UA59365C2 - Похідні цитизину, що містять фосфор - Google Patents

Abstract

Заявлені знову синтезировані фосфорвмісні похідні цитизину загальної формули , де n=0; 1 при n=0, X=S; 0 R=СН3; С2Н5; С3Н7, і - С3Н7; С4Н9 при n=l, X=0 R=СН3 Показано, що деякі з синтезованих сполук проявляють значну гепатопротекторну антиферментну активність.

Description

Опис винаходу

Изобретение относится к новьім химическим соединениям, в частности к фосфорсодержащим производньм 2 цитизина, проявляющим гепатопротекторную и антиферментную активность.

Известно, что алкалоид цитизин (1) впервье вьіделенньй из семян ракитника и термопсиса в настоящее время широко используется в медицинской практике в виде 0,1595 водного раствора (цититон) в качестве аналептического средства (Машковский М.Д. "Лекарственнье средства", М., 1977г., ч. 1, стр. 123)

К . . то ще Н х нен СНо УР (ОК) ї н н и ЩІ 0 ч 0 2

ФС, (а) 8

Сеть і 0 ч н 0 3 где К-С»5

Характерньм свойством цитизина является способность его возбуждать дьхание, связанная с с рефлекторной стимуляцией дьхательного центра усиленньіми импульсами, поступающими от каротидньх о клубочков. Одновременное возбуждение симпатических узлов и надпочечников приводит Кк повьішению артериального давления. В связи с зтим цитизин рекомендуют использовать в случаях остановки дьіїхания и сердечной деятельности при интоксикациях.

Цитизин широко распространен в природе. Он найден во многих растениях и извлечение его из Іс) растительного сьірья ионообменньім методом является главньім промьішленньїм способом получения цитизина. с

В работах (Докл. АН Узб. ССР, 1978г., Мо 9, стр.39 - 42; Докл. АН Узб. ССР, 1977, Мо 7, стр. 40 - 43) описан синтез фосфорсодержащих М-І|р-(диалкоксифосфинил) меркаптозтилі| цитизинов (2) и их иодметилатов. ФО (3). Ф

Авторьї показали, что все синтезированнье соединения обладают необратимой ингибирующей активностью

Зо в случае ацетилхолинзстеразьї и проявляют зффект избирательного торможения каталитической активности Щео, бутирилхолинозстеразь.

Сведения о других фосфорсодержащих производньїх цитизина нами в литературе не обнаружень!.

В связи с тем, что исходньій алкалоид цитизин проявляет значительную биологическую активность, можно « предположить, что и другие его фосфорсодержащие производньсе будут интереснь с зтой точки зрения.

Целью заявляемого изобретения является получение новьіх фосфорсодержащих производньїх цитизина, в о) с частности, обладающих повьішенной биологической активностью. "» Поставленная цель достигается тем, что полученьї фосфорсодержащие производнье цитизина общей " формуль!: сл ч н- (сн)а- (ОК), в (6)

Те | В

Їх

Фі б гдеп-О,тТприп-О0Х-5,0 сл К -СНу(а); СоНь(6); СзН/(в); 1-СзН/(г); САНо(д) прип-1Х-О

ВІ1-1-С3НІ(а); С6НУ(б); п-снЗо(О) (в)

Синтез О,О-диалкил-М-цитизинилфосфатов (п - 0, Х - О соединения 44д) осуществляли взаймодействием диалкилфосфитов с цитизином в условиях реакции Тодда-Атертона по следующей схеме:

Ф) їй Зх (воеио ерїу я (сні З-Д лова оРх т СО, я (Сано)у | 0 и М 6о н ї 0 ц

Синтез О,О-диалкил-М-цитизинилтиофосфатов (п - 0, Х - З соединения б5ад) осуществляли в две стадии. На 65 первой стадии при взаймодействий цитизина с диалкилхлорфосфитом (синтез описан в работе Нифантьев З.В. "Химия фосфорорганических соединений, М.: Наука, 1983г. -- стр. 85) в среде бензола, в токе сухого аргона й в присутствий тризтиламина образуется промежуточньй О,О-диалкил-М-цитизинилфосфит, которьій затем реагирует с зквимолярньм количеством злементной серь с образованием

О,О-диалкил-М-цитизинилтиофосфата. 9 Ех МН н-в(оК сту - (В0)ДВСЕ --- с, ВІК),

К - " " 0 0 70 | -З я я - РОВУ, і . 5 " М

Диметил - (М-цитизинил) алкил (арил) фосфонать (п - 1, Х - О, К-СНу соединения б ав) получень взаймодействием цитизина с альдегидами и диметилфосфитом в условиях реакции Кабачника-Филдса 20 . що . їх НК ' Я) 2Й «У МА СН -8(0СЯ»)» 1 КС шо (снаб)» в. --- || В!

НК ін н Н сч 25 й К . 0 І (8) : 6

Следующие примерь! поясняют изобретение подробнее, не ограничивая его зтим.

Примернь!: ІС о) 1. Синтез О,О-диметил-М-цитизинил фосфата (4а)

В колбу помещают смесь 2,86бг (0,026 моль) диметилфосфита и 15,5мл (0,16 моль) четьіреххлористого ї-о углерода в 100мл бензола и при перемешиваний прикальшают к ней смесь 5г (0,026 моль) цитизина и 2,63г.ЙЦ(«9У (0,026 моль) тризтиламина в 23Омл сухого бензола с такой скоростью, чтобьі температура раствора не превьішала 2076. Ф

После окончания прикальшвания реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в'течениеб М часов. Вьшпавшие кристалльй солянокислого тризтиламина отфильтровьшвают, растворитель отгоняют на вакуумном испарителе. Получают 5,64г (вьход 72,595 от теоретического) кристаллического вещества (перекристаллизация из бензола) с температурой плавления Т.пл. 158 - 15976. «

ИК спектр, у, см"!: 1270 (Р-О), 1050 (Р-О-С), 830 (Р-М-С), 1658 (М-СО).

Спектр ПМР, 5, м.д. 6б,2Зд (1Н, СНо, З)нн 5.0Гц), 7,2Зд.д.(1Н, СНв, З нн 3,2Гц), 6,12д (1Н, СНУ), 3,341 (6Н, З с СНЗО, осн 13,2ГЦ). . -» ямп "р: бр- 9 1м.д.

Найдено, 95: С 52,05; Н 6,24; М 9,30; Р 10,36;

СізРчоМ2ОаР 1 Вьічислено, 90: С 52,36; Н 6,37; М 9,40; Р 10,40 о По данньм рентгеноструктурного анализа координация атома фосфора в // молекуле

О,О-диметил-М-цитизинилфосфата - искаженная тетраздрическая, обьічная для фосфатньїх группировок. о Дигидропиридиновьй цикл - плоский с точностью х 0,01А, карбонильньїй атом кислорода отклоняется от зтой

Ф 20 плоскости незначительно (на 0,07А). Тетрагидропиридиновьій цикл принимаєт конформацию кресла сл (дсЗ 52,77) с вніходом мостикового атома С из средней плоскости остальньїх на 0,75А. Пиперидиновьй цикл имеет почти идеальную конформацию кресла (ДСО 50,57). Метильнье группьї СНзу имеют гош-ориентацию относительно связей Р-О и Р-0 соответственно.

Аналогично получень! другие соединения 46.8 зтого ряда (таблица). 2. Синтез О,О-диметил-М-цитизинилтиофосфата (5а). (Ф) В колбу помещают 5г (0,02бмоль) цитизина и 2,63г (0,02бмоль) тризтиламина в 200мл абсолютного бензола.

Ге При знергичном перемешиваний в токе сухого аргона и при комнатной температуре прибавляют 3,3Зг (0,02бмоль) диметилхлорфосфита. Перемешивают 5 часов. Вьшавший осадок гидрохлорида тризтиламина во отфильтровьівают, промьіувая порциями абсолютного бензола. Фильтрат и расчетное количество серьі 0,83г (0,02бмоль) помещают в колбу и продолжают перемешивать при комнатной температуре еще 2 часа. Затем смесь отгоняют в роторном испарителе и остаток перекристаллизовьівают из бензола. Получают 8,01г (вход 9790) кристаллического вещества с Т.пл. 164 - 16570.

ИК спектр, у, см"!: 1030 (Р-О-С), 1670 (М-СО), 820 (Р-5)/ 65 Спектр ПМР, 5, м.д. 6,23д (1Н, СНо, Зднн 6,0Гц); 7,16бд.д. (1Н, сНв, З нн 5,8Гц); 5,8д (1Н, сну),

Соединение | Т.пл. "С | що Брутто сінфІфе емла сінфмі Р ж за ввотв 00 вооввот ле логв стутючнв бозв от но оно 25. 600101 вовввлотлавов осв сувнміюв 521 товето ов вва 001010 во віття яз ономооі ВТ? вт ВТ живо сив тля вве сном БТ? Тв? Тет Тв 05. ю яко пявавіввит вивів оо сінокос вове вита ви в3я. впав ввтвивівят ово Стемювєв вв ово от 510. в ве0о) 00 волавлвля вит стназноозе боволо во оо 925. вв 0030 лваввввоя тя тво ВАЗ СітнотоОрв БИ ТО ТБ, 838 873 ія я 01010 ввюзввлотлвітно ват сунотчобое 55лз тло тет вав т 01010 вив відвтввтої те онов 1270 1 520. ва слово вет сіном БТяБТЕВТо во 187. в5посте1втватмв тео Оюномос втввяя тот тов 852. вв певолвв с олевляеве тот СоиновмеовР вом ев вов| 739 870. 3,40д (6Н, СНЗО, Мне 12,0Гу).

ЯМРУ Р: 82 - 10,22м.д

Найдено, 90: С 49,91; Н 6,13; М 8,87; Р 9,69; сем

СізНіоМ2ОзЗР (5)

Вьічислено, 90: С 49,68; Н 6,05; М 8,91; Р 9,87

Аналогично получень и соединения 56-д зтого ряда. Результать! приведень в таблице. 3. Синтез диметил-2-(М-цитизинил)-2-изобутилфосфоната (ба)

Смесь 3З,8г (0,02моль) цитизина, 1,24г (0,02моль) изомасляного альдегида, 2,2г (0,02моль) диметилфосфита Іо) и каталитического количества 18-краун-б6 в 1ООмл бензола кипятят З часа с одновременной отгонкой с образующейся в ходе реакции водьі. После отгонки растворителя по окончании реакции остаток промьіївают гексаном и перекристаллизовьшают из смеси бензол-зфир. Получают 5,52г (вьїход 78,190) кристаллического С вещества с Т.пл. 13876. ФУ

ИК спектр, у, см"!: 1220 (Р-О), 1070 (Р-О-С).

Спектр ПМР, 5, м.д. б,72д (1Н, СНа, Зунн 8,6Гц); 7,1Од.д. (1Н, СНВ, Зунн б,АГц); б,51д (1Н, СНУ), З,Зід (6Н, С

СНзо, окрув 12,6Гц); 0,50 д (ЗН, СНз-С),

Найдено, 90: С 57,70; Н 7,72; М 8,03; Р 8,67; «

С47Н27М20уР

Вьічислено, 90: С 57,56; Н 7,58; М 7,90; Р. 8,52 - с Аналогично получень и соединения 6б-в зтого ряда (табл.). а Биологическая активность заявляемьїх соединений. є» Проведеннье фармакологические исследования показали, что синтезированнье соединения проявляют гепатопротекторную и антиферментную активности.

І. Изучение гепатопротекторной активности. Острая токсичность соединения. 1 Средне-летальную дозу І О5о определяли на мьшах бельїх рандомбредньїх (320 голов по 18 - 20 грамм со каждая). Препарат вводили однократно внутривенно в физиологическом растворе или перорально в крахмальной 195 взвеси. Период наблюдения - 14 дней. Ежедневно проверяли общее состояние животньх, в (95) течение периода наблюдения З раза животньїх взвешивали, проводили вскрьтие павших животньх и бу 50 макроскопическое описание. Определение І Обо проводили методом проб и анализа.

В результате проведенньїх зкспериментов получили, что І Ово - 430Омг/кг (3200 - 5800) при пероральном сл введений соединения и ГО 5о - 180Омг/кг (1250 - 2550) при внутривенном введений. Приведена средняя арифметическая величина и доверительньйй полуинтервал при Р - 95965.

Гепатопротекторная активность при остром токсическом гепатите у крьс.

По мнению фармакологов, наиболее зффективньм гепатопротекторньмм препаратом в настоящее время о является препарат "Зссенциале" (ФРГ), которьій и бьіл использован в следующих зкспериментах в качестве препарата сравнения. Зтот препарат представляет собой сложньій комплекс веществ и содержит в своем їмо) составе сумму флаваноидов, фосфолипидов, никотинамид и различнье витаминь.

Изучение гепатопротекторной активности заявляемого препарата при остром токсическом гепатите бо проводили на 4 группах самцов бельїх рандомбредньх крьіс массой 120 - 150 грамм по 10 особей в каждой.

Первая группа - животньім вводили внутривенно 0,1мл изотонического раствора хлорида натрия и через час внутрибрюшинно 0,4мл вазелинового масла.

Вторая группа - внутривенно 0,1мл изотонического раствора хлористого натрия и через час внутрибрюшинно

О,4мл 4095 раствора гепатотропного яда - четьіреххлористого углерода в вазелиновом масле. бБ Третья группа - внутривенно 0,1мл раствора "Зссенциале" (5Омг/кг) и через час внутрибрюшинно 0,4мл 4090 раствора ССІ/ в вазелиновом масле.

Четвертая группа - внутривенно 0,1мл водного раствора заявляемого вещества (5Омл/кг) и затем, через час внутрибрюшинно 0,4мл 4095 раствор ССІ/ в вазелиновом масле.

Все иньекции повторяли один раз в сутки на протяжений четьірех дней, после чего под зфирньїм наркозом Животнье бьіли декапитировань!.

Гепатопротекторную активность заявляемого препарата и препарата сравнения при отравлений крьс четьіреххлористьмм углеродом оценивали по изменению биохимических и гистологических показателей, характеризующих степень повреждения (разрушения) клеток при отравлении. Исследовали активность фермента аланинаминотрансферазьі (АЛат) и уровень общего билирубина в крови, хемолюминисценцию 7/0 Ззритроцитов и морфометрически обьемную долю некрозов, внутридольковой инфильтрации, регенерирующих и дистрофированньх клеток в срезах ткани печени.

При изучений хемолюминисценции зритроцитьІ, вьіделеннье из крови суспензировали в изотоническом растворе хлорида натрия (по їмл 1095 взвеси зритроцитов в пробе) свечение стимулировали 0,1мл 595 НьО» и определяли среднеарифметические показатели интегральной площади под кривой хемолюминисценции. 5 | 48.1. 08. ов см 5» 81 вв008100041 3 о

Приведенньсе данньсе показьівают, что заявляемое вещество обладает гепатопротекторной активностью при отравлений крьіс четьіреххлористьмм углеродом, причем действует более активно, чем препарат "Зссенциале" о йспользованньй в качестве препарата сравнения. «я

Действие на вьіживаемость мьішей при отравлений их гепатотропнь/м ядом. 1. Для изучения действия препарата на вьіживаемость мьшей при отравлений гепатотропньм ядом і. использовались мьіши белье рондомбредньсєе, самць! массой 18 - 20 грамм, три группьї по 10 мьішей в каждой. Ге»!

Первой группе животньїх внутрибрюшинно вводили 0,їмл изотонического раствора хлорида натрия. Второй группе - внутривенно О,їмл раствора "Зссенциале" в дозе 5Омг/кг. Третьей группе - внутрибрюшинно 0,1мл юю раствора заявляемого вещества в водном растворе (10Омг/кг).

Через час после первого введения всем животньм внутрибрюшинно ввели О0,їмл 5095 раствора четьіреххлористого углерода в вазелиновом масле. «

Иньекции проводили однократно. Срок наблюдения 5 суток. Вьїживаемость через 5 суток составила. - с хз 11116 вв - 1 Полученнье результать! показьівают, что предлагаемое соединение в большей степени, чем "Зссенциале" с защищает животньх от гибели при отравлений их гипототропнь/м ядом.

Таким образом, мь установили, что соединение обладаєт умеренной токсичностью и его (65) гепатопротекторное действие в зксперименте на животньїх значительно превосходит действие препарата

Фу 50 "Зссенциале". 2. Хорошие результать! по виіживаемости мьшей при отравленийи их гепатопротекторньмм ядом показало и сл еще одно из заявляемьїх фосфорсодержащих производньїх цитизина.

Процент вьїживаемости для зтого соединения в зксперименте, аналогичном вьішеописанному, составил 8090.

Ії. Изучение антиферментной активности. о При исследований антиферментной активности синтезированньїх соединений изучали их взаймодействие с ацетилхолиностеразой (АХЗ) и бутирилхолинзостеразой (БухХЗ). Использовали АХЗ из зритроцитов крови іме) человека с удельной активностью 1,2Ед/мг и БУХЗ из сьворотки крови лошади с удельной активностью 9,бЕд/мг. Активность АХЗ и БухЗ определяли калориметрическим методом Зллмана при 25"'С в 02М бо Ма-фосфатном буфере, рН 7,5. В качестве субстрата использовали илдид ацетилтиохолина фирмь! "Спетарої!" (ЧСФР). Зффективность обратимьїх ингибиторов определяли по методу А.П. Бресткина и характеризовали величиной обобщенной ингибиторной константь! (К), которая при смешанном типе торможения связана с конкурентной (К) и бесконкурентной (Кк) составляющими соотношением 1/К, - 1/К;, ж кі.

Активность цитохрома Р450 определяли двумя методами: по скорости гидроксилирования 3,4-бенз/а/пирена, бо путем флуориметрического определения образующегося 4-гидроксибенз/(аллирена и по скорости дизтилирования 7-зтоксикумарина путем флуориметрического определения, образующегося 7-гидроксикумарина. Ингибирующее влияние исследуемьїх веществ на ЦТ Р450 оценивали по величинам р.)во, представляющим собой обратньйй логарифм концентрации агента, вьізьівающей активности на 50905.

Установлено, что цитизинилфосфать! и цитизинилтиофосфать! являются ингибиторами АХЗ средней силь и весьма зффективньми ингибиторами БУХЗ. Найбольшую избирательность по отношению к БУХЗ наблюдали для производньїх тиофосфата (ркК 1 -6,7 и рК 1 - 6,1 соответственно).

Вьіявленьї сильнье ингибиторьї цитохрома Р450, имеющие перспективу для практического использования, среди них - соединение с русо - 5,55 и соединение с русо - 5,70.

Claims (4)

Формула винаходу

1. Фосфорсодержащие производнье цитизина общей формуль! І ' Суть М Ї В (8) гдеп-0,Тприп-0,х-5,0 Кк - СНу», СоНв, СзН», і-СзН», С/Но се прип-1,Х- 0 Го) Кк - СНУ

1-. - ВІ-і-С,Н,СН.,п-СН,О -с ю в качестве гепатопротектора (Се)

2. Фосфорсодержащие производньсе цитизина по п. 1 общей формуль! с Го , й І Си Пи

Ї. У « 20 с НІС СН ш с где п - 0, 1 в качестве гепатопротектора "з 3. Фосфорсодержащие производнье цитизина по любому из пп. 1, 2, где п - 1 для использования в качестве медикамента.

4. Фосфорсодержащие производнье цитизина по любому из пп. 1, 2, отличающиеся тем, что они сл 35 предназначеньї для использования в производстве медикаментов для гепатопротективного лечения. (Се) Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних с мікросхем", 2003, М 9, 15.09.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. б 50 сл Ф) іме) 60 б5