UA126575C2

UA126575C2 - Композиція і спосіб контролю захворювань, що передаються переносниками

Info

Publication number: UA126575C2
Application number: UAA201909451A
Authority: UA
Inventors: Ігнасіо Мартінес; Игнасио Мартинес; Закарі Гаро Армен; Закари Гаро Армен; Крістін Цезарь; Кристин Цезарь; Баррі Ендрю Мартін; Барри Эндрю Мартин; Амадо Майєр Стів Авенданьо; Амадо Майер Стив Авендано
Original assignee: Флегшіп Пайонірінг Інновейшнз V, Інк.; Флегшип Пайониринг Инновейшнз V, Инк.
Priority date: 2017-01-24
Filing date: 2018-01-24
Publication date: 2022-11-02
Also published as: WO2018140507A8; EP3573638A4; BR112019014958A2; JP2020509078A; WO2018140507A1; US20190365853A1; RU2019126318A; CA3047357A1; CN111148523A; AU2018212575A1; RU2019126318A3; JP2023052111A; US20200261536A1; AU2018212575B2; US20210275635A1; EP3573638A1

Abstract

У даному документі передбачені способи та композиції, корисні для здоров'я людини, наприклад для цілеспрямованого впливу на один або декілька мікроорганізмів, що живуть в організмі комахи-хазяїна (наприклад, членистоногого, наприклад комахи, наприклад переносника патогену), при цьому це модулювання викликає зниження пристосовуваності хазяїна. У даному винаході описана композиція, яка містить модулювальний засіб (наприклад, фаг, пептид, малу молекулу, антибіотик або їх комбінації), що може змінювати мікробіоту хазяїна таким чином, що це є згубним для хазяїна. Модулювальний засіб, описаний у даному документі, можна застосовувати для зниження пристосовуваності низки комах, які переносять патогени, що передаються переносниками, які викликають захворювання у людей, за допомогою порушення рівнів мікроорганізмів, активності мікроорганізмів, метаболізму мікроорганізмів або різноманітності мікроорганізмів. 257

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

Дана заявка заявляє пріоритет за попередньою заявкою США Мо 62/450032, поданою 24 січня 2017 р., і попередньою заявкою США Мо 62/583925, поданою 9 листопада 2017 р., зміст яких включено в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Комахи виступають у ролі переносників патогенів, що викликають серйозне захворювання у людини, таке як лихоманка денге, трипаносомоз та малярія. Якщо брати до уваги 174 мільйони діагнозів та 655000 мільйонів смертей у 2011 р., малярія вважається одним із найбільш значущих захворювань у всьому світі. Таким чином, у даній галузі техніки є потреба в способах і композиціях для контролю комах, які переносять захворювання, що передаються переносниками.

Стислий опис винаходу

У даному документі розкриті композиції та способи для модулювання пристосовуваності комах для контролю поширення захворювань, що передаються переносниками, у людей.

Композиція містить засіб, який змінює рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна, при цьому зміна приводить до модулювання пристосовуваності хазяїна.

В одному аспекті в даному документі передбачений спосіб зниження пристосовуваності переносника (наприклад, комахи-переносника) патогену людини, при цьому спосіб включає доставку протимікробного пептиду, що характеризується щонайменше 90 95 ідентичністю послідовності (наприклад, щонайменше 90 95, 92 Фь, 94 95, 96 95, 98 95 або 100 95 ідентичністю послідовності) з одним або декількома з наступних: цекропіну (ЗЕО ІЮ МО: 82), мелітину, копсину, дрозоміцину (ЗЕО ІЮ МО: 93), дермцидину (5ЕО ІЮ МО: 81), андропіну (ЗЕО ІО МО: 83), морицину (ЗЕО ІЮ МО: 84), цератотоксину (ЗЕО ІЮ МО: 85), абецину (5ЕО ІО МО: 86), апідецину (ЗЕО ІЮО МО: 87), профеніну (ЗЕО ІО МО: 88), індоліцидину (ЗЕО ІО МО: 89), протегрину (ЗЕО ІЮ

МО: 90), тахіплезину (ЗЕО ІЮ МО: 91) або дефензину (ЗЕО ІЮ МО: 92), переноснику.

У деяких варіантах здійснення доставка включає доставку протимікробного пептиду в щонайменше одне середовище проживання, у якому переносник росте, живе, розмножується, живиться або здійснює зараження.

У деяких варіантах здійснення протимікробний пептид може бути доставлений у їстівній для комахи композиції для споживання переносником.

У деяких варіантах здійснення протимікробний пептид може бути складений у вигляді рідкої, твердої, аерозольної, пастоподібної, гелеподібної або газоподібної композиції.

У деяких варіантах здійснення комаха може бути щонайменше одним з комара, галиці, воші, москіта, іксодового кліща, триатомового клопа, мухи цеце або блохи.

В іншому аспекті в даному документі передбачена композиція, що містить протимікробний пептид, що характеризується щонайменше 09095 ідентичністю послідовності (наприклад, щонайменше 90 95, 92 9», 94 95, 96 95, 98 95 або 100 95 ідентичністю послідовності) з одним або декількома з наступних: цекропіну (ЗЕО ІО МО: 82), мелітину, копсину, дрозоміцину (ЗЕО ІЮ МО: 93), дермцидину (ЗЕО ІО МО: 81), андропіну (5ЕО ІЮ МО: 83), морицину (ЗЕО ІЮ МО: 84), цератотоксину (ЗЕО ІЮ МО: 85), абецину (З5ЕО ІО МО: 86), апідецину (ЗЕО ІО МО: 87), профеніну (ЗЕО ІО МО: 88), індоліцидину (ЕС ІЮ МО: 89), протегрину (ЗЕО ІЮО МО: 90), тахіплезину (ЗЕО

ІЮ МО: 91) або дефензину (5ЕО ІО МО: 92), складена для цілеспрямованого впливу на мікроорганізм у переноснику (наприклад, комасі-переноснику) патогену людини.

У деяких варіантах здійснення другого аспекту протимікробний пептид може знаходитись у композиції в концентрації від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г (від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 1 нг/г, від приблизно 1 нг/г до приблизно 10 нг/г, від приблизно 10 нг/г до приблизно 100 нг/г, від приблизно 100 нг/г до приблизно 1000 нг/г, від приблизно 1 мг/г до приблизно 10 мг/г, від приблизно 10 мг/г до приблизно 100 мг/г) або від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 100

БО мг/мл (від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 1 нг/мл, від приблизно 1 нг/мл до приблизно 10 нг/мл, від приблизно 10 нг/мл до приблизно 100 нг/мл, від приблизно 100 нг/мл до приблизно 1000 нг/мл, від приблизно 1 мг/мл до приблизно 10 мг/мл, від приблизно 10 мг/мл до приблизно 100 мг/мл).

У деяких варіантах здійснення другого аспекту протимікробний пептид може додатково містити націлювальний домен.

У деяких варіантах здійснення другого аспекту протимікробний пептид може додатково містити пептид, що проникає в клітину.

У ще одному аспекті композиція містить засіб, який змінює рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі комахи-хазяїна, при цьому зміна 60 приводить до зниження пристосовуваності комахи-хазяїна.

У деяких варіантах здійснення будь-якої з вищевказаних композицій один або декілька мікроорганізмів можуть бути бактерією або грибом, що живуть в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення бактерія, що живе в організмі хазяїна, являє собою щонайменше одну бактерію, вибрану із групи, що складається з Сапаїдацв» 5рр, Виспепега 5рр, Віакабасіегішт 5рр,

Вайтапіа 5рр, У/іддіезууопйіа рр, УУоїЇрасніа рр, ВісКейвіа 5рр, Огієпіа 5рр, 5Бодаїйв 5рр,

ВигКПоїдетіа рр, Сирііамідив зрр, ЕгапкКіа 5рр, Зпіті2орійт рр, Зігеріососсив рр, МоїїпейПа в5рр,

Хуїеїїа 5рр, Егміпіа 5рр, Адгобасієгцт 5рр, Васійи5 5рр, Раєпірасійн5 в5рр, Зперіотусевз зрр,

Містососсив врр, Согупебрасієгішт в5рр, Асеїорасієї зрр, Суапобрасієга в5рр, ЗаІтопеїа 5рр,

Аподососсив 5рр, Реепдотопаб5 5рр, Іасіобасійн5 5рр, Епіегососсив 5рр, Аїсаїдепе5 5рр,

Кіебзієїа врр, Раепірбасійй5 врр, АпйПгобасієї зрр, Согуперасієгішт зрр, Вгемірасієгішт в5рр,

Тпепти5 5рр, Рзейдотопа5 5рр, Сіозігідішт 5рр та Еб5сПегіспіа 5рр. У деяких варіантах здійснення гриб, що живе в організмі хазяїна, являє собою щонайменше один гриб, вибраний із групи, що складається з Сапаїда, Меї5сппіком/а, Оераготусев, зіагтегеїПа, Ріспіа, Стуріососсив,

Реєндогута, ЗутБбіоїарнгіпа риспегі, БЗутрбіоїарпнгіпа Коспії Зспепйегзотусез зпепаїає,

ЗспепПегзотусевз віїрієв, Стуріососсив, Тпісповзрогоп, Атуїозівгєеит агеоіайт, Ерісніоє з5рр,

Ріспіа ріпи5, Напзепиїа сарзціаге, Оаїдіпіа десірієп, Сегайосуїі5 5зрр, Орпіовіота 5рр та АЧатусев рготаїййіси5. У певних варіантах здійснення бактерія являє собою УМоІбасніа 5рр. (наприклад, в організмі комара-хазяїна). У певних варіантах здійснення бактерія являє собою КісКейбвіа 5рр. (наприклад, в організмі іксодового кліща-хазяїна).

У будь-якій з вищевказаних композицій засіб, який далі в даному документі також може називатися модулювальним засобом, може змінювати ріст, ділення, життєздатність, метаболізм мМабо тривалість життя мікроорганізму, що живе в організмі хазяїна. У будь-якому з вищевказаних варіантів здійснення модулювальний засіб, може знижувати життєздатність одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб, підвищує ріст або життєздатність одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна.

У будь-якому з вищевказаних варіантів здійснення модулювальний засіб, являє собою фаг, поліпептид, малу молекулу, антибіотик, бактерію або будь-яку їх комбінацію.

У деяких варіантах здійснення фаг зв'язується з білком клітинної поверхні в бактерії, що

Зо живе в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення фаг є вірулентним щодо бактерії, що живе в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення фаг являє собою щонайменше один фаг, вибраний із групи, що складається з Муомігідає, 5ірпомігідає, Родомігідає, І іроїнгіхмігідає,

Видімігдає, АтриПамігідає, Вісацдамігідає, Сіамамігдає, Сопісомігідає, Сувіомігідає, РизеїІомігідає, сіро омігідає, сиНамігідає, Іпомігідає, І емімігідає, Місгомігідає, Ріазтамігідає і Тесіїмігідає.

У деяких варіантах здійснення поліпептид являє собою щонайменше одне з бактеріоцину, бактеріоцину К-типу, збагаченого С пептиду бульбочок, протимікробного пептиду, лізину або регуляторного пептиду бактеріоцитів.

У деяких варіантах здійснення мала молекула являє собою метаболіт.

У деяких варіантах здійснення антибіотик являє собою антибіотик широкого спектра дії.

У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб являє собою бактерію, що зустрічається в природі. У деяких варіантах здійснення бактерія являє собою щонайменше одну бактерію, вибрану із групи, що складається з ВагіопеїйІа арі5, Рагазасспагірасіег аріит, ЕгізспеїЇа реггага, ЗподдгаззейПа аїм, сШіатеїа арісоїа, Війдорасіегішт 5рр та І асіорасійи5 5рр. У деяких варіантах здійснення бактерія являє собою щонайменше одну бактерію, вибрану із групи, що складається з Сапаїдати5 5рр, Виспепега 5рр, Віачарасіегічт 5рр, Ваштапіа 5рр, УМодіезумогіпіа 5рр, УМоірасніа 5рр, ВісКейвіа з5рр, Огієпіїа 5рр, 5одаїїз зрр, ВиїКНоЇдета 5рр, Сиргіамідив 5рр,

ЕгапКіа 5рр, Зпігптігобішт врр, Зперіососси5 5рр, Муоїїпейа в5рр, ХуїєМПа 5рр, Егміпіа 5рр,

Адгорасієгішт 5рр, Васійн5 5рр, Раєпірасіїйй5 зврр, бЗігеріотусе5 5рр, Місгососси5 зрр,

Согупебасієгішт в5рр, Асеїбасієї 5рр, Суапобрасієга в5рр, ЗаІтопеїа 5рр, Вподососсив в5рр,

Резепдотопаз в5рр, Іасіюбасійи5 5рр, Епіегососси5 5рр, АІсаїїдепе5 5рр, КіерзієПїа 5рр,

Раепібасійн5 5рр, Апйпгорасієї 5рр, Согуперасієтішт зрр, Вгемірасієтішт в5рр, ТНептив врр,

Рзепдотопазв 5рр, СіІовігідішт 5рр та ЕзсПегіспіа 5рр.

У будь-якій з вищевказаних композицій пристосовуваність хазяїна може бути виміряна за виживаністю, розмноженням або метаболізмом хазяїна. У будь-якому з вищевказаних варіантів здійснення модулювальний засіб може модулювати пристосовуваність хазяїна за допомогою підвищення сприйнятливості хазяїна до пестицидів (наприклад, сприйнятливості до пестициду, наведеного в таблиці 12). У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб модулює пристосовуваність хазяїна за допомогою підвищення сприйнятливості хазяїна до пестицидів. У деяких варіантах здійснення сприйнятливість до пестицидів являє собою сприйнятливість до бактерицидів або фунгіцидів. У деяких варіантах здійснення сприйнятливість до пестицидів являє собою сприйнятливість до інсектицидів.

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може містити безліч різних модулювальних засобів. У деяких варіантах здійснення композиція містить модулювальний засіб і пестицидний засіб (наприклад, пестицид, наведений у таблиці 12). У деяких варіантах здійснення пестицидний засіб являє собою бактерицидний або фунгіцидний засіб. У деяких варіантах здійснення пестицидний засіб являє собою інсектицидний засіб.

У будь-якій з вищевказаних композицій модулювальний засіб може бути зв'язаний з другим фрагментом. У деяких варіантах здійснення другий фрагмент може являти собою модулювальний засіб.

У будь-якій з вищевказаних композицій модулювальний засіб може бути пов'язаний з націлювальним доменом. У деяких варіантах здійснення націлювальний домен націлює модулювальний засіб на цільову ділянку в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення націлювальний домен націлює модулювальний засіб на один або декілька мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна.

У будь-якій з вищевказаних композицій модулювальний засіб може містити інактивувальну пре- або пропослідовність з утворенням тим самим моделювального засобу-попередника. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб-попередник перетворюється в активну форму в організмі хазяїна.

У будь-якій з вищевказаних композицій модулювальний засіб може містити лінкер. У деяких варіантах здійснення лінкер являє собою розщеплюваний лінкер.

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може додатково містити носій. У деяких випадках носій може являти собою прийнятний з погляду сільського господарства носій.

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може додатково містити принаду для хазяїна, липкий засіб або їх комбінацію. У деяких варіантах здійснення принада для хазяїна являє собою їстівний засіб і/або хемоатрактант.

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може міститися в дозі, ефективній для модулювання пристосовуваності хазяїна. І

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може бути складена для доставки в

Зо мікроорганізм, що живе в кишці хазяїна. У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може бути складена для доставки в мікроорганізм, що живе в бактеріоциті хазяїна й/або кишці хазяїна. У деяких варіантах здійснення композиція може бути складена для доставки в рослину.

У деяких варіантах здійснення композиція може бути складена для застосування в годівниці для хазяїна.

У будь-якій з вищевказаних композицій композиція може бути складена у вигляді рідини, порошку, гранул або наночастинок. У деяких варіантах здійснення композицію складають у вигляді композиції, обраної із групи, що складається з ліпосоми, полімеру, бактерії, що секретує пептид, і синтетичної нанокапсули. У деяких варіантах здійснення синтетична нанокапсула доставляє композицію в цільову ділянку в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення цільова ділянка являє собою кишку хазяїна. У деяких варіантах здійснення цільова ділянка являє собою бактеріоцит в організмі хазяїна.

У додатковому аспекті в даному документі також передбачені хазяї, які містять будь-яку з вищевказаних композицій. У деяких варіантах здійснення хазяїн являє собою комаху. У деяких варіантах здійснення комаха являє собою комара, галицю, вошу, москіта, іксодового кліща, триатомового клопа, муху цеце або блоху. У певних варіантах здійснення комаха являє собою комара. У певних варіантах здійснення комаха являє собою іксодового кліща. У певних варіантах здійснення комаха являє собою мікроскопічного кліща. У певних варіантах здійснення комаха являє собою вошу.

У даному документі також передбачена система для модулювання пристосовуваності хазяїна, що містить модулювальний засіб, який цілеспрямовано впливає на мікроорганізм, необхідний для пристосовуваності хазяїна, при цьому система є ефективною для модулювання пристосовуваності хазяїна, і при цьому хазяїн являє собою комаху. Модулювальний засіб може передбачати будь-яку з композицій, описаних у даному документі. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб складають у вигляді порошку. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб складають у вигляді розчинника. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб складають у вигляді концентрату. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб складають у вигляді розріджувача. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб одержують для доставки за допомогою об'єднання будь-якої з попередніх композицій з носієм.

У ще одному додатковому аспекті також передбачені способи модулювання пристосовуваності комахи за допомогою будь-якої з композицій, описаних у даному документі. В одному випадку спосіб модулювання пристосовуваності комахи-хазяїна передбачає доставку композиції за будь-яким із попередніх пунктів хазяїнові при цьому модулювальний засіб цілеспрямовано впливає на один або декілька мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна, і тим самим модулює пристосовуваність хазяїна. В іншому випадку спосіб модулювання різноманітності мікроорганізмів в організмі комахи-хазяїна передбачає доставку композиції за будь-яким із попередніх пунктів хазяїнові, при цьому модулювальний засіб цілеспрямовано впливає на один або декілька мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна, і тим самим модулює різноманітність мікроорганізмів в організмі хазяїна.

У деяких варіантах здійснення будь-якого з вищевказаних способів модулювальний засіб може змінювати рівні одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення будь-якого з вищевказаних способів модулювальний засіб може змінювати функцію одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення один або декілька мікроорганізмів можуть являти собою бактерію іМабо гриб. У деяких варіантах здійснення один або декілька мікроорганізмів потрібні для пристосовуваності хазяїна. У деяких варіантах здійснення один або декілька мікроорганізмів потрібні для виживаності хазяїна.

У деяких варіантах здійснення будь-якого з вищевказаних способів етап доставки може включати надання модулювального засобу в дозі й протягом часу, достатніх для впливу на один або декілька мікроорганізмів, з модулюванням тим самим різноманітності мікроорганізмів в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення етап доставки включає місцеве застосування будь-якої з попередніх композицій щодо рослини. У деяких варіантах здійснення етап доставки включає надання модулювального засобу через генетично сконструйовану рослину. У деяких варіантах здійснення етап доставки включає надання модулювального засобу хазяїнові у вигляді їстівного засобу. У деяких варіантах здійснення етап доставки включає забезпечення хазяїна, що несе модулювальний засіб. У деяких варіантах здійснення хазяїн, що несе модулювальний засіб, може переносити модулювальний засіб одному або декільком додатковим хазяям.

Зо У деяких варіантах здійснення будь-якого з вищевказаних способів композиція може бути ефективною для підвищення чутливості хазяїна до пестицидного засобу (наприклад, пестициду, наведеного в таблиці 12). У деяких варіантах здійснення хазяїн є стійким до пестицидного засобу до доставки модулювального засобу. У деяких варіантах здійснення пестицидний засіб являє собою алелохімічний засіб. У деяких варіантах здійснення алелохімічний засіб являє собою кофеїн, цистатин М сої, монотерпени, дитерпенові кислоти або фенольні сполуки. У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для вибіркового знищення хазяїна. У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для зниження пристосовуваності хазяїна.

У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для зниження продукування незамінних амінокислот і/або вітамінів в організмі хазяїна.

У деяких варіантах здійснення будь-якого з вищевказаних способів хазяїн являє собою комаху. У деяких варіантах здійснення хазяїн являє собою переносник патогену людини. У деяких варіантах здійснення переносник являє собою комара, галицю, вошу, москіта, іксодового кліща, триатомового клопа, муху цеце або блоху. У певних варіантах здійснення переносник являє собою комара. У певних варіантах здійснення переносник являє собою іксодового кліща.

У певних варіантах здійснення переносник являє собою мікроскопічного кліща. У певних варіантах здійснення переносник являє собою вошу.

У деяких варіантах здійснення патоген людини являє собою вірус, найпростіший організм, бактерію, протисту або нематоду. У деяких варіантах здійснення вірус являє собою вірус, що належить до групи Тодамігідає, РіІамімігідає, Випуамігідаеє, Кпараомігідає або Огбімігідає. У деяких

БО варіантах здійснення бактерія являє собою бактерію, що належить до роду "Уегзіпіа, ЕгапсізеїПа,

Кіскейнвсїа, Огіепіа або Воітеїйа. У деяких варіантах здійснення найпростіший організм являє собою найпростіший організм, що належить до роду Ріазітодішт, Тгурапозопта, І еїієптапіа або

Вабрезіа. У деяких варіантах здійснення нематода являє собою нематоду, що належить до роду

Вгидіа. У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для попередження або зменшення передачі патогену людям. У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для попередження або зменшення горизонтальної або вертикальної передачі патогену між хазяями. У деяких варіантах здійснення композиція є ефективною для зниження пристосовуваності хазяїна, темпів розвитку хазяїна або здатності до переносу.

В іншому аспекті в даному документі також передбачені скринінгові аналізи для бо ідентифікації модулювального засобу, який модулює пристосовуваність хазяїна. В одному випадку скринінговий аналіз для ідентифікації модулювального засобу, який модулює пристосовуваність хазяїна, включає етапи (а) впливу на мікроорганізм, який може жити в організмі хазяїна, одного або декількох кандидатних модулювальних засобів і (б) ідентифікації модулювального засобу, який знижує пристосовуваність хазяїна.

У деяких варіантах здійснення скринінгового аналізу модулювальний засіб являє собою мікроорганізм, що живе в організмі хазяїна. У деяких варіантах здійснення мікроорганізм являє собою бактерію. У деяких варіантах здійснення бактерія, коли живе в організмі хазяїна, знижує пристосовуваність хазяїна. У деяких варіантах здійснення скринінгового аналізу модулювальний засіб негативно впливає на мікроорганізм, що розщеплює алелохімікат. У деяких варіантах здійснення модулювальний засіб, являє собою фаг, антибіотик або досліджувану сполуку. У деяких варіантах здійснення антибіотик являє собою тиментин або азитроміцин.

У деяких варіантах здійснення скринінгового аналізу хазяїн може являти собою безхребетне. У деяких варіантах здійснення безхребетне являє собою комаху. У деяких варіантах здійснення комаха являє собою комара. У деяких варіантах здійснення комаха являє собою іксодового кліща. У певних варіантах здійснення комаха являє собою мікроскопічного кліща. У певних варіантах здійснення комаха являє собою вошу.

У будь-якому з вищевказаних варіантів здійснення скринінгового аналізу пристосовуваність хазяїна може бути модульована шляхом модулювання мікробіоти хазяїна.

Визначення

Використовуваний у даному документі термін "бактеріоцин" стосується пептиду або поліпептиду, який має протимікробні властивості. Бактеріоцини, що зустрічаються в природі, продукуються певними прокаріотами й діють проти організмів, споріднених зі штамом- продуцентом, але не проти самого штаму-продуценту. Бактеріоцини, передбачені в даному документі, включають без обмеження бактеріоцини, що зустрічаються в природі, такі як бактеріоцини, що продукуються бактеріями, і їх похідні, такі як сконструйовані бактеріоцини, бактеріоцини, що рекомбінантно експресуються, і бактеріоцини, одержані за допомогою хімічного синтезу. У деяких випадках бактеріоцин являє собою функціонально активний варіант бактеріоцинів, описаних у даному документі. У деяких випадках варіант бактеріоцину є на щонайменше 70 95, 71 90, 72905, 7З 0, 74905, 7590, 7690, 77 Чо, 79 о, 79 У, 80 Уо, 81 90, 82 бо, 83 9, 84 95, 85 95, 86 Ус, 87 У, 88 95, 89 95, 90 Ус, 91 У, 92 95, 93 Ус, 94 Ус, 95 У, 96 95, 97 Ус, 98 Уо або 99 95 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності бактеріоцину, описаного в даному документі, або бактеріоцину, що зустрічається в природі.

Використовуваний у даному документі термін "бактеріоцит" стосується спеціалізованої клітини, що зустрічається у певних комах, у якій живуть внутрішньоклітинні бактерії із властивостями симбіотичних бактерій.

Використовуваний у даному документі термін "ефективна кількість" стосується кількості модулювального засобу (наприклад, фага, лізину, бактеріоцину, малої молекули або антибіотика) або композиції, що містить указаний засіб, достатній для одержання указаного результату, наприклад для зниження або ослаблення пристосовуваності організму-хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші); для досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації модулювального засобу в організмі цільового хазяїна; для досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації модулювального засобу у кишці цільового хазяїна; для досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації модулювального засобу в бактеріоциті цільового хазяїна; для модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна.

Використовуваний у даному документі термін "пристосовуваність" стосується здатності організму-хазяїна виживати та/або давати життєздатне потомство. Пристосовуваність організму може бути виміряно за допомогою одного або декількох параметрів, у тому числі без обмежень тривалості життя, швидкості розмноження, рухливості, маси тіла й швидкості метаболізму.

Пристосовуваність може бути додатково виміряна на основі показників активності (наприклад, у тварин, що кусають, або людей) або передачі захворювання (наприклад, переносу від переносника переноснику або переносу від переносника людині).

Використовуваний у даному документі термін "кишка" стосується будь-якої частини кишки хазяїна, у тому числі передньої кишки, середньої кишки або задньої кишки хазяїна.

Використовуваний у даному документі термін "хазяїн" стосується організму (наприклад, комахи, наприклад комара, воші, мікроскопічного кліща або іксодового кліща), що несе мікроорганізми, що живуть у ньому (наприклад, ендогенні мікроорганізми, ендосимбіотичні мікроорганізми (наприклад, первинні або вторинні ендосимбіонти), організми-коменсали та/або патогенні мікроорганізми).

Використовуваний у даному документі термін "зниження пристосовуваності хазяїна" або "зниження пристосовуваності хазяїна" стосується будь-якого порушення фізіологічних процесів хазяїна або будь-якої активності, здійснюваної зазначеним хазяїном, внаслідок введення модулювального засобу, у тому числі без обмеження будь-якого одного або декількох із наступних необхідних ефектів: (1) зниження популяції хазяїна на приблизно 10 95, 20 Фо, ЗО Об, 40 96, 50 95, 60 Ус, 70 95, 8095, 90 95, 95 95, 99 95, 100 95 або більше; (2) зниження швидкості розмноження хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 20 95, ЗО Ус, 40 95, 50 95, 60 Зо, 70 95, 80 95, 90 о, 95 90, 99 Ор, 100 95 або більше; (3) зниження рухливості хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 20 Фо, 30 95, 40 Фо, 50 95, 60 Об, 70 9, 80 95, 90 9, 95 95, 99 95, 100 95 або більше; (4) зниження маси тіла хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 96, 30 95, 40 95, 50 95, 60 У, 70 Уо, 80 95, 90 Ус, 95 о, 99 95, 100 95 або більше; (5) підвищення швидкості метаболізму або активності хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 20 Фо, 30 95, 40 Фо, 50 95, 60 Об, 7096, 8095, 9095, 9595, 9995, 10095 або більше; (б) зниження переносу патогену від переносника переноснику (наприклад, вертикального або горизонтального переносу патогену 20 від однієї комахи іншій) з організму хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 20 95, З0 0, 40 95, 50 95, 60 о, 70 Об, 80 оо, 90 95, 95 95, 99 95, 100 95 або більше; (7) зниження переносу патогену від переносника людині (наприклад, від комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 то, 20 то, Зо то, 40 то, 50 то, 6о0 то, 70 то, 80 то, 90 то, 95 то, 99 то, 100 95 або більше; (8) зниження тривалості життя хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 95, 20 Фо, 30 95, 40 Фо, 50 95, 60 Об, 7096, 8095, 9095, 9595, 99 95, 100 95 або більше; (9) підвищення сприйнятливості хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) до пестицидів (наприклад, інсектицидів) на приблизно 10 95, 20 95, 30 Зо, 40 90, 50 95, 60 бо, 70 Ор,

Зо 80 Фо, 90 оо, 95 90, 99 95, 100 95 або більше або (10) зниження здатності до переносу в хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші) на приблизно 10 96, 20 95, ЗО 9о, 40 бо, 50 9, 60 Зо, 70 95, 80 Зо, 90 9, 95 95, 99 95, 100 90 або більше.

Зниження пристосовуваності хазяїна може бути визначене порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

Термін "комаха" включає будь-який організм, що належить до типу Агіпгорода та класу

Іпзесіа або класу Агасппіда, на будь-якій стадії розвитку, тобто статевонезрілих та дорослих комах.

Використовуваний у даному документі термін "лізин", також відомий як ендолізин, аутолізин, муреїнгідролаза, пептидоглікангідролаза або гідролаза клітинної стінки, стосується гідролітичного ферменту, який може лізувати бактерії за допомогою розщеплення пептидоглікану в клітинній стінці бактерії. Лізини, передбачені в даному документі, включають без обмеження лізини, що зустрічаються в природі, такі як лізині, що продукуються фагами, лізини, що продукуються бактеріями, та їх похідні, такі як сконструйовані лізини, лізини, що рекомбінантно експресуються, та лізини, одержані за допомогою хімічного синтезу.

Функціонально активний варіант бактеріоцину може бути на щонайменше 70 95, 71 о, 72 9, 7З ов, 7495, 7590, 7690, 77 Чо, 78 90, 79 У, 80 9, 81 в, 82 Ус, 83 У, 84 Ус, 85 У, 86 Ус, 87 У, 88 9, 89 Фо, 90 95, 91 Фо, 92 95, 93 о, 94 90, 95 90, 96 У, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності синтетичного, рекомбінантного бактеріоцину або бактеріоцину, що зустрічається в природі, у тому числі будь-якого описаного в даному документі.

Використовуваний у даному документі термін "мікроорганізм" стосується бактерій або грибів. Мікроорганізми можуть відноситись до мікроорганізмів, що живуть в організмі-хазяїні (наприклад, ендогенних мікроорганізмів, ендосимбіотичних мікроорганізмів (наприклад, первинних або вторинних ендосимбіонтів)), або мікроорганізмів, екзогенних для хазяїна, у тому числі мікроорганізмів, які можуть виступати як модулювальні засоби. Використовуваний у даному документі термін "цільовий мікроорганізм" стосується мікроорганізму, який живе в організмі хазяїна та піддається впливу модулювального засобу прямо або опосередковано.

Використовуваний у даному документі термін "засіб" або "модулювальний засіб" стосується засобу, який здатний змінювати рівні та/або функціонування мікроорганізмів, що живуть в бо організмі-хазяїні (наприклад, комасі, наприклад комарі, іксодовому кліщі, мікроскопічному кліщі, б воші), та тим самим модулювати (наприклад, знижувати) пристосовуваність організму-хазяїна (наприклад, комахи, наприклад комара, іксодового кліща, мікроскопічного кліща, воші).

Використовуваний у даному документі термін "пестицид" або "пестицидний засіб" стосується речовини, яку можна застосовувати для контролю шкідників, значущих для сільського господарства, навколишнього середовища або домашнього господарства/побуту, таких як комахи, гриби, бактерії або віруси. Термін "пестицид" розуміють як такий, що охоплює інсектициди, що зустрічаються в природі, або синтетичні інсектициди (ларвіциди та адультициди), регулятори росту комах, акарициди (майтициди), нематоциди, ектопаразитициди, бактерициди, фунгіциди або гербіциди (речовини, які можна застосовувати в сільському господарстві для контролю або модифікації росту рослин). Додаткові приклади пестицидів або пестицидних засобів наведено в таблиці 12. У деяких випадках пестицид являє собою алелохімікат. Використовуваний у даному документі термін "алелохімікат" або "алелохімічний засіб" означає речовину, яка продукується організмом, що може впливати на фізіологічну функцію (наприклад, зародження, ріст, виживаність або розмноження) іншого організму (наприклад, комахи-хазяїна, наприклад комара).

Використовуваний у даному документі термін "пептид", "білок" або "поліпептид" охоплює будь-який ланцюг з амінокислот, що зустрічаються в природі або не зустрічаються в природі (як р-, так і С-амінокислот), незалежно від довжини (наприклад, щонайменше 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 40, 50, 100 або більше амінокислот), наявності або відсутності посттрансляційних модифікацій (наприклад, глікозилювання або фосфорилювання) або наявності, наприклад, однієї або декількох груп, що не є аміноацильними (наприклад, вуглеводних, ліпідних тощо), ковалентно зв'язаних із пептидом, і включає, наприклад, білки, що зустрічаються в природі, синтетичні або рекомбінантні поліпептиди та пептиди, гібридні молекули, пептоїди або пептидоміметики.

Як використовується в даному документі, "відсоток ідентичності" між двома послідовностями визначають за допомогою алгоритму ВІ А5Т 2.0, який описаний в АйвбБспиЇї еї а!., (1990) 9. Мої.

ВіоІ. 215:403-410. Програмне забезпечення для проведення аналізів ВІ А5Т загальнодоступно завдяки Національному центру біотехнологічної інформації.

Використовуваний у даному документі термін "бактеріофаг" або "фаг" стосується вірусу,

Зо який інфікує бактерії та реплікується в них. Бактеріофаги реплікуються в бактеріях після введення їхнього геному в цитоплазму та здійснюють це за допомогою літичного циклу, який приводить до лізису бактеріальної клітини, або лізогенного (що не є літичним) циклу, за якого бактеріальна клітина залишається інтактною. Фаг може являти собою ізолят фага, що зустрічається в природі, або сконструйований фаг, у тому числі вектори або нуклеїнові кислоти, які кодують частковий геном фага (наприклад, у тому числі щонайменше всі найважливіші гени, необхідні для здійснення життєвого циклу фага в бактерії-хазяїні) або повний геном фага.

Використовуваний у даному документі термін "рослина" відноситься до цілих рослин, органів рослин, рослинних тканин, рослинних клітин, насіння та їхнього потомства. Рослинні клітини включають без обмеження клітини з насіння, суспензійних культур, зародків, ділянок меристеми, калюсної тканини, листя, коренів, пагонів, гаметофітів, спорофітів, пилку й мікроспор. Частини рослин передбачають диференційовані та недиференційовані тканини, у тому числі без обмеження: коріння, стебла, пагони, листя, пилок, насіння, пухлинну тканину й різні форми клітин і культури (наприклад, окремі клітини, протопласти, зародки та калюсну тканину). Рослинна тканина може знаходитись в рослині або в органі, тканині або культурі клітин рослини. Крім того, рослина може бути генетично сконструйованою таким чином, що в ній продукується гетерологічний білок або РНК, наприклад будь-якого із модулювальних засобів у способах і композиціях, описаних у даному документі.

Використовуваний у даному документі термін "переносник" стосується комахи, яка може передавати або переносити патоген людини з резервуара людині. Ілюстративні переносники включають комах, таких як комахи з колючо-сисними ротовими апаратами, які зустрічаються в

Нептірієга і деяких Нутепоріеєга і Оірієега, таких як комарі, бджоли, оси, галиці, воші, муха цеце, блохи й мурахи, а також представників Агасппідає, таких як іксодові кліщі й мікроскопічні кліщі.

Інші характеристики й переваги даного винаходу будуть очевидні з наступного докладного опису й формули винаходу.

СТИСЛИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

Фігури передбачено для ілюстрації одного або декількох з характеристик, аспектів або варіантів здійснення даного винаходу, і вони не передбачаються як обмежувальні.

На фіг. 1А-10 показані зображення різних систем доставки антибіотиків. Попелиць І 5К-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли різними терапевтичними розчинами шляхом бо доставки через рослини (фіг. 1А), покриття листя (фіг. 18), мікроїін'єкції (фіг. 1С), місцевої доставки (фіг. 10), перфузії в листя та розрізання листя (фіг. 1Е), перфузії в листя та через рослину (фіг. 1Е) та комбінованої обробки за допомогою розпилення як на рослину, так і на попелицю та доставки через рослину (фіг. 165).

На фіг. 2А-2С показана затримка розвитку попелиць за обробки рифампіцином у попелиць

Ї5В8-1 на стадії першого періоду розвитку, оброблених шляхом доставки через рослини з використанням трьох різних умов: штучного раціону без незамінних амінокислот (тільки АБ), штучного раціону без незамінних амінокислот зі 100 мкг/мл рифампіцину (АЮ ж рифампіцин) і штучного раціону зі 100 мкг/мл рифампіцину й незамінними амінокислотами (А ж рифампіцин 5

ЕАА). На фіг. 2А представлена серія графіків, на яких показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 33 попелиці/група). На фіг. 28 показані ілюстративні зображення після кожної обробки, отримані через 12 днів. Масштабні мітки відповідають 2,5 мм.

На фіг. 2С показані виміри площі тіл попелиць, що демонструють істотний ефект обробки рифампіцином. Додавання незамінних амінокислот назад частково усувало дефекти розвитку.

На фіг З показано, що обробка рифампіцином приводила до загибелі попелиць.

Виживаність відстежували щодня у випадку попелиць ЇЗК-1, оброблених шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (тільки АБ), штучного раціону без незамінних амінокислот зі 100 мкг/мл рифампіцину (АЮ т рифампіцин) та штучного раціону зі 100 мкг/мл рифампіцину та (АО т рифампіцин ж ЕАА). Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі. Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію й визначали наступні статистично значущі відмінності: тільки АО порівняно з АЮ ж рифампіцин, р«е0,0001 і АО я рифампіцин порівняно з АЮ ж рифампіцин ж ЕАА, р-0,017.

На фіг. 4 представлений графік, на якому показано, що обробка рифампіцином приводила до втрати здатності до розмноження у попелиць. Попелиць Г5К-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (тільки АБ), штучного раціону без незамінних амінокислот зі 100 мкг/мл рифампіцину (АЮ ж- рифампіцин) і штучного раціону зі 100 мкг/мл рифампіцину й (АО їх рифампіцин ї ЕАА) і вимірювали число потомків, що з'являлися в кожен день після того, як попелиці досягали зрілого віку. Показане середнє число потомків, що утворюються за день ж

З.0О. після того, як попелиці досягали зрілого віку.

Зо На фіг. 5 представлений графік, на якому показано, що обробка рифампіцином приводила до усунення ендосимбіотичних Висппега. Титр симбіонтів визначали для різних умов через 7 днів після обробки. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей

ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показане середнє співвідношення кількостей

ДНК Висппега і ДНК попелиць х 50 для З попелиць на групу. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі; 7, р«е0,05.

На фіг. б6А і 6В показано, що обробка рифампіцином, що доставляються за допомогою покриття листя, приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць емА5СО на стадії першого періоду розвитку обробляли шляхом покриття листів 100 мкл двох різних розчинів: контрольного розчинника (0,02595 Бімуеї 1-77) і 50 мкг/мл рифампіцину. На фіг. бА представлена серія графіків, на яких показана динаміка стадій розвитку для кожної умови.

Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 20 попелиць/група). На фіг. 6В представлений графік, на якому показані виміри площі тіл попелиць, що демонструють істотний вплив листя, покритого рифампіцином, відносно розміру попелиць. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі; "7, р«е0,05.

На фіг. 7 показано, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою покриття листя, приводила до загибелі попелиць. Виживаність відстежували щодня у випадку попелиць еМмАБЗСО, оброблених шляхом покриття листів 100 мкл двох різних розчинів: контрольного розчинника (Зім'еї І-77) ії 50 мкг/мл рифампіцину. Обробка негативно впливала на показник виживаності попелиць.

На фіг. 8 показано, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою покриття листя, приводила до усунення ендосимбіотичних Висппега. Титр симбіонтів визначали для двох умов через б днів після обробки. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць х 50. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі; 7, р«е0,05.

На фіг. 9 представлений графік, на якому показано, що обробка рифампіцином шляхом бо мікроін'єкції приводила до усунення ендосимбіотичних Висппега. Титр симбіонтів визначали через 4 дні після ін'єкції за вказаних умов. Контрольний зразок являв собою розчинник, 0,025 95

Зімеї І-77, описаний вище. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць х 50. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі; ",р-0,05.

На фіг. 10 представлений графік, на якому показано, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою місцевого застосування, приводила до усунення ендосимбіотичних Висппега. Титр симбіонтів визначали через З дні після розпилення розчинника (Зіїмеї І-77) або розчину рифампіцину, розведеного в розчиннику. Екстрагували

ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць 5

ЗО. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі; "7, р«е0,05.

На фіг. 11 представлена панель графіків, на яких показано, що попелиць І 5К-1 на стадіях 1- го й 2-го періодів розвитку поміщали на листя, піддане перфузії водою з харчовим барвником або 50 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником. Визначали динаміку стадій розвитку для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 74-81 попелиця/група).

На фіг. 12 представлений графік, на якому показана виживаність попелиць І 5В-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку, поміщених на листя, піддане перфузії водою з харчовим барвником або 50 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію.

На фіг. 13 представлений графік, на якому показаний титр симбіонтів, визначений через 8 днів після обробки листів, підданих перфузії водою з харчовим барвником або рифампіцином з водою та харчовим барвником. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць ж 50. Число в прямокутнику позначає медіану для

Зо експериментальної групи.

На фіг. 14 представлена панель графіків, на яких показано, що попелиць І 5К-1 на стадіях 1- го й 2-го періодів розвитку обробляли за допомогою ін'єкції в листя й через рослину з використанням води з харчовим барвником або 100 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником. Визначали динаміку стадій розвитку для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 49-50 попелиць/група).

На фіг. 15 представлений графік, на якому показана виживаність попелиць І ЗК-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку, поміщених на листя, піддане перфузії та обробці водою з харчовим барвником або 100 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі. Розраховували логарифмічний ранговий критерій і визначали, що статистично значущі відмінності між групами були відсутні.

На фіг. 16А і 168 представлені графіки, на яких показаний титр симбіонтів, визначений через б (16А) ії 8 (16В) днів після обробки у попелиць, яких вигодовують на листі, який піддавали перфузії та обробці водою й харчовим барвником або рифампіцином з водою й харчовим барвником. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК

Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК

Висппега і ДНК попелиць х 50. Число в прямокутнику позначає медіану для експериментальної групи.

На фіг. 17 представлена панель графіків, на яких показано, що попелиць І 5К-1 на стадіях 1- го й 2-го періодів розвитку обробляли контрольними розчинами (водою й 5іМм/еї І-77) або комбінацією типів обробки зі 100 мкг/мл рифампіцину. Визначали динаміку стадій розвитку для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 76-80 попелиць/група).

На фіг. 18 представлений графік, на якому показано, що попелиць І 5К-1 на стадіях 1-го та 2-го періодів розвитку обробляли контрольними розчинами або комбінацією засобів обробки, що передбачають рифампіцин. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі.

Розраховували логарифмічний ранговий критерій і визначали, що статистично значущі відмінності між групами були відсутні.

На фіг. 19 представлений графік, на якому показаний титр симбіонтів, визначений через 7 днів після обробки контрольними розчинами або розчинами рифампіцину. Екстрагували ДНК із 60 попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили

ЯРСК. Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць х 50. Число в прямокутнику позначає медіану для експериментальної групи. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою і-критерію.

На фіг. 20 представлене зображення, на якому показана система доставки хітозану.

Попелиць А. різит обробляли терапевтичним розчином шляхом доставки через перфузію в листя й через рослини, як показано.

На фіг. 21 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка хітозаном приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. рівит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини й перфузію в листя контрольного розчину (вода), а також 300 мкг/мл хітозану у воді. Стадії розвитку відстежували в ході всього експерименту. Показаний відсоток попелиць на кожній стадії розвитку (1-й період розвитку, 2-й період розвитку, 3-й період розвитку, 4-й період розвитку, 5-й період розвитку або 5К, що позначає 5-й період розвитку, здатний до розмноження) на групу обробки.

На фіг. 22 представлений графік, на якому показано зниження виживаності комах за обробки хітозаном. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини й перфузію в листя тільки води або розчину хітозану й виживаність відстежували щодня протягом експерименту. Число в дужках позначає загальне число попелиць у групі обробки.

На фіг. 23 представлений графік, на якому показано, що обробка хітозаном приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини й перфузію в листя води або 300 мкг/мл хітозану у воді. Через 8 днів після обробки екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили аРСК.

Показано середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць ж 50 для 6 попелиць/група. Медіанне значення для кожної групи показане в прямокутнику.

На фіг. 24 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка нізином приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. різит І 5К-2 на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 1,6 або 7 мг/мл нізину шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину й визначали динаміку розвитку. Показаний відсоток попелиць на кожній стадії життєвого циклу (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (здатний до розмноження 5-й) період розвитку) в указаний момент часу. М-56-59 попелиць/група.

На фіг. 25 представлений графік, на якому показане дозозалежне зниження виживаності комах за обробки нізином. Попелиць А. рівит І 5-1 на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 1,6 або 7 мг/мл нізину шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину й виживаність відстежували в динаміці. Число в дужках позначає число попелиць/група. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Кокса-Мантеля).

На фіг. 26 представлений графік, на якому показано, що обробка нізином приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 1,6 мг/мл нізину шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину, і екстрагували ДНК з вибраних попелиць через вісім днів після обробки, і використовували в ОДРСК для визначення числа копій Висппега. Показані середні співвідношення Висппега/попелиця для кожної обробки -7/- 5ЕМ. Число в прямокутнику над кожною експериментальною групою позначає медіанне значення для цієї групи. Кожна точка даних позначає одну попелицю.

На фіг. 27 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка левуліновою кислотою приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. різит еЄеМАЗСО на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 0,03 або 0,395 левулінової кислоти шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину й визначали динаміку розвитку. Показаний відсоток попелиць на кожній стадії життєвого циклу (1- го, 2-го, 3-го, 4-го й 5-го періодів розвитку) у зазначений момент часу. М-57-59 попелиць/група.

На фіг. 28 представлений графік, на якому показано зниження виживаності комах за обробки левуліновою кислотою. Попелиць А. різит еМАБСО на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 0,03 або 0,3 95 левулінової кислоти шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину й виживаність відстежували в динаміці. М-57-59 попелиць/група. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Кокса-Мантеля); 7", р«е0,01.

На фіг. 29 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка левуліновою кислотою приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. різит 60 емМмА5СО на стадіях першого та другого періодів розвитку обробляли водою (контроль) або 0,03 або 0,3 95 левулінової кислоти шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя та через рослину й екстрагували ДНК з вибраних попелиць через сім та одинадцять днів після обробки та використовували в 4РСК для визначення числа копій Висппега. Показані середні співвідношення Висппега/лопелиця для кожної обробки -/- ЗЕМ. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою однофакторного АМОМА та критерію множинних порівнянь

Даннетта; "7, р«е0,05. Кожна точка даних позначає одну попелицю.

На фіг. З0А і ЗОВ представлені графіки, на яких показано, що обробка госиполом приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (тільки АЮ) і штучного раціону без незамінних амінокислот з різними концентраціями госиполу (0,05 бо, 0,25 90 і 0,5 95). Стадії розвитку відстежували в ході всього експерименту. На фіг. ЗОА представлена серія графіків, на яких показано середнє число попелиць на кожній стадії розвитку (1-й період розвитку, 2-й період розвитку, 3-й період розвитку, 4-й період розвитку, 5-й період розвитку або 5Е, що позначає 5-й період розвитку, здатний до розмноження) на групу обробки. У зазначений час попелиць візуалізували та їхній розмір визначали з використанням Ітаде У. На фіг. ЗОВ представлений графік, на якому показана середня площа попелиць ї- ЗО для попелиць, оброблених штучним раціоном (контроль) або оброблених госиполом. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного АМОМА з наступним застосуванням апостеріорного критерію Тьюкі. ", р«е0,05. т, р«0,01.

На фіг. 31 представлений графік, на якому показано дозозалежне зниження виживаності попелиць за обробки алелохімікатом госиполом. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періоду розвитку обробляли шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (АО без ЕАА), штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,5 95 госиполоцтової кислоти (0,5 95 госиполу), штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,25 95 госиполоцтової кислоти (0,25 95 госиполу) і штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,05 96 госиполоцтової кислоти (0,05 9о госиполу) і виживаність відстежували щодня протягом експерименту. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі застосування середовища без незамінних амінокислот. Статистично значущі відмінності визначали за

Зо допомогою логарифмічного рангового критерію, і групи АЮ без ЕАА і 0,595 госиполу статистично значуще різняться, р--0,0002.

На фіг. 32А і 328 представлено два графіки, на яких показано, що обробка 0,25 95 госиполу приводила до зниження плідності. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли за допомогою доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (А0О5-2 без ЕАА) або штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,25 95 госиполоцтової кислоти (АЮ5-2 без ЕААчО,25 95 госиполу) і плідність визначали протягом усього експерименту. На фіг. 32А показано, що визначали середній день ї- 50, на який попелиці починають давати потомство, і обробка госиполом приводила до затримки утворення потомства. На фіг. 32В показано, що визначали середнє число потомків ж 50, утворених після того, як попелиця ставала дорослою статевозрілою особиною, і обробка госиполом приводила до зниження числа утворюваних потомків. Кожна точка даних позначає одну попелицю.

На фіг. 33 представлений графік, на якому показано, що обробка госиполом у різних концентраціях приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот (контроль) або штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,5 95, 0,25 95 і 0,05 95 госиполу. Через 5 або 13 днів після обробки екстрагували

ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показане середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць 5

ЗО для 2-6 попелиць/група. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою непарного і-критерію; "7, р«е0,05.

На фіг. 34 представлений графік, на якому показано, що мікроін'єкція госиполу приводила до зниження рівнів Висппега у попелиць. Попелицям А. різвит І! 5К-1 на стадії « 3-го періоду розвитку (німфи) ін'єктгували 20 нл штучного раціону без незамінних амінокислот (АЮ) або штучного раціону без незамінних амінокислот з 0,05 95 госиполу (госипол (0,05 95)). Через три дні після ін'єкції екстрагували ДНК з попелиць і рівні Висппега визначали за допомогою ДРСК.

Показані середні співвідношення ДНК Висппега/попелиця їх 50. Кожна точка даних позначає одну попелицю.

На фіг. 35 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка транс-коричним альдегідом приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. різит на стадіях першого й 60 другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини води й води з різними концентраціями трансо-коричного альдегіду (ТС, 0,0595, 0,590 і 5590). Стадії розвитку відстежували в ході всього експерименту. Показане середнє число попелиць на кожній стадії розвитку (1-й період розвитку, 2-й період розвитку, 3-й період розвитку, 4-й період розвитку, 5-й періоду розвитку або 5К, що позначає 5-й період розвитку, здатний до розмноження) на групу обробки. М-40-49 попелиць/експериментальна група.

На фіг. 36 представлений графік, на якому показано, що мало місце дозозалежне зниження виживаності за обробки природним протимікробним засобом трансо-коричним альдегідом.

Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини води й води з різними концентраціями транс-коричного альдегіду (ТС, 0,05 Об, 0,5 95 і 5 95). Виживаність відстежували протягом усієї обробки. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію. М-40-49 попелиць/група.

На фіг. 37 представлений графік, на якому показано, що обробка транс-коричним альдегідом у різних концентраціях приводила до зниження кількості ендосимбіотичних

Висппега. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини води й води з різними концентраціями трансо-коричного альдегіду (0,05 оо, 0,5 95 і 5 95). Через З дні після обробки екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показане середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць ж 5О для 2-11 попелиць/група.

Медіана для кожної групи обробки показана в прямокутнику над точками даних. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою непарного і-критерію; "7, р«0,05. Мала місце статистично значуща відмінність між групою контролю з водою й 0,595 транс-коричного альдегіду.

На фіг. 38 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка пептидом скорпіона,

ПОу192, приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць А. різит на стадіях першого та другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини та перфузію в листя контрольного розчину (вода), а також 100 мкг/мл Оу192 у воді. а) Стадію розвитку відстежували під час усього експерименту. Показаний відсоток попелиць на кожній стадії розвитку (1-й період розвитку, 2-й період розвитку, 3-й період розвитку, 4-й період розвитку, 5-й період розвитку або

БЕ, що позначає 5-й період розвитку, здатний до розмноження) на групу обробки.

Зо На фіг. 39 представлений графік, на якому показано зниження виживаності комах за обробки за допомогою АМР скорпіона, Оу192. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини й перфузію в листя тільки води або розчину Оу192 і виживаність відстежували щодня протягом експерименту. Число в дужках позначає загальне число попелиць у групі обробки.

На фіг. 40 представлений графік, на якому показано, що обробка за допомогою Оу192 приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. різит на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини й перфузію в листя води або 100 мкг/мл Оу192 у воді, через 8 днів після обробки екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили

ЯРСК. Показане середнє співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць хз 50 для 2-6 попелиць/група. Медіанне значення для кожної групи показане в прямокутнику.

На фіг. 41 представлений графік, на якому показано зниження виживаності попелиць, яким уводили мікроін'єкцію пептидів скорпіона, 010 ї 03. Попелицям А. різит Ї5К-1 уводили мікроін'єкцію води (контроль) або 100 нг пептиду скорпіона, ОЗ або 010. Після ін'єкції попелиць випускали на листя кінських бобів і виживаність відстежували протягом усього експерименту.

Число в дужках позначає число попелиць у кожній експериментальній групі обробки.

На фіг. 42 представлений графік, на якому показано зниження титрів ендосимбіонтів за ін'єкції пептидів скорпіона, ОЗ ї 010. Попелицям А. різвит І 5К-1 уводили мікроін'єкцію води (контроль) або 100 нг пептиду скорпіона, ОЗ або 010. Після ін'єкції попелиць випускали на листя кінських бобів і через 5 днів після обробки екстрагували ДНК з попелиць, що залишилися живими, і для визначення співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця проводили ЯРСЕ.

Показане середнє значення ж 50 для кожної групи обробки. М-2-9 попелиць/група. Число над кожною групою обробки в прямокутнику позначає медіану для сукупності даних.

На фіг. 43 представлений графік, на якому показано зниження виживаності комах за обробки сумішшю з АМР скорпіона. Попелиць еМмА5СО на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через перфузію в листя й через рослини суміші пептидів скорпіона (40 мкг/мл будь-якого з ПОу1!7, 03, ПОусіЗ і 010) ії виживаність відстежували протягом експерименту. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі обробки.

На фіг. 44 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка пептидом скорпіона, 60 злитим із пептидом, що проникає у клітину, викликала затримку розвитку попелиць. Попелиць А.

рівит І 58-2 на стадії першого періоду розвитку обробляли водою (контроль) або 100 мкг/мл

Оу19214СРРАБАМ шляхом доставки за допомогою ін'єкції в листя й через рослину й визначали динаміку розвитку. Показаний відсоток попелиць на кожній стадії життєвого циклу (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (здатний до розмноження 5-й) період розвитку) в указаний момент часу. М-90 попелиць/група.

На фіг. 45 представлений графік, на якому показано, що обробка попелиць пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, підвищувала смертність. Попелиць А. рівит 158-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли водою або 100 мкг/мл

ОУ1922СРРАБАМ (пептид) у воді, що доставляються шляхом ін'єкції в листя й через рослину.

Виживаність відстежували в динаміці Число в дужках позначає число попелиць/група.

Статистично значущі відмінності визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Кокса-Мантеля), і мала місце статистично значуща відмінність між двома експериментальними групами (р-0,0036).

На фіг 46 представлений графік, на якому показано, що обробка за допомогою

Оу19214СРРАБАМ приводила до зниження кількості ендосимбіотичних Висппега. Попелиць А. рівит 158-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли водою або 100 мкг/мл

Оу19214СРРАБАМ (пептид) у воді, що доставляються шляхом ін'єкції в листя й через рослину.

Екстрагували ДНК з вибраних попелиць через п'ять днів після обробки й використовували в

ЯРСК для визначення числа копій Висппега. Показані середні співвідношення

Висппега/лопелиця для кожної обробки /- ЗЕМ. Число в прямокутнику над кожною експериментальною групою позначає медіанне значення для цієї групи. Кожна точка даних позначає одну попелицю. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою і-критерію

Стьюдента; 7, р«0,0001.

На фіг. 47 представлена панель зображень, на яких показано, що Оу192-СРРАБАМ проникали через мембрани бактеріоцитів. Бактеріоцити витягали з попелиць та інкубували з 250 мкг/мл пептиду Оу192-4СРРАБАМ протягом 30 хв. Після промивання та візуалізації

Оу1924СРРАБАМ можна спостерігати у великих кількостях всередині бактеріоцитів.

На фіг. 48А та фіг. 488 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка пантотенолом приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць еМмА5СО на стадіях

Зо першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини з використанням трьох різних умов: штучного раціону без незамінних амінокислот (АО без ЕАА), штучного раціону без незамінних амінокислот з 10 мкМ пантотенолу (10 мкМ пантотенолу) і штучного раціону без незамінних амінокислот зі 100 мкМ пантотенолу (100 мкМ пантотенолу), штучного раціону без незамінних амінокислот зі 100 мкМ пантотенолу й штучного раціону без незамінних амінокислот з 10 мкМ пантотенолу. На фіг. 48А показані стадії розвитку, динаміка яких відстежується для кожної умови. На фіг. 488 представлені виміри відносної площі тіл попелиць, що демонструють істотний ефект обробки пантотенолом.

На фіг. 49 представлений графік, на якому показано, що обробка пантотенолом приводила до підвищення смертності попелиць. Виживаність відстежували щодня у випадку попелиць еМмАБСО, оброблених шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот або штучного раціону без незамінних амінокислот, що містить 10 або 100 мкм пантотенолу. Число в дужках позначає число попелиць у кожній групі.

На фіг. 50А, 50 і 50С представлена панель графіків, на яких показано, що обробка пантотенолом приводила до втрати здатності до розмноження. Попелиць емАзСО на стадіях першого й другого періодів розвитку обробляли шляхом доставки через рослини штучного раціону без незамінних амінокислот або штучного раціону без незамінних амінокислот з 10 або 100 мкМ пантотенолу. На фіг. 50А показана частка попелиць, що дожили до зрілого віку й появи здатності до розмноження. На фіг. 50В показаний середній день, у який попелиці в кожній групі починали розмножуватися. Показаний середній день ж 50, у який попелиці починали розмножуватися. На фіг. 50С показане середнє число потомків, що з'являються за день, після того, як попелиця починала розмножуватися. Показане середнє число потомків/день ж 50.

На фіг. 51 представлений графік, на якому показано, що обробка пантотенолом не впливала негативно на ендосимбіотичні Висппега. Титр симбіонтів визначали для різних умов через 8 днів після обробки. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК

Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показане середнє співвідношення кількостей ДНК

Висппега і ДНК попелиць х 50 для 6 попелиць на групу.

На фіг. 52 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка пантотенолом, що доставляються через рослини, не впливала негативно на розвиток попелиць. Попелиць еМАЗСО на стадії першого періоду розвитку обробляли шляхом покриття листя 100 мкл двох бо різних розчинів: контрольного розчинника (0,025 95 бімеї 1-77) і 10 мкМ пантотенолу, і визначали динаміку стадій розвитку для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку (розмір вибірки - 20 попелиць/група).

На фіг. 53 представлений графік, на якому показано, що обробка пантотенолом, що доставляється за допомогою покриття листя, приводила до загибелі попелиць. Виживаність відстежували щодня у випадку попелиць емАЗСО, оброблених шляхом покриття листів 100 мкл двох різних розчинів: контрольного розчинника (Зіїм'єї І-77) і 10 мкМ пантотенолу. Обробка негативно впливала на показник виживаності попелиць. Розмір вибірки - 20 попелиць/група.

Логарифмічний ранговий критерій Кокса-Мантеля використовували для визначення наявності статистично значущих відмінностей між групами й виявлення того, що дві групи статистично значуще відрізняються (р-0,0019).

На фіг. 54А і 548 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка сумішшю аналогів амінокислот приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць І 5К-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли шляхом доставки через перфузію в листя й через рослини води або суміші аналогів амінокислот у воді (суміші АА). На фіг. 54А показані стадії розвитку, динаміка яких визначається для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку. На фіг. 54В показані виміри площі тіл попелиць, що демонструють істотний ефект обробки сумішшю аналогів амінокислот (сумішшю АА). Статистично значущі відмінності визначали за допомогою І-критерію Стьюдента; 7, р«0,0001.

На фіг. 55 представлений графік, на якому показано, що обробка сумішшю аналогів амінокислот приводила до усунення ендосимбіотичних Висппега. Титр симбіонтів визначали для різних умов через 6 днів після обробки. Екстрагували ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показані середні співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць хх 5О для 19-20 попелиць на групу.

Кожна точка даних позначає окрему попелицю. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою І-критерію Стьюдента; "7, р«е0,05.

На фіг. 56А і 568 представлена панель графіків, на яких показано, що обробка комбінацією з трьох засобів приводила до затримки розвитку попелиць. Попелиць І 5-1 на стадії першого періоду розвитку обробляли шляхом доставки через перфузію в листя й через рослини води або комбінації з трьох засобів у воді (пептид-рифампіцин-хітозан). На фіг. 56А показані стадії

Зо розвитку, визначені у динаміці для кожної умови. Показаний відсоток живих попелиць на кожній стадії розвитку. На фіг. 56В показані виміри площі тіл попелиць, що демонструють істотний ефект обробки комбінацією з трьох засобів обробки (пептид-рифампіцин-хітозан). Статистично значущі відмінності визначали за допомогою І-критерію Стьюдента; 7», р«0,0001.

На фіг. 57 представлений графік, на якому показано, що обробка комбінацією з пептиду, антибіотика й природного протимікробного засобу приводила до підвищення смертності попелиць. Попелиць І 5К-1 обробляли водою або комбінацією з трьох засобів обробки (пептид- рифампіцин-хітозан) і після обробки щодня відстежували виживаність.

На фіг. 58 представлений графік, на якому показано, що обробка комбінацією з пептиду, антибіотика й природного протимікробного засобу приводила до усунення ендосимбіотичних

Висппега. Титр симбіонтів визначали для різних умов через 6 днів після обробки. Екстрагували

ДНК із попелиць і для визначення співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць проводили ДРСК. Показані середні співвідношення кількостей ДНК Висппега і ДНК попелиць 5

ЗО для 20-21 попелиці на групу. Кожна точка даних позначає окрему попелицю.

На фіг. 59А їі 598 представлена панель зображень, на яких показані зерна кукурудзи, які були покриті ципрофлоксацином і в які проникнув ципрофлоксацин. Зерна кукурудзи замочували у воді (без антибіотика) або указаній концентрації ципрофлоксацину у воді, і цілі зерна або зерно досліджували з метою виявлення того, чи можуть вони інгібувати ріст ОН5ба Е. соїї. На фіг. 59А показаний ріст бактерій у присутності зерна кукурудзи, замоченого у воді без антибіотиків, а на фіг. 598 показане інгібування росту бактерій у випадку, якщо цілі зерна або половинки зерен кукурудзи, які замочували в антибіотиках, поміщали на чашку, по якій була розподілена Е. соїї.

На фіг. 60 представлений графік, на якому показано, що зрілих довгоносиків 5. 7еатаїі5 обробляли ципрофлоксацином (250 мкг/мл або 2,5 мг/мл) або піддавали уявній обробці водою.

Через 18 днів після обробки геномну ДНК виділяли з довгоносиків і кількість первинного ендосимбіонту 5іорпійи5 визначали за допомогою ДРСК. Показане середнє значення ж 5ЕМ для кожної групи. Кожна точка даних позначає одного довгоносика. Медіана для кожної групи вказана над сукупністю даних.

На фіг. 61А ії 61В представлені графіки, на яких показаний розвиток довгоносиків після обробки ципрофлоксацином. На фіг. 61А показані окремі зерна кукурудзи, розкриті через 25 днів бо після того, як зрілі особини були видалені, з однієї повторності кожної із груп вихідних зерен кукурудзи, замочених/покритих водою (контроль) або ципрофлоксацином (250 мкг/мл або 2,5 мг/мл) і досліджені на наявність личинок, лялечок або майже повністю розвинених (зрілих) довгоносиків. Показана процентна частка кожної стадії життєвого циклу, виявлена в зернах з кожної групи обробки. Загальне число потомків, виявлених у зернах з кожної групи обробки, указане над кожною сукупністю даних. На фіг. 618 показана геномна ДНК, виділена з потомків, видалених із зерен кукурудзи з контрольної групи (вода) і групи обробки 2,5 мг/мл ципрофлоксацину; для вимірювання кількості присутнього первинного ендосимбіонту ЗНКОрпйи5 проводили ЗФРСК. Показане середнє значення їх 50 для кожної групи. Статистично значущі відмінності визначали за допомогою непарного І-критерію; 7, р«е0,001.

На фіг. 62А і 628 представлені графіки, на яких показано дві повторності зерен кукурудзи, що залишилися, підданих уявній обробці (вода) або оброблених 250 мкг/мл або 2,5 мг/мл ципрофлоксацину, у яких відстежували появу потомства після того як пари, що спаровуються, були видалені (через 7 днів після обробки). На фіг. 62А показане середнє число ж 50 довгоносиків, що знову з'явилися, у динаміці для кожної групи обробки. На фіг. 628 показане середнє число х ЗЕМ довгоносиків, що з'явилися, для кожної групи обробки через 43 дні після того пари, що спаровуються, були видалені.

На фіг. 63 представлений графік, на якому показано, що обробка рифампіцином і доксицикліном приводила до смертності мікроскопічних кліщів. Виживаність відстежували щодня у випадку необроблених двоплямистих павутинних кліщів і мікроскопічних кліщів, оброблених 250 мкг/мл рифампіцину й 500 мкг/мл доксицикліну в 0,025 95 БіЇМеї І -7 7.

На фіг. 64 представлена панель графіків, на яких показані результати аналізу позаклітинного потоку Зеайогзе щодо дихання бактерій. Бактерії вирощували до логарифмічної фази й завантажували в планшети Зеапогзе ХЕе9б для тимчасових вимірів швидкості споживання кисню (ОСК) і швидкості закислення позаклітинного середовища (ЕСАК), як описано в способах. Засоби обробки ін'єктували в лунки приблизно через 20 хвилин, і бактерії відстежували для виявлення змін росту. Рифампіцин - 100 мкг/мл; хлорамфенікол - 25 мкг/мл; фаги (17 у випадку Е. сої і Ф5ІтМІ -С1 у випадку 5. тагсезсеп5) являли собою лізати, розведені 1:22 або 1:100 у буфері 5М. Оцінки на кожній лінії передбачені винятково як індикатори стану, яким кожна лінія відповідає, і не вказують на точки даних.

Зо На фіг. 65 представлений графік, на якому показано, що фаг до 5. тагсезсеп5 приводив до зниження смертності мух. Усі мухи, яким уводили шляхом проколу 5. тагсевзсеп5, гинули протягом дня, у той час як значна частина мух, яким уводили шляхом проколу як 5. тагсев5сепв, так і фаг, виживали протягом п'яти днів після обробки. Майже всі з контрольних мух, яких ніяк не обробляли, виживали до кінця експерименту. Логарифмічний ранговий критерій використовували для порівняння кривих для визначення статистичної значущості, зірочка позначає р«е0,0001.

ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

У даному документі передбачені способи та композиції, корисні для здоров'я людини, наприклад, для зміни рівня, активності або метаболізму одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в організмі комахи-хазяїна (наприклад, членистоногого, наприклад комахи, наприклад переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, воші або іксодового кліща), при цьому дана зміна викликає зниження пристосовуваності хазяїна. У даному винаході описана композиція, яка містить модулювальний засіб (наприклад, фаг, пептид, малу молекулу, антибіотик або їх комбінації), що може змінювати мікробіоту хазяїна таким чином, що це є згубним для хазяїна. Модулювальний засіб, описаний у даному документі, можна застосовувати для зниження пристосовуваності низки комах, які переносять патогени, що передаються переносниками, які викликають захворювання у людей, за допомогою порушення рівнів мікроорганізмів, активності мікроорганізмів, метаболізму мікроорганізмів або різноманітності мікроорганізмів.

Способи та композиції, описані в даному документі, основані частково на прикладах, передбачених у даному документі, які ілюструють те, як модулювальні засоби, наприклад антибіотики (наприклад, окситетрациклін, доксициклін або їх комбінацію), можна застосовувати для цілеспрямованої дії на симбіотичні мікроорганізми в організмі хазяїна (наприклад, ендосимбіонтів, наприклад ендосимбіонтичну УМоЇраспіа у комарів або КісКейвіа в іксодових кліщів) у комах-переносників патогенів людини для зниження пристосовуваності хазяїна шляхом зміни рівня, активності або метаболізму мікроорганізмів в організмах хазяїв. Окситетрациклін і доксициклін являють собою ілюстративні приклади антибіотиків, придатних для цієї мети. На основі цього в даному розкритті описана низка різних підходів для застосування засобів, які змінюють рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів, що живуть в бо організмі хазяїна (наприклад, переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, воші або іксодового кліща), при цьому зміна викликає зниження пристосовуваності хазяїна.

Ї. Хазяї і. Комахи

Способи та композиції, передбачені в даному документі, можна застосовувати щодо будь- якої комахи-хазяїна, яка вважається переносником патогену, здатного викликати захворювання у людей.

Наприклад, комаха-хазяїн може включати без обмеження комах із колючо-сисними ротовими апаратами, які зустрічаються в Нептіріега і деяких Нутепорієега і Оірієга, таких як комарі, бджоли, оси, галиці, воші, муха цеце, блохи й мурахи, а також представників Агасппідає, таких як іксодові кліщі й мікроскопічні кліщі; у ряді, класі або родині Асагіпа (іксодових кліщів і мікроскопічних кліщів), наприклад у представників родин Агдазідає, Юегтапуззідає, Іходідає,

Рзогорііїдає або Загсоріідає і представників видів Атбріуотта 5рр., Апосепіоп 5рр., Агдав 5рр.,

Воорнпійив5 5рр., Спеуїеїейа 5рр., Спогіорієз зрр., Оетодех 5рр., Оептасепіог 5рр., Оєгтапуз5ив 5рр., Наеторпузаїїв 5рр., Нуаїтта 5рр., Їходе5 5рр., І упхасаги5 5рр., Мезовіїдтаїа 5рр.,

Моїедпеб5 5рр., Огпійодого5 5рр., Огпійопуззиб5 о5рр., Оїоріи5 о5рр., Оіодесіеє5 б5рр.,

Рпешиптопу5зив 5рр., Рзогоріе5 5рр., КПірісерпаі5 5рр., Запсоріе5 5рр. або Тготбісціа 5рр.;

Апорісшига (сисних вошей і пухоїдів), наприклад представників видів Вомісоїа 5рр., Наетаїйоріпив5 5рр., Гіподпаїйив5 5рр., Мепороп 5рр., Редісцшив 5рр., Ретрпіди5 5рр., Рпуїйохега 5рр. або зоІепороїе5 зрр.; Оіріега (мух), наприклад представників видів Аеде5 5рр., Апорпеїе5 5рр.,

Саїїїрпога врр., Спгузотуїа 5рр., Спгузорв 5рр., СосПіотуїа 5рр., Сшех врр., Спціісоїде5 врр.,

Сшціегебга 5рр., Оептайобіа 5рр., Сазіторніш5 5рр., Сіоззіпа 5рр., Наетайрбіа 5рр., Наєтаїйороїа 5рр., Нірробозса 5рр., Нуродетпта з5рр., І исіїа 5рр., І уреговзіа зрр., Меіорнадиз з5рр., Оєвігив в5рр.,

РІпаепісіа 5рр., РпІероїютизвх 5рр., Рпоптіа 5рр., Асагі (збудників свербіжної корости), наприклад

Загсоріідає 5рр., Загсорнада з5рр., бБітийшт в5рр., Зіотохув 5рр., Табапив 5рр., Таппіа 5рр. або

Тірша 5рр.; МаПорпада (пухоїдів), наприклад представників видів батаїйпа 5рр., Реїїсоїа 5рр.,

Неїегодохи5 5рр. або Тгісподесіе5 5рр.; або Зірпопарієга (безкрилих комах), наприклад представників видів Сегафрпуїшв5 5рр., Хепорзуїа 5рр; Сітісідає (справжніх клопів), наприклад представників видів Сітех 5рр., Тійкотіпає 5рр., Кподіпічи5 5рр. або Тгіаюта 5рр.

Зо У деяких випадках комаха являє собою кровосисну комаху із ряду Оірієга (наприклад, підряду Метаїосега, наприклад родини СшїїсіЧає). У деяких випадках комаха належить до підродин Спиісіпає, Согеїйгіпає, Сегаїородопідає або бітиїйає. У деяких випадках комаха належить до Сціех 5рр., Тпеобаїдіа 5рр., Аеде5 5рр., Апорпеїе5 5рр., Аеде5 5рр., Еогсіропіуїа 5рр., Сціісоїде5 5рр. або Неїєа 5рр.

У певних випадках комаха являє собою комара. У певних випадках комаха являє собою іксодового кліща. У певних випадках комаха являє собою мікроскопічного кліща. У певних випадках комаха являє собою пухоїда. і. Пристосовуваність хазяїв

Способи й композиції, передбачені в даному документі, можна застосовувати для зниження пристосовуваності будь-якого з хазяїв, описаних у даному документі. Зниження пристосовуваності може виникати в результаті будь-яких змін у мікроорганізмах, що живуть в організмі хазяїна, при цьому зміни являють собою наслідок уведення модулювального засобу і чинять згубну дію на хазяїна.

У деяких випадках зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді порушення або погіршення фізіологічних процесів хазяїна (наприклад, ослаблення здоров'я або виживаності) внаслідок уведення модулювального засобу. У деяких випадках пристосовуваність організму може бути виміряно за допомогою одного або декількох параметрів, у тому числі без обмеження швидкості розмноження, тривалості життя, рухливості, плідності, маси тіла, швидкості метаболізму або активності або виживаності порівняно з організмом-хазяїном, якому

БО модулювальний засіб не був уведений. Наприклад, способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження загального стану здоров'я хазяїна або для зниження загальної виживаності хазяїна. У деяких випадках зниження виживаності хазяїна становить приблизно 2 95, 5 5, 10 95, 20 95, З0 Зо, 40 90, 50 Зо, 60 Зо, 70 Зо, 80 Зо, 90 Ор, 100 95 або більш ніж 100 95 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виявлюваним у хазяїна, який не отримує модулювальний засіб). У деяких випадках способи і композиції є ефективними для зниження інтенсивності розмноження хазяїна (наприклад, швидкості розмноження) порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках способи і композиції є ефективними для зниження інших фізіологічних параметрів, таких як рухливість, маса тіла, тривалість життя, плідність або швидкість 60 метаболізму, на приблизно 2 95, 595, 1095, 20 95, 30 95, 40 90, 50 90, 6О Зо, 70 90, 80 У, 90 Ор,

100 95 або більш ніж на 100 95 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виявлюваним у хазяїна, який не отримує модулювальний засіб).

У деяких випадках зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді зниження продукування однієї або декількох поживних речовин в організмі хазяїна (наприклад, вітамінів, вуглеводів, амінокислот або поліпептидів). У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження продукування поживних речовин в організмі хазяїна (наприклад, вітамінів, вуглеводів, амінокислот або поліпептидів) на приблизно 2 95, 595, 10 95, 20 95, З0 Зо, 40 95, 50 95, 6095, 70 95, 80 Зо, 90 Ор, 100 95 або більш ніж на 100 95 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виивлюваним у хазяїна, який не отримує модулювальний засіб). У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть знижувати вміст поживних речовин в організмі хазяїна шляхом зниження продукування поживних речовин одним або декількома мікроорганізмами (наприклад, ендосимбіонтами) в організмі хазяїна порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді підвищення чутливості хазяїна до пестицидного засобу (наприклад, пестициду, наведеного в таблиці 12) та/або зниження стійкості хазяїна до пестицидного засобу (наприклад, пестициду, наведеного в таблиці 12) порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для підвищення чутливості хазяїна до пестицидного засобу (наприклад, пестициду, наведеного в таблиці 12) на приблизно 2 95, 595, 1095, 2095, З0 Зо, 40 95, 50 Об, боб, 7095, 8095, 9095, 100 95 або більш ніж на 10095 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виявлюваним у хазяїна, який не отримує модулювальний засіб).

Пестицидний засіб може являти собою будь-який пестицидний засіб, відомий у даній галузі техніки, у тому числі інсектицидні засоби. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть підвищувати чутливість хазяїна до пестицидного засобу (наприклад, пестициду, указаного в таблиці 12) за допомогою зниження здатності хазяїна метаболізувати або розщеплювати пестицидний засіб на придатні до використання субстрати.

Зо У деяких випадках зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді підвищення чутливості хазяїна до алелохімічного засобу й/або зниження стійкості хазяїна до алелохімічного засобу порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження стійкості хазяїна до алелохімічного засобу на приблизно 2 95, 5 б, 10 об, 20 то, Зо то, 40 то, 50 то, 6о0 то, 70 то, 80 то, 90 то, 100 95 або більш ніж на 100 95 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виявлюваним у хазяїна, який не одержує модулювальний засіб). У деяких випадках алелохімічний засіб являє собою кофеїн, цистатин М сої, монотерпени, дитерпенові кислоти або фенольні сполуки. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть підвищувати чутливість хазяїна до алелохімічного засобу за допомогою зниження здатності хазяїна метаболізувати або розщеплювати алелохімічний засіб на придатні до використання субстрати порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження стійкості хазяїна до паразитів або патогенів (наприклад, грибних, бактеріальних або вірусних патогенів або паразитів) порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження стійкості хазяїна до патогену або паразита (наприклад, грибних, бактеріальних або вірусних патогенів або паразитичних мікроскопічних кліщів) на приблизно 2 95, 5 95, 10 95, 20 95, 30 Зо, 40 9, 50 95, 60 о, 70 95, 80 Об, 90 95, 10095 або більш ніж на 10095 порівняно з еталонним рівнем (наприклад, рівнем, виявлюваним у хазяїна, який не одержує модулювальний засіб).

У деяких випадках зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді інших недоліків пристосовуваності, таких як знижена переносимість певних факторів навколишнього середовища (наприклад, переносимість високої або низької температури), знижена здатність до виживання в певних середовищах проживання або знижена здатність до підтримки певного раціону порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках способи або композиції, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для зниження пристосовуваності хазяїна багатьма способами, описаними в даному документі. Крім того, модулювальний засіб може знижувати пристосовуваність хазяїна в 60 будь-якій кількості класів, порядків, родин, родів або видів хазяїв (наприклад, в 1 виду хазяїв, 2,

З3,4,5,6, 7,8, 9,10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 200, 250, 500 або більше видів хазяїв). У деяких випадках модулювальний засіб діє на один клас, порядок, родину, рід або вид хазяїв.

Пристосовуваність хазяїна може бути оцінена за допомогою будь-яких стандартних способів у даній галузі техніки. У деяких випадках пристосовуваність хазяїна може бути оцінена за допомогою оцінки окремого хазяїна. Альтернативно пристосовуваність хазяїна може бути оцінена за допомогою оцінки популяції хазяїв. Наприклад, зниження пристосовуваності хазяїна може виявлятися у вигляді зниження успішного конкурування порівняно з іншими комахами, що тим самим спричиняє зниження розміру популяції хазяїв. ії. Комахи-хазяї в переносі захворювань

Завдяки зниженню пристосовуваності комах-хазяїв, які несуть патогени людини, модулювальні засоби, передбачені в даному документі, є ефективними для зниження поширення захворювань, що передаються переносниками. Модулювальний засіб може бути доставлений комахам за допомогою будь-якого зі складів та способів доставки, описаних у даному документі, у кількості й протягом періоду часу, ефективних для зниження переносу захворювання, наприклад зниження вертикального або горизонтального переносу між переносниками та/або зниження переносу людям. Наприклад, модулювальний засіб, описаний у даному документі, може знижувати вертикальний або горизонтальний перенос патогену, переданого переносником, на приблизно 2 95, 5 95, 10 95, 20 95, ЗО Ус, 40 95, 50 95, 60 о, 70 Об, 80 9, 90 90, 100 95 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. Як інший приклад модулювальний засіб, описаний у даному документі, може знижувати здатність до переносу в комахи-переносника на приблизно 2 95, 5 90, 10 90, 20 Об,

ЗО бо, 40 95, 50 9, 60 95, 70 90, 80 У, 90 95, 100 95 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

Необмежувальні приклади захворювань, які можна контролювати за допомогою композицій і способів, передбачених у даному документі, включають захворювання, що викликаються вірусами Тодамігідае (наприклад, чикунгунью, лихоманку ріки Росс, лихоманку Маяро, лихоманку Оніонг-Ніонг, лихоманку Синдбіс, східний кінський енцефаломієліт, західний кінський енцефаломієліт, венесуельський кінський енцефаломієліт або лихоманку лісу Барма);

Зо захворювання, що викликаються вірусами Ріамімігідаеє (наприклад, лихоманку Денге, жовту лихоманку, хворобу К'ясанурського лісу, омську геморагічну лихоманку, японський енцефаліт, енцефаліт долини Муррея, енцефаліт Росіо, енцефаліт Сент-Луїс, енцефаліт Західного Нілу або кліщовий енцефаліт); захворювання, що викликаються вірусами Випуамігідає (наприклад, москітну лихоманку, лихоманку долини Рифт, енцефаліт, що викликається вірусом Ла-Кросс, каліфорнійський енцефаліт, геморагічну лихоманку Крим-Конго або лихоманку Оропуч); захворювання, що викликається вірусами Кпараомігідае (наприклад, везикулярний стоматит); захворювання, що викликається вірусами Огбімігідає (наприклад, блутанг); захворювання, що викликаються бактеріями (наприклад, чуму, туляремію, Ку-лихоманку, плямисту лихоманку

Скелястих гір, мишачий тиф, марсельську лихоманку, кліщовий тиф Квінсленда, сибірський кліщовий тиф, цуцугамуші, поворотну лихоманку або хворобу Лайма); або захворювання, що викликаються найпростішими (наприклад, малярію, африканський трипаносомоз, нагану, хворобу Шагаса, лейшманіоз, піроплазмоз, філяріоз Банкрофта або бругіоз).

ІІ. Цільові мікроорганізми

Мікроорганізми, на які цілеспрямовано впливає модулювальний засіб, описаний у даному документі, можуть включати будь-який мікроорганізм, що живе в організмі хазяїна або на ньому, у тому числі без обмеження будь-які бактерії й/або гриби, описані в даному документі.

Мікроорганізми, що живуть в організмі хазяїна, можуть включати, наприклад, симбіотичні мікроорганізми (наприклад, ендосимбіотичні мікроорганізми, які надають корисні поживні речовини або ферменти хазяїнові), мікроорганізми-коменсали, патогенні або паразитичні мікроорганізми. Ендосимбіотичний мікроорганізм може являти собою первинний ендосимбіонт або вторинний ендосимбіонт. Симбіотичний мікроорганізм (наприклад, бактерія або гриб) може бути облігатним симбіонтом хазяїна або факультативним симбіонтом хазяїна. Мікроорганізми, що живуть в організмі хазяїна, можуть бути набуті за допомогою будь-якого шляху переносу, у тому числі вертикального, горизонтального переносу або переносу множинного походження. і. Бактерії

Ілюстративні бактерії на які можна цілеспрямовано впливати згідно зі способами і композиціями, передбаченими в даному документі, включають без обмеження Хепопараиз 5рр,

РПоїогпардив озрр, Сапаїдатше о5рр, Висипега зрр, Віацйарасієтшт 5рр, Вашйтапіа 5рр,

М/іддіезуопйпіа 5рр, УМоїІрасніа 5рр, ВісКенвіа 5рр, Опепійа 5рр, бодаїї5 5рр, ВиКНоїЇдепа 5рр, 60 Сиргіамідив врр, ЕгапКіа 5рр, 5піптігобішт врр, бЗігеріососсив 5рр, УМоїїпеМПа 5рр, ХуїеЇа 5рр,

Егміпіа 5рр, Адгорасієгішт рр, Васійив 5рр, Раєпірасіїи5 зрр, Бігеріотусез з5рр, Містососсив в5рр,

Резепдотопаз в5рр, Іасіобасійн5 в5рр, Епіегососсив 5рр, АІсаїдепеб5 5рр, Кіерзієїа 5рр,

Рзеидотопах 5рр, Сіовігідішт 5рр ії ЕсПегіспіа 5рр. Необмежувальні приклади бактерій, на які можна цілеспрямовано впливати за допомогою способів і композицій, передбачених у даному документі, показані в таблиці 1. У деяких випадках послідовність 165 рРНК бактерій, на які цілеспрямовано впливають за допомогою модулювального засобу, на щонайменше 50 95, 60 95, 70 ов, 80 9, 85 95, 90 95, 95 95, 97 95, 99 9, 99,9 95 або 100 95 ідентична послідовності, наведеній у таблиці 1.

Таблиця 1

Приклади цільових бактерій і комах-хазяїв розташування

Гамма-протеобактерїї | Ї! /

ТАТССАСаССАСАСИТТОСССТАСА асСтТАССТТаТТАССОСАСТТСАСССС

АСТТАСАААТСАТАССИЯТТатААТ

АСТААДААТТАСТТАТОАТАСААТТТ

АСТТоСАТОСТОТОАСОССОСсаСаваИТт астТатАСАДаастосАсААСИТАТ

ТСАССИТААСАТТСТОАТТТАСИаА

ТТАСТАаССаАТТССААСТТСАТИаА

ААТСИАИТТАСАСАТТТСААТОСССИ

ААСТААСААТАТТТТТТААСАТТАС

САТТАТаТТасССАТАТАССАТАТА

АСТТТТТатААТАСТСАТТатАасА сатататТАдасСсСсСтТАСТТАТААСО

ВсССАТОАТтТаАСТТа,вАСИВТОоаТос

ТСАССТТССТОСААТТТАТСАТТО

ССАСТТТСТТАТТАСТТСТААТАТА

ТТТТТАВТААААТААСаАТАДОСИТ тасастоатТТАТАасСАСТТААССОС

ААСАТТТСАСААСАСОСАасСтТадса

АСсАааССАТаСАасСсАССТатсСтТСА

Сагзопеїа года Листоблішки Бактеріоцити ААдССТААААААа СТ ТТАТТАТТТСТ (РзуїПоїдеа) ААТАААТТСТТТаСпСАТИаТСАдДААС тТАаСТААСАТТтттсИаТаттТатАТ

СаААТТАААССАСАТаСТОСАССС ста,атасадасСсссСССатсСААТТО

АТтТІТТОДИТТТТААССТТаСОСТоа

ТААТССССАСИ,аСОСаТСААСТТААС аСаттТАасСтТТТТтСАСТАДААДАТА

ТАТААСТТТТТТТСАТААААСАДААд

ТТАСААТТАТААТАТТТААТААДАТА аТТаАСАТССТТТАСтТасСАТОСАС тТАССАСОСОСИТАТСТААТОСТИатттТа

СТоСССАТаАСТТ ТССТатАТТАСТ ,ТСАСТАТТААААТАСАААТАСИаС

СстСасСссСАСТА,ТАТТСТТТСАСА

ТАТСТААДИСАТТТСАСТастАСТО

СТОаАААТТСТААТТ ТСТТСТТТТАТ

АСТСААСТТТАТААСИТАТТААТТТО

ААТАТТАААТТАСТТТААТАААТТТ

ААДАДАТТААТТТТТААДАААСААССТ

,ССАСАСССТТТАСасСССААТААТТ

СсСаАТТААСОаСТ ТаСАССССтТСаИ

ТАТТАССЯССЯОСТАСТааСАСОСА датлассаатаст СТ ТАСАА

АТААСИатсСААДАСАТААТАТТТТТТТ

АТТАТААААТСТСТТСТТАСТТТИат

ТОААдаИТтат т ТАСААСССТАДИаС

ССТТСТТСАСАСАСОаССаАТАТАСС тааАТСААдаСстттсастсАТТИатТтс

СААТАТСССССАСТОСТОССТТОС

СТАДАДОСТТТаИсССсССатТатсСтСА

СТОоССААТОТааТтТтТатТсСАТОСТО

ТААСАТСААСТАСИААТСАТАСТС

ТТаТтТАДаСТТТТАСТТТААСААСТ

ААСТААТТСИаАТАТААССТОСТТОТ

АТТАВСИААСОаАСАТТСТССИСТТСТ

ТТАТССАТТАССаАТАСАТАТТИаААТ

ТАСТАТАСАТТТСТАТАТАСТТТТСО

ТААТАСТААТАСИаИтАСаАТТСТТАТА

ТАТТАСТСАСССОЯТТСсОаСтТастАА

ТТАТТТТТТТААТААТТСИаСАСААС тасСсататаТтТААдастТАТСастА вСсатТСсААТСТаластТАТОаАТСАА

АСТСА

(ЗЕО ІО МО: 1)

АдадаТтттТаАТСАТОастСАСАТТ вААдсастТАаасСсааСАСАСАТААСА

САТаСАДОТСОСАЛАСаСОааСАТСАТА

СсАСаттааСААлаСсааСасСАСОос стТаАатААТАСАТатАААТАТАСС

ТААААДОСТИаСОССТААТААСИатАСИас

АААСатАСасТтААТАССОСАТААТ

ТАТТАСаАСАТАААССАСИасаастт

САТААДАДАДАААТСААССТТасаст

ТТТАСАААДАТТАСАТОАССасАТТА естТАатО,аТАпаАаТтААААДаСсСтТА

ССААДСатААСОАТтоСсИаИтАастас тотТаАаАдапАТИаАТСАаССАСАС тавоАСТалаААААаасСсССАсаАСс тоСстТАСЯСОАаСИасСАасСА,тацся

СААТАТТаСаСАСААТОСсОЯСасААС

СсСстТаАТССАСТСАТОСССОСЯТатТ

Ропієга аІєугодідагтит ВТ-)| Білокрилки Бактеріоцити сТаААдадАлсасстттааатТатА в (АІєугодоіаєа) АДаСАСТТТСАаСадАаАДадАДА

СТТАаААААТАДАААСТТАТААСТ

АТаАСОСИатТАСТСИаСАСААаААас

АсСпастТААСТОСЯТаССАаТсСАС ссоСб,атАлдадСавдааиаТасАА вСаттТААТСАСААТТАСТОСИСИт

ААдасасАтатааатаатТаттА дасттТАТатТаАААааТссстТАТаст

ТААСАТАССИААСОСААТАААаААС

ТОАСААДАСтТАаадатасСсАаАддОАа вААдСаатАаААТттоСсСсОвататАас сатаАААтТасСсиаТАСАТАТСТасА вОаААТАССАХааттасСсадлааСаАс стотавастаАСАСТОАСАСТа

АвАТаСаАААЛСаСсата,ассАасСАА

АСсСАССЧАТТАаАТАСССТОСТАИаТто

САСИаСтТатАААСаАгАтТАТСААСТАС

ССаТатТОсАТТСТТАААСААТТТТа тааСатТАССТААСасСаАТААСТТ вАТСОССТОСОССАСТАСОСОаТтОаИс

ААСОИСТААААСТСАААТОаААТТОА ссссесааСсССасСАСААЛСССЯИаТас

АВСАТИаТОаСТТТААТТССАТаСАА

СсОСасСААААССТТАССТАСТСТТО

АСАТССАААИТтТАСТТТОССАСАСАТ авадлдасасатасстТАаасААСТТТ вАСАСАССЯТОаИСсТасСАТОСОССТИаТто стТсА,СсТататтаТаАААТОаТТО ватТАдатосСатААСсадасСасА

АСССстТТатТссСТТАСтТТассСААСЯС

АТАДСССОСССААСТТТААСаАаА стТастааТтОАТАААССасАааАА сатаааспАСаАСатТСААСТСАТС

АТаССССТТААСАаатАаааасААдс

АСАССТаСТАСААТОССАААДАСА

ААДССИатСасСААААТаСТААСАТОИа

ААСИСТААТСССАААААААТТИаТтст тТАСТТСЯаСАТТааАаТСТаАААСТ

СОСАСТОСАТААДСТСИСААТСЯС

ТАСТААТСИТОаААТСАСААТОТСА сеаТаААТАСОЯТтсТоСвассттТ

СТАСАСАССЯСССОСТСАСАССАТ вОААдатаАААТаСАССАСАдСТа

ССААССТТТААССААДААААСАСаИАс

ААСАаТСАСТАСЯСТОИТаСаТТСАТ аАСТОСОССТаААатсСатААСААС атаастатасасасААсстатаас тТаспАТСАССТОСТТАА

ЗЕОІЮ МО: 2

АВБАСТТТОаАТСАТОССТСАСАТТОа

АдАсСастааСсаасСААасСсСтТААСАС

АтТасадатосалдаСсааСАсСаАалд дадаласттастотсоттатсса

СААДССОСасСсАААаСасватаАаТтААТ

АТСТОВОаСАТСТАСССААААСАС соацдпАТААСТАСТАСАААТИСТА

ССТААТАССОСАТААТаТТаААдА

АСсСАДАСТОСОССОС)|О!АССТТ І ТС

СТСАТаСТТ тТТаСАТОААСССАСА

СсОАСАТТАССТТаттаатТАСАСТА

АТАСССТАССААСОИаСААССАТСТ стаастаатстОАдОаАасСАТААСС

Висппега арпідісоїа, штам Попелиці АдаССАСАСТааААСТОАИаАСАСОИ

АРБ (Асупповірпоп (А пійоідев) Бактеріоцити | «аТССАСАСТОСТАСОЯОССОПСА;СИасАа рівит) р САСТОСОСААТАТТаСАСААТОС аСОпААдАдасстадтасАастАТОС

СсеСатаОтТАТОААСААаасСсСтТТАа вОаТТатТААДАаТтТАСТТ ТСДОаСОСа

САСОаАААААААТААААСТААТААТ

ТТТАТТТСаТОАСИаТТАСССасСАС

ААПАдаСАССОВастААСТОСИТО сСсАаСсАасСасСсосТтААТАСОССАС ватТасСААДИСИаТТААТСАСААТТАС тасвасСсастТАААсАааСсасСсатАаата

СТТТТТТААаИатсАСОстТатаАААТС

ССТАСОИСТСААССТАССИААСТас

АТТТОаАДААСТаСАДААСТАСАСТТ тоатТАаАдасаАастТАСААТТСТА ататТдаСааТаАААТаСатАСА

ТАТСТаСАСОаААТАСССЯЯТааСа

ААДОСИ,ааССТоСТАААСаААААсС

ТтТОАСАСТаАДОСаСасаААла,СаТта вапАпСААДАСАсСаАТТАСАТАСС

СстТаЙтТАаТСсСАТаССатТААДАСИаА татсОАсСТТапАсааТатТатТТсСсСАА

САСпААдаИтТаАСТТССОВААаТстААС асСАТТААХССТСОСАаСсСаССсТаавасцА атТАСОабаССасСААаасСТААААСТо

АААТаААТТОАСООВЯВСаСсСсСасА

СсАДаСсаатТавАаСАТатааТтттТА

АТТСОАТаСААСасСсОАААААССТтТ

АССТааТСсСТТаАСАТССАСАСААТ

ТСТТТАСАдААТАДАСААаИТтассттТ севасдастатадаАдсСА,аатаста

САТОССТОТСОаСТСсАаСстТСа,Ттатт атТаАААТОИТТаспСаИТтТААатосса

СААСИАДаСаСААСССТТАТСССС тата,ассласавапсавассаваА

АСТтТСАасадасАаАСсТассСаатТтТАТ

АААдсСсаавдапвАл,аатавааАсСаИ

АСаТтСсСААДИаТСАТСАТОЯССССТТАС

САСсССАапасСтТАСАСАСаТтастАС

ААТаСТТТАТАСААДАСАСАДасСАА

АТСТаСААДАСАСААДОаСАААССТСА

ТАААДИТАААТСОИаТАИатТССааАСТа вАатТсСТаСААСТСОАСТОСАСОА

АатТСапААТСаСтТАаЙТтТААТССОТа

САТСАСААТаССАСОССТОААТАС ат соСапасСсСсТТатТАСАСАССО

СсССаТтСсАСАССАТОСКОЯАХССТОСааИТ

ТаСААДДАЧАдАасСАсасТАТСОСТААС

ССТТТААААЙСААпаСаТсСтТТАССА

СсттТатаАТТСАТаАСТОаСОатаА

АСТСатААСААааТААССатТАсаИ ваААссТасааТТапАТСАССТО ст

ЗЕОІЮ МО: З

АААСТаААаСАаТтТТТаАТСАТОСССТ

СсАаАТТОАзАСсастаасцвасСААлаСс

СТААСАСАТаСААДООТСЯЛИаСОсС

АпССОаАААдАСпАААаТастТа,астттстт атаасвдасСспаСАААСса,ааата

АСТААТАТСТаСИаСсСАТСТаСССАА

АдадасваайАТААСТАСТАСААдДА тТаатАасСтТААТАССОСАТАААСТТ

САААДАДАССАдАаатасваааасстт щи . ТПТААДОСССТСАТИаСТТ ТТаСА

Висппега арпідісоіа, штам Попелиці Бактеріоцити | ТСДАСССАСАССАСАТТАССТТОТ за (Зспігарнів агатіпит) | (Арнідоідеа) ТОСТААССТААААССТТАССААС

ССААСИаАТСтТотТАасСсТаатстТаА

САаОАТААССАасССАСАСТаСАА

СТтТаАСпАСАСааЙТССАСАСТОСТА сва,асвда,аСсАдасСсАатТасвацААТАТ

ТтТаСАСААТОСОаСаАААасстТаАТ асСАаСстТАТаССасСаТтатТАТаААа

ААДАСаСсССсСТтТАсСасТтТатАААСТАСТ теза аАсСсСААААААТТАА

ААСТААТААТТТТАТТ ТТатТОаАСсат

ТАСССаСАСААпАзАаСАССИаасСтТ

ААСТОСОЯтТаСсСсАИаСсАаССаСцатТ

ААТАСОЯСАСОООСТасСсаАасаИатТАА

ТСАСААТТАСТаЧСОаСИатТААдада

СсАСОСтТАСаИаИтаатТТТТТтААатТсСАа

АТаТтТаАААТСССТАСаТстТтТААССТ

АЧВОпААСТаСАТТТаАААСТОаАААТ аСстТАвАатТАТСОСтТАасСАас,СасАсаИт

АСААТТоТАСООтТатАааСаатОаАА

АТаСаИТАСАТАТСТаСАССОААТАС ат аСОпААдАдаСаасСсСТоСтТАА

АСОСААТАСТаАСАСТОЛИЦаСаТасСа

ААдАдс;сатапсапАаСАААСАааИАТ

ТАСАТАСССТОаатАатСсСАТОаСС

СТААДАСОАТатТоаАСстапАсат тат тсСААСАпААдаТаАстсса

ААДССТААСОаСаТттТААатСсаАСсСа сставсааАдатТАСаасССасСААдсца

СТААДААСТСАААТаААТТаАСОаЦса

ЧвасСсСсаСАСААХДИаСОватапАсасСАТ аТааТТТААТТСОАТОСААСасСсаА

ААДААССТТАССТасТсСТТОаАСАТС

САСАСААТТТТТТАЧАААТААААдАА атассТСсапйОААСТаТтаАСАСА сатастасАтаастатсатсСАсас тсататтатОАААТаИТТасааИатТАА аТсССасСААСИаАдаСасСААСССТТ

АТСССОСТОтТасССсАЛаИаСсасттоОаа

Сапа пААСТСАсАасааАаАСсТасСо

СпаТтТАТАААССОИадДасвААаатася

СОаАСОАСатТСААатсСАТСАТОССС

ССТТАСОАССАЧСаСТАСАСАСО тТастТАСААТа,аТТТАТАСААДАДОаАда

ААДаСАААТСТаТАААпАСАДасСАА

АССТСАТААДАИЙТАААТССТАатТтос ваАСТапАатСсТасСААСТОСАСТ

ССАСПАдАаТСапААТСОаСтТАаТтА

АТСИаТтТОСАТСАСААТаССАСИаЦаТтТ

СААТАССТТОССвбИааСсСтТТаТтАС

АСАССаСССатСАСАССАТаСОА стат ТасСААААапААаСАСАТТ

ТОСТААССАСОАААдсСТапААсас аТСсТАССАСТТТаТтОАТТСАТОАС тапааТОААатТсСатААСАДОааТтТА

Адосатаа,асавАдАсстТасваттас

АТСАССТОСТТА

ЗЕОІЮ МО: 4

АСТТААААТТаААаАдаИТтТТТаАТСА тТоасСстТСсАвАТТОАдАСсИстТас са

САДИСТТААСАСАТаСААДИТСОА асСааСАТССААСААААСТТТАСТТ псестеа,авссваСсвАдаСаайсСАААСас

ВисНпега арпідісоіа, штам) Попелиці СТОАСТААСАТСТОвасвАТСТАС ; о , р: Бактеріоцити | СТААДААДаАлсСапсацпАСААССАТТО

Вр (Ваі2опдіа рівїасіає) (Арпідоіїдеа) САААССАТОССТААТАССССАТАА тат ТТ ТАААТАААССАААаИТтАаа ,СаАСТААААТ ТТАОССТТАТОаС

ТТАВАТОаААСССАЧАСаАал6АТТ

СТТОАТОСТААИаатТААТОССТТ

АССААСаСаАСаАТСТСТАасСта стотададасАтТААССАаТссСАСА стаспААСТаАдаАТтТАССатсСАаА стостТАСсоссалдсасАаасСАатасся

СААТАТТаСАСААТОаСааСТАААаС

СстаАТтТаСсАаастАтТасСсасатТатА тТаААДСдДАдСпассттТАаааТтТаТатАА датАСстттсАас,СсасвасАасАААс

ААТТАТаТСсСТААТАТАСАТАТТТТа тТаАСИТТАСССО,ААдпААСААасСА ссааСстТААСсСТОСОТаСсСАсСАаС сасоатТААТАСССТАСОИ,Тасада

СаТтТААТСАСААТТАСТОСаСаИатА

ААсСАаСАСаТАаСасСиастТАТТАА аТСАСпАТатТаАААТСССТАСИаСсСтТтТ

ААСТтТАаСААСТасСАТТТаАААСТ

ААТАПСАСТАЧАатСсТСАТАСАС,И адаспТАпААТТотТАсататАаса стТаАААТаСатАСАТАТСТАСАС вААТАСОСЯТИЦаСсаААддасаАсо

ТОСТАААТОААААСТаАСаИастада стаСсаАдАда,СсатасасАасСАААдС давпАТТАСАТАСССТОИаТАаТтосСА тасСстатТАААдСаАтТатоаАСстТаацА сататттоСстТАпАаАдАдатаастт

СсСпАдаСТААСаСАТТААСТОСИ,А ссасстасасАаатАСсасатСсасСАА аасСтТААААСТСАААТаААТТаАСаИ ссаассСасСсАСАДаСсастасдс

САТОТаСаСТТТААТТОСАТаСААССИ

СпААдпААССТТАССТОИаТСоТТаАС

АТССАТАСААТТТТТТАСАСАТААДА дадатассттАда,аасААСТАТИаАС

АсАсатастасатаастатсатс дастса;ататтатаАААТИаИТтТасат

ТАДСТСССаСААСИалдОаСасСсААСо

ССТАТСОСТТ ТИаТТасССАТСАССИТТ

АтастааваААСстодадааАсаАСТ соС,атТТАТАААССасАасААас тасаспАтТаАСаТтСААаТСАТСАТ сассСстТтТАСсадссАаасвастАСАС

АСОаТасСтТАСААТИССАТАТАСАДА вАСАТаСААСТоТасСсасААСАТАА

С,ССАДАССТСАТАААатАТИатТСаТтА стосаадстасА;атстТасААСТо

САСТОСАСОААдаТтАасаААТСасСтТ

АатААтТсаИатацвАТСАСААТассСА с,сатаААтТАсСаттсссааиасстт

СТАСАСАССОЯСССатСсАСАССАТ сюаалдатаасТтасСсАААДАадАДаСА ватАастТтТААССАСАТТАТТТТАТ тасвдасИеСастТАССАСТТТОСТа

АТТСАТаАСТОСОСОСТтТОААсТСаИт

ААСАдастААсСатааасаААСо тасааТттОсасАТСАССТОСТТА

ЗЕОІЮО МО: 5

АТаАСАТСАТТААТАТАТАААДААТС

Що Попелиці | АТаТТСоСААТТААААДААТТАСИАС

Виснпега арніаісоїа ВСс (Арпідоідеа) Бактеріоцити | ААААТТТТТТАСАСААТАААСАДАТ

ТАТТААТСАСАТААТТААТТТААТА

ААТАТТААТАААДААТСОСАТААТАТТА

ТТ ОАААТАСаСАТСАСааАТТАасАс

СаТТААСТТТТОСТАТТТОТАСААТ

САТТАААДААААТаАтТАатАТТАаА

ААТТаАТОААСАТСТТатат тт

ТТААСТСААДАСИТТТАТТТАТТАДАА

ААТТАСААДАТТАТААТТастОаАТАТ

ТАТААДАТТТаАТТТТТИТтТаИтТтттт

ТТТТСТТТАСАСААДАТАТААААААТ

АТАСОИаТТТАТТааТтТААТТТАССАТА

ТААТАТТаСТАСТАТАТТТТТТТТА

ААДАДАСААТТАААТТТСТТТАТААТА

ТААТТаАТАТаСсСАТТТТАТатТТТСА

ААДАДДаАдАсСТАаСАААСАСАТТАТТ дастАСТОСтТастТАСТАДАСААТА таатАаАТТААДИатАТТАТТОСАСА

АТАТТТТТАТААСАТАСААдАСТаИтт

АТТААТатТААТАААТТТААТТТТТТ

ТОСТАСТОСТАААИТАСАТТСТАС

ТТТТТТАСОАТТТАСТОСТАААТАТ

ТТТААТАСТАААТАТААААТАСАТА

ААСАТТТТТСТОаТТТТАСААТТААТ

ТАСТАСАТТТТСТТТТСААСАТАСА

АСАДААТТТТТАААТААТААТТТАА

ТАТСТТТАТТТТСТАСААДАСААТТ

ААТТТСТТТАСАТАТТОАТССАТАТ

ТСАДИДасАСаААДААТаТттТсСтТТтТА

АТТСААТАТТатАААТТААТадААТ

АТТАТТТаААААСАДАААТТТТАТа

ТТТАаАТТАА

ЗЕО ІЮ МО: 6

ТТАТСТТАТТТСАСАТАТАССТААТ дАдтгпаеасастасатТасСсАСсаАсаСсАТТ

ТТТТТОДАТТТСАСАТАТАТТТОССИТ

ТТААТАСИатТТААТААДААСИатАТТТ

ТІТТТТТТАТТТТТСТТАТТТОСААТ

ТСАССТААТАССААДССТТтттТАааИт

АТАТТТОаСсСАТААТТАСТатААТТСТ

ТААТАДАСТТТТТТАСААТОССТАТС

ТТ СААТАСААТадААДАСТААТААТА

ССААТТТТТадтТоСасААТатААТ

АТатТтТААТААТААТТТТТААТАТТТТ

АТатААТТСАТТТАТТТСТТааИаттТА

АТАТАТАТТСИААААаИастТаАААТ сттстсатдастасАТатТТАААТ

Висппега арпіаісоїа Попелиці Бактеріоцити ТТ,атТсСАТАТТТТаСссСАТТаАТТТТТ (Сіпага іціаїйіїїпа) (Арпідоїдеа) ТТАТаАТТТаААСТААСТСТААСО тасттаттТАТасат тт тТАТ

ТтТатТААТАТОАТОССТОСОСАТАТ тт тассатАТТТТТСТТСассСА

АААТТТТТТАТТАССТОатТТСтТАТТО тт тт,атт тат т ТТТТААССА

ТТОАСТААСТОАТАТТССАСАТТТ даваТТСАТАСаСАТАТСТАДАСаС

ТОСАТСАТТСАТАААТОААААТОС трацсАТАСТАСААТТТААСТатАТ

ТаАДАаАААТАССТАААТСТААТАА

ТАТТССАТСТАТТТТАТСТСТАТТТ

ТТТТСТТТТТТТААТАТТТТТТСААТ

АТТАСААААТТТАССТАДАДАТАТТ

ТТАДАТСасСсаИдАТСТТТТАТТТТТТ тоСадгдтТТТтТАТАСАТТатасат

СТТаАТСААТАСТАТАТААСТТТОС

АТТААССССТААТТСТТаААСААТ тТастгпаААТаАССАССАССТОоС

ААДАТаТтТАСААТСААСАТАТатАСС

СТСТТТТТТТАТТТТТААаТтАТТат

АТаАТТТСТТТТатТААААСАасИТттТ

ТАТОААТСАТ

ЗЕО ІЮО МО: 7

АТОААДААСТАТАААААСТТТТАААА

ААСАСТТТОСТатаААААААТАТаИа

САСААААТТТТСТТАТТААТАААИА

САТСАТААААДААТАТТОИаТТААдДААА

АТТААТССАААТАТАЧААСАААСА тТАЖТАСАААТСИасаАССАсааИТлдмттТА

ВСстТасСАТТААСТОАДасссСАТАТСТ

САСТТАТТААААСАСТТААТАИттТ

АТТаАААТАСАСТОатААТСТАТТАТ

АТП ТТТААДАДАААСААССАТТТТА

ТТСААААТТААТАСТТТТТТатсСАА

САТаСТТТАААСТТТААТТАТАСАА

АТТТАТТТТАТАААДАДААТАААТТ

ААТТССаТАТТТТТастААТТТАССА

ТАТААТАТСТСТАСАТСТТТААТТА

ТТТТТТТАТТТСААСАСАТТАСАИТ

Висппега арпіадісоїа, штам Попелиці . ААТТСААСАТАТОАА ТІ ГТАТОСТТ

Соб2 (Мугив регвісає) (Арпідоідеа) Бактеріоцити | САААДАйААХаСТ ТасСстТасААСАТТА

АТТаСАТТАССТасАХААТАААТАТ тТАСССсИатСаТттТадасАТТАТАТСТ

СААТАТТАТТатТОаАТАТСААААТТТ

ТАТТАААТОТТаСтТоСтТОадАСАТТ ттаассСстТАТТОСадаАаТтТТсСАТТ

СТАТАТТТатАААТТТААСАССТСА

ТСАТААТТСТОСТТАТТТТаттТТАТ

САТАТТААТАТТТТААДИасстТтТАТТА

САААТАДИаасСтТТТоСААДААТАаАА

САААААТАТТАСИатсСАТАИТТТАА

ААААТТТАТТТТСТОаАААСААСТТТ

АТТАААТТТАСАТАТТААТСССАСА

ТТААДСАастТадАААТАТТТСТИттт

ТТСАСТАТТатсСААТТАаСТААТТА

ТТТатАТАДААААДААТТАТАСТААА

АДДААТТАА

ЗЕО ІЮ МО: 8

АТТАТАААДААТТТТАДААААСАТТ

ТССТТТАААААсааИТтАТааАСААА

АТТТТСТТатСААТАСАДАДАСТАТ

ТСАДААСАТААТТААТАТААТТААТ

ССАААСАССААДАСАААСАТТАата вАААТттТасаоСстТасАттАастас

АТТААСАДААССААТТТатСААТТА

Висппега арпіадісоїа, штам Попелиці Бактеріоцити ТТАПААСААТТААТТатТТАТТОаАдААА

АК (Асуппозірноп Копабі) | (Арпідоїаєа) ТАСАТССТААТТТАТТОаТтТТтТТТАТТ

ААДАДААААСИаТтТСсАТТТТАТТСАААА

ТТААСАСТТТТТТАТСААСАСИаСТТ

ТАААТТТСААТТАТАСАСАТТТатт

ТТАТАДИАААДААТСААТТААТТСИТт

СТ ТТасСААДАСТТОаССАТАТААТ

АТТТСТАСАТСТТТААТТАТТТСТІТТ

АТТСААТСАТАТТАААСТТАТТСАА

САТАТИААТТТТАТаТТАСАСАДА сдасттастадААсСАТТААТТТСТ

АТТОСТасАААТАААТСТТАТОСС

СатТТтТААласАТТАТТТСТСАИатАТТ

АТТаТтТАДААТТАДААТАТТАТТАДА тат атАССТаААаТаАдттсадсс

ТАТАССЯАдАдАДатасАтТтоТаТаттт

ТАТСААТТТААСТОСТСАТАССААТ

ТСТОСАТАТТТТатТТАТОАТАСАА

АТАТССТСАСТТСТАТСАСАДаддА

АТаСТтТТТТтсСАДАдАТАСаААДаИсьяААА тттасСатСАТАСТТТААААААТТТ

АТ ТСТаАДАААСААСТААТТСАА

ТТАСАААТТААТССАААТТТАССИА

ССТаААААТАТТТСТАТСТТТСАИТ

АТТаТСААТТАаСТОаАТТАТТТАТА

ТАДААДААТТАААТААТСТТатАААА

АТСААТТАА

ЗЕОІЮ МО: 9

АТОАТАСТАААТАААТАТААДАААТ

ТТАТТОСТТТАААДААСаАТАСасАс

ААААТТТТСТТатТАААТАСАСАДАТ

ААТСААААДАТАТТАТСААААТААТТ

ААТССТАААААААСОаСАААСАТТА

ТТААААТТасАССЯСаТт ТАсат

ССаттТААСААААССТАТТТатадА

ТТТТТАААТаААСТТАТССИТСАТТаИ

АААТАСАТСОСТААТАТАТТАТСТТТ

ТТТААДАСАААТаТАТАТТТТТТОАТ

АААТТААДАААТАТАТТатТСАТААТОа

СТТТАСАТТТТААТТАТАДААДАТАТ

АТТСТАТАДААДАДАСТСААТТААТТ

СатТАТТТТТасАААТТТАССАТАТА

АТАТТТСТАСАТСТТТААТААТАТА

ТТТАТТ ТСИаСААТАТТОАТАТТАТТ

Висппега арпіадісоїа, штам Попелиці . СААСАТАТОААТ ТТ ТАТО ТТАСАА ца (Огоівисоп атрговіає) (Арпідоідеа) Бактеріоцити | СААйААСТаС!СТААААСАТТАС,ТТ

ССТАТТОСтТастОаАААААСТТТАТ ватсатТТААСТАТТАТАТСТСАА

ТАТТАТТаТтТААТАТТАДААТАТТАТ

ТАСАТАТТСИАССТОААААТТТТО

ААССТАТТССТААДАСТТААТТСААТ

СТТТатАААТТТААСТоСаИсАТАТТ

САТТСТОСТТАТТТТатТТАТаАТА

ТТААТТТАТТААСТАСТАТТАСААА

АСАТаСТТТТтСсААСАТАСЧААДИААА

ААТАТТаСатСАТАСТТТААСАДА

ТТГ ТТ ТТСТОаАаСААСАТТТААТТ

САТТТАСАДАТТААТСОСАААТТТАА вАасСстадАААТатТТСсСТАТТАТТСО

ААТАТТаТСсААТТааСсСТтТААТААТТТ

АТАТАДААДААСАТАААСАСТТТАТТ

ААТААТТАА

ЗЕО ІЮ МО: 10

АТОААДАААаСАТАТТССТАТАААА

АААТТТАСТСААААТТТТСТТатАса

Висппега арпіадісоїа (Арпів| Попелиці Бактеріоцити АтттадататаАТТАААААДАТААТ діусіпев) (Арпідоїдеа) ТАААТТТАТТААТССасАстТТАААТ

САААТАТТаСТТадААТТааАССса саАттАастТастАТСАСТоСАССТ

АттатаАТТТаАТАСАТСАТТТАА тТтатОАТТаАААТТОАТААААТТТТ

АТТАСАТАСАТТААААСАИТттсто

АТТТТАТТСААДААТТААСАСИТАТАТ

САТСААДСАТасСтТТТАасСАТТТОАТ

ТАСАТАААДСИТТАТТТААТАААДАААДА

АТАААТТАИТТСОААТТТТТОатАА

ТТТАССАТАТСАТИаТтТтТтСотТАСИаИтТсТ

ТТААТАТТаСАТТТАТТТАААДАСАА

ТТААТАТТАТТАААСАТАТОаААТТТ

ТАТаСТАСАААААСААаИТттасСтТад

АСОСТТТААТТасСААСТоОСАСОИСТАС

ТАААТТАТАТОИСТСОИТТТААСТАТТ

АТТТСТСААТАТТАТТОТААТАТАА

ААСТТТТАТтТасАтТататсТТСАА

ААТаТтТТттТАААССАаТтТТоСТААдАС

ТАССААТСААТТТТТСТТААТТТадс

АССТТАТАСТаАТТАТТТОСССТТАТ

ТТТАСТТАТААТаТтТАААСИаИатТстТтТА

СТТАТАТТАСААДАТТТАаТстТТтТсСА

ААДАДАДАСААДаАААААТАТТАСИатсСА

ТАИТТТАааТААААТАТТТТСТОАДА

АААСТТТТТАТААДААТТАААТАТТА

АТСССАДАТТААВАССТОаАаТдАТА

ТТТСТАТАТТАСААТАТТИТСАИТТ

АТСТААТТАТАТаАТАСААДААТААТ

АТТСАТСАСаСИСААСАТИаттТтаТАТТ

ТАА

ЗЕО ЮО МО: 11

АВАТТОААСОСТДИаСсОасАтТасс

ТТАСАСАТасСсААатсадАСаатАА

САсатсттСааАаСастадсаАстТ сасадАаСаастТалатТААТАСАТС вОААдсастасссалатсатававсо

АТААСТАСТОСАААСАатАаТстАА

ТАССЯаСАТАСОАТСТОАааАТИаА

Адасасасалссттсавассто ссаСвАТтасдассСассаАтас

СсАСАТТАсатАата,аатасацАТА

ААдастТТАССАДассаАСОАТСТ стаастастотададавАСаАСс

АВССАСАСТОСААСТОАСаАТАСИ вТосСАСАСТСОТТАСОССАСИаСАє

СсАаатаавацпААТАТТасСАСААТОаС

Аппапайїа ріпісоїа (РНуїохегоїдеа) |Бактеріоцити | сСбаСАдасстаАтТасА;астАтТат сас,тТатАТаААаААаТАсСсСтТтТАа ватТатАААатАСТТТСИАТАасА

ТААСААДСАТААТОАСАСТААТААТ

ТТТАТТОТСтТаАСатТтАастАТАСЄ

ААСАдаСАССааТсТтААСТОоСИТта ссАдаСсАХ,асСсасСасйТААТАСа,аса сатастАдасаТтТААТСасААТТАС тасОсСаТАААвАасСАТатАаатоа

СТТТАТТАДатсСАаАтТатаАААТС сСстТааАСТТААТСТАИаСААСТасА

ТТТаАДАСТААТАСССТАСАСТТТ сатлдадасадастАаААТТСТАа статТдаСастадААТасАТАСАТ

АТСТАСАДаСААТАТСАСТОССИА

АдсасраАдссТтстТасАСИаАТААСТ

САСаСТААААТаСаАААдаТсАТОаС

СТАааСАААСАСОаАТТАСАТАСССТ ватАаТтсСАТаСТатТАААСОАТаТ

СОАСТАДаЛДасСТТапАсСаИТтАТАА

СТТТТААТСТСТаТтТАастТААСаса тААДсСтТОСаАдссасстааааАсатТА

СсааТСсСаСААаасСтТААААСТСААА тТОААТТаАДСОСВаавасстаСАСАА а,авсаватапвАаСАТатТаатТТТААТТ

СОАТаСААСасСаИтТААААССТТАС

СсТаатстТТаАСАТССАСАСААТТТ

ТАСАСАААТаТтТАпйААаИатасААТТТ

СААСсТатаАпАСАваИтастасСАТ састатостолдастсататтата

АААТОатТасааИТтТААдатТСсССасСААС пАаСаСААСССТТатосСтТтТтТатТтА

ССАТААСАТТТААИСПСААСТСАдАС вАвАСстТасСааЙтТаАТАААСТааА аввАддаа,аачвапАСаАСатТСААС

ТСАТСАТОАССССТТАТаАССАСа

ССТАСАСАСИТаСТАСААТИаССА

ТАТАСАДАДСАСАТаСААТАТТИаСаИ

АААТААДАДаССААТСТТАТААААТАТ атТсСстТАааттСапвАстТаавАатста

СААСТСОАСТОСАСПАдАДаИтСасА

АТСаСТтТАСТААТСИаТтТацсАТСАаСА тТасСсАСааТаААТАТаИТТТССАС аССТТатТАСАСАССасСсСаТтсСАС

АССАТаСААЛаТОпйАТТаСААДАдАа

ААДаТтТААСпСААААТТААССТТСТТАА

СААДСИПАДААТААСТТАССАСТТТат

САСТСАТААСТОаСОСС,тТаА

ЗЕО ІЮ МО: 12 ттттаатАдапйАаатаАТССА

АсССсасСсАааТсССсСтТАСОСТТАС

СТТаТттТАСОСАСТТСАССССАС,СТСА

ТаААТСАСААДАДСЯТОСИТААИаСасс

СТОСТАААДАДВа ГТТАаОСТАССТАС

ТПСТТТаСААСССАСТТССАТОС татадссвасааТаТатАСАдИаС

СсоСОпОпАдАСаТАТТСАССОСТааС

АТТСТОаАТССАССАТТАСТАаасСад

ТССТАСТТСАТОСАССТСалИаттТа

САСАСТОСААТССОСАСТАСИАС

ССАСТТТАТОДОаТсССаИастТААСТО тсасадасттастстсТТТатТАТ

МогапеїІа епаобіа (Соссоідеа) Бактеріосоцити |! сСбаССАТттатАасСАСсатаТататАа

СССТАСТСИТААЧсСасСсСАТОАТОа

АСТТОАСаТсСАТССССАССТТОСТ

СсаатТТтТАТСАССОСаСАСаТСТоС тТОда ТТ СССаАССОаААТСИаСТ

СаСААДАДАДАДапАТААДИаааИтТтТаса стат асСаасСАСТТААСССААС

АТТТСАСААСАСДастаАсСаАсСА

СССАТаСАаСАССТатсТСАсада

ТСССаААдааТАССААААСАТСТО тТастААдат стТстТапАТатТтСААдОА атТАватТАдсаатстсасатас

АТСОААТТАААССАСАТаСТОоСАС састатсаааСССССатТСААТ

ТСсАТТТаАСТТТТААССТТОСОаС сатАСТоОСССАСсСОаСсастосАТТТ

ААСаСаТтТААСТАСОААдассАс

АСТТСААСАССАСАССТТТСААДАТ

СОАСАТАСТТТАСаОаСОтТасаАсСтТ

АССАСОаСТАТСТААТОСТОТТТОС тоСССАСсСОеСстттсатАССтТадас аТсАСТАТТСИЯТОоСАСОвавассо

СсСсТСасСсСАСТаСТАТТОСТОСАС

АТАТСТАСАСАТТТСАССОаСТАСА

СсСстТацаААТТСТАССССССТСТАСа

АВБАСТСТАаССТАТСАСТТТСААА тасдатСссСтТАСатТАдасссАс

СОАТТТСАСАТСТОАСТТААТААА

СсСОССТАСИТАСТСТТТАСОаСССА

СТААТТСССОСАТТААСОЯаСТТасСАСС

СстТоСатТАТТАССОЯСООСТОСТОС

СсАССЯСАСТТАаСССОСаТаТасттТоттТ

СсТатАСатААСИаТСААТСААТААС

СаТАТТААССАТАТТОССТТОСТО

ССТАСТОаАААаИтТастТТАСААСОС

СААдааСсСТТСТТСАСАСАСОСОС

СсАТаССТаСАТСАСОСТТТоСоС

САТТаТтТасСААТАТТОСССАСТОСТ состосСбатТАсадатсТасАССа татстсдаттоса,статвастас

ТСАТССТСТСАСАССАССТАОаС

АТСаТСаСсСТтТАаСТААДОаСТАТТАС

СТСАССТАСТАССТААТСССАТСТ сОаТТсАТСТаАдАСсОаТтатадаас

САДДАСОИТСоССССАСТТТОСТСТТ

АСОАСАТТАТаСОСТАТТАаСТАС

СсаттсСсАасСАаТтТАТСССССТОоС

АТСАСИаСАСАТССССАСАСТТТАС тсАсссатсаеастастсассаао

ААААААСТАААСТТ ТТТТоСИТТО

ССОСТСААСТТасАтТататтАас сстассасСссСАасСатТСААТСТИаА

СССАТОАТСАААСТСТТСААТТАА

А

ЗЕО Ю МО: 13

АААТТОААаАаТтТТаАТСАТОССТ

САСАТТОААСОСтТАааСааЙсСАЛаС

ТТААСАСАТаСААСТСОПСААСИаСстТА

АСАСААААААссттасттттттас тахсалдатсвассаАс,саатаАстТ

ААТОТСТаСОСАТСТАССТААТОС севааасСАТААСТАСТаСАААСас

ТАССТААТАССОаСАТААТаттТОатТА

Ієнікамуаєна сареціаїа АААССААдАС!СТаававаАСсСтТТАТа

Мокобе р (Неїегоріега) Бактеріоцити | ФССТоСАСАССАТТАСАТОаААССТА й САТОССАТТАССТТОТАСОСТОСО

СТААДСастоАССТАЧасСААСОСА тосСстТаастастоТаАвАасАТОИ

АССАСССАСАСТаСААСТОаАСАТ

СааТССАСАСТОСТАСОЯАСИаАдОса

СсАССАСТаСасААТСТТаСАСАА тааввсСаСАдасстТаАТаСАастА татсасатоТтАТаАДАСААц,асСстТ

ТАСОССТТОаТААДАСТАСТТТСАТСО

СОСААСААССАТАТСАСССТААТ

АТТСТСАТАТАТТСАССТТАССТО

САСААСААССАССССОСТААСТОС

СТОССАССАСССОСОСТААСАСО

САСССТОСОАССОТТААТСССАА

ТТАСТОСОССТАААСАССАССТА

ССТОСТТТАТТААСТСАТАТСТСА

ААТСССТОСОСТТААССТАССАА

СТОСАТСТОАААСТОАТАААСТАС

АСТТТОСТАСАСОСАССТОСААТ

ТОСАССТОТАССОСТОСАААТОСО

ТАСАТАТСТОСАССААТАТСАСАС

ССОААСОССАССТТСТОСАССАА

ААСТОАСАСТСАССТОССАААСС

СТОСССАОСАААСАССАТТАСАТ

АСССТОСТАСТССАСОСТОТААА

СААТОТССАСТААААААСТСТСАО

СТТОАСТТСТОСТТТТТОТАОСТА

АСОСАТТААСТССАССОССТОоО

САСТАСОСССОСААССТТААААС

ТСАААТСААТТОАСооОоСОтТосо

САСААССОСТОСАССАТСТОСТТ

ТААТТОСАТОСААСОССАААААСС

ТТАССТОСТСТТОАСАТССАСССА

АТТАТАТАСАААТАТАТААСТОССТ

ТТОООССААСТСТОАСАСОСТОС

АТОССТОТСОТСАОСТССТСТТО

ТОАААТСТТОССТТААСТОССОСА

АССАССОСССТТАТОСТСТОТТО

ССАССООСАТОСССООСААСТСА

САССАСАСТОССАСТАТТАААСТ

ССАССААСОТОСОСАТСАСОТСА

АСТСАТСАТОССССТТАТСАССАС

СОСТАСАСАССТОСТАСААТОСТ

СТАТАСАДАСАСААССААТСТСОС

ААСАСТААССААААСТСАААААСТ

АСАТССТАСТТСОСАТТАСАСТСТ

ССААСТОСАСТСТАТСААСТАСО

ААТСОСТАСТААТОСТОСАТСАСА

АТОССАСОСТОААТАССТТСТСТО

СССТТОТАСАСАССОССССТСАС

АССАТОССАСТААСТТОСААААС

ААСТАССТАОСТТААССТТТАТАС

САССССОСТТАССАСТТТОТСАТТ

ТАТОАСТОСОСТСААСТОСТААС

ААССТААСТСТАССОСААССТСТ

ССТТОСАТТАССТОСТТА

ЗБОЮ МО: 14

ТТСААТТСААСАСТТТОАТСАТОС

СТСАСАТТСААСОСТОССОСТАА

ССТТААСАСАТОСААСТОСАССО

ССАТСОСАДАСТАААТТААТТАСТ

ТТОССООСААСССОСССААСОССТ

0 Цикадки . САСТААТАТСТОСОСАТСТАССТТ

Вайитаппіа сісадейіпісоїа | (Сісадейіпає) | Рактеріоцити. | АТасСАСАСССАТААСТАТТОСАА

АССАТАССТААСАССССАТААТСТ

СОТСАСАССААААТОСООСАССТ

ААТТТАСОССТСАТОССАТААСАТ

СААСССАСАТСАСАТТАССТАСТА

ССТОАСАТААТАССТСАССТАСС

СААСаАТСТОоТАСТТаИтСстТаАсаА ваАТаАССАаССАСАСТасААСТ вАапАСАСааТСсСАВАСТОСТАСаИа садса,асАдасАаатасааААТСТТО

САСААТОаСОЯСИаАААСССтТаАТас дастТАТАССОЯССОСТататаААсСАА сассттсасатТатАААасСАСТТТ сада,аСбасацпААспСААААТаААаИТттТА

СТААТААТААТТатСсААТТаАСаИТтт

АСССасААдАдАадАдаСАССаастА

АдстосатасслдасаасСаСастА дадссадасааТаСАдасатТТААТ

Сс,ааААТТАСТОСОЯСИаИтАддасат

АТатТАсСаСасТтттТАТТТАаТСАСсСО татаАддассстТАаастТААССТА ваААТТаСАТТТОАААСТОСТАДа

СстТАаАатстоатаадасвсаавасаАд

СААТТоСАСОаЯТатАаСастТадАА тасатТАпАпАТСТаспСААсСААТАС

СаатааСсасддасасссоссста вАССААААСТаАСастоАдатАс вААдАасСсатасавАасСАААСАсааИаХ

ТТАСАТАСССТООСтТАИатоСсАСаст

СТАААСаАтТатоаАТТТаААСаИТтт атдассталастТАТАаСтТТтСаА

АаСТААСасСАТТАААТОСАССИС ставасАатАСаАССасСААСИтт

ААДААСТСАААТаААТТОаАСасаца сосСасСсАСАдассаатацпсАасСАТаИ тат ТТААТТССАТАСААСасаАА

АААССТТАССТАСТОТТОАСАТОС

АПСАСТАТААДИаСАСАААдаТстТ ТА стассттосацААСТСТадаАсСА сатастасатосастатсатТСАас тса,атататаАААТатасаттТАА стосСсасСсААдСадасСсасСААССсСтТТ

АТССТТТаТттТасССААССАТТАДИТ са,вацпААСТСАААдааАсвАСТасса сТаАТАААССаадс,саддастада

САТААСаТСААаТСАТСАТОССОС

СсТТАСадатТАсаасСтТАСАСАСат аСТАСААТОаСТаСАТАСААДОСАа

ААССААТСТСИатААаАИ,;ТТАасСААд

АССТСАТАДАСтТаСАТССТАИаТОоС саАттА,САатсТасСААСТОСАСТ

СТАТаАдАСаСТСсасСсААТСаСтТАаТтАА тба,атасАТСАаААТасСсАСсаата

ААТАСЯТТОССОЯаСаСсСтТтТатАСА

СсАССОЯаСССатСАСАССАТОИЧИАС татАТТаСААААСАдаТаттТАатАас

ТТААСТСАТААТАССЯАСАСаСаасс

СТТАССАСТТТатаАТТСАТААСТ сссатаААаТтСатААСААсСаИтАА ссатаасасААсстасасттасаА

ТСАССТОСТТАСАСТАДА

ЗЕО ІЮ МО: 15 . І АттаддсастаасаасСсАаассСтТА

Більш широкий . до: . АВпораїшв5 : АСАСАТаАСААЛСТСОС;СОСОСаСАСС сюветюсннот я ВЕ сасслассассаАаСба,асатадат

ААТОТСТаОСОССАТСТОСССОАТО сАсасааАТААСТАСТасАААСО

СТАССТААТАССОСАТААССИТОС

СААСАССААДАССТОСТЯВСАССТТо ваОССтТСАСАССАТСССАТОААС

СсСАсСатасвоАТТАаСтТАатАСаИт савоСтТААтТааСтТСАССТАСасасА

СОАТОССТАаСТа;тотТОАсАсО

АТОАССАСТСАСАСТОСААСТОА

САСАСОССТОСАСАСТОСТАСО,СОИ дасСАдсСАХатасОааААТАТТОИСА

СААТОСОССаАААСССТаАтТасСАС

СсСАТаОССОСОТИТатаААСААдаС ссттовааТТатАААаСАСТТТСА ссесасАдавААдсаСссАтааСатТ

ТААТАССИастТтАТССАТТадсСатТтТА

СССОСАвААСААдаСАССааСтТАА стосстасСсАдаСАсоСаСОатТАА тАСЯСАаСастТаСсаАаСатТТААТС

СОААТТАСТОСОССТАААОаСаТтА сеСАсасаатстаТТААатсАаА тТатОАААТСОССССЯВасСтТСААССТ вОаСААСТаСАТТТааАААСТОССА саСстТААстотТоастТАсАасасвсво

ТАСААТТОСАСОСТОтТАССаатТОаА

ААТОСОТАСАСАТСТОСАСОААТ досастааСсаАдАлдсасвассоссс тавпАССААСАСтТаАСаСсТСАааИтТ

АСсвАддасатававпАССАААСАС

САТТАСАТАСССТОСТАаИТССАС аСТаТАААСОаАТаТатсаАаТТТаААС стетовассттоласСсетаастТТ тоаОАаСТААСОТаТтТАААТССАС сесстасавАСаТАСааССОаСАА

СОаТТААААСТСАААТОААТТалсСо савасесСсСаСАСААХа,аСсватТасАс

САТатТОаТтТТААТТСОСАТасдАдса

СОААБААССТТАССТАСТСТТаАС

АТССАСАСААСТТааСАаАСАТО сттеатассттОСоОаААСТОСТа

АвАСАСОтТастасСАтТааСстТатоа тсАастТоататтатаАААТаТТОС

СТТААдатосСаСААСаАдаСОасСАА

СССТТАТССТТТАТТаССАСССАТ товатоаадААСТСААдасАаАС тасСоатТаАТАААССааАааААс стасапАТАСатСААСТСАТСА таасСсСстТТАСОСАСТАССаасСтТАСА

САССТОСТАСААТИССОСАТАСА

ААаАвААаСсаАтотоаСосАсАат

СсАаСацпАССТСАТААДАСТОССИТО стаатоСаСАТТаСаАаТСТОаСАА

СТООАСТОСАТОААСТСОСААТС

ССТАСТААТСССТасСАТСАСААТО

ССАСОСТОААТАССЯТТОССОИвИаС

СТТОТАСАСАССОССССТСАСАС

СсАТОСОСОАЛСТОаСОИТТасСААААСАА стТАааТАаСТТААССТТОвасАС ваСОасСТТАССАСТТТОТОАТТСАТ сАСТОСОССТО

11111111 БОЮ МОгІв)7717717717111сСсС у

АВБАТТТААСОЯаСТОССсОСеСАсааСс

ТААСАСАТОСАДСОТСОСАДИСасатА

ССАВААдпАА,астТа7астсттасто дсаласавос,аасАаСсасвоТаАСатТА

АтатАтааавАТСТасСсССадсСАс дасаацАТтТААСТАТТааАААСИас

ТАастТААТАССИасАТААТСТСТИад соАаСАдд,аСсАаааааААСсТТас тосттаСасСтТАТСОСАТаААСОС

АТАТОСОС"ААТТАСТАСТАСИатТад ваТААТааСТОоСССТАСаОаСААСО

АТоССТАаСсТаатстТаАдадасат

САТСАаССАСАСТСИАСТалаА

СсАСЯИаСССАаАСТОСТАСИИСОАС вСАаСсАатТаспааААТАТТаСАСА

АтасвасСпАААдаСсСсТаАТасСАасс

АтассаСсатТатАТОААСАдааст ттАаасаТаттатАААатАСТТТСАаТтТ

СсаАдаАсСаААААСАТТаАТастААТ

АТСАТСААТТАТТаАСИЯТТТоСад

САСААЧАЛАаСАССОаасСтТААСТОоС стассда,аСсАХда,ССсасСсасйТААТАССИ сдсавТасСАДасоТТААТСС,аАА

ТТАСТОСОСОСТААДаСаСАСОСА сасоатТААТТААааттТАаАТатаА

АдасооСавасСтТТААСССАСИАА

ТАаСАТАТААААСТастоААСТАС датАттатасАааасвасатТАаААТ що Хермес соснової | тоСсАТаТатаасСсасатадАА9тТасся

Напідіа ріпісоїа деревини Бактеріоцити | ТАйАСАТатасьттвсААТАССАИТт сасададсасавоооССстТаавАСА

ААДААСтТаАСасТтСАААТасААдА ссатасвасАСаСАААСАСаАТТАС

АТАСССТОИаТАатсСАТОаСТатАА

АсвАТОТООСАТТТассАааИаттатто ссталдасАдатаасттоСатАас

ТАДСОСИаТтТАААтТосАССсасстоа сававАатТАСаАдсСтТасСсААааТттТАА

ААСТСАААТОААТТалСсвасвсасо

СсСОСАСААДОСОЯСТОапАсаСАТИТа

СТТТААТТСИАТасСААСасСсадААА

АССТТАССТАСТСТТаАСАТССАС

АТААТТТАаСАСаАААТастттАаТт

АССТТСаООАААТСТОАаАСАСО тастасАатасстатостТоАасСтТо стат аТтОАААТтаттасаТТААаТ

СССаСААСОАасСсаСААСССТТАТ ссттаттасСссСсласСссаАТТАСатс вапААСТСАААдасАадстассяс

ТаАТАААСССЯСАССААлСИаТавсся

АТОАСОТСААСТСАТСАТОСССОСТ

ТтТАСОСАСТтТАИСастАСАСАССЯТас

ТАСААТасйСАТАТАСААДАСИЇААС

САДССТСОЯСИаАпАССААаСОадАА

СТСАТАААТТАТОТССЯТАИТТСАа

АТттТасАаТСтТасААСТОВАСТОСА таАддатсасцпсААдтсастАатААТС

СтТАВАТСАСПААТаСтТАСаатаААТ

АсаттосСс,апасСсСТТатТАСАСАС

СассСсатсАСАССАТОСКАчХИаТтаС

СТТаСАДААСААаИтАааТтААСТТА

АССТТАТаСАААдаСаТстТТАССАСТ татОАТТСАТААСТОСОСТа

ЗЕОІЮ МО: 17

Муха цеце

Міддіезуопніа діоз5іпідіа | (Оіріега: Бактеріоцити

Сіоззіпідає нин"? ЛВ ЛВ ЛО

Бета-протеобактеріїї | (ОЇ. 11111

АСатААТССАаССАСАССТТССА атТАСОСаСТАССТТаТттТАСОАСТТО

АССССАИТСАСААСССТТАССТТО

СаААСТаСССТоСТСАСААСТСА

ААССАССААДАСАСТТТТАААТСАС атАсАаАдаагАаасстаттТА

СТТСТОаСААСААТТАТТТССАТО статодсс,сааСсааТататАСААДО

АСССОАСААСАТАТТСАССОЯТаа

САТаСТОАТССАСОАТТАСТАСИСА

АТТССААСТТСАТОСАСТССАИТТ

ТСАСАСТАСААТССОаААСТадИаа сс,васттатаАаАТТАаСТоСсСтТ

ТТТаСАДСТТаСаСААСТСТТТОаСТ

ССаасССАТТаТАТОАТатТаТаАА аССССАСССАТАААДСааССАТОаДОа

САСТТаАСаТсСАТССССАССТТОС

ТОоСААСТТАТСЯСТООаСАСаТСТСоСТ

ТПТААСИаТААСТОАСТААТССАСТА

ССААТТАААДаАсСАасасаттасас

ТСаТтТАСАСОАСТТААСССААСАТ

СТСАСОАСАСИАДаСТаАСОАСАС

ССАТаСАаСАССТатТасАСТААТТ

Ріиепасоссиє СТСТТТСсАДаСАСТОССОЯСТТСТо т . ААСАСПИаАТСТТАаССАТАТСАААС гетбріауа рпепасоїа амепає Бактеріоми СТАССТААССТТТТТоОССТТеСА (ТРРАМЕ); ТССААТТААТССАСАТСАТССАСТ астатасааатсСсСсССатсСААТТ

СТ тТалдат т тТААССТОСсаОсс атТАСТоОСССАОСаСса,аТтТсСаАСТТа тасатТАастТасСАССАСТОАДААА

СОААААСТаСССААТааТттАатс

ААСАТСИТТТАОСОСАТОСАСТАС

СсАаСасСТАТСТААТОСТОТТТасСтТо

СсССАТИаСТТТАСсТОтТСсТаАЛаСаИТтс

АСТААСОААССАасаАда,астасст

АСаСсСТТтТсСОаСсСТтТАТТССТОСАСАТС

ТСТАСАСАТТТСАСТОаСТАСАТОС

СаААТТСТАССТОССССТСТСатТА

СсТоСАаССТасСсСАСТААСТасСса

САТТСТОАСаТТААасСссСстТСАасстТ

ТПСАСАССААТСТТААСАСасСАас

СТтТаСАСАСССТТТАСаСССААТАА

АТСТОАТТААСастТСсасАСССТАС атТАТТАССЯСОСЯИССТаАСТОаСАСО тлат"тассвдатастТтАТТСТТТС

СаТАСАСТСАСАССАССАААТТИаТтТ тлата,аватаст ст ТссСаАА

САААДАаТастТТТАСААСССАААдОа

ССТТСТТСАСАСАСОаСаасСАТТа стТапвАТСАСасСтТТоСаТсссАТТОа

ТОоСААДСАТТССТСАСТОСТОаСсСтТтТ сСстТосАсдАдатстасасса,ататст слатоссдататаастааоссто

СТСТСАПАССАИаСТАСССОАТСАТТ ,оСстТТапОпААдасСсСАТТАССТТТОС

ААСАДаСтТААТСАСАСАТСАОССА

АТСТСАаОСдасСасСАдДасаСсСААТТОаС тосостТасттсАТтСсТОаСсТТа,аст

АПАСААСТТТАТОСОаСТАТТААТТ аастТсАССтТАаСсТатоссос

АСстТотТаАаССАТОаТТСТОАТОаСАТ

ТАСТСАСССаТтттТассСАСТТОаССА

ССААаСсСстТАДасосСсататтассо

ТТСОАСТТаСАТаТатААСаОсСАТО всастАаСаТТСААТСТаАаССА

СОАТСАААСТСТ

ЗЕО Ю МО: 18 алатТаАТоСТаасСтТСАСАТТО

АДСОСТАаСаССАТОаСАТТАСАС

АтТасСАДатТоатАс,аасСсАасСАСаа есттас,асстастаассАдатасс вААдСсОаСсатаАдатААСаССстСацА дсстассттатастававасАТАС

ССсТОасСОАААДаССАСАТТААТАС

СасСАТОАдДаССасСАСАаСАТаСО сватаААдАдстТаасаАТТСТАаС

СстТсАсастТАстТааАтсаваСсасОо стотТалдтталастааттаасасоо

ТААТОВСССАССАДИаССТТАСАТ слатластаатстададаспсАСаА

ТСАаССАСАСТОСОСАСТОАСАСА ссвасссАаАСстоСстТАСса,асоАаас дасАатТаСОпААТСТТОСАСААТ ваасСаСААаСсСТаАТССАСаСААТ сосс,асатТатаТтаААСдАаОасСстТтТ сват СсаТАААаСсАСТТттаттса

Борошнистий ааАтТадлдсасвавасаТасСАААСА

Тгетріауа ргіпсерв червець Бактеріоми ССАТаСССТСТТОАСОАТАССОА виноградний ААСААТААДССАССИ,васСТААСТАС

Ріапососсиз сійгі стассдасХдасСасСиасТААТАСаИ таласСатТаСсаАаСатТААТСОИАА тСбАсТОСсССатАддасИатаСсаса сатааТттТасСссСААСАССССтТатТА

ААДАТССТАСОаСССААССОТАСТ сстасасдаатТТАСТастААасСтТ тадатТАтааСсАд,вдасасастТАаА

АТТоСсАСИТатАдасСсцаатадААТО

СаТАСАТАТСТаСАСОААТАССО

АдааСсалАдвасАдссооставас

САТСАСТаАСАСТаАДааСАСИадА дасатТаваОпАдаСААДАСАаСсАТТА вАТАСССТООаТАатосСАСаТссстТ

АААССАТОТСаАСТАСТТОТОСОСа сааслассстттсстса,атаА

СОАДасСтТААСОаСАТОААатТСадс сасставааАСтТАСОАССасСАДО

СТТАДААСТСАДАДаСААТТОаАСОа ваАСССасСАСАДаСастааАТОаА татасСАТТААТТССАТОСАдСОасСа

ААДААССТТАССТАСССТТаАСАТ сабапвАсАтсотасСсадаАдсас ваАддатасСстоОаАААаАСсААТоСа тТасАсАдаатТасСсТасСАтаасСтТатс тодастостатосаТаАСАТИаТтТТ васаптТААаИТСсССАТААСОДаСас

ААСССССатстТттТАаТтТасСтТАССА стаапаСАСТСТАТАСАдаАСтТас сааТОАТААдсСаавАдапАдаатТа свапАСсаАСаТСААаТСАТСАТОС

СсСстТтАТОСОИатТАааСаИстТСАСАС

СТСАТАСААДТОССТтТасАасСАдАС сатбасСсСААСстТосАс,сАда,адааада

СТААТСССАСААДАСССАасССССА сттсапАТТаСАСТСТасСААСТО вАатТасСАТОАДаТтСасААТСОСТ

АСТААТСИСТасАТСАССАТасСсСА сааТОААТАССОЯТТСоТоСастТсТтТ

СТАСАСАССасСсссСаТтСАСАССАТ свапАсТАдасСасСАТСАСАДОаСА аССТоССТААСССТАТОСТасСад дасАдаастасСссАддаатаааатТстТ

АТОАСТаИаааТТаААДаТСатААСА дасатласСбатАССапААаатасСа астасАТтТТАССТ

ЗЕОІО МО: 19 ниннБВЦІОВОВО ОЛЛТООСОООВОМІПІІТВВОО ВОЛЛЛМЛВОИІВСХЛЛОЛВІВВВЛВЛВЛТЛОВОЛОТОТОТОТОТИТОВОЛОЛОТОТОТООТИ

Мдапа 77777711 |БакеромиїЇ | 77777771

АСТТТААТОСТаСаСтТСАСАТТТАА

Сас асСОпАСАТаССТААСАСАТ

ССААаИтТТаААСаТТаААААТАТТТ

СААДОтТАасатТАТАааТаАатТАТА

АСАТТТАДАСАТАССТТАААСТТО паААТАССССОАТаАААдАТССИТ

АТААТАССИТАТААДААИТАТТТАА

СААТТААДДОСОСаааААААССтТоСа

ТтТастТАТААСАТТаТТАААТасСстТа

АТтТАСТттТаттастІ ТТТААСаИатАА

ААССТТАССААДСАСТТТОАТСАСТ асСстТАТТоТатТаАОасСАТОаТАТАСС

САСАТТааСАТТОаАААТААТИаСОС

Шкідлива АААССТотТАСОЯОСА,сСааСАа,сСАаТт комаха-хазяїн сапспААТАТТОСАСААтТадасаА

Мавзиїа депосерпаїпісоїа Масговісіев Бактеріоми АДОСТТОАТССАОСААТО СОС диаадгірипсіцшайтшв татассАТТААпасААДАСТатААА (Нетіріеєга: ССАСТТТТТТТТААСААТАДОСАААТ

Сісадеї дає) ТТТААТТААТААТТААААТТТТТОаА

АТаТтТАТТАААДАСААТАДИатАССаАд

СТААТСАСОЯтТаСсСсАаСАаИтасСа стТААТАССЯТОСОСССТОСсаАасСаТтт

ААТСИаСАТТТАТТОаСОаСОаТАААСТ

СТАТТСАСОаСтТасСтТТАААдАсСАТТ

ТАТАТТАААТАТТТАААТТАААТТТА

ААДААТаТтТАТАААТТАСТАТТААЛОС

ТАСАСТТТАСТАТААСАДАААдАСА

АТПТТАТОаТаТтТАаСАСТОаАААТИаС

СТТОАТАТАТААДАИСААСаТассадА

АпВСаАДАДасСАТТТТТСТОаТААТАС

ААСТаАСасТтТТАТАТАСОААДАОаСаИ таспатТАСаСАААСАсСсаАТТАСАТА

СсСсТаТАСТоСАСИСССТАААС

ТАТаТтТСААТТААСТАТТАСААТТТТ ттАЦСТОаВТатАасСтТААСсаТасатт

АААТТОАССасССстТааватАТТАСИаА

ТСаСААСАТТААААСТСАААИПВСАА тадСс,ввапАССАапСАСАдаСОоа тТапАТОаАТаТтТасАТТААТТСОАТО

АТАСаСОаАААААССТТАССТасСсс

ТТаАСАТаСТТАСААТТТТАТТаА

ААААТААДААИатТастТапсАААдАдада

СТААСАСАСАССвТаСтТасСАТОаСО татсатсАдастататсатаАаА татаватТААдатссССаСААСИА

ССаСААССССТАСТСОТТАаТТОасСтТ

ААТТААДАПСААСТТТААСАСААСАС

СТААСААТААИ ГТ ТАСАИапСАдОаА свапаАтТаАСТТСААаТосСтТСАТО асССсСсТТАТИаСаСАваасСТТСАСА

СатСсАТАСААТО,аТТААТАСАДАА

АаТттТасААТАТСИТААЧАТТадас

ТААТСТТТААААТТААТСТТАИатТттТто ва4АТтТатТАСТСТаСААСТСаАатА

САТаААДатТаспААТСОаСТтТАСаТААТ сеаСбавАТСсАдаСсСАТаСсСсасСсаатТаА

АТАСТТТААСТаатТсСТТатТАСАСА

СсСасСссСаТСАСАССАТОСАААТА

ААТСТТаТтТТтТТАААТаААаТААТАТ

АТТТТАТСААДААСАСЧИТТТТтТаТААС с,ааааТаААаТСатААСА

ЗЕО ІЮ МО: 20

АТАТАААТААДСЛИ ТТ ТаАТОСТас

СТСАСАТТаААСсастТАасСаатАТ аСстТТтТАСАСАТаСААДатТтСаААСаА

СААТАТТАААДаСТтТастТТААТАТА

АдатаасСсаААСаапаТтТаАаТААТА

ТАТСАДААСатАССТТАААДИТтаса ,СаАТААСТААТТаАААААТТАСАТ

ААТАССаСАТАТТААТСТТАСЧВСАТ

СААААТАСИаААТААТАТСТТАТОаС

ТТАВАТСОСТТОаАТАТСТОаАТТ дастАдатаатТтАаааТАААТаСтТтТ

АССААДСИаСААТаАТСАИСТтТАаста ат ТТАйСаААТОАТСАИаССАСАС лин СТАС Сет сесо 7 Іпаегіа іпзесіїсоїа САВІ славіорієга Бактеріоцити ААТАТТОСАСААТОССАСАААТСС

ТОАТССАССААТАССОЯСИЯТаАдаИт

САТаАдАДИааСсССсСТТАаВааТСаТтААА

АСТСТТТТаТттТАсСспАААсСААдАТАА

ТТТТАААТААТАТТТААААТТОаАТО

АС,ВИаТАССТАААЧААТААДИаСАСС вастТААСстТАсатассАасСАасСсСа

СсаатТААТАСЯТАОСаатТасАдасс

ТПААТСОСААТТАТТаСаСаТатААА слатасСсатАлаастТатТТАТАТААДИаА

ТАСАТаТтТадААТАСТТААИаСсСТтТтТАА

СТТААСЧААСТаСАТТТАТТАСТИаТтТТтТ

ТААСТАЧАСаТТТАТТАПВЙАлдИададАа тТапААТТ ТТАТИатТатАасСАаТтаАА

АТаСсСатАаАТАТАТАААИСААТАТ боАТОСсССаАдАасаТасАХастстас

ААТААТАСТОАДСОЯСТОАаасАсСа

ААдасатасапАаСАААСАааАТ тТАаАТАСССТОСтАатоСАСасс

СТАААСТАТаТтТСсСтТАСТАСТТАТТАА

АТТАААДААТААААТТТАСТААСатА

ССТААСаСАТТААИТАпАССасСс тавапАсСТАССАТСасСААСАТТА

АААСТСАДАааААТТОАСсасвассА

СоСОаСАСАДОСОСатТасАаятадтат ваАТТААТТСОаАТаСААСАСОАДАДА

ААССТТАССТАСТСТТОаАСАТИаТТ

ТаСААТТТТАААСАААТТТААААаИТ

ССТТаАДАДАаААССААААСАСАС стастаСсАТОССТатоатСАОастТ сатататаАвАтТаТаттасатТАА атоССасСсАдСсадаСасСААСССТТ

СТТАТТАТТТОСТААТАААААСААС

ТТААТАДОАСТаССААТОАСАДА тпасвдавпАдАлаатаавааАТаАСат

СААСТОСТСАТОСССсСтТтТАТОДИТ

АСааСТТСАСАСИТСАТАСААТОИаА

ТАТАТАСААТаИСИаТАССАААТТТОа

ТОААААТИДИаССААТССТТАААИТ

АТАТСТТАСТТСОааАТТОаТАаТСтТ ,ССААСТОСАСТАСАТаААССТТаС

ААТСаСТтТАСТААТСаСасАТСАС

САТОССОЯСОасСТадААТАСИТТСТО ваатстТатАСАСАССсасСсСсаТтс

АСАССАТаСААаТадгаТтТТТТАССА

САААТТАТТТаТТТААССТТТАТТО

САААДАДААДАТААТТААСИТтТАСААТТ

САТОАСТОСОСТтТаААдатТСаИатААс

ААсатАаасСАатТАтТСасАдаатТас вастасСАТТАСАТТТТААДАТ

ЗЕО ІЮО МО: 21

Віаррпогіпа сіті, азіатська .

РготеїІа аппашга цитрусова Бактеріоми листоблішка п

Альфа-протеобактерії | (ГГ

ААТОСТОаССОаСАааСсСТААСАС

АтТасАадатсасдасСапйАСААСатт

СААддсста,аталасСсааСадАСас стТаАаТААТАСИТОаАСААТСТАСС

САТСССААСОИТаАТААСАТАаТСА

АСАССАТатТСААТААСОИТАТОАТТ

ССТаСААДСАСИаИтТАААСАТТТТАТС

Цикада савапАтТасАтТаАдасСсТСАСаТстАСа

Н . , . АТТАасСтТАатТТааТОаАСАТАДАДОа одакіпіа Рісегоргосіа Бактеріом СССАССААССССААСАТСТАТАС зетісіпсіа СТОСТСТОСААССАТОСАСАССС

АСАТТОИЙСАСТаАаАСАДОааСос

ААСССТСТАДасАсСааСАасСАатТ вАасСААТАТТаСаАСААТааасСат

ААИССТаАТССАаССАТаССаТасА тТОАаТаАТТаАдАааТТСсСААСааА

СТаТтТАДААСТСТТ ТТ СТоСАСАаА

ТСАТААДАТОАТАаТАТСТОИатТИалАт

АТААССТОСООССААСТТСОТОС

САССАОССОСООТААТАСОАООО

САССОАСТАТТОаттсОаттТтТтТАТТ

СВОССТАААСОСТОТСсСАССТТОа

СТААСТААСТТААСААСААААТСТ

ТОАСАТТСААССТСАТААССТТСО

СТТААТАСТАСТААДОИСТССИАОСТТ

СОАТАСАСАСАААССОСААТТССО

АСТОИтТАСАССТОАААТТССТТОАТ

АСТТОСАСОАДАСАССАСАСОССА

АСОСОСТТТОТСАТАССААОСТО

АСАСТОАДАСАСАСОАААССАТОС

СОСАССАДАСАССАТТАСАТАССС

ТОСТАСТССАТОСССТАААСОТТО

АСТОСТААСАСТТССАТСААДОССА

САТОСТАТОАТССАСОАТТОТАСА

ССТААСОССТТААССАСТОСОСС

ТОСОТАТТАССАССОСААССТТА

ААДАСТСААДАСОААТТОАСОСАСА

СССОСАСАДОСОСТООАССАТСОТ

СатТТААТТСОААОСТАСАССАДС

ААССТТАССАОСССТТОАСАТАСС

АТООССААССАТССТОСАДАСАС

САТОТТаттсААСТТАААСССТТа

АДАТОССАССААСАСОТОСТОСА таостатТТОотТсАСТТСОТОТСОТО

АСАТОТАТОСТТААСТСССАДААС

СААСАСААСССТСАСССАТАСТТО

ССАТАДАСАСААТТОССТТСТСТА

ТОССТАСТОСТААССТААСТТАСА

СОВААСОТОАДОСАССАСААСААСТ

САТСАТОССССТТАТОСОСТОСО

ССАСАСАСАТОСТАСААТОСТОС

ТТАСАДАСАСССОСААССТТОТО

АСАССОАЛИСАААТСТССАААСАС

САТСТСАСТССООАТТОТАСТСТО

СААСССОДСТАСАТОаАДАСТАССА

АТСастТАСТААТСОТасАтТсСАСсСА

ТаССАСОСТОААТАССТТСТСОО

СтТСТТОТАСАСОССОСССОТСАС

АССАТОССАССТТСОСТОСОАТС

СААСТСААСТТАСССТТОАССАСА

ТСТТООСААСТОАСССА

ЗЕО ІЮ МО: 22

АААТТТОАСАСТТТОАТОСТОССТ

САСААТОАДАСОСТООСООСАССОС

СТААСАСАТОСААСТСОААСОСА

СТТАТАТТОТАОСТТОСТАТОСТА

ТААСТТАСТОССАСАСОССТОАО

ТААТОТАТАССААТСТАССТАСТА

Комар СТАСОСААТААТТатТОСААДАСОА . СААСТААТАССОТАТАСОСССТАС

МоїІБасніа 5р. мРір Сех | Бактеріом СССССАААААТТТАТТОСТАТТАС ачіпдмеїазсіаив АТОАСССТАТАТТАСАТТАССТАС тТаатавОатТААТАОССТАССАА

ССТААТОАТСТАТАССТОАТСТОА

САСОАТОАТСАОССАСАСТОСАА

СТаДСАТАССОСТСОСАСАСТСОСТА

СОапОоАООсСАССАСТОССОСААТАТ

ТОСАСААТОСССОАААОССТОАТ ссАдасСАтасСаСАТаАДатаААС

ААдсассттта,асваТтТаТтТАдА;астст ттАОСТОаАаСААаАТААтТОАСИаИТ

АСТСАСАПАдАСААстоСтаастА

АстосатасСсдаСАаа,аСсСасаатА

АТАССЯССсСАасСАСастТАасСаТттТАТТ

СбаспААТТАТТаСсОССОСТААдАсааас асатааасСТасТТААТААСТТАДА

АСТОАААТоССОадассСТТААССТТ

СаААТТаСТТТТААААСТАТТААТО

ТтТАаАаАТТаАААпдасАтТАаАОас

ААТТОСТаАТатАСАсСаИатААДААТТ

СаТАААТАТТАССАСасСААСАССА стаабаАдАд,сасаТстТАТСТОаСТТ

САААТСТОАСОаСтТадАасСасСаАА ссасстасацпАаСАААСАааАТТА вАТАСССТОДИатТАСсТоСАСсасСтТаИТт

АААСаАТОаААТОТТАААТАТОаСИаС

АСТТТАСТТТСТаТАТТАСАССТАА васСаТТАААСАТТОССОЯССТаИСО

АСТАСОаСТСОаСААСАТТААААСТО

АААСОсСААТттТалдСсааасаАСССасСА

САДаСссатасАаасСАта,атаат ТА

АТТСОАТаСААСасСсаАААДААСсСТТ

АССАСТТСТТаАСАТОАДААТСАТ

АССТАТТС,ААдсасАтТАаа,асаТоа ттсаасССасСАТТТТАСАСААДИТ сттасатаастатоатодастос татсатАвАтаттаасТТААстТо

СаСААдСсадаСсасСААСССтТСАТС

СсТТА,ТТасССАТСАСатААТаста

АСТАСТТТААДССАААСсТассАата

АТААДСаСТОСсАСОСААСсатасацАТ

САТаТСААаСТСАТСАТОСССТТТА таслатавасСтТАСАСАСатастА

СААТОСТаТСТтТАСААТОССЯСТасС

ААДСИи ТТаСасААДаССТАДОаТстААТ

СССТААДДАСАСАТСТСАИаттСаасляА татАСТСТаСААСТОССАСТАСАТ

СААСТТасСААТСастТАаТААТСИТтТ ааАтТСАаСАТасСсСсАСаатаААТА са,атстса,ааватстТатАСАСАСТО соСбатсАСасСсАтТаасААТттаат

ТСАСТСОаАДаСтТААТаасСсСтТААС

СсаСАдДасСААдОасСАСсСТТАТТТАдАатТ саспАТтТсАаатТаАСстасастТаААдат

СатААСААдаатТАаСАаТАаасаА

АТСТаСсСАаСТасАТТАССТОСТТА

ЗЕО ЮО МО: 23 шнннЮ6иВИ ВВ ІЛ

Васієюідееєв.ї///Ї!771111111ГГ

ААДОСсСАСАТАТТССААССАСАССТ тоссатТАСссатТАсСсттатТтАСаА

СТТАаСССТАСТСАТСААСТТТАС

СТТАпаСАСАССАСТОаААСИаАТТ

Огіпига адіазрідісоїа Щитівки Бактеріоцити |АСТаАСТТСсАСатАСССССаАСТ

СссАТаССТТаАСававаСсааТата

ТАСАДОАСТТСОСАСААСАТАТТСАС с,еабасСАТТаСТаАТаСассАТТ

АСТАаСОАТТОСТастТТСАТАСАС ді

ТоСААТТаСАСАСТОСААТСССОАА

СтТаАсаАСстТасттТАпАсСАТТАаС

ТоСстТаАТСАСССАСТООССТаСОоС ттатААССАасССАТТатТАасСАСа тататАаСССААааСАТАСАСас

САТаАТаАТТТаАСАТСАТОСССА

ССТТОСТСАСАСТТТАСАССИСИСА стттаттТасАаатТоооСаастТТтТА соСпАТааСААСТААСААТАСаСИС сттасастТоатТТАТАССАСТТААС

САДАСАСТТСАСАССАСОСААСТОаА

АПСАСААССАтТасСсАаСАССТТатАА

ТтТАССТСИаТАТАСАСТААССТИаттт

ССАаСТТАТТСИТААТАСАТТТАА соста,стТААдсаттостсасСатА

ТСАТССААТТАААССАСАТОИСТОС

АссасттатТасСссААСССССаТтсСА

АТТОСТТТаАСТТТСААТСТТаСа

АСсСТатАСТТОССАССЕСТтТасАТСАСТ

ТАТСОСТТТСаСТААдаССАСТОадА

ТАТСИТТ ТТ ТоСААТАССТАСТаА тТсАТССТТТАасСаСатацАСтТАС

СсАапасТАТСТААТОСТОИТТтТасСто сссАсасттсатасСсАСТОАДОаСа

ТСАаТАААСАТТТАИСААССТаСс тсастАТССатТаттСстТатАТОАТ

АТСТАТаСАТТТСАССасСтТАСАСС

АТАСАТТОСАСАТаСТоСААТСТТ

АСТСААССТТТАССАСТАТСААТАС

СААТТТТАСАСТТАДаСстТатАдас

ТТТСАСТАСТОаАСТТААТАААСАС

ССТАСАСАСССТТТАААСССААТА

ААТССО,ААТААСОЯСТТататсСАТО са,ататассассастастаасСАС ваААТТАаССС,АСАСТТАТТСИТА

ТАИТАССТТСААТСТОСТАТСАСС

ТААСАТАТТТТАТТТСТАТАСАДААД

,ССАС.ТТТАСААССТААДААСАССТТ

САТСОСТаСсСАСОЯСОаАСсОатАааСтТас;ь

ТСАСпАСТ ТТ оСТоСАТТОАССАА

ТАТТОСТоАСТОАСТОССТОССаИатА сзваатсотастосатТатстСАатА ссаататасАааТАСАСССТСТТ пасСссСссСсСтТАСТОАТСАТАСТСТТ асатТАпАдасССАТТАССТСАССААСТ

ААСТААТСАААСсасСсАаастоАТСТ

ТТТасСссСАССТААСТТТТААТАААДС

ССТоСАТаСАСАААСТТТАТАТТА тасасааАТТААТСАСААТТТСТТО таасСтТАТАССССАаСААААСаИТтА

САТТаСАТАССИТатТТтАСТОСАСССА тсассаатТСассСапАСАААТТАА

АААТТТТТСОСЧаАТаССССстТоаЦАСТТ аСбАТаОТаТттТААЛаСсТОСССасСтТАС

СсаТтТААТТотТаАдаССАасАТСААА стоттоаттатАа

ЗЕО ІЮ МО: 24

Синьо-зелені СТСАаОАТАААСОаСтАаасааАсцс зЗицісіа тие|Іегі цикадки й Бактеріоцити | аСТТААСАСАТаСААСИТОоИСАСаИс декілька інших ССАССАААААТААТТАТТТТТОСС видів цикадок вАСсСсааСАААдСапйатаАаИтААТА

САТАСИТААСТТТОСТТАТОаСТОаА

СОВААТАаСсСтТадайАААСТТаСА

ТТААТАССТСАТААТАСААТТТТТТ

АСАДАСАДАААТТатТТАААсаТТтТ

АТТАТОССАТААЧСАТАСИасСаИТтАТОа

ТОСААТТАаТТАаТттТОааТтААСваИтА

АТааСТТАССААСАСОаАТаАТТа тлассасасстала,адававасСатТ

ТоССССАСАТТааТАСТаАСАСА

СООАССАААСТТСТАСаавАдаас тТаСАСТОАССААТАТТОСТСААТа пАаспАААСТСТаААССАаТссСАСТ ссаса,атТасСАапАТаАААСАдАас

СТТАТТаСТТатАААСТастТтТттТат

АТАТОаААТААДААААТТСТААТТАТА

САДАТААТТаААСаТААТАТАСИА

АТААИСТАТСОАСТААСТОСОТИаТаСо дасдатсасо,атААДаАСАсАсаалА

ТАСАДОСОаТТАТССИаСсСАТТТАТТО ват тТААдасиИатасатАасасСаат

ТТТАААДИаТтТСАаТАСаТОаАААТСТТ

АААСИСТТААСТТТААААСТастАТ

ТОАТАСТОаААААДАСТАаАСТАдИаС тадпАатТААСтТавААтТататаИат аТАаСааТОАААТОаСАТАСАТАТС

АСАСАСААСАССИаАТАаСаАААс

СААДСИТТАСТААСССТАТАСТОаАСО

СстТОАаТСсАСИАДАдДасСАтасвасис

САДАСАСИаАТТАСАТАСССТОааТтА

СТоСАТаССИаТАААСОАТОаАТСА

СТААСТАТТаССаТ ТТТАТАСИТТа

ТААТТСАСтТаатТтаААдасСапАдАсТ

СТТААОТаАТССАССТОадасАсТ

АСОВАССаСААдсаТТаАААСТСАА

АдааААттаАдСса,асвавасСССОаСАСА

АТСЯССтТапаАасСАТИаТОаТТТААТТ

СОАТОАТАСАСОаАДОаСААССТТАС

САДСАСТТАААТатАСТАССИААТА

ААТТаСААДАСААТТТАатТСАДаИаса

Адоа,апвАатТАсСААдсатастасСАТаС патсстоластосатасСсатаАда

СТаТтТААДОСТТААаТсСсСТТТАААСа

АЧВСаСААСССТТАТТАТТАСТТОС

САТСОСАаТААТатсАасаасАСТо

ТААТАДОДСТОАССОСОааСАДОаСС сда,адаасда,аатасавАТаАСатТо

АААТСАТСАСИЯаСССТТАСИаТтТстТтТ ваапССАСАСАСаТасСстТАСААТИаА тоааТАСАДАдасасАасСсаАстТас аТаАССАпИаАдаСАААТССАСААдА

ВСсСОаАТСТААДаСттСаспАТтТасАС

ТСТаАААСТСОАСТОСАТОаАДаСТтТ

СОААТСаСТтТАаТААТСИТОаСАТСА вСсСАтТапСАСастТаААТАТИаТтТтОо сс,апасСсСсТТаТАСАСАССаСссСа

ТСАДдаССАТаСЧААаТТасяААаТтА

ССТААДСТТааСТТСасСТтТАССТАДО

СТААДСТСТААТААСТОАСОаСаССТАдОа

ТСИаТААСАДОСИатА

11111111 БОЮ МО:25)7777СС

ШИ

Дріжджеподібнісимбіонтиїд 77771111

АСАТТААДИССАТаСААаТтСстТАДаИт

АТААДОМААТСТАТАСМОТОДААСТ

ССаААТОаСТСАТТАААТСАСТТА

ТСОаТТТАТТТОАТАСТАССТТАСТА

САТаСАТААССИатТОаатТААТТСТАС

А,СТААТАСАТаСТАААААСССССИ

АСсТТсапААДСОаасСтТатАТТТАТТА

САТАДАДАДААССААТаТасссттоас састосттОатТаАТТСАТОАТААС

ТТААСОАДАТСОСАТОСССТТОаСО сосвасСспАТОСТТСАТТСАААТТТСО тТасссСстТАТСААСТТТСОАТОСТАС

САТАСТаСССТАССАТОСТТТТАА сааатТААСсСасааААТТАС,СИСаТТо вАТТОССЯСАсСАаСасвАа,СсСстТадаА

ААСОСИаСТтТАССАСАТССААДИ,СААС

ВСАаСсАпасаСасСАААТТАСССА

АТСССОАСАСОЯОСОСАСОТАаТтоА

СААТАДАТАСТОаАТАСЬССОЯСТОТ тттаватсТТатТААТТаСААТОАО

ТАСААТТТАААТСССТТААСИалас

ААСААТТасСАасСа,аСААа,атстоат асСсАдасАдаоСасСааЙтТААТТССАС

СТоОСААТАЯССОТАТАТТАААСТТа тТТасСсАаТТАААААастоатАатта

ААССТТаСООЯВОССТОССТОССсСсваТт

Міцетома між ССОССстТААССЯаСса,ататАСсТасто зЗутбіоїарнтгіпа риснпеїї, | Жуки-точильники передньою й ссессссвасстостстасвса контрольний штам зЗіедобійт середньою дассасАТтасссттсАСстТацвИаТа

СМм9740 рапісеит кис татовассААССАСааАСТТТТАС

ТТТОАДАДААТТАСАСТаИтТСАдА аСсАааССтТАТаСТоСсСААТАСАТТА

ССАТОСААТААТАСААТАССАСИТт ссаатСтТАТТТТОатТТасатТТстТА вОАССассСаТААТОАТТААТАСС вАТАСТССОССсСайСАТСАСТАТТС

ААТТаТтТСсАСАСаИаТаАААТТСТТОаС

АТТТАТТОААСАСТААСТАСТОСО

АААаСАТТТасССААасСАТИаТТТТо

АТТААТСАИТОААСОСААдАСТТАаС вОаАТСОААпАСаАТСАСАТАСССИ

ТССТАСТСТТААССАТАААСТАТО

СсСОАСТАсСасАТООСОваСаАТОТТ

АТТАТТТТОАСТСОЯСТСОСасАССТ

ТАССАСААДАТСАААССТоТТТасаИТт тотассаавАаТАТаСТСасСАДа

ССТОАААСТТАААСАААТТОдСИаС

АдаСасСАССАССАСОАХИаТОаАаС

Стаса сСТТААТТТОАСТСААСАС вОааОаАААСТСАССАпаИТтоСАСАС

АСАТТААИСАТТОАСАСАТТОДИаА аСстТоТсТТОАТТАТОТОСОСТОаС таавтасАдтаассс,тстТАСсТТа ставдатаАТТТатстТастТААТТ аСаАТААСаААСОАСаАССТТААС

СсТастАААТАСССССЯСТОоСасттт сос,ссоесса,астаасСТТсТТАсАС саАСТАТССЯИаСТСААлассСаАТас

ААСТттТаАдааСААТААСАцаИтста таАТИАСССТТАсСАТаИТттоТасас сасАдс,сСасСасСтТАСАСТадсСАаА ,ССААСПАСаТАААТСАССТТвас

СапААХс,СаТСсТапатААТСТТаТаттТА

ААСТСОТаТССТОСТОСсСОаСвАТАСА

ССАТТаСААТТАТТаСТСТТСААдС вАааААТТОСТАатААласСсасСААс тТесАТСАССТТаСсасСТаАтТТАСсИТо ссТасСсСсСстТТаТАСАСАССИЯСОС атастАСТАСССАТТаААТОЯСТ

СаатадааостсааАстаасАс дасадсаттаасСААСОАСадсос датассасАААаТТасТСАААСТ таатсСАТТТАСАСОАДАСТААААСТ

СатААСААдаатттоСатАааатаА

АостТаСасААасАТСАТТА

ЗЕО І МО: 26 тТАССТОСТТаАТттоТасСсАИатТАаТт

САТАТаСТТатСТСААДАСАТТАДО

ССАТаСААИТСТААаТАТААИСАА

ТСТАТАСОИТОаАААСТаСаААТО

ССТСАТТАААТСАСТТАТССОТТТАТ

ТТОАТАСТАССТТАСТАСАТОСАТ

ААССО,СТаа!тААТТСТАСАаТстТААТ

АСАТаСТААДАААССТО,АСТТОСОА

АДОСИСТатАТТТАТТАСАТААДАА

ААССААТОИаСССТТОССЯИСтТоСтТ таатаАТТСАТОАТААСТТААСОА

АтсасатасосттасасСсавасаА тТастТСАТТСАААТТТСТассстТА

ТСААСТтТсаАТОаатТАасаАТАаТОа аоСтТАССАТАСТТТСААСасатА

АсСсапаААТТАСаатТтосАТТОС садсАаасасвдасстаАаАдАСас

СТАССАСАТССААДСОААдсасАас

АдвдарасСаСАААТТАСССААТОоСС зЗутбіоїарнгіпа Коснії, Жуки-точильники вАСАССсССОСАСатАаТтаАСААТА контрольний штам СВ5 | азіодетта Міцетома ААТАСТаАТАСАСКЯЯССТСТТтТас 589.63 зепісоте аТсТТатААТТасСААТОАСТАСАА

ТТТАДАТСССТТААСОДОСААСААд таеадаосасадлдатстаатассАс

СсАаасС,аСасТтААТТОСАастосСА

АТАССОСТАТАТТАААДСИТТаттТасА

СТТААААдАаСстоаТатАаТТаААССТ тасасстасстасссаастосас

СстТААССОСОЯТОатАСсТОДИСтТОоСасо ссасостттостстасасвАасс вСАТОСССТТСоАСТОСОаТататс сасаААССАааАСТТТТАСТТТОаА

ААДДААТТАСАСТОТТСААДАОСАСО

ССТАТаАСТОСААТАСАТТАС,САТО

СААТААТАвААтТАасСаАаСса7ататаст тТстТАТТТТаТТОаТТтоТАасАСо ,оСатТААТОАТТААТАСОИсасАТАСТ ссссаасСАТСАСТАТТСААТТИаТ

САВДасСтТаАААТТСТТОасСАТТТАТ тТаААСАСТААСТАСТаСапАдДАасСА

ТТТаССААСОаАТОТТТТСАТТААТ

САТаААСОАААсСТТАасасАтТо

СААпАСаАТСАпАТАССаТтсатА

СТСТТААССАТАААСТАТИАССИАС тТАаааАтоасасСсаАТОТТАТТАТТ тО,АстсастоаасСАССТТАСИА

САААТСАААСТоТттТасаТаттстас сюавацсадатАатаатсаСАдасстах

ААСТТАААСАААТТадСаалААдася вСАССАССАССЯАСТОСИАСССТИас васттТААТТТаАСТСААСАСаваа

САААСТСАССАасТоСАСаАСАСА

ТТАДОСАТТОАСАаЧАТттадОаАаТст

СсТстТтаАТАТОТОСТОаТОас тасатассосаттсттлаттаата слатадттта|атстТастТААТТОаСа

АТААСИААСОАаАССТТААССтТас

ТАААТАаСССсОсСатосастттаас сассастаастСсТТАвАвасА

СстТАТССЯССТСАдассСсаАдТааААс ттадвасСААТААСАССТОоТаИатахд тасссСсттАааАТатстасассСас

Адс,асасСсасСтТАСАСТаАСАаласс

ААСсаАаТАСАТСАССТТООСССОС

АдастотапатТААТСТТОТТАдДАС тотатсатастапааАТтТАаАдаСА

ТТаСААТТАТТаСТСТТСАдСада

СААТТОоСтТАаатААдасСсасСАдаИатсАТ сласттасастаАТТАСа7атосстТ

ВоССстТТТатТАСАСАСССЯСОССИТо

ССТАСТАССИАТТОААТИаасСтТСА сталдвасєстсаадстаасСАСАС садсаттавсСсААСаАСадсссСАс тассаапААдАдатТСаТСАААСТТа

СТСАТТТАсСДасдлялдаммМмМААатс

СТААСААСЬЯТ ТТОСатАаатаАА сстасапАдАааАТСАТТА

ЗЕО І МО: 27

Ша симбіонт розташування

Бактерії, що розщеплюють фенітротіон дат таАТоСТаасСстТСАСАТТИадА сеастаасцсасСсАТассСтТТАСАСАТ вСАдатосаддсавасАасСАСацвс сасСсААсостаатасссасАаатаас вААСОасатадатААТАСАТСИаА дсастатостатастаассасАтТАС сосааСспААддаССасАТТААТАС

Віріопив СасСАТАСаАССТАдаааАсАААс

Викпоїдетіа 5р. ЗЕА1 едевігів Кишка ссассалтотсасасстсасСас р тТАТАСССССДСССОАТассСАСАТ тластааттаатасайтТАААаас

СТАССААСЯСОаАСадтстатАас таатотададааАСаАССАассСА

САСТаСОИАСтТОАаАСАСаасссА вАСТОСТАСССОсОсАсасАасАатиа сааААТТТТасСАСААТасавиасСА

АСССТОАТССАаСААтТасСса7сат атТатоААаАдАасасттссесваттат

АААаСАСТТТТОТОССОасСААДАСАДА

АСТТСатоСсСтТААТАТОСАТОаСАС вАТаАСОсСТАССОСААСААТААС

СсАССОССТААСтТАСОаЯтТассАасА ассасаатТААТАССТАОСОССТасо

АССОТТААТСИСААТТАСТОССЯС атТААДОССЯТОаСОЯаСАасСа7асаавтосто

ТТААСАССОАТОТОАААТССССО вастТТААССТОаСадАСТОСАТТОИ атаАдстааСсаса7астттадатата асдадасоааатТАСААТТОСАСОИ татаасСАаТОАААТаССстТАаАаА татаадасААТАССаАТассадА сваслдасссоСстапасСсСААСТАСТ

САСаСТСАТаСАСЧАААОСИаИтаа вОАаСААДАСАасаАТТАСАТАСОС таатАаТСсСАСОаСССТААДАСОСАТ

СТСсААСТАСТТОТТасвацАТТСАТ

ТТОСТТАСТААСИаИТтАасСТААСаСа таддаттаАассасставасАатА

СааТСаСААСАТТААДААСТСАдДАС вААТТаАСЯСОСаАСССОасСАСААС севатТасАтТаАТатТОаСАТТААТТСОС

САТаСААСасСаАААААССТТАССТ

АСССТТОАСАТОИТСОСААСССТ астадддаатасваватастоцАА

АаАаААсСсасСасСсАсАааатасто

САТОССТОаТСОСТСАЯАССТССТаИто атаАпАТаттаастТТАХатосссо

СААСсСОСАасСсасААсссттаТатостт пСТТастТАСаСААСАасСАСТСТАА сададстасСсастаАСАААССас давААдсатавоОпАТОАСаТатсСААС тТеоСстТсАТОССССТТАТОСОТАСС

ССТТСАСАСИТСАТАСААТОСТОС вААСАсСАсСааттассСАдаССасСа дастааАдасСсСААТСССАСААДАС

СсоАТССтТАсСТоСасвсАТСЯСАСТО тТаСААСТООСАСТОАСОаТОаААОСтТа

СААТСаСТтТАаТААТСОСОСАТСА аСсАТОССОСаатТОААТАССИТТОС сеаатсТатТАСАСАССООССССИтТ

САСАССАТОСОСАСТОасаТТТСАС

САСААИТАСИТтАассСстТААССасА дасдаачОСастТАССАСОСаТас сСАТТСАТОАСТОСКЬІИТаАдИатса

ТААСАДОССТАСС

ЗЕО ІЮ МО: 28 аСсААдссСсТОСсСтТаасасАХ,атаасСаА

АсаватоОАдатААТАСАТССОСААС састатостатаатасассасАтТАаСс

СсоаСОпАААаССааАТТААТАССО

Віропив САТАССОСАТСТАСИСААСАААОаСО

Викпоїдегтіа зр. КМ-А рейієвігів Кишка ссаавАтТостсосасАсстсаСас

ТАТАСССОКССаваСсСаАтТассСАСАТ таастааттсатапаатТАААсОас

СТАССААСОСаАдСссАтотатАас таатстададасАССАССАасССА

СсАСТаССАСТОАСАСАСОСОСССА вАСТОСТАССОССАСОЯСАССАаИто васААТТТТасАсСААтТасасасА

АСССТОАТССАССААТОИСССЯСИТ атТатоААдаАдАлсассттсааватто

ТААДДИСАСТТ ТТОТССОСАдДАСАА

ААСОСЯТСТТОаСТТААТАССТОаАСаС вОАТаАСастТАССасСААСААТАА асСАССООСТААСТАССЯТИАССАаС да,ассасСсастААТАССЯТАССССТас вАССаТТААТСОаСААТТАСТОСО

СсаТАдАасатасасаавасаатст

СТТААВАССОаАТатаАААТСССС вассСсТттТААССТОСОСААСТасАТТ сатаАстасСсаасасттталстат сваслдсдасасастТАЧААТТССАС статАаСАаЙТаАААтТасСсатАсаАС

АтатаайАССААТАССаАТаасаА дасСсАдсососСстасасСсСААСАСТ

САСаСТСАТаСАСЧАААОСИаИтаа вОАаСААДАСАасаАТТАСАТАССОС таатАаТСсСАСОаСССТАААСОСАТ

СТСсААСТАСТТОТТасвацАТТСАТ

САТаСААСасСаАААААССТТАССТ

АСССТТОАСАТОСТСОаСААСТСТ астадсасатасАсатастосАА

АаАаААсСсасСасСсАсАааатасто

САТОССТОТСОСТСАССТОСТатТо атаАпАТаттаастТТАХатосссо

СсоАТССтТАСсСТоСасаАТСЯСАСТо тТасСААСТООСАСТОАСОаТОаААОаСТО

САСАССАТОСОСАСТОасаТТТСАС

САСААИТАСИТтАассСстТААССасА дасдаачОСастТАССАСОСаТас

САТТСАТаАСТОСОСТадА9ат

ЗЕО ІЮ МО: 29 аСсААдссСсТОСсСтТаасасАХ,атаасСаА

Віропив СсоаСОпАААаССааАТТААТАССО

Викпоїдегтіа в5р. КМ-С редіевігів Кишка САТАСОАССТАДСаИасСАСаАддаИТсс сасаАтоттсОсОАсстсасастА таассас,ваССОАтТассСАСАТТА астасттаатапваатТАААсасСстТ

АССАДСССИаАСОаАТоТаИатАаста стотададасАСадсСАассСАСА ставаАСсТаАаАСсАСаассСсСАаА стостТАСсоссалдсасАаасСАатасся

СААТТТТаСАСААТОСОССИСААС

СсСстТаАТССАасСААтТассасатат стТаААваААаа,аосттсасваттатА

ААСИСАСТТТТатТоСасдАААСАдДАА

СстсаАастТААТАСССТТасАс вАТаАСОсСТАССОСААСААТААС

САССССТААСТАСОЯТасССАССА ссса,аСбаастААтТАСОаЧтТАаасатасс

АССОТТААТСИСААТТАСТОССЯС стТАДАСССЯТОАСОЯСАаСаСсасатоста

ТТААСАССОАТОТОАААТССССО васСтТТААССТаасСААСТОаСАТТО стаастааСсАааасттталатата сСдадсааацвиаТАСААТТСОСАСаИ татаасСАаТОАААТаССстТАаАаА татавАдасААТАСССАТааСОАА сасла,асосостапасСсСААСАСТа

АСаСТСАТаСАСААДОИЧСИаИТтасцся

САССАААСАСИаАТТАСАТАСССТ ватАатсСАСаСсССтТАААСадта

ТСсААСТАСТТОаТТасСасАТТСАТТ

ТОоСТТАаТААСатАасСстТААСсасат вААХСТТаАСсСсСОосСстТасасаАатТАс ваТСасСААСАТТААААСТСАААС вААТТадСсаасаАСССасСАСААС севатТасАтТаАТатТОаСАТТААТТСОС

САТаСААСасСаАААААССТТАССТ

АСССТТаАСАТОСТСОаСААСТСТ сстададсатасАсатастосАА

АдаАдаАдАсСссасасАСАааатаста

СсАТОССТИТО стсдастсататосатОАсАТаИаттТ сааттАддатоССбасСсАдСадасас

ААСССТТаТОоСтТТАСТТастАСОС

ААСАССАСТСТААИаСАСАСТОСС сатаАСААдАССсвадааАддаатас всаАтТадСатСсААатосТсАТоас сСсттАТОСОтТАааССТТСАСАСа

ТСАТАСААТАСТОССОСААСАСАСИ сттассддассасасаасатасАас

СААТСССАСААААССОАТСаТтАат сСсапвАТСОСАатстТасААСТОСА стасатТаддастаайААТСОСТАС тТААТСОССЯСАТСАССАТаИассаса стТаААТАСЬСЬТТОССОЯОСаИтстТТатА

САСАССОЯаСССатсСАСАССАТОСТО

АеатТасатТСАССАСААатАсаТт дасстТААССТаСААдАааадаавИсСа

СТТАССАСО

ЗЕО ІЮ МО: 30 нин Я ПОЯВА

Бджоли.

Бджола вАСАДаТТТОАТОСТОасСТСАСАТТ медоносна (Арі вААСОаСсТОаСсассСАТасСсСТТАСА зЗподдгаззеї Іа амі теїїега) і Клубова кишка | САТаСААатТоаААСаасАасАса

Вотвив 5 саадасттастототастаасаАд рр. СТОССОДАСОССТОАСТААТОСА тоапААСатТАССОАатААТааваИся

САТААСТИтТоССАААСаИлтастТ

ААТАССОСАТАСЯСССТОАДОСОСЯ вААДАДСССОСССОСЯСаАТоаАААвАССТ сеСатТТАТТТаАааСсоеССсАТаТ тевАТТАССТАСТТОаТаСасатА

ААааССтТАССААСИасСсаАСаАТОоС

АтТАасосаатстОАОАасСАТОАТС

СсОССАСАТТаааАСТОАаАСАСО

ССССАААСТОСТАСОЯСОСАсасАс

СсАатТапОСААТТТТОСАСААТОС сеопААСССтТаАТССАаССАТас сеСсатаТСстТаААвААаасСстТТоо ват атТАдАдааАсттта,аттАасо

ААСАДАддасСсаси Та ТТААТАСС ядтотаавтасСтТОАСасСтТАССТААА

СААТААДИСАССООСТААСТАСИТ соСАааСсАдаСсСаСастААТАСИТА савстассАдасСОсТТААТСааААТТ

АдставаСатТАААлаСаАаСаСАаА

Сайт тТААТТААИатСАаАТИатадАА тобобСОАаСТСААСтТтассАСИаТ

ССАТТТаАААСТОСТТААСТАСАС тататСсАСАасаасАсастТАСААТТО

САССЯТОТАССАаТОАААТаССИтТА вАСАТИТОСАСОСААТАСССАТОаС

СсОААлдааСАаоСстоСтаасАТААС

АСТтТОАСатТСсАТаСТоСАААСИСО тавстТАаСАААСАасаАТТАСАТА соСстТаОТАаТоСАСОаСССТАДАС

САТаАСААТТАОСТИАТТОаССИАСА

СТАСАТОатТСотТтТАаатАаасСсаААаТстА

Ас,аСатТОАААттатосасставоа вАСТАСастТСасСААаАТТААААСТ

САААдСааААТТалСссвасАссСас

АСААДССсасатасАтТаАтТатТасяатт

ААТТСОСАТИСААСОаСОААСААСС

ТТАССТОСТСТТОАСАТИатТАСИЯСА

АТСТСТТАСАСАТАаСАСАСТаС ство ОпААССИТААСАСАСаИТта стаСАТОССТОТОСТоАОСТоаТ стоатаАвАТатТаСатТТтААаТо

СсСОСААСсОсАаСасСААСССстТТаТто

АТТАСТТОССАТСАТТААСТТОССИ

САСТСТААТОАаСАСТОАССОИТаА

СсАААССОаСсАасаласатацвасАТта

АС,ТСААСТОСТСАТИССССТТАТ

САССАСОаСТТСАСАССТСАТАС

ААТОСТОССИТАСАСАСЯСТАаСО ддассаСвсАааТаААаССААТСТ

САБАААДОСсСсаАтоатАатоСасцА

ТТасСсАСтТСсТаСААСТоСАаЙтТОасСАТ

СААДСТСООСААТСастАатТААТОС

САааТСАаСАТАСТОССОСТОААТ

АдсаттосСаваТстТТатАСАСАС

СеСССаТСАСАССАТОСОСАСТОС пОаСАТАССАСААТтаСОаТАСАСТ

ААсСсаСААдсаАаатСасСтТТААСА соатТАТаСТТСАТОАСТОСОССТО

ААатоаТААСААдаатАяасссотАс

11111111 БОЮ МОЗ)

ТТАААТТОААСАСТТТОАТСАТОС

СТСАСАТТОДАСОСТООСОССАС

ССТТААСАСАТОСААСТСОААСО

СТААСАТОАСТОСТТОСАСТТОАТ

САСОАСТОССОСАСОСОТОАСТ

АААСТАТОСОСАТСТОССОААТО

САСОСССАСААСАСТТОСАААСО

АСТОСТААТАССОСАТАААСТТОА

САСАССАДАССАТОСОАССТТСО

СОССАТОСОССАТТТОАТОААСС

САТАТОССАТТАОСТАСТТОаСТтАС

СОТААТООСТТАССААСОССАСО

АТСТСТАОСТОСТСТОАСАСОАТ

САССАОССАСАСТОСААСТОАСА

САССОСТССАСАСТОСТАСОСОАС

ССАССАСТОаСОасСААТАТТОСАСА

АТОСОСОСАААСССТОАТОСАССС

АТОССОСОТОТАТОААСААСОСС

ТТСаОСТТОатТАААСТАСТТТСОСТ

САТОАДОСААОСТОаСтТОатТАТСТАА

ТАСОТОСАТСААТТОАСОТТААТТ

АСАСАДСААДОСАССОССТААСТС

ССТаССАССАСССОСОСТААТАС

СОСАСОСТОСОАОСОТТААТСОСА

АТОАСТОСОСОТАААСООСАТОТ

АСОСОСАТААТТААСТТАОСТОТ

САДАССССТОООСТСААССТАСО

Б ААТТОСАСТТААААСТОСТТААСТ джола Арі АСАСТАТТОТАСАССААОСТАСА

Сіїйатейа арісоїа і РІ | Клубова кишка | АТТССАСОТСТАССОСТОАААТО

Вот СОТАСАСАТОТОСАССААТАССО оториз врр. атООСсОАДАСОСООсСстТтТСтТОсАС

АСАТАСТОаАСОСТОАОАТОСОАА

АСЙСаТаСаСАССАААСАОСАТТА

САТАСССТОСТАСТССАСОСТСОТ

АААСОАТОТСОАТТТОСАСТТТОТ

ТОаССТАСАСТОАТОСОСТССОАА

ССТААСОССАТАААТСОСАССОСС

ТаОСОАСТАСОСССОСААССТТА

АААСТСАДАТОААТТОАСОСОСО

СССОСАСАДОСОСТОСАССАТОТ

СатттААТТСОАТОСААСОСОАА

СААССТТАССТОСТСТТОАСАТСС

АСАСААТСТТОСАСАСАТОСОСО

АСТОССТТСОСОААСТОТОАСАС

АССТОСТОСАТОССТОТСИТСАС стТСататтОтоАдААТОТТООСТТА

АСТСССОСААСОАССОСААСССТ

ТАТССТТТОТТассАтТСОСстТтТАСО

ССООСААСТСААДАССАСАСТОСС

СТТаАТАААССОСАССААСатТОО

СОАСОАСОТСААСТСАТСАТОСС

ССТТАСОАССАСОССТАСАСАСО

ТОаСТАСААТОССОТАТАСАААСС

САССОСОАССТСОСОАСАССААС

СОСАССТСАТАААОТАСОТСТААО

ТОСОСАТТОСАСТСТОСААСТСО

АСТСОСАТОаААОТСОСААТСОСТА

СТААТСОТОААТСАСААТОТСАСО сТаААТАССЯТТОССЯСОЯоСсттТат

АСАСАССОЯСССОаТСАСАССАТОС сгатаааТГТасСсАССАСААаИатАад тТАИСТТААССТТСССССОСАаСаасСаИт тТАССАССЯСТОТОааТтССАТИаАСТ сассатаААаТтСатААСААсСаИтАА ссатаасасААсстасасттасаА

ТСАССТОСТТАС

ЗЕО І МО: 32

ААдСаССАДААТСАААТТТТСААСТТ сдаАдаТтТаАТоСсТаасСтТСАСАА

СбаААдсестааСса,ааСАсастТААС

АСАТтТасСААдаТтСаААСасАСТТТТО садатадатаасСсАааАаСоаатад атТААСсасатасаААТСТАССТАТТ

ТСТАСОСААТААСаСАсСАСАААТТ татастТтААТАСССТАТАСИТОСТТ

Са,асаАсАААСАТТТАТСаССАСАТ даАТОДОСССОСОЯттасаАттАас тааттсатадоатААтТаасссАс

САДСЯСОСАСаАТССАТАСИСТИаСТтТ стададасАТаАССАассАСАТТ саадстТаАдаАСАСаасСссСАаАСТ

СсСстТАСасаАачвасаасАатааист

ААТАТТаСАСААТОСОИаСОасСсАА,С

СстаАТССАаССАТИАССЯСИаТтОада тТаАТаАдАСсСОаСсоСстАаа,аааТТатАА ас ТтсАСССаТаААСАТААТ вАСсааТтААССааАаААадАассс саастАдстсатассаасАасс ссастААТАСадаласасскчастАиас статтСбасАТТТАСТОСИаСатАА да,асасАдсатаааСацпАТАТТТАА

Бджола стосдсасатаАААдтосСсовасваст

Вапопеїа аріб медоносна (Аріз | Кишка СААДСССсСаспсААСТасстТ ТаАтТА тейега) СстапАТАТСТТаАдаТАТаСпСААдСцАСа аТААастасААаттоСаАататАаА саТаАААТТСаТАСАТАТТСССАС вААСАССсАХИатаасаддаасааст тТАСТОСТСОСАТТАСТОДСОСТтТОАСИ стаСсаАдАда,СсатасааАасСАдАСс давпАТТАСАТАСССТОИаТАаТтосСА васСстатТАААСаАТаААТаттАасс сттасАСАСТтттАСТаттосата вСаСАаСтТААСаСАТТААДАСАТТС сасстассадатТАСсастоасСАдОа

АТТААДАСТСАААасСААТТаАСас саассСаСАСААдасаатаадас

АТаТтасаТТтТААТТССАдаСАдСас

ССАаААССТТАССАассстТТаАс

АТоСсСОАТСЯСОЯОСАТОСТтТааАаА

САСССЯТСТтттсАсТттОава7асСтТасАТ ссатаАдСсАасатастасАатааста тсатсдастостатсатаАаАТа таеаватТтАдатосСасСсААдСадас

ССААСССТООСССТТАаттассА тТСАТТІТАСТТОаСОаСАСТОТААЛССаИ сАСсТасСсО7сатаАтТАласСсададиа сААдаатасасвАТаАСатсСААстТо стТсАТОССССТТАСОСОСОСсТасаИас

ТАСАСАСОЯТасСтТАСААТОСТИИаТ вАСсАХИатасасСсАааСадаАССаса

АПВаТтСаАаТастТААТСТОСАААдИаС

САТСТСАИаТтТСсасАТТаСАСТОСТа

СААСТСаАЛдатТаСАТаАдАаТттТасА

АТСаСТтТАСТААТСИаТтТацсАТСАаСА

ТтТаССАСОСТОААТАСИаИТТОоССОаса аССТТатТАСАСАССасСсСаТтсСАС

АСсССсАТОСОСАЛСТТааТТАСССа

ААДАСОСОТТИСТатасСтААССасСАдОаа дааСАпаСААСсСАСсаатАасИатТо да,асАдстаапаТаААаТсСатААс

АдсатлассатлачдааААССстТас вастапАТСАССТОСТТТСТААа

СААпЧАТаААИпААТТааАА

ЗЕО І МО: 33

СТАССАТаСААДаИТтСасСАССААдАС сттссессаатАаатасвопаАСоа атТаАатТААСасаТТАпОаААССТА ттавдааТсСасайсАТААСАТСОЯ

СаАААСсТаатТастТААТАССаСсСАТ вАТИССтТаАдапаССААДАдсаАОаАОа

АТССаССАТТОСАЛОССОСаССТаСОа

ГП сОАтТтАдастаатааттааватА

АДСОаСТаАССААДОСаСалдтТаАТса

АТАОССТИАаСТ ТТЛ, АааАТИаАТСА

СССАСАСТОССОАСТаАСАСАСОся

СССАПАСТоСтТАСасадаасСАсас датТапааААТАТТОаСАСААТИаСаИ

СаСААСССТаАТССАССААТИаСо асататТатаААпдАааТтстСоаа

АТТаТтТАДАДаСАСТТТСАСТАИаСадА

АВАТаАТаАСОааТАССТАСАСАА вАдасооСааЙсСтТААСТТСОСТасСс

АасСаСасйТААТАСИдАСаааИ авдастдаСсатастТСаОпААТОаАСТ

Бджола саасСсатАдлд,асаСса,аСатАааст

Рагазасспагібасієг аріит | медоносна (Арі | Кишка СГТТОТАСАСТСАСАТОТОАЛАТС тейїтега) сос,впастТТААССстТаасСААСстТас

АТТТаАТАСаТтаСАСаАСТА,аВАатс

СсаАдвАдадапсаттатасААТТОСо

АатТатАпАасСТаАААТТСатАСАТ

АТТааСсСААпААСАСсСсаатТасаА да,а,аСсааСААсСсТаастУМММММ М

МАМ ММ ММ ММ ММ ММ ММ

ММ УМаласСтТААсС аСсаттААлаСАСсАсСсасстасвцааА аТАСаасСссСасСААааСТТаАААСТО

АААДСаСААТТаАСсОВИааассССаТсА

СсАДОСОВИатТасАаСАТатаатТТтТА

АТТСОААДИСААСасСсасСАпСААСсСтТ тТАССАЛАСОСОавСсТттасата,всввАсас тТатАТСАСАСаАТасСАТАТТТСТТ сеааАсстССасСсАСсАХаватастТОас

АТОЯСТИаИТтСОаТСА,аСсТоИ,тТаТатоса тТАвАТИттТапааттААлатосСОас

ААС,ЧАдаСаИасСААСССТТатсТТ ТАС т ассСАТСАССЯТСОТаОССТаавасСА

СТСТАпАпАпАСсТассааТаАСА длассачвАдаваАдХдасТвапАТаА

СаТСААДаИатосСТСАТО,аСССТТАТО тост асСстТАСАСАСИаТасСтТАСА

АТвсССОСсСтТаАСсАааВАдаааАТастА

САТаСТаАСсСАТОССТастТаАТСТО

ААААААсСатсТСАатТСааАТТОа

ТАСТСТаСААСТСОСАаТтасСАТИаАА вата аААТСаСТтТАаТтААТСасСаС

АТСсСАаСАТОССОаСасСтТОаААТАСОЯ теосс,авасСссСсТТатТАСАСАССОс

СсСатСсАСАССАТОСОСАСаТТааТтТ

ТОАССТТААХаСсСаатадасСасААС

СОСАдДаСпААСасСАасССаАССАСо сапсасватсСАаСсаАСсТаваца

А

ЗЕО І МО: 34

ТПССТТАпВАААдапАааТтаАТССА асСсасСсАдаат сТосСтТАСаастТАС

СТТаттТАСОаАСТТСАСССТААТСА

ТСТатосССАССТТАСАСОАСТАСаС

ТОСТААААДСа,СТТАССССАТСИТОСТ т ааватаТТАСАААСТСТСАТОИ,Т сталдс,адваСсааТатаТАСАдаас

СсапаспААСОТАТТСАССИатТаасСА тТастаАТССАСОАТТАСТА,ТОАТ

ТОСААСТТСАТаСАСсСОаСаАИтТтТа

СсАаССТаСААТССИААСТОаАСАА таасТттТААйАчаАТТАастТаАсс тсасваттСасСсоАСТСаТттТатА

ССАТССАТТатТАОаСсАСОИТтататАа

СССАаСТСАТАДОаЧИаСаСАТОаАТОа

АТтТТТОАСОИаТСаТтссСсССАССТТОСТ

СсааТТТАТСАССОасСАСаТСТСА

СсТАпАдаТтТассССААСТАААТасСтТа

ССААСТААТААТАДОСЬСЯЗСЯ ТТ ТОИСасСтТ сю ОА ЕАСВЛ ТАС М

І асюврасійив5 КипКеві ей (Арі5 | Кишка ССАТССАССАССТСТСАТТСТОТС

СССОААпапААСаСсССААТСТОСТ тааватаСАпААпАТаТСААдаА астТатТААлсатстсаСсатАос

АТСОААТТАААССАСАТаСТОоСАС

СсАСТІТЯОТОаСОСасСсССССатсСААТ тест тТаАаТттСсААсСсТтасСсаа|ат

СаТАСТОСССАВОСИ,СААТАСТТ

ААТОСИаТттТАасСстТасСсааСАСТОаАА вааСайпАААСССТоСААСАССТА

СТАТТСАТСаТТТАСаасСАТИаСАС

ТАССАСЧааатАТСТААТССТИттсСа

СТАСССАТИАСТТТСИаАЛдаСсСтТСАа

СсаТСАаТААСАЧАССАСАААсаСс асстсасСсАСТаататсСсТСсСА

ТАТАТСТАСаСАТТТСАССастАС

АСАТаЧАаТТоСАСТТТОСТСТТо тТатАСТСААатТттТатАаТТТоСА

СсТаСАСТТССТСАаТТадОаСтТаА вас тСсАСАаСАаАСТТАСААА досасстасастасСТТАСасСс

СААТАДАТССОапСАСАДСЯСТТаС

САССТАСИаТАТТАССОСОСОЯСТОаС таасдссатАааттаассатаастт

ТСТОССТТАААТАСССИТСААА,ТИТтТ

ТААСАСТТАСТСТААСАСТТИТТО

ТТСТТТААСААСАСАСТТТТАСОА

ТОоСОААААССТТСАТСАСТСАСОС сеаСсаттасСстоСАТСАСАСТТТСИаТ

ССАТТатТасСААСАТТОССТАСТОаС тасстоссстаа,асасатотасвосс стТатсТСсАаТоССААТОТОСССО

АТТАСССТоТСАСОаСТоСастАССТ

АТСсСАТССОТСТТаССТОаСОастТТТтТАТ

СТСАССААСТААСТААТАССЯОЯСОС вОаатТССАТСССААДАаТаАТАССА

АДИАССАТСТТТСААИСТТОСААССА тасСспаТСсСААСТААТТАТОСОЯСТ

АТТАССАСТТаТТТОоСААДАТОТТАТ ссоссастосавасСАаатТТАСС

САСОСТатТТАСТСАССАСТТСаССА

СТСОаСТоСОААТССАдДАДАТСАТТ

ТАТОаСАДаСАТААДААТСААТТТОС

САСААСТСаТтТСсадАсСтТТасАТатА тгТАСаСсСАСОССОССАСОССТТСаИТт

ССстТаАасСссАСаАТСАААСТСТСАТ

СТТАА

ЗЕО ІЮ МО: 35

АсаААСОСсТааССвасостассТАА

ТАСАТОаСААЛССТСООСДОаСОСацадА стТсАсСапАХдассттсаватацАА стаставААдСсаАдас,васСасАТО ватаАСтТААСАСатТАСааТААССтТ аСсССтТАААДСаСОвапОаАТАССАТС тТОпАААСсАСаИтастААТАССОСА

ТАААСССАСВСАСТСАСАТОДИТа

СсТастТаАдААаАХсаваТсттаОст аТсАСТТТАССАТОаСАССТОСОаС

ЄатАТТАаСсТАСсСТТаИТапАатАА

СсааТТСсАССААСаСААТОАТАСО тТАСССОАССтТаАСАСаатТААТОСС

СССАСАТТаСОСАСТОАСАСАСас

СССАААСТОСТАСОСОАсСаТасАлас

Бджола А,ТАЧСОСААТСТТССАСААТОСА

І асюрасійив Еікт-4 медоносна (Арі5 | Кишка басСАДИаТоТаАтТапйАаСААСасс теї!іїтега) ссатасАтТаАдАаААааТтсттоась

АТСИТАААДАТОСТаттТатТтаААСА

АВАдссСатТатадаАаТААСТас

ТСАТААСИТОАСастТААТСААССА

СААДДаТтСсАСОИСаСТААСТАСОЯТаС

СсАССА,ССсСасСасТААТАСОТАСО тааСААлаСаТТа|атосСасАТТТАТТ свасратАдДлд,ассаАааСасСАаасса

СТСТТТТААСТСТОААТИТОдДАДдОа

СССТСАаСТТААСТаАИаСААСАС

САТСОСАДАСТОАСАСАСТТОда тасАпаАдАдадасАаАатааААСТО

САТОТОТАВСастОАААТОаСаИатА

САТАТАТаСААСААСАССАаИтас

СаАдАдсасасастотта7аатстатт

АСстТаАСастОоАдаасСстТСаААдОСА тааватТАаСОпААСАааАТТАСАТА соСстТОатАаТССАТаССОаТАААС вАТОДССТастТААЛОсТаттсасАдсс ттос,асстотсАастастасласт

ААСаСАТТААИСАСТОСИасстас саАатАСаАССасСААааТатТаААА

СТСААДАСадАТТОАаСОЬЯСИСаСос вСсАСААДОСОСОЯТтОаАаСАТаИтаат

ТТААТТСОААДаСААСасСсаААаААСс

СТТАССАЧОСТСТТаАСАТСТОСТОа

САДИССТААСЧАаАТттТАсСаТсатто сстОС,аваАСАСаадАСпАСАСИТ сатасСАТОСТТатТСОтТСАастоа татсатадаАтТаттасаттддатс

ССОСААСЧАЛаСасСААСССТТИТтт

АСстТАааттаСсСАасАтТтАДаИттасцся

САСТСТАСТаАсСАСТОСС,аТатаА

СсААДАССОЯСАсСаААсааТтацвиацАс

САСатСсАААТтТСАТСАТасССсСсСтТтТА таАССТапОаСТтТАСАСАСИЯТОаСтТА

СААТИСАТасаТтТАСААТадаАдас вААСТСООЯСв;аСса,аааААасСтТаАТо

ТСТОААААССАТТСТоАИТТСасА тасдаасСстТаСААСТООССТасСА таАддастаспсААдтСастАаТААТС ссааАТСАаССсСАТОССЯСаатТадА тТАССЯТТОССОЯаСаТасСссСТтТТатАСАСА ссасос

ЗЕО ІО МО: 36 нн Я ПОЯВА ( Шовкопряд.//771777111111111111111Ї111111111111Ї

АаатаАТССАаССасСАССТТОСИ

АТАССЯССТАССтТТатТАСадстто

АССССААТСАТСТАТСССАССТТА сасаасСстаасСтТоСАААААСОстТтТА

ССтТСсАССОАСТТООСаатТатТАСА

ААСТСОТСОСЯаТОВСТатоАасаИавасавс тататТАСААвСасСсССасОААСаИтА тсАсСсассасатастадтоСсас

САТТАСТАИаСОАТтТоСаастТТсСАТ аСАс,аСсоАаттасСсАасСсСтТасСААТ

СсСаААСстТадаАаААастТТААаА вАТТТаСсСАТаАССТСОССО,аИатстТА сСОаАСТоаттТатАСТТСССАТТИаТ да,асдсатататдассСсАдастсСАТ

Епіегососсив5 Вотбух тоїї Кишка АдасааСАТаАтТаАттталдсатс

АТССССАССТТОСТОСОСОСТТТИаТто доссасаХатстсастАасАатасс

СААСТААДАТадтТаасСААСТААСАА тТАДСССТТаСОСТОСТТОаСОоацА

СТТААСССААСАТСТСАССАСАСО асСстТадсСаАСААССАТОСАССАС

СсТатсАСТТТатТоСССОААцвасА

ААДаСТСТАТСТСТАсСАИатТастоСАА давАтТаТСААдаАсСстТасатААдсаИат тоттса,СаттастТсаААТТАААС

САСАТОСТоОСАССОЯСТТОТИаСОас аСССССОТСААТТОСТТТалсатт

СААССТТаСОаИТСОаТАСТОСССА сеосасддатТастТААТОССЯТТТас тасАдасАСТадАласаСасАААСс

СТоСААСАСТТАССАСТСАТССТТ тТАСВССОСтТОСАСТАССАСОСТАТ

СТААТССТОТТТаСстТоСССАССЯСТ тсСадасстсАасСсасТтсСАСТТАСА вАССАСАсСАасСоСсассттсассАс таататсСсТтосСАТАТАТСТАСОС

АТТТСАССОаСТАСАСАТИаСААТТО

САСТСТОСТСТТСТОСАСТСААСТ

СТОоССАСТТТОСААТаАСОССТОоССО ссатталассаававОасСТТТСАСА

ТСАСАСТТААСАААСОССЯССТаса

СсТСасттТАСаСССААТАААТОСО

САСААСОИаИсСТтТассСАССТАССТАТТ дссассеастеастаасСАСатАаТтт да,ассатаасттстТОсСтТТАСАТАС

СсетТСсАсасаАСаТТсСАаТттТАСТА

АСаТОСТТатТсСТТСстТСТААСААдС

АВБАСТТТТАСОАТСССИСААААССТТ

СсТТсАСТСАСОСООсССасТТа,астоа

СТСАСАСТТТСОТССАТТаССОАА вАТТОоССТАСТОСТАССТОоССИТтТА салатотасассататстсдатс

СсСАстатааССОАТСАСССТОСТО дастоааСстТАТОСАТССТОСССТ таатадасСссСОаТтТАССТСАССААС тТАИСТААТОаСАССОЯСОаатТСсСАТ

ССАТСАаСОАСАСССОААдаИасас

СТТТСАСТСТТАТаССАТОСОССА

ТАААСТОаТТАТИСОаСТАТТАаСАС

Стат ТсСААИататтТАТСССССтТо таАТОСОИтТАСИатТАСССАССИаТаИат

ТАСТСАСССОЯТоСассАСТОСТОТ

ТТОСААТТОАСТасСсААСсСАСТССИ авадасАААпААасстТСсОАСТТО

САТаТтТАТТАСОаСАСОЯССОССАСС аттсатосталасССАасСАТСААА стот

ЗЕО ІЮ МО: 37

САААДсСсАааатаАТоСАсаССас

АССТТоСОАТАССЯЯаСТАССТТИаТтт

АСОАСТТСАССССАИТСАССААС сссасс,тасастАла,сассстост тасасТттТАвастТАССТАСТТОСТа асаАсАссСасСстТосСсАТОСТСИаТа дсавасасоостТататАСААСАСоССО ваААСаТАТТСсАССОСОвасАТИаС тТаАТССОаСОАТТАСТАССОАТТОС вАСТТСАСОЯСАСТОоОСАСТТасАа

ОеЩщіа ВотрБбух тогі Кишка АдстасоАтоСаспАСТАСадстаа

ТТТТАТаССАТТАССТОССССТСОа ссеваттаасСААСССТоТатАССА аСсСАТТатТАТаАСОТОТОаТАОаССо

ССАССТАТАДССЗИаССАТИаЛСаАс

ТТаАСатсСАТССССАССТТОСТОС сдаттатсАССаасСАаТтсСтТСАТТА вАСТастТСААСТОААТатАасАА

СТААТаАСААХССССТТОСОСТОССИТ тарас сАСТТААСССААСАТСТСА

СОСАСАСАСаСТОАСаАСАаТссАТ асАдаСсАсстататасаааттстТо

ТТ ТСОАдОаСАСОААТССАТСТСТОаС

АААСТТССТаССАТаТСАААИаТта ватАдаат псасаттТасСАТСО

ААТТАААССАСАТСАТССАССЯаСТ татасаватоСсССатсСААТТОССТ ттаАаПТТТСААССТТИСаасСсСаИтА

СсТоСССАпаСайТСААСТТСАСО

СсаттАасСсТСсатТАСТаАСААдААСс

ТААТТСССААСААССАаТтТаАСАТ саттАаасасСатТааАСТАССАСа

СТАТСТААТССТаТТттТастосСССА састСатаСАТАаСатсСАстТ

АСсСАСИаИТтоСАцчаааАтТТаТасстТтса

СсСсАТСОСТаТТоОСТоСОасСАТАТСТ

АСаСАТТТСАСТаСТАСАСОСОС

ААТТСОСАТСССССТСТАССИаТАСТ

СТАаССАТаСАаТСАСАААТОаСА атсСсСсАвСата,аАдассСсапасАТ

ТСАСАТСТатТСсСТТАСАТААССОС сТасСаСАСасСТтТАСасСссССАСТА

АТТССОАТТААСастоСасСАСССТА

СсатАТТАСССЬСТЬСТЬЬТОСТОаСсТаасСАС атлдатАдассаатастТТАТТСТТА саатАсСсаТСАтТаваССосСстТаТт

АТТАпСААлсаачАХастттсаттосСа

ТАСААААДасСсАаТ ТТ тТАСААСССадА вассТсСАТССТаСАСасСсаасСАТ тасСстТаОАТСАаасСтТТсасСсСсСАТТ

СТСоСААДААТТОСССАСТОСТасСстТ сосатТАд,сосАааттавассатато теАдстосслататаастаатсат

ССТСТСАВпАССАССТАСАСАТССО тсаасттааТААДастТТТТАТСССА

ССААСТАССТААТСТаССАТСОСС

СаСТоСААТССЯСООСаВАа,васСссСаА дХдаЧчдаСССССасТтСАТССТСАС

АТСИаТАТаСааТАТТАОаСТАСТСТ

ТТ СаАСТАСТТАТСССССАССАСТ вааСАСаТТСоСОаАТатТАТТАСТСА сосатСасСсСсАСстТатсАасСИатТо

СОААпАССТаТИтТАССаТтСсалгстт

ССАТОТатТААваСАТаССасССАС

СатТТСсААТСТаАлДаССАааСАТСААА

СТСТАСАИТТСОАТСТ

ЗЕО ІЮ МО: 38

АТОСТОа,аСТСАСАТТОААСастТа всСааСАТОаССТТАСАСАТаСАДО

ТСаААСааТтТААСАСЧИаТТААдастТта

Адса,адатааСсаАдАСс,аааТтаАаТтАА

ТАТАТСЯСААСОЧЯТаСсСсСА,;тоСаИт саАЙаасАТААСТасСтТСаААдадас

РеІотопав5 Вотрух тоїі Кишка ХОСТААТАССОСАТАСОАССТОА сваатТаААддаСс,СаЧвапАТСИаСАА сАсстсасММмадттаавдаСасосс

САТАТСАЧаАТТАСЬЯТАЛССТТОИаТИас

СаТтТАААДааСССАССААДаССААСа

АТсСТОТАССТОИаТСТаАпАдОаАС

САССАаССАСАСТИАЧССАСТаАсА

СсАСОСаСССАВАСТОСТАСОИдС асад,аСбА,ставсасвААТТТТасАСА

АтасаСсасСААласстадтоСАаСс дтассосатассасАдадАдас сттвса,аасаТтТатАААсСса|асттттат

СсАапапААпААдААсааттоТаа!ттТА

АТАССТОСсСОАСТСАТаАСОСаТтАС

СсТаААСААТААИСАССИа,асСтТААС тАСсТаСсСсАССАССсСсасаатААТ

АсатаасаТасСАдасСаТТААТСС

СААТТАСТОСОСССОСТААдАаСатас аСбАасабааТТАТаСААСаАСАцАс сТаАААтТоССсСсасвастсААСсСтТа саААстассттатаАСтТасАТА аСстТАсАдатТАСа,аатАсАсааасАТ саААТТоСОЯСсОвВТтатАааСАсаТтадА

АТаСсатАваАТАТаСапАааААСА сбадтааСсаААдааСААТССССтТа сАССТатТАСТаАСастТСАТаСАС вАДАСТСОЯТасацАа,САААСАсад

ТТАСАТАСССТОСТАаТтоСАСИас

ССТАААССаАТаТатСААСстТасттатт сессАдсасат сот СсТСАатТААСа

ТАММТААСОЯаСсСИтадАаТтТаАССа сстасасаатАаСасаоСасАдаст

ТаАДАСТСААДАааААТТаАСОСИ вАСССОСАСАДаСОватасАтТаАТ атаапТтТТААТТССАТаСААСасаА

ААААССТТАССТАСССТТаАСАТОа сСАапААТоСтТаААсСАсСАТТТаС слатастоспсАААдаАаААССТааА

СсАСАСЧСТИаСТОаСАТОСОССаТтСаИт сала,астоеататсатаАдаАТа7аттас аТТАдатоССасСААСАааСОасСАА ост атсСАТТАаТТасСтТАССВААДА саасСАСТСТААтТадаАсТассас

ТтТОАСААдАсС,ааАасаддастасвссяся

АтТаАсатСАааТСсАТСАТОСССС ттАТОССсСТАаИаСйСТАСАСАСИаТо

АТАСААТОСССОЯССИАСАсАасИасС тТасСсААДСССОЯСОСАасСаасасАаТстА

АТСССАПААдАСсСсСсаеатсатАатс

С,апАТтсатАатсТасСсААСТОСАС табатТаАдатоапААТтСастАаТт

ААТСЯСОСООС,іаТСоАСааСсСТТаССсаСоас тТаААТАСЯТТОСССОСОССОСТОоТТИатАС

АСсАССОЯИСССаТСАСАССАТОаИА ссаааттСТасСАСаААатТАаТттТА

ВСсСтТААССаСААлааАасаасСсаАТТ

АссАссСасасасттс,атаАстаа сатТаАдатоаТААСААаааТАаСо стТАТСССААДССТОеСсаваИастасАято

АС

ЗЕО ІЮ МО: 39

Наприклад, комар (наприклад, Аєдез 5рр. або Апорпеїез 5рр.) містить симбіотичні бактерії, які модулюють імунну відповідь комара та впливають на здатність до переносу патогенів.

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може бути придатним для цілеспрямованого впливу на бактерії, що живуть в організмі комара, у тому числі без обмеження

Ер, Зегайца 5рр (наприклад, 5еїтайа тагсеб5сеп5), Епіеграсієгіоасеае 5рр., Епіегорасіег 5рр. (наприклад, Епіегорасієг сіоасає, Епіегобасієї атпідепи5, Епіегобасієг Ішам/ідії), Ргоїєив 5рр.,

Асіпеїобрасієї о5рр., МУМіддіезєумопйпіа о5рр. (М/іддіезмопНіа діоовіпідіа), Хапіпотопаб 5рр. (наприклад, Хапіпотопах таїорнпіїа), Рзендотопавз 5рр. (наприклад, Рзхенйдотопавх аеєгидіпоза,

Реєидотопав 5іці2етгі, Реендотопав5 гподевзіає), Е5сПепіспіа 5рр. (наприклад, ЕвсПегспіа соїїЇ),

Седесеа з5рр. (наприклад, Седесєа Іарадеї), ЕміпдеїПа 5рр. (наприклад, Ем/іпдеїйа атегісапа),

Васійн5 в5рр. (наприклад, Васіїййв5 ритіїшв), Сотатопав 5рр. або Мадососсив 5рр. (наприклад,

Мадососсив 5заІтопіпагішт) або М/оірасніа 5рр. (наприклад, Ууоібасніа - м/Меї, УУоіІрасніа - ЖАВ,

Моірасніа - уМе!Рор, УМоїбасніа - мМеїІРор-СІ А).

На будь-яку кількість видів бактерій можна цілеспрямовано впливати за допомогою композицій або способів, описаних у даному документі. Наприклад, у деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на один вид бактерій. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на щонайменше приблизно будь-який з 1, 2,3,4,5,6,7,8,9,10,15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 500 або більше різних видів бактерій. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на будь-який із від приблизно 1 до приблизно 5, від приблизно 5 до приблизно 10, від приблизно 10 до приблизно 20, від приблизно 20 до приблизно 50, від приблизно 50 до приблизно 100, від приблизно 100 до приблизно 200, від приблизно 200 до приблизно 500, від приблизно 10 до приблизно 50, від приблизно 5 до приблизно 20 або від приблизно 10 до приблизно 100 різних видів бактерій. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на щонайменше приблизно будь-які з 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 або більше типів, класів, порядків, родин або родів бактерій.

У деяких випадках модулювальний засіб може збільшувати популяцію однієї або декількох бактерій (наприклад, патогенних бактерій, бактерій, що продукують токсин) на щонайменше приблизно будь-яке значення з 1095, 2095, З0 У, 40 95, 50 95, бО Зо, 70 У, 80 У, 90 956 або більше в організмі хазяїна порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може зменшувати популяцію однієї або декількох бактерій (наприклад, симбіотичних бактерій, бактерії, що розщеплює пестициди, наприклад бактерії, яка розщеплює пестициди, наведені в таблиці 12) на щонайменше приблизно будь-яке значення з 1095, 2095, З0 У, 40 95, 50 95, бО Зо, 70 У, 80 У, 90 956 або більше в організмі хазяїна порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був

Зо уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може знищувати популяцію бактерії (наприклад, симбіотичних бактерій, бактерії, що розщеплює пестициди) в організмі хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб може підвищувати рівень однієї або декількох патогенних бактерій на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95, ЗО Зо, 40 Об, 50 96, 60 Ус, 70 95, 80 95, 90 95 або більше в організмі хазяїна й/або знижує рівень однієї або декількох симбіотичних бактерій на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95,

ЗО бо, 40 95, 50 о, 60 9о, 70 9, 80 У, 90 95 або більше в організмі хазяїна порівняно з організмом- хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати різноманітність бактерій і/або склад бактерій хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб може збільшувати різноманітність бактерій в організмі хазяїна відносно вихідної різноманітності на щонайменше приблизно будь-яке значення з 1095, 2095, З0 У, 40 95, 50 95, бО Зо, 70 У, 80 У, 90 956 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може зменшувати різноманітність бактерій в організмі хазяїна відносно вихідної різноманітності на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95,

ЗО бо, 40 95, 50 95, 60 Ус, 70 90, 80 95, 90 96 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію, активність, ріст і/або ділення однієї або декількох бактеріальних клітин. Наприклад, модулювальний засіб може змінювати експресію одного або декількох генів у бактерії. У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію одного або декількох білків у бактерії. У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію однієї або декількох клітинних структур (наприклад, клітинної стінки, зовнішньої або внутрішньої мембрани) у бактерії. У деяких випадках модулювальний засіб може знищувати (наприклад, лізувати) бактерію.

Цільова бактерія може жити в одній або декількох частинах організму комахи. Крім того, цільова бактерія може бути внутрішньоклітинною або позаклітинною. У деяких випадках бактерії живуть в одній або декількох частинах кишки хазяїна або на них, у тому числі, наприклад, у передній кишці, середній кишці й/або задній кишці. У деяких випадках бактерії живуть у вигляді внутрішньоклітинних бактерій у клітині комахи-хазяїна. У деяких випадках бактерії живуть у бактеріоциті комахи-хазяїна. бо

Зміни щодо популяцій бактерій в організмі хазяїна можуть бути визначені за допомогою будь-яких способів, відомих у даній галузі техніки, таких як мікроматричний аналіз, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), ПЛР у реальному часі, проточна цитометрія, флуоресцентна мікроскопія, трансмісійна електронна мікроскопія, флуоресцентна гібридизація іп 5йи (наприклад, РІЗН), спектрофотометрія, мас-спектрометрія з матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією (МАГ 0ОІ-М5) і секвенування ДНК. У деяких випадках зразок від хазяїна, обробленого модулювальним засобом, секвенують (наприклад, за допомогою метагеномного секвенування 165 рРНК або рДНК) для визначення мікробіому хазяїна після доставки або введення модулювального засобу. У деяких випадках зразок від хазяїна, який не отримував модулювальний засіб, також секвенують для одержання еталона. і. Гриби

Ілюстративні гриби, на які можна цілеспрямовано впливати згідно зі способами й композиціями, передбаченими в даному документі, включають без обмеження Атуїовіегепт агеоіїашт, Ерісніоє 5рр, Рісніа ріпи5, Напзепша сарзшціаїє, Оаїдіпіа десірієп, Сегаїосуїїв 5рр,

Орпіобіота 5рр та АНатусе5 Бготаїййси5. Необмежувальні приклади дріжджових і дріжджеподібних симбіонтів, виявлених у комах, включають Сапаїда, Меїв5сппіком/а,

Ребагуотусе5, ЗспейПегзотусе5 5Ппепайаеє і ЗспейПегзоптусевз зірнеб5, іаптегеїЇа, Рісніа,

Тііспозрогоп, Стуріососси5, Рвзецдолута, а також дріжджеподібні симбіонти з підтипу

Реліготусоїіпа (наприклад, Зутрбіоїаригіпа риспегі і 5утбіоїарйгіпа Коспії). Необмежувальні приклади дріжджових грибів, на які можна цілеспрямовано впливати за допомогою способів і композицій згідно з даним документом, наведено в таблиці 2.

Таблиця 2 (-Зйоатерарапсва) | 00111111 (Засспагттусев)ї/:////СС:|(КУНОССССГИЦ 11111111 |Сліпакишка(Топлорвівросппегі)ї 22222170 фен кишкою 11111111 |Міцетоми(Зутріоїарпйпариснпегі).З/-

ЗШВЗБ А ЛА 1 «Б 5 ЛО М о рт рисппегії 11111111 |Сліпа кишка (Зутріоїарнгіпа рисппегі):С/ кишкою 11111111 ((Бутріоїарпйнакосп)ї//-/:// фФ н""6:ЬЮЬИТЬТЬЛТДЛДбДГЛП ІННИ ПННІМОЕИОЛИВЛОБЖІЛОВВООЛОЛОООООТНИЯ 11111111 К(Саподакагамаєм). 77771 11111111 КСападаєтовб)ї//-/:/ (СС 11111111 КСападахевюрі)ї//:/ ( . оіІєорієга: Сегтатбрусідає ; зетірипсіаїа ївпиі5 вені рент ОЕМ

Сапаїда аийіептопаії . вусорпапіа Сапаїда іепиів ападіда гпадії нини ападіда їепиі5

Продовження таблиці 2

Сліпа кишка біля середньої кишки

Сапаїйда рагарзіїовів

НН ьяЯяяьяьвппп

Гершга тасиїїсогпів СоіІєорієга: Сегатбрусідає Сліпа кишка біля середньої кишки

Сапаїйда рагарзіїовів яп .сегатрусіюттіїїу/ . , . Сліпа кишка біля середньої кишки

І ершга запдиіпоЇепіа СоіІєорієга: Сегатбрусідає Сапаіда 50.

АНадіат Ббітазсіат СоіІєорієга: Сегатбрусідає Сліпа кишка біля середньої кишки

Сапаїйда їєпиі5 . . г. , . Сліпа кишка біля середньої кишки

АНадіат іпдиіївйог СоіІєорієга: Сегатбрусідає Сапайда аційетопаї

АНадіит тогаах СоіІєорієга: Сегатбрусідає ствпа кишка біля середньої кишки

Сагрорнішв5 петірієгив5 | СоіІєорієга: Мійаціідає Кишковий тракт (10 видів дріжджових

Одопіоїаєпіизв аівіипсіив| СоІєорієга: Раззаїїдає Задня кишка (Епіегогати5 дітогрпи5

Одопіоїаєпіив аів|іипсіив| СоІеорієга: Раззаїїдає Кишка (Ріспіа зірійв, Р. зедорієпвів,

Сапаїда знепаїає (Мепевовівтрещіапиє | //////р/рюрюрюрюИюИюиюЮюЮюЮ МК(Соетрайєпвів)//://:/С:(/ И/

СоіІєорієга: 5сагабавідає Травний тракт (10 видів дріжджових ветірипсіайв грибів)

Спігопіїв їигсмег ШН.-..252«щ -1 БИ

Соіеорівєга: бсагаравідає Кишка (Тгіспозрогоп сшїапеит)

Репагосіопиз і Ір5 5рр. | СоіІеєорієга: 5соіуїдає пиву канал (13 видів дріжджових

Оепагосіопив ігопіаїї5 | СоІєорієга: Зсоїуїїдає Середня кишка (Сападіда 5р.)

Ір5 зехаєпіай5 СоіІєорієга: 5соїуїаає Травний тракт (Ріспіа ромів, Р. гпподапепзвів 11111111 |Напвепша Ппоівій (Сапаїда гнадії 11111111 | Травнийтрактру/:У/У/:/У4.:/С:К«х//:/ 11111111 КСапайда риіснегіпа

Соіеорієга: Зсоїуїдає

Травний тракт (Напзепшиїа сарзшіаїа,

Сапаїйда рагарзіїовів5

Кишка та гомогенати жуків (Напзепша

Повії, Н. сарзшаїа, Сапаїйда адідаеєпвії, б. тойзепапа, С. піїгаїорніїа, Стуріососсив аірідив, С. Іаштепіїі

Тгуродепагоп Іпеашт | Соієорієга: бсоїуїаає

ХуЇоїетіпив роїйив5 СоіІєорієга: 5соїуїаає Голова, груди, черевце (Сапаїйда, Ріспіа,

Засспаготусорзів ява яп

Рістуорієга: Віацідає Гемоціль (Сапаїйаа 5р. пом.)

Віаца опепіаїб Рістуорієга: Віанідає Кишковий тракт (Кісумеготусез ріацає)

Віаїєїа дептапіса Оістуорієга: ВіайеїПдає

Стуріосегсив рипсішціайив) Оісіуорієга: Стуріосегсідає Задня кишка (1 вид дріжджових грибів)

Рійорпуїа Ппегасієї Оірієга: Терппіідає

Аєдез (4 види) Оіріега: Сийсідає Внутрішня мікрофлора (9 родів дріжджових грибів

Огозорпіїа Травний канал (24 види дріжджових овецдообвсига Оірієга: ОгозорпіЇїдає грибів)

Огозорпіїа (5 видів) Оірієга: ОгозорпіЇїдає Зоб (42 види дріжджових грибів)

Продовження таблиці 2 яв рогоріотусев5

Натійопарпіввіутасії | (77777777 оСіурпіпарпівбатризає|//://ООСССССССССССС111111111С1

Сегаарпівврі./////17ССС яп яв яп 1111 яйця 11111111 фЯйця(СапамауїдЇ7//7/:/ОСССС:/ ССС) юри дріжджових грибів) 11111111 Яйця німфи(Сападауд777/7//7С1С ори дріжджових грибів) нннІн"нНООЖГЇЇТЇИш сг є по: оМівіадгапасврвї/////1771111

Режіпвівтавррі./////1777777711111Т

Загхіатовтай///////17777111111

Зодаїєнлайшсієа,ї (17777771 яп

В.аціпдиесивріву//177711ССССССССТ яп яв

Личинки на стадії четвертого періоду

ГІроїуїїса

Продовження таблиці 2

Кишка і гемолімфа (Сапаїйда рагарзіїовів,

С. Проїуїїса, С. диПШептопайї, С. гидоза,

Ребрагуотусез Напзепії 11111111 Кишковийтракт(Тогшорвізарісоюуї/-/-- 10 0 0 2 0ол оо ул нн грибів) 12000101 ую грибів) 22002510 дюн грибів) 11111117 Кишечник (14 видів дріжджових грибів): 11111111 Кишковийтракт(Ріспіа теїззорийа)./-

З рт грибів) 11111111 Травнийканал(Напзепшабзімісоюуї /-/- 11111117 Зобі кишка (13 видів дріжджових грибів)

Апіпорпогаооссідепіаійв (Нутепоріега: Апіорпогідає |:// (771

ОМотіа теіапдей /Нутепоріега:Найсваєї/ (

Наїсіивтирісипаиз (Нутепоріега:Найсваєї/ ( (Медаспієсоїпаа? |Нутепоріега Медаспйдає

На будь-яку кількість видів грибів можна цілеспрямовано впливати за допомогою композицій або способів, описаних у даному документі. Наприклад, у деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на один вид грибів. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на щонайменше приблизно будь-який з 1,2,3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 500 або більше різних видів грибів. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на будь-який із від приблизно 1 до приблизно 5, від приблизно 5 до приблизно 10, від приблизно 10 до приблизно 20, від приблизно 20 до приблизно 50, від приблизно 50 до приблизно 100, від приблизно 100 до приблизно 200, від приблизно 200 до приблизно 500, від приблизно 10 до приблизно 50, від приблизно 5 до приблизно 20 або від приблизно 10 до приблизно 100 різних видів грибів. У деяких випадках модулювальний засіб може цілеспрямовано впливати на щонайменше приблизно будь-які з 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 або більше типів, класів, порядків, родин або родів грибів.

У деяких випадках модулювальний засіб може збільшувати популяцію одного або декількох грибів (наприклад, патогенних або паразитичних грибів) на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 90, ЗО Зо, 40 9, 50 90, 60 о, 70 Фо, 80 У», 90 95 або більше в організмі хазяїна порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може зменшувати популяцію одного або декількох грибів (наприклад, симбіотичних грибів) на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 Об,

ЗО бо, 40 95, 50 о, 60 9о, 70 9, 80 У, 90 95 або більше в організмі хазяїна порівняно з організмом- хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може знищувати популяцію грибів (наприклад, симбіотичних грибів) в організмі хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб може підвищувати рівень одного або декількох симбіотичних грибів на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95, 30 90, 40 9», 5096, 60 95, 7095, 80 95, 9095 або більше в організмі хазяїна й/або може знижувати рівень одного або декількох симбіотичних грибів на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 2096, 30 Зв, 40 96, 50 Зо, 60 Зо, 70 95, 80 95, 90 95 або більше в організмі хазяїна порівняно з

Зо організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати різноманітність грибів і/або склад грибів хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб може підвищувати різноманітність грибів в організмі хазяїна відносно вихідної різноманітності на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95, ЗО в, 40 95, 50 96, 60 Зо, 70 95, 80 95, 90 95 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений. У деяких випадках модулювальний засіб може знижувати різноманітність грибів в організмі хазяїна відносно вихідної різноманітності на щонайменше приблизно будь-яке значення з 10 95, 20 95, ЗО 9, 40 96, 5096, бО о, 70905, 8095, 9095 або більше порівняно з організмом-хазяїном, якому модулювальний засіб не був уведений.

У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію, активність, ріст і/або ділення одного або декількох грибів. Наприклад, модулювальний засіб може змінювати експресію одного або декількох генів у грибі. У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію одного або декількох білків у грибі. У деяких випадках модулювальний засіб може змінювати функцію одного або декількох клітинних компонентів у грибі. У деяких випадках модулювальний засіб може знищувати гриб.

Крім того, цільовий гриб може жити в одній або декількох частинах організму комахи. У деяких випадках гриб живе в одній або декількох частинах кишки комахи або на них, у тому числі, наприклад, у передній кишці, середній кишці й/або задній кишці. У деяких випадках гриб живе позаклітинно в гемолімфі, жирових тілах або в спеціалізованих структурах в організмі хазяїна.

Зміни щодо популяції грибів в організмі хазяїна можуть бути визначені за допомогою будь- яких способів, відомих у даній техніки, таких як мікроматричний аналіз, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), ПЛР у реальному часі, проточна цитометрія, флуоресцентна мікроскопія, трансмісійна електронна мікроскопія, флуоресцентна гібридизація іп 5йи (наприклад, РІ5Н), спектрофотометрія, мас-спектрометрія З матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією (МАГ 0І-М5) і секвенування ДНК. У деяких випадках зразок від хазяїна, обробленого модулювальним засобом, секвенують (наприклад, за допомогою метагеномного секвенування) для визначення мікробіому хазяїна після доставки або введення модулювального засобу. У деяких випадках зразок від хазяїна, який не отримував модулювальний засіб, також секвенують для одержання еталону.

І. Модулювальні засоби

Модулювальний засіб зі способів і композицій, передбачених у даному документі, може включати фаг, поліпептид, малу молекулу, антибіотик, вторинний метаболіт, бактерію, гриб або будь-яку їх комбінацію.

Зо і. фаг

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати фаг (наприклад, літичний фаг або нелітичний фаг). У деяких випадках ефективна концентрація будь-якого фага, описаного в даному документі, може змінювати рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів (описаних у даному документі), що живуть в організмі хазяїна, описаного в даному документі (наприклад, переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, пухоїда або іксодового кліща), при цьому модулювання викликає зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). У деяких випадках модулювальний засіб включає щонайменше один фаг, вибраний із порядків

Тесіїмігідає, Муомігідає, 5ірпомігідає, Родомігідае, СацйдомігаІе5, ІПіроїйгіхмігідае, Киаїмігідаеє або

Гідатепуігаех. У деяких випадках композиція містить щонайменше один фаг, вибраний із родини Муомігідає, Зірпомігідає, Родомігідає, Гіроїнгіхмігідає, Киаїмігідає, Атриїпйамігідає,

Вісацдамігідає, Сіамамійдає, Сопісомійідає, Сувіомійдає, ЕРизеїІомігідає, СІибоомігідає,

Сийнамігдає, Іпомігдає, І емімійідає, Місгомігідає, Ріазтамігідае і Тесіїмігідає. Додаткові необмежувальні приклади фагів, придатних у способах і композиціях, наведено в таблиці 3.

Таблиця З

Приклади фагів і цільових бактерій

Фаг і Ме доступу

ЗАТ(МС 027991), рпіРб8 (МС 004679 Зіарнуіососсив 5р. | Родина Арідає

Аєдез аедурії; Огозорпйа

УО (АВОЗ6666.1) Ууоїбасніа зр. теіаподавіег; Ріазтосійт р;

ТеІеодгуПи5 їІаїмапетта;

Вотрух тогі

КІТ (МС 018278), ВсерМагоц! (МС 005091) : Віріопиз 5р.; Руптпосогів

РПЇЄ125(МС. 003309 Виткпоібепазр. | арієгив.

Еет (МС 028851), Хепіа (МС 028837), Равпірасіїцув Іагуає Джмелі: Вотризє 5р.;

НВІОс2 (МС 028758 медоносні бджоли: А. теїЙега

Ріереїпа депоїїї; родина

СР2 (МС 020205), ХРІ1О (МС 004902), ХР15 | Хапіпотопаз зр. Арідає; Арі5 теїйега; родина (МС 007024), рн 7 (МС 012742) Огозорпіїїдає і родина

СПіогорідає

Ресіорасієгійт

РРІ (МС 019542), РМІ (МС 023865) сагоїомогит 5!,бБ5р. | Родина Арідає сагоїомогит

ФАЗА (МО. 009382), Ваі5юпіа Вотрбух тогі

ФАБВІ (МС 011201), ФАБ5І1 (МС 010811), воїапасеагит У

ВОМ (МС 008574

ЗЕТ1(МС. 028807) бгерютусев Риїатив вр.; Ттаспурив зр

ЕСМІ-4 (МС 025446), ЕСМІ -117 Евспегісніа сої Родина Арідає;

МС 025441), ЕСМІ-134 (МС 025449 Маїтоа дезігисіог

ЗОРО(Х274646.1), 55Рб (МС 004831),

ЗЕРІО (МС 016073), Е185Е (МС. 028698 ЗаІтопеїа 5р. Родина Огозорпіїїдає

Непарний шовкопряд; (МС. 001416), Всрі (МС. 024137) Васійив р. Гутапіга дізраг; Матоа девтисіог

Рийї (МС. 009821) Зспізіосегса аогадагіа

ФКММ (МС 005045), ФЕЇ! (АЄЗУ7969.1), ФК Ревудотопав 5 Гутапігіа аізраг; родина

МС 004629 Р. | дрідае

Аг (МС 004112), рпід'є (МС 004305) І астобасі! 5 5р. Огозорніїа; Матоа дезігисог

КГРМІ (МС 028760 КіебвівїІа вр.

УВ рам Адсірероа (МО б25462), Асіпеїобасівє! 5 Зспівіосегса дгадагтіа

УВ Абар. Асіреі007 (МС 025457 р. 9га9

У деяких випадках модулювальний засіб включає літичний фаг. Таким чином, після доставки літичного фага в бактеріальну клітину, що живе в організмі хазяїна, фаг викликає лізис у бактеріальній цільовій клітині. У деяких випадках літичний фаг цілеспрямовано впливає на бактерію, що живе в організмі комахи-хазяїна, і знищує її зі зниженням пристосовуваності хазяїна. Альтернативно або додатково фаг модулювального засобу може являти собою нелітичний фаг (який також називається лізогенним або помірним фагом). Таким чином, після доставки нелітичного фага в бактеріальну клітину, що живе в організмі хазяїна, бактеріальна клітина може залишатися життєздатною й здатною стабільно підтримувати експресію генів, що кодуються у геномі фага. У деяких випадках нелітичний фаг застосовують для зміни експресії генів у бактерії, що живе в організмі комахи-хазяїна, зі зниженням пристосовуваності хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб включає суміш літичного й нелітичного фага.

У певних випадках фаг являє собою фаг, що зустрічається в природі. Наприклад, фаг, що зустрічається в природі, може бути виділений зі зразка середовища, що містить суміш різних фагів. Фаг, що зустрічається в природі, може бути виділений за допомогою способів, відомих у даній галузі техніки для виділення, очищення й ідентифікації фага, який цілеспрямовано впливає на певний мікроорганізм (наприклад, бактеріальний ендосимбіонт в організмі комахи- хазяїна). Альтернативно у певних випадках фаг може бути сконструйований на основі фага, що зустрічається в природі.

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати фаг із вузьким або широким спектром цільових бактерій. У деяких випадках фаг має вузький спектр цільових бактерій. У деяких випадках фаг являє собою проміскуїтетний фаг із широким спектром цільових бактерій. Наприклад, проміскуїтетний фаг може цілеспрямовано впливати на щонайменше приблизно будь-яку з 5, 10, 20, 30, 40, 50 або більше бактерій, що живуть в організмі хазяїна. Фаг із вузьким спектром цільових бактерій може цілеспрямовано впливати на конкретний бактеріальний штам в організмі хазяїна без негативного впливу на іншу, наприклад таку, що не є цільовою, бактерію в організмі хазяїна. Наприклад, фаг може цілеспрямовано впливати на не більш ніж приблизно будь-яку з 50, 40, 30, 20, 10, 8, 6, 4, 2 або 1 бактерії, що живе в організмі хазяїна. Наприклад, фаг, описаний у даному документі, може бути придатним для цілеспрямованого впливу на одну або декілька бактерій, що живуть в організмі комара, у тому числі без обмеження Е5р/, Зегайа 5рр (наприклад, Зегайа тагсезсепбв),

Епіеграсієйпоасеає 5рр., Епієгорасієї 5рр. (наприклад, Епіегорасієї сіоасає, Епіегобасієг атпідепи5, Епіегорасієї Ідм/ідії), Ртоїєи5 5рр., Асіпеїобасієї з5рр., М/іддіезмопНіа 5рр. (МіддіеємопНіа /діоовзіпідіа) ХапШотопах 5рр. (наприклад, ХапіШотопаб5 тайПорнпіїа),

Рзепдотопазх з5рр. (наприклад, Рзепдотопав аєгидіпоза, Рзендотопав віцї2еїі, Рзендотопав пПодезіає), ЕвзсНегісніа 5рр. (наприклад, ЕвсПегспіа сої), Седесєа 5рр. (наприклад, Седесєа

Іарадеї), ЕміпдеМПа 5рр. (наприклад, ЕмжіпдеЇПа атегісапа), Васійи5 5рр. (наприклад, Васйив5 ритійнв), Сотатопаб5 5рр. або Мадососси5 зрр. (наприклад, Мадососсив 5заІтопіпагт) або

ММоІрасніа 5рр. (наприклад, УУоІраснпіа - м/Меї!, УуоІрасніа - мАЬВ, УУоІрбасніа - м/Меї!Рор,

М/оірасніа - мМе!Рор-СІ А).

Композиції, описані в даному документі, можуть містити будь-яку кількість фагів, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 або більше фагів. У деяких випадках композиція містить фаг з однієї або декількох родин (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 або більше фагів), одного або декількох порядків (наприклад, 2,3,4,5, 6, 7, 8, 9, 10 або більше фагів) або одного або декількох видів (наприклад, 1, 2, З, 4, 5,

Зо 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 або більше фагів). Композиції, що містять один або декілька фагів, також називаються в даному документі "сумішами фагів". Суміші фагів є придатними, оскільки вони забезпечують цілеспрямований вплив на більш широкий спектр хазяїв бактерій. Крім того, вони забезпечують цілеспрямований вплив на кожний бактеріальний штам (тобто підвид) численних ортогональних фагів, тим самим попереджаючи або значно затримуючи появу стійкості. У деяких випадках суміш містить декілька фагів, що цілеспрямовано впливають на один вид бактерій. У деяких випадках суміш містить декілька фагів, що цілеспрямовано впливають на декілька видів бактерій. У деяких випадках в однофаговій "суміші" міститься один проміскуїтетний фаг (тобто фаг із широким спектром хазяїв), що цілеспрямовано впливає на багато штамів у межах виду.

Придатні концентрації фага в модулювальному засобі, описаному в даному документі, залежать від таких факторів, як ефективність, показник виживаності, переносимість фага, кількість різних фагів і/або типи лізину в композиціях, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках фаг перебуває в рідкому або твердому складі. У деяких випадках концентрація кожного фага в будь-якій із композицій, описаних у даному документі, має щонайменше приблизно будь-яке значення з 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010 або більше БУО/мл.

У деяких випадках концентрація кожного фага в будь-якій із композицій, описаних у даному документі, має не більш ніж приблизно будь-яке значення з 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 БУО/мл. У деяких випадках концентрація кожного фага в композиції має будь-яке значення з від приблизно 102 до приблизно 103, від приблизно 103 до приблизно 104, від приблизно 104

БО до приблизно 105, від приблизно 105 до приблизно 106, від приблизно 107 до приблизно 108, від приблизно 108 до приблизно 109, від приблизно 102 до приблизно 104, від приблизно 104 до приблизно 106, від приблизно 106 до приблизно 109 або від приблизно 103 до приблизно 108

БУО/мл. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи фагів, то концентрація кожного типу фагів може бути однаковою або різною. Наприклад, у деяких випадках концентрація одного фага в суміші становить приблизно 108 БУО/мл, а концентрація другого фага в суміші становить приблизно 106 БУО/мл.

Модулювальний засіб, що включає фаг, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном в кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) бо концентрації фага всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад,

попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації фага всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації фага всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/і (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Як проілюстровано в прикладах 5-7 і 28, фаги (наприклад, один або декілька фагів, що зустрічаються в природі) можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію в організмі комахи-хазяїна, для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). і. Поліпептиди

Численні поліпептиди (наприклад, бактеріоцин, бактеріоцин К-типу, збагачений С пептид бульбочок, протимікробний пептид, лізин або регуляторний пептид бактеріоцитів) можна застосовувати в композиціях і способах, описаних у даному документі. У деяких випадках ефективна концентрація будь-якого пептиду або поліпептиду, описаного в даному документі, може змінювати рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів (описаних у даному документі, наприклад УмМоЇраспіа 5рр. або Кіскейвіа 5рр.), що живуть в організмі хазяїна (наприклад, переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, пухоїда або іксодового кліща) при цьому модулювання викликає зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). Поліпептиди, включені в даний документ, можуть включати поліпептиди, що зустрічаються в природі, або рекомбінантно отримувані варіанти. Наприклад, поліпептид може являти собою функціонально активний варіант будь-якого з поліпептидів, описаних у даному документі, на щонайменше 709,71 95,72, 739, 74, 759, 76, 77 9, 78 У, 79 У, 80 Уо, 81 Ус, 82 Уо, 83 Ус, 84 Уо, 85 Об, 8695, 87 Ую, 88 95, 89 95, 90 95, 91 95, 92 90, 93 95, 94 90, 95 90, 96 95, 97 95, 9895 або 99 95 ідентичний, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності поліпептиду, описаного в даному документі, або поліпептиду, що зустрічається в природі.

Модулювальний засіб, який включає в себе поліпептид, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня)

Зо концентрації всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/і (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Поліпептидні модулювальні засоби, обговорювані далі в даному документі, а саме бактеріоцини, лізини, протимікробні пептиди, збагачені С пептиди бульбочок і регуляторні пептиди бактеріоцитів, можна застосовувати для зміни рівня, активності або метаболізму цільових мікроорганізмів (наприклад, КісКейсіа або МуоІроспіа), як вказано в розділі щодо зниження пристосовуваності комах-хазяїв (наприклад, переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, пухоїда або кліща). (а) Бактеріоцини

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати бактеріоцин. У деяких випадках бактеріоцин продукується природно грампозитивними бактеріями, такими як

Рзеидотопавх, Зігеріотусе5, Васійи5, Зарпуіососси5 або молочнокислі бактерії (АВ, такі як

Іасіососсив5 Іасіїї)у. У деяких випадках бактеріоцин продукується природно грамнегативними бактеріями, такими як Наїйпіа аїмеї, Сйгорасієг їШшеипайї, КіІербзів!йа охуїоса, КіІерзіена рпештопіа,

Епіегорасієг сіоасає, беїтайа ріутійпісит, Хапіпотопах сатрезвігів, Еглміпіа сагоїомога, Наївіопіа 5оЇапасеагит або ЕзсПегіспіа соїї. Ілюстративні бактеріоцини включають без обмеження антибіотики І АВ І-ІМ класу (такі як лантибіотики), коліцини, мікроцини і піоцини. Необмежувальні приклади бактеріоцинів наведено в таблиці 4.

Таблиця 4

Приклади бактеріоцинів

Активний щодо грампозитивних рактерій: ІТ9ІВІ СТРОСКТ піегососсив,

Клас | Нізин Ї асіососсивз Іасіїв | асіорасійнв5 САІ МОСММКтА

І асіососсив, ТОНОЗІНУВК

Ї еисоповіос, (ЗО ТО МО: 40)

Ііетепа,

Сіовітідіит . . еарпуіососсив . . ІАЗКАІСТРОСАК

Епідермін ерійегтів Грампозитивні бактерії | ТаЗЕМЗУСС

ЗЕО ПО МО: 41

Клас І

Редіососсі,

І астобасій,

Ї еисоповіос,

ВгоспоїНгіх куугамаУтса

Редіососсив Рторіотірасівні кнЗоБУОМОК

Класна Педіоцин РА-1 асіанаснсі Васі ' АТТСПММОАМА

Епіегососсі, МАТССНОСМНКО еарпуососсі, (ЗО ТО МО: 42)

Ііетепла сіовігіадіа,

Ііеїепа топосуюдепезв,

І івїела іппосца

АТтАЗУСМИаМУМО

Епівгососсив5 І астобасійи5 закКеї МЗКОМУМИУС

Клас р Ентероцин Р гавсіт Епіегососсие гавсіт ЕАКЕМІАСІМІВЗСО

МАВ АСсСМаИаН

ЗЕО ІЮ МО: 43 атУррІСОСІС

ВУАУМУСКАМ

Клас с Лактококцин 5 | Бігеріососсиз Іасіїз| Грампозитивні бактерії. | ММЗОУМОАБ

ВІМАКККН

ЗЕО ІО МО: 44

МАУа,ОТМІ З5АА

І асіобасії ЗодатоІкАСКа

Класна Лактацин-Г Гасюрасінив Епіегососсив гаесаїїв ГолУоМАювУ опп5опії ааддІіааМЕаУ тн

ЗЕО ІЮ МО: 45

Клас ГО

МАКЕРИИІРААМА

СТМІМММЕАДОС

Широкий спектр: ММТТІМБІ ТАМа

Клас Га Котевоцин Етрогососси грампозитивні й ЗО0І5И АААСВ грамнегативні бактерії | ЕБІКАМІ ККЕІКК

КОаКААМІАМ/

ЗЕО ІЮ МО: 46

Продовження таблиці 4

М5УМІ МЕРІ КМІАК віарнуї Широкий спекти: 00 | УКОКМСВММУ

Клас Ауреоцин А70 тарпуіососсив грампозитивні й айгейв грамнегативні бактерії СОРТ ЕМУМОК

Ї ККІАСЇ.

ЗЕО ІО МО: 47

ІасАГ амМА! Ма.

І асіососсив Широкий спектр: аТмуАММММИс

Клас ІМ Гарвіцин А : грампозитивні й СЕММОМОММАМ

Чаглеає грамнегативні бактерії |КОКІМОМАРУ

ЗЕО ІЮ МО: 48

МАТІ ТІ МЕ! О5У засАБанвріАМА

Активний щодо ат заОгУдасі с. : САДАдсаамдасціА . Е5сПегіспіа соїї (а також

Некласифіко- Коліцин М Евспетіснпіа соїї близькоспоріднених УОХАЗТНКРМРА вані бактерій) МЗРЗаЇ СИТІКО

Епіегобасіегіасеає КРЕСІРЗЕАМУМУ

ААСВІ СМУУЗРМ

МІ 5ОМОЇ.

ЗЕО ІЮ МО: 49

У деяких випадках бактеріоцин являє собою коліцин, піоцин або мікроцин, що продукуються грамнегативними бактеріями. У деяких випадках бактеріоцин являє собою коліцин. Коліцин може являти собою коліцин групи А (наприклад, використовує систему ТОЇ для проникнення через зовнішню мембрану цільової бактерії) або коліцин групи В (наприклад, використовує систему Топ для проникнення через зовнішню мембрану цільової бактерії). У деяких випадках бактеріоцин являє собою мікроцин. Мікроцин може являти собою мікроцин класу І (наприклад, « 5 кДа, має посттрансляційні модифікації) або мікроцин класу Ії (наприклад, 5-10 кДа, із посттрансляційними модифікаціями або без них). У деяких випадках мікроцин класу ІЇ являє собою мікроцин класу Па (наприклад, потребує більше від одного гена для синтезу й складання функціональних пептидів) або мікроцин класу Б (наприклад, лінійні пептиди з посттрансляційними модифікаціями на С-кінці або без них). У деяких випадках бактеріоцин являє собою піоцин. У деяких випадках піоцин являє собою К-піоцин, Е-піоцин або 5-піоцин.

У деяких випадках бактеріоцин являє собою бактеріоцин класу І, класу ІЇ, класу ЇЇ або класу

ІМ, що продукується грампозитивними бактеріями. У деяких випадках модулювальний засіб включає бактеріоцин класу І (наприклад, антибіотики, що містять лантіонін (лантибіотики), що продукуються грампозитивними бактеріями). Бактеріоцини класу І або лантибіотики можуть являти собою пептид із низькою молекулярною масою (наприклад, менш ніж приблизно 5 кДа) і можуть мати амінокислотні залишки з посттрансляційними модифікаціями (наприклад, лантіонін, ВД-метиллантіонін або дегідровані амінокислоти).

У деяких випадках бактеріоцин являє собою бактеріоцин класу ІЇ (наприклад, сполуки, що не є лантибіотиками, які продукуються грампозитивними бактеріями). Велика кількість із них є позитивно зарядженими пептидами, що не містять лантіоніну, які, на відміну від лантибіотиків, не зазнають великої посттрансляційної модифікації. Бактеріоцин класу ЇЇ може належати до одного з наступних підкласів: "педіоциноподібні" бактеріоцини (наприклад, педіоцин РА-1 та карнобактеріоцин Х (клас Іа)); двопептидні бактеріоцини (наприклад, лактацин Е і АВР-118 (клас ІІБ)); кругові бактеріоцини (наприклад, карноциклін А та ентероцин А5-48 (клас Іс)) або немодифіковані лінійні непедіоциноподібні бактеріоцини (наприклад, епідерміцин МіОї і

Зо лактококцин А (клас Іа)).

У деяких випадках бактеріоцин являє собою бактеріоцин класу ІШ (наприклад, що продукується грампозитивними бактеріями). Бактеріоцини класу ЇЇ можуть мати молекулярну масу більш ніж 10 кДа та можуть являти собою термонестабільні білки. Бактеріоцини класу ПІ можуть бути додатково підрозділені на бактеріоцини групи ША і групи ПВ. Бактеріоцини групи

ІА включають бактеріолітичні ферменти, які знищують чутливі штами за допомогою лізису клітинної стінки, такі як ентеролізин А. Бактеріоцини групи ІВ включають нелітичні білки, такі як казеїцин 80, гельветицин ./ та лактацин В.

У деяких випадках бактеріоцин являє собою бактеріоцин класу ІМ (наприклад, що продукується грампозитивними бактеріями). Бактеріоцини класу ЇМ являють собою групу складних білків, асоційованих з іншими ліпідними або вуглеводними фрагментами, які, очевидно, потрібні для активності. Вони є порівняно гідрофобними й термостабільними.

Прикладами бактеріоцинів класу ІМ є лейконоцин 5, лактоцин 27 і лактоцин 5.

У деяких випадках бактеріоцин являє собою бактеріоцин К-типу. Бактеріоцини Е-типу являють собою скорочувальні бактеріоцидні білкові комплекси. Деякі бактеріоцини Е-типу мають скорочувальну структуру, подібну до відростка фага. С-кінцева ділянка білка нитки відростка фага визначає специфічність зв'язування з ціллю. Вони можуть прикріплюватися до цільових клітин за допомогою білка, що зв'язується з рецептором, наприклад нитки відростка.

За прикріпленням іде скорочення зовнішнього чохла й уведення серцевини через оболонку цільової бактерії. Проникнення серцевини викликає швидку деполяризацію потенціалу клітинної мембрани й миттєву загибель клітини. Контакт з однією частинкою бактеріоцину К-типу може призводити до загибелі клітини. Бактеріоцин К-типу, наприклад, може бути термолабільним, помірно кислотостійким, стійким до трипсину, здатним осаджуватися в результаті центрифугування, бути помітним під час використання електронної мікроскопії або мати комбінацію цих властивостей. Інші бактеріоцини Е-типу можуть являти собою складні молекули, що включають численні білки, поліпептиди або субодиниці, і можуть нагадувати структуру відростка бактеріофагів родини Муомігідає. У бактеріоцинів К-типу, що зустрічаються в природі, структури субодиниць можуть кодуватися бактеріальним геномом, таким як геном С. айсіНе або

Р. аегидіпоза, та утворювати бактеріоцини К-типу, які виступають як природний захист проти інших бактерій. У деяких випадках бактеріоцин К-типу являє собою піоцин. У деяких випадках піоцин являє собою В-піоцин, Е-піоцин або 5-піоцин.

У деяких випадках бактеріоцин являє собою функціонально активний варіант бактеріоцинів, описаних у даному документі. У деяких випадках варіант бактеріоцину є на щонайменше 70 95, 719,72 95, 73 У, 7490, 759, 6, 77 Чо, 78 90, 79 У, 80 Ус, 81 ув, 82 Ус, 83 Уо, 84 Ус, 85 о, 86 9, 87 то, 88 то, 89 то, 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 95 або 99 95 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності бактеріоцину, описаного в даному документі, або бактеріоцину, що зустрічається в природі.

У деяких випадках бактеріоцин можна створювати за допомогою біоінженерії згідно зі стандартними способами для модулювання його біологічної активності, наприклад підвищення, або зниження, або регулювання, або для визначення його цільових мікроорганізмів. В інших випадках бактеріоцин продукується трансляційним апаратом (наприклад, рибосомою тощо) мікробної клітини. У деяких випадках бактеріоцин синтезують хімічним шляхом. Деякі бактеріоцини можуть утворюватися з поліпептидного попередника. Поліпептидний попередник може зазнати розщеплення (наприклад, процесингу під дією протеази) з утворенням самого поліпептиду бактеріоцину. Таким чином, у деяких випадках бактеріоцин продукується з поліпептиду-попередника. У деяких інших випадках бактеріоцин включає поліпептид, який зазнав посттрансляційних модифікацій, наприклад розщеплення або додавання однієї або декількох функціональних груп.

Бактеріоцини, описані в даному документі, можуть бути складені у вигляді композиції для будь-якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) бактеріоцинів, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 бактеріоцину, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 або більше бактеріоцинів. Придатні концентрації кожного бактеріоцину в композиціях, описаних у даному документі, залежать від таких факторів, як ефективність, стабільність бактеріоцину, кількість різних типів бактеріоцину в композиціях, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках концентрація кожного бактеріоцину в рідкій композиції становить від приблизно 0,01 нг/мл до приблизно 100 мг/мл. У деяких випадках концентрація кожного бактеріоцину у твердій композиції становить від приблизно 0,01 нг/г до приблизно 100 мг/г. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи бактеріоцинів, то концентрація кожного типу бактеріоцинів може бути однаковою або різною. У деяких випадках бактеріоцин передбачений у композиції, що містить бактеріальну клітину, яка секретує бактеріоцин. У деяких випадках бактеріоцин передбачений у композиції, що містить поліпептид (наприклад, поліпептид, виділений із бактеріальної клітини).

Бактеріоцини можуть нейтралізувати (наприклад, знищувати) щонайменше один мікроорганізм, відмінний від окремої бактеріальної клітини, у якій поліпептид утворюється, у тому числі клітини, клонально споріднені з бактеріальною клітиною, та інші мікробні клітини.

Таким чином, бактеріальна клітина може виявляти цитотоксичні ефекти або ефекти, що 60 інгібують ріст, щодо багатьох мікроорганізмів за допомогою секреції бактеріоцинів. У деяких випадках бактеріоцин цілеспрямовано впливає на один або декілька видів бактерій, що живуть в організмі хазяїна, і знищує їх за допомогою утворення пор у цитоплазматичній мембрані, руйнування клітинної стінки (наприклад, активності пептидогліканази) або активності нуклеази (наприклад, активності ДНКази, активності 165 рРНКази або активності тРНКази).

У деяких випадках бактеріоцин характеризується нейтралізувальною активністю.

Нейтралізувальна активність бактеріоцинів може включати без обмеження зупинку розмноження мікроорганізмів або цитотоксичність. Деякі бактеріоцини характеризуються цитотоксичною активністю і, таким чином, можуть знищувати мікроорганізми, наприклад бактерії, дріжджові гриби, водорості тощо. Деякі бактеріоцини можуть інгібувати розмноження мікроорганізмів, наприклад бактерій, дріжджових грибів, водоростей тощо, наприклад, за допомогою зупинки клітинного циклу.

У деяких випадках бактеріоцин характеризується знищувальною активністю. Механізм знищення в бактеріоцинів є специфічним для кожної групи бактеріоцинів. У деяких випадках бактеріоцин характеризується біологічною активністю вузького спектра. Бактеріоцини відомі своєю дуже високою активністю щодо своїх цільових штамів. Активність деяких бактеріоцинів обмежена штамами, які є близькоспорідненими щодо штаму-продуцента бактеріоцину (біологічна активність вузького спектра). У деяких випадках бактеріоцин характеризується біологічною активністю широкого спектра щодо великої кількості родів.

У деяких випадках бактеріоцини взаємодіють із рецепторною молекулою або стикувальною молекулою на клітинній мембрані цільової бактерії. Наприклад, нізин є вкрай активним щодо своїх цільових бактеріальних штамів, демонструючи протимікробну активність навіть в однорозрядній наномолярній концентрації. Було показано, що молекула нізину зв'язується з ліпідом ІЇ, який являє собою основний переносник субодиниць пептидогліканів із цитоплазми в клітинну стінку.

У деяких випадках бактеріоцин характеризується протигрибковою активністю. Була ідентифікована низка бактеріоцинів із протидріжджовою або протигрибковою активністю.

Наприклад, було показано, що бактеріоцини з Васійш5 характеризуються нейтралізувальною активністю щодо деяких штамів дріжджів (див., наприклад, Адеїшипі апа ОїІаосує, Маїаузіап

Уоита! ої Містобіоюду 9:130-13, 2013). В іншому прикладі було показано, що пептид

Зо Епіегососсиз Таесаїї5 характеризується нейтралізувальною активністю щодо видів Сапаїйда (див., наприклад, Зпекп апа Коу, ВМС Місгобіоіоду 12:132, 2012). В іншому прикладі було показано, що бактеріоцини з Рхейдотопах характеризуються нейтралізувальною активністю щодо грибів, таких як СигмиЇагіа Ішпайа, види Еизагшт, види Неїтіпіпо5рогішт і види Віороїагі5 (див., наприклад, Зпаїапі апа Згімазіама, Те Іпіегпеї Уоигпаї ої Місгобіоїоду Моїште 5 Митрбег 2, 2008).

В іншому прикладі було показано, що ботрицидин АУ1316 та алірин ВІ! з В. 5!,Б5 характеризуються протигрибковою активністю.

Модулювальний засіб, який включає бактеріоцин, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації бактеріоцину всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації бактеріоцину всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації бактеріоцину всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (а) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/і (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Як проілюстровано в прикладах 8, 9 і 16, бактеріоцини (наприклад, соЇА або нізин) можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію в організмі комахи-хазяїна, для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). (р) Лізини

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати лізин (наприклад, також відомий як муреїнгідролаза або аутолізин пептидогліканів). Можна застосовувати будь- який лізин, що є придатним для інгібування бактерії, що живе в організмі хазяїна. У деяких випадках лізин являє собою лізин, який може продукуватися природним шляхом бактеріальною клітиною. У деяких випадках лізин являє собою лізин, який може продукуватися природним шляхом бактеріофагом. У деяких випадках лізин одержують із фага, який інгібує бактерію, що живе в організмі хазяїна. У деяких випадках лізин конструюють на основі лізину, що зустрічається в природі. У деяких випадках лізин конструюють для секреції бактерією-хазяїном, 60 наприклад, за допомогою введення сигнального пептиду в лізин. У деяких випадках лізин застосовують у комбінації з холіном фага. У деяких випадках лізин експресується рекомбінантним бактеріальним хазяїном, який не є чутливим до лізину. У деяких випадках лізин застосовують для інгібування грампозитивної або грамнегативної бактерії, що живе в організмі хазяїна.

Лізин може являти собою лізин будь-якого класу й може мати один або декілька видів субстратної специфічності. Наприклад, лізин може являти собою глікозидазу, ендопептидазу, карбоксипептидазу або їх комбінацію. У деяких випадках лізин розщеплює В-1-4-глікозидний зв'язок у цукровому фрагменті клітинної стінки, амідний зв'язок, що з'єднує цукрові й пептидні фрагменти бактеріальної клітинної стінки, та/або пептидні зв'язки між пептидними фрагментами клітинної стінки. Лізин може належати до однієї або декількох специфічних груп лізину залежно від ділянки розщеплення в пептидоглікані. У деяких випадках лізин являє собою М-ацетил-В-О- мурамідазу (наприклад, лізоцим), літичну трансглікозилазу, М-ацетил-В-ЮО-глюкозамінідазу, М- ацетилмураміл-і! -аланінамідазу, Г, О-ендопептидазу, О, О-ендопептидазу, 0, р- карбоксипептидазу, Ї, Ю-карбоксипептидазу або 1!, ОЮ-транспептидазу. Необмежувальні приклади лізинів і форм їхньої активності наведено в таблиці 5.

Таблиця 5

Приклади лізинів 5. рпеитопіає Ср!1 Срі-1 Мурамідаза МУККМО ЕМОМ

З5НМаТхмріІТай.

ЕОМОИттТМТтИКіІ

ЗЕЗТТМІ МРОЇ.

ЗАОМЕОБМРІС

ЕМНЕАНЕССИ ОМ

АЕАЕРЕАОБЕНІ.

ОМУМРМОУКУМІ.

МІ'ОУЕВОРЗОа рАОАМТМАСІ

ВЕМОМІАВАС

УКРІУУБЗУКРЕ

ТНОММОМООІ.

АОЕГРМБІ УЛАС чагмратАМЕ

ЕМЕРЗМОаИїАвМУ

МОМ5ЗМРЕОК

МІМ ГОБЕЕВСОК

РКТАИТМУКОЮ

ЗКаммгвАММ

СЗЕРМУМКУУ/ЕКІ ваУММУУво5К

СМСІ ТЕМІ КО

МЕКМ МІ КОМО

АМАТОММІ Уа

ЕМ УУМОрОБаИаА

МУТСУУКУКМ

МУУУМТМЕНОа

ММУЗМЕРІКЗИОК

СУМЕММТ МИ.

АРМРБЗЕТКЕРО

СИ ТМА

ЗЕО ІЮ МО: 50 5. рпеитопіає Ор-1 Амідаза МамОрІЕКаМАМ/

МОАдАКанУзув

МОЕгЕВраРОЗМУО

С555МУМАІ 5

АПАББЗАСМАМУМ

ТЕММНАМ ТЕМ

СУЕГІЗЕМАРМУ рАКНООІРІМС

ВКОАбБАСАСа

НТОаМмгРІОБОМІЇ

НСММАМОРИЦІВМ

МОНОЕНМ/ УМА

СОРУУУМУВІ т

МАМАСОРАЕККІ.

СУОКрАТОаРМ

УАВКАМИатТУРКО

ЕРЕМІЕЕМКОМ/Е

МЕОРОСУМІ АЕ

КУМ КНТрРаммуу

УМЕОВКОСУМАТ

ЗМКВІСЕБМ ТУ

ЕМНОСЗММУТОМУ

ІКУУМОММУМУСрА

ТМармкомМАРІВН

УМраТмм РО

САГАОКРОЕТМ

ЕРОСИІТАКМ

ЗЕО ІО МО: 51

В. апінгасіб Ріуса Амідаза МЕОККІ МОРБ

КУаТткСРУТМ

КРКМІТУНМТУ

МОАРАЕМЕМБ5У

МІБМММЕМЗЕН

ІАМОЮОККАЇОСІ

РГЕВМАМЖАСО ремавамМно5

ІЗМЕІСУВКоОаСО

ОВУУКАЕЄОМАМ

РУМВОІ М5МУ

МІРІ ЕММАТНОБ

МБаКкУсСРНАМ

ГАЕСВМСАРІО

КУКМОаММАТТО

РТКОМІОБСИАЕ

ЗРМХЕТРОУММаОА

І Т5І КМТАОНІ!.

ОБОЇ ТУРІЗКР

ТОАОЇ КАМКЕ

МГ ОВКОамМММЕ

УК

ЗЕОІЮО МО: 52 авсіит 5. аштеи5 ФМК11 МУ-І. Ендопептидаза | МОАКІ ТККЕРІЕ та амідаза МІ КТ5ЕСКОЕМ

МОГ МУМаБОСЕО

МАМАСМУКМІ ЕС.

ГГКаІ САКОІРЕА

ММЕрагігАТУМОМ

ТРОРГАОРО ОМ

УУРгавмМмуУвдаУ

СНМАМ/МІЕАТІ Ю

МПУМЕОМУМ С

СУМ ТОВІЕОРОМУ

СМУЕКМТАВОНА

УОЕГРМУУРІВРМЕ

КЗЕТАРАБІОБР

ТОАБККЕТАКРО

РКАМЕЇ КІКОУУК

СУОІ РКАОСМР

КамІНМОДОа5К

САТАЕАУВМИЇ.

ММАРІ 5ВІЕАДСІА нБУУБОаМТУММО

АГОЕБОМОМ НТ

АМОГаМКУМУМСІ

ЕМСОБМОАОМА

ТР'КМЕОАТЕРОЕ

САВІ І ККУ Р

АМАМТІВІ НМЕРГ

Т5Т5СРНАБ5МІ.

НТОаБОРМТВИ.

РЕОКОГ ОЇ КОМЕ

ІКОІВМУМОСКІР

МАТУ5МЕ55БА55

МТУКРМАБАМ/КА

МКУаТУУМЕЕМА

АЕТМамогРІТУВ

КІСРРІ 5СРМАУ

ОгОРССУСОМТ

ЕУМ ОрИЯаНУМ/М

СУТМЕСОВУМІ.

РІВТМУМОа5БАРРМ

ОП 'аріІ Маг

ЗЕО ІЮ МО: 53 5. адаіасііає взо Лізин ОВЗ Мурамідаза та | ММІМІЕОСАІАМ/МА ендопептидаза | ЗАКОКУТУЗМО уУвМаРБЗБЗУОС55

ЗМУРГАІЇ ВБАСА5бО

МОСУАУММТЕМЕНО

МІКМамММІ АЕМ

ТМУУМАО ВІРІ

МаквОАБАСАЕ

СНТОаМЕМОРОМІ

ІНСМУСУМОІ ТМ

МНОЕМаММасотРв

УМУАУпУБакКкОо5

МАКМОМКОМУУБЗК

ЕЕКЕГОММТРІ ЗМ

ЗММРУУЕАТІЗЕО

УУМЕБКРОММ5Т

РКЕ Г УдатиАУв

МУЕКУКОУМАВІС

АРОБМОМ/МЕВА

М ОАТОМ

ЗЕО ІЮ МО: 54 з. аштеий5 К Гузк Амідаза та МАКТОАЄБЇІМКАЇГ. ендопептидаза | ВАМАКОТУМО5Р

УВУККАТ5МОР

ЗРОММЕАСАЇЮ дПаУУНАОСОЮ

Томмі МстОМ

КУАТМ,МАКОСО

ІіКОБУаТтангкіІНн

ЕМКРОТУРККО

УЛАМЕТЗИаЗМУЕО жма;нісімУраам

Т5ТЕТІСЕОММУУМ

СМУАМККРТКАМО

МУмаТНиРЇІЕЇРМ

КАСИТТУККЕТАК

КЗАЗКТРАРККК

АТІ КУЗКМНІМУ

ТМОКАаИккРЕС

ММІНМОДО ЗИ

ООМЕМ5І АМАСУ

АВУАМСИІАНУУС

ЗЕСМММЕАІВАК

МОУ нтТа,7рат

САМЗОаМЕВЕДа

ЕМСОБМЗАБОА

ОРГКМЕОАМЕБОГ

ТАЕКЕРКЕМ СТР

МАКТУВІНМЕЕ

МРТАСРНАЗМУ

ІГнНТагМРМУТОС

АРБОАІММКІ КО

МЕІКОІКМУ МОК сте5етумкра

КТЗБАБЗТРАТАР утавмккмома

ТУУКРЕМАТЕММ

СМОРІМТВІС5РЕ

ІГМАРУССИМІ РАС

АТІММОЕМСІОА

СНІУ/ЛИаММАУМО

МАУУСРУВТСО

СМРРМОЇІРОМА жамЕк

ЗЕО ІО МО: 55

Г. топосуїодепез | А118 Ріу118 Амідаза МТ5УМУ5АБІ А

МУМКІ АОМТКА

ААВКІ ОМ5ЕЗ

МИаптЕМИМЕТІВТ

КЕООААМУМБС

АБОТМАЗУНІ М

СОАІГ ОРГУМАКа

КТМОМсаАУАЗО

КакККеЕМАКАКБІ. сгєЕмсармва

ЕМОМРНГОЄМУ каУстотРа7ака

А5БТЗМЗЗКРБА ртМитМеГ аг МОУ

ММІ-МКІ ОБЗЕАМ

АККІ АТЗУСІКМ

УЗаТАТОМТТ

АКГКАСКРНТР

АБКМТУУТЕМР

АКУКТІ МОСОГ

УКБМОЄТТКМО тТаатЕРРЕИтТУє тзамакткаа

ТРАЇКтТКБаИахумі.

ТАМТКЕМККІ

ЗЕО ІО МО: 56

Г. АБІ11 Ріуб11 Амідаза МУКУТМЕМКИПАС топосуюдепев І РКаКІ КОАМЕМ

ІАНЕТАМЗК5ТІЮ

МЕУБУМТАМУУК

МАРУТНЕМУСаСС

САУМОМАМУМУМ зУадаОмАМЗУ

ЗУАОМЕ! САТ5М

АТТЕККОУЕМУС

ОГП МОГАККАаИІР тіозОБКТООК

СІКЗНКУ/МАОКІ. ватТнОрРУАУ

І 5БУМаІЗзКАОБА

ЗП АКУБОСаИТмМтТ

СТАРАКРЗТРАР

КРОТРОТМІ ОК. с МОМММАККМ рЗБУЗМАОКІА

КОУСІАМУВИТ

АБОМТТИ ЗКІК

СаАРКРОЗТРАР

КРУОТЗТАККІМЕ

РРМІКОамМмУБУМР

ТМКАРМКАМАЇС

АІМРТКРСОСІ ТУ тОокКорамаммє

ІЮТрОогавМОМУ

САРБЗТОАМІКК

ЗЕО ІО МО: 57

Г. топосуїодепез | АБОО РіузОО Ендопептидаза | МА ТЕАУУ ТЕКА

МмАКІМАСамМУК

ІТ5ОКТАММІКК

МАКЕСІМІ СМА

ОСУВЗТАЄОМ

А УДОСАТКРИ

АМТМАКОСОМ

НМУСМАМОІ СІ М тМрако;уІМмЕзт

Т5АМККММААМ

КАєЄСЕКМ СИ

М/КЗЕКОУРНЕЕ

ІГССАМБИОЕКІРА

АТОМТМТМ5МА

МЕ,КМІОБАРІЇ.

РКМОРКЗ5ОРЕВ

МУКМаТЕР МУ оНМОМУМ/ УК

РОКІ УУМУКЕ

СОММАККОАКа

ВІКУВІКЗАКОЇ А

ІРУМ/ММІКІ МЗИК

ІК УАРМУКІ АМУ

УМУВВИміІ ЕІ М

УРМОСУУММУТАЕМРІК

ЗЕО ІО МО: 58

. Ендопептидаза 5. адаіасіає Профаг Ї атрааза! Глікозидаза ММІМІЕСАІАМУМА

Ї атрааза! знкакУтУ5мМо уУвМаР5УБУОЮС5

ЗЗМУБАЇ НБАСА

ЗОМОУАММТЕМУ

ЕНОУМ ІКМО УМ.

ІДЕМТМУМАОВ

СОІРМОКАОА

ЗАСАРаНТОаМЕ

МОРОМИІНСММО

УМ5ІТМММНОЕЇ

МаУМаоРМУМУМА

УВАУАВКОБМАК

МОМОБМУЗКЕЕК

ЕГОММТРІ 5М5М

МРУМУЕАТІбЕВУ

УМЕБКРОММЗТО

КЕГГМАатТАУВМ

ХЕКУКОУМ/АНВІСА

РОБМОУММЕВАУ

ПОАТОМ

ЗЕО ІЮ МО: 59 5. адаіасіає Профаг Ї атраабзаг2 Глікозидаза й | МЕІМТЕІАІАМ/М5

І атраабаг ендопептидаза | АНОСКУЗУЗМО уУуврагРМ5Уро5

ЗЗМУХАЇ ВБАСА

ЗЗАСУАУМТЕУ

МНОУЛІКМОМЕЇ.

ІАЕММОМУМАУВО

РІАмМУсМАОаньо5 вАСОаНМУМУМЕІЮР

ЕМІНСМУУАММИ

ІТМММУМОТААА

ЗОМУМУСУМУУ ВІ. кБаАБТОСКОІ о

ТІ МКЕТІ АОМУС

МОЕАВКАМІ СМО

ХМЕАУМ5МІМОКТТ

ТМОКТМрОЇ МОЕ

МІАЯСКНОМОЕАВК

КІ а5ОМПВАМОК

ВМТЕП ККОРБЕР

ЕКАСЕММКРТЕТК

ТЗОТЕГ ТаОСАТА

ТКЕЕСОІ 5ЕМОТ

ПІ ККАМІ ОК СМ

СККНОІ РБМУАЇ Т

ПІ НУЕСІ М/СТ5А

УаКАЮММУССамМ тутасамАрза

МТМТОО5АВРОМ

ЕСОНУМНУАБМ

РоЕСсТОМУРМИ.

ВАпОаБУКУВБОА

КТЕЗЕАІКОМЕКМ

СОАМУрУААБОЕ рБМІМОАБЗНІ К

АІЕАЕМаИБІ ОКЕ оКАТОІСВСС5К

ОКІОСІТІЕСІЕМТІ

Мат МЕСТККРМУ

ЗЕОІЮО МО: 60 5. ирегі5 Профаг РІУ700 Амідаза МТО5ІОЕМНАКІ. (АТОС700407) О5ІРУВУЮМИЮ вУаМчрАовраВ

ІЕМОС55АМ5КА

І аІ5МТММТЕТІ.

ООАЇ РАІСМОКІ

НОАМОаТЕОМО

АХОМИІМАРНОС

555І ЧАБанмМі

АТОЗРТТАІНСМУ аБОСІТЕМОММУ

ІМ/ЕІМСАРВАВЕЇМЕ вВКаТмтТОоТОАТУТ

ЗОБГЕВЕГОММАНІ.

ТУМ5ОКРУМУЕАТІ 5

ЕОМУМЕАСРНАВІО5

ООКЕІКАСТАМУВ

МУЕКІ МОМ ЗВІМ

НРЕБАОММЕО5

М МОАТЕМ

ЗЕОІЮ МО: 61 . Глікозидаза й

ЕММОЇ М Мао

СЕОМАМАСМУУК

М гака с

АКОІРЕАММЕЮ

СГАТУМОМТР

РРГАОРСЮМУ

УгавмМмУсАаУ

СНМУАМ/МІЕАТІ.

ОМИММЕОМУМІ. васмтраіво

РОМ СУЕКМТА

ВОНАМОЕРММУУ

ЕІВРМЕКБЕТАР

В5МО5РТОАРК

КЕТАКРОРКАМ

ЕС КИІКОУУКОМО

ІГРКАО5МРКИЇМ

ІННОАОЗКИаАТА

ЕАМВМОИЇ ММАРІ.

ЗВІР ЕАСІАНОММ

ЗаМТУММОАІ ЕЕ

БОМОаМ/НТАМОЇ

ОМКМУМСИТтЕМСоО

ЗМОаАОМАТЕЇ К

МЕОАТЕОЕСАНІ.

І ККУ, РАМАМ

ТІВ НМЕЕТ5Т5

СРНАБ5МІ НТО

ЕОРМТВаГ РЕ

ОКАГОЇ КОМ РІК

ОСІВАУМОСКІРУ

АТУ5БМЕ5З5БА55

МТУКРМИАБАМК

АВМКМаТУУМЕЕ

ЗАВЕТМОаМОРІТ

МАКМОаРРЕІ 5СР

УуахогОрРасУ

СОоУТЕУМІ ОРОС

НУУУСВУТМЕВ

ОВУМІ РІВТМУМ

С5АРРМОНП СО

І МСЕ

ЗЕО ІЮ МО: 62 з. аштеий5 Фнь Гузнь Амідаза та МОАКІ ТККЕРІЄ ендопептидаза | МІ КТЗЕСКОУМ

АРСОММОРОСЕО

УАМАСМУКАЇ ЕС

ПІ КамМалдкоІРЕ

АММЕВаГ АТУМО

МТРОБГАОРОЮ

МУУРавмМмуУцвАа

УОНМАММІЕАТ

ГОМПММЕОМУ. асхутрамоо

РОБОМЕКУТАВА

ОНАМОЕРММУУРІВ

РМЕКЗЕТАРНЗМ

О5РТОАБККЕТА

КРОРКАМЕЇ КІК рукам РКА

С5МРМЕЇМІНМО

АСЗКОАТАЕАдУ

ВАМОЇІ ММАРІ 5А

ГЕАСІАНОУУ5О

МТУМУОАЇ РЕБО

МОМ НТАМОСИМ кУаматєМсо

МОаАОМАТРЇ КМЕ

ОСОАТЕРОЕСАВИ К

КМ РАМАМТІ

ВІНМЕЕТ5ОТ5С

РНАБ5МІ НТОЕ

ОРМТВОЇ І РЕО

КАГОЇ КОУРІКО

ІВАУМОСКІРМА

ТУБМО5БАБОМ

ТУКРМАБАМКА

МКУатММЕЕ 5ЗАВЕТМОаМОР

ІТМАКМОРРЇІ 50

РУаМОБОРОС

Усрх

ТЕУМ СОБОНУ

МУаУТМЕСОВ

УЖ РІВАДТУМО5

АРРМОП СІ М

СаЕІ5

ЗЕО ІЮ МО: 63 ендопептидаза | М5КІСКИатрмио

Мам ОСсМоЕ

АМОМІННУТОС

КУТМУамМАІрА

РКММЕеОСІ СТУ

УТМТРЕЕРГВАВРАУ срУУМуБУаТ

ЕАТУСНІАІМУМ

РОРМОаЮГ ОМІТ

М'ЕОМУУ МОМ

СІУКТЕРАТІВ тТнрУТОаУ5Н

ЕІАРКЕАОЕМК

ЕТАКТУМКІ 5М

ОККІМТРКМ5М

ЕВІКМУУКТВО

МІМОСЕНУЕЇ УМ ванкРКОМУМІН

МТАСТАБАТОЕ

СОвВІТЯІмМТЕО

ОГАМОМАНМУХІ

ОКМТІМЕТІ РЕО

ВІАУНУАООСМа

МТЕРМУСІЕУСО5

АМТОКЕОРІАМ

ЕОМАРОЕААВН

ІЇК5БУТаМААМА

МТУВІННТЕ5

ЗТЕСРОМ5МІ. і нтТаУЗмМКМа

КРТООІТМКСА

ОМЕМКОЇІМАМІО

ОКОРєРТОТУМУОа5

ЗБЗОМКІ КАКМК рКеТОММТМЕ

УСТІМУККЕНА тТЕТСОМВОСІМ

ТАТТаРЕТ5СОСР

ОАСМІ УУпОБМ

МУртТУСКОраУ

ММ

УМ МРІВТУМУО

А5ТОКМ5ЕІМа

ТІ

ЗЕО ІО МО: 64 зпгеріососсі ФМСТС 11261 | РуУСВ5 Мурамідаза та | МАТУОЕУКЗА5 (ав5) ендопептидаза | МЕМАМОІравзеЕ

АОС рамхАдо

УСКМІ СІ РУАМ

СсТМТамАВОЇМ/

ЕОВНЕМИІІ МУ

ЕОЕМЕММОДОО

МАІРМУУрамтрР

У5НМУАІгрБрАС сах аоОмМ

ОоваАМадумм

КІРУБАТУРТАР

АРКУЕКМАМТМУ там МкКари

РІУЗАМООАВІ.

ТТТСООдатТтТК

ТІКМЗЕБІАМІ 50

АНОООАМТОР

ІамУнеаврРасао

ЗАГАОВЕАПІ РІ.

ЗМІ РОККУБМІ М

ІОМЕОБАБАЮОКО

АМТМАМІАЕМО

КІАБАСУКРІМУ

ЗУКРЕТІ ММІЮМУ

ОКПАКУРМБІММА

СМРОМЕМЕАТЕРІ.

МЕРЕРЗМОСУВ

УМмОгтЗУСУдО

СГОКМІМ АБО

ЗКМОІРКМОКРО

ЕГТЕМОКІ АТМТ

КГОМЗМУРУМЕА

ТІ 5ТОМММЕБЗКР

МАБЗАОКЕРІКАС

ТАУВУМЕКУМОМУ

ЗВІМНРЕБАОСМ/М

ЕОБМІ ММАТОМ

ЗЕО ІЮ МО: 65

Передбачувана

А. паезішпаїї ФАм-1- Лізин Ам-1 амідаза/ Н. в. мурамідаза

Амідаза та . Амідаза та

Г. топосуїодепез | ФЕРУМ .ЇтЗ3 Гуз25 Амідаза МУКУТМЕМКИА

СІ РКОаКІ КАМ

ЕМІАНЕТАМЗК5

ТІОМЕУЗУМТАМ

МОМАРУТНЕМОа сапавУМОМАММ

МУУБУСАСаОМА

МЗУЗМАОМЕГ СА

ТЗМАТТЕККОМЕ

МУСОГ ГМО АКК

АС,СІРІТ ОБОЗКТ зОоКаікЗнКкМмМА рк'ааттнНорР

МАХ 5БМУСІЗКА

ОРГАБОЇ АКУЗОС еСМТатАРАКРБ

ТРБОТМІ ОКІ СІ М

ВУММАККМО55

У5МВАВАКІ АКО

УСІАМУБИаТА5

ОМП ЗКІКОа

САРКРОЗТРАР

КРОТЗТАККІУ

ЕРРМКОаМУуЗУ

УРТМКАРМУКА

МАІаЇАЇ

МРТКРОСІ ТУ тоОокКкрдамам

МЕЮТрОвгаВ

МОМУСАРБ5Т

САМІКК

ЗЕО ІО МО: 66

В. сегейв5 ФВРБ1З ГузвРБ13 Амідаза МАКАЕКМІРЕЮОМ

ЕАЕМОКААКФЗБІ

КБІЕАБЇІ ЗК О

КСМКЕІВАТИаС

ОАТЕКЕМГАТІ.

КААКЕУММАЕМО

КМОНІКОІ ЗК

УБакм5АКЕЕМ

ОБКМІММАКТ5 мОовакмтозеЕ

СОМ КММЕНО

ІМ5УМКОРОМН

АКАМУЮрНОСО

УТРНІГКТМАК рзошмМемМРБ5 мманввмкгтт

ООМЕКАМОКЕ

ІГМООМЕАТТО

ГМОА МОЇ КЕЇ

ЗКІ МААБЕ5І 5

АВАБАБОУМ5 гОоОУБМЕТао вАтУоОтУса

ІЇКТАМАЕВМІ.

ЕГЗИаОАтТаї5К

ЕГОВІМЗККИаї.

ТАВЕСЕЕВККІ.

МАО ЕСІРАБЇ.

ТАВККІ М5З5І О

ЕТТ5ММЕКЕМ

ОБІ МОДОУУК

РЕГСЄТМНОММ

МЖЕВАРАЇАГАЇС

САІТАТІСКІ 5

ЕССМНЗКАМА

РОЕМУУСЧООТ

САМаАМУ АРМ

АТАТМАБИОЇ С

МН агТасоєм

МЕРОБЗММІ ЗАМ

СУНСАЕЄОМКАА

ТТООАТЕАВАТ са аБОЕЄЕМКОЕЕ

МТАУнЗИаа

МОТКОРОМАРІ. вАМКОБИАМС

ВЕКОРОЇ КАЇ М а 55МБОМА тУ5МООММА тУагозвАІЗо замАБІОСТК сОаАІМЕОСО

МаївЕавєМмоР

ОМААМРОЮСЄ тккмосмаан

ААІ НКОМЕКО

ІЗОРОМІ МТ І рАБКАБАСОЮ

РАЕОАЄЕМІ АТІ.

АБКМмамУММ55 рРОАВаТпоГгОР зак ткКЕМІИК

УМКкЕагкЕаві

ЕЗАКАОКАХ5

ЕЗКАБІОМЗО

ЕААТАКОАТЕ і момМа5кКІіНн

ОАМАА СИ Р

АРІ УТАІДАММУ

АГТААДУДОаЗА

І МЕКОаАБУМІ К вамМАЗКУСИ касксакас стассасАсє

САДАТаАСАА

АВАСИмМаАдА

АСЕМОАСМАА

СОААДАСАдАС

ОК даУаКка

ЕМКОАаКІ МІ.

РІ ап МОАЗЕЇ

МОАРЕЕАКО5 диаБАУМСИСІССЯ сІДаСААТад

ІдаЗЕ арт

АУОСІАСИАС

СЕАСЗБІ СЕТІ вам гОБаРКЕ рАБААОКАКАЮ

АБАААЇ ДАДАСІ т5аАУаЗЗАГО

ОМАОСІТаА

РММБОМИЗМА

ЗА ІЗБСАМА

ЗА СІБЗСОЄМ

ОСІЮОТМТОКЕМ

ТМТККАМЕАК

Кам ЗМЕВЕ

МІЗММЕВМІ Т

ВАЕОІГАСОАН дОоМмамамМа саватАсАС саіМмагтас

СКІГОРІГ АС

ОКМ ЗОМ О

ОонОГавгтро

МІТАЕОІГОКМУ

ІОБКАРОСЗМ

МАСМИАТЕК сОєгМаіоОРА

МЛАНААЕБЕЗО

М,Т5КІАНОК

СМЕРСІСАБО

ОБРУЗБЗАХЕРЕ кратавАдАЕ ваІМаСАКМУІ зЕКУУСКОМТ

ТГОКМКААСУ

АТМАБУАРМІА

ЗІМАСАРТОаЗО

БаММТАТІМУМ

УкарЕКивок

ІЇКМЗЗОМККА аекріІШБИ СЕМ

ЗВЕМТІА

ЗЕО ІЮ МО: 67 з. аштеий5 ФОНІ15 Гузан1ь Амідаза та МАКТОАБІМКА ендопептидаза | ОАМАКОТУО5

РУВІККАТЗМУО

РБОБРОУММЕАСА

ІСАРаУУнНАО

СОрИтТоУМІ Му

ГтоМкУвтУуа

МАКОРОЇКОБУ

СТОаЕКІНЕМКР

ЗТУРККОУМАМ

ЕтБавмоОосм сніСіМХОСХМ

Т5ТЕТІСЕОММУ

МОМАМККРТК вУрМмУмУаІ тн

НІЕІРУКАСТТУ

ККЕТАККЗАБК

ТРАРКККАТІ К

УМБКМНІМУТМ оКАОККРЕСМ

МІНМОДОаНнЗВа

ООМЕМБІ АМАСІ

ХАВУАМСИІАНУ

УО5ЕСУММЕАЇ

РАКМОІАМНТа ратаАМ5ОаМЕВ

ЕАИТаєМСОМЗА

ЗВАОГІ КМЕОАМ

ЕОРГТАЕКЕКЕМУ

С ТРМАКТУВІ Н

МЕЕМРТАСРНА

ЗММІ НТагмМРУ

ТОСАРБОАІММ

КІКОУРІКОІКМУ мокКкат55втУм

КрактеАБ5БТР

АТАРУТОБМКК

МОМатумУКРЕ

МАТЕУММаМО РІ

МТАВІВБРЕЇ МАР

УСОаМІ РАСАТІ

МУРЕМСІОДОН

МЛамМчАММИЮ

ВУМСРУВТСО

СМРРМНІРОМА

МОМЕК

11111111 5ЕОЮ Мов ШО

ФУВ бЗаи5- Ендопептидаза

С. врогодепев5 ФевО74-81 Сб5741. Амідаза МКІСІОМОНТІ 5 вАрУаУМаї АР

ЕБМІ ТАПЕМО ТК мук ОК анмм

ММСТУОКАББМУ

ЗЕБІ УТАУУВА

МОАММОЇ РІБІН

ЕМАТРОСТатЕ

МУТУдОВОї аЕ

АТВІВОЕНЕКБІ С

І вонаткКраба

АМІВМТКАКАМ

ІГЇМЕССЕСОМРМ

ОМКІ УМ5ЕБЕ5

МАЇУКатІакі Р маєБаммМмМос

СМКУКАММІММЕ

САОВАСАЕМІ А

М МСРТІБМЗАТ

ЕОМ5СМЕНММУАМ ваТккЕОУТКМІ.

КП 5аАМАМО

ТМООІЇМЕеІмМаак

ЗЕОІЮО МО: 69

З. ТуУрпітигійт ФБРМ15 ЗРМ15 Глікозидаза МОІМОРАВАЗИЇІ

МЕОГААВУУЕРН

ІТГТАММЕРИІТК

РОСОАМЕІЇАОМ

СНЕЗаСсСЕТНО

ЕМЕМУБУМИІ 5

СЕРІВАСВІТРОЮ

АМАЇ аАКТМУЕК

ЗІ Р ЕВОВАЇАМ г мУ5кКАМОаММа

РОрсМУМУВОаВ

СОТ МММво

Сама! КМ МАО

РЕПАОБСЕХМААВ

ЗААМ/ГРББОЗКИаС

МкУтТарІ УМ

ОопчасомМма!ро

ВАТАУАААВКМ

ІА.

ЗЕОІЮО МО: 70

МмаУМмамМиМас

ІРМОКМАЇ УНОС

І ГААСАААДОАХА с. . ГОРАУТВАТОаКР б. тіспідапепзі5 | ФСМ77 СМ77 Пептидаза І МІ'ЕСУВОЇ ТВ

ОКМІ АМІ МІ 5С

ВОМІААМРОИЇ 5М

НОМ АСОЕАА

РІМБ5БОаЗЕЕНН

М/МАВОМАРІ Га

РОМЖАВОСКАОМЕР

МНУЕМОаММУРМУ5

ВУАБІ ОМТРІОЮОВ

МОМАВІТЕСОМ

ОНВІАМІГ ОТЕЮТ

РІ СРАГМКНАЇ С рА І СОАМАМ

ЗІАЕМРОКТМО

МІ МОНРІ АКМЕ ратРІ КУВІ СО

МАКУЕРІ ЕНОМ

ТАОАІАКІ СТО

ЕТОКОЇ АТІСАС

МКРІОЕАБІ МУККІ

МОраУвВАЇ ГОВА

АА

ЗЕО О МО: 71

А. раштаппції ФАВ2 ГузАВа2 Глікозидаза МІСТКОСЕБІВМ

ЕГРОСКІ ОТО

МОАЇМЕІМАКАТЕ

ЗОЇ ТУРЕААМІ |.

АТІМНЕТОЇІ РОС

МУАТМОРІКЕАС

ЗОБУ ВО5ККУМР мамаммМоі ту

КЕММЕНЕИКИС

МОГІКМРЕКАЇ Е

РИТАІОЇІАІКО МІ. маеМмгтамавЕвА

КАРУБКУМКОО

МХЖУААНВМІМИаКО

КАЄПАКМАПЕЕ

ВАЇ В5І.

ЗЕОО МО: 72

В. сегейв5 Фв4 Гузв4 Ендопептидаза | МАМАГОТІ ІОКА мАКІ МУ5амаАк рУМАДЮАТААМІТО

МНАССІМІСМАЮ

СЕВБЕАЕОМАЇ У

АоавВтТкКРОБІМТ

МАНОСОБЗМНММУ

СМАМОІ СІ МТОЮ аБОМІМТМЕСМЕ

ВКМІААМКАОСЕ кма,аарМммМБЕКО

МРНЕЕ мруУсаа

ОКРРАЮМСИСАМ рмасавазТась засав5таааот сасхУрвБмЕт

КЕТОаТЕМТМТ5І

КІГ АТАРЕТ5АВСМ

ІАТ РАСЗРУМУ

МагРагєУраммуму

ІВОРАБМОМИМІ.

АТаЕЗКОСКНО муУматЕк

ЗЕО ІО МО: 73

С. їугобшугісит |ФСТтТРІ1 Срті Глікозидаза МККІАВІБМІ М ,ММОУКГ ЕМ.

СМІСПАКАБЗЕС атТЕМОКУУКО

МУТМтКАСак

ІТаАМНЕАМЕ5

ТІАКАООБАМЕ

Е-МСІАИТТРО

ЕММІ'ОГ ЕООСТ

СсОІТрАСІ АРІ.

МІМАККЕКСУМ

УСМ55РІКЕНІ.

МОКІСАМУРІ МІ

АМУСМАТРАЕТ

ГУ/ТКУАМУО

ЕТЕКООМУВИ5

СМІОБЗМІТОЕ

ЕРІКМІКОЕРЕМ

ЕМ ММУМОСА

РОВААЕМІ АВ

ГАСРТІММАВКЕ рУБМУКМУМАМ вамкЕОоМт5У г тИАСЗТАМТ

ТМОАМІ ОМІКМ

ІК

ЗЕО ІЮ МО: 74 з. аштеий5 Ріу187 Гідролаза МАЇ РКТаКРТА клітинної стінки | КОММОМ/АЇМІ С заУурурауУав

ОСМОІ РММІЕМ

ВУМ/МЕКТРОМ

АВОМАМ/УВУР

ЕСЕКУЕВМТ5О

ЕМРКРИВБІАУМУ таамМмимМмУмту антаммМарРзтк

ЗУРУБМОМММ

МЗМБУМаЗРААК

ІКНЗМЕеаМУТНЕМ

ВАВРАУКАЕРКРТР

РАОММРАРКОР

ЕРБККРЕБМКР

ІУКУМТКІЇ ЕТ

АНІЕНУКАМАЕ

УНМІТКЗОМНМ

МКРМКІМІКМТМ

ТА 5ТІОМУВУВ

РЕГОКОЕІРНЕЕ

МОВІГМУМАСАР

ІЕОБІМСИ НОВУ

МІ 5БІТЕТАТАІ 5

ОМЕКММЕЇЕСІ.

ЗІ АЕБІЇ КАММК

КМЗАЗМІМОМК

АМмАТЕКСНТОК р5І К555ЕТОК

ОМОКАММЕІКІ.

ЕМОКОКССММК

РКОМУМЕВІВІВТ

ІМКЕМТКЕМРБЗЕ

ГКРАММІНОКО

ОБКІОВМІММУТ

ГКОАЇ МОМКІ М

РКРОТЗМОУ5

М УМАБУМОЇК

ЗАМОТТКІРММ

ММОММОРІКІ М

ОМОСІРМОКІ М ко Уа,акаті АМ

ОСНАБГАВсСИСК

КУМІМЕЇМІ АН

ВАЕГЕЗАМИТ5Е

ЕАБОКТИамУмМ

УугамсацйАРОММР

ММАМАРГАНЗН

СМУ/Т5РТКАПСИ вАєРУСКИамеЕМ

Ммаомт МАМА

М/МРОКРИТНО

МАТРІБУМАКМОА

ОМІЗБАМУКЕЇСІ. тТаругІУроОУкККк

ЗЕО ІО МО: 75

Г. топосуїодепез | ФР35 РІУРЗ5 Амідаза МАВКЕТКАЕЇ МА

КАЕККМУСсИї КР

РУККАМІ ЗАМКЕ

АУОАУСІСНУБО

СУАБІАєОМИЇ М

ОовАТКРОМІМТ

МАКОСОБМНМ

ЕСМАМОРБАІЮСІЮ

РОКІОБУОРБЗА

ТІММММКАВаг кУусармкаЕт

РІРНЕЕАСОМУ

УвВОаЕНКУКМО

ТЗЕМКККЕМІМ мІКОМЕМБООК

РОРІМЗКВУНО

МкнаИТаткукітк ниЗНУУТамМ крамквБУвамі

УНЗМАКУТ5К

МзравзммМАТІМ

АНАЕЄСМ/ОМКК час гРІМІ КА

СЕКаІТНнНРАБЗО

СЕМРІ МЕАЗАК

КТЕМІРАУМЕО

ІКК

ЗЕО ІЮ МО: 76

ЗНОСУРІВСІСЕЕ

АСТТМТИКУЗЕ

ЗТ МРСІ ЗА

ОМЗО5МРІСЕУ

НЕАМ/РСОМЕЕЕ

АЕАЕАВУРІ ОММУ

РТОУКМІ МІ ОУЕ

ОНАБЗАЗМОВМТ

ТАСІ ВЕМОПАЕА

СУТРІУУЗУКРЕ

ТІОМУРУООІА

ОЕРМБЗІОМІАСУ

СІМОСТАМЕЕУ

ЕРЗМОСІВММ

ОУ5ЗЗМРЕОКМ

МИ ООЄКЕОМІ

ММЕМТІ КВІ-ТТ

МАМЕМІОСІ МС

МООЕВХОВІА

МАСУОРОАМО

ОКУМЕЇЇ МАВЕЇ

АРІ ТТМАМЕМІЮ

СІМ/СМСОЕВ

УО5ІАМАСУОР

ОАМООКУМЕЇЇ.

МАВЕЇАОІ ТУ

АМЕМІОСІ М/С

МООЕВХОЗВІ АМ

АСУОРРОАМОЮ

КУМЕІ 8

ЗЕО ІЮ МО: 77

Е. таесаї5 ФЕРАР-1 ЕРАГ-1 Амідаза МКІКО БУМ

ТЕС ЕСАТММ

ОАУЕМММЕРМІ.

ОРМ/ЕС5ООГАУ

РМКІЇ НЕТАМРА

АТОАМЕАТУМК

МІММ/РМАНТТАЇ

УВросімуУКМАР

ЕСМУЗМУСАСМ

АМРЖУАРМОЇЕСО

НТМОРЕЇ ЕКАМУ

КАУУрУТАОМО

ККЕСІРМТІОО

СО5ІМ'ЕКСОМУМ

ЗНОМУУТОЕМУМ

СОНТОРУСУІ.

АКМСІЗКАОГА

НОГАМСУЗОМТ

АТРТРКРОКРК

РТОРЗКРОМКК

ВЕМУВМОСІ ЕУ

УМОМУОГУМЕ

НІОКІОЕММ/ТЕ

МОІРУЕУМОКМ

МРАТСОРТКО

ОМІКУСОУЕМЕ

ОЕМБТаМУМОєЕ

ОТРУМИОаМТІ 5

НМОЇ РМЕРІУ/.

ЕТОБКОАЇ МУО

ЗЕО ІЮ МО: 78 (З.ашенв | 0 |5АЄТ //// |Невизначеніо/ |Нев./////////СсС

У деяких випадках лізин являє собою функціонально активний варіант лізинів, описаних у даному документі. У деяких випадках варіант лізину є на щонайменше 70 95, 71 95, 72 90, 7З Об, тА, 7595, 7690, 77 90, 78 У, 79 9о, 80 Фо, 81 9, 82 Уо, 83 Ус, 84 У, 85 Ус, 86 9, 87 У, 88 У, 89 Об, 9096, 9195, 9295, 9395, 9495, 9596, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності лізину, описаного в даному документі, або лізину, що зустрічається в природі.

У деяких випадках лізин можна утворювати за допомогою біоінженерії для модулювання його біологічної активності, наприклад підвищення, або зниження, або регулювання, або для визначення його цільового мікроорганізму. У деяких випадках лізин продукується трансляційним апаратом (наприклад, рибосомою тощо) мікробної клітини. У деяких випадках лізин синтезують хімічним шляхом. У деяких випадках лізин утворюється з поліпептидного попередника.

Поліпептидний попередник може зазнати розщеплення (наприклад, процесингу під дією протеази) з утворенням самого поліпептиду лізину. Таким чином, у деяких випадках лізин продукується з поліпепгиду-попередника. У деяких випадках лізин включає поліпептид, який зазнав посттрансляційних модифікацій, наприклад розщеплення або додавання однієї або декількох функціональних груп.

Лізини, описані в даному документі, можуть бути складені у вигляді композиції для будь- якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) лізинів, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 лізину, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або більше лізинів.

Придатна концентрація кожного лізину в композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність лізину, кількість різних лізинів, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках концентрація кожного лізину в рідкій композиції становить від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 100 мг/мл. У деяких випадках концентрація кожного лізину у твердій композиції становить від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи лізинів, то концентрація кожного типу лізинів може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, що включає лізин, описаний у даному документі, може бути

Зо приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації лізину всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації лізину всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації лізину всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/ (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна. (с) Протимікробні пептиди

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати протимікробний пептид (АМР). Можна застосовувати будь-який АМР, що є придатним для інгібування мікроорганізму, який живе в організмі хазяїна. АМР являють собою різноманітну групу молекул, які розділяються на підгрупи на основі їхнього амінокислотного складу й структури. АМР можуть бути одержані з будь-якого організму або продукуватися в будь-якому організмі, який природно продукує АМР, у тому числі АМР, одержувані з рослин (наприклад, копсин), комах (наприклад, дрозоцин, пептид скорпіона (наприклад, Оу192, ОусСстз3з, 03, 010, Оу17, Оу192), мастопаран, понератоксин, цекропін, морицин, мелітин), жаб (наприклад, магаїнін, дермасептин, ауреїн) і ссавців (наприклад, кателіцидини, дефензини і протегрини). Наприклад, АМР може являти собою пептид скорпіона, такий як ЦОу192 (5-РІ5ТІМ/МИІКИаїгІ-3; 5ЕО І МО: 227), ОустЗ (5-

ІЇ БАЇМУБИїКОІ Е-3; ЗЕО ІЮ МО: 228), 03 (5, МСаКІ МЕСМУКБІІ-37 ЗЕО ІЮ МО: 229) та 010 (5--

ЕРЕГКІ ЗІ КІРКЗАЇІКЗАЇІКНАЇІ -37 ЗЕО ІЮО МО: 230), Оу17 (5-ІЇ 5АІМУБаИаІка! І -3 ЗЕО ІЮ МО: 231) або їх комбінацію. У деяких випадках протимікробний пептид може являти собою пептид, що характеризується щонайменше 9095 ідентичністю послідовності (наприклад, щонайменше

90 Фо, 92 Фо, 94 9, 96 95, 98 95 або 100 95 ідентичністю послідовності) з одним або декількома з наступних: цекропіну (ЕС ІЮ МО: 82), мелітину, копсину, дрозоміцину (ЗЕО ІО МО: 93), дермцидину (ЗЕО ІЮ МО: 81), андропіну (ЗЕО ІЮ МО: 83), морицину (ЗЕО ІЮ МО: 84), цератотоксину (ЗЕО ІЮ МО: 85), абецину (5ЕО ІО МО: 86), апідецину (ЗЕО ІО МО: 87), профеніну (ЗЕО ІО МО: 88), індоліцидину (ЕС ІЮ МО: 89), протегрину (ЗЕО ІЮО МО: 90), тахіплезину (ЗЕО

ІО МО: 91) або дефензину (З5ЕО ІЮ МО: 92) для переносника патогену людини. Необмежувальні приклади АМР наведено в таблиці 6.

Таблиця 6

Приклади протимікробних пептидів

ЗИ ЕКО ОСАККА є. Багаті на глутамінову та увегекгакрАМУЕ

Аніонні пептиди аспарагінову кислоту Дермцидин ОГЕЗБМАКОАМНОМ

КОМІОБМІ

ЗЕО ІЮ МО: 79

Лінійні катіонні а- КМУ КСЕККЕКУВО спіральні Не мають цистеїну Цекропін А МІНОСИКАСРАМА пептиди МУ,ОАТОІАК

ЗЕО ІЮ МО: 80

МКУРБЗМІ ММ ТИ

ГАІМООБОАРІМИ

Андропін ОКМЕВАЇ НТОДХО

АСЕКІ ІАРМЕНИА

ТРККЗЕКРЕК

ЗЕО І МО: 81

ММ КЕРЕМРІМА

М5І УЗОЗТААРА

Морицин КІРІКАІКТМаКАМ

СКаї ВАІМІАЗТАМ

ОМЕМЕЇ КРККАКН

ЗЕО ІЮ МО: 82

МАМІ КАМЕГІСІТМ

АРІАГОСММАЕР

ААЕОБУМУУКНА5І

Цератотоксин ,5АЇ ККАЇ РМАК

КІСКІАЇ РІАКААЇ.

РМАДОЇ УС

ЗЕО ІЮ МО: 83

МКУМІРІЕАГ І АТІ

Катіонні пептиди, Багаті на пролін, аргінін САДЕАМУРІ РММ збагачені фенілаланін гліцин ' Абецин РОРОВАРЕРТЕР конкретними триптофан ' ' СОСРЕМРКІКМУР амінокислотами ОоаУ

ЗЕО ІЮ МО: 84

Продовження таблиці 6

КМЕАГГАПММТЕММ

АМЕРИМТМІГ ОРРТ

ВАРТАВІ ВВЕАКРЕ

АЕРЕММАРУМІРО

РАРРНРАЇ АВЕА

ЕРЕАЕРЕММА РУ

МІРОРАРРНРВІ В

ВЕАЕГЕАДЕРО ММ

АРУМІБОРАРРНР

ВГАВВЕАЕРЕАЕРС

ММАРУМІРОРАРР

Апідецини НРАГ АВЕАЕГЕАЕ

РОММАРМУМІБОРА

РРНРАЇ АВЕДЕР

ЕАЕРЕММАРУТЧХІ

РОРАРРНРАГАА

ЕАЕРЕАЕРСОММА

РУМІРОРАРРНРА

ІГАВЕАЕРЕАЕРСОМ

МАРУМІРОРАРРН

РАІ АВЕАКРЕАКР

СММАРМУМІРОРАР

РНРВІ

ЗЕО ІЮ МО: 85

МЕТОВАБІ СІ СА

МБІМІГ ГАЇ МУР

ЗАБАОАІЇ ЗУВЕАМ

ІГААМОВІ МЕО55ЗЕ

АМІ МАГ ЕІ сОРРК

АРЕОРИТтТРКРУБЕ

ТУКЕТМСРАРТАВ

РРЕ'СОРКЕМИа ВУ кОоСсУаТтмтІ роко

Профенін РІГ ОІТСМЕСУВАВЕР

М/М/М/РЕГААРНАЇ В

ВОАЕРРРМУРОаРАБЕ

РРРМУРааРВАВЕРРР

МЕРЕРАЕРРРМЕР

СРАЕРРРМЕРОаРР

ЕРРРІЕРЕРМЕРРР

РРЕВРРРЕСРРАЄ рРавв

ЗЕО ІЮ МО: 86

МОТОВАБІ ав

МБІМІГСГМУМР

ЗАБАОАІЇ ЗУВЕАМ

ІГААМООЇ МЕЇ 55Е

АМІ УВІ ЕІ ОРРР

КОМЕОГ атАКРУ

Індоліцидин ЗЕТУМКЕТМСОСРНАТІ

ООРАБОСОЕКЕК свУкОСУСТМТІ 0

РБОМООРОІ МОСМЕЇ.

ОБМІ РМКУУРУ/МУ/

РУВВО

ЗЕО І МО: 87

Продовження таблиці 6

МЕТОВАБІ СІ СА

МБІМІГ ГАЇ МУР

ЗАБАОАІЇ ЗУВЕАМ и, 2. ГААМОВІ МЕОБЗЕ пептиди, катонні АМІ УВІ ЕІ ООРР містять цистеїн Містять 1-3 дисульфідні КАРЕОРО ТРКРУЗ , Протегрін ЕТУКЕТУМСРАРТА таутворюють звязки ОРРЕІ! СОЕКЕМОВ дисульфідні УКОСУСТМТІ ООІК

ОРІ ОІТСМЕУОСУВ савісСУСсАВАВАЕСУ су,;сва

ЗЕО ІЮ МО: 88

КУСЕВУСУВаїС

Тахіплезини Уввосв

ЗЕО ІЮ МО: 89

МКСАТІМСТІАУМІ

ААТІ І! МЕЗМОАА

РОЕЕААІ ЗАМ

ІМТ ГОЕГРЕЕТ

Дефензини ННААІЕМУВАКА

АТСОІ АБИРИаМОа

ЗІ СААНСІАВНУ дапусмМеКАМС

УСсвМ

ЗЕО ІЮ МО: 90

ММОІКМІ ЕАГЕА

МІ МІ ММ ФАМЕА рдрсізанукарв

Дрозоміцин САУМОМЕТСВАМ

СКЕЕєСНОІЗИНО

ЗРБЗІ КСМУСЕСС

ЗЕО І МО: 91

АМР може бути активним щодо будь-якої кількості цільових мікроорганізмів. У деяких випадках АМР може характеризуватися формами антибактеріальної й/або протигрибкової активності. У деяких випадках АМР може характеризуватися біологічною активністю вузького спектра або біологічною активністю широкого спектра. Наприклад, деякі АМР цілеспрямовано впливають тільки на декілька видів бактерій або грибів і знищують їх, тоді як інші є активними щодо як грамнегативних, так і грампозитивних бактерій, а також грибів.

Крім того, АМР може функціонувати за допомогою низки відомих механізмів дії. Наприклад, цитоплазматична мембрана являє собою часту ціль для АМР, однак АМР можуть також порушувати синтез ДНК і білка, згортання білка й синтез клітинної стінки. У деяких випадках

АМР із сумарним катіонним зарядом і амфіпатичною природою руйнують мембрани бактерій, зумовлюючи лізис клітин. У деяких випадках АМР можуть проникати в клітини й взаємодіяти із внутрішньоклітинною ціллю з порушенням синтезу ДНК, РНК, білка або клітинної стінки. Крім знищення мікроорганізмів, АМР продемонстрували низку імуномодулювальних функцій, які залучені в усунення інфекції, у тому числі здатність змінювати експресію генів хазяїв, виступати в ролі хемокінів і/або індукувати продукування хемокінів, інгібувати продукування прозапальних цитокінів, індуковане ліпополісахаридами, сприяти загоєнню ран і модулювати відповіді дендритних клітин і клітин, що беруть участь в адаптивній імунній відповіді.

У деяких випадках АМР являє собою функціонально активний варіант АМР, описаних у даному документі. У деяких випадках варіант АМР є на щонайменше 70 95, 71 Фо, 72 95, 7З Фо, 7495, 750, 76 ою, 77 90, 78 Уо, 79 Уо, 80 90, 81 Ус, 82 Фо, 83 У, 84 Уо, 85 У, 86 95, 87 90, 88 Фо, 89 о, 9096, 9195, 9295, 9395, 9495, 9596, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності АМР, описаного в даному документі, або АМР природного походження.

У деяких випадках АМР можна створювати за допомогою біоінженерії для модулювання його біологічної активності, наприклад підвищення, або зниження, або регулювання, або для визначення його цільового мікроорганізму. У деяких випадках АМР продукується трансляційним апаратом (наприклад, рибосомою тощо) клітини. У деяких випадках АМР синтезують хімічним шляхом. У деяких випадках АМР утворюється з поліпептидного попередника. Поліпептидний попередник може зазнати розщеплення (наприклад, процесингу під дією протеази) з утворенням самого поліпептиду АМР. Таким чином, у деяких випадках АМР продукується з поліпептиду-лопередника. У деяких випадках АМР включає поліпептид, який зазнав посттрансляційних модифікацій, наприклад розщеплення або додавання однієї або декількох функціональних груп.

АМР, описані в даному документі, можуть бути складені у вигляді композиції для будь-якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) АМР, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 АМР, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або більше АМР. Наприклад, композиції можуть містити суміш АМР (наприклад, суміш пептидів скорпіона, наприклад ОУуСТЗ, 03, 010 ї Оу17). Придатна концентрація кожного АМР у композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність АМР, кількість різних АМР у композиції, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках концентрація кожного АМР у рідкій композиції становить від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 100 мг/мл (від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 1 нг/мл, від приблизно 1 нг/мл до приблизно 10 нг/мл, від приблизно 10 нг/мл до приблизно 100 нг/мл, від приблизно 100 нг/мл до приблизно 1000 нг/мл, від приблизно 1 мг/мл до приблизно 10 мг/мл, від приблизно 10 мг/мл до приблизно 100 мг/мл). У деяких випадках концентрація кожного АМР у твердій композиції становить від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г (від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 1 нг/г, від приблизно 1 нг/г до приблизно 10 нг/г, від приблизно 10 нг/г до приблизно 100 нг/г, від приблизно 100 нг/г до приблизно 1000 нг/г, від приблизно 1 мг/г до приблизно 10 мг/г, від приблизно 10 мг/г до приблизно 100 мг/г). У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи АМР, то концентрація кожного типу

АМР може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, який включає АМР, описаний у даному документі, може бути

Зо приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації АМР усередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації АМР усередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації АМР усередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/ (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Як проілюстровано в прикладах 20-22, АМР, такі як пептиди скорпіона, можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію в організмі комахи-хазяїна, для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). (4) Збагачені С пептиди бульбочок

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати збагачений С пептид бульбочок (пептид МОСК). Пептиди МСЕК продукуються в певних видах бобових рослин та відіграють важливу роль у мутуалістичному азотфіксувальному симбіозі рослин із бактеріями із родини КПі2горбіасеае (бульбочковими бактеріями), який зумовлює утворення кореневих бульбочок, у яких рослинні клітини містять тисячі внутрішньоклітинних ендосимбіонтів. Пептиди

МОСК мають протимікробні властивості, керуючи необоротним процесом термінального диференціювання бактерій, наприклад, із пермеабілізацією мембрани бактерій, порушенням клітинного ділення або інгібуванням синтезу білка. Наприклад, у клітинах бульбочок Медісадо іїгипсаїша, інфікованих 5Зіпогпігорішт пеїйоїї, продукуються сотні пептидів МОСК, які керують необоротним процесом диференціювання бактерій у великі поліплоїдні азотфіксувальні бактероїди. Необмежувальні приклади пептидів МОСК наведено в таблиці 7.

Таблиця 7

Приклади пептидів МСК

МІТКІММЕІМММІС СТТЕНМ

ЗАКККАМІЕСЕТН

. ЕОСБОМЕМРРЕМ ка 8О86бідБІАВЗЗ1477 1) МАСМІНЕСКІЕЄМИа Меадісадо ігипсаїша

ЕНГВУ

ЗЕО ПО МО: 92

МАКІМКЕМУММІРРІ.

ЗІ ОММУМУМСЕЇ

. РАОСРОІСМРРМЕМ ка воваідрІіАВ531476.1) сУМнА!АСамУМТО Меадісадо ігипсаїша

ОБІ ЕГТОЕЕТАЗКО

МБ

ЗЕО ІЮ МО: 93

МУКУМЕБІГАУМНА

КРМІМТКЕЕКЕМУТМ

»айЦ152218082|90ІА8531475.1) РІСІ5І ГГ УМТМАМАН Медісадо гипсаша

МСА 338 МСТрРІБОСЗЗМНОВУ 9

ЕСМ5І СММИаосІСІМЕ

ЗЕО ІО МО: 94

МУЕТІ ВІ ЕМІМІ гМ5

ІСІ! МУМОСЕБКІ ЕОТ »айЦ152218080|І950ІА8531474.1) С5ЕОРЕСМІКМРНУР Медісадо гипсаша

МОВ 337 ЕСНІ ВСЕЕСЕСООЇІ. 9

МаРА

ЗЕО ІО МО: 95

МАКІММЕМУ5МІМРЇ Е

ГРГЕМАТКААВНОИМІ СУ

»айЦц152218078|90ІА8531473.11 ТО5НСРРНМСРРОМ Медісадо гипсаша

Мов 336 ЕРВСУВВМСКСІ РІС 9

М/АКУГМР

ЗЕО ІЮ МО: 96

МОІСКМММЕТРКІ СУ

МПЕЕЕСМЕРЕВОМИ А

ІГМТТЕАРІ МЕКМІ ВЕ

»айЦц152218076|95ІА8531472.1) МмсаОоМАМІМКНАСОК Медісадо гипсаша

МСА 335 МНЕБПІ 5ОСКТМКОС 9

РКГЕАВАМУВСАКОУС

МРІ

ЗЕО ІО МО: 97

МІ ВІ М М5УЕ ГІ КАТ. . МБУЕБУЄ5ТМПЕСКТО ко Во7419БІАВЗЗ1471.1) МОСРІБЗОЇ КІМАМУКСМУ Меадісадо ігипсаїша

КМасніІггОМІРММУЄ

ЗЕО ПО МО: 98

МАБЇКЕММІМІ ЕМ.

ПУМАБЕНЕСМУТОРСОС

29Ц152218072|95ІА8531470.1) ЕКІЕІМРТМЕХАММСОСО5 Медісадо гипсаша

МСА 333 СУСММ МаТкимі і СІ. 9

ККККЕСПБМГ І.

ЗЕО ІЮ МО: 99

Продовження таблиці 7

МАЕПКЕММІМІЇ СМУ5І.

ІЕМАСЕЕСМТОАОС

. РОКІ МРОІАВКРІ МО5ІС ко 8070|95ІАВ531469. 1) ЕСУБ5І УКОКЕБІ 55 Медісадо мипсаїшіа

КТ5ЕБІ МУУМУМТІ МІ

СІ АВГАМІБОІ КР

ЗЕО ІЮ МО: 100

МАЄ КОЕМАММІ БІБ

ІІ РАКІВСЕТІ 5І ТН

РКСННІМІ РБІ РІТЕМ

»айЦ152218068|95ІА8531468.11 ЕОАМТОррасСРКРУМ Медісадо ігипсащіа

МСА 331 НГВУУКСІЕНІСЕУО У 9

МУАРОБАБЗОЇІРЕЗТК

МРАКВАЕ

ЗЕО ІО МО: 101

ММУЕПКМЕМАММІ БІБ

ІГАМУКІВСАНЕРСМТ

»9Ц152218066|95ІАВ531467.1) РООСРКРУМКІ ВМІК Медісадо ігипсащіа

МеВ 330 СІОНІСОМАВМІ РОЕА 9

ЗЕІЗЕЗТКМРОКОЕ

ЗЕО ІО МО: 102

МЕНАОАЕММАКМУ5М

ЕМСІМІГ РІГ АГ ЕРІТММ

»9Ц152218064|95ІА8531466. 11 РААВРЕСВЕОБНОСМТ Медісадо ігипсащіа

МОВ 329 ВІКСМІ РАКРЕСАМУА 9 са7асУр5МКкУВ

ЗЕО ІО МО: 103

МОМАОММАТІМЕМЕ

МПЕРІБГ І МУУТКаУВЕ »айЦ152218062|95ІА8531465. 1) РЕББЕТЕСРТОКЕВІО Медісадо ігипсащіа

МОВ 328 СРБІБСУМРОУРКСІМ 9

ЕЕСНСКМІРТТІ К

ЗЕО ІО МО: 104

МАТІЇ МУУМІТІ РІЇ.

ТМТЕСІ МЕРІ УМЕВ А

»9Ц152218060|95ІА8531464..1) ОРОСАВМІОСРБУІ С Медісадо ігипсащіа

МСА 327 МАРКУРАСІМЕЕСНС 9

КОІРБОН

ЗЕО ІО МО: 105

МТТ5ІКЕМУМАЇЇ РІ БІ. . ГП УУМОаСІВАВРЕСНО ко 8058І95ІАВ531463.11 ОБОСРОУЕСЕКІСТУРК Медісадо мипсаїшіа

СРУБКСУСК

ЗЕО ІО МО: 106

МТТ5ІКЕМУМАЇЇ РІ БІ. . ГП УУМОСІВККЕСНО ко 8056|95ІАВ581462.1) ОБОСРБЗУЕСЕКІ ТІАК Медісадо мипсаїшіа

СІН5ТСІ СК

ЗЕО ІО МО: 107

МОІСКМММЕТРКІ МУ

ЕП РІ БІР СІТУ5М55 »9Ц152218054|95ІА8531461.1) ЕБОІЕМ5АСКТОКОСР Медісадо ігипсащіа

Мов 324 кРавУМУв!СсАКаТмМмсМ 9

РІ

ЗЕО ІО МО: 108

Продовження таблиці 7

МТА ККРІМАМРЇ- РМ. . ЕГАТТММЕОРУСИаБМ ке ВоабідрІАВе81457 1 РЕСМУРОМЕОСІММІС Меадісадо ігипсаїша

КСУБННАТ

ЗЕО ІО МО: 109

МОКАКММАОПЕУМУУ

АПІГЕ5РЕГААВІ МЕМ »9Ц152218044|95ІА8531456.1| | МРЕКРСМТОАОСОВ Медісаво пипсаціа

МСА 319 УВАНЕБАІМ5ОМЕСКО 9

СУСРІОУННОРУР

ЗЕО ІО МО: 110

МОМАКММАСІ ЕМ

ХАГЛГСЕТРЕГМАВІМ

. МУМРММРОМТРАОС коню вод42|дрІАВ531455 1 ОАУАНКІАТАМІСМ Медісадо іпипсаїша

ОСЕСІ МОЄТНОРУА

РБІ Р

ЗЕО ІО МО: 111

ММНІБКЕММАПРІ ІМ

. ГУМГ рагРІБСКОНЕЕ ки водо|дрІАВВЗ Ат) ОВВКІМІ ВСІУВОЕКР Месісадо ігипсаїміа

МСІМ5БІСТОСМУКИ

ЗЕО ІО МО: 112

МОВЕКММАКІРЕЕМУ

АМІІРП РІГ МЕКМУМА

»9Цц152218038|9451АВ531453.1| | М КРЕСКТОВРОСОК5 Медісадо гипсаша

МСА 316 ГКТУУМУКСУКМЕСУ 9

ЕРАКК

ЗЕО ІО МО: 113

МАСТПКЕМНМПРІ БІЕН

. УУкМморравЕсЕКко5о ки ВОЗбідрІАВеУ 14521 СРОЕМСРБЗРІ КЕМСУ Меадісадо ігипсаїша

ЕГОоСсКкСаТмотІА

ЗЕО ІО МО: 114

МАМТНКІ М5МІГРІРІ РІ. . АБММУМЕСУУМСЕТОА ки воза|дрІАВеУ1451 1 ОСРРОЬТАУКАЕКСУКОа Меадісадо ігипсаїша

ЕСВМ/ТАМ5УА

ЗЕО ІО МО: 115

МОАВАКККАОУМУМЕМУН

. ОПІСІМІ РІМІТТАКТОЇІВ ки 80321д0ІАВ81450 1 СВЕММОСРАГЕМНЕС Меадісадо ігипсаїша

ЕСІЕОРСАМІВІ М

ЗЕО ІО МО: 116

МАКУУМЕММАГПЕМОР

. ЕП АТЕАТАІГ РСЕКОЮ ких ВОЗОІдДрІАВВЗТ9ИІ | ОСРЕАБІ РРУМКСУМ Медісадо ігипсаїша

АЕСОМЕЇЕ

ЗЕО ІО МО: 117

МІКОЕБМСМІЮОМАВММ

ТТ КЕРМІММІСС СН

»9Ц152218028|95ІА8531448.1| | МААМЕОРЕКЕІРОСККО Медісаво пипсаціа

МСА 310 СОСОНМСМтТРОИРКСТ 9

СУМСЕСЕЕМІ.

ЗЕО ІО МО: 118

Продовження таблиці 7

МОВА5АММТТІЕКЕАХІ

МІИІСМЕС МААОЄЕМ

»9Ц152218026|95ІАВ531447.1| | СІНРСККМЕОСМНМО Медісаво пупсаїца

Мов 309 ММРОЇ РМ/СНЕММІ СЕ 9

СУЕМАУСМТА

ЗЕОЮО МО: 119

МТШКЕМММІ РІ БІ ЕН

МАКМООМКІ ГІ 5РІЕЕєС »9Ц152218024|95ІА8531446.1) ЕСЕКОБОСРУММСОРБ Медісаво пупсаїца

МСА 304 РІКЕМСУРІКСУСОУМУСОа 9

РІВЕВВ МО5БНМРМІО

ЗЕО ІЮ МО: 120

МАКММТКІЇ МІСМА М

ІРІР БІАМБІТОМІ АВА

»9Ц152218022|95ІА8531445.1| | БАККРИОМІРСІМОНО Медісаво пупсаїца

МеВ ЗОЗ СРВКІ УР ЕВСУОВУ 9

СКМ.

ЗЕО О МО: 121

МАНКІ МУАЇТІ РІРІ РІ. . ІАММІЕООІРСІТОМОС коня вого|дБІАВЗ 444.1) РРМТІ МОВУВСІМИ Медісадо мипсаїшіа

КСМІ 5ЕУБУС

ЗЕО ІЮ МО: 122

МОЕТІКЕММІ І ЕМ5І. . СІ ММАРОУКМІМАЕС кн 8018ІдБІАВЗ81443. 1) ТОТБОСУККУРЕЇРМУУ Меадісадо ігипсаїшіа ескУвВСсУКОВСВІ ОМ

ЗЕО ІЮ МО: 123

МАКІЇКЕМУМІ АЇЕЕБІ. . ЕГМАКМУМОУУТОМЕО ко ВО відвів 4421 ЗОСРАМІСОРРМОВМ Меадісадо ігипсаїшіа

СЕУСЕСАСУВ5ЗКЕСТ

ЗЕО ІЮ МО: 124

МУКІИКЕМУЕМТІ РІ 5М . ГП УТТКЕРО5МЕСІАМІ ка ВО 41оБІАВЗЗ 14411 ОСРОІЕМІ РЕММАСІМ Меадісадо ігипсаїшіа

ЕВСОЇММ5ЕОТ

ЗЕО ІЮ МО: 125

МОБПКЕМУТШЕЕБІ ЕЕ

ЕААМММОАМІММСО Є

»9Ц152218012|95ІА8531440.1| | ТЕОСРАОМСО5НІВОМІ Медісаво пупсаїца

Мов 286 СІРЕККСКСАСОВУМР 9

ОМР

ЗЕО ІЮ МО: 126

МОВАКММАММНМІ І

ХАМІИСІ ГРМ ММТЕК

»9Ц152218008|95ІА8531438.1| | ТАІТСОСМЕОСІ МЕРЕ Медісаво пупсаїца

Мов 278 ТРІОМІ КСІОММСЕМ 9

ЕМ

ЗЕО ІЮ МО: 127

МУМІІКЕІММПЕРІ МЕ

. ЕМПЮОМСаТнмІімМЕСІЕ кож В0Об|дБІАВЗЗ1437.1) МАОСЕКОМСКЕРЕЇМ Медісадо мипсаїшіа

ВАСІ МООСКСМВІНМІ І

ЗЕО ІЮ МО: 128

Продовження таблиці 7

МПОЕБІУУМОВАКІ М

ММУЕПКЕ5НАНІРІ РІ. »9Ц152218004|95ІА8531436. 11 ЗА МТМАМІЕЕСЗТОЕ Медісаво пипсаціа

МОВ 265 ОСТУ/МІ СВОРМУМОК 9

СВІ НМО5СЕКМ

ЗЕО ІО МО: 129

МОЕМЕКЕМУУМПЕРЕ

. ПСОМАТМАЕКІВВСЕ ка 8002ІДБІАВ5З1435.11 МОАНСРРОМСТІ СМІ Меадісадо ігипсаїша

РКОЗАБТІСІС

ЗЕО ІО МО: 130

МНАКРМИМТКЕЕКЕМ

УТМЕШІБГ Р МУТМАМ

»9Ц152218000|95ІА8531434.1| | АМЯМСТОТ5ОС5З5МНО Медісадо гипсаша

МОВ 244 5УЕСУВІ СММСОСІС 9

ІМЕ

ЗЕО ІО МО: 131

МОМККМАТІЇ! КЕУМІ І

ІІМРІГ ЕММТЕЕЗНУМ

29Ц152217998|95ІА8531433.11 КЕБІСКООТОСРТІ ГЕ Медісаво пипсаціа

МОВ 239 СМІ РІММРКСІСЗКОСН 9

СКІ МУМ

ЗЕО ІО МО: 132

ММУЕТІ ВІ ЕМІМІІ ЕМ5І.

М УММрамвкіІ АОС 29Ц152217996|95ІАВ531432.1) ЗЕОРЕСМІКМРНАРЕ Медісаво пипсаціа

МеВ 237 СОЇ ВСРЕСУСОВІ О 9

КРТ

ЗЕО ІО МО: 133

МТТРІ КМАМІМИІСМЕ

МІ НГАДОМОБОКНВІ Н

29Ц152217994|95ІА8531431.1) ССКЕОВОСОМІСВУН Медісаво пипсаціа

Мов 228 АУТКСІОММОСВСЇ АМ 9

Ук

ЗЕО ІО МО: 134

МВАВІМАТРАЇІЕКЕМУТІЇ

. ІМ РС-АММАКОЇ РЕМ ков 17992|9БІАВЗ31430И11 | СЕКОЕОСІ ЕЕСАНОК Медісадо ігипсаїма

МАКСМІ МІСЕСЕ

ЗЕО ІО МО: 135

МАЕЄЇКІММРПРІ БП. . АМІЗОНРЕТРСЕТМА кт 17990|95ІАВ5831429.1) оСКСАМНКАРОСІ МУ Меадісадо ігипсаїша

НКСУСУ

ЗЕО ІО МО: 136

МАК5МАТІ КЕМУМІМ

ГРІМБГЕМІЕЗРОаНВРГІ. »9Ц152217988|95ІА8531428.11 ІУММСКМОТЕСРМОС Медісаво пипсаціа

МОВ 217 СРНЕОАКСІЇ МАСУС 9

МЕ

ЗЕО ІО МО: 137

ММТІІКРІЕММЕСРІ БІР

. І БДАЯМОКОМаРСТТ О

Кк 7986І95ІАВЗ81427 1) ОСЕТНММ/РГЕМО5СІЮ Меадісадо ігипсаїша

ЕЕСКСМ/БИ.

ЗЕО ІО МО: 138

Продовження таблиці 7

МАБПКЕММІМІ СМУ5І. . ІПАЕАБакКЕСМТОАЮ кн т984|дБІАВЗЗ 14261) СЕМ МРЕАМККРМЕСМ Меадісадо ігипсаїша

МТОМСМ5І УКЕРЗВУМ

ЗЕО ІЮ МО: 139

МАКІИКЕММІМІ СМУ5І. . ГОМЕАССКЕСМУТОМО

Кия 17982|9БІАВЗ81425.1) СЕКІМРОМККРІІСЗТ Меадісадо ігипсаїша

СУСУБІ МЕЕРРАУНК

ЗЕО ІЮ МО: 140

МАКУТКЕСУППНРІ 51.

ЕНАММУМАСаИвЕСНА 29Ц152217980|95ІА8531424.1) МЗНОМакІТсСМІ РОКР Медісаво пипсаціа

Мов 200 ЕСМУМУМАСУСМОБМК 9 ув

ЗЕО ІО МО: 141

МАКІЄРМУММАГІМРЇ БІ. . ЕматзамкМмаскн

Кк 17978|дБІАВЗЗ1423.1) тансРАКМССОСАКТТ Меадісадо ігипсаїша

КСАММКСОСМ

ЗЕО ІЮ МО: 142

МТЕПКЕМСУМИРІЗ5 гІм5КБІ МОСЗаКОоКо 29Ц152217976|95|ІАВ531422.1 ЕВОБОСРКНМСОРБ5Б .

Мова СО УАКСіМАЄСВСВАР Медісаво ігипсаїміа

ЕГОМОЇ МР

ЗЕО ІЮ МО: 143

МАНІИІМЕММАСІМАСЕ

ЗБ ЕМАОСІРСІ БООЕ

29Ц152217974|95ІА8531421.1) СРЕМБНУБЕКСММ Медісадо гипсаша

МСА 187 КІСЕМОЇ ФЕМ5О0О 9

УМ ЕМ5АВЕ

ЗЕО ІО МО: 144

МУВЕКММАКТІКЕМ

УМІМІРІ 5І ГГААКМІО 29Ц152217972|95ІА8531420.1) САУБУМ5НРІАІ РУИСО Медісадо гипсаша

МСА 181 ТААОСРЕСТВОВТУ 9

КСІММКОСВАУРКІ І КРІО

ЗЕО ІЮ МО: 145

МАНІЄРММУМУМАЇ І МР 5 . ГРЕМУтТМмаІнИаСОоКО ко ак 17970|9БІАВЗ31419.1) ВОСРКОМСНІ МОТР Медісадо ігипсаїшіа

КСІ КМІСКСМ

ЗЕО ІЮ МО: 146

МАБЕЇЇ КСЕУТММІ РІ

ЕШСРАКІВЕНІОСМІО

29Ц152217968|95ІА8531418.1) РОСРКБІ МКІ ЛПЛІКСІМ Медісадо гипсаша

МОВ 175 НУСОУМОМІ РОЕА5 9

ОІРКОТКМРУКОЕ

ЗЕО ІО МО: 147

МАМІ5ЗАВІЕММИ РІ БІ.

ЕРУМІМЕОМКБИ ЛЛІКМ

29Ц152217966|95|ІАВ531417.1) А5РІРСОВБООСРАМ Медісаво пипсаціа

МСА 173 ІГСМООПРТСУМ/АКС 9 кКосКМУМО

ЗЕО ІЮ МО: 148

Продовження таблиці 7

МАМУТКЕММІАЇМРІ 5

ІГЕРІАКМОАТАТЕСНО

»9і152217964І4БІАВ531416.1|. | ОБНСУТКІКСМІ РАТ Медісадо гипсаціа

МОВ 172 РОСВМЕАСОСУНОМ 9

КЕВ

ЗЕО ІЮ МО: 149

МаОаєІМКЕУУУМИМІ Є . МЕММАТа5БЕРІЕТКК коли 7962|95І1АВ531415.11 І ТЄСО9ЄКОСВекІ С Медісадо ігипсаїша

ХЗРКЕРУСКНИІСЕСІ

ЗЕО ІЮ МО: 150

МОИаємМЕКРЇїЇмТгеЕМН . І Р ММІЕЕВІСНІКУЄС ки 7960|95ІАВ5З31414.1) СІМООСУКеККРІ ЕК Медісадо ігипсаїша

ІМ/КСМЕМУМСМІ ММК

ЗЕО ІЮ МО: 151

МАНТІ КЕМУ5МІЇ РІ.

ЗІ Р МАМИ КІЕСІТЮОМ

»9і152217958ІДБІАВ531413.1|. | АОСРКОЇ УРИ УКСІ Медісадо гипсаціа

МОВ 165 ЖМКСІМЕТАІРЕРЕО 9

УМ

ЗЕО ІЮ МО: 152

МАМІТКЕММІАЇІ РІ 51.

ЕРІЯСММОААІЇ ЕСВЕ

»ді152217956|9БІАВ531412.1| | ОЗНСУТКІКСМІ РАК Медісадо гипсаціа

МОВ 159 РЕСАММАСТСУКИаС 9

ЕБЕНН

ЗЕО ІЮ МО: 153

МОВРУККМ5ЕТІ КЕМ

ХМ РІЗІЕНУМІМСО

»ді152217954|9БІАВ531411.1|. | ВІМЕРУЗАРСІТОКОС Медісадо гипсаціа

МОВ 147 РМІМКНУКАКСАКИа 9

ЕСІБЗАУВ

ЗЕО ІЮ МО: 154

МОЇІВКІМ5аИамМіІ КЕУУ

АП РІ РІ Р, МАВЕМОа С »ді152217952І9БІАВ5314101) | ГЕТІЕСЕТОСОСРАЗ Медісадо типсацша

МОВ 146 МІКМУМКММАНКСІЮ 9

ОКСЕМІККІ Р

ЗЕО ІЮ МО: 155

МЕМУОПІ РІЗ УМ

. СІМАЕАОТЗСНОБОО ки 7950І9БІАВ5314091| СРМУУАННУВЕСІЕСІ. Медісадо ипсаціа

САХУВІЇ У

ЗЕО ІЮ МО: 156

МОВАКК5ОЗМАКМІ КЕ

ЕЕРЕАІШИІ 5І РІЇ МАТЕМ »ді152217948|9ІАВ531408.1|.. | ССАУТЕСЕМОООСРК Медісадо гипсаціа

МОВ 144 РМКМЗНРОТУУКСУ 9

КНАСОМАМК

ЗЕО ІЮ МО: 157

Продовження таблиці 7

МЕМУТШЕГСЕРБЗНМІТ

МКІАІМСУБОООСІКТ

ЕТРІ ОГКСМОММСЕР

МІ ВСКаКСОЕНОЕК . ЕМЕГКАЇ ККМООКІ М

Коен 79абідрІАВ5З1407 1) ГЕЕОСМАНЕМКІРКК Медісадо іпипсаїша

ІГГРОВІОМРТРАТКО

ОМЕЕООМООООЕЕЕ

ЕЕЕЕООМОМУУЕНІ Р руУУсн

ЗЕО ІЮ МО: 158

МАКЕ5МЕМУАГІМЕЇ. . ЗІ РІ МЕТАІТМІНСУ5 ко тзаа|дБІАВЗ314061І | ОБОСРКМІКРІ УМКС Месісадо ігипсаїміа

ІСММСУРЕМІМЕС Р

ЗЕО ІО МО: 159

МАНКЕМУАПІ РІРІ Е

ГГ МАКМУКаУУУсА 291 52217942|д5ІАВ531405.1) ТМООСРРОТАОІ В Медісаво пипсаціа

МСА 136 УвсСІ МакскомВІ. 9 зуп

ЗЕОІЮ МО: 160

МОАкККММаюстшем

ЕАГІМРІ РІ МЕМТ

291 52217940|95ІАВ531404.1) ТТТІРСТРІЮОСРКМ Медісаво пипсаціа

МОВ 129 РІ МУКСІОМЕСМУЕ 9

ЕІК

ЗЕО ПО МО: 161

МАОТІ МІ ММАСЕТ

. ЗІ РГУМІБВОТОІРС ко 17938Ід0|АВ581403.1) КБОрАСРАУЗЗНН Меадісадо ігипсаїша

ІЕСУКаєСтТУМКІ О

ЗЕО ПО МО: 162

МІВАКМТМО МЕМ

ЗАГИМІРІ РІ МІТ55 . АМІРСМ5ОБОСРМУУК ковки 17936І9БІАВ531402 1 мМУтУАСМОрагсУУ Меадісадо ігипсаїша

КБІОРБТІРОММТО

ПЕРА

ЗЕО ІЮ МО: 163

МАМІ КЕММІМІРІ ЕЕ пиммуиматвоМАо 291 52217934|95ІАВ531401.1) ЕОСРРЕІСТОРОІРК Медісаво пипсаціа

МОВ 122 СУЗНІСЕСІ 550ОКЕ 9

АУ

ЗЕО ІО МО: 164

МОАЇКРІМАМРЕІ РІ.

ЕГЕМТТАММЕАЇ ЕЕ

291 52217932|95ІАВ531400. 11 СМАРЕМСаМООЕС Медісаво пипсаціа

МСВ 121 МУРЖАМОСІНВУСК 9

СІ КАМ

ЗЕО ІО МО: 165

Продовження таблиці 7

МОІСВАККМОИЕТРКІ.

МУМПІ РІ БІР СТМ5 91 52217930|95ІА8531399.1| ЗЕБОМІМЕНОСКАО Медісаво пупсаїца

МОВ 119 КОСРОЕВОМУМІВСВ 9

БаЕСТРІО5

ЗЕО ІО МО: 166

МОМАКММАСЕММ

МАПСЕБРЕЇГ МАВІМ

. МУММРММРОМТРАОС кое 7928|дБІАВ5З1 398.1 ОВУАНКІГАТАМУСМ Медісадо мипсаїшіа

ІСЕСІ МОЕТНОРМА

ЗІР

ЗЕО ІО МО: 167

МУУУУЮМаТкмМмА

ОВЕМЕЇІМАПІРІ ЗО

. ЕММІМТ5ОІ РММБМА коли 7926ІдрІАВ5З1397 1) М5РКЕОМЕСМЗМО Медісадо мипсаїшіа

ОСРТІ УМУБКОСМУМ

ЕСЕММУ

ЗЕОІО МО: 168

МАКІУМЕУУЗМИЕМ5

ІГРЕМАТКОС5КРЕЇ Т 91 52217924|95ІАВ531396.1 АРУРСМТаБОСРО . ов ОО ТКмМсоРРОУКРОСЕО Медвісадо тгипсаїціа

СУСМНОСУКАМ

ЗЕО ІО МО: 169

МУВТІКЕМУМП І 5

ГРЕМАКОСОККІМС

291 52217922|95ІАВ5З31395.1) ЕМААБЗСРВАЇ МУРІ М Медісаво пупсаїца

МСА 101 УКСГ ОМКСУКЕММ 9

К5АЕМ

ЗЕО ІЮ МО: 170

МАВТІКЕМУАМІЇ РІ.

ЗІ РІ МАКОООУКІКС

291 52217920|95ІАВ531394.1) ММААМСРОЇ МУРІ М Медісаво пупсаїца

МеВ 96 УКСІ МОІСМОЄТІ ТЕ 9

РЕМ

ЗЕО ПО МО: 171

ММ МЕМІТРІМІ М

ТІ ЕГаРКМММАБОР 291 52217918|95ІАВ531393.11 СУТТАОСМКТІКТО Медісаво пупсаїца

МСА 94 ЕМІМ/МЕСІМОЕСІРЕ 9

РІРКОВК

ЗЕО ІЮ МО: 172

МКАУМММАКІУКУМ

УМПРІ-5І РІ МАТКІЕ 291 52217916|95ІАВ531392.11 СУУУКСЕКОБОСУК Медісаво пупсаїца

МСА 93 ГГ СВІРГАРКСМУВН 9

ІСКСКУМІ ТОММУМІ Т

ЗЕО ІЮ МО: 173

МКАОаКММ5КІ! КЕ У

АТІМІМІ РІ ММУТКА5 291 52217914|95ІАВ531391.1) РОЕСКІОСОСРІБУО Медісаво пупсаїца

МеВ 90 КЕНТУКСІМОКСКМУ 9

МІГВЕНЕУ

ЗЕО ІЮ МО: 174

Продовження таблиці 7

МАКТІ МЕМЕАГІ РІ

ГРГМБ5КММАІСІЕМСО 291 52217912|95ІАВ531390. 11 ТОАОСРК5БЕЇІ 5МУТ Медісадо ігипсащіа

МеВ 88 М/КСІОМЕСМІ ЕКУМ 9

ООММ

ЗЕО ІЮ МО: 175

МАМТНКІ М5МІЇ РІРІ. . ЕГМАМММЕСМУМСЕТ ен 17910І95ІАВ531389 1) РАОСРРЗОТАУКАЕКС Медісадо мипсаїшіа

УКаЕСВМУТАМ5УА

ЗЕО ІЮ МО: 176

МАНЕРІ МЕМУА ІТС. . ЗІ РІ МЕМОНІ 5ІНСМ

Ко Оии 7908ІдБІАВЗЗ1388И11 | 5УДОСРКУЕКРІТМК Медісадо ігипсаїміа

СІММУСКУЕМОНКІ.

ЗЕО ІО МО: 177

ММОІРМЕОМТШЕЕ5

ГЕРМІТМООВІРСУТМ

291 52217906|95ІАВ531387. 1) СОСРУМАГРІММАС Медісадо ігипсащіа

Мо 76 ІТМ5СЕГЕРраРМІ С 9

АМЕВІ

ЗЕО ІЮ МО: 178

МАКОМАНВІБІ ЕММА. . ПРЕБІЕЕМІ ТМОЕЇ ЕЇ коки тЗб4|дБІАВ5З1 3861) АСМБОАЮСРІ ЕРІ РІ. Медісадо мипсаїшіа

НМАСІОЮОМСНІ ЕТ5

ЗЕО ІЮ МО: 179

МАСІ МЕММЕГРІ БІ. . ЕІ МЕБІКІЕТЕНВСВАТ ка 7902Ід0БІАВ5З138511Ї. | ОДОСРАВЕЇ РЕМ КС Медісадо ігипсаїміа овамоевИкко

ЗЕО ПО МО: 180

МАВМІБІ ЕМАПРІ РІ. . ЕІ МАТМООІ 5РСІ 5 ко оаи 7з00ідрІАВ5З1 384.1 сОосС5КОЕСРЗНІ МР Медісадо мипсаїшіа

КСІСІ ТСМСІ

ЗЕО ПО МО: 181

МОВАКММАОШІ гДУ . МРІБІБІ ГРІ ММУТМО МУК ен 7898І9БІАВ5З13831 ІРСУКОТОСРТІ РСР Медісадо мипсаїшіа

ГУ5КСМрагСКМІ 51

ЗЕО ПО МО: 182

МІЯНІЗКЕММАПІРІ М

У УМ равРУБСКОН 291 52217896|95ІАВ531382.11 МОСАВКУКІМОаСІЕР Медісадо ігипсащіа

МОВ 57 ОЄКРМСІМ5МСТСІВ 9

ЕІМР

ЗЕО ІЮ МО: 183

МК5БОМНАКРІЗЕУКМ

ОГЕКІЄОММОЗНЕКМ

. ЕРАЦІРС МТМ НУТ кове т894|дБІАВ5З1381.1 СМЕУМ5СМЗНІНСВМ Медісадо мипсаїшіа

ММНКІССМІРЕОМИ І.

СУМ ЕС У

ЗЕО ІО МО: 184

Продовження таблиці 7

МТІТМІЗКМУМАПІРІ 5

ІУМаММОСМІ МТСЕ 291 52217892|95ІАВ531380. 11 оНРЕосОоММООМа Меаісадо

МСА 54 С5ЕНЕІРОСІМ5ІСК їгипсаїша

СсМКка

ЗЕО ПО МО: 185

МТНІБЗБКЕМЕАНІРІ 5ІУ

МаммМосСкАІРСКОММ 291 52217890|95ІАВ531379.11 ОСММУМУМОЇ І АСАЕЕ Меаісадо

МСА 53 ВЕМРАСІМ5ІСКС ігипсаїша

МРМ

ЗЕОО МО: 186

ММОТРКІ МУМІМЦ ЦІ 5 , ІР'ЯМТІСМОЗЕЗНЕБЕ , зоба 7888|95І1АВ531378.11 ЕСАСКООКОСРКІ Н месісадо

В5ММАСАКИаосмої

ЗЕО ПО МО: 187

МТКІІ МІ ЕМАМІМЕНЬ

ІРГ МАБМТОЕСВТОАО

91 52217886|95ІАВ531377.11 СЕМІЇ СІ ЕРІІКАСІНМ Меаісадо

МСА 28 НСКСУРМаОаБІЕРМ5 ігипсаїша

ТІРМаМНКЕНІТММ

ЗЕОО МО: 188

МАКТІ МЕМСАМІЇГ РІ

, ІГРСМ5КММАЇ МПЕСКТ , зо Ба 7884|95ІАВ531376.11 РАОСРІБЗКІ ЯМУММУВ месісадо

СІКЗЗСНІ УКМІОЄММ

ЗЕО ПО МО: 189

МОКЕКММАКТЕРЕЕМУ

АМІИЕШІ БІ МЕММЕАА

91 52217882|95ІАВ531375.11 МПЕСОТОООСРКбБО Меаісадо

МСА 24 ГЕМЕАМУКСУКМИаСН ігипсаїша

ГРОМУЕВОООР

ЗЕО ПО МО: 190

МААТАКРЇУМІ ЗНЕЇ. »9іп52217880190ІАВ531374.1| КосКоу Медісадо

МОВ 21 ВМСЕСУКІКІ їгипсаїша

ЗЕО ПО МО: 191

МОВІ ОММАКММУКРЇ

МУМІПШ С РІЄМИМСО5 »діп52217878І90ІАВ531373.1) СКОУКОТАНСВКО Медісадо

Мов 20 УСМОвУКВТМ с їгипсаїша

УА

ЗЕОО МО: 192

МКРЇМІМІЇ РІ БІ РІ М

ОРІ ТоКаі тМРСЕМ

РТТСРЕОЕСТРРМІ

291 52217876|д5ІАВ531372.11 ТАСІМРЕІСІ СЮОРЕУ Меаісадо

МСА 19 АЕРЕУООРЕРЕМОН ігипсаїша

КОРІ 5МКРКІЇМЕМ

МММАЕАНММКЕЇЕМ

ЗЕО ПО МО: 193

Продовження таблиці 7

МАОРБІМЕММСПЕ М

. ГЕММЕААМЕЕЇ ТК ко 7874|дБІАВВ313711| | ТІВСУТОДОСРМУУК Месісадо ігипсаїміа

РІКРКСУРИагСсСЕХТ

ЗЕО ІЮ МО: 194

МКМАІНМАОИМЕЕ

МАЦІРІЗРЕ МОВА

»айЦц152217872|9БІАВ5ЗЗ31370. 1) ЗЕРЗББЕУМЗРКЗУТО Медісадо гипсаша

МОВ 10 ЕІРСКАТВОСРУЕЇ 9

МУХЕТКОСМО5І СТУ

ЗЕО ІЮ МО: 195

Будь-який пептид МОСК, відомий у даній галузі техніки, є придатним для застосування в способах або композиціях, описаних у даному документі. Рослини, що продукують пептиди

МСЕ, включають без обмеження Різит займит (горох), Авігада|5 бв5іпісиб5 (бобові ІКІ' С),

РІпазеоіих миїЇдагі5 (квасолю), Мідпа ипдиісшага (коров'ячий горох), Медісадо ігипсамшіа (люцерну усічену) і Г оїи5 іаропіси5. Наприклад, на основі геномної послідовності М. їгипсаїшіа прогнозують понад 600 потенційних пептидів МСК, та майже 150 різних пептидів МСЕ були виявлені в клітинах, виділених із кореневих бульбочок, за допомогою мас-спектрометрії.

Пептиди МСЕ, описані в даному документі, можуть бути зрілими або незрілими пептидами

МОСК. Незрілі пептиди МСЕ мають С-кінцевий сигнальний пептид, який є потрібним для транслокації в ендоплазматичний ретикулум і відщеплюється після транслокації. М-кінець пептиду МОСК містить сигнальний пептид, який може бути розщеплюваним, для націлювання на секреторний шлях. Пептиди МСЕК зазвичай являють собою малі пептиди з дисульфідними містками, які стабілізують їхню структуру. Зрілі пептиди МСЕ мають довжину в діапазоні від приблизно 20 до приблизно 60 амінокислот, від приблизно 25 до приблизно 55 амінокислот, від приблизно 30 до приблизно 50 амінокислот, від приблизно 35 до приблизно 45 амінокислот або в будь-якому діапазоні в проміжку між цими значеннями. Пептиди МОСК можуть містити консервативну послідовність із цистеїнових залишків, при цьому інша частина пептидної послідовності є високоваріабельною. Пептиди МСЕ. зазвичай мають приблизно чотири або вісім молекул цистеїну.

Пептиди МОСК можуть бути аніонними, нейтральними або катіонними. У деяких випадках синтетичні катіонні пептиди МСЕК, що мають рі, що перевищує приблизно вісім, мають форми протимікробної активності. Наприклад, як МОСК247 (рі-10,15) (ВМаСІМОРАСРМООСААРІМСВААА; 5ЕО 10 МО: 196), так і МСК335 (рі-11,22) (МАОРЕУМУЗРІ ЗІ гЕСЕААРЕВТЕТАМІ ТІРСТ5ООМОСРКМІЗРОНТКСЕРИагєСОаМУМІЕСЗУЕа Р 5ЕО ІЮ МО: 197) є ефективними щодо грамнегативних і грампозитивних бактерій, а також грибів. У деяких випадках нейтральні й/або аніонні пептиди МСЕ, такі як МСКОО1, не мають форм протимікробної активності при рі, що перевищує приблизно 8.

У деяких випадках пептид МОСК є ефективним у знищенні бактерій. У деяких випадках пептид МОСК є ефективним у знищенні 5. теїйоїї, Хепогпарди» 5рр, Рпоїогпаврдиз 5рр, Сапаідатив5 5рр, Висппега 5рр, Віапцарасіейцйт в5рр, Ваштапіа 5рр, М/іддіеєзмойНіа 5рр, УоІрбасніа 5рр,

ВісКенНвіа в5рр, Огпєпіа 5рр, Бодаїв 5рр, ВигКНоЇдега врр, Сирпаміди5 врр, ЕгапКіа з5рр, зЗпігі2горішт 5рр, Зігеріососсив зрр, М/оїїпеПа рр, Хуїєїїа 5рр, Егміпіа 5рр, Адгобасієгійт з5рр,

Васійи5 5рр, Раєпірасіїйй5 5рр, Бігеріотусе5 5рр, Містососсив в5рр, Согупебасієгішт зрр,

Асеїорасієї 5рр, Суапобрасієїйа 5рр, ЗаіІтопеїйа в5рр, Вподососсивз взрр, Реєепдотопа5 5рр,

І асторасійи5 5рр, Епівгососсиз 5рр, АїІсаїїдепез 5рр, КіІерзієїїа 5рр, Раепібасіїив5 5рр, АйПгобасіевг 5рр, Согуперасієгішт 5рр, Вгемібасіепйцт 5рр, ТНептив5 в5рр, Рзеидотопав 5рр, Сіозтіаійт 5рр або ЕзсПегіспіа 5рр.

У деяких випадках пептид МСЕ. являє собою функціонально активний варіант пептиду МОСК, описаного в даному документі. У деяких випадках варіант пептиду МСЕК є на щонайменше 70 95, 7195, 72 ую, 73 о, 74905, 750, 76 Уо, 77 Уо, 78 Чо, 79 Фо, 80 Уо, 81 Уо, 82 У, 83 95, 84 95, 85 ую, 86 о, 87 то, 88 то, 89 то, 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 95 або 99 95 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності пептиду МОСК, описаного в даному документі, або пептиду МСЕ природного походження.

У деяких випадках пептид МСЕ можна створювати за допомогою біоінженерії для модулювання його біологічної активності, наприклад підвищення, або зниження, або регулювання, або для визначення його цільового мікроорганізму. У деяких випадках пептид

МСЕК продукується трансляційним апаратом (наприклад, рибосомою тощо) клітини. У деяких випадках пептид МОСК синтезують хімічним шляхом. У деяких випадках пептид МОСК утворюється з поліпептидного попередника. Поліпептидний попередник може зазнавати розщеплення (наприклад, процесингу під дією протеази) з утворенням самого пептиду МОСК.

Таким чином, у деяких випадках пептид МСЕК продукується з поліпептиду-попередника. У деяких випадках пептид МОСК включає поліпептид, який зазнав посттрансляційних модифікацій, наприклад розщеплення або додавання однієї або декількох функціональних груп.

Пептид МСЕК, описаний у даному документі, може бути складений у вигляді композиції для будь-якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип пептидів МСЕ, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 пептиду МСЕ, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100 або більше пептидів МСК. Придатна концентрація кожного пептиду МОСК у композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність пептиду МОСК, кількість різних пептидів МОСК, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках концентрація кожного пептиду МСЕ у рідкій композиції становить від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 100 мг/мл. У деяких випадках концентрація кожного пептиду МОСК у твердій композиції становить від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи пептидів

МСЕ, то концентрація кожного типу пептиду МСЕ може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, який включає пептид МСЕ, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації пептиду МОСК усередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації пептиду МОСК усередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації пептиду МСЕК усередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або// (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Зо (є) Регуляторні пептиди бактеріоцитів

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати регуляторний пептид бактеріоцитів (ВКР). ВЕР являють собою пептиди, що експресуються в бактеріоцитах комах. Ці гени вперше експресуються в момент часу розвитку, що збігається із включенням симбіонтів, а їхня специфічна для бактеріоцитів експресія підтримується протягом усього життя комахи. У деяких випадках ВЕР має гідрофобний амінокінцевий домен, який, як передбачається, являє собою сигнальний пептид. Крім того, деякі ВЕР мають домен, багатий на цистеїн. У деяких випадках регуляторний пептид бактеріоцитів являє собою специфічний для бактеріоцитів білок, багатий на цистеїн (ВСК). Регуляторні пептиди бактеріоцитів мають довжину від приблизно 40 до 150 амінокислот. У деяких випадках регуляторний пептид бактеріоцитів має довжину в діапазоні від приблизно 45 до приблизно 145, від приблизно 50 до приблизно 140, від приблизно 55 до приблизно 135, від приблизно 60 до приблизно 130, від приблизно 65 до приблизно 125, від приблизно 70 до приблизно 120, від приблизно 75 до приблизно 115, від приблизно 80 до приблизно 110, від приблизно 85 до приблизно 105 або в будь-якому діапазоні у проміжку між цими значеннями. Необмежувальні приклади ВКР і форм їхньої активності наведено в таблиці 8.

Таблиця 8

Приклади регуляторних пептидів бактеріоцитів

Мк наРІМТМНІ5ІОМАМСаРЕТКУ

Родина специфічних для бактеріоцитів білків ( Ї!СОВМСНКІ СООЕРЕМСЗСІОМКБІ КИ.

ВСЕ, багатих на цистеїн, пептид ВСЕ М ЕРНСРТОКАБУМІ НМР! ТР

ЗЕО ІЮ МО: 198

МКГ Мав мМ ТІНІ ЗМОМЕЕЗРЕЕТКУ

Родина специфічних для бактеріоцитів білків | МСОТНОМКІ СЯКІОНСЗСІОМНЗМЕС

ВСЕ, багатих на цистеїн, пептид ВСК2 ГМЕРНСАТО5БААОМІ НОРІ ЗМР

ЗЕО ІЮ МО: 199

Продовження таблиці 8

М5МАКММІ РТМЕММІ ІМОРМУТ

Родина специфічних для бактеріоцитів білків РТЗУРІЗАУСУЗОСОІ-АГУСЕ

ВСЕ, багатих на цистеїн, пептид ВСКЗ УМО МО ОУРКЗ5АРІ ЗТ ' ' ЕТ5ССОаЕАБОТСТОНСІ АМЕКЕ

ЗЕО ІЮ МО: 200

МАГ МОагПМІ ТІМ ЄМОСБЕО . . «од. | РТЕЕКОаРЕРТІБІСВЬКУСАММ род ВВЕ СМУТЄАРСУСУЄААКЕНОО ' ' МЕРУСУЮ

ЗЕО ІО МО: 201

МАГ МОагРПІМ! ТІНІ МОЮ . . «од. |РМТІ ВАРУРТКЕІСЬЗКУСЕУ роя Во МУМСОАВІРСІСУОВАНО. ' ' ОНМУЕАССУраСаРЕМІ М

ЗЕОІЮ МО: 202

МКІ ЕМУУМІ МАМАІМЕМЕА

ЗОТАААРТОМЕОТМОМІБІ. є. ЗОЗ МАОМЗРУУВНУЗЗАЮ5 родина білків 5Р, що секретуються, пептид ССе5КТеОКМРІ СТІ КОМ

ІК ТКІЕАТУЗОААРАМРР

ІРРАЇ АВКМАСОМІ А

ЗЕО ІЮ МО: 203

ММУАСКМІЇ АМАММЕМААМО

САРОСЕРЕМААРІЕАЕЇ К

ЗМБОМІТМІ МА! ОМАСЕМА

ТААКММІ МАЕГАЕ5І КТЕАА є. МЕЗКОЕЕСКАБАБОМЕКЕ5 ррдина білків 5Р, що секретуються, пептид ТКМЕОАМУЮТМІКМІ РКО.

ТГКОЕТЕКОЗЕОАІ КУИММЕН

СТЕІТККАОСМТЕТЕКЕЇКЕ

ЕРККОТЕМІ ІОСКАЇ ОАКІ

АЕАККА

ЗЕО ІЮ МО: 204

МКТО55КМЕАБСМАЇМСІ АБ

МАМАЇ РУОКОМААТТЕМРІМ

ЕКНИаСВАНКМІ МВОММУМО.

КТУМО5МІИТМЕММОКОВМЕМ

О55ЕОЗМЕСОМЗЕОЗМЕС

ОМ5ЕО5МЕМОЗЗЕНОМЕС

ОМОКОЗМЕСОМЗЕОЗМЕМ

О5БЕНЗМЕСОМОЗЕОЗМЕМ є. О5БЕНЗМЕСОМОКОЗМЕС родина білків 5Р, що секретуються, пептид ОМеКОЗМЕМОЄЗЕНМУМЕ

СОМЗКОВМЕВОМЗЕОЗМ

ЕСОМЗКОЗМЕСОМОКО

МЕВОМЗЕОЗМЕСОМОК

ОБМЕМО5ЗЕОЗМЕСОМ

ЗКОЗ5МЕСО55ЕОБМЕС

ОМ5КОЗМЕМОЗРЕЕНУ

ОЇ РОРЕББУМЕБЕЕТКОа5

НЕЗБОа0ОБЕННІА

ЗЕО ІЮ МО: 205

Продовження таблиці 8

МКТП а СІ гаАГЕМУЗТО

ЗМРУСЕМАРАМРАМРБЗЕАМ

РОКОМЕАКРЕТМААБРУБ

РАКРЕБЗБОЗКРУВАЕМКРТ

МЗ5ЕМКАЕЗЕОКРОЗИаЕРКР

ЕЗОАКРУМАБЕЗКРЕБОР

КРААУМЕЗКРЕМОАМАРЕ

ТММОАКРЕМАААРУЗЕМК

РАТОАКАЕТЕПАОАКРЕБ

КРАБОЇ КАЕРЕААКРМЗЕМ

РМАЇ РІ МРТЕТКАТООБМ

Родина білків 5Р, що секретуються, пептид ЕТМОМЕОДАРАДАОАОРА

РА ' ' ААРААОРАРАРАДАРМУАА

ЕЕАКІ БЗЕЗАРЗТЕМКААЕЕ

РУЗКРАЕООЗБАКРУЕВАМР

ААБЗЕІЗЕТКУЗРАМРАМРЕ

МРАБРБЗАРАМАВРУБАРЕ

АЕКМАЕРАКААМЗАЕРАМ

О5БЕАКРАЕПІОКОИаАУМУ

АЕМРКРМИЕЕОКРАЕМАКР

АЕОБКЗЕАРАЕАРКРТЕО

ЗААЕЕРККРЕЗАМОЕККЕ

ОНЗУМКАОАТКЕККРТОЗ

ІМККОКОККАМ

ЗЕО ІЮ МО: 206

ММОКІМІ СЕАММЕІВОАМ5

ААТаТТРЕМЕВІККМАЕОМ

ЗОТЕМ5МАМНІ МАІТРМБЗА

ВАОКОІЕКІВТІММЯКагєТОоМ

Родина білків 5Р, що секретуються, пептид ЕТЕАМКМКОІМАКМАВРКІ.

ЗРБа МЕКУРЕГЕКЕЇ ККНІ З ТАК

ОМЕЕОКУМКРІСЕКМЕЇ КК

ІТЕММІКТГТТКОМЕАТММКАЇ ракгкко

ЗЕО ІЮ МО: 207

Продовження таблиці 8

МНІ НГ АГ а РІМСаММУрАТ

ЕУМРАБОТЕМОЇ МЕНВОВ

ЗІРІРУБМСУНУМРІЕРБІММ

ГОБІ 5ЕСІ О5ВІМТЕКРІМО

МУКМЗТООУМ5УРАТОМО

РКМБ5І МО5БЕМІБАКОІРБІ ЕЕ

РЕЕОБМОУКМІ СОРІ МКУ.

ТАРБТОЕЗБИЇАІМІ МАІКЕТО

МЕОМОагРТУКВРУББОБМУМУ

МЕС5БКІРМТМЕЕОРОБМЕ5

ОРМТЕКМ55РТІКІМКІ І РЕ

Родина білків 5Р, що секретуються, пептид | ТРЕОЕБИТТТКМУЕЇ МУКТ

ЗРб ТОЕТРТЕАЕЇ МРІТЗЕЕРО

ТЕОЕМНРМУРКЕМТТКО

ЕББЕІТТЕЕРІ ТЕОК5М5БІ

ТПЕКТОТЕОСЕ5М5ІЕЕМ5ІВ

ТЕЕКОЗМ5ІТТЕЕМОКЕВО

ЕЗБМ5ТТ5ОЕТТТАРМІ МО

ТЕОТМАУ555НЕВБІ МІ ВІ

ВЕГМКМІАВСВОСОМКЗОБА

ТМОМІРАКБОБМІ 550Е

ЗТМООРГЕРОЇ ММОаАОТ

Ук

ЗЕО ІЮО МО: 208

МТЕТМІ Р АСМУААІ ММС

ІБАТАСКРЕЕРЕАКІ 50Е

АРБМООАМУЕБІОВУВ

ВЕУураМАНУМИОСОСОСО

Колеоптерицин А, пептид СОЇА ОСООРКОМЕМАРОЇ АБО

ВамМтТкАОМЕІМККИаюрМмн рІМАСЬЄУСКМІМаРОБНК ртуУнУааБУВМУ

ЗЕО ІО МО: 209

МКЕТТМУУМАКГ ЕП А

КРІ СЇ КАММЕСКНАЇ СММ

ЗСВАЗ5НОаЕССЗОИЕСРІЕР

СУМА аУСКАГатРКК5 розмММмакмЕК

ММамМнНЕВІСОМЕЕВНИМ

ВІрА І типу С5УУКаРБІТАМООМЕО

ЕМЕМТААНЕТІ РЕМТМ

УКМЕСМатТ5УМУМУкКІМОВ

КТААССОКУМІ І 5ААААЕ5

ІГМОЕМТаРМОСОЇ КЕМІ. раБастРєРОМУСаОтТсСМІ Н

НЕССБОМСЕВЕМЕ5О

КОЕСІ РК (5ЕО ІЮ МО: 210

У деяких випадках ВЕР змінює ріст і/або активність однієї або декількох бактерій, що живуть у бактеріоциті хазяїна. У деяких випадках ВКР можна створювати за допомогою біоінженерії для модулювання його біологічної активності (наприклад, підвищення, зниження або регулювання) або для визначення його цільового мікроорганізму. У деяких випадках ВКР продукується трансляційним апаратом (наприклад, рибосомою тощо) клітини. У деяких випадках ВКР синтезують хімічним шляхом. У деяких випадках ВКР утворюється з поліпептидного попередника. Поліпептидний попередник може зазнати розщеплення (наприклад, процесингу під дією протеази) з утворенням самого поліпептиду ВКР. Таким чином, у деяких випадках ВКР продукується з поліпептиду- попередника. У деяких випадках ВКР включає поліпептид, який зазнав посттрансляційних модифікацій, наприклад розщеплення або додавання однієї або декількох функціональних груп.

Функціонально активні варіанти ВКР, описані в даному документі, також придатні в композиціях і способах, описаних у даному документі. У деяких випадках варіант ВКР є на щонайменше 70 то, 71 то, 72 то, 73 то, 74 Зо, 75 б, 76 Зо, 77 У, 78 то, 79 то, 80 то, 81 то, 82 то, 83 9, 84 95, 85 95, 86 Ус, 87 У, 88 95, 89 95, 90 Ус, 91 У, 92 95, 93 Ус, 94 Ус, 95 У, 96 95, 97 Ус, 98 Уо або 99 95 ідентичним, наприклад у визначеній ділянці або у всій послідовності, послідовності

ВЕР, описаного в даному документі, або ВЕР природного походження.

ВЕР, описаний у даному документі, може бути складений у вигляді композиції для будь- якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) ВЕР, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 ВЕР, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або більше ВЕР.

Придатна концентрація кожного ВЕР у композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність ВКР, кількість різних ВКР, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках концентрація кожного ВЕР у рідкій композиції становить від приблизно 0,1 нг/мл до приблизно 100 мг/мл. У деяких випадках концентрація кожного ВКР у твердій композиції становить від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи ВЕР, то концентрація кожного типу ВКР може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, який включає ВЕР, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації ВКР усередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації ВКР усередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації ВКР усередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або/ (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна. ії. Малі молекули

Зо Численні малі молекули (наприклад, антибіотик або метаболіт) можуть бути придатними в композиціях і способах, описаних у даному документі У деяких випадках ефективна концентрація будь-якої малої молекули, описаної в даному документі, може змінювати рівень, активність або метаболізм одного або декількох мікроорганізмів (описаних вище), що живуть в організмі хазяїна, при цьому зміна зумовлює зниження пристосовуваності хазяїна.

Модулювальний засіб, що включає малу молекулу, описану в даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації малої молекули всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації малої молекули всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації малої молекули всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або// (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Малі молекули, обговорювані далі в даному документі, а саме антибіотики та вторинні метаболіти, можна застосовувати для зміни рівня, активності або метаболізму цільових мікроорганізмів, як указано в розділах щодо зниження пристосовуваності комахи-хазяїна (наприклад, переносника патогену людини), такої як комар, мікроскопічний кліщ, воша або іксодовий кліщ. (а) Антибіотики

Модулювальний засіб, описаний у даному документі, може включати антибіотик. Можна застосовувати будь-який антибіотик, відомий у даній галузі техніки. Антибіотики зазвичай класифікуються на основі їхнього механізму дії, хімічної структури або спектра активності.

Антибіотик, описаний у даному документі, може цілеспрямовано впливати на будь-яку функцію або процеси росту бактерій і може бути як бактеріостатичним (наприклад, сповільнювати або попереджати ріст бактерій), так і бактерицидним (наприклад, знищувати бактерії). У деяких випадках антибіотик являє собою бактерицидний антибіотик. У деяких випадках бактерицидний антибіотик являє собою антибіотик, який цілеспрямовано впливає на клітинну стінку бактерій (наприклад, пеніциліни й цефалоспорини); антибіотик, який бо цілеспрямовано впливає на клітинну мембрану (наприклад, поліміксини); або антибіотик, який інгібує найважливіші ферменти бактерій (наприклад, рифаміцини, ліпіарміцини, хінолони й сульфонаміди). У деяких випадках бактерицидний антибіотик являє собою аміноглікозид. У деяких випадках антибіотик являє собою бактеріостатичний антибіотик. У деяких випадках бактеріостатичний антибіотик цілеспрямовано впливає на синтез білка (наприклад, макроліди, лінкозаміди і тетрацикліни). Додаткові класи антибіотиків, які можна застосовувати в даному документі, включають циклічні ліпопептиди (такі як даптоміцин), гліцилцикліни (такі як тигециклін), оксазолідинони (такі як лінезолід) або ліпіарміцини (такі як фідаксоміцин). Приклади антибіотиків включають окситетрациклін, доксициклін, рифампіцин, ципрофлоксацин, ампіцилін і поліміксин В. Інші необмежувальні приклади антибіотиків перебувають у таблиці 9.

Таблиця 9

Приклади антибіотиків 11111111 Антибіотик ЇЇ дія

Поліміксин, граміцидин мембрану кліндаміцин, спектиноміцин (міамбутол), стрептоміцин

Антибіотик, описаний у даному документі, може характеризуватися будь-яким рівнем специфічності до цілей (наприклад, вузьким або широким спектром дії). У деяких випадках антибіотик являє собою антибіотик вузького спектра дії і, таким чином, цілеспрямовано впливає на конкретні типи бактерій, такі як грамнегативні або грампозитивні бактерії. Альтернативно антибіотик може являти собою антибіотик широкого спектра дії, який цілеспрямовано впливає на велику кількість бактерій.

Антибіотики, описані в даному документі, можуть бути складені у вигляді композиції для будь-якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) антибіотиків, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 антибіотика, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або більше антибіотиків (наприклад, комбінацію рифампіцину й доксицикліну або комбінацію ампіциліну і рифампіцину). Придатна концентрація кожного антибіотика в композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність антибіотика, кількість різних антибіотиків, склад і способи застосування композиції У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи антибіотиків, то концентрація кожного типу антибіотика може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, який включає антибіотик, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а)

Зо досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації антибіотика всередині цільового хазяїна; (Б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації антибіотика всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації антибіотика всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (а) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або// (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Як проілюстровано в прикладах 1-4, 10, 14, 26 та 27, антибіотики (наприклад, доксициклін, окситетрациклін, азитроміцин, ципрофлоксацин або рифампіцин) можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію, таку як умоібасніа 5рр., в організмі комахи-хазяїна (наприклад, комахи-переносника патогену тварини, такої як комар, або мікроскопічний кліщ, або іксодовий кліщ, або пухоїд), для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). Як проілюстровано в прикладі 3, антибіотики, такі як окситетрациклін, можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію, таку як КісКекбіа 5рр., в організмі комахи-хазяїна, такої як мікроскопічні кліщі для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). (Б) Вторинні метаболіти

У деяких випадках модулювальний засіб у композиціях і способах, описаних у даному документі, включає вторинний метаболіт. Вторинні метаболіти утворюються з органічних молекул, що продукуються організмом. Вторинні метаболіти можуть виступати (ї) як конкурентні засоби, що застосовуються щодо бактерій, грибів, амеб, рослин, комах і великих тварин; (ії) як засоби, що транспортують метали; (ії) як засоби симбіозу між мікробами і рослинами, комахами й більшими тваринами; (ім) як статеві гормони і (м) як ефектори диференціювання.

Необмежувальні приклади вторинних метаболітів знаходяться у таблиці 10.

Таблиця 10

Приклади вторинних метаболітів

Муларини Беталаіни Монотерпени |Бензохнони |Тлнюзиди істини

Кумарини Беталаїни Монотерпени |Бензохінони | Глікозиди с. інші статини

Шин аринтонн етерен | 1 лерююнн

СІзофлавоноїди Пзохіноліни.ї | (ЇЇ 77777771 Ністатин///

Лінани //// фМіндолл// | 77777777 | 17171711 Рифаміцин//

Феноленони |Пурини.//// | |! /!/ / шен 17001102 дини

Вторинний метаболіт, застосовуваний у даному документі, може включати метаболіт із будь-якої відомої групи вторинних метаболітів. Наприклад, вторинні метаболіти можна класифікувати на наступні групи: алкалоїди, терпеноїди, флавоноїди, глікозиди, природні феноли (наприклад, госиполоцтова кислота), еналі (наприклад, транс-коричний альдегід), феназини, біфеноли та дибензофурани, полікетиди, пептиди синтази жирних кислот, нерибосомальні пептиди, пептиди, що синтезуються в рибосомах та зазнають посттрансляційних модифікацій, поліфеноли, полісахариди (наприклад, хітозан) та біополімери.

Поглиблений огляд вторинних метаболітів див., наприклад, у Міпіпд, Аппи. Кем. Місгобіо!. 44:395-427, 1990.

Вторинні метаболіти, придатні для композицій і способів, описаних у даному документі, включають метаболіти, які змінюють природну функцію ендосимбіонту (наприклад, первинного або вторинного ендосимбіонту), бактеріоциту або позаклітинного симбіонту. У деяких випадках один або декілька вторинних метаболітів, описаних у даному документі, виділяють у результаті високопродуктивного скринінгу (НТ5) протимікробних сполук. Наприклад, скринінг НТ5 виявив 49 антибактеріальних екстрактів, які характеризуються специфічністю щодо грампозитивних і грамнегативних бактерій, із понад 39000 неочищених екстрактів з організмів, що ростуть у різних екосистемах одного конкретного регіону. У деяких випадках вторинний метаболіт транспортується всередину бактеріоциту.

У деяких випадках мала молекула являє собою інгібітор синтезу вітамінів. У деяких випадках інгібітор синтезу вітамінів являє собою аналог попередника вітаміну. У певних випадках аналог попередника вітаміну являє собою пантотенол.

У деяких випадках мала молекула являє собою аналог амінокислоти. У певних випадках аналог амінокислоти являє собою І -канаванін, Ю-аргінін, О-валін, О-метіонін, О-фенілаланін, О- гістидин, О-триптофан, О-треонін, О-лейцин, І -Ма-нітроаргінін або їхню комбінацію.

У деяких випадках мала молекула являє собою природну протимікробну сполуку, таку як пропіонова кислота, левулінова кислота, транс-коричний альдегід, нізин або низькомолекулярний хітозан.

Вторинний метаболіт, описаний у даному документі, може бути складений у вигляді композиції для будь-якого зі шляхів застосування, описаних у даному документі. Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити будь-які кількість або тип (наприклад, класи) вторинних метаболітів, як, наприклад, щонайменше приблизно будь-яка кількість із 1 вторинного метаболіту, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або більше вторинних метаболітів. Придатна концентрація кожного вторинного метаболіту в композиції залежить від таких факторів, як ефективність, стабільність вторинного метаболіту, кількість різних вторинних метаболітів, склад і способи застосування композиції. У деяких випадках якщо композиція містить щонайменше два типи вторинних метаболітів, то концентрація кожного типу вторинного метаболіту може бути однаковою або різною.

Модулювальний засіб, що включає вторинний метаболіт, описаний у даному документі, може бути приведений у контакт із цільовим хазяїном у кількості й протягом часу, достатніх для: (а) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації вторинного метаболіту всередині цільового хазяїна; (б) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації вторинного метаболіту всередині кишки цільового хазяїна; (с) досягнення цільового рівня (наприклад, попередньо визначеного або порогового рівня) концентрації вторинного метаболіту всередині бактеріоциту цільового хазяїна; (4) модулювання рівня або активності одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, ендосимбіонтів) в організмі цільового хазяїна або// (е) модулювання пристосовуваності цільового хазяїна.

Як проілюстровано в прикладі 15, вторинні метаболіти (наприклад, госипол)у можна застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію в організмі комахи-хазяїна, для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). Як додатково проілюстровано в прикладах 11-13, 17-19, 23 і 24, малі молекули, такі як трансо-коричний альдегід, левулінова кислота, хітозан, аналоги вітамінів або інгібітори транспорту амінокислот, можна також застосовувати як модулювальні засоби, які цілеспрямовано впливають на ендосимбіотичну бактерію в організмі комахи-хазяїна, для зниження пристосовуваності хазяїна (наприклад, як викладено в даному документі). їм. Бактерії як модулювальні засоби

У деяких випадках модулювальний засіб, описаний у даному документі, включає одну або декілька бактерій. Численні бактерії є придатними в композиціях і способах, описаних у даному документі. У деяких випадках засіб являє собою вид бактерій, що виявляється ендогенно в організмі хазяїна. У деяких випадках бактеріальний модулювальний засіб являє собою вид ендосимбіотичних бактерій. Необмежувальні приклади бактерій, які можна застосовувати як модулювальні засоби, включають усі види бактерій, описані в даному документі в розділі ЇЇ докладного опису, і види бактерій, наведені в таблиці 1. Наприклад модулювальний засіб може являти собою вид бактерій із будь-якого типу бактерій, що наявний у кишках комах, у тому числі

Саттаргоїеорасієгіа, АїІрпаргоїеорасієгіа, Веїаргоїеобрасієгіа, Васієгоіїдеїе5, Ріптісціє5 (наприклад, І асіобасіїйи5 і ВасіШйи5 5рр.), СіІовзігідіа, Асііпотусеїев, Зрігоспей(ез, Меггисоптісгобіа і

Асііпобасіегіа.

У деяких випадках модулювальний засіб являє собою бактерію, яка порушує різноманітність мікроорганізмів або іншим способом змінює мікробіоту хазяїна таким чином, що це є згубним для хазяїна. В одному випадку бактерії можуть бути передбачені для порушення мікробіоти комарів. Наприклад, бактеріальний модулювальний засіб може конкурувати з популяцією симбіотичних бактерій в організмі комара, витісняти й/або зменшувати Її.

В іншому випадку бактерії можуть бути передбачені для порушення мікробіоти мікроскопічних кліщів. Наприклад, бактеріальний модулювальний засіб може конкурувати з популяцією симбіотичних бактерій в організмі мікроскопічного кліща, витісняти й/або зменшувати її.

В іншому випадку бактерії можуть бути передбачені для порушення мікробіоти пухоїда.

Наприклад, бактеріальний модулювальний засіб може конкурувати з популяцією симбіотичних бактерій в організмі пухоїда, витісняти й/або зменшувати Її.

В іншому випадку бактерії можуть бути передбачені для порушення мікробіоти іксодових кліщів. Наприклад, бактеріальний модулювальний засіб може конкурувати з популяцією симбіотичних бактерій в організмі іксодового кліща, витісняти й/або зменшувати Її.

Бактеріальні модулювальні засоби, обговорювані в даному документі, можна застосовувати для зміни рівня, активності або метаболізму цільових мікроорганізмів, як указано в розділах щодо зниження пристосовуваності комахи-хазяїна (наприклад, переносника патогену людини), такої як комар, мікроскопічний кліщ, пухоїд або іксодовий кліщ. бо м. Модифікації щодо модулювальних засобів

(а) Продукти злиття

Будь-який із модулювальних засобів, описаних у даному документі, може бути злитий або зв'язаний із додатковим фрагментом. У деяких випадках модулювальний засіб включає продукт злиття одного або декількох додаткових фрагментів (наприклад, 1 додаткового фрагмента, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 або більше додаткових фрагментів). У деяких випадках додатковий фрагмент являє собою будь-який із модулювальних засобів, описаних у даному документі (наприклад, пептид, поліпептид, малу молекулу або антибіотик). Альтернативно додатковий фрагмент може сам не виступати як модулювальний засіб, однак замість цього може виконувати вторинну функцію. Наприклад, додатковий фрагмент може полегшувати доступ, зв'язування або активування модулювального засобу в цільовій ділянці в організмі хазяїна (наприклад, у кишці хазяїна або бактеріоциті хазяїна) або в цільовому мікроорганізмі, що живе в організмі хазяїна (наприклад, переносника патогену людини, наприклад комара, мікроскопічного кліща, пухоїда або іксодового кліща).

У деяких випадках додатковий фрагмент може полегшувати проникнення модулювального засобу в клітину цільового хазяїна або цільовий мікроорганізм, що живе в організмі хазяїна.

Наприклад, додатковий фрагмент може включати пептид, що проникає в клітину. Пептиди, що проникають у клітину (СРР), можуть являти собою природні послідовності, отримані з білків; химерні пептиди, які утворюються в результаті злиття двох природних послідовностей; або синтетичні СРР, які являють собою послідовності, сконструйовані синтетичним шляхом на основі досліджень взаємозв'язку структури й активності У деяких випадках СРР характеризуються здатністю повсюдно проникати через клітинні мембрани (наприклад, клітинні мембрани прокаріотів та еукаріотіву з обмеженою токсичністю. Крім того, СРР можуть характеризуватися здатністю проникати через клітинні мембрани за допомогою енергозалежних та/або енергонезалежних механізмів без необхідності хірального розпізнавання специфічними рецепторами. СРР можуть зв'язуватися з будь-якими з модулювальних засобів, описаних у даному документі. Наприклад, СРР може зв'язуватися з протимікробним пептидом (АМР), наприклад пептидом скорпіона, наприклад ШМ192, злитим із пептидом, що проникає в клітину (наприклад, УСЄКККАКОККЕРІ ЗТІММОІКОЇ І ЕАМ; ЗЕО ІЮ МО: 232). Необмежувальні приклади

СРР наведено в таблиці 11.

Таблиця 11

Отриманізбілкв.///////Ї 77777771 . ВОІКІМ/ ЄОМААМКУУКК еАККАКОВААРРО

ГОПЕААВІВКОАНАНЗК

Ша

Химерні///////ССЇ11 . СМ/ТІ МАС СКІМІ КА ААЇ АККІЇ.

СА Р аг аваАДаЗТМаАМУБОРКККАКУ

НІМ/І-антиген 5У40 ЗЕО ПО МО: 216

ЗШ

Синтетичніо/////СЇ1111111

ЗЕО ІЮ МО: 217 . вВРУМАеМ ВА

В інших випадках додатковий фрагмент полегшує зв'язування модулювального засобу з цільовим мікроорганізмом (наприклад, грибом або бактерією), що живе в організмі хазяїна.

Додатковий фрагмент може включати один або декілька націлювальних доменів. У деяких випадках націлювальний домен може націлювати модулювальний засіб на один або декілька мікроорганізмів (наприклад, бактерію або гриб), що живуть у кишці хазяїна. У деяких випадках націлювальний домен може націлювати модулювальний засіб на конкретну ділянку в організмі хазяїна (наприклад, кишку або бактеріоцит хазяїна) для доступу до мікроорганізмів, які зазвичай наявні в указаній ділянці організму хазяїна. Наприклад, націлювальний домен може націлювати модулювальний засіб на передню кишку, середню кишку або задню кишку хазяїна. В інших випадках націлювальний домен може націлювати модулювальний засіб на бактеріоцит в організмі хазяїна та/або одну або декілька конкретних бактерій, що живуть у бактеріоциті хазяїна. Наприклад, націлювальний домен може являти собою лектин або аглютинін СсаЇапійи5 пімаій5 (ОМА), зв'язаний із модулювальним засобом, описаним у даному документі, наприклад

АМР, наприклад пептидом скорпіона, наприклад Оу192. (5) Пре- або продомени

У деяких випадках модулювальний засіб може включати амінокислотну пре- або пропослідовність. Наприклад, модулювальний засіб може являти собою неактивний білок або пептид, які можуть бути активовані за допомогою розщеплення або посттрансляційної модифікації пре- або пропослідовності. У деяких випадках модулювальний засіб конструюють з інакстивувальною пре- або пропослідовністю. Наприклад, пре- або пропослідовність може закривати сайт активації на модулювальному засобі, наприклад сайт зв'язування з рецептором, або може індукувати конформаційну зміну в модулювальному засобі. Таким чином, за розщеплення пре- або пропослідовності модулювальний засіб активується.

Альтернативно модулювальний засіб може включати малу пре- або промолекулу, наприклад антибіотик. Модулювальний засіб може являти собою неактивну малу молекулу, описану в даному документі, яка може бути активована в цільовому середовищі всередині хазяїна. Наприклад, мала молекула може бути активована за досягнення певного значення рнН у кишці хазяїна. (с) Лінкери

У випадках, якщо модулювальний засіб зв'язаний із додатковим фрагментом, модулювальний засіб може додатково містити лінкер. Наприклад, лінкер може являти собою хімічний зв'язок, наприклад один або декілька ковалентних зв'язків або нековалентних зв'язків.

У деяких випадках лінкер може являти собою пептидний лінкер (наприклад, довжиною 2, 3, 4, 5,

Зо б, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 25, 30, 35, 40 або більше амінокислот). Лінкер може включати будь-які гнучкі, тверді або розщеплювані лінкери описані в даному документі.

Гнучкий пептидний лінкер може включати будь-який із лінкерів, широко застосовуваних у даній галузі техніки, у тому числі лінкери, що мають послідовності, що містять головним чином залишки Су та 5ег (лінкер "55"). Гнучкі лінкери можуть бути придатні для з'єднання доменів, які потребують певного ступеня рухомості або взаємодії, і можуть містити невеликі, неполярні (наприклад, Су) або полярні (наприклад, Зег або Тпг) амінокислоти.

Альтернативно пептидний лінкер може являти собою твердий лінкер. Тверді лінкери придатні для збереження фіксованої відстані між фрагментами і підтримки їхніх незалежних функцій. Тверді лінкери також можуть бути придатними, якщо просторовий поділ доменів є важливим для збереження стабільності або біологічної активності одного або декількох компонентів у продукті злиття. Тверді лінкери, наприклад, можуть мати альфа-спіральну структуру або Рго-багату послідовність, (ХР)п, при цьому Х позначає будь-яку амінокислоту, переважно Аа, Гу або си.

У ще декількох випадках пептидний лінкер може являти собою розщеплюваний лінкер. У деяких випадках лінкери можуть розщеплюватися у специфічних умовах, таких як наявність відновлювальних реагентів або протеаз. Лінкери, що розщеплюються іп мімо, можуть використовувати оборотну природу дисульфідного зв'язку. Один приклад включає чутливу до тромбіну послідовність (наприклад, РЕ5) між двома залишками Су. Обробка тромбіном СРЕЗС іп міго спричиняє розщеплення чутливої до тромбіну послідовності, тоді як оборотний дисульфідний зв'язок залишається інтактним. Такі лінкери відомі й описані, наприклад, у Спеп еї аІ., Адм. Огид Оеєїїм. Нем. 65 (10):1357-1369, 2013. Розщеплення лінкерів у продуктах злиття також може здійснюватися протеазами, які експресуються в умовах іп мімо у конкретних клітинах або тканинах хазяїна або мікроорганізмах, що живуть в організмі хазяїна. У деяких випадках за досягнення цільової ділянки або клітини в результаті розщеплення лінкера може вивільнятися вільний функціональний модулювальний засіб.

Продукти злиття, описані в даному документі, альтернативно можуть бути зв'язані з'єднувальною молекулою, у тому числі гідрофобним лінкером, таким як негативно заряджена сульфонатна група; ліпідами, такими як полі(-СН2--)вуглеводневі ланцюги, такі як поліетиленгліколева (РЕС) група, їхніми ненасиченими варіантами, їхніми гідроксильованими 60 варіантами, їхніми амідованими варіантами або варіантами, які інакше містять М,

невуглецевими лінкерами; вуглеводними лінкерами; фосфодіестерними лінкерами або іншими молекулами, здатними ковалентно зв'язувати дві або більше молекул, наприклад два модулювальних засоби. Можна застосовувати нековалентні лінкери, такі як гідрофобні ліпідні глобули, з якими зв'язується модулювальний засіб, наприклад, за допомогою гідрофобної ділянки модулювального засобу або гідрофобного подовження модулювального засобу, такого як ряд залишків, багатий на лейцин, ізолейцин, валін або, можливо, також аланін, фенілаланін або навіть тирозин, метіонін, гліцин або інший гідрофобний залишок. Модулювальний засіб може бути зв'язаний за допомогою хімічної взаємодії зарядів таким чином, що позитивно заряджений фрагмент модулювального засобу зв'язується з негативно зарядженим іншим модулювальним засобом або додатковим фрагментом.

ЇМ. Склади і композиції

Композиції, описані в даному документі, можуть бути складені в чистій формі (наприклад, композиція містить тільки модулювальний засіб) або разом з одним або декількома додатковими засобами (такими як наповнювач, засіб доставки, носій, розріджувач, стабілізатор тощо) для полегшення застосування або доставки композицій. Приклади придатних наповнювачів і розріджувачів включають без обмеження лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбіт, маніт, крохмалі, аравійську камедь, фосфат кальцію, альгінати, трагакант, желатин, силікат кальцію, мікрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, целюлозу, воду, сольовий розчин, сироп, метилцелюлозу, метил- і пропілгідроксибензоати, тальк, стеарат магнію і мінеральне масло.

У деяких випадках композиція включає засіб доставки або носій. У деяких випадках засіб доставки включає наповнювач. Ілюстративні наповнювачі включають без обмеження тверді або рідкі матеріали-носії, розчинники, стабілізатори, наповнювачі для складів з уповільненим вивільненням, барвники й поверхнево-активні речовини (поверхнево-активні засоби). У деяких випадках засіб доставки являє собою стабілізувальний засіб доставки. У деяких випадках стабілізувальний засіб доставки включає стабілізувальний наповнювач. Ілюстративні стабілізувальні наповнювачі включають без обмеження епоксидовані рослинні «олії, протиспінювальні засоби, наприклад силіконове масло, консерванти, регулятори в'язкості, зв'язувальні засоби й засоби, що надають липкість. У деяких випадках стабілізувальний засіб доставки являє собою буфер, що є придатним для модулювального засобу. У деяких випадках композиція є мікроїнкапсульованою у засіб доставки на основі полімерних гранул. У деяких випадках стабілізувальний засіб доставки захищає модулювальний засіб від УФ і/або кислих умов. У деяких випадках засіб доставки містить рН-буфер. У деяких випадках композиція складена таким чином, що вона має рН у діапазоні від приблизно 4,5 до приблизно 9,0, включаючи, наприклад, будь-який із діапазонів РН від приблизно 5,0 до приблизно 8,0, від приблизно 6,5 до приблизно 7,5 або від приблизно 6,5 до приблизно 7,0.

Залежно від передбачуваних цілей і переважних обставин композиція може бути складена у вигляді концентратів емульсій, концентратів суспензій, розчинів, що безпосередньо розпилюються або розбавляються, паст, що наносяться у вигляді покриття, розведених емульсій, порошків, що розпилюються, розчинних порошків, порошків, що диспергуються, змочуваних порошків, пилоподібних препаратів, гранул, форм, інкапсульованих у полімерні речовини, мікрокапсул, пін, аерозолів, препаратів на основі газоподібного діоксиду вуглецю, таблеток, препаратів на основі смол, препаратів на основі паперу, препаратів на основі нетканого полотна або препаратів на основі трикотажного або тканого полотна. У деяких випадках композиція являє собою рідину. У деяких випадках композиція являє собою тверду речовину. У деяких випадках композиція являє собою аерозоль, як, наприклад, в аерозольному балончику, що знаходиться під тиском. У деяких випадках композиція наявна у відходах (таких як екскременти) шкідника. У деяких випадках композиція наявна всередині або на поверхні тіла живого шкідника.

У деяких випадках засіб доставки являє собою їжу або воду для хазяїна. В інших випадках засіб доставки являє собою джерело їжі для хазяїна. У деяких випадках засіб доставки являє собою харчову принаду для хазяїна. У деяких випадках композиція являє собою їстівний засіб, що поглинається хазяїном. У деяких випадках композиція доставляється хазяїном другому хазяїнові й поглинається другим хазяїном. У деяких випадках композиція поглинається хазяїном або другим хазяїном, і композиція вивільняється в оточення хазяїна або другого хазяїна з відходами (такими як екскременти) хазяїна або другого хазяїна. У деяких випадках модулювальний засіб включений у харчову принаду, призначену для поглинання хазяїном або переносу назад у його колонію.

У деяких випадках модулювальний засіб може становити від приблизно 0,1 95 до приблизно 60 100 95 композиції, як, наприклад, будь-яка кількість із від приблизно 0,01 95 до приблизно 100 95,

від приблизно 1 95 до приблизно 99,9 95, від приблизно 0,1 95 до приблизно 10 95, від приблизно 195 до приблизно 2595, від приблизно 1095 до приблизно 5095, від приблизно 50 95 до приблизно 99 95 або від приблизно 0,1 95 до приблизно 90 95 активних інгредієнтів (таких як фаг, лізин або бактеріоцин). У деяких випадках композиція містить щонайменше будь-яку кількість із 0,1 90, 0,5 95, 1 9, 5 о, 10 9, 20 Уо, ЗО У, 40 9Уо, 50 Зо, 60 Зо, 70 Зо, 80 Зо, 90 бо, 95 90 або більше активних інгредієнтів (таких як фаг, лізин або бактеріоцин). У деяких випадках концентровані засоби є переважними як комерційні продукти, а кінцевий споживач зазвичай використовує розведені засоби, які мають значно більш низьку концентрацію активного інгредієнта.

Будь-який зі складів, описаних у даному документі, можна застосовувати у формі принади, спіралі, електричного килимка, паруючого препарату, фуміганту або листа. і. Рідкі склади

Композиції, передбачені в даному документі, можуть знаходитись у формі рідкого складу.

Рідкі склади зазвичай змішують із водою, однак у деяких випадках їх можна застосовувати з рослинною олією, дизельним паливом, гасом або іншим легким маслом як носієм. Кількість активного інгредієнта часто знаходиться в діапазоні від приблизно 0,5 до приблизно 80 відсотків за вагою.

Склад у вигляді концентрату емульсії може містити рідкий активний інгредієнт, один або декілька розчинників на нафтовій основі й засіб, який сприяє змішуванню складу з водою з утворенням емульсії. Такі концентрати можна застосовувати в складах для сільського господарства, декоративних і газонних рослин, лісового господарства, обробки будинків, обробки харчових продуктів, сільськогосподарських тварин і шкідників, значущих для суспільної охорони здоров'я. ЇХ можна адаптувати для експлуатаційного обладнання від невеликих переносних обприскувачів до гідравлічних обприскувачів, малооб'ємних наземних обприскувачів, вентиляторних туманоутворювачів і малооб'ємних авіаційних обприскувачів.

Деякі активні інгредієнти легко розчиняються в рідкому носії. Під час змішування з носієм вони утворюють розчин, у якому не відбувається осадження або поділ, наприклад гомогенний розчин.

Склади цих типів можуть містити активний інгредієнт, носій та один або декілька інших інгредієнтів. Розчини можна застосовувати у будь-якому типі розпилювача, у закритому приміщенні та на свіжому повітрі.

Зо У деяких випадках композиція може бути складена у вигляді зворотної емульсії. Зворотна емульсія являє собою водорозчинний активний інгредієнт, диспергований у масляному носії.

Зворотні емульсії потребують емульгатора, який сприяє змішуванню активного інгредієнта з великим об'ємом носія на нафтовій основі, зазвичай паливного мастила. Зворотні емульсії сприяють зниженню зносу. У випадку інших складів деякий знос під час розпилення відбувається, коли краплі води починають випаровуватися до досягнення цільових поверхонь; у результаті цього краплі стають дуже маленькими й легковагими. Оскільки масло випаровується більш повільно, ніж вода, краплі зворотної емульсії стискаються менше, і більша кількість активного інгредієнта досягає цілі. Масло додатково сприяє зниженню поверхневого стоку й підвищує стійкість до дощу. Воно додатково виступає як адгезивний засіб шляхом поліпшення ступеня покриття поверхні й усмоктування. Оскільки краплі є порівняно великими й важкими, то їм складно пройти крізь покриття нижнього боку листя. Зворотні емульсії найбільш широко застосовуються у смугах відчуження, де знос на сприйнятливі нецільові площі може бути проблемою.

Текучий або рідкий склад поєднує багато з характеристик концентратів емульсій та змочуваних порошків. Виробники використовують ці склади, якщо активний інгредієнт являє собою тверду речовину, яка не розчиняється ні у воді, ні в маслі. Активний інгредієнт, просочений речовиною, такою як глина, подрібнюють до дуже дрібного порошку. Потім порошок суспендують у невеликій кількості рідини. Рідкий продукт, що утворюється в результаті, є достатньо щільним. Плинні й рідкі склади мають багато з характеристик концентратів емульсій, а також вони мають аналогічні недоліки. Вони потребують помірного збовтування для підтримки їх у вигляді суспензії й залишають видимі залишки, аналогічні таким у змочуваних порошків.

Плинні/рідкі склади є легкими в поводженні й застосуванні. Оскільки вони являють собою рідини, то вони зазнають розбризкування й розплескування. Вони містять тверді частинки, тому вони сприяють абразивному зношуванню насадок і насосів. Плинні й рідкі суспензії осаджуються у своїх контейнерах. Оскільки плинні й рідкі склади схильні до осадження, упакування в контейнери по п'ять галонів або менше полегшує повторне змішування.

Аерозольні склади містять один або декілька активних інгредієнтів і розчинник. Більшість аерозолів мають низький відсотковий вміст активних інгредієнтів. Існує два типи аерозольних складів - готовий до застосування тип, широко доступний у запечатаних контейнерах, що 60 знаходяться під тиском, і ті продукти, що використовуються в електричних аерозольних генераторах або аерозольних генераторах, що працюють на бензині, які вивільняють склад у вигляді диму або туману.

Готові до застосування аерозольні склади зазвичай являють собою невеликі автономні блоки, які вивільняють склад, коли клапан насадки приводиться в рух. Склад пропускається через тонкий отвір за допомогою інертного газу під тиском з утворенням тонкодисперсних крапель. Ці продукти використовуються в теплицях, на невеликих площах усередині будівель або на обмежених площах на відкритому повітрі. Комерційні моделі, які втримують до 5 фунтів активного інгредієнта, зазвичай є багаторазовими.

Димоутворювальні або туманоутворювальні аерозольні склади не знаходяться під тиском.

Вони використовуються в машинах, які розбивають рідкий склад на тонкодисперсний туман або густий туман (аерозоль) за допомогою диска, що швидко обертається, або поверхні, що нагрівається. і. Сухі або тверді склади

Сухі склади можуть бути розділені на два типи: готові до застосування й концентрати, які повинні бути змішані з водою для застосування як спрею. Більшість пилоподібних складів є готовими до застосування й мають низький відсотковий вміст активних інгредієнтів (менш ніж приблизно 10 відсотків за вагою) разом із дуже тонкодисперсним сухим інертним носієм, виготовленим із тальку, крейди, глини, горіхової шкаралупи або вулканічного попелу. Розмір окремих пилоподібних частинок варіюється. Деякі пилоподібні склади являють собою концентрати й мають високий відсотковий вміст активних інгредієнтів. Перед застосуванням їх змішують із сухими інертними носіями. Порошки завжди використовуються сухими й можуть легко зноситися на нецільові ділянки. ії. Гранульовані або пелетовані склади

У деяких випадках композиція складена у вигляді гранул. Гранульовані склади аналогічні пилоподібним складам, за винятком того, що гранульовані частинки є більшими й важчими.

Великодисперсні частинки можуть бути отримані з таких матеріалів, як глина, кукурудзяні качани або шкаралупа волоських горіхів. Активний інгредієнт покриває зовнішню поверхню гранул або всмоктується в них. Кількість активного інгредієнта може бути порівняно малою, зазвичай перебуваючи в діапазоні від приблизно 0,5 до приблизно 15 відсотків за вагою.

Зо Гранульовані склади найбільш часто використовуються для застосування щодо грунту, комах, що живуть у грунті, або усмоктування рослинами через коріння. Гранульовані склади іноді застосовують із використанням літака або вертольота для мінімізації зносу або проникнення в густі зарості. Після застосування гранули можуть повільно вивільняти активний інгредієнт. Деякі гранули потребують грунтової вологи для вивільнення активного інгредієнта. Гранульовані склади також використовуються для контролю личинок комарів та інших водних шкідників.

Гранули використовуються в операціях контролю шкідників у сільському господарстві, під час обробки будівель, на декоративних, газонних рослинах, у водному середовищі, у смугах відчуження, а також у суспільній охороні здоров'я (щодо комах, що жалять).

У деяких випадках композиція складена у вигляді пелет. Більшість пелетованих складів є досить подібними до гранульованих складів; ці терміни використовуються взаємозамінно. Однак у пелетованому складі всі частинки мають однакову масу й форму. Однорідність частинок полегшує застосування з використанням точного експлуатаційного обладнання. ім. Порошки

У деяких випадках композиція складена у вигляді порошку. У деяких випадках композиція складена у вигляді змочуваного порошку. Змочувані порошки являють собою сухі тонкоподрібнені склади, які виглядають як пилоподібні препарати. Зазвичай вони повинні змішуватися з водою для застосування як спрею. Однак небагато продуктів можна застосовувати як пилоподібний препарат, так і змочуваний порошок - вибір залишається за споживачем. Змочувані порошки мають від приблизно 1 до приблизно 95 відсотків за вагою активного інгредієнта; у деяких випадках більш ніж приблизно 50 відсотків. Частинки не розчиняються у воді. Вони швидко осаджуються, якщо їх постійно не збовтувати для підтримки в суспендованому стані. Їх можна застосовувати для розв'язання більшості проблем, пов'язаних зі шкідниками, і в більшості типів розпилювального обладнання, у яких можливе збовтування.

Змочувані порошки мають чудову залишкову активність. Завдяки їхнім фізичним властивостям більшість складу залишається на поверхні оброблених пористих матеріалів, таких як бетон, штукатурка й необроблена деревина. У таких випадках тільки вода проникає в матеріал.

У деяких випадках композиція складена у вигляді розчинного порошку. Розчинні порошкові склади виглядають, як змочувані порошки. Однак під час змішування з водою розчинні порошки легко розчиняються й утворюють справжній розчин. Після їхнього ретельного змішування бо додаткове збовтування не потрібно. Кількість активного інгредієнта в розчинних порошках знаходиться в діапазоні від приблизно 15 до приблизно 95 відсотків за вагою; у деяких випадках більш ніж приблизно 50 відсотків. Розчинні порошки мають усі переваги змочуваних порошків і жодного з недоліків, за винятком небезпеки вдихання під час змішування.

У деяких випадках композиція складена у вигляді гранули, що диспергується у воді.

Гранули, що диспергуються у воді, також відомі як сухі плинні склади, подібні до змочуваних порошків за винятком того, що замість бути пилоподібними, вони складені у вигляді невеликих гранул, що легко визначаються. Гранули, що диспергуються у воді, повинні бути змішані з водою для застосування. Опинившись у воді, гранули розпадаються на тонкодисперсні частинки, аналогічні змочуваним порошкам. Склад потребує безперервного збовтування для підтримки його в суспендованому стані у воді. Відсотковий вміст активного інгредієнта є високим, часто не менш ніж 90 відсотків за вагою. Гранули, що диспергуються у воді, мають багато з тих же переваг і недоліків змочуваних порошків за винятком того, що вони легше визначаються і змішуються. У зв'язку з низьким умістом пилоподібних частинок вони зумовлюють меншу небезпеку вдихання для споживача під час використання. м. Принада

У деяких випадках композиція включає принаду. Принада може знаходитись у будь-якій придатній формі, такій як тверда речовина, паста, пелетована або порошкоподібна форма.

Принада також може переноситися хазяїном назад у популяцію указаного хазяїна (наприклад, колонію або вулик). Принада може потім виступати як джерело їжі для інших членів колонії, тим самим надаючи ефективний модулювальний засіб великій кількості хазяїв і потенційно всій колонії хазяїна.

Принади можуть бути надані у придатному "будиночку" або "пастці". Такі будиночки й пастки є комерційно доступними, і наявні пастки можуть бути адаптовані для включення композицій, описаних у даному документі. Будиночок або пастка можуть бути передбачені, наприклад, у формі коробки і можуть бути передбачені в готовому вигляді або можуть бути виготовлені, наприклад, із картону, що складається. Придатні матеріали для будиночка або пастки включають пластмасу й картон, зокрема гофрований картон. Внутрішні поверхні пасток можуть бути вистелені липкою речовиною для обмеження руху хазяїна після потрапляння в пастку.

Будиночок або пастка можуть містити придатну борозенку всередині, яка може втримувати принаду на місці. Пастка відрізняється від будиночка, оскільки хазяїн не може легко залишити пастку після потрапляння, тоді як будиночок виступає як "годівниця", яка забезпечує хазяїна переважним середовищем, у якому можна годуватися й почувати себе в безпеці від хижаків. мі. Атрактанти

У деяких випадках композиція містить атрактант (наприклад, хемоатрактант). Атрактант може приваблювати дорослого хазяїна або статевонезрілого хазяїна (наприклад, личинку) до місця поблизу композиції. Атрактанти включають феромони - хімічні речовини, які секретуються твариною, особливо комахою, які впливають на поведінку або розвиток інших особин цього ж виду. Інші атрактанти включають цукрові сиропи й сиропи на основі гідролізатів білків, дріжджові гриби та м'ясо, що гниє. Атрактанти також можна поєднувати з активним інгредієнтом і розпилювати на листя або інші предмети в оброблюваній ділянці.

Відомі різні атрактанти, які впливають на поведінку хазяїна, наприклад пошук хазяїном їжі, місць для відкладання яєць або спарювання або партнерів для спарювання. Атрактанти, придатні в способах і композиціях, описаних у даному документі, включають, наприклад, евгенол, фенетилпропіонат, етилдиметилізобутилциклопропанкарбоксилат, пропілбензодіоксанкарбоксилат, цис-7,8-епокси-2-метилоктадекан, транс-8,транс-0- додекадієнол, цис-9-тетрадеценаль (і цис-11-гексадеценаль), транс-11-тетрадеценаль, цис-11- гексадеценаль, (2)-11,12-гексадекадієналь, цис-7-додеценілацетат, цис-8-додеценілацетат, цис- 9-додеценілацетат, цис-9-тетрадеценілацетат, цис-11-тетрадеценілацетат, транс-11- тетрадеценілацетат (і цис-11), цис-9,транс-11-тетрадекадієнілацетат (і цис-9,транс-12), цис- 9,трано-12-тетрадекадієнілацетат, цис-7,цис-11-гексадекадієнілацетат (і цис-7,транос-11), цис-

З,цис-13-октадекадієнілацетат, транс-3,цис-13-октадекадієнілацетат, анетол та ізоамілсаліцилат.

Для приваблення комах також можна застосовувати засоби, відмінні від хемоатрактантів, у тому числі освітлювальне обладнання з різними довжинами хвиль або кольорами випромінювання. мі. Нанокапсули/мікроінкапсулювання/ліпосоми

У деяких випадках композиція передбачена у вигляді мікроінкапсульованого складу.

Мікроінкапсульовані склади змішують із водою й розпилюють у такий же спосіб, як і інші склади, що розпилюються. Після розпилення пластмасові покриття руйнуються й повільно вивільняють 60 активний інгредієнт.

мії. Носії

Будь-яка з композицій, описаних у даному документі, може бути складена із включенням модулювального засобу, описаного в даному документі, та інертного носія. Такий носій може являти собою твердий носій, рідкий носій, гелеподібний носій та/або газоподібний носій. У певних варіантах здійснення носій може являти собою покриття для насіння. Покриття для насіння являє собою будь-який склад, що не зустрічається в природі, який прилипає цілком або частково до поверхні насінини. Склад може додатково містити допоміжну речовину або поверхнево-активну речовину. Склад може також містити один або декілька модулювальних засобів для розширення спектра дії.

Твердий носій, використовуваний для складу, включає тонкодисперсний порошок або гранули глини (наприклад, каолінової глини, діатомової землі, бентонітової глини, глини

Фубасамі, кислої глини тощо), синтетичний гідратований діоксид кремнію, тальк, керамічні матеріали, інші неорганічні мінерали (наприклад, серицит, кварц, сірку, активоване вугілля, карбонат кальцію, гідратований діоксид кремнію тощо), речовину, яка може бути сублімована і знаходиться у твердій формі за кімнатної температури (наприклад, 2,4,6-триіїзопропіл-1,3,5- триоксан, нафталін, п-дихлорбензол, камфору, адамантан тощо); вовну; шовк; бавовну; коноплі; жом; синтетичні смоли (наприклад, поліетиленові смоли, такі як поліетилен низької щільності, немодифікований поліетилен низької щільності й поліетилен високої щільності; співполімери етилену та вінілового естеру, такі як співполімери етилену й вінілацетату; співполімери етилену та естеру метакрилової кислоти, такі як співполімери етилену й метилметакрилату і співполімери етилену й етилметакрилату; співполімери етилену й естеру акрилової кислоти, такі як співполімери етилену й метилакрилату й співполімери етилену й етилакрилату; співполімери етилену й вінілкарбонової кислоти, такі як співполімери етилену й акрилової кислоти; співполімери етилену і тетрациклододецену; поліпропіленові смоли, такі як гомополімери пропілену і співполімери пропілену й етилену; полі-4-метилпентен-1, полібутен-1, полібутадієн, полістирол; смоли на основі співполімеру акрилонітрилу і стиролу; стирольні еластомери, такі як смоли на основі співполімеру акрилонітрилу, бутадієну і стиролу, блок- співполімери стиролу та спряжених дієнів і гідриди блок-співполімерів стиролу та спряжених дієнів; фторкаучуки; акрилові смоли, такі як полі(метилметакрилат); поліамідні смоли, такі як нейлон 6 і нейлон 66; поліестерні смоли, такі як поліетилентерефталат, поліетиленнафталат, полібутилентерефталат і поліциклогексилендиметилентерефталат, полікарбонати, поліацеталі, поліакрилсульфони, поліарилати, поліестери гідроксибензойної кислоти, поліетериміди, поліестеркарбонати, поліфеніленетерні смоли, полівінілхлорид, полівініліденхлорид, поліуретан і пористі смоли, такі як пінополіуретан, пінополіпропілен або піноетилен тощо), види скла, метали, керамічні матеріали, волокнисті матеріали, тканинні матеріали, трикотажні полотна, листи, папір, пряжу, піну, пористі речовини і мультифіламенти.

Рідкий носій може включати, наприклад, ароматичні або аліфатичні вуглеводні (наприклад, ксилол, толуол, алкілнафталін, фенілксилілетан, гас, газойль, гексан, циклогексан тощо), галогензаміщені вуглеводні (наприклад, хлорбензол, дихлорметан, дихлоретан, трихлоретан тощо), спирти (наприклад, метанол, етанол, ізопропіловий спирт, бутанол, гексанол, бензиловий спирт, етиленгліколь тощо), етери (наприклад, діетиловий етер, диметиловий етер етиленгліколю, монометиловий етер дієтиленгліколю, моноетиловий етер діетиленгліколю, монометиловий етер пропіленгліколю, тетрагідрофуран, діоксан тощо), естери (наприклад, етилацетат, бутилацетат тощо), кетони (наприклад, ацетон, метилетилкетон, метилізобутилкетон, циклогексанон тощо), нітрили (наприклад, ацетонітрил, ізобутиронітрил тощо), сульфоксиди (наприклад, диметилсульфоксид тощо), аміди (наприклад, М,М- диметилформамід, М,М-диметилацетамід, циклічні іміди (наприклад, М-метилпіролідон), алкіліденкарбонати (наприклад, пропіленкарбонат тощо), рослинну олію (наприклад, соєву олію, бавовникову олію тощо), рослинні етерні олії (наприклад, апельсинову олію, олію ісопу, лимонну олію тощо) або воду.

Газоподібний носій може включати, наприклад, газоподібний бутан, газоподібний політетрафторетилен, зріджений нафтовий газ (І РО), диметиловий етер і газоподібний діоксид вуглецю. їх. Допоміжні речовини

У деяких випадках композиція, передбачена в даному документі, може містити допоміжну речовину. Допоміжні речовини являють собою хімічні речовини, які не мають активності.

Допоміжні речовини попередньо змішують у складі або додають до розпилювального резервуара для поліпшення змішування або застосування або для посилення функціональних характеристик. Вони широко використовуються в продуктах, призначених для застосування 60 щодо листя. Допоміжні речовини можна використовувати для надання індивідуальних властивостей складу відповідно до конкретних потреб і введення поправки на місцеві умови.

Допоміжні речовини можуть бути призначені для здійснення конкретних функцій, у тому числі змочування, розподілу, прилипання, зниження випаровування, зниження звітрювання, буферизації, емульгування, диспергування, зниження зносу під час розпилення й зниження піноутворення. Жодна допоміжна речовина не може здійснювати всі ці функції сама, однак сумісні допоміжні речовини часто можна поєднувати для здійснення декількох функцій одночасно.

Серед необмежувальних прикладів допоміжних речовин, включених до складу, наявні зв'язувальні речовини, диспергувальні речовини і стабілізатори, зокрема, наприклад, казеїн, желатин, полісахариди (наприклад, крохмаль, аравійська камедь, похідні целюлози, альгінова кислота тощо), похідні лігніну, бентоніт, цукри, синтетичні водорозчинні полімери (наприклад, полівініловий спирт, полівініллпліролідон, поліакрилова кислота тощо), РАР (кислий ізопропілфосфат), ВНТ (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол), ВНА (суміш 2-трет-бутил-4- метоксифенолу і З-трет-бутил-4-метоксифенолу), рослинні олії, мінеральні масла, жирні кислоти й естери жирних кислот. х. Поверхнево-активні речовини

У деяких випадках композиція, передбачена в даному документі, містить поверхнево- активну речовину. Поверхнево-активні речовини, що також називаються змочувальними засобами й розподілювачами, фізично змінюють поверхневий натяг краплі спрею. Для того щоб склад належним чином виконував свою функцію, крапля спрею повинна бути здатною змочувати листя й розподілятися рівномірно по листу. Поверхнево-активні речовини збільшують площу, що покривається складом, тим самим підсилюючи вплив хімічної речовини на шкідника.

Поверхнево-активні речовини особливо важливі під час застосування складу щодо листя, покритого воском, або волосистого листя Без належного змочування й розподілу краплі спрею часто стікають або не можуть покрити поверхні листя належним чином. Водночас занадто велика кількість поверхнево-активної речовини може викликати надлишкове поверхневе стікання та знизити ефективність.

Поверхнево-активні речовини класифікуються на основі способу їхньої іонізації або розщеплення на електрично заряджені атоми або молекули, що називаються іонами.

Зо Поверхнево-активна речовина з негативним зарядом є аніонною. Поверхнево-активна речовина з позитивним зарядом є катіонною, і поверхнево-активна речовина без електричного заряду є неіїоногенною. Активність складу в присутності неіоногенної поверхнево-активної речовини може значно відрізнятися від активності в присутності катіонної або аніонної поверхнево- активної речовини. Вибір неправильної поверхнево-активної речовини може знижувати ефективність пестицидного продукту й завдавати шкоди цільовій рослині. Аніонні поверхнево- активні речовини є найбільш ефективними під час використання з контактними пестицидами (пестицидами, які контролюють шкідника шляхом безпосереднього контакту, а не системного всмоктування). Катіонні поверхнево-активні речовини ніколи не повинні застосовуватися як самостійні поверхнево-активні речовини, оскільки вони зазвичай є фітотоксичними.

Неїіоногенні поверхнево-активні речовини, часто застосовувані із системними пестицидами, полегшують проникнення пестицидних спреїв крізь кутикули рослин. Неіоногенні поверхнево- активні речовини є сумісними з більшістю пестицидів, і для більшості пестицидів, зареєстрованих ЕРА, яким необхідна поверхнево-активна речовина, рекомендується неїоногенний тип. Допоміжні речовини включають без обмеження клейкі речовини, сухі розріджувачі, речовини, що забезпечують проникнення в рослини, фактори сумісності, буфери або модифікатори рН, додаткові компоненти для контролю зносу, протиспінювальні засоби і загусники.

Серед необмежувальних прикладів поверхнево-активних речовин, включених у композиції, описані в даному документі, наявні солі алкілсульфатних естерів, алкілсульфонати, акліларилсульфонати, алкіларилові етери і їхні поліоксиетильовані продукти, етери поліетиленгліколю, естери багатоатомних спиртів і похідні цукрових спиртів. хі. Комбінації

У складах і в застосовуваних формах, одержаних із цих складів, модулювальний засіб може знаходитися у суміші з іншими активними сполуками, такими як пестицидні засоби (наприклад, інсектициди, стерилізатори, акарициди, нематоциди, молюскоциди або фунгіциди; див., наприклад, пестициди, наведені в таблиці 12), атрактанти, речовини, що регулюють ріст, або гербіциди. Використовуваний у даному документі термін "пестицидний засіб" стосується будь- якої речовини або суміші речовин, передбачених для попередження впливу, порушення впливу, відлякування або ослаблення впливу будь-якого шкідника. Пестицид може являти собою хімічну 60 речовину або біологічний засіб, що застосовується проти шкідників, у тому числі комах,

патогенів, бур'янів і мікробів, які конкурують із людьми за їжу, руйнують майно, поширюють захворювання або являють собою негативний подразник. Термін "пестицидний засіб" може додатково охоплювати інші біологічно активні молекули, такі як антибіотики, противірусні пестициди, протигрибкові засоби, антигельмінтні засоби, поживні речовини, пилок, сахарозу та/або засоби, які зупиняють або сповільнюють рух комах.

У випадках коли модулювальний засіб застосовують щодо рослин, суміш з іншими відомими сполуками, такими як гербіциди, добрива, регулятори росту, антидоти, хімічні сигнальні речовини або інші засоби для поліпшення властивостей рослини, також є можливою.

М. Доставка

Хазяїн, описаний у даному документі, може зазнати впливу будь-якої з композицій, описаних у даному документі, будь-яким придатним способом, який забезпечує доставку або введення композиції комасі. Модулювальний засіб може бути доставлений окремо або в комбінації з іншими активними або неактивними речовинами й може застосовуватися, наприклад, за допомогою розпилення, мікроін'єкції, через рослини, за допомогою поливання, занурення, у формі концентрованих рідин, гелів, розчинів, суспензій, спреїв, порошків, пелет, брикетів, плиток тощо, складених для доставки ефективної концентрації модулювального засобу.

Кількості й місця для застосування композицій, описаних у даному документі, зазвичай визначаються умовами проживання хазяїна, стадією життєвого циклу, на якій на мікроорганізми хазяїна можна цілеспрямовано впливати за допомогою модулювального засобу, ділянкою, у якій застосування повинне виконуватися, а також фізичними й функціональними характеристиками модулювального засобу. Модулювальні засоби, описані в даному документі, можна вводити комасі шляхом перорального заковтування, однак також можна вводити за допомогою засобів, які забезпечують проникнення через кутикулу або проникнення в дихальну систему комахи.

У деяких випадках комаха може бути просто "намочена" або "обприскана" розчином, що містить модулювальний засіб. Альтернативно модулювальний засіб може бути зв'язаний із харчовим компонентом (наприклад, їстівним) для комахи для полегшення доставки й/або для підвищення поглинання модулювального засобу комахою. Способи перорального введення включають, наприклад, безпосереднє змішування модулювального засобу з їжею для комахи,

Зо розпилення модулювального засобу в середовищі проживання комахи або полі, а також підходи на основі конструювання, у яких вид, який застосовується як їжа, конструюється для експресії модулювального засобу, після чого згодовується комасі, що підлягає негативному впливу. У деяких випадках, наприклад, композиція на основі модулювального засобу може бути включена до складу раціону комахи або покривати його зверху. Наприклад, композицію на основі модулювального засобу можна розпилювати на поле із сільськогосподарськими культурами, на яких комаха живе.

У деяких випадках композицію розпилюють безпосередньо на рослину, наприклад сільськогосподарські культури, наприклад, шляхом розпилення з рюкзака, розпилення з повітря, обприскування/обпилення рослинних культур тощо. У випадках, коли модулювальний засіб доставляють у рослину, рослина, що одержує модулювальний засіб, може перебувати на будь- якій стадії росту рослини. Наприклад, складені модулювальні засоби можна застосовувати у вигляді покриття для насіння або засобу для обробки коренів на ранніх стадіях росту рослини або у вигляді засобу для повної обробки рослини на більш пізніх стадіях циклу врожаю. У деяких випадках модулювальний засіб можна застосовувати щодо рослини як місцевий засіб, так щоб комаха-хазяїн заковтувала або іншим способом приходила в контакт із рослиною під час взаємодії з рослиною.

Крім того, модулювальний засіб можна застосовувати (наприклад, щодо грунту, у якому рослина росте, або щодо води, яку використовують для поливання рослини) як системний засіб, який поглинається й розподіляється через тканини (наприклад, стебла або листя) рослини- хазяїна або тварини-хазяїна таким чином, що комаха, що живиться на ній, буде одержувати ефективну дозу модулювального засобу. У деяких випадках рослини або організми, використовувані як їжа, можуть бути генетично трансформовані для експресії модулювального засобу, так щоб хазяїн, що живиться на рослині або організмі, використовуваному як їжа, заковтував модулювальний засіб.

Уповільнене або безперервне вивільнення також може досягатися за допомогою покриття модулювального засобу або композиції що містить модулювальний(модулювальні) засіб(засоби), розчинним або біоруйнованим шаром покриття, таким як желатин, при цьому це покриття розчиняється або руйнується в середовищі застосування, що потім робить модулювальний засіб доступним, або за допомогою диспергування засобу в розчинній або бо руйнованій матриці. Таке безперервне вивільнення й/або розподіл означає, що пристрої можуть бути переважно використані для стійкої підтримки ефективної концентрації одного або декількох модулювальних засобів, описаних у даному документі, у конкретному середовищі проживання хазяїна.

Модулювальний засіб також може бути включений у середовище, у якому комаха росте, живе, розмножується, живиться або здійснює зараження. Наприклад модулювальний засіб може бути включений у контейнер для їжі, годівницю, захисну обгортку або вулик. У деяких шляхах застосування модулювальний засіб може бути зв'язаний із твердою підкладкою для застосування в порошкоподібній формі або в "пастці" або "годівниці". Як приклад, у шляхах застосування, у яких композиція підлягає застосуванню в пастці або у вигляді принади для певної комахи-хазяїна, композиції також можуть бути зв'язані з твердою підкладкою або інкапсульовані в матеріал з уповільненим вивільненням. Наприклад, композиції, описані в даному документі можна вводити шляхом доставки композиції в щонайменше одне середовище проживання, у якому переносник (наприклад, переносник патогену людини, наприклад комар, мікроскопічний кліщ, пухоїд або іксодовий кліщ) росте, живе, розмножується, живиться або здійснює зараження.

МІ. Скринінг

У даний документ включені способи скринінгу модулювальних засобів, які є ефективними для зміни мікробіоти хазяїна (наприклад, комахи) і тим самим знижують пристосовуваність хазяїна. Скринінгові аналізи, передбачені в даному документі, можуть бути ефективними для ідентифікації одного або декількох модулювальних засобів (наприклад, фага), які цілеспрямовано впливають на симбіотичні мікроорганізми, що живуть в організмі хазяїна, і тим самим знижують пристосовуваність хазяїна. Наприклад, ідентифікований модулювальний засіб (наприклад, фаг) може бути ефективним для зниження життєздатності мікроорганізмів, які розщеплюють пестициди або алелохімікати (наприклад, бактерій, наприклад бактерії, яка розщеплює пестицид, наведений у таблиці 12), із підвищенням тим самим чутливості хазяїв до пестициду (наприклад, чутливості до пестициду, наведеного в таблиці 12) або алелохімічного засобу.

Наприклад, бібліотека фагів може бути піддана скринінгу для ідентифікації фага, який цілеспрямовано впливає на конкретний ендосимбіотичний мікроорганізм, що живе в організмі

З0 хазяїна. У деяких випадках бібліотека фагів може бути передбачена у формі одного або декількох зразків середовища (наприклад, грунту, ставкових донних відкладень або стічної води). Альтернативно бібліотека фагів може бути створена з лабораторних ізолятів. Бібліотеку фагів можна спільно культивувати з цільовим бактеріальним штамом. Після інкубування з бактеріальним штамом популяцію фага, який успішно інфікує і лізує цільові бактерії, збагачують у культуральному середовищі. Культуру, збагачену фагами, можна субкультивувати з додатковими бактеріями будь-яку кількість разів для подальшого збагачення популяції фага, що становить інтерес. Фаг може бути виділений для застосування як модулювальний засіб у будь- якому зі способів або композицій, описаних у даному документі, при цьому фаг змінює мікробіоту хазяїна таким чином, що знижується пристосовуваність хазяїна.

Таблиця 12

Пестициди мінеральні

Продовження таблиці 12

ЕРТС 77777771 Оксикарбоксин7/7//// С Ї777777711111111111111СсС1С

Етабоксам 0 Парафіновемасло/:/ ОЇ СС

Етиримол. 71111111 |Пенконазол/7/://////:К6ОНУССЇ. ССС

ПРИКЛАДИ

Далі наведений приклад способів згідно з даним винаходом. Слід розуміти, що на практиці можуть здійснюватися різні інші варіанти здійснення з урахуванням загального опису, наведеного вище.

Приклад 1. Обробка комарів АпорпеЇе5 розчинами азитроміцину

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність комарів

АпорпеІе5 соЇш»7і та знижувати швидкість передачі паразитів за допомогою обробки азитроміцином, що має відносно широку, але слабку антибактеріальну активність. Він інгібує деякі грампозитивні бактерії, деякі грамнегативні бактерії та багато атипових бактерій. Вплив азитроміцину на комарів опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комара, які є чутливими до азитроміцину. Одним цільовим бактеріальним штамом є Азаїа.

Даний комар був описаний як найнебезпечніша тварина у світі, а малярія являє собою одне із захворювань, що переносяться комарами, яке згубно впливає на людину. Налічується приблизно 3500 видів комарів, і всі з них, які переносять малярію, належать до підгрупи, що називається Апорпеїе5. Приблизно 40 видів АпорпеїЇе5 здатні переносити малярію, що значно впливає на здоров'я людини.

Схема терапії Порції крові, що висмоктується, змішаної з розчинами азитроміцину, складали в кінцевих концентраціях антибіотика 0 (негативний контроль), 0,1, 1 або 5 мкг/мл в 1 мл крові.

Схема експерименту

Для підготовки до обробки комарів вирощували в лабораторних умовах і середовищі.

Експерименти проводили із самицями комарів з колонії Нгуссо Апорпеїе5 соїЇц27ії, початково відібраними з польових комарів, зібраних у Камеруні, яких витримували на людській крові й вигодовували як дорослих особин 5595 фруктози. Личинок вигодовували на обробленій тетраміном їстівній рибі. Температуру підтримували при 28 С (31 С), вологість 70-80 95 із циклом світло/темрява з чергуванням у 12 год.

Вигодовування на людській крові й інфекції, що викликаються Ріахзхтоаійт

Гаметоцити Ріазтоадішт Гаісірагит МЕ54 культивували в середовищі КРМІ (ЗІВСО), що містить 300 мг І-глутаміну І-1, із додаванням 50 мг/л гіпоксантину, 25 мМ НЕРЕЗ5 та 10 95 термоінактивованої людської сироватки крові без антибіотиків. Культивування двох культур об'ємом 25 мл починали за 17 і 14 днів до інфікування при 0,5 95 паразитемії в 6 95 об'єм/об'єм відмитих еритроцитах О- (КВС). Середовище міняли щодня. До інфікування комарами центрифуговані КВС об'єднували й доповнювали 20 95 свіжопромитими КВС і сироваткою крові людини (співвідношення між КВС і сироваткою крові 2:3 об'єм/об'єм). Комарам надавали порцію крові, що висмоктується, з мембранного годувального пристрою (пробірки Еррепаогі на 2 мл), закритого парафільмом й утримуваного при 37 "С.

Розчини азитроміцину готували шляхом розчинення азитроміцину (5ІС2МА-АГОВІСН,

Р20007) в ОМ50О. Різні об'єми розчину азитроміцину додавали до свіжої крові до загального обсягу 1 мл у препараті порцій крові, що висмоктується. Кінцеві концентрації азитроміцину в крові становили приблизно 0 (тільки розчинник як контрольний розчин), 0,1, 1 або 5 мкг/мл.

Для кожної інфекції, що викликається Ріазтодішт, щонайменше 100 порівнянним за віком 2-

З-денним комарам на умову пропонували контроль або експериментальну порцію крові, що висмоктується, з мембранного годувального пристрою (пробірки Еррепаогї на 2 мл), закритого парафільмом й утримуваного при 37 "С, а комарів, що не напилися крові, вилучали. Порції надавали кожні чотири дні загалом у кількості трьох порцій крові, що висмоктується. Між порціями крові, що висмоктується, комарам надавали ватяні тампони, змочені дистильованою водою, для відкладу яєць. Ненагодованих комарів не видаляли після другої та більш пізніх порцій крові, що висмоктується. Число смертельних випадків підраховували щодня, і трупи видаляли й зберігали для аналізу Азаїа, як описано в даному документі. У кожній повторності використовували щонайменше 50 комарів на концентрацію азитроміцину. Після видачі останньої порції крові, що висмоктується, комарів витримували протягом 12 годин перед розтином.

Аналіз мікробіоти за допомогою кількісної полімеразної ланцюгової реакції

Перед розтином комарів занурювали в 70 95 етанол на 5 хвилин, потім промивали З рази в стерильному фосфатно-сольовому буферному розчині (РВ5) для знищення й видалення поверхневих бактерій, тим самим мінімізуючи контамінацію зразків бактеріями кутикули під час розтину. Середню кишку кожного комара (контроль і обробка азитроміцином) видаляли, і відразу заморожували на сухому льоді, і зберігали при 20 С до обробки. Середню кишку видаляли з аналізу тільки у випадку, якщо вона розривалася й значна кількість умісту кишки втрачалася. Зразки гомогенізували в суміші фенол/хлороформ у гомогенізаторі РгесеПуз 24

Зо (Вепіп) за допомогою скляних гранул шириною 0,5 мм (Вегіп) протягом 30 секунд при 6800 об./хв. і дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК) екстрагували сумішшю фенол/хлороформ.

Рибосомальну ДНК 165 (ОМА) використовували для кількісної оцінки Азаїа і представляли у вигляді відношення до рівня експресії 405 рибосомального білка 57, що кодується конститутивним геном Апорпеїез (ІЮО гена в Месіогразге АСАРО10592). Послідовності праймерів для Азаіа являють собою: прямий праймер 5-СсТаССсАТСТСТАААдасСссСатстТоСА-3' (5ЕО І

МО: 219) та зворотний 5-ТТсСИаСТоАСССОСаСТТООа!аат-3' (5ЕО ІЮ МО: 220), а для 57: прямий 5'- стасасаАдатТТацсАСпААсА-З3 (ЗЕО ІЮ МО: 221) та зворотний 5-АТСССТТТапСаСАСаААтТас-з" (ЗЕО ІЮ МО: 222). Кількісну полімеразну ланцюгову реакцію (ДАРСК) проводили на термоциклері для ПЛР у реальному часі 7500 Рабзі (Арріїей Віозузіетв) із використанням набору 5УВЕ Ргетіх

Ех Тад (ТаКага) згідно з інструкціями виробника. Комарі, оброблені азитромиціном, демонстрували зниження експресії специфічних для Азаїа генів.

Показники виживаності комарів, оброблених азитроміцином, порівнювали з комарами, обробленими негативним контролем. Показники виживаності комарів, оброблених розчином азитроміцину, знижувалися порівняно з контролем.

Приклад 2. Обробка комара Аедех мехап5 розчином антибіотика

Аеде5 мехап5 у результаті обробки доксицикліном, антибіотиком широкого спектра дії, який інгібує продукування білка. Вплив доксицикліну на комарів опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних стосовно комара, які є чутливими до доксицикліну. Одним цільовим бактеріальним штамом є УмоЇІбаспніа.

Успішний контроль і знищення вірусу репродуктивно-респіраторного синдрому свиней (РККБ5БУ) у цей час являє собою значну важливість для світового промислового свинарства. Для зниження ризику проникнення РКК5М свинарі використовують суворі заходи для посилення біологічної безпеки своїх ферм; однак інфекція РЕК5М у стадах свиней як і раніше зустрічається часто. Одним з переносників РККЗМ є комар Аеде5 мехап5. Аеде5 мехап5 є космополітним і розповсюдженим комаром-шкідником. Додатково до РЕКБМ, він також є відомим переносником Оігойагіа іттйіє (серцевий хробак собак); Мухотаїйові5 (смертельне вірусне захворювання кроликів) і східного кінського енцефаліту (смертельне вірусне захворювання коней у США). Аеде5 мехап5 є найпоширенішим комаром у Європі, що часто становить більше 80 95 популяції комарів Європи. Його поширеність залежить від доступності паводкових вод. Улітку пастки для комарів можуть збирати до 8000 комарів на пастку за ніч.

Схема терапії Порції крові, що висмоктується, змішаної з розчинами доксицикліну, складали за кінцевих концентрацій антибіотика 0 (негативний контроль), 1, 10 або 50 мкг/мл в 1 мл крові.

Схема експерименту

Експерименти проводили із самицями комарів з Аеде5 мехап5, початково відібраними з польових комарів, зібраних на полі кампуса Святого Павла Міннесотського університету, яких витримували на людській крові й вигодовували як дорослих особин 5 95 фруктози. Розчини доксицикліну готували шляхом розчинення доксицикліну (БІСМА-АГОКІСН, 09891) у стерильній воді. Різні об'єми розчину доксицикліну додавали до свіжої крові до загального об'єму 1 мл у препараті порцій крові, що висмоктується Кінцеві концентрації доксицикліну в крові становили приблизно 0 (контрольний розчин), 1, 10 або 50 мкг/мл.

У кожній повторності порівнянним за віком 2-3-денним комарам пропонували контроль або експериментальну порцію крові, що висмоктується, з мембранного годувального пристрою (пробірки Еррепоогї на 2 мл), закритого парафільмом та утримуваного за 37 "С. Комарів, що не напилися крові, вилучали. Порції надавали кожні чотири дні загалом у кількості трьох порцій крові, що висмоктується. Між порціями крові, що висмоктується, комарам надавали ватяні тампони, змочені дистильованою водою, для відкладу яєць. Ненагодованих комарів не видаляли після другої та більш пізніх порцій крові, що висмоктується. Число смертельних випадків підраховували щодня, і трупи видаляли й зберігали для аналізу УмоЇбасніа, як описано в даному документі У кожній повторності використовували щонайменше 50 комарів на концентрацію доксицикліну. Після видачі останньої порції крові, що висмоктується, комарів витримували протягом 12 годин перед розтином.

Перед розтином комарів занурювали в 70 95 етанол на 5 хвилин, потім промивали З рази в стерильному фосфатно-сольовому буферному розчині (РВ5) для знищення й видалення поверхневих бактерій, тим самим мінімізуючи контамінацію зразків бактеріями кутикули під час розтину. Середню кишку кожного комара (контроль і обробка доксицикліном) видаляли й

Зо відразу заморожували на сухому льоді й зберігали при 20 "С до обробки. Середню кишку видаляли з аналізу тільки у випадку, якщо вона розривалася й значна кількість умісту кишки втрачалася. Зразки гомогенізували в суміші фенол/хлороформ у гомогенізаторі РгесеПуз 24 (Вепіп) за допомогою скляних гранул шириною 0,5 мм (Вегіп) протягом 30 секунд при 6800 об./хв. і дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК) екстрагували сумішшю фенол/хлороформ.

Рибосомальну ДНК 165 (ОМА) використовували для кількісної оцінки УМоЇбасніа і представляли у вигляді відношення до рівня експресії 405 рибосомального білка 57, що кодується конститутивним геном Аедез (ІО гена в Месіогразе ААЕЇ 009496). Послідовності праймерів для

УмоІвасніа являють собою: прямий праймер 5-ТСАИССАСАСТаслАшАСТОИада-з (5ЕО ІЮ МО: 225) та зворотний праймер 5-ТААСЯСТАаСССТОТоСатА-3' (ЗЕО ІЮ МО: 226), а для 57: прямий 5'-

ААСатссасАСАССТТСАСИто-3" (ЗЕО ІО МО: 221) та зворотний 5- сса,атттаатадасатстТА-3 (5ЗЕО ІЮ МО: 228). Кількісну полімеразну ланцюгову реакцію (д8РСЕК) проводили на термоциклері для ПЛР у реальному часі 7500 Рабзі (Арріїей Віозузіетв) із використанням набору ЗУВК Ргетіх Ех Тад (ТакКага) згідно з інструкціями виробника. Комарі, оброблені доксицикліном, демонстрували зниження експресії специфічних для УмоІбаспіа генів.

Показники виживаності комарів, оброблених розчином доксицикліну, порівнювали з комарами, обробленими негативним контролем. Показники виживаності комарів, оброблених розчином доксицикліну, знижувалися порівняно з контролем.

Приклад 3. Обробка Оептасепіог апаегзопі розчином антибіотика

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність іксодового кліща Юегтасепіог апаегзопі за допомогою обробки окситетрацикліном лікваміцином

І А-200, антибіотиком широкого спектра дії, широко використовуваним для лікування широкого спектра бактеріальних інфекцій у великої рогатої худоби. Вплив окситетрацикліну лікваміцину

І А-200 на іксодових кліщів опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо іксодового кліща, які є чутливими до окситетрацикліну лікваміцину ГА-200. Одним цільовим бактеріальним штамом є КісКейбіа.

Іксодові кліщі являють собою облігатних членистоногих-гематофагів, які живляться на хребетних і викликають великі економічні втрати стосовно сільськогосподарських тварин внаслідок їхньої здатності переносити захворювання людині та тваринам. Зокрема, іксодові кліщі переносять патогени на всіх континентах і вважаються основними переносниками бо зоонозних патогенів. Фактично 415 нових бактеріальних патогенів, що переносяться іксодовими кліщами, були відкриті з моменту опису хвороби Лайма в 1982 році. ЮОегтасепіог апаегзопі, іксодовий кліщ Андерсена, вважається "справжньою скринькою Пандори серед патогенних факторів" і переносить декілька патогенів, у тому числі КіскКейбвіа гіскейбії і ЕгапсізеПа іШагепвів.

Він також є переносником Апаріахта тагодіпаіе, збудника анаплазмозу, і більшості широко розповсюджених патогенів сільськогосподарських тварин, що переносяться іксодовими кліщами, в усьому світі (саї! еї аі., Те ІЗМЕ дошигпа! 10:1846-1855, 2016). Економічні втрати внаслідок анаплазмозу у великої рогатої худоби за оцінками становлять 300 мільйонів доларів на рік у США (Коспоп еї аї., У. Мед. Епіотої. 49:253-261, 2012).

Схема терапії Терапевтична доза (11 мг/кг на масу тіла) ін'єктованого окситетрацикліну лікваміцину ГГ А-200 на - 4-й, - 1-й, - 3-й і ж 5-й дні після нанесення іксодових кліщів.

Схема експерименту

Розглядуваних дорослих 0. ападегхопі збирали за допомогою методик вилову на прапор на ділянках у Бернсі, Орегон, та Лейк-Комо, Монтана, як описано в (5соїез еї аї.,.). Мей. Епіотої. 42:153-162, 2005). Зібраних у польових умовах іксодових кліщів використовували для формування лабораторних колоній. Для аналізу бактерій іксодових кліщів когорту з дорослих самців іксодових кліщів Е1 або Г2 з кожної колонії вигодовували на теляті голштинської породи й розтинали для збору середньої кишки (МО) і слинних залоз (55) для виділення геномної ДНК і кількісної оцінки бактерій у такий спосіб.

Когорту іксодових кліщів Е1 вигодовували як на оброблених антибіотиками телятах, так і на необроблених телятах (контроль). Оброблені антибіотиком телята одержували терапевтичну дозу (11 мг/кг маси тіла) окситетрацикліну лікваміцину ГА-200, що ін'єктується, на - 4-й, - 1-й, 3-й і ї- 5-й дні після нанесення іксодових кліщів, тоді як неопрацьовані телята не одержували ніяких ін'єкцій (необроблений контроль). Самиць іксодових кліщів залишали для відкладу яєць для збереження другого покоління необроблених і оброблених іксодових кліщів (покоління Е2).

Оброблене покоління Е2 походило з дорослих особин Е1, які зазнали впливу антибіотиків.

Іксодові кліщі Е2 не зазнали дії антибіотиків.

Дорослих самців іксодових кліщів покоління ЕТ та Е2 вигодовували протягом 7 днів і потім розтинали протягом 24 годин. Число смертельних випадків підраховували щодня та іксодових кліщів видаляли та зберігали для аналізу КісКейсіа, як описано в даному документі. Перед

Зо розтином іксодових кліщів піддавали поверхневій стерилізації, і всі інструменти для розтину стерилізували після кожного розтину. МО і 50 іксодових кліщів висікали й поєднували в групи по із трьома біологічними повторностями. Тканини зберігали в розчині для лізису клітин (Оіадеп,

Валенсія, Каліфорнія, США) і протеїназі К (1,25 мг/мл). Геномну ДНК виділяли за допомогою набору для екстракції РигеСепе (Оіадеп) відповідно до інструкцій виробника.

Кількісний аналіз Кіскенвіа бБеїЇї

Для кількісної оцінки КісКейбіа число копій гену гіскА вимірювали за допомогою кількісної

ПЛР із використанням ЗУВК ОСгееп для необроблених і оброблених антибіотиком в Е1 і Е2 іксодових кліщів. Кількість КісКейбіа визначали за допомогою прямого /((5-

ТАСИаССАСТОССТОИТОатТ СА-3; 5ЕБЕО ІЮ МО: 229) та зворотного (5-(4АТаТААСОсСатАТТАС

АССААСАИ-3" 5ЕО ІЮ МО: 230) праймерів. Кількість бактерій вимірювали в МО і 50 об'єднаних зразків Е1 і Е2. Кількісну полімеразну ланцюгову реакцію (ДРСК) проводили на термоциклері для ПЛР у реальному часі 7500 Рабзі (Арріїей Віозузіетв) із використанням набору 5УВЕ Ргетіх

Ех Тад (Такага) згідно з інструкціями виробника. Іксодові кліщі, оброблені окситетрацикліном лікваміцином ГА-200, демонстрували зниження експресії специфічних для КісКейвіа генів.

Показники виживаності іксодових кліщів, оброблених розчином антибіотика, були порівнянними з необробленими іксодовими кліщами. Показники виживаності іксодових кліщів, оброблених розчином окситетрацикліну лікваміцину ГА-200, знижувалися порівняно з необробленими особинами.

Приклад 4. Обробка мікроскопічних кліщів, які інфікують сільськогосподарських тварин, розчинами рифампіцину

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність мікроскопічних кліщів за допомогою їх обробки розчином антибіотика. Даний приклад демонструє, що вплив окситетрацикліну на мікроскопічних кліщів опосередкований модулюванням популяцій бактерій, таких як Васіїйш5, ендогенних щодо мікроскопічних кліщів, які є чутливими до окситетрацикліну.

Свербіжна короста викликається мікроскопічними кліщами, які заражають тварин шляхом глибокого пробурювання шкіри й відкладу яєць усередині ходів. З яєць лупляться особини на личинковій стадії. Потім мікроскопічні кліщі на стадії личинок залишають ходи, просуваються на поверхню шкіри й починають утворювати нові ходи в здоровішій тканині шкіри. Розвиток від бо яйця до дорослої особини завершується протягом приблизно 2 тижнів. Ураження, що утворюються в результаті зараження цими мікроскопічними кліщами, є наслідком реакції імунної системи тварини на присутність мікроскопічних кліщів. У зв'язку з інтенсивністю імунної відповіді тварини потрібна лише незначна кількість мікроскопічних кліщів для того, щоб призвести до поширених уражень і генералізованого дерматиту. Незважаючи на те, що мікроскопічних кліщів можна знищити хімічно синтезованими майтицидами, ці типи хімічних речовин необхідно розпилювати на кожну тварину у стаді з використанням обладнання для гідравлічного розпилення під високим тиском, щоб забезпечити проникнення спрею в шкіру. Крім того, ці типи хімічних пестицидів можуть виявляти згубні екологічні й/або сільськогосподарські ефекти.

Схема терапії Розчин окситетрацикліну складали при 0 (негативний контроль), 1, 10 або 50 мкг/мл в 10 мл стерильної води з 0,5 95 сахарози й незамінними амінокислотами.

Схема експерименту

Для визначення того, чи мають дорослі мікроскопічні кліщі на стадії розмноження іншу сприйнятливість порівняно з форетичними мікроскопічними кліщами або їх потомством, оскільки їх кутикула не є затверділою, збирали мікроскопічних кліщів, що живуть на сільськогосподарських тваринах, і мікроскопічних кліщів на стадіях личинки й лялечки. У цьому аналізі досліджували вплив розчинів антибіотика на різні типи мікроскопічних кліщів і визначали, як їх пристосовуваність змінюється в результаті цілеспрямованого впливу на ендогенні мікроорганізми, такі як Васійи5.

Зі свиней, заражених мікроскопічними кліщами, збирали мікроскопічних кліщів, що відклали яйця. Зразки шкіри збирали за допомогою обережного зіскрібання й відривання покритих коринками ділянок з ділянки внутрішнього вуха свині з використанням загостреної чайної ложки й потім досліджували на наявність мікроскопічних кліщів.

Мікроскопічних кліщів розподіляли по групах залежно від віку й аналізували окремо. Вік визначали на основі морфологічних характеристик і пігментації личинок або лялечок у такий спосіб: мікроскопічних кліщів, зібраних із закручених личинок, які були досить маленькими для того, щоб пересуватися, поміщали в групу 1; мікроскопічних кліщів, зібраних з випрямлених личинок, які були занадто великими, щоб лежати в комірці, і починали витягатися прямо за допомогою свого ротового апарата в напрямку отвору комірки, поміщали в групу 2; і мікроскопічних кліщів, зібраних з лялечок, поміщали в групу 3. Мікроскопічних кліщів зберігали у вигляді личинки- або лялечки-хазяїна у скляних чашках Петрі доти, поки не збирали 50 одиниць.

Це забезпечувало збереження незмінним їх стандартних умов живлення й фізіологічного стану.

Щоб попередити відділення мікроскопічних кліщів від їх личинки або лялечки-хазяїна або заповзання один на одного, в одній і тій же чашці утримували тільки хазяїв на одній і тій же стадії розвитку.

Обладнання - кільце з нержавіючої сталі (внутрішній діаметр 56 мм, висота 2-3 мм) і 2 скляних кола (діаметр 62 мм) - очищали ацетоном і гексаном або пентаном з утворенням іспитової арени. Розчини окситетрацикліну й контрольний розчин наносили на обладнання шляхом однорідного розпилення на скляні диски й кільце арени. Для цього в резервуар завантажували 1 мл розчинів; установлювали відстань від поверхні, що обприскується, до дна пробірки на 11 мм, і використовували форсунку на 0,0275 дюймів. Тиск регулювали (звичайно в діапазоні 350-500 гПа) доти, поки кількість відкладеного розчину не становила 150,05 мг/см2.

Розчини антибіотика виливали у відповідні чашки, покриваючи все дно чашок, а залишкову рідину випарювали під витяжним обладнанням. Кільце поміщали між скляними колами, утворюючи камеру. Камери використовували протягом 60 год. після готування не більш ніж для трьох аналізів з метою контролю впливу розчинів антибіотика на мікроскопічних кліщів. У цю камеру вводили від 10 до 15 мікроскопічних кліщів, і частини обладнання з'єднували разом краплями розплавленого воску. Використовували мікроскопічних кліщів, зібраних із закручених личинок, випрямлених личинок, білооких лялечок і темнооких лялечок з білими й блідими тільцями.

Через 4 години мікроскопічних кліщів переносили на чисту скляну чашку Петрі (діаметр 60 мм) із двома або трьома білоокими лялечками (через 45 днів після покриття оболонкою) для вигодовування. Мікроскопічних кліщів спостерігали під препарувальною лупою через 4 год., 24 год. і 48 год. після обробки антибіотиком або контрольними розчинами й класифікували згідно з наведеними нижче категоріями. - Рухливі: вони пересувалися на своїх кінцівках, незалежно від того, чи ткнули в них голкою. - Паралізовані: вони рухали одним або декількома придатками, без стимуляції або після стимуляції, однак вони не могли пересуватися. - Мертві: нерухомі та не реагували на З послідовні стимуляції.

Стерильну зубочистку або голку використовували для стимуляції мікроскопічних кліщів шляхом дотику до їхніх кінцівок. Нові зубочистки або стерильні голки використовували для стимуляції кожної групи для запобігання контамінації між групами мікроскопічних кліщів.

Аналізи проводили при 32,5 "С і відносній вологості 6070 95. Якщо смертність контрольних особин перевищувала 30 95, то повторність виключали. Кожний експеримент повторювали з використанням чотирьох серій камер.

Статус ВасШи5 у групах мікроскопічних кліщів оцінювали за допомогою ПЛР. Загальну ДНК виділяли з контрольних (не оброблених окситетрацикліном) та оброблених окситетрацикліном особин (ціле тіло) за допомогою набору для виділення ДНК (ОМЕСА, Віо-іеК) відповідно до протоколу виробника. Праймери для Васі», прямий праймер 5- аАдасТАпАСпААаСОпАСсСТО-3 (5БО ОО МО: 231) та зворотний праймер 5-

ТоССТСАСОСТАСТИастТТОо-3' (ЗЕО ІЮ МО: 232), розробляли на основі послідовностей 235-55

ТЕМА, одержаних із геному Васійи5 (номер доступу: АРО0О7209.1) (Такепо еї аї., 9. Васіегіої. 194 (17):4767-4768, 2012) із використанням програмного забезпечення Ргітег 5.0 (Ргітег-Е / ю.,

Плімут, Велика Британія). Цикли ПЛР-ампліфікації включали початковий етап денатурації за 95"С протягом 5 хв., 35 циклів за 95 "С протягом 1 хв., за 59 "С протягом 1 хв. та за 727 протягом 2 хв. і кінцевий етап елонгації протягом 5 хв. за 72 "С. Продукти ампліфікації з оброблених окситетрацикліном і контрольних зразків аналізували на 1 95 агарозних гелях, забарвлювали за допомогою 5УВЕ зЗаїге та візуалізували з використанням системи візуалізації.

Показники виживаності мікроскопічних кліщів, оброблених розчином окситетрацикліну, порівнювали з мікроскопічними кліщами Маїтоа, обробленими негативним контролем.

Передбачається, що показники виживаності й рухливість мікроскопічних кліщів, оброблених розчином окситетрацикліну, знижуються порівняно з контролем.

Приклад 5. Отримання бібліотеки фагів

Даний приклад демонструє одержання колекції фагів зі зразків середовища.

Схема терапії Збір бібліотеки фагів, що має наступні родини фагів: Муомігідає, Зірпомігідає,

Родомігідає, Піроїнгіхміїдає, Видімійдає, АтрийПамійїдає, Вісацйдамійдає, Сіамамігідає,

Сопісомігдаеє, Сувіомігідає, РизеїІомігідає, Сспироїомігідає, Сийамігпдає, Іпомігідає, ІП емімігідає,

Місгомігідає, Ріазтамігідає, Тесіїмігідав.

Зо Схема експерименту

Декілька зразків середовища (грунт, ставкові донні відкладання, стічна вода) збирали в стерильні колби на 1 л протягом періоду 2 тижнів та негайно обробляли, як описано нижче, після збору та потім зберігали за 4 "С. Тверді зразки гомогенізували в стерильному бульйоні

Лурія подвійної міцності (І.В) або триптичному соєвому бульйоні (Т5В) Оїсо з додаванням 2 мМ

Сасі?2 до кінцевого об'єму 100 мл. Значення рН і рівні фосфату вимірювали за допомогою індикаторних смуг для фосфату. Для очищення всі зразки центрифугували при 3000-6000 9 в

Медагиде 1.0К, Негаєих або центрифузі Еррепдогі 5702 ЕК, протягом 10-15 хв. при 4 с, ії фільтрували через фільтри з розміром пор 0,2 мкм із низьким зв'язуванням білка для видалення всіх бактеріальних клітин, що залишилися. Надосадову рідину зберігали при 4 "С у присутності хлороформу в скляній пляшці.

Приклад 6. Ідентифікація фагів, специфічних щодо мішені

Даний приклад демонструє виділення, очищення й ідентифікацію окремих фагів, специфічних щодо мішені, з неоднорідної бібліотеки фагів.

Схема експерименту 20-30 мл бібліотеки фагів, описаної в прикладі 5, розводили до об'єму 30-40 мл ІВ- бульйоном. Цільовий бактеріальний штам, наприклад Висппега, додавали (50-200 мкл культури, вирощеної протягом ночі в І В-бульйоні) для збагачення популяції фагів, які цілеспрямовано впливають на цей конкретний бактеріальний штам у культурі. Цю культуру інкубували протягом ночі при 37 "С, струшуючи при 230 об./хв. Бактерії з цієї збагаченої культури видаляли центрифугуванням (3000-6000 д в Медатде 1.0, Негаєи5 або центрифузі Еррепаогі 5702 Є, 15-20 хв., 4 "С) і фільтрували (фільтр із розміром пор 0,2 або 0,45 мкм). 2,5 мл культури, що не містить бактерій, додавали до 2,5 мл І|В-бульйону і 50-100 мкл цільових бактерій для збагачення популяції фагів. Збагачену культуру вирощували протягом ночі, як описано вище.

Зразок з цієї збагаченої культури центрифугували при 13000 д протягом 15 хв. за кімнатної температури і 10 мкл надосадової рідини поміщали на чашку Петрі, що містить І В-агар, разом зі 100-300 мкл цільових бактерій і З мл розплавленого 0,7 95 м'якого агару. Планшети інкубували протягом ночі за 437 "С. Кожну з бляшок, що спостерігалася на бактеріальному газоні, збирали і переносили в 500 мкл І В-бульйону. Зразок з цієї вихідної культури бляшок додатково висівали на цільові бактерії. Очищення бляшок виконували три рази для всіх виявлених фагів з метою 60 виділення одного однорідного фага з неоднорідної суміші фагів.

Лізати з чашок з фагами з високими титрами (» 1 х 1010 БУО/мл) одержували шляхом збирання верхніх шарів з планшетів зі штамом бактерій-хазяїв, що демонструють злитий лізис.

Після додавання 5 мл буфера верхній м'який шар агару мацерували, очищували центрифугуванням і стерилізували фільтрацією. Одержані лізати зберігали за 4 "С. Фагові лізати з високим титром додатково очищували за допомогою ізопікнічного центрифугування з використанням Сз5сСЇї, як описано в Зуттег еї аї., 9. Васіегіо!. 192:179-190, 2010).

ДНК виділяли з очищених за допомогою С5СІ фагових суспензій, як описано в Зитітег,

Меїтпоаз Мої. ВіоІ. 502:27-46, 2009). Окремий виділений фаг секвенували у вигляді частини двох пулів геномів фагів за допомогою способу піросеквенування 454. Геномну ДНК фагів змішували в еквімолярних кількостях до кінцевої концентрації приблизно 100 нг/л. Об'єднану ДНК фрагментували, лігували за допомогою мультиплексної ідентифікаційної мітки (МІВ), специфічної для будь-якого з пулів, та секвенували за допомогою піросеквенування з використанням повнопланшетної реакції на секвенаторі РЇХ Тпйапішт Коспе відповідно до протоколів виробника. Об'єднана ДНК фагів була присутня у двох реакціях секвенування.

Урізані вихідні дані потокових діаграм РЇХ Тпапішт, що відповідають кожному з пулів, збирали окремо з використанням збирача Мем/Бієг версії 2.5.3 (454 |йе Зсіепсе5), регулюючи налаштування таким чином, щоб були включені тільки риди, що містять одну МІО на збір.

Ідентичність окремих контигів визначали за допомогою ПЛР із використанням праймерів, утворених для послідовностей контигів й окремих препаратів геномної ДНК фагів, як матриці.

Зедиепспег 4.8 (Сепе Соде5 Согрогайоп) використовували для збирання й редагування послідовностей. Хромосомні кінцеві структури фагів визначали експериментально. Липкі кінці (со5) для фагів визначали за допомогою секвенування кінців фагового геному та секвенування продуктів ПЛР, одержаних шляхом ампліфікації за допомогою лігувального з'єднання циркуляризованої геномної ДНК, як описано в (Зиттег, Меїпоаз Мої. Віої!. 502:27-46, 2009).

Ділянки, що кодують білки, спочатку прогнозували з використанням СепемагК.птт (І иКазпіп еї а! Мисівїс Асід5 Нев. 26:1107-1115, 1998), очищали за допомогою ручного аналізу в Апйетів (Ашпепого еї аї., Віоіптоптаїйсв5 16:944-945, 2000.) та аналізували шляхом застосування ВІ А5Т (граничне Е-значення 0,005) (Сатаснпо еї аІ., ВМС Віоіптогітаєйс5 10:421, 2009). Білки, що становлять особливий інтерес, додатково аналізували за допомогою ІпіегРгозсап (Нипієг еї аї.,

Мисівїс Асіах Не5. 40:0306-0312, 2012).

Електронну мікроскопію очищеного за допомогою С5СІ фага (21 х 10711 БУО/мл), який лізував ендосимбіотичні бактерії Висппега, виконували шляхом розведення вихідного розчину буфером на основі триптичного соєвого бульйону. Фаги наносили на тонкі сітки Гоптмаг на 400 меш із вуглецевим покриттям, забарвлювали 2 95 (вага/об'єм) уранілацетатом і висушували на повітрі. Зразки спостерігали в трансмісійному електронному мікроскопі УЕОЇ 1200ЕХ, що функціонує за прискорювальної напруги 100 кВ. П'ять віріонів кожного фага вимірювали для розрахунків середніх значень і стандартних відхилень розмірів капсиду й паростка, за необхідності.

Приклад 7. Обробка попелиць розчином очищених фагів

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність попелиць за допомогою обробки їх розчином фагів. Даний приклад демонструє, що вплив фага на попелиць опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо попелиць, які є чутливими до фагів. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега, при цьому фаг був ідентифікований в прикладі 6.

Попелиці являють собою ілюстративний вид для дослідження засобів, що модулюють мікробіоту, і їхніх ефектів щодо пристосовуваності попелиць.

Схема терапії

Розчини фагів складали при 0 (негативний контроль), 102, 105 або 108 бляшкоутворювальних одиниць (БУО)/мл фага з прикладу 6 в 10 мл стерильної води з 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами.

Схема експерименту

Для підготовки до обробки попелиць вирощували в лабораторних умовах і середовищі. У кімнаті з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла; 60-25 95 КН; 20:22 "С) рослини кінських бобів вирощували в суміші вермікуліту і перліту при 24 "С з 16 год. світла й 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях другого і третього періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розподіляли за видами обробки таким чином, що для кожного виду обробки отримували 60 приблизно те саме число особин з кожної з рослин колекції.

Розчини фагів одержували, як описано в даному документі. Лунки 9б6-лункового планшета заповнювали 200 мкл штучного раціону для попелиць (Ребмау еї аї., Сападіап дошигпаї ої 2ооІоду 66 (11):2449-2453, 1988) і планшет закривали парафільмом для одержання їстівного саше.

Штучний раціон змішували або зі стерильною водою та 0,595 сахарози та незамінними амінокислотами як негативним контролем, або з розчинами фагів із різними концентраціями фагів. Розчини фагів змішували зі штучним раціоном з одержанням кінцевих концентрацій фагів від 102 до 108 (БУО)/мл.

Для кожної повторності обробки 30-50 попелиць на стадіях другого і третього періодів розвитку поміщали окремо в лунки 9б-лункового планшета і планшет з їстівним саше перевертали над ними, що дозволяло комахам живитися через парафільм і залишатися обмеженими окремими лунками. Експериментальних попелиць утримували за тих же самих умов середовища, що й колонії попелиць. Після того, як попелиць вигодовували протягом 24 год., їстівне саше заміняли новим, що містить стерильний штучний раціон, і нове стерильне саше надавали кожні 24 год. протягом 4 днів. Коли саше заміняли, попелиць також перевіряли стосовно смертності Попелицю вважали мертвою, якщо вона ставала коричневою або розташовувалася на дні лунки і не рухалася під час спостереження. Якщо попелиця перебувала на парафільмі їстівного саше, але не рухалася, вона вважалася такою, що годується та є живою.

Статус Висппега у зразках попелиць оцінювали за допомогою ПЛР. Дорослих попелиць із групи негативного контролю (не оброблених фагом) та групи, обробленої фагом, спочатку піддавали поверхневій стерилізації 70 95 етанолом протягом 1 хв., 10 95 відбілювачем протягом 1 хв. та трьома промиваннями надчистою водою протягом 1 хв. Загальну ДНК екстрагували з кожної особини (все тіло) за допомогою набору для виділення ДНК комах (ОМЕСА, Віо-їек) відповідно до протоколу виробника. Праймери для Висппега, прямий праймер 5'- атссаОаСТСАТСАСАТОС-3 (5БО 10 МО: 233) та зворотний праймер 5- тоСатстТатАТТАТСТОСТ-3' (5ЕО ІО МО: 234), розробляли на основі послідовностей 235-55

ТЕМА, одержаних із геному Висппега (номер доступу: СА 000009605.1) (Зпідепобри еї аї.,

Маїште 407:81-86, 2000) із використанням програмного забезпечення Ргітег 5.0 (Ргітег-Е І ю.,

Плімут, Велика Британія). Цикли ПЛР-ампліфікації включали початковий етап денатурації за

Зо 95"С протягом 5 хв., 35 циклів за 95 "С протягом 30 с, за 55 "С протягом 30 с та за 7270 протягом 60 с та кінцевий етап елонгації протягом 10 хв. за 72 "С. Продукти ампліфікації з оброблених рифампіцином і контрольних зразків аналізували на 195 агарозних гелях, забарвлених за допомогою 5УВК заїе, та візуалізували з використанням системи візуалізації.

Попелиці, оброблені фагами, демонстрували зниження експресії специфічних для Висппега генів.

Показники виживаності попелиць, оброблених специфічними щодо Висппега фагами, порівнювали з попелицями, обробленими негативним контролем. Показники виживаності попелиць, оброблених специфічними щодо Висппега фагами, знижувалися порівняно з попелицями, обробленими контролем.

Приклад 8. Одержання розчину бактеріоцину соЇїА

Даний приклад демонструє одержання й очищення бактеріоцину соїА.

Послідовність конструкції саїадаїдасссдсассаїдсідШсідасоідсдідасддсдсщдїацдюдідсанадсдсдассдсддсааассддаадаашодсда аасдадсдадаадсдссдадсаасдаїсаддсдаїдіадааадсайсадсосіаїсдссдастодіддадасаассосіаіаасддас ддссадсадсадсадсадсадссдааасадідддаадідсдсссодаїсідадссдсдаїсадсдсддсаасассааадсосадоїд дааанаасааааааддсдаїаассаїдаіанаасосддоасіддддсааааасанйаасддсссддаїадссаїааадаїассддсаї дюддосдосадсдіасосідасісдаа (ЗЕО І МО: 235)

Схема експерименту

ДНК одержували за допомогою ПЛР з використанням специфічних праймерів з вищерозташованими (Маеї) ії нижчерозташованими (Хпої) сайтами рестрикції. Прямий праймер атТАТСТАТТОССОаТСТАСОСААСАТАТОаСсСААТТОСС (5БО ІО МО: 236) та зворотний праймер

ССОСТСОАСССАТСТОАСАСТІССТССАА (5БО ОО МО: 237). Очищені фрагменти ПЛР (Мисієозріп Ехігасі І - Маспегеу Мадеї) розщеплювали за допомогою Маеї або Хпої і потім фрагменти лігували. У випадку клонування соЇА лігований фрагмент ДНК клонували у вектор рег2.1 (номер доступу в базі даних сепВапк ЕМ122872) (Апзеїте еї аї., ВМС Віо!ї. 6:43, 2008).

Нуклеотидну послідовність систематично перевіряли (Содепісв).

Плазміду з послідовністю соЇА експресували в ВІ 21 (ОЕЗ)/рІ уз. Бактерії вирощували в І В- бульйоні за 30 С. За 00600 0,9 додавали ізопропіл-В-О-1-тіогалактопіранозид (ІРТО) до кінцевої концентрації 1 мМ та клітини вирощували протягом 6 год. Бактерії лізували шляхом 60 ультразвукової обробки в 100 мМ Масі, 1 945 Тийоп Х-100, 100 мМ Ттіз-основи з рН 9,5 і білки завантажували в колонку НізТтар НР (СЕ Неайсаге). Колонку послідовно промивали за допомогою 100 мМ Масі, 100 мМ Ттгі5-НСЇ з рН 6,8 і РВ5. Елюювання проводили за допомогою 0, ЗМ імідазолу в РВ5. Колонки для знесолення РО-10 (ЗЕ Неакпйсаге) застосовували для видалення імідазолу і солюбілізовані в РВ5З пептиди концентрували на центрифужних фільтрувальних елементах (МійПіроге).

Послідовність білка СоЇА:

МТАТМІ РАС УМААГУУСІЗА ТАСКРЕЕРАК І50ОЕАРБМОО АМУЕБІОВНУВ ВЕМОСМАУМа

СООООООРКО МЕМАРОЇ ЗНО ОВОаМТКАОМЕ ІМККОаОМНОЇ МАСУКМІМа РОБНКОТМУНУ аавмМАМ (5ЕО ІО МО: 211).

Приклад 9. Обробка попелиць розчином бактеріоцину соЇїА

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність попелиць за допомогою обробки їх розчином бактеріоцину. Даний приклад демонструє, що вплив бактеріоцинів на попелиць опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо попелиць, які є чутливими до бактеріоцину СОЇА. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега, при цьому бактеріоцин був отриманий у прикладі 8.

Схема терапії

Розчини СоїА складали при 0 (негативний контроль), 0,6, 1, 50 або 100 мг/мл СОЇА з прикладу 8 в 10 мл стерильної води з 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами.

Схема експерименту

Для підготовки до обробки попелиць вирощували в лабораторних умовах і середовищі. У кімнаті з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла; 60-25 95 КН; 20:22 "С) рослини вирощували в суміші вермікуліту і перліту і заражали попелицями. У тих же кліматичних умовах личинки Е. Ббайеасих5 одержували в результаті масового виробництва; дзюрчалок вигодовували з використанням цукру, пилку та води та відкладання яєць індукували шляхом розміщення заражених рослин-хазяїв у саж для комах на 3 год. Повний життєвий цикл відбувався на рослинах-хазяїнах, які щодня повторно заражали попелицями.

Лунки 96-лункового планшета заповнювали 200 мкл штучного раціону для попелиць (Гермау еї аі., Сападіап Ууоштпаї ої 7ооіоду 66 (11):2449-2453, 1988) і планшет закривали парафільмом для одержання їстівного саше. Штучний раціон змішували або з розчином стерильної води з

Зо 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами як негативним контролем, або з розчинами СОЇА з різними концентраціями СоОоЇА. Розчини СоЇА змішували зі штучним раціоном з одержанням кінцевих концентрацій від 0,6 до 100 мг/мл.

Статус Висппега у зразках попелиць оцінювали за допомогою ПЛР. Дорослих попелиць із груп негативного контролю та обробки фагом спочатку піддавали поверхневій стерилізації 70 95 етанолом протягом 1 хв., 10 95 відбілювачем протягом 1 хв. і трьома промиваннями надчистою водою протягом 1 хв. Загальну ДНК екстрагували з кожної особини (все тіло) за допомогою набору для виділення ДНК комах (ОМЕСА, Віо-ек) відповідно до протоколу виробника.

Праймери для Висппега, прямий праймер 5-СЧ4ТОоСсОаСТСАТСАСАТОС-3 (ЗЕО ІО МО: 233) та зворотний праймер 5-ГПОоСатстТатАТТАТСТОСТ-3' (ЗЕО ІЮ МО: 234), розробляли на основі послідовностей 235-55 "КМА, одержаних із геному Висппега (номер доступу: зСА 000009605.1) (Зпідепори сеї аї!., Маште 200:407, 81-86) з використанням програмного забезпечення Ргітег 5.0 (Ріїте/-Е Ц., Плімут, Велика Британія). Цикли ПЛР-ампліфікації включали початковий етап денатурації за 95 "С протягом 5 хв., 35 циклів за 95 "С протягом 30 с, за 55 "С протягом 30 с та за 72"С протягом 60 с та кінцевий етап елонгації протягом 10 хв. за 7270. Продукти ампліфікації з оброблених рифампіцином і контрольних зразків аналізували на 1 95 агарозних гелях, забарвлених за допомогою З5УВК бЗаїє, та візуалізували з використанням системи візуалізації. Попелиці, оброблені СоїА, демонстрували зниження експресії специфічних для

Висппега генів.

Показники виживаності попелиць, оброблених специфічним щодо Висппега бактеріоцином

СОІА, порівнювали з попелицями, обробленими негативним контролем. Показники виживаності попелиць, оброблених специфічним щодо Висппега бактеріоцином СоїЇА, знижувалися порівняно з попелицями, обробленими контролем.

Приклад 10. Обробка попелиць розчинами рифампіцину

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність попелиць за допомогою обробки їх рифампіцином, антибіотиком вузького спектра дії, який інгібує ДНК- залежний синтез РНК шляхом інгібування бактеріальної РНК-полімерази. Даний приклад демонструє, що вплив рифампіцину на попелиць опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо попелиць, які є чутливими до рифампіцину. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега.

Схема терапії

Розчини антибіотика складали при 0 (негативний контроль), 1, 10 або 50 мкг/мл рифампіцину в 10 мл стерильної води з 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами.

Схема експерименту

Для підготовки до обробки попелиць вирощували в лабораторних умовах і середовищі. У кімнаті з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла; 6025 95 КН; 20:22 "С) рослини кінських бобів вирощували в суміші вермікуліту і перліту при 24 "С з 16 год. світла й 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях другого і третього періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розподіляли за видами обробки таким чином, що для кожного виду обробки отримували приблизно те саме число особин з кожної з рослин колекції.

Розчини рифампіцину одержували шляхом розчинення рифампіцину (ЗІСМА-АГОВІСН, 557303) у стерильній воді з 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами. Лунки 96-лункового планшета заповнювали 200 мкл штучного раціону для попелиць (Ребмау еї аї., Сападіап доигпаї! ої 2ооіоду 66 (11):2449-2453, 1988) і планшет закривали парафільмом для одержання їстівного саше. Штучний раціон змішували або зі стерильною водою та 0,5 95 сахарозою та незамінними

Зо амінокислотами як негативним контролем, або з розчином рифампіцину з однією з концентрацій рифампіцину. Розчини рифампіцину змішували зі штучним раціоном з одержанням кінцевих концентрацій антибіотика від 1 до 50 мкг/мл.

Для кожної повторності обробки 30-50 попелиць на стадіях другого і третього періодів розвитку поміщали окремо в лунки 9б-лункового планшета і планшет з їстівним саше перевертали над ними, що дозволяло комахам живитися через парафільм і залишатися обмеженими окремими лунками. Експериментальних попелиць утримували за тих же самих умов середовища, що й колонії попелиць. Після того, як попелиць вигодовували протягом 24 год., їстівне саше заміняли новим, що містить стерильний штучний раціон, і нове стерильне саше надавали кожні 24 год. протягом чотирьох днів. Коли саше заміняли, попелиць також перевіряли стосовно смертності. Попелицю вважали мертвою, якщо вона ставала коричневою або розташовувалася на дні лунки і не рухалася під час спостереження. Якщо попелиця перебувала на парафільмі їстівного саше, але не рухалася, вона вважалася такою, що годується та є живою.

Статус Висппега у зразках попелиць оцінювали за допомогою ПЛР. Загальну ДНК виділяли з контрольних (не оброблених рифампіцином) і оброблених рифампіцином особин за допомогою набору для виділення ДНК комах (ОМЕСА, Віо-ек) відповідно до протоколу виробника.

Праймери для Висппега, прямий праймер 5-СЧ4ТОоСсОаСТСАТСАСАТОС-3 (ЗЕО ІО МО: 233) та зворотний праймер 5-ГПОоСатстТатАТТАТСТОСТ-3' (ЗЕО ІЮО МО: 234), розробляли на основі послідовностей 235-55 "КМА, одержаних із геному Висппега (номер доступу: СА 000009605.1) (Зпідепори сеї аї!., Майте 407:81-86, 2000) із використанням програмного забезпечення Ргітег 5.0 (Ріїте/-Е Ц., Плімут, Велика Британія). Цикли ПЛР-ампліфікації включали початковий етап денатурації за 95 "С протягом 5 хв., 35 циклів за 95 "С протягом 30 с, за 55 "С протягом 30 с та за 72"С протягом 60 с та кінцевий етап елонгації протягом 10 хв. за 72 "С. Продукти ампліфікації з оброблених рифампіцином і контрольних зразків аналізували на 1 95 агарозних гелях, забарвлених за допомогою ЗУВК Заїє, та візуалізували з використанням системи візуалізації. Попелиці, оброблені рифампіцином, демонстрували зниження експресії специфічних для Висппега генів.

Показники виживаності попелиць, оброблених розчином рифампіцину, порівнювали з попелицями, обробленими негативним контролем. Показники виживаності попелиць, бо оброблених розчином рифампіцину, знижувалися порівняно з контролем.

Приклад 11. Високопродуктивний скринінг (НТ5) щодо молекул, що цілеспрямовано впливають на Висппега

Даний приклад демонструє ідентифікацію молекул, які цілеспрямовано впливають на

Висппега.

Схема експерименту Для НТ5 для ідентифікації інгібіторів цільових бактеріальних штамів

Висппега використовували зброджування сахарози в середовищі РН-ММ5ис (Утеї!е-і екі еї аї.,

РіГо5 ОМЕ 7 (2)хе31307, 2012) для зниження рН середовища. Індикатори рН у середовищі забезпечували спектрофотометричний контроль підкислення середовища за зміною поглинання за 615 нм (Аб15). Цільовий бактеріальний штам Висппега, одержаний із вихідної культури в гліцерині, висівали на чашку з І В-агаром та інкубували протягом ночі за 37 "С. Петлю для посіву з клітинами збирали, промивали три рази за допомогою РВ5 та потім ресуспендували в РВ5 за оптичної густини 0,015.

Для НТ5 10 мкл суспензій цих бактеріальних клітин розділяли на аліквоти у лунки 384- лункового планшета, що містить 30 мкг середовища рН-Мітпзис і 100 нл фракції досліджуваної сполуки з бібліотеки природних продуктів, що містить попередньо фракціоновані екстракти (39314 екстрактів, розміщених в 384-лункових планшетах) з мікробних джерел, таких як ендофіти грибів, ендофіти бактерій, грунтові бактерії та морські бактерії, описані в (Уптеїе-Іі екі еї аі., РГо5 ОМЕ 7 (2):е31307, 2012). Для кожного аналізу АбЄ15 вимірювали після інкубування за кімнатної температури через 6 год. і 20 год. Цей етап є автоматизованим і валідованим у форматі 384-лункового планшета з використанням спектрофотометра для багатолункових планшетів ЕпмМізіспТМ для дослідження всіх фракцій з бібліотеки. Фракції, які демонстрували вповільнене підкислення середовища за зброджування сахарози й інгібовуваний клітинний ріст, вибирали для подальшого очищення й ідентифікації.

Приклад 12. Виділення й ідентифікація молекул, специфічних щодо Висппега

Даний приклад демонструє виділення й ідентифікацію ізоляту з фракції, описаної в прикладі 11, який блокує зброджування сахарози й інгібує клітинний ріст Висппега.

Схема експерименту

Фракцію, описану в прикладі 11, ресуспендували в 90 95 суміші вода/метанол та пропускали через колонку С18 5РЕ з одержанням фракції І. Потім колонку промивали метанолом з

Зо одержанням фракції ІІ. Фракцію ІІ відокремлювали за допомогою системи для НРІ С серії Адіїепі 1100 на колонці для препаративної хроматографії з фенілгексилом (Рпепотепех, І ипа, 25 см, 610 мм, розмір частинок 5 мм) з використанням буфера для елюювання із сумішшю 20 95 ацетонітрил/вода з 0,1 956 мурашиної кислоти за швидкості потоку 2 мл/хв. протягом 50 хвилин.

Це приводило до утворення численних сполук із різними значеннями часу елюювання. Спектри для кожної сполуки одержували на мас-спектрометрі АІрпа ЕТ-ІК (ВгиКег), спектрофотометрі для УФ/видимої ділянки спектра ШИгозрестМ 5300 рго (Атегзпат Віозсіепсе5) і ядерно- магнітному резонансному спектрометрі ІМОМА на 600 МГц (Магіап).

Приклад 13. Обробка попелиць розчином молекули, специфічної щодо Висппега

Даний приклад демонструє здатність знищувати або знижувати пристосовуваність попелиць за допомогою обробки їх однією зі сполук, ідентифікованих у прикладі 12, завдяки модулюванню популяцій бактерій, ендогенних щодо попелиць, які є чутливими до цієї сполуки. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега.

Схема терапії

Кожну сполуку із прикладу 12 складали при 0 (негативний контроль), 0,6, 1, 20 або 80 мкг/мл в 10 мл стерильної води з 0,5 95 сахарози і незамінними амінокислотами.

Схема експерименту

Лунки 96-лункового планшета заповнювали 200 мкл штучного раціону для попелиць (Гермау еї а)І., Сападіап доштаї ої 7ооіоду 66 (11):2449-2453, 1988) і планшет закривали парафільмом для одержання їстівного саше. Штучний раціон змішували або зі стерильною водою з 0,595 сахарозою та незамінними амінокислотами як негативним контролем, або з розчинами з бо різними концентраціями сполуки.

Статус Висппега у зразках попелиць оцінювали за допомогою ПЛР. Попелиць із груп негативного контролю та обробки сполукою 1 спочатку піддавали поверхневій стерилізації 70 95 етанолом протягом 1 хв., 1095 відбілювачем протягом 1 хв. та треома промиваннями надчистою водою протягом 1 хв. Загальну ДНК екстрагували з кожної особини (все тіло) за допомогою набору для виділення ДНК комах (ОМЕСА, Віо-ек) відповідно до протоколу виробника. Праймери для Висппега, прямий праймер 5-СсТоцпИасСтТСАТСАСАТОСОС-3 (5ЕО ІЮ

МО: 233) та зворотний праймер 5-ТТССаТтСстТатАТТАТСТОСТ-3' (5ЕО ІЮ МО: 234), розробляли на основі послідовностей 235-55 ГКЕМА, одержаних із геному Висппега (номер доступу: асА О000009605.1) (ЗНпідепори єї аї., Маїшгте 407:81-86, 2000) із використанням програмного забезпечення Ргітег 5.0 (Ргітег-Е Ца., Плімут, Велика Британія). Цикли ПЛР-ампліфікації включали початковий етап денатурації за 95 "С протягом 5 хв., 35 циклів за 95 "С протягом З0 с, за 55 "С протягом 30 с та за 72 "С протягом 60 с та кінцевий етап елонгації протягом 10 хв. за 7276. Продукти ампліфікації з оброблених сполукою 1 та контрольних зразків аналізували на 1 95 агарозних гелях, забарвлених за допомогою ЗУВК заге, та візуалізували з використанням системи візуалізації. Зниження експресії генів, специфічних для Висппега, указувало на протимікробну активність сполуки 1.

Показник виживаності попелиць, оброблених сполукою, порівнювали з попелицями, обробленими негативним контролем. Передбачається, що зниження показника виживаності

Зо попелиць, оброблених сполукою, указувало на протимікробну активність сполуки.

Приклад 14. Комахи, оброблені розчином антибіотика

Даний приклад демонструє обробку попелиць рифампіцином, антибіотиком вузького спектра дії, який інгібує ДНК-залежний синтез РНК шляхом інгібування бактеріальної РНК-полімерази.

Даний приклад демонструє, що вплив рифампіцину на модельний вид комах, попелиць, був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до рифампіцину. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега.

Схема терапії

Розчин антибіотика складали згідно зі способом доставки наступним чином (фіг. ТА-1С2). 1) Через рослини: з 0 (негативний контроль) або 100 мкг/мл рифампіцину, складеного в штучному раціоні (згідно АКеу апа Веск, 1971; див. розділ Схема експерименту) з незамінними амінокислотами і без них (2 мг/мл гістидину, 2 мг/мл ізолейцину, 2 мг/мл лейцину, 2 мг/мл лізину, 1 мг/мл метіоніну, 1,62 мг/мл фенілаланіну, 2 мг/мл треоніну, 1 мг/мл триптофану і 2 мг/мл валіну). 2) Покриття листя: 100 мкл 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево-активного розчинника Зім/еї Ї/-77 у воді (негативний контроль) або 100 мкл 50 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника, застосовували безпосередньо щодо поверхні листів і залишали висихати. 3) Мікроїн'єкція: розчини для ін'єкцій являли собою або 0,025 95 неіоногенний кремнійорганічний поверхнево-активний розчинник 5іЇм'єї І -77 у воді (негативний контроль), або 50 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника. 4) Місцева доставка: 100 мкл 0,025 95 неіїоногенного кремнійорганічного поверхнево- активного розчинника 5іїм'єї І-77 (негативний контроль) або 50 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника, розпилювали за допомогою аерозольного балончика на 30 мл. 5) Спосіб А ін'єкції в листя - перфузія в листя й розрізання листя: у листя ін'єктували приблизно 1 мл 50 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником або приблизно 1 мл негативного контролю з водою й харчовим барвником. Листя нарізали на квадратні шматочки розміром 2 х 2 см і попелиць поміщали на шматочки листя. 6) Перфузія в листя та доставка через рослину: у листя ін'єктгували приблизно 1 мл 100 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником або приблизно 1 мл негативного контролю з бо водою і харчовим барвником. Черешок листя, у який була зроблена ін'єкція, потім поміщали в пробірку Еррепдогі з 1 мл 100 мкг/мл рифампіцину з водою і харчовим барвником або 1 мл негативного контролю, що містить тільки воду і харчовий барвник. 7) Комбінований спосіб доставки: а) місцева доставка попелицям і рослинам: шляхом розпилення як на попелиць, так і на рослини 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево-активного розчинника Зіїм'еї І-77 у воді (негативний контроль) або 100 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника, за допомогою аерозольного балончика на 30 мл, Б) доставка через рослину: тільки вода (негативний контроль) або 100 мкг/мл рифампіцину, складеного у воді.

Доставка через рослини - схема експерименту

Попелиць (лінія І ЗК-1, Асупповзірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів (боби

Мгота місіа від допппу5 5еїесієйд бееав5) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:22 7С). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24"С за 16бгод. світла та 8год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5- 7 днів. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на З різні групи обробки: 1) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот, 2) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 100 мкг/мл рифампіцину і 3) штучний раціон з незамінними амінокислотами і 100 мкг/мл рифампіцину. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Використовуваний штучний раціон готували, як описано раніше (АКеу апа ВескК, 1971

Сопііписи5 Кеагіпд ої Ше Реа Арпід, Асугіпозірпоп різит, оп а Ноїїдіс Оіе), з незамінними амінокислотами й без них (2 мг/мл гістидину, 2 мг/мл ізолейцину, 2 мг/мл лейцину, 2 мг/мл лізину, 1 мг/мл метіоніну, 1,62 мг/мл фенілаланіну, 2 мг/мл треоніну, 1 мг/мл триптофану й 2 мг/мл валіну), за винятком того, що в жодному випадку раціон не включав гомосерин або бета- аланілтирозин. Значення рН раціонів доводили до 7, за допомогою КОН і раціони стерилізували фільтрацією за допомогою фільтра з розміром пор 0,22 мкм і зберігали при 4 "С протягом короткого строку («7 днів) або при -80 "С протягом тривалого строку.

Зо Вихідні розчини рифампіцину (ТоКуо Спетіса! Іпаивігу, СТО) одержували в концентрації 25 мг/мл у метанолі, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Для обробок (див. розділ Схема терапії) придатну кількість вихідного розчину додавали до штучного раціону з незамінними амінокислотами або без них з одержанням кінцевої концентрації 100 мкг/мл рифампіцину. Раціон потім поміщали в пробірку

Еррепдогі на 1,5 мл із черешком та листком кінських бобів та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування штучним раціоном потім поміщали в глибоку чашку

Петрі (Різпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 33 попелиці. Системи вигодовування штучним раціоном заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли з глибокої чашки Петрі, у якій містилася система вигодовування штучним раціоном, у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту. При досягненні попелицями стадії 4-го періоду розвитку їм надавали їхні власні штучні системи вигодовування в глибокій чашці Петрі для того, щоб можна було контролювати плідність, як тільки вони доходили зрілого віку.

У випадку дорослих попелиць нових німф рахували щодня і потім вилучали. Наприкінці експериментів плідність визначали у вигляді середнього числа потомків, що з'являлися щодня після досягнення попелицями зрілого віку. Знімки попелиць одержували протягом усього експерименту для оцінювання відмінностей у розмірах між групами обробки.

Через 7 днів після обробки ДНК екстрагували з декількох попелиць з кожної групи обробки.

Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТСАТСОТОТОСТТОТТААО; ЗЕБО ІЮ МО: 238) та Висп огоЕЗ 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ 60 МО: 240) та АРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСсАатТАСАСТОС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Снопа апа Могап,

2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ФРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСЕ аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (ТПепто

Еівпег Зсієпійіс, Оцапісішаіо Оезідп апа Апаїувів).

Обробка антибіотиками затримує і зупиняє прогресування розвитку попелиць

Попелиць І 5К-1 на стадії 1-го періоду розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі Схема експерименту (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через б днів (фіг. 2А). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених рифампіцином, та через 6 днів після обробки більшість попелиць не дозрівали далі, ніж до стадії 3-го періоду розвитку, та навіть через 12 днів їхній розмір зазнав істотного негативного впливу (фіг. 2А-20).

На відміну від цього, попелиці, оброблені штучним раціоном із рифампіцином із додаванням незамінних амінокислот, розвивалися швидше і досягали стадій періодів розвитку більш пізнього віку порівняно з попелицями, обробленими тільки рифампіцином, однак не так швидко, як попелиці, оброблені штучним раціоном без незамінних амінокислот (фіг. 2А-2С). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином погіршувала розвиток попелиць. Додавання незамінних амінокислот назад частково усувало цей дефект розвитку.

Обробка антибіотиками підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Більшість попелиць, оброблених тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, були живими через 5 днів після обробки (фіг. 3). Через 5 днів попелиці починали поступово гинути, а деякі виживали після закінчення 13 днів після обробки.

На відміну від цього, попелиці, оброблені рифампіцином без незамінних амінокислот, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, оброблені тільки штучним раціоном (р«0,00001). Попелиці, оброблені рифампіцином, починали гинути через 1 день після обробки, і

Зо всі попелиці гинули внаслідок обробки через 9 днів. Попелиці, оброблені як рифампіцином, так і незамінними амінокислотами, виживали довше, ніж попелиці, оброблені тільки рифампіцином (р-0,017). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином негативно впливала на виживаність попелиць.

Обробка антибіотиками знижувала інтенсивність розмноження попелиць

У ході обробок також відстежували плідність попелиць. Через 7 і 8 днів після обробки більшість дорослих попелиць, оброблених штучним раціоном без незамінних амінокислот, починали розмножуватися. Середнє число потомків, що з'являлися щодня після досягнення зрілого віку попелицями, обробленими штучним раціоном без додавання незамінних амінокислот, становило приблизно 4 (фіг. 4). На відміну від цього, попелиці, оброблені рифампіцином з незамінними амінокислотами або без них, були нездатні досягати зрілого віку й утворювати потомство. Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином приводила до втрати здатності до розмноження в попелиць.

Обробка антибіотиками знижувала кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводив рифампіцин до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 7 днів після обробки і для визначення числа копій Висппега/попелиця проводили ДРСК. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені рифампіцином, мали в я 4 рази менше копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 5), що вказувало на те, що обробка рифампіцином знижувала рівні Висппега.

Доставка шляхом покриття листя - схема експерименту

Вихідний розчин рифампіцину додавали до 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево-активного розчинника зіїм'еї Ї-77 з одержанням кінцевої концентрації 50 мкг/мл рифампіцину. Попелиць (лінія емАЗСО, Асугппозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів, як описано в попередньому прикладі. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: листя обприскували 1) негативним контролем (тільки розчином розчинника), 2) 50 мкг/мл рифампіцину в розчиннику. Розчини поглиналися шматочком листу кінських бобів розміром 2 х 2 см.

Для кожної групи обробки одержували приблизно однакове число особин з кожної з рослин бо колекції. Для кожної обробки на кожний лист поміщали 20 попелиць. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли у випадку їх виявлення. Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й період розвитку і 5К, що позначає 5й період розвитку, здатний до розмноження) визначали щодня протягом усього експерименту. Знімки попелиць одержували протягом усього експерименту для оцінювання відмінностей у розмірах між групами обробки.

Через 6 днів після обробки екстрагували ДНК з декількох попелиць з кожної групи обробки і для кількісної оцінки рівнів Висппега проводили ДРСЕ, як описано в попередньому прикладі.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою покриття листя, затримує і зупиняє прогресування розвитку попелиць

Попелиць І 5К-1 на стадії 1го періоду розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту", що описано в даному документі. Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, поміщені на покрите листя, оброблене контролем, починали досягати зрілого віку (стадія 5го періоду розвитку, здатного до розмноження; 5К) приблизно через б днів (фіг. бА). Розвиток затримувався в попелиць, поміщених на листя, покрите рифампіцином, і через 6 днів після обробки більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії Зго періоду розвитку, і навіть через 12 днів їх розмір зазнавав істотного негативного впливу (фіг. бА і 6В).

Ці дані вказують на те, що покриття листя рифампіцином погіршувало розвиток попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою покриття листя, підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали під час обробок шляхом покриття листя.

Попелиці, поміщені на листя, покрите рифампіцином, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, поміщені на листя, покрите контролем (фіг. 7). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою покриття листя, негативно впливала на виживаність попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою покриття листя, знижувала кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється за допомогою покриття листя, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність

Зо попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 6 днів після обробки, і для визначення числа копій Висппега/попелиця проводили ФДРСК.

Попелиці, поміщені на листя, покрите контролем, мали високі співвідношення числа копій

ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, поміщені на листя, оброблене рифампіцином, характеризувалися істотним зниженням числа копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 8), що вказувало на те, що обробка шляхом покриття листя рифампіцином усувала ендосимбіотичні Висппега.

Доставка шляхом мікроін'єкції - схема експерименту

Мікроін'єкцію здійснювали за допомогою автоматичного нанолітрового ін'єктора Мапо)|еї ПІ з висувною голкою з боросилікатного скла власного виготовлення (Огиттопа 5сіепійіс; Мо за кат. 3-000-203-5/ХІ). Попелиць (лінія еМмАБСО, Асупйпозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів, як описано в попередньому прикладі. Попелиць переносили за допомогою малярського пензля в трубну систему, приєднану до вакууму (фіг. 1С). Місце ін'єкції знаходилось у вентральній частині грудей попелиці. Розчини для ін'єкцій являли собою або 0,025 95 кремнійорганічний поверхнево-активний розчинник 5іїмеї І-77 (І ейіе Зеейд5, Мо за кат.

МІ5Б-01) у воді (негативний контроль), або 50 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника. Об'єм ін'єкції становив 10 нл для німфи і 20 нл для дорослої особини (в обох випадках за швидкості 2 нл/с). Для кожної групи обробки було приблизно однакове число особин, що отримали ін'єкцію, з кожної з рослин колекції. Після ін'єкції попелиць випускали в чашку Петрі з листям кінських бобів, черешки якого знаходились в 2 95 агарі.

Обробка антибіотиками шляхом мікроін'єкції знижувала кількість Висппега у попелиць

Для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється за допомогою мікроін'єкції, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 4 дні після обробки і проводили ДРСЕ, як описано в попередньому прикладі, для визначення числа копій Висппега/попелиця.

Попелиці, що одержали мікроін'єкцію негативного контролю, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, німфи їі дорослі особини попелиць, що одержали мікроін'єкцію рифампіцину, характеризувалися істотним зниженням числа копій

ДНК Висппега/попелиця (фіг. 9), що вказувало на те, що обробка шляхом мікроін'єкції бо рифампіцину зменшувала присутність ендосимбіотичних Висппега.

Місцева доставка - схема експерименту

Попелиць (лінія І 5-1, Асугіпозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів, як описано в попередньому прикладі. Аерозольні балончики наповнювали 2 мл контролю (0,025 95

Зіїмеї 1-77) або розчинами рифампіцину (50 мкг/мл у розчині розчинника). Попелиць (число - 10) переносили на дно чистої чашки Петрі і збирали на краю чашки Петрі за допомогою малярського пензля. Потім попелиць розділяли на дві когорти й обприскували «100 мкл або контрольного розчину, або розчину рифампіцину. Безпосередньо після розпилення чашку Петрі закривали кришкою. Через п'ять хвилин після розпилення попелиць випускали в чашку Петрі з листям кінських бобів, при цьому черешки знаходилися у 2 95 агарі.

Обробка антибіотиками шляхом місцевої доставки знижувала кількість Висппега у попелиць

Для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється за допомогою місцевої доставки, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через З дні після обробки і проводили ДРСЕ, як описано в попередньому прикладі, для визначення числа копій Висппега/попелиця.

Попелиці, обприскані контрольним розчином, мали високі співвідношення числа копій ДНК

Висппега/лопелиця. На відміну від цього, попелиці, обприскані рифампіцином, характеризувалися істотним зниженням числа копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 10), що вказувало на те, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою місцевої обробки, знижувала присутність ендосимбіотичних Висппега.

Спосіб А ін'єкції в листя - перфузія в листя й розрізання листя

Схема експерименту

Попелиць І ЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота »місіа від ЧЩУойпппуб беїесієій беей5з) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6б0ж-5 95 КН; 25:52 750).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16бгод. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали

Зо розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (лист, у який була зроблена ін'єкція води із синім харчовим барвником) і 2) лист, у який була зроблена ін'єкція 50 мкг/мл рифампіцину у воді із синім харчовим барвником. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції. Для обробки вихідний розчин рифампіцину (25 мг/мл в 100 95 метанолі) розводили до 50 мкг/мл у воді із синім харчовим барвником. Розчин потім поміщали в пробірку Еррепоогі на 1,5 мл із черешком кінського бобу, підданим перфузії розчинами, і отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку

Петрі (Різпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини. Для кожної обробки на кожний лист поміщали 74-81 попелицю. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення. Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (5-й, здатний до розмноження) період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою способу А ін'єкції в листя, затримує і зупиняє прогресування розвитку попелиць

Попелиць І ЗК-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Перфузія в листя й розрізання листя - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені водою з харчовим барвником, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через б днів (фіг. 11). Розвиток затримувався в попелиць, що вигодовують на листі, у яке була зроблена ін'єкція рифампіцину, а через 6 днів після обробки більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії 4-го періоду розвитку. Навіть через 8 днів розвиток попелиць, що вигодовують на листі, у яке була зроблена ін'єкція рифампіцину, суттєво затримувалося (фіг. 11). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином шляхом перфузії в листя погіршувала розвиток попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою способу А ін'єкції в листя, підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході експериментів з перфузії в листя. бо Попелиці, поміщені на листя, у яке була зроблена ін'єкція рифампіцину, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, поміщені на листя, у яке була зроблена ін'єкція контрольного розчину (фіг. 12). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою ін'єкції в листя, негативно впливала на виживаність попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою способу А ін'єкції в листя, приводить до знижених рівнів Висппега

Для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється шляхом перфузії в листя, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 8 днів після обробки й проводили ДРСЕ, як описано в попередньому прикладі, для визначення числа копій Висппега/попелиця.

Попелиці, яких вигодовують на листі, у яке була зроблена ін'єкція контрольного розчину, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, яких вигодовують на листі, у яке була зроблена ін'єкція рифампіцину, характеризувалися зниженням числа копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 13), що вказувало на те, що обробка рифампіцином, що доставляються за допомогою ін'єкції в листя, зменшувала присутність ендосимбіотичних Висппега, як показано в попередніх прикладах, і приводила до зниження пристосовуваності.

Перфузія в листя й доставка через рослину

Схема експерименту

Попелиць ГЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота »місіа від ЧЩУойпппуб беїесієій беей5з) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:25).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та 8 год. темряви.

Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) попелиці, поміщені на листя, у яке була зроблена ін'єкція розчину негативного

Зо контролю (вода й харчовий барвник), і поміщені в пробірку Еррепдогї з розчином негативного контролю, або 2) попелиці, поміщені на листя, у яке була зроблена ін'єкція 100 мкг/мл рифампіцину у воді з харчовим барвником, і поміщені в пробірку Еррепадогії зі 100 мкг/мл рифампіцину у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Для обробки вихідний розчин рифампіцину (25 мг/мл в 100 95 метанолі) розводили до 100 мкг/мл у воді із синім харчовим барвником. Розчин потім поміщали в пробірку Еррепабогі на 1,5 мл із черешком кінського бобу з листком, підданим також перфузії розчинами, та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 49-50 попелиць. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (5-й, здатний до розмноження) період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою ін'єкції в листя й доставки через рослину, затримує та зупиняє прогресування розвитку попелиць

Попелиць І 5К-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Перфузія в листя й доставка через рослину - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені контрольним розчином (тільки вода з харчовим барвником), починали досягати зрілого віку (стадія 5го періоду розвитку) приблизно через 6 днів (фіг. 14).

Розвиток затримувався в попелиць, оброблених рифампіцином, а через б днів після обробки більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії 3-го періоду розвитку. Навіть через 8 днів їх розвиток істотно затримувався (фіг. 14). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином шляхом перфузії в листя погіршувала розвиток попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою ін'єкції в листя й доставки через рослину, підвищувала смертність попелиць

Показники виживаності попелиць також вимірювали в ході експериментів, у яких попелиць 60 обробляли або контрольним розчином, або рифампіцином, що доставляються шляхом перфузії в листя й через рослину. Попелиці, яких вигодовують на листі, підданому перфузії та обробці рифампіцином, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, яких вигодовують на листі, підданому перфузії та обробці контрольним розчином (фіг. 15). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином, що доставляється через перфузію в листя й через рослину, негативно впливала на виживаність попелиць.

Обробка антибіотиками, що доставляються за допомогою ін'єкції в листя й через рослину, приводить до знижених рівнів Висппега

Для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється шляхом перфузії в листя й через рослину, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 6 і 8 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця, як описано в попередніх прикладах.

Попелиці, яких вигодовують на листі, у яке була зроблена ін'єкція контрольного розчину і яке було їм оброблене, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, яких вигодовують на листі, підданому перфузії та обробленому рифампіцином, характеризувалися статистично значущим зниженням числа копій ДНК

Висппега/попелиць в обидва моменту часу (р-0,0037 та р-0,0025, через 6 та 8 днів відповідно) (фіг. 16А і 168), що вказувало на те, що обробка рифампіцином, що доставляється шляхом перфузії в листя та через рослину, зменшувала присутність ендосимбіотичних Висппега та, як показано в попередніх прикладах, викликала зниження пристосовуваності.

Комбінований спосіб доставки

Схема експерименту

Попелиць І ЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота »місіа від ЧЩУойпппуб беїесієій беей5з) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; бОж5 бо КН; 2052 750).

Зо розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів.

Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) обробка розчином 5ім'єї-І77 або контрольним розчином води або 2) обробка рифампіцином, розведеним в 5ім'єї І-77 або воді.

Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції. Комбінація способів доставки була наступною: а) місцева доставка попелицям і рослинам шляхом розпилення 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево-активного розчинника 5іїм'єї І-77 (негативний контроль) або 100 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника, за допомогою аерозольного балончика на 30 мл і 5) доставка через рослину води (негативного контролю) або 100 мкг/мл рифампіцину, складеного у воді. Для обробки вихідний розчин рифампіцину (25 мг/мл в 100 95 метанолі) розводили до 100 мкг/мл в зімеї І-77 (для місцевої обробки попелиць і покриття листу) або воді (для доставки через рослину). Розчин потім поміщали в пробірку Ерреподогі на 1,5 мл із черешком кінського бобу з листком, підданим також перфузії розчинами, та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рієпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 76-80 попелиць. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Комбінована обробка антибіотиками затримує розвиток попелиць

Попелиць І ЗК-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Комбінований спосіб доставки - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені контролем, починали досягати зрілого віку (стадія

Бго періоду розвитку) приблизно через б днів (фіг. 17). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених рифампіцином, і через 6 днів після обробки більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії Зго періоду розвитку, і навіть через 7 днів їх розвиток істотно затримувався (фіг. 17). Ці дані вказують на те, що комбінація обробок рифампіцином погіршувала розвиток бо попелиць.

Комбінована обробка антибіотиками приводить до підвищеної смертності попелиць

Показники виживаності попелиць також вимірювали під час експериментів, коли попелиць обробляли за допомогою комбінації обробок рифампіцином. Попелиці, оброблені рифампіцином, характеризувалися дещо більш низькими показниками виживаності, ніж попелиці, оброблені контрольними розчинами (фіг. 18). Ці дані вказують на те, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою комбінації обробок, негативно впливала на виживаність попелиць.

Комбінована обробка антибіотиками знижувала рівні Висппега

Для дослідження того, чи приводив рифампіцин, що доставляється за допомогою комбінації способів, до втрати Виспйпега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 7 днів після обробки й проводили ДРСК, як описано в попередньому прикладі, для визначення числа копій Висппега/попелиць.

Попелиці, оброблені контрольними розчинами, мали високі співвідношення числа копій ДНК

Висппега/лопелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені рифампіцином, характеризувалися статистично значущим і істотним зниженням числа копій ДНК

Висппега/попелиця (р-0,227; фіг. 19), що вказувало на те, що обробка рифампіцином, що доставляється за допомогою комбінації способів, зменшувала присутність ендосимбіотичних

Висппега, і, як показано в попередніх прикладах, це приводило до зниження пристосовуваності.

У сукупності ці дані, описані в попередніх прикладах, демонстрували здатність знищувати попелиць та зменшувати їхні інтенсивність розвитку, здатність до розмноження, тривалість життя та ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх антибіотиком за допомогою декількох шляхів доставки.

Приклад 15. Комахи, оброблені природним протимікробним полісахаридом

Даний приклад демонструє обробку попелиць хітозаном, природним катіонним лінійним полісахаридом, що складається з ланок деацетильованого бета-1,4-О-глюкозаміну, який є похідною хітину. Хітин являє собою структурний елемент екзоскелету комах, ракоподібних (головним чином креветок і крабів) і клітинних стінок грибів, а також другим найпоширенішим природним полісахаридом після целюлози. Даний приклад демонструє, що вплив хітозану на

Зо комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до хітозану. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпіаісоїа.

Схема терапії

Розчин хітозану складали для використання в комбінації перфузії в листя й доставки через рослини (фіг. 20). Контрольний розчин ін'єктували в листя з використанням води ж синього харчового барвника й води в пробірці. Розчин для обробки за допомогою 300 мкг/мл хітозану у воді (низькомолекулярного) вводили шляхом ін'єкції в листя (із синім харчовим барвником) і через рослину (у пробірці Еррепаогі).

Перфузія в листя й доставка через рослини - схема експерименту

Попелиць І ЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгопта »місіа від допйппуб5 Зеїесіеій бБеед5) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:25).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16бгод. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) розчин для обробки, що містить 300 мкг/мл хітозану у воді (низькомолекулярного). Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Вихідний розчин хітозану (Зідта, Мо за кат. 448869-5005) одержували в концентрації 1 95 в оцтовій кислоті, стерилізували автоклавуванням та зберігали за 4 "С. Для обробки (див. розділ

Схема терапії) придатну кількість вихідного розчину розводили водою з одержанням кінцевої концентрації хітозану для обробки. Розчин потім поміщали в пробірку Еррепаогі на 1,5 мл із черешком кінських бобу із листком, підданим також перфузії розчинами, та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 50-51 попелицю. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували бо виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Через 8 днів після обробки ДНК екстрагували з декількох попелиць з кожної групи обробки.

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО І

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ФРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Еівпег Зсієпійіс, Оцапісшаіо Оезідп апа Апаїувів).

Мала місце негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки природним протимікробним полісахаридом

Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки негативним контролем, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через 6 днів (фіг. 21). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених розчином хітозану, а через 6 днів після обробки хітозаном більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії 4-го періоду розвитку. Ці дані вказують на те, що обробка хітозаном затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць.

Зо Обробка хітозаном підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Більшість попелиць, оброблених тільки контролем, були живими через З дні після обробки (фіг. 22). Через 4 дні попелиці починали поступово гинути, а деякі виживали після закінчення 7 днів після обробки.

На відміну від цього, попелиці, оброблені розчином хітозану, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, оброблені контролем. Ці дані вказують на те, що мало місце зниження виживаності за обробки природним протимікробним полісахаридом.

Обробка хітозаном знижувала кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка розчином хітозану до втрати

Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, ДНК екстрагували з попелиць у кожній групі обробки через 8 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/лпопелиця. Попелиці, оброблені тільки контролем, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені 300 мкг/мл хітозану у воді, мали в «5 разів менше копій ДНК Висппега/попелиць (фіг. 23), що вказувало на те, що обробка хітозаном знижувала рівні Висппега.

У сукупності ці дані, описані раніше, демонстрували здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні інтенсивність розвитку, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх природним протимікробним полісахаридом.

Приклад 16. Комахи, оброблені нізином, природним протимікробним пептидом

Даний приклад демонструє обробку попелиць природним поліциклічним антибактеріальним пептидом "широкого спектра дії", що продукується бактерією І асіососси5 Іасіїх, який широко використовується як харчовий консервант. Антибактеріальна активність нізину опосередкована його здатністю створювати пори в клітинній мембрані бактерій і переривати біосинтез бактеріальної клітинної стінки шляхом специфічної взаємодії з ліпідом Ії. Даний приклад демонструє, що негативний вплив нізину на пристосовуваність комах опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до нізину.

Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпіаісоїа.

Схема терапії

Нізин складали для використання в комбінації перфузії в листя й доставки через рослини.

Контрольний розчин (вода) або розчин для обробки (нізин) ін'єктували в лист і поміщали в пробірку Еррепабогі. Розчини для обробки складалися з 1,6 або 7 мг/мл нізину у воді.

Попелиць Асугіпозірпоп різит І ЗК-1 вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппу5 беїесієйд беєдвз) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 60:25 95 КН; 25:22 "С). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) обробка нізином у концентрації або 1,6, або 7 мг/мл нізину у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Для обробки (див. розділ "Схема терапії") розчин нізину (бідта, Мо продукту: М5764) готували в концентрації 1,6 або 7 мг/мл (вага/об'єм) у воді й стерилізували фільтрацією за допомогою шприцевого фільтра з розміром пор 0,22 мкм. Потім розчин ін'єктували в лист рослини і стебло рослини поміщали в пробірку Еррепоогї на 1,5 мл. Отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Ріхпег зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО87 5711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 56-59 попелиць. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (попелиці на 5-му періоді розвитку, здатні до розмноження) період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Через 8 днів після обробки ДНК екстрагували з попелиць, що залишалися, у кожній групі обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК

Зо екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107Е (СТОАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІО

Мала місце дозозалежна негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки нізином

Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені розчином негативного контролю (вода), починали досягати зрілого віку (стадії 5-го періоду розвитку) приблизно через 6 днів та здатності до розмноження (стадія 5К) через 7 днів (фіг. 24). Розвиток значно затримувався в попелиць, оброблених 7 мг/мл нізину. Попелиці, оброблені 7 мг/мл нізину, розвивалися тільки до стадії 2-го періоду розвитку через З дні, а через 6 днів усі попелиці в групі гинули (фіг. 24). Розвиток трохи затримувався в попелиць, оброблених більш низькою концентрацією нізину (1,6 мг/мл), і в кожний оцінюваний момент часу було більше менш розвинених попелиць порівняно з контрольними особинами, обробленими водою (фіг. 24). Ці дані вказують на те, що обробка нізином затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць, і ця затримка в розвитку залежала від дози нізину, що вводиться.

У той же час важливо зазначити, що обробка за допомогою 7 мг/мл нізину також впливала на стан здоров'я листя, використовуваного в аналізі. Незабаром після перфузії в лист 7 мг/мл нізину він починав буріти. Через два дні листя, в яке вводили 7 мг/мл, чорніло. Значущої відмінності в стані здоров'я листя, обробленого 1,6 мг/мл нізину, не спостерігалося.

Обробка нізином приводила до підвищеної смертності попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Приблизно 50 95 попелиць, оброблених тільки контролем, виживали після 8-денного експерименту (фіг. 25). На відміну від цього, виживаність була значуще меншою для попелиць, оброблених 7 мг/мл нізину (р-«0,0001, відповідно до логарифмічного рангового критерію Кокса-Мантеля), і всі попелиці в цій групі гинули внаслідок обробки через 6 днів (фіг. 25). Попелиці, оброблені більш низькою дозою нізину (1,6 мг/мл), мали більш високу смертність порівняно з попелицями, обробленими контролем, незважаючи на те, що відмінність не досягала статистичної значущості (р-0,0501, відповідно до логарифмічного рангового критерію Кокса-Мантеля). Ці дані вказують на те, що мало місце дозозалежне зниження виживаності за обробки нізином.

Обробка нізином приводила до зниження кількості Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка нізином до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 8 днів після обробки й проводили дДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки контролем, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені 1,6 мг/мл нізину, мали в «1,4 рази менше копій ДНК Висппега/попелиця через 8 днів після обробки (фіг. 26). У групі, обробленій 7 мг/мл нізину, не залишалося живих попелиць, і, таким чином, у цій групі не оцінювали число копій ДНК Висппега/попелиця. Ці дані вказують на те, що обробка нізином знижувала рівні Висппега.

У сукупності ці дані, описані раніше, демонструють здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні інтенсивність розвитку, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад, пристосовуваність, за допомогою обробки їх протимікробним пептидом нізином.

Приклад 17. У комах, оброблених левуліновою кислотою, знижується пристосовуваність комах

Даний приклад демонструє, що обробка попелиць левуліновою кислотою, кетокислотою, що продукується у результаті нагрівання вуглеводу, що містить гексозу (наприклад, деревини,

Зо крохмалю, пшениці, соломи або тростинного цукру), з додаванням розведеної мінеральної кислоти, знижує пристосовуваність комах. Левулінову кислоту раніше досліджували як протимікробний засіб проти Езспегіспіа сої ії ЗаІтопеїа під час виробництва м'яса (Сагрепіег еї аІ,, 2010, Меаї бсіеєпсе; Замаппап с. Нам/Ккіпе, 2014, Опімегейу ої Теппез5в6е Нопогв ТНевів).

Даний приклад демонструє, що вплив левулінової кислоти на комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комахи, яка була чутливою до левулінової кислоти. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпіаїісоїа.

Схема терапії

Левулінову кислоту складали для використання в комбінації перфузії в листя й доставки через рослини. Контрольний розчин ін'єктували в листя з використанням води і воду поміщали в пробірку Еррепаогї. Розчини для обробки, що містять 0,03 або 0,3 95 левулінової кислоти у воді, уводили за допомогою ін'єкції в листя й через рослину (у пробірці Еррепаогі).

Попелиць Асугіпозірпоп різит еМАЗСО вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від ЧХопппу5 Зеїесієй Зеед5) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 60:25 95 КН; 25:22 "С). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) розчин для обробки, що містить 0,03 або 0,3 95 левулінової кислоти у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Для обробки (див. розділ "Схема терапії") левулінову кислоту (Зідта, Мо продукту: М/262706) розводили до 0,03 або 0,3 95 у воді. Розчин потім поміщали в пробірку Еррепаогі на 1,5 мл із черешком кінського бобу з листком, підданим також перфузії розчинами, та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 57-59 попелиць. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й і 5-й період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Через 7 днів після обробки ДНК екстрагували з попелиць, що залишалися, у кожній групі обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ФРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 957 протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Мала місце дозозалежна негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки левуліновою кислотою

Попелиць А. різит еМАЗзСО на стадіях 1-го і 2-го періодів розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки негативним контролем, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через 7 днів (фіг. 27). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених левуліновою кислотою, а

Зо через 11 днів після обробки практично всі попелиці, оброблені контролем, досягали зрілого віку, тоді як 23 і 63 95 попелиць, оброблених 0,03 і 0,3 96 левуліновою кислотою відповідно, не дозрівали далі ніж до стадії 4-го періоду розвитку. Ці дані вказують на те, що обробка левуліновою кислотою затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць, і ця затримка в розвитку залежала від дози левулінової кислоти, що вводиться.

Обробка левуліновою кислотою приводить до підвищеної смертності попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Приблизно 50 95 попелиць, оброблених тільки контролем, виживали після 11-денного експерименту (фіг. 28). На відміну від цього, виживаність була значуще меншою в попелиць, оброблених 0,3 95 левулінової кислоти (р«е0,01). Попелиці, оброблені низькою дозою левулінової кислоти (0,03 95), мали більш високу смертність порівняно з попелицями, обробленими контролем, незважаючи на те, що відмінність не досягала статистичної значущості. Ці дані вказують на те, що мало місце дозозалежне зниження виживаності за обробки левуліновою кислотою.

Обробка левуліновою кислотою приводить до зниження кількості Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка левуліновою кислотою до втрати

Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 7 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/лпопелиця. Попелиці, оброблені тільки контролем, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,03 або 0,3 95 левулінової кислоти у воді, мали в «6 разів менше копій ДНК Висппега/попелиця через 7 днів після обробки (фіг. 29, ліва панель). Ці дані вказують на те, що обробка левуліновою кислотою знижувала рівні Висппега.

У сукупності ці дані, описані раніше, демонстрували здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні інтенсивність розвитку, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх левуліновою кислотою.

Приклад 18. Комахи, оброблені розчином вторинного метаболіту рослинного походження

Даний приклад демонструє обробку попелиць госиполоцтовою кислотою, природним фенолом, одержуваним з бавовнику (рід Со55урішт), який проникає в клітину й виступає як інгібітор для декількох ферментів дегідрогеназ. Даний приклад демонструє, що вплив госиполу на комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які бо були чутливими до госиполу. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпіаїісоїа.

Схема терапії Розчин госиполу складали залежно від способу доставки. 1) Через рослини: з 0 (негативний контроль) або 0,5 95, 0,25 95 і 0,05 95 госиполу, складеного у штучному раціоні (згідно АКеу апа ВесК, 1971; див. розділ "Схема експерименту") без незамінних амінокислот (гістидин, ізолейцин, лейцин, лізин, метіонін, фенілаланін, треонін, триптофан і валін). 2) Мікроін'єкція: розчини для ін'єкцій являли собою 0,595 госиполу або тільки штучний раціон (негативний контроль).

Попелиць (лінії емА5СО (у яких містяться як первинні, так і вторинні симбіонти Висппега та зЗегтайца відповідно) або 1!5БК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугійозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппуб Зеїесієд Зеейдз) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 60ж5 95 ВН; 2552270). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16бгод. світла та 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 4 різні групи обробки: 1) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот, 2) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 0,05 95 госиполу, 3) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 0,25 95 госиполу і 4) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 0,5 95 госиполу. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Сопііпиои5 Кеагіпд ої (Ше Реа Арпіа, Асугпйпозірпоп різит, оп а Ноїїаїс Оіє), з незамінними амінокислотами й без них (2 мг/мл гістидину, 2 мг/мл ізолейцину, 2 мг/мл лейцину, 2 мг/мл лізину, 1 мг/мл метіоніну, 1,62 мг/мл фенілаланіну, 2 мг/мл треоніну, 1 мг/мл триптофану й 2 мг/мл валіну), за винятком того, що в жодному випадку раціон не включав гомосерин або бета- аланілтирозин. Значення рН раціонів доводили до 7, за допомогою КОН і раціони

Зо стерилізували фільтрацією за допомогою фільтра з розміром пор 0,22 мкм і зберігали при 4 "С протягом короткого строку («7 днів) або при -80 "С протягом тривалого строку.

Вихідний розчин госиполоцтової кислоти (Зідта, Мо за кат. 54382-250М0) одержували в концентрації 5 95 у метанолі та стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Для обробок (див. розділ Схема терапії) придатну кількість вихідного розчину додавали до штучного раціону з одержанням різних кінцевих концентрацій госиполу. Раціон потім поміщали в пробірку Еррепоогії на 1,5 мл із черешком та листком кінських бобів та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рієпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 15-87 попелиць. Системи вигодовування штучним раціоном заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли з глибокої чашки Петрі, у якій містилася система вигодовування штучним раціоном, у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (5-й, здатний до розмноження) період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту. При досягненні попелицями стадії 4- го періоду розвитку їм надавали їхні власні штучні системи вигодовування в глибокій чашці

Петрі для того, щоб можна було контролювати плідність, як тільки вони доходили зрілого віку.

У випадку дорослих попелиць нових німф рахували щодня і потім вилучали. Наприкінці експериментів плідність вимірювали двома способами: 1) середній день, у який був визначений перший потомок у групі обробки, і 2) середнє число потомків, що з'являлися щодня після досягнення попелицями зрілого віку. Знімки попелиць одержували протягом усього експерименту для оцінювання відмінностей у розмірах між групами обробки.

Через 5 або 13 днів після обробки ДНК екстрагували з декількох попелиць з кожної групи обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, 60 були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К

(СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АРЕНТа 2468 (ТАТаСсТОасСТ тТсАаТтАаАаТтос; ЗЕО І МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ФРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Мала місце дозозалежна негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки алелохімікатом госиполом

Попелиць А. рівит еМАЗСО і | 5Б5-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на чотири окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через З дні (фіг. ЗОА). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених госиполом, і через 5 днів після обробки за допомогою 0,5 95 госиполу більшість попелиць не дозрівали далі ніж до стадії Зго періоду розвитку, і їх розмір також підпадав під негативний вплив (фіг. ЗОА і 30В). Ці дані вказують на те, що обробка госиполом затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць, і ця реакція була дозозалежною.

Обробка госиполом підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Більшість попелиць, оброблених тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, були живими через 2 дні після обробки (фіг. 31). Через 4 дні попелиці починали поступово гинути, а деякі виживали після закінчення 7 днів після обробки.

На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,25 (відсутність значущих відмінностей порівняно з контролем, р-0,2794) і 0,5 95 госиполу, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, оброблені тільки штучним раціоном, при цьому за обробки 0,5 95 госиполу спостерігалися значущі відмінності порівняно з контролем АЮ без ЕАА (р-0,002). Попелиці, оброблені 0,5 95

Зо госиполу, починали гинути через 2 дні після обробки, і всі попелиці гинули внаслідок обробки через 4 дні. Попелиці, оброблені 0,25 95, виживали дещо довше, ніж попелиці, оброблені 0,5 95, однак також зазнали істотного негативного впливу. Ці дані вказують на те, що мало місце дозозалежне зниження виживаності за обробки алелохімікатом госиполом.

Обробка госиполом знижувала інтенсивність розмноження попелиць

У ході обробок також відстежували плідність попелиць. Через 7 і 8 днів після обробки більшість дорослих попелиць, оброблених штучним раціоном без незамінних амінокислот, починали розмножуватися. Середнє число потомків, утворених щодня після досягнення зрілого віку попелицями, обробленими штучним раціоном без додавання незамінних амінокислот, становило приблизно 5 (фіг. 32А і 32В).

На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,25 95 госиполу, демонстрували зниження темпів досягнення зрілого віку й утворення потомків. Ці дані вказують на те, що обробка госиполом приводила до зменшення інтенсивності розмноження попелиць.

Обробка госиполом знижувала кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводили різні концентрації госиполу до втрати

Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 5 або 13 днів після обробки і проводили дДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот (контролем), мали високі співвідношення числа копій ДНК

Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,25 і 0,5 95 госиполу, мали в - 4 рази менше копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 33), що вказувало на те, що обробка госиполом знижувала рівні Висппега, і що це зниження було залежним від концентрації.

Мікроін'єкцію здійснювали за допомогою автоматичного нанолітрового ін'єктора Мапо)|еї ПІ з висувною голкою з боросилікатного скла власного виготовлення (Огиттопа 5сіепійіс; Мо за кат. 3-000-203-5/ХІ). Попелиць (лінія І ЗК-1, А. різит) вирощували на рослинах кінських бобів, як описано в попередньому прикладі. Для кожної групи обробки було приблизно однакове число особин, що отримали ін'єкцію, з кожної з рослин колекції. Німфи попелиць (стадія « 3-го періоду розвитку) переносили за допомогою малярського пензля в трубну систему, приєднану до вакууму, і їм у черевну частину грудей уводили мікроін'єкцію 20 нл штучного раціону без бо незамінних амінокислот (негативний контроль) або 0,05 95 розчину госиполу в штучному раціоні без незамінних амінокислот. Після ін'єкції попелиць поміщали в глибоку чашку Петрі з листом кінських бобів, черешок якого знаходився в 2 95 агарі.

Для дослідження того, чи приводив госипол, що доставляється за допомогою мікроін'єкції, до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, як було продемонстровано в попередніх прикладах, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 4 дні після обробки і проводили ДРСК, як описано в попередньому прикладі, для визначення числа копій Висппега/попелиця.

Попелиці, що одержали мікроін'єкцію негативного контролю, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, німфи й дорослі особини попелиць, що одержали мікроін'єкцію госиполу, характеризувалися істотним зниженням числа копій ДНК

Висппега/попелиця (фіг. 34), що вказувало на те, що обробка шляхом мікроін'єкції госиполу зменшувала присутність ендосимбіотичних Висппега, і, як показано в попередніх прикладах, це приводило до зниження пристосовуваності.

У сукупності ці дані, описані в попередніх прикладах, демонстрували здатність знищувати попелиць і зменшувати їх інтенсивність розвитку, здатність до розмноження, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх розчином вторинного метаболіту рослин за допомогою декількох шляхів доставки.

Приклад 19. Комахи, оброблені природною протимікробною сполукою рослинного походження, транс-коричним альдегідом

Цей приклад демонструє, що обробка попелиць транс-коричним альдегідом, природним ароматичним альдегідом, який являє собою основний компонент екстракту кори коричного дерева (Сіппатотит 7еуїапісшт), приводить до зниження пристосовуваності. Також було показано, що транс-коричний альдегід характеризується протимікробною активністю щодо як грамнегативних, так і грампозитивних організмів, незважаючи на те, що точний механізм здійснення його протимікробної активності залишається незрозумілим. Транс-коричний альдегід може руйнувати клітинні мембрани бактерій і інгібувати специфічні клітинні процеси або ферменти (С апа НоїІеу, 2004 Арріїеа Епмігоптепіа! Місгобіоіоду). Даний приклад демонструє, що вплив транс-коричного альдегіду на комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до транс-коричного альдегіду. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпіаісоїа.

Схема терапії

Транс-коричний альдегід розводили до 0,05 95, 0,5 95 або 5 95 у воді й доставляли через перфузію в листя (1 мл ін'єктували в листя) і через рослини.

Схема експерименту

Попелиць (лінії Г2К-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асуппозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппуз Зеїесієд Беейвз) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:25).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на чотири різні групи обробки: 1) контролі, оброблені водою, 2) 0,05 95 транс-коричного альдегіду у воді, 3) 0,5 96 трано-коричного альдегіду у воді й 4) 5 9о трано-коричного альдегіду у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Транс-коричний альдегід (Зідта, Мо за кат. С80687) розводили до відповідної концентрації у воді (див. розділ Схема терапії), стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. У листя кінських бобів ін'єктували приблизно 1 мл засобу для обробки та потім лист поміщали в пробірку Еррепоогї на 1,5 мл, що містить той самий розчин для обробки. Отвір пробірки, у яку поміщали живець кінського бобу, закривали парафільмом. Цю систему вигодовування для обробки потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 40-49 попелиць. Системи вигодовування для обробки заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі, у якій містилася система вигодовування для обробки, у випадку їх виявлення.

Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (5-й, здатний до розмноження) період 60 розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Через З дні після обробки ДНК екстрагували з живих попелиць, що залишалися, у кожній групі обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в б 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та

ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір ОМеавзу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АрРЕЕТа 107Е (сСТаАТТОаТаСсСатТасттТАТТа; 5ЕО І

Мала місце дозозалежна негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки природним протимікробним транс-коричним альдегідом

Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на чотири окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (що описано в даному документі).

Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки водою, починали досягати стадії Зго періоду розвитку приблизно через З дні після обробки (фіг. 35). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених транс-коричним альдегідом, і через З дні після обробки кожною із трьох концентрацій транс-коричного альдегіду жодна з попелиць не дозрівала до стадії більше ніж другого періоду розвитку (фіг. 35). Крім того, усі попелиці, оброблені найбільш високою концентрацією транс-коричного альдегіду (5 б), залишалися на стадії 1-го періоду розвитку протягом усього експерименту. Ці дані вказують на те, що обробка транс-коричним альдегідом затримувала й зупиняла прогресування розвитку

Зо попелиць, і ця реакція була дозозалежною.

Обробка транс-коричним альдегідом підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Приблизно 75 відсотків попелиць, оброблених тільки водою, були живими через З дні після обробки (фіг. 36). На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,05 95, 0,5 95 і 5 95 транс-коричного альдегіду, мали значуще більш низькі (р«0,0001 у кожній групі обробки порівняно з контролем, обробленим водою) показники виживаності, ніж попелиці, оброблені тільки водою. Ці дані вказують на те, що мало місце дозозалежне зниження виживаності за обробки природним протимікробним транс- коричним альдегідом.

Обробка транс-коричним альдегідом знижувала кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводили різні концентрації трансо-коричного альдегіду до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через З дні після обробки й проводили

Я4РСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки водою (контролем), мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. Аналогічним чином, попелиці, оброблені найбільш низькою концентрацією транс-коричного альдегіду (0,5 Об), мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця.

На відміну від цього, попелиці, оброблені 0,5 і 5 95 транс-коричного альдегіду, мали в 870 разів менше копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 37), що вказувало на те, що обробка транс- коричним альдегідом знижувала рівні Висппега, і що це зниження було залежним від концентрації.

У сукупності ці дані, описані в попередніх прикладах, демонструють здатність знищувати попелиць та зменшувати їхні інтенсивність розвитку, здатність до розмноження, тривалість життя та ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх розчином вторинного метаболіту рослин за допомогою декількох шляхів доставки.

Приклад 20. Комахи, оброблені протимікробними пептидами скорпіона

Цей приклад демонструє обробку попелиць декількома протимікробними пептидами скорпіона (АМР), з яких декілька АМР були ідентифіковані в транскриптомі отрутної залози скорпіона Огодаси5 уазспепкКої (І ипа-Катіге; еї аї., 2017, Тохіп5). АМР у типовому випадку мають сумарний позитивний заряд і, таким чином, високу спорідненість до мембран бактерій. бо Даний приклад демонструє, що вплив АМР на комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до пептидів АМР. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпідісоЇа, облігатний симбіонт попелиць.

Схема терапії

Розчин Оу192 складали для використання в комбінації перфузії в листя й доставки через рослини. Контрольний розчин ін'єктували в листя з використанням води ї- синього харчового барвника й води в пробірці. Розчин для обробки складався зі 100 мкг/мл Шу192 у воді для ін'єкції в листя (із синім харчовим барвником) і доставки через рослину (у пробірці Еррепаогі).

Попелиць І ЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгопта »місіа від допйппуб5 Беїесіей Зеейв5з) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 20:25).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16бгод. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) розчин для обробки, що містить 100 мкг/мл

АМР у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Оу192 синтезували в Віо-5упіпевіб5 із чистотою 25755905. 1 мг ліофілізованого пептиду розводили в 500 мкл 80 95 ацетонітрилу, 20 95 води й 0,1 95 ТЕА, 100 мкл (100 мкг) розділяли на аліквоти в 10 окремих пробірок Еррепдогї і залишали висихати. Для обробки (див. розділ "Схема терапії") 1 мл води додавали до 100 мкг аліквоти пептиду з одержанням кінцевої концентрації Оут92 (100 мкг/мл). Розчин потім поміщали в пробірку Еррепаогі на 1,5 мл із черешком кінського бобу з листком, підданим також перфузії розчинами, та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 50 попелиць. Системи вигодовування

Зо заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Через 8 днів після обробки ДНК екстрагували з попелиць, що залишалися, у кожній групі обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТООСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФдЗРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ДРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, З) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Рівпег зсієпіййс, Оцапізіцайо Оевідп апа Апаїувів).

Мала місце негативна реакція щодо пристосовуваності комах за обробки АМР скорпіона

Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки негативним контролем, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через 6 днів (фіг. 38). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених Оу192, а через 8 днів після обробки попелиці не дозрівали далі ніж до стадії 4-го періоду розвитку. Ці дані вказують на те, що обробка за допомогою Оу192 затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць.

Обробка за допомогою АМР скорпіона приводить до підвищеної смертності попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Більшість попелиць, оброблених тільки контролем, були живими через З дні після обробки (фіг. 39). Через 4 дні попелиці починали поступово гинути, а деякі виживали після закінчення 7 днів після обробки.

На відміну від цього, попелиці, оброблені за допомогою Оу192, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, оброблені контролем. Ці дані вказують на те, що мало місце зниження виживаності за обробки за допомогою АМР скорпіона ШІу192.

Обробка за допомогою АМР скорпіона Оу192 приводить до зниження кількості Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка за допомогою Шу192 до втрати

Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 8 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/лпопелиця. Попелиці, оброблені тільки контролем, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені за допомогою 100 мкг/мл ПОу192 у воді, мали в «7 разів менше копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 40), що вказувало на те, що обробка за допомогою Оу192 знижувала рівні Висппега.

У сукупності ці дані, описані раніше, демонстрували здатність знищувати попелиць та зменшувати їхні інтенсивність розвитку, тривалість життя та ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх природним протимікробним пептидом скорпіона.

Приклад 21. Комахи, оброблені протимікробними пептидами скорпіона

Цей приклад демонструє обробку попелиць декількома протимікробними пептидами скорпіона (АМР) 010, 03, ОусізЗ ї Оу17-АМР, які нещодавно були ідентифіковані в транскриптомі отрутної залози скорпіона Огодаси5 уазспепКої (Гипа-Катіге еї аї.,, 2017, Тохіп5). АМР у типовому випадку мають сумарний позитивний заряд і, таким чином, високу спорідненість до мембран бактерій. Даний приклад демонструє, що вплив АМР на комах був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до пептидів

АМР. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега арпідісоЇїа, облігатний симбіонт попелиць.

Попелиці являють собою сільськогосподарських комах-шкідників, що заподіюють

Зо безпосередню шкоду рослині в результаті годівлі й виступають як переносники вірусів рослин.

Крім цього, медяна падь попелиць сприяє росту цвілевих плівок грибів і притягує шкідливих мурах. Застосування засобів хімічної обробки, на жаль, як і раніше залишається широко розповсюдженим, що приводить до відбору стійких особин, знищення яких стає усе більш складним.

Схема терапії

Зазначений пептид або суміш пептидів (більш докладно див. нижченаведені розділи "Мікроін'єкція попелицям - схема експерименту" і "Перфузія в листя й доставка через рослини - схема експерименту) уводили шляхом прямої мікроін'єкції попелицям або доставляли за допомогою комбінації перфузії в листя й доставки через рослини. Як негативний контроль попелицям уводили шляхом мікроін'єкції воду (в експериментах з мікроін'єкції), або їх поміщали на листя, у яке була зроблена ін'єкція води, і у воду в пробірці (для експериментів з перфузією в листя й доставкою через рослину). Розчини для обробки складалися з 20 нл 5 мкг/мл ОЗ або р10, розчинених у воді (для мікроін'єкцій попелицям), або 40 мкг/мл суміші з 010, Оу17, ОЗ і

ЦУСІЗ у воді шляхом ін'єкції в листя й доставки через рослину (у пробірці Еррепаогі).

Мікроін'єкція попелицям - схема експерименту

Мікроін'єкцію здійснювали за допомогою автоматичного нанолітрового ін'єктора Мапо)|еї ПІ з висувною голкою з боросилікатного скла власного виготовлення (Огиттопа 5сіепійіс; Мо за кат. 3-000-203-С/ХІ). Попелиць (лінія Ї5К-1, Асуппозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппу5 Зеїесієйд беед5) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:22 72). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-- 7 днів. Для кожної групи обробки було приблизно однакове число особин, що отримали ін'єкцію, з кожної з рослин колекції. Дорослим попелицям уводили мікроін'єкцію 20 нл води або 100 нг (20 мкл 5 мкг/мл розчину) пептиду ЮЗ або 010 у черевну частину грудей. Швидкість мікроін'єкції становила 5 нл/с. Після ін'єкції попелиць поміщали в глибоку чашку Петрі, що містить лист кінських бобів, черешок якого знаходився в 2 95 агарі.

Пептиди синтезували в Віо-Зупіпевзі5 із чистотою 275905. 1 мг ліофілізованого пептиду розводили в 500 мкл 80 95 ацетонітрилу, 20 95 води й 0,1 95 ТЕА, 100 мкл (100 мкг) розділяли на аліквоти в 10 окремих пробірок Еррепоогі і залишали висихати.

Через 5 днів після обробки ДНК екстрагували з попелиць, що залишалися, у кожній групі обробки. Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107Е (СТОСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО І

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФдЗРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ДРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Рівнег зсієпіййс, Оцапізіцайо Оевідп апа Апаїувів).

Мікроін'єкція попелицям пептидів скорпіона, ОЗ і 010, приводить до зниження виживаності комах

Попелиць А. різит І 5К-1 на стадіях 1го й 2го періодів розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (що описано в даному документі).

Попелиць відстежували щодня і визначали показник виживаності. Через 5 днів після обробки попелиці, яким ін'єккгували пептиди скорпіона, мали більш низькі показники виживаності порівняно з контрольними особинами, яким ін'єктували воду (9, 35 і 45 95 виживаність у випадку ін'єкції ОЗ, 010 ї води відповідно) (фіг. 41). Ці дані вказують на те, що мало місце зниження виживаності за обробки за допомогою АМР скорпіона, ОЗ і 010.

Мікроін'єкція попелицям пептидів скорпіона, ОЗ ії 010, приводить до зниження кількості ендосимбіонтів Висппега

Зокрема, для дослідження того, чи приводила ін'єкція АМР скорпіона, ОЗ і 010, до втрати

Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 5 днів після ін'єкції і проводили ДРСЕ. для визначення числа копій ВисПппега/лопелиця. Попелиці, яким ін'єктгували тільки воду, мали високі співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця (47,4), тоді як попелиці, яким ін'єктували ОЗ і р10, мали більш низькі співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця (25,3 і 30,9 відповідно) (фіг. 42). Ці дані вказують на те, що обробка пептидами скорпіона, ОЗ і 010, приводила до зниження рівнів бактерій-симбіонтів Висппега.

Попелиць Асугіпозірпоп різит еЄЕМАЗСО (у яких містяться Висппега та зеїтайна) вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппу5 б5еїесієй Зееєдв5), як описано вище. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) розчин для обробки, що складається з 40 мкг/мл будь-якого з 010, Оу17, ОЗ ї ОУуСІЗ у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Пептиди синтезували, розчиняли й розділяли на аліквоти, як описано вище. Для обробки (див. розділ "Схема терапії") воду додавали до 100 мкг аліквоти пептиду з одержанням необхідної кінцевої концентрації (40 мкг/мл). Чотири пептиди поєднували з отриманням розчину суміші пептидів. Цей розчин застосовували для перфузії в листя шляхом ін'єкції. Після ін'єкції черешки листя, у яке була зроблена ін'єкція, поміщали в пробірку Еррепоаогі на 1,5 мл, яку потім запечатували парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рібпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 41-49 попелиць. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення.

Обробка сумішшю пептидів скорпіона приводить до підвищеної смертності попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Через б днів після обробки попелиці, оброблені сумішшю пептидів, мали більш низькі показники виживаності 60 порівняно з попелицями, обробленими водою, а через 9 днів ефект був більш очевидним (16 і

29 95 виживаність у випадку обробки сумішшю пептидів і водою відповідно) (фіг. 43). Ці дані вказують на те, що мало місце зниження виживаності за обробки сумішшю АМР скорпіона, і, як показано в попередніх прикладах, ці АМР знижували рівні ендосимбіонтів у попелиць.

У сукупності ці дані, описані раніше, демонстрували здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх окремим природним протимікробним пептидом скорпіона або сумішшю пептидів.

Приклад 22. Комахи, оброблені протимікробним пептидом, злитим з пептидом, що проникає у клітину

Даний приклад демонструє обробку попелиць протимікробним пептидом скорпіона (АМР) (Оу192), злитим з пептидом, що проникає у клітину, отриманим з вірусу. АМР Оу192 являє собою один з декількох нещодавно ідентифікованих АМР у транскриптомі отрутної залози скорпіона Огодаси5 уазспепкКої (І ипа-Катіге еї аї,, 2017, Тохіп5х). АМР у типовому випадку мають сумарний позитивний заряд і, таким чином, високу спорідненість до мембран бактерій.

Для посилення доставки пептиду скорпіона Оу192 у клітини попелиць пептид синтезували злитим із частиною білка-трансактиватора транскрипції (ТАТ) вірусу імунодефіциту людину (НІМ-1). Попередні дослідження показали, що кон'югування цього пептиду, що проникає в клітину (СРР), з іншими молекулами збільшувало їх поглинання клітинами шляхом трансдукції (7/пои вї аї., 2015 дошгпаї ої Іпзесі бсіепсе апа Септепаїї єї а)., 2011 Удошгпаї ої Іпзесі Ріузіоіоду).

Даний приклад демонструє, що вплив злитого пептиду на комах було опосередковано модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до протимікробного пептиду. Одним цільовим бактеріальним штамом є Висппега.

Схема терапії

Пептид скорпіона, кон'югований з пептидом, що проникає у клітину, і флуоресцентно мічений за допомогою бЕАМ (Оу192-СРРЯБАМ), складали для використання в комбінації перфузії в листя й доставки через рослини. Контрольний розчин (вода) або розчин для обробки (Оу192-СРРАБАМ) ін'єктували в лист і поміщали в пробірку Еррепадогії. Розчин для обробки містив 100 мкг/мл Оу1924СРРАГАМ у воді.

Зо Попелиць Асугіпозірпоп різит І ЗК-1 вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота місіа від допппу5 беїесієйд бееєдвз) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 60:25 95 КН; 25:22 "С). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та 8 год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою), 2) обробка за допомогою Оу1924СРРАБЕАМ зі 100 мкг/мл Оу1924СРРАБАМ у воді. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Для обробки (див. розділ "Схема терапії" Оу1924СРРАЕАМ (амінокислотна послідовність: уавккАВОВАВРЇ ЗТІММакай і -БРАМ) синтезували в Віо-Зупіпеві5 із чистотою »75 95. 5 мг ліофілізованого пептиду розводили в 1 мл 80 95 ацетонітрилу, 20 95 води й 0,1 95 ТЕА, 50 мкл (100 мкг) розділяли на аліквоти в окремі пробірки Еррепаогї і залишали висихати. Для обробки (див. розділ "Схема терапії") 1 мл стерильної води додавали до 100 мкг аліквоти пептиду з одержанням кінцевої концентрації Оу1924СРРАБАМ (100 мкг/мл). Потім розчин ін'єктували в лист рослини і стебло рослини поміщали в пробірку Еррепаогі на 1,5 мл. Отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Бієпег о Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Епіфлуоресцентна візуалізація листу підтверджувала, що листи містили пептид із зеленою флуоресцентною міткою у своїй судинній системі.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 30 попелиць у трьох повторностях. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення. Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й і 5К (попелиці на 5-му періоді розвитку, здатні до розмноження) період розвитку) визначали щодня протягом усього експерименту.

Через 5 днів після обробки ДНК екстрагували з декількох попелиць у кожній групі обробки.

Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в 6 95 розчин бо відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (статтостоаАатсаАТТТСС; ЗЕО ІЮ МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ДЗРСОК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Обробка пептидом скорпіона, Оу1!92, злитим з пептидом, що проникає у клітину, затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць

Попелиць А. різвит І 5К-1 на стадії 1-го періоду розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Розвиток як попелиць, оброблених водою, так і попелиць, оброблених пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, був аналогічним у дні 0 і 1 (фіг. 44). Однак у день 2 попелиці, оброблені контролем, розвивалися до стадій другого або третього періодів розвитку, у той час як деякі попелиці, оброблені пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, залишалися на стадії першого періоду розвитку (фіг. 44). Навіть через З дня після обробки деякі попелиці, оброблені пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, залишалися на стадії першого періоду розвитку (фіг. 44). Через 7 днів після обробки більшість попелиць, оброблених водою, розвивалися до стадії 5-го або 5-го, здатного до розмноження, періоду розвитку. На відміну від цього, тільки 50 відсотків попелиць, оброблених пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, розвивалися до стадії 5-го періоду розвитку, тоді як 42 і -8 відсотків

Зо попелиць залишалися на стадіях 3-го або 4-го періодів розвитку відповідно (фіг. 44). Ці дані вказують на те, що обробка пептидом скорпіона Оу192, злитим з пептидом, що проникає у клітину, затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць.

Обробка пептидом скорпіона, Оу192, злитим з пептидом, що проникає у клітину, приводила до підвищеної смертності попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Приблизно 40 95 попелиць, оброблених тільки контролем, виживали після 7-денного експерименту (фіг. 45). На відміну від цього, виживаність була значуще меншою в попелиць, оброблених за допомогою 100 мг/мл Оу1924СРРАБАМ (р«0,0036, відповідно до логарифмічного рангового критерію Кокса-

Мантеля), при цьому тільки 16 95 попелиць доживали до дня 7 (фіг. 45). Ці дані вказують на те, що мало місце зниження виживаності за обробки пептидом скорпіона, Оу192, злитим з пептидом, що проникає у клітину.

Обробка пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, приводила до зниження співвідношень кількості ДНК Висппега/попелиця

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка за допомогою Оу1924СРРАБАМ до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі через 5 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки водою, мали високі співвідношення (4134) числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього, попелиці, оброблені пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, мали в «1,8 разу менше копій ДНК Висппега/попелиця через 5 днів після обробки (фіг. 46). Ці дані вказують на те, що обробка пептидом скорпіона, злитим з пептидом, що проникає у клітину, знижувала рівні ендосимбіонтів.

Пептид скорпіона, злитий з пептидом, що проникає у клітину, вільно проникав у бактеріоцити зі здійсненням протидії Висппега

Для дослідження того, чи сприяв безпосередньо пептид, що проникає в клітину, доставці пептиду скорпіона в бактеріоцити, виділені бактеріоцити піддавали прямому впливу злитого білка й візуалізували. Бактеріоцити витягали з попелиць у середовищі Шнайдера з додаванням 195 вага/об. ВБА (середовище Шнайдера з ВЗА) та поміщали в лунку для візуалізації, що містить 20 мкл середовища Шнайдера. 100 мкг аліквоти ліофілізованого пептиду скорпіона бо ресуспендували в 100 мкл середовища Шнайдера з одержанням розчину 1 мг/мл та 5 мкл цього розчину домішували в лунку, що містить бактеріоцити. Через 30 хв. інкубування за кімнатної температури бактеріоцити ретельно промивали для видалення будь-якого надлишку вільного пептиду в розчині. Зображення бактеріоцитів одержували до і після інкубування (фіг. 47).

Злитий пептид проникав через мембрани бактеріоциту й був безпосередньо доступний для

Висппега.

У сукупності ці дані демонструють здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні інтенсивність розвитку, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх протимікробним пептидом скорпіона, Оу192, злитим з пептидом, що проникає у клітину.

Приклад 23. Комахи, оброблені аналогами вітамінів

Даний приклад демонструє обробку попелиць провітаміном пантотенолом, який являє собою спиртовий аналог пантотенової кислоти (вітамін В5). Попелиці мають облігатних бактерій-ендосимбіонтів Висппега, які сприяють утворенню ними незамінних амінокислот і вітамінів, у тому числі вітаміну В5. Попереднє дослідження показало, що пантотенол інгібує ріст

Ріазтодіцт ТаІсірагит шляхом інгібування специфічних кіназ паразита (Заїїба еї а!., 2005). Була висунута гіпотеза, що обробка комах пантотенолом була б згубною для симбіозу бактерія- комаха, негативно впливаючи в такий спосіб на пристосовуваність комахи. Даний приклад демонструє, що обробка пантотенолом знижувала пристосовуваність комах.

Схема терапії

Розчини пантотенолу складали залежно від способу доставки. 1) У штучному раціоні через рослини: з 0 (негативний контроль) або 10 або 100 мкм пантотенолу, складеного в штучному раціоні (згідно АКеу апа ВескК, 1971; див. розділ "Схема експерименту") без незамінних амінокислот (2 мг/мл гістидину, 2 мг/мл ізолейцину, 2 мг/мл лейцину, 2 мг/мл лізину, 1 мг/мл метіоніну, 1,62 мг/мл фенілаланіну, 2 мг/мл треоніну, 1 мг/мл триптофану й 2 мг/мл валіну). 2) Покриття листя: 100 мкл 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево-активного розчинника бім'еї Ї-77 у воді (негативний контроль) або 100 мкл 50 мкг/мл рифампіцину, складеного в розчині розчинника, застосовували безпосередньо щодо поверхні листів і залишали висихати.

Зо Доставка через рослини - схема експерименту

Попелиць (еМмА5зСО, Асугіпозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів (боби

Мгота місіа від допппу5 5еїесієйд бееав5) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:52 7С). Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24С за 16бгод. світла та год. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5- 7 днів. Для експериментів попелиць на стадіях першого й другого періодів розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на З різні групи обробки: 1) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот, 2) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 10 мкМ пантотенолу й 3) тільки штучний раціон без незамінних амінокислот і 100 мкМ пантотенолу. Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Сопііписи5 Кеагіпд ої Ше Реа Арпід, Асугіпозірпоп різит, оп а Ноїїдіс Оіе), з незамінними амінокислотами й без них (2 мг/мл гістидину, 2 мг/мл ізолейцину, 2 мг/мл лейцину, 2 мг/мл лізину, 1 мг/мл метіоніну, 1,62 мг/мл фенілаланіну, 2 мг/мл треоніну, 1 мг/мл триптофану й 2 мг/мл валіну), за винятком того, що в жодному випадку раціон не включав гомосерин або бета- аланілтирозин. Значення рН раціонів доводили до 7,5 за допомогою КОН і раціони стерилізували фільтрацією за допомогою фільтра з розміром пор 0,22 мкм і зберігали при 4 "С протягом короткого строку («7 днів) або при -80 "С протягом тривалого строку.

Розчини пантотенолу (Зідта, Мо за кат. 295787) одержували в концентрації 10 мкМ та 100

МКМ у штучному раціоні без незамінних амінокислот, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Для обробок (див. розділ

Схема терапії) придатну кількість вихідного розчину додавали до штучного раціону без незамінних амінокислот з одержанням кінцевої концентрації 10 або 100 мкМ пантотенолу.

Раціон потім поміщали в пробірку Еррепоабогі на 1,5 мл із черешком та листком кінських бобів та отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування штучним раціоном потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Ріхпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини.

Для кожної обробки на кожний лист поміщали 16-20 попелиць. Системи вигодовування штучним раціоном заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли з глибокої чашки Петрі, у якій містилася система вигодовування штучним раціоном, у випадку їх виявлення.

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; ЗЕО І

Зо Обробка аналогами вітамінів затримує розвиток попелиць

Попелиць еМмА5СО на стадіях 1-го й 2-го періодів розвитку розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Доставка через рослини - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) приблизно через 5 днів (фіг. 48А). Розвиток затримувався в попелиць, оброблених пантотенолом, особливо в другий і третій дні після обробки (фіг. 48А), що вказувало на те, що обробка пантотенолом погіршує розвиток попелиць.

В остаточному підсумку більшість попелиць із кожної групи обробки досягали зрілого віку й починали розмножуватися. Крім відстежування динаміки стадій розвитку попелиць, попелиць також візуалізували, і визначали площу тіла попелиць. Усі попелиці мали однаковий розмір через 1 день після обробки, однак через З дні після обробки попелиці, оброблені пантотенолом, мали меншу площу тіла, ніж необроблені контрольні особини. Крім того, попелиці, оброблені пантотенолом, мали набагато менший приріст розміру тіла (визначений на основі площі тіла) протягом експерименту порівняно з попелицями, обробленими тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот (фіг. 48Б).

Обробка аналогами вітамінів підвищувала смертність попелиць

Показник виживаності попелиць також вимірювали в ході обробок. Попелиці, що вигодовуються тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, мали більш високі показники виживаності порівняно з попелицями, обробленими 10 або 100 мкМ пантотенолу (фіг. 49), що вказувало на те, що обробка пантотенолом негативно впливала на пристосовуваність попелиць.

Обробка пантотенолом знижує плідність попелиць

У ході обробок також відстежували плідність попелиць. Визначали частку попелиць, що дожили до зрілого віку й появи здатності до розмноження. Приблизно одна чверть попелиць, оброблених штучним раціоном без незамінних амінокислот, доживала до досягнення зрілого віку через 8 днів після обробки (фіг. 50А). На відміну від цього, тільки трохи більше 1/10 попелиць, оброблених 10 або 100 мкМ пантотенолу, доживали до досягнення зрілого віку й розмножувалися через 8 днів після обробки. Також вимірювали середній день, на який попелиці в кожній групі обробки починали розмножуватися, і для всіх груп обробки середнім днем, на бо який попелиці починали розмножуватися, був 7-й день (фіг. 508). Крім того, також відстежували середнє число потомків, утворених за день зрілими попелицями, що розмножуються. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, утворювали приблизно 7 потомків/день. На відміну від цього, попелиці, оброблені 10 ї 100 мкМ пантотенолу, утворювали тільки відповідно приблизно 4 і 5 потомків/день, як показано на фіг. 50С. У сукупності ці дані вказують на те, що обробка пантотенолом приводила до втрати здатності до розмноження в попелиць.

Обробка пантотенолом не впливає негативно на кількість Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка пантотенолом до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 8 днів після обробки й проводили ДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки штучним раціоном без незамінних амінокислот, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця, як і попелиці, оброблені кожною із двох концентрацій пантотенолу (фіг. 51). Ці дані вказують на те, що обробка пантотенолом безпосередньо не впливала негативно на число копій ДНК

Висппега/попелиця.

Порошок пантотенолу додавали до 0,025 95 неіоногенного кремнійорганічного поверхнево- активного розчинника 5іЇм'єї І -77 з одержанням кінцевої концентрації 10 мкМ пантотенолу. Засіб обробки стерилізували фільтрацією за допомогою фільтра з розміром пор 0,22 мкм і зберігали при 4 градусах С. Попелиць (лінія еМАБСО, Асугппозірпоп різит) вирощували на рослинах кінських бобів, як описано в попередньому прикладі. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (тільки розчин розчинника) і 2) 10 мкМ пантотенолу в розчиннику. 100 мкл розчину поглиналося шматочком листу кінських бобів розміром 2 х 2 см.

Для кожної групи обробки одержували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції. Для кожної обробки на кожний лист поміщали 20 попелиць. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли у випадку їх виявлення. Крім цього, стадію розвитку (1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й період розвитку й 5К, що позначає 5-й період розвитку, здатний до розмноження) визначали щодня протягом усього експерименту.

Обробка пантотенолом, що доставляється за допомогою покриття листя, не впливає негативно на розвиток попелиць

Попелиць еМмАЗСО на стадії 1-го періоду розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту", що описано в даному документі. Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, поміщені на покрите листя, оброблене або контрольним розчином, або розчином пантотенолу, дозрівали за аналогічних швидкостей протягом двох днів після обробки (фіг. 52). Ці дані вказують на те, що покриття листя пантотенолом не впливало негативно на розвиток попелиць.

Обробка пантотенолом, що доставляється за допомогою покриття листя, підвищувала смертність попелиць

Попелиці, поміщені на листя, покрите пантотенолом, мали більш низькі показники виживаності, ніж попелиці, поміщені на листя, покрите контрольним розчином (фіг. 53). Ці дані вказують на те, що обробка пантотенолом, що доставляється за допомогою покриття листя, значуще (р-0,0019) негативно впливала на виживаність попелиць. Усі попелиці гинули в даному експерименті, і ніяких попелиць, що залишалися, не залишалося для екстрагування з них ДНК і визначення співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця.

У сукупності ці дані, описані в попередніх прикладах, демонструють здатність знищувати попелиць і зменшувати їхні інтенсивність розвитку, здатність до розмноження, тривалість життя й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, за допомогою обробки їх пантотенолом за допомогою декількох шляхів доставки.

Приклад 24. Комахи, оброблені сумішшю інгібіторів переносників амінокислот

Даний приклад демонструє обробку попелиць сумішшю аналогів амінокислот. Метою даної обробки було інгібування захоплення глутаміну бактеріоцитами за допомогою переносника глутаміну АрсЇМТ1. Раніше було показано, що аргінін інгібує захоплення глутаміну за допомогою переносника глутаміну (Ргісе еї аї., 2014 РМАФ5), і автори даного винаходу висунули гіпотезу, що обробка аналогами аргініну або аналогами інших амінокислот може також інгібувати захоплення незамінних амінокислот бактеріоцитами попелиць. Даний приклад демонструє, що зниження пристосовуваності за обробки було опосередковано модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливі до аналогів амінокислот. Одним бо цільовим бактеріальним штамом є Висппега.

Схема терапії

Суміш амінокислот складали для доставки через перфузію в листя й через рослину. Цей спосіб доставки полягав в ін'єкції в листя приблизно 1 мл суміші амінокислот у воді (див. нижче перелік компонентів суміші) або 1 мл розчину негативного контролю, що містить тільки воду.

Попелиць І ЗК-1 (у яких містяться тільки Висппега) Асугіпозірпоп різит вирощували на рослинах кінських бобів (боби Мгота »місіа від ЧЩУойпппуб беїесієій беей5з) в інкубаторі з контрольованим кліматом (фотоперіод з 16 год. світла/8 год. темряви; 6025 95 КН; 25:25).

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) негативний контроль (обробка водою) і 2) обробка сумішшю амінокислот. Суміш амінокислот містила кожний з наступних засобів у вказаних кінцевих концентраціях: 330 мкМ І -ММА (М-нітро-

І -аргініну; Зідта), 0,1 мг/мл І-канаваніну (Зідта), 0,5 мг/мл О-аргініну (Зідта), 0,5 мг/мл 0- фенілаланіну (Зідта), 0,5 мг/мл О-гістидину (Зідта), 0,5 мг/мл ЮО-триптофану (Зідта), 0,5 мг/мл

О-треоніну (Зідта), 0,5 мг/мл О-валіну (Зідта), 0,5 мг/мл ЮО-метіоніну (Зідта), 0,5 мг/мл ЮО- лейцину і 6 мкм Г-МММА (цитрату) (Саутап Спептісаї). У лист кінських бобів вводили хі мл розчину для обробки шляхом ін'єкції і стебло рослини поміщали в пробірку Еррепоаогі на 1,5 мл, що містить розчин для обробки. Отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему вигодовування потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Різєпег 5сіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини. Для кожної обробки в цілому 56-58 попелиць поміщали на кожний лист (кожна обробка складалася із двох повторностей по 28-31 попелиці). Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції.

Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення. Стадію розвитку попелиць (1-й, 2-й, 3-й, 4-й і 5-й період розвитку)

Зо визначали щоденно протягом усього експерименту й мікроскопічні зображення попелиць отримували в день 5 для виконання вимірювань площі тіла попелиць.

Вихідні розчини Г-ММА одержували в концентрації 5 мМ у воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Вихідні розчини І-канаваніну готували в концентрації 100 мг/мл у воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Вихідні розчини О-аргініну та Ю-треоніну одержували в концентрації 50 мг/мл у воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "с.

Вихідні розчини ЮОЮ-валіну та ЮО-метіоніну одержували в концентрації 25 мг/мл у воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Вихідні розчини Ю-лейцину одержували в концентрації 12 мг/мл У воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Вихідні розчини Ю-фенілаланіну та О-гістидину одержували в концентрації 50 мг/мл в 1 М НС, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Вихідні розчини Ю-триптофану одержували в концентрації 50 мг/мл в 0,5 М НС, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за 4 "С. Вихідні розчини Ї-МММА одержували в концентрації б мг/мл в стерильному РВ5, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Для обробок (див. розділ Схема терапії) відповідну кількість вихідного розчину додавали до води з одержанням кінцевої концентрації засобу в суміші, як вказано вище.

Через 6 днів після обробки ДНК екстрагували з декількох попелиць з кожної групи обробки.

ОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТСАТСОТОТОСТТОТТААО; ЗЕБО ІЮ МО: 238) та Висп огоЕЗ 98К (СТОТТССТООАСТССАТТТСС; ЗЕО ІЮО МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, 60 використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСсАатТАСАСТОС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Снопа апа Могап, 2016 РМА5). ФРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ФРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Обробка сумішшю аналогів амінокислот затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць

Попелиць І 5Е-1 на стадії 1-го періоду розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Перфузія в листя й доставка через рослини - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені водою, починали досягати зрілого віку (стадії 5-го періоду розвитку) у день 5 після обробки (фіг. 54А). Через 6 днів після обробки «20 відсотків попелиць, оброблених водою, досягали стадії 5-го періоду розвитку. На відміну від цього, менш ніж З відсотки попелиць, оброблених сумішшю амінокислот, досягали стадії 5-го періоду розвитку навіть через 6 днів (фіг. 54А). Ця затримка в розвитку за обробки сумішшю амінокислот була додатково представлена на прикладі шляхом вимірювань розміру попелиць, виконаних через 5 днів після обробки. Попелиці, оброблені тільки водою, мали площу тіла приблизно 0,45 мм2, тоді як попелиці, оброблені сумішшю амінокислот, мали площу тіла приблизно 0,33 мм2 (фіг. 548). Ці дані вказують на те, що обробка сумішшю амінокислот затримувала розвиток попелиць, негативно впливаючи на пристосовуваність попелиць.

Обробка сумішшю аналогів амінокислот приводила до зниження кількості Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка сумішшю аналогів амінокислот до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 6 днів після обробки й проводили

ЯРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, поміщені на контрольний розчин, мали високі співвідношення числа копій ДНК Висппега/попелиця. На відміну від цього,

Зо попелиці, поміщені на засіб для обробки із сумішшю АА, характеризувалися істотним зниженням числа копій ДНК Висппега/попелиця (фіг. 55), що вказувало на те, що обробка сумішшю аналогів АА усувала ендосимбіотичні Висппега.

У сукупності ці дані демонструють здатність зменшувати інтенсивність розвитку й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, у попелиць за допомогою обробки їх сумішшю аналогів амінокислот.

Приклад 25. Комахи, оброблені комбінацією засобів (антибіотиком, пептидом і природним протимікробним засобом)

Даний приклад демонструє обробку комах комбінацією із трьох протимікробних засобів - антибіотика (рифампіцину), пептиду (пептиду скорпіона, Оу192) і природного протимікробного засобу (низькомолекулярного хітозану). В інших прикладах будь-який із цих засобів, уведений окремо, приводив до зменшення пристосовуваності попелиць і зниження рівнів ендосимбіонтів.

Даний приклад демонструє, що за допомогою доставки комбінації засобів обробки пристосовуваність комах і рівні ендосимбіонтів знижувалися так само, як і за обробки кожним окремим засобом окремо, або навіть більше.

Схема терапії

Комбінацію засобів обробки складали для доставки через перфузію в листя й через рослину. Цей спосіб доставки полягав в ін'єкції в листя приблизно 1 мл комбінації засобів обробки у воді (з кінцевими концентраціями 100 мкг/мл рифампіцину, 100 мкг/мл Оу192 і 300 мкг/мл хітозану) або 1 мл розчину негативного контролю, що містить тільки воду.

Перед використанням для вигодовування попелиць рослини кінських бобів вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур за 24 "С за 16 год. світла та вгод. темряви. Для обмеження материнських ефектів або відмінностей у стані здоров'я між рослинами 5-10 дорослих особин з різних рослин розподіляли серед 10 рослин у віці двох тижнів і залишали розмножуватися до високої щільності протягом 5-7 днів. Для експериментів попелиць на стадії першого періоду розвитку збирали зі здорових рослин і розділяли на 2 різні групи обробки: 1) 60 негативний контроль (обробка водою) і 2) обробка комбінацією зі 100 мкг/мл рифампіцину, 100 мкг/мл Оу192 ї 300 мкг/мл хітозану. У лист кінських бобів вводили «1 мл розчину для обробки шляхом ін'єкції і стебло рослини поміщали в пробірку Еррепоогї на 1,5 мл, що містить розчин для обробки. Отвір пробірки закривали парафільмом. Цю систему для обробки потім поміщали в глибоку чашку Петрі (Рієпег Зсіепійіс, Мо за кат. ЕВО875711) і попелиць наносили на листя рослини. Для кожної обробки в цілому 56 попелиць поміщали на кожний лист (кожна обробка складалася із двох повторностей по 28 попелиць). Для кожної групи обробки отримували приблизно однакове число особин з кожної з рослин колекції. Системи вигодовування заміняли кожні 2-3 дні протягом усього експерименту. У попелиць щодня відстежували виживаність і мертвих попелиць видаляли із глибокої чашки Петрі у випадку їх виявлення. Стадію розвитку попелиць (1-й, 2-й, 3-й, 4-й і 5-й період розвитку) визначали щоденно протягом усього експерименту й мікроскопічні зображення попелиць отримували в день 5 для виконання вимірювань площі тіла попелиць.

Вихідний розчин рифампіцину (ТоКуо Спетісаї! Іпаизігу, СТО) одержували в концентрації 25 мг/мл у метанолі, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Для обробки придатну кількість вихідного розчину додавали до води з одержанням кінцевої концентрації 100 мкг/мл рифампіцину. Оу192 синтезували в Віо- зупіпевзіз із чистотою 275905. 1 мг ліофілізованого пептиду розводили в 500 мкл 80 95 ацетонітрилу, 20 95 води й 0,1 95 ТЕА. 100 мкл (100 мкг) розділяли на аліквоти в 10 окремих пробірок Еррепабогі та залишали висихати. Для обробки 1 мл води додавали до 100 мкг аліквоти пептиду з отриманням кінцевої концентрації 100 мкг/мл Оу192. Вихідний розчин хітозану (5ідта,

Мо за кат. 448869-5005) одержували в концентрації 195 в оцтовій кислоті, стерилізували автоклавуванням та зберігали за 4 "С. Для обробок придатну кількість вихідного розчину додавали до води з одержанням кінцевої концентрації хітозану 300 мкг/мл.

Стисло, поверхню тіла попелиць стерилізували шляхом занурення попелиці в б 9о розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім попелиць промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожної окремої попелиці за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір

ЮОМеазу) відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоОгор та число копій ДНК Висппега та

Зо попелиць вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для Висппега, були Висп дгоЕ5З 18Е (САТОСАТСОТОТОСТТОТТААС; ЗЕБЕО ІЮ МО: 238) та Висп одгоЕ5 98К (статтостоаАатсаАТТТОС; ЗЕО ІЮ МО: 239) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5Б). Праймерами, використовуваними для попелиць, були АРЕЕТа 107 (СТСАТТОТОССОТОСТТАТТО; 5ЕО ІЮ

МО: 240) та АрРЕЕНТа 246. (ТАТОСТОСТТСАСТАСАСТСС; ЗЕО ІЮ МО: 241) (Спопд апа Могап, 2016 РМА5). ФдЗРСК проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ДРСОК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 55 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 7С протягом 15 секунд, 6) 5570 протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 "С протягом 1 секунди. Дані ДРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпегто

Обробка комбінацією із трьох протимікробних засобів затримувала й зупиняла прогресування розвитку попелиць

Попелиць І 5Е-1 на стадії 1-го періоду розвитку розділяли на дві окремі групи обробки, як визначено в розділі "Перфузія в листя й доставка через рослини - схема експерименту" (що описано в даному документі). Попелиць відстежували щодня і визначали число попелиць на кожній стадії розвитку. Попелиці, оброблені водою, починали досягати зрілого віку (стадія 5-го періоду розвитку) у день 5 після обробки (фіг. 56А). Через 6 днів після обробки «20 відсотків попелиць, оброблених водою, досягали стадії 5-го періоду розвитку. На відміну від цього, попелиці, оброблені комбінацією із трьох засобів, не досягали стадії 5-го періоду розвитку навіть через 6 днів (фіг. 56А). Ця затримка в розвитку за комбінованої обробки була додатково представлена на прикладі шляхом вимірювань розміру попелиць, виконаних через 5 днів після обробки. Попелиці, оброблені тільки водою, мали площу тіла приблизно 0,45 мм2, тоді як попелиці, оброблені комбінацією з З засобів, мали площу тіла приблизно 0,26 мма2 (фіг. 56В). Ці дані вказують на те, що обробка комбінацією засобів затримувала розвиток попелиць, негативно впливаючи на пристосовуваність попелиць.

Обробка комбінацією із трьох протимікробних засобів підвищувала смертність попелиць

Виживаність також відстежували щодня після обробки. Через 2 дні після обробки приблизно 75 відсотків попелиць, оброблених водою, були живими, тоді як тільки 62 відсотка попелиць, оброблених комбінацією засобів, були живими. Ця тенденція до більшої кількості попелиць, що 60 пережили обробку, у контрольній групі (оброблених водою) зберігалася протягом усього експерименту. Через б днів після обробки виживали 64 відсотка контрольних (оброблених водою) попелиць, тоді як серед попелиць, оброблених комбінацією рифампіцину, Оу192 і хітозану, виживали 58 відсотків (фіг. 57). Ці дані вказують на те, що комбінація засобів обробки негативно впливала на виживаність попелиць.

Обробка комбінацією із трьох засобів приводила до зниження кількості Висппега у попелиць

Зокрема, для дослідження того, чи приводила обробка комбінацією пептиду, антибіотика й природного протимікробного засобу до втрати Висппега у попелиць і чи впливала ця втрата на пристосовуваність попелиць, екстрагували ДНК з попелиць у кожній групі обробки через 6 днів після обробки й проводили дДРСК для визначення числа копій Висппега/попелиця. Попелиці, оброблені тільки водою, мали співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця, що становлять приблизно 2,3 (фіг. 58). На відміну від цього, попелиці, оброблені комбінацією пептиду, антибіотика й природного протимікробного засобу, мали приблизно в 2 рази більш низькі співвідношення кількості ДНК Висппега/попелиця (фіг. 58). Ці дані вказують на те, що комбінована обробка знижувала рівні ендосимбіонтів, що приводило до зниження пристосовуваності попелиць.

У сукупності ці дані демонструють здатність зменшувати інтенсивність розвитку й ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність, у попелиць за допомогою обробки їх комбінацією пептиду, антибіотика й природного протимікробного засобу.

Приклад 26. Комахи, оброблені розчином антибіотика

Даний приклад демонструє вплив обробки довгоносиків ципрофлоксацином, бактерицидним антибіотиком, який інгібує активність ДНК-гірази і топоїзомерази, двох ферментів, необхідних для реплікації ДНК. Даний приклад демонструє, що фенотипічний вплив ципрофлоксацину на інших модельних комах, довгоносиків, був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо комах, які були чутливими до ципрофлоксацину. Одним цільовим бактеріальним штамом є первинний ендосимбіонт Зйорпйи5 (ЗРЕ, Сапаїідаєцв5 зодаїї»5 ріегапіопішйв5).

Схема експерименту

Кукурудзяних довгоносиків ЗйЙорпйи5 (Зйорпйи5 7еатаі5) вигодовували на органічній кукурудзі при 27,50 і 7095 відносної вологості. Перед використанням для вигодовування

Зо довгоносиків кукурудзу заморожували протягом 7 днів і потім доводили до 10 95 вологості стерильною водою. Пари, що спаровуються, дорослих самців і самиць розділяли на З різні групи обробки для експериментів, які виконували в трьох повторностях: 1) контроль з водою, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацину і 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацину. Вихідні розчини ципрофлоксацину (Зідта) одержували в концентрації 25 мг/мл в 0,1 н. НСІ, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Для обробок придатну кількість вихідного розчину розводили в стерильній воді.

Довгоносиків піддавали трьом послідовним обробкам. 1. Перша обробка передбачала замочування 25 г кукурудзи з кожним із засобів для трьох груп обробки, наведених вище: 1) контроль з водою, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацину і 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацину. Стисло, 25 г кукурудзи поміщали в конічну пробірку на 50 мл і будь- який із засобів обробки додавали до повного заповнення пробірки. Пробірку поміщали на шейкер на 1,5 години, після чого кукурудзу видаляли, й поміщали в глибоку чашку Петрі, й сушили на повітрі. Пари, що спаровуються, самців і самиць потім додавали в кожну групу обробки й залишали вигодовуватися протягом 4 днів. 2. Через 4 дні пари, що спаровуються, видаляли й піддавали другій обробці, поміщаючи їх на 25 г нової кукурудзи, обробленої 1) контролем з водою, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацину й 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацину. Пари, що спаровуються, вигодовувалися й відкладали яйця на цій кукурудзі протягом 7 днів. Кукурудзу після другої обробки оцінювали відносно появи потомства (див. розділ "Оцінка потомства" нижче). 3. Пари, що спаровуються, піддавали заключній обробці, яка передбачала комбінацію із занурення їх у засіб обробки (1) контроль з водою, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацину й 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацину на 5 секунд і поміщення їх у флакон із 10 зернами кукурудзи, які були покриті 1 мл 1) контролю з водою, 2) 250 мкг/мл ципрофлоксацину й 3) 2,5 мг/мл ципрофлоксацину.

Виживаність довгоносиків відстежували щодня протягом 18 днів, після чого ДНК екстрагували з довгоносиків, що залишалися, у кожній групі. Стисло, тіло довгоносиків піддавали поверхневій стерилізації шляхом занурення довгоносика в 6 95 розчин відбілювача приблизно на 5 секунд. Потім довгоносиків промивали в стерильній воді та ДНК екстрагували з кожного окремого довгоносика за допомогою набору для екстракції ДНК (Оіадеп, набір ОМеавзу) бо відповідно до інструкцій виробника. Концентрацію ДНК вимірювали за допомогою кількісної оцінки нуклеїнової кислоти з використанням МапоЮОгор та число копій ДНК 5РЕ ії довгоносиків вимірювали за допомогою ДРСК. Праймерами, використовуваними для ЗРЕ, були ФЗРСК бой ЕЕ (АТАССТОТССАСАСОСТТСО; ЗЕО ІО МО: 242) та аРсСк ой Кк (АТОТСатТОсАсСасСсАТТАСС; БО 10 МО: 243). Праймерами, використовуваними для довгоносиків (ВД-актин), були ЗАСТ144 РОК (СТО ООСОСТАСААСТССТ; 5ЕО ІЮ МО: 244) та

ЗАСТЗ14 ВЕМ (ОААТТаССТОадтТасдьсСАсит; 5БО І МО: 245) (І одіп еї аї., 2011). дРСВА проводили з використанням швидкості лінійної зміни для ДРСК-ампліфікації 1,6 градуса С/с та наступних умов: 1) 95 "С протягом 10 хвилин, 2) 95 "С протягом 15 секунд, 3) 57 "С протягом 30 секунд, 4) повторення етапів 2-3 40х, 5) 95 "С протягом 15 секунд, 6) 55 "С протягом 1 хвилини, 7) зміна швидкості лінійної зміни до 0,15 градуса С/с, 8) 95 С протягом 1 секунди. Дані ЗФЗРСК аналізували за допомогою аналітичного програмного забезпечення (Тпепто Ріхпег Зсіепійіс,

Омцапізіцайо Оевідп апа Апаїувів).

Оцінювання потомства

Через 25 днів одну повторність зерен кукурудзи після другої обробки дорослих пар, що спаровуються, розтинали (див. розділ "Схема експерименту", вище) для перевірки наявності будь-яких з личинок, що розвиваються, лялечок або дорослих довгоносиків. Більша частина розвитку довгоносиків Зйорпіш5 відбувається в зернових культурах/рисі/кукурудзі, і дорослі особини з'являються із зерен після того, як їх розвиток завершується. Зерна кукурудзи обережно розтинали скальпелем і будь-яких довгоносиків, що розвиваються, збирали й визначали відсоток дорослих особин, лялечок і личинок. Довгоносиків, отриманих у результаті розтину, потім піддавали поверхневій стерилізації і рівні «РЕ визначали за допомогою ЯРСЕ.

Зерна кукурудзи з двох повторностей, що залишалися, кожної із груп після другої обробки не розтинали, але перевіряли щодня щодо появи дорослих довгоносиків.

Оцінка проникнення антибіотика в кукурудзу 25 мг зерен кукурудзи поміщали в конічну пробірку на 50 мл і воду або 2,5 мг/мл або 0,25 мг/мл ципрофлоксацину у воді додавали до заповнення пробірки. Зерна замочували протягом 1,5 годин, як описано вище. Після замочування зерна висушували на повітрі й аналізували для визначення того, чи був здатний антибіотик покривати зерно й проникати в нього. Для дослідження цього концентрований зразок ОН5ба ЕзспПегіспіа соїї у воді розподіляли по 5 чашках

Зо з бульйоном Лурія (18). Відносно кожної чашки було виконано наступне: 1) додавали зерно кукурудзи, замочене у воді, 2) додавали ціле зерно кукурудзи, яке було замочено в 2,5 або 0,25 мг/мл ципрофлоксацину, і 3) додавали половинку зерна кукурудзи, яке було замочено в 2,5 або 0,25 мг/мл ципрофлоксацину, і поміщали вглиб чашки. Чашки інкубували протягом ночі при 37 градусах С і наступного дня оцінювали ріст бактерій і/або зону(зони) інгібування.

Замочування зерен кукурудзи в антибіотиках дозволяло антибіотикам покривати поверхню й проникати в зерна кукурудзи

Для дослідження того, чи міг ципрофлоксацин покривати поверхню зерна кукурудзи, зерна кукурудзи замочували у воді без антибіотиків або у воді з 2,5 або 0,25 мг/мл ципрофлоксацину (як описано вище). Потім концентровану культуру Е. соїї розподіляли по чашках з В ї одне з покритих зерен потім поміщали в центр чашки. Чашки інкубували протягом ночі, а наступного дня оцінювали ріст бактерій.

Газон з бактерій ріс на всій чашці із зерном кукурудзи, яке було покрито водою без будь-яких антибіотиків (фіг. 56А). На відміну від цього, бактерії не росли на чашках із цілими зернами кукурудзи, які були замочені в ципрофлоксацині в кожній із двох концентрацій (фіг. 568, ліві панелі). Ці дані показують, що спосіб покриття, використовуваний у цих експериментах, сприяв успішному покриттю ципрофлоксацином поверхні зерен кукурудзи та інгібуванню росту бактерій.

Для дослідження того, чи міг ципрофлоксацин проникати в зерно кукурудзи, зерна кукурудзи, замочені в 2,5 або 0,25 мг/мл ципрофлоксацині, розрізали навпіл і поміщали розрізаною стороною вниз на чашку з І В з концентрованою культурою Е. соїї. Чашки інкубували протягом ночі, а наступного дня оцінювали ріст бактерій. Ріст бактерій був відсутній у чашках із зернами, замоченими антибіотиком у будь-якій концентрації що вказувало на те, що ципрофлоксацин проникав у зерно кукурудзи (фіг. 56В, праві панелі). У сукупності ці дані вказують на те, що спосіб замочування зерен кукурудзи, застосовуваний у цих експериментах, приводив до успішного покриття зерен кукурудзи антибіотиком і його проникненню в них.

Обробка антибіотиками знижує рівні РЕ у поколінні БО

Пари, що спаровуються, 5. 7еатаїй5 розділяли на три окремі групи обробки, як визначено в розділі "Схема експерименту" (вище). Довгоносиків відстежували щодня, і всі довгоносики залишалися живими протягом експерименту. Через 18 днів після обробки довгоносиків бо піддавали поверхневій стерилізації, геномну ДНК екстрагували і рівні 5РЕ, вимірювали за допомогою ДЧРСОСК. Довгоносики, оброблені тільки водою, мали приблизно в 4 і 8 разів більші кількості РЕ порівняно з довгоносиками, обробленими відповідно 250 мкг/мл і 2,5 мг/мл ципрофлоксацину (фіг. 57). Ці дані вказують на те, що обробка довгоносиків ципрофлоксацином приводила до зниження рівнів 5РЕ.

Обробка антибіотиками затримує розвиток і знижує рівні РЕ у довгоносиків покоління Е1

Розвиток довгоносиків покоління Е1 оцінювали за допомогою розкриття зерен кукурудзи, у які пари, що спаровуються, ЕО відкладали яйця протягом 7 днів і які потім видаляли. Через 25 днів 12 потомків виявляли в кукурудзі, обробленій водою/контролем, при цьому більшість (767 95) потомства перебувала у формі лялечок (фіг. 58А). 13 і 20 потомків виявили в довгоносиків, оброблених відповідно 250 мкг/мл і 2,5 мг/мл ципрофлоксацину. Цікаво відзначити, що довгоносики, оброблені антибіотиком, демонстрували затримку розвитку порівняно з довгоносиками, обробленими контролем, при цьому більшість (38 і 65 95 у випадку 250 мкг/мл і 2,5 мг/мл ципрофлоксацину відповідно) потомків перебувало у формі личинок (фіг.

БВА).

Геномну ДНК екстрагували з довгоносиків, витягнутих із зерен кукурудзи і ФРСК проводили для вимірювання рівнів 5РЕ. Довгоносики Е1, оброблені водою, мали приблизно в 4 рази більш високі рівні ЗРЕ порівняно з довгоносиками, обробленими 2,5 мг/мл ципрофлоксацину (фіг. 588). Ці дані вказують на те, що обробка ципрофлоксацином знижувала рівні 5РЕ у довгоносиків, що приводило до затримки розвитку.

Обробка антибіотиками знижувала інтенсивність розмноження довгоносиків

Число довгоносиків, які з'являлися протягом 43 днів після того, як вихідні пари, що спаровуються, видаляли після другої обробки, використовували як показник плідності (фіг. 59А і 598). Поява перших довгоносиків відбувалася у день 29, і підраховували загальну кількість довгоносиків, які з'являлися до дня 43. Незважаючи на те, що довгоносики, оброблені водою й 250 мкг/мл, мали аналогічне число потомків Е1, у групі обробки 2,5 мг/мл з'являлося набагато менше потомків, що вказувало на те, що обробка антибіотиками знижувала рівні 5РЕ, негативно впливаючи на плідність довгоносиків.

Разом із попередніми прикладами ці дані демонструють здатність знищувати довгоносиків та зменшувати їхні інтенсивність розвитку, здатність до розмноження, тривалість життя та

Зо ендогенні популяції бактерій, наприклад пристосовуваність за допомогою обробки їх антибіотиком за допомогою декількох шляхів доставки.

Приклад 27. Мікроскопічні кліщі, оброблені розчином антибіотика

Даний приклад демонструє здатність знищувати, знижувати пристосовуваність двоплямистих павутинних кліщів за допомогою обробки їх рифампіцином, антибіотиком вузького спектра дії, який інгібує ДНК-залежний синтез РНК шляхом інгібування бактеріальної

РНК-полімерази, і доксицикліном, антибіотиком широкого спектра дії, який попереджає розмноження бактерій шляхом інгібування синтезу білка. Вплив рифампіцину і доксицикліну на мікроскопічних кліщів був опосередкований модулюванням популяцій бактерій, ендогенних щодо мікроскопічних кліщів, які були чутливими до антибіотиків.

Комахи, такі як комарі, і павукоподібні, такі як іксодові кліщі, можуть виступати в ролі переносників патогенів, що викликають серйозні захворювання в людини й тварин, такі як хвороба Лайма, лихоманка денге, трипаносомоз і малярія. Захворювання, передані переносниками, викликають мільйони людських смертей щорічно. Крім того, захворювання, передані переносниками, які інфікують тварин, таких як домашня худоба, представляють велике навантаження для системи охорони здоров'я в усьому світі. Таким чином, є потреба в способах і композиціях для контролю комах і павукоподібних, які переносять захворювання, передані переносниками. Двоплямисті павутинні кліщі є павукоподібними з того ж підкласу, що й іксодові кліщі. Таким чином, даний приклад демонструє способи й композиції, застосовувані для зниження пристосовуваності двоплямистих павутинних кліщів, і дає поглиблене розуміння зниження пристосовуваності іксодових кліщів.

Схема терапії

Для цих експериментів використовували дві обробки: 1) 0,025 95 5іЇмеї 1-77 (негативний контроль) або 2) суміш антибіотиків, що містить 250 мкг/мл рифампіцину й 500 мкг/мл доксицикліну. Вихідні розчини рифампіцину (ТоКуо СПетіса! Іпдивігу, СТО) одержували в концентрації 25 мг/мл у метанолі, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С. Вихідні розчини доксицикліну (від виробника) одержували в концентрації 50 мг/мл у воді, стерилізували шляхом пропускання через шприцевий фільтр із розміром пор 0,22 мкм та зберігали за -20 "С.

Схема експерименту

У цьому аналізі досліджували вплив розчину антибіотика на двоплямистих павутинних кліщів і визначали, як їхня пристосовуваність змінювалася в результаті цілеспрямованого впливу на ендогенні мікроорганізми.

Рослини квасолі Кідні вирощували в грунтовій суміші для горщикових культур при 24 "С з 16 год. світла й 8 год. темряви. Мікроскопічних кліщів вигодовували на рослинах квасолі Кідні при 26 "С і відносній вологості 15-20 96. Для обробок листові диски діаметром один дюйм нарізали з листя квасолі Кідні й обприскували 0,025 95 5іЇмеї І-77 (негативний контроль) або сумішшю антибіотиків (250 мкг/мл рифампіцину й 500 мкг/мл доксицикліну в 0,025 95 БІЇмеї 1-77) з використанням розпилювального повітряного компресора Мавіег Аїгрги5и Вгапа Сотргеззог моделі С-16-В8 Віаск Міпі. Компресор очищали етанолом до обробок, після них і між ними.

Рідину подавали в компресор за допомогою трубки діаметром чверть дюйма. Для кожної обробки використовували нову трубку.

Після того, як листові диски висихали, чотири з кожної групи обробки поміщали в чашку зверху вологої ватяної кульки, покритої шматочком серветки Кіту/ре. Кожну умову обробки виконували у двох повторностях. Потім 25 дорослих самиць мікроскопічних кліщів поміщали в чашку. У день 4 самиць видаляли із чашки, а яйця й личинки залишали на листових дисках.

У день 11 мікроскопічних кліщів на стадії протонімфи й дейтонімфи вилучали із чашок і поміщали в їхню власну пробірку для того, щоб можна було вимірювати виживаність. Кожна пробірка містила вологу ватяну кульку, покриту шматочком серветки Кітм/іре, з листовим диском діаметром у половину дюйма, обробленим негативним контролем або сумішшю.

Мікроскопічних кліщів спостерігали під препарувальною лупою щодня після вигодовування на листі, обробленому розчинами антибіотиків або контрольними розчинами, і класифікували у відповідності з наведеними нижче категоріями. - Живі: пересувалися на своїх кінцівках або рухалися після того, як у них ткнули малярським пензлем. - Мертві: нерухомі та не реагували на стимуляцію малярським пензлем.

Стерильний малярський пензель використовували для стимуляції мікроскопічних кліщів шляхом дотику до їхніх кінцівок. Мікроскопічних кліщів, класифікованих як мертвих, зберігали протягом усього аналізу й повторно перевіряли на рухливість щодня. Аналізи проводили при 26 76 і відносній вологості 1520 9.

Обробка антибіотиками підвищувала смертність мікроскопічних кліщів

Показники виживаності двоплямистих павутинних кліщів, оброблених сумішшю антибіотиків, порівнювали з мікроскопічними кліщами, обробленими негативним контролем. Показники виживаності мікроскопічних кліщів, оброблених сумішшю, знижувалися порівняно з контролем (фіг. 60).

Ці дані демонструють здатність знижувати пристосовуваність мікроскопічних кліщів за допомогою обробки їх розчином антибіотиків.

Приклад 28. Комахи, оброблені розчином очищених фагів

Даний приклад демонструє виділення й очищення зі зразків середовища фагів, які цілеспрямовано впливали на специфічні бактерії комах. Даний приклад також демонструє ефективність виділених фагів щодо цільових бактерій в аналізах бляшкоутворення іп міїго, виміряну за їхньою швидкістю споживання кисню й швидкістю закислення позаклітинного середовища. Нарешті, даний приклад демонструє ефективність фагів іп мімо, виміряну за здатністю фага цілеспрямовано впливати на бактерії мух за допомогою обробки їх виділеним фагом, що протидіє бактеріям. Даний приклад демонструє, що патогенна бактерія, яка знижувала пристосовуваність комахи, могла бути усунута за допомогою фага, що цілеспрямовано впливає на бактерію. Зокрема, Зе!гтайа тагсе5сеп5, яка являє собою патогенну бактерію мух, може бути усунута за допомогою фага, який був виділений із садового компосту.

Схема експерименту

Виділення специфічних бактеріофагів із природних джерел

Бактеріофаги, що протидіють цільовим бактеріям, виділяли з вихідного матеріалу середовища. Стисло, насичену культуру Зеїтайа тагсезсеп5 розводили у свіжому триптичному соєвому бульйоні (Т5В) подвійної концентрації та вирощували протягом «120 хвилин до ранньої лог-фази за 24-26 "С або в бульйоні Лурія-Бертані (І В) подвійної концентрації та вирощували протягом -90 хв. за 37 "С. Садовий компост готували шляхом гомогенізації в РВ5 та стерилізували шляхом фільтрації через фільтр із розміром пор 0,2 мкм. Неочищені стічні води стерилізували шляхом фільтрації через фільтр із розміром пор 0,2 мкм. Один об'єм фільтрованого вихідного матеріалу додавали до культур бактерій у лог-фазі та інкубування продовжували протягом 24 год. Збагачений вихідний матеріал готували шляхом осадження культур центрифугуванням і фільтрування надосадової рідини через мембрани з розміром пор 0,45 мкм.

Фаги виділяли шляхом висівання зразків на бактеріальні газони в подвійному шарі агару.

Стаціонарні культури бактерій поєднували з І В або Т5В з розплавленим 0,6 95 агару і наливали в чашки з ЇВ або ТЗВ з 1,595 агару. Після затвердіння 2,5 мкл розведених зразків фагів наносили на чашки з подвійним шаром агару і залишали для поглинання. Потім чашки загортали в обгортку й інкубували протягом ночі при 25 "С (Т5А) або 37 "С (ІВ), після цього оцінювали щодо утворення видимих бляшок. Свіжовиділені бляшки очищали за допомогою послідовного пасування окремих бляшок на цільовому штамі шляхом відбору бляшок у буфері

ЗМ (50 мМ Ттгі5з-НСЇІ рН 7,4), 10 мМ Мо950904, 100 мМ Масі) і інкубування протягом 15 хвилин при 55"С, потім повторення способу нанесення на подвійний шар агару, як вказано вище, з використанням суспензії бляшок.

Бактеріофаги успішно виділяли як зі стічних вод, так і з компосту, як докладно описане вище. Утворення бляшок було чітко помітно після нанесення зразків на газони з бактерій 5. тагсезсеп5, використовувані для збагачень.

Пасування, кількісна оцінка й розмноження бактеріофагів

Розмноження й утворення фагових лізатів для застосування в наступних експериментах здійснювали за допомогою бактеріофагів, виділених і очищених, як описано вище. Стисло, насичені культури бактерій розводили в 100 разів у свіжому середовищі й вирощували протягом 60-120 хвилин для досягнення стану ранньої логарифмічної фази росту з метою ефективного інфікування фагами. Суспензії фагів або фагові лізати додавали до культур у ранній логарифмічній фазі росту й інкубування продовжували до очищення бульйону, що вказувало на розмноження фагів і лізис бактерій, або до проходження 24 год. після інфікування. Лізати збирали шляхом осадження клітин центрифугуванням при 7197 х д протягом 20 хв. з наступним фільтруванням надосадової рідини через мембрани з розміром пор 0,45 або 0,2 мкм.

Відфільтровані лізати зберігали при 4 "с.

Підрахунок інфекційних фагових часток здійснювали за допомогою способу нанесення на подвійний шар агару. Стисло, в РВ5 виконували серійне розведення зразків 1:10 ії розведення наносили на чашки із затверділим подвійним шаром агару, отриманими з бактеріями хазяїна, як

Зо описано вище. Бляшкоутворювальні одиниці (БУС) підраховували після інкубування протягом ночі з визначенням приблизного титру зразків.

Аналіз іп міго виділених фагів шляхом вимірювання подиху бактерій

Аналізатор Зеапогзе ХЕе9б (Адіеп) використовували для вимірювання впливу фагів на бактерії шляхом відстежування швидкості споживання кисню (ОСК) і швидкості закислення позаклітинного середовища (ЕСАК) у ході інфікування. Планшети ХЕРе96б покривали за день до експериментів за допомогою 15 мкл 1 мг/мл вихідного розчину полі-І-лізину на лунку й висушували протягом ночі при 28 "С, і зонди ХЕРе96 урівноважували шляхом поміщення в лунки, що містять 200 мкл калібрувальної речовини ХЕ, та інкубування в темряві за кімнатної температури. Наступного дня планшети, покриті полі-І -лізином, промивали двічі за допомогою аанНго. Насичені нічні культури Е. соїї ВІ21 (ІВ, 37 "С) або 5. тагсе5сеп5 (ТЗВ, 2570) субкультивували за 1:100 в тому самому середовищі та вирощували за вентиляції протягом -2,5 год. за 30 "С. Потім культури розводили до 0.0. 600 нм «0,02 за допомогою того самого середовища. Засоби обробки одержували шляхом розведення вихідних розчинів у буфері 5М при 10х кінцевої концентрації й завантаження 20 мкл 10х розчинів у придатні отвори для введення проб планшета із зондами. Хоча зонди врівноважували в аналізаторі ХРе9б Ріих, планшети з бактеріями готували шляхом додавання 90 мкл бактеріальних суспензій або контролів із середовищем і центрифугували за 3000 об./хв. протягом 10 хв. Після центрифугування додаткові 90 мкл відповідного середовища обережно додавали в лунки так, щоб не порушити прилипання бактерій, доводячи загальний об'єм до 180 мкл на лунку.

Аналізатор ХБе9б проганяли при -30 "С відповідно до циклів змішування, очікування, зчитування тривалістю 1:00, 0:30, 3:00. Виконували чотири цикли, щоб забезпечити врівноважування/нормалізацію бактерій, потім уводили 20 мкл засобів обробки й цикли продовжували, як описано вище, протягом загального часу приблизно 6 год. Дані аналізували за допомогою пакета комп'ютерних програм Зеапогзе ХЕРе96 М/аме.

Вплив виділених бактеріофагів аналізували шляхом вимірювання швидкості споживання кисню (ОСК) і швидкості закислення позаклітинного середовища (ЕСАК) у бактерій в аналізаторі Зеапогхе ХЕе9б. Коли Е. соїї інфікували фагом Т7, а 5. тагсезсеп5 інфікували свіжовиділеним фагом Ф5ІтМмІ -С1, спостерігалися істотні зниження ОСК після короткочасних піків цієї швидкості (фіг. 64). Для обох фагів з обома організмами-хазяями аналіз беайогзе бо сприяв виявленню успішного інфікування фагами без необхідності в аналізах бляшкоутворення.

Таким чином, даний спосіб є застосовним для виявлення інфікування фагами організму-хазяїна, що не піддається традиційним способам виявлення фагів.

Аналіз трансдукції з використанням ЗУВК соїй для ідентифікації інфекції

Препарати бактеріофагів готували для забарвлення шляхом попередньої обробки нуклеазами для видалення позавірусних нуклеїнових кислот, які могли порушувати інтерпретацію флуоресцентного сигналу. Стисло, МоОСІ2 додавали до 10 мл фагового лізату за кінцевої концентрації 10 мМ і як РНКазу А (Оіадеп), так і ДНКазу І (ЗБідта) додавали до кінцевих концентрацій 10 мкг/мл. Зразки інкубували протягом 1 год. за кімнатної температури. Після обробки нуклеазами 5 мл лізатів поєднували з 1 мкл 5УВК сої (Тпегто, 10000х) і інкубували за кімнатної температури протягом «1,5 год. Надлишковий барвник потім видаляли зі зразків за допомогою ультрафільтраційних колонок Атісоп. Стисло, колонки Атісоп (15 мл, МУУСО 10 кДа) промивали шляхом додавання 10 мл буферу 5М і центрифугували при 5000 х 9, 47 протягом 5 хв. Мічені зразки фагів потім центрифугували в колонках при 5000 х 9, 4 "С доти, доки об'єм не знижувався приблизно в 10 разів (15-30 хв.). Для промивання зразків 5 мл буфера

ЗМ додавали в кожний резервуар і центрифугування повторювали з наступними двома додатковими промиваннями. Після третього промивання зразки, що залишалися, відбирали піпеткою з резервуарів Атісоп і доводили до приблизно 1 мл за допомогою буфера ЗМ. Для видалення більших контамінантів промиті й мічені зразки фагів центрифугували при 10000 х д протягом 2 хвилин і надосадову рідину з кожної пробірки потім фільтрували через мембрани з розміром пор 0,2 мкм у чорні мікропробірки й зберігали при 4 "С.

Насичені культури бактерій (Е. соїї Ме1655, вирощена в І В при 37 "С, 5. тагсезсепз і 5. 5зутрбіоїїса, вирощені в Т5В при 26 "С) одержували шляхом центрифугування 1 мл аліквот і однократного промивання за допомогою 1 мл РВ5 перед заключним ресуспендуванням за допомогою 1 мл РВ5. Мічені позитивним контролем бактерії забарвлювали шляхом об'єднання 500 мкл промитих бактерій і 1 мкл 5УВЕ сСоїй та інкубування протягом 1 год. у темряві за кімнатної температури. Бактерії осаджували шляхом центрифугування при 8000 х д протягом 5 хв. і промивали двічі рівним об'ємом РВ5З з наступним ресуспендуванням у кінцевому об'ємі 500 мкл РВ5. Об'єм 25 мкл забарвлених бактерій поєднували з 25 мкл буферу ЗМ у чорній мікропробірці, до якої додавали 50 мкл 1095 формаліну (595 кінцевий об'єм, «2 95

Зо формальдегід) і змішували шляхом клацання. Зразки фіксували за кімнатної температури протягом «З год. і потім промивали за допомогою ультрафільтраційних колонок Атісоп. Стисло, 500 мкл води РісоРиге додавали до колонок Атісоп (0,5 мл, ММУСО 100 кДа) і центрифугували при 14000 х д протягом 5 хв. для промивання мембран. Фіксовані зразки розводили шляхом додавання 400 мкл РВ5 і потім переносили в попередньо промиті мікроцентрифужні колонки і центрифугували при 14000 х уд протягом 10 хв. Колонки переносили у свіжі пробірки для збору зразків, і 500 мкл РВ5 додавали для розведення фіксатора, що залишався в ретентаті. Потім проводили два додаткові розведення за допомогою РВ5, у цілому в кількості трьох промивань.

Кінцеві ретентати розводили до близько 100 мкл, потім колонки поміщали догори дном у свіжі пробірки для збору зразків і центрифугували при 1000 х д протягом 2 хв. для збору зразків.

Промиті зразки переносили в чорні мікропробірки й зберігали при 4 "С.

Для експериментів з трансдукції й контролів 25 мкл бактерій (або РВ5) і 25 мкл міченого

ЗУВК соїй фага (або буфера 5М) поєднували в чорних мікропробірках та інкубували в нерухливому стані протягом 15-20 хв. за кімнатної температури для забезпечення адсорбції фагів і уприскування в бактерії, що отримують їх. Відразу після інкубування 50 мкл 10 95 формаліну додавали до зразків та фіксацію здійснювали за кімнатної температури протягом «4 год. Зразки промивали за допомогою РВ5 з використанням колонок Атісоп, як вказано вище.

Для успішного інфікування бактеріальної клітини-хазяїна було потрібно уприскування нуклеїнової кислоти бактеріофагів. Коліфаг РІ1Кс, мічений 5УВК соїа та інкубований разом з 5. тагсезсеп5, виявив присутність флуоресціюючих бактерій за допомогою мікроскопії, підтверджуючи застосування даного аналізу в процесі виділення фагів. Як і у випадку аналізу

Зеапогхе, даний підхід передбачав альтернативу традиційним способам аналізу фагів для забезпечення поширення на організми, що не піддаються аналізу бляшкоутворення. Крім того, аналіз трансдукції з використанням 5УВК сої не вимагав росту бактерій, тому був застосовний для аналізу фагів, що цілеспрямовано впливають на складні в культивуванні організми або навіть на організми, що не піддаються культивуванню, у тому числі ендосимбіонти, такі як

Висппега.

Дослідження ефективності фагів іп мімо у відношенні 5. тагсезсепз у мух Огозорпіїа теїаподавіег

Культури 5. тагсезсеп5 вирощували в триптичному соєвому бульйоні (Т5В) при 30 "С при бо постійному струшуванні при 200 об./хв.

Середовище, використовуване для вигодовування вихідних популяцій мух, являло собою середовище, що містить кукурудзяне борошно, меласу й дріжджі (11 г/л дріжджів, 54 г/л жовтого кукурудзяного борошна, 5 г/л агару, 66 мл/л меласи й 4,8 мл/л пропіонової кислоти). Усі компоненти цього раціону, за винятком пропіонової кислоти, нагрівали разом до 80"сС у деіонізованій воді за постійного перемішування протягом 30 хвилин, та їм давали охолонути до 60 "С. Потім домішували пропіонову кислоту та 50 мл раціону розділяли на аліквоти в окремі флакони та залишали охолоджуватися та тверднути. Мух вирощували при 26 "С, циклі світло:темрява 16:8 годин, при вологості близько 60 95.

Для інфікування мух 5. тагсезсеп5 тонку голку (з кінчиком шириною приблизно 10 мкм) занурювали в щільну нічну культуру в стаціонарній фазі і груди мух проколювали. Для цього експерименту чотири повторності по 10 самців і 10 самиць у кожній інфікували 5. тагсезсепз за допомогою способу проколювання голкою як позитивний контроль відносно смертності мух. У групах обробки чотирьом повторностям по 10 самців і 10 самиць у кожній уводили шляхом проколювання 5. тагсезсепвз і розчин, що містить приблизно 108 фагових частинок/мл. Нарешті, дві повторності по 10 самців і 10 самиць у кожній, яких не проколювали й не обробляли будь- яким іншим способом, використовували як негативний контроль відносно смертності.

Мух у всіх станах поміщали у флакони з їжею й інкубували при 26 "С, циклі світло:темрява 16:8, при вологості 60 95. Число живих і мертвих мух підраховували щодня протягом чотирьох днів після проколювання. Усі мухи, яким уводили шляхом проколювання тільки 5. тагсезсепв, були мертвими протягом періоду 24 годин після обробки. Для порівняння, більш ніж 60 95 мух у групі обробки фагами й усі мухи в групі контролю без обробки були живими в цей момент часу (фіг. 65). Крім того, більшість мух у групі обробки фагами і групі негативного контролю продовжували виживати протягом ще чотирьох днів після того, як експеримент завершували.

Для визначення причини загибелі мух мертвих мух із мух, яким вводили шляхом проколювання як 5. Магсезсепв, так і 5. тагсезсеп5 т фаги, гомогенізували та висівали. Чотири мертві мухи з кожної із чотирьох повторностей обробки як за допомогою 5. тагсезсепв, так і за допомогою 5. тагсезсеп5 ж- фагів гомогенізували в 100 мкл Т5В. Розведення 1:100 також одержували шляхом розведення гомогенату в Т5В. 10 мкл концентрованого гомогенату, а також розведення 1:100 висівали на чашки з Т5ЗА та інкубували протягом ночі за 30 "С. Під час

Зо дослідження чашок щодо росту бактерій у всіх чашках із мертвими мухами, яким вводили шляхом проколювання 5. ітагсезсепв5, був газон із бактерій, що ростуть на них, тоді як у чашках з мертвими мухами, яким вводили шляхом проколювання 5. птагсезсеп5 ж фаги, не було бактерій. Це вказувало на те, що за відсутності фага 5. тагсезсеп5, імовірно, індукувала септичний шок у мух, приводячи до їхньої смерті. У той же час у присутності фага смертність могла бути обумовлена ушкодженням, викликаним проколюванням голкою.

ІНШІ ВАРІАНТИ ЗДІЙСНЕННЯ

Незважаючи на те, що вищевикладений винахід був достатньо докладно описаний за допомогою ілюстрацій і прикладів з метою ясності розуміння, опису й приклади не слід тлумачити як такі, що обмежують обсяг даного винаходу. Розкриття всіх джерел патентної та наукової літератури, що цитуються у даному документі, явно включені в їхньому повному обсязі за допомогою посилання.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 ЕІад5Брір Ріопеегіпу, Іпс. «1205 КОМПОЗИЦІЇ ТА ВІДПОВІДНІ СПОСОБИ КОНТРОЛЮ ЗАХВОРЮВАНЬ, ЩО ПЕРЕДАЮТЬСЯ

ПЕРЕНОСНИКАМИ

«1305 51215-006403 «1505 705 62/583,912 «1515 2017-11-09 «1505 705 62/450,057 «1515 2017-01-24 «1605 245 «1705 РагбепсІп версія 3.5 «2105 1 «2115 1526 «2125 ДНК «213» Сагєвопе1і1їа гчадії «4005 1 баєссадсса саддсеєсссс басадсвтасс Єсдесасдас ЄсСсассссадд Єсасаааєса бо бассудєєдеа асадсаааає сасссаєдає асаасєсасе єссаєдоуаєдеЕ дасодддасоаде 120

Зо

ЧчеЕдсасаачду сЕСсСЧчадаасу баєссассуєЄ аасасєсєда єСсСвасчаєвта сеадсдчаєсс 180 саассєсаєд ааассдадеЕс асадаєсєса асссдаасста адаасасєєє єсаадаєсад 240 саєсаєдеЕвєд ссаєаєаддса Сасаассєсє сдсаасассс асєдбсадсас деЕдЕдсадсес 300 сЕасеєваєаа дддссаєдає дасеєсдасудє сдеЕссссасс сЕССЕССсСяає єсаєссаєєс9дуу 360 садеЕвєеєсева ЕсадеЕєссаа сасасьєссса десаааасаад асааддчеЕєд судсєсудєсає 420 адчассєаас ссаасасєсс асаасасуа сєдасдасад ссаєсдсадса сседссссаа 480 адсєаааааа дчссесастає єсссаасааа ЕЄСЕЄєсдддає деЕсааааєа ддсаадаєсе 540 гЕСУЧФСЄДдДЕСДЄ ассдааєсаа ассасаєдсе ссассудсесд єдсдадсссс судєсааєєеса 6о0 гЕсеЧадеєсес аасссвєдсуддд Єсубааєссс саддсуддеЕса асеєсаасудсу Єсадсесеесе ббо сассааааає абаєсаасьєє єЕсЄЄсасааа асааааєсас ааєсаєаава сеЕєааєааає 720 адЕсЧчасаєс дЕсСвассуса Єдчассасса дадсаєссаа ЄсссдеЕссусєс Єссссаєусс 780

Ессдєдеаєс адсудєсадса Єсаааасадча аасасусссє судссасвтадесе аєсссессад 840 асаєсєаадс ассссаседс гасссседаа асєсеаасес сеЕссевессає асссаадесе 900 аєаадсаєса ассессаасає гаааєсасьс єаасааасес ааааассаає сСеЕсСсааааас 960 аасссбдсаса сссеЕсрасус ссааєааєєс сдаєєсаасус сЄдсассссє сддбсаєвассд 1020 60 сддасЕдссдуд сасдаадева дссудеЕдсес сеЕсессасааа єаасудєсааа даєаасаєсьс 1080

СЕсСваєсаєва ааассесесс єсасеЕсвдеЕє дааадедеес сасаасссста адддассеЕссьє 1140 65 сасасасудсуд абаєадсєду аєсаадсеЕсє сдсеєсасвєудеЕ ссааваєссс ссасеЕдссдес 1200 сЕЕСсСсдбааа адеЕсєєддадудсс дЕДЕСЕСадс сссааєдедд ЕЕдЕЄсаєсс єСєаадаєса 1260 ассасуааєс асадесессвудє гаадсевеєва сеЕссаасаас саассааєєсс дасаєсаадсье 1320 сЕЕСваєсад сдаасдасає ссесуєесес сасссаєвта даєсасаваєє даасвассає 1380 асаєсеєссає асассеЕсеєсеЕ аасассааса дуєадаєссс сасасаєсас Ссасссуєес 1440 дседсеєаасс ассеЕсестаа єаасєєсдсас аасеЕєдсаєд Єдессаадсес аєсдсвадс 1500 бЕсааєсєда дссаєдаєса аасеса 1526 «2105 2 «2115 1536 «2125 ДНК «213» а1теугодідаєчт ВТ-В «4005 2 аачадсєсЧа СсаєдудсеЕса чаєсудаасус сСадсудсада саєаасасає дсаадеєсддад бо суддсаєЄсаєа саддеЕєддса адсддсдсас дддсдадсаа Сасаєдсааа басасссааа 120 адеЕдчачаасє аасусасуда аасуєасусс аасассудсає ааєсєсаєсасу адасааадса 180 чаЧчассєЧасє аааавдааасс аассЕсудсудс СЄЕсСвадаааа Єсасаєдссу дасвєадсвад 240 7 ЕсдЧдєачадс аааадссвтас сааддсаасу аєссуєадсеЕ дудєСсСєЧчадча чаєдаєсадс 300 сасасєддда ссдадаааад дсссадассс ссасддададд садсадсддд даасаєсєддва 360 сааєддддду аасссеєдаєс садесаєдсс дсуєдЕдвсда адаадуссЕс єддадЕєдсаа 420 адсассєсса дсдаачаача ааадєсадаа аасаааааде баєаасвтаєд асуддсасес 480 садаадаадс ассуддсєаас Сссдебдссад садссдсуддає аадасддадда деЕдсаадсдае 540 5 Баассачаасє Ссасеєддудсдє ааадчддасаєд СадудасєдуєсеЕ десвєаауссвс аєдедааадс 6о0 ссбасдсеєса асасаддаас ддаасааада ассдасааас бададесдсад аададдаадд ббо бадааєєссс ддаєдсадсдда Єдаааєдсує адагаєсвєдда аддаасасса дсєдсдааду 720 сачдассЕсссд ддссдасасс дасасєдада сєдсдааадсуд Єддддадсаа асаддаєсад 780 асасссєддс адсссасусєЕ дсааасчаєа Ссаассадсес дЕсд4цЧчасєссє Сааадаасес 840 з ЕдеЕдадсусбадд сєаасуусчає аадсєдаєсу сссдададчдаде асддесусаа ддссаааассе 900 саааєдаасє дасддддадсес сдсасаадсу деЕддадсаєд ЄддЕсЄвєааєє сдаєдсаасу 960 сдсаааассє бассвтасссс сСудасаєссаа адсасЕсеєсс адачаєддаа дудааєсдссева 1020 чадаасесєсу адасаддєдс Едсаєддсед ЕсдЕСсадсеЕс дЕДЕсЧдєЄЧдаа аєдеЕсОДЯЬЕ 1080 аадесссуба асудадсусаа сссеЕбдЕсСсЕ бадеєдссаа судсасааддс ддадаасеєсса 1140 т адчачдасєдс сЄддєдасааа ссуддаддаад деЕддддасчда суєсаадсса ссаєддсссе 1200

Баачадсаду дсаасасасу Єдссасааєд дсааааасаа адддесесусаа аасуддсааса 1260 бо Єдаадссаає сссаааагаааа ЕСЯЄсЕвадеі Есддудаєєдда дЕСєЄДдааасі сдассссаєба 1320 аадесудаає судссадсаає судєдааєсад ааєдесасуд Єдаасасуєє сеЕсдддсессве 1380

Чсасасассу сссуєЄсасас саєдчаасуд аааєсєдсасса дчаадсддсаа дЕсСсаассаа 1440 5 аааасадда аасадесасе асддеЕдЕдЧдє Есаєдассду дчдаєдаадесу Саасааддба 1500 чсеЕдсадчдудуч аасссдбдас бддаєсассе ссеєаа 1536

«2105 З «2115 1540 «2125 ДНК «213» Васіппегка арпідісоїЇїа, штам АР5 (АсукеєповБірпоп рівит) «4005 З ачадЕсСєЧдас сасуддсєсад асєдаасусс ддсддсаадс ссаасасаєд саадссадс бо т часадчсчача ачачадчсеєсу сссссссєсуєЄ суддсаадсудд сааасудаудаєд адсаасаєссе 120 чаччаєссас ссаааачадч чоачаєаасста ссадаааєду бадссєаасас сдсаєЄєааєсде 180

Єдаааасса аадєсддддда ссЕсєссдудсес ЄсасгдсЕєсс ддаєдаассс адасчадасс 240 адзссєЕдеЕсЧу Садчадесааса дсссассаа дсаасчаєсє ссадссуддес ЄдЧадчадчдчдаєса 300 ассадссаса сєдчаасєда дчасасудссс адасссссас доудадчаддсадс адчсоддоадаає 360 7 асєдсасаасє дадсчдааадс ссдаєдсадс сасдссудсує дсасдаадаа ддсссвадад 420

Есдсааадста сЕсеєсадсуду дччдадчааааа аасаааасса асаассссає сссаєсдасас 480 басссдсада адаадсассуд дссаасессд Сдссадсадс сдсуддбааса сддаддадеЕдс 540 аадсуєєаас сачааєсасе доддссааа адсчасубадуча ЄдачсЕсссса адссадаєде 6о0 чаааєссста ддсєЕсаассє адчаасєдса ЄЄсСЧдааассу даааассадча дядЕсссасада ббо т чачаччаєача аєсссаддасєд єадсуддЕЧдаа аєдсуєачає асссудччадчда асасссуаєду 720 сдааадсддс сссссааасу аааасєдаса сбдаддсдсуд ааадсдсддад дадсааасад 780 чаєсадасас ссеЕддсадсс саєдссдбаа асчасдеЕсда сссддадачеєє дЕсЕСсСаада 840 чаадеєдасеЕс ссдаадсвєаа сдудсаєсааЧдс сдассусссЧ доуачадсасудд ссдсаадаеєе 900 аааасссааа Счаасєдасу додддсссудса саадчсучдеЕдч адсаєдесдачє Єсааєєссдає 960 є чдсаасусудаа ааассеєсасс гддеЕсеЕєдас аєссасадаа СЕСЕссадаа асааадааді 1020 дссЕссуддда дссдсдадас аддедсєдса ЕддсЕдЕсСУдєЄ садсесудєдЕ сдедаааєде 1080 сбддасвєааде сссдсаасуда дсдсаасссє баєсссссдс Сдссадсудде Ссуддссдуддда 1140 асссададдда чдчасєдссуддЕ баєсааассуд аддаачддєду дчасдасуєс аадессаєсає 1200 чдасссЕсасу ассадддсба сасасудєдсе асааєуддеєс аєасааада аадсаааєсе 1260 " дсааадасаа дсааассєса бааадсааає суєсадсссууу ассддадсесс дсаасесдас 1320 бссасааде суддааєсудсє адсааєсудєд даєсадааєд ссасуддеєдаа Сасдеєсссд 1380 дассЕєдсас асассдсессуд Есасассаєд дчдадеЕдаддЕс дсаааадаад саддсаєсся 1440 аасссеЕссаа ааддааддсуд сЕбассасеє єдедаєєсає дасєдаддчєд аадесдбсаас 1500 ааддсаассу саддддаасс ЕдсддЕєЄдчдча Есассессьє 1540 60 «2105 4 «2115 1552 «2125 ДНК 65 «213» Васппегка арпідісоїЇа, штам 59д (5спіларпі5 дгатіпит) «4005 4 ааасєдаача чЕсСєЧдаєсає ддсссачаєс даасудссддс ддсаадссса асасаєдсаа бо чЧчеЕсчдадсддс адсчдаааача аадсЕсусеЕс ссесдеЕсуудс дадсудсааа сддуаєЄдЧадчса 120 асасєссуддадч аєсєдсссаа аачаччачуачЧа Саассассад ааасуддсадс Саасассодса 180 » Бааадсєдаа ааассаааде ддадуаЧассЕс сЕсСвєаааддс сссаєдсеЕвс содЧчаєдаасс 240 садасдадає гадсЕсдесд деЕааддсааа адсссассаа ддсаасдаєс Есеадседде 300 10 сЕдададдасє аассадссас асєддаасєдд адасасуддес садасєссса сдддаддсад 360 садеддддаа баєсдсасаа Сдддсдааад ссеєдаєсдсад сраєдссдсда ЕдбЕаєдаада 420 аддсессвєадчду ЧчЧЕсСЧсаааде асЕсссадсу дчададчаааа аасєсаааасс аасааєєссса 480 т гЕсесудсЧдасу Сбасссуса аадчаадсасс ддсєаасеєсс дсдссадсад ссдсдадєЄаає 540 асчачачччаєд счадсуєсаа Єсадааєсас Єддадсусбааа дчадсасубадч чясаддЕсесее 6о0 20 аадссадасд Єдааасссссї аддсєссаасс Саддааседс ассєдааасе дааасдсвад ббо адсаєсусад аччачадуєачд ааєсссаддс деадсуддеЕЧча ааєдсуєача сасссоддад 720 ааєсасссуєд дсдааадсуд ссЕССсССааас даасассдас асєдаддєдс дааадсуєд 780 7 ччдадсаааса дчаєсадчаса ссссддєадс ссаєдссуєба аасчаєдсесуа асссддадає 840

ЄдЕСЕСсСсаа ачаадеєдасеЕ єссдаадсва асудсуєсаа Єсдассудссє доаддчдадсасу 900 30 дссдсааддс Саааасєсаа асдааєєдас дддддсессдсе асаадсдуаєд дадсаєсдед 960

СЕсааєссуда сдсаасусуда аааассеєсас седдЕСЕсда сасссасада аєсеЕсесада 1020 аасаааааа сСдсссссда аасєдедада саддедссдс аєддасесдессу ЄсадсеЕсЧчед 1080 сЕдеЕдааає седддЕеЕсаад Есссудсаасу адсудсаассс сбаєссссвд себдссадсоад 1140

Ессуддссудду аасєсадчачдч ачасєдссудд Єсасааассу дчаччааччаєд доадасчасає 1200 саадесаєса ЕддсссЕсас дассадддсс асасасуєдс басааєддуаєє ваєасааада 1260 чаадсааасс сдсааадаса адсааассєс аєбааадсааа ссудбадессу дасеєдчадес 1320 бдсаасссуда сессасудаад Есуддааєсудс бадесааєсує дчдаєсадаає дссасдудеда 1380 з асасдеєсссс дддссЕсдсба сасассудссс дЕсасассає доададеддудє Єдсаааадаа 1440 чсадаєсєсс сбаассасдаа адсддааддс дЕСсСвєассасс сеЕдеЕдаєсса сдассддаде 1500 чаадссудсаа сааддеаасс дсаддддаас ссдсудЕсуд ассассеЕсся са 1552 «2105 15 «2115 1566 «2125 ДНК «213» Васппегка арпідісоїЇа, штам Вр (Ваілопдіа рівсасіаеє) «4005 5 асєЕсааааєс даачадсеєсу ассаєдудсеєс ачаєсудаасу ссддсддсаа дсссаасаса бо є ЕдсаадесЧда дсудсаєсєсууа адаааадсеєс ассеЕсеєсвєддд сддсдадсуду сааасуддуєд 120 адєеаасассс дадчдаєсвас ссаааачачду додадасаасса Єсуддааасча СЄддссєаавас 180 65 судсаєааєдс єєСссааасаа ассааауса дддастаааа СЕЄСрадсесос басдсессва 240 чаєдаассса дасчачаєса чсеЕсЧаєдує ааддсааєдудч ссвєассаадч счасаєсєсес 300

Бадсєддссс дачаддаєаа ссадссасас сЄддаассдач асасуддеЕсса дасеЕсссас 360 ччаадчдсадса чЕдчодачЧааса ЄсСудсасааєд ддсєааадсс Єдчасдсадсє аєдссодсєд 420 баєдаадаад дссЕсСадддЕ Єдсааадсас СсСЕСадсдд дчаддааадаа Єсаєдессваа 480

Ббаєасаваєс сеєдеєЧдасусєє асссудаадаа даадсассуд ссаассссудсє дссадсадсс 540 чсчддЕаасас дчадчдчдучсєдсу адсуєсааєс адаасстассуд ддсудєааача дсасєадас 6о0 т ЧЯаєЕсваєсаа деЕсачасуєд ааассссса дсссаасеса ддаассдсає ссдааассаа ббо

Бачассадча СсссаєсачачЧ ччдадчасадаа СЕСсаддеєдеЕ адсдчдєдааа Сдсуасбадаєса 720

Есградаддаа СасссудЕддс дааадсдасс Сссгаааєда ааасєдасудс Єдаддсдсда 780 аадсудсєдаду адсааасадч асєачаєасс сЕддсадеісс асдсєдсааа счаєдеЕсдас 840

ЕсоодЧчадЧчсєу СЕСсСсСсСвадачч аадсуддссєс сдаадссаас дсасєаадеєс дассуссевєдау 900 7 ччвадеасудудс судсаадудсса ааасєсааає дааєсуасууч дддсссусас аадсдчсдда 960 чсаєдеЕддчесє сааєссудаєд саасудсдаад аассесассоє ддаєссєдаса сссасадаає 1020

СЕсеєсадада сСаааададсд ссеЕсадуддаа ссбаєдадаса ддаєдсєдсає ддасеЕдЕСЯєсС 1080 адсЕСсСУуєдеЕє дедааасдеє дддадеєсаадес ссдсаасуда судсаассссє ассссЕесдее 1140 дссаєсаддс сасдсєддда асесададда дасєдссудде басааассудча аддааддеда 1200 т ччаєдасуєс аадссаєсає ддсссеЕвбасуд ассадддсба сасасуєдсе асаасддсає 1260 асасааада абдсаасесе дсдаадаєаа дсааасссса сСааадсаєдес сдсадессдчд 1320 ассдуддадеЕсе дсаасесдас єссасдаадеі аддааєсудсеєс адсаасєсуєд даєсадааєд 1380 ссасддеЕдаа басуєєсссу ддссЕбдсас асассдсссуд ЕЄсасассаєд ддадеЕдавчЕє 1440 дсаааадаа саддсадссє аассадаєса ЕєеЕсаєєдда дадсудсеєсас сасеЕстєдеда 1500 є беЕсаєдассуд дддедаадес дсаасаадді аассудєбаддуд даассєдсудд Єбдчдаєсасс 1550 ссеєса 1556 «2105 6 «2115 828 «2125 ДНК «213» Виасппега арпідаісоїа ВСсс «4005 6 асчачаєсає Саасаєсаєаа аааєсаєдеЕс ссаассаааа аассадчдаса ааассєєссса бо садааєааад ааасстаєсаа Ссадаєаасеє ааєсеєаасаа асаєсааєаа аааєсдаєаає 120 т ассаєсудааа Садчаєсадуч ассаддадсу ЄсаасеЕсеєсс ссасєссуєа аассаєсааа 180 аааасчдаєа сассадааає єдасєдаадає сЕеЕууедеЕєеєс сеЕсСЄаасесса аадеставсе 240 бо аєсаааааає сСасааастає аассоусеєдає ассаєаааає седасеєсссу сЕдеєсеЕсьсе 300

Єссеєсасада аасасааааа асасаддеЕс аєсддєааєс сассаєаєаа сасесдссасе 360 ангаєсЕсьвс сааааасаає гаааврсєсьс саєаасаєаа сеєдасаєдса сЕсСТсаєдьсь 420 5 сааааадаад бадсааадад аєсасвадсеЕ асеЕсссддеа сеааадааса Єддсадаєтва 480 адсаєсаєсу сасаасаєсє єсасаадаєа дааасєдеєва сеааєсуєсаа саааєсесаає 540

СЕСЕсСеЕсСсвса сЕССсСаааеі адаєсєстасе єЕсЕеЕЄвасає свеасессстєаа асаєссесаає 6о0 адсааасаса ааасадаєаа асасєсєесєсеЕ дЕЕвадаає сааєсасса ассессевве ббо саасасадаа дааааєєсеЕс аааєааєсаає сесаасаєсьс вавеєвєеєсвтас аааадааєса 720 агєсеЕсеЕссау асаєсдаєсс асаєсєсаада дсадааааєд СЕсСсСЕЄсаає ссаасаєвдаче 780 авааєсааєда аасастаєсє даааадаааа асеєсвтаєдеЕє садаєсаа 828 «2105 7 «2115 921 «2125 ДНК «213» Виасіппегка арпідаісоїЇїа (Сіпака Єчузаті1іпа) «4005 7

Есасссвтаєс ссасаєаєас дсаасаєсус дссдсудсєдса садчаєєсеЕє сеЕсдаасесс бо ачаєаєаєєсє ддасеєсаасас деЕссаасааа асбасесес сесеессасеьс сесесаєевє 120 сааєєсадна аєаддаадеЕс сЕсвсадддсає асссддаєаа Есасеєдеєаає ЕсЕсааєааа 180 чЧЕЕссСЕваса ассссаєссс сааєсадаасуд аааассааса асадсааєєє єсдаєсссдда 240 аєдеаасаєу сесаасааєсаа ЕСЕсСЕаасає єсваєддеаає ссаєєстаєсес сеЕсддеЕсаає 300 асаєаєссуда ааадсеЕсдаа асдеЕсєсеЕсудє адсєдчаєсує сеааасеєсує сасасеєсвду 360

Зо часєчасесе сесасдаєсє даасеаасес єаасуєдсеЕєс деЕсСасудееєс сеЕсесесває 420 сеЕдеаасаєу асддсеєсдуучд аврасєєееЕе єдсувавєсеєс ссеєсуссаа аасесестває 480

Сассеусеєсь ассусеЕсесе 9уєсЕдЕЕЕ ЕЄЕєаассає Судассаассу асаєсссада 540

Есвсаддчдєєсаєсасудсаєає ссаааддсесс аєсасєєсаєба ааєсєдааааєс сєсуадаєбасе 6о0 ачдаасєсаас сдсасєєдаад ааасасстаа аєсєааєаає аєсссаєсса сеЕсСтваєссьсь ббо авєсЕсЕсесе СЕСЕСеааса єЕсЕСсСЕссаає аєсадаааає свеассвєаааа асассесааа 720

Єсудсдааєсє сеЕсасеЕсесе єсссдавевєсє саєсадаєсує дддЕсСЕсдає саасассаєва 780

ЄаассеЕєсса Ссаассссса асссссдаад аагсєдсеЕвЕсс дааєдассас сасссссааа 840 бдсасааєса асасаєдрас сус равєесваау сасеєдсаєда сЕСсСЕЕсвЕ 900 баааасадде ссаєдааєса Є 9321 «2105 8 «2115 822 «2125 ДНК «213» Васіппегка арпідісоїа, штам 0002 (Мули5 регсзісає) «4005 8 асчаааадста СааааасеЕсє єаааавгасас ЄЕсСссвєдеда ааааасаєуду асаааассєсе бо бо сЕбаєсааса аададаєсає аааааасаєс деЕсСааааааа Сбааєсєссааа басСсадаасаа 120 асасєсадса аааєсудасс адчаєсадсс дсаєсаассу адсссасаєс Єсадесаєса 180 ааачадеєЕсаа Садеєсаєєда аасачассує аасссаєсає ассссссааа аааасаасса 240 65

СЕсваєссаа аасесаасаде ЕСсЕЕсЕдЕСяГа даєдсеЕеєсаа ассеєсааєса сасаааєєсса 300

СЕсвєаєаааа аааасааасе ааєссудваєс єсєеддеєааєс сассаєаєаа сасссссаса 360

ЄсЕсеЕсааєса СсЕСсСЕсСеЕсСасе єсаасасаєє ададесааєсеєс аадасаєдаа сСЕсСтсаєсдсеее 420 сааааадаад ЕсСдсЕдсаад аєсааєсдса єсасссддаа асааасаєса судеЕсддеевд 480 адсаєсаває сесаасаєса Есдєдаваєс аааарєеєсає сааасуєсдс ссседаадає 540

СЕсєдудссса сЕСсСсдададе Есаєєсвтава ЕсеЕЧдваааєс саасассяєса Ссаєааєсься 6о0 ссЕсСаСЕЄд ЕЄваєдаєсає сСаасаєєссса адсссвтаєса саааєааддс ЕсСеЕссаааає ббо ачаачааааа Сассасуєса садсєсаааа аасссасєсє ссдааасаас Єссаєссааає 720

Єбадаєаєса ассссадасе аададсєдаа аараєєсєсьу СЕсСЕеЕссаєса седессааєса 780

Чдссааєсаєс сдсасааааа аааєсавасе ааааааааєс аа 822 «2105 19 «2115 822 «2125 ДНК «213» Васіппегка арпідісоїЇїа, штам АК (Асукеєповірноп Копаоїі) «4005 19 ассасааааа асєєсааааа асасєсеєєссеЕ Ссаааааддсе асддасаааа ССЕЕсССвдЕсС бо аасасааааа стаєссаааа чаєаассаас асаассаасс сааасассаа асааасаєса 120 чЧчедчдааасєу дчасссудчдасє адссдсаєса асаааассаа ЄСсдессСааєс ассадаадаа 180

Зо

СеаасєдеЕса седааасада Есссааєсса єЕєдДдЕЕЕЕеЕсає сааааааасу Сесаєсестає 240

Єсаааассаа садеЕсесеса єсаадасудсе Есаааєєсса аєсасасада сСеЕсСдЄЕсває 300 аадаааааєс аассаасьсу єдЕСЕЄсєдуда аасеЕєдссає аєагасасссс сСасаєссвса 360 аєсасеєссьс сасессааєса гаєсааадеьс аєєсаадаєа сдаасессає десасадааа 420 чаччєсЧсед ааачаєсаає ЄСсСссасеєссс дадааасааає сесаєсєдудсесу ЄЄссСаадсаєс 480 авгсеєсеєСсадеі асєсасєдєаа аассааааса єсаєсаааєд сеєдсассєда адаєсесса 540 ссрагассда аадедсаєєс суасеЕсесаєс аасесаасес сесавєассаа Есссссабсає 6о0

ЄЕС васд асасаааєсає ссеЕсадеЕсєсеЕ ассасаадаа асдсеЕсеєсса ааасадааду ббо ааааєсеєсус деЕСсасадеЕсеє ааааааєсса ЄЄСсСсєдааа аачаассаає Ссаассадаа 720 аєсааєссаа асєссасудадс Едаааасаєє єсвраєсеЕсеєс адсаєєдеса аєсадсеєдає 780 басеєсасаса аааааєсааа саасєсевєдса ааааєсааєєс аа 822 «2105 10 «2115 822 «2125 ДНК «213» Васппегка арпідісоїЇа, штам Оа (Ого1іейсоп аптрговзіае) «4005 10 бо аєдасассаа асСсааасаєаа аааасстасє ссЕЄсСааааа дасасддаса аааєссессс бо чЧсааасача аааєааєсаа ааасасєсаєс аааасааєса ассссааааа аасудсаааса 120

Свбаєсадааа ссддассудду ЕЄгаддедсуд ЕбЄаасаааас сеаєсєддеєда ассествтааає 180 65 чаасевсаєсу Єсаєсдааає адаєсстєаає асаєваєсьс сеєсєааадаа асдсаваєсе 240 сЕсдаєааає сааааасаєса Есдеєсаєаає дсеЕсвадаєс сеєааєсаєаа ааасаваєсс 300 басааааааа дссааєсаає Есдравєееєс ддаааєєсас сасасаасає сесвасаєсь 360

Єеаасаасає асссаєссєсу даасаєєдає аєсаєсєсаа аєаєдаасес сасдессасаа 420 саадаадедд ссаааадаєс адсеєдссасє сседдсдааа аасеЕсСтаєдда ЕсдсЕсСааде 480 аєсасаєсеєс аасассаєсу єаасаєсааа асаєсаєсас аєаєссудасєсс Єдаааасься 540 саасссаєєс сеааадеЕсаа сСесааєсдеЕєєс десаааєстаа сеЕСсСсаває єсасеєсеєссе 6о0 сасЕседеЕс аєдасаєсаа Есваєсаасеі адсаєсасаа аасасусесс ссаасасада ббо адаааваєає сдсудссаєад ЕсСЕаадааає ЕСЕ ЕеЕСвУ адсаачасеєс аасессаєєеса 720 чаааєєааєс сааасеєсаад адсєдаааає дчеЕсЕсСсаєвта сеЕсаасаєсу Ссаасєддсе 780 аасааєєссає асааааааса гааасадеЕеєс аєсаасааєс аа 822 «2105 11 «2115» 816 «2125 ДНК «213» Виасіппегка арпідісоїа (Арпі5 діусіпев) «4005 11 асдаааавадс асаєссстає аааааваасеєс адссаааасє єсссеєЧдвадча сСЕсЧСЧадесосу бо асєсааааваа Сааєсааасєє саєсааєссу садесаааєу ааасасєсдучє Єдаааєсода 120

Зо ссдуддаєсад сєдсваєсас ссудассстаєєс судєдаєсьєда гадаєсаєєє ааєсдєдаєс 180 чааасєдаєса аааєсесасє адасадаєса ааасадессс сасеєсвсаєєс аааассааса 240

Чбасаєсасс аадчасдсЕсс адсасєєєдає сСасасааадс басєвєаасаа ааааааасааа 300 сгадсєсуаа СЕСсСеЕсОддеаа Есвассаває саєдеЕєеєста суєсєєсаає ассдсаєєса 360

Есєаааадаа Ссаасаєсає сааачасаєд аасєссаєдс сасааааача адссдсєсдаа 420 судєєвааєвд саасессаду Садесаааєса сасоуддесуєє єаадсаєтає єссссаасає 480 басєдеєааса саааадесесе асеєдсаєдед ЕсЕєЄСсаааає дЕсСЄсааасс адесесссааа 540

Чдеадаассаа СЕСЕССсССваа ЕСсСЕДдасасся гагасеєдаєс ассесссеєса сеЕСтвасстває 6о0 ааєдеааасу СЕСЕСсСадеєса сасєсасааасєс ссадсЕсєсс аааааадаа ааааасаєса ббо судєЕсасадьє гаддеєаааає аєсеєсссудаа ааадесеєсьса саааасєтааа саєсвєааєссс 720 аааєсаадас сеєдадаасає єсссасаєса саасаєєуєс адсвсаєссаа ссасаєдаєва 780 чааааваєааса сссассадда асаєсдеЕседеЕ авєесваа 816 «2105 12 «2115 1463 «2125 ДНК «213» Аппапаїа ріпісоїа 60 «4005 12 ачасєдаасу сєддсуддсає дсссвбасаса Сдсаадссуа асуддеєааса дчЕСЕсСсддас бо

ЧчсЕдЧасчадс доасчдаасуддч Єчадєаасас аєсуддаасує дсссадеЕсудє доаодоачЧасаас 120 65

Басссудааа адсадссаає ассусаєасу аєсєдадчає дааадсуддад дЧассєєсо9Чу 180 ссесдсдсда Есддадсуддс сдаєддсада ЕсаддсадеЕс ддасдддаєаа аадсеєсасса 240 адссчасчає сеєдсадсєдуд єсєЧдачдчаддча сдассадсса сассддаасс дадасасоде 300 ссадассссє асдддададдса дсадсдддада асасєдсаса аєдддсдсаа дссєдаєдса 360 » ЧчесвЕаєдеЕСцЧс дЕЧДєаєдаа аачассєса дчасєдсааад сасесссдає адсасаадаа 420 чаєаасчача сеєаасааєсє саєсуєссЧча судєсадссає адаадчаадса ссуддсесєаасе 480 10 ссудєЕдссадс адссдсддеа аєасдддддад ЕдссадсудеЕє ааєсддааєс ассддадсдеа 540 аачачсасує адччаєдуаєєса єсаадссача СдсЧдаааєсс ссддасссаа Єссаддаасе 6о0 чсасєсуааа сеєаасадчсє адчадеЕсеєсуєЄ ачачоачадчуає адааєсссад деЕдсадсоаде ббо т чаааєдсаєа часасєссада дчдаасаєса Сддсдааддс дчассЕсссдуа асчаєаассу 720 асудсєаааас дсдааадсає дуддсадсааа садчаєсада басссєддеа деЕСссаєдсс 780 20 бааасчаєдеЕ сдассаадад чесдчдаддса Саассстваа ЄСЕСсСЕДдсадс ЄаасудсдеЕса 840 адеЕсдЧассудс сЕдчуачачдса суддссдсаа дссаааассс аааєчааєсд асдаддоадсесе 900 чсасаачсчч СЄддадсаєдЕ чдЕсєаассєс даєдсаасудс дсаааассєс асссддссесе 960 7 часаєссаса дааєсеєсаса даааєдсада адсдсаасес даасєдєдад асаддедсед 1020 саєддсеЕдЕсС дЕсадсеЕсЧЕ дЕсдсЧдааає ЧчеЕсддддесаа деЕсссудсаас дадсдсаасс 1080 30 сСЕгдЕССЕЕЄ деЕвассаєаа дасєсаауда асссааадда дассдссуддЕ даєааассду 1140 аддаачддсуд ддасудасудеєс аадссаєсає ддсссеЕваєд ассаддудсба сасасдєдсе 1200 асаасудсає асасааадад асєдсаасаєє дсдаааєсааа дссааєсєса сСаааасаєдве 1260 ссрадеєсдда аседдадеЕсє дсаасеєсудас Єссасдааді суддааєсудсе адесааєсччєд 1320 чаєссадсаєу ссасудедаа гаєдеЕсєєсса ддссЕсдсас асассуусссу Єсасассаєд 1380 чаадсдуддаєсє дсаааагдаад баадаааанє аассеЕсссвта асааддаааєс аасеЕсассас 1440 сЕсдесдасьс асааседоада да 1463 «2105 13 «2115 1554 «2125 ДНК «213» Могапеї1а епаобіа «4005 13

ЕСЕСЕсСєдуЧЄ аадчаддєда єссаассуса ддссссссса судчеєсассвєс деЕсасасесес бо сассссадсс асдаассаса аадеддсаад сдсессссста аааддеЕсадд ссасссасеєс 120 сСЕЄЕгдсаас ссасеЕєссає даєдедасодд дсуддЕдсдЕа сааддсссдре даасдрасеЕс 180 ассудєддсає сссдаєссас дчаєсасвсадс дасєсссасе сєсасдддадесс дадессудсада 240 сЕСсССсааєссд дассасдасуд сасеЕсвтаєда ддЕсСсдссаа сЕСЕСдсдад сЕсдсесесес 300 є гЕсеЕдваєдсу ссаєсдусадс асусдсдса сссвасссує аадддссаєд аєчасеєєсдас 360

ЧдеЕсаєсссса сссесссссу дсєсассасс дадсадеЕсСеЕсс ЕСЕЧдадеЕссс сдассддааєс 420 65 ЧдсЕддсаааа аадчдасаадд деЕсдсдсЕєсд Єсдсудуддасс Єаасссааса ЄСесСасааса 480 сдадсєдасд асадссасбдс адсасссдесс єсададессс сдааддсасс аааасаєсьс 540

Едссаадсеєс Єссуддасуєс аачачсадс аадддсеєсеЕсс дсудсєєдсаєс дааєсааасс 6о0 асасудсеєсса ссуссеЕдедс дддсссссуєЄ сааєссаєсеє дадсеєсваас сЕсдсоддаесо ббо бассссссад дсддссдасс бЄаасусдесба ассасдааад ссасадесєса адассасадс 720

ЕсеєСаааєсу асаєадсеєса суддсуєЄдчас Сассадддса Єсеєаасссту сЕсДдсЕсСсесс 780 асусЕсеЕсуєЄ ассеєдадсує садсасєсуєЄ ссадддддсес дсессєсдсса сЕддсасесс 840 т Ессачаєсаєс Сасасасєсс ассудссасас седчаасєсеє ассссссессс асдадасесе 900 адссвєаєса СЕсСсаааєдс адеЕсссвтада Єсаадсссад дчдасєєссаса Єссдасессаа 960

Сааассудсесе асусассссє гасудсссадеЕ ааєєссддаєс аасусєсдса сссеЕСсдтває 1020 бассдсуддасеЕ дссддсасуд адесадссуд ЕдсЕЕсСЕсЄсс деаддеєаасу Ссааєссааєса 1080 ассубаєсаа ддаваєсдсес ЕсссЕССсССсСва сєдааадсудс СЕсасаассс дааддссеєсс 1140 7 бесасасасу суддсаєддудсе дсаєсадддє ЕЕЄсссссаєєс дедсаасаєс ссссасеєдсе 1200 дссЕСсСссуєба ддадессдда ссудєдЕсеЕса дЕєссадсудс ддсєддеєсає ссесссадас 1260 садсєаддда ЕсдЕСусста ддсаадсвсає сбассссассеє асеадсвєаає сссаєсєдад 1320 беЕсаєссдаа чдасдсдаддс сааааддесс сссасеєєсду сЄсесвбасудаса ссаєсдсудуава 1380 ббадсвассу СЄЕсСссадсад Есбаєсссссе ссаєсаддса даєссссада сеЕсСвасессас 1440 т ссдбЕсдсвд сЕсСудссуудса ааааадсааа СЕСЕсСЕеЕссс ЕєдссдсеЕса асеЕсдсаєдве 1500 чЧЕсаддссвд ссудссадсуєЄ Єсааєсєдад ссаєдаєсаа асесессаає сбааа 1554

З5 «2105 14 «2115 1539 «2125 ДНК «213» ІвНіКамаєеї1а сарзціаєса Моркобе «4005 14 ааасєдаача чЕсСєЧдаєсає ддсссачаєс даасудссадс ддсаадссса асасаєдсаа бо чЧчеЕсчдаасудс аасадааааа адзсссєдссЕс десусеєдасу адсдасуадас дадеЕдадсаа 120 з гЕдЕСєЧдЧдоддЧа Сссасссаає дчодасдаддоадЧдає аассассудда аасуддсадсс аасассдсає 180 ааєдЕсСЧусаа аассаааЧдсу дчдадчдчасссва СддссЕсаса ссасвєадаєд аасссадЧдаєсу 240 ччаєсадссєЕ дсаддсдддда Єаааддсєса ссграддсаас дассссстадс ЄддЕСсСдада 300 ччасдасса ссасассудда асєдачасас ддсссадасеє ссргасудча дсадсадеду 360 ччааєсєЕсудс асаасуддудсу саадссєдає дсадсстаєде сдсдєдсаєд аадааддсесе 420 т ЄЕаччаЧдсєдса аадсассєсс ассучудЧчаач аадчасаєда дсессаасаєсс ссесасбасаєсс 480 часудєсассо дсадаачдаа сассудссаа сЕСсуєдсса дсадссдсудуч Саасасудад 540 бо чЧаєЕдсдадсд Ссаассуддаа Єсассдддсд Сааададсас дсаддсдуаєє баєєаадеса 6о0

БаєдеЕдааас сссЕддудссєЕ аассвєаддаа сєдсаєдеЕда аассдаєааа сеададесеєсс ббо чЧчсачаччачадчд чЕдчаасеєсс аддасдсадсу чЕЧчааасудсу Єачавєаєсє дчЧадчдаасаєс 720 5 ачаччсчдаа дсчдассссєсеЕ дчдасчаааас Сдасасссад дсдсчдааадчс деЕддадддЧдадса 780 аасадччасєвєа дЧасасссвєдд єадсссасус Єдсааасаає дссдасвааа ааассдсдад 840 сеЕсдассєЕдЕ,Ї Ч9ФДдФЕСЕСЕДва дссаасудсає єаадсесдасс дссеЕддддад гасддссдса 900 аддсєаааас Ссаааєдаає Єдасчддчддучє ссдсасаадс чодаєдчадсає дедачеєссаає 960 » бсдаєдсаас дсудааааасс Есасседдес ЕєЄдасаєсса дсудааєсаєа садааасаєа 1020 баадсдссесє ссудддаасе сеєдадасдсе дсаєддсєдс судєсадсеєсу сдеЕєдеЕдааа 1080 сдсєдоадеЕса адссссудсаа сдадсудсссє баєссеєссудє сСудссадсуддсес аєддссддадада 1140 асссададдда чдчасєдссадеі асєсааассда аддаачдчдєду дчаєдасуєс аадессаєсає 1200 чдасссеЕсаєсу ассадддсба сасасдбєдсе асааєддсдс абєасааада аадсааєссес 1260 т чдсаададсаа дсаааассса аааадсасає суєгадсєсуу аєсададсесс дсаасесдас 1320

Єссасдаадсі аддааєсудсє адесааєсудєд даєсадааєд ссасуддеєдаа Сасусесься 1380 дассЕєдсас асассдсессуд Есасассаєд ддадеаадес дсаааадаад Саддсадсесе 1440 аассєєсаса ддадддсдсеЕ бассасеЕсєвєд єдаєєсаєда сеєдддчачєдаа деЕсдсаасаа 1500 часаасєдса ддаддаассід ЕддЕєдчавєе ассессьса 1539 «2105 15 «2115 1561 «2125 ДНК

Зо «213» Вапшаппіа сісаде11іпісоїа «4005 15

Ессаасєдаа чадЕСсСєЧчаєс асуддсєсача сСеєдаасуссуд дсуддеєаадсс Саасасаєдес бо аадссдадсуд дсаєсддааа дсаааєстаає Сасеєссдссу дсаадсддсд аасддадеЕдад 120

Єаасасєссуу дчаєстассеє єаєдчдвачачду часаассасє ддааасчаєа дссаасасс 180 сасааєдеЕсд Есадассааа аєсдддддасс баасєсаддс сесаєдссає аадаєдаасс 240 є садаєдадає єадсбадсад деЕдадасаає адсссассва ддсаасдаєс Есеадевєдае 300 сЕдададдає дассадссас ассбддаассд адасасддес садасеєссса сддададдсад 360 садеддддаа ЕСссСсСдсасаа Єдддддааас сссдаєдсад сбасассдсу ЕДдсдЕДЧаада 420 адчдсссєсЧу ЧчЕсСЧдсааадс асЕсссадсу дадаачаааа Єдаадессасс аасааєааєсс 480 чЧчеЕсаасєдас деЕсСасссуса ааадаачсас суддссаассс судєдссадса дссодсудесаа 540 " часччаччаЧчс дсаадсуєса ассучаасєса сєдддсдєаа адсуєаєдса доасоадеЕсвсає 6о0

ЕсадесадЧдє деЕдааадссс баддссєаас ссаддааєсу саєсєдааас СЄддаєаадсса ббо чадеЕсЕСуса даддддддда дааєєсєссадда ЄдеЕадсддсєд аааєдсдбєад адаєссддаа 720 чаасассадс доасдааддсуд ссссссєдда сдаааасєда судсссаадса сдааадсуєд 780 чачадсааас адчасвєачає асссєддса СссасусеєдЕ ааасчаєдеЕС дчасєсдаад 840 є ЕсудсадссЕс дадссасадс ЕСЕСсСЧдаадсс аасуудсасєвєаа ассдассусс Єдадчадвас 900 чассудудсааду Сбаааасєса ааєчааєсуда судддддсссу сасаадсудс ддчдадсаєсучєд 960 65 дЕСєааєссу асасаасдсуд ааааассеєвса ссрассссвєд асаєссадад СасСааадсад 1020 аааадсесєса дчедссеЕссуд даасесєдад асаддєдсьд саєсддсєдеЕс дЕСадсесае 1080 чЧчЕсЧдеЧааає ЧчеЕсдддєсаа деЕсссдсаас дадсудсаасс сЕсСассссвс деЕсдссаасу 1140 асєаадесуд дчаасссааа чачассудссу дЕЧчасааасс дчаадчаадус дЧадчаєаасу 1200 ссаадесаєс асддсессеЕса сдадсаддудс басасасуєд сбасааєсддає дсаєасааад 1260 адаадсааєс ссуєаадау бадсааассе саєааадсдс аєсуєбадесс ддадаєсададі 1320 сеЕдсаасєсуд асеєсстаєдаа дчеЕсуддааєсу ссадсааєсуд бддаєсадаа ЄдссасодЧчєд 1380 т аасасуєєсс сддадссссдЕ асасассудсс суєсасасса сдудчачдсдса седсаааада 1440 адсбєадсадс ссаасеєсаса асасчдададда дсдсєЕсасса сЕсєдсдаєс сасаассд9ад 1500 чЧдЕдаадссудє аасааддєаа ссдсадддчда ассєдсуддеЕс дчдаєсассєс сеЕСасастаа 1550 а 1561 «2105 16 «2115 1464 «2125 ДНК «213» Бодаіі5-подібні «4005 16 асєдаасусс дадсуддсаддс ссаасасаєд саадссудадс ддсадсдчдчда адаадсеєвєдас бо

ЕсссеЕсудссу дсчадсудсу часуддєдад сааєдеЕСвєду дчаєссдсесс дасодадоаЧчУ 120 чаєаастасеЕ ддааасуддса дссаасассуд саєаасудєсуд саадассааа дчсддддадасс 180

ЕссудддсесЕсС асассасєсуд асдаассса ЧчЕЧдоаЧасва ссадеадчєд чоадеаасдас 240

Есасссадудс дасчаєсссє адссудудеЕссу ачаччаєдас садссасасс дчдаасєсдада 300 5 сасддеЕссад асеЕсссасдудд даддсадсад Єддддаасає Єдсасааєдда дддааасссє 360 чаєдсадсса СдссусуєдЕ дсдаадчааЧду сссЕєСУддУЄє дсааадсасс сеєСсадсу9чуЧ 420 аддааддсда Єддсдеєаасє адсудсбтаєсд асєдасдеєса сссусадаад аадсассддс 480

Баасеєссуєд ссадсадссу суддсбааєасу чадчддєдсча дсуєєааєссу дааєсаседу 540 чсЧдсааадсу Сасудсадчдсу ЧчсЕссдсваа Ссачаєдеда ааєссссудуч сЕСаассвєду 6о0 з чаасєдсаєс Сдааассуддс адчдсєачадс сеЕсудсбадачдч чодчдсачаає Єссададєдса ббо чсчддЕдааасє дсуєачачає ссдчадчаасє ассуддеЕддсу ааддсддсесс сссддасдчаа 720 часєдасудсЕ саддсасудаа адсуєддудда дсааасадда Єсадасассс ЄддеЕадесса 780 сдсЕдЕааас даєдеЕсдаєєс єЄдааддсєдеЕ ддссеЕсЄдадс судсддсеЕвєсс ддадссаасу 840 єЕдЕсСаааєсу ассусссудуау дчадсасудсс дсааддсєаа аасссаааєд аасєдасоа9чу 900 т чЧасссдсаса адсчдЕєдчач саєдЕддвчеЕс аасссучаєдс аасудсдаада ассесасста 960 сЕсСЕбдасає ссададаасє сдудсадачає чссссддедс сЕєсдддаас ЕсЕдадасау 1020 бо ЧдЕдссдсаєдд дссдесудеєса дсеЕсСУЧєЧЧЕвЯ Едаааєсуєєд ддєсаадссс сдсаасдадс 1080 дсаасссєса сссеЕсваєсд ссадсдаєєс ддєсдуддаас ссаааудада седссдудеєда 1140 бааассудда чааддеддаудд аєдасдеєсаа деЕсаєсаєду сссеЕсасда сСадддссаса 1200 5 сасдедсвас ааєддсдсає асааададаа дсдаєсєсдс дададесадс ддассессаєга 1260 аадедсудеЕсу бадессудає єддадеЕседс аасєсдасес саєдаадссу дааєсдстад 1320 бааєсуєдуда ссадаасдсс асддедааса суєєсссудд ссебдсасас ассдессдес 1380 асассаєдудуч адсдддєєдс аааадаадса ддєадсеєсаа ссессуддчдад ддасдсеЕсасс 1440 » асеєєсуєдає ссаєдаседа дЧаєд 1464 «2105 17 «2115 1465 «2125 ДНК «213» Накгксідіа ріпісоїа «4005 17 адаєсстаасуд ссддсддсад дсссаасаса Сдсаадесда дсддбассад аадаадсес бо сСЕсСсСсєдссд асдадсддасуд дасдддєдад и бєааєдсаєдда ддаєсєдссс дасададдадад 120 чаєаасваєс дчдааасудса дсвєаасассу сасааєсєсе дадчдадсааа дсаддддЧдаас 180 7 гЕссудсссЕс дсудссасєсуд асдаасссає аєддачасва ссадеадчєд аддеаасдас 240

Есссссадудс аасчаєсссє адссуддЕссу ачаччаєдає садссасасс доадасєдада 300 сасддсссад ассссврасуду даддсадсад Єдддчдаасає Єдсасааєдущ дсдааадссяе 360 чаєдсадсса СдссусуєдЕ асдаадчааЧчу СЕСвадудудсє дсааадсасс сеєСсадеєсдчад 420 адчаааасасє Счаєдссаає ассаєсааєс аєсдасуЄєсє ссдасадаа аадсассуддс 480 т Баасеєссуєд ссадсадссу суддсбааєасу чадддєдсаа дсуєєааєссу дааєсаседу 540 чсдсааадсу сасудсадчдсу дсєаасвєаа Свсачаєдеда аадссссудуч сЕсСаасссад 6о0 чаасадсаса Саааасєддс саассададеЕ асєдсададда ддддєадаає ЄссаєдеЕдса ббо чсчддЕдааасє дсудєачачає чдсдчдадчаасє ассадсдудсу ааддсддесс сссддасааа 720 аассдасусс сааасусучаа адсуєдддча дсааасачча Єсадасассс Єддсадессса 780 є гдссдсааас часуєсчасє єдчаддчєсує сссссєдаду адсадсеЕссс дЕадсвєаасу 840 сдЕбаааєсд ассдссєддад ддадсасдас єдсааддеса ааасссааає дааєєдас9ад 900 дддсссдсас аадсддєедда дсаєдеЕддєє Сааєссдаєд саасудсдааа аассессСассс 960 асєссєдаса сссадасаає Єсадсадааа ЄдсЕесадна сссєсуддаа аєседадаса 1020 часдсеЕдсає ддсеЕдЕСЧдЕєсС адсеЕсСдЕдЕеЕє дЕдаааєдеЕс ддадеЕсаадес ссдсаасдад 1080 " судсаасссес аєссЕєЕддьє дссадсудаєє аддесддадаа сесаааддад асеєдссодчєд 1140 аєсааассуда ддааддсдуд чаєдасуєса адесаєсаєд дсссеЕсасуда деадддстас 1200 асасудєдсса сааєддсаса басааадудда адсаассєсуд сдададсаад сдааасесає 1260 ааваєсаєуєс деадсссада єсддадеЕсвд саасесдасс ссаєдаадес ддааєссддсва 1320 чЧеаассудєа ассадааєдс гасуддедаає асдеЕєсссудучщ дссЕсбдсаса сассудсссає 1380 є сасассаєдуд дадедддЕєд саааадааді аддеаасеса ассеєвсаєдда аадсдсевбас 1440 сасеєєсдеєда Єссаєаасьу дчаЧчеЕд 1465 65 «2105 18 «2115 1571 «2125 ДНК

«213» Тгепріауа рпепасоїа «4005 18 аддсааєсса дссасассссє ссадсасудс Сассссдеєса сдасеєссасс ссадссасаа бо » сссеЕсСасссє сддаасеєдсс сЕССсСсСсСасаа сссааассас сааасасеЕсеЕ єаааєсадде 120

Ечачачадує Саддсссусєеє асЕсСссуддса адаастаєсеє ссасуддеЕдед асдддсу9дчєд 180 10 бдеасаадас ссдадаасає асссассуєд дсаєдсеєдає ссасдаєсас Садсааресс 240 аассєсасус асссадеЕсє садчадсасаа Сссдаасєда чуссудссЕвЕс деЕЧадчаєвад 300 сСЕСсСсСсСЕСЕеЕсдд саадеЕсддса ассссеєсддає ссддссаєєд баєдаєдеде даадссссас 360 т ссаєаааддс саєдаддасс ЄдасудеЕсаєс сссассеЕссс сссаасесває сдссддсаде 420 сСЕСЕсСєаадд Єаасєдасста аєссадсадс ааєсааадас аддддеЕсєдсд сЕСдДдДЕсСасад 480 20 часєсаассс аасассєсас дасасдадсеЕ дасдасадсс асдсадсасс ЄдЕдсастаа 540

ЕсСссссеєсСса адсасеєсссу ссєСсСЕСаяааса дчаєсєЕсадс саєаєсааа дчеЕаддеєаад 6о0 гЕСсЕсСеЕсудсуєЄ Сдсаєсдаає Єаасссасає сасссасєдс ЄсСЧсЧдсуддуаєЄ ссссаєсаає ббо 7 ЄЕсссесЧдаде сеєсаассесуд суддссубасо ссссаддсуд Єсчассєуєдд сдєвєадседс 720 ассассдааа адчаааассу сссаасудеЕсє адссаасаєс деЕссадддса Єддассасса 780 30 чадсаєссаа СссЕдсЕвєдс ЄссссаєдсеЕ СсадсдеЕссд адсудєсадса асдаассаду 840 аддсєЕдсста суусЕсеЕсудеЕ асссссссас ассесстасас ассссассудс Сасасдсода 900 асеєсвтассеЕс ссссссссує асеєссадссо дссадеєаасеє дссуусаєєссє даддесвєаадс 960 сеЕсадссЕес сасадсааєс сСбаасаддса дссеєдсасас ссеЕсвасудсс саасаааєсяе 1020 чаєсєаасусє сдсассстас дсаєвтассудс дудсєдсеЕддс асдбєадеьссу ссуддедсева 1080

СЕСЕСсесуде асадссасас сассаааєсд ЕсадеЕсЧуує дусЕсЕсеЕсс ссдаасаааа 1140

ЧдЕдсЕЄсаса асссаааддс сЕЕсСЕссаса сасуудсудсає сдсєдчдаєса ддасеЕсссдес 1200 саєєдеЕссаа даєеєссесас судсєдссеЕсс сеЕСсадаадес єдддссуєдЕ сесадесссса 1260 з чЧчЕдЕдЧчсЕду ссуєссесссс адассадсва ссдаєсаєєд ссеєдуддаа ссаєсассьє 1320 бссаасаадс бааєссадаса садссааєс сададсуса аддсааєссудуу Ссссседссе 1380 ссаєсссудсеє сддбеададаа сееєсаєдсуд баєсааєса дсесссассо адсеЕдеЕсссс 1440 сасєсєдадуд саєдеЕєсєда Єдсасвассс асссуєсьдс сасебдссас саадсстєаадй 1500 сссуєдЕсдс судєєсЧдасьє дсаєдедбсаа ддсаєдссудс гадсдеєєсаа ЕсЕдадссад 1550 чаєссааассс є 1571 «2105 19 бо «2115 1535 «2125 ДНК «213» Тгетпріауа ргіпсерв «4005 19 65 ададсеЕєдає ссеЕддсєсад асєдаасудсеЕ адсддсаєдс ассасасаєд саадссдвас бо часадсасчд дссвбаддссЕ додєдоасчадс доасчаасудч Єдадсаасуус сєЕсуддаасає 120

ЧчессєдЕадс доадоачасадс ссддсудааа ссадаєсаає ассусаєдаа дссдсасадс 180 асдсодсЧддеЕд ааачсочуддчуадчЧ асєсвтадссо сасуссассу дчаєсддссод даєсєдЧдаєса 240

ЧдсЕадеЕєддс ддддсааєдд сссассаадд ссбадаєсад бЄадсєддеЕс дададдасда 300

Есадссасас Сдуадассдад асасудссса дасеєсссасу дчдаддсадса чЧчеЕдадададЧдааєсс 360

Есддасааєд дадсудсаадсс Єдаєсєссадса асєдссудсуаєд єЄдеЕдаадчаад дссеєссодцаає 420 т сдсааадсас ЕСсСЕсДсєсСдудд дасдаадаада ддсдЕдсааа сассаєдссс ЕСЕЄсЄДасдає 480 ассдааачдаа Саадсассууд ссаассасує дссадсадсс дсоддеєаасас деЕаддаєдс 540 адсусєєаасс ддаассассд ддсудєааадда дсдсдсдддЕ ддЕєєдссаа дасссседса 6о0 ааасссвасу дсссаассує адєдссдсууч аддЕсасеєд Єаадссєдадд сасддсадад ббо чаЧчачсачаа СЕСсССсаддєдЕ адсудсдааа Сдсудсачаса єсєдчадчдаа Сассудаадас 720 7 чааддсаасс сссЕддудсса Єсасєдасас Єдаддсаса аадсуєдаду адсааасад 780 ассачаєасс сеЕддсадесс асудссстєааа ссаєдессцчЧчас садессдссоад дадчадсссєе 840

СЕЕсссЕСсСдД Єдасдаадсі аасудсаєдаа дссдассдсес Єддддадсас дассдсааду 900

Есаааассса аадчаасєда судудчдасссу сасаадсудЕ дчаєчаєдедд часєааєсесу 960 аєдсаасусу аааавассеєса ссрасссебд асаєдудсуда дасєсєдссу ададдсдуддаа 1020 т чЧЕдсеєсдааа дадааєссує дсасаддедс Едсаєддсед сЄсдеЕсадсес дЕЯДЕСЯЄЧад 1080 аєдеЕсддЧчєє аадесссаса асдадсусаа сссссуєсеЕс садесдссас саседдддаса 1140 сЕСсасадад аседссдуєд аєааассуда ддааддсддад дасдасудєса адесаєсаєд 1200 дссЕсваєдучЩ деадддсесс асасудєсаєа сааєдудссдуав адсаааддде сдссаасесд 1260 ачачачдчддад себаассссас ааасссадсс ссадеєсуда сеєдсасессу саасссдаде 1320 є чсаєдаадесс ддаассудсса деааєсуєдуд аєсадсаєдс сасудсдаає асдеєссс9д3у 1380 чЧдЕсЕсдсаса сассудсссуЄ сасассаєдудщв дадеєаадссу саєссадаадс адссессстга 1440 ассссаєсдсє додааддадда ссдсдааддєЕ доддЧдєстаєд ассддддаєда адссудєааса 1500 аддеадссує ассуддааддЕ дсддсєддає бассе 1535 «2105 20 «2115 1450 «2125 ДНК «213» Мавцліа аеіЄосерпаііїпісоїа «4005 20 адЕсСєаассс Сддссєсадчає єсаасуссс сдасаєдссеє аасасаєдса адссдаасає бо

Едаааасаєс сСсааадсадс дсасаддсєда дсаєаасасє єааасаєсасс Свааадсясу 120 бо чЧаасассссуд асдааааєсуд дсасєаасасс дсаєаааадс асссаадаає Сааадсд9а9дду 180 аааассєсує дссасаадає єдеЕсаааєдс сеєдаєсадеЕс сусЕдУєЕес сааддєаааа 240

ЧдсЕсСассаа ассеєсучаєса дсадссасєс суЧсЧчадчаєу сасадссаса Єсдадаєєсда 300 5 ааєаасуссс ааассеЕсвас дчдадддсадс адсдчадчаає асєддасаасє дадсдааадс 360

ЕсЧдаєссадс аасуєсудсує дсдсчаєсаа дадааассус ааадсасеєс сссессаадаа 420

Еаачааасєс сСааєсааєаа Єсаааасєсєєс Єдаасубассє аааачаасаа дсассастса 480 ассасуєдсс адсадеЕсусу дсааєсасуєд доадЕдсчадс дсєаассуда сСЕсСасвєдоаде 540 » чЧеааачдсудса сесаддседс Есааааадає єсасаєсааа сасеєсаааєс аааєсстсаааа 6о0 ааєдеаєааа Ссассаєсвтаа дсвєачадсеЕс адсасаадаа аааачаасеєс сасудєдсадс ббо адеЕдааасдс деЕєдасаєає аааддаасудс сдааадсдаа адсаєсеєвєєс Єдгеаасадаа 720 сЕдасдсєса баєсасдааад сдедддсадс ааасаддаєсє адасасссвд деадесссасу 780 сссрааасвта єдеЕсааєсаа свеаєсадаає СЕСЕсСЕеЕсадеі ддаєдеЕадсва асдсудєсааа 840 т Есдассуссо доадеаєсасу ассусаадасє сСаааасссаа адчаасєдас доаддассадс 900 асаачсчдеЕд часєчаєдеЕдч ассаасєсуа Єдчасасудсда аааассєсас седсссеєєсда 960 саєгддевсада авєєвтаєсда аааасаааа СдсЕсСддааа ададссааса сасаддедсе 1020 чсаєддасєдЕ сдссадсесуд ЕдЕСЧєЧдада єдеЕсєдуддєва адссссудсаа сдадсдсаас 1080 сссрасеЕсеЕс адеєдсваає сааадаассє саададааса дсєаасааса адеєсадачу 1140 7 аадчачуддда Єдасссєсаад Ессесаєддс ссеЕбаєдуддс адддсеЕєссас асудеєсасаса 1200 аєддєєааса сааааадссуд саасаєсдбєа адчаєєдадсс аасссєсааа ассааєсьса 1260 дЕсСсЧдаєсу сасеЕсєдсаа сссдадсаса Єдаадесєдчча аєсудссадса аєсдсдадаєс 1320 адсаєсдссудс ддаєдаасаде ЕсааседдеЕс ЕєЄдеасасас судсссуєсас ассаєсддааа 1380 бааасссвсудеЕ сесаааєдаа дсаасавсаєс єсаєсаааас аддеЕсеєсуєа ассодддадеда 1440

З5 адссдеЕааса 1450 «2105 21 «2115 1536 «2125 ДНК «213» йіпаекіа іпзессісоїа САВІ «4005 21 асасааасаа дадеЕссдЧаєс седдсЕсада Ссдаасусса дсддбаєдсеЕ Єсасасаєдсес бо аадссдаасу асаасасєсаа адуссЕдсссаасасааадес ддасдаасдач Єчадсаасає 120 ассаааасує ассєсаааде Ччоаодчодачаєаас Сааєсуаааа ассадчаєаає ассдсасбаєсс 180 " аасссвсадда Єдаааасау аасаасаєсє гаєдсеєеєсва даєсудчєєда сасссєдаєса 240 чсЕадсєдуЧє аччдадсааасу ссбсассаачу сааєдаєсад Садсеєдачєєс сСадсдааєда 300

Есадссасас Сддаасєдад асасуддесса дасеєсстасу дааддсадса дЕддодадааса 360

Есддасааєд дчачаааєсс Єдаєсєссадса асассусуаєд адєдаєдаад дссеєсададе 420 сдсаааассс ЕСсСЕсСДЕсвсадуд ааадаааєаа ЕСЕСааасаа Ссасеєсаааає Єдаєсдасдаде 480 є асссааадаа Саадсассудд ссаассасуєЄ дссадсадсс дсоддесаасас дсадддеєдса 540 адсуєсааєс дчаасвтаєсу ддсудєааача чЕдсдєаддс ЄДдЕСсСасаєаа дчасачасочєд 6о0 65 аваєсасссаа дсссаасеЕса адаасєдсає єсаєвтассує сеаассадад СЕСаєтвадад ббо ачаачсудаа СЕСсСваєдеЕдеє адсадсудааа Сдсудсачаса баєааадчдаа Ссассчаєсдас 720 чаадчсадсс Сссєдчдааса асасєдасус Єдаддсаса аадсуєдаду адсааасад 780 ассачаєасс сЕддсадесс асудссстєааа ссасєдеЕссас садессаєсаа ассаааааєса 840 аааєсстадса асдєадсвєаа сдсаєсааудЕ адассдсссд дддадсасда Єсдсаадаєсс 900 аааасссааа дчаасєдасу дчоуадЧдасссуса саачсчдеЕдч асчаєдсудча Єсааєєссдає 960 дсаасасудаа ааассеєсасс гасесеЕєдас аєдеЕсєддаа СЕссааадаа асссааааді 1020 т чдсЕєЄдааааа даассаааас асаддедсвєд саєддсеЕдЕсС дЕСсСадсесудє дЕСЯДЄДдадає 1080 чЧчЕсдЧдЧчаєсаа деЕсссдсаас дадсудсаасс сЕєЧДЕсаєвта сСЕсддсвєааса аааадаасьс 1140 бааєаадасе дссааєдаса ааєсоддадда аддаєдудддає дасуєсаадс ссссаєддсес 1200 сЕсаєдадна дддсеЕєЄсаса судєсєсаєасаа Сдаєсаєсаєас ааєдддбєадс ааасєсуєда 1260 аааєдадсса аєссссааад багаєсєсад Еєсудаєсдс адсссдсаас ссдастасає 1320 7 чаадсєдчдаа Ссудссадсаа Есдсуддаєса дсаєдссудсу дЕдааєсасує Єсесудадесе 1380 бдсасасасс дсссуєсаса ссаєддааде дарєеєсєвасс адаааєсаєс судсеєсаасся 1440 свсаєсдудааа аааасааєса аддсадааєє саєдасєдад дЕдаадесудє аасааддеад 1500 садсаєсудда аддеЕдсдудсє дчдаєсасаєс сеааає 1536

Зо «2105 22 «2115 1423 «2125 ДНК «213» Ноадкіпіа «4005 22 ааєдссддсу дсаддссвєаа сасаєдсаа Ссудадсудас аасуєссааа сдсєдЕсадс бо часчаасчдчу Єчадсаасас дсЧачаассс асссаєссса асуєдчаєсаас асадссааса 120 ссаєдессаас аасдбсаєдає Єссбдсааса ддсааадаєє сбасєсудддада Єддаєдадсе 180 сасдсрадає єадсбадсєд деЕдадасааа адсссассаа ддссаадаєс багадсеєдде 240 сЕддааддає ддасадссас аєсдддассд адасааддсс саасссеєсста аддадддсад 300 з садеЕдаддаа баєсддасаа сбдддсдсаад и ссєдаєссад ссаєдссдса Єдадедаєвд 360 ааддЕссаас дчассудсааа асєсЕсеєссс ссадчачаєса саааєдаса Сасссоддесда 420 баєгаадсссс ддссаасеЕсс дседссадсад ссдсуддбеаасє асдаддадчад сдадсаєвде 480

ЄЕсочдЧЕСЕсСає сСоддасудсааа чудадсдсссад ЧЕсСЧЧдсвєаадеЕ аадсвєаасаа сааа9ааєсеєсу 540 ачасєсаасс Ссаєаасуєє суддсєаасас сасвєаадссс дадсеЕсдчає ададасааас 6о0 т ччааєсссча дчЕЧдеачадучє дчаааєссуєс дасасеєсудда дчдаасасса аддсдаадас ббо

ЧЯдЕсЕєдЕсСас ассаадсєда сассудаадас асдааадсає ддддадсааа садчаєсада 720 бо басссеЕддса дсссасдссс бЄааасдеЕєда дсдссаасад ЄСсдаєсаад ссасаєсдсса 780

Ечасссадча СЕєдеасадсеЕ аасудсуєсаа дсассссудсс Едддєаєсас дассусаад 840

Есаааассса аадчаасєда судадчасссу сасаадсудЕ дчдадсаєдеЕд дчЕсСєЄаасесу 900 5 аадсвєасасу аадаассєса ссадссссвєд асаєассаєсдд дссаассаєс сеЕддааасад 960 часдеЕєдеЕсєс аадессааасс себдаааєдс саддаасадд Єдсєдсаєда сЕдЕсДдЕесСад 1020 сЕСсСУдєсЧдєсУєЄ дачаєдсаєд деЕбаадессс аааасудааса саасссєсас ссагадевєдас 1080 саєааасаса аєсуддачеЕєсеЕ свраєдддбас Єдссаасуба адссададда аддеєдаддас 1140 » сасаасааде саєсаєдудсс сЕсасддддсеЕ дддссасаса саєдссасаа єддаєдЧчевсас 1200 адаададссудс аасудсєдеда дассдадсаа аєсєссааа ассаєссса Сссоддаєеєде 1260 ассссдсаас ссудадеасає даадсаддаа Есдсврадсаа Ссудєддаєса дсаєдссас 1320 чЧчЕдааєсасує ссссудддЕсЕ єдрасасдсс дсссудєсаса ссаєдуддадс сЕсСдсЕссда 1380

Єсдаадссаа дссасссесд ассасаєсьє ддсаадедас сда 1423 «2105 23 «2115 1504 «2125 ДНК «213» ШМо1расніа р. мРір «4005 23 ааасєсуача чЕсСєЧдасссє ддсссачаас даасудссддс ддсаддссса асасаєдсаа бо

ЧЕсдаасуда дЕсасаєєдеЕ адсеєсдссає ддеасаассс адсддсадас доадЕЧдадеаа 120

Едсаєадчдаа Сссасссаде адсасучаасє аассдєсдуда аасдасаасс аасассддавєає 180 асудсссвасу дадчдааааає Єсасєдссас садчасєдадсес бавєаєсадчає сСадссадчесу 240 т чЧчеЧдаддаєаас адсссассаа ддєаасчаєс сасадссдає ссдачадчає даєссадссас 300 асєдчаасєуд ачаєсасудсс садчасссста суддчаддсач сачсдЧддчддаа Сассуддасаа 360

Єдддсдааад ссєдаєссад ссаєдссуса Сдадсдаада аддсссеєсд дееєдсааадс 420

ЕСЕСсСеєсадвд адчдаачаєаа Єдасудбєасс сасадаачаа ЧчсссЕддсва ассссудєдесс 480 адсадссудсу деЕаасасуда чаддудсєадс дчЕсСасеєсуда асваєсддодас деЕаааддас 540 є сдсаддсєдда Есааєаадьс аааадедааа Есссдаддсес СаассеєЕсдда аседсесесва 6о0 ааастаєсаа Сссачдачасє дааачаччає ачаччааєсс ссдаєдвада додасааааєсс ббо

Чеааасасса ддаддаасас садєеддсудаа ддсдсстасс єддеЕєсааає сєдасудсеєда 720 адсудсчдаачу счдсдчдадчдадс ааасадчаєс адчасассссуд дсадесессасу сєдсааасда 780

ЕдчааєдеЕсСаа асаєдададдучад ЕСвассеЕссс двсаєсасадс Єаасудсудєва аасасеєссс 840 " сЕддддасса сддссдсаад аєсаааассс аааддааєсєсд асуддддассс дсасаадс9д 900

Едчачсасує дудсеєсааєсс даєдсаасус дааааасссс ассасессеєс дасаєсєдаааа 960 ссаєассває ссдаадддчдає адддеЕсуддеєЕ суддссудаєє сбасасаадс дЕсСдсаєддас 1020 бдссдєсадс ссуєдеЕсуєд адаєдеЕєдудад ЄбЄаадесссу саасудадсудс аасссесаєс 1080 сЕгадеєдсс аєсаддєаає дссдадсасе Єсааддааас бЄдссадедає аадсеєдчачуу 1140 є аадчдсддаада сЄдаєдесаад Есаєсаєддс сЕєсаєдда сбддчдасєасас асудєдссаса 1200 аєдчдєдеЕсса сааєдддсєд сааддедсудс аадсссаадс бааєссссаа аадасаєсес 1260 65 адесєсудасє дсассссдса асеєсдчадстас аєдаадесду аассдсесаде аассдєддває 1320 садсаєдсса суддЕдаасас дЕссссдачудє сЕсдсасаса седсссуєса судссаєдудада 1380 аєсддеЕсєсєса сесдаадсса асддсесваас сусааддаад дадесаєсса аадсдоадаєс 1440 адсчассдуда деЕдаадссуєЄ аасааддрад садсаддудда аєсєдсадсе ддаєсассес 1500 сева 1504 «2105 24 «2115 1532 «2125 ДНК «213» МОтхіпига адіазрідісоїа «4005 24 ааачдчачасєа СеЕссаассас асссеєссудс асуддссассеє єдессасчасс Садссссаде бо т саєсаадеЕсеє ассссаддса дассассдаа ддасстассда сеЕссаддбрас ссссдасесс 120 сасддссєда сдддсддаєдЕ деЕасааддсє сдадаасаєа СеЕсассдсудс саєсдседає 180 дсдсдаєсас Садсдаєєсс Єдсеєссасад адеЕсдааєсд садассссаа Єссдааседа 240 чассудЕСЕс адчачаєсадс єсссдаєсас ссадсудссу ссссєсдсаа ссадссаєсд 300

Бадсасуєдс деадсссаа дсасачадудс саєчаєдасє єЄдасаєсаєс сссассєєсс 360 7 ЕсасадеЕєсста сассудсадеЕ ЄСЕЧдуєсада Єссссудсесє сасссдаєдуа саассаасаа 420

БЕаччЧчЧдЕсСЧдс дсссуєсаса дчдасеЕсаасс ааасассєса садсасдаас СЄдаадасаас 480 саєдсадсас сЕсдсаасас дЕСЧдгасада сегаадссдеЕє Єссадсеєсаєсє єсдсаасаса 540

ЕсеааууссЕс дасаадддЕсєс сссудсуєаєс аєсдаасвсаа ассасаєдсс ссассусЕєс 6о0

Едсдаасссс судєЄсаасеєсс ЕСсСЕЧаЕСЕС аасссвєдсуда ссдсасеЕссс саддсдчдаєс ббо 5 асеваєсусеє сЕСсСдссаадс сасєдаасає суєеЕесеЕсса аєадсвсаеу ассаєсдесе 720 адчдасдєдчва сеассадудує асссааєссс дчЕСЕдссссс сасусесеєссу Єдсасеєдадс 780

ЧЕсадєааад асєвсадсаас ссдссеЕссудс Саєсуддедеєє седсаєдаєа Єсвбаєдсаєс 840

Есассудссас ассасасасє ссачасусеєс сааєсєсасе саадессасс адсаєсааса 900 чсааєсєсас адсєаассу єаадссєсса сврассдассє ааєсааасадс сеасасассс 960 з бЕсааассса асаааєссуда асаасудсеєвєд ЕдеЕсаєссує аєсдссдсда сеЕдссддсас 1020 ччаассадсс дасасесасє судбаєадсас сеЕссааєсес свеаєсасуєа адасаєсеса 1080

СЕсссасаса ааадсадеЕсє асаассвааа адасссєсає сссдсасудсуд асдєадседа 1140 бЕсацдадеьссє сссссасєда ссааваєєсс єсаседссдс сЕСССсСєадуд адеседдесс 1200 чЧЕдЕСсСЕСсСаде ассадедедд аддсасассс ЕсЕсаддсесс сссасєдаєс агадессеєвєд 1260 т бададссаєс ассеєсассаа ссаассааєс ааасдсаддс Єсаєсєссвсу ссассеаадеі 1320

СЕсааєсааа дссссасдса дааасеєсає аєсаєддадауд аєсаассада ассесессвд 1380 бо дссасасссс адсаааадде адасєєдсава суєдеЕсасес асссаєссдсе соддЕСЯдссда 1440 саааєсаааа авсеєесєсдає дссссеєсдас седсаєдедеЕ єаадсеЕсдсс дсеадсуєва 1500 аєсссдадсс аддаєсааас ЕСсСЕссСЧдЕЧЕ ад 1532 65 «2105 25 «2115 1470

«2125 ДНК «213» Сагєвопе1і1їа гчадії «4005 25 сЕсаддаєаа асдссадсду адддсєЄсаас асасдсааде сдаддддсад сааааасаає бо баєсєсвєдудс дассудсааа судддєЕдадса асасасасує аасесссссвс асдссдадвча 120 асадссєда чааасєсуда Єсаасассеєс асаасасаає ЄСЄСсСсадааа даааааєссе 180

Єааадсеєста свеаєдудсаса ачасаддсує аєдеЕСсааєся адеЕсСадеЕсЧду Сааддєааєд 240

ЧдсЕсСассаа асчаєчаєсу дсадчдддудсс Єдачаддддс дЕЕсСссссас аєсдднасс 300 адасасуддас сааассєсса сддааддссд садедаддаа бЄасєддесаа Сддададдааас 360

Есєдаасса ссассссусу Єдсаччаєча аадааадссє сассудеЕсує ааассусеесе 420

Едсаєсаєдаа Саааааасєсс єаасєсаєадча аасааєсуаа ддєаасасас даасаадсає 480 сдассаассс єдеЕдссадса дЕсСдсддеЕаа дасададдає асаадсудЕса Ессддаєєства 540

ЕсоЧдУЧсЕсСаа аддудсєдсуса учусудсЕСсЕс ааадссадса дсдаааєсьс ааадсеєсаас 6о0

ЄЕгаааадсдд ссаєсдаєас Єдааааасса дадеааддеЕс ддадеаассд дааєдесдвед ббо

ЕдеадсуддЕд аааєдсаєа асассасаса даасассдає адсдааадса адсвассаас 720 ссбасасєда сдссдадсса сдааадсаєсд дддадсааас аддаєсадає асссєддбсад 780

Зо

ЕссаєдссуєЄ ааасчаєчає сассаассає Суддуєеєсвсає асудєєдсаає Ссадсоддеда 840 адсчааадєд Ссєаадеєдаєс сассєдадча дсасдассудс ааддеєєдааа сссаааддаа 900 бєдасддддд сссдсасаасє сддєддадса СудєддеЕєваа ЄсСсуучаєдаса сасдаддаас 960 сЕбассаада сеЕсаааєдьа свбасудаасаа ассддаааса асєссадесаа дсдасудчаде 1020 асааддєдсЕ дсаєддеєдЕ сдеЕсадсесд Едссдєдад Єдсааддева адесссестваа 1080 асдадсудсаа сссеЕсаєтає гадесєдссає сдадсааєсудс саддддасес сСааєсаадасе 1140 дссддсдсаа дссдададда аддеддддає дасуєсааає сассасуддсес сеЕСасдєссє 1200 дддссасаса сдеЕдссасаа Єдаєсддсас аааадддадс дасєдддєда ссаддадсаа 1260 аєссадааа ссудаєссаад Ессуддаєсда адесєдааас ссудасеєссає даадсеєддаа 1320 бсдссадсаа ссуєдсаєса дссаєддсас дудчєдаасаєд СЕсссудддсес сЄбдесасасасєс 1380 сдсссудЕсаа дссаєддаач Єєдчдаадсас ссааадсвудддап Ессудссассе ааддеаадес 1440 бааєаасєдч ддсеаадссуд баасааддеа 1470 «2105 26 «2115 1761 «2125 ДНК «213» Буштріобарпгіпа рисппегі, контрольний штам 7СМ9740 бо «2205 «221» інша ознака «2225 (30)..(30) 65 «223» п являє собою а, д, с або Є «2205 «221» інша ознака

«222» (40)..(40) «223» п являє собою а, уд, с або Є «4005 26 адаєсаадсс абдсаадеєсс аадсасаадп ааєссаєасп дсдааасєдс дааєддсеса бо

ЄбаааєсадеЕ сассуєстає єсдаєадсас сеЕвсассасає дчдаєаассує ддсааєссса 120 чадсєаасас аєдссааааа ссссдассєс дааадддучєд баєсвтаєса аєаааааасс 180 т ааєдссссеєс доадЧасЕСССЕ ддЕЧасеєсає дасаассваа сдааєсдсає ддсссвєдсас 240 сддсдаєсдудЕ Есасєсааає СЕСсСЕдсссса єсаасеЕєссуд аєддсаддає адесддсстас 300 саєддеЕсеєвса асдддеаасу ддадааєсадщт дЕссдасссс дадададддад ссєдадааас 360 чЧассассаса Сссааддаа дсадсадудсу сдсааасвтас ссааєсссда сасододоадЧдад 420

Бадсдасаасє ааасассуає асаддудсєссс СЕсСЧдУєЄсСЕє дсааєсудаа Єдчадсасаає 480 7 Есааасєсссо Саасчаддчдаа саасєсудчачу дсаадессдч Єдссадсадс сдсдеааєсс 540 ссадсеєссаа бадсдсбасає сааадеЕсдеє дсадесаааа адсеєсдбадеі єдаассеєє9д 6о0 чЧдессЕддссда ссддессусс ЄаассдсуєЄєд СасеЕддсессу дессудадсссє сссЕсССєд9аяу ббо чадссдсаєд сссеЕсСсассу чудєдеЕдеЕсЧчу дчдаассадча сесссасесс дааааааєса 720 чадсдсєсаа адсаддсесса єдсссдааєса сасєадсаєд даасаасадча аєадчасуєд 780 т сддЕсСТСаєсЕ ЕСДСЕДЧДСЄЕСЄ сеаддассдс сдбеааєдаєс аасадддаса десЕсдддддса 840

Есадсаєсса аєсуєсачач чсдЧаааєссс Судасєсасс даадассаас Сассдсдааа 900 дсаєсєдсса адчасдеЕєсс саєсааєсад Сдаасдааад Єсаддддаєс даадасчаєсс 960 ачаєассуєс дсадсесссаа ссасааасса Єдссдасса дчаєсучддсу аєдеЕсаєтає 1020 сеЕсдасссудс сЄсуддсасссє асдадаааєс ааадеЕсеЕсву дчаєсєсєдоада ддаадсаєдає 1080 є сдсааддссд ааасєсааад аааєсдасудуц аадддсасса ссаддадесдда адссеєдсдадс 1140 ббаасеєсдас ссаасасудудд дааасєсасс аддеЕссадас асаєсаауда седасадаєе 1200 чацчадсссеє сссєдаєстає дсдодачєдаєд деЕдсаєддсес дЕсСЄвадеЕс доаєсддадеда 1260

СЕС ссСсдсЕє сааєсдсдає аасдаасдад ассєсаассє дссааасадс ссуддессдсе 1320

Єєдодасддудсес дссдудссЕсСЕ гададддасе аєсуддсесаа дссуаєддаа дЕсСеєдаддса 1380 " аєсаасаддеєс сдсдаєдссс Есадаєдеєс єдддссдсас дсудсудссаса сеЕдасададс 1440 саасдадсаа аєсассеєду ссудааддеєс Єдддсаасєсе єдеЕсааасес єЕдЕСЯЄєДСвУ 1500 чадасададс ассдсааєса єЕсСдсЕсСЕєса асдаддааєс сссадсаадс дсаадеЕсаєс 1550 адсЕсдсусе дассасуєсс сеЕдсссЕсвд басасассус ссуєсусвсас сбассуаєєда 1620 асддсєссадс даддсессєсу дассудудсаса доадасусєєду саасдасдас ссадсдсс9ад 1680 є ааадсєдччеєс ааасссддес асєєсададда адсаааадес деаасаадде сЕСсСдєадає 1740 чаассєдсуду ааддаєсаєєв а 1761 65 «2105 27 «2115 1801 «2125 ДНК

«213» Буштріобарйкгіпа Коспії, контрольний штам СВ5 589.63 «221» інша ознака «222» (1753)..(1755) «223» п являє собою а, уд, с або Є «4005 27 басссддесєд асєссдссад Єадеєсабасд ссЕдссеЕсаа адаєєаадсс абЄдсаадесе бо аадсасаадс аасссасасу чсдааассус дааєдудсеєса Єсаааєсадес Сассуаєєвсає 120

ЕсЧдаєсадсас сеЕсСасвсасає дчдасаассує дадсааєссса дадссаасас асдссааааа 180 т ссесдасеЕсс ддаадддадеЕд басеєсаєвсад асаааавасс аасдсессеЕсс ддаддсесесссьєс 240

ЧчаєчЧасєсає дасаасссаа сдааєсусає дадсссєдсдс суддсчаєдуає Єсаєссааає 300

СЕСЄДсссса Ссаассєєсд асддсаддає адеддсстас сасддеЕєєса асддадсаасу 360 чачаасвєаду дчЕсСсЧдасеєсс дчаачадучдад сссдадчааас ддссассаса Сссааддаад 420 чсадсаддсу судудсааассас ссааєсссуа сасчддададч бадсдасаає ааасасєдає 480 7 асадчуасєссс СЕСЧУдУєЄсССЄ дсааєсуудаа Сдчадсасаає Єсаааєсссо Саасддадддаа 540 сааєсддадда дсаадсссдуд Єдссадсадс сдсуддбааєс ссадсеєссаа бадсдбаєсає 6о0

ЄааадЕвдесе дсадсесаааа адсєсдбЕадеі СдаассеЕєдуда дссЕєддсєда ссддесссдесс ббо

Еаассудсуєд Сасеєддсссу чссудусєссеЕс сссЕсСсоддуа дадссусаєд сссеЕєЄсасесд 720

ЧчаєЕдЕЧдЕСЯЧУ дчаассадчда ссєсвсассєс дааааааєса чадсудсєссаа адсаддсесста 780 5 бдсеЕсудааса сассадсаєд даасаасада асадчасуєд ЄддеЕєстаєс седдеєсоадесе 840 сеаддассдс сдеааєдаєсє аасадддаса деЕсдддддса Єсадсаєєса ассдессадад 900

ЧЕдаааєссеЕ Сддассвтасс даадассаас Сасєдсдааа дсаєєсдсса аддасуєесс 960 саєсааєсад Єдаасудааа сСбадудддаєс даадасудаєс адасассудєс дсадеЕсєсаа 1020 ссабааасвта єдссдасса дчаєсучддсу аєдеЕсаєвтає єесєдасеєсудс Есддсассьє 1080 з асдадаааєс ааадессеєсд ддеЕєсеЕдоачда дчдадеаєдаудє суудсааддсеєд ааасссааад 1140 аааєсдасудуд аадддсасса ссаддчадедуд адссєдсуддс ЄбЄааєєсєдас ссаасасодда 1200 чааасєсасс аддеЕссадас асасєєсаадда ЕєЄдасачаєс дададсессеє ссеєдаєтає 1260 чЕЧчаЧдЕдЧєЧд деЕдсаєддсес дЕЕСЕсадеє даєдчадеча СЕсСУєЄсьдсеє сааєсдсдає 1320 аасуаасуа ассеєсаассе дсгааасадс ссддеЕссудсс сєдчдсучддасєсс дхеесддсесесь 1380 т бададддасе ассддсєсаа дссдаєддаа дЕсєдаддса аєЄаасаддес сЄдедаєдссс 1440

Єббадаєдесс сддадассудсас дсдсудсвбаса сєдасададс саасудадсас ассассеєвєд 1500 бо ссддааддеЕс Еддуєааєсє сусєааассс сдссуєдссЯд додаєсададс асєдсааєсва 1550 бЕдсесссса асудаддааєе ссрадсаадс дсаадессаєс адсєсдсусє даєстасудесс 1620 сЕдсссЕсвд басасассудс ссудєсусвас бассуаєєда асєддсеєсадеі даддссеєсу 1680 5 часєддсаса дддасдсєєдд саасдасдас ссадедссуд ааадессуєс ааасеєвдчеЕс 1740 аєсвсададда адпппаадсс дсаасаадде Еєссдєаддс даассєдсуда ааддаєсаєе 1800 а 1801 «2105 28 «2115 1490 «2125 ДНК «213» ВасКкКПо1дегкіа 5р. 5ЕА1 «4005 28 адзЕсСєЧчасєсс сСддссєсадає єЄдаасуссуду сддсаєдссе бЄасасаєдса адссдаас9ад бо садсасудддда дсаассссдуа Єддсдадеда сдаасудддед адсааєсасає сддаасдєде 120 ссЕдгадесдуа дддаєадссс дудсдааадсс ддасстаасас судсасбасдас сгаадддада 180 аачсчдчуачЧа Сссєсудасс Есдсудсвєаєа доаддадсдасс асддсачаєєс адсвадесвду 240

ЕдаддЧдсааа дссвассаач дсчасчаєсс дсадсєддсс Єдададчдасуд ассадссаса 300 7 сЕдддасєда дасасуддсесс адассссврас дддаддсадс адсддддаає ЕсСєддасаає 360 чаЧчаддсаасс сєдасссадс ааєдссудсуєЄ дчЕЧЕЧчаадчаа дудассЕСсСЧдддє сЄдсааадсас 420

СЕЕсдЕССдд ааадаааассі ЄсдЕССсСссаа Саєддаєдда ддаєдасуде ассддаадаа 480

Баадсассуд сєаасвасує дссадсадсс дсддсаасас дсаддчєдсуч адсдєєааєсс 540 ччааєсасвєдд дасудсааадс дсдсдсаддс дасєссдсваа дассчаєдед аааєсссс9 6о0 т ЧсЕсСаассвєд дчаасєдсає єдуаєчЧчассуду садчсєсєда чсЧдсодддсача дадоадасада ббо асєссасуєд Садсадсудаа асудсусачдач аєдедчадчда асассаєд сдааддсадс 720 ссссЕдддсс аассассдас дсєсаєдсас дааадсудсдуч ддадсаааса дчассадаєва 780 сссеЕддсаде ссасдсессва аасдаєдеЕса асрадесеЕдеЕс ддаддаєссає єЕсссеЕсСаднва 840 асчсбадссаа судсуєЄдааде Єдассудссвєд дададсасудд Єсуусаачаєс аааасссааа 900 є ччааєсучасу доадасссуса саадсучєдЧчу аєчасучєдчда Єсааєсєссудає дсаасусддаа 960 ааассеєсасс сбасссеЕсдас асддесуддаа сссЕєдсєдаа аддедчддчадє дсесдааада 1020 чаассудсдс асаддеЕдссд саєддсеЕдеЕСсС деЕСадсесує дЕСУОЄЧЧСадає дЕсСдддесваа 1080

ЧдЕсссусаас дадсудсаасс сеЕбдЕСсСсСЕва дЕєдссасудс аададсасес сааддадасе 1140 чдссуддеЕдаса аассудадда аддеддддає дасуєсаадс ссссаєддсес сЕсаєсддуадеа 1200 " чаЧдсЕсСсаса суєЄсаєсасаа ЄддсєсучЧаас ачачдчдєєЄдс саадссусча дасоддадсса 1260 аєсссадааа ассудаєсудба деЕссуддаєсуд садеЕсєдсаа сеєсудассдсу Єдаадсєсдда 1320 аєсудсвєадса ассдсддаєс адсаєдссус дуаєдаасасу СЄсссудддеЕс СЕдеасасас 1380 сдсссдесас ассаєдддад ЄдддЕЕссас садаадсадда бадссвраасс дсааддад9ад 1440 сдсеЕбассас ддєдодачаєєс аєдасєдчачуд Єдаадесудба асааддеєадс 1490 60 «2105 29 «2115 1408 «2125 ДНК 65 «213» Вискпо1дегіа Бр. КМ-А «4005 29 чсаассссду Сдудасчадеду счаасуддєд адсаасасає судаасуєдеЕ ссєдсадеду бо чачаєадссс ддасдааадсс дчасєсаасас суусасасчає ссасудаача аадсоддчоддда 120

Ессссєсудда ссссудсудсса саддаддсддс счаєддасача Єсадссадесс дасоддаддчвдаєсаа 180 » аддсссасса аддсчасчає ссдсадссуду ЄссЧдачачдда сдассадсса сассдоадасе 240 чачасасудс ссадассссє асуддчадчддаса дсачсдЧоддчда ассєссудчдаса асдададсаа 300 10 сссєдаєсса дсааєдссдс дЕДЕдЕЧдаад ааддссссс ддЕСдсааа сасеЕсеЕєсдес 360 сддааадааа асдсессєддс баасассєда ддсуддаєдас ддсассуддаа даасаадсас 420 сддссаасса сдеЕдссадса дссдсддеЕаа басдбадддс дсдадсдеЕса ассддааєта 480 т сЕдддсдЕаа адсдедсдса ддсддЕСЕдЕ баадассдудає дедаааєссс сдддсеЕвєаас 540 сЕдддаассд саєсддеЕдас сЄддсаддссє єдадесдесддс ададддаддадеЕ адааєєсссас 6о0 20 ЧЕдсадсадеЕ дааасдсусба дадаєдедда дчдаасассда Єддсудааддс адссссседу ббо чдссаасасєд асудсссаєдс асдааачсуєЄ дадчадсааа саччаєсада Сасссєддаєа 720

ЧдеЕссасуссс СааасчаєдеЕ саассадсвсу Єсуддчуачаєсс асєсссеєса Саасдєсадсе 780 7 аасудсдєдаа дчЕсСЧассуусс Єдадчадсас дадсєсдсаада ЄсСаааассса аадчааєєсда 840 сдддадасссд сасаадсуддс ддаєдаєсдед даєсааєссу аєдсаасдсд аааагаассюства 900 30 ссбасссеЕєу асасддссда аадсесєдсєд ададдаєддас деЕдсссдааа дадаассддс 960 чдсасаддєдс Єдсасддсеєд Есдесадсес дЕДдЕСЧУєЄЧад аєдЕсддучєє аадесссдса 1020 асудадсудсаа сссеЕсдесссеЕ гадесбєдссас дсаададсас сссааудада седссдудєеда 1080 сааассуддад даачдчдєдчдад аєдасуєсаа деЕссссаєддач сссеЕвбаєдуд бадддсеєсса 1140 сасдесаєас ааєддссудда асададддсє дссаадссдс даддсддадс сааєссссада 1200 ааассаєсу сбадеЕссудає сдсадеЕсєдс аасєсудасед суєЄдаадссєд дааєсдстад 1260 бааєсусуда сЄсадсаєдсс дсддедааса суєєсссудач ссеЕбдсасас ассдессдес 1320 асассаєдуду адсдддеЕвєсєс ассадаадса ддєадсссаа ссудсааддад ддсдсеЕсасс 1380 з асуддеддчає ссаєдаседа ддаєдаадве 1408 «2105 30 «2115 1383 «2125 ДНК «213» ВасКкКПо1декіа 5р. КМ-б «4005 30 дсаассссдд Єддсдадєдд сдаасддуєд адгсаасасає сддаасудєдЕ ссЕдсадеду бо чачаєадссс ддасдааачдсс дчасєсаасас суусасасдас ссаачудчача аадсоддчодаддчда 120

ЕсЕсСсуддасс сСсудсуссаса ддддсдассу аєддсачасеє адссадеЕсду ЄдададЧдєааад 180 є чЧессассаа дсчасчаєсєЕ дсадссдудес Єдчачадчдасу ассадссаса сєдадасеєда 240 часасуддссс адассссвас дудадЧаддсадс адсодчддчаає ЄсСєЧдЧдасаасє доадададсаасс 300 65 сЕдаєссадс аасдссдсдЕ дЕдсдаадаа ддессЕєсдачя Сєдсааадса сЕсседессс 360 чааачаааас СЕсЧчаддєса асасссеЕсуду адчаєдасуд бЄассудаадча аєаадсасс 420 чсЕаасвасу Сдссадсадс сдсддсбааса ссадчдадаєдс дадсуєсаає садааєсасе 480 чаЧчсчсааа сдсдсодсадч суддеЕссудєЄвса адчассчаєде даааєссссу ддсєсаассє 540 чадаасєдса СсддЕдассд дсаддсеЕєсд адеЕдсддадсад аддддддаєад аареєссасє 6о0 чЧсадсачсЧда аасусусачда чаєдеЕдчачду аасассаєу дсдааддсад сссссеЕддс ббо саасассдас дсеЕсасдсас дааадсудєдда ддадсаааса ддаєсадаса ссседдбаде 720 ссасдсессса аасудасдесеса ассадеЕсСдсєЕ ддддасеєсає сеЕССЕЄвєадса асдсадссаа 780 сдсдєдааде Єдассдссєуд ддададсасуда єсдсаадаєсє аааасєсааа ддааєєсдас 840 чЧддасссдса саадсуддєдда аєчдаєдедда Ссаасссудає дсаасдсудаа ааасссвасс 900 бассссєдас аєддссудаа ЧчсссдсеєЧдад аддеєдчасує дсЕСЧдааадча даассуддсдс 960 асаддеєдссуд сасддсєдеЕс деЕсадсеєсуєЄ дЕСУєЧадає дЕсЧдддЕсаа дЕсССсСсдсаас 1020 чадсдсаасс сЕсСдсссеЕса деЕєдссасус аададсасес сааудадасс дссддедаса 1080 аассудачдуда аддеддуддає дасдесааде ссеЕсаєдудсс сЕсаєсєдуддуба дддсесєсаса 1140 судєсасбасаа єддссддаас ададдудєєдс саадссудсда ддєддадсса аєсссадааа 1200 ассуаєсуєа деЕссудаєсуд садесбдсаа сеєсудаседсу Єдаадсєсдда аєсдстадса 1260 аєсудсудаєс адсасдссудс ддедаасасу ЕЕСсСссуддудеєс сбЄдсасасас сдсссдесас 1320

Зо ассаєдуддчад сЄдддеЕЕссас садаадсадд бадсссаасс бдсаааддад ддсдсеЕсасс 1380 ас 1383 «2105 31 «4005 31 оо «2105 32 «4005 32 оо «2105 33 «2115 1505 «2125 ДНК «213» 5поддгавзвеї1їа аїхі «4005 33 чачадчсєсЧа СссеєддсеЕса чаєсудаасус Єддсддсасєдд ссєсасасає дсаадссддаа бо сддсадсасуд дададсеЕсдс ЄсСЕсСсддЕда сдадеддсда асдддеєдаде ааєдсаєс9ад 120 аасуєассчда деЕаасуддчадудч асаассудсєсс даааудчаєду ссаасассудс абєасудсссвд 180 ачдччададччдааа счдддуачЧаєсу ааачассссу сдєвтаєсєда дсоддссчаєд Сєдчаєсадс 240 бо бадссддаєдоа ддеаааддсес бЄассааддсд асчаєссаса дсдуддЕсєда дадчаєдаєсс 300 сдссасаєсд ддасєдадас асддсессааа сссстасудад аддсадсадЕ ддддааєсес 360 ччвасааєдучу дчадаассссд асссадссасє дссодсудєдесЕс єЄдаадчааддс сЕЄсСЧдуЧєсд 420 65

БааадчасеЕс сеєдЕсадуда адаааадссу чдсдсвєааса ссасєссдуєд сеЕдасуддеас 480 сегааадааса адсассддсс аасрасудєдс садсадссдс ддсаасасдє адддедсдад 540 сдЕєаассддаа ааєсассддад сдсааадсда дсдсадасдд СЕаасєаадеі садаєдеЕдаа 6о0 асссссдадс ЄсаасеєЕсуудуч асуЄєдсасеЕс дааасєддсє аассадчадед Єдссададчд ббо » адчсачааєс ссасуєдсад садсчдаааєд ссбачачасєу Єдчаччдааса ссдаєсддасда 720 адчдсадссеЕс сеЕддчдасаас асєдасуєєс аєдсссдааа Чдсасддацаєад сааасадчає 780 бадасасссеє ддеадсссас дсесссааасу асдасааєса дссдЕсдудда састадаєде 840 сЕсадеадсд аадсєаасдс дЕдааасєдеЕ ссдсссдддуа адсасддесд саадаєссааа 900 асєЕсааадча аєсучасуддуд асссусасаа дсдасоддЧдаєсуч асучєддаєса асссдаєдса 960 т асдсудаадаа ссссассвуд ЕсЕєЄдасаєд басудааєсс сеЕсададаєа ддададедсс 1020 бЕсудддаасс деаасасадд Єдсєдсаєдудщ сЕдЕСсЧдєса сЕСсСуєдеЕсУдєЄ дачаєдеЕ вда 1080 дЕсаадсссс дсаасдадсуд саасссеєєує саєсадесдс саєсаєсаад СЕдддсасес 1140 бааєдадасє дссуддедаса аассудадчда аддєдчдадає дасуєсаадс ссесаєддес 1200 сеЕбаєдасса дддсЕєЄсаса судєсєсаєбасаа сддаЕсдднас ададддбадс даадссусда 1260 7 часдаадсса аєссессадааа дссдаєсдба дЕссуддаєєд сасєсєдсаа сеЕсдадедса 1320 бдаадесуда аєсдссєадса ассдсаддес адсаєассдс дчаєдаасасу СЕССсССсСдддЕсС 1380

Сєдеасасас сдсссдссас ассаєдуадад Єдддадасас садааєсдудад Садасеаасс 1440 чдсаадчадудє сдсеЕсаасас ддсаєдсеєс аєдассдчдд Єдаадессуєа асааддсадс 1500 сдєад 1505

З5 «2105 34 «2115 1541 «2125 ДНК «213» сСі11іате11а арісоїа «4005 34

Есааасєдаа чадЕСсСєЧчасєс асуддсєсача сСеєдаасуссд дсуддсаддес Саасасаєдсес бо аадссдаасу дсаасаєдад ЄдсЕєсдсасе Сдаєдасдад Єддсуддасда дсдадсааад 120 баєдачадчаєс Сдссчдааєдча адчддудадасаа садссудааа сдасєдссаа Сассдсаєаа 180 адеЕсЧчачача ссааацчсасу дчасссєсуд дссасдсудсес асєсдчаєдаа сссасаєсод9ау 240 " асєтадсвєадс Сдудєаддудса асуддссєвасс ааддсдаса ЄсЕСвадсвеєд дЕСЕєЧадЧдачЧу 300 асдассадсс асассуддаас Єдадасасуд Єссадасеєсс єЄасудчаддс адсадеєдоадЧУ 360 аасгасєдсас ааєддддччаа асссєдаєдс адссасдссуд сдеЕдсаєдаа дааддсессЕсс 420

ЧчачЧсЕєдЕааа дсассєссуч Єчаєсєчаччаа дчасЧдаєдсає ссаасадаєд саєсааєєсда 480 сдЕбаасвсас адаадаадса ссуддсбаасе ссдедссадс адссдсуддаба абасддадад 540 є ЕдсчдадсддеЕс аассучаасуч асєдаддасуаєа ааддудсаєдеЕ аддсудчЧасаа СєаадеЕсадв 6о0

ЕдеЕдааадсс сЕдддсссаа ссеадчдааєс дсасссаааа ссуддеЕсЄсаасс адчадчсаєсде ббо 65 ададдааддЕ адаассссас деЕдсадсуді даааєдсудса дчадаєдедча ддаасасс9ду 720

Едадсчдааддс дЧасссЕсСєду асачасассу асудссЧачає дсчдааадсує дадчадсааа 780 саддаєсада бассссддеа деЕссасудссд бааасддаєдсе сддаєстєддад ЕСЕДЕСДДЧССЄ 840 ачадеєчЧасуду дссссдаадс Єаасусдаєа аассудассус ссдддчЧадва сддссдсаад 900

ЧдЕєгаааассс аааєдааєсд асддддадссс дсасаадсуда ЄддадсаєдЕ ддЕєсааєсс 960 часдсаасудс даадаассесє асседдесьс дасаєссаса дааєсєссдса дадаєдсоддад 1020 адсдсссєсу ддааседеда дасаддедсеЕ дсаєддсєдс судєсадсеєсу сдеЕєдеЕдааа 1080 т сдсєдоадеЕса адссссудсаа сдадсдсаас ссеЕбаєсєссьс судсєєсдссаєс даєсаддссд 1140 ччаасссааа дчачассдсс дсЕєЧдасааа соодадчаадч Єдадчасдас деЕсаадессає 1200 саєддсссЕс асдассаддд сбасасасудє дссасаасдда сдбасасааа ддачдчаддсдас 1260 сеЕсдсудадад саадсудасс Єсаєааадса судсессаадсс судаєєсддад Есєдсаасес 1320 часеєссаєда адссуддааєс дсвгадесааєс деЕдааєсєсада аєдеЕсасудс даасасудеєс 1380 7 ссдддссЕбд басасассудс ссудєсасасс аєсдддачдеддрз деЕєдсассад аадсадаєа 1440 сЕгбаассеєс додададддсує сбассасуде деЕддессаєд асєдддчдєда адесудєсааса 1500 аддеаассудс аддддаассеє дсудЕєдчає сассеєссева с 1541 «2105 35 «2115 1528

Зо «2125 ДНК «213» Вагсбєопеї1а арів «4005 35 аадссаааас сааасеєсеєса асєсучачадс сеєЧдасєссвєдд сссадаасча асудссдас9 бо 5 саддсЕєЕсаас асасдсаадс сдаасдсасеЕ ЕсСЕСсСодОдадед адсддсадас дддеЕдадсаа 120 сдсдєдддаа Ессассвтаєс сссасддаає аасудсадада аасеЕсдсдсеЕ аагсассдбає 180 асдЕссЕссУ ддадааадає Єсаєсддада Садаєдадсс сдсуєєсдчає Садссадес 240 чеЧчаддєаасє ддсссассаа дудсдасчаєс сасадссудує ссдачадчдає дассадссас 300 асєдадасеєд адасасудсс садчасссста суддчаддсач сачсдЧддчддаа Сассуддасаа 360 з Едддсдсаа сссдаєсса ссасдссусу ЄчадчсЧчдаєда аддсссвада чЧчЕсдсааадс 420

ЄсЕсеєсассу дЕЧдаачаєаа Єдасудєаас судчдачаадчаа дссссуддсва ассеЕсдсдсс 480 адсадссдсд дсаасасудаа дддудудстадс чсЕДдсссодда єЄСсассддудс дсааадсдса 540 сдсаддсдда баєсєаадес аддддеЕдааа єсссддададсс саассссудда асЕдссеєвд 6о0 асасєдчаєа СссєЧдадває дчдаачадчудєа адсдчдааєсс счадеЕдєадча доасЄдаааєсс ббо т чсачасасєс дчадчдаасас садсудудсдаа дадасоддссєсас Єддсссаєса сєдасуссєда 720 чаєдсчдааачд счдсдчадчдадс ааасадчаєс адчасассссуд дсадесессасу сєдсааасда 780 бо ЄдаасдеЕсад ссдЕсддаса деЕссасЕдсеЕ сдадаєддсдса дссаасдсає Сааасаєєсс 840 чсесссд9двдчдад сасуддЕсуса ачассаааас Ссааадчдаає Єдасудддддс ссдсасаадс 900 чаєдчачсає чЕддсЕсаає єсудаадсаас дсудсадаасс Єсассадссс Єєдасаєссс 960 5 чаєсєсдсудає ддасддадаса ссудєсеЕєсса деЕєсддсєду аєсуддедаса ддаєдсеЕдсає 1020 чЧчасЕдЕСУОЄСсС адсеЕСудбсдЕс деЕдЧачаєдеьє доддЕсаадес ссудсаасудад сдсаасссес 1080 дсссеЕвбадеьс дссаєсаєсє адесдддсас Ессааддуда сеєдссудбда Саадссддада 1140 ччаадчєдуду чаєдасуєса адессеєсаєд дсссеЕсасудуд дссдддсбас асасудєдсва 1200 » сааєддедЧдЕ дасадедддс адсчдадассу сдаддесдад сбааєсеєсса ааадссаєсе 1260 садеєсддає Єдсасєссдс аасєсудауєу саєдаадесд дааєсдссад єаассудєдчаа 1320 ссадсаєсдсс асуддсдааса судесєсссудуда ссеЕєдсасас ассудсссуєс асассаєддд 1380 аздзсЕдчавЕвс асссудаадде дсЕдеЕдссаа ссдсаадда дсаддсаасс асуддсаддЧче 1440 садсчдасєдуд ддєдаадссу бСаасааддса дссдбадддд аассєдсддс Єддаєсассе 1500 т ссЕсЕСваад даадаєдаа аасєддааа 1528 «2105 36 «2115 1390 «2125 ДНК «213» Рагахасспакірассег аріцт «220» «221» інша ознака «222» (643)..(756) «223» п являє собою а, уд, с або Є

Зо «4005 36 серассасбдса адесдсасда аасссєссодд ддЕсСадеддс ддасддадеЕда дсаасдсдеє бо адчаасссасє сєдчадчєду дчуаЧчаєаасає судуддааассу дсдсвєаасас сдсаєдаєдес 120 сЕдадддсса ааддачадає ссдссасєєдуща аддддасссдс дЕЄСЧассад стадеЕєдадвее 180 чачЧсааадчдс СЄдчассаачус чаєчаєсччає адсєддачеЕсєсу ачдчадчаєдає садссасасе 240 чачассЧдача сасуддсссад асеєЕсссасудд дЧаддсадсачЧ ЄддудадЧаасає сСддасааєду 300 є чадчсаасссо дасссадсаа ЄдссудсуєЄЧєЄ деЕдаачаадч ЄСЕссудчаєсс дсааадсасе 360

Ессассадучау аачаєчаєда судсассса адаадаадсс ссуддссаасс ссууєдссадс 420 адссдсддсба асасдааддд ддсЕєадсусєєЕ дсЕСУддааєсд ассдддсуєа аадддсдсдє 480 аздзчсЕдеЕсву сСасадесачча Єдедааасєсс ссудддсесєєсаа ссєдададаасс дсаєсєдаєа 540 сдєдсадасе ададеЕссдад ададддєєдЕ ддааєсссса дЕдЕададдЕ даааєссдднеа 6о0 " чаєаєсудчда адаасассуд ЕЄсдсдааддс ддсаассєдд сспппппппп пппппоппппо ббо пппппппппоп ппппопопоп попопопопо ппопопопопп попопопопоп ппппопоппопп 720 пппппппппп пппопоппопоп ппппппппопп пппопппдадс ЄаасдсуєЄєва адсасассдс 780 сЕддддадса сддссдсаад деЕсдааассс аааддааєсд асддддадссс дсасаадс9д 840

Едчачсасує ддсєсааєсс даадсаасус дсадаасссє ассаддудсеЕс дсаєдоаддчддад 900 є ЧчсЕДдДвЕаєсса чачасуучаса єЄсСеЕсСеЕсСсуда ссесссудсас аддедссдса ЄддссєдеЕсає 960 садсеЕсдЕдЕ судєдачаєдс сддауаєсаадс сссдсаасуда дсдсаасссе ЕдесЕсваде 1020 65 бдссаєсасу Єссоддаєдуда сасессадад адасєдссуд Єдасаадссу даддаадачеєд 1080 чачаєдасує саадсессеєса гддсссЕсає дЕССЕддудсе асасасудсдс басааєддсд 1140 чЧЕдасададу чаєсдсврасає ддеЕдасаєду Єдсєдаєсьєс аааааассує сеЕСсадеЕєсс9д 1200 аєсдсасеєсе дсаасесдад Єдсаєдаадда Єддааєсудсс адсаасєсусу даєсадсаєд 1260 ссдсддеЕдаа басуєєсссу ддссеЕсдсас асассдсссу Єсасассаєд дададеЕсСодес 1320

Едасссвєаа ссудсдадсу аассусааЧда аасдсадссу ассассудЕс содддесєсадс 1380 часєдддада 1390 «2105 37 «2115 1583 «2125 ДНК «213» Ппасворасії1їц5 Кипкееї «4005 37

ЕсссеЕсадаа адчаддєдає ссадссудусад чЕсССЄСссвас дудссассєв свасуасеЕєс бо ассссаасса СсеЕдссссас сссадасуас Садсссстаа ааддеЕсассс сарсуєсеєес 120 чаЧчсдсваса аасеєсєсаєу чседсЧасудцчу счддЕдЕдсас ааддсссудчад аасубаєсса 180 ссдеЕддсаєд сєдаєссасу аєсасвадед асєссаасес саєсдсаддсд адеєдсадсс 240 7 Едсаасссууда ассудачаасу ч«сЕсСєаада аєсадссеєда ссЕСЧЯсУУдЕЄ Єсудсудасесу 300

Есдсассаєс сасєдеадса суєдеЕдвєадс ссадсеєсаса аддддсаєда Єчаєсєдасу 360

Есдессссас сСесссссдд єссаєсассу дсадссеєсас Єададсдссс аасгаааєдсес 420

Еддсаассаа СааєаадддЕ Єдсусссуєс дсуддасеєса асссаасаєс Ссасудасас 480 адссдасас аассаєдсас сассєдеєсає сседсссссу ааддчаасусєс ссаассєсеє 540 5 чаеЧчсєдЧчдсадд аачасудсєсаа чадсєддсаа ЧУЧСсСЕСЕсССсСсС дсадсаєсда аєсааассас 6о0 асудсеЕссасс ассєдедсуддач дсессссуєЄса ассссєсєда дЕсссаассє Єдсуддесоаєба ббо сЕСсССсссаддс ддаасассва аєдсдЕсадс Едсуддсасєд аадддсуддаа асссессаас 720 асссадвсаєс сассуєстас ддасаєддасс ассадддсає ссааєсссдс Єсдссассса 780 гдссеЕссдадд ссссадсуєс адсаасадас садааадссу ссЕссдссас ЄдудсєдеЕссее 840 з ссабаваєсє асдсасеєсса ссудссасаса єддадсєсса сЕСЕСсСсСсСсСсЕє седсасесаа 900 чЧЕЕсеЕдеадс сєссассудса сссссссадс Єдчадсєдадч дсЕсссасад садасесаса 960 аваассусссу сусЕсСудсЕСсЕ асдсссааса ааєссудаса асудсєєдсса сссасдабаєє 1020 ассдсуддсбєд сеєддсасудба деЕгадссуєд дсЕвЕЕСЕдудЕ бааасассує сааадедеса 1080 асадессасес саасасссує єсЕссеЕссаа саасададес свеасудаєссу аааасссєсса 1140 т бсасссасудс ддасдсєбєдсес саєсадасьсє єсдЕССсСаєєд сддаадасеєс сссаседсед 1200 ссЕССсСсдбад дадеЕсєдддс судєдеЕссса Єсссаасудбд дссудаєвтасс сЕСЕСаддес 1260 бо чдасеєасудбєає сассуєсєЕсу чдсоддасЕЕвЕ аєсєсассаа сеєаассааса сддсдсдадЧеЕ 1320 ссаєсссааа деЕдаєсадсаа адссаєсєсс саадсєддаа ссаєдсудеє ссаассааєєс 1380 аєдсудудбсаєсс адсасеЕсдсе Ессаааєдеьс аєсссссусс ссуддаддсада сСбасссасає 1440 5 чЧдЕсасеєсасс адсссдссас ЕсдсЕссдаа Ессаааааєс аєссаєсдсаа дсаєааааєс 1500 аасєсдудча аасесудсєсу асесєдсаєдеЕ аєсаддсасу ссудссадсує Єсудессєдад 1550 ссаддаєсаа асеЕсеЕСсаєсє баа 1583 «2105 38 «2115 1395 «2125 ДНК «213» БПГасеЕорасіії1їц5 ЕБігст-4 «4005 38 асчаасусєд дсдадсудсєдсес Єаасасасус аадссчадсу сдчдадаадсса дадаадссєє бо сдвддсддаас єддсддаасу адсддсуддає дддєдадсаа сасдсаддса асссдссста 120 аадсддддда Сассасєсєдд ааасаддбдс Саасассдса бЄааасссадс адесасаєда 180 чЧеЕЧсЕдЧЄвєЧЧ ааачасуддсє Єсуддссдсєса сЕссадчаєу дчассєдсддс дсаєсадсса 240

ЧЕєдЧасодчад саасуддсєса ссааддсаас дасасусадс сдассєдача доадеааєссад 300 7 ссасаєсддд асєдадасас ддсссааасе ссрасудддад дсадсадсад ддаассьєссс 360 асааєдчасу саадсссЧає дчдадсаасус сдсуаєЄдчдаєсуч аачааддесс Єсуддчаєсоава 420 ааасссЕдсеЕ деЕєдаадаад аасудЕєдсєд ададсаассд сссаєаасує дасддсаасс 480 аассачдааа Ссасуддсєаа ссасусєдсса дсадссусуд Єаасасуєад деЕддсаадс 540

ЕсЯдсссодає свсаєсуддуасу Єааачуачадс дсаддсуддЕс ЄСЕЄсСаадссоі дааєсдеседааа 6о0 т ЧдсессЕСадсс Саассудадда ададсаєсуд ааассудачач асєсдчадсдс адаачадчад ббо адеЕдчаасеєс сасудєсєдсадс дчуаєдааасус дсачаєсасає ддаачаасас садсдддасдаа 720 чЧасуддсЕССС СддЕССДЕСа ссдасдсєда ддсЕсдааад сасдддбадс даасадчадасс 780 ачасасссвєд деадсссаєсу ссусбааасча Єчадсудссаа ЧчЕЧЕсдоадад дЕсесссдесе 840 сЕсадедссд садсєаасдс аєсаадсасе ссдсссбддду адсасдассуд сааддсєдаа 900 є асєЕсааадча аєсучасудчдуду дсссусасаа дсдасоддадс асуєдудеиєса асссдаадса 960 асдсудаадаа ссссассадд ЕсЕєЄдасаєс Ессєдсаадс сєаададаєс аддддеЕєссс 1020 сєсуддуадаса ддаадасадд єЄддеЕдсаєда ЕЄДдЕСДєСад сЕСУ9ЄЧЕСЯЄ дадчасоаяєвєда 1080 чЧдЕсаадессс дсаасдадсу саасссеЕсудє бассадесдс садсаєсаа сеЕдддсасес 1140

Бадсдачасс дссуддеЕЧдаса аассудЧачча аддєдададудчдас дасуєсааає саєсаєдесесс 1200 " сЕсаєдассе дддссасаса судбдсвсасаа сдчдаєдднас ааєдадаадс даасеєсудсда 1260 чадчаадсєуд аєсеЕсеєдааа ассаєсєссса деЕєсдчдаєєу саддсєдсаа сеЕсдссеєдса 1320

Єдаадссуда ассудстадса ассдсуддаєс адсаєдссус даєдаасасу СЕСССОДЯСсс 1380 ббдеасасас сдссс 1395 бо «2105 39 «2115 1549 «2125 ДНК «2135» Епебегососсив 65 «4005 39 адчдєдаєсса дссуусасссє ссдаєсасудс Сассссдеса сдасеєссасс ссааєссаєсе бо ассссассЕс аддсуддсєду ссссааааа дчЕСассссас сасеЕссуд Єдесвбасааас 120

ЕсЕСЧОсЧЧЧдЕЧЧ Сдасудддсуду ЄДдЕдвасаа дсссуддаас дсасеєсассу суддсуєдсеУ 180 асссуусаєс ассадсдасє ссудсесєсасє дсаддсдадес Єдсадсссдс аасссддаасе 240 » чачачаадсс Сєаачачасєє єдсаєдассс судсудЕССад счасеєсуєсу Сасессссає 300

Едесадсасує деЕдєадссса ддаєсасаачу дасаєчаєда ЄсСєдасуєса Єссссассеє 360 10 ссЕСсСсСУДдЕЕс дЕСассддса дЕСЕСсССсСврад адсдсссаас Саааєдаєдудд саассаасаа 420

ЕаачдчдчЕсСЧдс дсссуєсодсу ддасеЕсаасс саасаєсєса судасасдадс Єдасудасаас 480 саєсбдсассас сбдссасеєс деЕсСсссдаад ддааадссєсс аєсєссадад єддЕсаааду 540 т асдсєсаачас сеЕддсаадчує ЄсСЕсСсусуєЄєс дсссєсчаасс ааассасаєд сессасссе 6о0

ЕдеЕдсдаддес сссуєЄсаасє ссЕсєЧдадеЕс Ссаассесдс ддєсубасесс сссадддсода ббо 20 ЧЕдссваасу сдЕєсдсеєдс адсасєдаад ддсддааасс ссссаасасе Єадсасесає 720 сдЕЕсасддс деЕддастасс адддсаєсса асссЕдеЕсвд сеЕССсСсасудс ЕсСЕСДадссе 780 садсдеЕсаде басадассад ададссдссеЕ Есдссассддда єдЕєсСсеЕсСса бсасаєссасу 840 7 сасеєссассуд ссасасаєддуда аасеєссассс єссЕсеЕссвуд сасеєсаадес єсссадесес 900 сааєдасссеє ссссддеЕсЄда дссдддддсЕ єссасаєсад асссаадааа ссдссідсдас 960 30 Єсдсеєсасу сссааєааає ссуддасаасуд сеЕєдссассо асудсбаєсасс дсуддасеЕдссд 1020 чдсасдєадеьсє адссуєддсеЕ ЕЄсСЕддЕсад аєассуєса дддасуєсса деЕсСасеєаас 1080

СЄсСсСЕсУДЄЕсСЕ сссссаасаа сададесєсвса сдаєссудааа ассеєссесса сеЕсасдсддас 1140 чЧЕсдсЕСсСуддЕ садасесссу Ессаєєсдссу аадаєєссссо ассдсєдссе сссдбаддад 1200

Єссдддссує деЕСЕСадеєсс садедбддсс даєсасссяс ссаддеЕсудс басдсаєсдаие 1260 чЧдассеЕєдуаєд адссудеЕсасс єсассаасвта дсеаасдсас судсдддесса Сссаєссадсд 1320 асасссудааа дсудссеЕсеЕса сеЕсСеЕваєдсс аєдсуддсаєа аасєдессаєд сддеаєсадс 1380 ассЕдеЕсеєсс аадесдеЕсаєс ссссеЕСєДдає дуддеаддеєва сссасуєудесє асссасссає 1440 з ссдссасеєсс ЕСЕ ЕСсССсСаає сЄдадсдсаа сасссудддад дааадаадсд ЕЄСсСЧдасеЕєдс 1500 аєдеаєсад сасдссудсса дсдЕєсуєсс єЄдадссадда Єсааасесе 1549 «2105 40 «2115 1541 «2125 ДНК «2135» Ре1т1їбіа «4005 40 садаааддад дедаєссадс сдсасссєсс дасасуддсеса ссеЕєдеЕсасд асессасссс бо адеЕсасаас сссудссуєдуа Єаадсудсссс ссЕсдсудачеЕє аддссассста сЕсссуддсда 120 є часссусссс сасудудєдеЕЧда судддсудчасєдс деасаадасс суддаасуєа сСеЕсассус9ад 180 сасдсеєдаєс сдсдаєсєтасс адсдаєсссд асеЕссасудса дЕСдадесєдс адасеєдсдає 240 65 ссудассасу ассддЕсста Єдододаєсадс Есссссссдс дддеЕсддсаа сссЕСЕдсас 300 садссасєдеЕ асдасдеЕдед садссссасс баєсаадддсес аєдаддасеє дасдеєсаєсс 360 ссассеЕсссеЕ ссудЕСЕДдДЕС ассддсадес єсаєсададе дсесаасєда асбдсадсаас 420

Баасдасаа чЧдасєЕдсудссєс дсєдсууддас Сбаасссаас ассссасдас асдадсєдас 480 чЧасадссаєсд садсассвєде дедсаддеєс сСсЕєсСсдадс асдааєссає сссгЕддадааас 540

Есссвєдссає деЕсааадчсу чоасааддчсс чсєссусуєєдс ассдааєсєсаа ассасаєсає 6о0 ссассдсЕсд ЕдсдддЕсСсс сдеЕсаасеєсс єЕсеЕдадеЕсеєс аассесдсдуча ссдабасьссс ббо саддсддЕса асеЕссасудсуд СЄсадсеЕссудеЕ бассдадааа ассааєсссс аасаассаде 720

Едасассуєс садчддсуєдуч асеассадчду Сасссааєсс ЄЕдЕСЕСсСССсСсС ссасуссеєс 780 чЧЕдсаєдадс дсЕсадсасад дсссаддудда СсСдсссЕсдс сассудеЕдесє ссеЕССсСддсаса 840

Есвєасусаєс сСсассдсвас асуудсудааєс ссаєсссссяє ссассуєасс свеадссаєдес 900 адеЕсасааасє дсадсєссса дучєсЧдадссс дадчаєсєса саєсЕдеЕсес асаєаассс 960 сЕдсдсасудс ЕЄсасуссса деаасеєссуда Єсаасудсеєсуд сассссрасує аєсассодс9у 1020 сЕдсЕддсас деЕадеЕсадсс ддєдсеЕсаєс сеЕсасудднас сдеЕсаєддудс сссседваєс 1080 ачаадчадсє СЕСЕсСудСЕсСсС дсасаааадс адесєвсасаас ссддааддсесе Ссаєсссдса 1140 сдсуддсаєєд сєддаєсад сеЕсеєсудссса Єсдессаааа Есссссасвд сеЕдссЕсссу 1200 бадчачессд ддссудбєдЕсеЕ садесссаде дЕддсЕддеЕс дЕССЕСсСсса ассадссаса 1260

Зо чаєсдЕсудс ЄЕддсаадсе Есваєсссас саасвтассва аєсєдссаєс ддссдсессса 1320 аєсдсудсдад дсссудаадудд сссссусеЕвЕ саєссєсада ссудбєаєдсудудч бастадсвас 1380 ссСсеЕссддаде адссаєсссс сасдасєдудд сасуєєсєссуа Єудсаєссасес асссуЕєссдс 1440 сасєсдеЕсад сдеЕссдаада сседесвсассу сСЕСсСдасеєдс аєдедсаадд саєдссдсса 1500 дсдЕссааєс сдадссадда сааасеєсса садесеєсдаєс Є 1541 «2105 41 «2115 1502 «2125 ДНК «213» Ре1отопав «2205 «221» інша ознака «222» (192)..(193) «223» п являє собою а, уд, с або Є «2205 «221» інша ознака «222» (832)..(833) «223» п являє собою а, уд, с або Є «4005 41 асссЕддсеЕсС ачаєсудаасу ссддсуддсає дссЕсасаса Єдсаадесда асуддсаасад бо бо

ЧЕєаадссда счадсудудсда асчдддучдєдЧчадс аасасасєсуд аасуєдссса дЕСЧЯдоЄсдЧОЯЧЧ 120 асаассудсЕсС дааададсад ссаасассус аєасасссд адддєдЧааач сододоаддчдчЧчаєс 180 65 саадассеєсу сппдаєсдда дсуддссдаба Єсадаєсадд Садсесддаєдуа ддєаааддсс 240 сассаадсса асчдаєсєдвта дссддЕСсСєда даддасдасс адссасассд ддасєдадас 300 асуддсссада сЕСсСсасуд аддсадсадс доадчдаасЕсЕ ддасааєдуда сдсаадсстєд 360 асссадссає дссудсуєЄЧдсу дчдаачаадчдс сСЕссудЧчуєс ЄааассусЕс Єсдссадоада 420 адааааддусєЕ ссддеЕсааса сседддассс асдасддеас ссдаадааса адсассддсе 480 аассасусєдс садсадссудс ддєаасасує адддсдсаач суєсааєсу аасвтассод9ад 540 сдсааадсдЕ дсдсаддсдд Єбаєдсаада сададдедаа асссссуддадс єсаассєд9ад 6о0 аассдсссеЕс дедасеєдсає адссадчадса соддєачаччадч дчасдчааєс ссудсуєдеад ббо садедааасд сдбадаєаєд сддаддааса ссдаєддсда аддсааєсссс ссддасседе 720 асєдасдссс абдсасудааа дсдЕдддчдад сааасаддає Єадабасссеє ддаєадесссас 780 дессвєааасу аєдеЕСаассу ЧСЕЧ9ЕСсСОЧдЧа чЧФаЧЕСЕСЕСС єСадєаасує аппесаасос 840

Ечаачдчсєдас судсссдудадчда чдсасуддссуус ааддсєдааа сссааачдаа Ссдасоадоада 900 сссдсасаад сддєддаєда ЄдЕддЕсСвЕаа єссдаєдсаа сдсдааааас сесасстасс 960 сЕєбдасаєдс саддааєссє даачачаєсє дддадедссс дааададаас сєддасасад 1020

ЧдЕдссдсаєд дссудссудєса дсеЕСсСЧєдЕСЯ Едадасуєвєд ддєсаадссс сдсаасдадс 1080 чдсаасссєсу Єсаєсадесд ссбасдааадд дсасеєссаасє дадассдссуд деЕдасааасс 1140 ччаччаачдє ддаддаєдасу Есаддесаєс аєддсссєва сддаєадддс басасасудес 1200

Зо асасааєдудс судуддасачад дудссдссаас ссусуаддуду чадсвєааєсєсс садааасссу 1260 чЧЕсудбсадесс ддаєсдбадеі седсаасесуд аседсуєдаа дЕсудааєсу сеадсааєсд 1320 сддаєсадсе Едссдсдудєд аасасуєєссс судддаєссвдЕ асасассдсс суєсасасса 1380 бдддадсучда сЕседссада адсадесадс сбаассусаа дчдадддсдає сбСассасуддса 1440 чаЧдЕссдєда седдддаєдаа деЕсдбаасаа ддсадссуєа ссуддаадаєд сддасеєддаєс 1500 ас 1502 «2105 42 «2115 34 «2125 Білок «213» БпасеЕососсив Іасвів «4005 42

І1їе ТПг Бек І1їе бек Іеч Суб ТПг Рго сіу Суб Ппуб ТПг сіу Аза Іеч 1 5 10 15

Меє сі1іу Сув Авп Меє ПЦув Тпг Аїа Тіпг Сув Нів Сув бек І1їе Нів Уаї 20 25 Зо зек Гуз бо «2105 43 «2115 22 65 «212» Білок «213» Б5БЕарнуІ1ососси5 ерідестів «4005 43

Іїе Аза Бек Ппу5 Роре І1їе Суб5 ТПг Рго сіу СубБ Аза Пуб5 ТПг біу б5ег 1 5 10 15

Рпе АвБп бБег Тук Сув Сув 20 «2105 44 «2115 144 «212» Білок «213» Редіососсив асіді1їасвісі «4005 44

Туз Тук Тук біу Авп сіу Маі ТП Сув біу Пу5 Нібв бек Сув Бек Уаї 1 5 10 15

АБр Тер сбіу Пув Аїа ТП ТБ Суб І1е І1їе АвБп А5п сіу Аїа Меє Аїа 20 25 Зо

Тгр Ата Трг сіу сС1у Нів сіп С1іу Авп Нів Пув Сув «2105 45

Зо «211» 44 «212» Білок «213» ЕпЕбегососсив Гаесійт «4005 45

З5

Аза ТпПг Агуд бБеє Тук біу АБп біу Уаії Тук Суб Авп АБп бек Гув Сув 1 5 10 15 40 Тер УМаї Авп Тер С1у бічш Аїа їув біц Авп І1е Аза Ссіу І1е Уа1ї І1е 20 25 Зо

Бек сбіу Тер Аїа бек біу Те Аїа сіу Меє с1іу Нів 35 40 «2105 46 «2115 39 «212» Білок «213» БЕгреребососсцв ІТассів «4005 46 сіу Тв Тер Авр Авр І1е сіу сСіп С1іу І1е сіу Акуд Уаі1і Аїа Туг Тгр 1 5 10 15

Уаї б1у Гуз Аїа Меє сбіу Авп Меє Бек АБр Уаі АБп біп Аза бег Агд бо 20 25 Зо

І1їе АБп Акуд пуб Куб Гув5 Нів 35 65 «2105 47 «2115 48

«2125 Білок «213» Гасєорасі1ї1цЧ5 3)3оппзопії «4005 47

АБп Агуд Тер бі1іу АБр ТБ Уаї Іеч бег Аїа Аза бек сіу Аїа сб1у ТЕБг 1 5 10 15 с1у Іїе цув Аїа Сув Пув Бек Рре Сіу Рго Тер Сіу Меє АїТа І1е Сув 20 25 Зо сіу Уаі сіу сіу Аїа Аза Ії1е сіу біу Тук Робе біу Туг ТП Нів АБп 35 40 45 «2105 48 «2115 70 «212» Білок «2135» ЕпЕбегососсив Таесаіїі5 «4005 48

Мес Аїа пув сій Рре С1у Іїе Рго Аїа А1їа Ма1 Аїа С1іу ТіПг Уаї Ієч 1 5 10 15

АвБп о Уаі1і Уаі1і сії Азїа біу біу Ткр Уа! ТрПг ТПпг Іїе Уа1ї бек І1е Іеч

Зо 20 25 Зо

ТПг Аїа Уаї біу бек біу біу Гей бек Геї Геї Аїа Аїа Аза с1у Агд

З5 біч бек Іїе пу Аїа Тук Геч Ппуб5 Гуз біч Іїе Ппув пуб Ппув с1Уу Пув 5о0 55 бо 40

Агуд Аїа Уаі Іїе Аза Тгр 65 70 45 «2105 49 «2115 51 «2125 Білок «213» Б5БЕарнуТ1ососсив ацгецьв «4005 49

Меє бек Тгр Геч Авп Рпе Гечп Ппуб5 Туг Іїе Аїа Гуз Тук біу Ппув Пув 1 5 10 15

Аа Уаі Бек Аїа Аїа Тер Гуз Тук Ппув біу Пув Уа1і Геч січ Тер Іеч 20 25 Зо бо АБп оУМа1 сіу Рго ТПг їеч Сі Тгр Ма1і Тер Сіп ПЦув Теч Ппув Кув І1е 35 40 45

Аза с1у Геч 65 50 «2105 550

«2115 43 «2125 Білок «213» Ггасеєососсив дасуієеає «4005 50

Іїе сіу сі1іу Аїа Іечп біу АБп Аза Гей А5п сіу Гез біу ТБг Тгр Аїа 1 5 10 15

АвБп оМеє Меє Ап о сіу біу біу Рпе Уаі Авп сбіп Тер сіп Уаі1і Тугє Аї1а 20 25 Зо

АБп оПпув сС1у їув І1е Авп Сіп Туг Агд Рего Туг 35 40 «2105 51 «2115 103 «2125 Білок «213» Евспекісніа соїї «4005 51

Меє Аку Тбг Те Трг Гей Азп бій Геї АБр бек Уа! бек сіу сіу Азїа 1 5 10 15 бЗек б1у Акуд АБр Іїе Аїа Меє Азїа І1їе сСіу ТіПг Іеч бег Сіу біп Рре 20 25 Зо

Уаї Аїа сСіу біу Іїе сіу Аіїа Аза Аїа сіу сбіу Уаі Аза сіу сіу Азїа 35 40 45

Іїе Тук АБр Тук Аза бек ТПг Нібв пуб Рго Ап Рго Аїа Меє б5ег Рго 5о0 55 бо бек сіу Геч сіу біу ТБгЕ Іїе пу5з біп пуб Рго біцп сіу І1е Рго 5ег 65 70 75 80 біч Азїа Тер Авп Туг Аза Аза сіу Аку ІТеч Суб АбБп Тер бек Рго АБп 85 90 95

АБп о Теч бег Авр Уаі1ї Сув Іеєч 100 «2105 чф1352 «2115 339 «2125 Білок «2135 сСрі «4005 52 60

Меє УМаї Гуз Гув Авп Авр Гей Рбпе Уаі АБр Уаі! бек бег Ні АБп с01УуУ 1 5 10 15 65 Тук Авр І1е Тпг СсС1у Іїе Ге Січ Сіп Меє сіу Тпгс Трг Авп Тс І1е 20 25 Зо

Іїе Ппу5 І1ї1е бек біц бек Тс ТБПг Тук Геч АбБп Рго Суб Іец бег Аїа 35 40 45 біп Уа1ї бій біп бек АБп Рго І1їе сіу Рбе Туг Ні Рре Аїа Агу Ріре 5о0 55 бо біу бі1у Авр Уаі Аїа сії Аза сії Аку біз Аза біп Рре Рре Геч Азр 65 7о 75 80

Авп оУа1 Рко Меє сіп Маії Гуз Тук Ге Уаі Гей Авр Тук сії АБр АБр 85 90 95

Рго Бек бі1іу АБр Аїа біп Аїа Абп ТПг А5п Аза Суб Іеї Агку Ропе Меє 100 105 110 біп Меє Іїе Аза А5р Аза сіу Тук Гу5 Рго І1е Тук Тук Бек Туг Пув 115 120 125

Рго Рре Тпг Нів Авр Авп Уаі1ї Авр Туг Сіп Сіп Іїе Те Аза Сіп Рре 130 135 140

Рго АБп бек Геї Тгр Іїе Аїа сіу Тук сіу Геї АБп АБр біу ТПг Аїа 145 150 155 160

Авп о Рпе сії Тугк Роре Рго бек Мес Авр сіу Іїе Агду Тер Тгр біп Туг 165 170 175

З5

Бек Бек АБп Рго Робе АвБр Гу5 АБп І1їе Уа! Геч Геї АБр АБр біч січ 180 185 190

АвБр Авр Пув Рго Пуб5 ТПг Аза біу ТБПг Тер пуб біп АБр бек Гувз б1Уу 195 200 205

Тер Тер Рпе Агуд Агу Авп Авп біу бек Роре Рго Туг АБп Пув5 Тер біч 210 215 220

Туз І1їе сіу сіу Уа1і Тер Тугк Тук Роре Авр бек Ппувз біу Тук Сув Гечй 225 230 235 240

ТПг Бек бії Тер Геч губ Авр АвБп бій пуб Тер Тугє Тук ІТеч ГУу5 Авр 245 250 255

АБп о сіу Аїа Меє Аза ТПг біу Ткр Уаі Ге Уа1і сіу Бек січ Тгр Туг 260 265 270 60

Тук Меє АБр АБр бек біу Аїа Меє Уаі ТПг сіу Тер Маї пуб5 Тук Пув 275 280 285 65 АБп о АБп оТеср Туг Туг Меє Тпг Авзп бій Агу біу Авп Меє Уаї 5Бег Авп 290 295 300 біч Рпе Іїе Пув бек сіу Ппув біу Ткр Тук Рпе Меє Авп ТПг А5п с1УуУ 305 310 315 320 бі пе Аза Авр АвБп Рго Бек Ропе ТПг Пув бій Рго Авр б1іу їеч І1е 325 330 335

ТВг Уаї А1а «2105 10553 «2115 296 «212» Білок «2135 р-1 «4005 53

Меє сіу Ма1 Авр І1їе Січ Ппув сСіу Уа1і Аза Тер Меє Сіп Аза Агуд Кув 1 5 10 15 біу Акуд Уаії бек Тук Бек Меє АБр Роре Агу АБр біу Рго Авр бБег Туг 20 25 Зо

Авр Сув Бек Бек бек Меє Туг Туг Аїа Гей Агуд Бек Аїа сіу Аїа 5ег

Зо зек Аїа сіу Тер Аїа Уаії АБп ТПг бій Тує Меє Ні5 Аза Тер Іеч Іе 5о0 55 бо

З5 біч АвБп біу Тук бі Геї І1їе бек біц АБп Аза Рго Тер АвБр Аїа Гув5 65 70 75 80 40 Агуд б1у Авр Іїе Рпе Іїе Тер С1іу Агд Пув Сіу Аїа бБег Аза С1у А1а 85 90 95 біу бі1у Ні ТПпг сіу Меє Рре І1їе АБр б5ег АБр АБп Іїе Іїе Ні Сув 45 100 105 110

АБп оТук Аза Туг АБр біу І1їе бек Уаі Авп Авр Ніб Авр сії Агу Тер 115 120 125

Тук Тук Аїа біу біп Рко Тук Тук Тук Уа1і Туг Агу Іеїп ТБг АБп Аза 130 135 140

АБп Аза сбіп Рго Аїа бічп Гуз Гув Пец сіу Тер сбіп Пу5 АБр Аїа ТЕБг 145 150 155 160 бо сі1у Рбпе Тер Туг Аїа Агу Аза Авп Сіу ТПг Туг Рго Пув Авр січ Ре 165 170 175 біч Тує Іїе біц сій Авп о Ппув бек Тгр Рпе Туг Рре Авр Ав5р сіп с1Уу 65 180 185 190

Тук Меє теп Аза бічЧ пуб Тер Геч пуб Нів ТПг АБр о біу АБп Тгр Туг

195 200 205

Тер Рпе АБр Агу АБр о біу Тук Меє Аза ТіПг бек Тгр Гуз Акгд ІШе с01У 210 215 220 біч бек Тер Тук Тук Рпре АБп Агу АвБр о біу бек Меєсє Уаі! ТПг сіу Тгр 225 230 235 240

Іїе Ппув Тук Тук АБр АБп о Тгр Тукг Тук Сув АБр Аїа ТПг АБп б1іу Авр 245 250 255

Меє Гуз бек АБп Аза Рпе Іїе Аку Туг АБп АБр біу Тгр Тукг Іеч Гец 260 265 270

Теч Рго Авр біу Акуд їеч Азїа Авр їув Рго біп Рре Тіг МУа1ї січ Ркго 275 280 285

Авр сіу Геї Іїе ТПг Аза Гуз Уаї 290 295 «2105 «54 «2115 233

Зо «212» Білок «2135» гамма «4005 54

Меє січ І1їе сіп Пув ПЦув Геч Маі1і Авр Рго бег Кув Тук б1у Тіпг Гуз 1 5 10 15

Сув Ркго Тук ТПг Меє Ппув Рго пуб Тук І1їе Тбг Уаї Нібв5 АвБп ТпПг Туг 20 25 Зо

АБп о Авр Аза Рго Аїа біп АБп бі Уаї бек Тук Меє Іїе бек АБп АБп 35 40 45

АвБп обі Уа1ї Бек Роре Ні5 Іїе Аза Уаі Авр Ар Пу5 Пу5 Аїа І1е сіп 5о0 55 бо біу І1їе Рго Гей бій Агуд АБп Аза Тгр Аїа Суб біу Авр с1іу АБп с1УуУ 65 70 75 80 зек бі1у АБп Агуд біп бек ІїІе бек Уаі біп Іїе Сув Тук Бек Ппувз 5бег 85 90 95 біу бі1у Авр Агуд Туг Тук пуб Аїа бі АбБр Абп Аза Уа1і Авзр Уа1ї Уаї бо 100 105 110

Агуд біп Геч Меє бек Меє Туг АБп Іїе Рго Іїе сій Ап Уаі Агу ТБг 115 120 125 65

Нів біп бек Тер бек біу пуб Тук Суб Рго Нів Аку Меє ТІеч Аза сі1ц 130 135 140 біу Акуд Тер біу Аїа Рпе Іїе сіп Гпуб5 Маї їу5з АБп біу Авп Уаі Аза 145 150 155 160

ТПг Тр бек Рго Тйг Гпубз біп Абп Іїе Іїе сіп бек біу Аїа Робе 5бег 165 170 175

Рго Тук бії ТП Ргро Авр Уа! Меє сіу Аза Геї ТПг бек Іеч Гуз Меє 180 185 190

Тис Аза Авр Ріре І1їе Іїеч Сіп бек Авр сіу Те Тіг Туг Рре І1є бег 195 200 205

Тув Рго ТПг бек Авр Аза сіп Геч Гуз Аїа Меєсє Туз бій Тук Геч Авр 210 215 220

Агуд пуб сб1у Тер Тер Тук біч Уаї Пув 225 230 «2105 1655 «2115 481 «2125 Білок

Зо «213» МВ11 «4005 1055

Меє біп Азїа Гу5з Ге ТПг Ппув пуб сі Рбе І1їе біїп Тер Теч пу5 Торг 1 5 10 15

Ззек бі сіу Ппув біп Рбе АБп Уаі Авр Гей Тер Тук сіу Роре біп Сув 20 25 Зо

Рпе Авр Туг Аїа АБп Аза біу Ткр Пувз Уа! Геч Рбе сіу Іеч Іеч Іеч 35 40 45

Туз біу Геш сіу Аїа Пу5 АБр І1їе Рго Рбе Аза Абп Авп Рпе Авр с1УуУ 5о0 55 бо

Теч Атїа Тпс Ма1 Туг Сбіп Авп Трг Рго Авр Рре Іеч Аза Сіп Рго С1Уу 65 70 75 80

Авр Меє Уа1і Уа1і Рре біу бек АБп Туг сіу Аїа сіу Тук біу Нівз Уаї 85 90 95

Аза Тер Уаі Іїе сії Аза ТБг Те Азр Туг Іїе Іїе Уа1і Туєк біч сіп 100 105 110 60

АБп Тер Геч сіу сіу біу Терр Тбйг АБр Агуд Іїе сій сбіп Рго с1іу Тгр 115 120 125 65 біу Тер біц пуб Уаі! Тпг Агу Агуд біп Ніз Аза Туг Авр Рпе Рго Меє 130 135 140

Тер Рбе І1їе Агу Рго АБп Рпе пуб бек бій ТПг Аза Рго Агу бег Те 145 150 155 160 біп бек Рго ТПг біп Аза Бек Ппуб5 Пуб5 біп ТбВг Аза Пу5 Рго біп Рго 165 170 175 пув Аїа Уаї січ Течш Пув І1їе І1е їув Авр Ма1 Уа1і цЦув Ссі1іу Туг Авр 180 185 190

Теч Рго Мпув Агуд сіу с1іу АБп Рго Пуб5 біу Іїе Уаі І1їе Ніб5 Авп Авр 195 200 205

Аза сіу Бек Ппув біу Аїа Тйг Аза біц Аза Тугк Агу АБп о біу Іеч Уаї 210 215 220

АБп Аза Рго Геї бек Агу Теч біц Аза сіу Іїе Аза Нів бек Тук Уаї 225 230 235 240

Бек біу АБп ТПг Уаі Ткр біп Аза Гей А5зр бі бек біп Уаії сбіу Тгр 245 250 255

Нів Тпг АТїа Авп оСбіп Тїеч С1у Авп Гув Туг Тує Тук С1у І1е січ Уаї 260 265 270

Сув біп бек Меє сіу Аза АБр АБп Аїа ТПг Рбе Ге пуб Ап січ сіп 275 280 285

Аза ТП Рпе сіп січ Су5 Аза Агку Теч Ге Ппу5 пуб Тер сі1у Іеч Рго 290 295 300

Аза Авп Агуд АБп Тс І1е Агу Теч Ніб5 Авп бі Рре ТіПг бБег ТПг б5ег 305 310 315 320

Сув Ркго Нів Агуд бек Бек Уаії Геч Ні ТБг біу Роре Ар Рго Уаі1і ТПг 325 330 335

Агкуд б1у Гечй Гей Рго бій Авр Пув біп еп біп Гешп Пуз Авр Тук Ріе 340 345 350

Іїе пуб сбіп І1їе Аку Ма! Тук Месє Авр сіу пуб Іїе Рго Уаі Аїа ТЕБг 355 360 365

Уаї Бек АБп біц бек бек Азїа Бек Бек АБп о ТПг Уа! пу5з Рго Уаі Аза 370 375 З8о 60 зек Аїа Тер Пу5 Агу АБп о Тув Тук біу ТПг Тук Тує Меє січ біч АБп 385 390 395 400 65

Аза Акуд Рбе ТПг АБп о біу АБп обіп Рго Іїе ТпПг Уаі Агу Гуз І1е С1Уу 405 410 415

Ркго Рбпе Геї бек Суб Рго Уаі Аза Тук сбіп Рпе сіп Рго сіу сб1іу Туг 420 425 430

Сув АвБр Туг ТпПг бі Уаї Меє еп біп Авр біу Ні Уаі Тер Уа1 сС1У 435 440 445

Тукє Тйг Тер бічц б1іу біп Агу Тує Тук Гей Рго І1е Агу ТБг Тер Авп 450 455 460 біу бек Аза Рго Рго АбБп біп І1їе Іеч біу АБр їеч Тер сСіу бі Ше 465 470 475 480 зег «2105 56 «2115 239 «2125 Білок «2135» ВЗ30 «4005 156

Меє Уаі Іїе АБп Іїе сбіц сбіп Азїа Іїе Аїа Ткр Меє Аза бег Агуду Пув

Зо 1 5 10 15 біу пу Уаї ТПпг Тук Бек Меє АБр Туг Агу АБп обіу Рго бек бБекг Туг 20 25 Зо

З5

Авр Сув Бек Бек бек Ма! Тук Рпе Аза Гей Агуд Бек Аїа сіу Аїа 5ег 40

АБр Авп сбіу Тер Аїа Уаі АБп Тйг бі Тук бі Ніб Авр Тгр Іеч І1е 5о0 55 бо 45 Пув Авп обіу Туг Маії їеч Іїе Аза Сі Авп ТПг Абвп Тгср Ап Аїа сСіп 65 70 75 80

Агуд сбіу АвБр Іїе Рпбе І1їе Тгкр біу Гуз Агуд сіу Аза Бек Аїа с1іу Аїа 85 90 95

Рпе сіу Нів ТП біу Меє Рбе Уаї Авр Рго Авр АБп І1їе І1е Нів Сув 100 105 110

АвБп оТук сіу Туг АБп бек І1е Тбйг Уаі Авп Авп Ніб А5р сіЧ І1е Тгр 115 120 125 60 біу Тук АвБп біу сбіп Рго Туг Ма1і Тук Аїа Туг Агку Тук бек с1у Пув 130 135 140 65 сСіп бек Авп Аза Ппув УМа1і Авр Авп Туз бек Ма1 Уаії бек пув Рпе січ 145 150 155 160

Туз біч Гей Авр Уаії Авп ТП Рго Гей бек АБп бег Ап Меє Рго Туг 165 170 175

Тук бій Аза ТрПг Іїе бек бій Авр Тук Тук Уаї сій бек Пув Рго Авр 180 185 190

Уаї АБп бек ТПг Авр о пуб бі Геч Гечп Уаі Аїа б1у ТБг Агуд Уаії Агд 195 200 205

Уаї Тук біч Гуз Уаі Ппув сіу Тер Аїа Агу І1ї1е б1іу Аза Рго біп 5бег 210 215 220

АБп обіп Тер Уа1і бі АБр Азїа Туг Гец Іїе АвБр Аза ТПг АБр Меє 225 230 235 «2105 157 «2115 495 «2125 Білок «2135 К «4005 57

Меє Аза Гуз ТПг біп Аза сій Іїе АБп Гуз Агу Теч А5р Аза Туг Аза 1 5 10 15

Зо

Туз біу ТП Уа1ї Авр Бек Рго Тугк Аку Уаї їув пуб Аза ТпПг бек Туг 20 25 Зо

З5

АвБр Рго Бек Ріре сбіу Ма! Месє біц Аза сіу Аїа Іїе АБр Аїа АБр с1Уу 40 Тук Туг Нів Аза Сіп Суб Сіп Авр Іїеч І1ї1е Трг Авр Туг Уаї Іеч Тгр 5о0 55 бо

Теч ТпЕ Авр Авп о Ппув Уаі Агу Тс Тер б1іу АБп Азїа пу5 АвБр біп Ше 45 65 7о 75 80

Туз біп бек Тук сіу ТПг сіу Рре Гуз Іїе Ніб5 біц Авп Пув Рго бБег 85 90 95

ТПЕ Маї Рко Гуз їув біу Тер Іїе Аїа Уа1і Рре ТПг бек біу бек Туг 100 105 110 біч біп Тер сіу Ні Іїе сіу І1їе Ма! Тугк АБр біу б1іу АвБп ТпПг бБег 115 120 125 бо Таг Рпе Трг І1їе їеч бі Сіп Абвп Тгср Авп біу Туг Аїа Авп Гуз Гув 130 135 140

Рго ТПг Ппув Агуд Маі Авр АБп Туг Тук сіу Гечп ТПг Нів Рое Іїе січ 65 145 150 155 160

Іїе Ркго Маії Ппу5 Аїа біу Тйг Тпг Уаї Ппув пуб бій Тс Аза Гуз Гуз

165 170 175 ек Аїа Бек Пуб5 ТПг Рго Аза Ркго пуб ПувБ пуб Аїа ТП Іеч Гуз Уаї 180 185 190 зек Ппув АБп Ніб І1їе АБп Туг ТПг Меє Авр Пуб5 Аку б1іу Гу5 КТув5 Рего 195 200 205 біч біу Меє Уаі Іїе Ніб5 АБп АБр Аїа біу Агу бек бек сіу сбіп сіп 210 215 220

Тук віп АБп бек Теч Аза А5п Аїа сіу Туг Аїа Агку Туг Аїа А5Бп 01УуУ 225 230 235 240

І1е Аїа Нів Туг Туг сСі1у бек біц с1іу Тує Уаі1і Тгр сії Аїа І1їе Авр 245 250 255

Аза пуб Ап о сбіп І1е Аза Тгср Ніб5 Трг сбіу Авр сіу ТПг с1у Азїа АБпП 260 265 270

Бек сбіу АБп Рпе Аку Рбе Аїа біу Іїе сі Уа1і Суб біп бек Меє 5ег 275 280 285

Зо

Аза Бек АвБр Аїа сіп Робе ІТеч Гуз АБп біц сбіп Аїа Уаі Рре сіп Ріе 290 295 300

З5

ТПг Аїа бічп Гуз Рбпе пуз біц Тер сіу Геї ТП Рго АБп Агу Гуз То 305 310 315 320

Уаї Агу їеч Нів Меє Сіц Рре Уаї Рго ТПг Аїа Сув Рго Нів Агкд 5ег 325 330 335

Меє Уаї Іеч Нів Трг сіу Рпе А5п Рго Уаі ТПг біп б1у Агу Рго 5бег 340 345 350 біп Аїа Іїе Меє А5п Ппуб5 Геч Куб АБр Тукє Рпе Іїе Пу5 сіп Іе Гув5 355 360 365

Авп оТук Меє АБр о Гу біу ТіПг бек бек бек ТПпг Уаі Уаї1ї Гуз АБр б1Уу 370 375 З8о

Туз Тс бек бек Аїа Бек ТПг Рго Аїа ТБг Агу Рго Уаі ТПпг сіу бБег 385 390 395 400 бо Тер Гуз пуб АвБп о біп Туг б1іу ТПг Тер Тук Ппуз Рго бій АБп Аза ТПг 405 410 415

Рпе Уаі АБп о біу АБп о біп Рго Іїе Уа! ТПг Агу І1е б1іу бек Рго Ре 65 420 425 430

Теч АБп Аза Рго Уаі сіу сі1у АБп ІТеп Рго Аїа сіу Аїа ТПг Іїе Уаї

435 440 445

Тук АБр біп УМаї Сув Іїе біп Аза сіу Нів5 Ії1їе Тгр І1е біу Тук Авп 450 455 460

Аза Тук Авп сбіу АБп Аку Уа! Тук Суб Рго Уаі Аку Тс Су5 біп с1Уу 465 470 475 480

Уаї Ркго Рго АБп біп Іїе Рго сіу Уаі Аїа Тер біу Уаії Рре Гув 485 490 495 «2105 158 «2115 281 «2125 Білок «2135» А118 «4005 58

Меє ТПг бек Туг Тукг Тук бек Акуд Бек Геї Аїа АБп Уаії АБп о ГПу5 Гец 1 5 10 15

Аза Ар Ап Тс губ Аза Азїа Аза Аку пуб Геч Геч АБр Тгр бек бічЧ 20 25 Зо

Зо ек АвБп сбіу І1їе біп Маї Іїеч І1їе Тук бі ТпПг Іїе Аку ТПг Гу5 б1Ч 35 сіп біп Аза Аза Авп Уа1ії Авп бег Сіу Аїа бБег Сіп Тс Меєб Агд 5ег 5о0 55 бо

Тук Нів Іеч Уаі! біу біп Аза Гей Азр Рпбе УМаії Меє Аза Туз с1у Пув 40 65 7о 75 80

ТПг Маї АБр Тер біу Аїа Туг Агкуд бек Авр Пуб5 сіу пуб КГув Ріе Уаї 85 90 95 45

Аза пув Аза Пув бек Іеч біу Рпе біц Тер сіу сіу АБр Тгр бек б1Уу 100 105 110

Рпе Уаі АБр АБп Рго Нівз ІТеч біп Рпе Авзп Тук Ппув сіу Тук б1у Тс 115 120 125

АБр ТП Ре сбіу Ппув біу Аїа бБег ТіПг бек Авп бек бек Ппувз Рго 5бег 130 135 140

Аза Авр ТіПг АБп о ТБ АБп о бесє Теч біу Гей Уа1і Авр Тугє Меє АБп Іеч бо 145 150 155 160

Авп оПпув Геч АБр о бек бек Ропе Аза АвБп Агуд пуб пуб Геї Аїа ТПг 5ег 165 170 175 65

Тук б1у І1їе Гуз АБп Туг бек сіу ТПпг Аза ТПг біп АБп ТБбг Тк Гец 180 185 190

Теч Аїа Ппу5 Геч ПпувБ Аза сіу Ппубв Ргро Нів ТіПг Рго Аза бек Пув АБпП 195 200 205

ТПг Тук Тук ТБ бічЧ Абп Рго Акуд пуб УМа1ї Ппуб5 ТБг ІТеч Уаї сбіп Сув 210 215 220

Авр Геч Тук пуб бек Маі АБр Рпе ТПг ТПг пуб Ап о сбіп Тс б1у б1Уу 225 230 235 240

Так Рпе Рго Рго Сіу Тпг Уаї Рре ТіПг І1їе бек Сіу Меє с1у Пув Тс 245 250 255

Туз біу біу ТПг Рго Акуд Геч пуб ТБ Гуз бек біу Ту Тук Геч ТПг 260 265 270

Аза Ап Тк Ппув Ре Уаї Туз Тув Іе 275 280 «2105 59 «2115 341 «2125 Білок

Зо «2135 А511 «4005 59

Меє Уаї Гуз Тукє Тс Уаії бій Абп пу5 Іїе Іїе Аїа сб1іу Теч Рго Пув 1 5 10 15 біу ув Геч пу сіу Аза АБп Рпбе Уаі Іїе Аїа Ні5 бі ТПпг Аза АБп 20 25 Зо

Зек Ппув Бек ТПг І1їе АБр АБп біц Уа! Бек Туг Меє Тс Агу АБп о Тгр 35 40 45

Туз АБп Аїа Рпе Уа! ТПг Ні Рре Уа! сСіу біу сіу сіу Акуд Уа1ї Уаї 5о0 55 бо сіп Уаі1і Азїа Авп Уаі1ії Авп Туг Маї бек Тгр сіу Аїа СсСі1іу Сіп Туг А1а 65 70 75 80

АБп обБек Туг Бек Тук Аїа біп Уа! біч Гей Суб Агуд ТПг бБег АБп Аза 85 90 95

ТПЕ ТЕ Ре Гуз Гув АБр о Тук бі Уа1! Тук Сув біп ІГеч Іеч Уаї Авр 100 105 110 60

Теч Аїа Ппу5 пу Аза сіу І1їе Рго І1їе Тбг Іец Ар бек сіу Бек Пув 115 120 125 65

ТПг Бек АБр Гуз біу Іїе пуб бек Нів пуб Тгр Маі Аза АБр ГПув5 Гец 130 135 140 біу біу ТБПг Тпг Ніб біп АвБр Рго Тук Аїа Туг Гей бек бек Тер с1У 145 150 155 160

Іїе Бек Ппув Аїа біп Рбе Аза бег Авр Ге Аза Пуб5 Уаі бек біу б1Уу 165 170 175 сі1у Авп Тпс біу Тпг Аза Рго Аїа КПув Рго бБег Тпг Рго Аїа Ркго Кув 180 185 190

Рго Бек ТПг Рго бек ТПг АБп Тед Авр пуб Геч сіу Геї Ма1ї АБр Туг 195 200 205

Меє АБп Аза Гу5 Ппу5 Меє Авр бек бБег Туг бек АБп Агу АБр о Гу5 Гец 210 215 220

Аза ПпувБ сіп Ту бі1у І1їе Аїа АБп Туг бек сіу ТПг Аїа бек біп АБп 225 230 235 240

ТПг ТЕ ІГеч Іечп бек Гуз Іїе пуб сіу сіу Аїа Ркго Гу5 Рго бек ТіПг 245 250 255

Рго Аїа Рго Пув Рго бег ТіПг бег ТПг Аза Ппуз Ппуз І1е Туг Робе Рго 260 265 270

Рго АБп оПпув біу АБп о Тср бек Уаії Тук Рго ТПг АБп пуб Аза Рго Уаї 275 280 285

Туз Аза АБп Аза Іїе сіу Аза І1їе АБп Рго Тйг Пу5з Рпе сіу сіу Гей 290 295 300

ТПг Тук Тс Іїе біп Гуз Авр Агуд сіу Абп сбіу Маі Тук біч І1е сіп 305 310 315 320

ТПЕ АБр біп Рбе біу Аку Уаі сіп Уаі Тук сбі1у Азїа Рго беєг ТЕ 01УуУ 325 330 335

А1їа Уаї І1еєе пув Гув 340 «2105 60 «2115 289 «2125 Білок «2135 А5БОО0 «4005 60 60

Меє Аза Іечп ТПг біц Аза Тер Ге Іїе сії пуб Аза АБп Агу Гпу5 Гец 1 5 10 15 65 АБп Аза сіу Сіу Меє Туг Пув І1е ТПг бег Авр Пув Тпг Агуд Ап Уаї 20 25 Зо

Іїе пув пуб Меє Азїа Гуз біч сбіу Іїе Тук Геч Сув УМаі Аїа біп с1Уу 35 40 45

ТУуг Акуд бек ТПг Аза бій біп Авп Аза Ге Туг Аїа сбіп сб1у Акд ТПг 5о0 55 бо

Туз Рго біу Аїа Іїе Уаі ТПг АБп Азїа Гуз біу біу біп бек АвБп Нів 65 7о 75 80

Авп оТук сіу Маі Аїа Уаї АБр Теч Суб Гец Тук ТПг АБп АБр б1у Гуз 85 90 95

Авр Уаі Іїе Тер сії бек ТБг Тбг бек Агу Тер пуб пуб Уа1і Уаї Аза 100 105 110

Аа Меє пув Аїа січ б1у Робе Гуз Тер біу сіу Авр Тер Пув бек Ріе 115 120 125

Пув Авр о Туг Рго Нів Рпе бі їеч Сув Авр Аїа Уаі1і бек сіу січ Гуз 130 135 140

Іїе Рго Аїа Аїа ТП біп АБп о ТБг Авп Тс А5п бБег АБп Агу Тує січ 145 150 155 160 біу пу УМаії Іїе Авр Бек Аїа Ркго ІТеч ТГеч Рго Пу5з Меє Авр Роре ГПув5 165 170 175

З5

Зек Бек Рго Роре Аку Меє Тук пуз Уаії сіу ТП сі Рре ІГеч Уа1ї! Туг 180 185 190

Авр Нів АвБп обіп Туг Тер Тук пуб Тс Ту Іїе АвБр АБр Гув5 Іеч Туг 195 200 205

Тук Меє Тук Пув бек Рпе Су5 Авр Уаії УМаії Аїа Ппуз Пув АвБр Аїа Тув 210 215 220 біу Акуд Іїе пуб Уаі Аку Іїе Ппуб5 бек Аїа Гуз АБр Гей Агуд Ії1е Рго 225 230 235 240

Уаї Тер АБп АБп Іїе пуб Геч Аб5п бек біу Гуз Іїе пу5 Тер Туг Аза 245 250 255

Рго АБп Уаії Ппуб5 Іеч Аза Тср Туг АвБп Туг Агуд Агкуд сіу Тугк Іеч б1Ч 260 265 270 60

Теч Тер Тук Рго Авп Ар сіу Тгр Тук Тук Тпг Аїа бій Тук Роре Гей 275 280 285 65 цув

«2105 61 «2115 239 «2125 Білок «213» Профаг Іатраабза1ї «4005 61

Меє Уаі Іїе АБп Іїе сбіц сбіп Азїа Іїе Аїа Ткр Меє Аза бег Агуду Пув 1 5 10 15 біу пу Уаї ТПпг Тук Бек Меє АБр Туг Агу АБп обіу Рго бек бБекг Туг 20 25 Зо

Авр Сув Бек Бек бек Ма! Тук Рпе Аза Гей Агуд Бек Аїа сіу Аїа 5ег 35 40 45

Авр Авп сСіу Тгр Аза Ма1і Авп Тйг бі Туг біз Нів Авр Тер Іеч І1е 5о0 55 бо

Туз АБп о біу Тук Уаі Геї Іїе Аза бій АБп ТБг Абп Тер А5п Аза сіп 65 7о 75 80

Зо

З5

АвБп оТук сіу Туг АБп бек І1е Тбйг Уаі Авп Авп Ніб А5р сіЧ І1е Тгр 115 120 125 сіу Тук Авп біу біп Рго Туг Уаії Туг Аїа Туг Акуд Туг Аіїа Агу Пув 130 135 140 біп бек Авп Аза пуб Уа1і АБр АБп обіп бек Уаі! Уаії бек пуб Рпе сій 145 150 155 160

Тук бі Аза ТПг Іїе бек біц Авр Тук Тугк Уа1ї січ бек Гув Рго Авр 180 185 190

Уаї АБп бек ТПг Авр о пуб бі Геч Гечп Уаі Аїа б1у ТБг Агуд Уаії Агд 195 200 205 бо Уаї Тук бічц Ппув Ма1і ПЦув Ссі1у Тер Аїа Агу І1їе сС1у Аза Рго СсСіп 5ег 210 215 220

АБп обіп Тер Уа1і бі АБр Азїа Туг Гец Іїе АвБр Аза ТПг АБр Меє 65 225 230 235 «2105 62

«2115 468 «2125 Білок «213» Профаг Іатраабза? «4005 62

Меє сії І1їе АБп ТПг сбіц Іїе Аїа Іїе Аїа Ткгр Меє 5ег Аза Агкудуд сіп 1 5 10 15 біу пув Уаії бек Тук Бек Меє АБр Туг Агу АБр біу Рго Авп бБег Туг 20 25 Зо

АБвр Сув Бек бек бек Уа1! Туг Туг Аїа Геї Агу бек Аїа сіу Аїа 5ег 35 40 45 зек Аїа сіу Тер Аїа Уаії АБп ТПг бій Тує Меє Ні АБр Тер Іеч Іе 50 55 бо

Туз АБп о біу Тук бі Геї Іїе Аза біцш АБп Уаі Авр Тер А5п Аїа Уаї 65 70 75 80

Агуд сбіу АБр Ії1е Аїа І1ї1е Ткр Сбіу Месє Аку сіу Нібв бБег Бек сіу Аїа 85 90 95

Зо біу бі1у Ні Уа! Уа1ї Меє Рре І1їе АБр Рго біц А5Бп Іїе Іїе Ні Сув 100 105 110

АБп о Тер Аза Авп о Авп біу І1е ТБг УМа1і Авп Авп Туг Ап Сіп ТБг А1та 115 120 125

Аза Аза Бек сіу Тер Меє Тук Суб Тук Уа1і Тук Акд Геч Ппув5 бек б1Уу 130 135 140

Аа бек ТПг сіп сбіу Ппув5 бек Ге Авр ТПг Геч Уаі! Ппу5 сії ТіПг Іеч 145 150 155 160

Аза сіу АвБп Тугк біу АБп біу бі Аїа Акуд пуб Аза Уа1і Іеч б1у АБп 165 170 175 біп Тук біц Аза Уа1ї Меє бек Маі Іїе АБп біу пуб ТПг ТпПг Тбг АвБп 180 185 190 сіп Пув Тпс о Ма1 Авр Сіп Тїеч Уаї Сіп Сі Маї І1їе Азїа сСіу Пув Нів 195 200 205 бі1у АБп біу біц Аза Аку Пуб5 Ппубв бек ІТеч біу бек біп Туг АвБр Аза бо 210 215 220

Уаї біп Гуз Акуд Уаі ТПпг сій Геч Геч Гуз Гуз біп Рго бек бій Рго 225 230 235 240 65

Рпе пув Аїа сіп біп Маї АБп губ Рго ТПг бій Тс Ппуб5 Тс бек біп 245 250 255

ТЕ січ ІГечп Тс біу біп Аза ТПг Аза ТПг Гуз біз бі біу Ар Гец 260 265 270 ек Рпе АБп сіу ТПг Іїе їеч Пуз пуб Аїа Уаі Геї АвБр Гу5 І1е Іеч 275 280 285 бі1у АБп Сув пуб пуб Нібв АБр о І1е Геї Рго бег Туг Аїа Гей ТП Ше 290 295 300

Теч Нів Туг бі сіу їеч Тгр сіу ТБ бег Аїа Уа1і СсС1у Пув А1їа Авр 305 310 315 320

АвБп о Авбп Тер сіу сіу Меє ТБг Тер ТБ сіу біп с1іу АБп Агку Рго 5ег 325 330 335 біу Уаі Трг Уа1і! Тпг сіп сіу бек Аїа Агу Рго бег АБп бі сіу с1УуУ 340 345 350

Нів Тук Меє Ні Туг Аза бек Уаі Авр Авр Роре Геї ТПг АБр Тгр Ре 355 360 365

Зо

Тук Геч Іеп Агу Аїа сбіу сбіу бек Тук пуб Маії бек біу Аїа пу5 Тр 370 375 З8о

Рпе бек сії Аїа Іїе Ппув Сіу Меє Рре пув Уаі1ї сіу сі1у Аза Уа1ї Туг 385 390 395 400

Авр Тук Аза Аїа бек біу Робе АвБр бег Туг ІїІе Уаі сіу Аїа бек 5ег 405 410 415

Агуд Геч пуб Аза І1е біп Аза біч АбБп о біу бек Гечй Авр Пув Роре АБр 420 425 430

Туз Аза ТПг Авр о чІ1їе сіу АБр сіу бек Гу5 АБр Гуз І1їе АБр ІШе ТПг 435 440 445

Іїе сіш сі1у І1їе біп Ма! ТБг Іїе А5Бп сіу Іїе ТПг Тук січ Іеч ТЕбг 450 455 460

Пув Гув Рго Уа1 465 «2105 63 бо «2115 236 «2125 Білок «213» Профаг (АТСОС7О00407) «4005 63 65

Меє ТПг АБр бек Іїе біп сі Меє Аку Ппуб5 Теч біп бек І1їе Рго Уаї! 1 5 10 15

Агуд Тук Авр Меє б1і1у АБр Агу Тує біу Авп Абр Аза АБр Агу АБр б1Уу 20 25 Зо

Агуд Іїе бій Меє АБр Суб бек бек Аза Уаі бек ПувБ Аза Гезч с1у І1е 35 40 45 бек Меє Тпг Авп Ап Тпг бі Тс Тез Сбіп Сбіп АзТа Теп Рго Азїа І1е 5о0 55 бо біу Ту бі1у Пув ІїІе Ніб АБр Аїа Уаі АБр біу ТПг Рре Авр Меє сіп 65 70 75 80

Аза Тук Ар Уаі Іїе І1е Тгр Аїа Рго Агу Ар сіу бБег бек бек Іеч 85 90 95 біу Аїа Рпе сіу Нів Уаії Геї Іїе Азїа ТПг бег Рго ТПг ТПг Аїа Ше 100 105 110

Нів Сув АБп Тук біу бек Авр сіу Іїе ТПг сії АБп АБр Туг АБп Туг 115 120 125

І1е Тер сії І1їе Ап с1у Аку Рго Агд Сі І1е Ма1і Рре Акду Пув С1У 130 135 140

Уаї ТЕ біп Тс біп Аза ТпПг Уа! Тбг Бек біп Рбе бічЧ Агку січ Гец 145 150 155 160

Авр Уаі1і Авп Аза Аку ІТеч ТБг Уаї бек Авр пуб Рго Туг Тугк січ Аї1а 165 170 175

ТПЕ Геч бек біцш Авр Туг Тук Уаі сіш Аза сіу Рго Агу Іїе Авр 5бег 180 185 190 біп АБр пуб бі Ге Іїе Ппу5 Аїа біу ТБйг Агкуд Уаі Акуд Уа1і Тук сій 195 200 205

Пув пес Авп біу Тер бек Агу І1е АБп Нів Рго бій бег Аза біп Тер 210 215 220

Уаї біп Авр бек Туг Гец Уаі Авр Аїа ТПг січ Меє 225 230 235 «2105 64 «2115 481 бо «212» Білок «2135 РЬБ111 та Рбі12 «4005 64 65 Меє Сіп Ата Ппу5 Тез Тпг Пув Авп біз Рпе І1їе Сі Тгр Іеч Пув Тис 1 5 10 15

Рпе Авр Туг Аїа АБп Аїа біу Тер Ппув Маї Ппеп Ррбе сіу Ге Гей Іецй 35 40 45

Туз біу Геш сіу Аїа Пу5 АБр І1їе Рго Рбе Аза Абп Авп Рпе Авр с1УуУ 50 55 бо

Теч Аїа ТрПг Уа1! Тук сбіп АБп ТП Ргро АБр Рпе Гец Аза сіп Рго с1Уу 65 70 75 80

Аза Тер Уаі Іїе сії Аза ТБг Те Азр Туг Іїе Іїе Уа1і Туєк біч сіп 100 105 110

АБп Тер Теч Сіу сСі1у сіу Тер Тбг Авр сС1у І1е Сіц Сіп Рго С1і1у Тгр 115 120 125 біу Тер біц пуб Уаі! Тпг Агу Агуд біп Ніз Аза Туг Авр Рпе Рго Меє 130 135 140

Тер Рбе І1їе Агу Рго АБп Рпе пуб бек бій ТПг Аза Рго Агу бек Уаї 145 150 155 160

З5 біп бек Рго ТПг біп Аза Рго Ппув5 Пуб5 біп ТБг Аза пуб Рго біп Рго 165 170 175

Туз Аїа Уаії сіц Геч Ппу5 Іїе Іїе Гуз АБр Уаі! Уаії Ппув сіу Тук Авр 180 185 190

Пес Рго Ппув Агу біу Бек АБп Рго Ппуз біу Іїе Уаі Іїе Нів Авп Авр 195 200 205

Бек біу АБп ТПг Уаі Ткр біп Аза Гей А5зр бі бек біп Уаії сбіу Тгр 245 250 255 60

Нів Тс Аза АБп о біп Іїе біу Авп Пув Туг Туг Тук бі1у І1їе січ Уаї 260 265 270 65 Сув біп бек Меє сі1іу Аїа Авр Авп Аза ТіПс Рпе Теч Пув Ап січ сСіп 275 280 285

Аза АБп Агу АБп о ТВг І1е Агуд Течй Нів Авп бій Рре ТПг бек ТПг 5ег 305 310 315 320

Агуд сбіу Геч Геї Рго бій АвБр їу5 Акуд Гей біп Геч Ппуб5 АБр Тук Ріе 340 345 350

Іїе пуб сбіп Іїе Аку Аїа Туг Месє Авр сіу пуб Іїе Рго Уаі Аїа ТЕБг 355 360 365

Уаї Бек АБп біц бек бек Азїа Бек Бек АБп о ТПг Уа! пу5з Рго Уаі Аза 370 375 З8о век Аїа Тер Пуз Агуд Авп Тув Туг біу ТПг Тугк Тук Меє сі сі 5ег 385 390 395 400

Аза Акуд Рбе ТПг АБп обіу АБп обіп Рго Іїе ТпПг Уаі Аку Гуз Уаі с1Уу

Зо 405 410 415

Ркго Рбпе Геї бек Суб5 Рго Уа! біу Тук біп Рпе сіп Рго сіу сб1іу Туг 420 425 430

З5

Тук Тс Тер біч біу біп Акуд Тує Тук Геї Рго І1їе Агу Тбг Тгр Авп 450 455 460 сіу бек Аза Рго Рго АБп біп І1е Іеец С1у Авр Іеєїш Тгр Сіу січ І1е 465 470 475 480 зег «2105 65 «2115 481 «212» Білок «2135 (Ррі)Нн5 «4005 65 бо Меє Сіп Ата Ппу5 Тез ТПг Ппув Ппув бі Рпе І1їе Сі Тгр Іеч Пув Тис 1 5 10 15

Зек бі сіу Ппув біп Ту АБп Аїа Авр сіу Тер Тук сбі1іу Роре біп Сув 65 20 25 Зо

Рпе Авр Туг Аїа АБп Аза біу Ткгр пуб Аза Гечп Рбе сіу Іеч Іеч Іеч

35 40 45

Туз біу Уаі сіу Аїа Пуб5 АБр І1їе Рго Рбе Аза Абп Авп Рпе Авр с1УуУ 50 55 бо

АБп Тер Теч Сіу сі1у с1у Тр ТПг Авр сС1іу Уаі1і біп сСіп Рго СсСі1у бег 115 120 125 біу Тер біц пуб Уаі! Тпг Агу Агуд біп Ніз Аза Туг Авр Рпе Рго Меє 130 135 140

Зо біп бек Рго ТПг біп Аза Бек Ппуб5 Пуб5 біп ТбВг Аза Пу5 Рго біп Рго 165 170 175

З5

Пес Рго Ппув Агу біу Бек АБп Рго АБп Рпе Іїе Уа! Іїе Нів Авп Авр 195 200 205

Нів Тс Аза АБп о біп І1їе біу АвБп Пув5 Тук сіу Тук бі1у І1їе січ Уаї 260 265 270 бо Сув біп бек Меє сі1іу Аїа Авр Авп Аза ТіПс Рпе Теч Пув Ап січ сСіп 275 280 285

Аза ТП Рпе сіп січ Су5 Аза Агку Теч Ге Ппу5 пуб Тер сі1у Іеч Рго 65 290 295 300

Аза Авп Агуд АБп Тс І1е Агу Теч Ніб5 Авп бі Рре ТіПг бБег ТПг б5ег

305 310 315 320

Уаї Бек АБп Авр бег бек АфЇїа бБег Бек АБп о ТПг Уа! пуб Рго Уаі Аза 370 375 З8о век Аїа Тер Пуз Агуд Авп Тув Туг біу ТПг Тугк Тук Меє сі сі 5ег 385 390 395 400

Аза Акуд Рбе ТПг АБп обіу АБп обіп Рго Іїе ТпПг Уаі Аку Гуз Уаі с1Уу 405 410 415

Зо

З5

Тук Тс Тер біч біу біп Акуд Тує Тук Геї Рго І1їе Агу Тбг Тгр Авп 450 455 460 40 сіу бек Аза Рго Рго АБп біп І1е Іеец С1у Авр Іеєїш Тгр Сіу січ І1е 465 470 475 480 зег 45 «2105 656 «2115 477 50 «212» Білок «2135 (РПі)УМУ «4005 66 55 Меє цув Тпг о Ппув Аа Сіп Аїа Пув бек Тгр І1е АБп бег Гув І1е С1У 1 5 10 15

Туз біу І1їе Авр Тер Авр сіу Меє Тук біу Тук біп Суб Меє Ар сій бо 20 25 Зо

Аа Уа1 Авр Туг І1їе Ні Нів Уа! ТБЬг Авр сіу пуб Уа1і ТПг Меє Тгр 65 біу АБп Аїа Іїе Авр Аза Рго Пуб5 АБп АБп Рпе біп сіу Геч Суб ТПг 5о0 55 бо

Уаї Тук ТБгЕ АБп о Трг Рго бій Рбе Аку Рго Аїа Туг біу Авр Уаі Ше 65 70 75 80

Уаї Тер бек Тук біу ТПг Рпе Аза ТіПг Тугк біу Ніз5 Іїе Аза І1їе Уаї 85 90 95

Уаї АБп о Рго АБр Рго Тук біу Авр Геї Ссіп Тук І1їе ТБг Уаї Іеч сіц 100 105 110 сіп Авп о Тер Авп С1іу АБп біу І1е Тує ПЦув Тпг Сі Рбе Аза ТрПг І1е 115 120 125

Агуд Тпк Нібв АБр о Тугє Тс біу Уаї бек Ні Рпе Іїе Акуд Рго Пу5 Ріе 130 135 140

Аза Авр січ Маї Гпу5 бі Тс Аза пуб Тпг оУа1ї АвБп о Гпуб5 ТІеч бек Уаї 145 150 155 160 біп уз пуб Іїе Уа1і ТП Рго пуб АБп бек Уаі біц Акуд Іїе пуб АБпП 165 170 175

Зо

Тук Маї Гуз ТПг бек біу Тук Іїе А5п сіу сії Ні Тук біч Іеч Туг 180 185 190

АБп Агуд с1іу Нів Гув Рего Пув Сіу Ма1 УМаї І1їе Нів Авп Тйг А1а С1У 195 200 205

ТПг Азїа бек Аїа Тйг біп біц сіу біп Акд Геї Тс АБп Меє Тбг Ре 210 215 220 біп біп Гец Аза Азп сіу Уаі Аїа Ні Уаї Туг Іїе Авр Пуб5 АвБп Тс 225 230 235 240

Іїе Ту сії ТПг Гей Рго біц А5Бр Агуд Іїе Аза Тер Ні5 Уаі Аза сіп 245 250 255 біп Тук біу АвБп ТпПг січ Рбе Тугк біу Іїе бічЧ Уаії Суб сіу Бек Агд 260 265 270

АБп о Тпг АвроПув бі біп Ре їеч Аза Авп Січ біп Уаії Аїа Рре сіп 275 280 285 бічЧ Аза Аза Агу Асуд Геч Ппуб5 бБег Тер біу Месє Агуд Аза АвБп Агд АБп бо 290 295 300

ТПг Маї Аку Тез Нів Нібв Трг Рре бек Бек ТПг біч Сув Рго АвБр Меє 305 310 315 320 65

Зек Меє Геч Геч Ні ТіПг біу Тук бек Меє пуб Ап сіу Пув Рго ТЕГ 325 330 335 біп АбБр Іїе ТпПг Абзп пуб Сув Азїа АБр Тук Рпе Меє пуб біп І1е АБп 340 345 350

Аза Тук Іїе АБр сіу Гуз біп Рго ТБПг бек ТпПг Уа1і Уа1ї сіу бек 5ег 355 360 365

Бек Бек АБп Гу ІГеч Гуз Аза Пу5 Авп о Пув АвБр о Гпув бек ТПг біу Тгр 370 375 З8о

АБп о Тпг Авп біз Туг б1іу ТБг їеч Тгр Гуз Кув бі Нів Аїа Тс Рре 385 390 395 400

ТЕ Сув бі1у Маі Аку біп сбіу Іїе Уаі! ТПг Агу Тс ТБ б1іу Рго Ре 405 410 415

ТПг Бек Суб Рго біп Аїа сіу Уа1і Геч Туг Тугк біу біп бек Уаії Авп 420 425 430

Тук АБр ТПг УМаї Сув пуб біп Авр сіу Туг УМаії Тгр І1е бег Тгр ТЕрг 435 440 445

Зо

ТПг Бек АБр біу Туг Авр Уаії Тер Меє Рго І1ї1е Агу ТБг Тгр АБр Агд 450 455 460 бек Тпг Авр Пув Ма1! бег бі І1е Тгр сС1у Тбг І1е 5ег 465 470 475 «2105 67 «2115 443 «2125 Білок «2135 (Ррі)МСсСтТо 11261 «4005 67

Меє Аза ТПг Тук біп бі Тук пуб Бек Агуд бек АБп біу АБп Аза Туг 1 5 10 15

АБр І1їе Авр Сіу бек Рпе сС1у Аїа біп Сув Тгр Авр сСіу Туг А1їа Авр 20 25 Зо

Тук Сув Кпув Тук Геч біу Гей Рго Туг Аза АБп Суб5 ТПг АБп Тс с01У 35 40 45

Тук Аї1а Агу АБр Іїе Тгр біц біп Акуд Ніб бій АБп о біу Іїе Іеч Авп 5о0 55 бо 60

Тук Рпе АБр біп Уаі! бі Уаії Меє сіп Аза сіу АБр Уаі Аза І1е Ре 65 70 75 80 65

Меє Уаї Уаії АБвБр сбіу Уа1і ТпПг Рго Туг бек Ніз Уаі Аза І1їе Рпре Азр 85 90 95 зек АвБр Аїа сіу біу біу Тук біу Тер Рпе Ге сіу сбіп АБп біп с1Уу 100 105 110 біу Аїа АвБп сіу Аїа Тугк АБп І1їе Ма! Гуз Іїе Рго Туг бек Аза ТПг 115 120 125

Тук Рго Трг Аза Рпе Агуд Рго Пув Ма1і Рре Пув Ап Аїа Уаі1ї Тіг Уаї 130 135 140

ТЕ б1у АБп Іїе біу Геч Авп пуб сіу Авр Тугк Роре І1е АБр Уаї! 5бег 145 150 155 160

Аза Тук сбіп сіп Аза АБр Теч ТПг Тс Тбг Су5 сбіп сбіп Аза сб1у ТЕбг 165 170 175

ТПЕ Ппув ТП Іїе Іїе Гуз Уаії бек бій Бек Іїе Аїа Тер Іеч 5ег Авр 180 185 190

Агуд Нів біп біп біп Аза АБп Тс бег Ар Рго Іїе сіу Туг Тукг Нів 195 200 205

Рпе с1у Аку Рпе Ссіу Ссі1у Авр бег Аїа Іеш Аїа Сбіп Акуд Січ Аза Авр 210 215 220

Теч Ріпе Пец бек Авп Геч Рго бек КПуб5 Гуз Уаії бек Тук Ге Уаі Ше 225 230 235 240

Авр Тук сії АвБр бек Аза бек Аза АБр пуб біп Аїа А5Бп ТПг АБп Аза 245 250 255

Уаї Іїе Аїа Рбе Меє Авр пуб Іїе Аїа бек Аїа біу Тук Пув5 Рго Ше 260 265 270

Тук Тук бек Тук Гув Рго Рпе ТПг Гей АБп АБп І1е АБр Тук біп Був 275 280 285

І1е І1е Атїа ПЦув Туг Рго АБп бег І1е Тгр І1е Аза с1у Тує Рго Авр 290 295 300

Тук бі Маії Аку ТБ бід Рко Гей Тер бій Рре Роре Рго бек Меєс Авр 305 310 315 320 біу Уаі Аку Тер Тер біп Рре ТПг бек Уа! біу Уаі Аза сіу сіу Гей 325 330 335 60

АвБр Пув Ап о І1ї1е УМаії Іеч Іечп Аза А5вр Авр бек бек пуб Меє АБр І1е 340 345 350 65

Рго Ппув Маі АБр Гу5 Рго біп біц Гей ТпПг Рре Туг біп Гуз Іеч Аїа 355 360 365

ТПЕ АБп оТБг Гуз ТГеч Авр Авп бек А5п Уаі! Рго Тугє Тук бічЧ Аза Тр 370 375 З8о

Теч бек ТПгЕ Авр Тук Тук Уа1ї сії бек Гуз Рго АБп Аза бег бек Аза 385 390 395 400

АБр Пув бі Рпе І1е пу Аїа Сіу ТіПг Акуд Уаі Агуд Ма1 Тує Січ Був 405 410 415

Уаї АБп о біу Ткр бек Агуд Іїе АбБп Нібв Рго бій бек Аїа біп Тер Уаї! 420 425 430 біч Авр бек Тук Геч Уаі АБп Азїа ТБг Ар Меє 435 440 «2105 68 «2115 334 «2125 Білок «2135 (РПі)ЕМТТтЗ «4005 68

Меє Уаї Гуз Тукє Тс Уаії бій Абп пу5 Іїе Іїе Аїа сб1іу Теч Рго Пув

Зо 1 5 10 15 біу ув Геч пу сіу Аза АБп Рпбе Уаі Іїе Аїа Ні5 бі ТПпг Аза АБп 20 25 Зо

З5

Зек Ппув Бек ТПг І1їе АБр АБп біц Уа! Бек Туг Меє Тс Агу АБп о Тгр 40 біп АбБп Аза Рпе Уа! ТПг Ні Рре Уа! сСіу біу сіу сіу Акуд Уа1ї Уаї 5о0 55 бо 45 сіп Уаі1і Азїа Авп Уаі1ії Авп Туг Маї бек Тгр сіу Аїа СсСі1іу Сіп Туг А1а 65 70 75 80

ТПЕ ТЕ Ре Гуз Гув АБр о Тук бі Уа1! Тук Сув біп ІГеч Іеч Уаї Авр 100 105 110

Теч Аїа Ппу5 пу Аза сіу І1їе Рго І1їе Тбг Іец Ар бек сіу Бек Пув 115 120 125 60

ТПг Бек АБр Гуз біу Іїе пуб бек Нів пуб Тгр Маі Аза АБр ГПув5 Гец 130 135 140 65 сіу біу Тис Трпг Нів Сбіп Авр Рго Туг Аїа Туг Геч бек бег Тер С1У 145 150 155 160

Іїе Бек Ппув Аїа біп Рбе Аза бег Авр Ге Аза Пуб5 Уаі бек біу б1Уу 165 170 175 б1іу Авп ТПг біу ТП Аїа Рго Аїа Пув Рго бБег ТПг Рго бБег ТПг Авп 180 185 190

Теч АБр пуб Геч сіу Геч Уаі АБр Тук Меє АБп Аза Пу5 пуб Меє Ар 195 200 205

Зек Бек Туг бек АБп Агуд Аїа пуб Ге Азїа Ппу5 Ссіп Тує біу І1їе Аза 210 215 220

АБп оТук Бек сіу ТПг Аза бек біп АБп Тс Тс Гей Ге бБег КГу5 І1е 225 230 235 240

Туз біу бі1у Аза Рго Пув Рго бек ТПг Рго Аза Рго пуб Рго Бек ТПг 245 250 255 век ТПг Аїа Пув Пув Іїе Тук Рре Рго Рго Авп Пуз біу АБп Тгр 5ег 260 265 270

Уаї Тук Рго ТП Авп пуб Аза Рго Уаі Гуз Аїа АБп Аїа І1е сСіу Азїа

Зо 275 280 285

І1їе АвБп Рго ТП Гуз Рпе біу біу Гечп ТПг Туг ТПг І1їе біп ГУу5 Авр 290 295 300

З5

Агуд сбіу АБп сіу Маїі Тук бічЧ Іїе біп ТпПг А5зр сбіп Рре б1і1у Агкуду Уаї 305 310 315 320 40 біп Уаі Тук сіу Аза Рго Бек ТПг біу Аїа Уаї Іїе Ппу5 Пув 325 330 45 «2105 69 «2115 1278 «2125 Білок «2135 (РПі1)ВР5ЗІ1З 50 «4005 69

Меє Азїа їуз Аку біц пуб Тук Іїе Рбе АБр Уаі біч Аза січ Уаі .Щ1Уу 1 5 10 15 55

Туз Аїа Аза Пув5 бек Іїе Пув5 бек ІГеч біш Аза біц Пец бек пуб Гей 20 25 Зо бо сбіп Пув їеч Ап пув Січ І1їе Авр Аза ТПс сіу с1у АБр Агд ТПг січ

Туз біч Меє Гец Аза ТПг Гечп пуб Азїа Аза Туз біц Уаі А5Бп Аза сій 65 50 55 бо

Тук біп Гуз Месє біп Аку Іїе Гечп пуб АБр о Геч бек Гувз Туг бек 1Уу

65 70 75 80

Туз Уаії бек Акуд пуб бій Рбе АБп АБр бек Гуз Уаі І1їе Авп Ап Аза 85 90 95

Туз ТП бек Уаі сіп сіу сіу Ппув Маі ТБг Авр бек Ропе сіу біп Меє 100 105 110

Теч губ АвБп Меє сій Акуд біп І1е АБп бек Уаі АБп Пуз біп Рпе Ар 115 120 125

АвБп о Нів Акуд пув Аза Меє Уаі! АБ5Бр Агуд сіу сбіп сбіп Тугє ТіПг Рго Нів 130 135 140

Печ Ппув ТПг Авп Агу Пуз АБр обБег біп біу Авп бБег Авп Рго бБег Меє 145 150 155 160

Меє б1у Агку АБп о пуб бек ТПг Тс біп Абр Меє бічЧ Гуз Аза Уаі1ї! Авр 165 170 175

Туз Рпе Ге Авп сіу сбіп АБп бі Аза ТП ТБг біу Гей А5п сбіп Аза 180 185 190

Зо

Теч Тук біп Ге ПпувБ сії І1їе бек Гуз ІТеч АБп Агуд Агуд бек січ бБег 195 200 205

З5

Теч бек Агуд Агуд Аїа Бек Аїа бек біу Тук Меєс бек Рпе сбіп сіп Туг 210 215 220 бек Авп Рпе Тійг біу Авр Агу Агуд Тпг Уа1і Сіп біп Тбг Тує С1у СУ 225 230 235 240

Теч Гпувз Тр Аза А5п Акуд бі Агуд Маії Іеч біч Іец бек сіу сбіп Азїа 245 250 255

ТЕ б1у І1їе бек їув біц Гей Ар Акуд Геї АБп о бек Гу5 ТУув біу Гец 260 265 270

ТПг Азїа Аку біз біу бі бі Агуд пуб пуб Гез Меє Агу біп ТІеч сіц 275 280 285 біу Іїе АБр Аїа сії Геї Тс Аза Аку Гуз Ту5 Гец АвБп бек бек Гей 290 295 300 бо Авр біч Трг ТБс бег Авп Меє Січ губ Рре Авп о біп бег Іеч Уа1ї Авр 305 310 315 320

Аза сіп Уа1і Бек Ма1і Гуз Рго біч Акуд біу ТПг Меє Акуд сіу Меє Меє 65 325 330 335

Ту бі Аку Аза Рго Аїа Іїе Аза Геї Аза Ії1е сіу б1у Аза Ії1е Тр

340 345 350

Аза ТПпг Іїе сіу пуб ІГеч Тук бек біц сбіу сіу АвБп Ні бБег Гу5 Аїа 355 360 365

Меє Агу Рго АБр біц Меє Тук Уаі сіу сіп біп Тс біу Аїа Уаі .Щ1Уу 370 375 З8о

Аза Авп Тер Агкуд Рго АБп Агу ТБг Аза Тбг Меє Агуд бБеє б1у Іеч С1Уу 385 390 395 400

АБп о Нів Геч сіу Рре Тс біу біп біц Меє Меє сії Рре сіп бек АБп 405 410 415

Тук їеч бБег Аза АБп біу Туг Нів С1у Аїа сії Авр Меє Ппувз Аїа А1а 420 425 430

ТПг Тс б1у біп Аза ТБйг Рре Аїа Агу Аза ТПг сіу Іеч біу б5ег Авр 435 440 445 біч Уаії Ппув Авр Рпе Рпбе АБп ТПг Аза Туг Агу бек біу сіу І1е АБр 450 455 460

Зо бі1у АБп біп Тпг пуб біп Рбе біп АБп Аїа Рпе гейш сіу Аїа Меє Гув 465 470 475 480

З5 біп бек біу Аїа Уаі сіу Акуд сії Гуз Авр біп Геч пуб Аза Геч АБп 485 490 495 сС1у І1їе Пец бБег бек Меє бБег біп Авп Агуд Тіпг Уаі1ії бек Авп Сіп Авр 500 505 510

Меє Меє Агу ТП Уаії сіу Гей сіп Бек Аїа І1е бек бек бек біу Уаї! 515 520 525

Аза бек Геч сіп сіу Тс Гуз біу біу Аїа Ге Меє сії сіп Геч Ар 530 535 540

АБп о сіу Іїе Акуд сії б1іу Робе АБп Абр Рго біп Меє Акуд Уа1ї Іеч Ріе 545 550 555 560 біу біп біу ТПг пуб Тук біп сіу Меє сі1іу бі1у Акуд Аїа Аза Геч Агд 565 570 575 бо пув біп Меє біп Ппуз сі1у І1е 5ег Авр Рго Авр Авп Теч Авп ТПг Гей 580 585 590

І1їе АвБр Аїа бек Гуз Аза бег Аїа сіу сбіп АБр Рго Аїа бічп Сбіп Аза 65 595 6о0 605 біч Уаі Пец Аза ТпПг Гечп Аза бек Гуз Месє біу Уаі Авп Меє Бек бБег

610 615 620

АБр сбіп Аза Акуд сбіу ІТеч Іїе АБр Ге біп Рго Бек сіу пуб Іеч ТЕбг 625 630 635 640

Туз біч Авп Іїе Ар Ппув УМа1ї Меє Гуз біч біу Геч Ппув5 бі сіу бБег 645 650 655

Іїе сій Бек Аїа Гуз Агу АБр Гуз Аза Туг бек бі Бек Пув Аїа 5ег 66о 665 670

І1їе АвБр АБп бек бек біц Аза Аза ТрПг Аза пуб сіп Аза ТПг січ Іеч 675 680 685

АБп о АвроМеє Сіу бБег Пув Те Агуд біп Аїа АБп Аза Аїа Ієч С1у С1У 690 695 700

Теч Рго Аза Рго Гечп Туг ТПг Азїа І1ї1е Аїа Аїа Уа! Уаі Аза Рпе ТПг 705 710 715 720

Аза Аза Уаі Аїа сіу бек Аїа Іїеч Меє Рпе Пу5 сіу Аїа бек Тгр Іеч 725 730 735

Зо

Туз біу біу Меє Аза Бек Ппув5 Тук біу біу їувз сбіу сі1у ПпувБ сі1у с1Уу 740 745 750

З5

Туз біу біу сіу ТПпг сіу сіу сіу бі1у бі1у Аїа сіу сбіу Аїа Аза Аза 755 760 765

Тис с1у Аза сі1іу Аза Аза Аїа Ссіу Аза сіу сСіу Ма1 С1у Аза Аїа А1а 770 775 780

Аза сіу сбіш УМаї сб1у Аїа сбіу Уаі Аїа Аза сіу сіу Аїа Аза Аза с1Уу 785 790 795 800

Аза Аза Аза сіу сіу бек Гуз Теч Аїа сіу Уа1і сіу Ппув сі1іу Роре Меє 805 810 815

Туз біу Аїа сіу Пув Геч Меє Геї Рго Іечп Сіу Іїе Гей Меє сСіу Аза 820 825 830

Бек бі Іїе Меє біп Аза Рго біц біц Аза Пу5 сіу Бек Аїа І1е С1Уу 835 840 845 бо бек Аїа Уа1і СсСіу СсС1у І1е сіу сі1у сі1у І1е Азїа сіу сі1у Аїа Аз1а ТЕГ 850 855 860 біу Аїа Іїе Аза сіу Бек Роре Іечп біу Рго І1їе сіу ТПг Аза Уа1і СсС1Уу 65 865 870 875 880 біу Іїе Аїа сіу сіу Іїе Аїа сіу біу Рбе Аза сіу бек бек Геч с1Уу

885 890 895 біч ТЕ Іїе сіу сіу Тер Ррбе АБр бек біу Рго Пу5 бій АвБр Аза 5Бег 900 905 910

Аза Аза Авр Пу5 Аїа Гуз Аза АБр Аїа бег Аїа Аза Аза Геч Аза Аза 915 920 925

Аза Аза сіу Тіг бек біу Аїа Уаі! сСіу бек бек Аза Геї Ссіп бек біп 930 935 940

Меє Аза біп біу І1їе ТП сіу Аза Рго АБп Меє бек біп Уаі! сіу бег 945 950 955 960

Мес А1їа бБег Аїа Іезп С1іу Іїе бег бек Сі1у Аїа Меє Аїа бБег Аїа Іеєч 965 970 975 біу І1е бек бек сіу біп бій АБп о біп І1їе біп Трг Меє ТпПг Авр Гув 980 985 990 біч АбБп о ТБЕ Авп о Тпг пуб пуб Аза АБп січ Аїа Гуз Гуз б1у Авр АБпП 995 1000 1005

Зо

Теч бек Тук бічЧ Акуд бі А5п о І1е бек Месє Туг біц Агуд Уаї Гец 1010 1015 1020

З5

ТПгЕ Акгу Аїа сії біп Іїе Те Аїа сіп Аїа Аку Аїа сіп А5хп б01Уу 1025 1030 1035

І1е Меє сіу Ма1 сі1у сіу с1у сіу Трпг Аїа сС1у Аїа сіу с1у С1Уу 1040 1045 1050

Іїе АБп о сіу Рбе ТПг сіу біу сіу пу Геї сбіп Рое ГІечп Аїа Аза 1055 1060 1065 біу біп Гуз Тгр бек бек бек АБп Течп біп біп Ніб5 АБр Геч 01Уу 1070 1075 1080

Рпе Тпг АвБр о біп Абп Геї ТПпг о Аїа бій Ар Геї АБр о пуб Тгр Ше 1085 1090 1095

Авр Бек пуб Аза Рго сіп сіу бек Меє Меє Агуд сіу Меє сіу Аза 1100 1105 1110 бо ТаЕ Рпе Теч пуб Аїа сі1у Сіп біц Туг сС1у їеч Авр Рго Агд Туг 1115 1120 1125

Теч Іїе Аїа Ні5 Аза Аза сій бій бек біу Ткр біу ТіПг бек ГПув 65 1130 1135 1140

Іїе Аїа Агуд АБр ГПув біу АБп о Рпе Рпе сіу Іїе сіу Аїа Рре Ар

1145 1150 1155

Авр Бек Рго Тук Бек Бек Аїа Тук біц Рпе пуб АБр сіу ТПє с1У 1160 1165 1170

Ззек Аїа Аа сії Акуд сіу Іїе Меєсє сіу сіу Аїа пуб Тгр І1їе 5Бег 1175 1180 1185 біч пу Тук Тук біу Пув біу АБп о ТБг ТБ теп Авр о пуз Меє Гпув 1190 1195 1200

Аза Аїа біу Тук Аза ТПг АБп о Аза бег Тер Аїа Рго АБп Іїе Аза 1205 1210 1215 бек І1е Меб АТа с1у АзТа Рго ТіПг сіу бек Сі1іу бек сСі1у Авп Уаї 1220 1225 1230

ТПг Аїа ТрПг Іїе АвБп Уаі! АвБп о Уаі Ппув сіу АБр бії Ппув Уаї 5ег 1235 1240 1245

Авр о Пув о Гпеч пуб АБп Бек Бек АБр Меє пуб пуб Аїа б1іу Пубв АБр 1250 1255 1260

Зо

Іїе сіу Бек Гечш Геї сіу Рпе Туг бек Акуд сбіп Меє Тірг Іїе Аза 1265 1270 1275

З5 «2105 70 «2115 495 «2125 Білок «2135 (Ррі)СснНІ15 40 «4005 70

Меє Аза Гуз ТПг біп Аза сій Іїе АБп Гуз Агу Теч А5р Аза Туг Аза 1 5 10 15 45

Туз біу ТП Уа1ї Авр Бек Рго Туг Аку Іїе їу5 пуб Аза ТПг бек Туг 20 25 Зо 50

АвБр Рго Бек Ріре сбіу Ма! Месє біц Аза сіу Аїа Іїе АБр Аїа АБр с1Уу

Тук Туг Нів Аза Сіп Суб Сіп Авр Іїеч І1ї1е Трг Авр Туг Уаї Іеч Тгр 5о0 55 бо

Теч ТпЕ Авр Авп о Ппув Уаі Агу Тс Тер б1іу АБп Азїа пу5 АвБр біп Ше бо 65 7о 75 80

Туз біп бек Тук сіу ТПг сіу Рре Гуз Іїе Ніб5 біц Авп Пув Рго бБег 85 90 95 65

ТПЕ Маї Рко Гуз їув біу Тер Іїе Аїа Уа1і Рре ТПг бек біу бек Туг 100 105 110 біп біп Тер сіу Ні Іїе сіу І1їе Ма! Тугк АБр біу б1іу АвБп ТпПг бБег 115 120 125

ТПЕ Ре Тс Іїе їеч біц біп Абп Тер АБп о сіу Тук Аза АБп о Пу5 Пув 130 135 140

Рго ТПг Ппув Агуд Маі Авр АБп Туг Тук сіу Гечп ТПг Нів Рое Іїе січ 145 150 155 160

І1е Рго Уаі1і Цув Аза сіу Тип Тпс Ма1ї Ппув Пув біц Трг Атїа ПЦув Був 165 170 175 ек Аїа Бек Пуб5 ТПг Рго Аза Ркго пуб ПувБ пуб Аїа ТП Іеч Гуз Уаї 180 185 190 зек Ппув АБп Ніб І1їе АБп Туг ТПг Меє Авр Пуб5 Аку б1іу Гу5 КТув5 Рего 195 200 205 біч біу Меє Уаі Іїе Ніб5 АБп АБр Аїа біу Агу бек бек сіу сбіп сіп 210 215 220

Зо

Меє Уаї Іеч Нів Трг сіу Рпе А5п Рго Уаі ТПг біп б1у Агу Рго 5бег бо 340 345 350 біп Аїа Іїе Меє А5п Ппуб5 Геч Куб АБр Тукє Рпе Іїе Пу5 сіп Іе Гув5 355 360 365 65

Туз Тс бек бек Аїа Бек ТПг Рго Аїа ТБг Агу Рго Уаі ТПпг сіу бБег 385 390 395 400

Тер пув Губ5 АБп обіп Тук біу ТПг Тер Туг Ппув Рго біц АБп Аза Тр 405 410 415

Рпе Уаі АБп о біу АБп о біп Рго Іїе Уа! ТПг Агу І1е б1іу бек Рго Ре 420 425 430

Теч Авп Аза Рго Уаі Сіу С1іу Авп Те Рго Аїа сСіу Аїа ТПг І1е Уаї 435 440 445

Аза Тук Авп сбіу АБр Аку Уа! Тук Суб Рго Уаі Аку Тс Су5 біп с1Уу 465 470 475 480

Уаї Рко Рго АБп Ніб Іїе Рго сіу Уаі Аїа Тер біу Уаії Рре Гув 485 490 495

Зо «2105 71 «2115 264 «2125 Білок «2135» (Ррі)8074-В1

З5 «4005 71

Меє Гуз Іїе біу Іїе Авр Меє сіу Ніє ТіПг Геч бек біу Аза Авр Туг 1 5 10 15 40 біу Уаії Уаії сіу Гечш Акуд Рго бій бек Уаі Іїеп Трг Акуд сі Уа1і сС1У 20 25 Зо 45

ТПЕ Ппув Маії Іїе Тук Ппув Ге біп пуб Геч сіу Ні Уаї Уаї Уаї Авп

Сув Тпг УМаї Авр Ппуз Аїа бБег бБег Уаі бек бій бек ТГеч Туг ТПг Агд 5о0 55 бо

Тук Тук Аку Аїа АБп о біп Аза А5п Уаі АвБр Геї Роре І1їе бег Ії1е Ні 65 7о 75 80

Рпе АбБп Аїа ТПг Рго біу біу ТП сіу ТП сій Маї Тує ТБг Туг Аза 85 90 95 60 біу Аку біп Ге сіу сіцш Аза Тс Агу Ії1е Агу біп бі Рбе пуб бБег 100 105 110 65

Теч біу Гей Агуд Авр Акуд біу ТБ Гуз АБр обіу бек сіу Геч Аїа Уаї 115 120 125

І1їе Акуд АБп о Тбс Гуз Аза Туз Аза Меє Гецп Уаі січ Сув Суб Рое Сув 130 135 140

АБр Авп Рго АБп о АБр о Меє Гуз ІТеч Туг Авп бек бі Бек Роре бек АБп 145 150 155 160

Аза І1їе Уаї Пув с1у І1е Тип Сс1у Пу5 Гечш Рго Авп сС1у бі бек СЩШ1У 165 170 175

Авп о Авп Абп обіп біу біу АБп Гуз Уаі пуб Аїа Уа1і Уа1ї І1е Тук АБп 180 185 190 біч бі1у Аза АвБр Агу Агуд сбіу Аза біз Тує Те Аза Авр Тук Геч АБп 195 200 205

Сув Ркго ТПг Іїе Бек Авп Бек Агу ТБ Роре АБр Туг бек Сув Уа1і сій 210 215 220

Нів Маї Тук Аїа Уаі! сіу сбіу пуб пуб бій біп Тук ТБкЕ Гувз Тук Гец 225 230 235 240

Пув Тип їеч тес бек С1іу Аза Авп Аку Туг Авр Тпг Меє Сіп сіп І1е 245 250 255

Теч АБп Рпе Іїе А5п сіу сіу ГПув 260 «2105 72 «2115 209 «212» Білок «2135 (РПі1)5РМІ15 «4005 72

Мес АБр І1е Авп Сіп Рбе Агуд Акуд Аза бек сіу І1е АБп біч Ссіп Іеєч 1 5 10 15

Аза Аза Ак Тер Роре Рго Ніб5 Іїе ТрПг ТПг Аза Меє АБп сії Рое сС1Уу 20 25 Зо

Іїе Тпг Ппув Рго АБр АБр біп Аїа Меє Рпе Іїе Аза сіп Уа1ї с1у Нів 35 40 45 біч бек біу сіу Рпе Тбг Агкуд Іеч біп біЧ Абп Рре Азп Туг бБег Уаї 5о0 55 бо 60

АвБп о сіу Геч бек біу Рбе Іїе Агу Аїа сіу Агуд Іїе ТПг Рго АБр біп 65 70 75 80 65 Аза АБп Аза Гей сіу Акуд Пув ТрПг Тує бій Ппу5 бек Гей Рго Геч сі 85 90 95

Агуд біп Агуд Аза чІ1е Аза АБп о Теч Уаі! Тук бек пуб Акуд Меє б1у АБп 100 105 110

АБп осбіу Рго біу АвБр біу Тер Авп Туг Агу біу Агу біу Ге І1е сіп 115 120 125

Іїе Тпг сіу Геї АБп АБп Туг Агуд АвроСув с1іу АБп о біу ІТеч Гуз Уаї 130 135 140

АвБр Геч Уаі Аїа сіп Рго біцш Теч їец Аза сіп Авр сії Туг Аза Аїа 145 150 155 160

Агуд Бек Аза Аїа Ткр Ррбе Рібе бег бек пуб сіу Суб Меє Ппув5 Тукє Тс 165 170 175 біу АБр Гей Уаі Аку Уаі Тс біп І1їе Іїе АБп сбіу сіу сбіп АБп с1Уу 180 185 190

І1е Авр Авр Агуд Агуд ТБг Агсуд Туг Аїа Аза Аза Агуд пув Уаї Іеч А1а 195 200 205

Теч

Зо «2105 73 «2115 290 «212» Білок «2135 (Ррі)СсМ77 «4005 73

Меє сі1іу Туг Тер сС1іу Туг Рго Авп Сіу біп І1е Рго АБп Авр Пув Меє 1 5 10 15

Аза Геч Туг Акуд сіу Суб ІТеч Те Агуд Аїа А5Бр Аїа Аза Аза сіп Аї1а 20 25 Зо

Тук Аїа тез біп АБр Аза Туг ТПг Агуд Аза Тбг сіу пуб Рго Іеч Уаї 35 40 45

Іїе ге сі сі1у Тук Агу АБр Те ТБПг Агуд біп пуб Туг Геї Агу АБпП 5о0 55 бо

Теч Тук Пец бек сіу Акуд сбіу АБп Іїе Аза Аза Уаії Рго сіу Геч бБег 65 70 75 80 бо АБп о Нів сіу Тгр Сс1у Гечш Аза Сув Авр Рре Аза Азїа Рго Іеч Авп бег 85 90 95

Зек сбіу Бек бі бі Ніз Агку Тер Меє Агкуд сбіп АБп Аза Рго Іеч Ре 65 100 105 110 біу Рпе Авр Тер Аіїа Аку сіу Ппув Аза АБр АБп о біц Рго Тер Ні Тгр

115 120 125 біч Тук біу Авп Уаі Рго Уаі бек Агу Тгр Аза бек Гей Авр Уаі1і Тс 130 135 140

Рго Іїе АБр Агу АБп АБр Мес Аза А5р І1їе ТПпг сій сіу сіп Меє сіп 145 150 155 160

Агуд Іїе Аїа Уаї Іїе Іеч Іеч А5р ТПг сі Іїе сіп ТПг Рго Іееч С1Уу 165 170 175

Рго Акд Геч Маї Гуз Нібз Аза Тїецп сіу Авр Аїа Геч Геї Іеч сб1у біп 180 185 190

Аза Авп Аїа Авп о бег І1їе Аїа Січ Ма1і Рго Авр Пув Тпг Тер Авр Уаї 195 200 205

Теч Уаії Авр Нібв Рго Геї Аїа Куб АБп о біч АБр біу ТПг Рго Геч Пув 210 215 220

Уаї Ак Іеч біу Авр Уаі Аїа Ппу5 Тугк бі Рго Іеч бі Нібв біп Авп 225 230 235 240

Зо

ТПг Агу АБр Аза Іїе Аза пуб Геч сіу Тбг Тез біп Рбе Тбг Авр Був 245 250 255

З5 біп те Аза ТПг Іїе сіу Аїа сіу Маії Гу5з Рго І1їе АвБр бій Аза бБег 260 265 270 40 Теч Ма1 ПцЦув Ппув І1е Уаі1і Авр сіу Уаі Агуд Аїа Те Рбе С1у Агкуд А1а 275 280 285

Аза А1а 45 290 «2105 174 «2115 185 50 «212» Білок «2135 (РБі)АВ2 «4005 174 55 Меє Іїе Іїеч Трг пув Авр біу Рре бек І1е І1їе Аку АБп біч Геч Ріє 1 5 10 15 біу бі1у Пув ГПечп Ар біп Тс біп Уаії АБр Аза Іїе А5п Рре Іїе Уаї бо 20 25 Зо

Аза пув Аза ТПг бій бек біу Теч ТБПг Туг Рго сі Аза Аїа Тукг Іеч 65

Теч Аза Трг Іїе Тук Нів сії ТП біу ТГечп Рго бек біу Туг Агкд ТПг 5о0 55 бо 2А1

Меє біп Рго Іїе пу біц Аїа сіу Бек АБр бек Тук Теч Агку бек Пув 65 70 75 80

Туз Тук Тук Рго Туг Іїе сіу Тук біу Тук Уаі біп Ге ТпПг Тер Гув 85 90 95 біч АвБп Тук біц Акуд Іїе сіу Ппуб5 ІТеч Іїе біу Уаі Авр Геч Іїе Гув5 100 105 110

АБп о Рго сі їув Азїа їеч Сі Рго їеч І1їе Аза І1е Сіп І1е Аїа І1е 115 120 125

Туз біу Меє Гей Абзп сіу Тер Рре ТПг біу Уаі сбіу Рпре Агуд Аг Пув 130 135 140

Агуд Рго Уаі1і Бек Ппув5 Тук АБп їувз біп біп Тук Уаі Аза Аїа Агду АБп 145 150 155 160

Іїе Іїе АБп сбі1у Гуз АБр Гуз Аза сі Ге Іїе Аїа Гуз Туг Аїа Пе 165 170 175

Зо

Іїе Рпе сії Агу Азїа Іеч Агу бек Гец 180 185 «2105 75 «2115 262 «2125 Білок «2135 (Ррі)В4 «4005 75

Меє Азїа Месє Аза Ге сбіп ТПпг Ге Іїе АБр Гпуб5 Аза АБп Агу ГПу5 Гец 1 5 10 15

Авп оУа1і Бек сіу Меє Аку їу5з Авр Уаі Аза А5р Агу Тс Агу Аза Уаї 20 25 Зо

І1е Тпг сСіп Меє Ніб Аїа Сіп сС1у І1їе Туг І1е Суб Маії Аїа сіп С1У 35 40 45

Рпе Акуд Бек Рпе Аїа біп біп Аб5п Аза Гей Туг Азїа сіп с1у Агкуд ТЕбг 50 55 бо

Тув Рго біу бек ІїІе Уаі ТПг АБп Азїа Агу біу біу біп бек АБп Нів 65 70 75 80 60

АвБп оТук сіу УМаі Аїа Уа1ії АБр ІТеч Суб Гец Тук ТПг сбіп АБр б1іу б5ег 85 90 95 65

Авр Уаі Іїе Тер Тс Уаі біч біу АБп Рре Агкуд пуб Уаі Іїе Аза Аї1а 100 105 110

Меє Гуз Аза біп біу Рпе пуб Тер сіу сі1у АБр Ткр Уаї бек Рпре Гув 115 120 125

Авр Тук Ркго Нів Роре бічп ІТеч Туг АвБр Уаі Уа1і сіу сіу сбіп Гув Рего 130 135 140

Рго Аїа Авр АБп біу с1іу Аїа Уа1і Авр Авп Сіу СсСіу сСіу бек Сс1у бег 145 150 155 160

ТЕ сі1у біу бек біу біу біу бек ТПг сіу сіу біу бек Тс с1у .Ш1Уу 165 170 175 біу Тук Авр бек бек Тер Рпбе ТПг Гуз біп Тбг біу ТБг Рпе Уаі1їі Тс 180 185 190

АБп оТпг Бек Іїе Губ5 Іеч Агу ТПг Аза Рго Рре ТіПг бек Аза АБр Уаї 195 200 205

Іїе Аза ТПг Геї Рго Аза біу бек Рго Уаі Авп Туг АБп біу Рбе с1Уу 210 215 220

І1е сі Тук Авр біу Туг Уаі Тер І1ї1е Аку Сіп Рго Акд бек АБп С1У 225 230 235 240

Тук сі1у Тук Те Аза ТіПг сіу сій бек Ппув сіу б1у Гуз Агу біп Авп 245 250 255

Тук Тер б1у ТПг Робе Гуз 260 «2105 76 «2115 274 «2125 Білок «2135 (РПі)СсСтТРІ «4005 76

Меє Гуз Гуз Іїе Аза Авр Іїе Бек АБп Геї АБп о біу АБп Уаії Авр Уаї 1 5 10 15

Тув Теч Гей Рпе А5зп Гечп сіу Тук Іїе сСі1у Ії1е Іїе Аза пуб Аза бБег 20 25 Зо біч біу біу ТПг Рпе Уаії АБр Ппув5 Тук Тук їув біп Авп Туг ТпПг АБп 35 40 45 60

ТЕ пуб Азїа біп біу Гуз Іїе ТПг сіу Аза Тугк Ніб Роре Аза АБп Ре 5о0 55 бо 65 бек Тпг І1е Аїа Гу5 Аїа Сіп Сіп біц АТїа Авп Рпе Рре Іеч Авп Сув 65 70 75 80

Іїе Аза сіу ТП ТБ Ргро АБр Рре Уаі Уаі! Гей Авр Геч січ біп сбіп 85 90 95

Сув ТПпг біу Авр І1е ТБг АБр Аза Су5 Іїеч Аза Рпре Гей Авзп Іїе Уаї 100 105 110

Аа Ппув пуб Ре Ппу5 Сув Уаї Уаї Тук Суб Авп бБег Бек Роре І1е Гуз 115 120 125 біч Нів Пец Авп бек Ппув І1їе Суб Аїа Туг Рго їец Тер Іїе Аза АБпП 130 135 140

Тук сбіу Маі Аза ТБйг Ркго Аїа Рпе ТпПг Геї Тер Тс Гуз Туг Аїа Меє 145 150 155 160

Тер біп Рбе ТБ біч Гуз біу біп Уаі! Бек сіу І1е бек біу Ту Ше 165 170 175

Авр Рпе бег Туг І1е ТрПг Авр бі Рре І1е Пув Туг І1е Кув С1у січ 180 185 190

Авр сій Уа1і сії АБп о Теч Уа! Уаі! Туг Авп Авр сіу Аза АБр біп Агд

Зо 195 200 205

Аза Аза сії Тугє Геї Азїа АБр Агу Гец Аза Суб Рго ТПг І1е АБп АБпП 210 215 220

З5

Аза Акуд пуб Ре АБр Тук бек АБп Уаі пуб Ап Уаі! Туг Аїа Уа1і С1Уу 225 230 235 240 бі1у АБп Ппув бій біп Тує ТПг бек Тук Теч Тбйг Трг Ге Іїе Аза с1Уу 245 250 255 бек Трпг Агуд Тує Тс Тбг Меє біп Аза Уаії їеч Авр Туг І1е Пув5 Авп 260 265 270

Теч Гув «2105 177 «2115 628 «212» Білок «213» Вірус стафілококу 187 «4005 77 бо Мес Аїа Іеч Рго Пув Тпг біу Ппув Рго ТПг Аїа Пув Сіп Ма1ї Уаї Авр 1 5 10 15

Тер Аї1а І1їе АБп Іїеч Іїе сіу бек сіу Уаі АБр УМаі АБр біу Тукг Туг 65 20 25 Зо біу Акуд біп Суб Тер Авр Геї Рго АБп Тук І1їе Рпе Аб5п Агуд Туг Тгр

35 40 45

Авп о Рпе Ппу5 ТПг Рго біу АБп Аїа Аку Авр Меє Аза Тгр Туг Агуду Туг 50 55 бо

Рго біц сбіу Рре Гуз УМаії Рбе Агку Авп ТПг о бБег Авр Роре Уаії Рго Гуз 65 70 75 80

Рго сбіу АБр Іїе Аїа Уа! Тср ТП сбіу сіу Авп Туг АБп о Тгр АБп Тс 85 90 95

Тер бі1у Ні ТП біу Іїе Уаї Уа1ї сіу Ркго Бек ТПг Гу5 бек Тук Ре 100 105 110

Тук бек Уаі Авр біп Авп Тер Авп Авп бек АБп бБег Туг Уаї сбі1у 5бег 115 120 125

Рго Аїа Аїа Гу І1їе Гу5з Нібв бек Тук Рпе сіу Уа1і ТіПг Нів Ріре Уаї 130 135 140

Агуд Рго Аїа Тук Пу5 Аїа бічш Рго Пу5 Рго ТПг Рго Рго Аїа біп АБпП 145 150 155 160

Зо

АБп о Рго Аза Рго пуб АБр Рго біц Рго бек ПувБ пуб Рго бій бек АБп 165 170 175

З5

Тув Рго Іїе Тук Пув Уа1ї МУМаї ТП Гуз Іїе їецп Рре ТПг ТПг Аза Ні 180 185 190

І1е сі Нів Уаї Пув Аїа Авп Агуд Рре Уаі1і Нів Туг І1е Тис Пув бег 195 200 205

АБр Авп Нів АБп о АБп оГув Рго АБп о Гуз Іїе Уаі Іїе Пуб5 АБп Тс АБпП 210 215 220

ТПг Аїа Геї бек Тйг Іїе Авр Уа1і Тук Аку Туг Агу АБр біЧ Іеч Авр 225 230 235 240

Туз АБр о біц Іїе Рго Нів Рре Робе Уаі АБр Агу Те Азп Уаі Тер Аза 245 250 255

Сув Агуд Рго Іїе сій Авр бек І1їе АБп біу Тук Нібв Авр Бек Уа1ї Уаї 260 265 270 бо Теч бек І1е Тпг сії ТБг Агсуд ТБг Ата Тец бег Авр Авп Рре Гуз Меє 275 280 285

АБп січ Іїе сіп Суб Гечп бек Те Аза сій бек Іїе Геї Гпу5 Аза АБпП 65 290 295 300

Авп оПпув пуб Меє бек Аза бек АБп Іїе Іїе Уаі Авр А5Бп Пув5 Аза Тгр

305 310 315 320

Агуд Тпк Рбе Пув5 Ге Нів ТПг біу Пуб Авр бек Геч пуб бБег бек 5ег 325 330 335

Рпе ТПг Бек Пув АБр Тук біп Гуз Аза Уаі! А5п сії Геї І1їе ГУу5 Іеч 340 345 350

Рпе Ап АвБр о губ АБр оГувз Теч Гей Авп Авп пуб Рго Пуб5 АБр Уа! Уаї 355 360 365 бічЧ Агуд Іїе Агуд Іїе Агу Тс І1їе УМаї їу5з біц Авп Тпг пуб Роре Уаї 370 375 З8о

Рго Бек бій Ген Пув Рго Агуд Авп Авп Іїе Агу Авр Пуз біп АБвр 5бег 385 390 395 400

Туз І1їе АвБр Акуд Уаі Іїе АБп АБп Тук ТБг Іеч Пуз біп Аза Геч АБп 405 410 415

Іїе сбіп Тук Ппув Геч АБп Рго пуб Рго біп ТПг о бБег Ап сіу Уаї 5ег 420 425 430

Зо

Тер Тук АБп Аза бек Уаі АвБп біп Іїе Ппу5 Бек Аїа Меє АБр Тс Тр 435 440 445

З5

Туз Іїе Рпе Авп Абзп Ап Уаії бСіп Маі! Тук біп Рре Гей Ппуб5 Геч АБп 450 455 460 сбіп Ту біп сіу І1е Рго Ма1і Авр Пув їеч Ап Пув Іеч Іеч МУаї С1У 465 470 475 480

Туз біу ТБ Ге Аза А5Бп о сбіп сбіу Ніз Аза Рпе Аза Авр сіу Сув Пув 485 490 495

Туз Тук АБп Іїе А5п сії Іїе Тугє Іеп Іїе Аїа Ні5 Акуд Рпе Геч сій 500 505 510 зек Аза АБп о сіу ТіПг бек Рпе Рпе Аза бек сіу пуб ТПг сіу Уа1ї Туг 515 520 525

АБп оТук Рпе сіу Іїе б1у Аїа Рбе Абр Абп Авп Рго Ап АБп Аза Меє 530 535 540 бо Аза Рпе Аїа Агу бек Нів Сіу Тгр ТіПг бег Рго ТПг Пув АТїа І1е І1е 545 550 555 560 біу біу Аїа сі Рпе Уаі сіу Ппув5 біу Тук Рпе Авп Уаі сіу сбіп АБп 65 565 570 575

ТПг Геч Тук Агкуд Месб Агку Тер Авп Рго сбіп Ппуб5 Рго біу Тбг Нів сіп

580 585 590

Тук Аїа ТПг АБр Іїе бек Тер Аїа пуб Уаі сіп Аїа біп Месє І1е 5бег 595 6о0 605

Аа Меє Тук Ппув сії Іїе сбіу Теч ТБг біу Авр Тук Рре Ії1їе Туг АБр 610 615 620 біп Тук Пув Гуз 625 «2105 78 «2115 291 «2125 Білок «2135 (РБПі)РЗ5 «4005 78

Меє Аза Аку їу5 Рпе ТпПг пуб Аза сії Геч Маі Азїа Туз Аїа бій ГПув 1 5 10 15

Туз Уаії сіу сіу Пес пуб Рго АБр Уаі! Гуз Туз Аза Уаі Гей бек Аза 20 25 Зо

Зо

Уаї гув бі Аза Туг Авр Агуд Ту сіу І1ї1е сіу І1їе І1їе Уаї бек сіп 35 сіу Тує Агуд бБег І1е Аїа бі сСіп Авп С1іу Іїеч Туг Аїа Сіп с1у Агд 5о0 55 бо

ТПЕ пуб Рго біу АБп І1їе Уаі ТпПг А5п Аза Ппуб5 біу біу біп бек Авп 40 65 7о 75 80

Нів АБп Рпе біу Уаі Аїа Уаі Авр Рпе Аза Іїе АБр Іеїп І1їе АБр ' Авр 85 90 95 45 біу Гпув І1їе Авр бек Тер біп Рго бек Аїа Тйг І1їе Уаі Авп Меє Меє 100 105 110

Туз Агуд Агуд сіу Рпбе пуб Тер сіу біу АБр Тгр Гу5 бек Рпе ТпПг Ар 115 120 125

Пес Рго Нів Рре біш Аїа Суз Авр Тгр Туг Акуд б1іу бій Агу Ппу5з Туг 130 135 140

Туз Маі Авр ТпПг бек бі Тер Гуз Гувз Гуз бід Авп І1е А5п Іїе Уаї бо 145 150 155 160

Іїе Ппув АБр Маї біу Тук Рбпе біп Авр пуб Рго біп Ррбе Геї АБп 5ег 165 170 175 65

Туз бек Уаі Акуд сбіп Тер Пуб5 Ні біу ТБ Гуз Уаї Ппув Геч ТПг Гуз 180 185 190

Нів АБп о бек Нів Тгр Тукє ТП сіу Уа1ї Уа1ї Ппув АБр біу АБп пув5 бег 195 200 205

Уаї Аку біу Тук Іїе Тук Нібв Бек Меє Аїа Ппуб5 МУМаї! ТБг бек пу5 Авп 210 215 220 век Авр сіу бек Маі АБп Аїа ТПг Іїе А5п Аза Ні5 Аза Робе Су5з Тгр 225 230 235 240

АБвр АБп оПпув пуб Геч АвБп біу біу Авр Рпе Іїе АвБп Ге Пуз Агуд сб1УуУ 245 250 255

Рпе пув сіу І1їе ТПг Нів Рго Аза бек Авр сіу Рре Туг Рго Іеч Туг 260 265 270

Рпе Аза бек Аку Гуз Пув ТПг Рпе Туг Іїе Рго Аку Тук Меє Робе Ар 275 280 285

Іїе Ппув Гуз 290

Зо «2105 79 «2115 342 «2125 Білок «2135 (РБПі)сСР-7

З5 «4005 79

Меє УМаї Гуз Гув Авп Авр о Гец Рбе Уаі АБр Уаі Аза бег Ні5 біп 0Ш1УуУ 1 5 10 15 40

Тук АБр І1е бек біу Іїе Ге сіц сбішц Аза сіу Тс ТБг АБп Тс Те 20 25 Зо 45

Іїе Ппув Ма1ії бек бі бек ТПг бек Тук Геч АвБп Рго Суб Іец бег Аїа сСіп Уаї бек біп бек Авп Рго І1е Сіу Рпе Туг Нів Рбе Аза Тер Ріє 5о0 55 бо біу б1у АБп біц бій бій Аза сії Аза бі Аза Агку Тує Рре Геч Авр 65 7о 75 80

Авп оУа1 Ркго Тс біп Маї Гуз Тук Пец Уаі! Гечп Авр Тугк січ АБр Нів 85 90 95 60

Аза Бек Аза Бек УМаі біп Аку АБп Тс ТБ Аїа Суб Геї Акуд Рое Меє 100 105 110 65 біп Іїе Іїе Аїа сішп Аза сіу Тук ТПг Рго Ії1е Тук Тук Бек Туг Пув 115 120 125

Ркго Рпе ТПг Геї АБр АБп Уаі Авр Туг сіп сіп І1їе Іеп Азїа біп Ріре 130 135 140

АБп о Рпе сі Тугє Рпе Рго бек Меб Авр сС1у І1е Агд Тер Тгр Сіп Туг 165 170 175

Бек Бек АБп Рго Робе АвБр Гу5 АБвБп І1їе Уаі! Геч Геї АБр АБр біч Гуз 180 185 190 бічЧ Авр Авп о І1е Ап АвБп бій АБп о ТБг Теч Ппуз бек Гечп ТПг ТПг Уаї 195 200 205

Аза АБп січ Уаії І1ї1е біп сбіу Теч Тер сбіу АБп сіу біп сії Агуд Туг 210 215 220

Авр Бек Геї Аза АБп Аїа біу Туг АвБр Рго сбіп Аїа Уа1і сіп АБр Гуз 225 230 235 240

Уаї АБп біц І1їе Іеш АБп Аза Аку Січ І1їе Аїа А5р їеч ТПг Трг Уаї 245 250 255

Аза АБп січ Уаії І1ї1е біп сбіу Теч Тер сбіу АБп сіу біп сії Агуд Туг 260 265 270

Авр Бек Геї Аза АБп Аїа біу Туг АвБр Рго сбіп Аїа Уа1і сіп АБр Гуз 275 280 285

Уаї АБп бічЧ Іїе Гец А5Бп Аїа Аку сії Іїе Азїа АБр Те Тс ТрПг Уаї 290 295 300

Аза АБп січ Уаії І1ї1е біп сбіу Теч Тер сбіу АБп сіу біп сії Агуд Туг 305 310 315 320

Авр бБег їеч Аза Ап Аїа сСіу Туг Авр Рго Сіп Аза Ма1 Сіп АБвр Був 325 330 335

Уа1 Авп бій Геч Геч 5бег 340 «2105 80 «2115 328 бо «212» Білок «2135 (РБП1)ЕЕАР-1 «4005 80 65 Меє цЦув їеч Ппув С1іу І1їе їеч Геч бек Уаї Ма1 Тс Ті Рпре СсС1Уу Ієч 1 5 10 15

Теч Рпе сіу Аза ТпПг А5п Уаі сіп Аїа Тук бічЧ Уаі Авп Авп бій Робе 20 25 Зо

АБп Ге біп Рго Тер бій біу бек біп біп Гешп Аза Тук Рго АБп Гуз 35 40 45

Іїе Іїе Гечш Ніб5 біп ТБг Аза АБп Рго Агуд Аїа ТПг сіу Агу АБп січ 50 55 бо

Аа ТПпг Тук Меє пуб АБп АБп Тр Ррпе Азп Аза Ні ТіПг ТіПг Аза І1е 65 70 75 80

Уаї б1у АБр біу біу Іїе Уа1і Тук Ппув Маі Аза Рго біч біу Авп Уаї! 85 90 95

Ззек Тер бі1іу Аїа бі1у АБп Аїа АБп Рго Туг Аїа Рго Уаі сіп І1е с1Ч 100 105 110

Теч біп Нів Трпг Авп Авр о Рго бій Те Рпе Пув Аїа АБп Туг Гуз А1а 115 120 125

Тук Маїії АБр Тук Тйг Агу Авр о Меє сіу Ппу5 Пув Роре біу І1е Рго Меє 130 135 140

ТПЕ Геї АБр біп біу біу бек Ге Тер сії Ппуб5 біу Уаї Уаї бек Нів 145 150 155 160

З5 біп Тер Уаі ТпПг Авзр Рбе Уаії Тгр біу АБр Ніб5 Трг Авр Рго Тугєк С1У 165 170 175

Тук Геч Аїа Гуз Месє сіу Іїе бек пуб Аза сСіп ІТеп Аза Нібв Ар Гец 180 185 190

Аза Авп сіу Уа1ї бек біу Авп Тйг Аза ТрПг Рго ТП Рго Пув Рго Авр 195 200 205

Тув Рго Пув Рго ТПг біп Рго Бек Пув5 Ргро Бек АБп Гуз Пуб Агуд Робе 210 215 220

АвБп оТук Акуд Уаі АБр о біу Іеч бічЧ Тук Уаі Авп сіу Меє Тер сіп І1е 225 230 235 240

Тук АБп бі Ні Теч сбіу Пув Іїе Абвр Рре АБп Тгр ТбПг біч А5Бп с01УуУ 245 250 255 60

Іїе Ркго Уаі сії Маї Уаї Авр пуб Уаі А5п Рго Аїа ТПг сб1іу біп Рго 260 265 270 65 Та Ппув Авр оСбіп Уаії їеч Ппув УМаі1і С1у Авр Тугє Рпе Ап Рре Сіп Ссіц 275 280 285

АБп обБек ТПг сіу Маі Уаі біп біч біп ТПг Рго Тук Меє сіу Тує ТЕБг 290 295 300

Пес бек Нів УМаї біп Гей Рго АБп бій Рбе Іїе Тер Іїеч Рре ТпПг Авр 305 310 315 320

Ззек Ппув біп Аїа Іечп Меєсє Туг сіп 325 «2105 81 «2115 48 «212» Білок «213» Ното 5арієпь «4005 81 бек бек Тїечшч їеч бічц Ппув Сіу їеч Авр сС1у Аїа Пув Ппув Аїа Уа1і1 С1У 1 5 10 15 біу Геч сіу пуб Геч сіу Пув АБр Аїа Уа! біц Авр Геч сії бБег Уаї 20 25 Зо біу пувз біу Аїа Уаі Нібв АвБр УМа1ії Куб Авр Уа! Гец Авр бек Уа1ї Гей

Зо «2105 82 «2115 37 «2125 Білок 35 «213» Нуа1орпога сесгоріа «4005 82

Туз Тер Ппув Геч Рпе Ппу5 Ппув І1їе біп Гуз Уаі! сбіу біп А5Бп Іїе Агд 40 1 5 10 15

АБр сіу Іїе Іїе пуб Аза біу Рго Аїа Уаі Аїа Уаі Уа1і сіу сіп Аї1а 20 25 Зо 45

ТПгЕ біп І1е Аза Гуз 35 «2105 83 «2115 62 «2125 Білок «213» БгоБорпіїа бСеїввзієгі «4005 83

Меє Гуз Тук Ріпе бек Уаі! Гечш Уа1і Уаї Іеї Тс Іеч І1їе Ге Аїа Ше 1 5 10 15 60

Уаї АБр біп бек Авр Аза Рпе Іїе АБп ІГеч Іеч АвБр Гуз Уаї бій Авр 20 25 Зо 65

Аза Геч Ні ТПг біу Аїа біп Аїа сіу Рпе Пу5 Геї І1ї1е Агу Рго Уаї 35 40 45 бічЧ Акуд біу Аза Тпг Рго Ппув5 Ппув бек бічш Гувз Рго біц ГПув 5о0 55 бо «2105 84 «2115 66 «2125 Білок «213» Воштрух тогі «4005 84

Меє АБп Іїе їеч Ппуз Рпе Рпе Рпе Уа! Рре І1ї1е Уа! Аза Мес бек Гец 1 5 10 15

Уаї бек Сув бек ТПг Аза Аза Рго Аїа Гуз Іїе Рго Іїе Пух Аїа Ше

Зо 20

Туз Тс Уаії сіу пуб Аза Уа1і сіу Гпу5 біу Те Акгуд Аїа Іїе А5Бп Ше 25 А1а Бек ТБйг Аза АБп Авр о Уаі Рре Азп Рпе Гей Ппуз Рго Ппуз Пуз Агд 5о0 55 бо

Туз Нів

Зо 65 «2105 85 «2115 71 35 «212» Білок «213» Сегкавівів5 сарієаєа «4005 85 40 Мес Аїа Авп тТеч пув Аза Ма1 Рре Іїеч І1їе Сув5 І1е Уаі1і Аза Рре І1е 1 5 10 15

Аза Ггеч сіп Сув Маі УМаі Аза біц Рго Аіїа Аза сії АБр бек Уа! Уаї 45 20 25 Зо

Уаї Гуз Агуд бек Іїе сіу Бек Аза Геч Губ5 Гуз Аза Те Рго Уаі Аза 35 40 45

Туз пуб Іїе сіу пуб Іїе Аза Геї Рго Іїе Аїа Туз Аза Аза Геч Рго 5о0 55 бо

Уаї Аї1а Аза с1у Іеч Уаі 0Щ1У 65 70 бо «2105 86 «2115 53 «2125 Білок «213» Арів5 щтеі1їітега 65 «4005 86

Меє Гуз Уаї Уаі Іїе Рпе Іїе Ррбе Аїа Іечп Іеп Аза ТБг Іїе Су5 Аза 1 5 10 15

Аза Рпе Аза Тугк Маі1ії Ркго Тез Рго Авп Уаі Рго сіп Рго с1у Агу Агд 20 25 Зо

Рго Рпе Рго ТП Робе Рго біу біп біу Рго Рпе АвБп Рго Пу5 І1е Гуз 35 40 45

Тер Рго біп б1у Туг 5о0 «2105 87 «2115 283 «2125 Білок «213» Арів5 щтеі1їітега «4005 87

Туз АБп Рпе Аїа Гечш Аза І1їе Іечп Уа! Уа! Трг Рпре Уаі Уа1ї Аїа Уаї 1 5 10 15

Рпе сіу АБп ТПг АБп о Тецп АБр Рго Рго ТПг Агуд Рго Тбг Агу Іеч Агд 20 25 Зо

Агуд біч Атїа Пув Рго біш Аїа Сіц Рго СсС1у АБвп Авп Агуд Рго Уа1! Туг

І1їе Рго сбіп Рго Агу Рго Рго Ніб5 Рго Агуд Гей Агуд Агуд біз Аза с1Ч 35 50 55 бо

Рго біц Аїа бій Ргро біу АБп Абп Агуд Рго Уа1і Туг І1їе Рго біп Рго 65 70 75 80 40

Агуд Рго Рго Нів Рго Агу Теч Агу Агуд бі Аза сій Геї сії Аза с1Ч 85 90 95 45

Рго біу АБп АБп Агу Рго Уа! Туг І1їе бек біп Рго Агу Рго Рго Нів 100 105 110

Рго Агд те Агу Агд Сі Аїа Сі Рго Сі Азїа бі Рго Сіу Авп Авп 115 120 125

Агуд Рго Уа1і Туг І1їе Рго біп Рго Аку Рго Рго Нібв Рго Агу Іеч Агд 130 135 140

Агуд бі Аза сії Гезч бі Аза бі Ркго біу Авп Абп Агуд Рго Уаії! Туг 145 150 155 160 60

І1їе Бек біп Рго Агу Рго Рго Ніб5 Рго Агуд Гей Агуд Агуд біз Аза с1Ч 165 170 175 65

Рго біц Аїа бій Ргро біу АБп Абп Агуд Рго Уа1і Туг І1їе Рго біп Рго 180 185 190

Агуд Рго Рго Нів Рго Агу Теч Агу Агуд бід Аза сій Рго сії Аза січ 195 200 205

Рго біу АБп АБп Агу Рго Уа! Туг Іїе Рго сбіп Рго Агу Рго Рго Нів 210 215 220

Рго Агд те Агу Агд Сі Аїа Сі Рго Сі Азїа бі Рго Сіу Авп Авп 225 230 235 240

Агуд Рго Уа1і Туг І1їе Рго біп Рго Аку Рго Рго Нібв Рго Агу Іеч Агд 245 250 255

Агуд бі Аза Ппув Рго бі Аза Гу5 Рго біу Авп Абп Агуд Рго Уаії! Туг 260 265 270

І1їе Рго сбіп Рго Агу Рго Рго Ніб5 Рго Агд Ше 275 280 «2105 88 «2115 228 «2125 Білок «2135 5Бив5 вскгоїа

Зо «4005 88

Меє біп Тс біп Агуд Аза бек Геї Суб Геч біу Агу Тер бек Геч Тгр 1 5 10 15

З5

Пес пеп Гпеп Геп Аза Гей УМаії Уаії Рго бег Аїа бек Аза біп Аїа Гей 20 25 Зо 40

Зек Ту Акуд бі Аїа Уаії Іеч Аку Аїа Уаі! Авр Акд Геї АБп біч біп 45 зек Бек бій Аїа Авп Теч Туг Агу Печп Геп бі Гей АБр Сбіп Рго Ркго бо

Туз Аза Авр бій Авр Рго сбіу ТіПг Рго Гу5з Рго Уаії бек Рре ТіПг Уаї 50 65 7о 75 80

Туз біч ТБ Уаї Суб Рго Агуд Рго ТБг Агу Агуд Рго Рго січ Геч Сув 85 90 935 55

Авр Рпе Ппув сії АБп о біу Аку Уаії Ппуз біп Сув Уа1і сіу Тс Уаї ТБг 100 105 110 60

Теч АБр біп Іїе пуб АБр Рго Геї АБр Іїе ТБПг Суб Авп січ сіу МУаї 115 120 125 65 Агкуд Агуд Робе Рго Тер Тер Тер Рго Рре Гей Агу Агу Рго Агу Гей Агуд 130 135 140

Агуд біп Аза Рре Рго Рго Рго АБп Уаі Рго сіу Рго Акд Роре Рго Рго 145 150 155 160

Рго АБп о Уаі Рго біу Рго Аку Рпре Рго Рго Рго АБп Роре Рго Сб1іу Рго 165 170 175

Акгуд Рпе Рго Рго Рго АБп Ропе Рго біу Рго Акуд Робпе Рго Рго Рго АБп 180 185 190

Рпе Рго сіу Рго Рго Робпе Рго Рго Рго Іїе Ррбе Рго біу Рго Ткр Ре 195 200 205

Рго Рго Рго Рго Рго Ропе Агку Рго Рго Рго Ррбе сіу Рго Рго Агку Ре 210 215 220

Рго бі1іу Агу Агд 225 «2105 89 «2115 144 «2125 Білок «2135» Во5 Єайги5

Зо «4005 89

Меє біп Тс біп Агуд Аза бек Геч бек Геч біу Агу Тер бек Геч Тгр 1 5 10 15

З5

Теч ІТеч Гей Ге сіу Гечп Уаії МУМаї Рко бек Аїа бек Аїа сіп Аїа Гей 20 25 Зо 40 бек Туг Акуд Січ Азїа Уаї Іеч Агу Аїа Уа1і АБр біп їеч Авп Січ Іеч

Зек Бек бі Азїа АБп Теч Туг Акуд Гечп Геч сбіц Геї АБр Рго Рго Рго 45 50 55 бо

Туз АБр АвБп бій Ав5р Геї сіу ТБ Агу Гу5 Рго Уаії бек Рпре ТіПг Уаї 65 70 75 80

Туз біч ТБ Уаї Суб Рго Агу Тс І1їе біп біп Рго Аїа сії сіп Сув 85 90 95

Авр Рпе пув січ Ппуб5 біу Аку Уаі Ппуз біп Сув Уаі1і сіу Тс Уаї ТБг 100 105 110 бо Пес Авр Рго бек АБп АБр о біп Робе Авр Гей Авп Суб Авп бі Геч біп 115 120 125

Зек Уа1і І1їе Геї Рго Тгр Гу5 Тер Рго Тер Тер Рго Тгр Агу Агку б1Уу 65 130 135 140 «2105 190

«2115 149 «212» Білок «2135 5Бив5 вскгоїа «4005 90

Пес пеп Гпеп Геп Аза Гей УМаії Уаії Рго бег Аїа бек Аза біп Аїа Гей 20 25 Зо бек Туг Акуд Січ Аїа Уаї Іеч Агуд Аїа Уаі Авр Агд їеч АБп Січ сіп 35 40 45

Зек Бек бі Азїа АБп Теч Туг Акуд Гечп Геч сбіц Геї АБр біп Рго Рго 50 55 бо

Туз Аза Авр бій Авр Рго сбіу ТіПг Рго Гу5з Рго Уаії бек Рре ТіПг Уаї 65 70 75 80

Туз біч ТБ Уаї Суб Рго Агуд Рго ТБг Агу біп Рго Рго січ Геч Сув 85 90 95

Зо

Авр Рпе Ппув сії АБп о біу Аку Уаії Ппуз біп Сув Уа1і сіу Тс Уаї ТБг 100 105 110

Теч Авр Сбіп І1їе Ппув Авр Рго Гечп Авр І1е Тпг Сув АБп бі МУМаї сСіп 115 120 125 біу Уаі Акуд сіу сіу Акд Гезч Суб5 Тук Сув Акуд Агуд Агуд Рбе Сув Уаї 130 135 140

Сув Уаі с1у Акду б1Уу 145 «2105 91 «2115 17 «212» Білок «213» Таспурієцв дідав «4005 191

Туз Тер Суб Рпе Акуд Уа1і Сув Тук Аку біу Іїе Суб Туг Агуд Аг Сув 1 5 10 15

АгкЧ 60 «2105 12 «2115 102 «212» Білок 65 «213» Апорпе1е5 датріає «4005 92

Меє Гуз Сув Аза ТПг Іїе Уаії Суб ТПг Іїе Аїа Уаії Уаі їец Аза Аза 1 5 10 15

ТВгЕ Ген Гей Авзп біу бек Уаі біп Аїа Аза Рго сіп сій бій Аїа Аї1а 20 25 Зо

Теч бек біу сіу Аїа АвБп Геї АБп о ТПг ІТеч Іеч Авр бій Геч Рго сій 35 40 45 біч ТЕ Ні Ні Аза Аза Геї сії АБп Тугє Агуд Аїа пуб Агуд Аза ТБбг 5о0 55 бо

Сув АБр Ге Аза бек сіу Ррпе сіу Маі! біу бек бек Ге Су5 Аїа Аза 65 70 75 80

Нів Сув Іїе Аїа Агу Агку Туг Агуд сіу с1іу Тугк Суб АБп бек ув Аїа 85 90 95

Уаї Сув Ма1 Сув Агу Ап 100 «2105 13

Зо «2115 70 «2125 Білок «213» БгоБорпіїа теіаподавзбег «4005 193

З5

Меє Меє біп Іїе Ппу5 Тук Ге Рпе Аза Геї Рре Аїа Уаї Іеч Меє Гец 1 5 10 15

Уаї Уаї1ї їеч с1у Аїа АБп біц Аїа Авр А1їа Авр Сув їеч бБег сС1у Агд 20 25 Зо

Тук Ппув біу Рго Суз Аїа Уаі Тер Авр Абп бій Тс Суб Агу Агсуд Уаї 35 40 45

Сув пув біц бі сіу Акуд бБег бек біу Нів Суб бек Рго бек Геч Пув 5о0 55 бо

Сув Тер Сув бі сіу Сув 65 70 «2105 194 «2115 63 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 60 «4005 194

Меє ТП Гуз Іїе Уа! Уаії Рпе Іїе Тугк Уаї Уаї Іїе Іеч Іеч Іец Тр 1 5 10 15 65

Іїе Рпе Нібв Маї бек Аза їу5з пувз пуб Агуд Тук Іїе січ Сув бій ТЕбг 20 25 Зо

Нів січ АвБр Сувз бек біп Уаі Рпе Меє Рго Ркго Роре Уа! Меєсє Аг Сув 35 40 45

Уаї І1їе Ніз бічЧ Сув пуб Іїе Рбе АБп сіу біп Нівз Іеч Агуду Туг 5о0 55 бо «2105 195 «2115 76 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 195

Меє Аза Гуз Іїе Меє пуб Рпе Уа1! Туг АБп Меє І1їе Рго Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Іїе Рпе Іїе І1їе ТП Іеч біп Уаі Авзп Уаі Уа1ї Уаї Суб5 бічш Іїе Ар 20 25 Зо

Аза Авр Суб Рго біп І1їе Суб Меє Рго Рго Тук бі Маі Агку Сувз Уаї 35 40 45

АБп о Ніз Агуд Сув біу Тер Уаі Авп Трг Авр Авр бек Гей Рое Гей ТЕГ 5о0 55 бо біп бі Рре ТПг Агуд бБегє Ппуб5 біп Тує Іїе І1е 5бег 65 7о 75 «2105 196 «2115 76 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 196

Меє Тугє Ппув Маї Уаі1і Сіц бБег І1е Рбе І1їе Акуд Тує Меє Нів Агуду Кув 1 5 10 15

Рго АвБп Меє ТПг Гуз Ропе Рбпе Гуз Рпе Уа! Тук ТПг Меє Роре І1е Іеч 20 25 Зо

Іїе Бек Геї Роре ІГечп Уа! Уа! ТБ Абп Аза А5п Аза Ні АБп Суб ТЕГ 35 40 45

АвБр І1їе Бек АБр Суб бек бек АБп Нібв Суб бек Тук бі сіу Маї 5ег 5о0 55 бо 60

Теч Сув Меє Авп сіу сіп Суб Іїе Суз5 Іїе Тук біц 65 70 75 65 «2105 97 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

«4005 197

Меє Уаії біч ТБ Гец Акуд Геш Рпе Туг І1їе Меє Іїе Те Рібе Уаї! 5бег 1 5 10 15

Теч Суб Пец Уаі! Уаі1і Уа1ї АБр сіу бі бек їув Ге бі сбіп ТПг Сув 20 25 Зо

Зек бі АБр Рпе біп Суз Тук Іїе Пуб5 Авп Рго Нів УМаі Рго Рое с1Уу 35 40 45

Нів Геї Аку Сув Рпе біц сбіу Рпе Суб сбіп біп Геї АБп біу Рго Аїа 5о0 55 бо «2105 98 «2115 67 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 98

Меє Аїа Гуз Іїе Уаі Авп Рпе Уа1! Туг бек Меє Іїе Уа! Рре Ге Ріе 1 5 10 15

Зо

Теч Рпе Пец Уаі Аза ТПг Ппу5 Азїа Аза Аку біу Тук Пец Суб Уа1і Тс 20 25 Зо

АБвр Бек Нів Сув Рго Рго Нів Меє Сув Рго Рго біу Меє бій Рго Агд 35 40 45

Сув Уаі Акуд Акуд Меє Суб Ппув Суб Гей Рго Іїе біу Тер Агуд пуб Туг 50 55 бо

Рпе Уаї Ркго 65 «2105 199 «2115 96 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 199

Меє біп Іїе біу пуб Авп Меє Уа1і сії ТП Ркго Гуз Теч Авр Тук Уаї 1 5 10 15

Іїе Іїе Рпе Робе Робе Іїеп Туг Рпе Рпре Рпе Агу сіп Меє Іїе І1їе Іеч 20 25 Зо 60

Агуд Геч АбБп о Тбг Тс Ре Агу Рго їец Авзп Рпе пуб Меє Геї Агку Ріе 35 40 45 65

Тер б1у біп АБп Агуд АбБп о Іїе Меє пуб Нібв Агку біу біп Губ5 Уаї Нів 5о0 55 бо

Рпе Бек Геї І1їе Геї бек АБр Сув Пуб5 ТПг Авп Пубв АБр о Сув Рго ТКув 65 70 75 80

Теч Агуд Акгуд Аза Авп Уаі Агку Суб Агу Гувз бег Туг Сув Уаі Рго Ше 85 90 95 «2105 100 «2115 65 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 100

Меє Іеч Агку Іїеч Тук Пец Уа! бек Тук Рре Геч Іеч Гуз Агу ТПг Гец 1 5 10 15

Теч Уаії бек Тук Рпе бБег Туг Роре бек ТПг Туг Іїе Іїе січ Суб Пув 20 25 Зо

ТВгЕ АБр Авп Авр оСув Рго Іїе бек біп еп Ппуз І1їе Туг Аїа Тер Гув

Сув Уаі пуб Авп о сіу Суб Нів Геї Рібе Авр Уа! І1їе Ркго Меє Меє Туг

Зо 50 55 бо вій 65

З5 «2105 101 «2115 79 «2125 Білок 40 «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 101

Меє Азїа бічЧ Іїе Геч Пу5 Рпе Уаі! Туг Іїе Маії Іїе Іечп Рібе Уаї! 5бег 45 1 5 10 15

Теч Іїеч Пец Іїе Уаі! Уаі Аза бек бії Аку бічЧ Сув Уаі Трг Авр Авр 20 25 Зо

Авр о Сув січ пуб Геч Тук Рго Тбйг АБп о біц Туг Акуд Меє Меє Сув АБр 35 40 45

Бек сіу Тук Суб Меє АБп Теч їец Авп сіу пуб Іїе Іїе Туг Іеч Іеч 5о0 55 бо бо Сув Теч ПЦув Пув Ппув Пув Рпе їеч І1е І1їе Іїе бег Уаї Іеч Іеч 65 70 75 «2105 102 65 «2115 95 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

«4005 102

Меє Азїа бічЧ Іїе Іїе Пу5 Рпе Уа1! Туг Іїе Меє Іїе Іеч Субв Уаї 5бег 1 5 10 15

Теч Іїеч Гец Іїе сіц Уаі Аїа сіу бі біч Сув Уаі ТргЕ Авр Аїа Ар 20 25 Зо

Сув АБр пуб Геч Тук Рго АБр І1їе Аку Гу5 Рго Те Меє Суб бек Ше 35 40 45 сіу біш Сув Тук бек Гечп Тук Ппуз біу Пув Ріпе бег ІТеч бег Іїе Іе 5о0 55 бо зек Ппув ТПг бек Ріе бек Те Меє Уа! Тук Ап Уаії Уаі1ї ТіПг Іеч Уаї 65 7о 75 80

Іїе Суб Геї Аку Іечп Аза Туг І1їе бек Гечш Геч Геч пу Рое Іеч 85 90 95 «2105 103 «2115 100 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 103

Меє Аїа бічЧ Іїе Гей Пу5 Авр Рбе Туг Аїа Меє АБп їец Рпе І1їе Ріе 1 5 10 15

Теч Іїе Іїе Гей Рго Аїа Пуб5 І1їе Аку біу біч Тс Гей бек Геч ТПг 20 25 Зо

Нів Рго Ппув Сув Нів Нів Іїе Меє Гей Рго бек ІТеї Рое Іїе ТПг сіц 35 40 45

Уаї Рре біп Акуд Уаі ТрПг Авр Авр сіу Суб Рго Гув Рго Уаії Ап Ні 5о0 55 бо

Теч Аку Уаї Ма1ї Ппув Сув І1їе сі Нів І1е Суб січ Тук С1у Туг Авп 65 70 75 80

Тук Аку Рго АБр Рпе Аза бек біп Іїе Рго сії бек ТПг Гуз Меє Рго 85 90 95

Агуд пув Агд бій 100 60 «2105 104 «2115 78 «2125 Білок 65 «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 104

Меє Уаї бічЧ Іїе Гей пуб Авзп Рбе Туг Аїа Меє АБп Те Рпе І1їе Ріе 1 5 10 15 їеч Іїе Іїе Геш Аїа Маії Ппуз Іїе Акуд біу Аїа Нів Рре Рго Суз Уаї 20 25 Зо

ТПЕ АБр о АБр о АБроСув Рго пуб Рго Уаі АБп Гу Іечп Агку Уаії Іїе Гув 35 40 45

Сув І1їе АвБр Ніб5 Іїе Суб сбіп Ту Аїа Агу АБп Тец Рго Авр Рпе Аза 5о0 55 бо

Зек бі І1їе бек біц бек Тйг пуб Меє Рго Сув Ппув бі1у січ 65 70 75 «2105 105 «2115 72 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 105

Меє Рбе Ніз5 Аза біп Аза сій Абп Меє Аїа Гуз Уаї бек Авп Рре Уаї! 1 5 10 15

Зо

Сув Іїе Меє Іїе Гей Рпбе Гечшп Аїа ІТечп Робе Робе І1е Трг Меє Авп А5р 20 25 Зо

З5

Аза Аза Акуд Рбе січ Суб Агку біч Абвр обесє Нібв Суб Уаі ТПг Агу І1е 40 Ппув Сув Маії Пе Рго Агу Ппуз Рго бій Сув Агуд Авп Туг Аїа Суз 01У 5о0 55 бо

Сув Тук АвБр бек Авп Пу5 Туг Агд 45 65 70 «2105 106 «2115 78 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 106

Меє Сіп Меєб Акуд Сіп Абвп Меє Аїа Тіпг І1е Гей Авп Рпе Ма1 Рре Уаї 1 5 10 15

Іїе Іїе Геї Рре Іїе бек ІТеч Іїец Пец Уа! Уа1і Тпг Ппув сіу Тугк Агд бо 20 25 Зо біч Ркго Рре бек бек Рпе ТПг січ біу Ргро Тйг Сув Пув бій АвБр Ше 35 40 45 65

АвБр Сув Рго Бек І1е бек Сув Уаі АБп Рго біп Уаі Рго Ппув Сув І1е 5о0 55 бо

Меє Рпе біч Суб Нібв Суб пуб Тук Іїе Рго ТПг ТПг Іеч Гуз 65 70 75 «2105 107 «2115 71 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 107

Меє Аза ТПг Іїе Ге Меє Тук Уа1! Туг І1їе ТПг Іїе Іеп Робе І1е 5бег 1 5 10 15

Іїе Ггечш ТПг Уаї Іечп Тбйг біц сіу Гечп Тук бі Ркго Геч Тук АБп Ре

Зо 20

Агу Агуд Авр оРго АБр о Суб5 Агуд Агуд АбБп о І1е Авр о Суб Рго бек Тукгк Іеч 35 40 45 25

Сув Уаі Аза Рго пуб Уа1і Рго Аку Су5 Іїе Меє Рпе сій Суб Нів Сув 5о0 55 бо

Пув Авр І1е Рго бег АБр Нів 65 70 «2105 108 «2115 57 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 108

Меє ТП Тс бек Геч пуб Рпе Уаі! Тугк Маії Аїа Іїе Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч їечш їеч Ма1 Уаї Меє сі1у с1у І1е Агуд Агд Рре Січ Суб5 Агкд сСіп 20 25 Зо

Авр Бек Авр Сув Рго бек Тук Рпе Суб біц пуб Геч ТПг МУМаї Рго Гуз 35 40 45

Сув Рпе Тер бек Ппув Сув Тук Сув Гуз 5о0 55 «2105 109 «2115 57 «2125 Білок бо «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 109

Меє ТП Тс бек Геч пуб Рпе Уаі! Тугк Маії Аїа Іїе Іечп Робе Іец 5бег 65 1 5 10 15

Теч Іїеч Пец Уа! Уа1і Меє сіу сі1у І1їе Аку їу5 Ппув бій Сув Акду сіп

20 25 Зо

Авр Бек Авр Сув Рго бек Тук Рпе Суб бі пуб Геч ТПг Іїе Аза Гуз 35 40 45

Сув Іїе Нібв бек ТПг Сув Геч Сув Гуз 5о0 55 «2105 110 «2115 66 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 110

Меє біп Іїе біу пуб Авп Меє Уа1і сії ТП Рго ГУу5з Теч Уаї Тук Ріе 1 5 10 15

Іїе Іїе Геї Роре ІГеп бек Іїе Рпе Гей Суб Іїе ТПг Уаі1ї бек АБп 5ег 20 25 Зо

Зек Ррпе бек біп Іїе Робе АБп бек Аза Суб Пуб ТПг АБр губ АБр Сув

Зо

Рго пуб Рпрпе бі1у Аку Уаі АБп Уаі Агку Суб Акуд пув б1у АБп Сувз Уаї 5о0 55 бо 35 Рго І1е 65 «2105 111 40 «2115 57 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 111 45

Меє Тс Аза Іїе Ге Ппу5 пуб Ррбе І1їе АБп Аїа Уа! Рпе Гей Рпе Пе 1 5 10 15

Уаї їеч Рпе тес Аїа Тпг ТрПг Авп Уаі1ї Сі Авр Рре Уаі1ї сСіу сі1у бег 20 25 Зо

АвБп о Авробіч Сув Маї Тук Рго АБр Уаі Рпе сіп Суб Іїе АБп АБп І1е 35 40 45

Сув Ппув Сув Уа1! бек Нібв Нібв Агу Тс 5о0 55 60 «2105 112 «2115 74 «2125 Білок 65 «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 112

Меє біп Гуз Акуд пуб Авп Меє Аза сіп І1е Іїе Рбе Туг Уаї Тугк Аза 1 5 10 15 їеч Іїе Іїе Пе Робе бБег Рго Ріпе Те Аїа Аїа Агу Печп Уа1ії Роре Уаї 20 25 Зо

АвБп о Рго січ пуб Рго Сув Ма! Тбг Авр Аза Авр Суб АвБр Агу Тугє Агд 35 40 45

Нів сії бек Аза Іїе Тук бек Авр Меє Рре Суб Гу5 АБвр біу Тук Сув 5о0 55 бо

Рпе Іїе АБр Тук Нібв Нібв АБр Рго Туг Рго 65 70 «2105 113 «2115 76 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 113

Меє біп Месє Аку пуб Авп Меє Аза сіп І1ї1е Іечп Рбе Туг Уаї Тугк Аза 1 5 10 15

Зо

Теч Геч Іїе Гей Рпе Тбг Ркго Робе Іеп Уаі! Аза Аку Іїе Меє Уа1ї Уаї 20 25 Зо

З5

Авп оРго АвБп АБп о Рго Субв Уа! ТПг Авр Аза Авр Суб сбіп Агку Тугє Агд 40 Нів пуб їеч Аза Тіг Агуд Меє І1їе Сув Авп Сіп С1іу Рбе Сув Іеч Меб 5о0 55 бо

АвБр Рпе ТПг Ні АБр Рго Туг Аза Рго бек Геч Рго 45 65 7о 75 «2105 114 «2115 64 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 114

Мес АБп Нів І1їе бек ПЦув Рре Маї Туг Аїа їеч І1е І1е Рре Ієч 5ег 1 5 10 15

Іїе Тукє Геч Маї Уаії Іеч АБр біу Гей Рго Іїе Бек Сув Куб АБр Нів бо 20 25 Зо

Рпе січ Сув Агу Агу Гуз Іїе АБп Іїе Гей Агуд Суб І1їе Туг Агкду біп 35 40 45 65 біч пуб Ркго Меє Суб Іїе АБп бек І1е Су5 Тпг Суб Уаї Пув Геч Гей 5о0 55 бо

«2105 115 «2115 67 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 115

Меє Сіп Агуд сій пув Авп Меє Аїа Туз І1е Рре Сі Рре Ма1ї Туг А1а 1 5 10 15

Меє Іїе Іїе Рпбе Іїе Гей Гечш Рбе Геї Уаі біч Гу5з Авп Уаії Уаі Аза

Зо

Тук Геч Гпу5 Робе біч Суб Пуб ТПг Авр АвБр АБр о Субв біп Гув бек Гец 20

Теч пувз ТрПг Тук Уаі! Тер пув Сув Маі Гуз АБп о біч Суб Тук Рпе Ріе 5о0 55 бо 25

Аа Ппув Гув 65

Зо «2105 116 «2115 61 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 35 «4005 116

Меє Аза сбі1у Іїе Іїе Пу5 Рпе Уаі Ні Уаї Іез Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15 40

Теч Рпе Ніб Уаі Уа1ї пуб АвБп АБр АБр о біу бек Рпе Суб Рпе пуб Авр 20 25 Зо 45 век Авр Сув Рго Авр бій Меє Суб Рго бек Рго Гечп Ппуз бі Меє Сув 35 40 45

Тук Рре Геч біп Сув пув Сув біу Уаі А5р ТПг І1е Аза 50 55 бо «2105 117 «2115 59 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 117 бо Мес Аза Авп Трг Нів Пув Теч УМаії бек Меє І1їе Те Рбе І1їе Ре Ієч 1 5 10 15

Рпе Ггеч Аїа бек АБп АБп Уа! біц сіу Ту Уаі АБп Суб5 біц ТБбг Авр 65 20 25 Зо

Аза Авр Сув Рго Рго бек Тйг Акуд Уаі пуб Акуд Рбе Пув Суб Уаї Гуз

35 40 45 сбіу бічЧ Суб Агуд Тер Тс Агуд Меє бег Туг Аїа 50 55 «2105 118 «2115 63 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 118

Меє Сбіп Агуд Акуд Пув Пув пуб Аїа Сіп Уаї УМа1ї Меє Рре МУаї Нів Авр 1 5 10 15

Теч Іїе Іїе Суб Іїе Тук Геї Роре І1їе Уа! Іїе Тс Трг Агудуд пуб Тс 20 25 Зо

Авр І1їе Акуд Суб Аку Робе Туг Туг Авр Суб Рго Акд Геч січ Туг Нів 35 40 45

Рпе Суб січ Суб Іїе бічЧ АвБр Рпе Суб Аїа Туг Іїе Агу Іеч АБп 5о0 55 бо

Зо «2105 119 «2115 57 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

З5 «4005 119

Меє Аза Гуз Уаї Тук Меє Рпе Уаі! Туг Аїа Іеї Іїе І1їе Робе Уаї! 5бег 1 5 10 15 40

Рго Рпе Геї Геї Аза Тйг Ррбе Аку ТПг Агуд Геч Рго Суб5 бі Гув5 Авр 20 25 Зо 45

АБр Авр Суб Рго біп Аза Рбе Тецп Рго Рго Уа1і Меє Ппув Суб Уаі1ї АБп

Агуд Рпе Сув Сіп Туг сії І1їе Ієч січ 5о0 55 «2105 120 «2115 77 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 120 60

Меє Іїе Гуз біп Рпе бек Уаі! Сув Туг І1їе біп Месє Агу Агд Ап Меє 1 5 10 15 65 Тис Тс І1е Тез ПЦув Рре Рго Туг І1е Меє Уаї І1їеє Суб Іеч Іеєч Ієц 20 25 Зо

Теч Ніз Уаі Аза Аза Тук сії АБр Робе біч Гуз біц Іїе Рпре Авр Сув 35 40 45

Пув Ппув Авробіу Авр Сувз АБр Нівз Меє Сув Уа! Тіпг Рго б1у Ії1їе Рго 5о0 55 бо

Туз Суб ТП біу Тук Уа1і Сув Рре Суб Робе бічЧ Ап Гец 65 7о 75 «2105 121 «2115 73 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 121

Меє Сіп Агуд бег Аку Авп Меє Трпг ТБ І1е Рре пув Рбе АїТа Туг І1е 1 5 10 15

Меє Іїе Іїе Сув Уа! Рпе Гецш Гей Аб5п Іїе Аза Аїа Сбіп січ Іїе сіц 20 25 Зо

АБп о сіу Іїе Ні Рко Сув Гув пуб АвБп о біц Авр Суб АБп о Нів Меє Сув

Зо

Уаї Меє Рго біу Пец Рго Тер Суб Нібв біш АБп АБп о Теч Суб Рре Сув 5о0 55 бо

З5

Тук бі АБп Азїа Туг біу АвБп ТПг Агд 65 70 40 «2105 122 «2115 85 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 45 «4005 122

Меє Тс Іїе Іїе Іїе пуб Рпре Уаі А5п Уаії Іезч Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Ні Уаі Аза пуб АБп АБр АБр АБп о Ту5 Теч Гец Гей бек Ріе 20 25 Зо

І1е біш біш б1іу Рбе Тїеч Суб Рпе Пув Авр бек Авр Сув Рго Туг Авп 35 40 45

Меє Суб Рго бек Рго Геч пуб січ Меє Суб Тук Ропе Іїе Пу5 Сув Уаї бо 50 55 бо

Сув біу Уаії Тук сіу Рго І1їе Аку біп Агу Агуд Ге Туг біп Бек Нів 65 70 75 80 65

АБп Рго Меє Іїе сіп 85

«2105 123 «2115 69 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 123

Меє Агу губ Авп Меє ТіПг Гпув І1е Іїеч Меє І1їе сС1у Туг Аїа Іеч Меє 1 5 10 15

Іїе Рпе Іїе Робе Іеп бек Іїе Аза Уа! бек Іїе ТПг б1у АБп Іеч Аїа

Зо

Агуд Аза Бек Акуд Ппуб5 Куб Ргро Уаі Авр Уаі Іїе Рго Суб5 І1е Туг АБр 20

Нів АБр Суб Рго Агу Гпу5 Геч Тук Рпе Геї сії Агку Суз Уаї сб1у Агд 5о0 55 бо 25

Уаї Сув Гув Тук Гец 65

Зо «2105 124 «2115 58 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 35 «4005 124

Меє Аза Ніз їув Пец Уа! Тук Аза І1їе ТПг Іеп Робе І1їе Рре Ге Ріе 1 5 10 15 40

Теч Іїе Аїа АвБп Аб5п Іїе сії АБр АБр І1їе Рбе Су5 І1е ТПг АБр АБпП 20 25 Зо 45 Авр о Сув Рго Рго АБп ТПг Теч Уаі біп Агу Тук Агу Суз І1е АБп с1Уу 35 40 45

Туз Сув Авп Гей бек Рре Уаі беєк Тує б1Уу 50 55 «2105 125 «2115 61 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 125 бо Меє АБр біц Трг Тез ПЦув Рре Маї Туг І1їе їеч І1е їеч Рре Уаї 5ег 1 5 10 15

Теч Суб Пец Уаі Уаі Аза АБр сіу Маії Гу5з АБп І1їе АвБп Акд січ Сув 65 20 25 Зо

ТЕ біп ТБ бек Авр оСув Тук пуб пуб Туг Рго Роре Іїе Рго Тер 01У

35 40 45

Туз Уаі Акуд Суб Уа1і пуб с1іу Аку Суб Агуд Теч Ар Меє 50 55 бо «2105 126 «2115 62 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 126

Мес Аїа їу5 І1їе І1їе ПЦув Рпе УМаї Тує Уаї Іїеч А1їа І1е Рре Рре 5ег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі Аза пуб АБп УМаі АБп о біу Ткр Тпг Сув Уа1і січ Авр 20 25 Зо век Авр Сув Рго Аїа АБп Іїе Суб біп Рго Рго Меє сіп Аку Меє Сув 35 40 45

Рпе Тук сіу бі Сув Аза Сув Уаії Агуд бек Ппув Роре Суб ТЕГ 5о0 55 бо

Зо «2105 127 «2115 61 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

З5 «4005 127

Меє Уаї Гуз Іїе Іїе Пу5 Рпе Уа1! Тугє Рре Меє ТПг Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15 40

Меє Іеч ІТеч Уа! Трг ТПпг пуб бій АвБр біу бек Уаі біч Суб Іе Аза 20 25 Зо 45

АвБп о І1їе АвБр о Сув Рго біп Іїе Рбе Меє Гей Рго Ррбе Уаі Меє Агуд Сув

І1е Авп Рре Агу Суб Сбіп І1е Уаї Авп бег Січ Авр ТЕГ 5о0 55 бо «2105 128 «2115 67 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 128 60

Меє АБр бічЧ Іїе Геч Пу5 Рпе Уа! Тугє ТПг Геї Іїе І1їе Робе Ріре 5бег 1 5 10 15 65 Теч Рре Рпе Аза АТїа АБп Авп Маї Авр Азїа Авп І1е Меє Авп Сув Сіп 20 25 Зо

Бек ТПЕ Рре АБр Сув Рго Агу Авр Меє СуБ Бек Нібв І11е Агу Авр Уаї 35 40 45

І1е Сув Іїе Рбе Ппув Пув Сув Ппув Суб Аза сіу сб1у Агу Туг Меє Ркго 5о0 55 бо біп Уаї Рго 65 «2105 129 «2115 62 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 129

Меє Сбіп Агуд Аєуд Гуз Авп Меє АТїа Ап Авп Нів Меє їеч Іїе Туг А1ї1а 1 5 10 15

Меє Іїе Іїе Суб Пец Рпе Рго Тугк Геч УМаі! Уа! Тйг Рре пуб ТПпг Аза 20 25 Зо

Іїе Тпг Сув АБр Суб АБп о біч Авр Суб Гей Ав5п Рре Рре ТіПг Рго Іеч

Зо

АвБр Авп о Геч Ппув Суб І1їе АБр АБп Уаі Сув5 сій Уа1і Роре Меє 5о0 55 бо

З5 «2105 130 «2115 65 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 40 «4005 130

Меє Уаії АБп Іїе Геч пуб Рпе Іїе Туг Маії Іїе І1їе Робе Робе Іїе Гец 1 5 10 15 45

Меє Рре Рбе Уа! Ге Іїе Авр Уаі Авр сіу Ні МУМаї Іеч Уаї сіц Сув 20 25 Зо

Іїе бій АБп Агу АвБр о оСув біч пуб сбіу Меє Суб Пув Роре Рго Ропе Ії1е 35 40 45

Уа1 Акуд Сув Печп Меє Авр о біп Суз Ппуз Сув Маі Агу І1е Нібв Авп Іеч 5о0 55 бо

І1е 60 65 «2105 131 «2115 74 65 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 131

Меє Іїе Іїе біп Рбе бек Іїе Тук Тугк Меє сіп Агу Агу ГУуб5 Теч Авп 1 5 10 15

Меє Уаї бічЧ Іїе Пец Пув Рпе бек Нібв Аїа Іечпч Іїе І1їе Рре Ге Ріе 20 25 Зо

Теч бЗек Азїа їеч УМаі1і Тбг Авп Аїа Авп о І1е Рпе Рібе Сув Бег ТПг Авр 35 40 45 біч Авр Суб Тбг Тер Абп о Геч Суб Агу біп Рго Тер Уаі сіп Ппув Сув 50 55 бо

Агуд Геч Нів Меє Суб бек Сув біч Гу5 Авп 65 70 «2105 132 «2115 58 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 132

Меє АБр біч Уаі! Рпе Пу5 Рпе Уа1і Тугє Маїі Меєсє Іїе І1е Роре Рго Ріє

Зо 1 5 10 15

Теч Іїе Гец Авр Уаі Аза ТПг АБп Аза біп Гуз І1їе Аку Агуд Суб Робе 20 25 Зо

З5

АБп о Авр Аза Нів Суб Рго Рго АвБр Меє Суб ТПг Ге сіу Уаі І1е Рго 40

Туз Сув бек Акуд Рпе ТПг І1їе Су5 І1е Сув 5о0 55 45 «2105 133 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 133

Меє Ні Агку Губ Рго Авп Меє ТпПг пуб Рре Робе Гуз Рбе Уа! Тугє Трг 1 5 10 15

Меє Рре Іїе Пеп Іїе бек ГПешп Робе Гей Уаі Уаії Тпйг Авп Аза Авзп Аза 20 25 Зо бо АБп о АБп оСув ТВг Авр о ТВпг обег Ар о Сув бБег бек Авп Нівз Сувз Бек Туг 35 40 45 біч біу Уаії бек Геч Суб Меє АБп о біу біп Су5 Іїе Суб5 Іїе Тук сій 65 50 55 бо «2105 134

«2115 69 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 134

Меє біп Месє Гуз пуб Меє Аза ТПг Іїе ІГеч Гуз Рпе Уа! Тугє Ге Ше 1 5 10 15

Іїе Гечш Геї І1їе Тук Рго ІТеч Іїец Уаі Уа! ТП сій сі бек Нів Туг 20 25 Зо

Меє пув Рпе бек Іїе Сув Ппув АБр АБр ТПг АБр о Сув Рго ТПг ТГеч Ріре 35 40 45

Сув Уаії Пец Рго Авп Уаії Рго Ппув5 Сув Іїе біу бек Пув СувБ Нів Сув 50 55 бо

Тув Геч Меє Уа1ї Ап 65 «2105 135 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 135

Теч Тук Пец Уаі! Уа1ї Уа1ї АБр сіу Маї бек їув Пец Аза сіп Бек Сув 20 25 Зо

Зек бі АБр Рпе біп Суз Туг Іїе Пуб5 АвБп Рго Нів Аїа Рго Рое с1Уу 35 40 45 біп Те Акуд Суб Рпе сі сіу Тук Суб біп Акуд Ге Авр Пуб5 Рго ТПг 5о0 55 бо «2105 136 «2115 63 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 136

Меє ТП ТБ Рбе Гей пуб УМаі Аза Туг Іїе Меє Іїе Іїе Суб Уа1 Рібе 1 5 10 15 60

Уаї Іеч Ніз Іец Аїа Аза сіп Уаі АвБр бек біп Гуз Агуд Іеч Ніх5 с01УуУ 20 25 Зо 65 Сув Ппув біш Авр Агуд Авр о Суб Авр о АбБп Іїе Суб бек Уа1і! Ніз Аїа Уаї 35 40 45

ТЕ Ппув Суб І1їе біу АБп Меє Суб Агуд Суб Геї Аїа АБп Уаї Гуз 5о0 55 бо «2105 137 «2115 61 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 137

Меє Агу І1їе АБп Аку Тбг Рго Аза І1їе Роре Гуз Рбпе Уа! Тугє Тс Ше 1 5 10 15

Іїе Іїе Тук Геї Рре Іїеч їец Акуд Уаі! Уаі Аза Гпу5 АБр Течп Рго Ре

Зо 20 АБп о І1е Сув біч пуб Авр Січ Авр Суб Теч бі Рпе Сув Аїа Нів Авр

Туз Уаі Аїа Ппу5 Суб Меє Геї АБп І1е Суб5 Робе Сув Ре 25 50 55 бо «2105 138 «2115 54

Зо «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 138 35 Месє Аа Січ І1їе їечш ПЦув Іїе ес Тугє Маії Рре І1е І1їеє Рре Ієч 5ег 1 5 10 15

Теч Іїе Гец Аїа Уаі Іїе Бек біп Ні Ргро Робе ТБПг Рго Суб бій ТПг 40 20 25 Зо

АвБп Аза Авр о Суб Ппув Суб Агуд АБп о Ніб пуб Агуд Рго Авр о Сув Іеч Тгр 35 40 45 45

Нів Ппув Сув Тук Сув Тусг 5о0 «2105 139 «2115 65 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 139

Меє Аку Гуз бек Меє Аїа ТпПг Іїе Геї Губ5 Рібе Уа! Тук Уаі І1е Меє 1 5 10 15 60

Теч Рпе Іїе Тук бек Гечш Рре УМаі Іїе біп бек Ропе сбіу Ніб5 Агкуд Ріе 20 25 Зо 65

Теч Іїе Тук Авп Авп Суб Пув АБп АБр Тс біч Суб Рго Авп Авр о Сув 35 40 45 біу Рго Ніб5 біц сіп Аза Ппув Суб5 І1їе Іїеч Тук Аїа Суб Тук Сув Уаї 5о0 55 бо вій 65 «2105 140 «2115 58 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 140

Меє АБп Тс Іїе Геч пуб Рпе Іїе Рбе Уаії МУаії Ріре Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15

І1їе Рпе Геї бек Аза біу АБп бек Пубв бек Тук сіу Рго Суб Тс Тс 20 25 Зо

Теч біп Авр Сув бі ТБ Нібв Авп о Тср Рпе бі Уаі1ї Сув Бег Сув І1е

Авр Рпе січ Сув Ппув Суб Трр бек Іеч Гец

Зо 50 55 «2105 141 «2115 64 35 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 141 40 Месє Аїа Січ І1їе Іїе ПЦув Рре Маї Тугє І1їе Меє І1е їеч Сув Уаї 5ег 1 5 10 15

Теч Іїеч Гец Іїе Аїа сії Аза бек біу Гуз біч Сув Уаі Трг Авр Аза 45 20 25 Зо

Авр о Сув сії АвБп о Геч Тук Рго біу АвБп пуб пуб Рго Меє Роре Суб5 АвБп 35 40 45

АБп о ТП сіу Тук Суб Меє бек Теч Тук Ппув бій Рго бБег Агуд Тугк Меє 5о0 55 бо «2105 142 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 60 «4005 142

Меє Аїа Гуз Іїе Іїе Пу5 Рпе Уа1! Туг Іїе Меє Іїе Іеч Сув Уаї 5бег 1 5 10 15 65

Теч їеч Гец Іїе Уаі! сії Аїа сі1у біу Гпув біц Суб Уа1і ТП АБвр Уаї 20 25 Зо

Авр о Сув січ Ппув І1е Тук Рго біу АвБп пуб пуб Рго Геї І1е Сув 5ег 35 40 45

ТЕ сі1у Тук Сув Тук бек Ге Тук бій бі Рго Рго Агу Тук Нів Пув 5о0 55 бо «2105 143 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 143

Меє Аза Гуз Уаі! ТП пуб Рпе сіу Туг Іїе І1ї1е І1їе Ні5 Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Рре Гей Аїа Меє Ап Уаі Аза сіу сбіу Аку біц Суб Нів Аза 20 25 Зо

АБп обБек Нів Сув Маї біу Гуз Іїе ТБПг Суб Уаї Гей Рго сіп Гув Рего 35 40 45 бішц Сув Тер Авп Тук Аїа Суз УМаії Сув Туг Авр бек Авп Пувз Туг Агд 5о0 55 бо «2105 144 «2115 55 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 144

Меє Аза Гуз Іїе Рпбе Авзп Тук Уа1! Туг Аїа Геї Іїе Меєсє Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рре їеч Меє сСіу Ті бек сіу Меє Цув Авп сС1у Сув Пув Нів Тис 20 25 Зо біу Ніз Суб Рго Акуд пуб Меє Суб біу Аїа їу5 ТПг ТЕ Ппув Суб Агд 35 40 45

Авп о Авп о Гпув Сув біп Сувз Уаї 5о0 55 «2105 145 «2115 69 «2125 Білок бо «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 145

Меє Тс бічЧ Іїе Геч пуб Рпе Уаі Су5 УМаї Меє Іїе І1їе Робе І1е 5бег 65 1 5 10 15

Зек Рпе І1їе Маї бек Гувз бек Ге Авп сіу сіу сіу Ппув АБр Гув Сув

20 25 Зо

Рпе Акуд АБр бек АБр оСув Рго Пув Нібв Меє Суб Рго бек бек Іеч Уаї 35 40 45

Аа пуб Суб І1їе АБп Агку Теч Субз Акуд Суб Агуд Агуд Рго бій Іеч біп 5о0 55 бо

Уаї біп Геч Авп Рго 65 «2105 146 «2115 69 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 146

Меє Аза Ні Іїе Іїе Меє Рпе Уа1і! Туг Аїа Іеч Іїе Туг Аїа Ге Ше 1 5 10 15

І1їе Рре бек бек Іечп Рбпе Уаі Агу Авр сіу Іїе Рго Суб Іеч 5ег Авр 20 25 Зо

Зо

Авр січ Сув Рго бі Меє бек Нів Тук бек Рпе Ппуб5 Сув АБп АБп Туз 35 І1е Сув бій Туг АБр Іїеч біу бій Меє бек Авр Авр Авр Тук Туг Іецй 5о0 55 бо біч Меє бег Агкд сій 40 65 «2105 147 «2115 77 45 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 147

Меє Тук Агуд сі пув Авп Меє Аїа Туз ТіПг о Теч Пув Рпе Ма1 Туг Уаї 1 5 10 15

Іїе Уа1ї Геї Роре Гей бек Те Ропе Гец Аїа Аза Пуб5 АБп І1е АБр б1Уу 20 25 Зо

Агуд Уа1ї Бек Туг АБп бек Робе Іїе Аза Гей Рго Уаі Суб сіп ТПг Аїа 35 40 45 60

Аза Авр Суб Рго біп біу ТБг Агу біу Агуд Тбг Тує пув Сув І1е АБп 5о0 55 бо 65

Авп оПпув Сув Агу Тук Рго ГУу5з Теч Геч пуб Рго Іїе сіп 65 70 75

«2105 148 «2115 56 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 148

Меє Аза Нібз Іїе Ррбе Авзп Тук Уа1! Тугк Аїа Геї Іечп Уа! Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Меє Уа! ТПг АБп о сіу І1їе Ні5 Іїе біу Суб Авр пуб Авр 20 25 Зо

Агу Авр оСув Рго Пуб5 біп Месє Суб Нібв Гец Ав5п сбіп ТП Рго Гув Сув 35 40 45

Теч губ АвБп Іїе СувБ Пув Сув Уаї 50 55 «2105 149 «2115 77 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

Зо «4005 149

Меє Аїа бічЧ Іїе Гечш Ппув Суб Рбе Туг ТПг Меє АБп їец Рпе І1їе Ріе 1 5 10 15

З5

Теч Іїе Іїе Гей Рго Аїа Пу5 Іїе Аку біп Ніз5 Іїе біп Суб5 Уаі Ше 20 25 Зо 40 АБвр АБр Авр о Сув Рго Пув бек Теч Авп Пу5 Ппечп Гей І1їе І1е Ппуз Сув

І1їе АвБп Нів Маї Сув біп Тук Уаі біу Авп Гей Рго АБр Роре Аза 5ег 45 50 55 бо біп І1їе Ркго Пув бек ТПг Ппув Меє Рго Тук їув сбіу сіц 65 7о 75 «2105 150 «2115 70 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 150

Меє Аза Туг Іїе бек Акуд Іїе Рпе Туг Уаії Іез Іїе І1їе Робе Іец 5бег бо 1 5 10 15

Теч Рпе Рпе Уаі! Уаі Іїе АБп сіу Маї Пувз бек Пец Геп Геч Іїе Гув5 20 25 Зо 65

Уаї Аку бек Рпе Іїе Рго СувБ біп Акуд Бек АБр АБр Сув Рго Агу Авп 35 40 45

Теч Сув Маі АвБр сіп Іїе І1їе Ркго ТБ Суз Уаі Тер Аїа пу Сув Пув 50 55 бо

Сув Гув АБп Туг АБп Авр 65 7о «2105 151 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 151

Меє Аза АБп Уа! Тс пуб Рпе Уаі! Туг Іїе Аїа І1е Тук Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Рпе Іїе Аза пуб АБп АБр Аза ТПг Аза Тс Рре Суб Нів Ар 20 25 Зо

АвБр Бек Нів Сув Ма1ії ТП Гуз Іїе пу5з Суб Уаі! Гей Рго Агу ТіПг Рего 35 40 45 біп Сув Агу Авп обі Аїа Суз сбіу Сув Туг Нів бек Авп Пув Рпре Агд 50 55 бо «2105 152 «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 152

Меє б1у бічЧ Іїе Меє Пув5 Рпе Уа1і Тугє Ма1і Меє Іїе Ії1е Тук Геч Ріе 1 5 10 15

Меє Рпе Ап Маї Аїа Тіг сіу бек бі Рпе І1їе Рре Тібг Пув Пув5 Ієч 20 25 Зо

ТПг Бек Суб Авр бек бек Пубв Авр Суб Агуд бек Роре Іеч Сув Туг 5ег 35 40 45

Ркго пуб Рбе Рго Ма! Сувз Туз Акуд сіу Іїе Суб січ Сув І1е 50 55 бо «2105 153 «2115 61 «2125 Білок бо «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 153

Меє б1у біч Меє Рре пуб Рпе Іїе Туг ТПг Роре Іїе Іїеч Рре Уаї Ні 65 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі! Уаі Іїе Рбе сбішп АБр Іїе біу Ні Іїе пуб Тук Сув

20 25 Зо бі1у Іїе УМаії Авр Авр Суб Тугк Ппув бек Гув Гув Рго Гей Рпе Пу5 Ше 35 40 45

Тер пув Суб Маії бічЧ Авп Уаї СувБ Уа1ї Геї Тгр Тук Гуз 50 55 бо «2105 154 «2115 63 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 154

Меє Аза Аку Тйг Геч пуб Рпе Уа! Туг Бек Меє Іїе Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі Аза А5п сіу Геч Гуз І1їе Рбе Суз5 І1їе Авр Уаі Аза 20 25 Зо

Авр о Сув Рго Пув АБр Геї Тук Рго Геч Геч Тук пуб Суб І1е Тук АБп

Зо

Туз Суб І1е Уаі Рпе Тбг Агу І1е Рго Робе Рго Рре Авзр Тер Ше бо 35 «2105 155 «2115 66 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 40 «4005 155

Меє Аза АБп Іїе ТБПг пуб Рпе Уа! Туг Іїе Аїа Іїе Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15 45

Теч Рпе Рпе Іїе сіу Меє АБп АБр Аза Аза Іїе їеч бі Суб5 Акд сій 20 25 Зо 50 АБвр Бек Нів Сув Маії Тпйг Ппув Іїе Ппув Сув УМаії ГПей Рго Агу Пуз Рго 35 40 45 біч Сув Акуд Авп Абп Аза Суб ТПг Суб Тук Гуз біу біу Рпе бек Ріе 55 50 55 бо

Нів Нів 65 60 «2105 156 «2115 68 «2125 Білок 65 «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 156

Меє біп Аку Уаії Ппуз пуб Меє Бек сії Тс ІГеч Гуз Рпе Уаї Тук Уаї 1 5 10 15 їПеч Іїе Ппешп Робе І1їе бек І1їе Рібе Ніз Уаї Уаі Іїе Уа1ї Су5в Авр 5ег 20 25 Зо

Іїе Тук Рре Рго МУМаі! бек Агку Рго Суб Іїе ТПг АБр губ АБр Сув Рго 35 40 45

Авп оМеє Ппув Нів Тук Гуз Аза їу5 Сув Агуд пуб с1іу Рре Суб5 І1е 5ег 5о0 55 бо век Акд Уаі Агд 65 «2105 157 «2115 72 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 157

Меє біп Іїе Аку Пуз Іїе Меє Бек сіу Маії Іеч Гуз Ріпе Уаї Туг Аза 1 5 10 15

Зо

Іїе Іїе Геї Роре Іеїп Рбе Іїецп Рре Гец Уаі Аза Аку сії УМа1і с1у С1Уу 20 25 Зо

З5

Теч біч Тр Іїе сій Сув бій Тбг АБр о біу АБр Суб Рго Агкуд бек Меє 40 І1е Ппув Меє Тер Авп Гув Авп Туг Агу Ні Ппуз Сув І1е АБр с1Уу Гуз 5о0 55 бо

Сув біч Тер Іїе ПпуБ пуб Іеч Рго 45 65 70 «2105 158 «2115 54 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 158

Меє Рпе УМа1ї Туг Авр їеч Іїе Геп Ріре І1їе бег Іеч І1е Іеч Уаї Уаї 1 5 10 15

ТЕ б1у Іїе АБп Аїа біц Аза Авр ТПг Бек Суб Нібв бек Роре АБр Ар бо 20 25 Зо

Сув Рго Тер Уаі Аза Ні Ні Тугк Аку біч Су5 Іїе сі сіу Геч Сув 35 40 45 65

Аза Тук Агку І1їе Іеч Туг 5о0

«2105 159 «2115 69 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 159

Меє Сбіп Агуд Аєуд пуб Пув бБег Меє Аїа Пув Меє теп ПЦув Рре Рре Ріє 1 5 10 15

Аза Іїе Іїе Геї Геї Іечп бек Іїец Рпре Ге Уаі Аза Тс січ Уаі! С1Уу

Зо біу Аїа Тук Іїе сбіш Сув біш Маії АБр АБр АБр Суб Рго пуб Рго Меє 20

Тув АБп о бек Нів Рго АвБр ТПг Тук Тук Гуз Сув Уаї пуб Нібв Аг Сув 5о0 55 бо 25 біп Тер Аїа Тер Був 65

Зо «2105 160 «2115 140 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 35 «4005 160

Меє Рре Уа! Тукє Трг Ге Іїе Іїе Роре Геї Рібе Рго бег Ніб5 Уаі Ше 1 5 10 15 40

ТПгЕ АБп Гуз Іїе Аїа Іїе Тук Суб Уа1і Бек АБр АБр АБр Субв Геч Гув 20 25 Зо 45 Так Рпе Трг Рго їеч Авр о Теч Кув Суб Ма1і Авр Авп Ма1! Сув Січ Рре 35 40 45

Авп о Геч Акуд Сув Ппув біу їув Суб біу бі Агуд АБр січ Гу5 Робе Уаї 50 55 бо

Рпе Геч Ппув Аїа ІГеч Гуз Пув Мес Авр о сіп Пує Геч Уаі Іеєзч січ січ 65 70 75 80 біп біу АБп Аїа Акуд січ Уа1ї Ппуб5 І1їе Рко Гуз пуб Гец Гец Рпе Ар 85 90 95 60

Агуд Іїе біп Уа1ї Ркго ТБ Ргро Аїа ТБПг пуб Авр о біп Уа1і січ січ Ар 100 105 110 65 Авр о Туг Авр Авр Ар Авр Сі Січ бі сії біз бі біз Авр Авр Уаї 115 120 125

Авр Меє Тер Рре Ніб5 Іецп Рго Авр Уаї Уаі1ї! Сув5 Нів 130 135 140 «2105 161 «2115 60 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 161

Меє Аза Гуз Ріе бек Меє Рпе Уаі! Туг Аїа Геї І1їе АБп Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уа! сі Тпг Аза І1їе ТПг АБп І1е Агу Суб Уа1ї бек Авр

Зо 20 АБвр АБр о Сув Рго Пув Маі! Іїе Пув Рго Ппечп Уаї Меє Ппуз Суз І1е С1У

Авп оТук Суб Тугк Роре Роре Месє Іїе Тує біц сіу Рго 25 50 55 бо «2105 162 «2115 58

Зо «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 162 35 Мес Атїа Нів Ппув Ріе Уаї Туг Аїа І1їе І1їе їеп Рре І1е Рре Іеч Ріє 1 5 10 15

Теч Уаі Аза пуб Ап Уа1і Ппув сіу Тук Маії Уаї Суб Аку ТПг Уаі1і Авр 40 20 25 Зо

Авр о Сув Рго Рго АБр ТПг Агу Авр Гец Агуд Туг Агуд Суб Тез АБп б1УуУ 35 40 45 45

Туз Сув Пув бек Туг Агкд Геч бегк Туєк б1Уу 50 «2105 163 «2115 61 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 55 «4005 163

Меє біп Аку Гуз пуб Авп Меє сіу сіп Іїе Іечп Іїе Рре Уаії Рпе Аза 1 5 10 15 60

Пес Іїе Авп Рібе Гей бБег Рго І1е Гей Уаії бій Меє Трг ТрПг ТпПгс Тпс 20 25 Зо 65

Іїе Ркго Суб ТП Робе Іїе АБр Авр Суб Рго пуб Меє Рго Іеч Уаї Уаї 35 40 45

Туз Сув І1е Авр Ап Рбе Суб АБп Тук Рпе біч І1їе ГПув 5о0 55 бо «2105 164 «2115 57 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 164

Меє Аза біп Тйг Ге Меє Гец Уаі! Туг Аїа Іеї Іїе І1їе Робе Трг 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі! Уаії Іїе Бек Аку біп ТБг АБр Іїе Рго СувБ Пув бБег

Зо 20

АБр Авр Аза Суб Рго Агу Уаі! бек бек Нів Нів Іїе сії Сув Уаї Гуз 25 с1у Рбе Сув Тпг Тукє Тгр Був Іеч Авр 5о0 55 «2105 165

Зо «2115 77 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 165

З5

Меє теп Агу Агуд пуб Ап о Тпг Уа1ї сСіп І1е Іечп Месє Рре Уа! бек Аза 1 5 10 15 40 Теч Те І1е Туг І1е Рбе Іеч Рре Іеєєп Уаії І1їе Трг бек бБег Аїа Авп 20 25 Зо

ІТїе Ркго Суб АБп бек Авр бег АБр Суб Рго Тер Пуб5 І1їе Тугє Тук Тс 45 35 40 45

Тук Аку Суб АБп Авробіу Рпе Суб Уа1! Туг Ппув бек І1е АБр Рго 5бег 5о0 55 бо

ТПгЕ І1ї1е Ркго біп Тук Меє Трг Авр Геї Іїе Роре Рго Агд 65 70 75 «2105 166 «2115 59 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 60 «4005 166

Меє Аїа Уаї Іїе Гей Ппу5 Рпе Уа1і! Туг Іїе Меє Іїе І1їе Рре Ге Ріе 1 5 10 15 65

Теч Геч Тук Уаі Уаі АвБп сбіу Тс Агку Суб АБп Агуд Ар бій Авр Сув 20 25 Зо

Рго Рпе І1ї1е Суб ТіПг біу Рго біп Іїе Рго Ппу5 Суб МУМаії бек Ні5 Пе 35 40 45

Сув Рпе Суб Пец бек бек сіу Пув січ Аза Туг 5о0 55 «2105 167 «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 167

Меє АБр Аїа Іїе Гей Ппу5 Рпе Іїе Туг Аїа Меє Рбе Те Рре Ге Ріе 1 5 10 15

Теч Рпе Уаі Тпг Тпг Агуд Абп о Уаї біз Аза Теч Робе бій Суб Авп Агд 20 25 Зо

Авр Рпе Уа1і Суб біу АБп АБр АвБр бій Суб Уа1! Туг Рго Тугк Аїа Уаї 35 40 45 сіп Сув І1е Нів Аку Тук Суб Пув Сув Геч пуб бег Агу Ап 5о0 55 бо «2105 168 «2115 67 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 168

Меє біп Іїе біу Аку пуб пуб Меє сіу сії ТП Рко Гуз Іеч Уаї Туг 1 5 10 15

Уаї Іїе І1їе Гей Ріре Гец бБег І1е Рре Іеч Суб Тіпг Авп бБег бег Ре 20 25 Зо

Зек біп Меє Іїе АБп Рбе Аку біу Суб пуб Агуд АБр губ АБр о Сув Рго 35 40 45 біп Рпве Акуд сіу Уаі А5п Іїе Аку Суб Агу бек біу Рпе Суб ТПг Рго 5о0 55 бо

І1е Авр 5ег 65 60 «2105 169 «2115 76 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 65 «4005 169

Меє біп Месє Аку пуб Авп Меє Аза сіп І1ї1е Іечп Рбе Туг Уаї Тугк Аза

1 5 10 15

Теч Геч Іїе Гей Ррпе бБег Ркго Робе Іеп Уаі! Аза Аку Іїе Меє Уа1ї Уаї 20 25 Зо

Авп оРго АвБп АБп о Рго Субв Уа! ТПг Авр Аза Авр Суб сбіп Агку Тугє Агд 35 40 45

Нів пуб Геч Аза Тйг Аку Меє Уаї Суб Ап І1ї1е сіу Роре Суз Іеч Меє 5о0 55 бо

АвБр Рпе ТПг Ні АБр Рго Туг Аза Рго бек Геч Рго 65 70 75 «2105 170 «2115 77 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 170

Меє Тук Уаї Тук Тук Іїе сбіп Меє сіу Гу5 АБп Месє Аза біп Агкуд Ріе 1 5 10 15

Зо

Меє Рбпе Іїе Туг Аїа Гей Іїе Іїе Ррбе Геч бек біп Рпе Рре Уаї Уаї 20 25 Зо

І1е АБп ТБг б5ег Авр Іїе Рго Авп Авп бек Авп Агу АБп о бБег Рго Гуз 35 40 45 біч Авр Уаії Рпе Суб Абвп о бБег АБп АБр Авр Суб Рго ТПг Іїе Геч Туг 50 55 бо

Тук Маї бек Гуз Сув Уаі Тук Авп Рпе Суб січ Тугє Тгр 65 70 75 «2105 171 «2115 67 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 171

Меє Аїа Гуз Іїе Уаі! Авп Рпе Уа1! Туг Бек Меє Іїе І1їе Робе Уаї! 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі Аза ТПг Ппув сіу біу бек їув Рго Рпе Гей ТПг Агд 20 25 Зо 60

Ркго Тук Рго Суб АБп ТПг біу бек Авр Суб Рго біп АБп Меє Су5 Рго 35 40 45 65

Рго сіу Тук Ппув Рго біу Сув біц Авр сіу Тук Суб АБп Нів Сув Туг 5о0 55 бо

Тув Агд Тгр «2105 172 «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 172

Меє Уаії Аку Тйг Геч пуб Рпе Уаі! Туг Маії Іїе Іїе Іечп Іїе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Гец Уаі Аза Ппу5 сіу сіу біу Гу5з Туз І1е Тук СувБ січ АБп

Зо 20

Аза Аза Бек Суб Рго Аку Теч Мес Тук Рго Геч Уа1ї! Тугк Ппув Сув Іеч 25 Авр Авп о Ппув Сув УМа1і Ппув Ріе Меє Меє Ппув бек Агуд Рре Уаї 5о0 55 бо «2105 173

Зо «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 173

З5

Меє Аза Аку Тйг Геч пуб Рпе Уа! Туг Аїа Уаї Іїе Іечп Робе Іец 5бег 1 5 10 15 40 Теч Рре їеч Ма1ї Аїа ПЦув Сіу Авр Авр Уаї Ппув І1е ПЦув Сув УМаї Уаї 20 25 Зо

Аза Аза АвБп о Сув Рго АБр Теч Мес Тукг Рго Геч Уа1ї! Тугк Ппув Сув Іеч 45 35 40 45

АвБп о сіу Іїе Сув Маії біп Рбе Тбг Гей ТПг Рпе Рго Ріре Уаї 5о0 55 бо «2105 174 «2115 65 «2125 Білок «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 174

Меє бек Авзп ТПг Ппеп Меє Рпе Уаї І1ї1е ТПг Ріре І1їе Уаї Іеч Уа1! Тс бо 1 5 10 15

Теч Рпе Гей сіу Рго пуб АБп УМаії Тук Аїа Рбе біп Рго Суб Уаі1і Тс 20 25 Зо 65

ТЕ Азїа АБр Сувз Меєсє пуб ТПг Геч пуб Тс АБр бій АБп Іїе Тгр Туг 35 40 45 біч Сув І1їе Авп Авр Рбе Суб5 І1їе Рго Робе Рго І1їе Рго Пув с1іу Аг4д 50 55 бо

Тув 65 «2105 175 «2115 76 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 175

Меє Гуз Акуд Уа! Уаії Авп Меє Аза Гуз І1ї1е Маі! Гуз Тук Уаї Тук Уаї 1 5 10 15

Іїе Іїе Іїе Роре Іеп бек Іїеп Рре Гец Уаі Аза ТПг Гуз Іїе біч с1Уу 20 25 Зо

Тук Тук Тук Гуз Сув Рпе пуб Авр бБег АвБр Суб Маі! ТУу5 Іеч Геч Сув 35 40 45

Агкуд ІТ1е Рго Гей Агкуд Рко Пув Сув Меє Тугк Агу Нівз І1їе Сувз Ппув Сув 50 55 бо

Туз Уаії Уаії Гей Тпг біп АБп АБп Тук Уаї Іеч Тр 65 7о 75 «2105 176 «2115 66 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 176

Меє цув Агуд с1іу Пув Авп Меє бег Тув І1е Іїеч Пув Рбпе Іїе Туг Аїа 1 5 10 15

ТПЕ Геч Маї Іеч Тук Тецп Рпе Гецш Уа! Уа1ї Тс Ппуб5 Аза б5екг АБр Ар 20 25 Зо біч Сув Пув Іїе Авр сіу АБр Суб Рго Ії1е бек Тер біп Пув Роре Ні 35 40 45

ТПг Тук Гпув Сув Іїе АБп біп пуб Суб Пув Тегр Маії Іеч Агу Роре Ні 50 55 бо 60 біч Туєг 65 65 «2105 177 «2115 64 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

«4005 177

Меє Аза Гуз Тпг Гец Авзп Рпе Меє Рбе Аїа Іеч Іїе Іечп Робе І1е 5бег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уа! бек пуб АБп УМаі Аза Іїе АБр Іїе Рпе Уаі1їі СуБ сіп 20 25 Зо

ТПгЕ АБр Аза АБр Суб Рго пуб бек сії Ге бек Меє Тук ТПг Тер Був 35 40 45

Сув І1їе Авр Авп січ Суб АБп о ТГечп Рбе Гуз Уаії Меє сіп сіп Меє Уаї 5о0 55 бо «2105 178 «2115 59 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 178

Меє Аза АБп Тс Ніб пуб ГПец Уа1! Бек Меє Іїе Іеїп Робе Іїе Ріре Гец 1 5 10 15

Зо

Рпе Геч УМаі Аза АБп АБп Уа! біц сіу Ту Уаі АБп Суб5 біц ТБбг Авр 20 25 Зо

А1Та АБвр о Сув Рго Рго бек ТПг Ак Уаії Ппуз Агу Робе Ппуз Сувз МУаї Гуз 35 40 45 сбіу бічЧ Суб Агуд Тер Тс Агуд Меє бег Туг Аїа 50 55 «2105 179 «2115 59 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 179

Мес Атїа Нів Ре Іеш Меє Рпе Уаї Туг Аїа їеч І1е Тіг Суб Іеч 5ег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі! сі Меє сіу Нівє ТІечп бек І1їе Нібв Суб Уаі1і Бек Уаї 20 25 Зо

АБр Авр Сув Рго Ппу5 Маії біч Гпувз Рго Іїе ТПпг Меє Ппув Суб І1е АБп 35 40 45 60

Авп оТук Сув Ппув Тук Роре Уаії АБр Нібв Ппу5 Гец 5о0 55 65 «2105 180 «2115 66 «2125 Білок

«213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 180

Меє Авп біп Іїе Рго Меє Рпе сіу Тук ТПг Ге І1їе І1їе Робе Робе 5ег 1 5 10 15

Теч Рпе Ркго Уаі Іїе Тбг АБп о сбіу АБр Агу Іїе Рго Суб Уа1і ТпПг АБп 20 25 Зо біу АБр Суб Рго Уа1і Меє Ак Геї Ркго ІТеч Туг Меє Агуд Сув5 ІШе Тс 35 40 45

Тук Бек Суб біш Теч Рбе Рпе Ар сіу Рго АБп ІТеч Суз Аза Уаї сіц 5о0 55 бо

Агд Ше 65 «2105 181 «2115 61 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

Зо «4005 181

Меє Аку Гуз Авр о Меє Аза Агу Іїе бек Геї Рібе Уа! Туг Аїа Ге Ше 1 5 10 15

З5

І1їе Рпе Робе бек Іечп Рбпе Рбе Уаії Гей ТПг Ап сіу бічп Іеч січ Іе 20 25 Зо 40 Аку Сув Уаії бек АвБр Аза Авр Суб Рго Ппеїп Робе Рго Гей Рго Гей Нів

АвБп о Агуд Суб І1їе АБр АБр Уа! Суб Нібв Гей Рпе ТпПг 5бег 45 50 55 бо «2105 182 «2115 60 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 182

Месє Аа Сіп І1їе їееш Меє Рпре Уаї Тугє Рпе Іеч І1е І1е Рре Ієч 5ег 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уа! сій Бек Іїе Ппу5 Іїе Рбе Тбг біц Ніб5 Агуд Суб Агд бо 20 25 Зо

ТЕ АБр Аза АБр Суб Рго Аїа Аку січ Геї Рго бі Тук ТГеч Ппу5 Сув 35 40 45 65 біп біу сбіу Меє Суб Акуд Геч Тез І1їе Гуз ТУу5 Авр 5о0 55 бо

«2105 183 «2115 56 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 183

Мес Аза Агуд Маї І1їе бек Іеч Рре Туг Аїа їеч І1е І1е Рре Іеєч Ріє 1 5 10 15

Теч Рпе Пец Уаі Аза ТПг АБп о сбіу АБр ІГечп бек Рго Суб Геч Агд бБег

Зо бі1у АБр Суб бек пуб Авр о біч Суб Ргро бек Нібв Пец Уа! Рго Пув Сув 20

Іїе сіу Геї ТП Сув Тук Сув Ше 5о0 55 25 «2105 184 «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

Зо «4005 184

Меє біп Аку Агуд Гуз Авп Меє Аза сіп І1їе Іечп Іечп Робе Аза Тук Уаї 1 5 10 15

З5

Рпе Іїе І1їе бек І1їе бек Іїеч Рпе Гец Уа! Уа1і Тбг АБп сіу Уаї Гув 20 25 Зо 40

Іїе Ркго Сув Маї Куб АБвр ТПг АБр Суб Рго ТПг Геч Рго Суб Рго Іеч 35 40 45 45 Тук бек Ппув Сув Маі Авр с1у Рре Сув Пув Меє Іеч Ббег І1е 5о0 55 бо «2105 185 «211» 66 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 185

Меє АБп о Нівз Іїе бек пуб Рпе Уа! Туг Аїа Іеї Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15 бо Уа1ї Тук Ге Уаі Уаї Гпешп Авр сбіу Агу Рго Уаії бек Сув Пув Авр Нів 20 25 Зо

Тук АБр Суб Агуд Агуд пуз Уаї пуб Іїе Уаі1і сіу Суб І1е Робе Рго сіп 65 35 40 45 біч Гпув Ркго Меє Суб Іїе АБп бек Меє Су5 ТПг Су5 І1їе Агуд бі Ше

5о0 55 бо

Уаї Ркго 65 «2105 186 «2115 86 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 186

Меє цЦув Бек біп Авп о Нів АТїа Ппув Ріе І1е бег Ріре Тугк Пув Авп Авр 1 5 10 15

Теч Рпе Ппуз Іїе Рпе сіп АбБп АБп АБр о бек Нів Рпе Ппуз Уа1! Рпе Ріе 20 25 Зо

Аза Геч Іїе Іїе Роре Те Тугє ТБПг Тук Геп Нів Уа1і ТП АБп сб1іу Уаї 35 40 45

Рпе Уа1і Бек Суб АБп бек Нів Іїе Ніб Суб Акуд Уаі АБп АБп Нів Гуз 5о0 55 бо

Зо

Іїе сіу Сув АБп Іїе Рго біц біп Тук Геч Геч Суб Маі АБп Теч Ре 65 70 75 80

Сув Те Тгр Іеч Авр Туг 85 «2105 187 «2115 62 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 187

Меє ТПг Тук Іїе бек пуб Уа! Уа1ї Туг Аїа Іеї Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15

І1е Туг Уа1і сСіу Ма1 Авп Авр Сув Меє їечш Уа1ї ТПг Сув Січ Авр Нів 20 25 Зо

Рпе Авр Сув Агу біп АБп Уа! біп біп Уа1і! сіу Суб Бек Рое Агу січ 35 40 45

Іїе Ркго сіп Суб І1їе АБп бек Іїе Суб пуб Суб Меє пув с1У 5о0 55 бо 60 «2105 188 «2115 63 «2125 Білок 65 «213» Медісадо сгчпсаєчіа «4005 188

Меє ТПг Нівз Іїе бек пуб Рпе Уаі Рре Аїа Іеч Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15

І1е Туг Уаії сіу Маії Авп Авр Сув Пув Агу Іїе Рго Сув Пувз АБр АвБп 20 25 Зо

Авп о АвроСув АБп о АБп АБп о Тср біп Ге Ге Аїа Суб Агкуд Рое бі Агд 35 40 45 біч УМаії Ркго Акуд Суб Іїе АБп бек І1е Сувз пув Суб Меє Рго Меє 5о0 55 бо «2105 189 «2115 60 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 189

Меє Уаї біп Тбг Рко пуб ГПец Уа1! Тугк УМаї І1їе Уаї Іеч Іеч Іец 5бег 1 5 10 15

Іїе Рпе Геч сіу Меє ТБг Іїе Суб Авп бБег Бек Роре бек Нібв Ропе Ре 20 25 Зо

Зо біч бі1у Аїа Суб ПпувБ Бек АБр Пуб5 АБр о Сув Рго Пу5 Гей Нібв Агд бБег

З5

Авп о Уаі Акуд Сув Агку Гуз біу біп Суз Уаі сбіп Ше 5о0 55 бо 40 «2105 190 «2115 77 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа 45 «4005 190

Меє ТП Гуз Іїе Ге Меє Геш Рпе Туг Аїа Меє Іїе Уаї Робе Нів5 5бег 1 5 10 15

Іїе Рпе Геї УМаі Аза бек Туг ТПг Авр бій Суб Бек ТПг АБр Аза Ар 20 25 Зо

Сув біч Туг І1їе Те Сув їеч Рре Рго І1ї1е І1їе Пув Агуд Сув І1е Нів 35 40 45

АвБп оНів Суб Ппув Суб Маі! Рго Меєс сбіу бек Іїе сій Рго Меє бек ТЕбг бо 50 55 бо

І1їе Рго АБп сіу Маїії Нів їувз Рпе Ніб5 Іїе Іїе Авп АБпП 65 70 75 65 «2105 191 «2115 64

«2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 191

Меє Аза Гуз Тпйг Гец Авзп Рпе Уаі Суб Аїа Меє Іїе Іечп Робе І1е 5бег 1 5 10 15

Теч Рре їеч Ма1! бек ПЦув Авп УМаї Аїа Іеч Туг І1е І1е січ Сув КПув 20 25 Зо

ТПЕ АБр Аза АБр Суб Рго І1їе бек пуб Геї АБп Меє Тугк АБп Тгр Агд 35 40 45

Сув Іїе Пув бек Бек Суб Ні Геч Тук Гуз Уаі Іїе сіп Рпе Меє Уаї 5о0 55 бо «2105 192 «2115 72 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєшіа «4005 192

Меє біп Гуз бічЧ пуб Авп Меє Аза ГПу5 ТПг Рре біч Рре Уаї Туг Аза

Зо 1 5 10 15

Меє Іїе Іїе Рпе Іїе ГПешп Гей Робе Гей Уаі бій А5Бп Азп Рре Аїа Аза 20 25 Зо

З5

Тук Ії1е Іїе біч Сув біп ТБПг Авр Авр Авр Суб Рго Гувз бек біп Гец 40 біч Меє Рпе Аїа Тер Пу5 Сув Ма1ії Гуз АБп о біу Суб Нів Геч Рпе СсС1УуУ 5о0 55 бо 45 Меє Тук бі Авр Авр АБвр Авр Рего 65 70 «2105 193 «2115 57 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 193

Меє Азїа Аза ТПг Акуд пуб Рпе Іїе Туг Маії Іеч бек Ніб Рре Геч Ріе 1 5 10 15 бо Теч Рре їеч Ма! Тпг Пув І1їе Трг Авр Аза Агуд Уа1ї Сув Пув бег Авр 20 25 Зо

Туз АБр оСув пуб Ар о Іїе Ії1е І1їе Туг Аку Туг Іїе Гецп Ппуб5 Суб Агд 65 35 40 45

АБп о сіу бій Сув Маї Гуз Іїе їу5з Те

5о0 55 «2105 194 «2115 75 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 194

Меє біп Акуд теп Авр Авп Меє Аза Гув АБп Уа! Гуз Рпе І1їе Тук Уаї 1 5 10 15

І1ї1е Іїе Те їеч їеч Рре Іїе Рпе Іеп Уаі І1їе Іїе Уаї Сув Авр бег

Зо

Аза Рпе Уа1і Рго АБп бек біу Рго Суб ТПг Тпг Авр о Пув АБр о Сув Туз 20 35 40 45 біп Уаі пу сіу Тук Іїе Аза Аку Суб5 Агку їувз біу Тук Сув Меє сіп 5о0 55 бо 25

Ззек Уа1і Ппув Аку ТПг Тгср бег бег Туг Бек Аг4д 65 70 75

Зо «2105 195 «2115 102 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа

З5 «4005 195

Меє Гуз Рпе Іїе Тук Іїе Меє Іїе Геї Робе Іеп бек ІТеч Рре Гей Уаї! 1 5 10 15 40 біп Рпе Гей ТпПг Суб пуб сбіу Геї ТПг Уаї Рго Сув біц АвБп Рго ТПг 20 25 Зо 45

ТПЕ Сув Рго біц Авр Рпе Суб ТПг Рго Рго Меє І1е ТБг Агу Сув Те

АБп о Рпе І1е Сув їеч Сув Авр Сі1іу Рго Сі Туг Аза сії Рго Січ Туг 5о0 55 бо

Авр о сіу Рго біш Ркго бічш Тук Авр Ніб пуб сіу АвБр Роре Іеч бек Уаї 65 7о 75 80

Тув Рго Ппув Іїе Іїе АбБп бій АБп Меє Меє Месє Агу біц Агуд Ні Меє 85 90 95 60

Меє Гуз біч Іїе сіц Уаї! 100 65 «2105 196 «2115 59 «2125 Білок

«213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 196

Меє Аїа біп Рпе Ппецп Меє Рпе Іїе Тук Маії Ге Іїе І1їе Рбе Ієч Туг 1 5 10 15

Теч Рпе Тук Уаі сіц Аза Аза Меє Рре біп ІТеч ТПг Ппуз бег ТП Ше 20 25 Зо

Агуд Сув Уа1і Тс АБр Аза АБр Суб Рго Авп Уа1! Уаі1ї пуб Рго Іеч Гуз 35 40 45

Рго пуб Сув Маі АБр біу Рпе Суб бій Тукє ТПг 5о0 55 «2105 197 «2115 70 «2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 197

Меє Гуз Мес Агу Іїе Ні Меє Аза сіп І1е Іїе Месє Рре Рре Туг Аза 1 5 10 15

Зо

Теч Іїе Іїе Рпе Гей бек Рго Роре Геї Уаі! АБр Агу Аку бек Рпе Рго 20 25 Зо

З5

Зек Бек Ріре Маії бек Рго Гув бек Туг ТПг бек сії І1їе Ркго Сув ТКув 40 Аза ТБПг Агу АБроСув Рго Туг бій Печп Тук Тук бі ТК Ппуз Сув Уаї 5о0 55 бо

АвБр Бек Геч Суб ТПг Туг 45 65 70 «2105 198 «2115 41 «212» Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 198

ТВгЕ Агуд Меє їей ТПг Іїе Рго Сув ТПг Бек АБр АБр АБп о Сув Рго ТКув 1 5 10 15

Уаї І1їе бек Рко Суб Нібв ТПг Ппув Сув Роре АвБр біу Рпе Суб сіу Тгр бо 20 25 Зо

Тук І1е січ сбіу бек Ту біц с1у Рго 35 40 65 «2105 199 «2115 69

«2125 Білок «213» Медісадо Єкчпсаєчіа «4005 199

Меє Аза біп Рбе Гецп Гей Рпе Уа! Туг Бек Геї Іїе І1їе Робе Іец 5бег 1 5 10 15

Теч Рре Рпе сіу сСіш Аїа Аза Рре Сі Агуд Тпг бій ТБ Агсуд Меє Іеєч 20 25 Зо

ТПЕ І1їе Ркго Сув ТПг бек Авр Авр Авп Суб Рго Пуб5 Уаі І1е б5ег Рго 35 40 45

Сув Нів ТБПЕ пуб Суб Рре АБр біу Рібе Суз біу Тер Ту Іїе січ с1УуУ 5о0 55 бо

Ззек Тук бі с1у Рего 65 «2105 200 «2115 78 «2125 Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа

Зо «4005 200

Меє Гуз Іеч Іеч Ні сіу Рпе Геш Іїе Іїе Меє Іечп ТБг Меєсє Ні Гец 1 5 10 15

З5

Бек Іїе сіп Тук Аїа Тук біу біу Ркго Рпе Геч ТПг Ппув5 Тук Іеч Сув 20 25 Зо 40

АБр Акуд Уа1і Суб Ні Гуз Теч Суб біу Авр сій Рре Уаї Суб бек Сув 45 І1е біп Тукг Ппув бек Геч Пув біу їеп Тер Рпе Рго Нівз Сувз Рго ТЕГ 5о0 55 бо біу пу Аїа бек Уа1і Уа1ї Геч Ні АБп Ропе ей Трг бек Рго 65 7о 75 «2105 201 «2115 77 «212» Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 201 бо Меє цЦув Іїеч Геч Тує Сіу Рбе їеш І1їе І1їе Меє Іїєп Тіг Іїе Нів Ієч 1 5 10 15

Зек Уаі1і сіп Тук Рре біц бек Ркго Рпе сії ТПг Ппув5 Тук АБп Сув Авр 65 20 25 Зо

ТПЕ Нів Суб АвБп о Тувз Теч Суб сіу пуб Іїе АБр Нів Суб бек Сув Ше

35 40 45 біп Тук Ніб бек Меє сії сіу Геї Терр Ропе Рго Ніз Суб Агу ТПгЕ Сс1УуУ 50 55 бо зек Аїа Аїа біп Меє ІТеч Ніб Авр Рпе Гей бБег АБп Рго 65 70 75 «2105 202 «2115 86 «2125 Білок «213» Висбпега арпідісоїа «4005 Щ 202

Меє бек Маії Аку пуб Авп Уа! Геч Рго ТПг Меє Рре Уа! Уаї Іеч Гец 1 5 10 15

Іїе Меє Бек Ркго Маі! ТБг Рго ТБПг бек Уаі Рпе Іїе бек Аїа Уаї Сув 20 25 Зо

Тук Бек біу Сув біу бек Гецш Аїа Геч Уа1ї Суб Роре Уа! бег АБп б01УуУ

Зо

І1їе ТпгЕ АБп осіу Гечш Авр Тук Рпе пуб бек бек Аза Рго Геч бек ТЕГ 5о0 55 бо 35 бек бі Тпг бек Сув с1у бі Азїа Рпе Авр Типг Суб Трг Авр Нів Сув 65 70 75 80

Теч Аїа Авп Рпе пу Ріе 40 85 «2105 203 «2115 69 45 «212» Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 203

Мес Агу їеч їТеч Тує Сіу Рбе їеш І1їе І1їе Меє Іїеєп Тіг Іїе Туг Іеєч 1 5 10 15

Зек Уаі1і сбіп АБр Робе АБр Рго ТПг біц Рпе Пув сіу Рго Роре Рго ТЕГ 20 25 Зо

Іїе сії І1їе Сув бек Гувз Тук Сув Аїа Уа1і Уа1і Суб АБп Тугє ТіПг 5ег 35 40 45 60

Агуд Рго Суб Тугк Суб Маі бі Аза Аза пуб бій Агуд АбБр біп Тср РБе 5о0 55 бо 65

Рго Тук Сув Тукг Авр 65

«2105 204 «2115 77 «2125 Білок «213» Висппега арпідісоїа «4005 204

Меє Агу Іеч Іеч Тук сіу Рпе Геш Іїе Іїе Меє Іеп Тбг Іїе Нів5 Гец 1 5 10 15

Зек Уаі1і сбіп АБр І1їе АБр Рго АБп ТПг Гей Агуд сбіу Рго Тугк Рго ТЕГ 20 25 Зо

Туз біч Іїе Суб бек пуб Тугк Сув біп Тук АБп Уа! Уаї Су5 сіу Аїа 35 40 45

Зек Геч Рго Су5Б І1їе Сув Уаі біп АвБр Аїа Агку сіп Іечп АБр Нів Ткгр 5о0 55 бо

Рпе Аїа Сув Сув Туг Авр Сіу Сі1у Рго Сі Меє Іеєч Меє 65 70 75 «2105 205

Зо «2115 108 «2125 Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 205

З5

Меє Гуз Теч Рпе Уа! Уа1 Уаї Уаї Геї Маі Аїа Уа! сбіу Іїе Меє Ріе 1 5 10 15

Уаї Рпре Азта бег Авр Тійг Аза Аза Аїа Рго ТрПг Авр Туг біч Авр Тис 20 25 Зо

АвБп о Авр оМеє Іїе бек Геї бек бек Ге Уаі! сіу Авр АБп бек Рго Туг 35 40 45

Уаї Аку Уаї бек бек Аза Авр бек сіу сіу бек бек Гу5 ТПг бек бег 5о0 55 бо

Туз АБп о Рго Іїе Гечш сіу Гечш Геч Гуз бек Уаі Іїе Пу5 Геч Геч ТПг 65 70 75 80

Туз І1їе Рпе сіу ТпПг Тугк Бек АБр Азїа Азїа Рго Аїа Меє Рго Рго Ше 85 90 95 бо Рго Рго Аїа їеч Агуд Пув Авп Агуд біу Меє Іеч А1а 100 105 «2105 206 65 «2115 178 «2125 Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа

«4005 206

Меє Уаі Аза Сув пуб Уаі! Іїе Геї Аїа Уаі Аїа Уаії Уаії Рре Уа1і Аза 1 5 10 15

Аза Уа1і сіп сіу Аку Рго біу біу біц Рго бій Тер Аїа Аза Рго І1е 20 25 Зо

Рпе Аїа сії Геч Гув5 бек Уаі бек Авр Авп Іїе ТПг АБп Іеч Уаїі! С1Уу 35 40 45

Теч Авр Ап Аза сСіу Січ Туг Аїа Тип Азїа Аїа Пув АБп Авп Теч Авп 5о0 55 бо

Аза Рпе Аза сії бек ІГеч Гуз Тбйг біц Аза Аза Уа1і Ріре бек Гув5 5ег 65 7о 75 80

Рпе сіцп сіу Ппув Аза бек Аза бек Авр Уаі Рпе Ппуб5 сій бек ТПкг Гуз 85 90 95

АвБп о Рпе сіп Аїа УМаї Маії АБр Тйг Тук Іїе пуб Авп Геч Рго Пув5 АБр 100 105 110

Зо

Теч ТП Ге пуб Авр Рбе ТПг січ Гуз бек бі біп Аза Геч пуб Туг 115 120 125

Меє Уаї бі Нів сіу Тпйг бі І1е ТБ Пув пу Аза Сіп С1у АвБп Тис 130 135 140 біч ТЕ бі пу бій Іїе Ппув сії Рре Рбе Гуз Ппуз біп І1е січ АБп 145 150 155 160

Теч Іїе сбі1у сбіп сіу Пув Аїа Іез біп Аза Туз Іїе Аза сії Аза Гув5 165 170 175

Туз Аїа «2105 207 «2115 311 «2125 Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 207

Меє ув ТіПг бек бек бек пуб Уа1і Рре Аїа бек Суз Уаі Аза І1їе Уаї 1 5 10 15 60

Сув Теч Аза бек Уаі Аза АБп Аїа Те Рко Уа! біп Ппуз бек Уаі Аза 20 25 Зо 65

Аза ТПпг Тбг бі АБп о Рго Іїе Уаі біц Ппу5 Нів сіу Сув Агу Аїа Нів 35 40 45

Зоо

Туз АБп Гей Уаі Акуд біп Абп о Уаї МУМаї АБвр Теч Пу5 ТПг Туг Авр бБег 5о0 55 бо

Меє теп Іїе ТБг Авп о біц Уа! Уаі1і сіп Пув біп бек АБп біч Уаї сіп 65 70 75 80 бек бек біп біп бБег Авп бі Сіу біп Авп бек біц Сіп бек Авп січ 85 90 95 біу біп Авп бек бій біп Бек АБп бі Уаї біп бек бек біц Нів бБег 100 105 110

АБп бій сбіу біп АБп бек Гуз біп бек АБп бі сіу біп АБп бек бічЧ 115 120 125 біп бек АвБп бі Уаі! сіп бек бек бі Нів бек АБп біц сіу сбіп АБп 130 135 140

Зек бій біп бек АБп біц Уа! біп бек бек бі Нібв Бек АБп біц с1Уу 145 150 155 160 біп Авп о бек Ппув біп Бек АБп бій біу біп Авп бек Пув біп бек Авп 165 170 175 біч Уаії біп бек бек бі Нів Тгр АБп біч біу біп Авп бек пуб сіп 180 185 190 век Авп бі АБр біп АБп бек біц біп бек Абп бій сбіу біп АБп б5ег 195 200 205

Туз біп бек АвБп бі сіу біп АБп бек Гу5з біп бек АвБп бій Авр сіп 210 215 220

АБп о Бек бій біп бек АБп біч біу біп Авп бек пуб біп Бек АБп січ 225 230 235 240

Уаї біп бБег бек бі Сіп бБег Авп бі Сіу біп Авп бек КГув Сіп бег 245 250 255

АБп бій сіу біп бек бек бічЧ біп бек АБп бій сіу біп АБп бек Гуз 260 265 270 біп бек АвБп біц Уаі! сіп Бек Рго біч бі Нів Туг Авр Гей Рго Авр 275 280 285 60

Рго бій бБег бек Тук бі бек бі біц ТПг пуб сіу Бек Нів бі 5ег 290 295 300 65 бі1у АБр Ар бек бій Ні Агд 305 310

ЗО01

«2105 208 «2115 431 «2125 Білок «213» Висппега арпідісоїа «4005 208

Меє Гуз ТПг Іїе Іїе Пец сіу Геч Суб Геї Рре біу Аїа Гец Рпе Тгр 1 5 10 15 ек ТПг біп бек Меє Рго Уаі сіу біц Уаі Аза Рго Аїа Уаї Рго Аза 20 25 Зо

Уаї Ркго бек бі Аза Уаії Рго сіп Пу5 біп Маії біп Аза Гу5 Рго сіц 35 40 45

ТПгЕ АБп Аза Аза бег Ркго Уаії бек Авр Аза Пуб5 Рго біц б5ег Авр 5бег 5о0 55 бо

Пув Рго Уаії Авр Аїа Січ Ма1ї Пув Рго ТПг Ма! бек Січ Маї Гуз А1т1а 65 70 75 80 біч бек біц біп пуб Рго Бек сіу біш Рго Гу5з Рго біц бег Авр Аза

Зо 85 90 95

Туз Ркго Уаі Уаі Аза Бек сії бек Пуб5 Ргро біц бек Авр Рго ПувБ Рго 100 105 110

З5

Аза Аїа Уа1і Уаї сії бек Гувз Рго біц Авп Авр Аза Уаі Аза Рго січ 115 120 125

ТПЕ АБп АБп АвБр Аза пуб Рго бій Абп Аза Аза Аза Ркго Уаі! бек сбіц 130 135 140

АвпоПпув Рго Аїа ТПг Авр Аза ПЦув Аїа Сі Тйг біч теп І1їе Аза сіп 145 150 155 160

Аа Ппув Рго сіп бек Гув5 Рго Аза бег Авр Гечш пуб Аїа сії Рго січ 165 170 175

Аза Аза ГПув Рго АБп бек біц Уа! Рко Уаі Аїа Гей Рго Геї АБп Рго 180 185 190

ТЕ бій Тс Гуз Аза ТП біп біп бек Уа1і сії Тс АБп біп Уаї сіц 195 200 205 60 біп Аїа Аза Рго Аіїа Аза Аза сіп Аза АБр Рго Аїа Аїа Аза Рго Аза 210 215 220 65 Аза Авр Рго Аїа Рго Аїа Рго Аїа Аїа Аїа Рго Маі Аїа Аїа січ січ 225 230 235 240 зЗо02

Аа Ппув Геч бек біп бек Аза Рго бек ТПг бій Аб5п пу5 Аїа Аза с1Ч 245 250 255 бій Рго бек Пув Рго Аїа бі біп біп бек Аїа Пув Ркго Уаі бій Авр 260 265 270

Аа Уаі Рго Аїа Аїа бек біп Іїе бек біц ТПг пуб Уа1ї бБегє Рго Аїа 275 280 285

Уа1 Рко Аїа Уаії Рго бі УМаії Рго Аїа бБег Рго б5ег Аїа Рго Аїа Уаї 290 295 300

Аза Авр Рго Уаі бек Аїа Рго бічЧ Аза біц пуб А5п Аза сій Рго Аїа 305 310 315 320

Туз Аїа Аза Авп бек Аза сії Рго Аїа Уаі! бСіп бек біц Аза ПувБ Рго 325 330 335

Аза бі Авр Іїе Сіп Пув бек Сіу Аза Маї Уаі бек Аза сії Авп Рго 340 345 350

Туз Рго Уаі сбіц сій сбіп Пув Рго Аїа біч Уаі Аза пуб Рго Аза сій

Зо 355 360 365 біп бек Ппув бек біц Аза Рго Аїа біп Аза Рго пуб Рго ТПг січ сіп 370 375 З8о

З5

Ззек Аїа Аїа січ бі Рго Гу5 пуб Рго бій бек Аза АБп АБр біч Гуз 385 390 395 400

Туз бічЧ біп Нібв бек Уаі АБп губ Агу АБр Аза Тс пуб січ пуб ГПув 405 410 415

Рго Тпг Авр бек Іїе Меє Пув Пув біп Пув Сіп Пув Ппув Аїа Ап 420 425 430 «2105 209 «2115 160 «2125 Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 209

Меє АБп о біу Гуз Іїе Уаії Гей Суб Ррпе Аїа Уаі Уаі Робе Іїе с1у сіп 1 5 10 15 бо А1тїа Меє бег Аїа Аза Трг сСіу ТПс Тбг Ргро біз Уаї січ Авр І1е Був 20 25 Зо

Туз Уаі Аза сій сіп Меє бек біп Тс Рбе Меєс бек Уаі Аза Ап Нів 65 35 40 45

Теч Уаії сбіу Іїе ТпПг Рго АБп бек Аїа АБр Аїа біп пуб бек ІШе сій

ЗОЗ

5о0 55 бо

Туз І1їе Аку Тбг Іїе Меє АБп о Гпуб5 біу Роре Тбг Авр Меє сій ТПгЕ сій 65 7о 75 80

Аза Авп о Ппув Меє Гпуб5 АБр І1їе Уаі Аку пуб Авп Аза АБр Рго Гув5 Іеч 85 90 95

Уаї біч Гуз Туг АвБр біц Ге січ пуб бі Геч Гуз Гу5з Нів Іеч 5бег 100 105 110

ТЕ Аїа Гуз АБр о Меє Рпе бій Ар Ппув Уа1ї Уаї Гуз Рго Іїе с1у сіц 115 120 125 пув Маі1 Січ Геч Ппув ПЦув І1їе Трг Січ Ап Маї І1е ПЦув Тпг Тс Гуз 130 135 140

Авр Меє сії Аза ТПг Меє АБп губ Аза Іїе Ар сіу Рре Ппу5 КГу5 біп 145 150 155 160 «2105 210 «2115 415

Зо «212» Білок «213» Виасіпега арпіадаісоїа «4005 210

Меєс Нів Іеч Рре Іечш Аїа Іеч СсСіу їеч Рпе І1їе Уа1і Сув сіу Меє Уаї 1 5 10 15

АвБр Аза ТПг Рре Туг АБп Рго Агу бек біп ТПг Рпе Ап сіп Геч Меє 20 25 Зо біч Агуд Агуд біп Агуд бБег І1е Рго І1е Рго Туг бек Тук сіу Тукгє Нів 35 40 45

Тук АБп Рго Іїе біцЧ Ркго бек Іїе А5п Уаі Геї АБр бек Іеч бек біц 5о0 55 бо біу Геч Авр бек Акуд Іїе АБп ТП Робе Гуз Рго І1їе Тук сбіп АвБп Уаї 65 70 75 80

Пув Меє бек Тпг Сіп Авр Уа1і Авп бек Уаі Рго Акуд Тіп біп Туг Ссіп 85 90 95

Ркго пуб АБп о бек Геї Туг АвБр бек бій Туг Іїе Бек Аїа Гуз АБр Пе бо 100 105 110

Рго Бек Геї Роре Рго біч біц Авр бек Туг Авр Туг пуб Тук Іеч С1У 115 120 125 65

Бек Ркго Геї АБп о Гув5 Тук Те ТрПг Агуд Рго бек ТПг сбіп бі бек б1Уу 130 135 140

Іїе Аза Іїе АБп Іеч Уаі! Аза Іїе пуб бій ТпПг Бек Уа1і Роре АБр Туг 145 150 155 160 біу Рпе Ркго ТПг Тук пуб Бек Рго Тук бек бек Авр бек Уаі1і Тер АБп 165 170 175

Рпе сіу Бек Пуб5 І1їе Рго АБп ТПг Уаі! Рпе сій АвБр Рго біп бек Уаї 180 185 190 сій бек Авр Рго Авп Тіг Рре Пувз Уа1і бек бБег Рго Тйг І1їе Гув І1е 195 200 205

Уаї пу Теч Іеч Рго біц ТПг Рго сі сбіп сій бек Іїе Іїе Тс Торг 210 215 220

ТПЕ пуб АБп о Тук бічЧ Тец Авп Тук пуб ТПг Тс біп бій ТБс Рго То 225 230 235 240 біч Аза біц Гецй Тук Рго Іїе ТПг бек біп бі Робе біп ТПг бій Авр 245 250 255

Зо біч Тер Ніб Рго Меє Уаії Рго Ппуб5 біп АБп Тбг ТБг пуб Ар січ бБег 260 265 270 бек Рре І1е Тіг ТПг січ біз Рго Гечп Тбг Січ Авр Гпув бек Авп бег 275 280 285

Іїе ТПгЕ Іїе січ Гуз ТБг біп ТБ бід Авр бій бБег АБп бек І1е січ 290 295 300

Рпе А5п бБег І1їе Аку Тс біч бі пуб бек А5п бБег Іїе ТПг Тс січ 305 310 315 320 біч АБп о біп пуб бій Авр АБр бій бек Меєс бег ТрПг Трг бек сбіп сій 325 330 335

ТПг Тс Тс Аза Рбе Абп Гей Ав5п Авр о Тбг Ре АБр Тс АБп Агуд Тус 340 345 350 зек Бек бек Нів бій бек ІТечп Меє Гей Агу Іїе Агу бі Гечп Меє Гуз 355 360 365

АБп о І1ї1е Аїа АБр біп біп АБп Гуз бек біп Рпе Агкуд Тбг Уа1ї АБр АБп бо 370 375 З8о

І1їе Ркго Аїа пуб бек біп бек Абп Гец бег бек Ар бій бек ТПг АБпП 385 390 395 400 65 біп біп Рпе сій Рго сіп Гез УМаі АБп біу Аза Авр ТПг Тукгк ГПув 405 410 415

Зо5

«2105 211 «2115 126 «212» Білок «213» Бібєорпіїй5 7еатаї5 «4005 211

Меєс Тиаг Агуд Тс Меє еп Рпе Те Аїа Сув Маї Аза А1їа Іеч Туг Уаї 1 5 10 15

Сув І1е бек Аїа ТПпг Аза сіу Ппуб5 Рго бі бі Рре Аза Пуб5 Геч бБег

Зо

АвБр сії Аза Рго бек АБп АБр біп Аза Меє Тук сі Бек І1ї1е біп Агд 35 40 45 20

Тук Аку Аку Рбе Уаі! Ар біу Авп Агуд Тугє АБп о біу біу біп біп сіп 5о0 55 бо 25 біп біп біп Рго пуб біп Тер бі Маі Агу Рго Авр Гец бег Агуд АБр 65 70 75 80 сіп Аку б1у Авп Тбг ув Аза сбіп Уаі1і Сі І1їе Авп Пув Пув С1у Авр 85 90 95

АБп о Нів Авр Іїе АБп Азїа біу Ткр біу Пубв АвБп Іїе Ап сбіу Рго АБр 100 105 110

Зек Нів Пув АБр ТПг Тер Нібз Уаї сіу сіу Бек Уа1і Агку Тгр 115 120 125 «2105 212 «2115 220 «2125 Білок «213» Асукбєровірйоп рівит «4005 212

Меє Гуз біч Тпг Тр Уа1і! Уаі! Тер Аїа ГУу5 Іечп Робе їец Іїе Ге Ше 1 5 10 15

Іїе Ггечшч Аїа пуб Ркго Іеч біу Геч Ппубз Аїа Уаі Аб5п січ Сув Гув Агд 20 25 Зо

Теч біу Авп Авп бек Суб Агуд бек Нібв біу біч Сув Сув бек сб1іу Роіе 35 40 45 60

Сув Рпе Іїе сій Рго сіу Тгр Аїа Іеч сСіу Уаії Сув пуб Агкд Геч Сс1У 5о0 55 бо 65 ТВЕ Ркго Пув Пув бБег Авр Авр бек АБп АБп сіу Пуз АБп Іїе біч Гув 65 70 75 80

Авп о Авп о сіу УМа1і Ніб5 біш Агку І1їе Авр Авр Уаі Рре сії Агку сіу Уаї 85 90 95

Сув бек Тук Тук Ппув сіу Рго бБег І1е Тбйг Аза Авп біу Авр Уаі1і! Рре 100 105 110

АвБр бій Абп бі Меє Тс Аза Аза Ні5 Аку Тпг Гей Рго Роре АБп ТЕГ 115 120 125

Меє Уаї Гуз Уаії січ сіу Меє сіу ТПг Бек УМаії Уаї Уаї їу5з І1е Авп 130 135 140

АБр Агуд пуб Тс Азїа Аза АБр біу Гуз Уаії Меє Гей Ге бБег Агу Аїа 145 150 155 160

Аза Аза сії Бек Геї АБп І1їе АБр біц АвБп Тпг сіу Рго Уаїі біп Сув 165 170 175 сіп їечш ПцЦув Рпе УМаії їеч Авр Ссіу бек С1іу Суб ТіПг Рго Авр Туг С1У 180 185 190

АвБр ТПпг Суб Уа1ї ІГеч Нів Нів біч Суб Суб бек біп АБп Суб Роре Агд 195 200 205 біч Меє Рре бек Авр Пув сіу Роре Сувз Теч Рго Пув 210 215 220

З5 «2105 213 «2115 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «223» Пенетратин «4005 213

Агуд біп Іїе пу5 І1їе Тер Рбе біп Абзп Агуд Агуд Меє Гпуб5 Тегр Гув5 Гуз 1 5 10 15 «2105 214 «2115 13 «212» Білок «213» Вірус імунодефіциту людини типу 1 «4005 214 бі1у Акуд пуб Пуб5 Агуд Агуд біп Агу Агу Агущ Рго Рго біп 1 5 10 60 «2105 215 «2115 18 «212» Білок 65 «213» Штучна послідовність «2205 «223» рус

«4005 215

Теч їеч Іїе Іїе Гей Агу Агу Агу І1е Агсу їуб5 біп Аза Ні5 Аза Ні 1 5 10 15 зек Гуз «2105 216 «2115 27 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «223» Транспортан «4005 216 біу Тер ТБпг Гей Абзп бек Аїа сіу Тук ІТеч ІТеч біу пуб І1їе А5вп Гей 1 5 10 15

Туз Аза Ге Аза Аза Гечш Аза Пув5 Пув5 І1е Іеч 20 25

Зо «2105 217 «2115 27 «212» Білок «213» Штучна послідовність

З5 «220» «223» МРО «4005 217 сі1у Аїа Печ Рпе Те Сіу Рпе Те Сіу Аїа Аїа Ссіу бек Тпг Меє С1Уу 1 5 10 15

Аза Тер Бек біп Рко Гу5з Гу5з їув Акуд пуб Уаї 20 25 «2105 218 «2115 21 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «223» Рер-1 «4005 218

Туз біч ТЕ Тер Тер бій Тс Тер Тер ТБ бід Тер бек біп Рго Пув 1 5 10 15 60

Туз пуб Акуд пуб Уаї 20 65 «2105 219 «2115 18 «212» Білок зов

«213» Штучна послідовність «223» МАР «4005 219

Туз Теч Аїа Геш Ппув Гечш Аїа ІГеч Гуз Аза Теч Ппуз Аза Аза Геч Гув5 1 5 10 15

Теч Аїа «2105 220 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «2205 «223» ВОМЗ3 «4005 Щ 220

Ага Агу Тгср Тгр Агу Агуд Тер Агу Агд 1 5

Зо «2105 221 «2115 25 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

З5 «220» «223» Прямий праймер для Аваїа «4005 221

ЧЕдссдаєсє ссаааадссу ЕсЕса 25 «2105 222 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для Аваїа «4005 щЩ222 бЕсдсеєсасс ддасеЕссддаде 20 «2105 223 «2115 19 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 бо «223» Прямий праймер для 57 «4005 223 чЧчЕдсдсудаде сЄддадаада 19 65 «2105 224 «2115 19 «2125 ДНК зо9

«213» Штучна послідовність «223» Зворотний праймер для 57 «4005 224 аєсддЕсєсдуа дсадааєдс 19 «2105 225 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Прямий праймер для Мо1распіа «4005 225 бсадссасас сддаасеєдад 20 «2105 226 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для Шо1распіа

Зо «4005 226 баасдссадс ссессссдаба 20 «2105 227

З5 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для 57 «4005 ЩД 227 ааддесдаса ссесєсасуес 20 «2105 228 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для 57 «4005 228 ссдєеЕсдєд адддеЕстьева 20 «2105 229 «2115 19 бо «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для ВісКеєєсвзіа 65 «4005 Щ 229 басудссасес сссдсдесса 19

«2105 230 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для ВісКеєсєвіа «4005 230 чаєсдсаасуу бассасасса асад 24 «2105 231 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для Васі11ц5 «4005 231 чадчдсбадасу аадсдассед 20 «2105 232 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» Зворотний праймер для Васі11ц5 «4005 232 рЕсссьсасу деасєддаеьс 20 «2105 233 «2115 17 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для ВиспПппега «4005 233

ЧдЕсддсеЕсає сасаєсс 17 «2105 234 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Зворотний праймер для ВисПпега «4005 234

СЕССЯДЕСєД Є ассаєсьсся 20 60 «2105 235 «2115 390 «2125 ДНК 65 «213» Біборпіїц5 леатаїі5 «4005 235 сасаєдаєда сссдсассаєс дссдеЕЕсссд дсдсдсоясдуа сдвдсдсєдса ЕДдЕДЯДЕдсакс бо адсусдассу судддсааасс дчдаачаасеЕс удсдааасєда дсчдаєдаадс дссддадсаас 120 чаєсадчсча Сдсасудааач саєссадсусєс СассудссусєсеЕ ЄсЧсоддаєдаа саассстає 180 аасддсуддсс адсадсадса дсадсадссу ааасадєеддд аадедсдссс ддаєсєдадс 240 сдсдаєсадс дсддсаасас сааадсдсад дсддааасса асаааагвавадд сдасаассає 300 чаєассаасуд сдддссдуддода сааааасасє аасддсессда асадссаєаа адасгассвє9ду 360 саєдедддсд дсадсуєдсу сєддсеєсад 390 «2105 236 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Прямий праймер для СОоО1А «4005 236 чеаєсваєєс ссуєсвтасуда асасаєддаа Ессе 34 «2105 237 «2115 29 «2125 ДНК

Зо «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для СОо1А «4005 237 ссдсЕсдадс саєсєдасас сеЕсСсесссаа 29 «2105 238 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для Висі дгов5 18Е «4005 238 саєдаєсуєд ЕдсЕєдеЕєаа 21 «2105 239 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для Висі дгов5 988 «4005 239 бо сЕдЕЕссесу адесдаєьсс с 21 «2105 240 «2115 21 65 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205

«223» Прямий праймер для АрЕЕТа 107Е «4005 240 сЕдаєєсдедс сдєдсеЕваєє 21 «2105 241 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Зворотний праймер для АрЕКЕ1Та 2468 «4005 241 басддеєдчеЕсє садсададес с 21 «2105 242 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для бод Е «4005 242 абгадсєдеЕсс адасудсеєєсд 20

Зо «2105 243 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

З5 «2205 «223» Зворотний праймер для 5ойа В «4005 243 аєдеЕсдЕсда ддсдаєвасс 20 «2105 244 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Прямий праймер для 5АСТ144 КОВ «4005 244 чЧчаєЧдеЕєдЧасу басаадесссе 20 «2105 245 «2115 20 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «220» «223» Зворотний праймер для 5АСТ314 ВЕУ «4005 245 чааєсдссвд аєддасадає 20 65

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Спосіб зниження пристосовуваності комахи-переносника патогену людини, при цьому спосіб включає: доставку композиції, яка містить кон'югат, який містить протимікробний пептид і пептид, що проникає у клітини, де протимікробний пептид має щонайменше 90 95 ідентичність послідовності з одним або декількома з наступних: Оу192 (ЗЕО ІЮ МО: 227), ОуУСТЗ (5ЕО ІЮО МО: 228), ОЗ (ЗЕО ІЮО МО: 2259), рІо0 (5ЕО ІЮО МО: 230), Оу!7 (ЗЕБО ІЮ МО: 231) і дермсидину (ЗЕО ІЮ МО: 81), комасі- переноснику, де вказаний пептид має протимікробну активність і де протимікробний пептид націлений на мікроорганізм, резидентний у комасі-переноснику, що приводить до зниження пристосовуваності комахи-переносника порівняно з контрольною комахою-переносником, не обробленою композицією, і пептид, який проникає у клітини, має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 211-218.

2. Спосіб за п. 1, де композицію доставляють у композиції, їстівній для комахи, для поглинання комахою-переносником.

3. Спосіб за п. 1 або 2, де композиція додатково містить щонайменше один агент, вибраний з антибіотика і природного протимікробного засобу.

4. Спосіб за будь-яким із пп. 1-3, де комаха є щонайменше однією із комара, галиці, воші, москіта, іксодового кліща, триатомового клопа, мухи цеце або блохи.

5. Композиція, складена для цілеспрямованої дії на мікроорганізм у комасі-переноснику патогену людини, де композиція містить кон'югат, який містить протимікробний пептид і пептид, який проникає в клітини, де протимікробний пептид має щонайменше 90 95 ідентичність послідовності з одним або декількома з наступних: Оу192 (ЗЕО ІЮ МО: 227), ОуУСТЗ (5ЕО ІЮО МО: 228), ОЗ (ЗЕО ІЮО МО: 2259), р1о (5ЕБЕО ІЮ МО: 230), Оу!7 (ЗЕБЕО ІО МО: 231) і дермсидину (ЗЕО ІЮО МО: 81), де вказаний пептид має протимікробну активність, і пептид, який проникає в клітини, має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 211-218.

6. Композиція за п. 5, де протимікробний пептид присутній у концентрації від приблизно 0,1 нг/г до приблизно 100 мг/г в композиції.

7. Композиція за п. 5 або 6, де протимікробний пептид додатково містить націлювальний домен.

8. Композиція за будь-яким із пп. 5-7, де протимікробний пептид додатково містить щонайменше один агент, вибраний з антибіотика і природного протимікробного засобу.

9. Композиція за п. 8, де антибіотик являє собою щонайменше один, вибраний з окситетрацикліну, рифампіцину, ципрофлоксацину, доксицикліну, ампіциліну, поліміксину В, тиментину і азитроміцину, і природний протимікробний засіб являє собою хітозан. ї Ростннх з Б с-м ї т с

1. Фіг ЛА ї Треінття Янстя й осо КК ММ МК МОН : с о. ПИ КО А п п о. о Кр шХ ОХ о її

Фіг. 18 ДИ т т М тв я ї МикреовкекціВ Е : скани ї . ї ОК: ї дені шо Ж т ка ж ВО в х о: і і ЗО 0 КВ г | я . |і ШЕ: 00 0 ї ВО ХО М В кое : и я теми У

Фіг. 1: сш З ПЕВ не ЕЕ іш м о і о 3 Ох ої о я г шо хо МЕМ В, Покка жа АККААМ КА КАК АЮ АКА ААМ КУКА

Фіг. 10

КОЮ ККУ КК ХХІ КК ККУ ку сх Кккююх ї Перфуза влистя жи З : розвізаняя : ПАК о Я ПОН нн ІБ М РЕ НП о ІП В я ТО о М : ДАЕ ОХ МОХ долі пунк кладок Дойлккнхккчніннні

Фіг. 1Е х Поу почнете та . вере . т ВОСУННУ спор ме ПИ ПТО, і спшнн у и В В їі

О.П хо КК Я КОДИМА ї М ї НО В ї ПДК ОО ТОНКИМ ше, о. ОО ТО КК ОК х х

Фіг. ТЕ і тот : і Тимбінація покра З т аВстя, МЕШеВС ОСрОСЕН ОЇ і ТЕНТ Та ЛОВ ї і через оси нНу ї дод мескуххну хи ке мк км стек

Фіг. 15

: Дек Деньб й Девь ВО дж КІ Черь? . ват ЗК дв) Кі і Девь2 ЯК п 5 і. КНеки, й - і В т КЕ ХЕ З ІРО У лень М р: І п І М с Тк: 3 5 КОХ у: Я КІ од День й з; і В НЕ БЕ - ОЗ Ея Ї МК БО п : З Ку І. ПК 5 шві В я Ню тв пе : Її І 5 ках ЯН : ї хни СВ ше І КЗ Ж Ж - Ти х . ; БЕК ОО ї ОМ Не Ж ї Ж Ох ЩО У ХХ 5 ЕХ 2 НЕ 1 п. ПВ Не Не не Б. : І: Б ЕЕ Я КО «КЕ ж Ек г ЕЕ З ЯКУ Я 1 В Не НЕ НК ї г х ТБ па Є ЗЕ 3 15 Мо х Ж Як Її М КУ в ї Ж ЕІ В й 50: Ех ІК ши Ох ЕЖ НЕ і ЕЕ М. ї ї Ех ЩІ су я ї У ж 155 КЕ ГО ДАВ Я є 5 і Вод ! | : Як ПА ек з Ук в ще ІЩЕ ! ЕХ Є У ов я З го 5 Що : х 1 З 5 ЩЕ В я їй А Баш -ї «о Мн їх ї ; щкЕ З -яи Щи. су аж - Хе Я з хі й ! Де ї я Фах Кох : У 7 - бе т й х ве 41 с АЖ. т аж Ах КО Же ах А се еВ : ! Хо ОК ко - - КО. ; й сх ї- ох Ох з з з Бе Ж: сою ди У от ж КЕ хх ха Ходи чо хх те АВ х АХ я з ож ке с З У тш к Фе и З У «У що ' ткетех 13 ско Ух Я у Ух те ень |: щи ще и ст у А с-ще А х т ІЗ - - с ж Лень 11 МЕ зе й ж демії Кк Е І Зиеці З е її ЕНьСУ У Ех В с - -- жу ЕЕ КЕ ет День З сх її : ї хх д трек в гі с з о НК КЕ БЕ ЩЕ в З ж : КК їх КО. Е Мод КЕ Же ех КЗ ї Бе ї Ох Ж Ех БІ ще 5 : ск ях 13 од х ОККО КТ ї й ЗещЯ ї ж Кт МОУ до : Ж З 3 МКК ІК сх Е 15 НЬ З ПО І ЕХ я шо Бк з : ТОТЕ че т Ж «5 З ОКХ Ох у КОоМХЕ их іх х Б ях КЕ що 5 Ж І г В, Б В 5 І І ох З Я ще г В КУ і Кк І. із у В ЩО а їх БО и а» чи Ж ща в Я ж же РЕ МВА шо Кв 16 а в ЗК ий шишки т 5 Же в ПЕ ЕВ. ЕІ дае; ее ий се ІК я і ї БУК Ж з кож те шк шток Ой дк ЕЕ З | СЕ а о ще У шк ек шо що - ї х і ОККО Ак ех ах ще Я ге : СЯ : . як ; че с а є а «х хе ох ех «я «я

ЕВ. ША бої яд ой т і. оо ек Же ях ХЕ я хх о сом єм «ле - ге ше «ож ду чо х х ХК ех ФО А Оу я - Кі в че т ах Ж -- " ші «Є 7 - ет Фіг. 2А ххх й апев іт ївя КЕ ЕК ке Ї ЗіБ ді що пом Не т ПАК ОК НМ, шо с ОМ КЕ с н с ЕЕ щ о СЯ со ооооссссСОС ЕКОН ОМІЕНН а с с Ви ох п ОК о с с ПО ПЕК, СВО Ам ЕК с с с ШКО с КО ЕЕ ОК КЕ с с ПОВ, ОХ ОО п ПЕКИ п с с ЕВ о Ко КОКО с ооо. У о КЕН о п ОО о по о ЕВ ОКХ У 5 ВЕНА ОО КАК КО КК с КК МОХ ОККО ЖИДО с МЕ ЕОМ ЗО МОХ МОХ БО Ж с ни ОО ЗО о. с ЕВ ОО 3. с ПЕК С ОО п с п Ве с с с с с с. У у с с с с ш- с ЕК ни ОО ВИ ШЕ ЗБ МЕККО с вт. с с ОО в-во пе ПИ ли КК ПЕК: КМИН пек Ве п ТЕКСМНИКИ З Кон КО Е ОКХ ИККМИКИКЯ МОМ УМИМ с . п КК. ЕЕ А А АСК ЕА КК кпоиок, о Ве ПКЕЕ с Б ЕК ОМ ПЕК г ПИЛОМ сс ПК о ПЕ. с ОКХ МКК МИХ МК, ПЕВ ОХ КН ОО ши с НВ КМУ В,

0. КЕ ПО і. о. пе о.

5. х пон с с с с с ПК о о с с с ПИМЯ По По ше -ш пово п пи Е: не т ПО

Фіг. 28

З Ж ЕМ ж що: й Те. : І В є як 5005 ай ще т "й ух Моя нки ее ке ще ке

Фіг. 20 1 00 Ї Ї | шк Тільки АВ (29) що рення сш. АРТЮР 75 к. ї- а Зах зах МЕМ | І ж. до й КІ СЯ ї роаюеяофня ОЙ АРНВЧЕААЦІТ) Ж ! Є : феееарени "- Е о | Ще з, і о. . Шен дж 2 4 6 8 10 12 День

Фіг. З

Плелючість ще ще 4 мах тлу сррожвев Я . - тс, | се ще З | в е ЕЕ 6 | з з " щ і - Фе ох 4 | В 8 т т що вас од ек ; Ї Й ОО ж ке аа ак чу же се В «Е - КУ о и і хе а «і : -

Фіг. 4

7 днів 801 х / в 501 ща Г . . 83401.

204. - ку я Я хх хх

Фіг. 5 очі Дснв о Це ерея. День Девь | Девь2 рознніку: 00 т 10 ж -х «ов кої хі ЦКУ жи г» ї р 5 . ЩЕ НН т вд! а ШІ х що Тв шо до. Є вн НН Б - НН Ор з я щої г - і і - ва: БЕН ЩЕ С я їх 1 шо: з а | | НИ зх ЩЕ Аа де . Ї ши т Що о тата пен вий ев Ж ее ка ех -е ще се І ке А де 5? - їх й ще «що ди ЩЕ я я й з що я шк як а « Же ко ЕЙ В ою Я У щк я че ех я - в ще я я У як се Я лень З Чень я ц ц з Ясень Я вАЕаль В ЕС в 1035 ооо вия 7 З ие ; о І 1090 | Б Б З па - со З р я ж с щ о о. ММК ш ОКО БВ Кі ожач БО 5 БО . НИ КЕ ОБОВ Її ї ЕЕ Ел р. пз М щи - КОЖ ЯМ ННІ в СЕК 0 МК т ! шо о. З ВО. о НЕ 5 Бі ши ші ОО НК | - В о о м ПЕРО БИ с ї ОБ дк І КО де. о 1 т її. Х - гу «У ; Н Сашу ше Ко -Е я пе я ж Ї Ко щих х с ща в са ка ви оз У щ ще хе я як Ж а оо Но Йой :: 8 шк

Фіг. бА

День й

Я. рем во кох зі. ш | а зоря 0,2 аг с ще ни «я

Фіг. Б Е | А х | А х -2 | ше Контрольнни зИжеї 1-77 -йнн 30 мкг/мл рифампіцину о 1 2 З 4 5 б День

Фіг. 7

День б шу ре а303 В 1505 Е 100- 8000: ро о ; -50-- 5 - - т - - Ж - -- ях є ши Я й У фіг. 8

Ж ке з ж ОК Мак Х а

Е . З : 2 ох ке ї ї 0 ке З Ф не секс чне сн г «А и сяк ЗХ ее шх Я в з кю КУ - ке я щу в ей ШЕ - -ї Б - де Й ди ж 0 ат ау оо ях де се Я щі ОК

Фіг. З

День 3, спрей для міспевого застосування я р-0093 « 1005 д І но 80 ;. е БО60100- 85 401 -й- 5-8 204 це ща КИ т- шо ку «Я ЩЕ «

Фіг. 10

Девеб Вежа денці Перша дове Нерізі розвити х . роЖаНТКУ; . ! розви у МО: ше ся Й; дення о жоохев я Я. : ори і ШО | ЗЕ ї ЩО БО За КО Бані о рокее В зв КО с: ко. БО т коді МО т В ж 8 б колб ВЗ : і сх і в ; МК ря сен ВИННИК. ВІ Ді дея пня Бо Дія ВВЕ. З ; : Ж то мк ная ЕВ ща тн Ж Вежа Гифампівня о" Жука щян Мода о Бебнмющне ДевеЗ Нешез День ера день! Неріва се вену с розЕНтк : розвитку ОВУ дення к нк пт ще ШЕ ШИ жо ТО БОМ 55 : жов г 5 М ВОМУ БУ ща Енн 6 ЕВ аю: вві о 0 ВЗ щі Я БО ВЗ ба Б аз ОБ о о. що ОО ЕБООУ їх що що що «- ММ шо е- Я Ко вн. В Назв. Кефамтцнх я МБазв о Кафе ій Коза 0 Бефажмеізвих щ Ден Я печах І і укунНиКу ші ш ШЕ шо ТБ ВІ еееея ви Е МО КО І зе кож ве З ж же ИЙ о - ше 0 Ехаво гефамтниж ш:

Фіг. 11 х -- 754 нн. ж ш 5 З ; в х ! фон всяк км я жах Ши фе Бодла СЯ) я - рев фен. 0 Є яко 50 мкм рифамнічнну день

Фіг. 12

ТЕ ех День 5 4 : до су КЕ ї ч-х КЕ Е я : : і що й ' хсеї ху і х Мей до З ї я з ЕХ боях з ща 7 - є і ї те і і що ! зв! шк т : З Не зок В схо ЧЕ | х як зма Я їх хе У кт ж : ще Ах «і Леше ї Мт Пов МещяЗ Денне? Перікл ВАН ХХ - КВК . МЖК хх іде ПОЛЕШЕКК 105 . ралвктву: 1 зезмнтву: М стос: 0 ХО Не зх се хода . с ЗК 0 вовувюх созедоювоки но ши 05 п в К 00 в хи ше шо КН ШО ех ш ЩІ ВЕН Но прж ро ї х м щ- ї ВН: ння ак Вона ДО як Ж кі з ЧІ І Я х ке МК К- І зв г : І : сот ія : М зді В ав ! : ВЗ ще З як І ї Я: щоб З Я о хо що й : КЕ: |: : З ; Ж ? ж пі Жов: пі. ож ов ЯК 7 Ж МЕ 7 з сх Й ї хх З в а де ЕК як ях се їх З а я я й - й я Я че язові «Е як 5 вка Дені Певіши денс Мерія Деве? ЕЕ АТМ У хх - є - що 7 ДБАВ ККУ пд ! ДККМЕКИ - роз ЗУ панавях век до Ви жу си м ни тех Ве ся де м ом пе Ж с оч я КА пок МН КУ т Коші ВЕ Я т ощ КмиР НАХ х посту 0 ВОБООЯ т дян ще Ше Па БЕ Я 0 вк Б З ща з. ; . ш : КО ККУ п кошт ОХ Б ! ваз я КО з ча: БВБЕ Б з Вау м НА ВА БК я Я МК КОНЯ МОХ ОМ | ко ЩО ОБ З "Р ВО ВОМ з сі ОО 20 ЗОН НН Я І ВН Я Й « де М ча ч з в з Є З я ще я ї В я їх Е я Я ру ще КЗ ще Ко Мермод де «й День Я розвитку: х -ЗЖЖЯ рлпвиооь веб - НЯ ропвиоці рве -ог ТУ ПЛИТИ КМУ: Шо як Б КО ща ше о шо Ти КИТИ нн шко с ще я яке С «а де «ріг. 14 за. Вода (50) -- РиФфамищин (9 Фени !

25. 01234567 8 День

Фіг. 15 я пре шк 2 День й ЩОБ и щі ск щ- й роя сне вк . ж ЕЕ 100. шо Еш . С а ЕЕ Б : 7 в . тез о ї уклали От Ах : ШУ ШЕ коре - 0 м еднкнюоконн В снмквомньі «ІНІЙ ВК техно КК ак о « «В - я с ки «й

Фіг. 16А День б 8 180154 дя | Мети що аж Кт М З ! й щ- В щи 100 7 знехрноя М шо ' ; - в в і 8903 ох я ямок 5 с Й во сне Гн х Кк є ох «й

Фіг. 16Е

Денье Неріюв Деві Пера динь: Метод су ТОНН ТКУ - розаютку: з пеКяМтиХ ке ос ЗО: денне З ; дж ЖЖ рн ; св ! шк що Шк вав Зк кі й ше сії ї Є ки! : шо | ! ; Я вд - ! х х щи 8 5 | ! Е ща щоЖН ! ! Ще : т | тра і ! | ЕЕ пі М їм ШЕ Я й й к ді й я о і й - 4 А Ку , ся с БУ с и х е Ж Е Ка 3 ях У ЯК дю ко кВ кл ст а ех дих « як Ще Я 7 о Є гаї є Левк 5 Пер Деяке Певіом Дно? Нотоз Що раВатку: : фазнніку; до КНЕУ г слоллтнння й Я Чо ви шок 1 оомроявея пеки ме кі ши ш ШЕ; ш ш ше; оп -к 0 й еді Б 0 Мов шок я ожщо БОШ ре якос тво БЕК М зх ков о бе ен 055 шо шо. ОВ ; Шоошщі Бони т ук Шон Бл Бо й

5. ВО ше це 8 я Ме 5 ох щ- Е І ср Ж Бош РОС Кк: В Ох шк ща дк що Що. | Ще ш Фі ровенв і ща вщоФ- З І ! Е. рон : йо ЩЕ жа 8 с-м ЩО донні ВЕ піс - 3 ОО К и: . з й: 2 - й: -х вх 3 ЩА и вч б я КУ Же КО Ех де УНК ще «ОХ я Ме Ж ДК АХ хх я ху ле є М ди ї хх щи з Б Ж хе З я ще Б з їй кож Б т, ч- с

Фіг. 17 Ор Ех ее пумуки Ж. сна ЖК ше нак де я 1 | тів Контрольний ихеє С-77 176 «ве Рифампіцин (50) 3 Е ї ника нини Е - шк З Х Ї ; хода 254 і; Попппппрплпплвволвваллливодаараанцадаці ше а 7 Укоажв День

Фіг. 18

Аеньб 82004... С - З шт З 4 3 з 1503 ща З я | т. в - о и | Ф - я " й «а

Фіг. 19 фен г дикою Х ехх КУ ско Ж Химикиххх Х мех ююм Жих Я Я фе мити соди мкких МеЕен МЕ ТИ пкт ККУ ВІН пеки ПИШИ КИТИ схо Кен пиши, ПЕЛЕ пит ПЕ МКТЕНК ПИТ оккккюю щи ТИ ЕНН т ПОЖЕОт п ПОДИОКО и тт СКК Е пов п ШЕ по З тож, я п пиши «ЕК о по ше пЦдЕедея я КК УНН ТЕ ПЛ Є п. УМ МОВ ЕТ й Ов СЕ СПК ПО ри КЕ Повне м. Дос кош тииЙ тих : ще пейоКНя Мт с КЕ ш- ПІПЕЕШя ПОПИТІ 5 х Скла ТЕ ПШиОВ ПЕК я Сх жна, ЕВ ПлІХ В МИ ПІДЕ поети х

3. с нь п ню пло во ПИ т ож и ех шо ПЕ ПОЛІС, ПТ Кошеня ГБО ПЕН с с Б. ее пет й ОНЕНВ о х МПИМУМлИх ще КК ЕНН Пен КО З хх Є ОХ ЗХ ЕОЕОВЕТОВтВ що пек СКИТ ПИЛИ ДН ПДК Е ПЕКИ Мн Кора ПК ВО с Ноя 5. я о ди ВЕ З НИ тт шо т ПЕК ЗО п я я ПТК ПИЛКИ и КЕНЕ ТК Ши З ж ПО ПОЕТОЮ с. З ПМК пак ШЛЕ с с ПОТ ПЕ ПЕ Б БО ШІ ПЕК ХК ПЛШИд ПЕНЯ ОКХ СОУ ОКО АК З 5 МИЛИ ЛИП, ТИЛ ї СИНЯ З КН По ПАК т о о У с Зх ПК оВМ ЩЕ ПИТ Жх І СЕЗ ФоиитЕ ЕН МИ КК ВХ МОУ с хх М дОСТК НИ пиши ОО ДК ДЕ ПІНКИ ПЕК що 5 с ОК З ОО я ПК ПІДОАОВИЯ Па з ПЕВ ПОВ ПИ ОВ ОК с ше КЕКИИКНИТ пох " шо : ОН МІ ОО сх Кн УК УКВ с МОВНЕ ПИ СЕЕЕНКТ пиМТ их ПЕ ДЕК ОБ ПОПОВ З ОО МАХ Кох с о КО п хх ТЕ и п ПИШЕ ро иа з о ел м С ЗВУКУ з хх ХО З ХО хх КВ У Пи росу ДК пл СЕ ПЕ ЗО ПНЯ ж 00 ДОН ПИВ т 0. с с ПЕН шу ЩО: с ОО Зх с ОН 0. ох Ми КОДИ МД Сх ОО о КК с ЗО МЕН шт дЕЕЖяи АЕН Ко пе с с с М. ВВ по фо ОО ОСС ЗУ о. хе с ОК ПИ ПЕ Ка ШИК МИ КОКО Є с МКК Ох ПИ ТКНЯ МОМ ОО ЗО ях с пил се с п о. ВІ ше М ще с ї СА о ї КН Се КУМ КО ХК 5 З Кох СО ПО ПЕВ : с рон ПНО с и М о с т Ежен : с ШИХ СО ЗХ ПУ КИ ПЕ ПОЕВОЯ и НК МКК ще ОНКиК ОО ПІНИ КК ПОВЕ шен о ОКА о т, ПКЕЕ Пе МТК і ПОКЕЯ Пил КЕЖХКЖКСЯ Дн с З 0. п ТЕН повно ПВ УКОЯ пи ПИ о с с ПИ о М ЕИОННЕН СИ о. З СКЕВ Ето М : с В 0. пе м по ЕН се пи по ВЕ с КЕ с ОК о У ДЕ п с с Ех, пи 0 ій ПО ДИ ПК МУ с Те ж КК КК с -х ПОН ит Б ПАМ ПЕ КН КУ не О КА ККУ щ М КК ПК хі нн ООФЕКЕВННН ПУНШ ВНМи ОККО, ПН ПОВ. 5 ЕК ТЕ МК ПАК ПОШИ В Сх МАЕ ХХ ООН ОО, с ООКИИ ПЕМАШНИНЯ ПЕТ, Мен с ОО и МОХ ПИ МКХ КУ КОН с ПОЕКЕВЯ то ММА ОХ МНК КА УКХ М МИХ З пе ПИ Пен Пе ПАНИ СЕК ЕЕ Кт т ЖИМУ ЗККАикя ЛК ОККУНИ їх ОКУ СУЯ ХА Ке ХХ КК ХК М М АЕН КЗ о М КЕ ПеКНОНО ще С се АНКК ОХ ІЕЕ МН МО ОККО КК ОО ех ІОВ Ми ЕХ ХУ М о ПН ТК Ко хх ХВ ОКХ НОМУ КК ОНя КЕКВ хе КК КО КК о КО с ОО, ОХ Ох о. с с КК КО ЗК КО ОО СО У с Б ОО ОК, КК ОО о КО оо 53 ТО оо оо ПМ М ПО ОО ОМ КОо Ко хх Ох ЕК ДОМЕН ХХХ с З с ЗК КВУ ооо ОО У СК Ох ХХ с КК Ка З Кн У У ККИХ КК КО с с У КОКО, ЕТ 5 Я а КЕ ОК ОО с БУК МК ПАХ ок ХВ ОО ж СО ОН МОЖУ ОКХ У КН я с ДОКИ Зх Мо дО ОО КЕН КИ КОЖ а с що КОКО ооо о Зо ОО щщ ЗК ВК КЕ ЗХ оо Б ПЕК ОК КО КИ У ОХ о ОК ОО ОКО о ЗОВ с Ох ще о ОО МК М КЕ АК ОНКО. ЗЕХЕ КК ХО по и о ХО З КОХ о до Зх ОО ХХ КОКО ОН КУ МО З ОО ХК Мо а ХО Хе: З З Сех о с З ОК ПО КОМ КК ВОООК о ОО Я ПОКЯ ЗК ЕКККАо я КОС З ОАЕ ОВ я с ОО СО ОО ОХ Ох п ОО о» ОО що с ОО КЕН о. що ве ще МО о КОХ е х СХ х МКУ ПОМОМ БЕ ОХ СЕ ХЕ зм Х ПК г с с с г Ж о ОХ ен В се па МО У МЕ х а КК ОО З М ОК ЕМ ОО еВ КО ОКОУ ЕОМ У ОК Х а ОО КК х ек ОО А ОХ НЯ МОЯ С ЗХ о ОК КК ОКХ Х де ко ПАХ Ох ха щ о МУ М ПОВ й КК ПАК КУМ ММ хх ле Хорохюкюкх о о с о ОКО ОО о двох Й ех У ТУ МО хх ОК З Те хо де моукннкююко ОВ ТоСКОУ СО КОХ дове й КВ няття о о. с о о. кох я В о. З у ФІхиогк ук пЖеКя ОО не КИ М З : сих МУКУ м УХ ММ -Х ско х ОСІВ ОО де НО ижУХхюю МАМ ХХ Сх хх УОЖХ : сооюкее КК ЕХ МК Ох світ ОА о ще сооюкютоюо ЕККМИ НЕ У УЖ ХМКюхх ж х З саККюкх КИМ . скМххх їх

Фіг. 20 зосооюнян

День 0 Певоз Денві ризнитЕу: то і ях к : онко ї005 о. звненоннн, ШИ п 8 я 5. Бо 4 8 Б. ЩЕ З шах ШИ Фе ях о и ще ще Девь 7 Період День В ІБУНВ ЖЖ: н чов- шен фея я 1001 р: за Кеш . ! НЕ п ! ЕН 5 Ж з Бене зи я еВ же п о тік її о І В шо НЕ шо 8 о БЕ Б ди Б ЩІ ка е 80 о НЕ ен ВА І тав ЩО) ЩЕ З Б | ЩО ШО 0 ШІ 12 ШАНИ Доеннннновмсстецресс еонососовененеседесснонік ж Ден КК зееоеееех 1 -« ке «КЕ « с де (фіг. 21 У я ! я жах вутажевх сек щ з м г0- ше : й 2 5 5 «фе Хітозан День

Фіг. 22 ень в Се У ! | о, я 1504 | 57,4 175 зЗ'жш не ї ! " Її щ я ох В Ї дО 04 зн ще і я «їй ї ші о дух те

Фіг. 23

День Мерія Девю! Пегржоя День З Перюд УНЕМЖ їКЖ . ризвнуку ї тезвНк Я ення рн ннндннниня ЗВУ дної питне Я доня рнсяю «КииниМ. ЩЕ | о ще Еш ИН: ОО і Що : Кк ви х ї т: в . ТЕ Ої ) ко . А саж заго к - Б й до" ! й а ОО 85 Фі що ще й шоку В ЖЕІ Е ВН 54 5 Во | Ба 5 ОВНОе Ба В гр В, ! а Гея Ко у 3 шо Ма 35 ЩЕ ще ОВО о З З пк й я о т а в З м а Й по 8 НЕ п де З і т г ду г ; " й 4 з ав и з ав се в а Ж ЖЕ є я ОД ШЕ Ко З с У с ях Ши Со дат х шах Я ЯК ЗА пи хх Є КК й ОО я ох ву С й ші КМ кт а Ж х Фо Бе АТ АХ ЖИ що Лецьб Певіоз Лек Первоз День В Пера пезжжу " розБнуку ремНРИКЮ ЗМК яке шов во 300 шен ще пече ЗО же лу СВ щі. й ШЕ Я ЩЕея а Тяе а ОО ще що сни щ- я кх САУ - ш ВІ ВВР 5 я х ТО БО НН х Ще м ВН НЕ 5 - ОО Ж Є ж им ОаААК ОЗ т р ЕК ЛЕК щ- Ж Ж ва Б З - З Б 8 І Б НН Б 5. 0056 5 ВІ БО Я хш0Я В Ор не щі С А МН с а се се Ох р М Ж МО т и КОХ Кк пп - УК Б Е Ж: З Ж КВІВЕ пжжкжк М п З І фВІ БА ЕМ дві Б СВ Ох о й Зі ЗЕ ОВ В їй - їж С шоп мок МУ Я те ОКУ ст ее лннх :ОММУ от їв З ж хх щ ВХ що їі а с те ми По п ЩЕ ОМ 5 п х ща ва м ШЕ ві І 5 Б ї ОО Б ов 7 щі СЕКС че чення СИ се паж нетнереєтяеенея КО ЕМКВИ МКМ пане теє ев А тав я ета А и Се х ще А к че й м Ж ще т У Оу Я Ж о ою ке Се я я шу жа шу Ж шах УМ в Я ху Я АК ЕЕ КАТ Фе з х КЗ яки « ще ' У ут

Фіг. 24 Е г г. 5 г- БВиживаність ше | Коцтроль з водою (56 75 : : ; С деечйкеси ух вчу ЕД НЯ ши ; «вк Зб мг/мл нізину (59) Но ЩЕ ! ї «жк ї З х - -фк І МЕ МИ НІЗИНУ ІФ Зі як ну Зм Я З ї й - 7 м | і ; т с зАСНЬ ріг. 55 ка Чень 5 й 4242 ккд 2; і об : ш- 0 : Кк с й е с ща та » і ї ме 2 ї нт жре Х ме хх з м 8 27 ї х й 7 Зм. і х 2 -й : с т Ї жі г з : є шо а " - | а Ка щ шк : і що са а 3 3 вн Кт й Я ще З Я лі ре «З с ще : ку т | ой Я - ЕЕ Сея ' і сан ваю і ня я т яче що ще ду кКх ве сх хо ще Й У де мб в СО - пе їжі Зрник ї Перюа р Чан ПойнУх Дене Пеант Зень і Певно; " пф ча ве розякуи КАДЖНВ Х Кук 7 Ух з об ж: З з що х с дже УК МЕНІ КУ, ї : еняку: ТА г рр рони МВ ве век Ре ро той Р Я 5 ЗО г ГО юешнявух ср р по: 11: де МУ; Р І хх т К.І 7 «і (НКУ 5 ІІ 1: х- шо її жа що о -к ТБ пане з ща хх 11 Рі з я 1 ж поле шк ші ща Яви 11 Ж І я Е ве Вк ! Б та 3 бі! що яз в Б Зк об со ЧЕ р х м щі ВБФ те ї З ? Тл В а -х що - БЕ с о ЖЕ Я... ; дк с САН ОМ Е ом - се п хх й . її хв. ! -е ко се щ- со ж: щої Ж КІ . ще А се п ІЗ гос я х Б жі ме к пе Я х Кс Я я ЕЕ Ох я я МК де шк я ЕК 2 ж 2 З о ще ЖК ИН: чо ши Н: С Є ооо од ох ЦЯ Ко ще КЕ ЗХ А о ст КК «КВ х У Фе У ОКО ил Од о щх ЗНЗ -.Х т я а ки є є ех а я К я я су я ех КУ ди Ж кл с мк ще . -й г тан Де щі ЕК Нещад у 7 тещу Беріз У А х ЩО я Х п м У Цемь ї МОХ АЛЕЯ Що - сій З Зіна МЕМ Є свлдет пвх Я Я дева ерюх Я Ой дев Тв ЗО Без мое в РОзННІЖУ: Ск рос; ку Дотт речаннтку - Ж жожа ди лк ЗНІКу: Р БО Б УЗ зді БМ Б КА сук ТОК шщ ВЕУ В позннтку: КОХ» ре до ко. рехантху я вх ОСНО по НИ ТИ Я 7 тах М ЖИ КО щЕ ОЕМ БЮ БУ КА ще З мо МИ ОК КЕ ща ді В х шк з ЖИ Хе. ТАК ще ж ні КОЖ БАНЯ ух 4 яд ВОК ВЕ ке ї т Ж их з СЕ Х ВТ я ОВ пк ОЕ з Е : ХУ я ї Зіждді БА З ЩІ дО КО ГУБУ ща Є ад! МОХ КО З щ З шов : : Я па БО з ч ові БОМ ЩО Я ЕХ ЩОБ: БИ 5 я шої ї ї о ! ЩІ Мпаі вом 171 й км: КО ОВ МБ вда 5 БР ї : їх які Б і З р ом» щі ще ЕЕ БО я ям М БОБ осв Во ЩО ше х ж ДЕК : її Ка ж х 3 1 жк. ШЕ дюни ї 8 ті Н ; Її ї МЕЖ ох Мо а ШО Я . й Шни щк бу ек Жак ЩЕ 4 що Ж шок ЕК, їх з Тк . ХК ях Бу ь зе ї-- ЩЕ Ко ще У що ці «Е Я ди - ш я ОН їй ох ; еВ ДІ Ж Ж Б У Ко ай ших т Ой яко СН ШУ ще З од дод Як я Хо «М. що ож ою МК лу я ШЕ до ке КИ (ЖОМУ В и ЖЕ о М ще мох я ШО де ох тА я я - я г сах б кл т я щи В ї тю Пгоюя х «о як ко: Певкії ї - є Дежуій Нежмод в? узи тя ше МО; ху Бор ов разВНІКу; ІК в КУ БО рев Кк: сві М БОМ Кох е р Ба в к ОГО штхЮ Б БД хх ророкя З КА ща С | ММ БО З ре з ТК ОБИЕНЯ КУ ж З ож ЕШЯ КХМ В Сл 5 Щі Я ще в в ОБОРОНІ Ех 2 ВОМ КО ї щ 5-5 5. КО 55 п і я з Б мо ТОВ щі ж 2 ОО в КЕ МкО ОВК Зіка М ЖИ. Се о В КУМ в: з ек ші КК «В З ще Кешеся І Як І ХУ ех Щб о Ж й ще шк шк лю ОК. дк - «обо она Кх СО с ск «Е дк и ще Б я в я ОКО їж е ка ЗК я х

Фіг. 27

. 3 і коор ОЇ р-н шЕ хи й пр їх З ф-ня 50000 0 Контрозь 5 фія " о 25 фетр жж я. 0.0355 ледвулінова кислота : джнннючю» Я лін Й левунінова кислота День

Фіг. 28 Лень? День 2 Во з ВО;

З . Ех ; ХВ ' В дя тн 550 - Вк 60 ЕБ5 Б що мож ї е ща се ке ат дБ нер Й ш роя , дя КЕ ї Ж Б Е К 5 | гине с З 0 нан аж 50 й б за Я Ж 0000 ; шк ся г г ш а КУ г з де - зе х й с В «й а й я «е я Ей «о я У У св ех и - ше се Фе Як ке і м Я У й « т 8 о я -- У ях а - Я» ще ах Я Сй У Ес У що «о яко ж ке Ф у мк не су У У Ма с

Фіг. 29

День Мерів День З Період разнитку; й ризаукуХ

190. і Її ще чО8. "Ж: ЩО НН ЕЖ ; ща І швв ЛК с вв ШИ що ШИ І Шк Що я БО | аа НІ ща ше ЩЕ З Я ЩЕ З / 02 1 02 й Я --Я ш а нини мий ші се я Ко що і м Ф - - и Ї ооо ОМ бе «У День Я МПЧерюод цень З Період й рН Ку: розвитку ; 1005 ня я нт Що 4004 ше я тт: хо БМ Що в 5 З 50 ЩІ я ОБО 84 254 ЩІ 1 ЩІ З 25 І ЩІ З Ем і 1 Оп о НІ 1 02 : : ха їх З ле ее 000 З У ще м се і ее . З «У Кк я М '. З

Ж . лк Со р

Фіг. ЗО 95 госиполу Контроль 0,05 025 0 Ще ! ! | І ; - 04 7 | | | жк чех ! і ! чере ї я ооо341- НН ТТ х День після оброски

Фіг. ОБ и 7 я АЮ без ЕАА (87) єв і ! їх 75 ! як Об госиполе 0)

ж. с. і ; вл, скол хх 50 Є--К-7З те ПУ» госиноне СЮ 2 пе Яся ко ОДО555 госаполуУ (30 к В. 1 яю, День

Фіг. 31 доз що : сеавеню вин ання що Й

Во . ВО ш сі 0 т й с С щі ов У ай «У ек де ее Є я

Фіг. З32А

Ко щ ОВО 40. ЕВ В » шо ся ік ва 5 ско є вх ж дк о Бе ух з кох з ку я з ож ск ее ех а ем ка т - щи и - У

Фіг. 328 Зв госиполу мимо Кавтроль дах 0 п Гак о 5 ОО шо й ж дих ! Ех зо ! з Ех -- Ж Гак я : Девь жісня обробки

Фіг. 3

8 255 На ал У Мо ї шо що: Ба змо ра Ї Я - сі ; 0 ; - 2 ! С Мей о ев ! ВЕ і ! Мох г Гак яй й ; ке ще Я ні ЩО « що ! те 5 ; ака и: ї «ШК ви. ппопееевеееен пет зл МИ : КЗ м с т ще ще КУ ; и - й с -к се я ж ких са 0 «а ї

Фіг. 34 День пПерох ДеМьі Перше ДЕЧЬ? о Церіод День 4 Перро зви роазянку: де дж Ху; зва ВезвиТиу.: д гозБИтке НЮе ероту Нв Ме вач ши ВЗ, сві ож ; м хв ж і и ші щ -. РО - в РР ж З ЩА зош ЩА ак Ще ВВ Ва лі дО ЩЕ пе ЯН я РР ТІ г щі І: ЕД ші щ Ка ТІ я ШТ. : З ; : ж пе Ж і . ге зе | я я є і | ще Шщ до Ї пе ок В є р і от сс В Шо ши конк МК от кода КМ ся се ФК от сх чу «а М ЗИ дм ма кош огиди в у ож жу ще - я де Ж : ге т Ж т с-ще є Фе ее «- пт ха хх в ще

Фіг. 35 ЗА

575 о ок Вода БОЇ я 254 | - 0,059 ТС ла -» 05 ТС Д денне р ЗВО ТО день

Фіг. 36 День З й ж т й 300 . во зп 8, 00 т 1003 Мотя щ й ОО та в'Я -100 Гн Б Фе яв ок ж Фо «

Фіг. 47

Пен З Пере чек Періс Чен Перд лені . ЯМ ЕК - розБНткх: щи резчажку: 7 во Я: 0 дннсннннннщ рес Як НУ рем фмеогоготу м Я одн деле скосу і і : В в і ! і т БК і ! Е БА я ще СИН що з ТВО Я я В і - В ! --о г Ео і Ї сту во Кк Жов | кА шо Ва: ка ре: : а хх ї ї х : . Жов В Ян Ов що Кз е- ще щ Ф- | ца ж ве що ооо щі ФУ шо 2 й я ей ке сг ки КЗ в яке о ов свой мні Тер деше З ЕБчнах ДЗепьй Терівз Чеккї Меріл їое ше вивих в Кн й пев БО ов то) ЩЕВЕ НЯ рок и вне - т: ї і ї ск ява Ко Ти ї я ЗЕа ри т 5 не ше ш ой ж п В бою жо Е ЕЕ ї х сх 001 й се : кх М 1 ї ЗЕ стю. Я : : Рая дове ва ІЕЕ Гея ОКО ро . . І де ї щей м 1 НЯНИ ИН щ : соки ВУ с жі З я БІ що Зав ЕС що ОТ ! т що ВИ ОНА не ОМ ВВЕ НОВ гія я де що Я ов ї ї Я ! є НЕ ОНКО ще и ств уник вк. рю Кк ежжжня. сік ді і я Е.В! є - Як й Й А ЕВ - шк я ХЕ а хе Яд ях я хв жень ї Твоя НЄ тееанеку Ж сих кювькик виш вш и шко овал БИ фев а З ща і КЕ. а : у Я ї г І з в ЕВ . іш к З х ях М Кя Е У с жи

Фіг. 38 тя : цк ох Як як ЩЕ стяжок, щк х в : їх їх фрохехекхектхх ера СО х 50 фета в Воло щ і : Я : За ях Е ще її

Ж. ях " теж сег

25. бе жа 190 т РЕ День

МДМень 8 ТЕ ЕВ тт . 5 | 4 їз Б ра | нен айфоне Е В 50- шн Е

Фіг. 40 І: с- фігня 83 І в ! І : Ї а. вола Со ! мк ії Вола 20) і

Ото. : 5 а як 0300) КЕ до Ж чає 021020) й 0 12345 день

Фіг. 41

День З г 801 - і і снрнн й ії 401 7, | ди о з ; Б ті | 5 те і З «о - «В : є

Фіг. 42 5 15. рен і і 254 Єскераих ях й . . По, Суміш певртидів (49) День

Фіг. 43

День Певівд Дені Церіов Девь2 Перівх 48 Що Ве втю ще укатвретху: їж їкюкнтку: н - - зкрвевєоья Ще У дети плоеюее ЗНУ рим у с щі | во ов ще вк ! о Зв | і є «ОЕІ Боно Бод с ж ЩЕ | З х п ! | : 5 кої г о ЩЕ п ї З с що 5 ї ! ох шо БО ЗКУ ок ве 5 щої шин 1 : ї : " 5 ЕЕ: : я | Й Е і і г хх А ї | ї3Зя 2 : ! г тб 1 М ово ще Оз 1 і ! я Щ І ! іх 7 : ; з | Н а КЕ і МЕ щі з ЖЖ ве 1 і о - щ " і У їх Е 1 се Я ї і ще" я в я й Ко Я се ЩЕ а в СУ - 5 с День З Тверееня еще Веулол зе пе че розв ку: ЖЕ ОКИС ОМ «же ек ОО я КО ху ку Ши - ше: ш . й 8 С мене В Е ; 5 Фон г ко о. 5 яке во п о я Я я м КОКО БОНН ОБОВ У С ОВО оре то б ВВ вою КОКО родний їз ії БОБ КИсВ го к зе У у ЖЕ а Ко У Ка " як як ей яке а ве 7 Я о ші

Фіг. 44 1 00 ит ди сне мМ . чі Нола СО)

75.- чи «ве Пептид (75) ме Ж й КЗ ї | ї День

Фіг. 45

Лень пак ; кох нь я г ше: ЕК Я ой У о чо а х м З ХВ 1 БО . пеню дення х Ж в В Фах | й зевовоосо Й іевввосв: ЕЕ Е. т-й ! с: І з в ! . ве ще ча то З ; -е Е як 7 0 с ке о Кк

Фіг. 46 сніп паде Зененне вени НОВЕ ОВ В В В В ВО В ВО ВОХО о о с я ОО о. ПО ДО ОК М ОО Ох КО З оОВОООВ СХ ОХ ОКО КОКО ОО М М КК с с ОО с СХ о і с МО КО В В о о. о є В с Зх ЗК ОХ о ПК М ж с о ОО - нн . и

--. МОМ СУ УКХ ще ОО КОН У М М М т МО о ЗАМ В Кк о с ХУ ОК а Мн нн нн НН НН НН М М ди ОК о ОХ ОК НО М ме о КО Б ОО М

-. ОО Б АСК М М М ях ох ОХ ОО М В с Ох ЗОВ о М М ММ М М

Ж о. о. с М М пе п оС с с хх ОО о с с о п МО М ті С ОКУ ОКО ОМ І - ЗОМ о ОО ОО МО М З с І І ОО с п о. ЗОМ М ОККО КВ ЕВ ОКО КК ОО ВМО ОО М М В МОБ КО о. їх ОО В КК В - МОМ КОХ В В шо ОО о ОО МО дО МОМ Мо с Її КОМ Ж с Ж ВО КОКО ма МОМ ВО ог ОО В В о Е с с ССС СО ОС НЕ ВОК З ОК х є с с С її 0 о. ОО с й є п ЩЕ є У Б о ек с ССС Б о. 5 о ОН АХ КО ЗХ М ОК ЗО ОКО с ОО КОХ с В фон . ХУ о ОХ 5 ОО

Фіг. 47

Те . чу. у Ленві Аевь я Гері се

0. жене пером ВК вою вну к і кі ТВХМЕВ КУ Еш ря 5 Ж ї " 7 п їх жк шо що шо ШЕ; 2 да ї ї то щі ї маша що З ЩО ! « й. ! піший жи Я. ОС 5 ЩЕ. НН: НИК... с сх ке щи с я да ще ек вк ще щи ж щет ще ще Пай С а У тк 2 о ке -е поз х як дже х я КЗ мод м» Лечьї існЬ З ягр Пекол зев 0 де шому коса чив лу дев І Бе м і о Ше фиих ПОЗяНаКУ | і о. М В се 5 о вен Б ще В і . ши ех ОБ рено тях ся МЕ Б РН роя : з ОВО фитих я тиву ай ш Я ща мм Ка а хх я хх Ме

«ще. Ко ху мих Ох ОМ КЕ я Кк їх а З ож М є Се по НА оо МА и о м я

Фіг. 4ВА "Е а НЕ МЕМ пане воту

Я з. ЩЕ якМ пан ниснолу ШЕ 25) З НК ЯК М пантотенолу що а шк 5 ЖЕ Ко В щ 15 ко ей щ М 3 й я й ВЕ в я шОж БУ ни Б їн се ща ЗМ НН 2 3 й В ЦЗень

Фіг. 48А

«ве АЯ-2 без НА А (16) аю АЮІ-З без ЕАЛАЯІО мк М пантотенолу (20)

«в. АЗ-2 без ЕААІО0МКМ пантотенолу (20) й Е ; Га скора ! Бе . те а | Я гани ше і х й в й : ее 5. День

Фіг. 49 Пікецючість с 001 ше як 58 а сх Я ко Я с Й шк ТУ ще то фіг. 50А

Наоденчість й ха й Ж Оож к щої м щої ; і зад З й їх ЕЕ т їз і що 85 їй В Ж ск Я мете її ОБО шо мес ЖАВ З а І їх 4 : 7 7 я Б з с ша в в яю На й а -е сі дк т їж ще же шо -х Со де С я и ее АК че І ку

Фіг. БОБ З ж Пледжість щ ВЕ у дя. б Мр їх т Б ЖЕ, ж і у мов . .

щи. ; : 5 м її Ї і М ш Ка. Я як Усю і ! шов ди сю док їв й -щ Б її ! Кт в ще ше шо Как ок СЯ ШИ м КЕ г ою аа х Я ей же х ою Му

Фіг. БОС

День « зкп їі д- 200- о же : ме са го з 150. ке й Ох Її. - ! б -5 М по. мехкенюні осннкюсною ще що ть ї Ед фкдія. ку : СЕК "83 ек дао сени Я ї Гак Й й (ак о о о в КУ А че ях ; ке ек М ще ще кош з Ко "у

Фіг. 51 ДечьО День! День? аз їо8: Ї і ! ОО БИтИСЯ Що 1001 шк же | ЕТ Періех розвнуюю | ; Б ще де | я п БЖ ок 5 Е М житі Е ;

во. в 4 що ВО сш я 1 Щ3 і п 2 и і . їй і " Дія ПЕН ЗМИВ охо 0 Й . | ре Кк як з х У я «З КУ и - дк «7 що - мов є ко «В я У КУ ке Км - Як ЯК к г С У я Я ХХ - Бо з а І сЖ ех ще хх а 2 шк 2 -х о Я Є х «У -

Фіг. 52

-кк о Контрольний іже 1-77 «а 0 МКМ пантотенолу оо рен О00ояяятрнннтя хо щ : в к : я в : : ' ї 012345 6 День Фіг, 5

ЗЧемк чи. Ж День Цецв о Девь З г Ж і ш : й Я ден вики 5 ЕЕ ка Аня ш НК ав пе - - фол Око т і Я ОК ром ї КК ОХ ж Я Х й і о. ях : с КИНЕ жк ЗЕ. Коти пло --о1 ЖК 5 м хуй ії МК ПЕеКЕ СОДУ ТИЙ. ху Жити Н ще КО Кодядк я : 0 ОО ВЕ х Шо шо іш з ПЕК Дуже крону В сег Др З СОКИ нях Кі Дон Е у я Я с. щ йх У СК всей ох ЕС ат - хе У БО то г їх КА Бо зо Я Т-їж К 4 щ ; фе День Лечь 5 БК; мидкежня ке жд У МОР во; МО» що ті ЯНВ ТІМ я НИ Е З КЕ що Я : 5 оо ВЗВНЕ ОВ Ж оші ВЩНАНК ВООКЕ Ше ще ше Ф що ня «7 гх ще і ЕЕ

Фіг. БАД День5 ЖЕК І : пе | ж 8 пт з ва» ?

З. пе я б х й в -- те С --е ак йо З ож пеки к ШИ яке що щ т. ам М ще Кі ке и

Фіг. БВ

Аень 6 т т в ЖИ Шо Ж ОМ б- а ож ; ш г5 8) Кіш г й я й 2-4 РМ . кОм ! о. во шк І 0 7 ми б им

Фіг. 55 й Убоууя Я тк : тракту і ІНЬ З День День Дедь Я г. я ск є Я 1 80 Ж | ші шої - ! ща : нд Кк Ів шк ї ке Я сив В й а - - ме тк Мур ЖИМУ ре НЕ КЕН пе жк ТЕ Ов жк тросі БЕН ФІН 7 о І ОО ННЕНЕ БО дк ВОВК орли Б І БОМ КО ВО ще ї НЕВКНЕ. БББОЯ Хо жи ит ЕУПИПРОМИЙ ж ї СО І х ж У ВІКЯУКИ ХХ Ще с ВИНО БО Ко с Б 15 з в он я МО фо І я ОО беж 00 1 Ве Я не роб вла м Ж сюбеажюню ОСТАННЯ в ЩООБЕККЕКЕ жк іОоБТЬ БИ Я і ООМонЯ КИНЕ и ЇХ сх Ку ТЕ КАК нин АКА, ІБ КС ЕЕ сля фун р купола в учету: д вх б ше Я х Перкм н яК о ооо У ак в о щх Ж Я ак ок аа Є вх ОМ У У сей да Й Ех сх а КЕ щи А се М ку хх КО ОК; кг СЯ ян м нах яд я Ух Кк Яр те Ол як п От Моя Се ШИ дк Ме даю З щ У КК З га Се те -ов то о че Девь я День Е М МЕВНХ ся ка Є " т ї АК мої : Мк се Ж дур я НК хв ха 1 0ОБКНООІ УКХ жюрі 0 ВІН МКК хе ОО КХКМИО МОМ ї дк я сх РОВОМ Бо кл ОБ УМЛЕ ее Пия ві РО Же о БИТВ у ШИК ВМ п Зоо екс щ ВК КЕ ще зе с х ска о. Ж Ж ши о ше як о як Ки К і а е КУ й КВУ й з ей ок КО -- щи ко Я м ке ї х к с ші

Фіг. ББА Децщьа ЖЖЕЖ її Кк і НА НІ вх. і з я жов ес по ба ян -- ВА. У М ї жа зах Б грі І уча з КА ш Ме й вано їжкя З Я « ек с я шк ще ШК іх М ях Соня я де се як ке

Фіг. 558

- КЕ | м се з | - а а Я т ян Вода змін Пентид-рифампіцин-хітозан Дечь «ріг. 57

ТЕесухк с День б ще ; 83 З ее

06. я ЕЕ й : -8 | - в ка : Як ; ко я ї шо А оо оо пон що ще ! а: ; шо Моб, Од ЩЕ зон Й речі ій сонет не як о. Ж 7 Ка вуж я й в жи «т І ж Же новий в о т їз з. а щі Ме ак У зак що ле щ- У и - : У «В я ще

Фіг. 585 пере оннноне: он З КВ ПЕКУН КАК ПАК с Дех КВ СЕ с ЗО м 5 с п с щ с 5 З ОН. С о пн

Фіг. 59А

Сг ОА 126 НИК СИХ Еіоловннкох хо ше х ОО а С І КО НЯ ох п. ей о о о 5 Ех с щ с а Ес 5 0 м МУ СО с М о. с т З ОХ с й ВО с. с хе с п В ж СХ ОКХ с В ВЯ сх, с і В о. о. ОО о. шо с с о. с о ПЕ о КА З с ТИ КО Ох 5 с І

ЕЕ. о. с о. р ОМ с о с Ох с ОО о. ОО с В о С ї х - ОЗ 8 с с САНИ ї о». о. з с с З з : Її г. о 1 З

І. . пос ШО Ме М п о ж . с З . о. . 1 т Б КО ОО ОО ЗО п. В ОО я й п 5-5 5 о о К с 5 сш З ВХ І

Фіг. ОВ

День 18 Мешаннеє пах шк г ї З: значення КЕ 017 08 .е їх 24 ж ші ржння м 0 нини Й нн С ВНД кЯдщ хи ЩІ а дк о а «о - 5 і дж пи шк - с е щ Б «к

Фіг. бО0

ПЦечометноа Загальна кількість ! вичвиених пОТОМКІ 12 15 20 в-а

400. . і о Дрецороєтих КЕ тт Пре лялечок ще нев ще ОН во» личннає 755 і Й Б я о ! 7 як ШЕ

25. 11 МЕ де ах жк дк о я я шк я Бо г яю Мк к-Я що де ток М С нт

Фіг. ТА Ме, й і ож зяжх Га 3 Ї Е б дк ! ваш Жов . ! з зе Е У ов ше Я я ке ек им зе Мах ее ; я ох

Фіг. Є1Е зво

. А ЗМ МКС М пив локеванну р зе и МЕЧА НЕО КОКСВ НН в ТУ - В я бе ; сві нення 755 3 35 40 45 50

Фіг. 62А КЕ ДЕчть 5 Ж 5 0 щ : їй ; З і Б і БО «5 у і ; 3 БО ї і . ш У» Зк : в а а т аа ик і: ей Я в я ти . ше я ей ак Я В же 2 сь ще Ж

Фіг. 62

1 0 о "Ка г" ЖЕК ЦО ЖиИ ХМ САМКЖИЖНИИг СМКЖОКЕК КИ, З Е ру Ж КО ОО я в ху ще а і і ) | ; Ф ОСКоВу ЕВ, - Я и ою т. Я ри : ДКСЯом ХК вва, як ІЗ Е і де пе : - би кв Кк чччеь В 2 г зі Контроль Ке- Ве ї шо бом сут їв Ї «ЖЕ Су Ми НТ ОТНКЕ ТК День

Фіг. 63 Ж, сей, дані ро Б. сеї девідню о: їж Івін СА се ВО Ж Ї Ж «ТЕ: ші х Ше - се ї Ж - 5 ре я з тож в Ух ро МК Б АЖ на о хз М осо Вран : ОО Бо рекесожкв, Й що 1 он окр ОО Ж ки квт що ща й од ша: М учееннняттьноя Кум НН щ зеееенн Во ані осаді - зо ЩІ ! БСК - ех З «Др осююнтююнюєттюрроюттюстююстюс третю оюфоосоюстююстсссю . шо Той МКК В о зоб З апа й чо Зой 30 ака «ее пив М я - дя жов еко ПЗ оий Овес хви Час хви «ве Рвані г - г х подих зе К ОВО МНН ТЯ ЯВНІ про Белтицну, ДяНРЛІ т 7 що с 4 БОАВ кавкяВаг, З Ка ЗЕ сову; 100 х Ж Я, НК їх КА слой хи їх м ЗО ох шодя ЖК х Же Ф де о В ем К 5 Ж . -к Ж ЗК с НН ЕХ - Я он КИ КК ТИКИ я ОКвокх до й шо ЕМО КО и рол Кролик юю х в ДМ Щ а 00 30 00 я дою Чаеіханання Час (хвилини

Фіг. 54 з62

- ! ши з. в з пютееврепя ї ще и ш 5 : НЕО 5. ппатовресепк ок дає в | ння «і Контроль (без обробки) ж і З ; п І х | | Ж Ди

Фіг. 65