UA33801C2 - Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові - Google Patents
Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові Download PDFInfo
- Publication number
- UA33801C2 UA33801C2 UA99041829A UA99041829A UA33801C2 UA 33801 C2 UA33801 C2 UA 33801C2 UA 99041829 A UA99041829 A UA 99041829A UA 99041829 A UA99041829 A UA 99041829A UA 33801 C2 UA33801 C2 UA 33801C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- granules
- blood
- neutrophils
- functional activity
- neutrophilles
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims abstract description 14
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- JBBPTUVOZCXCSU-UHFFFAOYSA-L dipotassium;2',4',5',7'-tetrabromo-4,7-dichloro-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diolate Chemical compound [K+].[K+].O1C(=O)C(C(=CC=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C(Br)=C1OC1=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 JBBPTUVOZCXCSU-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L phloxine B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 description 1
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Винахід відноситься до гематології і стосується клінічних лабораторних методів дослідження функціональної активності нейтрофілів. Спосіб полягає у фіксації мазків крові у парах формаліну, фарбуванні метиловим фіолетовим з флоксином та у порівнянні кількості гранул в зразках крові, взятих з уражених інфекцією ділянок, із зразками крові здорової людини. При зменшенні кількості гранул роблять висновок про підвищення функціональної активності нейтрофілів.
Description
Опис винаходу
Винахід відноситься до гематології і стосується клінічних лабораторних методів дослідження. 2 Існує відомий спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові, який міститься у вивченні їх руху /Истаманова Т.С, Алмазов В.А. Лейкопениий и агранулоцитозь. - Л.: Медгиз, 1961/. Краплю крові поміщають у закріплений на столику мікроскопу термонагрівальний столик, який автоматично підтримує температуру 377С.
Дослідження нейтрофілів проводять за допомогою фазово-контрастного устрою, сполученого зі звичайним мікроскопом. Реєстрація швидкості руху нейтрофілів відбувається за допомогою рисувального апарату, сполученого з мікроскопом.
Ознакою, спільною з заявленим рішенням, є мікроскопічне дослідження нейтрофілів. Але даний спосіб потребує особливої апаратури, що ускладнює його широке використання, і не дозволяє отримати добре порівняні результати, тому що не має високої точності.
Існує відомий спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів, який міститься у дослідженні 12 фагоцитозу /Кост Е.А., Стефко М.И. Советский грамицидин и его применение в клинической практике.
Лабораторнье исследования и оценка их результатов // Научнье трудьії Клинической больницьі имени С.Л.
Боткина. - М., 1947. - С. 253-256/, прийнятий як прототип. Об'єктом фагоцитозу є живі і вбиті мікроби. У відалевську пробірку набирають одним і тим самим капіляром від апарата Панченкова: 1 капіляр 4965-ного розчину цитрату натрію, 2 капіляра крові, 1 капіляр одноденної живої культури з 1-2 млрд мікробних тіл в 1мл, або вбитих мікробів концентрацією 4 млрд тіл в їмл. Суміш ретельно перемішують і ставлять у термостат при 377С на 1 годину. Потім вміст пробірок старанно перемішують, роблять на предметних стеклах дуже тонкі мазки, висушують їх на повітрі, фіксують протягом 30 хвилин рідиною Нікіфорова /яка складається з рівних об'ємів етилового спирту та сірчаного ефіру/. Фіксовані мазки заливають на 25-40 хвилин розведеною фарбою
Романовського, яку готують таким чином. 3,8г сухої фарби Романовського розчиняють у 250мл чистого с метилового спирту. Розчин залишають на 3-5 доби, часто збовтуючи для кращого розведення фарби. Потім Ге) додають 250мл чистого гліцерину і знову залишають на 3-5доби, періодично збовтуючи. Перед вживанням барвник відтитровують, тобто фарбують декілька фіксованих мазків крові протягом 30 хвилин /1-2 краплі фарби на мл дистильованої води/. Цим барвником фарбують декілька фіксованих мазків крові протягом 25-40 хвилин.
По добре пофарбованому препарату встановлюють необхідну кількість краплин фарби на їмл води та час -- фарбування. У пофарбованих мазках підраховують 100 нейтрофілів. Відмічають процент фагоцитуючих ав нейтрофілів /показник фагоцитарної активності/ і середню кількість мікробів у кожному з фагоцитувавших нейтрофілів /фагоцитарний індекс/. со
Але цей спосіб дуже складний, має потребу в наявості мікробних культур. Джерело помилок: забруднення со культури, у зв'язку з чим перед кожним дослідженням потрібно перевіряти культуру бактероскопічним методом;
Зо використання нестерильних реактивів; застосування кислого розчину цитрату натрію замість нейтрального та ін. о
В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові, в якому фіксація та пофарбування нейтрофілів дозволяє з високою точністю виявляти та підраховувати кількість гранул у цих клітинах, а на основі даних зниження їх числа судити про підвищення їх активності. «
Відмінними від прототипу ознаками є: використання як фіксатора парів формаліну, а в складі барвника - З метилового фіолетового, підрахунок кількості гранул у нейтрофілах. с Спосіб здійснюють таким чином:
Із» - у чашку Петрі наливають 20мл формаліну; - на дно чашки кладуть дві скляні палички; - на палички мазками вниз поміщають два предметних скла і закривають чашку; - проводять протягом 5 хвилин інкубацію мазків у сходячих парах формаліну; о - витягують мазки з чашки і на них наливають на 30 сек 195-ний розчин метилового фіолетового; со - промивають мазки дистильованою водою протягом 1 хвилини; - наливають на мазки 195-ний розчин флоксину на 5 хвилин; со - промивають мазки дистильованою водою; о 20 - висушують; - мікроскопують з імерсією; та На пофарбованих препаратах у цитоплазмі нейтрофілів виявляють фіолетові гранули, середнє число яких у клітинах встановлюють на підставі підрахунку на 100 нейтрофілів.
Приклад 1. У здорової людини брали кров з пальця та готували мазки. Останні фіксували в парах формаліну і 29 фарбувапи метиловим фіолетовим з флоксином запропонованим способом. На препаратах у цитоплазмі
ГФ) нейтрофілів виявлялись фіолетові гранули. Середня їх кількість із розрахунку на одну клітину складала 12943.
Приклад 2. Із запаленої ділянки брали краплі крові, з яких готували мазки. Останні фіксували і фарбували о метиловим фіолетовим з флоксином розробленим способом. На приготованих таким чином препаратах у цитоплазмі нейтрофілів виявлялись фіолетові гранули. Середня кількість гранул із розрахунку на одну клітину 60 складала 973,2 (р « 0,001). Зменшення кількості гранул пов'язане з підвищенням секреторної активності клітин.
Порівняльний аналіз заявленого способу з прототипом показує, що він відрізняється від відомого простотою.
Сукупність перерахованих операцій, які характеризують суттєві ознаки заявленого винаходу дозволяють по зниженню кількості гранул робити висновок про підвищення функціональної активності клітин. де Таким чином, заявлений спосіб можна використовувати в клінічних лабораторних дослідженнях.
Claims (1)
- Формула винаходу Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові, що полягає у фіксації, фарбуванні та 2 дослідженні гранул нейтрофілів, який відрізняється тим, що мазки крові фіксують у парах формаліну та фарбують метиловим фіолетовим з флоксином, підраховують кількість гранул в нейтрофілах і по зниженню кількості гранул у порівнянні з нормою роблять висновок про підвищення функціональної активності нейтрофілів. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних 70 мікросхем", 2003, М 5, 15.05.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с щі 6) «- «в) (ее) (зе) со -с . и? (95) (95) (ее) г ШИ - іме) 60 б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA99041829A UA33801C2 (uk) | 1999-04-01 | 1999-04-01 | Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA99041829A UA33801C2 (uk) | 1999-04-01 | 1999-04-01 | Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA33801C2 true UA33801C2 (uk) | 2003-05-15 |
Family
ID=74197552
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA99041829A UA33801C2 (uk) | 1999-04-01 | 1999-04-01 | Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA33801C2 (uk) |
-
1999
- 1999-04-01 UA UA99041829A patent/UA33801C2/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Booth | Estimating cell concentration and biomass of autotrophic plankton using microscopy | |
| Witlin | Detection of antibodies by microtitrator techniques | |
| CN103257213A (zh) | 一种全集成高通量细胞水平微流控芯片药物评价系统 | |
| CN112961899A (zh) | 一种化妆品原料体外巨噬细胞联合3d皮肤模型抗炎功效筛选方法 | |
| CN109266717A (zh) | 一种通过单细胞分析检测细菌耐药性的方法和装置 | |
| CN105806840B (zh) | 定性及半定量检测血清或尿液中百草枯的试剂盒及检测方法 | |
| Kouri et al. | ISLH recommended reference procedure for the enumeration of particles in urine | |
| Parker et al. | A microculture method for lymphocyte transformation studies in the clinical laboratory | |
| CN109892320A (zh) | 一种细胞保存液及其制备方法和应用 | |
| Pauly et al. | Whole blood microculture assay of human lymphocyte function | |
| Dazo et al. | Two new field techniques for detection and counting of Schistosoma haematobium eggs in urine samples, with an evaluation of both methods | |
| Soares et al. | Light microscopy in aquatic ecology: methods for plankton communities studies | |
| UA33801C2 (uk) | Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів крові | |
| CA2230889A1 (en) | Stain and capillary slide to detect animal and plant cells | |
| CN103645332B (zh) | 自动化高通量检测胆固醇以及其它分析物细胞流出的多功能工作站 | |
| Erdoğmuş et al. | Evaluation of in vitro genotoxic effects of benfuracarb in human peripheral blood lymphocytes | |
| CN203881776U (zh) | 自动化高通量检测胆固醇以及其它分析物细胞流出的多功能工作站 | |
| RU2143685C1 (ru) | Способ дифференциального подсчета гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов | |
| Shukla et al. | Forensic Applications of Compound Microscope | |
| RU2562588C2 (ru) | Набор для тестирования спермы в пятнах на исследуемом образце | |
| UA30460U (uk) | Спосіб визначення функціонального стану нейтрофілів крові | |
| RU2350951C2 (ru) | Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты | |
| CA2860590A1 (en) | Fixative composition for cytology, cell fixation method and its applications | |
| RU2190852C2 (ru) | Способ оценки функции коры надпочечников | |
| Mainland et al. | The investigation of cell size with special reference to the human lymphocyte |