UA123890C2 - Інгібітори cd73 - Google Patents

Abstract

Винахід стосується сполук 5-[5]-[2-циклоалкіл]-6-піридазин-3-іл]-1Н-піримідин-2,4-діону або їх фармацевтично прийнятних солей та фармацевтичних композицій, які містять згадані сполуки, які інгібують активність CD73 і є придатними для лікування раку .

Description

Цей винахід стосується сполук 5-І(51-(2-циклоалкіл|-б-піридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону або їх фармацевтично прийнятних солей та фармацевтичних композицій, які містять згадані сполуки, які інгібують активність СО7З і є придатними для лікування раку.

СОр7З, також відомий як 5'--нуклеотидаза або екто-5'--чуклеотидаза (ЕС 3.1.3.5), є ферментом, який перетворює 5'-мононуклеотиди на нуклеозиди. СО7З3 експресується у багатьох тканинах і активується в ракових тканинах, а шлях СО7З сприяє росту пухлин, обмежуючи протипухлинний

Т-клітинний імунітет через передавання сигналів рецепторів аденозину (7Нпапу В, Сапсег

Везеєагси 2010; 70: 6407-6411; Апіопіоїї І, еїгаїІ., Ота Оізсомегу Тодау 2017; 22: 1686-1696).

СВ7З-дефіцитні миші мають підвищений протипухлинний імунітет і є стійкими до досліджуваних метастазів (5іа99 5, єї а!., Сапсег Незвєагсп 2011; 71: 2892-2900). Позаклітинний аденозин, утворений пухлинною СО73, накопичується в пухлинному мікросередовищі, ослабляє протипухлинний Т-клітинний імунітет (2папд В, Сапсег Везвагсі 2010; 70: 6407-6411; Апіопіоїї І, еїа!., Огид Оізсомегу Тодау 2017; 22: 1686-1696), і пов'язаний з ухилянням пухлин від механізмів імунологічного нагляду, проліферацією, міграцією, неоваскуляризацією, метастазуванням та хіміорезистентністю пухлинних клітин (Іпопе У, єї а!., Опсоїагоєї 2017; 8: 8738-8751).

Повідомлялось також, що підвищена експресія СО73 пов'язана з підвищеною імунною супресією (п 0, еї а)І., Сапсег Вев. 70: 2245-2255 (2010); Веамів РА, вї аї., Ттепавз Іттипої! 33: 231-7 (2012); Веамів, РА, еї аї., Сапсег Іттипої! НРев5. З: 506-17 (2015); Гої 5, еї аї., Ргос. Маї!).

Асад. 5сі. ОБА 110: 11091-11096 (2013)).

Отже шлях СО73 чинить імуносупресивний вплив, і було висловлено припущення, що блокування шляху СО7З може бути корисним при лікуванні раку (Апіопіої І, еї аі., Опсоїттипо!. 2016; 5: е1216292, дої: 10.1080/2162402Х.2016.1216292; Апіопіоїї І, єї аї., Ттепаз іп Сапсег 2016; 2: 95-109; АЇМага 0, єї а!., Іттипоїйегару 2016; 8: 145-163). Інгібітори СО7З знаходяться на стадії клінічних випробувань для лікування раку (Нау СМ, еї аї., Опсоіттипої. 2016; 5(8): е1208875;

Айага 0, єї а!., ІттипоїПегару 2016; 8: 145-163).

Залишається потреба у наданні альтернативних інгібіторів СО73, зокрема, для лікування раку. Зокрема, залишається потреба в доступних дрібномолекулярних інгібіторах СО73 для перорального вживання, які демонструють більш повне цільове інгібування в пухлинному мікросередовищі.

Відповідно цим винаходом надані сполуки інгібітори СО73, які можуть бути придатними для лікування раку. Цим винаходом надана сполука Формули в г нотах де п становить 0-3; де В" - це -Н, -Е, -гем-дифтор, -гем-диметил, -Сч.-« алкіл, -СНЕ», -«СЕ2СНз або -СНаСНеЕ; та

В? вибраний з-посеред -Н, -СН3З, -Е, -СІ, -СМ, або -ОСН»; або її фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу надана сполука Формули І, де п становить 0,

ВА - це -С.. алкіл, і В? - це -СН»з, або її фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це

Її КЗ Е

К ях Я К; су де ія ї ». Ка хе б;

М-ї Мем МАЯ ве М-х 00МАМ

Мн м М х е чи ЗИ г н го ув п н З 2 т Ах В Ко; лей жк ОХ Же я- іх 5 Ж М а

Об ре рани б иннуння Сх, ри ШИ.

М мем м ММ - Мем т ї є ноя кох на уд но Кв ме Ши пе жк Не ос: ну НЯ Ох ан Же С Око -н дО ї шій Мем ї пий Кр М н- Б М и М в Щщ- її. в рен те | З ее ше ит ШК де Щ Ме я Б т Й ших й В о й

Щк-К дини КЗ Кк ХК, шнйй хан и ще -- ШК и ШО ни ше М не и шив нн не НН Не

Щ- щем Ще 00 Мем М-Я же

В Н н

КЕ зе ьо іч - ак г» ною м но - М Ка сй ше ши ме и ме Чим К -ї МЕМ - Ме 2 5 І з а жене - в СА ви ЩА Ин й а щем М ше щем К я ще , ; , ще як Кк ї Н х пе М г но ін но и о ви хі Я я Я нн - Я й тк ран ща й й рев І ї. я де си ши ше НІ ШО Не: ШК ШЕ й М.М ш-ї щ-АМ м-ї м. і їх х

М й но я н р де шко й Ж І НК р, у -Ж Кн ;

Ме М М- 0 щАМ щ- м нн Н н

КЕ де ш-- в ря

Е я ра й - х ; ї і і-ї хі хі сек ; на й сонні г ЕФ. ее ІЗ ей дих у ен-яо Кан - н ух Я - Е рУШННЕХ ї х х де х 7

Віру р -Е г Гн по дусі Мура З кі т дження її й - - п че ху Ай и я м: рн В р-н щем Меню щем я Ме і. га.

М і Гомер і й Помер? .

г У Ган я Е но - «я ов о я че Може Мо Й щ ї хо ря і ї г єї Б гай х М - дей с: Ши ШІ ас» КИ в ВШ ни ЗИ се щ- Май М ше щ-м з: р ли З н їй б М-я щ-М 2 « або М або їх фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це 7 ї х

Гой шлнй де н З пиия о ен їх; З

В е не м. / М 4 й в о й у р; Тен ре СОН

ОО ях ки хх н-4 і банні о: ШИ нн ШИН шин бен ня че їй Кей Ге шк Б М ше М й м - ху нн м н це Є з ях - й рних . НК КЕ - і й и Ех в / К а Бан но сон -ф яИЦІХ м рай о в х ся у нн х ї х ко піша ші рах й рі ТТ, я (ме й й С.

ЗОщя Щ-М 8 М.О ше 7

В Н в- мем , або І або їх фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це

У Кк Ей їхоє й не й но ми но МК

Щ- яд, Щи --К М-Є щ--й з ШЕ в щ ; х ЯК | м льш ЖК о в гй А я і: ти шн рен г КК Піни щ- ЕК щ--2 ме к-я мем М-Я 00 Маю

М М М х х КЗ й Б ех їх, шк Гу ще й течі х і вн о ше: но ші: но йТ

НІ шк д-Ах яАт С її щої дн Ту т С ж р: м - М С щ- о вщ-м к-ї ке -- мем н Н н х У а : Е

Шия ше Е а х ї щщ х х Й у і на т Є ро я но де а НН Ян дих щ- ден,

У я ОХ ХЕ Е С хх й у, ОМ Ах бен Об-но и: шо:

ТЕ че ве і; Кей Її й її Б Ко З

М Мем Щ- Мем щ- Ме н В Н х я або з або їх фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це і КЕ

Б ку с. Ме г ж Н зд - й

Й В і, ню уд х чн В /й Е сш у г ЩА м- ях щ М иа о: р зни ЧІ ваше с: у ес: ШО ее вх

У шекй М: М -- щем Й - Ми М

Ь

Б І х х я Е ет г Ко о Хей о У дян -к ре - рй Но й но Я

Кк о ря М й и М - кі ее: Шо ШИ бе у дим Ок ЕМ

М-- ще: М-Я -к щ-я щ-АМ

М Н Н й й " або

Роди во й

М -ї ме

Ср | ак б

М- 0 меМ я або їх фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це

З ще

М Ко г» -- М Н но Й н й ма м яЖ ж У - М - Бра їй їх -к ЯК ща аж рн ие о Он ее: нн - щ-- Мем х щ- Ам ЩА 0 Мем

Не н М х х з

ЕК Б

Е К В: - ко ке х Н х і ше : ; чної г сля о 3 ї ря Й ї й Й и. Ко ден ці , Нау діння її ж ще а Ох Кк Хр З х х ях я ху ох ві Хе і І; с: Ши М-Я 0 Мем Щ-Я Мем щ- чем М Не

В ізомен і! Номер : омер , ОМТЕ я або

Її Ж іЯ сх

Я х й сг де Банк дя Га

Щ-я Мем н або їх фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу згадана сполука - це , Е ве ке чо ех

ЩА ЩА н або її фармацевтично прийнятна сіль.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу сполука Формули І є сполукою Формули: ною й зна ше я

МА мем це де В! - це -«СНа.СНз або -СН(СНз)г, або її фармацевтично прийнятною сіллю. В іншому варіанті здійснення цього винаходу сполука Формули І є сполукою, де В' - це -СН»СН», або її фармацевтично прийнятною сіллю. В іншому варіанті здійснення цього винаходу сполука

Формули І є сполукою, де В" - це -СН(СНз)», або її фармацевтично прийнятною сіллю.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу сполука Формули І є сполукою Формули:

в: м в! сф: ке А що р . тА ЦИТ ен Мем

В або

Гж- ня й ц шко я

Оу гл ЩЕ

М- 00 щем

М де В"- це -СНаСНз або СН(СНЗз)», або її фармацевтично прийнятною сіллю.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу сполука Формули І є сполукою Формули: с К.

В ж НЯ М ною й

Кі

Ед де В" - це -«СНаСНз або -СН(СНз)г, або її фармацевтично прийнятною сіллю. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука шкі МНН в ЧЕ ше А.

Ме нев нн або її фармацевтично прийнятна сіль.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука

Бей

М а р

Ж Ж

- Раш

З ж я дани рн

Щщ- щи г або її фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука

Гн н ! о Е ся х й р рай

ЩА ще ч-- ко " М або її фармацевтично прийнятна сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука не Ох

С шен Хрех нн або її фармацевтично прийнятна сіль.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука, яка являє собою 5-(5-К15, 25)-2-етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука, яка являє собою 5-(5-(15, 2В8)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надана фармацевтична композиція, яка містить 5-(5-К15, 25)-2-етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин- 2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль, та один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, розріджувачів або наповнювачів.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана сполука, яка являє собою 5-(5-(15, 2В8)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана фармацевтична композиція, яка містить 5-(5-К15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н- піримідин-2,4-діон та один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, розріджувачів або наповнювачів.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості 5-(5-К15, 25)-2- етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діону або його фармацевтично прийнятної солі.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості 5-(5-К15, 28)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діону або його фармацевтично прийнятної солі.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 5-(5-М(15, 25)-2- етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-АН-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятна сіль, для застосування в терапії.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 5-(5-(15, 2Н8)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятна сіль, для застосування в терапії.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 5-(5-М(15, 25)-2-

Зо етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-АН-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятна сіль, для застосування в лікуванні раку.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 5-(5-(15, 2Н8)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятна сіль, для застосування в лікуванні раку.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надана фармацевтична композиція для застосування в лікуванні раку, й ця композиція містить 5-(5-М(15, 25)-2- етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-АН-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надана фармацевтична композиція для застосування в лікуванні раку, й ця композиція містить 5-(5-(15, 2Н8)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон або його фармацевтично прийнятну сіль.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надане застосування 5-(5- (15, 25)-2-етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діону або його фармацевтично прийнятної солі, у виготовленні лікарського засобу для лікування раку.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом надане застосування 5-(5-К15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діону або його фармацевтично прийнятної солі, у виготовленні лікарського засобу для лікування раку.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надане одержання та застосування 4-хлор-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазину, який може бути структурно представлений так

Їй денні а Кк ре в. р Б Ж який є придатним для виготовлення сполуки або лікарського засобу для лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 4-хлор-6-(2,4- диметоксипіримідин-5-іл)у-3-метилпіридазин для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надане одержання та застосування 4,4,5,5-тетраметил-2-(2-заміщений циклопропіл)-1,3,2-діоксаборолану, який може бути структурно представлений так в ми вд З чу де В'«СНоСНз або СН(СНЗз)г, який є придатним для виготовлення лікарського засобу для лікування раку. В одному з варіантів здійснення цього винаходу В'ЄСНоСН». В іншому варіанті здійснення цього винаходу Н'СН(СН»з)г. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 4,4,5,5-тетраметил-2-(2-заміщений циклопропіл)-1,3,2-діоксаборолан для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надане одержання та застосування 2-(15, 25)-2-етилциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану, який може бути структурно представлений так х т т Й я "ви ге хх та який є придатним для виготовлення сполуки або лікарського засобу для лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 2-М15, 25)-2- етилциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом надане одержання та застосування 2-К15, 25)-2-ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану, який може бути структурно представлений так з й здо го ! пе та який є придатним для виготовлення сполуки або лікарського засобу для лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий 2-М15, 25)-2- ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий хіральний синтез 2- (15, 25)-2-етилциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану, із застосуванням (1,3- діоксоізоіндолін-2-іл)-(15, 25)-2-етилциклопропанкарбоксилату, який може бути структурно представлений так ро

Їуулих КИ Уши ше й ос Моя

Кк Й о

Зо ; де В'ЄСНоСН»з або СН(СНЗ)», та який є придатним для виготовлення сполуки або лікарського засобу для лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий (1,3-діоксоізоіндолін-2-іл)-(15, 25)-2-етилциклопропанкарбоксилат для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий хіральний синтез 2- (15, 25)-2-ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану, із застосуванням (1,3-діоксоізоіндолін-2-іл)-(15, 28)-2-ізопропілдиклопропанкарбоксилату, який може бути структурно представлений так

00 в ше че та який є придатним для виготовлення сполуки або лікарського засобу для лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий (1,3-діоксоізоіндолін-2-іл)- (15, 28)-2-ізопропілциклопропанкарбоксилат для застосування у виготовленні сполуки або лікарського засобу.

Білок СО7З експресується в багатьох тканинах, в тому числі в головному мозку, щитовидній залозі, надниркових залозах, кістковому мозку, лімфатичних вузлах, мигдаликах, селезінці, серцевому м'язі, гладенькій мускулатурі, легенях, носоглотці, печінці, жовчному міхуру, підшлунковій залозі, слинній залозі, слизовій оболонці рота, стравоході, шлунку, дванадцятипалій кишці, тонкій кишці, товстій кишці, прямій кишці, нирках, сечовому міхурі, яєчках, передміхуровій залозі, маткових трубах, піхві, молочних залозах, шийці матки, матці, ендометрії, яєчниках, м'яких тканинах та шкірі (ргоївіпаНаз.ога/»ЕМ5С100000135318-МТ5ЕЛІіввиє).

СОр7З надекспресується в пухлинах численних типів (Апіопіоїї І, єї а!., Маї. Веєм. Сапсег 13, 842- 857 (2013); Апіопіоїї І, еї аЇ., Ттепабз Сапсег 2: 95-109 (2016)). СО73 також експресується в нормальній та патологічній гепатобіліопанкреатичній тканині людини, включаючи гепатоцити, аденокарциному протоків підшлункової залози та позапечінкову холангіоцелюлярну карциному (Зсіатта, А., вії аІ., Сапсег Іттипої! Іттипоїнег 2019; дої.ога/1 0.1007/500262-018-2290-1).

Підвищена експресія та активність СО7З пов'язана з інвазивністю та метастазами пухлин і меншим часом виживання пацієнта (дій О, еї аіЇ., Сапсег Незеагсй 2010; 70: 2245-2255).

Підвищену експресію СО7З3 зв'язують з поганим прогнозом (Іпоце К еї аї., Опсоїагоєї 8: 8738- 8751 (2017); ТитгсоНе К, єї аЇ., Сапсег НКе5. 5: 4494-4503 (2015); и МТ, еї аї., УМопа 9.

Савзігоепієгої. 19: 1912-1918 (2013); Ми ХВ, єї а!., У. Зйиг9. Опсої. 106: 130-137 (2012); Виівзегеї 5, еї а!., Апп. Опсої. 29: 1056-1062 (2017); І есіегс В, евї аї., Сіїп. Сапсег Вев. 22: 158-66(2016)).

Експресія СО7З при тричі негативному раку молочної залози пов'язана з гіршими клінічними наслідками та підвищенням стійкості до хіміотерапії антрацикліном (АПага В, еї а!., Ехреп Оріп.

ТНег. Тагдеїв 2014; 18: 863-881). 2073 зв'язують з поганим прогнозом при плоскоклітинному раку голови та шиї (Веп 2-Н, єї аї., Опсоїагаєї5 2016; 7: 61690-61702). Експресія СО7З3 також пов'язана з прогресуванням нирковоклітинного раку (Ми У, єї аї!., Опсої. І ей. 2015; 9: 2485-2494).

СО073 надекспресується в пухлинах ендометрію АЇадах Е, еї аї!., Медіаюгв ої ІпїТаттаїцйоп

Зо 2014; дої: 10.1155/2014/509027), пухлинах тканини передміхурової залози (І есієтс ВО, евї аї.,

Сіїй. Сапсег Рез. 2016; 22: 158-166), в тканині недрібноклітинного раку легенів (Іпоце У, еї аї.,

Опсоїагдеї 2017; 8: 8738-8751). Повідомлялось, що СО73 надекспресується в пухлинах, включаючи рак молочної залози, рак ободової і прямої кишки, рак яєчників, рак шлунка та рак жовчного міхура (дао 2-ММ та 7папуд Н-2, Віотей Вев. Іпї. 2014; дої: 10.1155/2014/460654).

Повідомлялось, що СО7З3 надекспресується в лініях ракових клітин, включаючи лінії клітин гліобластоми, меланоми, раку молочної залози, раку яєчників, медулобластоми та раку сечового міхура (Сао 27-М/ та 7Напд Н-7, Віотеєа Вез.Іпі. 2014; дої: 10.1155/2014/460654).

Повідомлялось, що генерований СО73 аденозин ослабляє імунну реакцію та знижує виживаність у хворих на рак яєчників (сацайгеа Р-О еї аї., Опсоіттипоіоду 2016; 5 (5): єї! 127496).

Повідомлялось, що іп мімо блокада СО73 селективним інгібітором СО73 а,р- метиленаденозин-5'-дифосфатом зменшує ріст пухлин у сиягенних мишей, яким підшкірним шляхом були введені пухлинні клітини ЕС7 (лімфома), МС38 (товста кишка), АТ-3 (молочна залоза) та В16Е10 (меланома) (5іада «у, єї аІ., Сапсег Везвагсіп 2011; 71: 2892-2900; ЕБопе С, єї а|., У. Іттипої. 2012; 189: 2226-2233). Повідомлялось, що терапія антитілами проти СО7З інгібує ріст та метастазування пухлин молочної залози (5іа99 у), еїаІ.РМАБ2010; 107: 1547-1552;

Терма, у. Іттипої. 2013; 191:4165-4173).

Крім того, повідомлялось, що у пацієнтів, які страждають на рак, підвищується активність аденозину та ферменту СО7З (Ниапод М, еї аї., Сапсег Нез.75:1538 (2015)), а пацієнти, які не відповідають на інгібітори імунної контрольної точки, мають більш високий рівень аденозину, ніж ті, хто реагує (Сіаппаків НХ еї а)!., у. Сііп. Опсої. 35: 15 5иррі. 3036-3036(2017)).

Повідомлялось, що активацію онкогенів та втрата рецепторів естрогенів пов'язують з посиленою експресією СО7З (ВеїіпНагаї ., єї а!І., Сапсег Вев. 77: 4697-4709 (2017); 5руснаїйа .), еї а|., Сіп. Сапсег Ав. 10:708-17 (2004); Авсіепо апа МсАйнитг .)., Тгапві. Мед. 15: 173 (2017); Мошпа

А, еїаї., Сапсег Нев. 77:4684-4696 (2017)).

До суб'єктів, які можуть одержати позитивний результат від лікування інгібіторами СО73, належать ті суб'єкти, які мають пухлини, стійкі або рефрактерні до інгібіторів РО1/РОІ -1, такі як недрібноклітинний рак легенів, рак сечового міхура та меланома; ті суб'єкти, які страждають на рак, спричинений мутацією ЕСЕВ/ВВАР/Ктаз, такий як недрібноклітинний рак легенів, рак сечового міхура, меланома, рак ободової кишки та підшлункової залози; ті суб'єкти, які страждають на естроген-рецептор негативний рак, такий як тричі негативний рак молочної залози; ті суб'єкти, які мають високий рівень експресії СО73З, тобто такі, які страждають на рак підшлункової залози та рак ободової та прямої кишки. Якщо бажано, такий суб'єкт може бути вибраний для терапії сполукою, розкритою в цьому описі, або її фармацевтично прийнятною сіллю, виходячи з наявності визначених імуногістохімічним методом високих рівнів експресії

СО73 в пухлинах суб'єктів; або виходячи з наявності у пухлинах суб'єктів мутацій ЕСЕВ та

ВВАБЕ, які виявлені методами ВТ-РСА (ПЦР у реальному часі); або беручі до уваги втрату рецептора естрогенів в пухлинах суб'єктів, яку було виявлено із застосуванням імуногістохімічного аналізу або ВТ-РСА аналізу; або виходячи з наявності високого рівня аденозину та АМР (аденозин-5'-монофосфат) у пухлинах суб'єктів або плазмі, які були виявлені методом 10-М5 (рідинна хроматографія-мас-спектрометрія). Для фармакодинамічного оцінювання наведене в цьому описі ех мімо дослідження на основі Ї/0-М5 може бути застосоване для визначення впливу інгібітору СО7З на конверсію АМР в аденозин в крові.

Цим винаходом також наданий спосіб лікування раку у пацієнта, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі.

В цьому описі цим винаходом також наданий спосіб лікування раку, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі, де згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишки, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок. В одному з варіантів здійснення цього винаходу згаданий рак молочної залози - тричі негативний рак молочної залози. В іншому варіанті здійснення цього винаходу згаданий рак легенів - це недрібноклітинний рак легенів. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-І5-(15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н- піримідин-2,4-діон.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу пацієнтом є той, у кого визначена активність

СО73 у сироватці крові. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, "визначення активності СО73" означає виявлення наявності активності СО73. Методи визначення рівня експресії СО7З або активності СО73З відомі фахівцям у цій галузі, наприклад, дивись 5 Могеїо, єї аїЇ., У. Ттап5. Мей. 2017; 15: 244. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, "визначення активності СЮО73" означає кількісне визначення рівня перетворення АМР на аденозин за допомогою СО73, і у цьому описі наведене дослідження на основі І С-М5, яке полегшує кількісне визначення рівня активності СО73.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу пацієнтом є той, у кого була визначена експресія СО7З3 в тканині. В іншому варіанті здійснення цього винаходу цією тканиною є пухлинна тканина. Методи визначення рівня експресії СО7З3 в тканині відомі фахівцям в цій галузі, наприклад, із застосуванням вестерн-блотингу або імуногістохімії (ХА УУи, еї аї., у. Бига.

Опсої. 2012; 106: 130-137).

Цим винаходом також наданий спосіб, який включає визначення експресії СО7З в тканині, одержаній від пацієнта, якому була введена сполука за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятна сіль. У варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданою тканиною є пухлинна тканина.

Цим винаходом також наданий спосіб, який включає визначення активності СО73 у сироватці крові, одержаної від пацієнта, якому була введена сполука, що відповідає розкритій в цьому описі сполуці Формули І, або її фармацевтично прийнятна сіль. Цей спосіб є чутливим, не потребує біопсії пухлини, не потребує антитіл або імуногістохімії, полегшує кількісне визначення активності СО7З3 (наприклад, спрощенням обчислення ЕСзхо). В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-(15, 2В8)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон. в іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, спосіб крім того включає дослідження активності СО7З із застосуванням радіоактивно міченого аденозинмонофосфату (АМР) і визначення концентрації АМР, міченого радіоактивною міткою, із застосуванням мас-

спектрометрії. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, радіоактивно міченим АМР є "305-15М5-АМР.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданий спосіб включає (а) введення сироватки, одержаної від пацієнта, в кожне з множини вмістищ (наприклад, мікротитраційний планшет)», сконфігурованої так, щоб вміщати розчини з різними концентраціями сполуки, яку вводять пацієнту, (б) введення "3С10-5М5-АМР в кожне вмістище зі згаданої множини вмістищ, (с) інкубування згаданої множини вмістищ в умовах, що полегшують перемішування (наприклад, струшування), (4) центрифугування згаданої множини вмістищ, (є) перенесення супернатанту з кожного вмістища в нове відповідне вмістище, (Її) введення екстракційного розчину, що містить внутрішній стандарт, в кожне зі згаданих нових відповідних вмістищ, (9) центрифугування цих нових відповідних вмістищ, (п) перенесення супернатанту з кожного нового відповідного вмістища у відповідне вмістище для дослідження, (і) дослідження супернатанту у кожному відповідному вмістищі для дослідження на "3С10-5М5-аденозин, 73С10- 1Ма4-інозин та "»Ма4-гіпоксантин із застосуванням І! С/М5, як наведено у цьому описі ("Мас- спектроскопія на аденозин і очищення аденозину") та (|) обчислення ЕСоо. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-К15, 28)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон. В варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, внутрішнім стандартом є "ЗС5-АМР, "зС5-аденозин, "МА- інозин та "ЗС5-гіпоксантин.

Цим винаходом також надане застосування сполуки Формули | або її фармацевтично прийнятної солі в терапії. В одному з варіантів здійснення цього винаходу терапією є лікування раку. В іншому варіанті здійснення цього винаходу згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишки, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок. В одному з варіантів здійснення цього винаходу згаданий рак молочної залози - це тричі негативний рак молочної залози. В іншому варіанті здійснення цього винаходу згаданий рак легенів - це недрібноклітинний рак легенів. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука це 5-(5-(15, 28)-2-

Зо ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон.

Цим винаходом також надане застосування сполуки Формули | або її фармацевтично прийнятної солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку. В одному з варіантів здійснення цього винаходу згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишки, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок. В одному з варіантів здійснення цього винаходу згаданий рак молочної залози - це тричі негативний рак молочної залози. В іншому варіанті здійснення цього винаходу згаданий рак легенів - це недрібноклітинний рак легенів. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-(15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з одним або декількома протипухлинними засобами. До необмежувальних прикладів протипухлиних засобів належать рамуцирумаб (гтатисігитар), нецитумумаб (песйититаб), оларатумаб (оіагатштарб), гемцитабін (детсіїтаріпе), пеметрексед (ретеїгехед), галунісертиб (даІшпізепір), абемацикліб (аретасісіїв), гефітиніб (аеєїйіпір), вемурафеніб (метитгаїепію), дабрафеніб (дабгаїепіб), траметиніб (їІгатеїіпір), цисплатин (сівріайп), карбоплатин (сатборіаййп), дакарбазин (дасагбагіпе), ліпосомальний доксорубіцин, доцетаксел (досеїахе!Ї), циклофосфамід (і доксорубіцин (дохогибісіп), навелбін (памеїріпє), ерібулин (егіриційп), паклітаксел (расійахеї), зв'язані з білками частинки паклітаксела для ін'єкційних суспензій, іксабепілон (іхареріїопе), капецитабін (саресіїабіпе) РОГРОХ (лейковорин (Ієисомогіп), фторурацил (Пиогоишгасії) та оксаліплатин (охаїїріайп), БОЇ РІВ! (лейковорин, фторурацил та іринотекан (ігіпоїесап), цетуксимаб (сеййхітарб), інгібітор ЕСЕВ (рецептор епідермального фактору росту), інгібітор Раї (білок-регулятор експресії о-фетопротеїна), інгібітор В-Ваї, інгібітор сигнального шляху ЕВК, інгібітор СОКАУ/6, інгібітор індоламін-2,3-діоксигенази, інгібітор ТИЕр (фактор некрозу пухлин-В) та інгібітор рецептора ТОЕВД.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку, бо що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з одним або декількома імуноонкологічними засобами. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданий імуноонкологічний засіб - це антитіло проти РО-1, антитіло проти РО-Ї1, агоністичне антитіло проти СО 137 або антитіло проти СТІА4. До необмежувальних прикладів імуноонкологічних засобів належать ніволумаб (пімоїнтаб), іпілімумаб (іріїтитарБ), підилізумаб (ріайї:итавб), пембролізумаб (ретргоїїгитаб), тремелімумаб (петеїйтитар), урелумаб (игеіїнтар), лірилумаб (ІПйштаб), атезолізумаб (аїегоїїгитарб), дурвалумаб (дигуаіштавБ) та антитіло проти РО-1 1 І 3300054 (послідовності важкого та легкого ланцюгів якого представлені у МО 2017/034916 та 05 2017/0058033 як послідовності ФЕО ІЮ

МО: 10 та 5ЕО ІО МО: 11, відповідно). В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим імуноонкологічним засобом є антитіло проти РО-1. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим імуноонкологічним засобом є антитіло проти РО-І 1. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-І5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н- піримідин-2,4-діон і імуноонкологічним засобом є І 3300054.

В одному з варіантів здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування недрібноклітинного раку легенів, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули | або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з іншим засобом. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є осімертиніб (озітепіпів), цетуксимаб (сеїйхітаб) або абемацикліб (аретасісіїю). В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є осімертиніб. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є цетуксимаб. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є абемацикліб.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування меланоми, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули

Ї або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з іншим засобом. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є інгібітор ВВАЕ, антитіло проти РО-1 або антитіло проти РО-І1. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є інгібітор ВААБР. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є антитіло проти РО-1. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є антитіло проти РО-І1. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, антитілом проти РО-11 є І 3300054. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука це 5-(5- (15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон, та згаданий інший засіб, яким є антитіло проти РО-1 1, - це І! М3300054.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку ободової і прямої кишки, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з іншим засобом. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є абемацикліб. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-(15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон, та згаданим іншим засобом є абемацикліб.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку підшлункової залози, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з іншим засобом. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згаданим іншим засобом є абемацикліб. В іншому варіанті здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-(15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон, та згаданим іншим засобом є абемацикліб.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування тричі негативного раку молочної залози, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули | або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з іншим засобом. В одному з варіантів здійснення цього винаходу, якому віддають перевагу, згадана сполука - це 5-(5-К15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл)|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон.

Цим винаходом також наданий спосіб пригнічення ферментативної активності СО7З3 у пацієнта, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості сполуки бо Формули | або її фармацевтично прийнятної солі. Цим винаходом також наданий спосіб інгібування перетворення АМР на аденозин у пацієнта, що включає введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу цим винаходом наданий спосіб лікування раку, що включає введення ефективної кількості розкритої в цьому описі сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі одночасно, окремо або послідовно в комбінації з одним або декількома засобами, які модулюють аденозин. До необмежувальних прикладів засобів, що модулюють аденозин, належать антитіло проти СО7З та антагоніст рецептора аденозину.

Цим винаходом також надана фармацевтична композиція, яка містить сполуку Формули І або її фармацевтично прийнятну сіль з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями, розріджувачами або наповнювачами. Крім того, цим винаходом наданий спосіб одержання фармацевтичної композиції, який включає змішування сполуки Формули І або її фармацевтично прийнятної солі з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями, розріджувачами або наповнювачами. Цей винахід також охоплює нові проміжні продукти та процеси синтезу сполук Формули І.

Як вжито вище і протягом усього опису цього винаходу, наведені нижче терміни, якщо не зазначено інше, мають тлумачитися як такі, що мають такі значення: "Фармацевтично прийнятний носій, розріджувач або наповнювач" є середовищем, загальноприйнятим в цій галузі, для доставки біологічно активних засобів ссавцям, наприклад, людям.

Терміни "курс лікування", "лікування", "лікувати" тощо означають уповільнення або звертання прогресування розладу. Ці терміни також охоплюють полегшення тяжкості симптомів, поліпшення, ослаблення, усунення або зменшення одного або декількох симптомів розладу або стану, навіть якщо згаданий розлад або стан фактично не усунено, і навіть якщо прогресування згаданого захворювання або стану само по собі не уповільнюється або не звертається. "Ефективна кількість" означає таку кількість сполуки за цим винаходом або її фармацевтично прийнятної солі, або фармацевтичної композиції, що містить сполуку за цим винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль, яка буде спричинювати біологічну або медичну відповідь або чинити бажаний лікарем терапевтичний вплив на пацієнта. В одному з варіантів здійснення цього винаходу сполука або її фармацевтично прийнятна сіль інгібує

Зо перетворення АМР на аденозин в іп міго або ех мімо дослідженні ферменту СО73. В іншому варіанті здійснення цього винаходу сполука або її фармацевтично прийнятна сіль інгібує перетворення АМР на аденозин в цільній мишачій крові, одержаній від тварин, які одержували різні дози сполуки. "Гем-дифтор" відноситься до двох атомів фтору, зв'язаних з одним атомом вуглецю. "Гем-диметил" відноситься до двох метильних груп, зв'язаних з одним атомом вуглецю.

У значенні, вживаному у цьому документі, термін "пацієнт" відноситься до людини.

Ефективна кількість може бути легко визначена лікуючим діагностом, як фахівцем в цій галузі, шляхом застосування відомих методик і вивчення результатів, одержаних за аналогічних обставин. При визначенні ефективної кількості для пацієнта лікуючим діагностом до уваги береться ряд факторів, в тому числі, але не обмежуючись ними: особливості пацієнта; його розмір, вік і загальний стан здоров'я; конкретне наявне захворювання або розлад; ступінь ураження або тяжкість захворювання або розладу; реакція конкретного пацієнта; конкретна призначена для введення сполука; спосіб введення; характеристики біодоступності призначеного для введення препарату; вибрана схема приймання лікарського засобу; застосування супутнього лікарського засобу; та інші відповідні обставини.

Сполуки за цим винаходом можна використовувати в широкому діапазоні доз. Наприклад, дози на добу зазвичай знаходяться в межах від приблизно 0,01 мг/кг до приблизно 50 мг/кг маси тіла.

Сполуки за цим винаходом переважно виготовляють у вигляді фармацевтичних композицій, які вводять будь-яким шляхом, який робить згадану сполуку біодоступною, включаючи пероральний, внутрішньовенний та трансдермальний шляхи. За варіантом, якому віддають найбільшу перевагу, такі композиції призначені для перорального введення. Такі фармацевтичні композиції та способи їх одержання добре відомі в цій галузі. (Дивись, наприклад, Ветіпаїоп: Тпє бсієпсє апа Ргасіїсе ої Рнаптасу (О.В. Тгоу, Еайог, 2151 Еайоп,

Прріпсойн, М/Шіатв 8 УМІКіп5, 2006).

Фахівцю буде зрозуміло, що сполуки за цим винаходом здатні утворювати солі. Сполуки за цим винаходом містять основні гетероцикли і, відповідно, реагують з будь-якою з ряду неорганічних та органічних кислот з утворенням фармацевтично прийнятних солей. Такі фармацевтично прийнятні солі, одержані додаванням кислоти, та загальна методика їх одержання добре відомі в цій галузі. Дивись, наприклад, Р. еїапйпі, єї аїЇ., Напароок ої

Рпагтасеціїса! Зав: Ргорепіев, ЗеІесіоп апа Ове, (МСНАЛМІеу-МСН, 2008)). "Фармацевтично прийнятні солі" або "фармацевтично прийнятна сіль" вживається по відношенню до нетоксичної, неорганічної та органічної солі або солей сполуки за цим винаходом (5.М. Вегоде, вї аї!., "Рнаптасеціїйса! Зав", доитаї ої Рнаптасецшіїйса! бсіепсев, Мо! 66,

Мо. 1, Чапиагу 1977).

Позначка "ізомер 1" у назві сполуки означає, що відповідний проміжний хімічний продукт або сполука за цим винаходом є першим або першою з двох елюйованих енантіомерів, коли суміш пари енантіомерів відокремлюється хіральною хроматографією в умовах, описаних у наведеному нижче розділі "Препаративні методики та Приклади". Позначка "ізомер 2" у назві сполуки означає, що відповідний проміжний хімічний продукт або сполука за цим винаходом є другим або другою з двох елюйованих енантіомерів, коли суміш пари енантіомерів відокремлюється хіральною хроматографією в умовах, описаних у наведеному нижче розділі "Препаративні методики та Приклади".

Сполуки за цим винаходом можуть бути одержані за способами синтезу, добре відомими і визнаними в цій галузі. Прийнятні реакційні умови для етапів цих реакцій добре відомі в цій галузі, і відповідні заміни розчинників і сореагентів знаходяться в межах компетенції фахівців в цій галузі. Аналогічно, фахівцям в цій галузі буде зрозуміло, що синтетичні проміжні продукти можуть бути виділені та/або очищені різними відомими методами за необхідності або за бажанням, і що часто буде можливо використовувати різні проміжні продукти безпосередньо на подальших етапах синтезу з незначним очищенням або зовсім без очищення. Крім того, фахівець буде усвідомлювати, що в деяких умовах порядок введення складових не є критичним. Конкретний порядок етапів, необхідних для одержання сполук за даним винаходом, залежить від конкретної сполуки, що синтезують, вихідної сполуки та відносної відповідності заміщених складових, що добре розуміється кваліфікованим хіміком. Всі замісники, якщо не вказано інше, відповідають наведеному вище визначенню, і всі реагенти є добре відомими і визнаними в цій галузі.

У значенні, вживаному у цьому документі, наведені нижче терміни мають вказані значення: "АСМ" означає ацетонітрил; "СА5Т" означає трифторид діетиламіносульфуру, "ОСМ" означає

Ко) дихлорметан; "ОМАР" означає 4-диметиламінопіридин; "Ятво" або "ОМ50" означає диметилсульфоксид; "ее" означає енантіомерний надлишок; "Е5Б/М5" означає мас- спектрометрію з електророзпилюванням; "ЕїОАс" означає етилацетат; "ЕрРО" означає діеєтиловий ефір; "ЕВ5" означає ембріональну бичачу сироватку; "Я40-М5" означає газову хроматографію-мас-спектрометрію; "НВ55" означає збалансований сольовий розчин Хенкса; "ІСво" означає напівмаксимальну інгібуючу концентрацію; "| АН" означає алюмогідрид літію; "І б-

ЕБ/М5" означає рідинну хроматографію/мас-спектрометрію з електророзпилюванням; "М" означає мас-спектрометрію; "МеонН" означає метанол; "МТВЕ" означає метил-трет-бутиловий ефір; "МВиї ії" означає н-бутиллітій; "нм" означає нанометр або нанометри; "ЯМР" означає ядерний магнітний резонанс; "ОАс" означає ацетат; "розі" означає фунти на квадратний дюйм; "ВТ" означає кімнатну температуру або температуру навколишнього середовища; "5СХ" означає сильний катіонний обмін; "ЗЕС" означає надкритичну флюїдну хроматографію; "ЗМАг" означає нуклеофільну ароматичну заміну; "ТЕА" означає триетиламін; "ТНЕ" означає тетрагідрофуран; "А" означає час утримування; "мас." відноситься до масових пропорцій в розчині.

Сполуки за цим винаходом можуть бути синтезовані так, як показано на наведених далі схемах.

щЩ ую і кое о і я «еко и

Ї вону Се тор ме Не и І 1» й ! х ня мон сан п у ше. М их і Ну ше т БЕЗ. ; 3 , за беж а я і х Гн ря о ЖК не Кк й й ле й кШШшЯЙ шо

Он ун ож ШИ шк ФІН й ня Ме Я Мем

М

Формула ій

Ве СН СН»

СИС, МОСК СВБАСН, ев с

Схема 1 описує одержання сполуки Формули Іа. Із застосуванням загальновідомих умов реакції Сузукі, наявна у продажу (2,4-диметоксипіримідин-5-іл)/боронова кислота 1 може бути сполучена з 4,6-дихлор-З3-метилпіридазином. Для одержання сполуки 4 може бути проведена подальша реакція сполучення Сузукі хлорвмісної складової З з відповідно заміщеним транс- циклопропілборонатом. Фахівець буде усвідомлювати, що енантіомери сполуки 4 можуть бути відокремлені із застосуванням методів хірального розділення, добре відомих в цій галузі.

Сполуки Формули Іа можуть бути одержані шляхом деблокування метоксигруп у сполуці 4 за великою кількістю умов деметилювання, добре описаних у цій галузі.

Семи

Н 4 і є: Кн б Сніння бе я НИ К в |; пй У в їі со г а , й в М чЧинимуУда

В є сСНуснУ СНСВО», синени

Схема 2 описує складні боронові ефіри циклопропілу, необхідні для одержання сполук

Формули ІІ. Фахівець усвідомлює, що для одержання алкенілборонату 6, гідроборування відповідно заміщеного алкіну 5 може здійснюватись за великою кількістю умов, особливо в присутності каталізатора на основі перехідних металів, таких як Си або 77. Для одержання відповідно заміщеного транс-циклопропілборонату 7 згаданий алкенілборонат може бути підданий циклопропануванню у стабілізованих умовах карбеноїдного типу, добре відомих у цій галузі, таких як циклопропанування Сіммонса-Сміта, реакція Корі-Чайковського та спосіб циклопропанування діазометаном (або діазосполуками), як з (наприклад, Си, Ра, або Мі), так і без (наприклад, термічно або фотохімічно) каталізаторів на основі перехідних металів. Фахівець буде усвідомлювати, що термодинамічно переважним продуктом циклопропанування буде суміш транс-енантіомерів сполуки 7.

іо й Що 2

Во об; ях ОН ЧИ я

ТЕ - т я ООН ди, мн. с о ето ве ос й 5 16 НІ 12 о , . ту ї Ку з А я. й Кк В і Гея о шк ЇЙ т «фогілосокккя віт ен м в ІК . а Б й ще ЕЕ СОН ' У З е ї

І їй їз х

Ге А Тх З о Кк не й

ГСУ -- щ-й пить М - і п и ЕХ ща КУ я ГКУ ше ще я МАЧО

М ів Формула ЇВ ке сне, сис сСТСщев,

Схема З описує хіральний синтез сполук Формули Ір. Деазотування відповідно заміщеної амінокислоти 8 в модифікованих умовах реакції Зандмейєра (Запатеуєег) (радикал- нуклеофільне ароматичне заміщення (ЗМАг) для одержання сполуки 9 є добре відомим в цій галузі. Подальше відновлення до алкоголю 10 може бути здійснено з використанням великої кількості відомих в цій галузі відновлювачів, в тому числі гідридів алюмінію та диборану.

Циклізація до хірального епоксиду 11 в основних умовах добре описана в цій галузі.

Стереоселективна реакція Хорнера-Вадсворта-Гммонса може бути застосована шляхом обробляння хірального епоксиду 11 відповідним фосфонатним складним ефіром (наприклад, етил-2-діетоксифосфорилацетатом або триетилфосфоноацетатом) та відповідною основою (наприклад, алкіллітієм, алкоксидами металів або гідридами металів) для одержання транс- циклопропанової похідної 12 (Дивись, наприклад, Ї. ЮОеІНнаує; А. Мегзспаеєт; Р. ОеЇІреКе; МУ.

Вііопе. Ог9. Ргос. Вез. в Оеєм. 2007, 11, 689-692). Гідроліз сполуки 12 до відповідної кислоти 13 може бути здійснений за великої кількості основних умов, добре описаних у цій галузі.

Подальше сполучення кислоти 13 з відповідно заміщеним М-гідроксифталімідом для одержання сполуки 14 з використанням придатного кислотоактивувального реагенту, наприклад, карбонілдіїмідазолу, у присутності м'якої ненуклеофільної основи, добре описано в цій галузі.

Декарбоксилювальне борування М-гідроксифталімідного складного ефіру 14 може бути здійснено за багатьох умов, відомих в цій галузі, в тому числі у присутності каталізатора на основі перехідного металу (наприклад, реакція Сузукі-Міяури), у фотолітичних умовах або шляхом поодиноких реакцій перенесення електронів, у тому числі, наприклад, для комплексоутворення М-гідроксифталімідного складного ефіру з дибором у радикальному сполученні, полегшеному піридин-борним радикалом, для одержання транс-циклопропан- боронату 15 (Дивись, наприклад, М/.-М. Спепо; 5. Виї; В. 7Нао; МУ .-І. Хіпд; У. Ри. Ого. І ей. 2017, 19, 4291-4294). Сполучення боронату 15 з арил хлоридом 4 і подальше деметилювання для одержання хіральних сполук типу сполук Формули ІБ можуть бути здійснені аналогічно описаному на Схемі 1.

Схема Я щі ї

В ек щі . ї- п усно ТИ щи У зт в і ні не ин сі МАС Щ мову

Сеня ноя я й пкмкюююкофю Ак й ; й ж я У - сокжжнфюх ді й вх жк ї Н

М-М Он аю и: щи т те

І ії і о 4 г:

Кк, Кк.

Її - їла

Є п Оу о ДСН ново Мена зесеюсюєюєррк: і й ри - песооюкофи ї- р - 5 А й Ж Х г я в. А й хх ей : Женя, ях | ул КУ КК ; їй заннн х | Маша й ще щем щ-я Маха нн

З формула є ве, і Ва ке НСНУ, СН,

СаРУСНА НУ»

Схема 4 описує синтез сполук Формули Іс. Для одержання заміщеного піридазину 19 нуклеофільне заміщення дихлорпіридазину 17 може бути здійснено в умовах генерування вільних радикалів (наприклад, реакція Мінісци), добре відомих в цій галузі. Для одержання сполук типу сполуки Формули Іс сполучення боронату 20 з арил хлоридом 19 і подальше деметилювання може бути здійснено аналогічно описаному на Схемі 1.

Схема ; й Й с В. й

Я ї у ха

З з-ОН о м-н не; зна

Не р ггогсодви Маю ях ; зоннннже М че с ; ни ння ША шення нн Ме ден х хуй хо Х Я У їх х Я х Я бом веМ ОО Мам М май зі з Формуза ці пе, ва еп РО (СН.

Схема 5 описує синтез сполук Формули Ід. Для одержання метоксипіридазину 22 заміщення 2-хпорпіридазину 21 може бути здійснено в нуклеофільних умовах, загальновідомих в цій галузі.

Подальше деметилювання сполуки 22 може проводитись аналогічно описаному на Схемі 1 для одержання сполук типу сполук Формули Ід.

Схема б

З 1 в, Кк. и оку 1 У жу й кет т о - Її Нео в Я ке; рда їс На їв

Мн пики ще М--й р ск я й я чі знан я Що г Б

Ох нні ен ос: ШУ ни не

М- 00 Мем м- Мем

Н нн

Формжла Їс Формули іє ве 1.

В ТРУ ЄНЕ»

СОС, СНІСВІЬ.

Схема 6 описує синтез сполук Формули Іе. Для одержання сполук типу сполуки Формули їе ціанування сполуки Формули Іс може бути здійснено за різних умов, відомих у цій галузі, в тому числі реакцій, каталізованих перехідними металами (наприклад, Ра, Си, ВН).

Схема

У а г х і о ШЕ ов к. 0 й -Нй у жа ог се дин я мей кю х Ук

І Ок й Ов х а їз о,

НЕ се др 3 ЩО й СЕ с в о пн в у НН НН ки КТ пн а НИ у ї Є тк У ех АК о І Е Гя х Той х Ред Гній о й ї3 свя Н а ко - рей - те н-х 4 з й пе - де ху й е-ї Аню плини няні вс: ШИ ни я ще щ-М Б Щпю щ-Мм ЩА щ-М

М

27 ЗЕ Формуза І зо в В «НоСН,

Схема 7 описує синтез сполук Формули Її. Алкенілборонат може бути циклопропанований аналогічно описаному на Схемі 2. Для одержання хіральної сполуки 26 сполучення боронату 25 з арил хлоридом З може бути здійснено аналогічно описаному на Схемі 1. Зворотне перетворення діеєтилацеталю 26 на альдегід 27 може бути здійснено шляхом обробки відповідною кислотою. Обробка альдегіду 27 різноманітними фторуючими реактивами (наприклад, САБТ, ХіаїІРійо!?, Ріпоієадй"М або ЮОЮеохо-РІог?) може забезпечити одержання дифторметилу 28. Для одержання сполук типу сполуки Формули Ії подальше деметилювання сполуки 28 може бути проведене аналогічно описаному на Схемі 1.

Схема є

Фо ев х В ння Я БУ ї» вч Годннняй,

М - Кеь леденевйн Мж- а скккнкніфюк Й - я яви о В-в о М м- 0 щем н 28 БІ Формула

Схема 8 описує синтез сполук Формули Ід. Метансульфонат 29 може бути перетворений на фтори 30, із застосуванням відомих фахівцю методів заміщення з реагентами, такими як фторид калію або фторид трет-бутиламонію. Для одержання хіральної сполуки Формули Ід подальше деметилювання може бути здійснено аналогічно описаному на Схемі 1.

Препаративні методики та Приклади

Наведені нижче Препаративні методики та Приклади додатково ілюструють цей винахід та відображають типовий синтез сполук за цим винаходом, але не мають тлумачитись для обмеження обсягу цього винаходу у будь-який спосіб. Реагенти та вихідні матеріали є легко доступними або можуть бути легко синтезовані фахівцем у цій галузі. Слід розуміти, що

Препаративні методики та Приклади представлені як ілюстрації, а не обмеження, і що фахівцем у цій галузі можуть бути внесені різні модифікації.

ЇС-ЕБ/М5 виконують она системі рідинної хроматографії Адіепі НР 1100. Мас- спектрометричні вимірювання з електророзпилюванням (одержані в позитивному та/або негативному режимах) проводяться на квадрупольному мас-спектрометрі з селективним детектором маси, підключеному до системи високоефективної рідинної хроматографії НР1100

НРІ С. Умови І С-М5 (низький рН): колонка: РНЕМОМЕМЕХ? СЕМІМІ?Є МХ С-18 2,1 х 50 мм, 3,0 мкм; градієнт: 5-100 906 В протягом З хв, потім 100 95 В протягом 0,75 хв. температура колонки: 50-10 С; швидкість потоку: 1,2 мл/хв; Розчинник А: деіїонізована вода з 0,195 НСООН;

Розчинник В: АСМ з 0,1 95 мурашиної кислоти; довжина хвилі 214 нм. Альтернативні умови І С-

М5 (високий рівень рН): колонка: колонки АТЕНО "М ХТЕВНВА? М5 С-18, 2,1 х 50 мм, 3,5 мкм; градієнт: 5 95 розчинника А протягом 0,25 хв., градієнт від 5 95 до 100 95 розчинника В протягом

З хв. і 100 95 розчинника В протягом 0,5 хв. або від 10 95 до 100 95 розчинника В протягом З хв. і при 100 95 розчинника В протягом 0,75 хв.; температура колонки: 50:10 "С; швидкість потоку: 1,2 мл/хв.; Розчинник А: 10 мМ МНАНСсО», рн 9; Розчинник В: АСМ; довжина хвилі: 214 нм.

Препаративну хроматографію з оберненою фазою здійснюють на системі Адіїепі 1200 І С-

ЕБ/М5, спорядженій омас-спектрометром з селективним детектором маси та автопробовідбірником/колектором фракцій І еар. Методи з високим рівнем рН застосовують на колонці РНЕМОМЕМЕХ? СЕМІМІ2-МХ 75 х 30 мм з частинками розміром 5 мкм і передколонкою 10 х 20 мм. Швидкість потоку 85 мл/хв. Елюент: 10 мМ розчин бікарбонату амонію (рН 10) в

АСМ.

Спектри ЯМР, які визначали на ЯМР спектрометрі ВгиКег АМІЇ НО 400 МГц, одержували з розчинів у СОСІз або (СбОз3з)250 і представляли дані у млн.", із застосуванням залишкового розчинника |СОСІз, 7,26 млн"; (00О3)250, 2,50 млн.'| як еталонного стандарту. При представленні даних пікової мультиплетності можуть використовуватись такі абревіатури: 5 (синглет), а (дублет), І (триплет), 4 (квартет), т (мультиплет), Бі-5 (широкий синглет), аа (дублет дублетів), аї (дублет триплетів). Константи взаємодії (3), коли представлені дані, надаються в герцах (Гу).

Препаративна методика 1 Рацемічний транс-2-(2-етилциклопропіл)-4,4,5,5-тетраметил- 1,3,2-діоксаборолан с їй

То ннняй п-В шк ке

Рая ше

До розчину 2-КЕ)-бут-1-еніл|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану (1,65 г, 9,06 ммоль) в

ЕгО (45,30 мл) додають Ра(ОАс)» (0,20 г, 0,90 ммоль). Обробляють ультразвуком протягом 5 хв., і охолоджують до температури -5 70.

У 250 мл колбу Ерленмейєра вміщують спочатку 40 95 водний розчин КОН (162 мл), після чого ЕБО (245 мл). Двофазну суміш охолоджують до температури -5 С на водяній бані з сумішшю лід/насичений водний розчин Масі. Порціями протягом 10 хв. додають М-нітрозо-М- метилсечовину (36,1 г, 350 ммоль). Перемішують протягом 15 хвилин, і поміщають на баню з сумішшю сухий лід/ацетон. Шар діетилового ефіру зливають у вимірювальний циліндр, і до описаного вище розчину при температурі -5 "С додають суміш ЕБО (71 мл, « 10 еквівалентів

СНеМг). Через 2 год. вміст реакційної суміші фільтрують через діатомову землю, сушать над

МБО», і концентрують іп масо до одержання вказаної в заголовку сполуки (1,08 г, 58 95) Н

ЯМР (д6-ОМ5090) 6: -0,51 (аї, 9-93 Гу, 5,7 Гц, 1Н), 0,33-0,37 (т, 1Н), 0,50-0,54 (т, 1Н), 0,76-0,84 (т, 1Н), 0,91 (І, 9-74 Гц, ЗН), 1,14 (5, 12Н), 1,21-1,30 (т, 2Н).

Методика альтернативна Препаративній методиці 1

До розчину біс(пентаметилциклопентадієніл)/уцирконію діхлориду (11,1г, 25,5 ммоль) в ТНЕ (3,4 л) у атмосфері азоту при температурі 0 "С додають 1М розчин літію триетилборогідриду в

ТНЕ (41,3 мл, 41,3 ммоль). Нагрівають до кімнатної температури, і перемішують протягом 1 год., захищаючи колбу від світла алюмінієвою фольгою.

У іншій охолодженій азотом колбі при температурі -78 "С конденсують 1-бут-1-ин (50,6 г, 936 ммоль), і додають пінаколборан (55,0 г, 425 ммоль). Одержану суміш перемішують при температурі -78 "С протягом 30 хвилин, і через канюлю додають вміст першої колби. Додають

ТЕА (5,93 мл, 42,6 ммоль), і реакційну суміш перемішують і одночасно нагрівають до кімнатної температури протягом 20 год. Реакцію гасять додаванням через канюлю суміші лід/вода (1,5 л), додають ЕОАс (300 мл), і перемішують при кімнатній температурі протягом 30 хв. Одержані шари відокремлюють, і водну фазу повторно екстрагують ЕТОАс (2 х 200 мл). Органічні екстракти об'єднують, сушать над Маг50О5, фільтрують, і концентрують іп масо до одержання 2-

МКЕ)-бут-1-еніл|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану (53 г, 65 95) у вигляді масла жовтого кольору. аОо-Ме(т/2): 182 (М.).

До хлорйодометану (55 мл, 755 ммоль) при температурі -20 "С протягом 10 хв. додають розчин діетилцинку в толуолі (15 95 (мас.), 550 мл, 611 ммоль), і перемішують протягом 35 хв.

Краплями протягом 20 хв. додають розчин 2-МЕ)-бут-1-еніл|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2- діоксаборолану (53 г, 277 ммоль) в толуолі (100 мл), підтримуючи внутрішню температуру реакційної суміші на рівні -20 "С. Суміш перемішують протягом 2 год. з одночасним нагріванням до температури 0 "С. Реакцію гасять шляхом повільного додавання насиченого водного розчину

МНАСІ (750 мл). Органічний шар відокремлюють, і водну фазу повторно екстрагують ЕОАс (2 х 250 мл). Органічні екстракті об'єднують, сушать над М950О5, фільтрують, і випарюють до одержання вказаної в заголовку сполуки (48 г, 8495) у вигляді масла, придатного для застосування без додаткового очищення. СС-Ме(т/2): 180(М-16).

Препаративна методика 2 4,4,5,5-Тетраметил-2-КЕ)-З3-метилбут-1-еніл|-1,3,2-діоксаборолан

Ум ещи як к. ай х-О

Пінаколборан (9,5 мл, 64 ммоль) краплями протягом 5 хв. додають до льодяного 3- метилбут-1-ину (4,91 г, 72,0 ммоль). Реакційну посудину високого тиску герметизують,

Зо нагрівають до кімнатної температури, і вміст перемішують протягом 18 год. Додають біс(циклопентадієніл)уцирконію(ІМ) хлоргідрид (2,0 г, 7,4 ммоль) та ТЕА (1,1 мл, 7,9 ммоль).

Реакційну посудину високого тиску герметизують, поміщають на масляну баню при температурі 60 "С, ії перемішують протягом 10 хв. Одержаний розчин червоного кольору протягом 2,5 год. охолоджують до кімнатної температури. Реакційну суміш розбавляють ОСМ (200 мл), промивають насиченим водним розчином Мансоз (100 мл), насиченим водним розчином Масі (50 мл), сушать над Ма50О5, фільтрують через шар силікагелю (150 мл), силікагель промивають

ОСМ (700 мл), і концентрують іп масио до одержання вказаної в заголовку сполуки (11,5 г, 82 9Ув). ЕБ/М5 (т/лг): 196 (МАН). "Н ЯМР (СОсСіз») 6: 1,03 (а, 9-6,7 Гц, 6Н), 1,29 (в, 12Н), 2,37 (т, 1Н), 5,40 (аа, 1н), 6,64 (аа, 1Н).

Препаративна методика З

Рацемічний транс-2-(2-ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан я - В ша ї

До льодяної двофазної суміші ЕБО (70 мл) та водного розчину КОН (30,5 г, 435 ммоль, 70 мл НгО) порціями додають М-нітрозо-М-метилсечовину. Перемішують до розчинення твердих речовин («5 хв.). Одержаний розчин діазометану піпеткою вносять в ретельно перемішувану льодяну суспензію Ра(ОАс)г (237 мг, 1,05 ммоль) та 4,4,5,5-тетраметил-2-КЕ)-З-метилбут-1- еніл|-1,3,2-діоксаборолану (4,00 г, 20,4 ммоль) в ЕБО (70 мл). Після завершення додавання реакційну суміш нагрівають до кімнатної температури, фільтрують через діатомову землю, і фільтрат концентрують іп масо. Одержаний залишок розчиняють в ОСМ, фільтрують через шар силікагелю (25 г), і концентрують іп масио до одержання вказаної в заголовку сполуки (4,32 г, 299 Ув). ЕБ/М5 (т/2): 210 (МН) "Н ЯМР (СОСІ») 6: -0,35 (т, 1Н), 0,45 (т, 1Н), 0,65 (т, 1Н), 0,78 (т, 1Н), 0,98 (т, 7Н), 1,23 (5, 12Н).

Препаративна методика 4 4-Хлор-6-(-2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин х о С

Ме ден я ОМ 00 мем

У посудині високого тиску у суміші (1:4) діоксан/Нго (151 мл) об'єднують 2,4-диметокси-5- піримідинілборонову кислоту (6,75 г, 36,7 ммоль), 4,6-дихлор-З-метилпіридазин (5,98 г, 36,7 ммоль), (1,1-бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладій(І!) (0,55 г, 0,73 ммоль) та С52СОз (29,9 г, 91,8 ммоль). Повітря видаляють, і посудину заповнюють М2. Посудину герметизують, і гріють при температурі 70 "С протягом З год. Залишок фільтрують через діатомову землю, і промивають ЕЮАс. Органічну суміш промивають спочатку водою, потім насиченим водним розчином Масі, сушать над Мо950», і випарюють насухо. Одержаний залишок чорного кольору очищають шляхом хроматографування на силікагелі, із застосуванням 330 г колонки ВЕСІЗЕРФ з градієнтом 0-30 95 ОСМ/(3З3 95 Меон у ОСМ) протягом 15 хв. при швидкості потоку 200 мл/хв., і одержують вказану в заголовку сполуку (6,2 г, 63 95) після випаровування хроматографічних фракцій. ЕБ/М5 (т/2). (35С1/37СІ) 267/269 МАТ Н ЯМР (дв-ОМ50О) 6: 2,74 (в, ЗН), 4,00 (5, ЗН), 4,03 (5, ЗН), 8,20 (5, 1Н), 8,87 (5, 1Н).

Методика альтернативна Препаративній методиці 4

Потік азоту протягом 5 хв. пропускають через суміш (2,4-диметоксипіримідин-5-іл)боронової кислоти (85 г, 439 ммоль), 4,6-дихлор-З-метилпіридазину (75 г, 437 ммоль) та б52бОз (358 г, 1099 ммоль) в 1,4-діоксані (1175 мл) і Н2О (340 мл) Додають |(|1,1- бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладій(!І!) (6,6 г, 8,7 ммоль), і перемішують одержану суміш при температурі 75 "С протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, фільтрують суміш через діатомову землю, і відфільтрований осад промивають

ЕЮАс. Одержані шари відокремлюють, органічну фазу двічі промивають насиченим водним розчином МасСі, сушать над М950».5, фільтрують, і концентрують іп масо. До одержаного залишку додають воду (500 мл), перемішують протягом 16 год. при кімнатній температурі, і відфільтровують одержану тверду речовину. Зібрану тверду речовину промивають НгО, сушать у вакуумі протягом 16 год., і одержують бажану сполуку (70 г, 54 95) у вигляді твердої речовини коричневого кольору. ЕБ/М5 (т/з) (3501/3701) 267/269 |МаА1|-.

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано у

Препаративній методиці 4. 5-(5-Х і З-іл)-2,4 о й -(в-Хлорпіридазин-3-іл)-2,4- Мн 9 диметоксипіримідин дн У ц 2538/255 я ВАХ мем

Зо

Препаративна методика б /тмрансо-5--2-Етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-2,4- диметоксипіримідин х І

Мав д-й ; КОХ 7

Я ЩА ем

У 20 мл реакційну посудину високого тиску вміщують 4-хлор-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-

З-метилпіридазин (0,6 г, 2,0 ммоль), бісіди-трет-бутил(4- диметиламінофеніл))фосфін)дихлорпаладій(І!) (114мг, 0,16 ммоль), К»СОз (0,69 г, 4,9 ммоль),

НгО (225 мл) та рацемічний транс-2-(2-етилциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2- діоксаборолан (0,66 г, 3,37 ммоль). З посудини видаляють повітря, і заповнюють М2. Посудину герметизують, і гріють при температурі 90 "С протягом ночі. Реакційну суміш фільтрують через діатомову землю, органічний шар спочатку промивають водою, потім насиченим водним розчином Масі, сушать над Ма50О5, і концентрують іп масио. Одержаний залишок очищають методом хроматографії з оберненою фазою, із застосуванням 275 г колонки ВЕРІБЕРУ Соїа

С18, елююючи градієнтом 30-50 95 10 мМ розчину МНАНСОз/АСМ протягом 20 хв. при швидкості потоку 150 мл/хв., і одержують вказану в заголовку сполуку, що являє собою по суті рацемічну суміш ізомерів (475 мг, 70 95), у вигляді твердої речовини білого кольору після випаровування хроматографічних фракцій.

Одержані ізомери піддають очищенню із застосуванням 5ЕС (колонка: РНЕМОМЕМЕХ?У

ГиХе СеїІшіозе-4, 4,6 х 150 мм; 40 95 Меон/Со», ізократичне елюювання; швидкість потоку: 5 мл/хв., УФ 250 нм), і одержують 0,197 г ізомеру 1: 18-2,71 хв. (УФ); і 0,195 г ізомеру 2: ІВ 3,55 хв. (УФ), обидва з »98 95 ее. ЕБ/М5 (т/л2): 301 (М'-Н).

Препаративна методика 7 транс-5-(2-Ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-ілІ|-2,4-диметоксипіримідин о -к

Мах лек

ОН мем

Об'єднують 4-хлор-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-З3-метилпіридазин (1,97 г, 7,39 ммоль), рацемічний транс-2-(2-ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан (3,32 г, 15,8 ммоль), біс(іди-трет-бутил(і4-диметиламінофеніл)фосфін)дихлорпаладій(!!) (1,35 г, 1,85 ммоль), 1,4-діоксан (37 мл), і 1М водний розчин МагСОз (18 мл, 18 ммоль). Реакційну посудину продувають Му», і нагрівають до температури 90 "С протягом 18 год. Охолоджують до кімнатної температури, розбавляють ЕТОАс (150 мл), і шари розділяють. Органічний шар послідовно промивають 1М водним розчином Маг2СОз, насиченим водним розчином Масі, сушать над

Маз5оз, фільтрують, і фільтрат концентрують іп масо. Одержаний залишок очищають шляхом хроматографування на діоксиді кремнію, елююючи градієнтом 60-10095 ЕЮАсС/ОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді по суті рацемічної суміші ізомерів (1,48 г, 64 95) після випаровування хроматографічних фракцій.

Одержані ізомери піддають очищенню із застосуванням 5ЕС (колонка: РНЕМОМЕМЕХУ ОХ?

СеїІшов5е-4, 4,6 х 150 мм; 40 95 Меон/Со», ізократичне елюювання; швидкість потоку: 5 мл/хв.,

УФ 250 нм), і одержують 647 мг ізомеру 1: І8-2,56 хв., і 647 мг ізомеру 2: І8-3,75 хв. Е5Б/М5 (т/2): 315 (МАН).

Препаративна методика 8

Етил-(18,28)-2-етилциклопропанкарбоксилат їх в Дт У по ще

До розчину етил-2-діетоксифосфорилацетату (62,2 г, 277 ммоль) в 1,4-діоксані (400 мл), охолодженому на льодо-водяній бані (внутрішня температура: 8 С), краплями протягом 10 хвилин додають 2,5 М розчин н-Ви!і в сгексанах (110 мл, 280 ммоль). Видаляють охолоджувальну ванну, і перемішують протягом 30 хв. при кімнатній температурі. Розчин за допомогою канюлі переносять в 1 л реакційну посудину високого тиску, і додають (2Н)-2- етилоксиран (20 г, 280 ммоль). Одержану суміш перемішують при температурі 150 "С (тиск 50 фунтів/кв.дюйм (0,3447 МПа)) протягом 17 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, і додають воду (250 мл). Органічну фазу відокремлюють, і водну фазу повторно екстрагують МТВЕ (2 х 200 мл). Органічні екстракти об'єднують, промивають насиченим водним розчином Масі (2 х 150 мл), сушать над Ма50О5, і концентрують іп масо до одержання вказаної в заголовку неочищеної сполуки (49,1 г, кількісний вихід) у вигляді масла жовтого кольору, придатного для застосування без додаткового очищення. ОС-М5 (т/л2): 142 (Мк), 97 (М-45).

Препаративна методика 9 (15, 25)-2-Етилциклопропанкарбонова кислота гхя он

Суміш етил-(15, 25)-2-етилциклопропанкарбоксилату (39,44 г, 277,4 ммоль), 1,4-діоксану (315 мл) і 25 9о водного розчину гідроксиду натрію (315 мл) перемішують при температурі 100 7 протягом 16 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, екстрагують МТВЕ (2 х 300 мл), і видаляють органічну фазу. Водну фазу підкислюють 37 96 водним розчином НСІ до рн1-2, екстрагують МТВЕ (3 х 300 мл), шари розділяють, органічний шар промивають насиченим водним розчином Масі, сушать над Мд5О», і концентрують іп масио до одержання вказаної в заголовку сполуки (25,1 г, 75 95) у вигляді олії бурштинового кольору. "Н ЯМР (СОСІз) 5: 0,79-

0,85 (т, 1Н), 1,00 (її, 97,5 Гу, ЗН), 1,22-1,26 (т, 1Н), 1,32-1,42 (т, ЗН), 1,43-1,48 (т, 1Н), 9,0-12,0 (рі-5, 1Н).

Препаративна методика 10 (1,3-Діоксоізоіндолін-2-іл)-(15, 25)-2-етилциклопропанкарбоксилат я мо

УК Ган

Суспензію (15, 25)-2-етилциклопропанкарбонової кислоти (25,1г, 209 ммоль), 2- гідроксиізоіндолін-1,3-діону (34,8 г, 209 ммоль) і ОМАР (2,58 г, 20,9 ммоль) перемішують у ОСМ (360 мл) при температурі 0"С і краплями додають М, М'-дізопропілкарбодіїмід (29,3 г, 230 ммоль). Охолоджувальну ванну видаляють, і реакційну суміш перемішують протягом 2 год. при кімнатній температурі. Суспензію фільтрують через силікагелеву пробку, елююючи ОСМ.

Розчинник випарюють, і одержаний залишок очищають шляхом хроматографування на силікагелі, елююючи сумішшю 15 95 гексану/ацетон, і одержують вказану в заголовку сполуку (51,56 г, 84 95) у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. Е5Б/М5 (т/лг): 260 (М'-1).

Препаративна методика 11 2-МК15, 25)-2-Етилциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан

А иа и оси

Потік Ма протягом 5 хв. пропускають через розчин (1,3-діоксоізоіндолін-2-іл)-(18,28)-2- етилциклопропанкарбоксилату (51 г, 173,1 ммоль) та біс(пінаколато)дибору (87,9 г, 346 ммоль) у ЕЮАс (1 л). Додають етилізонікотинат (5,34 г, 35 ммоль), і перемішують суміш при температурі 85"С протягом 24 год. Одержану суспензію охолоджують, фільтрують, тверду речовину відкидають, і фільтрат коричневого кольору концентрують при зниженому тиску.

Одержаний неочищений залишок фільтрують через силікагелеву пробку, елююючи сумішшю 290 БЕЮАс/гексани. Видаляють розчинник з фільтрату, і одержаний залишок піддають повторному очищенню шляхом хроматографування на силікагелі, елююючи З 95 ЕІЮАс/гексани, і одержують вказану в заголовку сполуку (17,1 г, 49 95) у вигляді безбарвного масла після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. (50-М5 (т/г2): 180 (М-16).

Препаративна методика 12 (25)-2-Хлор-3-метилбутанова кислота яти Га! геї

ЗО С

Розчин І! -валіну (286 г, 2,44 моль) і 5М водний розчин НОСІ (3,25 л, 16,3 моль) охолоджують при температурі 0 "С. Краплями протягом 2 годин додають 4М водний розчин Мамо» (1 л, 4 моль), підтримуючи внутрішню температуру нижче 5 "С. Реакційну суміш перемішують протягом 2 год. з одночасним нагріванням до кімнатної температури, і додатково перемішують ще протягом 16 год. при кімнатній температурі. Протягом 30 хв. порціями додають МагСОз (242 г, 2,28 моль). Одержаний розчин екстрагують МТВЕ (3 х 1000 мл), об'єднані органічні екстракти промивають насиченим водним розчином Масі (500 мл), органічні екстракти сушать над Мд5Ох, і концентрують іп масо. Одержаний залишок очищають вакуумною перегонкою (15 мбар/140 "С (1500 Па/140 "С)), і одержують вказану в заголовку сполуку (248 г, 68 95) у вигляді масла. "Н

ЯМР (400 МГц, СОСі») 6: 1,1 (а, 9-6,6 Гц, 2,6 Гц, 6Н), 2,34-2,42 (т, 1Н), 4,19-4,23 (т, 1Н), 10,0- 12,0 (рі-5, 1Н).

Препаративна методика 13 (25)-2-Хлор-3-метилбутан-1-ол у но Н сі

Розчин (25)-2-хлор-3-метилбутанової кислоти (137 г, 1 моль) у 2-метилтетрагідрофурані (500 мл) охолоджують до температури 0 "С. Краплями протягом 2,5 годин додають 2,3М розчин

І АН у метилтетрагідрофурані (480 мл, 1,1 моль), підтримуючи внутрішню температуру нижче 10 "С. Нагрівають до кімнатної температури, і суміш перемішують протягом 1 год. при кімнатній температурі і протягом 1 год. при температурі 50 С. Реакційну суміш охолоджують до температури 0 "С, і послідовно та повільно додають НО (1,48 мл), 15 95 водний розчин Масон (1,48 мл) ї НгО (4,46 мл). Реакційній суміші дозволяють нагрітися до кімнатної температури, фільтрують через шар діатомової землі, і випарюють розчинник іп масио до одержання вказаної в заголовку сполуки (110 г, 81 95) у вигляді безбарвного масла. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІз) 6: 0,97- 1,1 (т, 6Н), 1,94-2,18 (т, 1Н), 2,60-3,09 (рі-5, 1Н), 3,71-3,78 (т, 1Н), 3,80-3,85 (т, 1Н), 3,90-3,96 (т, 1Н).

Препаративна методика 14 (28)-2-Ізопропілоксиран

Ко.

НН

Розчин КОН (195 г, 3,48 моль) у НгО (195 мл) охолоджують до температури 0 "С, і протягом 20 хв. додають нерозбавлений (28)-2-хлор-3-метилбутан-1-ол (110 г, 801 ммоль), підтримуючи внутрішню температуру нижче 5 "С. Реакційній суміші дозволяють нагрітися до кімнатної температури. Реакційну суміш очищають шляхом вакуумної перегонки при 100 мбар (0,01 МПа), нагріваючи від температури 23 "С до 50 "С, і одержують вказану в заголовку сполуку (47 г, 64 9бо) у вигляді безбарвного масла, "Н ЯМР (400 МГц, СОсСіз) 6: 0,98 (а, 9У-6,9Гц, ЗН), 1,05 (а, 9У-6,9 Гц,

ЗН), 1,51 (о, У-6,9 Гц, 1Н), 2,52-2,54 (т, 1Н), 2,70-2,75 (т, 2Н).

Препаративна методика 15 Етил-(15, 28)-2-ізопропілциклопропанкарбоксилат

А і В

До розчину етил-2-діетоксифосфорилацетату (153 мл, 772 ммоль) в 1,4-діоксані (870 мл), охолодженому на льодо-водяній бані (внутрішня температура: 8 "С), краплями протягом 25 хв. додають 2,5М розчин н-Виїі в гексанах (310 мл, 780 ммоль). Нагрівають до кімнатної температури, і перемішують протягом 40 хв. Розчин за допомогою канюлі переносять в З л реакційну посудину високого тиску, і додають (2А)-2-ізопропілоксиран (70 г, 772 ммоль) в 1,4- діоксані (180 мл). Реакційну суміш перемішують при температурі 150 "С під тиском 50 фунтів/кв. дюйм (0,3447 МПа) протягом 14 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, і додають НгО (700 мл). Шари розділяють, і водну фазу повторно екстрагують МТВЕ (2 х 500 мл).

Зо Органічні фази об'єднують, промивають насиченим водним розчином Масі (2 х 350 мл), сушать над Ма50О, і концентрують іп масио до одержання вказаної в заголовку неочищеної сполуки (107,7 г, »99 95) у вигляді масла жовтого кольору, придатного для подальшого застосування без додаткового очищення. (10-М5 (пт/2): 156 (М'ю).

Препаративна методика 16 (155 28)-2-ізопропілцдиклопропанкарбонова кислота ц ях З а не ! он

Суміш етил-(15, 28)-2-ізопропілциклопропанкарбоксилату (107,7 г, 482,6 ммоль) у 1,4- діоксані (800 мл), що містить 25 95 водний розчин Маон (800 мл), перемішують при температурі 100 "С протягом 7 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, додають воду (300 мл), екстрагують МТВЕ (2 х 500 мл), і видаляють органічну фазу. Водну фазу підкисляють 37 95 водним розчином НСЇІ (приблизно 500 мл) до рН 1-2.

Підкислену водну суміш екстрагують МТВЕ (2 х 600 мл), органічний шар промивають насиченим водним розчином Масі, сушать над Мд5О5, і концентрують іп масио до одержання вказаної в заголовку сполуки (54,2 г, 75 95) у вигляді масла бурштинового кольору. "Н ЯМР (400

МГц, СОСІ») 6: 0,81-0,86 (т, 1Н), 1,01 (да, 9-5,9 Гц, 3,7 Гц, 6Н), 1,04-1,13 (т, 1Н), 1,20-1,24 (т, 1Н), 1,28-1,37 (т, 1Н), 1,39-1,44 (т, 1Н).

Препаративна методика 17 (1,3-Діоксоізоіндолін-2-іл)-(15, 28)-2-ізопропілциклопропанкарбоксилат їн ія ні й

Суспензію (15, 2Н8)-2-ізопропілдиклопропанкарбонової кислоти (54,2 г, 359 ммоль), 2- гідроксиізоіїндолін-1,3-діону (59,8 г, 359 ммоль) і ОМАР (4,44 г, 35,9 ммоль) перемішують у ОСМ (690 мл) при температурі 0 "С. Краплями додають М, М'-діззопропілкарбодіїмід (50,4 г, 395 ммоль), нагрівають до кімнатної температури, і одержану реакційну суміш перемішують протягом 2 год. при кімнатній температурі. Додають Н2гО (600 мл), і фази розділяють. Водну фазу екстрагують ОСМ (2 х 300 мл), органічні фази об'єднують, сушать над М950»5, фільтрують, і випарюють. Одержаний твердий залишок очищають шляхом хроматографування на діоксиді кремнію, елююючи 100 945 ЮСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку (96 г, 88 95) у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору після випаровування хроматографічних фракцій.

ЕБ/М5 (т/г2): 274 (М-н1).

Препаративна методика 18 2-К15, 25)-2-Ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан ях с 5 Й м д- ЕВ с і Ой 2

Потік азоту протягом 15 хв. пропускають через розчин (1,3-діоксоіїзоіндолін-2-іл)-(15, 25)-2- ізопропілциклопропанкарбоксилату (96 г, 316 ммоль) та біс(пінаколато)дибору (160 г, 630 ммоль) у ЕЮА» (480 мл). Суміш перемішують при температурі 85 "С, і краплями протягом 10 хв. додають етилізонікотинат (24,38 г, 157 ммоль). Одержану суміш перемішують при температурі 85"С протягом 16 год. Одержану суспензію охолоджують, фільтрують, тверду речовину видаляють, і фільтрат коричневого кольору випарюють при зниженому тиску. Неочищений залишок фільтрують через силікагелеву пробку, елююючи сумішшю 2 95 ЕюАб5/гексани.

Видаляють розчинник з фільтрату, і одержаний залишок піддають повторному очищенню шляхом хроматографування на силікагелі, елююючи сумішшю З 956 ЕА5з/гексани, і одержують вказану в заголовку сполуку (25,3 г, 38 95) у вигляді безбарвного масла після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІз): -0,33-0,38 (т, 1Н), 0,42-0,47 (т, 1Н), 0,63-0,67 (т, 1Н), 0,75-0,82 (т, 1Н), 0,89-1,02 (т, 1Н), 0,98 (т, 6Н), 1,24 (5, 12Н).

Препаративна методика 19 4,4,5,5-Тетраметил-2-КЕ)-4-метилпент-1-еніл|-1,3,2-діоксаборолан

В ЩИ в в-О х ястй че ми

Зо КЕ)-4-метилпент-1-еніл|Іборонову кислоту (0,975 г, 7,62 ммоль) та пінакол (1,11 г, 9,14 ммоль) розчиняють у безводному ЮОСМ (9,7 мл). Додають Ма5О54 (0,7313 г, 6,05 ммоль), і перемішують при кімнатній температурі протягом З днів. Нерозчинні тверді речовини відфільтровують, і розчинник видаляють при зниженому тиску до одержання вказаної в заголовку сполуки у вигляді прозорого масла (1,6 г, 100 95). "Н ЯМР (400,13 МГц, ОМ50): 0,86 (а, уУ-6,6 Гу, 6Н), 1,08 (5, 6Н), 1,19 (5, 12Н), 1,62-1,72 (т, 1Н), 2,01 (14, 9У-6,9 Гц, 1,4 Гц, 2Н), 3,92 (5, 1Н), 5,31 (дії, т-17,9 Гц, 1,3 Гц, 1Н), 6,47 (ді, 9-17,9Гу, 6,9Гцу, 1Н).

Препаративна методика 20 трет-Бутил-|(25)-оксиран-2-іл|метокси|-дифенілсилан

А. вини фіни г. ві, а й і 7 і й й щ

До льодяного розчину (2А)-оксиран-2-іл|метанолу (15,0 г, 202,6 ммоль) в ОМЕ (135 мл) додають імідазол (33,34 г, 489,8 ммоль), і перемішують протягом 15 хв. Краплями протягом 30 хв додають трет-бутил-хлордифенілсилан (77 мл, 302,5 ммоль), і перемішують протягом ночі при кімнатній температурі. Розбавляють гексанами (1 л), діетиловим ефіром (500 мл) і водою (1 л). Шари розділяють, і водний шар екстрагують діетиловим ефіром (2 х 1 л). Органічні шари об'єднують, і промивають водою (3 х 750 мл), насиченим розчином МанНсСоОз, насиченим водним розчином Масі, і сушать над М9505,. Розчинник випарюють при зниженому тиску. Очищають шляхом хроматографування на силікагелі, елюент: 0-10 95 ЕОАс у гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (11,77 г, 18 Ус) у вигляді масла після видалення розчинника з хроматографічної фракції. "Н ЯМР (400,13 МГц, СОСІз»): 1,08 (5, 9Н), 2,64 (аа, 9-26 Гц, 5,1 Гц, 1Н), 2,77 (1, 9-46 Гц, 1Н), 3,15 (дпіпівї, У-3,5 Гц, 1Н), 3,73 (аа, У-4,7 Гу, 11,68 Гу, 1Н), 3,88 (аа, 9-3,2 Гц, 11,9 Гц, 1Н), 7,40-7,48 (т, 6Н), 7,71 (т, 4Н).

Препаративна методика 21

Етил (15, 25)-2-(гідроксиметил)циклопропанкарбоксилат

Ма но-я ва

До суспензії трет-бутоксиду натрію (3,67 г, 37,82 ммоль) у 1,4-діоксані (40 мл) при кімнатній температурі повільно додають триетилфосфоноацетат (7,5 мл, 38 ммоль). Через 1 год. додають трет-бутил-І|(25)-оксиран-2-іліметокси|-дифенілсилан (11,77 г, 33,76 ммоль), і гріють при температурі 140 "С протягом ночі в герметичній реакційній посудині високого тиску. Додають додаткову кількість триетилфосфоноацетату (2 мл), і гріють при температурі 160 "С протягом години. Суміші дозволяють охолонути, і розбавляють ЮОСМ (300 мл) і водою (150 мл). Шари розділяють, водний шар екстрагують ЮОСМ (3 х 150 мл). Органічні шари об'єднують, і промивають насиченим водним розчином Мансоз, насиченим водним розчином Масі, і сушать над Мд5О». Фільтрують через діатомову землю, і розчинник випарюють при зниженому тиску до одержання етил-(15, 25)-2-(трет-бутил(ідифеніл)силіл|оксиметил|циклопропанкарбоксилату (18,45 г) у вигляді масла. Розчиняють у ТНЕ (75 мл), і при кімнатній температурі додають тетрабутиламонію фторид (1М ТНЕ, 67 мл, 67 ммоль, 1,0 М). Перемішують протягом 48 год., і видаляють розчинник при 130 мбар (0,013 МПа) і температурі 30 "С. Очищають шляхом хроматографування на силікагелі, елюент: 0-50 96 ЕТОА5 у гексанах, і виділяють вказану в заголовку сполуку (3,35 г, 625905) у вигляді масла опісля видалення розчинника з хроматографічної фракції. ЕБ/М5 (т/2): 142 (М--1). "Н ЯМР (400,13 МГц, СОС»): 0,90-0,86 (т,

Зо 1Н), 1,23 (ад, 9У-4,5 Гу, 8,9 Гц, 1Н), 1,28 (І, 97,2 Гу, 4Н), 1,56-1,60 (т, 1Н), 1,69-1,77 (т, 2Н), 2,06 (5, 2Н), 3,50 (аа, 9У-6,9 Гу, 11,5 Гу, 1Н), 3,64 (аа, 9У-6,0 Гц, 11,4 Гц, 1Н), 4,14 (да, 9-71 Гц, 2,9 Гц, зн).

Препаративна методика 22

Етил-(15, 25)-2-формілциклопропанкарбоксилат а дБ сей Он

До охолодженого льодом розчину етил-(15, 25)-2-(гідроксиметил)циклопропанкарбоксилату (12,25 г, 84,9 ммоль) у ОСМ (425 мл) однією порцією додають піридинію хлорхромат (26,09 г, 118,6 ммоль). Через 30 хв. баню з льодом видаляють, і перемішують при кімнатній температурі протягом 4 год. Додають воду (200 мл), і фільтрують через діатомову землю. Промивають додатковою кількістю води (100 мл) і ОСМ (800 мл). Відфільтрований осад в діатомовій землі суспендують в ЮОСМ, і фільтрують. Цю операцію повторюють двічі. Органічні шари об'єднують, водний шар відокремлюють, і органічний шар фільтрують через шар діоксиду кремнію.

Промивають додатковою кількістю ЮОСМ, і розчинник випарюють при зниженому тиску до одержання вказаної в заголовку сполуки (11,0 г, 91 95) у вигляді масла. "Н ЯМР (400,13 МГц,

СОбСІі»): 1,30 (, У-7,3Гуц, ЗН), 1,57-1,50 (т, 1Н), 1,60-1,65 (т, 2Н), 2,26-2,30 (т, 1Н), 2,45 (4, 92-90

Гу, 4,2 Гу, 1Н), 4,13-4,22 (т, ЗН), 9,32 (й, 9-4,2 Гц, 1Н).

Препаративна методика 23

Етил-(15, 25)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилат ка в-ї х

Е

Трифторид дієтиламіносульфуру (24 мл, 172,3 ммоль) протягом З хв. додають до льодяного розчину етил-(15, 25)-2-формілциклопропанкарбоксилату (11,00 г, 77,38 ммоль) у ОСМ (220 мл). Через 1 год. льодяну баню видаляють, і перемішують при кімнатній температурі протягом 2 год. Додають трифторид дієтиламіносульфуру (3,5 мл), і додатково перемішують протягом 1 год. Суміш охолоджують на льодяній бані, і обережно виливають в насичений водний розчин

Мансоз. Шари розділяють, і водний шар екстрагують ОСМ (2 х 50 мл).

Органічні шари об'єднують, і сушать над Ма5О»5. Зразок фільтрують через невеликий шар діоксиду кремнію, і розчинник випарюють при зниженому тиску (250 мбар (0,025 МПа) і 30 "С) до одержання вказаної в заголовку сполуки (11,10 г, 87 95) у вигляді масла. "Н ЯМР (400,13 МГц,

СОбсІз): 1,14-1,19 (т, 1Н), 1,29 (т, 1Н), 1,30 й, 9У-7,2 Гц, ЗН), 1,97-1,89 (т, 2Н), 4,22 (а, 9-7,2 Гу,

ЗН), 5,79 (ід, УН-Р-56,8 Гц, У-3,6 Гц, 1Н).

Препаративна методика 24 (15, 25)-2--(Дифторметил)циклопропанкарбонова кислота 23 во / Си

Е

До розчину етил-(15, 25)-2-(дифторметил)циклопропанкарбоксилату (11,10 г, 67,62 ммоль) у

Меон (75 мл) додають Ін Маон (75 мл), і перемішують при кімнатній температурі протягом ночі. Додають ОСМ (70 мл), і шари розділяють. Водний шар екстрагують ОСМ (70 мл). Водний шар охолоджують на льодяній бані, і рН доводять до 1, додаючи 35 95 НСІ. Додають ОСМ (50 мл), і розділяють два шари. Водний шар екстрагують ОСМ. Органічні шари об'єднують, сушать над М495О»4, і розчинник випарюють при зниженому тиску (200 мбар (0,020 МПа), 30 "С) до одержання вказаної в заголовку сполуки (6,25 г, 68 95) у вигляді масла. "Н ЯМР (400,13 МГЦ,

СОбізв): 1,26 (1, 9-8,4Гц, 5,9 Гц, 1Н), 1,34-1,39 (т, 1Н), 1,92-1,96 (т, 1Н), 2,01-2,07 (т, 1Н), 5,82 (4, УН-Е-59 Гу, У-3,2 Гу, 1Н).

Препаративна методика 25 транс-Бензил-2-ацетилциклопропанкарбоксилат оо

Н й не зи ща ве не зак м | КУ р

До суміші бензилбромацетату (40 г, 174,618 ммоль), метилвінілкетону (43 мл, 523,85 ммоль), 1,4-діазабіцикло(2,2,2|октану (2,3 г, 20,9 ммоль) в ацетонітрилі (400 мл) додають К»СОз (36,2 г, 261,93 ммоль). Перемішують у атмосфері Ма при температурі 80 "С протягом ночі.

Дозволяють охолонути, фільтрують, і випарюють розчинник при зниженому тиску. Очищають

Зо хроматографуванням на силікагелі, елюент: 0-50 905 Е(ОАз/гексан, і одержують вказану в заголовку сполуку (13,4 г, 35 95) після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. "Н

ЯМР (400,13 МГц, а--ЮОМ50): 1,33-1,39 (т, 2Н), 2,08-2,13 (т, 1Н), 2,24 (5, ЗН), 2,54-2,59 (т, 2Н), 5,13 (5, 2Н), 7,39-7,37(т, 6Н).

Препаративна методика 26 транс-Бензил-2-(1,1-дифторетил)циклопропанкарбоксилат г Кк де ІЗ кт, ше бо,

До суміші транс-бензил-2-ацетилциклопропанкарбоксилату (2,76 г, 12,6 ммоль) та трифториду біс(2-метоксіетил)іуаміносульфуру (23,2 мл, 126 ммоль) при температурі 0"С додають ЕКОН (0,05 екв.). Дозволяють нагрітися до кімнатної температури, і гріють при температурі 50 "С протягом 40 год. Розбавляють ОСМ, і охолоджують суміш на льодяній бані для повільного додавання насиченого водного розчину МансСоОз. Шари розділяють, і водний шар екстрагують ОСМ (2 х 100 мл). Органічні шари об'єднують, і сушать над безводним Ма»5Ох.

Розчинник випарюють при зниженому тиску. Очищають хроматографуванням на силікагелі, елюент: 10 95 МТВЕ/гексан, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,30 г, 76 95) у вигляді безбарвного масла після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. "Н ЯМР (400,13

МГц, ад-ОМ50): 1,19 (ії, У-7,5 Гц, 2Н), 1,67 (І, У Н-Е-16 Гц, ЗН), 1,93-1,98 (т, 1Н), 2,00-2,08 (т, 1Н), 5,13 (5, 2Н), 7,38-7,40 (т, 5Н).

Препаративна методика 27 транс-2-(1,1-Дифторетил)циклопропанкарбонова кислота ок

ЕН Яку нон

До розчину транс-бензил-2-(1,1-Дифторетил)циклопропанкарбоксилату (6,56 г, 27,3 ммоль) в ЕІОА5 (136 мл, 0,2М) додають 10 95 Ра/С (1,53 г, 14,4 ммоль). Протягом З год. перемішують при кімнатній температурі в атмосфері Не, застосовуючи еластичну камеру з газом під тиском.

Фільтрують через діатомову землю, і промивають ЕЇОА5. Розчинник випарюють при зниженому тиску до одержання вказаної в заголовку сполуки (4,03 г, 98 95) у вигляді безбарвного масла. "Н

ЯМР (400,13 МГц, а--0М50): 1,10 (ї, У-7,4 Гц, 2Н), 1,66 (ї, У Н-Е-184 Гц, ЗН), 1,72-1,77 (т, 1Н), 1,96-1,99 (т, 1Н), 12,49 (5, 1Н).

Препаративна методика 28 5-5-К15, 25)-2-Етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-2,4-диметоксипіримідин те Рені, ; це

Ми й Щ-я Ме

Суміш 4-хлор-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазину (16 г, 54,0 ммоль), 2-15, 25)-2-етилциклопропіл/|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолану (17 г, 83,22 ммоль), 2М водного розчину МагСОз (70 мл, 140 ммоль) і 1,4-діоксану (290 мл) знегажують барботуванням через суміш Ме протягом 10 хв. Додають бісі(іди-трет-бутил(4- диметиламінофеніл)фосфін)дихлорпаладій(!І) (2,0 г, 2,74 ммоль) і одержану суміш перемішують при температурі 90 "С протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, розбавляють Н2гО, і екстрагують ЕТОА5. Одержані фази розділяють, органічну фазу сушать над безводним Мо50О5, і концентрують іп масио. Одержаний залишок очищають шляхом хроматографування на діоксиді кремнію, елююючи градієнтом 60-100 95 гексанів/ЕОА5, і одержують вказану в заголовку сполуку (12,95 г, 77 95) у вигляді масла бурштинового кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. Масло твердне при стоянні при кімнатній температурі до твердої речовини не зовсім білого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 301 (М--1).

Препаративна методика 29 5-5-К15, 28)-2-Ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-2,4-диметоксипіримідин х ні

ЕФ) Кк в яв мем 4-Хлор-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин (19,1 г, 70,6 ммоль), КзРоОх (45,9 г, 212 ммоль), 1,4-діоксан (300 мл) і Н2О (75 мл) змішують, і суміш знегажують М2 протягом 1Охв.

Додають (1,1"-бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладій(ІІ) (7,98 г 10,6 ммоль). Барботують азотом протягом 2 додаткових хвилин, і однією порцією додають 2-15, 25)-2- ізопропілциклопропіл)|-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан (22,2 г, 106 ммоль). Одержану суміш перемішують при температурі 80 "С протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, додають НгО, і екстрагують ЕЮА5. Органічний шар відокремлюють, сушать над безводним М950О:5, і концентрують при зниженому тиску. Одержаний залишок очищають хроматографуванням на діоксиді кремнію, елююючи сумішшю 85 Фо гексанів/Е(ОАЗ5, і виділяють вказану в заголовку сполуку (21,5 г, 92 95) у вигляді масла бурштинового кольору після видалення розчинника з хроматографічної фракції. Масло твердне при стоянні при кімнатній температурі до твердої речовини не зовсім білого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 315 (М--1).

Препаративна методика 30

А-(15, 25)-2-(Дифторметил)циклопропіл|-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин в

Х Гн о- ння г М шк Ве г

До знегаженої суспензії З-хлор-4-К(15, 25)-2-(дифторметил)циклопропіл|-6-(2,4- диметоксипіримідин-5-іл)піридазину (502 МГ, 1,46 ммоль) та 1,1- бісідифенілфосфіно)фероценпаладіюцІ!) дихлориду (53 мг, 0,07 ммоль) у ТНЕ (6 мл) додають диметилцинк (2М в толуолі, 1,5 мл, 3,0 ммоль). Гріють при температурі 60 "С у герметизованій посудині протягом 2 год. Дозволяють охолонути до кімнатної температури. Додають насичений водний розчин МНАСІ, і екстрагують ЮСМ (3х). Органічні шари об'єднують, сушать над безводним Мо95О:4, і розчинник видаляють при зниженому тиску. Очищають хроматографуванням на силікагелі, елюент: ЕІЮАс, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді залишку жовтого кольору (433 мг, 91,895) після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. Е5Б/М5 (т/л2): 323 (М'-1).

Препаративна методика 31

З,б-дихлор-4-циклопропілпіридазин

Ме

До суспензії 3,6-дихлорпіридазину (10,00 г, 67,12 ммоль) у воді (300 мл) додають 10 мл концентрованої Н25О4 і циклопропанкарбонову кислоту (5,85 мл, 73,7 ммоль), гріють при температурі 70 "С, і знегажують М». Протягом 30 с додають розчин А9МО: (2,28 г, 13,4 ммоль) в 10 мл НО, після чого краплями протягом 30 хв. додають розчин (МНа)252Ов (46 г, 201,577 ммоль) у 150 мл НгО. Через годину дозволяють суміші охолонути до кімнатної температури, і виливають на лід, рН доводять до 9 додаванням концентрованого МНАОН. Розбавляють ЕОА5, і відокремлюють органічний шар. Водний шар екстрагують додатковою кількістю ЕАЗ5.

Органічні шари об'єднують, сушать над безводним Маг25О:4, і випарюють розчинник при зниженому тиску. Очищають методом хроматографії з оберненою фазою (С18 Соїд, 415 г, градієнт 25-100 95 АСМ у 10 мМ бікарбонаті амонію; 150 мл/хв., протягом 30 хв.), і виділяють вказану в заголовку сполуку (6,83 г, 54 95) у вигляді твердої речовини білого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. ЕБ/М5 (т/з2): (3501/3701) 189/191.

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано у

Препаративній методиці 22.

Препаративна г. с. ЕЗ/М5 (т/г) методика Ме Хімічна назва Хімічна структура звсу/З7СІ ре 32 Рацемічний транс-3,6-дихлор-4-(2- --й х 231/233 ізопропілциклопропіл)піридазин ки р- р 33 Рацемічний | транс-3,6-дихлор-4-(2- ді 217/219 етилциклопропіл)піридазин ей ще 3,6 4-22 ! 2 за б дДихлор'яа ші 225/227 дифторциклопропіл)піридазин сей о че

М Ж

Рацемічний транс-3,6-дихлор-4-(2- КО (дифторметил)циклопропіл|піридазин - ж че 239і2А

Мем

Ко

Рацемічний 3,6 д-(24 пн ацемічний транс-3,6б-дихлор-4-(2-(1,1- у у 36 дифторетил)циклопропіл|піридазин рек 253/255 6-4 ща: 37 3,6-Дихлор-4-циклобутилпіридазин рик 203/205 не щей ї

З,6-Дихлор-4-(3,3- м

ЗВ диметилциклобутил)піридазин я 2917233 ще

Е

ШЕ

3,6-Дихлор-4-(3,3- Ма 39 дифторциклобутил)піридазин ден 239/2и1

Ми 40 З,6-Дихлор-4-циклопентилпіридазин - 217/219 2-6 У -ої

КЕ ЖЕ рак 3,6-Дихлор-4-(3,3- У м дифторциклопентил)піридазин д-і 253/255 еа-й Ус

ЧУ а с у; ший 42 З,6-Дихлор-4-циклогексил піридазин денні, 231/233 4-й ря пі ще

Препаративна методика 43

З-Хлор-4-циклопропіл-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)/піридазин х Гб о /

Дн нн --гї я ща мем

Змішують (2,4-диметоксипіримідин-5-іл)боронову кислоту (4,60 г, 25,0 ммоль), 3,б6-дихлор-4- циклопропілпіридазин (5,2 г, 28 ммоль), КгСОз (4.4 г, З2 ммоль), 1,4-діоксан (125 мл) та Н2О (42

МЛ), і суміш знегажують Ме протягом 10 хв. Додають комплекс (1,1- бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладію(іІІ) дихлорметан (1,5 г, 1,8ммоль), і додатково знегажують М». Одержану суміш перемішують при температурі 60 "С протягом 1 год. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, додають НгО, і екстрагують ЕюАс.

Відокремлюють органічний шар. Екстрагують водний шар додатковим ЕІЮА»5. Органічні шари об'єднують, сушать над безводним Ма?5О:, і випарюють розчинник при зниженому тиску.

Одержаний залишок очищають хроматографуванням на діоксиді кремнію, елююючи сумішшю 70 95 гексанів/(«3:2 ацетон: ОСМ), і виділяють вказану в заголовку сполуку (2,4 г, 33 95) у вигляді твердої речовини світло-жовтого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. ЕБ/М5 (т/2): (3501/3701) 293/295 МА1ТГ"

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано в

Препаративній методиці 6. методика Ме Хімічна назва Структура звсу/З7СІ х т» щ

Рацемічний транс-3-хлор-6-(2,А- о р еши 4А диметоксипіримідин-5-іл)-4-(2- Ме 335/337 ізопропілциклопропіл)піридазин и Ши Ма 4 щ- ех

Рацемічний З-хлор-4-(2,2- а Ж 45 дифторциклопропіл)-6-(2,4- ча ші Е 329/334 диметоксипіримідин-5- дні У с ітпі ме ШИ ди Но іл)упіридазин кока мем

Е

Рацемічний транс-З-хлор-4-(2- ха ен (дифторметил)циклопропіл|-6- шо Кк і: 46 (2,4-диметоксипіримідин-5- З Й У т 343/345 іл)упіридазин мч

К

Рацемічний транос-3-хлор-4-(2- за Манн (1,1-дифторетил)циклопропіл|-6- п Кй і: 47 (2,4-диметоксипіримідин-5- а п ЧИ с 3577359 іл)упіридазин м ЧІ ЧИ

З-Хлор-4-циклобутил-6-(2,4- Ек ца 48 диметоксипіримідин-5-іл) Ма ш- 307/309 піридазин ни Ши 2 М- Мам й 3-Хлор-6-(2,4- Є с 49 диметоксипіримідин-5-іл)-4-(3,3- ме ЩО 335/337 диметилциклобутил)піридазин пі У У

Я Кк 0 Ме М

Е

З-Хлор-4-(3,3- й и дифторциклобутил)-6-(2,4- о ще 50 диметоксипіримідин-5- Мах дек Заз3/345 іл)піридазин жи Шк: ов МеМ х Є З 3-Хлор-4-циклопентил-6-(2,4- З У 51 диметоксипіримідин-5- Моя 321/323 іл)піридазин а- р с 7 - Мен

Препаративна методика 52 4-Циклобутил-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метоксипіридазин х ги

Ге М

Ме и о- ден хо йо ВеЯ МЕМ

З-Хлор-4-циклобутил-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)упіридазин, одержаний відповідно до

Препаративних методик 21 і 33 з циклобутилкарбонової кислоти.

З-Хлор-4-циклобутил-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)піридазин (0,42 г, 1,4 ммоль) додають до розчину МаОМе, одержаного розчиненням Ма (0,16 г, 6,8 ммоль) у МеонН (12 мл). Вказану суміш гріють у закритій посудині при температурі 60 "С протягом ночі. Суміші дозволяють охолонути до кімнатної температури, додають 5095 насичений водний розчин Масі, і екстрагують ОСМ (3х). Органічні шари об'єднують, і сушать над безводним Ма5О»4. Розчинник видаляють при зниженому тиску, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,38 г, 93 95). у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/г2): 303 (М'-1).

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано у

Препаративній методиці 52.

Зо

Препаративна с. ЕБЗ/М5 (т/г) методика Ме Хімічна назва Структура (Мен х г. 4-Циклопропіл-б-(2,4- о ря 53 диметоксипіридин-5-іл)-3- Яшооооушекоу 289 метоксипіридазин а- их оито 4 5-ІБ-(3,3- . -7

БА Диметилциклобутил)-6- о Ю- 331 метоксипіридазин-3-ілІ|-2,4- Мен, диметоксипіримідин йон но

Я - нем

Е

4-(3,3-Дифторциклобутил)- х і 55 6-(2,4-диметоксипіримідин- ч ри й 339

Б-іл)-3-метоксипирідазин 0-4 ще й хе ї Щеня Мей 4-(3,3- ЖК

Дифторциклопентил)-6- х і 56 (2,4-диметоксипіримідин-5- и о ри 353 іл)у-З3-метоксипирідазин Б ФШИ ми ЩЕ 0-0 нн (Ізомер 1) ; щ. Мав в 4-(3,3- й

Дифторциклопентил)-6- х х З 57 (2,4-диметоксипіримідин-5- Щ о и 353 іл)-З-метоксипирідазин Не же ЧИ, (Ізомер 2) кне и ше Ин ці ен ща: ях 4-Циклогексил-6-(2,4- в й 58 диметоксипіримідин-5-іл)-3- Май дні, . 331 : КТ Я й метоксипирідазин о- | і У о 7 Щ-Я Мам

Препаративна методика 59 транс-трет-Бутилдиметил-(2-(2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл) циклопропіл|етокси|)силан

Ша: я хх ех

Може бути одержаний по суті так, як описано в Препаративній методиці 3, з наявного у продажу трет-бутилдиметил-|(Е)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)бут-3- енокси|силану. "Н ЯМР (400,13 МГц, СОСІ»з): 3,70-3,66 (т, 2Н), 1,51-1,38 (т, 2Н), 1,23 (в, 12Н), 1,04-0,96 (т, 1Н), 0,91 (5, 9Н), 0,71-0,67 (т, 1Н), 0,46-0,41 (т, 1Н), 0,07 (5, 6Н),-0,38 (аї, 9-9,3 Гц, 105,68 Гц, 1Н).

Препаративна методика 60 транс-трет-Бутилдиметил-(2-(2-(6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4- іл|ІГц(иклопропіл|етокси|силан и ра ж йоорршкм0 щАМ

Може бути одержаний по суті так, як описано в Препаративній методиці 4.

ЕБ/МО(т/2):417(М-1).

Препаративна методика 61 транс-2-(2-(6-(2,4-Диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4-іл|Іциклопропіл|єтанол я- СМ и еВ

Фторид тетрабутиламонію (5 мл, 5 ммоль, 1М у ТНЕ) та транс-трет-бутилдиметил-(2-(2-(6- (2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4-іл|Іциклопропіл|єтокси|Їїсилан (1,15 г, 8,9 ммоль) додають в ОСМ (3 мл), і перемішують при температурі 60"С протягом 1 год.

Дозволяють охолонути до кімнатної температури. Розбавляють ОСМ (80 мл), і промивають насиченим розчином МНАСІ (3 х 30 мл). Органічні шари об'єднують, сушать над безводним

Ма?5О»:, і розчинник видаляють при зниженому тиску. Очищають хроматографуванням на силікагелі, елюент: 0-30 96 МеОН/Е(ОАсС, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,53 г, 53 95) у вигляді твердої речовини білого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. ЕБ/М5(т/2): 317 (М--Н1). "Н ЯМР (399,80 МГц, СОСІ»з): 8,92 (в, 1Н), 7,29 (т, 1Н), 4,03 (в,

ЗН), 4,02 (5, ЗН), 3,81 (1, 5-6,2 Гц, 2Н), 2,76 (5, ЗН), 1,73-(т, ЗН), 1,26 (т, 2Н), 1,03(т, 2Н).

Препаративна методика 62 транс-2-(2-(6-(2,4-Диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4- іл|Іциклопропіл|єтилметансульфонат

НЕКЯ

Й еВ о

Ко Бе я кро КА

Метансульфонілхлорид (0,2 мл, З ммоль) додають до розчину транс-2-(2-І(6-(2,4- диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4-іл|циклопропіл|єтанолу (0,390 г, 1,22 ммоль) та М,

М-діїзопропілетиламіну (0,4 мл, 2 ммоль) в ОСМ (8 мл) при температурі 0 "С в атмосфері М».

Перемішують при температурі 0 "С протягом 40 хв. Розбавляють 50 мл ОСМ, і промивають 5 95

Мансо:з (2 х 30 мл) і водою (30 мл). Органічні шари об'єднують, сушать над безводним Маг25О4, і розчинник видаляють при зниженому тиску. Очищають хроматографуванням на силікагелі, елюент: 0-20 95 МеОН/ЕЮАс, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,280 г, 58 95) у вигляді твердої речовини коричневого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. ЕБ/М5 (т/2): 395 (М--1).) "Н ЯМР (399,80 МГц, СОСІз): 8,98 (в, 1Н), 7,38 (5, 1Н), 4,37 (Її,

Коо) 9-62 Гц, 2Н), 4,07 (5, ЗН), 4,05 (5, ЗН), 3,01 (в, ЗН), 2,81 (5, ЗН), 2,04 (т, 1Н), 1,90-1,78 (т, 2Н), 1,27 (т, 1Н), 1,06 (її, 9-71 Гу, 2Н).

Препаративна методика 63 транс-2,4-Диметокси-5-(б-метил-5-(2-(2-фторетил)циклопропіл|піридазин-з-іл|Іпіримідин і Руни Й о ХК а-й

У: лише 7 реки М-М

Гідрат тетрабутиламонію фториду (З мл, З ммоль, 1М у ТНЕ) додають до розчину трано-2-(2-

І6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3-метилпіридазин-4-іл|циклопропілфюіестилметансульфонату

(0280 г, 0,71 ммоль) у ТНЕ (3 мл). Нагрівають при температурі 70 "С протягом 2 год.

Дозволяють охолонути до кімнатної температури. Розбавляють ЕЮА»5, промивають насиченим водним розчином Масі, сушать над безводним Ма»5Ойх, і видаляють розчинник при зниженому тиску. Очищають хроматографуванням на силікагелі, елюент: 0-20 96 МеОНнН/ЕІЮАс, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,170 г, 7195) у вигляді масла блідо-жовтого кольору після видалення розчинника з хроматографічних фракцій. ЕБ/М5 (т/2): 319 (М--1). "Н ЯМР (399,80

МГц, СОСіз): 9,01 (т, 1Н), 7,39 (5, 1Н), 4,67-4,52 (дії, У Н-Е 48 Гц, У-6,7 Гц, 2Н), 4,08 (5, ЗН), 4,07 (5, ЗН), 2,83 (5, ЗН), 2,00-1,94 (т, ЗН), 1,27 (т, 1Н), 1,06 (т, 2Н).

Хіральне розділення: колонка Гих СеїЇІшШіо56е-4, 250 х 21 мм, швидкість потоку 70 г/хв., елюент: 40 96 МеОН/СО».

Енантіомер 1299 95 ее, п 2,59 хв. (их СеїЇІшо56-4, 4,6 х 150 мм, 40 95 Меон/сСо», 5 мл/хв., 225 нм). Енантіомер 2299 95 ее. її 3,34 хв. (их СеїЇшШовзе-4, 4,6 х 150 мм, 40 96 Меон/со», 5 мл/хв., 225 нм).

Приклад 1 5-5-К15, 25)-2-Етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діон не ди 3 п дн ра

М-Я Мем нн 5-І5-(2-етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-2,4-диметоксипіримідин (ізомер 1) (197 мг, 0,66 ммоль) розчиняють у 1М водному розчині НСІ (4 мл), і нагрівають одержану суміш до температури 70 "С протягом ночі. Реакційну суміш охолоджують до кімнатної температури, заморожують на бані з сумішшю ацетон/сухий лід при температурі -78 "С, видаляють розчинник ліофілізацією, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,176 г, 97 95) у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 273 (М'-Н).

ІН ЯМР (д6-ОМ50) 5: 1,00 (ї, 9У-7,3 Гц, ЗН), 1,11-1,16 (т, 1Н), 1,27-1,33 (т, 2Н), 1,47-1,52 (т, 2Н), 1,92-1,96 (т, 1Н), 2,80 (5, ЗН), 8,00 (5, 1Н), 8,41 (0, 9-5,5 Гц, 1Н), 11,73 (5, 1Н), 11,99-11,91 (т, 1Н).

Альтернативна методика для Прикладів 1-5

Суспензію З 5-І5-К15, 25)-2-етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-2,4- диметоксипіримідину (16,2 г, 51,5 ммоль) і ЇМ водного розчину НСІ (135 мл, 135 ммоль) перемішують при температурі 45 "С протягом 16 год. Охолоджують до кімнатної температури,

Зо додають 2М водний розчин КаНРО»х до рН--6 (приблизно 150 мл), і перемішують при кімнатній температурі протягом 16 год. Фільтрують, і збирають одержану тверду речовину, промивають водою, сушать у вакуумній печі при температурі 45 "С протягом 16 год., і одержують вказану в заголовку сполуку (13,8 г, 93 95) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/лг): 273 (Ма1).

Кристалізація 5-(5-М15, 25)-2-етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4- діону 5-5-К15, 25)-2-етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон розчиняють у метанолі, перемішують при температурі 50 "С протягом 1 год., і дозволяють охолонути до температури навколишнього середовища з його кристалізацією з розчину. Тверді речовини виділяють вакуумною фільтрацією, і короткочасно сушать у вакуумі при температурі 70 "С.

Приклад 2 5-5-К15, 28)-2-Ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діон н ке / Є Що щ-Я дн с Ше Ша

Є М МеВ н транс-5-І(5-(2-Ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-2,4-диметоксипіримідин (ізомер 1) (628 мг, 2,00 ммоль) розчиняють у Меон (3 мл). Додають 1М водний розчин НСІ (5 мл), їі нагрівають до температури 70 С протягом З год. Охолоджують до кімнатної температури, завантажують реакційну суміш на колонку 5СХ, промиту МеОНнН (20 г, біїїсусіє ФІПАВОМО Товіс

Асіа), промивають 5СХ колонку МеОнН (140 мл), та елююють потрібний продукт 2М МНз/Меон (140 мл). Фракції Мнз3/МеОнН концентрують до одержання вказаної в заголовку сполуки у вигляді твердої речовини кремового кольору (546 мг, 95 95). ЕБ/М5 (т/2): 287 (М--Н). "Н ЯМР (дв-ЮОМ5О) о: 0,99 (т, 9Н), 1,24 (т, 1Н), 1,81 (т, 1Н), 2,72 (5, ЗН), 7,67 (5, 1Н), 8,23 (5, 1Н), 11,43 (рз, 2Н).

Альтернативна методика для Прикладів 1-5

Суспензію 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-2,4- диметоксипіримідину (21,5 г, 65,6 ммоль) та 1М водний розчин НСІ (165 мл, 135 ммоль) перемішують при температурі 45 "С протягом 16 год. Охолоджують до кімнатної температури, і екстрагують МТВЕ. Органічну фазу видаляють, і у водну фазу додають 2М водний розчин

К»НРО» до рН-б (приблизно 150 мл). Одержану суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 16 годин. Фільтрують, збирають одержану тверду речовину, промивають водою, сушать у вакуумній печі при температурі 45"С протягом 16 год., і одержують вказану в заголовку сполуку (14,3 г, 76 Ус) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/лг): 287 (М-н1).

Приклад З 5-(5-(2-(Дифторметил)циклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діон

КЕ

М ей ЯХТ, І ху р й Деікнкх - х в й Я щ--У щ-М

М

5-(5-(2-(дифторметил)циклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон може бути одержаний по суті так, як описано в Прикладі 1.

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано в Прикладі 1. асо мч 5-ІВ-Метил-5-|геІ-(15, 25)-2- но в 4 ізобутилциклопропіл| М-ї й 301 піридазин-3-іл| -1Н-піримідин-2,4-діон беж -ї о

М- 0 Мем

М

Б.

Гек 5-(6-Метил-5-(геІ-(15, 25)-2-(1,1- нн о ОХ 5 дифторетил)циклопропіл| ч-ї д-ї 309 піридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон Ох ан- бр щ- МеВ

НЕ

КЕ

5-(5-К15, 25)-2- н о о Е (Дифторметил)циклопропілі|піридазин- М- доб | 281 3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон аж - й щ-- МАМ

Приклад 7 5-(6-Хлор-5-циклопропілпіридазин-3-іл)-1 Н-піримідин-2,4-діон

М

1М о НСІ (14 мл, 14 ммоль) додають до розчину З-хлор-4-циклопропіл-6-(2,4- диметоксипіримідин-5-іл)піридазину (1,0 г, 3,4 ммоль) у МеоОН (17 мл), і перемішують при температурі 50 "С протягом ночі. Розчинник видаляють при зниженому тиску, і одержують вказану в заголовку сполуку (0,9 г, 100 95) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/г2): (3501/87СІ) 265/267.

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано в Прикладі 7.

Зо не ЕБЗ/М5 (т/2 уні 5-Іб-Хлор-5-(геІ-(15, 28)-2- на уд х ізопропілциклопропіл|піридазин- І у жк чи 307/309 3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон пл ши Дан, я щем

Га 1 КЕ

Ве 5-ІВ-Хлор-5-(геІ-(18)-2,2- на КОСе дифторциклопропілі|піридазин-3- й жк я щ 301/303 іл|-! Н-піримідин-2,4-діон с ШИ ни Ша

Я Мей це е й 5-(б-Хлор-5-К15, 25)-2- но пен 10 (дифторметил)циклопропіл) М-ї лей й 315/317 піридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4- пейоойКе . М ЕХ р ях хх ит Ще діон н-- щи

М и 5-І(б-Хлор-5-Ігеі-(15, 25)-2-(11- а в дифторетил) де ДИ 329/331

Щ циклопропіл|піридазин-3-іл|-1 Н- дн АХ а піримідин-2,4-діон ши ач

М ет 5-(6-Хлорв. зілілн ве циклобутилпіридазин-3-іл)-1 Н- МН оянні 12 піримідин-2,4-діон; Ок р у.е 2г179/281 гідрохлорид - Мем не і 5-(б-Хлор-5-(3,3- чо мк: 13 диметилциклобутил)піридазин-3- Май дені 307/309 іл|-НН-піримідин-2,4-діон Ос р єї

М-Я вем

Н

КЕ

5-Іб-Хлор-5-(3,3- ав ри 14 дифторциклобутил)піридазин-3- ле снів, 315/317 іл|-!Н-піримідин-2,4-діон За - ре - 0 Мам

М сн

З

5-(6-Хлор-5- но М 15 циклопентилпіридазин-3-іл)-1 Н- - рей І 293/295 піримідин-2,4-діон ШО ние ШИЯ

В Ми

М

Приклад 16 4-Циклопропіл-6-(2,4-діоксо-1Н-піримідин-5-іл)піридазин-3-карбонітрил но І?

А-я ще

М

Розчин 5-(б-хлор-5-циклопропілпіридазин-3-іл)-1 Н-піримідин-2,4-діона (А, 57 мг, 0,22 ммоль, 100 95 (мас.)) У ОМЕ (1 мл, 12,9 ммоль) знегажують Мг2. Додають 2п(СМ)» (20 мг, 0,22 ммоль),

трис(дибензиліденацетон)дипаладій (0) (5 МГ, 0,0054 ммоль) та 1,7- бісідифенілфосфіно)фероцен (6 мг, 0,011 ммоль), і додатково знегажують М2. Кришку щільно закривають, і гріють при температурі 120 С протягом ночі. Охолоджують до кімнатної температури, і фільтрують через діатомову землю. Очищають методом хроматографії з оберненою фазою (С18 Со 15,5 г, градієнт 5-20 95 АСМ в 10 мМ гідрокарбонаті амонію; 20 об'ємів колонки), і виділяють вказану в заголовку сполуку (0,032 г, 58 90) у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору. ЕБ/М5 (т/г2): 256 (М'-1).

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано в

Прикладі 16. не ЕБЗ/М5 (т/г) 6-(2,4-Діоксо-1Н-піримідин-5-іл)- й ее не х 17 4-15, 28)-2- Що 298 ізопропілциклопропіл|піридазин- бе -й ЕК

З-карбонітрил Щ-- жи

Я

6-(2,4-Діоксо-1Н-піримідин-5-іл)- ц о вана 4-(кеі-(15, 25)-2- й і Е 18 Мі 306 (дифторметил)циклопропіл| ші чн ем піридазин-3З-карбонітрил чи ДИ те ЧИ "М : ек 4-Циклобутил-6-(2,4-діоксо-1Н- не т 19 піримідин-5-іл)піридазин-3- е р ра м 270 : я: ШИ ни ШИН карбонітрил М.Й Мем

Н

З

4-Циклопентил-6-(2,4-діоксо-1 Н- но й 20 піримідин-5-іл)піридазин-3- Ми 284 карбонітрил ас: ШИ ни Ше щм-я 00 ВАМ

М т ви 4-(18)-2,2-Дифторциклопропілі- о Ів 21 6-(2,4-діоксо-1Н-піримідин-5- Ме пов 292 іл)піридазин-3-карбонітрил п- сем я ок 6-(2,4-Діоксо-1Н-піримідин-5-іл)- но у 22 4-05, 25)-2-етилциклопропіл)| я ни ше в 284 піридазин -З-карбонітрил може ни Чи рид р р м. щ-ю

Приклад 23 5-(5-Циклобутил-б6-метоксипіридазин-3-іл)-1Н-піримідин-2,4-діон ет ; щ: ех - У. а г ос ШИ

Не 1М НС (5,2 мл, 5,2 ммоль) додають до 4-циклобутил-6-(2,4-диметоксипіримідин-5-іл)-3- метоксипіридазину (0,39 г, 1,3 ммоль), і перемішують при температурі 50 "С протягом 6 год., після чого при кімнатній температурі протягом ночі. Видаляють розчинник при зниженому тиску.

Очищають із застосуванням 5СХ картриджу (10 г, елюенти: 60 мл ОСМ, 60 мл 50 525 МеОнН у

Зб

ОСМ ії 120 мл 50 95 7/М МНз в МеоН в ОСМ), і одержують вказану в заголовку сполуку (0,337, 96 Фо) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 275 (М--1).

Наведені нижче приклади сполук можуть бути одержані по суті так, як описано в Прикладі 23. с. ЕБ/М5 5-(5-Циклопропіл-б- Н и ун 24 метоксипіридазин-3-іл)-1 Н- ни ач 261 піримідин-2,4-діон в ни ШК римід яд щ- ОО щ-М

М х 5-(5-(3,3-Диметилциклобутил)-6- н б ун 25 метоксипіридазин-3-іл|-1 Н- Ме оон, ЗОЗ піримідин-2,4-діон Он Зк щ-- С щем

НІ

Е

НЕ

5-ІБ-(3,3-Дифторциклобутил)-6- З А 26 метоксипіридазин-3-іл|-1 Н- Мн, 311 піримідин-2,4-діон Ок М -й ау в-й ме н

КОЖ реч 5-(5-(3,3-Дифторциклопентил)-6- о кі 27 метоксипіридазин-3-іл|-1 Н- Ме й 325 піримідин-2,4-діон (Ізомер 1) Ок - У щ- 00 Мем

М

КО и 5-(5-(3,3-Дифторциклопентил)-6- що 4 28 метоксипіридазин-3-іл|-1 Н- чо; ей, 325 піримідин-2,4-діон (Ізомер 2) О-і У й чу

М-я щем

М як 5-(5-Циклогексил-6- но р 29 метоксипіридазин-З-іл)-1 Н- ше ни ШЕ зо піримідин-2,4-діон екон ня Ма:

Н

Приклад 30 5-(5-К15, 28)-2-(2-Фторетил)циклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин- 2,4-діон

ИЕ

Га ке; Ів що

М рев о Кк Я х

Ох ДК ри

МА Ам

Не

НОСІ (ІМ у НО, 2 мл, 2 ммоль) додають до Енантіомеру 1 трансо-2,4-диметокси-5-|б-метил-5- (2-(2-фторетил)циклопропіл|піридазин-3-іл|піримідину (0,043 г, 0,14 ммоль), і гріють при температурі 50 "С протягом ночі. Видаляють розчинник при зниженому тиску. Очищають із застосуванням 5СХ картриджу (12 г, елюенти: 7/0 мл МеонН, 70 мл 2М МНз в Меон), і одержують вказану в заголовку сполуку (0,037 г, 8995) у вигляді твердої речовини білого кольору. ЕБ/М5 (т/2): 291 (М--1).

Біологічні аналізи

Наведені далі дослідження демонструють, що наведені як приклад сполуки за цим винаходом є інгібіторами активності СО7З і корисні при лікуванні раку.

Експресія та очищення білка СО7З

С-кінцевий 6-НІЗ-мічений людський СО7З (амінокислоти 1-547) експресується в клітинах ссавців НЕК2ОЗЕ шляхом тимчасової трансфекції клітин геном СО73 та очищення із застосуванням метал-афінної хроматографії на колонках з іммобілізованим іоном Міг" та гель- хроматографії за розміром молекул Зирегдех 200. С-кінцевий 6-НІЗ-мічений мишачий СО7З3 (амінокислоти 1-549) експресується та очищається так, як описано вище. С-кінцевий 6-НІ5- мічений пацючий СО73 (амінокислоти 1-549) експресується та очищається так, як описано раніше.

Мас-спектроскопія на аденозин та очищення аденозину

Автоматизована екстракційна система Адієпі 300 Варіаріге (Адіїепі, Запіа Сіага, штат

Каліфорнія) використовується з трьома чотирипоршневими насосами для високоефективної рідинної хроматографії (НРІ С), поєднаними з потрійним квадрупольним мас-спектрометром

Зсіех 6500 (АВ бсієх, Егатіпайат, штат Массачусетс) зі спряженим джерелом іонізації електророзпилюванням (Е5І). Систему ВРарійРіє Маб55 рес завантажують багаторазовим картриджем Раріагіге НІГІС (НІ) для твердофазного екстрагування (РЕ) (29203-80109).

Розчинник А, що використовується для завантаження та промивання зразків - це 50 мМ розчин форміату амонію, рН 4,0, що містить 595 (об'єми. АСМ. Розчинник В, який використовується для елюювання зразків, - це 0,396 мурашиної кислоти ж 2 95 гідроксиду амонію в суміші 70 95 АСМ/30 95 МеОнН. Зразки послідовно аналізують шляхом відсмоктування під вакуумом 10 мкл на замкнений контур для збору безпосередньо з багатолункових планшетів. 10 мкл зразка завантажують на картридж НІГІС, і промивають із застосуванням чотирипоршневого насоса 1, застосовуючи розчинник А, зі швидкістю потоку 1,25 мл/хв. протягом 3000 мс. Утримані досліджувані речовини елююють до мас-спектрометра із застосуванням чотирипоршневого насоса 3, застосовуючи розчинник В, зі швидкістю потоку

Зо 1,25 мл/хв. протягом 3000 мс. Систему повторно врівноважують чотирипоршневим насосом 1, застосовуючи розчинник А, зі швидкістю потоку 1,25 мл/хв. протягом 3000 мс.

Потрійний квадрупольний мас-спектрометр споряджають джерелом іонізації електророзпилюванням (Е5І), і досліджувані речовини контролюють із застосуванням моніторингу вибраних реакцій (528М) у позитивному режимі (МН). Аденозин контролюють при т/2 268,05/136,0, а монофосфат аденозину при т/72 348,1/136,0. Значення співвідношення площ для аденозину та монофосфату аденозину обчислюють, із застосуванням "ЗС5-аденозину та 1545-АМР, відповідно, як внутрішні стандарти.

Біохімічне дослідження людського СО7З

Мета цього дослідження полягає у виявленні та охарактеризовуванні інгібіторів активності ферменту СО73. Реакційні суміші (20 мкл), що містять 2 мкМ аденозинмонофосфату (бідта, Мо за каталогом 01930), 10 мМ трис-буферу, рН 7,5, 100 мМ Масі, 0,0195 В5А, 02 мМ октилглюкозиду та 50 мкМ білка СО73, наносять на 384-лунковий планшет (Мипс, Ме за каталогом 264573). Після 30 хв. інкубування при кімнатній температурі реакцію припиняють додаванням 20 мкл стоп-розчину, що містить 2 95 мурашиної кислоти та 10 мМ "ЗС5-аденозину (рибоза, мічена 7"3С5) (Сатрбгідде Ізоїоре Іарогаюгєз, Мо за каталогом Сі М-3678-0), з подальшим додаванням 40 мкл аНгО. Рівні аденозину- та рибози-3С5 аденозину (внутрішній стандарт) визначають із застосуванням мас-спектрометрії так, як описано вище. Для кількісної оцінки кожної реакції використовують співвідношення сигналів (пікова інтеграція аденозину/пікова інтеграція внутрішнього стандарту для аденозину). Інгібування у відсотках обчислюють із застосуванням рівняння (95 інгібування - 100х11-(Х-МІМ)УХМАХ-МІМ))|), де Х відповідає співвідношенню сигналів лунки, МАХ відповідає середньому співвідношенню сигналів контрольного ОМ5О і МІМ відповідає співвідношенню сигналів активності ферментів у присутності »10Х ІСво відомого конкурентного інгібітора. Для скринінгу кожну сполуку досліджують при 50 мкМ в 195 ЮМ50О. ІСво кожної сполуки визначають дослідженням кожної сполуки в 10 концентраціях від 0,0025 мкМ до 50 мкМ (із застосуванням схеми розведення 1:3).

ІСво для 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діона становить 0,028 мкМ.

ІСво для 5-(5-(15, 25)-2-етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діона становить 0,043 мкМ. бо Всі сполуки Прикладів, розкриті у цьому описі, демонструють ІСво меншу ніж 0,062 мкМ.

Дослідження механізму дії людського СЮО7З

Мета цього дослідження полягає у визначенні механізму дії сполуки, яка чинить інтерес.

Дослідження проводять так, як зазначено вище для біохімічного аналізу людського СО73. Кожну сполуку досліджують у 8 різних концентраціях від 0,023 мкМ до 50 мкМ за схемою розведення 1:3, але при 8 різних концентраціях АМР від 0,023 мкМ до 50 мкМ із застосуванням З-кратної схеми розведення. Співвідношення площі для різних концентрацій інгібітору та субстрату наносять на графік із застосуванням СтарпРай Ргізт 7.00, і підганяють із застосуванням спеціальної змішаної моделі інгібування для визначення значень Мтах, Кт, Кі та альфа інгібування. «Мтахарр-Мтах/(1-4ПИ(АІрна " Кі); Ктарр-Кт " (1-4ЩУКОЛІ1АПИ(АІрна " Кі));

Уу-Мтахарр " Х/Ктарр-Х), де альфа, Мтах, Кт і Кі є спільними для кожної сполуки).

Кожен з 5-І5-К(15, 25)-2-етилциклопропіл|-б6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону та 5-5-(15, 2Н)-2-ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діону Є неконкурентним інгібітором, який зв'язується з ферментно-фосфатним комплексом, але не з самим апоферментом.

Підвищення субстратних концентрацій АМР підвищує активність неконкурентних інгібіторів, наприклад, 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциюіопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону, оскільки значення його ІСзхо знижені, як показано в Таблиці 1.

Таблиця 1

Дослідження механізму дії мишачого СО7З

Метою цього дослідження є оцінювання інгібіторів щодо їх інгібування активності мишачого ферменту СО73. Це дослідження проводять так, як описано вище для біохімічного дослідження людського СО7З3, за винятком того, що використовують З мкМ АМР та 50 пМ мишачого ферменту СО73.

ІСво для 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону становить 0,175 мкМ.

Дослідження людських клітин СаЇшб

Мета цього дослідження полягає в тестуванні сполук проти СО7З в дослідженні на клітинній основі. Клітини Сашб (1500 клітин/лункад вирощують на 9б-лунковому планшеті,

Зо сенсибілізованому полі-О-лізином (ВО, Мо за каталогом 356640), що містить 100 мкл живильного середовища (МЕМ (мінімальне підтримувальне середовище) (Ссіірсо, Мо за каталогом 11095-072) - 195 пірувату натрію (Сеібсо, Мо за каталогом 11360-070) - 195 МЕАА (розчин замінних амінокислот) (Срірсо, Мо за каталогом 11140-050) 4 1095 ЕВ5 (Нусіопе, Мо за каталогом

ЗНЗО071). Планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 30 хв. з подальшим інкубуванням протягом ночі при температурі 37 "С/5 95 СО».

Клітини двічі промивають аналітичним буфером (10 мМ Трис-НСІ, рН 7,2, 10 мм О-глюкози, 1 ММ КСІ, 125 мМ Масі, 2 мМ МаосСіг) (90 мкл/лунка). Потім в кожну лунку додають 90 мкл аналітичного буферу з подальшим додаванням 10 мкл на лунку АМР та преміксу сполуки (50

ММ АМР, змінні концентрації сполуки в 195 ОМ50). Планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 60 хв., потім видаляють 10 мкл супернатанту/лунку, і додають на новий планшет з подальшим додаванням 20 мкл стоп-розчину (295 мурашиної кислоти, 1,2. мМ рибози-3С5 аденозину (Сатьгідде Івоїоре І абогайогієв, Мо за каталогом СІ М-3678-0) та 90 мкл дано для мас-спектроскопічного аналізу. Рівні аденозину та рибози-ЗС5 аденозину (внутрішній стандарт) визначають мас-спектрометрією (Адііепі ВНаріагіге) так, як описано вище для біохімічного дослідження людського СО73. Інгібування у відсотках також обчислюють так, як описано вище.

ІСво для 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону становить 0,0073 мкМ (сполука Прикладу 2).

ІСво для 5-(5-(15, 2А)-2-етилциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону становить 0,028 мкМ.

Ех мімо дослідження цільового інгібування

Мета цього дослідження полягає в тестуванні сполук проти мишачого СО7З в крові мишей в ех мімо дослідженні. Тваринам (б/групу) пероральним шляхом вводять кожну сполуку, приготовлену у 20 95 НРВСО (2-гідроксипропіл-р-циклодекстрин), рН 2, після того, як об'єм пухлин досягає приблизно 400 мм. Після обробки кров відбирають у гепаринізовані пробірки, та використовують для ех мімо дослідження конверсії 73210-5М45-АМР на мічений аденозин, інозин та гіпоксантин так, як описано для ех мімо дослідження з використанням цільної крові, зібраної у тварин, яких піддавали обробці сполуками шляхом перорального дозування. 5-5-(15, 2Н8)-2-ізопропілциклопропіл|-6-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон інгібує конверсію АМР на аденозин, інозин та гіпоксантин у цільній мишачій крові тварин, які були оброблені різними дозами сполуки так, як показано в Таблиці 2.

Таблиця 2 пи 7 В ПОТ Я ПОН ПОН ТК ТТ ПО х- статистична значущість

ІСво для 5-(5-К15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діону становить 0,0073 мкМ.

Іп мімо дослідження цільового інгібування людського СЮО7З на основі пухлинних клітин Са|Шб

Мета цього дослідження полягає в тестуванні сполук проти людського СЮО7З на пухлинних ксенотрансплантатах, які походять з людських ракових клітин Са|шб, в дослідженні цільового інгібування іп мімо. Клітини Саішб (АТСС) вирощують у середовищі НВ5О5, доповненому 10 95 ембріональної бичачої сироватки. Субконфлюентні клітини збирають трипсином, і двічі промивають безсироватковим середовищем для вирощування. Ріст підшкірних пухлин ініціюють введенням 5 х 109 клітин у суміші НВ55 та МАТАВІСЕЇ Ф (ВО Віозсіепсез, Егапкіїп І аКе5, штат

Нью-Джерсі) в задню частину боку "голих" мишей (ТНе Напоп І арогайогу). Коли середній об'єм пухлини досягне приблизно 400-500 мм3, тварин рандомізують за розміром пухлин та масою тіла, і розміщають у відповідні досліджувані групи так, як зазначено. Після обробки зразки пухлин (по 50-80 мг кожної) збирають, і обробляють в 1 мл холодного екстракційного буфера, який містить внутрішні стандарти, так, як описано нижче.

Зо В ступку для попереднього охолодження вносять смужку фольги і рідкий М2. Пухлинну тканину накривають іншою смужкою фольги, і товкачиком розбивають пухлину до її повного подрібнення. Від 50 мг до 100 мг пухлинної тканини поміщають у пробірки (Різнег Зсієпійіс, Мо за каталогом 02-681-302), і поміщають на сухий лід. В пробірки вносять по одній металевій кульці (Оіадеп, Мо за каталогом 69989) та по 1 мл 80 95 метанолу, який містить внутрішні стандарти 13б65-аденозин, З3С5-АМР, ?М5-СТР, "»На-інозин-5'-монофосфат о та /"З0б-5М-гіпоксантин (Сатьгідде Ісоторе ар та Саутап СНетісаї), і зразки зберігають при температурі -80 "С до застосування для І С/М5 дослідження.

Кров також відбирають у гепаринізовані пробірки та використовують для ех мімо дослідження конверсії "7305-9М5-АМР на мічений аденозин, інозин та гіпоксантин так, як описано для дослідження ех мімо, використовуючи цільну кров, зібрану у тварин, яких піддавали обробці сполуками шляхом перорального дозування.

Як показано в Таблиці 3, 5-(5-(15, 28)-2-ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1 Н- піримідин-2,4-діон інгібує конверсію АМР на аденозин в пухлинах СаЇшб, оброблених різними дозами згаданої сполуки.

Таблиця З нини шишки кс лиш " - статистична значущість.

Дослідження супресії Т-клітин

Карбоксифлюоресцеїндіацетат-сукцинімідиловий складний ефір (СЕБЕ) використовується як маркувальний агент. РВМС (мононуклеари периферичної крові) людини або ізольовані клітини СО4 (0,5 х 106-1х108 клітин) промивають маркувальним буфером (АРМІ 1640 м/ - глутамін, СІВСО, Мо за каталогом 11875), що містить 5 95 НІ ЕВ5 (Сіірсо, Мо за каталогом 10082), і суспендують в 1 мл маркувального буфера. Клітини змішують з 110 мкл РВ5, що містить 50

МКМ СЕ5Е (Віоієдепа, Мо за каталогом 423801), і інкубують при кімнатній температурі протягом 5 хв. Мічені клітини промивають один раз РВ5, який містить 5 95 НІ ЕВ5 (Сзібсо, Мо за каталогом 10082), і один раз нормальним середовищем для вирощування Т-клітин (Х-Мімо 15, І оп7а, Мо за каталогом 04-74403), яке містить їх пеніцилін/стрептоміцин, і суспендують у середовищі для вирощування, яке використовують для РМВС та клітин СО.

Активація та обробка Т-клітин

Мічені СЕБЕ людські РВМС (600000 клітин/мл) або клітини СО4 (500000 клітин/мл) змішують з Т-активатором людських СОЗ3З/С028 ЮупареайдеФ (Сірсо, Ме за каталогом 111310) у співвідношенні клітини/гранули 1:11 та людським І//-2 (60 МОд/мл, НКоспє, Мо за каталогом 11011456001). Клітини поміщають на водяну баню при температурі 37 "С на 10 хв. для попередньої активації Т-клітин. РВМС (125 мкл/лунку) або клітини СО4 (100 мкл/лунку) переносять на 9б-лунковий планшет (Совіаг 3799, Согпіпд Іпс.). Для тестування сполук із застосуванням РВМС, досліджувані сполуки в різних концентраціях готують у нормальних середовищах для вирощування клітин (125 мкл), які містять 400-600 мкМ АМР. Для тестування сполук із застосуванням клітин СО4, досліджувані сполуки в різних концентраціях готують у нормальних середовищах для вирощування клітин (100 мкл), які містять 200-250 мкМ АМР.

Оброблені клітини культивують при температурі 37 "С, 5 95 СО», протягом 68-70 годин.

Середовище (160 мкл), яке містить оброблені РВМС, переносять на планшет, та решту середовища, яке використовують для дослідження на цитокіни, переносять на планшети

АсгоРгер 96 (АстоРгер 96 Рійег ріаїє, Отеда ЗК МТВ 350 мкл лунка, Раї! ее бсієпсе, Мо за каталогом 8033) для підготовки зразків для І! С-М5 дослідження метаболітів.

Середовище (100 мкл), яке містить клітини СО4, переносять, і відфільтровують через

Зо планшети АсгоРгер на інший планшет шляхом центрифугування при 1500 9 протягом 2 год.

Відфільтроване середовище (50 мкл/лунку) змішують з таким самим об'ємом 80 95 метанолу, 195 МНАОН та внутрішніми стандартами (250 нг/мл "ЗС5-АМР та 250 нг/мл "ЗС5-аденозину) для

І С-М5 дослідження метаболітів.

Оброблені РВМС або клітини С04 збирають, і забарвлюють для проточної цитометрії для кількісного оцінювання проліферації Т-клітин.

Проточна цитометрія

Клітини РВМС або СО4 забарвлюють 7отбріє Ада (Віоїєдепа, Ме за каталогом 423102, партія Мо В195875) при розведенні 1:200 в ОРВ5 протягом 15 хв. з подальшим блокуванням інгібітором зв'язування людського рецептора Ес-фрагмента (Віозсієпсє, Мо за каталогом 14- 9161-73). 73) при розведенні 1:5 протягом 15 хв. у буфері для проточного забарвлювання (ОРВ5 (фізіологічний розчин, забуферений фосфатом Дульбекко) - 2 95 НІЕВ5 (термоінактивована ембріональна бичача сироватка) - 0,5 95 ВБ5А (бичачий сироватковий альбумін)) на льоді. РВМС забарвлюють коктейлем з антитіл проти СОЗ людини, мічених АРС/Су7 (Віоїєдепа, Мо за каталогом 300426, розведення 1:20), антитіл проти СО4 людини, мічених АРС (Віоієдепа, Мо за каталогом 317416, розведення 1:20) та антитіл проти СОвВа людини, забарвлених барвником

Расіїіс ВіІсе (Віоіедепа, Мо за каталогом 300927, розведення 1:20), та клітини СО4 забарвлюють антитілами проти СО4 людини, міченими АРС (Віоієдепа, Мо за каталогом 317416, розведення 1:20) протягом 30 хв. у буфері для проточного фарбування на льоді.

Дані проточної цитометрії збирають із застосуванням ВО БАС Мегбє. Кожен канал флуоресценції відповідним чином компенсується. Дані обробляються із застосуванням Ріодо мег. 7.6.5 із такою стратегією стробування: лімфоцити, стробовані на точковому графіку Е5С (пряме світлорозсіювання) проти 550 (бічне світлорозсіювання); життєздатні клітини лімфоцитів, стробовані на точковому графіку 550 проти 7отріе Ада; клітини СОЗ життєздатних лімфоцитів, стробовані на точковому графіку АРС-Су7 проти 7отбіе Адпца; клітини

СА та клітини СО8 клітин СОЗ, стробовані на точковому графіку АРС проти Расіїйс Вішпеє; клітини

С04 та СО8, крім того стробовані на точкових графіках АРС проти СЕЗЕ(РІТС) та Расіїіс Віне проти СЕБЕ(РІТС). Проліферацію клітин СО4 та СО8 досліджують проліфераційним інструментарієм. Індекс проліферації (РІ) визначають як відношення загальної кількості клітин до вихідної кількості клітин, а 95 вивільнення сполуки обчислюють як (Рім/о дме м/о сра Рзразка)/(Р м/о

АМР м/о сра-РіІм АМР м/о сра) "100.

Як показано в Таблиці 4, інгібування СО7З3 5-05-(15, 2Н8)-2-ізопропілциклопрошл|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діоном "рятує" опосередковане аденозином інгібування проліферації Т-клітин, яке співвідноситься з дозозалежним зменшенням рівнів аденозину в середовищі для вирощування.

Таблиця 4 пот е У: ВИ ПО ОО КОН ЖЕ 1: КО во Ї11111111011111111111111111111111111108071

Дослідження цитокінів

Культуральне середовище з оброблених РВМС розбавляють 1:7,5, 1:2,5 та 1:50 їх розріджувачем ЕГІ5ЗА/ЕГІ5РОТ з наборів ЕГІ5А для дослідження цитокінів та досліджують на

ТМЕа із застосуванням набору Нитап ТМЕ аїрна ЕГІЗА НАеаду-5ЕТ-СО! (еВіобзсіепсе, Ме за каталогом 88-7346-22), на 1-14 із застосуванням набору Нитап ІІ. -18 ЕГІЗА Неаду-5ЕТ-СО! (2- е покоління) (еВіозсієпсе, Мо за каталогом 88-7261-22) та на ІЄМу із застосуванням набору

Нитап ІРМ датта ЕГІ5ЗА геаду-5ЕТ-СИО! (еВіозсіеєпсе, Мо за каталогом 88-7316-22), базуючись на інструкції виробника.

Як показано в Таблиці 5, інгібування СО7З3 5-(5-М15, 2В8)-2-ізопроаілциклопропіл)|-6-

Зо метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діоном підвищує рівні ТМЕ-а в Т-клітинах СО4».

Таблиця 5

Як показано в Таблиці б, інгібування СО73 5-(5-(15, 2В)-2-ізопропілциклопропіл|-6- метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діоном підвищує рівні ІМЕ-у в Т-клітинах СОУ».

Таблиця 6 вввю11111111111Г1111901

Моделі іп мімо

За бажанням, доклінічне моделювання результату інгібування СО73 сполукою за цим винаходом або її фармацевтично прийнятною сіллю, може бути здійснено, наприклад, за способами, викладеними в цій галузі, наприклад, у Копамаийх А, вї аї., Аппиа! НеєуУ. ІттипоЇоду 2013; 31: 635-74, та в літературі, цитованій у вказаній роботі; Заптатеай МЕ, еї а!., Аппаїв5 ої

Опсоіоду 2016; 27: 1190-1198, та в літературі, цитованій у вказаній роботі. Дослідження на основі І С/М5 для визначення активності СО7З в сироватці людини

Свіжу нормальну людську кров центрифугують при 1500 д протягом 15 хв. при кімнатній температурі, і збирають верхню фракцію, яка містить сироватку. Зібрану сироватку (25 мкл/лунка) переносять на 9б6-лунковий планшет (ОМУР, Апаїуїїса! Заіеб5 4 бегмісев5 Іпс., Мо за каталогом 968820), що містить різні концентрації сполуки Прикладу 2 і фіксовану концентрацію левамізолу (1500 мкМ). Після інкубування на льоді протягом 60 хв. в кожну лунку планшету додають "305-5М5-АМР (50 мкМ), і планшет інкубують при кімнатній температурі протягом 15 хв. Потім планшет поміщають на сухий лід з додаванням 200 мкл/лунку 17,3 ТСА з подальшим струшуванням при 26 струшуваннях/с протягом З хв. на машині для струшування планшетів (Оіадеп). Потім планшет центрифугують при 2940 9 протягом 20 хв. при температурі 4 "С. Після центрифугування 100 мкл/лунку супернатанту з кожної лунки переносять на новий 96-лунковий планшет з глибокими лунками, і змішують з 18,4 мкл/лунку 2,5М МагСОз на льоді з подальшим додаванням 200 мкл екстракційного розчину, який містить внутрішній стандарт (І5 (внутрішній стандарт): "З3С5-АМР, "ЗзСб5-аденозин, "ЗС5-гіпоксантин та /"»Ма4-інозин). Після подальшого центрифугування при 2940 9 протягом 20 хв. при температурі 4 "С, 200 мкл/лунку супернатанту використовують для дослідження на "3С10-»М5-аденозин, 73210-»М5-інозин та "?"М5-гіпоксантин із застосуванням І С/М5 так, як описано вище. Для розрахунків ЕС50О, концентрації інгібітора

СО73 в сироватці крові коригують з незв'язаною фракцією (95), визначеною на іп 5іїсо моделях або експериментально.

Зо Таблиця 7 містить дані щодо інгібування активності СО7З в сироватці людини 5-(5-(15, 28)- 2-ізопропілциклопропіл)|-6-метилпіридазин-3-іл|-1 Н-піримідин-2,4-діоном (сполука Прикладу 2).

Таблиця 7 ннн""6:ньжЕНШ ПННІІІІІНННаяВИВВНН

Таблиця 8 містить дані щодо інгібування активності СО7З3 в сироватці людини певними сполуками, розкритими у цьому описі.

Таблиця 8

ЕСво (мкМ) 0,213 0,051 в 0,179 пиши 0,297

Claims (23)

0,055 0,212 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука формули в ав н д Но де п становить 0-3; В! - це -Н, -Е, -гем-дифтор, -гем-диметил, -С:-4алкіл, -СНЕ», -СЕ2СНз або -СНСНЕ; та В? вибраний з -Н, -СН3З, -Е, -СІ, -СМ або -ОСН»:; або її фармацевтично прийнятна сіль.

2. Сполука формули за п. 1, яка являє собою: Це ке ЖК бий ря ЩЕ Мун Рой яке - Мам іш. або її фармацевтично прийнятна сіль.

3. Сполука формули за п. 1 або 2, яка являє собою: хв на АТ М Ма я або її фармацевтично прийнятна сіль.

4. Сполука формули за п. 1 або 2, яка являє собою:

МА одн Х У рак дж ран пря або її фармацевтично прийнятна сіль.

5. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-4, яка являє собою: тож но шик сей НК М Мем або її фармацевтично прийнятна сіль.

6. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-5, де п становить 0, КЕ - це -С.:-залкіл, і 2 - це -СНЗз, або її фармацевтично прийнятна сіль.

7. Сполука формули зап. б, де К" - це ізопропіл, або її фармацевтично прийнятна сіль.

8. Сполука формули за п. 1, яка являє собою: га х Е Геошанй, ке У щі Й їде ся о ч Й її ит но / ноя х рН: 7 І 7 й їх Бе Е Не у ит їх щу Кк То чн В КО но КУ Но й 3 я ден ря бек дей Хуне ве ; дк ж СЯ ш- мем М- 0 Вем МА 0 Мем У х Кі їх. Й їз Глий Я раки - НЯ се, їж х ниви ви и В но рн щ-К ре ех ув Я МА МеВ М-- ем Мм- 0 вАН Н г НН ОБЖ « у шк є рий м о рн М. з й й Р х Ме ся ї М Ки й м ке рН че и ши Я

Ср. Манн щ- її Ми ра шу я С Ме, дин - Нк Щ- Мам щ- Мам я щм- Н н Н Е ЖЕ в їх а х і й ІЗ ж вх во на; Я БК Я ЦЕ КЕ КЗ В Кк Х жк дЕттВ М ос Си х 7 х Са й Оле р р хх дн ої Ок | ри ЕМ - щ- М пе Мах й ней Ма

, щу х КЕ шу Гв рек н З Ве: ок ке: А н г х Е їх З Е Ще а й й они ци браеу Дн нт В -- рснннннйй ф-но з: у ни Ши НН НИ но нн ІНН ОН ще ща щ- Ме щ- щем Н Н н 2 т У н й ит ни ко не й - КУ, К- дев М- дев и и ни На и Не о ВШ ши Но щ- МАМ М-є 00 ВАМ Щ- Й В-М н н Н - і ж ей г ГА ї» й В г / рН и і ул іх Щ- ТИХ й щ-« лише й щ-я Мем х М-Я 00 щ-М М-Я Мей н Н Н хх Я - хе Е ве ка ї в с) Що, ее но м- не М че: в- М- дк М- ях ; М в Я : Е я х ї за г Ко й хх Сй ши и шли и а не р в шко Кн Ме 0 Мем Щ- Мем М-ї 0 Мем М Я.

й . ізомерії ; Ізомев З , дет КЕ я Я х У ;. й Ох хай Гая ц а - не / і: у ри М М- я-й ; М-к и ук, М - й Осех нн нах рани рі Бо У она М- 0 вет Мщ- МА М щ-М М М нн або її фармацевтично прийнятна сіль.

9. Сполука формули за будь-яким з пп. 1, 2, 6 та 7, яка являє собою: учня с ц ші х Он х А я ше ши зш Ми: х або її фармацевтично прийнятна сіль.

10. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-9, яка являє собою 5-(5-К15,28)-2- ізопропілциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон, або її фармацевтично прийнятна сіль.

11. Сполука формули за будь-яким з пп. 1, 2, 6 та 7, яка являє собою:

чі М о Кк ЕМ вес р ше Я ри Щ- Мах М Н або її фармацевтично прийнятна сіль.

12. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-8 або п. 11, яка являє собою 5-(5-К15,25)-2- етилциклопропіл|-б-метилпіридазин-3-іл|-1Н-піримідин-2,4-діон, або її фармацевтично прийнятна сіль.

13. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку формули за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятну сіль та один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, розріджувачів або наповнювачів.

14. Спосіб лікування раку, який включає введення пацієнту, який цього потребує, ефективної кількості сполуки за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятної солі, де згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишок, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок.

15. Спосіб за п. 14, який відрізняється тим, що пацієнтом є той, у кого визначена активність СОр7З у сироватці крові.

16. Спосіб за п. 14, який відрізняється тим, що пацієнтом є той, у кого визначена тканинна експресія СО73.

17. Спосіб, який включає визначення активності СО7З в сироватці крові пацієнта, якому була введена сполука за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятна сіль.

18. Спосіб, який включає визначення експресії СО7З в тканині пацієнта, якому була введена сполука за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятна сіль.

19. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятна сіль для застосування в терапії.

20. Сполука формули за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятна сіль для застосування в лікуванні раку.

21. Сполука для застосування за п. 20, де згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишок, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок.

22. Застосування сполуки формули за будь-яким з пп. 1-12 або її фармацевтично прийнятної солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку.

23. Застосування за п. 22, де згаданий рак - це рак сечового міхура, рак молочної залози, холангіокарцинома, рак ободової і прямої кишок, рак ободової кишки, рак шлунка, рак жовчного міхура, гліобластома, рак голови та шиї, рак печінки, рак легенів, лімфома, медулобластома, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, рак передміхурової залози або рак нирок.