UA147270U - Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії - Google Patents
Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії Download PDFInfo
- Publication number
- UA147270U UA147270U UAU202005119U UAU202005119U UA147270U UA 147270 U UA147270 U UA 147270U UA U202005119 U UAU202005119 U UA U202005119U UA U202005119 U UAU202005119 U UA U202005119U UA 147270 U UA147270 U UA 147270U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- virus
- rna
- dna
- influenza
- viruses
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 73
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims abstract description 29
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims abstract description 27
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 claims abstract description 25
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 241000430519 Human rhinovirus sp. Species 0.000 claims abstract description 24
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims abstract description 3
- 241001500350 Influenzavirus B Species 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 3
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 abstract 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 abstract 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 58
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 48
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 40
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 2
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 101100133229 Mus musculus Nfam1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000013616 RNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Спосіб виявлення в зразку РНК або ДНК таких вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії включає взяття досліджуваного зразку, екстракцію з досліджуваного зразку РНК або ДНК вірусів з одержанням підготовленого досліджуваного зразку, ампліфікацію РНК або ДНК вірусів шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразку таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу, та праймерного реагенту, детектування продуктів ампліфікації шляхом виміру інтенсивності флуоресцентного сигналу. При ампліфікації РНК або ДНК вірусів додають один або два праймерних реагенти. Причому у випадку додавання одного праймерного реагенту до одної порції підготовленого досліджуваного зразку додають праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК всіх таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії. У випадку додавання двох праймерних реагентів до одної порції підготовленого досліджуваного зразку додають перший праймерний реагент, який містять суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів обраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, до другої порції підготовленого досліджуваного зразку додають другий праймерний реагент, який містять суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів обраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, при цьому кожний із праймерів до РНК або ДНК вірусу грипу А, вірусу грипу В, респіраторно-синцитіального вірусу, аденовірусу, риновірусу людини, вірусу мікоплазменної пневмонії, може бути лише у одному із двох праймерних реагентів.
Description
Корисна модель належить до галузі медицини, а саме, до способів визначення наявності чи відсутності вірусної інфекції в організмі людини.
Одним із сучасних методів виявлення вірусів в організмі людини є метод ПЦР - полімерно- ланцюгової реакції.
Метод ПЛР використовує принципи молекулярної біології. Його суть полягає в застосуванні особливих ферментів, які багаторазово копіюють фрагменти РНК і ДНК збудників хвороби, які знаходяться в пробах біоматеріалу, наприклад в крові. Процес ПЛР проводять в амплификаторі - приладі, що охолоджує і нагріває пробірки з пробами біоматеріалу. Нагрівання і охолодження потрібні для проведення реплікації. Точність температурного режиму впливає на точність результату.
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР, РСК-роїутегавзе сНаїп геасійоп) - метод отримання безлічі копій певних фрагментів ДНК або РНК у біологічному зразка.
Суть ПЛР як методу молекулярної біології полягає у багатократному виборчому копіюванні певного гена (ділянки ДНК або РНК) за допомогою спеціальних ферментів в умовах іп міїго.
Важливою особливістю ПЛР є отримання копій конкретної ділянки ДНК або РНК, що відповідає заданим умовам. Синонімом процесу копіювання ДНК або РНК є "ампліфікація". Реплікація ДНК або РНК іп мімо також може вважатися ампліфікацією. Проте на відміну від реплікації, в процесі полімеразної ланцюгової реакції амплифицируются короткі ділянки ДНК або РНК (максимум 40 000 пар нуклеотидів). Утворення нуклеотидной ланцюга здійснюється ферментом ДНК- полімеразой або РНК-полімеразой. Проте для початку роботи ферменту потрібний стартовий майданчик. Майданчиками виступають праймери (приманки) - синтетичні олигонуклеотидь! довжиною 15-20 нуклеотидів. Праймерів повинно бути два (прямий і зворотний), вони комплементарні ділянкам ДНК або РНК, і саме фрагмент ДНК або РНК, обмежений праймерами, багаторазово копіюватиметься ДНК-полімеразою або РНК-полімеразою. Робота полімерази полягає в послідовному додаванні нуклеотидів, комплементу послідовності ДНК або
РНК. Тим самим в одному температурному циклі знову синтезується два нові фрагменти ДНК або РНК (оскільки молекула ДНК - двуцепочечная, то і матриць спочатку дві). Таким чином, за 25-35 циклів в пробірці накопичуються мільярди копій ділянки ДНК або РНК, визначеної праймерами. Структуру окремого циклу можна представити таким чином:
Зо денатурація ДНК або РНК (плавлення, розбіжність ланцюгів ДНК або РНК) - 957С -1 або 2 хвилини; відпал праймерів (приманки зв'язуються з ДНК або РНК, температура цієї стадії визначається нуклеотидним складом праймера) - 60 "С (приміром) - 1 хвилина; елонгація ДНК або РНК (полімераза синтезує ланцюг ДНК або РНК) - 72 "С -1 хвилина (час залежить від довжини фрагмента, що синтезується).
База приладів для здійснення методу полімеразної ланцюгової реакції в лабораторії повинна складатися з: ампліфікатора;
ПЛР-боксу (для підготовки проб); вортекса; мікроцентрифуги; набору автоматичних дозаторів (механічних або електронних).
Реагентна база в звичайній ПЛР-лабораторії для проведення повноцінної полімеразної ланцюгової реакції включає реагент, що містить фермент ДНК-полімеразу або РНК-полімеразу з буфером, реагент, що містить праймер до ДНК або РНК, наприклад, вірусу.
Відомий спосіб виявлення в зразка РНК такого вірусу як вірус грипу А (дивитись документ "Инструкция по применению набора реагентов для вьБявления РНК вируса гриппа
А/НІМ1(54/2009) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией"), який затверджений наказом Росздравнадзором
Мо 10914-Пр/09 від 31.12.2009, веб-сторінка З адресою пора /Лпепарзегмісе ги/иріоаа/лріоск/а07ЛиПнепгазогОмігивУв20А-НІ1 -5м/іпе-
ЕГ9620(зарегистр) Імі 060819.раю), який включає такі дії як взяття досліджуваного зразка, екстракцію з досліджуваного зразка РНК вірусу з одержанням підготовленого досліджуваного зразка, ампліфікацію РНК вірусу грипу А шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразка таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу, та праймерного реагенту, детектування продуктів ампліфікації шляхом виміру інтенсивності флуоресцентного сигналу.
Взяття досліджуваного зразка може бути здійснено шляхом взяття мазка з порожнини носа і ротоглотки, взяття мокроти або аспіратів з носоглотки і трахеї. Екстракцію з досліджуваного бо зразка РНК вірусу з одержанням підготовленого досліджуваного зразка здійснюють шляхом занурення досліджуваного зразка, наприклад, занурення мазка, у спеціальний розчин, або додавання до досліджуваного спеціального розчину. Ампліфікацію РНК вірусу грипу А здійснюють шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразка таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу, та праймерного реагенту. Праймерний реагент містить праймер до РНК вірусу грипу А. Детектування продуктів ампліфікації здійснюють шляхом виміру інтенсивності рфлуоресцентного сигналу у такому приладі як ампліфікатор, який підтримує певні умови для проведення ампліфікації РНК або ДНК цільових вірусів - так як ампліфікація РНК або ДНК вірусів триває певний час, і можливі варіанти детектування флуоресценції продуктів ампліфікації як під час самого процесу ампліфікації, так і по закінченні процесу ампліфікації.
Недоліками відомого процесу є те, що він дозволяє виявляти в зразка лише один вид вірусу - вірус грипу А. Існують інші подібні способи виявлення РНК або ДНК вірусів у зразка - які дають змогу виявляти по одному виду вірусу, наприклад, виявляти вірус грипу В тощо.
Наразі існує проблема лікування респіраторних інфекцій - респіраторні інфекції із схожими симптомами можуть бути викликані такими різними видами вірусів як вірус грипу А, вірус грипу
В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії. Тому для діагностування та правильного лікування людини із певними симптомами необхідне перевірка людини на наявність чи відсутність в організмі людини зазначених шести видів респіраторних вірусів. Виявлення зазначених шести видів респіраторних вірусів шляхом здійснення шість разів взяття зразка та аналізу кожного зразка на один вірус вимагає значних витрат часу та таких реагентів як праймерні реагенти.
В основу корисної моделі поставлено задачу розробки ефективного способу виявлення в зразка РНК або ДНК таких вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, для здійснення якого не треба багато часу та не треба багато праймерних реагентів.
Поставлена задача вирішується тим, що спосіб виявлення в зразка РНК або ДНК таких вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, що включає взяття досліджуваного зразка, екстракцію з досліджуваного зразка РНК або ДНК вірусів з одержанням підготовленого досліджуваного
Зо зразка, ампліфікацію РНК або ДНК вірусів шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразка таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК- полімеразу, та праймерного реагенту, детектування продуктів ампліфікації шляхом виміру інтенсивності флуоресцентного сигналу, згідно з корисною моделлю, при ампліфікації РНК або
ДНК вірусів додають один або два праймерних реагенти, причому у випадку додавання одного праймерного реагенту до одної порції підготовленого досліджуваного зразка додають праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК всіх таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, у випадку додавання двох праймерних реагентів до одної порції підготовленого досліджуваного зразка додають перший праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, до другої порції підготовленого досліджуваного зразка додають другий праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, при цьому кожний із праймерів до РНК або ДНК вірусу грипу А, вірусу грипу В, респіраторно-синцитіального вірусу, аденовірусу, риновірусу людини, вірусу мікоплазменної пневмонії, може бути лише у одному із двох праймерних реагентів.
Крім того, за одним із варіантів здійснення запропонованої корисної моделі, перший праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, другий праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох таких видів вірусів як аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії.
Спосіб виявлення в зразка РНК або ДНК таких вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, здійснюють наступним чином.
Спочатку здійснюють взяття досліджуваного зразка - яке може бути здійснено або шляхом взяття мазка з порожнини носа і ротоглотки, або взяття мокроти або аспіратів з носоглотки і трахеї. Досліджуваний зразок зберігають та транспортують відповідно до рекомендацій та нормативних настанов, затверджених компетентними органами. Як правило, тривале (більше бо 48 годин) зберігання та транспортування досліджуваних зразків здійснюють при температурі -
20 "С. У випадку мазка ватний тампон може бути поміщений у рідину для зберігання зразків.
Потім здійснюють екстракцію з досліджуваного зразка РНК або ДНК вірусів з одержанням підготовленого досліджуваного зразка - це здійснюють шляхом занурення досліджуваного зразка, наприклад, занурення мазка, у спеціальний розчин, або додавання до досліджуваного спеціального розчину. Склади такого спеціального розчину можуть бути різними, та описані у літературі. У результаті екстракції одержують підготовлений досліджуваний зразок, який є розчином. Потім здійснюють ампліфікацію РНК або ДНК вірусів, які є у підготовленому досліджуваному зразка, шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразка таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу, та одного або двох праймерних реагентів. Праймерний реагент містить декілька праймерів до РНК або ДНК певних видів вірусів. Додавання до підготовленого досліджуваного зразка РНК-полімерази або
ДНК-полімерази та праймерів до РНК або ДНК певних видів вірусів запускаю процес полімерно- цепної реакції.
Особливістю технічного рішення є використання або одного праймерного реагента, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК всіх таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, або використання двох праймерних регаентів, з яких перший праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, і другий праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або
ДНК трьох різних видів вірусів вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно- синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, при цьому кожний із праймерів до РНК або ДНК вірусу грипу А, вірусу грипу В, респіраторно- синцитіального вірусу, аденовірусу, риновірусу людини, вірусу мікоплазменної пневмонії, може бути лише у одному із двох праймерних реагентів. Тобто праймери до РНК або ДНК всіх таких шести видів респіраторних вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, знаходяться або у одному праймерному реагенті, або у двох праймерних реагентах.
У випадку використання одного праймерного реагенту, який містить суміш праймерів до РНК
Зо або ДНК всіх таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, його додають до одної порції підготовленого досліджуваного зразка, і у цю же порцію підготовленого досліджуваного зразка додають реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу.
У випадку використання двох праймерних реагентів можливі різні комбінації праймерів до
ДНК або РНК зазначених шести вірусів у кожному із двох праймерних реагентів. У цьому випадку перший праймерний реагент додають до одної порції підготовленого досліджуваного зразка, і у цю же порцію підготовленого досліджуваного зразка додають реагент, який містить
РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу, другий праймерний реагент додають до другої порції підготовленого досліджуваного зразка, і у цю же порцію підготовленого досліджуваного зразка додають реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу, Як приклад одної із можливих комбінацій праймерів до ДНК або РНК зазначених шести вірусів у кожному із двох праймерних реагентів, перший праймерний реагент може містити суміш праймерів до РНК або
ДНК трьох таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, другий праймерний реагент може містити суміш праймерів до РНК або ДНК трьох таких видів вірусів як аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії.
Використання одного або двох праймерних реагентів для шести зазначених респіраторних вірусів дозволяє за один процес здійснення способу визначити наявність чи відсутність одночасно шести респіраторних вірусів, що значно скорочує час виявлення РНК або ДНК вірусів, та скорочує об'єм і кількість реагентів, які необхідні для виявлення цих шести вірусів.
Продуктами процесу ампліфікації є фрагменти РНК або ДНК вірусів, і завдяки цьому процесу у розчині відбувається значне збільшення кількості фрагментів РНК або ДНК вірусів.
Продукти ампліфікації можна детектувати шляхом виміру інтенсивності флуоресцентного сигналу - флуоросценції, яка відбувається під час процесу ампліфікації, або по закінченню процесу ампліфікації. Ампліфікацію та вимірювання флуоросценції здійснюють у таких приладах ампліфікатори. Відомими моделями ампліфікаторів є прилади під торговими назвами
АВІ7500 та 5І АМ-96Р, ці прилади призначені для виявлення ДНК і РНК вірусів за допомогою проведення полімеразної ланцюгової реакції з флуоросцентним детектуванням результатів в режимі реального часу.
Технічний результат, який досягається запропонованою корисною моделлю - спосіб 60 дозволяє провести за один процес здійснення корисної моделі, виявлення шести різних видів респіраторних вірусів, значно зменшити витрати часу та кількості реагентів для виявлення зазначених вірусів.
Наведені приклади здійснення запропонованої корисної моделі лише ілюструють технічне рішення, але не обмежують його.
Claims (2)
1. Спосіб виявлення в зразка РНК або ДНК таких вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, який включає взяття досліджуваного зразка, екстракцію з досліджуваного зразка РНК або ДНК вірусів з одержанням підготовленого досліджуваного зразка, ампліфікацію РНК або ДНК вірусів шляхом додавання до порції підготовленого досліджуваного зразка таких реагентів як реагент, який містить РНК-полімеразу або ДНК-полімеразу, та праймерного реагента, детектування продуктів ампліфікації шляхом виміру інтенсивності флуоресцентного сигналу, який відрізняється тим, що при ампліфікації РНК або ДНК вірусів додають один або два праймерних реагенти, причому у випадку додавання одного праймерного реагента до одної порції підготовленого досліджуваного зразка додають праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК всіх таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно- синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, у випадку додавання двох праймерних реагентів до одної порції підготовленого досліджуваного зразка додають перший праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів, вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно- синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, до другої порції підготовленого досліджуваного зразка додають другий праймерний реагент, який містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох різних видів вірусів, вибраних із переліку вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії, при цьому кожний із праймерів до РНК або ДНК вірусу грипу А, вірусу грипу В, респіраторно-синцитіального вірусу, аденовірусу, риновірусу людини, вірусу мікоплазменної пневмонії може бути лише у одному із двох праймерних реагентів. Зо
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що перший праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох таких видів вірусів як вірус грипу А, вірус грипу В, респіраторно-синцитіальний вірус, другий праймерний реагент містить суміш праймерів до РНК або ДНК трьох таких видів вірусів як аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU202005119U UA147270U (uk) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU202005119U UA147270U (uk) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA147270U true UA147270U (uk) | 2021-04-28 |
Family
ID=75723456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU202005119U UA147270U (uk) | 2020-08-06 | 2020-08-06 | Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA147270U (uk) |
-
2020
- 2020-08-06 UA UAU202005119U patent/UA147270U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6329370B2 (ja) | 呼吸器系ウイルスによる疾患の同時診断キット | |
| US9222126B2 (en) | Methods for point-of-care detection of nucleic acid in a sample | |
| JP5420256B2 (ja) | 精製方法及びキット | |
| ES2439951T3 (es) | Detección y cuantificación multiplex de ácidos nucleicos microbianos controlada de forma interna | |
| Yu et al. | Development of a real-time reverse transcription loop-mediated isothermal amplification method for the rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus | |
| Petrov et al. | Alternative sampling strategies for passive classical and African swine fever surveillance in wild boar | |
| CN110093457A (zh) | 一种非洲猪瘟病毒asfv-lamp检测引物组及试剂盒 | |
| ES2605303T3 (es) | Detección cualitativa y cuantitativa de ácidos nucleicos microbianos | |
| CN111334608B (zh) | 用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的双重荧光冻干微芯片、试剂盒及方法 | |
| CN111286559B (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| WO2010102460A1 (zh) | 定性定量检测病原微生物遗传物质的方法及其试剂盒 | |
| Katsarou et al. | Viral detection: past, present, and future | |
| CN106434996A (zh) | 一种检测鲍曼不动杆菌dna的试剂盒及检测方法 | |
| Spackman | Avian influenza virus detection and quantitation by real-time RT-PCR | |
| Reynés et al. | Rapid visual detection of SARS-CoV-2 by colorimetric loop-mediated isothermal amplification | |
| Valadan et al. | Differential gene expression analysis of common target genes for the detection of SARS-CoV-2 using real time-PCR | |
| Wang et al. | A label-free technique for accurate detection of nucleic acid–based self-avoiding molecular recognition systems supplemented multiple cross-displacement amplification and nanoparticles based biosensor | |
| CN111321247B (zh) | 用于鉴别非洲猪瘟病毒、猪瘟野毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株的冻干微孔板、试剂盒及方法 | |
| Bhat et al. | Polymerase chain reaction | |
| CN114214455A (zh) | 乙肝病毒DNA快速定量引物探针及其CRISPR/Cas12b检测系统 | |
| BR112017000581B1 (pt) | método automatizado para detectar ácidos nucleicos de hiv-1 em uma amostra de sangue | |
| UA147270U (uk) | Спосіб виявлення в зразку рнк або днк таких вірусів як вірус грипу а, вірус грипу в, респіраторно-синцитіальний вірус, аденовірус, риновірус людини, вірус мікоплазменної пневмонії | |
| Wu et al. | Rapid detection of three rabbit pathogens by use of the Luminex x-TAG assay | |
| Hanlon et al. | Laboratory diagnosis of rabies | |
| KR20050043882A (ko) | 고형 담체에 투여되어 저장되고 그리고 탐지되는 핵산 |