UA125607C2 - Ветеринарна композиція для імунокастрації свиней - Google Patents
Ветеринарна композиція для імунокастрації свиней Download PDFInfo
- Publication number
- UA125607C2 UA125607C2 UAA201701754A UAA201701754A UA125607C2 UA 125607 C2 UA125607 C2 UA 125607C2 UA A201701754 A UAA201701754 A UA A201701754A UA A201701754 A UAA201701754 A UA A201701754A UA 125607 C2 UA125607 C2 UA 125607C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- dose
- immunization
- pigs
- risk
- weeks
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 178
- 230000002130 immunocastration Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 211
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims abstract description 190
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 claims abstract description 95
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 60
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 59
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 50
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 91
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 90
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 35
- HFVMLYAGWXSTQI-QYXZOKGRSA-N 5alpha-androst-16-en-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C=CC4)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 HFVMLYAGWXSTQI-QYXZOKGRSA-N 0.000 claims description 34
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 31
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 30
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 29
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 claims description 27
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 claims description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 8
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000035946 sexual desire Effects 0.000 claims description 7
- 230000035558 fertility Effects 0.000 claims description 6
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 230000009329 sexual behaviour Effects 0.000 claims description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002381 testicular Effects 0.000 claims description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 235000014548 Rubus moluccanus Nutrition 0.000 claims 2
- 235000010893 Bischofia javanica Nutrition 0.000 claims 1
- 240000005220 Bischofia javanica Species 0.000 claims 1
- 101100482711 Caenorhabditis elegans gon-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 235000009025 Carya illinoensis Nutrition 0.000 claims 1
- 244000068645 Carya illinoensis Species 0.000 claims 1
- 101100408262 Danio rerio pi15a gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims 1
- 241001659863 Panna Species 0.000 claims 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 claims 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 claims 1
- 241000183024 Populus tremula Species 0.000 claims 1
- 241001424341 Tara spinosa Species 0.000 claims 1
- 108091034135 Vault RNA Proteins 0.000 claims 1
- 241000289690 Xenarthra Species 0.000 claims 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 claims 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 claims 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 claims 1
- XAEWZDYWZHIUCT-UHFFFAOYSA-N desipramine hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].C1CC2=CC=CC=C2N(CCCNC)C2=CC=CC=C21 XAEWZDYWZHIUCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 claims 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 claims 1
- 125000002951 idosyl group Chemical class C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 claims 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 claims 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 abstract description 4
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 abstract 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 abstract 1
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 abstract 1
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 84
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 58
- ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N skatole Chemical compound C1=CC=C2C(C)=CNC2=C1 ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 41
- 229940074386 skatole Drugs 0.000 description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 26
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 25
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 21
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 18
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 14
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000013461 design Methods 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 8
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 8
- 101710198693 Invasin Proteins 0.000 description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 7
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 6
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 6
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical group NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 5
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 241000352232 Mirimiri Species 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001115378 Modisimus miri Species 0.000 description 2
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000579 abdominal fat Anatomy 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 2
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 235000021051 daily weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methylphenyl)-2,6,6-trimethylcyclohexa-1,3-dien-1-amine Chemical compound CC1=C(N)C(C)(C)CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010001488 Aggression Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100055841 Danio rerio apoa1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000214054 Equine rhinitis A virus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000009165 Gonadoliberin Human genes 0.000 description 1
- 108050000048 Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005726 Pituitary Hormone-Releasing Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010031037 Pituitary Hormone-Releasing Hormones Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 208000012761 aggressive behavior Diseases 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002303 hypothalamus releasing factor Substances 0.000 description 1
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 238000013031 physical testing Methods 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008786 sensory perception of smell Effects 0.000 description 1
- 230000014860 sensory perception of taste Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0006—Contraceptive vaccins; Vaccines against sex hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Винахід стосується ветеринарної композиції для імунокастрації свиней, яка складається з ефективної кількості суміші в однакових молярних співвідношеннях пептидних імуногенів, які мають амінокислотну послідовність, представлену SEQ ID NO: 7, 8 і 9, у фізіологічному розчині; і прийнятного у ветеринарії засобу доставки або ад’юванта, де прийнятний у ветеринарії засіб доставки або ад’ювант являє собою ISA50V2 або емульсиген D. Винахід також стосується способу інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свиней, способу зниження продукції тестостерону та його похідних у тварин, та способу індукування антитіл проти рилізинг-фактора лютеїнізуючого гормона (LHRH).
Description
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід стосується імуногенної композиції ІНЕН і, зокрема, імуногенної композиції
ІНЕКН, яка містить ІНКН, що містить пептидні конструкції, які призводять до функціональної супресії рівня ГНКН у свиней, що призводить до ефективної імунокастрації, видалення присмаку кнура та посилення росту свиней.
ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ
Гонадоліберин (СПЕ), також відомий як рилізинг-фактор лютеїнізуючого гормону (ІНЕН), є тропним пептидним гормоном, відповідальним за вивільнення фолікулостимулюючого гормону (Е5Н) і лютеїнізуючого гормону (ІН) з передньої частки гіпофізу. ІЇНКН синтезується і вивільнюється нейронами гіпоталамуса.
Вакцинація проти гіпоталамусного рилізинг-фактору лютеїнізуючого гормону (НЕКН) показана як імунологічний спосіб контролю розмноження з початку 1970-х рр. Викликання імунної відповіді на І НЕН запобігає вивільненню з передньої частки гіпофізу гормонів ІН і Е5Н, необхідних для розвитку і підтримки статевих залоз - сім'яників у самців і яєчників у самиць.
Таким чином, зниження рівнів ІН і ЕН призводить до втрати репродуктивної функції.
Операції стерилізації (або кастрації) є найбільш широко практикованими хірургічними операціями у ветеринарії і тваринництві. Значну частку обох статей домашньої худоби і тварин- компаньйонів загальноприйнято хірургічно стерилізують для запобігання множини небажаних характеристик, що супроводжують статеву зрілість.
Імунологічне блокування дії І НЕКН може призводити до безплідності тварин, тому що І НЕН контролює продукцію тестостерону, в свою чергу, що регулює розвиток сперми, і продукцію естрогену, в свою чергу, що викликає дозрівання яйцеклітини. Крім того, імунотерапія на основі
ІЇНКН забезпечує засоби контрацепції у самців і самиць тварин-компаньйонів (наприклад, собак, кішок, коней і кроликів), а також зниження небажаної регульованої андрогенами поведінки, такої як статеве бажання, мічення території та агресія. Такий процес є оборотним залежно від рівня антитіла в сироватці у тварин, що піддаються обробленню, після імунізації за допомогою імунотерапії на основі І НЕН. На закінчення, імунологічна кастрація (наприклад, яка грунтується на антитілах інгібування дії |НКН) має додаткове застосування у виробництві м'ясної худоби. Самців не пускають на кращі шматки м'яса через неприємний запах і смак
Зо їхнього м'яса через циркулюючий тестостерон (наприклад, присмаку кнура). Оскільки механічна (наприклад, хірургічна) кастрація самців харчових тварин більше не вважається гуманною, імунологічна кастрація являє собою прийнятну альтернативу цій практиці.
Тестують кілька імуногенних форм ІНЕН. Наприклад, пептид ІЇНКН кон'югують з білками- носіями для підвищення імунологічної активності пептидного гормону. Проте, ці білки-носії є занадто дорогими для великомасштабного застосування, і отримувані кон'югати пептид-білок не є настільки ефективними, щоб (1) призводити до імунокастрації на тривалий період часу, і нездатні (2) генерувати імунну відповідь проти І НЕКН у всіх тварин, при цьому обидві умови необхідні для ефективної вакцини як заміни хірургічної кастрації.
Крім того, ефективна імунізація з використанням І НЕН, неімуногенного 10-мірного пептиду, залежить від ділянки кон'югації між І НЕН і білками-носіями. Крім того, білковий зв'язок з І НКН є складним як імуноген, тому що більшість імунних відповідей проти таких імуногенів спрямована проти великих білків-носіїв, а не проти пептиду І НЕН (велика кількість токсинів або інших білків- носіїв є набагато більшими, ніж І НЕН, 10-мірний пептид). Це явище найчастіше призводить до індукованої білком-носієм епітопної імуносупресії. Таким чином, необхідно шукати імуностимулятор, який підходить для сполучення з пептидом ІНКН, що призводить до отримання недорогої пептидної конструкції для застосування як ключового інгредієнта у складі вакцини, здатної стимулювати ранню та сильну імунну відповідь на основний гормон І НЕН, для застосування в імунокастрації. Аналогічно цей імуномодулятор також має уникати індукованої носієм епітопної супресії. Таким чином, вакцина І НКН, яка має постійно високу ефективність для імунокастрації, включаючи (1) конкретне застосування для видалення присмаку кнура разом з посиленим профілем росту у свиней; і (2) для модифікації поведінки для спрощення утримання тварин у стаді; все ще є дуже бажаною для усунення існуючих недоліків імунокастрації на основі І НЕН, зокрема, у свиней.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Винахід стосується вакцинної композиції для кастрації свиней, що містить пептидний імуноген і ветеринарно прийнятний засіб доставки або ад'ювант, де пептидний імуноген містить (ад пептид ІНКН у ЗЕО ІЮ МО: 1 і (Б) щонайменше один Т-хелперний епітоп або імуностимулюючий елемент, вибраний з групи, що складається з ЗЕО ІО МО: 2, 3,4,516, де пептид ГНКН можна ковалентно зв'язувати його М-кінцем з Т-хелперним епітопом і/або бо імуностимулюючим елементом за допомогою спейсерної послідовності (іу-сСІу або єм ув.
Спейсер "єМІує" являє собою залишок лізину, який знаходиться між двома амінокислотами, зв'язаними з (1) С-кінцем попередньої амінокислоти в групі є-МНго залишку лізину і (2) М-кінцем наступної амінокислоти на С-кінці залишку лізину. Терміни "ЄМ ув", "є ув", і "єК" можна використовувати взаємозамінно.
В іншому варіанті здійснення пептидний імуноген за даним винаходом містить ЗЕО ІЮО МО: 7, 8, 9 або 10 або їхню суміш, і ветеринарно прийнятний ад'ювант вибраний з групи, яка складається з ІЗА5ЗОМ2 і емульсигену О. Загальна кількість пептидного імуногену становить більше 6,25 мкг на дозу, переважно - від 50 мкг до 200 мкг.
Інший аспект даного винаходу стосується способу інгібування характеристик, викликаних статевим дозріванням свиней, що включає введення свиням ефективної кількості вакцинної композиції за даним винаходом для зниження продукції тестостерону і його похідних, таких як дигідротестостерон, і естрогену у імунізованого хазяїна. Характеристики включають, як необмежувальні приклади, присмак кнура, статеву активність, фертильність і статеве бажання.
Спосіб за даним винаходом інгібує присмак кнура і ріст сім'яників або придатків яєчка.
В одному з варіантів здійснення вакцинну композицію вводять за допомогою внутрішньом'язової ін'єкції самцям свиней серією з двох доз, при цьому першу дозу вакцинної композиції вводять свині вже у віці З тижнів, а другу дозу вводять як бустер у віці від 10 до 16 тижнів або більше, що призводить до ефективної імунокастрації, підвищеного росту і видалення присмаку кнура приблизно через два тижні після введення бустера.
Детальний опис винаходу викладений в наступних варіантах здійснення з посиланням на супутні креслення.
Посилання: (1) Наукове обговорення Ітргомас на веб-сайті Еигореап Медісіпе5 Адепсу (ЕМА) (останнє оновлення 2010/04/22): пируЛумли. етва.еигора.ец/досв/еп. СВ/доситепі Іргагу/ЕРАВ -
Зсівепійіс Оівсивзвіоп/уеїегіпагу/000136/Л//С500064057. раї (2) Мапо, СУ; 7ать, Т9.; МЕ, уопп; Катіп5Ку, ЗМ.; Нозеїп, Ваграга; Міхоп, ОР.; Кой, СМ;
Коумаї5Ккі, дасек; УМаїієїд, А М., 5іисіигейд 5упінеїїс апіїдеп Ігагіез аз аіадповіїс5, массіпез5 апа
Іегарешісв. МО 95/11998. Опіеа біагев: Опіеа Віотеадісаї Іпс.
Зо (3) Аппа Еїйт І ада, Спапуд Уі Мапо, ТітоїШу дозерп 7атр., "Іттиподепіс ГНВАН реріїде сопбігисів апа 5упіпеїйс ипімегза! іттипев 5іїтцагв5 їог массіпез", патент США Мо 5759551.
Опйеа стаїез: Опіеа Віотеавдісаї Іпс. (4) Мапо, СУ. "Апіййсіаї Т Неїрег сеї ерйорез абз іттипе 5ійтшціаюг5 їТог зупіпеїйс реріїде іттиподеп5 іпсійадіпа іттиподепіс ГНАН рерііде5", патенти США МоМо 6025468, 6228987, 6559282. Опіпеа біагез: Опіїейа Віотедісаї, Ійс. (5) Мапуд СУ. Апійсіаї Т Неїрег сеїЇ ерйоре5 абз іттипе війтшаюг5 ог 5упіпеїйс реріїде іттиподеп5. Патенти США МоМо 6713301. Опіїей 5іаїев: Опіїєйд Віотеаісаї Іпс. (6) Меївіег, єї аї., "Тмо помеї! Т сеї! еріюре ргедісіоп аідогпййтв»5 разед оп МНО-ріпаїпу тоїїїв; сотрагізоп ої ргедістед апа риріїзпей ерйоре5 їот Мусобасіетгіит їшбрегсціо5ів5 апа НІМ ргоївїп ведпиепсев", Массіпе, 13(6):581-591. (7) Зупіпнеїїс Рерііде5: А Овег5 Стіде. Стапі СА, вд. Мем Моїк: М/Н Егеєтап апа Сотрапу: 1992
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
На фігурах та і 16 показані відповідні титри антитіл проти ГНЕН після імунізації самців свиней з використанням складів, які містять | НАНЗ (5ЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9) в ад'юванті ІБАБОМ2 (1а) або емульсигені О (15). Свині у всіх тестованих групах (групах 1-4 і групах 8-11) мають високий титр антитіла проти ЇНКН через два тижні після введення бустера (тобто через 10 тижнів після вихідної імунізації, або 10 М/РІ, що відповідає віку приблизно 18 тижнів). На відміну від цього, титри антитіл проти ІЇНЕКН у свиней, яким вводили доступну в даний час комерційну вакцину Іптргомасф (група 7 і група 14), підвищувалися лише через 14 М/РІ, при цьому титри були нижчими, ніж у випадку складів пептидних вакцин за даним винаходом (групи 1-4 і групи 8- 11). Свиням у групах 5 і 12 вводили фізіологічний розчин, і вони служили як негативні контролі, і свиней у групах 6 і 13 кастрували за допомогою хірургічної операції, і вони служили як позитивні контролі.
На фігурах 2а і 20 показана тривалість кастрації відповідних тварин за допомогою ілюстрування відповідних концентрацій тестостерону у свиней після імунізації самців свиней складами, які містять | НЕНЗ (5ЕО ІО МО: 7, 8 і 9) у складах, які містять ад'ювант ІЗАБОМ2 (га) або емульсиген О (20). В усіх групах зі складами в ІЗАБОМ2 або емульсиген О підтримували низький рівень тестостерону до 10 МУРІ, і він залишався низьким до 16 М/РІ (віку 24 тижні). На бо відміну від цього, свині в групах 7 і 14, яким вводили вакцину ІтргомасфФ, мали високі рівні тестостерону в сироватці до 12 М/РІ, ї низький рівень якого починав зростати з 14 МУРІ, що свідчить про набагато нижчу ефективність імунокастрації з використанням Ітргомасд).
На фігурах За і 35 показані відповідні маси тіла свиней у віці 24 тижні після імунізації самців свиней складами, які містять ІНКНЗ (ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 ї 9) у складах, які містять ад'ювант
ІБА5БОМ?2 (За) або емульсиген 0 (30). Неімунізовані групи негативного контролю і групи хірургічно кастрованих тварин мали значно нижчі середні маси тіла 94,9 кг (негативні контролі, групи 5 і 12) і 88,8 кг (групи кастрованих тварин 6 і 13). Порівняно з групами хірургічно кастрованих тварин, вакцина за даним винаходом (групи 4 і 11) демонструвала значно більшу перевагу в прирості маси тіла приблизно на 27,9 95.
На фігурах 4а і 4р показані відповідні титри антитіл проти І НКН після імунізації самців свиней складами, які містять І НЕНІ (5ЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ?2 (4а) або емульсигені
О (4р). Свині у всіх тестованих групах мали високі титри антитіл проти ГНКН через два тижні після введення бустера через 10 М/РІ (тобто у віці 18 тижнів). Можна підтримувати титри антитіл приблизно 3,0 (І 0д:іо) до 16 МУРІ (тобто у віці 24 тижні), коли свиней виставляють на продаж на ринку, у випадку обох груп складів у ІЗАБОМ2 або емульсигені 0.
На фігурах 5а і 55 показані відповідні концентрації тестостерону після імунізації самців свиней складами, які містять І НЕНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5БОМ2 (5а) або емульсигені
О (55). Концентрації тестостерону в сироватці у свиней у групах 1-4, яким вводили склади в
ІЗАБОМУ, і групах 8-11, яким вводили склади в емульсигені Ю, були зворотно пропорційними титрам антитіл проти І НЕН у сироватці, тобто чим вищі титри антитіл проти І НЕН, тим нижча концентрація тестостерону в сироватці до досягнення, що призводить до кастрації рівня тестостерону в сироватці з пороговим значенням, оцінюваним як 1,87 нмоль/л, через два тижні після введення бустера (тобто через 10 МУРІ або у віці 18 тижнів). В усіх групах, за винятком групи 1, яким вводили склади в ІЗАБ5ОМ2 або емульсигені О, підтримували низький рівень концентрації тестостерону в сироватці до 16 МУРІ (віку 24 тижні).
На фігурах ба і 66 показані відповідні маси тіла свиней після імунізації самців свиней складами, які містять І НЕНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5БОМ?2 (ба) або емульсигені Ю. Групи негативного контролю, тобто невакциновані тварини, (групи 5 і 11) і групи хірургічно кастрованих тварин (групи 6 і 12) мали значно нижчі середні маси тіла 94,9 кг і 88,8 кг, відповідно, у віці 24
Зо тижні. Порівняно зі свинями в групах хірургічно кастрованих тварин, склади вакцин за даним винаходом (групи 4 і 10) мали значно більшу перевагу в прирості маси тіла приблизно на 20,3 У.
На фігурі 7 показана тривалість знаходження титрів антитіл проти І НЕН після імунізації самців свиней складами, які містять ІНАНІ (5ЕБО І МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2 або емульсигені Ю. Через два тижні після введення бустера (тобто 10 М/РІ) титри антитіл проти
ІНАН у групах 1-4 досягали більше 3,0 (І0діо), і такі високі титри зберігалися до 20 М/РІ. У імунізованих тварин з груп 2 і З титри антитіл проти І НЕН навіть могли зберігатися на рівні 3,0 (Ірао) до 24 М/РІ (тобто у віці 32 тижні). На відміну від цього, у групі негативного контролю (групі 5) і контрольній групі тварин, яким проводили хірургічну кастрацію, (група 6) завжди зберігався низький титр антитіл проти ГНКН.
На фігурі 8 показана тривалість кастрації відповідних концентрацій тестостерону у свиней після імунізації самців свиней складами, які містять І НКНІ (ЗЕО ІЮО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5ОМ2 або емульсигені Ю. Через два тижні після введення бустера (тобто 10 М/РІ) у сироватці всіх свиней у групах 1-4 виявляли низький рівень тестостерону, і він досягав рівня кастрації при супресії антитілами проти ІНЕН, показаної в цих групах. Рівень тестостерону у свиней у групах 1-4 зберігався таким же низьким, як у контрольній групі кастрованих тварин (групі 6) до 20 М/РІ (тобто у віці 28 тижнів).
На фігурі 9 показана маса сім'яників свиней після імунізації складами, які містять ГНКНІ1 (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІБА5ОМ2 або емульсигені 0, через 24 М/РІ. У групах 1-4 сім'яники свиней зменшувалися до нефункціонального розміру.
На фігурі 10 показана маса придатків яєчка свиней після імунізації складами, які містять
ІНЕКНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5ОМУ?2 або емульсигені 0, через 24 МУРІ. У групах 1-4 маса придатків яєчка значно знижувалася.
На фігурі 11 показана маса тіла свиней після імунізації складами, що містять ГНЕКНІ (ЗЕО ІЮ
МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2 або емульсигені 0. Імунізовані тварини з груп 1-4 мають набагато переважаючий приріст маси тіла, ніж в групах негативного контролю і контрольних групах хірургічно кастрованих тварин (групах 5 і 6).
На фігурі 12 показаний ефект відносно концентрації андростенону у свиней після імунізації
ІНКНІ (5ЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5ОМ2 або емульсигені О. Концентрації андростенону в бо жирі зберігалися на рівні нижче 0,5 мкг/г жиру в групах 1-4. У випадку групи З навіть зберігалося середнє значення андростенону 0,1384 мкг/г жиру.
На фігурі 13 показаний ефект відносно концентрації скатолу у свиней після імунізації І НКНІ1 (ЗЕО ІЮ МО: 10) з ад'ювантом ІЗАБОМ2 або емульсигеном 0. Концентрація скатолу зберігалася на рівні нижче 0,1 мкг/г жиру в групах 1-3. У групі З виявляли найменше середнє значення скатолу (0,0514 мкг/г).
На фігурі 14 показаний графік розподілу фактору присмаку кнура. Група 1 мала властивості, схожі з групою 2, у якій 7/8 зразків потрапляли в групу низького ризику, а один зразок - у групу середнього/високого ризику. Група З мала виняткові властивості до 24 М/РІ, ї- при цьому всі зразки в ній потрапляли у групу низького ризику. У групі хірургічно кастрованих тварин (групі 6) завжди зберігалася найменша концентрація факторів присмаку кнура. Контрольна група, якій вводили фізіологічний розчин (група 5), включала лише 2/8 у групі низького ризику, 2/8 у групі середнього ризику і 4/8 у групі високого ризику.
На фігурі 15 показані титри антитіл проти І НЕН після імунізації самців свиней складами, які містять ІНАНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5БОМ2, з різними схемами примування і введення бустера для оцінки гнучкості схеми імунокастрації. У свиней в групі 1 спостерігали високу імуногенність, при цьому середні титри антитіл проти І НЕН становили до 3,556 (І0до) у віці 22 тижні і зберігалися на рівні 3,235 (І0д:о) у віці 26 тижнів. У групі 2 досягали найвищого титру антитіл, при цьому середній титр становив 3,526 (І0до) у віці 18 тижнів і зберігався на рівні 2,869 (Іоачо) У віці 26 тижнів. У групі З досягали найвищого титру антитіл 3,219 (І0до) у віці 24 тижні, і він зберігався на рівні 2,682 (І0д о) У віці 26 тижнів.
На фігурі 16 показані концентрації тестостерону в сироватці після імунізації самців свиней складами, які містять ГНКНІ (5ЕБЕО ІЮО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5БОМ2, з різними схемами примування і введення бустера для оцінки гнучкості схеми імунокастрації. У свиней в групі 1 спостерігали ефект імунокастрації (концентрація тестостерону -1,87 нмоль/л) у віці 20 тижнів, тобто через 2 тижні після введення бустера, і такий ефект тривав щонайменше протягом 6 тижнів до досягнення віку 26 тижнів. Концентрації тестостерону у свиней в групі 2 були значно нижчі 1,87 нмоль/л протягом періоду від 2 до 6 тижнів після введення бустера (тобто у віці від 22 26 тижнів) і залишалися низькими (концентрація тестостерону «1,644 нмоль/л) до досягнення віку 26 тижнів. Через два тижні після введення бустера середня концентрація тестостерону в
Зо групі З становила 4,535 нмоль/л.
На фігурах 17а, 17р, 17с і 174 показана маса сім'яників і придатків яєчка у свиней після імунізації складами, які містять ГНКНЗ (ЗЕО ІО МО: 7, 8 і 9) в ад'юванті ІЗАБОМ2. Масу сім'яників вимірювали в 10 МУРІ (17а), 12 МУРІ (1760), 14 МУРІ (17 с) ії 16 М/РІ (174). Сім'яники і придатки яєчка поступово зменшувалися з часом, і спостерігали значну втрату ваги в 10 М/РІ у випадку придатків яєчка та у 12 М/РІ (р«е0,001) у випадку сім'яників.
На фігурах 18а, 186, 18с і 184 показана кількість фактору присмаку кнура (андростенону і скатолу) після імунізації самців свиней складами, що містять ІНКНЗ (ЗЕО ІЮ МО: 7, в і 9) в ад'юванті ІЗА5БОМ2. Кількість андростенону і скатолу оцінювали на 10 МУРІ (18а і 18с, відповідно) і 12 МІРІ (186 ї 184, відповідно). Після імунізації тестостерон знижувався до рівня кастрації (тобто менш 1,87 нмоль/л), що призводило до зниження андростенону в жирі.
На фігурах 19а і 19р показана оцінка ризику за результатами визначення рівня андростенону і скатолу в жирі в групі самців свиней негативного контролю, яким не вводили засіб (19а), порівняно з самцями свиней, яких імунізували вакцинними складами пептиду І НЕКН (196). Всі вакциновані групи виявляли в групі низького ризику при чутливій оцінці (низька концентрація андростенону («0,5 мкг/г жиру) і низька концентрація скатолу («0,22 мкг/г жиру)) з 10 МУРІ по 16 М/РІ.
На фігурі 20 показана тривалість ефекту титрів антитіл проти І НЕН після імунізації самців свиней складами, що містять І НКНІ (5ЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2. Титр антитіл у групі 1 знижувався з 3,636-0,577 (10910) (на піку) до 2,418--0,742 (І 0910) (наприкінці дослідження).
Титр антитіл у групі 2 знижувався з 3,868-0,221 (0910) до 2,806-0,213 (І 0910) (наприкінці дослідження).
На фігурі 21 показана концентрація тестостерону після імунізації самців свиней складами, що містять ГНКНІ (5ЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗА5БОМ2. Концентрація тестостерону у всіх групах на вихідній стадії дослідження становила 2,943--2,854 (середнє - 503) нмоль/л. Часовою точкою, встановленою для оцінки активності вакцини, був момент через 2 тижні після введення бустера, коли спостерігали найменшу концентрацію тестостерону. Середні концентрації тестостерону у свиней в групах 1-4 через 2 тижні після введення бустера становили 1,265--0,353, 1,329-0,636, 1,904--2,297 і 1,222--0,445 (середнє - 5) нмоль/л, відповідно.
На фігурах 22а і 225 показана довжина (фіг. 22а) і об'єм сім'яників (фіг. 225) після імунізації 60 самців свиней складами, що містять ГНКНІ (5ЕБО ІЮО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2. Не спостерігали відмінності в масах пар сім'яників, пар придатків яєчка і довжинах сім'яників серед свиней у групах 1-4. Стрілками показана часова точка введення бустера у випадку відповідних груп.
На фігури 23а, 2365 і 23с показані маси пар сім'яників (фіг. 23а), пар придатків яєчка (фіг. 235) і довжини яєчок (фіг. 23с) у свиней при некропсії після імунізації самців свиней складами, що містять СНКНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2.
На фігурі 24 показані концентрації андростенону і скатолу у віці 24 тижнів після імунізації самців свиней складами, що містять ГНКНІ (5ЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІБАБОМ2. На графіку розподілу фактору присмаку кнура фактори ризику для всіх свиней у групах 1-4 знаходилися в ділянці низького/середнього ризику, за винятком однієї свині в групі 1.
На фігурі 25 показані титри антитіл проти ГНЕН після імунізації самців свиней складами, що містять ГНКНІ (ЗЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2. Титри антитіл проти ІНКАН у віці із тижнів знаходилися приблизно на фоновому рівні 1,718--0,297, 1,765--0,340 ї 1,770-0,283 (Го910) у випадку свиней у групах 1, 2, і 3, відповідно. Титри антитіл проти І НКН становили 3,249-0,346 у групі 4 і 2,893--0,786 у групі 5 у віці 18 тижнів після введення бустера у віці 16 тижнів.
На фігурі 26 показані концентрації тестостерону в сироватці у свиней після імунізації складами, що містять ЇНКНІ (5ЕБЕО ІО МО: 10) в ад'юванті ІЗАБОМ2. Рівні тестостерону в сироватці у свиней у групах 1 і 2 становили 2,154--0,921 нмоль/л у віці 10 тижнів і 2,183--1,231 нмоль/л у віці 6 тижнів, відповідно. Найнижчий рівень тестостерону у свиней в групі З становив 3,065-0,205 нмоль/л у віці 12 тижнів. Концентрації тестостерону в сироватці знижувалися до низьких рівнів приблизно 0,586--0,184 і 0,893--1,192 нмоль/л у випадку груп 4 і 5 у віці 20 тижнів, відповідно. Для порівняння, рівень тестостерону в сироватці у свиней, яким вводили вакцину
Ітргомасф (група 6), залишався високим (приблизно 9,415--7,560 нмоль/л) у віці 20 тижнів, а потім знижувався до низької концентрації у віці 22 тижні.
На фігурі 27 показані титри антитіл проти ГНЕН після імунізації самців свиней складами, що містять ІНАКНЗ (ЗЕО ІО МО: 7, 8 і 9) в ад'юванті ІБАБОМ. Титри антитіл проти ІНЕКН у свиней у групах 1 і 2 були значно вищими, ніж у групах контролів З (інтактні неімунізовані) і 4 (хірургічно кастровані).
Зо На фігурі 28 показана повна (100 95) імунокастрація самців свиней у групах 1 і 2 після імунізації складом, що містить І НКНЗ (ЗЕО ІО МО: 7, 8 і 9) в ад'юванті ІЗБАБОМ, у різних дозах.
На фігурі 29 показаний вищий середній добовий приріст маси (АОС) у результаті підвищеного середньодобового споживання корму (АОГЇ) у випадку самців свиней, яким проводили імунізацію складом, що містить І НКНЗ (5ЕО ІО МО: 7, 8 ї 9) в ад'юванті ІЗАБОМ, порівняно з групою хірургічно кастрованих тварин.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Наступний опис являє собою найбільш продуманий спосіб здійснення винаходу. Цей опис призначений для ілюстрування загальних принципів винаходу, і його не слід тлумачити як обмеження. Обсяг винаходу найкраще визначений за допомогою посилання на формулу винаходу.
Даний винахід стосується пептидів, що містять І НЕКН, 10-мірний пептид, зв'язаний М-кінцем з костимуляторним або Т-хелперним епітопом (Тп-епітопом).
Термін "НКН" стосується рилізинг-фактору лютеїнізуючого гормону (СепВапк:
ААВЗ34379.1), що є тропним пептидним гормоном, який відповідає за вивільнення фолікулостимулюючого гормону (Е5Н) і лютеїнізуючого гормону (ІН) з передньої частки гіпофізу. Термін ГНКН, який використовується в даному описі, включає гомологи ІГНЕН, отримувані з різних таксонів, включаючи птахів, риб, плазунів і безхребетних. Переважно, пептиди І НКН містять амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 1, як показано в таблиці 1.
Термін "вакцина" є загальним клінічним терміном для опису імуностимулюючої композиції, що призводить до продукції антитіл у індивідуума, який піддається впливу вакцини. З клінічної точки зору, індивідууми, яким вводили вакцинні композиції, будуть продукувати антитіла проти антигену, що присутні у вакцині. Вакцинні композиції, що описуються в даній заявці, не обмежені біологічними препаратами, які покращують імунітет проти конкретного захворювання або патогену.
Термін "Т-хелперний епітоп (Тп-епітоп)" за винаходом стосується Тп-епітопів, отриманих з чужорідних патогенів, включаючи, як необмежувальні приклади, Т-хелперні епітопи поверхневого (НВзЗАд) і корового антигену гепатиту В (НВс), Т-хелперні епітопи коклюшного токсину (РТ Ті), Т-хелперні епітопи правцевого токсину (ТТ ТІ), Т-хелперні епітопи білка ЕЕ вірусу кору (ММЕ Ті), Т-хелперні епітопи основного білка зовнішньої мембрани СпПіатуаїйа бо маспотаїйв (СТ Ті), Т-хелперні епітопи дифтерійного токсину (ОТ ТР), Т-хелперні епітопи спорозоїту Ріазтодіцт Таісірагит (РЕ ТР), Т-хелперні епітопи триозофосфатизомерази
Зспівіозота тапзопі (5М ТИ), Т-хелперні епітопи Тга ЕзсПегіспіа соїї (Тта ТИ). Отримані з патогенів Тп-епітопи, вибрані в цьому випадку як типові приклади проміскуїтетних Тп-епітопів, наведені як 5ЕО ІЮ МО: 2-9 і 42-52 у патенті США Мо 5759551 і включені в даний опис як посилання.
Застосовні Тп-епітопи також можуть включати комбінаторні Тп-епітопи. У У/апоа еї аї. (ММО 95/11998) описували конкретний клас комбінаторних Трп-епітопів, "структуровану синтетичну бібліотеку антигенів" (З5АЇ). Тп-епітопи З5АЇ. містять множину Тп-епітопів з амінокислотними послідовностями, організованими навколо структурного каркасу інваріантних залишків із замінами в конкретних положеннях. Послідовності 55АЇ визначають, зберігаючи відносно інваріантні залишки та одночасно варіюючи інші залишки для забезпечення розпізнавання різноманітних елементів МНС-рестрикції. Це можна здійснювати, вирівнюючи первинну амінокислотну послідовність проміскуїтетних Тп-ептопів, вибираючи і зберігаючи як кістяковий каркас, залишків, що відповідають за унікальну структуру Тп-пептиду, і варіюючи решту залишків відповідно до відомих елементів МНС-рестрикції. Доступні списки інваріантних і варіабельних положень з переважними амінокислотами елементів МНС-рестрикції для отримання МНСОС-єднальних мотивів. Ними можна керуватися при дизайні З5АЇ Тр-епітопів (Меївіег єї а!., Массіпе, 1995; 13:581-591). В одному з варіантів здійснення ТПп-епітоп включає
ЗЕО ІЮО МО: 2, 3, 4 і/або 5, як представлено в таблиці 1.
ЗЕО ІЮО МО: 6 стосується пептидного фрагмента, отриманого з білка інвазину патогенних бактерій Мегвіпіа 5рр., білка зовнішньої мембрани мікроорганізму, опосередкованого проникнення бактерій у клітини ссавців. Показано, що у випадку інвазії бактерій у культивовані клітини ссавців необхідна взаємодія між молекулою інвазину МУегзіпіа і деякими молекулами з
В1-сімейства інтегринів, що є присутнім на культивованих клітинах. Оскільки Т-лімфоцити багаті на В1-інтегрини (особливо активовані або Т-клітини пам'яті), і демонстровані костимуляторні властивості Т-клітин асоційовані з цим доменом інвазину, їх можна зв'язати з проміскуїтетним
Ти-епітопом, що містить конструкції ЇНКН, для додаткового підвищення імуногенності сконструйованого пептидного імуногену (патент США Мо 6025468).
Пептиди за винаходом включають щонайменше один ІНЕН, Тп-епітоп і, необов'язково,
Зо костимуляторний пептидний домен інвазину. Пептид І НКН (включаючи його гомологи) можна ковалентно зв'язувати його М-кінцневими амінокислотами за допомогою спейсеру з пептидом, який містить щонайменше одну послідовність, про яку відомо, що вона містить Тп-епітоп. ТА- епітоп можна ковалентно зв'язувати його М-кінцем з костимуляторним пептидним доменом інвазину. Спейсер включає, як необмежувальні приклади, Спу-Стіу, Гуз, ЄМ уз, ЄМ уз-(І уз)п, де п-від 1 до 3, або І увз-І ув-І ув-єМІ уз (ЗЕО ІО МО: 11) і тому подібне.
Пептиди за винаходом містять від приблизно 20 до приблизно 100 амінокислотних залишків, переважно - від приблизно 20 до приблизно 70 амінокислотних залишків, і більш переважно - від приблизно 25 до приблизно 50 амінокислотних залишків. В іншому переважному варіанті здійснення пептид містить від приблизно 27 до приблизно 45 амінокислотних залишків.
Кількість Тп-епітопів включає, як необмежувальні приклади, один, два, три, чотири або більше Трп-пептидів, як представлено в таблиці 1 опису. Пептиди за винаходом містять щонайменше один пептид Тп-епітопів, вибраних з ЗЕО ІЮ МО: 2, 3, 4, 5, що, необов'язково, можна з'єднувати з М-кінцем пептиду І НКН 5ЕО ІО МО: 1. В одному з варіантів здійснення Тп- епітопи можна з'єднувати з М-кінцем ГНЕКН для отримання пептиду за винаходом. Наприклад, пептиди 5ЕО ІО МО: 2 ії З можна послідовно з'єднувати з М-кінцем ГНКН за допомогою спейсерів (Спіу-СТІу, уз або єМ( уз). Фахівець у цій галузі буде змінювати кількість Тп-епітопів і типи спейсерів, з'єднаних з пептидним імуногеном ІНЕКН, для отримання оптимального пептиду за винаходом, за необхідністю.
В іншому варіанті здійснення пептиди за винаходом містять ЗЕО ІЮ МО: 7, 8, 9 і/або 10, як представлено в таблиці 2, або мають щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95 або щонайменше 99 95 подібності з ними.
Пептиди за даним винаходом можна отримувати способами хімічного синтезу, як правило, добре відомими фахівцям в цій галузі; див., наприклад, Сгапі, ед. (1992) Бупіпеїййс Рерііде5: А
Ов5ег5 (зціде, МУ.Н. Ргеетап 5 Со., Мем/ МогК, М.У., рр. 382. Таким чином, пептиди можна синтезувати з використанням автоматизованого твердофазного синтезу /- трет- бутилоксикарбоніловим (1-Вос) або 9-втореніл-метилоксикарбоніловим (Б-тос) способом за допомогою Аррієй Віозузієт5 Реріїде бупіпезілег моделі 430А або 431. Для синтезу полілізинового корового залишку використовують незахищені ди(Ї-Вос)- або ди(Е-тос)-Ма, Ме- бо лізинові залишки замість Ї-Вос або Б-тос із захищеної є-аміногрупи. Для покращення розчинності сконструйованого пептиду його можна подовжувати за допомогою додаткових залишків серину і/або лізину на М-кінці. Після повного складання бажаного пептиду смолу обробляють стандартними способами для відщеплення пептиду від смоли і деблокування захисних груп на бічних ланцюгах амінокислот. Вільний пептид очищують за допомогою ВЕРХ і біохімічно охарактеризовують. Альтернативно, довші пептиди можна синтезувати добре відомими способами рекомбінантної ДНК. У будь-якому стандартному посібнику з технології
ДНК представлені детальні способи отримання пептидів за винаходом.
Пептид за винаходом при використанні як ключового інгредієнта у вакцинному складі може призводити до імунокастрації, включаючи втрату фізичних і/або хімічних характеристик, асоційованих зі статевою зрілістю, таких як статева поведінка, бійки, міграція, агресивна статева поведінка, небажані органолептичні характеристики, пухлини репродуктивних органів і вагітність, цикл статевого бажання, фертильність, вагітність, і пухлини репродуктивних органів у імунізованої тварини. Таким чином, інгібування характеристик включає інгібування статевої активності (наприклад, запобігання вилізанню одного самця великої рогатої худоби на іншого самця), запобігання або затримку овуляції, зменшення сім'яників і придатків яєчка, зниження концентрації тестостерону, зниження агресивної поведінки або зниження небажаних органолептичних характеристик, таких як присмак кнура.
Пептиди за винаходом складають для зручного та ефективного введення в ефективних кількостях з придатним фармацевтично прийнятним носієм у стандартній лікарській формі, як представлено в даному описі. Стандартна лікарська форма, наприклад, може містити основний пептидний антиген в кількості в діапазоні від 0,5 мкг до приблизно 2000 мкг, як правило, переважно, більше 6,25 мкг, найбільш переважно - 25 мкг, 30 мкг, 40 мкг, 50 мкг, 60 мкг, 70 мкг, 80 мкг, 90 мкг, 100, 150 або 200 мкг. У випадку композицій, що містять додаткові активні інгредієнти, дози визначають з урахуванням загальноприйнятої дози і способу введення зазначених інгредієнтів.
Даний винахід також стосується композицій, які містять фармацевтично прийнятні системи доставки для введення пептидних імуногенів. Композиції містять імунологічно ефективну кількість щонайменше одного пептиду за даним винаходом. Кількість пептиду за винаходом включає, як необмежувальні приклади, один, два, три, чотири або більше в композиції (вакцині)
Ко) за винаходом. Наприклад, композиція за винаходом містить ЗЕО ІЮ МО: 7, 8, 9, 10 або їхню суміш. В одному з варіантів здійснення композиція за винаходом включає один пептид з БЕО ІЮ
МО: 7, 8, 9 або 10. В іншому варіанті здійснення композиція за винаходом включає 5ЕО ІЮО МО: 7, 8 ї 9, що позначаються як | НКНЗ в наступних прикладах. В іншому варіанті здійснення композиція за винаходом включає 5ЕО ІЮ МО: 10, що позначається як ГНКНІ в наступних прикладах. При складанні в такий спосіб композиції за даним винаходом, що містять І НЕН або його гомолог як антигенну ділянку-мішень, використовують для запобігання появи/видалення присмаку кнура, підвищення профілю росту, імунокастрації свиней і контрацепції самців і самиць.
Пептидні імуногени за винаходом можна складати у вигляді імуногенних композицій з використанням ад'ювантів, емульгаторів, фармацевтично прийнятних носіїв або інших інгредієнтів, які загальноприйнято використовуються у вакцинних композиціях.
Ад'юванти або емульгатори, які можна використовувати в даному винаході, включають галуни, неповний ад'ювант Фрейнда (ІРА), ліпосин, сапонін, сквален, 1121, емульсиген, монофосфорилліпід А (МР), 2521, і ІА 720, ІЗА 50, ІЗА 50М2, І5А 35 або ІЗА 206, а також інші ефективні ад'юванти і емульгатори. Фахівець у цій галузі легко визначить склади, і вони також включають склади з негайним вивільненням і/або уповільненим вивільненням. Вакцини за даним винаходом можна вводити у будь-який зручний спосіб, включаючи підшкірний, пероральний, внутрішньом'язовий, інтраперитонеальний або інший парентеральний або ентеральний спосіб. Аналогічно, імуногени можна вводити у вигляді однократної дози або багаторазових доз. Фахівці в цій галузі, як правило, легко визначають схеми імунізації.
В конкретному варіанті здійснення засобом доставки та ад'ювантом є Мопіапіде"м ІБА 50М2 (масляна композиція вакцинного ад'юванта, що складається з рослинної олії та олеату маніду, для отримання емульсій "вода-в-маслі" (тобто м/0)), ГуеєпФ 80 (також відомий як: полісорбат 80 або поліоксіетилен (20) сорбітан моноолеат), СрОо-олігонуклеотид, і/або будь-яка їхня комбінація. В іншому варіанті здійснення фармацевтична композиція є емульсією "вода-в-маслі- у-воді" (тобто м/0/м) з емульсигеном або емульсигеном О як ад'ювант. Даний винахід також стосується інших інгредієнтів, які загальноприйнято включаються у вакцинні склади, та інструкцій з дозування таким чином, що досягають збалансованої В- і Т-клітинної імунної відповіді. бо Фармацевтичні форми, що підходять для ін'єкційного застосування, включають стерильні водні розчини (водорозчинні) або дисперсії і стерильні порошки для екстемпорального отримання стерильних ін'єктованих розчинів або дисперсії. Вони мають бути стабільними в умовах виробництва і зберігання і захищеними від контамінації мікроорганізмами, такими як бактерії і грибки. Носій може бути розчинником або дисперсійним середовищем, що містить, наприклад, воду, етанол, поліол (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь і рідкий поліетиленгліколь і тому подібне), їхні придатні суміші і рослинні олії. Можна підтримувати правильну текучість, наприклад, з використанням покриття, такого як лецитин, за допомогою підтримки необхідного розміру частинок у випадку дисперсії і з використанням поверхнево- активних речовин. Запобігання дії мікроорганізмів можна досягати за допомогою різних антибактеріальних і протигрибкових засобів, наприклад, парабенів, хлорбутанолу, фенолу, сорбінової кислоти, тіомерсалу і тому подібне. У багатьох випадках переважним може бути включення ізотонічних засобів, наприклад, цукрів або хлориду натрію. Пролонгованої абсорбції або відстроченого вивільнення ін'єктованих композицій можна досягати з використанням композицій засобів, що сповільнюють абсорбцію, наприклад, моностеарату алюмінію і/або желатину.
Винахід також стосується способу індукування титру антитіл проти ІНКН, зниженню концентрації тестостерону, запобігання появи присмаку кнура, зменшення сім'яників і придатків яєчка, імунокастрації свиней і контрацепції за допомогою введення пептидних композицій за винаходом ссавцям протягом періоду часу.
Як правило, способом за винаходом можна індукувати титр антитіл проти І НЕН у свині, і титр антитіл проти ГНЕН становить більше 2,0, переважно - 2,5 або 3,0 (І од:іо) після однієї або двох вакцинацій. Способом за винаходом також можна супресувати концентрацію тестостерону у свиней, і концентрація тестостерону становить менше 2,5 нмоль/л, переважно - 2,0, 1,87 або 1,0 нмоль/л після однієї або двох вакцинацій. Крім того, способом за винаходом можна підвищувати масу тіла свиней, переважно - з підвищенням на 10 95 або більше.
Композиції за винаходом можна вводити будь-яким придатним, відомим у цій галузі способом, включаючи, як необмежувальні приклади, пероральне введення або введення за допомогою ін'єкції, переважно, внутрішньом'язової ін'єкції.
Композиція за даним винаходом містить ефективну кількість одного або декількох пептидних
Зо імуногенів за даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій. Така композиція в придатній стандартній лікарській формі, як правило, містить від приблизно 0,5 мкг до приблизно 1 мг пептидного імуногену на кг маси тіла. При введенні в багаторазових дозах її може бути зручно розділяти на відповідну кількість на дозу. Наприклад, дозу, наприклад, від 6,25 мкг до 200 мкг; переважно - 50 мкг, можна вводити за допомогою ін'єкції, переважно - внутрішньом'язово. Після неї можна вводити повторні (бустерні) дози. Дозування буде залежати від віку, маси тіла і загального стану здоров'я індивідуума, як відомо в галузі вакцин і терапії.
Винахід також стосується способу інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свиней, що включає введення ефективної кількості вакцинної композиції за винаходом.
Кількість і час введення доз необмежені способом за винаходом. Як правило, спосіб за винаходом включає щонайменше одну дозу, переважно - дві, три, чотири, п'ять доз або більше, переважно - дві дози або більше. Фахівцю в цій галузі відомо про підвищення кількості доз для індукування ефективності. Першу дозу можна вводити свиням у будь-якому віці (наприклад, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 тижнів). Часові точки вакцинації можна змінювати або модифікувати залежно від різних типів свиней, дозування, ад'юванта і способу введення.
Як правило, примування (введення першої дози) здійснюють після віку З, переважно - від З до 8 тижнів. Бустерну вакцинацію (введення другої дози), переважно, проводять через 3-13 тижні після примування. Стандартна схема буде включати від З до 13 тижнів між примуванням і введенням бустера.
В одному з варіантів здійснення переважна схема вакцинації буде наступною: примування будуть проводити приблизно у віці 8 тижнів, бустер будуть вводити приблизно у віці 16 тижнів, і у випадках, коли свиней умертвляють, це здійснюють через 6-8 тижнів після введення бустера.
Схема примування/бустерної вакцинації за винаходом підходить для свиней. Залежно від способів отримання, які використовуються у різних країнах, у багатьох випадках свині можуть не досягати віку 21 тижня.
Конкретні варіанти здійснення даного винаходу включають, як необмежувальні приклади, наступні: (1) Вакцинну композицію для кастрації свиней, що містить пептидний імуноген і ветеринарно прийнятний засіб доставки або ад'ювант, де пептидний імуноген містить (а) пептид НКН ЗЕО ІО МО: 1, і
(б) щонайменше один Т-хелперний епітоп, вибраний з групи, яка складається з ЗЕО ІО МО: 2, 3, 4 і 5, і, необов'язково, імуностимулюючий пептид ЗЕО ІМ МО:6, де пептид І НКН ковалентно зв'язаний своїм М-кінцевим залишком з Т-хелперним епітопом. (2) Вакцинну композицію за п. (1), де пептид ЇНЕН, Т-хелперний епітоп і, необов'язково, імуностимулюючий пептид, зв'язаний за допомогою сСіу-сіІу, єМГув, Гуз-єМ ув, Гувз-І убз-єМ ув,
Г ув-Г увз-І убз-єМІ уз (ЗЕО ІО МО: 11), єм ув-І уз-Гуз або єМГуз-І ув-І ув-Г ув (ЗЕО ІО МО: 12) (3) Вакцинну композицію за п. (1), де пептидний імуноген містить 5ЕО ІЮ МО: 7, 8, 9 і/або 10, або їхню суміш. (4) Вакцинну композицію за п. (1), де ветеринарно прийнятний ад'ювант містить ІЗА5БО,
ІЗАБОМ2 або емульсиген 0. (5) Вакцинну композицію за п. (1), де загальна кількість пептидного імуногену становить від приблизно 12,5 мкг до 200 мкг на дозу. (б) Спосіб інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свині, що включає введення свині ефективної кількості вакцинної композиції за п. 1. (7) Спосіб за п. (6), де характеристика містить присмак кнура, статеву активність, статеву поведінку, фертильність і статеве бажання. (8) Спосіб за п. (б), де вакцинну композицію вводять за допомогою внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції. (9) Спосіб за п. (б), де першу дозу вакцинної композиції вводять свині у віці від З до 8 тижнів. (10) Спосіб за п. (6), де другу дозу вакцинної композиції вводять свині у віці від б до 16 тижнів.
Додаткові конкретні варіанти здійснення даного винаходу включають, як необмежувальні приклади, наступні: (1) Ветеринарну композицію, що містить: (а) пептидний імуноген, вибраний з групи, яка складається з () суміші ЗЕОІО МО: 7, 819, (і) «ЕОІО МО: 10, ї (ії) комбінації (1) і (ії); і (Б) ветеринарно прийнятний засіб доставки або ад'ювант.
Зо (2) Ветеринарну композицію за п. (1), де пептидний імуноген у (а) є () сумішшю ЗЕО ІЮО МО: 7,819. (3) Композиція за п. (2), де ветеринарно прийнятний ад'ювант містить ІЗА5БО, ІЗАБОМ2 або емульсиген 0. (4) Композиція за п. (2), де загальна кількість пептидного імуногену становить від приблизно 12,5 мкг до 200 мкг на дозу. (5) Спосіб інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свиней, що включає введення свині ефективної кількості композиції за п. (2). (6) Спосіб за п. (5), де характеристики включають присмак кнура, статеву активність, статеву поведінку, фертильність і статеве бажання. (7) Спосіб за п. (5), де композицію вводять за допомогою внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції. (8) Спосіб за п. (5), де першу дозу композиції вводять свині у віці від З до 8 тижнів. (9) Спосіб за п. (5), де другу дозу композиції вводять свині у віці від 6 до 16 тижнів. (10) Спосіб зниження продукції тестостерону і його похідних у тварини, що включає введення тварині ефективної кількості композиції за п. (2). (11) Ветеринарна композиція за п. (1), де пептидний імуноген у да) є (ії) ЗЕО ІЮО МО: 10. (12) Композиція за п. (11), де ветеринарно прийнятний ад'ювант містить ІЗА5БО, ІЗА5БОМ2 або емульсиген 0. (13) Композиція за п. (11), де загальна кількість пептидного імуногену становить від приблизно 12,5 мкг до 200 мкг на дозу. (14) Спосіб інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свиней, що включає введення свині ефективної кількості композиції за п. (11). (15) Спосіб за п. (14), де характеристики включають присмак кнура, статеву активність, статеву поведінку, фертильність і статеве бажання. (16) Спосіб за п. (14), де композицію вводять за допомогою внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції. (17) Спосіб за п. (14), де першу дозу композиції вводять свині у віці від З до 8 тижнів. (18) Спосіб за п. (14), де другу дозу композиції вводять свині у віці від 6 до 16 тижнів. (19) Спосіб зниження продукції тестостерону і його похідних у тварини, що включає бо введення тварині ефективної кількості композиції за п. (11).
ПРИКЛАД 1
Синтез пептиду І НКН
Способи синтезу конструкцій спорідненого ЇНКН пептиду, включені в дослідно- конструкторські роботи для дизайну ефективної, спрямованої проти І НКН вакцини і складання, описані нижче. Пептиди можна синтезувати в малому масштабі, що застосовується для лабораторних пілотних і польових досліджень, а також у великому масштабі (кілограми), що застосовується для промислового/комерційного отримання вакцинних складів і серологічних аналізів.
Для скринінгу і селекції найоптимальніших пептидних конструкцій для застосування в ефективній вакцині проти ІГНКН конструювали широкий репертуар споріднених ІНЕКН антигенних пептидів, що мають послідовності довжиною від приблизно 10 до 40 амінокислот.
Кожна конструкція містить пептид ГНКН (ЗЕО ІЮ МО: 1), синтетично зв'язаний з ретельно сконструйованим Т-хелплерним (ТП) епітопом або імуностимулюючим пептидом, ідентифікованим у таблиці 1 (ЗЕО ІЮ МО: 2-6). Пептиди І НЕН, які використовуються у вакцині проти ІЇНКН за винаходом, являють собою 5ЕО ІЮ МО: 7-10.
Всі пептиди, які використовуються для дослідження імуногенності або зв'язаних серологічних тестів для детекції і/або вимірювання антитіла проти І НКН синтезували в малому масштабі способом Етос за допомогою пептидних синтезаторів Арріїєї Віозуєїет5 моделей 4З0А, 431 і/або 433. Кожний пептид отримували за допомогою незалежного синтезу на твердофазній підкладці з використанням захисту Етос на М-кінці і захисних групах бічного ланцюга трифункціональних амінокислот. Завершені пептиди відщеплювали від твердої підкладки і видаляли захисні групи бічного ланцюга за допомогою 90 95 трифтороцтової кислоти (ТЕА). Синтетичні препарати пептидів оцінювали за допомогою часопролітної мас-спектрометрії з лазерною іонізацією і десорбцією з рідкої матриці (МАСОІ-ТОЕ) для забезпечення правильного вмісту амінокислот. Кожний синтетичний пептид також оцінювали за допомогою обернено- фазової ВЕРХ (КР-ВЕРХ) для підтвердження профілю синтезу і концентрування препарату.
Незважаючи на суворий контроль способу синтезу (включаючи поетапний моніторинг ефективності складу), також отримували аналоги пептидів через непередбачені події протягом циклів елонгації, включаючи інсерцію, делецію, заміну амінокислот і передчасну термінацію.
Таким чином, синтезовані препарати, як правило, включали численні аналоги пептидів разом з цільовим пептидом. Незважаючи на включення таких непередбачених аналогів пептидів, отримувані препарати синтезованих пептидів все-таки були придатними для імунологічного застосування, включаючи імунодіагностику (як антигени для захоплення антитіл) і вакцинацію (як пептидні імуногени). Як правило, такі аналоги пептидів, навмисно сконструйовані або отримані за допомогою способу синтезу у вигляді суміші побічних продуктів, найчастіше є настільки ж ефективними, як очищений препарат бажаного пептиду, за умови, що розробляють спосіб ОС розпізнавання для моніторингу способу виробництва і способу оцінки продукту для забезпечення відтворюваності та ефективності кінцевого продукту, в якому використовують ці пептиди. Великомасштабний синтез пептидів у кількості від сотень грамів до кілограмів здійснювали за допомогою зробленого на замовлення автоматизованого пептидного синтезатора ОВІ 2003 в масштабі від 15 ммоль до 50 ммоль відповідно до того самого принципу твердофазного пептидного синтезу.
У випадку активних інгредієнтів, які використовуються в кінцевих вакцинних складах для польових досліджень, конструкції пептиду Ї НКН очищували за допомогою препаративної КР-
ВЕРХ з положистим градієнтом елюції та охарактеризовували за допомогою мас-спектрометрії
МА! 0І-ТОРЕ, аналізу амінокислот і ЕР-ВЕРХ на чистоту та ідентичність.
ПРИКЛАД 2
Отримання вакцинного складу
Суміш трьох пептидних імуногенів СНКН (СНКНЗ: 5ЕО ІО МО: 7, 8 ї 9) і одного пептидного імуногену (СНЕКНІ: 5ЕО ІЮ МО: 10) складали, відповідно, в емульсійній системі доставки "вода- в-маслі" (М//О) з використанням ад'юванта ІЗА від Зерріс (Ргапсе) або в емульсії "вода-в-маслі- у-воді" (МИОЛЛІ) з емульсигеном О від ММР (О5А). В короткому викладі, пептиди у фізіологічному розчині (20 95 мас./об. масі розчин) комбінували в рівних молярних співвідношеннях, асептично фільтрували (з використанням фільтрів 0,22 мкм), а потім змішували із засобом доставки
ІБА5ОМ2 або ад'ювантом емульсигеном Ю за допомогою гомогенізації. Способи складання перевіряли на всьому їхньому протязі на в'язкість. Кінцеві продукти охарактеризовували за допомогою тестування ідентичності, фізичного тесту і тесту на стерильність. Всі способи складання, наповнення та упакування здійснювали в чистому приміщенні для підтримки стерильних умов. (510) ПРИКЛАД З
Імунізація самців свиней різними дозами вакцинних складів І! НКНЗ (ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9)
Загалом для дослідження використовували 40 кнурів віком 8 тижнів і 8 хірургічно кастрованих свиней. Цих свиней поділяли на групи по 8 свиней на групу, як представлено в таблицях З і 4, при цьому ГНЕНЗ (ЗЕО ІО МО: 7, 8 і 9) складали з ад'ювантом на основі масла (Мопіапіде"М ІБАБОМ або ІБА5БОМ2) для отримання емульсії "води-в-маслі" (МУ/О), як представлено в таблиці З (групи 1-4), або з ад'ювантом на основі масла емульсигеном О для отримання емульсії "воді-в-маслі-у-воді" (МИ/ОЛЛІ/), як представлено в таблиці 4 (групи 8-11), для підвищення імуногенності кінцевих вакцинних продуктів. Три контрольні групи включали свиней, яким вводили фізіологічний розчин, як негативні контролі (групи 5 і 12), хірургічно кастрованих свиней як позитивні контролі (групи 6 і 13) і свиней, яким вводили вакцину, що знаходиться на сучасному рівні техніки, ЇНЕН ІтргомасфФ для прямого порівняння ефективності (групи 7 і 14).
Зразки крові збирали через 0, 4, 8, 10, 12, 14 і 16 тижнів після вихідної імунізації (або М/РІ) для вимірювання титрів антитіл проти ГНКН в сироватці і концентрацій тестостерону в сироватці, відповідно, у свиней. а. Титрування антитіл проти ІНКН у сироватці за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГ ІЗА).
Розробляли аналіз ЕГІЗА, який використовується для оцінки титрів антитіл проти І НКН у сироватці, і він описаний нижче.
Ямки 96-ямкових планшетів окремо покривали протягом 1 години при 372С 100 мкл окремих цільових пептидів у кількості 2 мкг/мл окремо або як еквімолярну суміш, якщо конкретно не зазначено інше, у 10 мМ буфері Мансо», рН 9,5, якщо конкретно не зазначено інше.
Покриті пептидом ямки інкубували з 250 мкл З 95 мас. желатину в РВ5 при 3720 протягом 1 години для блокування неспецифічних ділянок зв'язування білка з наступними трьома промиваннями РВ5, що містить 0,05 95 об. ТмуеепФ 20, і сушили. 100 мкл розбавлених зразків сироваток додавали в кожну ямку і дозволяли реагувати протягом 60 хвилин при 3720. Потім ямки шість разів промивали 0,05 95 об. ТмеепФ 20 у РВ5 для видалення антитіл, що не зв'язалися. 100 мкл мічених пероксидазою антитіл кози проти Ідс: свині в попередньо протитрованому оптимальному розбавленні і в 1 95 об. нормальної сироватки кози з 0,05 95 об.
ТмжеєпФ 20 у РВ5 додавали в кожну ямку і інкубували при 372 ще протягом 30 хвилин. Ямки шість разів промивали 0,05 95 об. ТуеєпФ 20 у РВ5 для видалення антитіла, що не зв'язалося, і проводили реакцію з 100 мкл суміші субстратів, що містить 0,04 95 за масою 3,3,5,5'- тетраметилбензидину (ТМВ) і 0,12 95 об. пероксиду водню в буфері цитрату натрію ще протягом 15 хвилин. Цю суміш субстратів використовували для детекції пероксидазної мітки з утворення забарвленого продукту. Реакції зупиняли додаванням 100 мкл 1,0 М Но5О»х4 і визначали поглинання при 450 нм (Азво).
Розбавлення сироватки здійснювали відповідно до мети для виміру титрів антитіл проти
ІЇНКН у сироватці. Для визначення титрів антитіл у свиней, яким вводили вакцинні склади на основі пептиду ГНЕН, здійснювали 10-кратне серійне розбавлення сироваток від 1:10 до 1:10000 для ЕГІЗА ії титр в тестованій сироватці, що виражається як І 0д:іо, обчислювали за допомогою лінійного регресійного аналізу Адво.
Відповідно до фіг. Та і 1р, за винятком груп негативного контролю (групи 5 і 12) і хірургічно кастрованих тварин (групи 6 і 13), всі групи, яким вводили тестовані ЗЕО ІО МО: 7, 81 9, демонстрували високий титр антитіл проти І НЕН через два тижні після введення бустера в 10
МІРІ (вік 18 тижнів). Титри антитіл у вакцинованих групах (групах 1-4 і групах 8-11) зберігалися близькими до 3,0 (І одіо) або вище до 16 М/РІ (вік 24 тижні), часу продажу свиней на ринку, не тільки у випадку груп, яким вводили склад з ІЗА5БОМ2 (групи 1-4), але також і груп, яким вводили склад в емульсигені О (групи 8-11). На відміну від цього, титри антитіл у свиней, яким вводили
Ітргомасф (група 7), підвищувалися тільки до 14 М/РІ, через 2 тижні після введення бустера, при цьому титри антитіл були нижчими, ніж у випадку пептидної вакцини за винаходом (групи 1-4 і групи 8-11). р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці
Концентрацію тестостерону (ТТ) у сироватці вимірювали за допомогою комерційних наборів для ЕГІ5ЗА або КІА. Набори включали набір для ЕГІЗА тестостерону ОКОФ (ЕІА-5179), набір для ЕГІЗА ВіоМепаог і набір для КІА Зеатап5. У цьому конкретному прикладі концентрації тестостерону в сироватці в групах 1-4 і групах 8-11, яким вводили склад в ІЗАБОМ2 або емульсигені 0, відповідно, вимірювали за допомогою набору для ЕГІЗА тестостерону ОКОФ, при цьому вона зворотно корелювала з відповідними титрами антитіл у сироватці свиней, при цьому концентрації знижувалися нижче порогового значення кастрації (1,87 нмоль/л, в цілому, або 1,0 нмоль/л при суворіших критеріях) через два тижні після введення бустера (тобто 10 МУРІ бо або у віці 18 тижнів). У свиней у всіх інших групах, яким вводили склад в ІЗА5ОМ2 або емульсигені 0, підтримувався рівень тестостерону, що відповідає кастрації, як показано на фіг. га і 260, аж до 16 М/РІ (тобто віку 24 тижні), вікна для продажу свиней на ринку. Результати свідчать про те, що вакцинний склад ГНКНЗ за винаходом демонстрував дозозалежне інгібування тестостерону, і в групах 4 і 11 спостерігали вищий рівень інгібування порівняно з іншими групами.
Порівняно зі свинями, яким вводили вакцинні склади, у свиней у групах негативного контролю і контрольних кастрованих тварин завжди спостерігали фоновий рівень низьких титрів антитіл проти І НЕН, при цьому концентрації тестостерону в сироватці коливалися у негативних контролів («у групах 5 і 12) як некастрованих тварин; у випадку свиней в групах позитивних хірургічно кастрованих контролів (групах б і 13) концентрації тестостерону в сироватці зберігалися на низькому рівні кастрації.
У свиней, яким вводили вакцину ІНЕН ІтргомасФ),, зберігався високий рівень концентрації тестостерону в сироватці до 12 М/РІ, коли вводили бустер, і такий рівень знижувався після 14
МУРІ, тобто через два тижні після введення бустера. Результати чітко свідчать про те, що
ІтргомасФ не є настільки ж потужною, як вакцинні склади за винаходом (групи 1-4 і групи 8-11, яким вводили склади, що містять пептид 5ЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9 у ІЗАБОМ2 або емульсигені 0) для імунокастрації свиней. с. Маса тіла
Відповідно до фіг. За і Зр, масу тіла свиней перевіряли весь час від преімунізації (у віці З тижнів) до кінця дослідження (16 МУРІ, у віці 24 тижні). Результати свідчили про вплив вакцинації на масу тіла тварини. Всі свині, яким вводили фізіологічний розчин як негативні контролі і яким проводили хірургічну кастрацію як позитивні контролі, мали значно нижчі середні маси тіла 94,9 кг (негативний контроль, групи 5 і 12) і 88,8 кг (хірургічно кастровані контрольні тварини, групи 6 і 13), відповідно, у віці 24 тижні. Порівняно зі свинями, яким проводили хірургічну кастрацію (групи 6 і 13), свині, яким вводили вакцинні склади за винаходом в кількості 200 мкг/мл/дозу (групи 4 і 11) мали значно вищу економічну перевагу в прирості маси тіла приблизно на 27,9 9.
ПРИКЛАД 4
Імунізація самців свиней різними дозами вакцинних складів І НЕНІ (ЗЕО ІЮ МО: 10)
У цьому прикладі спосіб був схожим зі способом з прикладу З, за винятком того, що
Зо пептидний імуноген у даному вакцинному складі заміняли ЗЕО ІЮ МО: 10, ї дозу заміняли відповідно до таблиць 5 і 6. Після імунізації сироватки всіх тварин збирали в різні моменти часу для визначення титрів антитіл проти І НКН і відповідних концентрацій тестостерону в сироватці.
Крім того, під час умертвіння також збирали статеві органи (сім'яники і придатки яєчка) свиней віком 24 тижні для вимірювання маси. а. Титрування антитіл проти І НЕКН у сироватці за допомогою ЕГІЗА
Відповідно до фіг. 4а і 4р, за винятком груп негативного (фізіологічний розчин) і позитивного (хірургічна кастрація) контролю, всі тестовані групи, яким вводили склад, що містить пептидний імуноген 5БЕО ІЮ МО: 10, мали високий титр антитіла проти І НКН через два тижні після введення бустера в 10 М/РІ (вік 18 тижнів). Титри антитіл зберігалися близькими до 3,0 (І 0910) або вище до 16 МУ/РІ (вік 24 тижні), вікна для продажу свиней на ринку, не тільки у випадку свиней у групах 1-4, яким вводили склад в ад'юванті ІЗАБОМ2, але також свиней у групах 7-10, яким вводили склад в ад'юванті емульсигені 0. р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці
Відповідно до фіг. 5а і 5р, концентрації тестостерону в сироватці свиней у групах 1-4, яким вводили склад в І5АБОМ2, або в групах 7-10, яким вводили склад в емульсигені 0, зворотно корелювали з відповідними титрами антитіл, і всі з них досягали рівня нижче порогового значення кастрації («1,87 нмоль/л) через два тижні після введення бустера (тобто 10 М/РІ, вік 18 тижнів). За винятком найменшої дози в групах 1 і 7, свині у всіх інших групах, яким вводили склад в ІБАБОМ2 або емульсигені 0, зберігали рівень тестостерону в сироватці, що відповідає кастрації, до 16 МУРІ (віку 24 тижні), що являє собою вікно для продажу свиней на ринку. с. Маса тіла
Відповідно до фіг. ба і бо, масу тіла свиней перевіряли весь час від преїімунізації (віку З тижні) до кінця дослідження (16 МУ/РІ, вік 24 тижні). Результати свідчили про вплив вакцинації на масу тіла тварини. Свині, яким вводили фізіологічний розчин як негативні контролі і яким проводили хірургічну кастрацію як позитивні контролі, мали значно нижчу середню масу тіла 94,9 кг (негативні контролі, групи 5 і 11) і 88,8 кг (хірургічно кастровані контролі, групи 6 і 12), відповідно, у віці 24 тижні. Порівняно зі свинями, яким проводили хірургічну кастрацію (групи 6 і 12), свині, яким вводили вакцинні склади (групи 4 і 10) за даним винаходом, мали значно вищу економічну перевагу в прирості маси тіла приблизно на 20,3 95. (510) ПРИКЛАД 5
Тривалість імунітету у свиней, яким вводили різні дози вакцинних складів І НКНІ (5ЕО І
МО: 10)
У цьому прикладі спосіб був схожим зі способом з прикладу 3, за винятком того, що пептидний імуноген заміняли ЗЕО ІЮО МО: 10 при дозуванні, наведеному в таблиці 7. Після імунізації сироватки збирали в різні моменти часу для визначення титрів антитіл проти І НЕН і відповідних концентрацій тестостерону в сироватці. Крім того, також збирали статеві органи (сім'яники і придатки яєчка) свиней після умертвіння у віці 32 тижні для вимірювання маси.
Метою цього дослідження було розширення польового дослідження до 24 М/РІ, або віку 32 тижні, при цьому зразки сироватки збирали для вимірювання титрів антитіл проти ІНЕН і відповідних концентрацій тестостерону в сироватці для оцінки тривалості ефективності імунокастрації за допомогою вакцинних складів за винаходом з використанням стандартного способу імунізації з примуванням у віці 8 тижнів (0 М/РІ) і введенням бустера у віці 16 тижнів (8
МУРІ). а. Титрування антитіл проти І НКН у сироватці за допомогою ЕГІЗА
Як показано на фіг. 7, зразки сироватки свиней у групах 1-4 збирали через два тижні після введення бустера (тобто 10 М/РІ) і аналізували на титри антитіл проти І НЕН. Виявляли, що всі зразки мали титр антитіл проти ЇНЕН більше 3,0 (І0д:іо) і такі титри зберігалися на рівні 3,0 (ато) протягом 10-тижневого періоду до 20 М/РІ (тобто віку 28 тижнів). Крім того, у групах 2 і З зберігалися титри антитіл проти І НЕН на рівні 3,0 (І0д:іо) до 24 М/РІ (тобто віку 32 тижні). На відміну від цього, у групі негативного контролю (групі 5) і групі кастрованих контролів (групі б) завжди зберігався низький фоновий рівень титр антитіл. р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці
Як показано на фіг. 8, зразки сироватки свиней у групах 1-4 збирали через два тижні після введення бустера (тобто 10 М/РІ) і аналізували на концентрацію тестостерону в сироватці.
Виявляли, що всі зразки від свиней з груп 1-4 мають концентрації тестостерону в сироватці на рівні кастрації що є результатом супресії високими титрами антитіл проти ГНЕН. Рівні тестостерону в групах 1-4 зберігалися такими же низькими, як у групі хірургічно кастрованих контролів (групі б) до 20 М/РІ (тобто віку 28 тижнів). с. Зменшення статевих органів (сім'яників і придатків яєчка) після імунокастрації за допомогою вакцинних складів І НЕКНІ1
Наприкінці розширеного дослідження на 24 МУРІ (тобто свиней у віці 32 тижні) свиней умертвляли і зважували їхні статеві органи, включаючи сім'яники і придатки яєчка, для оцінки ефективності імунокастрації. Виявляли, що сім'яники і придатки яєчка свиней з груп 1-4 зменшувалися до нефункціональних розмірів, як показано на фіг. 9-10. Маси сім'яників і придатків яєчка також корелювали з концентрацією тестостерону в сироватці. а. Маса тіла
Свині з групи 1-4 перевершували свиней у контрольних групах (групах 5 і 6) за приростом маси тіла, як показано на фіг. 11. е. Видалення присмаку кнура, вимірюване за концентраціями андростенону і скатолу в жирі на животі
У цьому дослідженні тривалості кількісна оцінка факторів присмаку кнура наприкінці дослідження показала, що ефективне видалення присмаку кнура в жирі на животі може розширювати вікно продажу свиней до 24 МУРІ (тобто віку 32 тижні). У цьому дослідженні, андростенон і скатол екстрагували з жиру на животі, коли свиней умертвляли, а потім визначали їх за допомогою ВЕРХ. Відповідно до фіг. 12, концентрації андростенону в жирі зберігалися на рівні нижче 0,5 мкг/г жиру у свиней в групах 1-4. Зокрема, у групі З середнє значення андростенону зберігалося на рівні до 0,1384 мкг/г жиру. Відповідно до фіг. 13, концентрація скатолу зберігалася на рівні нижче 0,1 мкг/г жиру у свиней у групах 1-3. У свиней у групі З виявляли найменше середнє значення скатолу 0,0514 мкг/г.
Крім того, будували графіки окремих концентрацій андростенону і скатолу в конкретному зразку для оцінки факторів ризику появи присмаку кнура і розділяли їх на чотири сектори, низький, середній/низький, середній/високий і високий, для всіх зразків, зібраних у цьому дослідженні, як показано на фіг. 14. Відповідно до фіг. 14, у групі хірургічно кастрованих тварин (групі 6) завжди зберігалася найменша концентрація факторів присмаку кнура. Зразки від свиней у групі З мали виняткові властивості, при цьому всі зразки потрапляли в сектор низького ризику до 24 МУ/РІ. Зразки від свиней з групи 2 мали добрі властивості до 24 МУ/РІ, коли 7/8 зразків потрапляли в сектор низького ризику, а один зразок - в сектор високого ризику. Зразки свиней з групи 1 мали властивості, схожі з властивостями в групі 2, при цьому 7/8 зразків потрапляли в сектор низького ризику, а один зразок - в сектор середнього/високого ризику. На бо відміну від цього, у контрольній групі, якій вводили фізіологічний розчин, лише 2/8 зразків потрапляли в сектор низького ризику, 2/8 - у сектор середнього ризику, і 4/8 - у сектор високого ризику (фіг. 14). Вакцинні склади ГНКНІ за винаходом демонстрували активність видалення присмаку кнура весь час до 24 МУРІ (тобто віку 32 тижні). Результати, отримані в цьому дослідженні, чітко свідчили про те, що у свиней, яким вводили вакцинні склади ЇНКНІ за винаходом в різних дозах, можна ефективно супресувати продукцію андростенону і скатолу і, таким чином, видаляти присмак кнура з відповідних м'ясних продуктів.
ПРИКЛАД 6
Ефект схеми імунізації відносно імунокастрації з примуванням і введенням бустера, які здійснювались з різними тимчасовими інтервалами з використанням вакцинних складів І НЕН 1
В цьому прикладі спосіб був схожим зі способом з прикладу 3, за винятком того, що пептидний імуноген, який використовувався у вакцинних складах, заміняли 5ЕО ІЮО МО: 10 з ад'ювантом І5АБОМа2, і часові точки примування і бустерної імунізації модифікували відповідно до таблиці 8. Сироватки збирали в різні моменти часу для вимірювання титрів антитіл проти
ІНКН і концентрацій тестостерону в сироватці.
Як показано на фіг. 15, у свиней у групі 1 спостерігали високу імуногенність з середнім титром антитіл проти ЇНКН, що вимірювалися на рівні 3,556 (І0д:о) у випадку свиней віком 22 тижні, і такі титри зберігалися на рівні 3,235 (І0д1о) до віку 26 тижнів. У випадку свиней у групі 2, виявляли найвищий титр антитіл на рівні 3,526 (І0д:о) У віці 18 тижнів, і він зберігався на рівні 2,869 (0910) у віці 26 тижнів. У випадку свиней у групі 3, через пізню схему бустерної імунізації у віці 18 тижнів, найвищий титр антитіл становив 3,219 (І0д:іо) У віці 20 тижнів через два тижні після введення бустера, і титр зберігався на рівні 2,682 (109 о) до віку 26 тижнів.
Крім того, як показано на фіг. 16, у свиней в групі 1 виявляли ефект імунокастрації (концентрація тестостерону «1,0 нмоль/л) у віці 20 тижнів, тобто через два тижні після введення бустера, при цьому ефект імунокастрації тривав протягом щонайменше б тижнів до віку 26 тижнів. У свиней у групі 2 також виявляли високу ефективність імунокастрації. Концентрація тестостерону у свиней з групи 2 становила менше 1,0 нмоль/л протягом періоду від 2 до 6 тижнів після введення бустера (тобто у віці 22 тижні) і зберігалася на відносно низькому рівні (концентрація тестостерону «1,644 нмоль/л) до віку 26 тижнів. Через два тижні після введення бустера середня концентрація тестостерону у свиней з групи З складала 4,535 нмоль/л.
Зо Концентрація тестостерону свиней з групи З знижувалася до 1,968 нмоль/л у віці 26 тижнів. Для фермерів вигідно починати примування свиней вакциною в більш ранньому віці, переважно, у віці приблизно З тижні, для простоти утримання тварин. Фермери також можуть вводити бустер свиням більш старшого віку, таким чином, забезпечуючи тимчасову буферну зону для працівників для імунізації свиней і забезпечення підтримки концентрації тестостерону на постійному низькому рівні кастрації в практичних цілях для операції імунокастрації на фермах.
Результати, представлені в цьому дослідженні, свідчать про те, що вакцинні склади за винаходом можна використовувати вже у віці від З до 4 тижнів і так пізно у випадку бустера, як у віці 18 тижнів. Схеми примування і введення бустера можуть призводити до високої імуногенності, що призводить до ефективної супресії концентрації тестостерону в сироватці у свиней у віці від 22 до 26 тижнів, що є загальноприйнятим у свинарстві вікном для продажу свиней на ринку.
ПРИКЛАД 7
Видалення присмаку кнура за допомогою вакцинних складів І НАНЗ
У свинарстві розроблений консервативний і дружній споживачу підхід для встановлення порогового значення андростенону на рівні 0,5 мкг/г жиру для оцінки фактору ризику присмаку кнура. Низького ризику отримання м'яса з присмаком можна досягати при середньому рівні андростенону (0,5-1,0 мкг/г жиру) у комбінації з низьким рівнем скатолу («0,1 мкг/г жиру) або при низькому рівні андростенону («0,5 мкг/г жиру) у комбінації з середнім рівнем скатолу (0,1-0,22 мкг/г жиру). Середній ризик буде виникати, коли обидва параметри (біомаркери) присмаку кнура виникають на середніх рівнях (андростенон 0,5-1,0 мкг/г жиру; скатол 0,1-0,22 мкг/г жиру). Якщо обидва біомаркери (андростенон і скатол) одночасно перевищують ці порогові значення, це буде означати високий ризик того, що м'ясо будуть вважати м'ясом з присмаком (таблиця 9).
У цьому прикладі спосіб був приблизно тим самим, що й у прикладі 3. Свиней імунізували з використанням ГНКНЗ (ЗЕО ІЮО МО: 7, 8 їі 9), складеного в ад'юванті ІЗАБОМ2 для отримання емульсії "вода-в-маслі" (М/С), як представлено в таблиці 10. Після імунізації, сироватки збирали в різні моменти часу для вимірювання концентрацій тестостерону в сироватці і титрів антитіл проти ІНЕКН. Крім того, збирали тканини та органи свиней для вимірювання маси сім'яників і придатків яєчка і для вимірювання кількості скатолу та андростенону в жирі на животі за допомогою ВЕРХ. 60 а. Зменшення сім'яників і придатків яєчка
Спостерігали зменшення сім'яників і придатків яєчка при зважуванні виділених органів, коли свиней умертвляли в різні моменти часу дослідження, тобто 10, 12, 14 і 16 М/РІ, відповідно (фіг. 17а-17а, відповідно). Виявляли, що після імунізації вакцинними складами (І НКНЗ) за винаходом сім'яники і придатки яєчка зменшувалися з часом під супресуючим впливом підвищених концентрацій антитіл проти ГНКН протягом цього дослідження зі значною втратою ваги, що спостерігається на 10 М/РІ у випадку придатків яєчка і на 12 М/РІ (р«0,05) у випадку сім'яників, як показано на фіг. 17. р. Вимір присмаку кнура 5 г хребтового шпику, зібраного у вакцинованих свиней або інтактних кнурів, окремо додавали в 1,5 мл 100 95 метанолу. Потім жир подрібнювали з використанням пресів на основі піску до повної гомогенізації тканин. Екстракт жиру переносили в центрифужні пробірки ємністю мл і обробляли ультразвуком протягом 5 хвилин при кімнатній температурі. Екстракт жиру охолоджували на льоду протягом 15 хвилин, а потім центрифугували при 4000 об./хв. протягом хвилин при 52С для відділення від тканинного дебрису. Супернатант переносили в іншу 15 центрифужну пробірку ємністю 1,5 мл.
Після імунізації свиней вакцинними складами піковий титр антитіл проти І НЕН з'являвся на 10 М/РІ, тобто через 2 тижні після введення бустера, при цьому рівень тестостерону знижувався приблизно до рівня кастрації приблизно 1,0 нмоль/л або нижче, що призводило до зниження концентрацій андростенону в жирі, як показано на фіг. 18а. Концентрації андростенону у 20 свиней, яким вводили вакцинні склади І НКНЗ за винаходом, знаходилися в діапазоні від менше 0,02 до 0,53 мкг/г жиру порівняно з концентраціями андростенону у свиней з групи негативного контролю, яким вводили фізіологічний розчин, що становили від приблизно менше 0,02 до 2,12 мкг/г жиру. Концентрація андростенону значно знижувалася на 10 МУРІ порівняно з контрольними групами (р«е0,05) до кінця цього дослідження на 16 МУ/РІ (у віці 24 тижні).
Крім того, концентрація скатолу у свиней, яким вводили вакцинні склади ГНКНЗ за винаходом, становила від приблизно 0,004 до 0,2 мкг/г жиру (фіг. 190) порівняно з концентрацією скатолу у свиней з групи негативного контролю, що становила від приблизно 0,04 до 0,36 мкг/г жиру (фіг. 19а2). Концентрації скатолу у свиней, яким вводили вакцинні склади
ІЇНКНЗ за винаходом, значно знижувалися лише на 14 МУ/РІ через те, що він найчастіше контролюється за допомогою корму, яким годують свиней, і метаболізується в похідні, такі як скатол, що зберігається у відповідній жировій тканині. За висновком галузі, якщо й андростенон, і скатол одночасно перевищують граничне значення (андростенон: 0,5 мкг/г жиру; скатол: 0,22 мкг/г жиру), це буде означати високий ризик, того, що м'ясо будуть вважати м'ясом із присмаком. Як показано на фіг. 19, результати свідчили про те, що всі зразки жиру, отримані з вакцинованих груп, стосуються сектора низького ризику при чутливій оцінці неприємного запаху з низькою концентрацією андростенону («0,5 мкг/г жиру) і низькою концентрацією скатолу («0,22 мкг/г жиру) на 10 М/РІ або 16 МУРІ; в той час як свині в групі негативного контролю мають приблизно 50 95-у схильність ризику того, що м'ясо низької якості буде мати неприємний запах при його готуванні.
ПРИКЛАД 8
Гнучкість схеми імунізації вакцинними складами І НЕНІ за винаходом
У цьому прикладі спосіб був схожим зі способом з прикладу 3, при цьому свиней імунізували пептидом ГНКНІ (ЗЕО ІЮО МО: 10), складеним в ад'юванті ІЗА5ОМ2 для отримання емульсії "вода-в-маслі" (ММ/О), як представлено в таблиці 11, за винятком того, що дозування складало 25 мкг/2 мл/дозу, і часові точки вакцинації модифікували відповідно до таблиці 11. а. Титрування антитіл проти І НЕН у сироватці за допомогою ЕГІЗА
Титр антитіл проти ІНКЕН на вихідній стадії цього дослідження становив 1,458-0,007 (І 0910) (середнє - 50), що являло собою фонове значення для аналізу. Після примування і бустерної імунізації (групи 1-3) титри антитіл поступово підвищувалися, і всі з них досягали рівнів через 2 тижні після введення бустера. Середній титр антитіл у групі 1 знижувався з 3,636-0,577 (І 0910) на піковому рівні на 10 УУРІ до 2,418--0,742 (І 0д:о) наприкінці дослідження. Середній титр антитіл у групі 2 знижувався з 3,868-0,221 (І 09д1іо) на найвищому рівні серед цих 4 груп до 2,806-0,213 (І 0д1о) наприкінці дослідження. Імунні відповіді в групах З і 4 були схожими за профілями антитіл. Результати свідчили про те, що 1-у імунізацію, переважно, можна проводити з віку 8 тижнів до віку З тижнів (фіг. 20). р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці
Як показано на фіг. 21, концентрації тестостерону у всіх групах на вихідній стадії експерименту становили 2,943--2,854 (середнє - 503) нмоль/л. Часовою точкою, встановленою для оцінки активності вакцини, був час через 2 тижні після введення бустера, коли, як правило, бо спостерігають найменшу концентрацію ТТ при імунокастрації. Грунтуючись на цьому спостереженні, виявляли, що середня концентрація тестостерону в групах 1-4 становить 1,265-0,353, 1,329-0,636, 1,904-2,297 і 1,222--0,445 (середнє - 50) нмоль/л, відповідно. Не спостерігали статистично значущих відмінностей (р-0,992) між групами, що аналізували за допомогою однобічного дисперсійного аналізу Краскела-Уоліса. Крім того, для титрів антитіл проти ГНКН спостерігали зворотну кореляцію з концентраціями тестостерону з коефіцієнтом кореляції -0,72, при цьому високий титр антитіл проти ЇНЕН призводив до низьких концентрацій тестостерону після введення бустера.
У випадку оцінки тривалості імунітету свині в групі З мали кращі властивості (тобто найменші концентрації тестостерону), при цьому їхня середня концентрація тестостерону в сироватці у віці 24 тижні становила 0,896-0,386 нмоль/л. Не спостерігали значущих відмінностей (Р-0,835) між групами З і 4. При просуванні за схемою концентрація тестостерону підвищувалася до 1,913--0,930 нмоль/л (група 2) і 4,149-3,603 нмоль/л (група 1). Спостерігали значущу відмінність між групами 1 і З (Р-0,010), що аналізували методом Дана. с. Вимірювання статевих органів
Прижиттєвий розмір сім'яників (довжину і ширину) вимірювали з віку 12 тижнів і обчислювали їхній об'єм з використанням наступної формули:
Об'єм сім'яника-1/2хахр-, де "а" є довжиною сім'яника "р" є шириною сім'яника
Вимірювання статевих органів включали (1) прижиттєві вимірювання сім'яника в довжину і ширину і (2) вимірювання маси, довжини і ширини сім'яника і придатку яєчка при некропсії.
Відповідно до фіг. 22 і 23, не спостерігали відмінностей у масі пари сім'яників, пари придатків яєчка і довжини яєчка між групами 1-4. Прижиттєві довжина та об'єм сім'яників (фіг. 22а і 2265) значно знижувалися до віку 22 тижні. Проте за кожним параметром свині в групі 2 мали кращий результат.
Розподіл концентрацій андростенону і скатолу у віці 24 тижнів показано на фіг. 24.
Відповідно до переважної категорії концентрації фактору присмаку кнура, 87,5 905 свиней з групи 1, З їі 4 стосувалися "низького ризику", що не є чутливим для почуття смаку і нюху людини. Всі свині в групі 2 потрапляли в зону "низького ризику", що, таким чином, відповідало 100 95
Зо ефективності. а. Маса тіла
В цьому дослідженні також вимірювали масу тіла кожної свині. Кожну групу свиней вирощували подібним чином. Середня маса для продажу свиней на ринку Тайваню становить приблизно 115 кг, чого можна досягати до віку 26 тижнів.
На закінчення, порівняно з програмою регулярної імунізації з примуванням і введенням бустера, що здійснюються у віці 8 ії 16 тижнів, відповідно, схему примування за даним винаходом можна легко пристосовувати для свині віком З тижні. Крім того, введення бустера можна здійснювати так пізно, як у віці від 14 до 16 тижнів, як показано в цьому дослідженні.
ПРИКЛАД 9
Дослідження гнучкості обробки на ранній стадії з використанням вакцинного складу І НЕКНІ1
У цьому прикладі спосіб був схожим зі способом з прикладу 3, за винятком того, що пептидний імуноген, який використовується у вакцинному складі, заміняли ЗЕО ІЮ МО: 10, і часові точки вакцинації модифікували відповідно до таблиці 12. Метою цього прикладу є оцінка тривалості кастрації якщо вакцинний склад вводять дуже маленьким поросятам, та імунологічна обробка призводить до атрофії статевих органів. Цей експеримент планували для оцінки "гнучких схем обробки" і для визначення найбільш раннього часу примування в схемі імунізації. а. Титрування антитіл проти І НЕН у сироватці
Як показано на фіг. 25, при ранній імунізації досягали середнього титру антитіл проти ГНКН 2,346-0,451 (І од'о) У віці 12 тижнів у групі 1, що імунізували у віці трьох днів (03) як примування та у віці трьох тижнів як бустер, і 2,173-0,527 (І од:о) У віці 6 тижнів у групі 2, що імунізували у віці семи днів як примування та у віці трьох тижнів як бустер (фіг. 25).
З цих груп тільки у свиней у групі З, яким проводили примування у віці три тижні і введення бустера у віці 6 тижнів, встановлювався високий титр антитіл проти І НЕН 2,767-0,476 (І одчо) У віці восьми тижнів. У випадку свиней у групах 1-3, після досягнення антитілами проти ГНКН найвищих титрів через два тижні після введення бустера, титри антитіл зберігалися на рівні 1,718-0,297, 1,765--0,340 і 1,7 70-0,283 (І одіо) у групах 1, 2, і 3, відповідно. Свиням у групах З і 4 також проводили примування, яке здійснювалося у віці трьох тижнів, а бустер вводили у віці 16 тижнів. У свиней в групах 4 і 5 можуть встановлюватися вищі титри антитіл 3,249-0,346 і 60 2,893--0,786 у віці 18 тижнів, відповідно, через два тижні після введення бустера у віці 16 тижнів.
Що стосується свиней, яким вводили комерційну вакцину ІтргомасФ (група 6), титри антитіл проти І НЕН досягали 1,724-0,339 (І одіо) у віці 20 тижнів, тобто через два тижні після введення бустера. Ані в позитивному контролі, тобто у свиней, яким проводили хірургічну кастрацію (група 7), ані в негативному контролі, тобто у свиней, яким не проводили вакцинацію (група 8), не спостерігали титри антитіл проти ЇНКН вище фонового рівня, значення якого при аналізі становило 1,451--0,006 і 1,445-0,010 (І сао), відповідно. р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці
Як показано на фіг. 26, рівень тестостерону в сироватці свиней у групах 1 і 2 знижувався до найменшої концентрації 2,154--0,921 нмоль/л у віці 10 тижнів і 2,183-1,231 нмоль/л у віці 6 тижнів, відповідно. У групі З першу дозу вводили у віці трьох тижнів, і профіль тестостерону є схожим з таким у групах 1 і 2. Найменший рівень тестостерону в групі З становив 3,065--0,205 нмоль/л у віці 12 тижнів.
Якщо бустерну імунізацію відкладали до віку 16 тижнів у групах 4 і 5, незалежно від того, чи вводили першу дозу у віці З або 8 тижнів, концентрація тестостерону знижувалася до низьких рівнів приблизно 0,586--0,184 і 0,893--41,192 нмоль/л у групах 4 і 5 у віці 20 тижнів, відповідно. На відміну від цього, хоча у випадку свиней у групі б дотримувались інструкцій з імунізації
ІтргомасФ, рівень тестостерону в сироватці у свиней залишався високим (приблизно 9,415--7,560 нмоль/л) у віці 20 тижнів. У випадку свиней у групі 7, яким проводили хірургічну кастрацію, концентрації тестостерону у кожної зі свиней завжди зберігався на фоновому рівні (приблизно 0,559--0,372 нмоль/л). Що стосується свиней у групі 8, яким не проводили вакцинацію і які служили як негативні контролі, середня концентрація тестостерону зберігалася на нормальному рівні (від 3,546--2,409 нмоль/л до 7,380-3,269 нмоль/л) протягом дослідження.
На закінчення, титри антитіл проти ГНКН можна ефективно індукувати з використанням примування вже у віці З тижнів і наступного введення бустера, підтримуючи високі титри таких антитіл до кінця дослідження, отримуючи профіль антитіл, схожий з профілем після схеми регулярної імунізації з примуванням у віці 8 тижнів і введенням бустера у віці 16 тижнів. Таким чином, концентрацію тестостерону в сироватці можна ефективно знижувати до низьких рівнів, якщо примування проводили у віці від З тижнів до 8 тижнів, у той час як бустер вводили у віці 16 тижнів. Фермерам зручно проводити імунокастрацію з використанням гнучкої схеми імунізації на
Зо ранній стадії у випадку свиней у віці З тижнів, коли, в основному, вводять багато інших вакцин.
ПРИКЛАД 10
Ефективна імунокастрація, продемонстрована в польовому дослідженні з використанням вакцинного складу ЇНКНЗ у концентрації 100 мкг/мл/дозу з примуванням і бустерною імунізацією, які здійснюються у віці 8 і 16 тижнів, із закінченням дослідження у віці 22 тижні.
Великомасштабне польове дослідження здійснювали на свинарській фермі, що знаходиться в південному Тайвані, для оцінки ефективності імунокастрації в польових умовах з використанням двох партій вакцинних складів ЇНКНЗ, що відповідають ОМР. У цьому дослідженні, на фермі отримували тридцять шість кросбредних самців свиней і вісім кастрованих свиней віком від 8 до 9 тижнів.
Свиней класифікували на 4 групи і зважували на 0, 8, 10, 12 ї 14 М/РІ. Всіх свиней імунізували на 0 і 8 М/РІ і забирали кров на 0, 8, 10, 12 і 14 М/РІ для визначення титрів антитіл проти ІНКН у сироватці і концентрацій тестостерону в сироватці, як представлено в таблиці 13.
Після умертвіння вимірювали маси статевих органів (сім'яників, придатків яєчка, сім'яних пухирців і передміхурових залоз), товщину хребтового шпику і площа м'язового вічка (довжелезного м'яза спини). а. Титрування антитіл проти І НЕН у сироватці за допомогою ЕГІЗА
Як показано на фіг. 27 і в таблиці 14, титри антитіл проти І НКН у свиней у групах 1 і 2 були значно вищими, ніж у свиней у групах З (інтактний контроль) і 4 (хірургічно кастрований контроль). Як приклад, рівні титрів антитіл проти ЇНКН становили приблизно від 1,52--0,12 (Годо) до 2,90--0,42 (І одіо) у групі 1 ї від 1,45--0,01 (І 0д:то) до 3,09--0,37 (І одіо) У групі 2. Для порівняння, всі титри антитіл проти І НКН у групах З і 4 були значно нижчими таких у групах 1 і 2. р. Оцінка концентрації тестостерону в сироватці для імунокастрації
Як показано на фіг. 28 і в таблиці 15, всіх свиней у групах 1 і 2 кастрували з коефіцієнтом імунокастрації 100 Фо після імунізації вакцинним складом І НКНЗ у концентрації 100 мкг/мл/дозу.
Концентрації тестостерону всіх свиней у групах 1 і 2 знижувалися до дуже низького рівня з 8
МІРІ до досягнення імунокастрації. Результати свідчили про те, що вакцинний склад І НКН З за даним винаходом може ефективно інгібувати характеристики статевої зрілості у свиней. с. Підвищення мас тіла у вакцинованих свиней бо Масу тіла кожної свині вимірювали, як зазначено в таблиці 16. Як спостерігали, маси тіла свиней у групах 1 і 2 перевершували такі в групі 3.
Як показано на фіг. 29 і в таблиці 17, підвищений середній добовий приріст маси (АОС) свиней був більшим у вакцинованих групах (групах 1 і 2) порівняно з кастрованими контролями (група 4). Підвищення АОС, в основному, було результатом підвищеного середньодобового споживання корму (АОРЇ), але не ефективності корму (БЕ). Результати цього польового дослідження свідчили про те, що вакцинний склад І НКНЗ за даним винаходом при введенні в кількості 100 мкг на дозу за схемою примування і введення бустера у віці 8 і 16 тижнів, відповідно, був високоефективним, щоб призводити до імунокастрації зі значно підвищеним ростом у самців свиней. У результаті цього підвищеного росту, свиней можна продавати на ринку більш ніж на два тижні вперед відносно загальноприйнятої схеми схрещування, таким чином, також досягаючи значної додаткової економічної вигоди для фермерів. а. Зменшення статевих органів
Наприкінці цього дослідження на 14 МУРІ (тобто у віці 22 тижні) свиней умертвляли і зважували сім'яники, придатки яєчка, сім'яні пухирці і передміхурову залозу для оцінки ефективності імунокастрації. У випадку свиней у групах 1 і 2 виявляли, що маси статевих органів, включаючи сім'яники, придатки яєчка, сім'яні пухирці і передміхурову залозу, значно знижувалися (таблиця 18), при цьому ці статеві органи зменшувалися до нефункціональних розмірів.
На закінчення, вакцинні склади на основі пептидного імуногену ГНКН за даним винаходом мають вищий ефект імунокастрації, ніж доступний у даний час комерційний (ІпргомасФ). На додаток до гуманного фактору перетворення загальноприйнятої хірургічної кастрації на імунокастрацію, що розвивається в галузі тваринництва, значне збільшення маси в результаті такої практики імунокастрації буде призводити до значної економічної вигоди, що буде висувати тенденцію кастрації тварин на передову після десятиліть досліджень.
Хоча даний винахід описаний за допомогою прикладів і в термінах переважних варіантів здійснення, слід розуміти, що винахід не обмежений варіантами здійснення, що описуються.
Навпаки, він призначений для охоплення різних модифікацій і схожих розстановок (як буде очевидно фахівцям в цій галузі). Таким чином, обсяг доданої формули винаходу має відповідати найширшій інтерпретації для включення всіх таких модифікацій і схожих
Зо розстановок.
Таблиця 1
Послідовності І НЕН, Тп-епітопів і костимуляторного пептидного домену інвазину з фщеннняняни Зроееиютю інвазину
Таблиця 2
Послідовності пептидних імуногенів ЇНКН за винаходом 8 |ТАКЗККЕРБУТАТУОРОСІЗЕІКОМІУНВІЕСУОСЕНМУВУСЬАРО 7771 9 |ТАКЗККЕРБУТАТУОРОСЕРИ ТВ ТІРОБІЕССЕНУУЗУСІАРО 77777771
Таблиця З
Дизайн дослідження складу І НКНЗ у ІЗА5ЗОМ2
Кіль- Досліджуваний Дозування Шлях Умер-
Мо групи | кість зразок (концентрація введе- |) 1-а доза | 2-а доза твіння тварин й пептиду) ння 118 о пнвналедвоме |вомшимлдоюу М де | яр | Р 1 в ІГНАНЗ /ЗАБОМ2 50 мкг/1 мл/дозу | І.М. МУР? МРІЙ МІРІ? 87 (0 167(8 | 227 (16 2 в ІНАНЗ/ЗАБОМ2 1100 мкг/ 1 мл/дозу| І.М. МУР? МР? МУР? 87 (0 167(8 | 227 (16
З в ІНАНЗ/ЗАБОМ2 1150 мкг/ 1 мл/дозу| І.М. МУР? МІРІ? МІРІ? 87 (0 167(8 | 227 (16 4 в ІНАНЗ/ЗАБОМ2 1200 мкг/ 1 мл/дозу| І.М. МУР? МІРІ? МІРІ?
Фізіологічний розчин 87 (0 167(8 | 224 (16 (негативний о мкг/ 2 мл/дозу Л.М. МИР) МУР) 0МУРІ контроль)
Немає (хірургічна од» кастрація) 127 (0 207(8 | 24 (12 "Вік у тижнях
МІРІ: Тижні після (першої) імунізації
ІНЕНЗ містить пептиди ЗЕО ІЮО МО:7, 8 і 9.
Таблиця 4
Дизайн дослідження складу І НКНЗ в емульсигені Ю
Кіль- Досліджуваний Дозування. Шлях 2-а Умерт-
Мо групи | кість (концентрація введе- | 1-а доза й зразок доза віння тварин пептиду) ння
ІЇНАНЗ /емульсиген 8'(0 1167(8| 247(16 вв р 50 мкг/ 2 мл/дозу | І.М. МІР | МР МІРІ
ІЇНАНЗ /емульсиген 8'(0 1167(8| 247(16 ав р 100 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІР | МР МІРІ
ІЇНАНЗ /емульсиген 8'(0 1167(8| 247(16 в р 150 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІР | МР МІРІ
ІЇНАНЗ /емульсиген 8'(0 1167(8| 247(16 11 в р 200 мкг/ 2 мл/дозу)| І.М. МІРІ | МРІЄ? МІРІ
Фізіологічний . 8(0 11671(8| 247(16 12 озчин (негативний | 0 мкг/ 2 мл/дозу |1.М.
Що контро дозу МИР) | МУР)! МУР)
НЕИНСНИ сабо ПИШНІ НЕТ ШОЕ НЕ ШОЕ кастрація) 127(0 1207(8| 254 (12 "Вік у тижнях
МІРІ: Тижні після (першої) імунізації
ІЇ НКНЗ містить пептиди ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9.
Таблиця 5
Дизайн дослідження складу І НЕКНІ у ІЗАбОМ2
Кіль- Досліджуваний Дозування Шлях Умеот-
Мо групи | кість джу (концентрація | введе- | 1-а доза | 2-а доза тер зразок віння тварин пептиду) ння 12,5 мкг/ 2 87 (0 167 (8 25 (16 1 в ІНАНІ /5АБОМ2 мл/доз І.М. МІРІ МІР МІРІ 87 (0 167 (8 2: (16 2 Що ІНАВНІ/ІЗАБОМ2 (25 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІРІ МІРІ МІРІ 87 (0 167 (8 2: (16
З Що ІНАВНІ/ІЗАБОМ2 (50 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІРІ МІРІ? МІРІ 100 мкг/ 2 87 (0 167 (8 25 (16 4 Що ІНАНІ /5АБОМ2 мл/дозу І.М. МІРІ МІРІ МІРІ
Фізіологічний розчин 87 (0 167 (8 25 (16
З (негативний о мкг/ 2 мл/дозу /.М. МР | МУР | МР) контроль)
Немає (хірургічна ж : 24 кастрація) "Вік у тижнях;
ВРІ: Тижні після (першої) імунізації
ІНЕНІ містить пептид 5ЕО ІЮ МО: 10
Таблиця 6
Дизайн дослідження складу І НЕКНІ в емульсигені Ю
Кіль- Дозування Шлях й . - . 2-а Умер-
Мо групи | кість |Досліджуваний зразок (концентрація | введе- | 1-а доза й доза | твіння тварин пептиду) ння 7 ІНВНТІ / емульсиген 12,5 мкг/ 2 ІМ 87 (0 167(8 | 24 (16 р мл/дозу Шо МУ РІЙ МРІЙ МРІЙ
ІНВАНТІ / емульсиген 87 (0 167(8 | 24 (16 вв р 25 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІРІ МРІЙ МРІЙ
ІНВАНТІ / емульсиген 87 (0 167(8 | 24 (16 в р 50 мкг/ 2 мл/дозу| І.М. МІРІ МРІЙ МРІЙ в ІНАНТІ /емульсиген Ю мл/доз І.М. МІРІ МРІЙ МРІЙ
Фізіологічний розчин й 87 (0 167(8 | 247(16 11 Що (негативний О мкг/ 2 мл/дозу | І.М. МИР) | МУРУ ОО МУРІ) контроль)
НЕНСІ сь ПИШНІ ННІ ШОЕ НЕО ПЕС кастрація) "Вік у тижнях;
РДІРІ: Тижні після (першої) імунізації
ІНЕНІ містить пептид 5ЕО ІЮ МО. 10
Таблиця 7
Дизайн дослідження тривалості імунітету
Кіль- Дозування й й - (концент- Шлях Умерт-
Мо групи | кість |Досліджуваний зразок ; 1-а доза| 2-а доза й тварин рація введення віння й пептид 12,5 мкг/ 2 87 (0 167 (8 2: (16 1 в ІНАНІ /5АБОМ2 мл/дозу І.М. МІРІ МІРІ МРІЙ 25 мкг/2 87 (0 167 (8 2: (16 2 в ІНАНІ /5АБОМ2 мл/дозу І.М. МІРІ МР МУРІВ 50 мкг/ 2 87 (0 167 (8 2: (16
З в ІНАНІ /5АБОМ2 мл/дозу І.М. МІРІ МІРІ? МІРІ? 100 мкг/ 2 87 (0 167 (8 2: (16
А в ІНАНІ /емульсиген Ю мл/дозу І.М. МІРІ МІРІ МРІЙ
Фізіологічний розчин й О мкг/ 2 87 (0 167 (8 2: (16
Що (негативний мл/дозу І.М. МУРІВ) МУРІВ МУРІ) контроль)
Немає (хірургічна ж : 24 кастрація) "Вік у тижнях;
ВРІ: Тижні після (першої) імунізації
ІНЕНІ містить пептид 5ЕО ІЮ МО: 10
Таблиця 8
Часові точки вакцинації ше ре ре ера в
МРІЇ 70 14 | 12 | 714 | 16 | 718 | го | гг
Приму- . си Вакцинація вання;! Бустер;2
МЛМ мл/М
Забіркрові | В |В в |В | |В |В
МРІ /ї7777777771 01 8 | 70 | 712 | 714 | 16 | 18
При- се Вакцинація мува- | Бустер;2 ння; | мл//М
Ммл/М
Забіркрові | |В |В в |В |В |В ів
МР Го 11711710 11214 | 6 | в
Приму- Бустер; 2
З Вакцинація вання; 1 лм ' мллМ мл
Забіркрові | |В |В Ів |В |в |в ів /
Вакцинація: БЕО ІЮ МО: 10, 25 мкг/мл
В: Забір крові
Таблиця 9
Оцінка ризику виникнення присмаку кнура за допомогою комбінаторних порогових значень андростенону і скатолу
Скатол (мкг/г) Андростенон (мкг/г) 0001 Середній 0,5-1,0
Середній 0,1-0,22
Високий 20,22
Таблиця 10
Дизайн дослідження видалення присмаку кнура тварин зразок введення віння в ІНВНЗлеАБОМ2 | 100 мкг ОМУРІ | ВМУРІ | 1ОМУРІ мл/дозу
Фізіологічний 2 розчин о мк! м. ОМ/РІ 8МРІ | 10 МУРІ (негативний мл/дозу контроль)
ШЕ ІНВНЗлеАБОМ2 | 100 мкг ОМУРІ | ВМРІ | 12 МРІ мл/дозу
Фізіологічний 4 розчин о мк! м. ОМ/РІ 8М/РІ | 12 МРІ (негативний мл/дозу контроль інвнзлеАБоМ2 | 00 мкл | м ОМУРІ | ВМРІ | 1АМУРІ мл/дозу ШІ
Фізіологічний розчин о мкл м. ОМ/РІ 8МРІ | 14 МУРІ (негативний мл/дозу контроль) в ІНВНЗлеАБОМ2 | 100 мкг ОМУРІ | ВМУРІ | 16МУРІ мл/дозу
Фізіологічний розчин о мкл м. ОМ/РІ В8М/РІ | 16 МРІ (негативний мл/дозу контроль) "Вік тижнів
ІЇ НКНЗ містить пептиди ЗЕО ІЮ МО: 7, 8 і 9.
Таблиця 11
Дослідження гнучкості схеми імунізації тварин зразок введення | доза | доза | віння мкг/2 З'(0|12и8)| 24710 25 мкг/2 З'0 |148| 2410 25 мкг/2 30 1678) 2412
Таблиця 11
Дослідження гнучкості схеми імунізації тварин зразок введення | доза | доза віння мкг/2 80 116781 24712
Таблиця 12
Дослідження гнучкості схеми з введенням у ранньому віці тварин зразок введення | доза | доза |твіння
Му26" мкг/ Оз | М/8 (2 50 мкг/1 07100 |М357 (2 | 267 (25 2 ши ІНАНІ /5ЗАБОМ2 мл/дозу І.М. увів МУР МУРІ? 50 мкг/1 МиЗ" (0 | М/6 (3 267 (23
З ши ІНАНІ /5ЗАБОМ2 мл/дозу І.М. МРІЯ МРІЄ МУР?
Му167 50 мкг/1 МУЗ" (0 267 (23
Му167 50 мкг/1 Му87 (0 267 (18 а ПИШИ Р) |мену | МР)
МУ127 |М207 300 мкг/2 267 (14
ІтргомасфФ 5.6. (0 (8 я ши Мл/дозу мив) |миею) | ГО кастрація)
НСЗНННСННИ іо ННЯ НЕННЯ НЕ НЕ ССЗ кнур)
Тр: вік у днях; "МІ: вік у тижнях;
УДІРІ: Тижні після (першої) імунізації.
Таблиця 13
Дизайн дослідження тривалості імунітету 1,0 мл вакцинного складу ГНКНЗ (ЗЕО ІЮ МО: 1, 2 і 3; 100 мкг/мл, 1 12 партія 1) з ад'ювантом ІЗАБОМУ, з примуванням у віці 8 тижнів і введенням бустера у віці 16 тижнів. 1,0 мл вакцинного складу І НАНЗ (ЗЕО ІО МО: 1, 2 і 3; 100 мкг/мл, 2 12 партія 2) з ад'ювантом ІЗАБОМУ, з примуванням у віці 8 тижнів і введенням бустера у віці 16 тижнів.
Без кастрації і без вакцинації (інтактний контроль 40010008 |Без вакцинації (хірургічно кастрований контроль
Таблиця 14
Титрування антитіл проти ГНКН 37 1 057 | 052 | 066 | 090 | 129 44 | 032 | 060 | 022 | рр 147 | 143
Таблиця 14
Титрування антитіл проти ГНКН ато 11110899. | 14 | лля | їла | 087 щЩ-
Таблиця 15
Концентрація тестостерону і імунокастрація
Таблиця 15
Концентрація тестостерону і імунокастрація "Встановлювали рівень кастрації для тестостерону «1,87 нмоль/л (99 95-ий довірчий інтервал) через два тижні після другої ін'єкції (10 МУРІ).
Таблиця 16
Маса тіла свиней, яким вводили вакцинні склади (групи 1 і 2) порівняно з контролем (групи З і 4) 000711 мо | 7777777 28в6534 | 119,0598....:(: 720 | 323305 | юю Брак | 77777771 000711 мо | 7777777 2в5на8 | л2ббни3
Таблиця 16
Маса тіла свиней, яким вводили вакцинні склади (групи 1 і 2) порівняно з контролем (групи З і 4) 00711 мо | 7777777 2бвнб | 7 пліББоВ нини: ин ши Ух ПТ п ПО: ТК по 0001711 мо | 777777 зоиня | пмоомов
Таблиця 17
Середній добовий приріст маси, середньодобове споживання корму та ефективність корму маси (кг корму (кг
Таблиця 18
Маса статевих органів 11 2вбо2 | 545 | (4959 2 щЩ | 60 | з 2 1 28605 | 468 | ---ф(з3859 2 2 щЩщ| 60 | їй 1-33 1 28702 | 364 | (353 | 40 | 09 16 1 31406 | 389 | .-.юЮюЙй275 2 щЩ | 75 | 09 1-7 1 30803 | щ-л441 | 794 | 80 | 12 1-8 1 31402 | 684 | 433 | 89 | 16 мо 0 вленвя | 495НаЗ | 950 | 15506 21 1 287303 | 5 | 3854 2 щ | 48 | 08 22 | 28801 | 802 | (451 | 2 .89 | 07 23 | 28602 | 900 2юЮщ Вже | 355 | 34 | 08
Таблиця 18
Маса статевих органів 2-7 | 30802 | 2020 | 772 | 99 | о 2ело 1323305 | о. ЇЇ
МО 19924503 | БОбнє | 79538 | 147 8 128805 | БО | 1226 | 2620 | 66 8-6 | 28504 | 2840 | 914 | 1659 | 96 8-7 | 28603 | БО | 1226 | 2620 | 66 8-8 | 28601 | 4770 | 15990. | 1960 2 | 98 11001 мо | 4639новб | лівноям | 47055703 | 74нм8
Claims (7)
1. Ветеринарна композиція для імунокастрації свиней, яка складається з: (а) ефективної кількості суміші в однакових молярних співвідношеннях пептидних імуногенів, які мають амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 7, 8 і 9, у фізіологічному розчині; і (5) прийнятного у ветеринарії засобу доставки або ад'юванту, де прийнятний у ветеринарії засіб доставки або ад'ювант являє собою ІЗАБОМ2 або емульсиген 0.
2. Ветеринарна композиція за п. 1, де прийнятний у ветеринарії засіб доставки або ад'ювант являє собою ІЗА5ОМ2.
3. Композиція за п. 1, де прийнятний у ветеринарії засіб доставки або ад'ювант являє собою емульсиген 0.
4. Композиція за п. 1, де фізіологічний розчин являє собою 20 95 мас./об. масі.
5. Композиція за п. 1, де загальна кількість пептидного імуногена становить від 12,5 до 200 мкг на дозу.
6. Композиція за п. 1, де ветеринарна композиція складена у вигляді 1 мл стандартної лікарської форми, яка містить: (а) всього 100 мкг суміші в однакових молярних співвідношеннях пептидних імуногенів в 20 9о мас./об. масі фізіологічному розчині; і (Б) ІЗА5БОМ2 як прийнятний у ветеринарії ад'ювант.
7. Спосіб інгібування характеристик, які викликає статева зрілість свиней, що включає введення свині ефективної кількості композиції за будь-яким з пп. 1-6.
8. Спосіб за п. 7, де характеристики включають присмак кнура, статеву активність, статеву поведінку, фертильність і статеве бажання.
9. Спосіб за п. 7, де композицію вводять за допомогою внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції.
10. Спосіб за п. 7, де першу дозу композиції вводять свині у віці від З до 8 тижнів.
11. Спосіб за п. 7, де другу дозу композиції вводять свині у віці від б до 16 тижнів.
12. Спосіб зниження продукції тестостерону та його похідних у тварини, який включає введення тварині ефективної кількості композиції за будь-яким з пп. 1-6.
13. Спосіб індукування антитіл проти рилізинг-фактора лютеїнізуючого гормону (ІНКН) у свині, який включає введення свині ефективної кількості композиції за будь-яким з пп. 1-6. сну: СЛ НАНЗИВАБОМ2 (50 мг/мл 1 мМлідову) он й - 5 00591 НЕНЗИБАБОМ? 1100 мг/мл ї млідову) снення --- З ІНАНЗИЗАБОМО (150 мг/мл (Ф 1 млідову) -і ше - й 0 000 ОА НКЕНЗИБАБОМ2 (200 мг/мл Ф 1 мл/дову) онтннфетннняє 95 Фіз. розчин (0 мг/мл Є 2 мл/дозу) : пеню нн ннифуню жін Сб МЦемає (Хірургічна кастрація) "В пезвзаафревякия й 7 Іпргомас 5о : ! : З 4 . : Е і- й щ- х ШО їз Й о З | тло р іне чн в ші ! Н ря що й й : Я - : Ж "чав чи ; і й А Імунізація А Їмунізація нт рр пр о 2 с. о 8 1012 14 16 18 ж Ма зе ! ча іпргомає 2 МУРІ п Ітргоуас Фіг1А
Д стр вхо О8 НЕК НУ, мульситен Ю (50 мг/мл Ф 2 мл/дозу) ся шен нн 539 ГНЕ НЗСмульсяген Ю (100 мг/мл Ф 2 мл/дозу) ння Вк - 10 НЕ НУЄЕмМульсяген ІЗ 1150 мг/мл Ф 2 мл/дозу) - -ййй я-ен І НК НЗИсмульсиген І (200 мг/мл ФІ З мл/дозу) пнжео я чннфр нею я 011 З «різ, розчин (0 мг/мл 2мл/дозу) пн чин мнофрни чл ян 313 Немає (Хірургічна кастрація) ! тажжея «фе жу ве 4 Ітргоуас - | : : : : : : :
еЕ .
5. | рве 5 о - | Ге Зак ї-х і | рення вкоюте чапвсчн к жк « й М - . . ра доктнни т м й . х . . К ра нний мн вуж : РА ета ! ШИ песни пис ри в : п імунізація ПИ Імунізація і рн інн і о р. 4 б 8 10 12 14 16 18 2 - ітргоуас 2 МРІ Д» Ітргоуас
Фіг. 18 Зо
25 ; --е - ек 1 НЕНЗИБАБОМО (50 мг/мл (Ф 1 млу/дозу) ння я С? НЕНЗИВАБОМ2 (100 мгймл (Є 1 мп/дозу) я-- еф -- - 3 НЕНЗИБАБОМ2 (150 мг/мл 1 мл/дозу) АОООЖО Я --.--3 ОД НЕНЗЯВАБОМ? (200 мг/мл (9 1 млідозу) Ко пен зл нюфузсннитє 0 035 Фіз. розчин (0 мг/мл о Ф 2. мл/дозу) з тс своих смецфрню нн СІЮ Немає (Хірургічна кастрація) х пазикевфеножик їз; іт тус й 1. і ме З 10 шо . ще дв д ! Я. орене г: 5 ' ше К т», І бок ; я - | ти е Ше ей , нд У Імунізація Ї Імунізація -5 -4 | пон 0 2 4 б 8 30 2 14 016 0018 Іппргомас т МІРІ 3 ітргомуає
Фіг. ЗА
25 но й й ше яхкжкктя й ке» 8 МНКЕНЗ/ЛемМульсиген ІЗ (50 мг/мл 2 мл/дозу) Ї ман мана. мире сен он ж 019 НЕ НИ мульсягев З (100 мг/мл (2. мл/дозу) шення санннь Ірен нен жо 110 1 НЕ НЗЕмульсяген Ю (150 мг/мл (2 2 мл/дозу) - рі рних чик «ев СТІ ІНЕНУ; мульситей роб мг/мл 7 мл/дозу! 7 зно хг ниіцфу яння» 0312 Фіз, розчин (О мг/мл Змл/дозу) с а пяти моль, заюкфурмо жк, и С1А 3 Немає (Хірургічна кастрація) - зкаєжанфнехнкз 14 тримає а 45 ! ! ни ше в їе ! З , ' ', вч | , м -х Кр я / . жацча й
ОБ. й то В Но : ЩО й 4 щ и «г, ку і х " е нал "є, зскнйй че ше ще сах ще чної ет шк м в не ; я 0 / | Імунізація і і Імунізація -Б ; " о 2 й б 8 10 012 14 16 18 З 2 Ітргочас Мт ду ітргочас гу : - « Я «
Фіг. 28
160 | пекан фени СБ ЕНКНЗИЗАБОМ2 (50 мглмп (ФО 1 мл/дозу) пн по чною вра нен они 32 І НЕНЗИБАБОМО 100 момліфд Ммл/довВу) -- - (,« 8 А - - ЗІ НЕНЗИБАБОМ2 (150 мг/мл (д 1 мл/дозу) 34 нання (34 І НЕНЗІБАБОМ2 (200 мг/мл (ДЮ 1 мп/дозу) пн зж нн ефунняхнння (15 Фіз. розчин (0 мг/млФ Змл/дозу) знжжюе чеефеожшжсне 0 05 Немає (Хірургічна кастрація) 1283 І (7 Іпогоуас г. - : : : : : | В, З : - во ле. че ву и з зай | 4 і : : Й ей га . 0 імунізація х М / і Імунізація -4 - 0-4 0-0 2 4 5 8 10 12 14 16 18 20 ітргочас ї УуувІ 3 Іпргочас
Фіг. ЗА чена ой ше О8 ПИКНУЕМульсяген р мг/мл 2 млідозу) 180-000 дн. 991 НЕНЗЕМУЛЬСЯГен Ю (100 мг/мл 2 2 мл/дозу) шию сн Тр нн я 121 НЕНЗЛЕМульсигем (150 мг/мл Ф З мл/дозу) Яд 7 пнів ня СП БНЕНУЄ мульсяген (200 мг/мя (4 2 млідозу) зак ажеифузнннає 012 ФИз, розчин (0 мт/млд амлілозуї : зних ян пефрнь ень 0113 Немає (Хірургічна кастрація) ти я СЯ Ітпріоуас | : г. 100 - нин Те шк т нан оса г 80 ще о Г і ж, що й З - я Й - 80 се - ! й Я ше : І ши ія й : 20 ! - не ння о Імунізанія і | | | І Імунізація нини ниви Й ! : і ї ! -8 -6 --2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 2 - іщноуає ХХ д ітргохуає й лом Фіг, ЗВ бен БА НАНТДОАБОМО 112,5 мг/мл 2 мл/дозу) пон нею нн нен 02 І НАНТЛОАБОМ? (25 мг/мл (2 млідозу) тен и ОЗ НАНТЛБАБОМО (50 мгмл 2 мл/дозу) ян Я я БД НАТИБАБОМ2 (100 мгмл 2 мл/дозу). офренккжнесфнкхжж.и С15 фіз. розчин (0 мг/мл Ф 2 мл/дозу) тане о жефроеяе 00 Сб Немає (Хірургічна кастрація) рр рняня 1 ше ; А Імунізація / у Імунізація ні! р 4 6 8 010 125 4 18 18 УУРІ
Фіг. 4А зе йфнно 07 СНЕНЕмульсятен (12.5 мг/мл Ф 2 мл/дозу) пк нок пу нн нн 2018 1 НЕ НІ Емульсяген І (25 мг/мл ( 2 мл/дозу) пен понкноіфуа пня - 09 НЕНИКМУульсяген О (50 мг/мл Ф 2 мл/дозу) дод янф АС О СНЕНІ/Ємульсяген З 100 мг/мл 2 мл/дозу) "ОЇ зе кз чнфе є жен СТІ Фіз. розчин (0 мг/млє 2мл/дозу) чн лань» зннфрннь янюк я 112 Немає (Хірургічна кастрація) --й . Й з : - Фо... | : Е й, ТаХ р: З . й : . І І й і В | вич д. делннію меггнє ? Н й м. й : ША нання Е : и» шасі бе р ох ма ВШ і ! Імунізація І Імунізиція 0 Е 4 б 8 1012 714 16 18
Фіг. 48 Зб
ФВ яр ней 1 СНКНТЛВАБОМ2 (17.5 мкумп 9 2 мл/дозу)
пн 21 НКНТИЗАБОМ? (25 мкпмл (О 2 мл/дозу) д ренні ОЗ НЕНТИЗАБОМ? (50 мкумп (ФО 2 мп/дозу) я 20 - пен ОВ НКНІТИЗАБОМ? 100 мкг/мл (Ф 2 млідозу) Є чно хх жнафу єння СІЙ Фіз, розчин (0 мг/мл Ф 2 мл/дозу) тен нефрнннкя 0 СІЮ Немає (Хірургічна кастрація) що 155 | | щ що З г Е; 5 В, вро ц | и ! е дк 33 лМИЙка: шко ЕЛЕ ИН ех сс Не Я п - пон ше А Імунізація Імунізація -5 Ї ни Ї - 7 0 2 4 5 8 10 12 14 76 18 МР ЧФиг.
ЗА пф С7 СНЕНІЖ мульсяген (12.5 мг/мл Ф 2 мл/дозу) шенню понині ян нн я СЯ НЕ НІЛЕмМульсиген Ю (25 мг/мл Є З мл/дозу) зно мину няно 039 ГНЕ НІ/Ємульсяген О (30 мг/м 2 2 мл/дозу) шк ВО ни СТО СНЕ НІ /Ємульсятен ОЗ 0100 му/мл 2 мл/дозу) сх зник з ннафу я жених 0311 Фіз, розчин (0 мг/мл 2мл/дозу) в птн чно чисофун чного чне, 0312 Немає (Хірургічна кастрація) З хх Й . Ши ,/ ся и Ч ях 5 Й і й й з е , . В ) ка: ИЙ ш- кі ; і. - г Й й Кокоя Як М ж жк як ЕВ! сн ; / Імунізанія Імунізаціяї -5 0 2 4 Б В М 2 34 16 18 МІРІ
Фіг. 58
160 нина пеня ОТ НКНИЗАБОМО 112.5 мкг/мл (0 2 мл/дозу) пентннфруєтняя БИ НЕНТИБАБОМУ 125 мкг/мл (О 2 млідозу) : 440 яння ння вною ОЗ ЦНКНТЛОАБОМУ 150 мюрмл (ФО 2 мл/дозу) ще усні ннянфрнння я СА НЕНІДБАБОМ? 100 мкг/мл ФО 2 мл/дозу) : пише чяефіветниєх (13 Фіз. розчин іо мг/мл Ф З ноловуК Ї 123 Тл (6 Немає (Хірургічна кастрація) ; Ї 100 3 ни ни я г, МИ й, Імунізашя -// / Імунізація ми ши пи пн пн пон пн пон пон пон нин нин «я -6 .-4.-- 0 0.2 4 56 8 1012 14 169 18 20 МІРІ
Фіг. А
180 - ше ше СНЕНІ/ЕЄмульсиген Ю (12.5 мг/мл Ф 2 мл/дозу) ря ИН 8 НЕ НІ /Емульсиген І) (25 мг/мл Ф 2 мл/дозу! рн ВН -- 9 ДНЕНИ мульсятен Ю (50 мг/мл (ФУ мл/дозу) 340 А - А - ОО НКНІ/Емульсиген О (100 мг/мл Ф 2 мл/дозу) чашках теовфу х сн яя 0111 Фіз. розчини (0 мг/мл? 2млі/дозу) поко чан» спін ян чин 0312 Пемає (Хірургічна кастрація) 120 я | Шик 5 З ва - ше ше в Би: ІННИ Ж | і 40 - | Дт ж й - Імунізація | Ї ІЙ Імунізація Ї рент п нини ни пон по Пн пон нин нн, -- -4 4-2 0 2 4 8 8 101914 16 18 20 УХРІ
Фіг. 68 й рено ст .НКНТИБАБОМ2 (12.5 мкумл 6 2 мл/дозу) О Пнжежіетяк 2 | НЕНТЛБАЗОМ? 125 мкпмл (0 2 млідозу зе фнксннк 0 ЗІ НАЕНІЛВАВОМЯ 150 мкг/мл (2 млідозу ' стеження: СА НЕНІЙ мульсиген 3100 мкг/мл Є 2 мл/дозу) Во реняяннйвенняхх (15 ФІЗ, розчин (0 мкг/млофд З мл/дозу) ниви С Немає (Хірургічна кастрація) Ко ! й - , -Ф «веж й - сте т наш то Її | | нку на -к : , Кет 7 Пенн ш - ак жажтвйй» й І й 2 . би і; . . й . . І ше Ши | о х о. і саду : д Імунізація і Імунізація 0 -- пря т- 0 0 й й 6 8 0 4 4 о б 25 24 УР
Фіг.
7 ЖО : - пппегестння нини М пажжняківнняяя 0 1 НКНІЙБАБОМ» 112.5 міг/мл Є 2 Ммлідозу) - ! щ Е нею 2 ПНВНТЛЗАБОМ2 (25 ай дов : і й паю зннефінх яшкх (33 ІНКНТЙЗАВОУ? 150 мем о МліДОЗуІ с З фр кжифежияя 0 4 | НЕНІЄмульсиген ПВ (00 мкг/мл В З мледоЗу) о. мого я з хенефе і інею я є 05 Фіз. резчин ( мкг/мл Фо мл/дозу) : ! т нон нміванінннінні сб Немає. (Хірургічна т | | щ 5 ша з КО ще ІЙ ц Й : й що | раки ! ж Во ее й . ; : : що й щі ! 5 ЗЕ ку фанати «іх яті що | і Імунізація А Імукизація : : : - і ї : Н їх й 4 б Я 3000015 04 016 018 050 352 а МІ
Фіг. 8
ВВ | сеон і г с м,
В 4. о ни: ри ОО - БО Пон і - ЕЕ В я Коля М п жо ж кю п. пи - | щі и ся мо ше он ШО шо шт щ щ Дон шо .-- «оо сни ВОК ШК: ІЙ С Ге пива с що Групи ж Значно відрізняється від 15 (фізіологічнай резчин)
Чиг. 9
950 панна тт кун ння що Кк. Ба в Ї Ж | - т зи ик З В Я ШОВК ї З | ТЕО дин би ШЕ ШЕ ще ки у и З а шк й Я ж Тита п.
це. Фе 3 се оо Групи я; Значно відвізняється від 15 (фізіологічний розчини)
Фіг. 10
«тв рення О1ІНАВНІЙБАВОМ2 (12,5 мкг/мл (З 2 мл/дозу) в т7- бе ІНАВНІЙВАБОМ2 (25 мкг/мл 2 мл/дозу) т рення СЗІНЕНІЛОАБОМ2 150 мкгмлн і 2 мп/дозу) ще 150 сіння СА ВНЕНІЄмульсяген ГП) (і0бмкома й З мл/ідоЗу; 0-й со. 5 О5 а. розчині мкгіма п З МЛІДеУЇ се до ех се 85 пиши аб Немає (Хірургічна кастрація) ..- р! Кдк т Ши речи НИ ма Ше Е Бл | «Я т | я см от пе : Шк Р; 5 що БО | ше с. щи б. ши Ці Імутизація А Імунізація ме нини пи Н пи аа и рр рр «8-5 -4-8 9 8 4 5 8 0 15 14 15 18 20 225 53 56 МІРІ
Фіг. |!
і а - ! ш 18584 Щ Ко і « ! Кий : ГжЯ Я 1 Н шо. і : ші ві З) М ях з й | т ще і Є ! | ! Бе | З о - уки 0 ИН : о менш и В по я як нн 3: у що АЙ ВИК шк г нн нн ні 3 32 са а ца де
Фіз. Хірургічна розчни кастрація Групи
Фіг. 12 ї ко 025 Ж - м Н «ЕЕ П.І я 2 З їх | рис жи Н пу і в ! | Кос в | о ши Не ПЛ - й ШЕ: ка | с з І «і ! З СИ г бе | Е І КК Ки: - | ОН. щ | : с. М В ще й | ; І РО от ва соодтелювввн д ; о. ОА сло В я шо. Ж З Б ОО -- - -ЯИЩщ й о й си а Й М С 2 3 4 оо об
Фіз. Хірургічна розчин кастратня Гручи
Фіг. 13
0 т пе є Середній ; Високий : с ризик . ризик А со : "и Н сЗ Високий і з е т і я я изик ро і ис Й Н : ж пах (Контроль, якому вводиться. фіз. розчи в) г: | : : а 6 Кастрація ж п 2 уижежеванки маяжавнвикеихкивоаутикникиаженжеекнувитанттевирєатенйженжетиивнихх» ; Ж х | й Н я
Ще . М
-д . а е ше. - В Х, | т Середній ь х ш | Низький ї ризик : а ре ризик ; , РУ " б х їх Ед Ж г 0 о аттвааняйтядносяя Диненняичввкьниоакуавонвиві кави ввюутвувааттчиееєвнвкаання те ж ; х Я 8 их . З зи і я и я зр и СЯ Я Її Низький а Чизький я : с ця «ж рюик Н середній ризик зизико г песня нн вит п п а о 0.5 10 3.5 2о 25 Андростенон (мкг/г жиру)
фіг. 14
45- птн ше не рони - що З 35 ; у, ра Її щ ї Й Шк щ ке що Н м тро: !
як . 7 Ж срок всв к -о ; Ж
В. аа ве а а п а рий - й нн нн - - г. п я - а я і - | р а 7 / в Дорн "М пп т АН и в по ня а й и е ре щ- їЕ ! ра рай - й 155 во и сін пенні . ши і Е А НИ гНи Ві іп і тА н-- 2 34587890 151334151817 " ча ї 2324 252827 28 Вік кнуристижні) і г і г
Фіг. 15 и с . . ! : 304 вн - , інн Я я Пани ль Я 53 лх до . | т З ях зе ШИ ше ! То. . роя і . я х : ше -й | ра Що! | а ' і
Во. и и ї ОК - и / х 8 - Межі стнсто ж х | х ! ке 2 нннйонннини стен і севаданкя. завкуналиятий ява ші ш Й у н - й Ци й - и й т СЕ се "МВ -й Ше молоовванннню мини знов пивних полон пинннннннння маненсни ши й птнннндннтттреннннннннреннннн й 4 в В та 012 14 06 ї8 Я 22 м ж зв Ж » р Вік А | й ! Стижні ! х Е ' р І І си се са с за
Фіг. 16
ОО рт т ет Маса статевих органів (НИМ РІ шНакпинована трупа вв. Контроль, якому шЕБОодиле і фізіологічний розчин я 401 в І кх у ЧИ ж І з: 05 І ' ! я ре0лю7 200 г ПН ее Сім'яннки Придатки яєчка Фіг, 17А Миса статевих оргавів 2 РИ . | ще ! ЩЕ Вакцивзонана група Контродь, якому ево з яводили фізолюогічний розчино ХЕ х вп я АЙ і я ЖХ ! 2 дО а || | ТІЙ Бен ШНННИНН Сім'яннки Придатка ясчка фіг. 178
ВО. Маса статевих органів Я ЖУР Я Вахкцинована групи Контроль. якому 600 г г) вводили. фізіблогічний розчин ма нище "рев а і 200 Ксеня кВ х 01 МД А ИН: НИМИ тік с МИ Сім'яннки Придатки яєчка
Фіг. 170 ДОЮ рт тт тт Масв статевих органів СОР я м в ; і ВД Накцинована група І Контроль. якому і сич вводнин НЕ що я 7 ШИ . н : ! я ор «ВНИ фімологічний розчин о Я зва Е ІН Й ех в | Мен ! синя я р «01 зе ШОДОЕЕН ! доня ЕНН ПЕН дес ееесеессе МИ, Слм'язики ТЕидатки яєчка.
Фнг. 170
2 ут ння т ред.о5 о я Цілі кнури Вакцинація проти присмаку кнура Вакцинація, паб Цілі квУри, п ота
Фіг. 18А є ра 02 я нини нн нон : щі - Е пі15 тт нини ши і ; МЦлі кнури Вакцинація проти присмаку кнура Що 000 Вакцннадія, лей Цілі кнури, по-8
Фіг. ІВ ж оре ред Б 15 - пинняннннн денятняхн нн ннужчнни нях нюни чу тож нн яння ннучяняяянни Е г | - 1 нижня пенні нняктккжнин тая катки єжьє тт тттує тях текктняжуння !
-.- ! Цілі кнурн Вакцинація проти присмаку кнура Вакцинація. пжи Цілі квурн, пог
Фіг. 1982
! у ЩЕ у В Я. дреннннняяятяя по пн нн 005 сення пнів -- 0 і пптнтнння і ; ! Цін кнури Вакцинація проти присмаку кнура Вакцицая, пай Цілікнурн.йпх/
Фіг. 150
Середнійризик о Високий Високий ризик ризик - о Ууте о оз ; о ж щ 6 о ! до а о с 82 м му - у о Середній ризик о Високнії й лизик Низький ризнко 8 ? р о о о Га о 0 о оо о з о о о о з оо 9 о о й : Низький ризик Низький ризик Середній ризик по і
0.0 0.5 10 15 2.0 25 М г 31 Андростенон (мкт/є жиру)
Фіг. 19А
Сере дній ризик Високий Високий ризик ризик КОЛО МУРІ жо МІРІ А е АМРІ в 03 ж ОРІ пня Ка - " о / ий не ще Високий « Низький Середній і : ризик ризик ризик ол жи , и «м і К Ак Низький Середній ризик 00 4-4 аійзький ризик рНЗАиК
0.0 0.5 КВ! 1.5 95.0 2.5 Андвростенон (мкг/г жиру) М 2
Фіг. 198 пф С шення па . вів в пи - заавводффеннння -5а4 | , 5854. ще МИ Тошот я 25. не кові, Я ШІ ше - Ин, Е що Ши: 20 рах щ й льні І ! 184- - сн шк 12345678 90111513 14151637 18192021 92 53 24 25 26 Кк як Кк А Вік Х Й (тижні) (7 й
Фіг. 20
18. прут тен нене няння т нн тт тт кт ння нет нт ннтнкнннннняня 17 ех ГЕТЕ т . - . і 1 па чи ру ПИ | 6 15 пе "пс | т ' яння в - В З 15 я : : : р 114 . . . ше . ! З 1 ! що ше ! р В с и, п. . . Кк -ї 0 п. . . їх 5 4 «Її ПИ жкеянизваккєвтканиї, . | 6. Й В речи - НЯ . . 4 р и М Е г З А Й Ина у ве чи 77 і 2 : і Байки " щі Н й туе ж" їж зидраєхин» Н І Я 2 жен ут ня о ж ХЕ ОГО ЖТОЕ З І ' ! | і Порогове значення х 10 а А ЛА нмоль/л -в тент ни Н т м м ми ЗИ: Н 12345879 12 13 14 15 ї 17181920 21 22 53 24 25 285 в Но п А Й: А Вік й 3 Сстижні) І
Фіг. 21
Середня довжина сім 'яника (прижиттева) 00 й о оо Ї ато фін ті 3 т : ше й Я,
во. ш | ре « : ШЕ - - Мк їй ; Че жо дих раиши - 40 : с заці ЦО с КАМ ШИ В їх ие" них тшй і т речи Її . вх явне М Н і 9 ві і й - Ї ї н-ш 14195 15 14 1656 160017 0 3Яя 19 020 051 29 23 74 25 і і 3 п їв й . ! Ї Вік Й (тяижий бо
Середній об'єм сім'яниках (прияцеттєва) ЗеННВ. др ттеетнттеттнеетнтненнттнт ення ! тля ЗІ 1 у п ее пря 3 ше ВЗеза | : са З п І. рез Н -- Ж і і чи Я і З Е щ ! шк бет К з і ш йена 4 "и я 8 | їй т ОЙ З : - ще сут вй 7 ще як ї- Н вача з гч ке льсни д НО; Н іх же і п ши йо шк -К. і і; Я - й нн шк Е 11 33 143 34 045 36 077 38 513 520 951 25 23 25 98 ї ЦЯ А г! ; . й ДІ Ще Вік А (тижні)
НІ. ! з: Середній об'єм сім'яника обчислюють таким чином: Об'єм сім'яника є 1/2 х Довжина х (Ширина)
Фіг. 228
; Р тк Міися пари сім ямиків (г) чада ана А А А А А А А А А На А А А А А а А А Е І : І Н І і і : Н Н 300 - тю Н ї- кий -е і Бе) Н і що | і , ї Н в | | т ще і ! І т ! І Ж ян | і Б 80О 4 і 0) Н х ! ! Е Н Н Н --е Н Кг ї ! І і Ган Н ' І щ- Н ! і з ' а ї Е- де Н - І на 300 й Н і Н І оооопеяес нави ї Н ! з нс ОН Ї И ІК ОО не ЗМО , Ж МИ ОКХ ХХ ка ВК Ко ПАНОМ Я о ОО ОС 1 і ща Й Ши ОБО ! Н т АХ сх ММК ! Н ще УКВ ОХ Н Е за зимі ов МО Я і : За | НОЯ ОВО ОО ! ! М М ОО КО КОКО Н в І ..- ІЙ ще де Тут нев ЕН ОВ ще Шй с се еки са Групи х вн А Фіг кока
Маса пари прилатків яєчок (г) 1-40 я
126.4 со та : Ж бо - : е : д і нин Ки, 593 : пани ия а КЗ | : КО с, Ки ! З 30 4 . о Ко жит ! З і З В КО З ООН Ко т Н : Ся хо ХО КО ДЕМИИИИПИДИИИ У он ви ! Ж ! є З т Ж : : Ве С ЗО ЗЕ НЕ ЕК и Не ою ная Н : и и ЕТ дну я Н : : шк З и Н : оту п Кон І ев 0 - і а а НИ сс юю пн Ге де ва са Групи фіг. 238
Середня довжина сім'яника (мм) то т - - я є К ! ! 3 р ни і ? ей два А 7 | | о Му В ! З т В ит щ ' : пря Б ик ш 4 і Ж ОБ М З чо ' : о Еш Кит | ! ск а; ет - | ї І 5 сш ; Як ш Я ви. ОМ ОД я о я Кк М С ПЕТ со в і мое З Коннов ук У хо з ОХ в Пов Ку ! ї ки Я жк м | | по шк. шо : Бе З Б ня як г я ! ТИ о Ше ше шо: ШИ сиь за 3 се Груня
Фіг. 23Є
0.0 пн т ! і З с :
вва. авоя доз ще і баветлціїй ян Високий ризик Високий ризик г 249 4 Середній ризик ризик Ї к | ! й 0304 ! - ві ; і во щі Низький ризик о; Середній ризик Високий ризик з 5» Тизький виз в а дя ки ризнк х Середній ризик Низький ризик о ! нина пана аажажаоаоаолаолЛ л Ли оо о ан поп о 05 10 15 20 по: 8 в кожній групі Андростенон (мкг/г жиру) Фіг, 24
4.0 рт го їси ' | ни зе ! 36 ши Ше Ф а | Ї с т ця їх ! ще ще У ее ! В нн: З Шан ї п З | ше Тож Те З зв к. ж її ши - | ИН НН ех лек ШВИ ж й и Кк как Ще Яорнннтнттитнт Н т Н | т по 2 4 в а 00100015 14 36 18 20 22 245 25 28 Вікстижні) як Б: ЕНАНТЛОАООМ2, тмл/дозу (ІМ. 03. МУЗ) зако: СЕ НЕНТЯБАБОМУ, Тмлідозу МО. УЗ) беж: ОЗ 1 НЕНІТЛБАБОМО, Тмп/дозу МОЗ. ДВ) сей од 1 НКНТЛЗАВОМУ, Тмлідозу М УЗ. МО) -- 055 МНАНІЛ5АБОМ2, Імл/дозу ПМ МЕ УМО) -к-- 56: Ітргомас млідозує во Уа УМО) сте: 07; 296 бензнловий спирт в 00996 масі | мл/дозу - в ОВ: ОО 02505 З«феноксівтанолов 0990 Масі і млудозу --ж- 59: Хірургічна кастрація - 10: Немає
Фіг. 25 г ие че 1
В. кв ! - «ЖИ М НИХ ШИ З фе -- ! . А Ж ! т», є. кезсвН ай: шк се я й І чеше ч ж Ї 7 ах - Ж Бей М саке МИ ож» ее аа. ЗИ Я со жк і -5 4 нуту т т ВІ 2 й в ВО за 44 185 48 30 25 54 25 28 Вистижні) десневренно Ф1:ІНАНТЙВАБОМО, Тмлідозу М. 03. ММЗ) печене 62; ІНВНТИВАБОМО, Тмлідозу М.ОО7. УЗ) пінневннияс 1 НЕНІТЛБАБОМО, 1мл/ідозу ПМ МУЗ Мб) пиття СА І НЕНТЛВАБОМО, Тмлідозу ПМ. МУЗ МИ В) сне - - ОБ: ТНЕНІИВАБОМ2, Тмлідозу (ІМ МВ МО) пнтевнеотевеуннонеосссною СК: Пргатас Змлідозу с УЗ МОЇ зняти тор леннн о СУ7: Ов бензиловий спирт в 0996 масі тен В: 012505 002596 2-фенокоетаног в. 0,996 масті езажнюфрняяяє СУ; Хірургічна кастрація птн СО; Немає
Фіг. 26
Автитіво прати ГИВИ -е-еГрупз | ня Група 4 І г - і Кастрований нак еКнур я кнур ре Е-у В "м Ів РЕ г ре ; ! ! ї 5 смій ст ; ! фол дитя фо АКТААТЖ Ін іне є а аю м осоочнени, ! 1 -- ПОПОВА Заннесн 1 - З і слллчляяяяя- й У... сукннккююютюкю уттттттттттааяутттттття плітутккттттяя с--- падлллччтяяяжті тт ня ІВ о В Це ІЗ ій ХР
Фіг. 27 ге в в в п І Група кастрованнх тварин і --Вакцинованз група ЗОС яите ТО
Ж . А в -- (й зкиннована гони 2 е рел т ж і -- а то ї- й Б Ши ре 9 з І- КЕ НН а .
-Х. В Ка З а 8 12 12 14 15 Фіг, 25
334. уеооосоопеовапогосогогососососововон говопогогогос осо ковогосоеовововогов днк ні ясо сосні кн осовосово сосні, Група кастрониних Н М І І А й хвирнн Іо нн нн В Вакцнвована трупа | СТ г. Ричє Р І п Од шин Вакцинована гоупа 5 тати шо туї поь щи Ї т се Ек, ло ване но дн ра оо Е ; а ; ий х тут г | у МО ; де ! ера тк я 5000 БУ рез ОО МИ шко ія І он забута пише ех талузктиї 3 Е де мо Ех ШЕ 4 Ед козеня їх норок ого нич о аз г. о В Со дя ати «ге с З ПОШИ о дя клали ! ен с АВ і океани Кі КИ ж ЗЕЗЕ 105 |! да А он и и АВ ЗЕ их х нен ле 5 тату ит Пн Я сло їУї вхічині ни рик сайт ! мини Х до я дк таб ЗНиВгииуи дон су В ЛЬ НЕ Ва с леви нн ПДК Я КОХ виє ПИТИ о о Ве ЗК с оон; В ВЗ МИ 5 ОК. х а'ялятїх п і Шк що ОТУТ ли хз Кн Кінпева маса тіла кг)
Фіг. 29
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/US2014/048164 WO2016014071A1 (en) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | Immunogenic lhrh composition and use thereof in pigs |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA125607C2 true UA125607C2 (uk) | 2022-05-04 |
Family
ID=55163454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201701754A UA125607C2 (uk) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | Ветеринарна композиція для імунокастрації свиней |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20170216418A1 (uk) |
| EP (2) | EP3191119A4 (uk) |
| CN (1) | CN107073086B (uk) |
| AU (2) | AU2014401765A1 (uk) |
| CA (1) | CA2956065C (uk) |
| CO (1) | CO2017001320A2 (uk) |
| MX (1) | MX2017000209A (uk) |
| PE (1) | PE20211787A1 (uk) |
| RU (1) | RU2745720C2 (uk) |
| TW (1) | TWI595884B (uk) |
| UA (1) | UA125607C2 (uk) |
| WO (1) | WO2016014071A1 (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107703294B (zh) * | 2017-10-12 | 2019-06-04 | 华派生物工程集团有限公司 | 一种用于检测鸡血清中cLHRH抗体效价的ELISA方法 |
| CN107449924B (zh) * | 2017-10-12 | 2019-03-19 | 华派生物工程集团有限公司 | 一种鸡免疫去势效果的判定方法 |
| CN107880135A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-06 | 华派生物工程集团有限公司 | 一种鸡促黄体素释放激素重组抗原去势疫苗及其制备方法 |
| AU2019200941B2 (en) * | 2018-02-12 | 2021-02-25 | Zoetis Services Llc | Anti-GnRH vaccine |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8900726A (nl) * | 1989-03-23 | 1990-10-16 | Stichting Centr Diergeneeskund | Peptide, immunogene samenstelling en vaccin- of geneesmiddelpreparaat; werkwijze voor het immuniseren van een zoogdier tegen lhrh, en werkwijze voor het verbeteren van de vleeskwaliteit van varkens. |
| US5759551A (en) | 1993-04-27 | 1998-06-02 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic LHRH peptide constructs and synthetic universal immune stimulators for vaccines |
| ES2180576T3 (es) * | 1993-04-27 | 2003-02-16 | United Biomedical Inc | Construcciones peptidicas de lhrh inmunogenicas y estimuladores de inmunidad universales sinteticos para vacunas. |
| CA2175579A1 (en) | 1993-10-26 | 1995-05-04 | Chang Yi Wang | Structured synthetic antigen libraries as diagnostics, vaccines and therapeutics |
| CN1179181A (zh) * | 1995-02-10 | 1998-04-15 | 萨斯喀彻温大学 | GnRH－白细胞毒素嵌合体 |
| BRPI9609411B8 (pt) * | 1995-06-07 | 2020-05-12 | Pepscan Systems Bv | peptídeo, composição, vacina, e, processos para imunocastrar um porco |
| CA2327262A1 (en) * | 1998-05-05 | 1999-11-11 | Biostar Inc. | Methods of raising animals for meat production |
| TWI229679B (en) * | 1998-06-20 | 2005-03-21 | United Biomedical Inc | Artificial T helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptide immunogens |
| US6025468A (en) * | 1998-06-20 | 2000-02-15 | United Biomedical, Inc. | Artificial T helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptide immunogens including immunogenic LHRH peptides |
| TWI227241B (en) * | 1998-06-20 | 2005-02-01 | United Biomedical Inc | IgE-CH3 domain antigen peptide, peptide conjugate containing the same, and pharmaceutical composition for treating allergies containing the peptide conjugate |
| US6780969B2 (en) * | 2000-12-22 | 2004-08-24 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide composition as immunogens for prevention of urinary tract infection |
| US8088388B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-03 | United Biomedical, Inc. | Stabilized synthetic immunogen delivery system |
| MX358912B (es) * | 2011-12-30 | 2018-09-07 | United Biomedical Inc | Vacuna de marcadores basados en péptidos sintéticos y sistema de diagnóstico para el control efectivo del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (prrs). |
-
2014
- 2014-07-25 US US15/329,154 patent/US20170216418A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-25 WO PCT/US2014/048164 patent/WO2016014071A1/en active Application Filing
- 2014-07-25 UA UAA201701754A patent/UA125607C2/uk unknown
- 2014-07-25 AU AU2014401765A patent/AU2014401765A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-25 PE PE2021000789A patent/PE20211787A1/es unknown
- 2014-07-25 RU RU2017105451A patent/RU2745720C2/ru active
- 2014-07-25 CN CN201480080234.XA patent/CN107073086B/zh active Active
- 2014-07-25 EP EP14898255.6A patent/EP3191119A4/en active Pending
- 2014-07-25 EP EP20214150.3A patent/EP3842067A1/en active Pending
- 2014-07-25 CA CA2956065A patent/CA2956065C/en active Active
- 2014-07-25 MX MX2017000209A patent/MX2017000209A/es unknown
-
2015
- 2015-07-24 TW TW104124013A patent/TWI595884B/zh active
-
2017
- 2017-02-10 CO CONC2017/0001320A patent/CO2017001320A2/es unknown
-
2019
- 2019-11-18 US US16/686,672 patent/US20200069781A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-03-29 AU AU2021201950A patent/AU2021201950B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2021201950A1 (en) | 2021-04-29 |
| AU2021201950B2 (en) | 2024-06-27 |
| CN107073086B (zh) | 2021-07-27 |
| TW201603821A (zh) | 2016-02-01 |
| PE20211787A1 (es) | 2021-09-09 |
| US20200069781A1 (en) | 2020-03-05 |
| TWI595884B (zh) | 2017-08-21 |
| CN107073086A (zh) | 2017-08-18 |
| RU2017105451A3 (uk) | 2018-08-27 |
| WO2016014071A1 (en) | 2016-01-28 |
| CA2956065C (en) | 2021-05-18 |
| EP3191119A4 (en) | 2018-01-24 |
| AU2014401765A1 (en) | 2017-01-12 |
| EP3191119A1 (en) | 2017-07-19 |
| US20170216418A1 (en) | 2017-08-03 |
| RU2017105451A (ru) | 2018-08-27 |
| MX2017000209A (es) | 2017-05-01 |
| EP3842067A1 (en) | 2021-06-30 |
| RU2745720C2 (ru) | 2021-03-31 |
| BR112017000354A2 (pt) | 2017-11-07 |
| CA2956065A1 (en) | 2016-01-28 |
| CO2017001320A2 (es) | 2017-07-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hodgins et al. | Vaccination of neonates: problem and issues | |
| JP5775451B2 (ja) | インフルエンザを処置するための組成物および方法 | |
| AU2021201950B2 (en) | Immunogenic LHRH composition and use thereof in pigs | |
| CN109675029A (zh) | 油基佐剂 | |
| US9597393B2 (en) | Synthetic toll-like receptor-4 (TLR-4) agonist peptides | |
| JP5743315B2 (ja) | トランスフェクション方法及びそのための組成物 | |
| US8492516B2 (en) | Zona pellucida binding peptides for species specific immunocontraception of animals | |
| JP5265545B2 (ja) | 免疫応答を誘発または誘導する方法 | |
| TWI583393B (zh) | 免疫原性組合物、包含其之疫苗與治療劑及其用途 | |
| US20220031826A1 (en) | Vaccine For The Prevention And Treatment Of C. Difficile Infections And The Use Thereof | |
| KR102261457B1 (ko) | 면역 치료제용 펩타이드 | |
| US20220233668A1 (en) | Glycopeptide vaccine | |
| US8940693B2 (en) | Protein for the immunocastration for mammals | |
| WO2010130683A1 (en) | Glycan antigen | |
| Bradley | Immunocontraceptive vaccines for control of fertility in the European red fox (Vulpes vulpes) | |
| JP2023538539A (ja) | 抗コロナウイルスワクチン | |
| BR112017000354B1 (pt) | Composição veterinária, método não terapêutico de remoção do odor de macho inteiro de produtos à base de carne, e uso de peptídeo imunogênico e um veículo ou adjuvante de liberação veterinariamente aceitável | |
| Schell | The Innate Resistance of Mice to Mousepox | |
| Abdul-Wahid | Development and evaluation of a cyst wall protein 2-encoding Giardia transmission-blocking DNA vaccine | |
| CN103044546A (zh) | 一种朊蛋白抗体及其制备方法和应用 |