RU2350951C2 - Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты - Google Patents
Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2350951C2 RU2350951C2 RU2007114236/15A RU2007114236A RU2350951C2 RU 2350951 C2 RU2350951 C2 RU 2350951C2 RU 2007114236/15 A RU2007114236/15 A RU 2007114236/15A RU 2007114236 A RU2007114236 A RU 2007114236A RU 2350951 C2 RU2350951 C2 RU 2350951C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- eosinophilic
- sputum
- smears
- solution
- potassium
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и касается способа окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты. Способ заключается в том, что фиксированный в пламени мазок мокроты окрашивают смесью равных объемов 0,5% раствора эозина калия в этиловом спирте и 5% водного раствора фенола, после чего докрашивают раствором метиленового синего. Использование способа позволяет повысить точность выявления эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты и упростить диагностику воспалительных заболеваний легких аллергической природы. 6 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике.
Сущность изобретения
Задачами изобретения являются повышение точности распознавания эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты и облегчение диагностики воспалительных заболеваний легких аллергической природы.
В настоящее время для окраски мазков мокроты применяют способы окраски по Паппенгейму, метиленовым синим и Романовскому-Гимзе (Справочник медицинские лабораторные технологии, том 1./ Под редакцией А.И.Карпищенко, Санкт-Петербург, «Интермедика», 2002, с.213-220. Руководство по клинической лабораторной диагностике, часть 1./ Под редакцией проф. М.А.Базарновой. Киев. Головное издательство (Объединение «Вища школа», 1981, с.40). При микроскопическом исследовании мазков мокроты, окрашенных по Романовскому-Гимзе, обнаруживают следующие виды клеток: клетки эпилетия, альвеолярные макрофаги, эозинофильные лейкоциты, нейтрофильные лейкоциты, базофильные лейкоциты, моноциты и лимфоциты. Лейкоциты дифференцируют по их морфологии и окраске зернистости (справочник «Лабораторные методы исследования в клинике»./ Под редакцией профессора В.В.Меньшикова. Москва, «Медицина», 1987, с.124-125).
Однако при окраске мазков мокроты по Романовскому-Гимзе эозин калий не проникает в зозинофильные лейкоциты. Это обусловлено тем, что они окружены слизью, постоянным компонентом мокроты. В результате этого их специфические гранулы (синоним-эозинофильные гранулы) не окрашиваются эозином калием и не проявляется бесспорный признак эозинофильных лейкоцитов - специфическая зернистость в виде округлых объемных гранул одинакового размера и формы оранжевого цвета (Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология. Москва, 2002, с.17).
Сущность способа
Фиксированные в пламени спиртовки мазки мокроты окрашивают смесью равных объемов 0,5% раствора эозина калия в этиловом спирте и 5% водного раствора фенола, дающей красное окрашивание специфических гранул эозинофильных лейкоцитов, в течение 40-50 минут. При таком способе окраски эозин калий легко проникает в эозинофильный лейкоцит и их специфические гранулы окрашиваются в красный цвет.
Для придания контрастности препарату мазки докрашивают 0,3% раствором метиленового синего в течение 20-30 секунд. Мазки исследуют с масляной иммерсией в световом микроскопе при увеличении 900-1000 раз. Эозинофильные лейкоциты распознают по красной окраске их специфической зернистости в виде округлых объемных гранул одинакового размера и формы, занимающих всю цитоплазму. Количество их подсчитывают. Например, абсолютное их количество в 100 полях зрения мазков.
Используя способ окраски, обнаруживают эозинофильные лейкоциты в неокрашенных и окрашенных другими способами мазках мокроты после длительного их хранения, до 3-х месяцев и более.
Применение предложенного способа дает следующие результаты:
1. Повышается точность распознавания эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты.
2. Облегчается диагностика воспалительных заболеваний легких аллергической природы, при которых характерно увеличение абсолютного количества эозинофильных лейкоцитов в мокроте.
3. Способ обеспечивает обнаружение эозинофильных лейкоцитов после длительного хранения мазков, до 3-х месяцев и более.
4. Способ может быть использован для выделения эозинофильных гранул в иммунологических исследованиях и разработке сферических магнитных частиц.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Приготовление растворов. Готовят необходимый объем 0,5% раствора эозина калия в 96° этиловом спирте. Эозин калий водорастворимый, формула - С20Н6Br4К2O5·nH2О (Каталог химических реактивов и высоко чистых химических веществ. Москва, Химия, 1971 г., с.550).
Этиловый спирт. Формула С2Н5OH, молекулярный вес 46,07.
0,5 г сухой краски эозина калия растворяют в 100 мл 96° этилового спирта и получают 0,5% раствор эозина калия в этиловом спирте. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр.
Готовят 5% водный раствор фенола. Формула - С6H5ОН, молекулярный вес 94,11.
5 г фенола растворяют в 100 мл дистиллированной воды и получают 5% водный раствор фенола. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр. Далее смешивают полученные растворы - в 100 мл раствора фенола добавляют 100 мл раствора эозина калия. Смесь готова, она стабильна в течение 5-6 месяцев при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре.
Ход окраски мазков мокроты.
На двух предметных стеклах готовят 2 мазка исследуемой мокроты. После высыхания их фиксируют в верхней трети пламени спиртовки в течение 3-5 секунд.
На каждое стекло накладывают полоску фильтровальной бумаги так, чтобы она полностью закрывала мазок. Это делают для того, чтобы краска не разливалась по стеклу. Наливают на бумагу приготовленную смесь с избытком. Мазки окрашивают в течение 40-50 минут, чтобы эозин калий проник в клеточную стенку эозинофильного лейкоцита. Пинцетом снимают и удаляют фильтровальную бумагу. Мазки тщательно промывают дистиллированной водой и докрашивают в течение 20-30 секунд 0,3% раствором метиленового синего. Вновь аккуратно промывают дистиллированной водой, наклоняя каждое стекло, чтобы стекала вода. Высушивают на открытом воздухе при комнатной температуре в вертикальном или наклонном положении.
В результате специфические гранулы эозинофильных лейкоцитов окрашиваются в красный цвет.
С использованием предложенного способа окрашены мазки мокроты больных Горевой М.Н., Тараканова В.Д. и Иванова Н.И., находившихся на лечении в Якутской городской клинической больнице с диагнозом пневмония.
Прилагаются результаты определения объектов, изображенных на фотографиях препаратов мокроты (далее - фигуры).
Фиг.1. увеличение 1000 раз.
Эозинофильный лейкоцит со специфическими гранулами красного цвета. Видны отдельные эозинофильные гранулы красного цвета, указаны стрелками.
Фиг.2. эозинофильный лейкоцит. В его цитоплазме видны 5 штук эозинофильных гранул, указаны стрелкой.
Фиг.3. эозинофильный лейкоцит с признаками дегрануляции. Эозинофильные гранулы разбросаны вне эозинофильного лейкоцита, указаны стрелками.
Фиг.4. эозинофильный лейкоцит, наверху эпителиальная клетка легких на слизи, эпителиальная клетка указана стрелкой.
Фиг.5. препарат был окрашен по способу Циль-Нильсена, потом через три месяца перекрашен предложенным способом. Эозинофильный лейкоцит на слизи, указан стрелкой.
Фиг.6. неокрашенный препарат был окрашен предложенным способом через три месяца после приготовления. Эозинофильный лейкоцит. Эозинофильные гранулы указаны стрелками.
В мазках мокроты, окрашенных предложенным способом, подсчитано абсолютное количество эозинофильных лейкоцитов в 100 случайных полях зрения у трех больных - Горевой М.Н., Тараканова В.Д. и Иванова Н.И. Количество эозинофильных лейкоцитов у Горевой М.Н. составило 50, Тараканова В.Д. 27, Иванова Н.И. 0.
Выводы:
1. Предложенный способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты повышает точность их распознавания.
2. Способ дает возможность количественного подсчета эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты.
3. Используя способ, мазки мокроты, неокрашенные и окрашенные другими способами, красят на наличие эозинофильных лейкоцитов после длительного их хранения, до 3-х месяцев и более.
Claims (1)
- Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты, включающей использование эозина калия, отличающийся тем, что фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают смесью равных объемов 0,5%-ного раствора эозина калия в этиловом спирте и 5%-ного водного раствора фенола в течение 40-50 мин, далее после промывания дистиллированной водой докрашивают в течение 20-30 с 0,3%-ным раствором метиленового синего.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007114236/15A RU2350951C2 (ru) | 2007-04-16 | 2007-04-16 | Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007114236/15A RU2350951C2 (ru) | 2007-04-16 | 2007-04-16 | Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007114236A RU2007114236A (ru) | 2008-10-27 |
| RU2350951C2 true RU2350951C2 (ru) | 2009-03-27 |
Family
ID=40543134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007114236/15A RU2350951C2 (ru) | 2007-04-16 | 2007-04-16 | Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2350951C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2733451C1 (ru) * | 2020-01-20 | 2020-10-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином |
-
2007
- 2007-04-16 RU RU2007114236/15A patent/RU2350951C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Справочник медицинские лабораторные технологии, под ред. Карпищенко А.И., т.1, Интермедика. - С.Пб.: 2002, с.213-220. МЕРКУЛОВ Г.А. Курс патологогистологической техники. Медицина. - Л.: 1969, с.236-240. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2733451C1 (ru) * | 2020-01-20 | 2020-10-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007114236A (ru) | 2008-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2711786B2 (ja) | 試薬組成物とその細胞球形化への使用 | |
| JP4042925B2 (ja) | 幼若白血球の分類計数法 | |
| FR2501865A2 (fr) | Procede d'analyse, par sorption differentielle d'un colorant metachromatique, des divers leucocytes du sang | |
| JPH027427B2 (ru) | ||
| EP3462170B1 (en) | Specific malaria detection with digital optical microscopy | |
| CN103424540A (zh) | 一种白细胞分类试剂盒及其分类方法 | |
| WO2015173774A2 (en) | A microscopy system and a method for analyzing fluids | |
| CN104833805A (zh) | 一种循环肿瘤细胞检测和鉴定试剂盒及其应用 | |
| CN105087775A (zh) | 一种基于稀有细胞检测c-MET/CEP7基因状态的方法及相关试剂盒 | |
| RU2350951C2 (ru) | Способ окраски эозинофильных лейкоцитов в мазках мокроты | |
| Soares et al. | Light microscopy in aquatic ecology: methods for plankton communities studies | |
| CN115963255A (zh) | 一种人嗜碱性粒细胞免疫荧光样品的制备方法及应用 | |
| CA2230889A1 (en) | Stain and capillary slide to detect animal and plant cells | |
| RU2143685C1 (ru) | Способ дифференциального подсчета гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов | |
| Railean et al. | Flow Cytometry–Sophisticated Tool for Basic Research or/and Routine Diagnosis; Impact of the Complementarity in Both Pre-as Well as Clinical Studies | |
| Mohan et al. | Practical pathology for dental students | |
| RU2638811C1 (ru) | Способ пробоподготовки биологического материала кала для определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий | |
| CN111487179B (zh) | 一种便携式血细胞计数试剂盒 | |
| Muller et al. | Haematological values of gyr hybrid falcons | |
| RU2463349C2 (ru) | Способ обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах | |
| RU2704969C1 (ru) | Способ морфологической оценки агрегации эритроцитов, индуцированной высокомолекулярными полимерами | |
| CN110531065A (zh) | 一种基于水凝胶的微量全血分离和血浆检测一体化微流控芯片 | |
| Boseila | Identification and Counting of Basophil leucocytes | |
| Saad et al. | Production of carp immunoglobulin M exposed with whole protein from Myxobolus koi spore through feed as an immunostimulant | |
| Kashyap | Comparison of three alum Hematoxylin–Harris, Mayer’s, Ehrlich Hematoxylin using different tissues–a study of 60 cases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110417 |