UA56971A - Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) - Google Patents
Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) Download PDFInfo
- Publication number
- UA56971A UA56971A UA2003032233A UA200332233A UA56971A UA 56971 A UA56971 A UA 56971A UA 2003032233 A UA2003032233 A UA 2003032233A UA 200332233 A UA200332233 A UA 200332233A UA 56971 A UA56971 A UA 56971A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antigen
- wells
- trichinella
- plasma
- antibodies
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 17
- 241000243777 Trichinella spiralis Species 0.000 title abstract 2
- 229940096911 trichinella spiralis Drugs 0.000 title abstract 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 14
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 7
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 208000003982 trichinellosis Diseases 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 abstract description 4
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 1
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 1
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000024293 detection of nematode Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до Trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини включає набір реагентів для імуноферментного аналізу та концентрований трихінельозний антиген. При цьому до лунок полістиролових планшетів, де знаходиться адсорбований антиген Trichinella spiralis, вносять досліджувані зразки сироваток або плазми крові.
Description
Опис винаходу
Винахід відноситься до ветеринарної медицини, а саме до виявлення антитіл до ТгіспіпеЇМа зрігаїів в 2 сироватці та плазмі крові тварини.
Личинка Тгіспіпейа зрігайз є небезпечним збудником хвороби теплокровних тварин ї людей. Вона завдає великої шкоди свиноробству і приводить до значних збитків у сільському господарстві. На сьогодні в Україні склалась тривожна ситуація відносно трихінельозу. Широке розповсюдження хвороби серед свиней і неодноразові випадки зараження людей через вживання свинини свідчать про недостатній контроль за 70 поширенням вогнищ інфекції і недостатній рівень тестування інфікованих тварин.
Діагностика трихінельозу на містах відбувається методом компресійної трихінелоскопії що є дуже трудоємким, малоефективним відносно чутливості методом і не задовольняє сучасним потребам у діагностиці захворювання. Найбільш чутливим і достатньо специфічним сучасним методом діагностики трихінельозу у світі є метод імуноферментного аналізу, який полягає в тому, що у зразках сироватки тварин і людей тестують вміст специфічних до збудника антитіл. Звичайно тестування цим методом дає позитивний сигнал на 16-25 день після інфікування тварини, в той час, як стандартний метод трихінелоскопії в такий термін дає дуже низький відсоток виявлення інфекції. Порівняно з методом трихінелоскопії імуноферментний метод має також незаперечну перевагу при скринінгових дослідженнях.
Найближчим аналогом винаходу є спосіб виявлення нематод Тгісптега зрігаїї5, який полягає в тому, що в лунки мікропланшета для імунологічних досліджень, які є інертними носіями антигену і антитіл, послідовно вносять розчинений антиген, досліджувану сироватку крові, кон'югат і субстрат. Кон'югат це розчин антивидових антитіл мічених ферментом. В якості антигену використовують трихінельозний антиген, який одержують з личинок трихінел. Антиген одержують в 2 етапи, спочатку готується цільний екстракт личинок трихінел, потім він фракціонується методом гель-хроматографії на сефадексі 5-200.
Створений в процесі постановки реакції комплекс антиген-антитіло виявляється за допомогою кон'югата, що « розщеплює субстрат, який характеризується появою темно-коричневого забарвлення, яке може реєструватись візуально по титру дослідних сироваток або за допомогою спектрофотометра, шляхом вимірювання оптичної густини субстрату (1).
Недоліком цієї тест-системи її трудомісткість і складність. До того ж використання фракціонованого -- антигену може давати помилкові результати. -
В основу винаходу поставлена задача розробити тест-систему "ІФА-Трихінела скрін тестАВ" на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до ТгіспіпеММа зрігайвз в сироватці і плазмі о крові тварини шляхом застосуванням набору реагентів, що дозволяло би спростити процес ідентифікації Ге) личинок Ттіспіпеїа зрігаїїз та підвищити його надійність. 3о Виходячи з цих міркувань розроблено на основі імуноферментного методу тест-систему "ІФА-Трихінела о скрин тест АВ", яка задовольняє сучасним вимогам діагностики тріхинельозу відносно чутливості і специфічності і може бути використана для скринінгових обстежень.
Поставлена задача вирішується у тест-системі на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої « ідентифікації личинкової стадії Тгіспіпейа зрігайв в м'язовій тканині тварини, яка включає набір реагентів З для імуноферментного аналізу та концентрований трихінельозний антиген, відповідно до винаходу; до лунок с полістиролових планшетів де знаходиться адсорбований антиген ТтгіспіпеїІа зрігаїїз вносять досліджувані зразки
Із» сироваток або плазми крові при цьому специфічні до антигену антитіла зв'язуються з антигеном на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло, після відмивання антитіл, що не зв'язались, в лунки планшетів вносять імуноферментний кон'югант, позначений пероксидазою, який зв'язується з комплексами антиген-антитіло, а 49 дісля інкубації та відмивання непов'язаного кон'югату, в лунки додають субстрат пероксидази перекис водню та і-й хромоген - ортофенілендіамін, пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи 2М розчин сірчаної кислоти, і
Ге») вимірюють оптичну густину суміші в лунках, яка при довжині хвилі світла 492 нм та 620 нм пропорційна концентрації специфічних антитіл у досліджуваних зразках. о Для виключення хибних результатів зразки, що досліджуються, необхідно готувати і зберігати в умовах, які -і 20 запобігають бактеріальному проростанню.
Треба освітлювати зразки, які містять агрегати та осад за допомогою центрифугування. Зібрані зразки та зберігають при температурі 4-8"С на протязі 72 годин. Якщо немає можливості провести аналіз в цей термін, зразки необхідно заморозити (до -207С). Слід запобігати размороження зразків більше двох разів. Кожний зразок сироватки або буферний розчин відбирають окремим чистим наконечником. 29 Склад набору. » во "в. Конютатмчений пероксидазою проти мукотобулічв класу 0 свиней осгмл бо 8 Позитивна контрольна сироватка О,О5мл -Д-
ЗІ 00111 Неттенасонтрольнясировата | оовмл
Проведення аналізу (у розрахунку на 1 планшет).
Перед проведенням аналізу тест-систему витримують при кімнатній температурі протягом 30 хвилин.
Готують розчин для промивання планшетів. Для цього 1Омл концентрату розчину для промивання планшетів 7/0 Возводять У 290мл дистильованої води. Якщо концентрат розчину кристалізований, його прогрівають перед застосуванням при 35-37"С до повного розчинення кристалів.
Вносять у всі лунки планшету для попереднього розведення по 95мкл розчину для розведення сироваток.
Вносять в лунки планшету аналогічно по 5мкл досліджуваних сироваток, залишивши вільними від зразків вісім контрольних лунок.
Вносять в три з восьми контрольних лунок планшету по 5мкл позитивного контролю.
Вносять в три інші лунки по 5мкл негативного контролю.
Залишають без зразків дві контрольні лунки (контроль кон'югату).
Вносять в усі лунки планшету з імуносорбентом по 9Омкл розчину для розведення сироваток.
Переносять з планшету для попереднього розведення сироваток по 1Омкл розведення у планшет з імуносорбентом.
Закривають планшет клейкою плівкою та інкубують його при 377С 60 хвилин.
Промивають планшет розчином для промивання планшетів 4 рази, після цього позбавляються вологи постукуючи планшетом по фільтрувальному папері.
Готують розчин кон'югату. Для цього вміст ампули кон'югату вносять у їОмл розчину для розведення об Кон'югату, ретельно піпетують недопускаючи піноутворення.
Вносять в усі лунки планшету по 100мкл розчину кон'югату та інкубують його при 377"С ЗОхвилин. «
Промивають планшет розчином для промивання планшетів б разів, після цього позбавляються вологи постукуючи планшетом по фільтрувальному папері.
Готують розчин проявника: для цього одну таблетку або вміст порошку однієї капсули вносять у 1О0мл «- зо розчину для приготування хромогену, ретельно струшують 2-4 хвилини до повного розчинення хромогену.
Вносять по 100мкл розчину проявника в усі лунки планшету та інкубують в темному місці 30 хвилин. -
Зупиняють реакцію додаванням в кожну лунку 5Омкл стоп-реагенту і визначають оптичну густину у Ф двохвильовому режимі (492нм та 62Онм)
Облік результатів аналізу. со
Розраховують середнє значення оптичної густини для лунок позитивного і негативного контролів. ю
Проведення аналізу вважають коректним, якщо середнє значення оптичної густини негативного контролю не вище ОД оптичної одиниці, а середнє значення позитивного контролю не нижче 0,6. Якщо одне з трьох значень негативного контролю більше 0,1 оптичної одиниці, його відкидають і середнє значення розраховують за значеннями оптичної густини решти лунок. «
Граничне значення розраховують, додаючи сталу для даної серії наборів величину оптичної густини -о с негативного-контролю. "Сіра зона" - зона значень оптичної густини досліджуваних зразків, яка простягається від граничної зони :з» до значень оптичної густини меньших граничного значення на 10905.
Результати тестування вважають позитивними, якщо оптична густина досліджуваного зразка більша ніж
Граничне значення. Результати тестування вважають негативними, якщо оптична густина досліджуваного зразка с менша рівня "сірої зони".
Форма випуску набору.
Ме Діагностичний імуноферментний набір " ІФА-Трихінела скрін тест АВ " складається з двох комплектів со реагентів. Набір розраховано на проведення 176 аналізів.
Джерела інформації: і 1. Бессонов А.С. Диагностика трихинеллеза, Вильнюс, "Митне", 1975, -с.383.
Claims (1)
- - Формула винаходу Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до ТГгіспіпейПа Р зрігайз в сироватці і плазмі крові тварини, яка включає набір реагентів для імуноферментного аналізу та концентрований трихінельозний антиген, яка відрізняється тим, що до лунок полістиролових планшетів, де знаходиться адсорбований антиген ТгіспіпеЇМа зрігайв, вносять досліджувані зразки сироваток або плазми во крові, при цьому специфічні до антигену антитіла зв'язуються з антигеном на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло, після відмивання антитіл, що не зв'язались, в лунки планшетів вносять імуноферментний кон'югант, позначений пероксидазою, який зв'язується з комплексами антиген-антитіло, а після інкубації та відмивання непов'язаного кон'юганту в лудки додають субстрат пероксидази, перекис водню та хромоген - ортофенілендіамін, пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи 2М розчин сірчаної кислоти, і вимірюють оптичну 65 густину суміші в лунках, яка при довжині хвилі світла 492 нм та 620 нм пропорційна концентрації специфічних антитіл у досліджуваних зразках.Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2003, М 5, 15.05.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. « «- ча (22) (Се) ІС в) -с . и? 1 (22) се) - 50 - 60 б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003032233A UA56971A (uk) | 2003-03-14 | 2003-03-14 | Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003032233A UA56971A (uk) | 2003-03-14 | 2003-03-14 | Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA56971A true UA56971A (uk) | 2003-05-15 |
Family
ID=74208774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2003032233A UA56971A (uk) | 2003-03-14 | 2003-03-14 | Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA56971A (uk) |
-
2003
- 2003-03-14 UA UA2003032233A patent/UA56971A/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Petersen et al. | Performance evaluation of a specific IgE assay developed for the ADVIA Centaur® immunoassay system | |
| Amarir et al. | National serologic survey of Haematobium schistosomiasis in Morocco: evidence for elimination | |
| NO160746B (no) | Fremgangsm te fovisning av okkult blod i fecesproeve | |
| JP2007010418A (ja) | 検体中の内分泌物質測定方法 | |
| CN110488025A (zh) | 一种化学发光定量检测粪便钙卫蛋白及其检测方法和其在肠道健康检测的用途 | |
| MX2007006621A (es) | Anticuerpos monoclonales y policlonales para hemoglobina equina y aparatos y metodos que emplean anticuerpos o reacciones quimicas de peroxidasa en la identificacion y ubicacion de ulceras de equinos. | |
| Yilmaz et al. | Are tonsils a reservoir for Helicobacter pylori infection in children? | |
| KR19980701608A (ko) | 심장 트로포닌 1의 초감도 분석방법 | |
| AU2439600A (en) | Urinary trypsin inhibitor to diagnose aids | |
| UA56971A (uk) | Тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої ідентифікації антитіл до trichinella spiralis в сироватці і плазмі крові тварини (іфа-трихінела скрин тест ав) | |
| US6756043B2 (en) | Compositions and methods for detecting adult Taenia solium | |
| US20230055382A1 (en) | Detecting gut barrier dysfunction and/or cirrhosis | |
| KR101894489B1 (ko) | Igm 반정량적 렙토스피라증 진단 키트 | |
| CZ299992B6 (cs) | Zpusob detekce patogenních organismu ve vzorcích stolice, slin, sekrekcního a bioptického materiálu | |
| CN110716054A (zh) | 一种血清亲细胞性免疫球蛋白e的定量检测试剂盒 | |
| Everall | The double diffusion precipitin test in human fascioliasis | |
| WO2012077983A2 (ko) | Ape1/ref-1을 함유하는 방광암 진단용 조성물, 및 이를 이용한 방광암 진단 키트 | |
| RU2338462C1 (ru) | Способ определения прогрессирования течения опухолевого процесса | |
| RU2574914C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики хронического гастродуоденита у детей | |
| RU2112243C1 (ru) | Набор "па-тест" для диагностики неврологических заболеваний | |
| AU2021105747A4 (en) | Application of diagnostic kit and MAK16 in preparation of reagent for early diagnosis of systemic lupus erythematosus | |
| WO2023090553A1 (ko) | 인간의 소변을 검체로 이용하여 대장암을 진단하는 진단키트 | |
| CN110741099B (zh) | 评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒 | |
| JP3165788B2 (ja) | 歯周病の診断キット | |
| Motha et al. | Confirmation of rabbit haemorrhagic disease in wild New Zealand rabbits using the ELISA |