UA154080U - Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту - Google Patents

Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту Download PDF

Info

Publication number
UA154080U
UA154080U UAU202201476U UAU202201476U UA154080U UA 154080 U UA154080 U UA 154080U UA U202201476 U UAU202201476 U UA U202201476U UA U202201476 U UAU202201476 U UA U202201476U UA 154080 U UA154080 U UA 154080U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
cells
product
differs
umbilical cord
msc
Prior art date
Application number
UAU202201476U
Other languages
English (en)
Inventor
Віталій Арнольдович Кордюм
Альберт Точиловський
Олена Григорівна Дерябіна
Олена Карнеліївна Топорова
Яніна Олександрівна Похоленко
Поліна Олексіївна Пікус
Світлана Олександрівна Хитра
Марина Олексіївна Шульга
Оксана Борисівна Горбатюк
Original Assignee
Товариство З Обмеженою Відповідальністю "Віотехсом"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Товариство З Обмеженою Відповідальністю "Віотехсом" filed Critical Товариство З Обмеженою Відповідальністю "Віотехсом"
Priority to UAU202201476U priority Critical patent/UA154080U/uk
Publication of UA154080U publication Critical patent/UA154080U/uk

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Спосіб отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту, за циклом отримання клітинного продукту з клітин пуповини людини включає доставку пуповини, яку поміщають в розчин перекису водню в концентрації від 0,001 % до 0,3 % і транспортують на виробництво. Доставлені пуповини перевіряють на відсутність контамінації патогенами, і ті пуповини, які позбавлені патогенів, далі ведуть індивідуалізовано. Для чого їх відмивають, кожну окремо, в розчинах антибіотиків, роздрібнюють і отримають диски товщиною 0,5 - 3,0 мм, клітини з яких в подальшому мультиплікують в живильному середовищі та додають тромболізат від 0,1 до 10 %, а відповідно до пропозиції, мультиплікацію клітин провадять в системах 2D, 3D або комбіновано. Переміщення, живильного середовища і зміну його обсягу здійснюють по нелінійній програмі, до досягнення 70-90 % конфлюентності. Додають модифікуючі агенти, через 12-24 години рідку фазу заміщують змінним середовищем, який готують на базі сольового розчину, в якому через 24-48 годин за рахунок життєдіяльності модифікованих МСК накопичуються інтегральні складові життєдіяльності і таку отриману, інтегровану за структурованими та неструктурованими складовими рідку фазу відділяють від клітин і їх дебрису. Додають, відповідні до потрібного варіанту відбудови конкретного порушення. Додатки і готовий продукт розфасовують і заморожують при температурі не нижче за – 80 0С. Отримують продукт придатний для подальшого застосування.

Description

Корисна модель належить до медичної біотехнології та медицини, а саме дерматології та дистрофічної травматології та спрямована на відновлення порушення шкірних покровів, слизових оболонок та розташованих під ними тканин і є інтегральним продуктом мезенхімальних стовбурових клітин пуповини людини, а більш конкретно до способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту, та самого цього продукту.
Враховуючи особливість мезенхімальних стовбурових клітин (МОСК), як природного універсального внутрішньоорганізмного захисно-відновного засобу, кожна група препаратів, одержуваних з МОСК матиме якусь свою біологічно-основну дію. Але найбільш широкі можливості потенційно має інтегральний продукт - живильне середовище, на якому вирощували
МОСК. Однак, на шляху потенційних можливостей у вигляді препарату, що реалізує такі можливості, стоїть багато проблем Перша, основна, пов'язана з тим, що таке використане середовище - "кондиціонат" містить багато компонентів потрібних для зростання МОСК у культурі, але не потрібних організму, а також залишку розкладу зруйнованих клітин. Друга, не принципова, але дуже важлива - це обсяг кондиціонату, який потрібний для досягнення бажаного ефекту. Перша проблема зазвичай вирішується зміною живильного середовища на середовище, прийнятне для використання. Середовище зростання замінюють на середовище майбутнього кондиціонату. Але у ній зростання клітин уже немає. І в ній відбувається подальше експонування МОСК протягом 1-3 діб. Те, що за цей час (і за нових умов) МОСК зможе експортувати і буде "кондиціонатом". Але в ньому корисних продуктів кількісно в перерахунку на одиницю обсягу кондиціонату зазвичай не так вже й багато. А застосування великих обсягів рідини, у свою чергу, викликає багато проблем. Тому часто (хоч і не завжди) кондиціонати концентрують. І, нарешті, завжди залишається питання оцінки та стандартизації одержуваного продукту. Його задовільного рішення досі не знайдено.
Шкіра людини є не тільки найбільшим органом людини, але разом зі слизовими виконує особливу роль - захищають тканини, що лежать під ними, від усіх видів впливів навколишнього зовнішнього середовища. І вже через це вони піддаються найчастішим, різноманітним порушуючим, ушкоджуючим та руйнівним факторам оточення. Тому їх захисту та відновленню приділяється особлива увага. А для їхнього відновлення, лікування, використовують усі можливості. Однією з таких перспективних можливостей є МК і різні продукти, що отримуються
Зо на їх основі. І їх використання для відновлення пошкодження покривних тканин людини набуло масового характеру. В останньому детальному аналізі наводяться докладні відомості про дослідження щодо використання кондиціонатів МОСК у лікуванні різних пошкоджень шкірних покривів |Мопіего-Міїспе? еї аї., 2021). Цьому ж присвячено і велику кількість патентів.
Відоме кондиціоноване середовище мезенхімальних стовбурових клітин, в якому кондиціоноване середовище отримують культивуванням МСК у безсироватковому середовищі з
ЕСБЕ2, Такий склад середовища не дає клітинам загинути, але продуктивність утворення ними необхідних біологічно активних факторів буде обмежена та однотипна. | такий кондиціонат мають на увазі використовували у складі лікувальних композицій. (Опубліковано-
О52О10323027АІ-2010-12-23, заявник. АСЕМСУ ЗСІЕМСЕ ТЕСН 8 КЕЗ |5ОІ, автори: ІМ ЗАЇ
КІАКО ЗОЇ; ГМЕ ЕПІАЗ (550), МПК: Аб1К35/12: АбТР17/02).
Відоме кондиційне середовище, що володіє лікувальним ефектом, в якому середовище кондиціонату містить сольовий склад, амінокислоти, антибіотики та ембріональну телячу сироватку (ЕТС). Але ЕТС є ксеногенним набором білків. Сама ж середовище константна за складом і МОСК знаходяться в ній в тому самому статусі, (патент РФ Мо2292212, власник: ГУ
Медичний радіологічний науковий центр РАМП (КО), МПК: АбІК 35/28; АбІР 17/02-
Опубліковано: 27.01.2007 Бюл. Мо 3).
Відомий спосіб отримання засобу, що володіє регенеративною, імуномодулюючою, детоксикаційною та адаптогенною активністю на основі МСК. Але джерелом отримання МСК є жирова тканина, в якій МСК вже дорослі. Крім того, отриманий кондиціонат фільтрується через пори рейтингом 10 кДа, що прибирає більшу частину біологічно активних продуктів (патент РФ
Мо 2720812. власник: Общество с ограниченной ответственностью "НОВИСТЕМ" (КО). МПК:
АВБІК 35/28, Аб1ТР 43/00, Опубліковано: 13.05.2020 Бюл. Ме14).
Відомий спосіб отримання з пуповини людини МСК-вмісного продукту, що реалізується цикл отримання клітинного продукту з пуповини людини, який починається з умов доставки пуповини, яку поміщають в розчин, що містить перекис водню в концентрації від 0,01 95 до 0,3 95, ітранспортують на виробництво, де доставлені пуповини перевірюють на відсутність контамінації патогенами, і ті пуповини, які позбавлені патогенів, далі ведуть індивідуалізовано, для чого їх відмивають, кожну окремо, в розчинах антибіотиків, роздрібнюють і отримують диски товщиною 0,5-3,0 мм, клітини з яких в подальшому мультиплікують в живильному середовищі та 60 долають тромболізат з тромбоцитів крові людини від 2 до 20 95, альбуміну людини від 0,1 до
4 у5, холестерину - до насиченості середовища і М-ацетил-ї!. цистеїн 0,1-10 мМ в системах 20,
ЗО або комбіновано, де і переміщення живильного середовища і зміна його обсягу здійснюються по нелінійній програмі, в кожну свіжу порцію середовища додається до 30 95 кондиціонату, а отримані індивідуальні популяції оцінюють по потенційній терапевтичній активності і розподіляють по лотах. Однак - за даним способом отримують МСК-вмісний продукт, що містить клітини-МСК (патент України Мо 145315, публікація відомостей про державну реєстрацію: 25.11.2020, Бюл. Мо 22, власник; Товариство з обмеженою відповідальністю "ВІОТЕХСОМ").
В основу запропонованої корисної моделі поставлена задача розробити такий спосіб отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту, який прискорює і покращує відбудову шкіряних покровів, слизових оболонок і тканин, що знаходяться під ними.
Поставлена задача вирішується тим, що у способі отримання з клітин пуповини людини
МеК-похідного продукту, за циклом отримання клітинного продукту з клітин пуповини людини, що включає доставку пуповини, яку поміщають в розчин перекису водню в концентрації від 0,001 95 до 0,3 95 і транспортують на виробництво, де доставлені пуповини перевіряють на відсутність контамінації патогенами, і ті пуповини, які позбавлені патогенів, далі ведуть індивідуалізовано, для чого їх відмивають, кожну окремо, в розчинах антибіотиків, роздрібнюють і отримують диски товщиною 0,5-3,0 мм, клітини з яких в подальшому мультиплікують в живильному середовищі та додають тромболізат від 0,1 до 10 95, а мультиплікацію клітин провадять в системах 20 - 30 або комбіновано, де переміщення, живильного середовища і зміну його обсягу здійснюють по нелінійній програмі, до досягнення 70-90 95 конфлюентності, додають модифікуючі агенти, через 12-24 години рідку фазу заміщують змінним середовищем, який готують на базі сольового розчину, в якому через 24-48 годин за рахунок життєдіяльності модифікованих МОСК накопичуються інтегральні складові життєдіяльності і таку отриману, інтегровану за структурованими та неструктурованими складовими рідку фазу відділяють від клітин і їх дебрису, долають, відповідні до потрібного варіанту відбудови конкретного порушення, додатки і готовий продукт розфасовують і заморожують при температурі не нижчою за -80 "С і таким чином отримують продукт придатний для подальшого застосування.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що
Зо у змінне середовище додають тромболізат.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що у змінне середовище для отримання інтегральних складових життєдіяльності МСК додається альбумін.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, то для отримання МСК-похідного продукту використовують трансфіковані МОСК.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МОСК, модифіковані протизапальними цитокінами.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МОСК, модифіковані протизапальними цитокінами.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МОСК, модифіковані відновлюючими цитокінами.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МОСК, модифіковані протипухлинними речовинами.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МСК, які модифіковані хемокінами, що підсилюють рухливість та міграцію.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що перед розфасовкою у вже відділену від клітин та їх дебрису рідку фазу вносять додаткові компоненти, зокрема інсулін.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту є те, що готовий продукт може використовуватися як спрей, аплікація та ін'єкція.
Особливістю способу отримання з клітин пуповини людини МСОСК-похідного продукту є те, що готовий МСОСК-похідний продукт забезпечує відбудову ушкодженої шкіри, слизових оболонок і клітин, які розташовані під ними.
Суть корисної моделі пояснюється фото, де: бо - на Фіг. 1 показано аналіз мікрофотографій;
- на Фіг. 2 показано загоєння хімічного опіку викликаного обробкою трихлороцтовою кислотою у мишей лінії ІСК на 2-гу та 15-ту добу після моделювання патології.
При вирішенні поставленої задачі автори виходили з того, що спектр, кількості та співвідношення біологічно активних продуктів синтезованих та експортованих клітин повністю залежить від статусу цих клітин та умов їх культивування. Умови, в яких знаходяться МОСК в організмі, радикально відрізняються від тих, що мають місце при їх культивуванні в лабораторних умовах. | це виливає на утворювані та екскретовані МСК продукти. За всіх переваг ЕТС та її штучних замінників вони чужі для МОСК. Зростання за їх додаванням може бути дуже інтенсивно. Але і спектр біологічно активних речовин утворюватиметься стосовно таких умов.
Для наближення до умов організму і, відповідно, спрямованості біосинтезу, в базовому живильному середовищі для підготовчої стадії - культивування МОСК, замість ЕТС та її замінників, використовували тромболізат і як добавки вводили препарати, що підсилюють регенеративні здібності МОСК і як похідне - їх інтегрального продукту. Тромбоцити містять біоактивні молекули та фактори росту, які вивільняються з а-гранул після руйнування тромбоцитів фізичними чи фізіологічними методами. Лізат тромбоцитів (ЛІ) людини, являє собою розчин, насичений факторами росту, білками, цитокінами та хемокінами і застосовується для лікування різних захворювань, таких як загоєння ран, регенерацій кісток, алопеція, мукозит порожнини рота, коренева біль, остеоартрит та захворювання очей. Крім того, його можна використовувати в клітинній культурі для клітинної терапії та трансплантації тканин. Фактор росту тромбоцитів, фактор росту фібробластів, інсуліноподібний фактор росту, трансформуючий фактор росту ВД ії фактор росту ендотелію судин є ключовими факторами росту в тромбоцитарному лізаті, що відіграють головну роль у проліферації клітин, загоєнні ран та ангіогенезі.
При необхідності, під конкретне завдання в базове середовище підготовчої стадії вводили відповідні модифікуючі добавки - Іл 10 та інші, які інтенсифікують продукцію біологічно активних молекул, що забезпечують відновлювальну дію МОСК. Це багаторазово та детально описано у літературі. Після зростання в таких умовах МОСК при досягненні 70-90 906 конфлюентності, живильне середовище підготовчої стадії замінювали на базове для отримання інтегрального
Зо продукту.
Середовище для отримання інтегрального продукту є другим ключовим фактором, що забезпечує терапевтичні можливості. Для цього інтегральний продукт за своїм складом повинен бути адекватний вимогам до його використання і не містити неприйнятних компонентів, наприклад ЕТС, хенесу та ін. Для забезпечення цього, в процесі підготовки МОСК до продукування інтегрального продукту, їх відмивали від живильного середовища і всього, що в ньому містилося, А кондиціонат, за визначенням, є продуктом з усім, що в ньому є накопичено під час активного росту МОСК. Тому, базове середовище для отримання інтегрального продукту повинно бути таким, щоб не мати непридатних для подальшого застосування компонентів і сприяти виконанню клітинами своєї основної, а такій технології, функції - виділення в середовище максимальної кількості біологічно активних продуктів і в тому співвідношенні, яке необхідне для вирішення поставленої задачі - забезпечення відбудови ушкоджень шкіри, слизових оболонок і клітин, які розташовані під ними.
Щоб забезпечити максимальну відновлювальну здатність запропонованого МСК-похідного продукту, в нього, перед зміною середовища культивування, додавали 0,1-10 95 тромболізату та 0,05-2 95 альбуміну. Альбумін у крові є основним стабілізуючим фактором і широко застосовується у медицині. У базовому середовищі альбумін виконує аналогічні функції та адсорбує на собі (як і в організмі) біологічно активні молекули, що перешкоджає їх адсорбції на поверхні судини та носіїв. Тромболізат, крім своїх властивостей підтримувати біологічну активність МОСК, має ще одну властивість. В організмі вміст тромбоцитів звільняється у зоні ушкодження та виконує дві функції. Перша це закрити тромбом пошкодження і забезпечити максимальне збереження пошкоджених клітин. Друга - дати сигнал стовбуровим клітинам йти в зону пошкодження та виконати призначену їм функцію відновлення. Тому і зростання МОСК у присутності тромболізату і наявність у середовищі його помірних кількостей забезпечує форматування метаболізму на відновлення і служить сигналом викиду біологічно активних компонентів, що забезпечують відновлення. Сам тромболізат є природним продуктом і застосовується в медицині саме для посилення відновлення. Через 1-3 доби середовище відокремлювали від клітин та фільтрували. Фільтрування проводять через фільтри, що затримують клітинний дебрис великих розмірів і пропускає весь спектр МеСК-похідних структурних компонентів, що експортуються, і, таким чином, вже фільтрування є процедурою, 60 після якої інтегральний продукт стає базовим продуктом. У такому вигляді, з додатками, що посилюють бажаний ефект, готовий МСК-похідний продукт розфасовували і заморожували при 80 "С. Технічно поставлену задачу вирішували наступним чином.
Приклад Мо 1. Отримання МОСК-похідного продукту.
Мезенхімальні стволові/стромальні клітини пуповини людини виділяли з тканини пупкового канатика методом експлантів. Пупкові канатики, отримані за поінформованою згодою здорових породіль під час нормальних пологів (38-40 тижнів гестації). Пупкові канатики відмивали від крові фізіологічним розчином і стерилізували протягом 2 хв. у 80 95 етанолі або 30 хвилин у середовищі ДМЕМ: Е2 (Зідта, США) з додаванням 10- кратної концентрації антибіотиків (пеніцилін, 1000 одиниць/мл та стрептоміцин) мл) та 2,5 мг/мл амфотерицину. Після цього тричі відмивали фосфатно-сольовим буфером (ФСБ) та нарізати на фрагменти завдовжки 3-5 см і видаляли судини. Тканина пуповини без судин подрібнювали до фрагментів розміром 2-3 мм та промивали культуральним середовищем ЮМЕМ: Е12. Фрагменти переносили в культуральні флакони Т25 або Т75 і культивували експланти в середовище ОМЕМ/Е12 з 595 тромбоцитарного лізату та антибіотиками (100 О/мл пеніциліну, Київмедпрепарат, Україна, 100 мкг/мл стрептоміцину, Київмед).
Одержання тромболізату (ЛІТ) з тромбоцитарної маси (ТМ) донорів для середовища нарощування клітинної маси стовбурових клітин людини та як добавки до змінного середовища кондиціонату.
Лізат тромбоцитів із тромбоцитарної маси донорів отримували кріодеструкцією тромбоцитів.
Для цього проводили триразовий температурний лізис тромбоцитарної маси шляхом почергового заморожування на добу до -80 "С і розморожування при 37 "С.
Подальше осадження клітинного дебрису з допомогою центрифугування розморожених зразків проводили при 3000-4000 д протягом 30-40 хвилин при температурі 4-6"7С для видалення всіх клітинних фрагментів з кінцевого продукту. Після центрифугування надосадка відбирали і зберігали при температурі - 80 "С.
Вирощування клітин здійснювали в СО2-інкубаторі (Теппозсіепіййс, США) при температурі 37 "С ії 5 уо-ної концентрації СО2. Культуральне середовище міняли двічі на тиждень. Через 7-15 днів із екеплаптів виходять МОСК, які утворюють клони. Клітини в клонах є матеріалом нульового пасажу поза організмом. Пересів первинної культури МУК здійснювали на 14-20 день
Зо культивування, коли моношар клітин досягав 70 9о конфлюентності. Культуру МОСК пасували з використанням 0,01 95 розчину трипсину в 0,53 ммоль розчині ЕОТА. Перед додаванням трипсину клітини двічі промивали ФСБ без Са? та Мд2ж. Трипсин інактивували подвійним обсягом культурального середовища з інгібітором трипсину.
Суспензію клітин центрифугували при 800-1000 д протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. Відмиті від трипсину клітини нульового пасажу пасерували на культуральні флакони 175 або Т175. Щільність сівби становила 3000-5000 клітин/см-. Так само отримували культуру МОСК другого пасажу. Для отримання інтегрального продукту клітини другого пасажу при досягненні 70-80 95 конфлюентності моношару тричі відмивали розчином ФБс.
У культурального флакони з відмитими клітинами заливали змінним середовищем, яке містило антибіотики. Об'єм середовища для флаконів Т75 становив 12-15 мл- для флаконів Т175-25-
ЗО мл. Рідинну фазу забирали з флаконів через 1 добу, центрифугували при 1000-2000 д для усунення цілих клітин, які могли відкріпитися від поверхні культурального флакона в процесі відмивання і фільтрували надосад через шприцевий фільтр 0,22 мкм.
Отриману рідину переносили у стерильні пробірки об'ємом 2-5 мл і зберігали при -80 "С до використання.
Зразки кожної партії отриманого МСК-похідного продукту перевіряли на стерильність за загальновизнаними методами. Приклад Мо 2. Результати скретч-тесту.
Для моделювання процесу загоєння ран іп міїго в світовій літературі запропоновано і широко застосовується скретч-тест. Він заснований на тому, що якщо в моношарі клітин зняти їх частину, то звільнене місце заповнюється крайовими клітинами. Відбувається модель загоєння рани. Методично це виконують за рахунок здирання по прямій лінії клітин, що звільняє простір на ростовій поверхні. В наведеному прикладі це виконувалось як описано далі, а тест- культурою для цього тесту були обрані МОСК, як первинна сукупність клітин. МСК пуповини людини другого пасажу були посіяні у б-лунковий планшет. Щільність посіву складала 5 тис. клітин на 1 см, об'єм культурального середовища 3 мл.
Через 24 години культивування у СОг-інкубаторі клітини, що не прикріпилися до поверхні, були видалені з лунок відмиванням культуральним середовищем, що не містить сироватку, або фосфатно-сольовим буфером. Свіже середовище додавали у лунки в тому ж об'ємі. При досягненні клітинами субконфлюентного моношару через 48-72 години вздовж діаметра лунки бо робили пряму подряпину "5сгаїспй" наконечником самплера. Повноцінне середовище замінювали на МСК-похідний продукт, отримання якого наведено у прикладі 1. В якості контролю у такі самі лунки додавали середовище ДМЕМ/Р12 без додавання тромбоцитарного лізату, Мікрофоторгафії 10 рандомізованих полів зору кожної лунки зроблено одразу після "зогаїсп" га через 17 годин. Клітини були зафіксовані та фарбовані фарбою-фіксатором Мая-
Грюнвальда з подальшим дофарбовуванням водним розчином фарби Романовського.
Аналіз мікрофотографій показав, що у контролі "рана" через 17 годин тільки почала відновлюватись з країв в той час як у варіанті і МСК-похідним продуктом вона вже загоїлась повністю (Фіг. 1).
Приклад Мо 3. Відбудова ушкодження шкіряного покрову, Моделлю глибокого ушкодження шкіри і безпосередньо прилеглих до нього підшкірних клітин був хімічний опік. Хімічний опік шкіри моделювали на мишах лінії ІСК, у віці 2-2,5 міс., шляхом дворазового нанесення на депільовану та знежирену шкіру розчину 25 95 трихлороцтової кислоти протягом 10 хв. При проведенні експерименту тварини були розділені на 2 групи. 1) - миші - яким наносився розчин, який містив живильне середовище ДМЕМ без тромболізата у вигляді спрею (контроль); 2) - миші, яким наносився МСК- похідний продукт (отриманий за описом у прикладі Мо 1) у вигляді спрею. Аплікацію препаратів повторювали тричі. Перший раз, безпосередньо після відтворення опіку. Друге нанесення через 1 добу. Третє нанесення через 2 доби експерименту. Аплікацію проводили шляхом розпилювання. На поверхню шкіри після експозиції з препаратом наносили оклюзивний препарат в усіх випадках (тобто і в контролі, і в досліді). Клінічну оцінку результатів проводили на основі динамічного візуального контролю стану опікової поверхні. Аналіз репарації опікової поверхні проводили на 2-гу та 15-ту добу з моменту травми. Наведені на
Фіг. 2 дані свідчать про те, що нанесення спрею з МСК-похідним продуктом у порівнянні з контролем призводить до 1) - суттєвого і швидкого зникання запальних процесів, про що може свідчити майже повна відсутність еритемоподібних плям на опіковій поверхні (Фіг. 2, а); 2) - прискорення регенерації шкіри та відновлення хутрового покрову (Фіг. 2, б).
Таким чином, застосування МСК-похідного продукту при хімічних опіках суттєво прискорює процеси загоєння вже з перших днів після нанесення на травми і призводить до повноцінного відновлення дермального шару шкіри.
Приклад Мо 4. Зняття запалення слизової оболонки.
Зо Приклад Ме 4. Зняття запалення слизової оболонки. Слизова оболонка покриває тканини всіх порожнин людини. Її ураження відбувається дуже часто і важко зникають. Однією загально прийнятою моделлю ураження слизової оболонки с неіїнфекційний перитоніт черевної порожнини у мишей. Ця модель була використана для оцінки дії МСК-похідного продукту на слизові оболонки. Перитоніт у мишей викликався інтраперитоніальним введенням 1 мл 3 95 протеозного пептона (Васіо Ргоїеозе Реріопе (ЕРгапсе). Через 24 год. після розвитку гострого запалення черевної порожнини у мишей. їм вводили інтраперитоніально МОСК- похідний продукт, отриманий як наведено в Прикладі Мо 1 у дозі 500 мкл/"мишу. Вимивали ексудат з черевної порожнини тварин через 30 хв. після введення їм МСК-похідного продукту. Запалення, як показник ураження слизової оболонки черевної порожнини оцінювали через підрахунок вимитих перитоніальних макрофагів, використовуючи камеру Гаряєва, Через 24 год. після інтраперитоніального введення тваринам пептону спостерігалось збільшення перитоніальних макрофагів у 6.5 разів порівнюючи з нормою, що свідчить про гостре запалення черевної порожнини миші. А вже через 30 хв. після інтраперитоніального введення МСК-похідного продукту мишам з розвиненим перитонітом, кількість макрофагів в їх черевній порожнині зменшилась у З рази, порівнюючи з контрольною групою тварин з перитонітом і наблизилась до норми.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ
    50 1. Спосіб отримання з клітин пуповини людини МСК-похідного продукту, за циклом отримання клітинного продукту з клітин пуповини людини, що включає доставку пуповини, яку поміщають в розчин перекису водню в концентрації від 0,001 до 0,3 95 і транспортують на виробництво, де доставлені пуповини перевіряють на відсутність контамінації патогенами, і ті пуповини, які позбавлені патогенів, далі ведуть індивідуалізовано, для чого їх підмивають, кожну окремо, в
    55 розчинах антибіотиків, роздрібнюють і отримують диски товщиною 0,5-3,0 мм, клітини з яких в подальшому мультиплікують в живильному середовищі та додають тромболізат від 0,1 до 10 95, який відрізняється тим, що мультиплікацію клітин проводять в системах 20, ЗО або комбіновано, де переміщення живильного середовища і зміну його обсягу здійснюють по нелінійній програмі, до досягнення 70-9095 конфлюентності, додають модифікуючі агенти,
    бо через 12-24 години рідку фазу заміщують змінним середовищем, який готують на базі сольового розчину, в якому через 24-48 годин за рахунок життєдіяльності модифікованих МОСК накопичуються інтегральні складові життєдіяльності, і таку отриману, інтегровану за структурованими та неструктурованими складовими рідку фазу відділяють від клітин і їх дебрису, додають, відповідні до потрібного варіанту відбудови конкретного порушення, додатки і готовий продукт розфасовують і заморожують при температурі не нижче за -80 гС, і таким чином отримують продукт придатний для подальшого застосування.
  2. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що у змінне середовище додають тромболізат.
  3. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що у змінне середовище для отримання інтегральних складових життєдіяльності МСК додають 0,05-2 95 альбуміну.
  4. 4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для отримання МСК-похідного продукту використовують трансфіковані МОСК.
  5. 5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для отримання МеСК-похідного продукту використовують МСК, модифіковані протизапальними цитокінами.
  6. б. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для отримання МСК-похідного продукту використовують МОСК, модифіковані прозапальними цитокінами.
  7. 7. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для отримання МеСК-похідного продукту використовують МСК, модифіковані протипухлинними речовинами.
  8. 8. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для отримання МеСК-похідного продукту використовують МОСК, які модифіковані хемокінами, що підсилюють рухливість та міграцію.
  9. 9. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, для отримання МеСК-похідного продукту використовують МУК, модифіковані відновлюючими цитокінами.
  10. 10. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що розфасовкою у вже відділену від клітин та їх дебрису рідку фазу вносять додаткові компоненти, зокрема інсулін.
  11. 11. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що готовий продукт може використовуватися як спрей, аплікація та ін'єкція.
  12. 12. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що створений готовий продукт забезпечує відбудову ушкодженої шкіри, слизових оболонок і клітин, які розташовані під ними. 1 2 З . с 1 с о с о с Початкова «рана» ж кондиціонатчеврез 17 тод. т чисте середовище через 17 год.
    Фіг. 1 Контроль Лослід, ; Контраль Дослід о А о Щ пл 0..3з Є с: Ох 5 ОЇ г Ех ОО ВЕЕ о. Е Ж я ВВВОНОВ НО 5 . Дт шо О.В а. З - 2-та доба і 15 діб
    Фіг. 2
UAU202201476U 2022-05-06 2022-05-06 Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту UA154080U (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU202201476U UA154080U (uk) 2022-05-06 2022-05-06 Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU202201476U UA154080U (uk) 2022-05-06 2022-05-06 Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA154080U true UA154080U (uk) 2023-10-11

Family

ID=88696190

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU202201476U UA154080U (uk) 2022-05-06 2022-05-06 Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA154080U (uk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6892485B2 (ja) トロンビン血清の調製、その利用およびその調製機器
Neuman et al. Hyaluronic acid and wound healing
ES2710921T3 (es) Composiciones para tratar y prevenir lesión y enfermedad tisular
JP7210465B2 (ja) 成長因子含有血小板放出物を調製する方法
UA123822C2 (uk) Нові форми стандартизації та медичні пристрої для отримання тромбоцитарно-збагаченої плазми (prp) або фугату кісткового мозку (вмс) окремо або в комбінації з гіалуроновою кислотою
US20190290690A1 (en) Compositions comprising adjustable concentrations of growth factors derived from blood serum and clot hypoxia-conditioned medium and methods of their production
JP7378486B2 (ja) 医療用接着剤及びその調製方法、その用途
CN117209800A (zh) 一种基于鲵皮肤分泌物的载细胞的水凝胶微球及其应用
CN108324926B (zh) 干细胞提取物和抗菌肽的组合物及其用途
Zawrzykraj et al. The effect of chemotherapy and radiotherapy on stem cells and wound healing. Current perspectives and challenges for cell-based therapies
KR20130052441A (ko) 재조합 인간 골형성 단백질과 트위스트 전사인자를 활성성분으로 함유하는 피부조직 재생용 조성물 및 키트
UA154080U (uk) Спосіб отримання з клітин пуповини людини мск-похідного продукту
CN109072185A (zh) 增强型多能细胞和微血管组织以及其使用方法
KR20170109585A (ko) 세포 재생 및 세포 성장의 증가를 위한 혈소판 농축물
CN113730447A (zh) 一种促进创面愈合的中药和提取物及应用
Khodaie et al. Impact of Mummy Substance on the Proliferation and Migration of Human Adipose-derived Stem Cells and Fibroblasts in Separate or Co-culture Model.
EP0142109B1 (en) Macromolecules extracted from cultured mesenchymal cells for the treatment of degenerative diseases
US10722539B2 (en) Cadaveric derived wound treatment and method of use
Bahari Golamkaboudi et al. Current Non-Surgical Curative Regenerative Therapies for Knee Osteoarthritis
CN114209840A (zh) 一种mif抑制剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用
Volodymyrovych et al. THE USE OF PRP THERAPY IN PATIENTS WITH SURGICAL PATHOLOGY
CN116687837A (zh) 一种促进创面愈合的干细胞制剂及其制备方法
Lehn 1Department of Pediatric Surgery, University Hospital of Strasbourg, Strasbourg, France, 2UMR DIATHEC, EA 7294, Translational Medicine Federation of Strasbourg (FMTS), University of Strasbourg, Strasbourg, France
JP2004161649A (ja) 生体組織修復剤およびその製造方法
CN118403147A (zh) 间充质干细胞生物支架复合物的制备、冻存及复苏方法