UA76849C2

UA76849C2 - СПОЛУКИ 1-(D-ЦИКЛОПРОПІЛГЛІЦИНІЛ)-4-(ПІПЕРИДИН-4-ІЛ)ПІПЕРАЗИНУ ЯК ІНГІБІТОРИ ФАКТОРА Xa СЕРИНОВОЇ ПРОТЕАЗИ

Info

Publication number: UA76849C2
Application number: UA20041008649A
Authority: UA
Inventors: Майкл Роберт Уайлі; Гарі Лоуелл Інджел
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2002-04-01
Filing date: 2003-03-24
Publication date: 2006-09-15
Also published as: KR20040094892A; HRP20040900A2; WO2003084929A1; NZ535402A; ES2248737T3; DE60301569D1; EP1492767B1; ATE303990T1; IL164018A0; DE60301569T2; CA2478340A1; DK1492767T3; US7166606B2; EP1492767A1; MXPA04009640A; ECSP045329A; CR7497A; EA007300B1; AU2003218147A1; JP2005531529A

Abstract

Сполуки формули (І), де R - атом водню або атом фтору, чи їхні фармацевтично прийнятні солі є інгібіторами фактора Ха, придатними для лікування тромботичних захворювань. (І)

Description

Опис винаходу

Цей винахід має відношення до сполук, придатних як фармацевтичні препарати, до фармацевтичних 2 композицій, що містять згадані сполуки, до способу одержання згаданих сполук, до проміжних продуктів, придатних для одержання згаданих сполук, і до застосування згаданих сполук як фармацевтичних препаратів.

Серцево-судинні захворювання продовжують залишатись головною загрозою для здоров'я у всесвітньому масштабі, і є поширеною причиною серйозних хвороб і смерті.

Один із напрямків роботи дослідників у пошуку нових лікарських засобів для лікування серцево-судинних 70 захворювань базується на гіпотезі, що інгібітор серинової протеази, фактора Ха, може бути придатним як антикоагулянт при лікуванні тромботичних захворювань.

Інгібітори фактора Ха є відомими. Наприклад, УУО 01/96323 розкриває певні сполуки, до складу яких входить ароматична група, залишок гліцину, що несе циклічну групу і заміщену в положенні 4 піперазинільну групу.

Згаданою циклічною групою може бути циклоалкільна група, наприклад, циклопентил або циклогексил, однак 72 перевага віддається сполукам, у яких циклічною групою є фенільна група.

Встановили, на подив, що шляхом вибору у межах обсягу УМО 01/96323 4-метоксифенільної або

З-фтор-4-метоксифенільної групи як ароматичної групи, циклопропілгліцинової групи як залишку гліцину і 1-метилпіперидин-4-ілпіперазинільної групи як 4-заміщеної піперазинільної групи, можна одержати сполуки, що є селективними інгібіторами фактора Ха і мають властивості, яким віддається особлива перевага.

Відповідно, цей винахід пропонує сполуку формули (І) -

М с

М о

М о щу Ф « с нм о і - о « - (а - с

Кк ;» (Т) і де К - атом водню або атом фтору, чи її фармацевтично прийнятну сіль.

Ге») Було встановлено, що сполуки формули (І) є сильнодіючими і селективними інгібіторами серинової протеази, фактора Ха, мають добру антикоагулянтну активність у людській плазмі, добре впливають на плазму у разі бо введення ссавцям перорально і мають фармакологічні та токсикологічні профілі активності, яким віддається ї» 20 особлива перевага.

Сполуки формули (І) можна називати також за їхніми хімічними назвами: с 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин і 1-(3-фтор-4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин.

Слід розуміти, що сполуки формули (І) містять центр асиметрії, що має (Ю) конфігурацію. Згадані сполуки, 29 таким чином, можуть існувати і виділятись у суміші з відповідним (І) ізомером, наприклад, у рацемічній

ГФ) суміші, або окремо. За варіантом, якому віддають перевагу, сполуки виділяють по суті вільними від (І) ізомерів.

Слід розуміти також, що сполуки формули (І) або їхні фармацевтично прийнятні солі можуть виділятись у о формі сольватів і, відповідно, що будь-який із таких сольватів включається до обсягу цього винаходу.

Прикладами фармацевтично прийнятних солей є солі з кислотами, а саме гідрохлорид, фумарат і малеат. 60 Слід мати на увазі, що сполуки формули (І) містять два основні атоми азоту і можуть, таким чином, утворювати солі шляхом приєднання кислоти до одного або обох згаданих атомів азоту.

Однією групою сполук формули (І) є група, в якій К є атомом водню.

Конкретними сполуками, у яких Кк являє собою атом водню, є: 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин і його солі з хлористоводневою, бо фумаровою та малеїновою кислотами, особливо дигідрохлорид, дифумарат і дималеат.

Були одержані солі з кислотами, а саме кристалічні дигідрохлорид, дифумарат і дималеат, із визначенням їхніх характеристик засобами диференційної сканувальної калориметрії (ОС): дигідрохлорид: розкладається перед розплавленням; дифумарат: 222,82 (початок), 225,49С (пік); і дималеат: 195,82 (початок), 202,02 (пію).

Особливої згадки заслуговує дифумарат 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину у кристалічній формі.

Іншою групою сполук формули (І) є група, в який К є атомом фтору.

Конкретними сполуками, у яких Кк являє собою атом фтору, є: 1-(3-фтор-4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин і його гідрохлориди.

Сполуки формули (І) і їхні фармацевтично прийнятні солі можна одержати способом, який включає: (а) проведення реакції сполуки формули (ІІ) фі с о нм (22) (ТІ) з або її солі (наприклад, тригідрохлориду) зі сполукою формули (ІІІ) со г - и Деь свою зви Я МИ (Ж) або її реакційноздатною похідною; або -І (Б) проведення реакції сполуки формули (ІМ) со -- и М мА їз 50 у и іЧе) ( у ря або її солі (наприклад, дигідроброміду) зі сполукою формули (М)

Ф) іме) 60 б5

170 о ів (М) або її реакційноздатною похідною; з подальшим одержанням, якщо необхідною є фармацевтично прийнятна сіль, фармацевтично прийнятної солі.

Реакція між сполукою формули (Ії) і сполукою формули (ІІ) може зручно здійснюватись із застосуванням реактивів та за умов реагування, що традиційно застосовуються для одержання амідного зв'язку. Цю реакцію зручно здійснюють у присутності реактиву на основі бензотриазолу, наприклад, 1-гідроксибензотриазолу або 1-гідрокси-7-азабензотриазолу, і дегідрувальної сполуки, наприклад, дициклогексилкарбодіміду або 1-"3-диметиламінопропіл)-З-етилкарбодіїміду, у інертному органічному розчиннику, наприклад, диметилформаміді та/або метиленхлориді. Реакцію зручно здійснюють при температурі від 09С до 509С, за СМ варіантом, якому віддають перевагу, при температурі навколишнього середовища. У разі застосування солі (5) сполуки формули (Ії), реакцію зручно здійснюють при додатковій присутності основи, наприклад, триетиламіну. У цій галузі відомими є інші придатні реактиви і розчинники, наприклад, галогенангідрид, наприклад, хлорид р-анізоїлу у присутності основи, наприклад, триетиламіну.

Реакція між сполукою формули (ІМ) і сполукою формули (М) може зручно здійснюватись із застосуванням (о) реактивів та за умов реагування, що традиційно застосовуються для одержання амідного зв'язку, наприклад, як - описано вище для реакції сполуки формули (Ії) зі сполукою формули (ПП).

Сполуки формули (Ії) можна одержати шляхом реагування сполуки формули (ІМ) зі сполукою формули (МІ) (ее) (Се) і - мнаА" « - нОоОосС с . » п (МІ) де В! - група захисту аміну, наприклад, трет-бутоксикарбоніл (Вос), з одержанням сполуки формули (МІЇ) -і -

Ф М

(ее) їз 50

Ф М

Ф) іме) - в'нМ 65 (МІЇ)

з подальшим видаленням захисної групи.

Сполука формули (ІМ) є відомою і її називають також 1-(1-метилпіперидин-4-іл)/піперазином.

Сполуки формули (М) можна одержати шляхом проведення реакції сполуки формули (МІ)

МН,

Е

5 (МІІ1І) де БК? - карбоксильна захисна група, наприклад, (С--Св)алкільна група, наприклад, метил або етил, зі сполукою формули (Ії) з одержанням сполуки формули (ІХ) ге сикбен зксоді щи Кк о о Жені Ф зо Що же -

Кк. со

Щй .. со з подальшим видаленням захисної групи.

Сполуки формул (МІ) ії (МІ) є відомими або їх можна одержати з (0)-циклопропілгліцину за допомогою традиційних способів для одержання карбоксилу або аміногрупи амінокислоти. (0)-циклопропілгліцин можна « зручно одержати з циклопропанкарбоксальдегіду із застосуванням (К)-()-о0-метилбензиламіну за способом, опис З 70 якою наведено у патенті США Моб,090,982, або за процедурою, яку наведено у цьому описі. с Сполуки формули (ІІ) є добре відомими. з Захист аміногруп і карбоксилів описано у |МакОмі (МсОтіеє), Ргоїесіїпд Сгоирз іп Огдапіс Спетівігу, Ріепит

Ргезв, МУ, 1973 і у Грін (ОСгеепе) та Вутс (МУцїв), Ргоїесііпд Сгоимрз іп Огдапіс Зупіпезів, 2 видання, допп УМіеу

Зоп5, МУ, 1991)|. Прикладами груп захисту карбоксилу є С.-Св-алкільні групи, наприклад, метил, етил, -1 75 трет-бутил і трет-аміл; арил(С.--С/)алкільні групи, наприклад, бензил, 4-нітробензил, 4-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, 2,4-диметоксибензил, 2,4,6-триметоксибензил, 2,4,6-триметилбензил, бензгідрил і тритил; (є) силільні групи, наприклад, триметилсиліл і трет-бутиддиметилсиліл та алільні групи, наприклад, аліл і 1- со (триметилсилілметил)проп-1-єн-3-іл.

Прикладами груп захисту аміну є ацильні групи, наприклад, групи формули ВЗСО, де КЗ - С.1-Св-алкоксильна т. група, феніл-С--Св-алкоксильна група або С3-Сіо-циклоалкоксильна група, де фенільна група може бути с факультативно заміщена, наприклад, одним або двома атомами галогену, Сі-Св-алкільною групою або

С.і-С,-алкоксильною групою.

До груп захисту аміну, яким віддають перевагу, належать бензилоксикарбоніл (СВ2) і трет-бутоксикарбоніл 5 (Вос).

Гадають, що певні з проміжних продуктів, опис яких наведено, наприклад, сполуки формули (ІІ) і формули

ГФ) (М), є новими і, відповідно, пропонуються як додаткові аспекти цього винаходу. г) Сполуки за цим винаходом можуть вводитись будь-яким зручним шляхом, наприклад, до шлунково-кишкового тракту (наприклад, ректально або перорально), носу, легень, м'язів, судинної сітки або во черезшкірно. Сполуки можуть вводитись у будь-якій зручній для введення формі, наприклад, у формі таблеток, порошків, капсул, розчинів, дисперсій, суспензій, сиропів, спреїв, супозиторіїв, гелів, емульсій, пластирів тощо. Такі композиції можуть містити складові, що є традиційними у фармацевтичних препаратах, наприклад, розріджувачі, носії, модифікатори рН, підсолоджуючі речовини, наповнювачі і додаткові активні агенти. У разі потреби у парентеральному введенні, композиції будуть стерильними і у формі розчину або суспензії, придатної в5 для ін'єкції або інфузії. Такі композиції є додатковим аспектом цього винаходу.

Якщо дивитись з цього боку, винахід пропонує фармацевтичну композицію, що містить сполуку формули (І)

або її фармацевтично прийнятну сіль, разом із фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм.

За іншим аспектом, цей винахід пропонує сполуку формули (І) або її фармацевтично прийнятну сіль для застосування у терапії.

За іншим аспектом, цей винахід пропонує застосування сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятної солі для виготовлення лікарського засобу для лікування тромбозу.

За іншим аспектом, цей винахід пропонує спосіб лікування тромбозу у суб'єкта, що потребує лікування, який включає введення ефективної кількості сполуки формули (І) або її фармацевтично прийнятної солі.

Згаданим суб'єктом може бути людина або тварина, наприклад, ссавець, що не є людиною, наприклад, кіт, 70 собака, кінь, корова або вівця.

Тромботичне захворювання може бути, наприклад, венозним тромбозом, емболією легеневої артерії, артеріальним тромбозом, ішемією міокарда, інфарктом міокарда або тромбозом судин головного мозку. Сполуки можуть також застосовуватись відповідно до такого що відповідає цьому винаходу способу лікування гострої оклюзії судин, пов'язаної з тромболітичною терапією та рестенозом, наприклад, після транслюмінальної 7/5 Коронарної ангіопластики або обхідного шунтування коронарних чи периферичних артерій, та при підтримці прохідності судин у пацієнтів, що піддаються тривалому гемодіалізу.

Доза сполуки формули (І) буде залежати від природи та тяжкості стану, що піддається лікуванню, шляху введення, розміру та виду суб'єкта. Взагалі, будуть вводитись кількості у межах від О,01їмкМ/кг до 100мкМ/кг маси тіла.

Термін "лікування", який використовують у цьому описі, включає профілактичне застосування. Термін "ефективна кількість" означає кількість сполуки формули (І), що є ефективною для зменшення або пригнічення розвитку симптомів тромбозу, який піддається лікуванню.

Сполука за цим винаходом може вводитись самостійно або у комбінації з антикоагулянтом, що має інший спосіб дії чи з тромболітичним засобом. с

Наведені нижче приклади ілюструють винахід.

Скорочення, що застосовуються, відповідають номенклатурі ІЮПАК-ІЮБ. В описі застосовують такі і) скорочення: Вос (трет-бутилоксикарбоніл), обчисл. (обчислено), ОМ5О (диметилсульфоксид, дейтерований, якщо для ЯМР), ЕОСІ (гідрохлорид 1-(З-диметиламінопропіл)-З-етилкарбодіїміду), Е5Б-М5 (мас-спектр з іонізаційним електророзпилюванням), НОВІ (1-гідрокси-бензотриазол), НРІС (високоефективна рідинна Ге! зо хроматографія, де Її, - час утримування), МеОН (метанол), ЯМР (ядерний магнітний резонанс), ТРА (трифтороцтова кислота). -

Приклад 1 со 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин

А. О-циклопропілгліцин ісе)

Амінокислоту одержують із циклопропанкарбоксальдегіду, як правило, із застосуванням ча (К)-(ю)-о-метилбензиламіну і процедури патенту США Моб,090,982 або процедури, на яку посилаються у цьому описбі.

В. Вос-О-циклопропілгліцин «

Розчин О-циклопропілгліцину (46,1г, О,4моль) у суміші діоксану (бО0Омл), води (ЗООмл) і 1-н. розчину МаОН (48О0мл, 048моль) перемішують з охолодженням до температури 0-52 на льодяній бані. Повільно додають - с ди-трет-бутилдикарбонат (105г, О0,48моль), і перемішування здійснюють при кімнатній температурі впродовж а О,бгод. Розчин концентрують у вакуумі до приблизно 500мл, охолоджують на льодо-водяній бані, накривають "» шаром етилацетату (500мл) і підкислюють розбавленим водним розчином КНЗО, до рН 2-3. Водну фазу екстрагують етилацетатом (500мл), і екстрагування повторюють до повного вичерпання продукту. Етилацетатні екстракти об'єднують, промивають водою (0,б5л), розсолом (0,5л), сушать над Ма»5О,), фільтрують і - концентрують з одержанням твердої речовини білого кольору (78г, 90,69). (9Чю079--312 (с-1,02, МеОН).

Ф Т"Н ЯМР (СОСІ») 5 5,9 (зб, 1Н), 5,09 (зб, 1Н), 3,75 (т, 1Н), 1,42 (в, 9Н), 1,10 (9, 1Н), 0,4-0,7 (т, 4Н). с. 1-«(Вос-О-циклопропілгліциніл)-4--1-метилпіперидин-4-іл)піперазин Вос-О-циклопропілгліцин (216г, со 1,0моль) і 1-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин (192г, 1,05моль) суспендують у безводному СНоСі»о (З3З,2л) у «» 20 атмосфері Мо. Після цього одержану суміш охолоджують до температури 0-52С на льодяній бані. До цієї суміші додають спочатку моногідрат 1-гідроксибензотриазолу (НОВО (149г, 1,1моль) і діззопропілетиламін шо (136г, 1,05моль), потім повільно гідрохлорид 1-ІЗ--диметиламіно)пропіл|-З-етилкарбодіміду (ЕОСІ) (211г, 1,Тмоль) із підтримуванням температури на рівні 0-59 впродовж год. Реакційній суміші дають нагрітися до кімнатної температури впродовж ночі. Після цього реакцію гасять шляхом додання насиченого водного розчину 59 Мансоз (Зл) і екстрагують метиленхлоридом (2л). Шари розділяють. Органічний шар знову промивають

ГФ) насиченим розчином Мансо» (Зл), розсолом (2л), сушать над Ма5О,, фільтрують і концентрують з одержанням з неочищеного продукту у вигляді в'язкого масла (415г, 10995), яке застосовують безпосередньо. "ЯН ЯМР (0М5О0-йв6) 5 6,91 (4, 1Н), 3,97 (Б 1), 3,41 (в, 4Н), 2,74 (4, 2Н), 2,40 (зб, 4Н), 2,10 (т, во 7), 2,09 (в, ЗН), 1,79 (Б 2Н), 1,65 (4, 2Н), 1,40 (т, 2Н), 1,36 (5, 9Н), 1,05 (т, 1Н), 0,93 (й, 1Н), 0,40 (т, 2Н), 0,26 (т, 1Н).

Ор. Тригідрохлорид 1-(О-циклопропілгліциніл)-4--1-метилпіперидин-4-іл)-піперазину 1-«Вос-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин (неочищений, 415г, 1,0моль) розчиняють у безводному метанолі (1,5л). До цього розчину додають розчин НСІ-мМеонН (З380г/1,5л, 10,4моль) при температурі 65 0гС. Реакційну суміш перемішують і повільно нагрівають до кімнатної температури впродовж 2год. Після цього з перемішуванням додають етилацетат (2л). Перемішування здійснюють впродовж год при температурі 0-5С, і продукт випадає до осаду у вигляді порошку білого кольору, який відфільтровують і сушать у вакуумі при температурі 4593 з одержанням вказаної в заголовку сполуки у вигляді твердої речовини білого кольору (З357Тг, 91,796).

ТН яЯМР (0М5О0-й5-0250) 5 8,4 (рев, 1Н), 4,5 (рв, 2Н), 3,0 (ї 4Н), 2,78 (т, 1Н), 2,74 (в, ЗН), 2,35 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 2,08 (т, 2Н), 1,06 (ра, 1н), 0,60 (т, 4Н).

Е. 1-(4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин

Тригідрохлорид 1--О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)-піперазину (ЗООг, 0,77моль) суспендують у безводному СНоСі» (Зл) у атмосфері Мо. Після цього одержану суміш охолоджують до 70 температури 0-52С на льодяній бані. До цієї суміші спочатку повільно додають триетиламін (450мл, З,2З3моль) із підтримуванням температури на рівні 0-59, потім повільно п-анізоїлу хлорид (142г, 0,8Змоль) знову із підтримуванням температури на рівні 0-5 С. Реакційну суміш витримують із нагріванням до кімнатної температури впродовж 2год. Після цього реакцію гасять шляхом додання насиченого розчину Мансо з (Іл) і шари розділяють. Після цього водний шар екстрагують СН 25Сі» (2л). Органічні шари об'єднують, промивають 79 розсолом (Тл), сушать над Мо5О5, фільтрують і концентрують з одержанням вказаної в заголовку сполуки (326Гг, 10296).

ТН ЯМР (0М8О-йв) 5 8,55 (й, 9У-7,7ГЦ, 1Н), 7,88 (0, 2Н), 6,96 (4, 2Н), 4,39 (ї, 1Н), 3,79 (в, ЗН), 3,45 (5, 4Н), 2,74 (8, 2Н), 2,40 (т, 4Н), 2,09 (в, ЗН), 2,08 (т, 1), 1,79 (а 2Н), 1,62 (й, 2Н), 1,38 (т, 2Н), 1,26 (т, 1Н), 0,43 (т, 2Н), 0,35 (т, 2Н).

Приклад Та

Дифумарат 1-(4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину

До розчину 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину (315г, 0О,7бмоль) у 9595 етанолі (4,2л), який нагріли до температури 652С, додають розчин фумарової кислоти (177г, в 1,52моль) у гарячому етанолі (при температурі 652, 2,8л). Одержаний прозорий розчин перемішують при см температурі 6592С, повільно охолоджують спочатку до кімнатної температури (впродовж 2год), потім до (о) температури 0-50. Кристали білого кольору відфільтровують, промивають 9595 етанолом (1л) і сушать у вакуумі при температурі 4523 з одержанням вказаної в заголовку солі (448г, 91,2965), температура плавлення-205-20726,

ТН ЯМР (0М5О-й5) 5 11,35 (з, 1Н), 8,58 (9, 1), 7,86 (4, 2Н), 6,96 (4, 2Н), 6,55 (з, 4Н), 4,39 (0 1), о 3,79 (в, ЗН), 3,45 (в, 4Н), 3,20 (а, 2Н), 2,62 (ї, 2Н), 2,55 (в, ЗН), 2,42 (т, 6Н), 1,80 (а, 2Н), 1,62 (а, 2Н), 1,28 (т, 1Н), 0,43 (т, 2Н), 0,35 (т, 2Н). ч

Ісдо 9--37,72 (с-0,836, НО). со

Приклад 1Б со

Гідрохлорид 1-(4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину

Зо 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин (3,04г, 6,7Зммоль) - розчиняють у приблизно 0,2 М НСЇ (З7мл) і ліофілізують з одержанням 2,98г (кількісний вихід) вказаної в заголовку сполуки.

Частковий спектр ЯМР "Н (0М5О-й5) 5 10,63 (Бг, 1Н), 8,59 (Бг, 1), 7,88 (4, 2Н), 6,98 (а, 2Н), 4,36 (Бг «

Ї, 1Н), 3,82 (в, ЗН), 2,70 (в, ЗН), 1,29 (т, 1Н), 0,48 (т, 2Н), 0,36 (т, 2Н). З то ЕВ8-М8, т/» 415,5 (МА). с Аналіз для СозНазаМаОз-1,25НС1.1,0Н20: :з» Обчислено: С 57,78; Н 7,85; М 11,72; СІ 9,30;

Знайдено: С 57,79; Н 7,93; М 11,74; СІ 9,64.

Аналітична НРІС (колонка Хіета КРІ8, 4,бх15О0см), градієнт від 1095 ацетонітрилу/вода (0,195 -І трифтороцтової кислоти) до 5095 ацетонітрилу/вода (0,195 трифтороцтової кислоти) впродовж 40Охв), мл/хв: 9990, (-10,66бхв. (22) Приклад 2 со 1-КЗ-фтор-4-метоксибензоїл)-Ю- циклопропілгліциніл|-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин

До перемішуваної суспензії тригідрохлориду 1-О-циклопропілгліциніл-4-(1-метилпіперидин-4-іл)-піперазину ве (1,5г, З, 8БбБммоль) у дихлорметані (ЗОмл) додають спочатку триетиламін (1,36бг, 13,5ммоль), потім

Ге З-фтор-4-метоксибензойну кислоту (0,622г, 3,6бммоль), НОВІ (0,573г, 4,24ммоль) і ЕОСІ (0,813г, 4,24ммоль).

Після переміщування впродовж ночі суміш розподіляють між дихлорметаном і насиченим водним розчином бікарбонату натрію. Органічну фазу після цього знову промивають насиченим водним розчином бікарбонату натрію, потім розсолом, після чого сушать Ма5О у, фільтрують і концентрують у вакуумі. Залишок після цього розчиняють у дихлорметані і хроматографують на силікагелі з елююванням градієнтом 0-12905 2-н. розчину (Ф. аміаку/метанолу у дихлорметані. Чистий продукт, що містить фракції, об'єднують і концентрують у вакуумі з ко одержанням 1,03г (61905) вказаної в заголовку сполуки.

Е5-М8, т/з2 433,5 (МА1)"7. во Аналітична НРІ С (колонка Мудас С18, 4,6х15Осм, градієнт від 1095 ацетонітрилу/вода (0,195 трифтороцтової кислоти) до 50906 ацетонітрилу/вода (0,190 трифтороцтової кислоти) впродовж 4Охв), Тмл/хв: 9595, -13,16хв.

Приклад 2а

Гідрохлорид | 1-КЗ-фтор-4-метоксибензоїл)-О-циклопропілгліциніл|-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину 65 1-КЗ-фтор-4-метоксибензоіл)-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазин (1, 2,31ммоль) розчиняють у приблизно 0,2М НОЇ (12,7мл) і ліофілізують з одержанням 1,03г (кількісний вихід) вказаної в заголовку сполуки.

Частковий спектр ЯМР "Н (0М5О-й5) 5 10,36 (рг, 1Н), 8,73 (9, 1), 7,75-7,83 (т, 2Н), 7,25 (Її, 1Н), 4,36 (, 1Н), 3,90 (з, ЗН), 2,70 (в, ЗН), 1,28 (т, 1Н), 0,48 (т, 2Н), 0,36 (т, 2Н), Е5-М5, т/з2 433,3 (МАТ) 7.

Аналіз для СозНазЕМАО»з.1,6НСІ.0,5Н20:

Обчислено: С 55,26; Н 7,18; М 11,21; Е 3,80; СІ 11,35;

Знайдено: С 55,31; Н 7,24; М 11,38; Е 3,64; СІ 11,36.

Аналітична НРІ С (колонка Хіегта КР18, 4,6Х150см, градієнт від 1095 ацетонітрилу/вода (0,195 трифтороцтової кислоти) до 50906 ацетонітрилу/вода (0,190 70 трифтороцтової кислоти) впродовж 40хв), Тмл/хв: 9895, .-8,067хв.

Реакції пригнічення ферменту:

Здатність експериментальної сполуки до пригнічення фактора Ха може оцінюватись за однією або декількома із наведених нижче реакцій пригнічення ферменту або за іншими стандартними реакціями, відомими фахівцям у цій галузі.

Реакція пригнічення ферменту

Людський фактор Ха і людський тромбін одержували від фірми Епгуте Кезеагсі І арогайгієз (Зоцій Вепа,

Іпдіапа, США). Інші протеази походять з інших комерційних джерел. Хромогенні протеазні субстрати пара-нітроанілідного пептиду одержували від фірми Міджмевзі Віогесі (Різпегв, Іпаіїапа, США).

Спорідненість до зв'язування з людським фактором Ха вимірювали як уявні константи асоціації (Казв), виведені з кінетики пригнічення протеаз, як описувалось раніше 2224, Уявні значення Казз одержують із застосуванням автоматизованих (ВіоМек-1000) розведень інгібіторів (визначення Казз здійснюють тричі для кожної з сорока восьми концентрацій інгібіторів) на 9б-лункових планшетах, і швидкість гідролізу хромогенних субстратів визначають при 405нм за допомогою пристрою для сканування планшетів Тпегтотах від фірми

Моїіесшаг Оемісез (Сан-Франциско). Методика проведення реакції для пригнічення фактора Ха виглядає так: с

БОмкл буфера (0,06М трис-буфер, 0,9М Масі, рН 7,4); 25мкл експериментального розчину інгібітора (у МеОН); (У 25мкл людського фактора Ха (32нНМ у 0,03М трис-буфера, 0,15М Масі, 1Імг/мл НЗА (людський сироватковий альбумін)); і, нарешті, 15О0мкл В2ПесіисіІуАгаорМа (0,3ММ у воді) додавали у межах 2хв для початку гідролізу.

Кінцева кількість |фактор Ха) становить З3,2нМ. Значення (|Вільний Ха) і (Зв'язаний Ха) визначають за лінійними стандартними кривими на тому самому планшеті за допомогою програмного забезпечення 5ойтахРго для о кожної концентрації інгібітора і уявні Казв обчислюють для кожної концентрації інгібітора, яка викликала «Її пригнічення гідролізу у межах від 2095 до 80956 від контролю (3,2НМ фактора Ха) уявна

Казв-ЧЕ ЕД ТЕ ТЕ ДИО-15). Одержані таким чином значення уявної Казз дорівнюють приблизно оберненій со величині Кі для відповідних інгібіторів (1/уявна Казз-уявна Кі). Змінність середніх значень уявної Казвзв, (Се) визначених з однією концентрацією субстрату, дорівнює 1595. Кт аналітичної системи визначили як їм 0,347 --0,031нМ (т-4); і Мтах дорівнювала 13,11--0,7бмкМ/хв.

Значення Казз визначають із тромбіном і іншими протеазами із застосуванням однакової методики з такими концентраціями ферменту і субстрату: тромбін, 5,9нм з 0,2мМ В2РпемаіІАгормМа; « фактор Хіа, 1,2нМ з 0,4мММ ругобСіІшРгоАгорМа; з с фактор Хііа, ЛОНМ з 0,2мМ НОРгоРПеАгорМа; . плазмін, З,4НМ з 0,5мММ НОМАЇ! ешГ узрМА; и?» пЕ-РА (тканинний активатор плазміногена), 1,2нНМ з О,6мММ НОПеРгоАгармМА; урокіназа, О04нНМ з 04мММ ругобіцс1ІуАгарМа; аРс (активований білок С), ЗНМ з 0,174мМ ругосІйРгоАгорМа; -І калікреїн плазми, 1,9нМ з О-РгоРпеАгормА; трипсин великої рогатої худоби, 1,4нНМ з 0,18мМ В2РпемаІіАгормМа.

Ме. Посилання

Го! (а) (а) Заїї О0.9., 9.А. Вавзіап, 5.1. Вгідд5в, УА. Виреп, М.У. Спігдадге, О.К. Сіамжвоп, М.М. ЮОеппу, 0.0.

Сіега, Ю.5. сШога-Мооге, КМУ. Нагрег, К.Г. Найзег, М.9). КіїтКомувкі, ТУ. Койпп, Н.-5.: (іп, УК. МсСомжап, А.О. пи Раїком/й2, сС.Р. Зтійй, М.Е. Кіспей, К. ТаКеиспі, Ку. ТАигазпег, 9У.М. Тіпвіеєу, В.О. ОЧеграск, 5.-С.8. Мап, М.

Ге) 2папо, Оіравіс Вепго|в|Ппіорпепез ЮОегімаймез аз а Моме! Сіазв ої Асіїме Зйе Оігесіей /Тиготбіп Іппірйогв. 1. Оейїегптіпайоп ої о (йе Зегіпе Ргоїеазе Зеїесіїмйу, Зігисішге-Асіїмйу Кеїайопепірв апа /Віпаїпд

Огіепіайоп. у). Мед. Спет. 40 3489-3493 (1997). (Б) Зтій О.Р., ТУ. Ста 0.5. Сійога-Мооге, МУ.О. Сойтап, К.О. Кигл, Е. Кобегів, К.Т. Зп!итап, О.Е.

ЗапаизКу, М.О. допез, М. Спігдадге, апа С.М. дасквоп. А Ратіу ої Агдіпа! Типготбіп Іппіріоге Кеїагей ю

Ф) ЕтТедаїгап. Зет. Тиготбров. Нетозі. 22, 173-183 (1996). ка (с) Зтійй .Р., 0.5. Сійога-Мооге, Т.). Стай, М. СВігдадге, Ку. Кшегрогіев, Т.О. І іпавігот, .Н.

ЗацЦепупіе. Еїедайап: А Мем Сагаїомазсціаг Апіісоадшапі п Мем Апіісоздшапів їог (Ше Сагаіомазсцаг бо Рамепі, Еа. К. Рігагте, Напку 8 Вегив, Іпс., РпіІадеї!рпіа (1997) рр. 265-300. (а) Заї О0.9У., О.Ї. Ваїйеу, УА. Вавзіап, М.М. Спігдадге, А.С. СІетепе-Зтіфй, М.І. ЮОеппеу, Му. РізНег,

О.О. Сеїга, Ш0.5. сійога-Мооге, К.МУ. Нагрег, Г.М. допйпзоп, М.9. КіїтКкому8Кі, ТО. Копп, Н.5. іп, УК. МсСожап,

А.О. Раїком/й», М.Е. Кіспей, Р. тій, ОМ. Зпудег, К. Такеиспі, У.Е. Тоїф, М. 7апд, Оіатіпо

Вепго|рІпіорпепе Оегімаймез аз а Моме! Сіазв ої Асіїме Зйе Оігесіей ТиготбБіп Іпрірйоге: 5. Роїепсу, 65 ЕпПісасу апа Рпагтасокіпейіс Ргорегієв ої Модійеа С-3 5іде Спаїіп Оегімаймев. 9). Мед. Спет., 43, 649-663 (2000).

Встановили, що сполуки формули (І), наведені як приклад у цьому описі, у реакції пригнічення ферменту демонстрували Кавзв на рівні приблизно від 14х1О0бл/умоль до ЗБ5х1Обл/моль. Здатність експериментальної сполуки до подовження часткового тромбопластинового часу (протромбінового часу) може визначатись за наведеними нижче експериментальними методиками.

Експериментальна методика визначення часткового тромбопластинового часу (протромбінового часу)

Венозну кров збирають у вакутейнери із 3,295 (0,109М) тринатрійцитрату у 1 об'ємі антикоагулянту на дев'ять об'ємів крові. Клітини крові відділяють центрифугуванням при 7009 впродовж 10хв з одержанням плазми, яку заморожують при температурі 702С до виникнення потреби.

Для здійснення експерименту 10О0мкл плазми за допомогою піпетки переносять до скляної 70 експериментальної пробірки, додають імкл розчину експериментальної сполуки у ОМ5БО і витримують з нагріванням до температури 37 «С впродовж 2хв. Додають 100мкл теплого (3722) реактиву Мапспевзіег (тканинний тромбопластин) (фірма Неїепа Віозсіепсе5, Великобританія) і витримують до урівноваження впродовж 2хв. Для ініціювання згортання додають 10О0мкл теплого (37 С) розчину (25ММ) хлориду кальцію.

Експериментальну пробірку тричі нахиляють під кутом 902 через кожні 5с для перемішування реактивів, і 79 реєструють час до утворення згустка. Дані ряду спостережень та концентрацій експериментальної сполуки аналізують за допомогою програми статистичного аналізу ЗАЗ, і визначають СТ2 (концентрація, необхідна для збільшення часу утворення кров'яного згустка вдвічі) для кожної сполуки.

Було встановлено, що сполуки за цим винаходом значно подовжують частковий тромбопластиновий час (протромбіновий час).

Альтернативні методики визначення протромбінового (РТ) часу і АРТТ (тромбопластинового часу)

Визначення згортання: Значення протромбінового часу і АРТТ визначають на людській плазмі за допомогою приладу 5ТА (5іадо). ВіоРТ являє собою спеціальну реакцію утворення згустка не плазми, що запускається людським тканинним фактором (Іппоміп). Можливе зв'язування з альбуміном або ліпідом визначають шляхом порівняння ефектів ВіоРТ у присутності/відсутності ЗОмг/мл людського альбуміну (НБА) і мг/мл с фосфатидилхоліну (РО). Інгібітори доставляють у 5095 водному розчині носія у метанолі. Ге)

Реакція АРТТ 75мкл нормальної цитратної (СіїгоЇ, фірма Вахіег-Оаде) людської плазми 25мкл експериментального розчину 75мкл актину (фірма Вахіег-ЮОаде). Активований цефалопластин інкубують впродовж 2хв при температурі Ме з37об. « 75мкл Сасі; (0,02М).

Реакція РТ со 75мкл плазми Ге) 25мкл експериментального розчину 75мкл фізіологічного розчину; інкубувати впродовж 1хв при температурі 3726. - 75мкл інновіну (Іппоміп) (фірма Вахіег-Оаде), рекобінантний людський тканинний фактор.

Додаткові властивості сполук формули (І), яким віддається перевага можна демонструвати шляхом визначення їхніх фармакодинамічних (РО) та фармакокінетичних (РК) властивостей на лабораторних тваринах, « й наприклад, пацюках і собаках, з подальшим пероральним введенням дози голодним і ситим тваринам. -о с "з

Claims

Формула винаходу п

1. Сполука формули (І) , () - тя (о) м о М ло щ» іЧе) ва о о -2 Е іме) - - . де К - атом водню або атом фтору, чи її фармацевтично прийнятна сіль.

2. Сполука за п. 1, де К - атом водню. 60 З.

Сполука за п. 2, вибрана з 1--4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину і його солей з хлористоводневою, фумаровою та малеїновою кислотами.

4. Сполука за п. 3, вибрана з дигідрохлориду, дифумарату і дималеату у кристалічній формі.

5. Сполука за п. 4, якою є 1-(4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину бо дифумарат у кристалічній формі.

6. Сполука за п. 1, де К - атом фтору.

7. Сполука за п. б, вибрана з 1-(3-фтор-4-метоксибензоїл-О-циклопропілгліциніл)-4-(1-метилпіперидин-4-іл)піперазину і його гідрохлоридів.

8. Сполука за будь-яким із пп. 1-7 для застосування у терапії.

9. Фармацевтична композиція, що містить сполуку за будь-яким із пп. 1-7 разом із фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм.

10. Фармацевтична композиція за п. 9, придатна для перорального застосування.

11. Застосування сполуки за будь-яким із пп. 1-7 для виготовлення лікарського засобу для лікування 7/0 тромботичного захворювання.

12. Застосування за п. 11, де лікарський засіб призначений для перорального лікування тромботичного захворювання. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних 7/5 Мікросхем", 2006, М 9, 15.09.2006. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с щі 6) (о) « (ее) (Се) і - -

с . и? -І (о) (ее) щ» 3е) іме) 60 б5