UA46673C2 - Method of cryopreservation of human hemopoietic cells - Google Patents
Method of cryopreservation of human hemopoietic cells Download PDFInfo
- Publication number
- UA46673C2 UA46673C2 UA2002010343A UA2002010343A UA46673C2 UA 46673 C2 UA46673 C2 UA 46673C2 UA 2002010343 A UA2002010343 A UA 2002010343A UA 2002010343 A UA2002010343 A UA 2002010343A UA 46673 C2 UA46673 C2 UA 46673C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- minus
- cells
- freezing
- degree
- stage
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 20
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title abstract description 5
- 210000004524 haematopoietic cell Anatomy 0.000 title abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 20
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 19
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 19
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 10
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 2
- 235000015111 chews Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 1
- 210000005256 gram-negative cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
но підібраний режим зниження температури не викликає зріст великих кристалів які можуть порушити обо- лонки клітин.but the selected mode of lowering the temperature does not cause the growth of large crystals that can disrupt cell membranes.
Зазначені переваги, призводять до збільшення періоду збереження та збільшення кількості життєздат- них клітин після періоду заморожування.These advantages lead to an increase in the preservation period and an increase in the number of viable cells after the freezing period.
Для порівняння прототипу та запропонованого способу здійснювали спосіб за прототипом та запропо- нованим на зазначених нижче прикладах 1-64. В прикладах здійснювали такі дії.To compare the prototype and the proposed method, the method according to the prototype and the one proposed in examples 1-64 indicated below was carried out. In the examples, the following actions were performed.
Незалежно від джерела одержання (кістковий мозок, кордова кров, ембріональна печінка, периферична кров) приготування клітинної суспензії за прототипом та запропонованим способом здійснювали однаково.Regardless of the source (bone marrow, cord blood, embryonic liver, peripheral blood), the preparation of the cell suspension according to the prototype and the proposed method was carried out in the same way.
В таблиці 1 зазначені режими виконання прикладів 1-8 за прототипом. При підготовці клітин до низько- температурного консервування за прототипом, в отриману завісь клітин, що призначені для кріоконсерву- вання, через ін'єкційну голку по краплині додавали такий же об'єм кріоконсерванта, який являв собою 1,5- 2,5моль/л гліцерину у середовищі ЮОцірессоз Моайеай Еадіє5 Меаіїим при легкому перемішуванні завісі шляхом похитування пробірки.Table 1 shows the modes of execution of examples 1-8 according to the prototype. When preparing cells for low-temperature preservation according to the prototype, the same volume of cryopreservative, which was 1.5-2.5 mol/l, was added dropwise through an injection needle to the obtained suspension of cells intended for cryopreservation of glycerol in the medium of JuOciressoz Moayeai Eadie5 Meaiiim with light stirring of the suspension by shaking the test tube.
За допомогою шприцу через ін'єкційну голку гемопоетичні клітини розливали по мл в поліетиленові кріоампули об'ємом 1,8мл фірми Мипс (Стуобіоге Вохев).Using a syringe through an injection needle, hematopoietic cells were poured ml by ml into polyethylene cryoampules with a volume of 1.8 ml from the Mips company (Stuobioghe Vohev).
Кріоампули герметично закривали кришками і маркували. Заморожування здійснювали при різних ре- жимах зазначених в Таблиці 1. Заморожування гемопоетичніх клітин за прототипом виконували за допомо- гою програмного заморожувача, який дозволяє варіювати швидкість зниження температури на різних ета- пах. Для ініціалізації кристалоутворення додатково вносили в крісзампули зародки льоду в позаклітинний простір кріоконсерванта і клітин.Cryoampules were hermetically closed with lids and labeled. Freezing was carried out in different modes indicated in Table 1. Freezing of hematopoietic cells according to the prototype was performed with the help of a software freezer, which allows you to vary the rate of temperature reduction at different stages. To initialize crystal formation, ice nuclei were additionally introduced into the crysampules in the extracellular space of the cryopreservant and cells.
Зберігали кріоконсервовані гемопоетичні клітини в низькотемпературному сховищі при -707С. протягом двох місяців.Cryopreserved hematopoietic cells were stored in a low-temperature storage at -707C. within two months.
Процедуру відмивання клітин від кріопротектора здійснювали шляхом додавання розчину, який містить удвічі меншу концентрацію кріопротектора, розчин центрифугували при швидкості 2000об/хвил. протягом 10 хвилин. Потім надосадок знімали, ще раз додавали удвічі меншу концентрацію кріопротектора, повторюва- ли процес центрифугування. Надосадок знімали, до осадку додавали розчин фізіологічного розчину, до до- сягнення початкового об'єму суспензії.The procedure of washing the cells from the cryoprotectant was carried out by adding a solution containing half the concentration of the cryoprotectant, the solution was centrifuged at a speed of 2000 rpm. within 10 minutes. Then the supernatant was removed, half the cryoprotectant concentration was added once again, and the centrifugation process was repeated. The supernatant was removed, a saline solution was added to the precipitate until the initial volume of the suspension was reached.
В таблиці 2 зазначені режими виконання прикладів 9-64 за пропонованим способом.Table 2 shows the modes of execution of examples 9-64 according to the proposed method.
В прикладах 9-22, таблиця 2а використовували гемопоетичні клітини ембріональної печінки, в прикла- дах 23-36, таблиця 26 гемопоетичні клітини кордової крові, в прикладах 37-50, таблиця 2с гемопоетичні клі- тини периферичної крові, в прикладах 51-64, таблиця 2д гемопоетичні клітини кістяного мозку.In examples 9-22, table 2a, embryonic liver hematopoietic cells were used, in examples 23-36, table 26, cord blood hematopoietic cells, in examples 37-50, table 2c, peripheral blood hematopoietic cells, in examples 51-64, table 2d hematopoietic cells of the bone marrow.
Підготовка клітин до низькотемпературного консервування за запропонованим способом.Preparation of cells for low-temperature conservation according to the proposed method.
Кріопротектор диметилсульфоксид (далі ДМСО) - 7,Омол/л концентрації розводили до 0,8 і 2,9мол/л концентрації, а потім додавали до клітин у співвідношенні 1:1 до одержання 0,4-1,45мол/л кінцевих концен- трацій. В отриману завісь клітин, що призначені для кріоконсервування, через ін'єкційну голку по краплині додавали такий же об'єм 0,4-1,45моль/л диметилсульфоксиду (далі ДМСО) при легкому перемішуванні за- вісі шляхом похитування пробірки.Cryoprotectant dimethylsulfoxide (hereinafter DMSO) - 7.Omol/l concentration was diluted to 0.8 and 2.9mol/l concentrations, and then added to the cells in a 1:1 ratio to obtain 0.4-1.45mol/l final concentrations thrations The same volume of 0.4-1.45 mol/l dimethylsulfoxide (hereinafter DMSO) was added dropwise through an injection needle to the obtained suspension of cells intended for cryopreservation, while gently mixing the suspension by shaking the test tube.
За допомогою шприцу через ін'єкційну голку гемопоетичні клітини розливали по мл в поліетиленові кріоампули об'ємом 1-1,89мл фірми Мипс (Стгуобіоге Вохе5з). Кріосампули герметично закривали кришками і маркували.With the help of a syringe through an injection needle, hematopoietic cells were poured by ml into polyethylene cryoampules with a volume of 1-1.89 ml from the Myps company (Stguobioge Wohe5z). Cryosamples were hermetically closed with lids and labeled.
Заморожування гемопоетичніх клітин виконували за допомогою програмного заморожувача, який до- зволяє варіювати швидкість зниження температури на різних етапах кріоконсервування і автоматично здій- снювати ініціювання процесу кристалізації (сідінг) за певної температури, шляхом разового пропуску рідкого азоту через відповідну трубку.Freezing of hematopoietic cells was performed with the help of a software freezer, which allows to vary the rate of temperature reduction at different stages of cryopreservation and to automatically initiate the crystallization process (seeding) at a certain temperature, by passing liquid nitrogen through the appropriate tube once.
При заморожуванні клітинної суспензії в ампулах використовували спеціальні укладки, в які вставляли контейнери вертикально і укладку розміщували в теплообмінну камеру заморожувача на відповідному при- строї, що виконує ініціацію кристалоутворення.When freezing the cell suspension in ampoules, special stacks were used, into which the containers were inserted vertically and the stack was placed in the heat exchange chamber of the freezer on the appropriate device that initiates crystal formation.
Заморожування клітин виконували за трьохетапною програмою. На першому етапі від кімнатної темпе- ратури (20:47) зі швидкістю (0,7-1,27С) на хвилину до (мінус 8,5-10,5"С). На протязі першого етапу замо- рожування, при досягненні температурі -3,5 -4"С здійснювали захолоджування (сідінг) одного боку контей- нера із клітинною суспензією, шляхом разового пропускання через нього рідкого азоту, завдяки чому, при відповідній температурі автоматично відбувалася ініціація кристалоутворення.Cell freezing was performed according to a three-stage program. In the first stage, from room temperature (20:47) at a rate of (0.7-1.27C) per minute to (minus 8.5-10.5"C). During the first stage of freezing, upon reaching at a temperature of -3.5-4"C, cooling (seeding) of one side of the container with the cell suspension was carried out by passing liquid nitrogen through it once, thanks to which, at the appropriate temperature, initiation of crystal formation occurred automatically.
На другому зі швидкістю - (1,0-4,57С) на 1 хвилину до (мінус 30-402С) і на третьому - зі швидкістю 10- 127С на 1 хвилину до (мінус 130-1967С). Конкретні зазначені в таблиці 2. Концентрація кріопротектора скла- дала 0,4-1,4моль/л. Після замороження контейнери за допомогою ліщат вилучали із укладки і переносили в рідкий азот в спеціальне сховище біологічних продуктів (марки СБ-0,5), обладнане чарунками зі змінними касетами.On the second with a speed of (1.0-4.57С) for 1 minute to (minus 30-402С) and on the third - with a speed of 10-127С for 1 minute to (minus 130-1967С). Specific ones are listed in Table 2. The concentration of the cryoprotectant was 0.4-1.4 mol/l. After freezing, the containers were removed from the stack with the help of laths and transferred to liquid nitrogen in a special storage of biological products (brand SB-0.5), equipped with cells with replaceable cassettes.
Зберігали кріоконсервовані гемопоетичні клітини в низькотемпературному сховищі при мінус 130-196" протягом трьох місяців.Cryopreserved hematopoietic cells were stored in a low-temperature storage at minus 130-196" for three months.
Ефективність режимів зазначених в прикладах оцінювали шляхом перевірки життєздатності клітин, яку оцінювали методом наступного культивування в агаровому середовищі клітин заморожених за режимами зазначеними в прикладах 1-8 після двомісячного зберігання, а в прикладах 9-64 - після тримісячного збері- гання при кінцевій температурі охолодження зазначеної в прикладах. Ефективність методу також оцінювали проведенням бактеріологічного контролю кріоконсервованих гемопоетичних клітин.The effectiveness of the regimes specified in the examples was evaluated by checking the viability of cells, which was evaluated by the method of subsequent cultivation in an agar medium of cells frozen according to the regimes specified in examples 1-8 after two months of storage, and in examples 9-64 - after three months of storage at the final cooling temperature of the indicated in the examples. The effectiveness of the method was also assessed by carrying out bacteriological control of cryopreserved hematopoietic cells.
Бактеріологічний контроль кріоконсервованих гемопоетичних клітин на відсутність грампозитивної і грамнегативної флори здійснювали згідно «Інструкції з контролю стерильності консервованої крові, її ком- понентів, препаратів, консервування кісткового мозку, кровозамінювачів, консервуючих розчинів та умов їх заготівлі», затвердженої МОЗ України в 1996р.Bacteriological control of cryopreserved hematopoietic cells for the absence of gram-positive and gram-negative flora was carried out in accordance with the "Instructions for controlling the sterility of preserved blood, its components, drugs, preservation of bone marrow, blood substitutes, preservative solutions and conditions for their preparation", approved by the Ministry of Health of Ukraine in 1996.
З цією метою сателіт вилучали з низькотемпературного банку і розморожували у водяній бані (плюс 4020,57С) і здійснювали скрінінг.For this purpose, the satellite was removed from the low-temperature bank and thawed in a water bath (plus 4020.57C) and screening was carried out.
Якісні характеристики отриманих за відомим способом продуктів зазначені, в таблиці 1, в конкретних прикладах. Як видно з результатів більшість зразків має контамінацію різними видами мікрофлори, що свід- чить про порушення стерильності при внесенні кристалів льоду.The qualitative characteristics of the products obtained by the known method are indicated in table 1 in specific examples. As can be seen from the results, most of the samples are contaminated with various types of microflora, which indicates a violation of sterility during the introduction of ice crystals.
В прикладах 9-64 в таблиці 2а, 26, 2с, 2д зазначено кількість колоній та кластерів (на 105 посаджених у культуру клітин) на 8-10 добу. Приклади 9-64 характеризуються відсутністю грампозитивної і грамнегативної флори в отриманому продукті.In examples 9-64, Tables 2a, 26, 2c, 2d show the number of colonies and clusters (per 105 cells planted in culture) for 8-10 days. Examples 9-64 are characterized by the absence of gram-positive and gram-negative flora in the obtained product.
Як видно з отриманих результатів запропонований спосіб має кращі результати збереження клітин.As can be seen from the obtained results, the proposed method has better results in preserving cells.
Ініціація кристалоутворення в цьому способі здійснюється автоматично без додаткового контакту з клі- тиною суспензією, що спрощує спосіб та покращує умови стерильності середовища.The initiation of crystal formation in this method is carried out automatically without additional contact with the cell suspension, which simplifies the method and improves the sterility of the environment.
Застосовані в способі середовища дозволено для внутрівенного використання і тому клітини отримані за таким способом можна використовувати в більшості випадків лікування.The medium used in the method is allowed for internal use and therefore the cells obtained by this method can be used in most cases of treatment.
Зазначені режими заморожування не травматичні для гемопоетичних клітин людини тому, що емпірич- но підібраний режим зниження температури не викликає ріст великих кристалів які можуть порушити обо- лонки клітин.The specified freezing modes are not traumatic for human hematopoietic cells because the empirically selected mode of lowering the temperature does not cause the growth of large crystals that can disrupt cell membranes.
Завдяки тому, що спосіб передбачає використання зменшеної концентрації кріопротектора, отримані за способом клітини можна використовувати зразу після розморожування без відмивання від кріопротектора, що спрощує спосіб та зменшує негативний вплив додаткових дій на клітини.Due to the fact that the method involves the use of a reduced concentration of cryoprotectant, the cells obtained by the method can be used immediately after thawing without washing off the cryoprotectant, which simplifies the method and reduces the negative impact of additional actions on the cells.
Зазначені переваги, як показують приклади, призводять до збільшення періоду збереження та збіль- шення кількості життєздатних клітин після періоду заморожування.These advantages, as the examples show, lead to an increase in the period of preservation and an increase in the number of viable cells after the freezing period.
Таблиця 1Table 1
Кількість колоній таNumber of colonies and
Використовувані! Швидкість за- | Кінцева те- | Швидкість за- | Кінцева темпе-| Термін кластерів Наявність .Used! Speed per- | The final te- | Speed per- | Final tempe-| The term clusters Availability.
Ме прик- - Н (на 107 по- ІГрампозитивної ладу гемопоєтичні морожування, мпература морожування, ратура заморо- зберігання, саджених у і грамнегатив- клітини С/хвил. етапу, "С С/хвил. жування, "С місяців . культуру ної флори клітин) на 8-10 добу 7. кордовакровї | - 10 | 6 | 03 | 0 | 2 | 2 | Наявна 2. |кордовакров.ї | - 1 | 8 / 002 | 0 2 | 2 | 9 | З Наявна а ен | 9 | 8 | 09 | т | 2 | з | Вася печінка « Гени| " | з | ме | т | 2 | "м | наявна печінка периферична зош 15150012 2 | я периферична - є дв | 1 | в | 02 | т | ге | 8 | Вдотя о /. |кістковиймозок|,д 10 | 6 | 77703 | 0 | 2 | 2 | Наявна 8. |кістювиймозок|ї 1 | 8 | 002 2 | 0 2 | 2 | 7 | З Наявна - кріопротектора; морожування, | проведення | мпература | морожування, | мпература о упинки,;! морожування, | рату) ладу о сиг о о о о зупинка, "С о моль/л С/хвил. сідінгу, "С етапу, "С С/хвил. етапу, "С ХВ. С/хвил. жує 9 | ющг0о6 | 08 | 35 | -85 | 13 | 386 | 386 | 47 | 114 10... 1ЙЮЙьюиюг0бб5 | 09 | 36 | -05 | 175 | 364 | 364 | 44 | 116 ( 1. 17773 777107 | 39 | 86 | 38 | 35 | 35 |46| п и 14177114 7777 ли | 14 7196 | 45 | 329 | 325 | 33 | 2 щ 173 щ Ккфе 15. | 08 2 | 08 | 37 | 55 | 25 | 30 | з0 | 4 | 106 ( 16. 17.77 1т72 | 09 2 6 ю Ю | 39 | 94 | 4 | о | 40 | 49| 107 ( 17. | 04 2 | 09 | 35 | 98 | 23 | 379 | з79 | 3 | 117 ЦК 18. | 71 | 08 2 | 38 | лом | 35 | 314 | 314 | 5 | 119 ( 19. 1ЙЮЙ2 09 2 ЮюЮ(| 098 | 38 | лом | 43 | 357 | з5/ | 39 | 0 ( 20. | щ.0б7 | 08 | 36 | 2 | 28 | зе | з21 | 37 | 18 ( 21. 17117145 | ли | 4 1 859 | ющ1т78 | з/1 | з/1 | 34 | 103 з; 22. | 0098 6ЮЖ | 1 | 37 | 104 | 2 | з/1 | з/1 | 49| о (Me app- - N (for 107 I Gram-positive hematopoietic freezing, freezing temperature, freezing temperature, planted in and gram-negative cells C/min. stage, "C C/min. chewing, "C months. culture of flora cells) for 8-10 days 7. cord blood | - 10 | 6 | 03 | 0 | 2 | 2 | Available 2. cord blood - 1 | 8 / 002 | 0 2 | 2 | 9 | With Available and en | 9 | 8 | 09 | t | 2 | with | Your liver "Genes". " | z | me | t | 2 | "m | available liver peripheral hospital 15150012 2 | I am peripheral - there are two | 1 | in | 02 | t | hey | 8 | Vdotia about /. |bone marrow|, d 10 | 6 | 77703 | 0 | 2 | 2 | Available 8. bone marrow 1 8 | 002 2 | 0 2 | 2 | 7 | Z Available - cryoprotector; ice cream, | holding | empire | ice cream, | empire about stops,;! ice cream, | rate) order o sig o o o o stop, "S o mol/l S/min. seeding, "S stage, "S S/min. stage, "S MIN. S/minute chews 9 | yushg0o6 | 08 | 35 | -85 | 13 | 386 | 386 | 47 | 114 10... 1ЮЮЮюйюг0бб5 | 09 | 36 | -05 | 175 | 364 | 364 | 44 | 116. | 55 | 25 | 30 | z0 | 4 | 106 ( 16. 17.77 1t72 | 09 2 6 yu Yu | 39 | 94 | 4 | о | 40 | 49| 107 ( 17. | 04 2 | 09 | 35 | 98 | 23 | 379 | z79 | 3 | 117 CC 18. | 71 | 08 2 | 38 | scrap | 35 | 314 | 314 | 5 | 119 ( 19. 1ЮЮЙ2 09 2 ЮюЮ(| 098 | 38 | scrap | 43 | 357 | z5/ | 39 | 0 ( 20. | sh.0b7 | 08 | 36 | 2 | 28 | ze | z21 | 37 | 18 ( 21. 17117145 | ly | 4 1 859 | yush1t78 | z/1 | z/1 | 34 | 103 z; 22. | 0098 6ХХ | 1 | 37 | 104 | 2 | z/1 | z/1 | 49| o (
Є кріопротектора; морожування, | проведення | мпература | морожування, | мпература о упинки,;! морожування, | рату) ладу о сту о о о о зупинка, "С о моль/л С/хвил. сідінгу, "С етапу, "С С/хвил. етапу, "С ХВ. С/хвил. жує 23. | ЙЮЙИ РОБ | 6 Бж ж й 09 | 35 | ло4 | 45 | 357 | з35/ | 43 | 119 ( 24. | 06 | їпе | 36 | 92 | 25 | -за3 | з43 | 4 | 7There is a cryoprotector; ice cream, | holding | empire | ice cream, | empire about stops,;! ice cream, | rate) order o st o o o o o stop, "S o mol/l S/min. seeding, "S stage, "S S/min. stage, "S MIN. S/minute chews 23. | YUYI ROB | 6 Fri and 09 | 35 | lo4 | 45 | 357 | with 35/ | 43 | 119 ( 24. | 06 | ype | 36 | 92 | 25 | -za3 | z43 | 4 | 7
25. | 13 | 1 | 39 | 98 | а | 379 | з79 | 36 | 10 КК 27. | 098 6 6ЮБЮЩ | 09 | 38 | -4 | 35 | зе! | з21 | 33 | 106 КН 28. |ЙЮЙм 04 | 08 | 35 | 99 | 43 | з/1 | з/1 | 5 | 703 и( 30. |. 72 | 09 6 ЮюЮщ | 39 | 86 | 73 | 393 | 393 | 49 | 4 щ л2 2 КЦц з | 174 | 09 | 4 | 88 | 75 | 336 | 336 | 3 | 109 К|(Ш 32 | 08 2 | 1 | 37 | 85 | 38 | 329 | з29 | 47 | М 35. | 145 | ли | 4 | 96 | 178 | 364 | 364 | 44 | пл 365 | 09 | 08 | 37 | -05 | 2 | з5 | -з5 | 37 | 104 (25 13 | 1 | 39 | 98 | and | 379 | from 79 | 36 | 10 of the Criminal Code 27. | 098 6 6YUBYUSH | 09 | 38 | -4 | 35 | what! | from 21 | 33 | 106 KN 28. |ЮЮМ 04 | 08 | 35 | 99 | 43 | with/1 | with/1 | 5 | 703 i( 30. |. 72 | 09 6 YuyuYushch | 39 | 86 | 73 | 393 | 393 | 49 | 4 sh l2 2 КЦц with | 174 | 09 | 4 | 88 | 75 | 336 | 336 | 3 | 109 K |(W 32 | 08 2 | 1 | 37 | 85 | 38 | 329 | z29 | 47 | M 35. | 145 | ly | 4 | 96 | 178 | 364 | 364 | 44 | pl 365 | 09 | 08 | 37 | -05 | 2 | z5 | -z5 | 37 | 104 (
Ме прик- Концентрація Швидкість за- |Гемператураї! Кінцева те- | Швидкість за- | Кінцева те- емпературна Термін | Швидкість за- | Кінце ладу кріопротектора) морожування, | проведення | мпература | морожування, | мпература зупинка, «С упинки, морожування, | рату) моль/л "б/хвил. сідінгу, "С етапу, "С "б/хвил. етапу, "С " ХВ. "С/хвил. жує 38. |. 09 2 | 1 | 38 | 96 | 45 | 329 | 329 | 36 | 109 фКи 395 | 04 | 08 | 35 | 5 | 35 | -14 | 314 | 5 | 116 40. 1... | 109 | 38 | 05 | 43 | 357 | з5/ | 39 | пл а. | 08 | 09 | 37 | 98 | 28 | 40 | 40 | 37 | 106 ( 42. 1. 12 | 08 2 | 39 | 86 | 175 | 364 | 364 | 47 | 173 Ци( 43. | 13 | 09 | 39 | лбе | з | з0 | з0 | 34 | 107 ( 45. | 06 | 07 | 36 | 9 | 23 | 336 | 336 | 46 | п і 46. | 14 | 08 | 4 | 1 | 18 | 386 | 386 | 41 | 18 2 КНЦК 47. 1... 07 | 08 6 ЮюЮ | 36 | 385 | 25 | За | з2а1 | 33 | 1/7 49. 1 .ЮюЮюЮюЙО05 | 08 | 35 | лом | 2 | з/1 | з/1 | 49| о 50. | щ09 2 5 | 7 | 37 | 92 | 13 | 379 | з79 | з | 103Me app- Concentration Speed per- |Hemperaturai! The final te- | Speed per- | Final temperature Term | Speed per- | The end of cryoprotector) freezing, | holding | empire | ice cream, | temperature stop, «C stops, freezing, | ratu) mol/l "b/min. seeding, "C stage, "C "b/min. stage, "C" min. "S/min. chewing 38. |. 09 2 | 1 | 38 | 96 | 45 | 329 | 329 | 36 | 109 fKy 395 | 04 | 08 | 35 | 5 | 35 | -14 | 314 | 5 | 116 40 1... | 109 | 38 | 05 | 43 | 357 | z5/ | 39 | pl a. | 08 | 09 | 37 | 98 | 28 | 40 | 40 | 37 | 106 ( 42. 1. 12 | 08 2 | 39 | 86 | 175 | 364 | 364 | 47 | 173 Tsi( 43. | 13 | 09 | 39 | lbe | z | z0 | z0 | 34 | 107 ( 45. | 06 | 07 | 36 | 9 | 23 | 336 | 336 | 46 | p and 46. | 14 | 08 | 4 | 1 | 18 | 386 | 386 | 41 | 18 2 KNCK 47. 1... 07 | 08 6 YuyuYu | 36 | 385 | 25 | For | з2а1 | 33 | 1/7 49. 1 .ЮюЮюЮюЮО05 | 08 | 35 | scrap | 2 | z/1 | z/1 | 49| o 50. | sh09 2 5 | 7 | 37 | 92 | 13 | 379 | from 79 | from | 103
Ме прик- Концентрація Швидкість за- |Гемператураї! Кінцева те- | Швидкість за- | Кінцева те- емпературна Термін | Швидкість за- |Кінце ладу кріопротеєктора,| морожування, | проведення | мпература | морожування, | мпература зупинка, «С упинки,| морожування, | рату моль/л "б/хвил. сідінгу, "С етапу, "С "б/хвил. етапу, "С " ХВ. "С/хвил. жу 52 104 | ли | 35 | щ йхХУ8 | 35 | 30 | 30 | 43| й4 53. | щ72 | 09 | 39 | 704 | 45 | 3/1 | з/1 | 4 | б 54 108 1777707 | 37 191 17711р2а5 | 336 | 336 | 36 | РМ 4( 55. | 14 | 09 | 4 | 05 | 4 | 329 | 329 | 47 | 104 56. 17/17 17777109 2 | 38 | лбе | 1 | заз | 343 | 37 | 103 57. | 06 2 | 12 | 36 | 96 | 78 | 393 | 3953 | 34 | 173 58. | 13 1777709 2 | 39 | 95 | 2 ющ 2 | 357 | 357 | З | 106 5955 | 7145 | 08 | 4 | 86 | 75 | 0 | 0 | 46 | 709 60 | ще609 2 | 1 | 37 | 88 | 38 | 379 | 3/9 | 49 | їй 6. 1.09 | 1 | 38 | 85 | з | 314 | 314 | 44 | їп9 63. | 2 Юющ-.Юа0605 | 08 | 35 | 94 | 28 | 364 | 364 | 41 | 12 64 | 07 | 1 | 36 | 859 | їз | 35 | з5 | 33 | люMe app- Concentration Speed per- |Hemperaturai! The final te- | Speed per- | Final temperature Term | The speed of the |End of the cryoprotector system,| ice cream, | holding | empire | ice cream, | mperatura stop, "C stops,| ice cream, | ratu mol/l "b/min. seeding, "C stage, "C "b/min. stage, "C" min. "S/min. zhu 52 104 | ly | 35 | ш хХУ8 | 35 | 30 | 30 | 43| й4 53. | ш72 | 09 | 39 | 704 | 45 | 3/1 | з/1 | 4 | б 54 108 1777707 | 37 191 17711r2a5 | 336 | 336 | 36 | RM 4( 55. | 14 | 09 | 4 | 05 | 4 | 329 | 329 | 47 | 104 56. 17/17 17777109 2 | 38 | forehead | 1 | zaz | 343 | 37 | 103 57. | 06 2 | 12 | 36 | 96 | 78 | 393 | 3953 | 34 | 173 58. | 13 1777709 2 | 39 | 95 | 2 yush 2 | 357 | 357 | Z | 106 5955 | 7145 | 08 | 4 | 86 | 75 | 0 | 0 | 46 | 709 60 | more609 2 | 1 | 37 | 88 | 38 | 379 | 3/9 | 49 | her 6. 1.09 | 1 | 38 | 85 | z | 314 | 314 | 44 | ip9 63. | 2 Yuushch-.Yua0605 | 08 | 35 | 94 | 28 | 364 | 364 | 41 | 12 64 | 07 | 1 | 36 | 859 | iz | 35 | z5 | 33
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002010343A UA46673C2 (en) | 2002-01-14 | 2002-01-14 | Method of cryopreservation of human hemopoietic cells |
| RU2002113440/15A RU2233589C2 (en) | 2002-01-14 | 2002-05-23 | Method for cryopreserving human hemopoietic cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002010343A UA46673C2 (en) | 2002-01-14 | 2002-01-14 | Method of cryopreservation of human hemopoietic cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA46673C2 true UA46673C2 (en) | 2005-04-15 |
Family
ID=34391245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002010343A UA46673C2 (en) | 2002-01-14 | 2002-01-14 | Method of cryopreservation of human hemopoietic cells |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2233589C2 (en) |
| UA (1) | UA46673C2 (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2569834C1 (en) * | 2014-12-17 | 2015-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России" | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells |
| RU2623083C1 (en) * | 2016-06-20 | 2017-06-21 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for platelets freezing |
| RU2623081C1 (en) * | 2016-06-20 | 2017-06-21 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for platelets cryopreservation |
| RU2623864C1 (en) * | 2016-06-20 | 2017-06-29 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for cryopreserved platelets preparation for transfusion |
| RU2624243C1 (en) * | 2016-07-26 | 2017-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method for determination of optimum mono-endocellular cryopreserving agent for cells storage at -80c |
-
2002
- 2002-01-14 UA UA2002010343A patent/UA46673C2/en unknown
- 2002-05-23 RU RU2002113440/15A patent/RU2233589C2/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2002113440A (en) | 2004-01-10 |
| RU2233589C2 (en) | 2004-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jang et al. | Cryopreservation and its clinical applications | |
| RU2416197C1 (en) | Method of cryopreservation of hematopoietic stem cells of umbilical blood | |
| US20060046243A1 (en) | Method for vitrification of mammalian cells | |
| KR20080087148A (en) | Cryoprotective compositions and methods of using same | |
| Criado et al. | Experimental contamination assessment of a novel closed ultravitrification device | |
| WO2014088514A1 (en) | A method of vitrification | |
| Jaiswal et al. | Cryopreservation: A review article | |
| UA46673C2 (en) | Method of cryopreservation of human hemopoietic cells | |
| RU2624214C1 (en) | Method for cryopreservation of haemopoietic stem cells | |
| Freitas-Ribeiro et al. | Long-term and short-term preservation strategies for tissue engineering and regenerative medicine products: state of the art and emerging trends | |
| WO2016040063A1 (en) | Cryopreservation instrument and method of using same | |
| Liebermann | Vitrification: a simple and successful method for cryostorage of human blastocysts | |
| US4965186A (en) | Method for low-temperature preservation of spermatozoa | |
| Barun | A review on applications & advantages of cryopreservation in different fields of science | |
| Stănescu et al. | Freezing of dog’s sperm: a review | |
| Isachenko et al. | Whole ovine ovaries as a model for human: perfusion with cryoprotectants in vivo and in vitro | |
| Ware et al. | Effect of varying glycerol and sucrose concentration combinations on embryo survival rate in a one-step cryoprotectant removal from frozen-thawed ovine embryos | |
| CN112931490A (en) | Ultralow temperature cryopreservation method for bee sperms | |
| US3983712A (en) | Method of preserving teeth with attached live root membrane | |
| HARVEY¹ et al. | Practical methods for chilled and frozen storage of tilapia spermatozoa | |
| Widyastuti et al. | Effect of cryoprotectants on sperm vitrification | |
| Brian | Cryopreservation of plant protoplasts | |
| RU2794963C1 (en) | Method for optimizing cryopreservation of ovarian tissue for long-term storage | |
| RU2263448C1 (en) | Method of cryopreservation of umbilical blood | |
| EA008674B1 (en) | Method for storing spermatozoa and product for telegenesis |