UA122310C2 - Спосіб відбору рослини роду буряків, яка має стійкість до вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка - Google Patents

Abstract

Винахід стосується способу відбору рослини роду буряків, яка має стійкість до вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка (BNYVV), де спосіб включає: застосування молекулярного маркера для виявлення наявності гену RZ-3, виявлення у послідовності гена щонайменше одного поліморфізму, що обумовлює стійкість до BNYVV, та відбір стійкої рослини. KWS 206 DE 22.06.2012

Description

молекулярного маркера для виявлення наявності гену Н2-3, виявлення у послідовності гена щонайменше одного поліморфізму, що обумовлює стійкість до ВММУМУМ, та відбір стійкої рослини.

Винахід належить до молекули нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, здатний зумовлювати стійкість до патогену, а саме до "вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка" (ВМУММ) у рослин, а саме у рослин з роду буряків, де експресується цей поліпептид. Цей винахід також належить до самого поліпептиду, який здатний зумовлювати стійкість до патогену, а саме до ВМУММ у рослин роду буряків, де експресується цей поліпептид, що кодується молекулою нуклеїнової кислоти, до якої належить цей винахід. Також винахід належить до трансгенної рослини, рослинної клітини, органу, тканини, частини або насіння, що містить молекулу нуклеїнової кислоти або її частини, а також до способів одержання трансгенних рослин або рослинних клітин цього типу. Винахід також включає способи для виявлення молекули нуклеїнової кислоти, яка зумовлює стійкість, та способи селекції рослин або рослинних клітин, що міститимуть молекулу нуклеїнової кислоти, яка зумовлює стійкість.

Ризоманія є найбільш серйозним захворюванням цукрових буряків у світі, яке впливає на прибутковість та може спричинити втрати доходів від врожайності у розмірі 50 95 та більше.

Захворювання, що також описується як "розростання кореня", спричиняється "вірусом некротичного пожовтіння жилок буряка" (ВМУУМ) та передається найпростішими виду Роїутуха реїає через грунт. Інфекція проявляється підвищеною проліферацією тонких та вторинних коренів, а також формуванням значно зменшеного тіла основного кореня зі зниженим вмістом цукру. Інфіковані рослини слабо поглинають воду і, таким чином, стають більш схильними до висихання. Розповсюдження інфекції по всій рослині спричиняє пожовтіння жилок листків, появу на них некротичних вогнищ та жовтих плям. Оскільки повне вилікування рослини неможливе, так само як ії у випадку інших вірусних захворювань, пошкоджень можна уникнути лише культивуючи стійкі види. Фактично, на теперішній момент вивчаються три основних гени проти ризоманії: К2-1 (інша назва "НоїПу"), К2-2 та К2-3. Також в літературі описані і інші гени, що зумовлюють стійкість до ризоманії, проте, вони мають менше значення. Наразі ген резистентності К2-1 вже включено до більшості гібридних ліній (батьківське насіння та/або компоненти запилювача батьківських форм). Однак, було виявлено, що стійкість, зумовлена геном КА-1, є недостатньою у сильно заражених регіонах або в регіонах, де наявні різноманітні типи ВМУММ (наприклад, роботи Бойпі та Маїекі, 2004). Тому, деякий час назад було запропоновано комбінувати К2-1, наприклад, з К2-2 або К2-3. ІН2-2 та К2-3 мають походження

Зо з виду Буряк звичайний, підвиду приморський (Веїа миЇдагіз зир5р. тагййта) (МУВ42, МВА), та знаходяться в тій же частині хромосоми З на генетичній мапі геному цукрового буряка, що і К2- 1, котрий, однак, знаходиться нижче від К2-2 та К2-3. 5споЦеп та співавт. (1999) визначили відстань між головними К2-генами К2-1 та К2-2, яка склала 20-25 сантиморганід (СМ). Сідпег та співавт. (2005) отримали коротшу відстань, а саме 5 СМ між К2-1 та К2-2, а також не підтвердили, що К2-2 та К2-3 розташовані в одному й тому ж локусі. Зсптіаїййп та співавт. (2008) за допомогою аналізу експресії у інфікованих буряках визначали різно-індуковані гени, які, однак, не відповідали генам К2-2 та К2-3. У дослідженні І аг5оп та співавт. (2008) у цукрових буряках за допомогою методу МА 0І-ТОЕ-М5 були виявлені деякі білки, індуковані ВМУУМ, однак, ці білки, що кодувалися К2-1, Н2-2 або К2-3, вчені ідентифікувати не змогли. Крім того, ця послідовність навколо гена резистентності є повторюваною, що робить розробку діагностичних маркерів особливо складною. До теперішнього часу, специфічно для генів стійкості до ризоманії не було ні високороздільних маркованих генетичних карт, ні верифікованих генів-кандидатів. Також, дотепер не була повністю відома функціональна основа, тобто генетична структура цих генів стійкості.

Для ефективної культивації сортів, стійких до ризоманії, здатних протистояти ризику появи окремих особин, в яких відсутня стійкість до ВМУМУМ, необхідно постійно виявляти нові гени стійкості та інтегрувати їх до пулу генів у врожайних культурах, таких як цукровий буряк.

Даний винахід створено на основі описаного вище рівня техніки. Задачею цього винаходу є виявлення молекули нуклеїнової кислоти та/або поліпептиду, здатного зумовлювати стійкість рослини до ризоманії. Також задачею винаходу є одержання трансгенної рослини, стійкої до ризоманії, та розробка способу її розведення. Ще однією задачею цього винаходу є розробка та використання молекулярних маркерів, що дозволяють ефективно культивувати стійкі до ризоманії рослини та виводити нові стійкі лінії рослин.

Варіанти реалізації цього винаходу, які вирішують поставлену в основу винаходу задачу, базуються на точному генетичному картуванні, ідентифікації, ізоляції та описі характеристик гена, що походить із донорського виду, а саме виду Веїа миЇдагіє зир5р. тагййта, та кодує поліпептид або білок, здатний зумовлювати стійкість до патогенну у рослини, в якій експресується цей поліпептид.

Деякі терміни, використані в цій заявці, будуть вперше пояснені та деталізовані далі:

Термін "приблизно" у поєднанні з визначенням довжини нуклеотидної послідовності означає відхилення до ж 200 пар азотистих основ, бажано до х 100 пар азотистих основ та найбільш бажано до х 50 пар азотистих основ. "Рослина роду Буряк" належить до родини амарантових (Атагапіпасеає). Ці рослини включають рослини видів Буряк великоплідний (Веїа тасгосагра), Буряк звичайний (Веїа уУцідагі5), Веїа Іотаїодопа, Веїа тасгтоті?а, Веїа согоїІШога, Буряк триматочковий (Веїа ігідупа) та Буряк карликовий (Вейїа папа) Рослини роду Буряк звичайний (Веїа миїЇдагі5) - це здебільшого рослини підвиду приморський (Веїа миїЇдагіє 5ирер. тагййта (Зеетаподоїа)) або підвиду столовий (Веїа миїЇдагіз зиБзр. миїЇдагіз). Вони, включають, наприклад, Веїа мпїЇдагі5 зиБ5р. миЇдагіє маг. анієбвіта (цукровий буряк у більш вузькому розумінні), Веїа миЇдагіб 55р. мцідагібх маг. миїдагіє (Мангольд), Веїа миЇдагі5 55р. миЇдагіє маг. сопайіма (червоний буряк), Веїа мУціІдагів 55р. мцЇІдагів маг. стазза/аІра (буряк кормовий).

Під терміном "гібридизувати" або "гібридизація" мається на увазі процес, в якому однониткова молекула нуклеїнової кислоти прикріплюється до іншої нитки нуклеїнової кислоти, що є у максимально можливій мірі комплементарною, тобто формує пари азотистих основ.

Стандартні методи гібридизації описані, наприклад, у ЗатрьгоокК та співавт., 2001. Це означає, що бажано, щоб не менше 60 95 азотистих основ у молекулі нуклеїнової кислоти формували пари з основами нитки нуклеїнової кислоти, комплементарної у максимально можливій мірі, більш бажано - не менше 65, 70, 75, 80 або 85 95, найбільш бажано 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99 95 азотистих основ. Вірогідність такого збігу залежить від того, наскільки жорсткі умови гібридизації дотримуються.

Термін "жорсткість" належить до умов гібридизації. Так, високий ступінь жорсткості означає, що парування азотистих основ є контрольованим, а низький ступінь жорсткості означає, що парування азотистих основ є послабленим. Жорсткість умов гібридизації, зокрема, залежить від концентрації солі, сили іонів чи температури. Загалом, ступінь жорсткості може бути збільшений шляхом підвищення температури та/або зниження вмісту солі. "Жорсткі умови гібридизації" - це умови, при яких гібридизація відбувається переважно лише між гомологічними молекулами нуклеїнових кислот. Термін "умови гібридизації" в цьому випадку стосується не лише умов, які переважають під час фактичного приєднання нуклеїнових кислот, але також стосується умов,

Зо що переважають під час наступних стадій відмивання. Жорсткими є умови гібридизації, при яких, наприклад, гібридизуються переважно лише ті молекули нуклеїнових кислот, що мають не менше 70 95, бажано не менше 75, 80, 85 або 90 95, особливо бажано не менше 95, 96, 97, 98 або 9995 ідентичних послідовностей. Приклади жорстких умов гібридизації: гібридизація у 4х55С при 65"С та наступне багаторазове промивання в 0.ї1х55С при 65"С протягом приблизно 1 години. Термін "жорсткі умови гібридизації" в цьому випадку може також означати наступне: гібридизація при 68С в 0.25 М фосфату натрію, рН 7.2, 7 95 додецилсульфату натрію, 1 мМ ЕДТА та 1 95 В5А протягом 16 годин та наступне дворазове промивання у 2х55С0 та 0,1 95 додецилсульфату натрію при 68 "С. Гібридизація переважно проводиться при жорстких умовах. "Ізольована молекула нуклеїнової кислоти" - це молекула нуклеїнової кислоти, виділена з її природного або первинного середовища. Цей термін також включає молекули нуклеїнових кислот, що створені синтетично. "Ізольований поліпептид" - це поліпептид, що виділений зі свого природного або первинного середовища. Цей термін також включає синтетично створені поліпептиди. "Молекулярний маркер" - це нуклеїнова кислота, що є поліморфною у популяції рослин. Цей маркер, таким чином, може виявляти та диференціювати різні алельні стани (алелі). Відомі аналітичні методі, що використовуються для цієї мети, наприклад: КЕГР, АРІ Р, 5МР, 55 або

КАБР. Термін "молекулярний маркер" належить до послідовності нуклеотидів, що є комплементарними, принаймні у максимально можливій мірі комплементарними або гомологічними до геномних послідовностей, наприклад, нуклеїнові кислоти, що використовуються як зонди або праймери. Маркери, за допомогою яких можна описати поліморфізм, можуть бути визначені за допомогою напрацьованих методів. Такі методи включають наприклад, ПЛР-ампліфікацію, специфічну до послідовності, визначення поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів (КЕР), визначення поліморфізму полінуклеотидів за допомогою алель-специфічної гібридизації (АЗН), визначення ампліфікованої варіаційної послідовності геному рослини, визначення самореплікації послідовності, визначення простих повторів послідовності (55К), визначення одиночних нуклеотидних поліморфізмів (ЗМР), або визначення ампліфікованих поліморфізмів довжини фрагменту (АЕГГР). Крім того, відомі методи визначення маркерів експресованої послідовності бо (Е5Т) та маркерів простих повторів послідовності (55К), що є похідними від методів визначення маркерів експресованої послідовності (Е5БТ) та випадково ампліфікованої поліморфної ДНК (ВАРОБ). "Промотор" - це регуляторна нетрансльована послідовність ДНК, типово розташована в області кодування згори, складається зі зв'язуючої точки для РНК-полімерази та ініціює транскрипцію ДНК. "Патоген" - це організм, що при взаємодії з рослиною призводить до виникнення симптомів захворювання в одному або більше органів рослини. Патогени включають в себе, наприклад, тваринні, грибні, бактеріальні, вірусні організми або ооміцети. "Інфекція, спричинена патогеном" - це найбільш ранній момент, коли патоген вступає у взаємодію з тканинами рослини-хазяїна. Наприклад, у випадку вірусного патогену ВМУММ, хвороба передається найпростішим Роїутуха Бреїає. Роїутуха формує спори, що можуть виживати у грунті протягом багатьох місяців. Вірус також живе у цих спорах. Коли ці тимчасово неактивні спори проростають та формують рухомі зооспори, вірус отримує змогу перейти через спори у клітини тканин рослини-хазяїна, та взаємодіяти з ними (Ев55ег 2000). "Органи" рослини - це, наприклад, листя, вісь росту, стебло, коріння, гіпокотіль (підсім'ядольне коліно), вегетативні бруньки, меристеми, зав'язі, пильники, сім'я та плоди. "Частини" рослини - це сукупність кількох органів, наприклад, квітки та насінини, або частина органа, наприклад, зріз стебла. "Тканини" рослини - це, наприклад, калюс, паренхіма, меристемна тканина, тканина листка, стебла, кореня, пухлинна тканина рослини або репродуктивна тканина. "Клітини" рослини - це, наприклад, ізольовані клітини з клітинною стінкою, їх агрегати або протопласти.

Термін "стійкість" має широке значення, що охоплює сукупність засобів захисту від затримки пригнічення розвитку хвороби. Важливим прикладом є патоген вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка. Згідно цього винаходу, стійкі клітини або рослини переважно стають стійкими до

ВМУММ. Стійкість проти патогену прирівнюється до стійкості проти хвороби, спричиненої цим патогеном, наприклад, стійкість проти ВМУУМ прирівнюється до стійкості проти ризоманії.

Термін "Трансгенна рослина" в цьому випадку стосується рослини, у геномі якої є принаймні одна інтегрована нуклеїнова кислота. В цьому випадку це може бути гетерологічна нуклеїнова

Зо кислота. Бажано, щоб нуклеїнова кислота була інтегрована стабільно. Це означає, що інтегрована нуклеїнова кислота стабільно утримується у рослині, може експресуватися, а також може стабільно передаватися нащадкам.

Цей винахід описує молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид, здатний зумовлювати стійкість до патогену у рослини, в якій експресується цей поліпептид. Молекула нуклеїнової кислоти включає нуклеотидну послідовність, відібрану за наступними параметрами: а) нуклеотидна послідовність, що кодує поліпептид, який містить амінокислотну послідовність згідно 5ЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 3, б) нуклеотидна послідовність, що містить кодуючу послідовність ДНК згідно з ЗЕО ІЮО МО: 1, в) нуклеотидна послідовність, що гібридизується з комплементарною послідовністю нуклеотидів згідно а) чи б) в жорстких умовах., г) нуклеотидна послідовність, яка кодує поліпептид, що виходить після заміщення, делеції та /або приєднання однієї чи більше амінокислот у послідовності, кодованої послідовністю нуклеотидів згідно а) або б), з поліпептиду, кодованого послідовністю нуклеотидів згідно з а) чи б), д) нуклеотидна послідовність, що кодує поліпептид, який має послідовність амінокислот не менш ніж на 60 95 ідентичну послідовності амінокислот, що кодується послідовністю нуклеотидів згідно а) чи б), або е) послідовність нуклеотидів, що кодує принаймні один нуклеотид-зв'язуючий домен (МВ5 або МВ-АКС) відповідно до позицій амінокислот 168-227 у ЗЕО ІЮ МО: 2 або 182-241 у 5ЕО І

МО: 3, щонайменше один лейцин-багатий домен (І ЕК) відповідно до позицій амінокислот 591- 613 у 5ЕО ІО МО: 2 або 605-627 у 5БО ІЮ МО: 3 та/або принаймні один внутрішній повторюваний домен (ІК) відповідно до позицій амінокислот 1013-1072 у 5ЕО ІЮО МО: 2 або 1027-1086 у БЕО ІО МО: 3.

Молекула нуклеїнової кислоти може бути ізольованою. Бажано, щоб це була ДНК, особливо бажано - кДНК (кодуюча ДНК). Поліпептид, що кодується молекулою нуклеїнової кислоти, описаної в цьому винаході, переважно зумовлює стійкість до вірусного патогену, а саме до "Вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка" (ВМУУМ), який зумовлює захворювання рослини на ризоманію. Крім того, поліпептид, що кодується молекулою нуклеїнової кислоти, як описано в цьому винаході, особливо у рослин роду буряків, зумовлює стійкість до патогену. Описані

Ге) рослини - це, як правило, рослини видів Веїа миЇдагіх, а саме рослини підвидів Веїа миїдагів зир5р. тагййте або Веїа миїдагіє 5ирер. миЇдагіє; вони включають, зокрема, врожайні типи, наприклад, цукровий буряк, червоний буряк, кормовий буряк, листковий буряк, буряк Мангольд.

Відповідно до цього винаходу, в одному з варіантів реалізації молекули нуклеїнової кислоти вона включає в себе послідовність нуклеотидів відповідно до пункту а). Послідовність амінокислот у поліпептиді, що кодується за послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2, та/або поліпептиді, що кодується за послідовністю ЗЕО ІО МО: 3, утворює білок резистентності гена К2-3. В цьому випадку це ген, що кодує білок резистентності типу МВ5-І ЕК, який характеризується певною структурною послідовністю. Загальна структура таких білків резистентності у рослин була добре вивчена (Мапіп та співавт. 2003). Проте, розкриття принципу структурної будови саме домену, відомого як ЇКК (лейцин-збагачений домен), який потенційно є доменом для ідентифікації здебільшого невідомих патогенетичних чинників, у найближчому майбутньому не передбачається. Таким чином, ідентифікація гена, що кодує стійкість до ВМУММ або відповідного білка на основі тільки наявних знань, неможлива. Ідентифікація гена резистентності К2-3 відбувалася шляхом клонування на основі генетичних карт, що вимагало ретельного генетичного картування та точного картування таргетної області, де спочатку передбачалося розміщення гена резистентності К2-3. Процес розробки буде описано детальніше далі в цьому документі.

Ідентифікований білок резистентності належить до типу МВ5-ЇКЕ та має нуклеотид- зв'язуючий домен (МВ5, також відомий як МВ-АКС) (адапторами для зв'язування нуклеотидів є фактор активації протеаз апоптозу-і (АРАБЕ-1)), К білки та СЕО-4)), що відповідає позиціям амінокислот 168-227 у послідовності «ФЕО ІЮ МО:2 або 182-241 у послідовності ЗЕО ІЮ МОЗ, лейцин-багатий домен (КЕ), що відповідає позиціям амінокислот 591-613 у ЗЕО ІЮО МО:2 або 605-627 у БЕО ІЮО МО:3З та/або принаймні один внутрішній повторюваний домен (ІК; внутрішній домен-повтор), що відповідає позиціям амінокислот 1013-1072 у БЕО ІЮ МО:2 або 1027-1086 у

ЗБЕО І МО:3. Домен МВ5 кодується нуклеотидами 2019-2882 у 5ЕО ІО МО, домен І КК кодується нуклеотидами 3288-3356 у 5БЕО ІЮ МО:1, а домен ІК кодується нуклеотидами 4554- 4871 у 5ЕО ІО МО:1. Домен МВ-АКС є центральним доменом, що зв'язує нуклеотиди. Скоріше за все це функціональний домен АТФази, що ймовірно регулює активність білка резистентності.

Домен МВ-АКС складається з трьох субдоменів: МВ, АКСІ1 та АКС2. Характерною ознакою

Зо домену МВ-АКС є наявність фактора активації протеаз апоптозу-ї (АРАБЕ-1), що ймовірно відповідає за реакцію гіперчутливості, а також мотиви ППНОКЕХЕ, УмМаїЇКег-А- або Р-Ісор, УМаїКег-В,

СхХР, ВМВ5- від А до О та МНО (Ооїеп еї аї!., 2008). Деякі із вказаних мотивів на сьогоднішній день вже можуть бути ідентифіковані. У подальших варіантах реалізації молекули нуклеїнової кислоти, як показано в цьому винаході, молекула нуклеїнової кислоти містить послідовність нуклеотидів згідно до пункту б). Послідовність нуклеотидів включає кодуючі послідовності ДНК відповідно до ЗЕО ІЮ МО1, що кодують послідовності амінокислот відповідно до 5ЕО ІЮ МО2 та 5ЕО ІЮ МО:3.

У наступному варіанті здійснення молекули нуклеїнової кислоти, молекула нуклеїнової кислоти містить послідовність нуклеотидів відповідно до пункту г). Ця послідовність нуклеотидів кодує поліпептид, що є похідним поліпептиду, який кодований послідовністю нуклеотидів відповідно до а) або б). Цей похідний поліпептид представляє собою отриману послідовність амінокислот, що містить принаймні одну заміну, делецію або приєднання однієї або більше амінокислот у функціонально значимій частині кодованого поліпептиду/білка. Якщо відбувається заміна однієї амінокислоти іншою амінокислотою, що має ті самі, еквівалентні чи подібні хіміко-фізичні властивості - це називається "консервативна заміна" або "напівконсервативна заміна". Приклади фізико-хімічних властивостей амінокислоти - це, наприклад, гідрофобність або заряд. Спеціалісту в цій галузі відомо, яка заміна амінокислоти є консервативною, а яка - напівконсервативною. Загальне знання галузі дає змогу спеціалісту визначити, ідентифікувати та виявити делеції амінокислот та їх приєднання, що є шкідливими для функціональності білка резистентності К2-3, а також ті позиції в яких це можливо.

Спеціалісту в цій галузі відомо, що в разі модифікацій у послідовності амінокислот білка МВ5-

ЇКК (заміни, делеції або приєднання однієї чи більше амінокислот), функціональність вищевказаного збереженого домену повинна залишитися незмінною, і тому в цих доменах можлива лише обмежена кількість модифікацій вищезгаданого типу. Послідовність нуклеотидів для цих варіантів реалізації винаходу кодує похідні або отримані послідовності амінокислот, коли послідовність нуклеотидів гомологічна або ідентична до послідовності нуклеотидів відповідно до пунктів а) або б) принаймні на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 92, 94, 96, 97, 98, 99 9.

Такі послідовності нуклеотидів, що кодують похідні або отримані послідовності амінокислот, переважно можуть бути виготовлені прямим або непрямим способом (наприклад, шляхом бо ампліфікації або послідовних реплікацій) із початкової послідовності нуклеотидів, що відповідає всій довжині або принаймні частині послідовності ЗЕО ІЮ МО:1 чи іншій послідовності, описаній у цьому винаході.

Також варіантом реалізації цього винаходу є молекула нуклеїнової кислоти, що містить послідовність нуклеотидів відповідно до пункту д). Ця послідовність нуклеотидів кодує поліпептид, що містить послідовність амінокислот, ідентичну до послідовності амінокислот, яка кодується послідовністю нуклеотидів відповідно до а) або б) принаймні на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 92, 94, 96, 97, 98, 99 Ор.

Іншим варіантом реалізації цього винаходу є отримання молекули нуклеїнової кислоти, що містить послідовність нуклеотидів відповідно до пункту е). Така послідовність нуклеотидів кодує принаймні один нуклеотид-зв'язуючий домен (МВ5), що відповідає позиціям амінокислот 168- 227 у послідовності 5ЕО ІЮ МО:2 або 182-241 у послідовності «ЕО ІЮ МО:3, принаймні один лейцин-збагачений домен (І КЕ) відповідно до позицій амінокислот 591-613 у послідовності 5ЕО

ІЮ МО:2 або 605-627 у послідовності ЗЕО ІЮО МО:3 та/або принаймні один внутрішній повторюваний домен (ІК) відповідно до позицій амінокислот 1013-1072 у послідовності ЗЕО ІЮ

МО:2 або 1027-1086 у послідовності ЗЕО ІЮ МО:3. Послідовність нуклеотидів переважно відповідає за кодування поліпептиду, що містить принаймні один нуклеотид-зв'язуючий домен (МВ5) відповідно до позицій амінокислот 168-227 у ЗЕО ІЮ МО:2 або 182-241 у 5ЕО ІЮ МО:3, принаймні один лейцин-збагачений домен (І КК) відповідно до позицій амінокислот 591-613 у

ЗЕО ІЮ МО:2 або 605-627 у ЗЕО ІОЮО МО:З та принаймні один внутрішній повторюваний домен (ІК) відповідно до позицій амінокислот 1013-1072 у ЗЕО ІЮ МО:2 або 1027-1086 у ЗЕО ІЮ МО:3.

Ці домени, як правило, організовані у поліпептидах послідовно від М- до С- кінця у порядку МВ5-

ІЇАВ-ЇїЇК, де між доменами в окремих випадках можуть бути присутні одна або більше амінокислот.

Цей винахід також належить до поліпептиду, який здатний зумовлювати стійкість до патогену у рослині, де експресується цей поліпептид, та який кодується молекулою нуклеїнової кислоти, описаною у цьому винаході. При цьому патоген переважно представлений ВМУУМ та/або рослини переважно представлені родом буряків, а саме рослинами виду Веїа мпїдагіб (буряк столовий). Поліпептид переважно має амінокислотну послідовність відповідно до 5ЕО І

МО:2 або до ЗЕО ІО МО:3. Поліпептид може бути ізольованим.

Зо Ще один аспект цього винаходу належить до вектору, що містить молекулу нуклеїнової кислоти, як описано у винаході. Вектором може бути плазміда, косміда, фаг або експресійний вектор, трансформаційний вектор, човниковий вектор, клонуючий вектор, це також може бути двонитковий або однонитковий, лінійний чи колоподібний вектор, він також може трансформувати прокаріотичних або еукаріотичних хазяїв шляхом інтеграції у їхній геном або позахромосомним шляхом. Як показано у цьому винаході, молекула нуклеїнової кислоти переважно функціонально зв'язана з однією чи більше регуляторними послідовностями в експресійному векторі, що робить можливою транскрипцію та, в деяких випадках, експресію у прокаріотичній або еукаріотичній клітині-хазяїні. Як приклад, можна навести молекулу нуклеїнової кислоти, яка знаходиться під контролем відповідного промотора або термінатора.

Придатними можуть бути промотори, що постійно індукуються (наприклад, промотор 355 вірусу мозаїки цвітної капусти (ОдеїЇ та співавт.1985), а особливо придатними є промотори, що індукуються патогеном (наприклад, промотор РК1 петрушки (Ки5Ппіоп та співавт., 1996).

Особливо підходять патоген-індуковані синтетичні або гібридні промотори, яких немає в природі, сформовані із певних елементів та які містять мінімальний промотор, а також у положенні вище мінімального промотора мають принаймні один цис-регуляторний елемент, що служить зв'язуючою точкою для спеціальних факторів транскрипції. Гібридні промотори розробляються у відповідності до необхідних вимог та індукуються або репресуються різними факторами. Приклади таких промоторів можна знайти у М/О 00/29592, УМО 2007/147395 та УМО 2013/091612. Придатним термінатором є, наприклад, термінатор нопалінсинтази (поз) (ОеєрісКег еїаї.,1982).

Крім вищеописаних векторів, цей винахід також пропонує метод включення описаного вектора до клітини-хазяїна. Вектор може бути включений, наприклад, за допомогою кон'югації, мобілізації, біолістичної трансформації, трансформації за допомогою агробактерій, трансфекції, трансдукції, вакуумної інфільтрації або електропорації. Спеціаліст у цій сфері має інформацію про ці методи, а також про методи підготовки описаних векторів (затрьгоок та співавт.2001).

Також цей винахід пропонує включення до клітини-хазяїна молекули нуклеїнової кислоти або вектору, описаного у винаході вище. Клітина-хазяїн у сенсі цього винаходу може бути прокаріотичною (наприклад, бактерія) або еукаріотичною (наприклад, клітина рослини або дріжджового грибка). Клітина-хазяїн - це переважно агробактерія, наприклад, Адгобасіегійт бо їштегтасіеп5 або Адгорасіегішт гпігодепе5, або рослинна клітина, яка містить молекулу нуклеїнової кислоти, як описано у цьому винаході. Численні методи, наприклад, кон'югація або електропорація є відомими для спеціаліста у цій галузі, таким чином, обізнаний спеціаліст може включити молекулу нуклеїнової кислоти або вектор, описані в цьому винаході, у агробактерію; а методи, похідні від трансформації (біолістична трансформація, агробактеріо-опосередкована трансформація) є також відомими для обізнаного фахівця, таким чином такий фахівець може включити молекулу нуклеїнової кислоти або вектор, описані в цьому винаході, до рослинної клітини (затьгоок та співавт. 2001).

Ще один аспект цього винаходу стосується трансгенної рослинної клітини, що містить як трансген молекулу нуклеїнової кислоти або вектор, описані в цьому винаході. Трансгенна рослинна клітина цього типу - це, наприклад, рослинна клітина, що була трансформована, бажано стабільно, та має молекулу нуклеїнової кислоти або вектор, як це описано у винаході.

Більш бажаним варіантом реалізації є трансгенні рослинні клітин з оперативним приєднання молекули нуклеїнової кислоти до однієї або більшої кількості регуляторних послідовностей, що дозволяє транскрипцію та, в деяких випадках, експресію у рослинній клітині. Таким чином, згідно цього винаходу, уся подальша побудова молекули нуклеїнової кислоти та регуляторних послідовностей містить трансген. Такі регуляторні послідовності - це, наприклад, промотори або термінатори. Численні функціональні промотори або термінатори, що підходять для рослин, є добре відомими обізнаному у цій галузі фахівцю. Трансгенна рослинна клітина, як описано у цьому патенті, це, зокрема, клітина рослини роду буряків, яка переважно демонструє більшу стійкість до патогену, а саме до ВНПЖБ, ніж відповідна нетрансформована клітина рослини (рослинна клітина, що не містить трансгену). Рівень стійкості, наприклад, до ВНІПЖБ у рослин роду буряків можна оцінити якісно шляхом визначення показників за відповідними шкалами (шкали для рослин роду буряків є доступними з попередніх робіт, наприклад, у МеспеїКе (1997) для цукрового буряка). Вища стійкість проявляється у покращенні резистентності принаймні за однією шкалою, принаймні за двома шкалами, або принаймні за трьома або більше шкалами. У цьому винаході, крім того, описано метод отримання трансгенних рослинних клітин, включаючи стадію включення молекули нуклеїнової кислоти або вектора в рослинну клітину. Наприклад, включення може відбуватися шляхом трансформації, переважно стабільної. Також, відповідні техніки включення, такі як біолістична трансформація, агробактеріо-опосередкована

Зо трансформація або електропорація, є відомими для обізнаного фахівця (ЗатбгоокК та співавт.2001).

Також, цей винахід належить до трансгенних рослин, або їх частин, що містять трансгенні рослинні клітини, як описано вище. У цьому випадку частиною рослини може бути клітина, тканина, орган або комбінація певної кількості клітин, тканин або органів. Комбінація певної кількості органів - це, наприклад, квітка або насінина. Зокрема, у цьому варіанті реалізації винаходу описано отримання насіння з трансгенної рослини, яке містить молекулу нуклеїнової кислоти як трансген, згідно цього винаходу. Трансгенні рослини, як описано у цьому винаході, а саме рослини роду буряків, переважно мають вищу стійкість до патогену, а саме до ВНПЖБ, ніж відповідні нетрансформовані рослини (рослини без трансгену). Рівень стійкості, наприклад, до

ВНИЖБ у рослин роду буряків можна оцінити якісно за допомогою визначення показників відповідних шкал (шкали для рослин роду буряків можна знайти в попередніх роботах, наприклад, у МеспеїЇКе (1997)для цукрового буряка). Вища стійкість проявляється у кращій резистентності за щонайменше однією шкалою, або принаймні двома шкалами, або принаймні трьома чи більше шкалами. Цей винахід також належить до методу отримання трансгенних рослинних клітин, включаючи стадію введення молекули нуклеїнової кислоти або вектора в рослинну клітину, відповідно до цього винаходу, а також в деяких випадках - до стадії селекції трансгенної рослинної клітини. Крім того, такий метод для отримання трансгенної рослини передбачає подальший крок, який включає регенерацію трансгенної рослини із трансгенної клітини, отриманої у попередній стадії. Методи регенерації відомі фахівцеві, обізнаному у цій галузі, із попередніх робіт.

Також цей винахід пропонує метод для отримання або збільшення стійкості до патогену, а саме до ВМУММ, у рослин, а саме у рослин роду буряків; цей метод включає стадію трансформування рослинної клітини за допомогою молекули нуклеїнової кислоти або вектора, як описано у цьому винаході. Використання цього методу переважно приводить до покращення резистентності принаймні за однією шкалою, а в кращому випадку - до підвищення резистентності за двома, трьома або більше шкалами. Відповідні показники шкал для рослин роду буряків відомі з попередніх робіт, наприклад, з роботи МеспеїКе (1997) для цукрового буряка.

Також цей винахід стосується регуляторної послідовності промотора, який контролює бо експресію гена, що містить молекулу нуклеїнової кислоти, описану у цьому винаході, ця (с;

регуляторна послідовність може зумовлювати або модулювати експресію гетерологічної послідовності ДНК у відповідь на інфікування патогеном, також ця регуляторна послідовність містить молекулу нуклеїнової кислоти, яка має послідовність нуклеотидів відповідно до 5ЕО ІЮ

МО:1 у нуклеотидах 1-1403. Гетерологічна послідовність ДНК - це, переважно, послідовність нуклеотидів, яка кодує компонент захисту рослини від патогену (наприклад, ген резистентності (В-депе) або ген, що кодує ензими, задіяні у передачі сигналу, наприклад, кінази або фосфатази, а також С- протеїн), або та, що кодує ефектор патогену (відомий як ген авірулентності (амг)). Крім того, цей винахід включає в себе рекомбінантну молекулу ДНК, яка містить регуляторну послідовність, описану вище. Рекомбінантна молекула ДНК переважно функціонально зв'язана з гетерологічною послідовністю ДНК.

Також цей винахід належить до клітини-хазяїна, яка трансформована за допомогою вищеописаної регуляторної послідовності або яка містить описану рекомбінантну молекулу

ДНК; а також трансгенної рослини, рослинної тканини або клітини, яка містить регуляторну послідовність або рекомбінантну молекулу ДНК як трансген. Крім того, цей винахід пропонує спосіб одержання трансгенних рослин, включаючи стадію введення регуляторної послідовності або рекомбінантної молекули ДНК у рослинну клітину, як описано у цьому винаході, а також, в деяких випадках, стадію відбору трансгенних рослинних клітин. Крім того, такий спосіб для отримання трансгенної рослини передбачає подальший крок, який включає регенерацію трансгенної рослини із трансгенної клітини, отриманої на попередній стадії.

Як зазначено вище, ген резистентності К2-3 був визначений шляхом послідовного процесу клонування на основі картування. Цей процес, зокрема, включав у себе наступні кроки: точне генетичне картування, фізичне картування, формування дуже великої популяції для сплайсингу, що містила більш ніж 8000 2 сплайсингових нащадків, рекомбінантний скринінг, розробку маркера у таргетному регіоні, порівняльний аналіз послідовностей за допомогою штучних бактеріальних хромосом (ВАС-секвенування) у резистентних та чутливих генотипах, біоїінформаційний аналіз, попередню оцінку білків та порівняння білків. Така робота є надзвичайно трудомісткою та витратною, крім того, невідомо, чи буде її результатом вдале виявлення гена. Після інтеграції локуса К2-3 із Вега миЇдагі5 підвиду тата до рослини роду буряків, а саме до цукрового буряка (Веїа миїдагіє 5ибе5р. миїЇдагіє маг. анйізвіта), маркери, що

Зо давали хороші значення, використовувалися для відстеження сегмента генома К2-3 у точному картуванні, що виявилося особливо важким, оскільки таргетна область має повтори на великих проміжках. Однак, неочікувано, виявилося можливим вдало розробити кілька ідентифікаційних маркерів, які до того ж функціонували лише при використанні певної техніки маркування, а саме піросеквенування, тобто були РІО-маркерами, або нуль-алельними маркерами.

Незважаючи на описані технічні труднощі, шляхом комплексного аналізу за допомогою цих маркерів ми змогли відмежувати локус К2-3 у вигляді геномного регіону довжиною 0,67 СМ. Це відповідає фізичній довжині приблизно 340,000 пар азотистих основ. Незважаючи на інтенсивні зусилля, в подальшому було можливо лише частково зменшити інтрогресію у гені Веїа упцідагів зиБ5р. тагййта шляхом маркування та визначити можливі гени, які могли би бути геном Н2-3.

Подальше скорочення інтрогресії, однак, є бажаним у будь-якому випадку, з точки зору культивування, щоб уникнути будь-якого потенційного "перетягування зв'язку, що дуже характерно для гена К2-3. В результаті, ми змогли обмежити таргетний регіон приблизно до 0,07 СМ шляхом кількастадійного точного картування та за допомогою інформації про послідовності із фізичних генетичних карт. Однак, це стало можливим лише завдяки тому, що було перевірено загалом 8004 екземплярів, включаючи інформативні рекомбінантні рослини

ВС251 або ВС252, для яких були інтенсивно проаналізовані 90-180 нащадків, у кожному випадку. Це було необхідно, оскільки з невідомих причин ми не завжди могли зрозуміти експресію резистентності. Описані нащадки були індивідуально генотиповані та паралельно фенотиповані. За допомогою статистичних методів (Т-тест, аналіз сили) були визначені фенотипи інформативних рекомбінантів (гомозиготні резистентні - КЕ; гетерозиготні резистентні - К5; гомозиготні чутливі - 55), таким чином, ми змогли зробити висновки щодо генотипу інформативних рекомбінантів.

У відносно малому таргетному регіоні довжиною приблизно 38000 пар азотистих основ, до генотипу чутливості можна було віднести десять генів. У резистентному ВАС-пулі було визначено перекриваючі клони для цього таргетного регіону за допомогою нових специфічних до нього маркерів, а згодом їх було секвеновано. Через те, що таргетний регіон повторюється, послідовність у чутливому генотипі була визначена у вигляді невеликих частин з невідомим змістом. Тому поєднання послідовностей КК та 55 було надзвичайно важливим. Однак, виявилось можливим визначити гіпотетичний ген резистентності. Він містився у всіх без винятку бо 55-генотипах у вигляді ретротранспозону, що мав довжину приблизно 8000 пар азотистих основ між ГГ ЕК доменом та доменом ІК, що неможливо було визначити у генотипах КЕ. Послідовність амінокислот, яка передбачалася у гіпотетичному гені резистентності, показала, що цей ген ймовірно кодує білок МВ-АВС-ЇКК. Такий висновок можна зробити, виходячи з того, що введення ретротранспозону вимикає функцію гена у чутливих генотипах 55, оскільки він відділяє внутрішній повторюваний домен (ІК) від двох інших доменів (МВ-АКС та І КК).

Порівняння гена МВ5-ЇКК у генотипах 55 з цим геном у генотипах КК також показало значний поліморфізм, що продемонстровано на фіг. 1, 2 та 3. На основі цього поліморфізму у гені МВ5-ЇКЕ було розроблено та випробувано маркери у широкому наборі генотипів, що складав приблизно 100 55 та ЕК генотипів. Маркерні панелі, а також порівняльні визначення послідовностей у таргетному гені підтвердили, що включення практично завжди пов'язано з чутливістю. Однак, кілька генотипів 55, як виявилось, не мали інсерції ретротранспозону і все одно залишалися чутливими. Ці генотипи 55, однак, можна було чітко відрізнити від генотипів

ЕК за допомогою маркерів, що показують значущий поліморфізм, як показано на фіг. 1, 2 та/або

З.

У проаналізованій популяції було визначено рекомбінанти за таргетним регіоном, що демонструє рекомбінацію між геном МВ5-І ЕК та гіпотетичним геном, що знаходиться нижче у суміжній ділянці та який міг би кодувати білок з анкіриновим повтором. У випадку двох рослин, рекомбінації можна виявити між геном МВ5-І КЕ та гіпотетичним геном, що знаходиться вище у суміжній ділянці, що міг би кодувати білок ОПШЕ565 (білок з невідомою функцією). За допомогою аналізу резистентності у нащадків цих рекомбінантних рослин (видалення одного гена у ділянці вище та нижче гена МВ5-І ЕК), можна цілком чітко продемонструвати, що ген між геном білка з анкіриновим повтором та геном білка ОШЕ565, а саме ген МВ5-І І Е, описаний в цьому винаході, відповідає за стійкість у генотипі КК. На фіг. 4 наведено фізичну карту таргетного регіону К2-3 з розробленими маркерами. Дані генотипу вісьмох щільних рекомбінантних ліній, а також статистичний аналіз їхніх нащадків показано на фіг. 5.

Також винаходом пропонується метод визначення молекули нуклеїнової кислоти, що кодує білок, здатний зумовлювати стійкість до патогену ВМУММ у рослинах роду буряків, де експресується цей білок. Метод включає в себе виявлення відсутності інсерцій до послідовності кодуючих нуклеотидів у молекулі нуклеїнової кислоти. Метод переважно включає виявлення

Зо відсутності інсерції, а саме інсерції ретротранспозону, до послідовності кодуючих нуклеотидів у молекулі нуклеїнової кислоти. Ретротранспозон може бути довжиною, наприклад, приблизно 500 пар азотистих основ, приблизно 1000, 2000, 4000, 8000 або більше пар азотистих основ. У цьому випадку, при описі методу, зазначена молекула нуклеїнової кислоти - це молекула нуклеїнової кислоти, описана вище у цьому винаході, а також та, що кодує ген резистентності

В2-3 або функціональний гомолог гена К2-3. Рослини роду буряків - це переважно Веїа мцїдагі5 зиБ5р. тагійта або Веїа муцідагів вирер. миЇдагів маг. анієвіта (цукровий буряк). Обізнаний у цій галузі фахівець володіє знаннями про те, які методі підходять для виявлення відсутності інсерції. Наприклад, такий фахівець, знаючи молекулу нуклеїнової кислоти, описану у цьому винаході, може розробити молекулярні маркери, що виявляють присутність або відсутність інсерції у вищеописаному регіоні гена МВ5-1 ІК (див. приклади для приблизного розуміння). Цей винахід включає вищезгадані маркери та їх використання для виявлення присутності або відсутності інсерції і для селекції резистентних, а саме резистентних до ВМУМУМ, рослин, а саме

Веїа уціІдагі5 зибзр. тагйіта або Веїа миїЇдагів вирзр. мцЇдагів маг. анізвіта (цукровий буряк). Такі маркери переважно описують локуси у точках інсерції ретротранспозону. Точки інсерції - це точки переходу між геномною ДНК та ретротранспозоном на 5" та/або 3" інсерції. Точки переходу потрібно визначати в широкому діапазоні, а локуси маркерів можуть бути організовані на ДНК на відстані менше 1000 нуклеотидів, бажано менше 800 або 600 нуклеотидів, найбільш бажано - менше ніж 400, 200, 150, 100, 50, 40, 30, 20 або 10 нуклеотидів вище та нижче від точки інсерції. Альтернативним або додатковим кроком виявлення присутності або відсутності інсерції до кодуючої послідовності нуклеотидів молекули нуклеїнової кислоти є метод, що зокрема включає виявлення поліморфізму у кодуючій послідовності нуклеотидів молекули нуклеїнової кислоти за допомогою молекулярних маркерів, що визначають поліморфізми, а саме значущі поліморфізми; метод включає виявлення принаймні одного поліморфізму, згідно фіг. 1, 2 та/або 3, бажано виявлення принаймні 2 чи З поліморфізмів, як показано на фіг. 1, 2 та/або 3, найбільш бажано виявлення чотирьох, п'яти або більше поліморфізмів, як показано на фіг. 1, 2 та/або 3, згідно цього винаходу. Це виявлення переважно виконується за допомогою принаймні одного маркера для одного поліморфізму, а саме для значущого поліморфізму.

Фахівець, обізнаний у цій галузі, має інформацію про те, які техніки маркування слід застосувати для визначення відповідного поліморфізму та як отримати молекулярні маркери для цього бо (Джерела інформації:). Крім того, цей винахід включає молекулярні маркери, що описують або визначають поліморфізм згідно до фіг. 1, 2 та/або 3, а також застосування молекулярних маркерів для визначення поліморфізму як показано на фіг. 1, 2 та/або 3. Також, методи ідентифікації, описані вище, включають у себе методи для селекції рослини, яка має стійкість до ВМУММ. Методи селекції включають остаточний етап селекції резистентних рослин.

Крім того, ми змогли показати, що у вивчених генотипах КК знаходилася частина геномної послідовності ДНК, яка відповідала області 5ЕО ІЮ МО:4, розташованій вище гена К2-3 (ЗЕО ІЮ

МО':1), а також частина геномної послідовності ДНК, що відповідала 5ЕО ІЮО МО:5, розташованій нижче гена К2-3 (ЗЕО ІО МО), та які були щільно пов'язані з геном К2-3 і, як наслідок, гарно підходили як регіони ДНК для розробки діагностичних маркерів для гена К2-3. Таким чином, цей винахід належить до методу селекції рослини, яка мала би стійкість до ВМУММ. Цей метод включає в себе використання молекулярного маркера на послідовності ДНК, що відповідає БЕО

ІО МО:4 та/або на послідовності ДНК що відповідає 5ЕО ІЮ МО:5, та заключний етап селекції резистентної рослини. Обізнаний у цій галузі фахівець має інформацію про те, як розробити та використовувати маркери на основі наведеної вище інформації про послідовність.

За допомогою цього винаходу можна отримати наступні переваги при культивації та розробці нових резистентних ліній рослин роду буряків:

Інформація про послідовність, а також визначені поліморфізми, що дозволяють відрізнити резистентні КК та чутливі 55 алелі в описаному гені, роблять можливою розробку маркера напряму у гені, що дозволяє розробити оптимальні елітні лінії без "перетягування зв'язку" та зумовлює значну користь для агронома. Також, інформація про структуру послідовності може бути використана для ідентифікації наступних генів резистентності, а саме резистентності проти ризоманії, які, як варіант, були би частково гомологічними.

Використання алельного гена стійкості, описаного в цьому винаході, у цис- або трансгенних дослідженнях надає можливість виведення нових резистентних видів рослин роду буряків, які, зважаючи на дозозалежний ефект, матимуть більш високу стійкість або в яких, в результаті стекінгу/укладання гена, описаного в цьому винаході, з іншими генами резистентності, можна уникнути переривання та спостерігатиметься оптимізована експресія резистентності.

Модифікація гена шляхом культивування або селекційної інженерії є також можливою для розробки нових алелей резистентності.

Зо Цей винахід також належить до використання ідентифікованого гена резистентності К2З при генетичному або молекулярному стекінгу з іншими генетичними елементами, які можуть зумовлювати агрономічно вигідні властивості у рослині. В результаті може бути значно збільшена економічна цінність врожайних рослин, наприклад, за рахунок підвищення плодоносності, також можлива розробка нових посівних площ, що не були доступні раніше для культивації певних рослин, в тому числі, за рахунок біотичних факторів, таких як важке навантаження патогенів, або абіотичних факторів, таких як сухість грунту/клімату. Агрономічно вигідною властивістю є, наприклад, стійкість до гербіцидів, таких як гліфосат, глюфосинат або інгібітори ацетолактатсинтази. Інші численні гербіциди та можливості їх застосування відомі з попередніх досліджень за цією темою для відповідно фахівця. Обізнаний в цій галузі фахівець може звернутися до попередніх робіт за цією темою, щоб отримати інформацію щодо генетичних елементів, які потрібно застосовувати, та способів їх застосування для отримання бажаної стійкості у рослин. Як приклад можна навести агрономічно вигідну властивість у вигляді додаткової стійкості до патогену, де патогенами можуть бути комахи, віруси, круглі черви, бактерії або гриби. Прикладом також може бути комбінування стійкості/толерантності до різних видів патогенів, де широкий спектр захисту рослини від патогенів може бути досягнутий завдяки тому, що генетичні елементи можуть мати доповнюючі ефекти. Відповідно освіченому фахівцю відомі численні гени стійкості, які можна використати як генетичні елементи для досягнення цієї мети. Також, прикладом агрономічно вигідної властивості може бути стійкість до низької температури та морозу. Рослини, що мають таку властивість, можна сіяти раніше або, наприклад, вони можуть залишатися довше на полі, навіть під час заморозків, що, зокрема, може привести до більшого врожаю. Також обізнаний у цій галузі фахівець може звернутися до попередніх робіт з цієї теми, щоб знайти відповідні генетичні елементи. Також, прикладом агрономічно вигідної властивості може бути ефективне засвоєння води, ефективне засвоєння азоту та врожайність. Генетичні елементи, що можуть зумовлювати такі властивості, можна знайти у попередніх роботах з цієї теми.

Відповідно освіченому фахівцю також відомі численні модифікації захисту від патогену. Крім часто описуваних родин К-генів, також з користю можна використовувати досягнення по дослідженню Амг/К, комплементації Амг гена (МО 2013/127379), автоактивації гена К(М/О 2006/128444), дослідження НІО5 (пригнічення гена індуковане клітиною-хазяїном) (наприклад, бо УМО2013/050024) або МІС5 (пригнічення гена індуковане вірусом). Зокрема, автоактивація гена

КЕ може мати велике значення для цього винаходу. Для досягнення цієї мети потрібно розробити нуклеїнову кислоту, яка кодує білок автоактивованої резистентності, який, в свою чергу, зумовлює стійкість до патогенів у рослин. Таким чином, ця нуклеїнова кислота матиме лише частину гена резистентності МВ5-І КК, наприклад, гена К23, поширену від нижчележачої ділянки із 5'-кінця кодуючого регіону гена стійкості МВ5-І КК до початку домену МВ5 в гені стійкості МВ5-Ї КЕ, за умови, що ген МВ5-І ЕК не є геном стійкості ТІК-МВ5-І АВ.

Крім того, цей винахід включає в себе використання алельного гена стійкості К23, визначеного за допомогою вищеописаного методу, для комбінування з однією із вищеописаних модифікацій або з одним з вищеописаних генетичних елементів, які можуть зумовлювати одну або більше агрономічно вигідних властивостей в рослин.

Варіанти та способи реалізації цього винаходу будуть описані на прикладах із посиланням на прикладені фігури та послідовності:

Послідовності

ЗБО ІЮ МО:1 послідовність геномної ДНК у гені стійкості К2-3. Послідовність включає нуклеотиди від 1 до 1403 регуляторної області промотора.

ЗЕО ІЮ МО:2 передбачувана амінокислотна протеїну резистентності К2-3 1

ЗЕО ІЮ МО:З передбачувана амінокислотна протеїну резистентності К2-3 2

ЗЕО ІЮ МО 4 суміжні хромосомальні області, що розташовані вище гена К2-3 (ЗЕО ІЮ МО)

ЗЕО ІЮ МО:5 суміжні хромосомальні області, що розташовані нижче гена К2-3 (5ЕО ІО

МО-1)

ЗЕО ІЮ МО:6 консенсусна послідовність у геномній послідовності гена К2-3 в генотипі 55

ЗЕО ІЮ МО/:7 таргетна послідовність у гені К23 конструкта РНКІ у векторі Р2ЕМ-С48-РНКІ.

Фігури

Фіг.1 А-І: порівняння послідовності нуклеотидів у геномній консенсусній послідовності гена

В2-3 у генотипі 55 (ЗЕО ІЮ МО:6) та гена К2-3 у генотипі (ЗЕО ІЮ МО:1). Значущі поліморфізми показано сірим та чорним шрифтом. Незначущі поліморфізми підкреслено. Потенційні початкові точки транскрипції у гені позначені стрілками. Вони ведуть до двох варіантів поліпептиду К2-3 1 та К2-3 2. Позиція ретротранспозону позначена чорним трикутником згори.

Фіг. 2 А-І: порівняння послідовності амінокислот передбачуваного поліпептида по генотипу

Зо ВА (8-3 1; 5ЕО ІЮО МО:2) та поліпептидів по 22 різним генотипам 55. Значущі поліморфізми показано сірим та чорним шрифтом. Незначущі поліморфізми підкреслено.

Фіг. З А-І: порівняння послідовності амінокислот передбачуваного поліпептиду по генотипу

ВА (8-3 2; 5ЕО ІЮО МО:3) та поліпептидів по 22 різним генотипам 55. Значущі поліморфізми показано сірим та чорним шрифтом. Незначущі поліморфізми підкреслено.

Фіг 4: фізична карта таргетної області гена К/-3. П'ять генів були позначені на представленій таргетній області у референтному чутливому генотипі: (2" (0ООБ565), "3" (гіпотетичний білок), "4" (МВ5-АК ген-кандидат), "5" (ретротранспозон) та "6" (анкіриновий повтор)). Ген-кандидат МВ5-КК ("4") містить ретротранспозон ("5") у чутливій референтній послідовності. Цей ретротранспозон повністю відсутній у резистентній послідовності, і таким чином, лише чотири гени можуть бути позначені як гени генотипу резистентності "2", "3", "4" та "6" Позиції найбільш щільних рекомбінацій (рекомбінанти: 1117 3515/ 2К11007 03075 під номером "7" та 111Р83645/27К08093 05621 під номером "8") зображені згори. Виходячи з вищезазначеного, можна відмежувати коротшу таргетну область "1". Маркери, розроблені для цієї мети шляхом рекомбінантного аналізу, зображені у вигляді чорного пунктиру у нижній частині фігури. Сегмент гена ("9"), що обраний та виділений як таргетна послідовність із домену "10", був використаний для оцінки гена у роботі з РНКІі для сплайсингу генів у алельному гені резистентності К2-3.

Фіг. 5: аналіз маркерів рекомбінантів по найбільш близько розміщених локусах у таргетній області К2-3 (маленькі літери у жирній рамці є маркерними даними, отриманими іп 5іїїсо). Вісім рекомбінантних ліній були фенотиповані та генотиповані у 1051 нащадків. Нащадки були розділені на З групи (КК резистентні гомозиготи, К5 гетерозиготи, 55 чутливі гомозиготи) на основі даних маркування за геном-кандидатом МВ5-І КК або сплайсингу фланкуючих областей у випадках, коли ген-кандидат МВ5-ЇІ КК був гомозиготним ЕК або 55. Крім того, представлено відповідні дані ІФА. Статистичну обробку даних сплайсингу, а також випадків, коли сплайсинг не відбувся, було виконано за допомогою т-тесту та критеріїв Вілкоксона. На основі результатів можна було чітко відокремити ген-кандидат між маркерами 53е5800501 та 53е5873501.

Фіг. 6: Вектор трансформації рАЕМ-С48-РНКІ: аз55-промотор; С48 5: положення смислової послідовності С48; АІДАРб інтрон2г: інтрон амінокислоти пермеази 6 Арабідопсису (Агабідорвів

Інаійапа); С48: положення антисмислової послідовності С48; Мо5-Т: термінатор Нопалінсинтази; бо ЇВ фланкуюча ділянка: фланкуюча ділянка лівого краю; 2ЕМ ділянка: ділянка розпізнавання білкового домену "цинкові пальці" (комплементарна); Рпо5: промотор Нопалінсинтази; МРТ: кодуюча послідовність; ген неоміцинфосфотрансферази (пр); рАс7/: термінатор рАс7;

ВмираіЗ' ТА: 3"-нетрансльована область гена Ра! буряка цукрового; ЇВ: лівий край; аадА: кодуюча послідовність; аміноглікозид-3"--аденілтрансферази (ААБ); рм51-КЕР: початок реплікації рРУ51;

СоїЕ1 огі: початок реплікації СОЇЕ1; КВ: правий край.

Приклади:

Картування та точне картування гена К2-3/ фізична генетична карта.

Ген резистентності К2-3 (також позначений як стійкість-С48 або С48) було картовано шляхом кількох кроків за допомогою картування та точного картування хромосоми З між 57.1 та 57.8 СМ (внутрішня референтна карта), тобто на генетичній відстані між двома фланкуючими маркерами 0.0714 СМ на генетичній карті. Для картування всього досліджено 8004 рослин, схрещених за 5504 (чутливий генотип) х 174 (стійкий генотип). Паралельно до ОТ. картування

С48, після кожного кроку картування розроблялися нові інформативні маркери, що орієнтовані на таргетну область та застосовані для відмежування таргетної області С48.

Координати було додатково підтверджено при точному картуванні за допомогою аналізу нащадків інформативних рекомбінантів. Для цієї мети були детально проаналізовані інформативні рекомбінантні рослини ВС251 або ВС252, у кожному випадку аналізували 90-180 нащадків. Ці нащадки були генотиповані та фенотиповані паралельно та індивідуально для кожної рослини. За допомогою статистичних методів (т-тест, аналіз потужності), було визначено фенотипи інформативних рекомбінантів (резистентні гомозиготи КК/гетерозиготи Кз/чутливі гомозиготи 55), і, таким чином, можна було зробити висновки стосовно генотипу інформативних рекомбінантів. Отримано гомозиготні класи нащадків (КК проти 55), що відрізняються за параметрами резистентності, ген був присутній у геретозиготній ділянці (К5) батьківської рослини, в іншому випадку він був присутній у гомозиготній ділянці (КК або 55) батьківської рослини.

Фізична карта була розроблена для чутливих до ризоманії генотипів за допомогою визначення маркерів та їхніх генетичних позицій у хромосомних послідовностях. Після ОТ. визначення області С48 було розроблено нові інформативні маркери на основі референтної

Зо послідовності та було проведено додаткове порівняльне секвенування у резистентних генотипах (секвенування наступного покоління та секвенування за Сангером).

Область, що була визначена за допомогою точного картування, містить послідовність довжиною 37996 пар основ (положення фланкуючих маркерів 5МР) у чутливій референтній послідовності. Колінеарність між генетичною та фізичною картами у таргетній області є суттєвою (послідовність 12 маркерів у таргетній області).

Ідентифікація та секвенування резистентних ВАС- клонів

Бібліотека ВАС була розроблена для вибраного резистентного генотипу К2-3 (С48). Із цього

ВАС-банку було взято зразки та промарковано С48 ОТІ області. Для дослідження описаної вище таргетної області було вибрано декілька ВАС-клонів. Із них для секвенування були обрані три ВАС- клони різної довжини, де було повністю визначено таргетну область. ВАС-клони були секвеновані, та на основі отриманих даних секвенування було виконано збірку "де помо". Серед отриманих сегментів у послідовності, що кодує стійкість, найбільша послідовність мала довжину 110909 пар азотистих основ (34537 зчитуваних фрагментів) та повністю містила таргетну область.

Порівняння чутливих та резистентних послідовностей - оцінка послідовностей

Колінеарність двох 55 та ЕК послідовностей була порівняна за допомогою різноманітних програмних інструментів. Для обох - резистентної та чутливої послідовностей - анотація гена виконувалася за допомогою програм МакКег та Редапі. Анотація гена в обох послідовностях показала одну й ту саму послідовність передбачуваних генів. Однак, неочікувано ми виявили значну відмінність в одному із цих генів, а саме у гені, що є цим винаходом (К2-3).

Ретротранспозон можна було анотувати до чутливого генотипу у цьому ідентифікованому гені

МВ5-ІКК. Введення ретротранспозону виконувалося у гені між двома доменами - І КК та ІК.

Резистентний генотип не має цієї інсерції та відтворюється згідно послідовності зЗЕО ІЮО МО: 1.

Крім того, передбачувані послідовності поліпептидів були зрештою порівняні та оцінені (частково показано на Фіг. 2 та 3).

Порівняльне секвенування гена-кандидата МВ-АВС-Ї ВА

Ген-кандидат МВ-АВС-І ЕК був секвенований за допомогою порівняльного методу шляхом двох кроків. У наборі генотипів, що містив всього 92 резистентних та чутливих генотипи була верифікована точка інсерції ретротранспозону. Цей аналіз показав, що жоден з резистентних бо генотипів не мав інсерції ретротранспозону. Тим часом, в чутливих генотипів інсерції можна було визначити у більш ніж 9095 випадків. Визначення інсерції таким чином виявилось пов'язаним з генотипом чутливості. Однак, завдяки знайденим невідповідностям (приблизно 10 95 решти чутливих генотипів без інсерції), на другому етапі секвенування всього гена перед точкою інсерції було розширене та охопило область промотора (ЗЕО ІЮ МО: 1). Загалом було просеквеновано та проаналізовано 31 вибраний резистентний та чутливий генотип, включаючи суперечливі генотипи. В результаті всі резистентні генотипи, де стійкість мала сім різних джерел походження, були на 100 95 ідентичними при порівнянні приблизно 4100 пар основ. Також, у послідовності нуклеотидів, із яких певна кількість призводила до замін амінокислот у білковій послідовності було виявлено безперечно значущі поліморфізми (див. Фіг. 1, 2 та 3). Деякі із цих замін, а саме в областях доменів, могли призводити до функціональної втрати визначеного білка резистентності у генотипах 55. Крім того, три інсерційно-делеційних поліморфізми (ІМОЕМ), повністю зв'язані з резистентністю (зміщення рівноваги зв'язку - 1), також були виявлені в області промотора (Фіг. 1). Ці інерційно-делеційні поліморфізми (ІМОЕЇ) також можна вважати потенційними кандидатами на ті, що зумовлюють функціональну втрату відповідного білка.

Верифікація гена за допомогою рекомбінантів за близько розміщеними локусами

В проаналізованій популяції, що містила 8004 рослин, було виявлено 16 рекомбінантів у таргетній області (область точно картована і визначено 37996 пар основ). Із цих 16 генотипів 9 рослин містили рекомбінацію між білююм МВ-АВС-Ї КК та суміжним білком з анкіриновим повтором на правій стороні. У випадку двох рослин, рекомбінації були знайдені між білком МВ-

АВС-Ї КК та суміжними білками ЮОРЕ565 зліва (білок з невідомою функцією). За допомогою аналізу нащадків всіх цих рекомбінантних рослин (довжина гена вліво та вправо), ми змогли цілком чітко продемонструвати, що ген лежить між ОШОЕ565 та білком із анкіриновим повтором, а особливо те, що лише білок МВ-АКС відповідає за стійкість.

Приблизне визначення відсутності інсерції транспозону

Для визначення інсерції ретротранспозону, було розроблено 3 спеціальних комбінації праймерів. Перша та друга комбінації праймерів здатні визначити інсерції, оскільки в кожному випадку один праймер із кожної з двох пар знаходиться в ретротранспозоні (ліве або праве фланкування ретротранспозону), а другий праймер приєднаний безпосередньо перед ретротранспозоном або після нього. Третя пара праймерів визначає відсутність

Зо ретротранспозону, і таким чином праймери мають точки приєднання перед ретротранспозоном та після нього. Продукт ПЛР зрештою може бути отриманий при стандартних умовах, лише якщо немає ретротранспозону, в іншому випадку, коли ретротранспозон присутній, продукт ПЛР буде занадто великим і в такому випадку неможливо буде створити амплікон.

Верифікація гена за допомогою РНКІ

Крім описаної вище верифікації генів за допомогою рекомбінантів, подальше визначення ефекту резистентності на ген було виконане за допомогою РНК-інтерференції. Для цієї мети, стандартний генотип резистентного цукрового буряка був трансформований за допомогою ДНК- конструкта, який кодує двоспіральну шпилькову РНК. Ця дсРНК може впливати на пост- транскрипційне пригнічення гена, що може зменшити або вимкнути ефект алельного гена резистентності К2-3, і таким чином попередньо резистентний генотип цукрового буряка повинен стати чутливим до ризоманії.

Для того, щоб отримати придатний ДНК-конструкт, було вибрано певну таргетну область алельного гена резистентності К2З, що мала довжину 434 пар азотистих основ (ЗЕО ІЮ МО:7;

Фіг. 4), вона була ампліфікована за допомогою ПЛР та клонована як в смисловому та і в антисмисловому напрямках у векторі рАЕМ, що є придатним для синтезу шпилькових структур (Фіг. 6). Цей вектор має подвоєний промотор Саму 355, декілька точок клонування, інтрон із гена АІААРб, що кодує амінокислоту пермеази в Арабідопсіса (Агарідорзів (Паїйіапа), також кілька точок клонування та термінатор нопалінсинтази. Трансформація цукрового буряка за допомогою отриманого вектора була виконана у відповідності з протоколом Ліндсей та Галуа (1990) з використанням антибіотика канаміцину як маркера селекції. Після декількох стадій селекції, було проаналізовано вдалу трансформацію на трансгенних паростках шляхом ПЛР за допомогою визначення присутності гена прій, інтрону ААРб та двох т-ДНК крайніх послідовностей (ІВ/КВ), а також відсутності мії. Позитивні паростки були розмножені за допомогою клонування іп міго до 30 паростків з кожного, висаджені та перенесені у землю в теплиці. Приблизно 2 тижні потому рослини трансгенного цукрового буряка були висаджені у грунт, заражений ризоманією, де вони зростали протягом 8-10 тижнів. Як контрольну групу було використано нетрансформовані рослини, взяті за основу для трансформації того ж генетичного стандарту резистентності. Для визначення поширення ризоманії та сили атаки ВМУМУМ корені цукрового буряка було зібрано та оцінено шляхом ІФА тесту, в якому низький показник за ІФА бо був показником резистентності, а високий показник вказував на чутливість (МеспеїКе 1997, СІатк

8 Адат5 1977). Показник ІФА у трансформованого цукрового буряка із середнім значенням 3.55, був достовірно вищим ніж ІФА показник у контрольній групі, що також була резистентною та мала середнє значення 1,27, порівнянне з чутливим стандартом 0108 55 (таблиця 1).

Результати тесту ІФА відповідно показали, що попередньо резистентна рослина була чутлива до ВНПЖБ в результаті пригнічення специфічного гена, а саме алельного гена резистентності

ВІ2-3 на фоні трансформації. Таким чином ген, описаний в цьому винаході може бути чітко названий геном резистентності К23.

Таблиця:

Результати тесту ІФА та статистичного аналізу даних (0108 55 - чутливий стандарт; 6921 КК - резистентна трансформована основа; 6921 РНКІ - резистентна трансформована основа з

ДеРНК, направлена проти гена К23). 11111111 о1ов яв 1777 богівА | 6921РНК п1111111116111111711111111111251 11111164 (Стандартневідхилення | 006 2 | 124 2 | 087

Т-тест (рівень достовірності): ре0,0001

Джерела інформації:

Сіак, М.Р.; Адатв, А.М. (1977): СНагасіегівіїс5 ої Ше тісгоріаї тетой ої епгуте-іїпКей іттипозогрепі аззау ог Ше адеїесійп ої ріапі мігивев. у. (зеп. Міго!. 34, 475-483

Оеріскег А, еїаспєї 5, ЮОНаєзе Р, 7атргузкі Р, Сбоодтап НМ (1982) Мораїйпе зупіпазе: іапвсетірі тарріпд апа ОМА з5зедиепсе. У Мої Аррі Сепеї. 1(6): 561-73.

Еззег К (2000) Ктурюдатеп 1: СуапобракКіетєп АїЇдеп Ріїге Рієсніеп Ргакіїкит па І епгрисн.

Зргіпдег Рибіївпіпа Ноизе, Вепіп, НеїдеїІрего, Зга еййіоп. 2000.

Сідпег 5, Іеппеїог5 ВІ, Міїззоп МО, Вепзеїеїї у), донапззоп Е, СуПепвреї М, Ктгай Т (2005)

ОТІ. тарріпу ої ВМУММ гевзівїапсе їот Ше М/В41 5оийгсе іп зидаг реєї. Сепоте 48: 279-285.

І агзоп ВІ, Міпівєттапівє! М/М, НІЇ А, Еопів І, Мипег А (2008) Ргоївеоте спапдез іп 5з!идаг Бреєї іп гезропзе юю Вевєї пестгоїйс уеєїЇом меїп міги5. Рпузіоіодіса! апа Мої. РІ. Раїої. 72: 62-72.

Іпазеу, К., апа Р. СаПоїз (1990) "Ттапетоптаїйоп ої зидаг Бевї (Веїа мпЇдагіз) Бу Аагобасієтійт

Тмтеїасієпв." Ууоштпаї ої ехрегітепіа! боїапу 41.5: 529-536.

Мапіп 2В, Водаапоме Ау; бЗезза С (2003) Опаегеіапаійпа їйе Тпсіп5 ої ріапі аізєазе гезібїапсе ргоївіп5. Аппиаї! Немієму ої Ріапі Віоіоду 54: 23-61.

МеспеїКе УМ (1997) Ргобіете іп дег Кіготапіагезізтеп22йспішипо, Могігаде Тйг Рпаплеп2Испішпа,

Кезілеп22йспішпа беї 2гисКегтгиреп, сСезеїїзспай гг Рпапгеп2йсттипа е.М., 113-123.

Оаеї! ОТ, Маду Е, Спца М-Н (1985) Ідепійісацноп ої ОМА зедшиепсез гедцігеа бог асіїміу ої те саціШомег тозаїс мігив 355 рготоїег. Маїшге 313, 810 - 812

Вивпюп РУ, Тоїтез УТ, РатівКе М, У/еттент Р, Напібгоск К, апа ботввзісп 1ІЕ (1996) Іпієгасійоп ої ейсйпог-іпдисеа ОМА-Біпаїпу ргоїєїп5 мйй еїїсйог тезропзе віетепів іп Те рготоїег5 ої рагзІву

РАТ адєпез. ЕМВО У. 15(20): 5690-5700. затбргоок У, Вивзеїї МУ (2001) Моїіесціаг Сіопіпуд. А Іабогаїогу тапиаї, Соїд 5ріпд Нагбог

І арогаїогу Ргев5, 3. Ації. 2001.

Зептідіп ГЕОЄЕВ, М/еуеєп5 Сї, І еермте М, Сіїтег ОО (2008) Ідепійісайоп ої аїймегепіану ехргеззей гоої депе5 ироп Іпіготапіа дізеазе. Мої. Ріапі Раїної. 9(6):741-51.

Зспоеп ОЕ, Воск ТОМО, Ківїп-І апКногві ВМ, І апде МУ (1999) Іпнегпапсе ої гезівїапсе іо Вевї пестоїїс уеПом меїіп міги5 іп Веїа миЇдагі5 сопієїтей Бу а 5есопа депе ог гезібіапсе. ТНеог. Аррі.

Сепеї. 99:740-746. зЗопі НН, Маїекі М(2004) Емідепсе юг ргезепсе ої іїуре5 А апа В ої Бевї пестгоїйс увіІІом меїп міги5 (ВМУУМ) іп Ігап. Мігиз Сепез 29(3): 353-8.

Мап Ооійєп С, Мауг С, Казіет ММА, АїЇргеспі М, Согпеїїзвеп ВУС, Таккеп РІГ/М/ (2008) зігисіиге-Типсіп апайїузів ої Ше МВ-АВС дотаїп ої ріапі дібзєазе гезівіапсе ргоївіп5. доштаї ої

Ехрегітепіа! Воїапу, 59(6): 1383-1397

МО/2000/29592. (Мах-Ріапсек-СезеїЇвспай 7!иг Ебгаегипд дег Уміз5зепзспайеп е.М.). Спітегіс рготоїег5 сарабіє ої тедіаййпд депе ехргезвіоп іп ріапі5 ироп раштодеп іпієсііоп апа изез ІНегеої.

МО/2006/128444 (КМ/5 БААТ ДО). АОТОАСТІМАТЕО ВЕБІЗТАМСЕ РАОТЕЇМ.

МО/2007/147395 (КМУ5 5ААТ АС). Раїтйодеп іпдигівг/брагег зупіпеїїзснег Рготоїйог.

МО/2013/127379 (КМУ5 5БААТ АС). РАТНОСЕМ-БЕБІЗТАМТ ТВАМЗСЕМІС РІ АМТ.

МО/2013/050024 (КМ/5 5БААТ АС). ТВАМЗСОЄМІС РІ АМТ ОЕ ТНЕ 5РЕСІЕ5 ВЕТА МОЇ САВІ5

НАМІМа ЕМНАМСЕО ВЕБІЗТАМСЕ ТО СЕНСО5РОВА.

МО/2013/091612 (КМ/5 БААТ АС). МОМЕЇ. РІГ АМТ-ОЄЕВІМЕО СІ5-ВЕСШ АТОВУ ЕІ ЕМЕМТ5

ЕОВ ТНЕ ОЕМЕГОРМЕМТ ОЕ РАТНОСЕМ-ВЕЗРОМ5ІМЕ СНІМЕВІС РЕРОМОТОН5Б.

Claims (2)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Спосіб відбору рослини роду буряків, яка має стійкість до вірусу некротичного пожовтіння жилок буряка (ВМУУМ), де спосіб включає: (а) застосування молекулярного маркера до послідовності нуклеїнової кислоти 5ЕО ІЮО МО: 4 та/або нуклеїнової кислоти ЗЕО ІЮ МО: 5 для виявлення наявності однієї 3: () ЗЕО ІЮ МО: 1, або (ії) нуклеотидної послідовності, що кодує поліпептид, який має амінокислотну послідовність хЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 3, або (ії) нуклеотидної послідовності, яка гібридизується в жорстких умовах з послідовністю, комплементарною ЗЕО ІЮ МО: 1, або нуклеотидної послідовності, яка кодує поліпептид, який включає амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІЮО МО: 3; (б) виявлення у послідовності ЗЕО ІЮ МО: 1 щонайменше одного поліморфізму, зазначеного на Фігурі 1, 2 та/або 3, та (в) відбір стійкої рослини.

2. Спосіб за п. 1, де відібрана рослина містить регуляторну послідовність промотору, яка контролює експресію гена, і регуляторна послідовність містить нуклеотиди 1-1403 5ЕО ІО МО: 1. омоежкисут мих ехм КК дедетсттктидектветивх КАЖІ ЕК ЛІТЕ УХЖТ ТКАНІ СМЕТАНУ ТЕМА МЕТ я їй схіжЖке местміщюкутує ПІ ПРОЖТІТКТТЕЄ КИМ ЮК ТТ АлАТ Пак ТК АЖ ТТ поАйех смоли ПЗВ ТФЕРИЖАЛА ЖИТ МАТКА Ти І Є жан - ше хухоюхм Пк МККотя уст тт ук те укла Ватт Акта плат тхійке сомІМІіДюЄМІіІсІ ІІ ОДНЕ УСТУ КСО УС МІМІ КІ КРТ ПИТИ хом озуєтмох ТІЛ пон СТИК ТИТА ТАЛА ПИВ ТЯ не щі птахи семуфмщмиоть ПШЖЛВ КУПИТЕ АВ УНУС А Ю ОА РИ ТТОАТТКРІУТ ТИ ИЦО КОТА АТАКА МОМ КПУХ ЧИХ ПИЛ ФСАКІКТСТОТВКТАЕ КВК КВТ КВТ, копали ттАйиХ пмодіфеммість ЇЖАТІ ТОХатТУКлту КЕ КК КЕ ет КК ТЕН ях. кижокит ут Мухи НК канта Ко оо те р а Кон а он Зак шк піка попа сюеюкінуюіЯАЕ КОВДРУ ВАКР УВУ КВ КК ВА Уа уу тик чі ХЕ хоемпекцу чутно х ДІР КОНИКИ МИТТІ Т с ЕЕ АКА ТІК ЕТ ла ект чЧлудах сомпопуюкеїіною ГУК и на кв в ов в

Фіг. 1А

ЕК вик смксюнтучи Мучмюх 1251 МККЖКОММКМО МКМ ОК ЕМЕТЕ КК ЕН ЕК ТТ ЕВ тіше КХУгТІДХУЙКІХИ КВК: пули Ан ОКРІМ Кромка МеВ шкі тах Моимкюпи тую 00 ХОМА) оКТЕКЕИТХ ВЛИТИ КХ ДКВ ЕК ЕК ТЕТ ПКТ ЕТ хат сії влмдкеїстУ ЇХОФІ вуж рКеихаКТ ско Киеве кокон коки Кх лм ти хоемсвхпуточуціних о і Я ТЕ ША стійко кканабююкуююе ТЯ: ДНК КЕ КИ ЕК КК Хемпекслусочутанох Ша МКК КК КК ах жа тхЖек Мемлоситохсх» їх: КОМЕТИ Ки КО АК В Кат: ЖЕ ІП пики М ещика ЕІ МОЖЕ ТУ Ми КО Ме муїйхе диму юю УНК пУуЯТУНТВУ М у УК Ву и я Каея ке хенсемтк почути ТБ: ВЕС за о у оса не зорі а КНТ ви зо ке ока о КК Знак о за ьяоя МКМ ВИМІМАМКМІЙКИ ВК КЛЕН ТІК КА ПМК КТК МТА КТ ЕК КАХ ТК ТКУ. тлхЗ МЖХ мохом шскодуТиХоХ ЖЕ: ХДУ ЛК ПУТ КАЖАН ТАТІ ЕКТяВ, сКжех схилі дижмусть (ЇОМКІ ФЗКТАМТУ КОТИКИ АТО ТТ АВТ ТКА КОТ ЖЕ ТВМЕТХ їх ТАК спшкимтуєєежОюко ІЩУШУ ТАТАМИ ЖТ КАХ ВАТ ВАЛ УК КАЖУ Пе Тая КТК піка сихіхіпжжіпух ІШВЕУ ФЕВ аорта ТЕ ТЕТ АІТРИКІКВСТОГІКОХ І М кпможимут умами (ВІЇ: Фо яре кт таА ЕТ АКТА КОТА КД КОТ ОАКЕ ВК ся й М -- ШЕ М ЧДМЖж смію МаціІх ТАШУХІ УТА УАТКУ ВАКУУМ КЕН ТВА КИ ТТККВТКАЛЛЕТУ УА ККИХ Ка Вам мохпектус-чутниех ОХ Т: ТЕГТЕМАУТАДИ ВТО КТК АКА КВК ВАТ ТК ПЕ ТА ТАКТ ВИК стюжха похідна ють ФО: УЗОТУКУСТМТРИКИТУ ТУ КВ КОТ ЕИКУиУ р КА її ідгемті 195 кпможимутозУмИмиХ ЗЦОМО: КРЕАТЛАВІЛЕККВУК ЦЕ УТ ІК КАРА КИЕВ ВКА ТИВ В КК ТТ стадЕд сів похаііх ІТ БАБЦІ У У ТАКИ ВУ ВЕ КК хі І1хЯх Момент ЗутаМих ЩІ ШХОБОТТУТ ТИПУ ВА МВРУ УК МЕ КИМ ККУ КИВ, птйЖех МИМО Кедх (ДЗК: ШТОК П ТУ КАРИ К КК КК КТК І5ІіжІИ КО пресу ми тИюЕМ 2Щ1М5І Села жут у АМКУ КИТ УТ порту «шМЕМа пмоіідеохОУте КЗПОЖІ ОЕЛЖУ АКТ АК У У КУ І ВОК ЕК Кі: Щ ІКХ хомсеипух зутиМих 1АЙЩМ муКДАВЮТ ЛИ Ку КТК о и ех пу вкиВ, схмухо пееміЮМОМІМУЄ ХІІ ХОЛІ ТУТ ПАТ УМ шк и в ЗНАК ви з ок ев в Ко о в в В В ВЕ С ос СЯ птащех умоюрмекааломо (КВ: ТКУ ДИ п У УА ММК КИ ПЕК СО ПИТ КВ ВК КАМ КК яких. ша ік тосджнеу МИ ИИКаМ ІЗ, ме КК ТК ек де ки ФхмУко песмідмомІМУє ХУЙ ЛУСКИ ТУ у ТО УТ ПЕ У У ТК Ку ХК Ико їі іп пимеомоюмує жк ЗА ХІ КТК ТТ КАТЯ ТОП у пи КК ТТ ПОМ ЖЕ ХАЛВ» суібко месхіщююкімую ХІЗЕКУ МЛТТАИЮ КТ ЕТ ТТ ЕВ По ТЕТ Та МТУ ж Ко хомсмюютрме вити ЗІЗ ПУХТУТЕЛУВВКУ ТММ я я ПРА МК ЕК УМА ХЕ Я ТЛА ВУЛ. паю спимо жмАсв (ЇЖІ ТДТУ Т ЛЕ АХ ТЕКА КАК КЕ К ПЕКТИ їтКі й ше па осокою к СУК дтУТЯ ТУТ МА КЕ У ТАКИ ТЯ ККАЛ ТТ и ДТ М КК сухо месхіщююкімую ХІШКЖІ ВТО ЕЛК ТРАВМУ КТ о АП ТРТТУТІДТя Ки КЗ ДУХ юю КИТ ОМВК ЕМ КД ДДТ ЕК о ДОК КТ п ВК суфдке поімідежкі І Х ВОК УМО ЕЕ ТРАВ ЯКО КТК ВПК яе т ту хом о юеК МУ ИМШЕЛ УВП ТАКИ И ТМ КИ ЕВ У я ВАТ ДИВ ВАХ птАйих смолі амУєть о МРТ ТММ ТТ АВТ ТТ КВК КК. хаті о два юю КИТ МИВІ ЕДТА ТАКІ Ки т уява каАеМ шТУШУМ ІІДІЩИВМЗтьІду як УЯКУЛУ КВК Ву КИ ТВА ТУ ТТ ВТ ЕВ

Фіг. 10 я дл МоМОВипЕ ЗУМИММІ КОЖ: МЕКУТХКУ ККУ КК Ту КВТ Кри ую, сшАщЕю пІМІМБІОМеАІЮкіХАКЖІ ПЕОМ КЕКВ ЛК У КУ ВТ КТ вити т ле Момент уєочуткиюХ ОКЖЯМІ СОКИ УМ Ве УВЕСТИ рних «ЖМмо десдіджомІУ ДЖЕ ФЛМУДЩУТУВ ВУ ПИТ У ДЕС В ЕЕ ОМ ВК КУТУ їі те ШОК му КК СТО: ДОМИ КАТКИ УК КТК ТУ А Ку схійко мосхідюекітую ШИЯ ДОВИХ я АП ЕВ АТ ТК ВИ дах ххх р хомсрукюх висно ом ЗУ ІА ТД ТЕТ КУТУ ПМ КОХАВ УЛ МАЯ ЦЕМА ТК ВІККАВ МУК ВИК МАТИ лиМмужех мозку ІЙЗЖІ РІКИ ТІ КА КІМ КАНВІ ПІВ ТТИ хі Щі Щ їх Кок КМУ МРТ ТТ ЕЕ МТ ТТ ЕТ ЕК ТТ ХУ ПУТІ ПАК схо, месомІщеюкі ту ЙДИ ЛВМУТК ТК ВКМ МОНУ ТА КВ ХМІ ТЕКА Км таки юшку сухо ІКНІ ТИСКОМ К ТЕТ ТММ ПІХВУ МВП МИ МТУ піде пеомглекліх ШИХ; РИМОМ СУВ Оце юрхцІІк ОАЕ КОВКИ МКК Км дих Момцеюсу ЧИМКОХ ОО МТУ ТЕК КВ КК ТТ ТАКЕ ЕК АПУ КТ УА КАТ ОО ВН У А о вежа и Ко СТВ КК ков не В СК хі Хо ее НН с КК во зи о со овю За от с ко поз зако конс ФЖМЕМО ПеСЦІДИОМІСУВІЙКИХ ХУСТІ ХОККВМ УВК ЯВКУ ТИКИ в

Фіг. ТЕ ШОЇ, Ух хоххиксуєт мутна дж; ФРЕНК ИУ ІВЦ МК ЕТ КРУ МІК Ко, стожма пемцдідштмусть ЦОМТЖІ ПууКи ТКУ МУ КТ КК КК АЖ ПК ВВ ее, ІІ пи милу т ум МИ УтрдУ тк. Кн и в пжудеюх поладюккійкі Ку; ТУМАН ет Руси 5: ЗП: МЕМ ую у их ТЕТ М КДАВТ Ту КЕ упО А Ктк тк підем схоже нтю ІДХІЙ) УМЖОКТВ ВАТ ТІ ТОВ АВК о АНТ ТЕТ шої дея ТЕсМюНсУТ МИ ОМЮМ ІЖБУІ УКОСУ М У КК У т Кл схимжмо песціюмоемоумке УЖЕ. ЛЕМУМУ МТМ ТАКТИ КИ АТ КУ АВМИ ТТ ТТ ЕМ ХА ВАЛИК У ТТ ИКЯ ЗІ зів хом ую ІДУ Ж: пулу пе РК кокюмкру сука хан у тую тппфем сиза ШИХ) УЧИ УМО ВИТ АВ ЕМ ПИТТЯ РОТИ УТ КТ ЕМ УКуК ТИ ркесня зЗЕЩх Момот юутох ДІМ: СКУПАТИСЯ псашех смаку сю ОЛІЙ) ОЖИНУ ПИТИ ЛІВТЕ МИТІ ЦІ ПІВ КУУ КАиВЖІ ВК ху йде охмсозумімус ик СИ УКР ОТ ОМ ТТ ТАМ РК ТЕ КВК ВІТ У ТИМ КАРА ВИК схіжжа мотмлмюОм ІМ СЗШ. МКУ ТІЛКОТт ПОЛІ КТ ка Вода, УКУТАТИ пек Кале Ко их ХОМІМУЖКІЮМУ у ММ УМХ ЗЛОМ У ВТ ТК ТОМ ТУКА ПХТ ЕМ УК УМКТАЕМИ КАК В МАВ тхіжке гемІМЛЛдюМіІ ст ДМК ФМуКОМИК УМ КК юУ ЦО ТКрРКІАМІЕКОХ,

Фіг. 1Е зливу зах хоюмоемІВН ВМ Мою ММА сек ГЛАЧК ТКА КАЛКТТ Я ТУ КМТ ККУ ККАЛ КТК КАТ ТАНКИ пуішею ссміМмамеюиі ло: ММ «ЕТИКИ М ВАТА ТИ АТО ПИКА АКТ зму хадх ехежомоксемуєкююх ЖУКИ ДЕРТЕКОІ ВАК ВУ ММ У ТАКУ ТЕМА ВК, ек Вся стхімюж метмІЮОЮЮМОМИ ІЗМИМІ СУТІ КІМИНЕСІЕКІАННІ МІМІКУ КАТІ ММ ТО Дю побтентахх Мило ТНІВЖІ Запі Зах еимюож тут МИХ ПИТОМА, ТД КА УК ТТ ЯМУ ВТ Я ЕТ ТА ТЕЛЕ схійка псемідюєжітуїйтйІ ТАТЕЕОКМА АВЕРС В ТАК АТЕ ТКУ КА дата дя лиж - мито жлю паж в в кю МТУ тив В. Се «ижомт; Момоохюот ун СУДИН ДНО ни тттх шк нн ЗсеДКодетиан птУіфех соми юкихтв За: МИХ ЦлЛт КВТ УА ВАР ТК ОО ВДКТ МИ сполох птійх сохомудюекитковІЗВЯМ КОЗАЦТВА Ту КАК ТЕКИ ЕК ВАЖКИХ ТР хлкоде зе ххди ско М ноу ЮК ЛЕВИ «КРТ КЕ ПЕВ ХИЖАК КК та тя ит па дев с вх схійка похохідкомкіскмь і) ТИЖ ЕСТКДКАЖ ТОВ ЕЕ ва тетАСЮДРУ ВІ ВАК А Тех зт хіше теКктМі т ЕК СКЛМРІ ФККЕКТТАТВ КАМ ЕК КАТ ЕК УКВ ТТ ДЕТЕКТИВА соідкоа помімісюітме ЩОКУ; ЗщцехтІкЕтРИЦУМОХО ПЕРЕ Кт ре уки кткитих УЖ п Момсмюют умо УКІЦ У КТ ККД ЯКЕ НИМ МКК ЕК ЯМ КТ ПЕМАВМАВАТТ пітіжжх семозУдимих У КУТУ; ско цеки Ма ие акти иа ке М ник ек хау тухетм ту мух ВОДІ МКК ЦУР КлнУнТ ХУ УВХКУУИ ОМ ТЕКТИ МЕ ХІІ КАЕТІ КЕ «Ж ДІМ ШИ Мис ГИ) ІМТ КИДАТИ ТТ ВУ КИТ ОДА ЯКУ УТА

ВИ 1 на иа уч МЕТКИ ПУТ КИМ АК УК КВК ТК КАРЕ ТИ сХІКО ПОМХІДФЮМІММСІНИКІ ТЕТТИ УТ ТО Т ІМ УТ КВК ДУ ХЛ ДУ КВУ пе Е МоМсМУСу т У ИМОКІ ОКО ЗМОЖУ ТУ КК я КИ МУ т Кук тем пиБЖЩех хр КОДоюТуИВІх ПОМТТТУФИМ МИТ ХАІ У КАТКИ ТИВ ях БІО Кя кі: Мох МскиеКУТКОХом ТОЮ ПКУ КТЛИХ МТВ ІТТ ТТ ДОМІ КОТУ Ми Ти лейжех смій евсоІдИ МО ПИШИ ДИ АТАКУ ПЕ М ПУЕ МВт МИНЕ зажі хдше емохжамуєс жюхомко СХЕМ ДИКУ Т ВЛ ЕМЕКА АК ТЕСКТККК ХМ И ПКАКАКЛ НА ЕМВ у М МТ ТЕТ УМ ИХ схійке гпмихмімеекімух ЗЗИИТУХ ДПТ ХЕ ВОК ТИВИ ЕК ТКА ЖИМ п ТЕКА еВ як експерт жижжЕ М ках ХОМ МСКІМ КИТ ОМ ЕМО Дитини тюттютю тюки тжиюттиютх тини КВАРТЕТ ПАКТ АВК ПИ сл фех мод жевоеві ді ЖАСЖІЮПСОКТІМОСЕКТ ТЕТ ДТ КТК цап яд зах МеюпеМтТус МИМО Х КИ ДАЛА ТТЮ УМІТИ Макет ТТКОа ІТ Кока К УП ста пхемтідовхістьіяшуИ: ХОРУ КУКМ МА це КАВОВУ ТЦ КТК МИХ в їх хлмигкемутсо сумне ВУі сЕУК. ен ее МОУ ІТК иа ІКТ Ти ОК ММ я З о еВ хви пед МЕР УКІЦ Б ащЕ хоюпектус митюмох их ЖК дрож жим МоІх пет сотки ПТЕАЛЧТУЄМХ яко ММ АЖ МІНІ ТИ Ен КК вс в в в п ВМ В В В Кв

Фіг. ян 254 БЕ ЖХизомжюпото умо йлМІ СОТ дЕНИК ТТ аТМ ТИКТТУКК тики ободок УДО иииХ пстіжшиме сим МАТОМ ЗВ СОКУ ТЕМ ТРЕК КАТ КЕ АРКИ КИ. Мкцлтлкоюц су киеаньюхи як яд мкс туст мит ТИМ КУ. ев. ТЕКИ І ТПОКІ МЕТИ АКТІ ТДНЯ ТОМА МІ ЕЕ КЕ, тка спмемі два сли АВИХ УФК Ко Кук, ОНЕУ КІ Ку ЦО Кр ТУ т я я Фомксхнтухі Ме ММА ЖІ ШЩІ ОМИНУВ О Хо УНК КРКМ тА «туйка попе юеіК МИ: МСЕ КТУ Ку те дими ому Кка хи «км хх Хемоммпутооугмаа и юмиктТІкОеАхеи МКУ КУПКИ ТВ хтакреде ІфАЖеМ сим мес ВУХ озна Ксо с ва СО са ва аванс Я в тк й й еще и и в и не НК ЗЕ КК «Уійко пикцовхІтеіяТАЕК РАВА КУ р У и п кт КІ Ух МІВКОКВИу КК МКОКа ЯКІ МКУ У ЕХ У АВТ У ВАК, ХХійХо сою нІйне КЕ УТА ТВА УК А ВАК КТ КАРЕ КВ Я ТТ я й дах: МОХОюЮКІУ Му ОКІВ КА УВП ККД т ПЕД ДОК КАК КАТ КАСИ КАК КТК «хбех МсюмівикейокьІВИІ» ЖЕУПТЕТМУ УТ ВХ М ЖУК ВТК ДЕЯКА ТИВ УВА ат Ма? КІМНОКВ ЖК МІЮКо ЯВИ СУДОВУ Я ОТТО п ст в ТТ ВУ тя жоУЖкх пдемідвютстьіяОІх ЖОДАІКОВМ ТИ ЕТ КОТ ОТАК це КЕКь

ФІГ. ЛІ Ї Бо ЛФ х. ІМ Демі сь Шона Я усе: пф УКУС МИ КАК цуЖШО ЗМоУдтКейето КН сок СК ВКо а оою вк ви Св Есе ЕК лЕЕШЮ. Зоомійнумодежиї 115 УККРУТТ ЕЛ ККК ЕАИКК КК ВАТА УК КАК ДИН, ТЕКА ТК ОВК и цях лряхххм омсогзимю вх Ла а фо о ВК ок о о я

ЗНМ. песліцмакксхей ЩІ КІКУЧОАОЛКРИ ХЕ О КИЕВ У ЕМО ТЕМ КТК ОКА уд. спите рве ПІлОКІМЛеБеМ КР ОЕУ ЕМО ККУ Тов ТК ККУ КК пвх. фмицлошх ех ТМ: ХІЛЛ ОМ, КВУ ЕМ К МТ КАТА УК КК КАК ТК КВК. Зретм. псесміджюттхеї ен в В З ск ово товяоя му. пеплідсмактихех ЩО КІНО ОДКРОХСЕМ ОКА ук КК Ку уко ук. пюпцідевкиюх о во Ко ЕЕ С КВ Св о о А о в п в Кв Ся зржщх. фоідеккійнеАи 151 МЕХУФТКМЕКАН ТАКИ ТЕТ КИТ У КИМ КИ Чухмм. сепоїдежніпухАх ІІ ОМУКУЛИОКЦКВЦ ВНІ КСКІ ІНК МІТКИ ЕДЕМ КОМ ЕК Чухмх. пхимдкаїптМи ПО УК МУК КВ И КІВІ МІК ЦІМ МЕМ У ТІМ МКМ ШКІ МКК ЦУШШО ЗММОЗД МОДЕМ 0111 сля тютюн ютттнит о ткє ТІК Кт и и

ЛЕО. Змоммійимодехої 1 УКУФТ ВЛ В ЖК ЗХ УК ОТ В МЕТУ МА ТОВКИ лряххм омстмзмимювтхи Ла а фо о ВК ок о о я зужтов. псів Увмкі тей а о ан в о Ж Коня зд. спбмиїіщевкртаей 1: Мужтюєхьпко у км х мае Крут ТК ев Ку Ка рт. пет здимюІХНІМ Ла а фо о ВК ок о о я зЗужтов. спсгізмУвмк оте а о ан в о Ж Коня чу. ему йи ІБ МУК Ус МО УВІ КІ МІШХІЮЦІК МІМІКА КУМКОММИКІМ ККУ МЕ ЧУТИ Море І пек ВАК КІ п Кук Т ТМ Кути вки рих. ММЦІдеюкІнимИМ 1) МУМЕТК ОМА ВИК КТ КТК ЕК КТ ЖІ КК КК .

Фіг. 2А

ТІ 19 сервк.посцідитемісти Р с вежа и Сов В С оо ок КОН р Ст ож во Фон Я жука. псодіхоюмімхеї ІА У ХДУ ЛИЛО УХА У ТАКОМУ КОМИ ОВУ КТ КЛІМКІН в Я ПУ ММА ШКАМ ТУТ КІМ Ех Іа М хдел. пі лекіІкО пл.) МмІхускРМм Мк ик цУХІ Ок МедшиИОк УТ ОМЕМІМ ХОЛІ МІК ДХ мутц. пиЗМІЛІДМХ ОЦК ПИМІ Мем Ииуувюи ту МКК МИ КОЗИ Мухи. зисІвАЮКОАТИТИ ШТ ЛИКУ ЖК В КТК ом КМ НМУ ОНУК КІ КИ ТК мух. Ха В ЖхАМТИМ Я т ХО ОЗУЖМКМЕшНЛМУЮ УК МО ЗК ОК ВИМ я МК ХМ ТЕМ мутц. пизІЛІХаЦИю ТЖМІ МОКМЕХМЦЯЦЮЕ ТАКИМ КЕН АМКУ УХИЛИ ВИХ Мухи. зліва Х ШТ ЛИКУ ЖК В КТК ом КМ НМУ ОНУК КІ КИТ мух. Ха ВИжхАЮТИМИ їЕ т ХО ОЗУЖМКМЕ ШЛЮЗ КВ ТИМ ЕХ МК КИМ ТИЧНО сто осади утти То 215 СУМОК ОКЛНИИМ УСМІШКИ МКК ЕІ Мен МІ ОКІКОМИОЄ ди. песдіднемуєте А ТА ПКУ МОО МКУ ТАКА ВАК Е Ки Ми КАЖУ МН чих. похмдіІМОоюМіхУтІЙ ІТАУ ХДУ ЦИЛО ККУ ТАКОМУ КМУ ТВ КТК КАЛІ КІ Н уж. МосхІіМтюкісуіІЙ ОПІКУ ХЛАУТЕДАОММ ІМ ЕУ ТИМКІВ МІВ Медове хХ па ХХ мує. тМмІмілюХЛІКІкИ я 11.) МІдУуСКООММ МК УЛИМОЩ УВА КУМ ІМОК МДУ ОК КОЦІМУО МВ ЄМІМХМИВ РИ КИДУ муж. чзиміпьпюжаіипких ПІ МОКМТКеСИСУОюю МКМ УРИВКУ КМ ІК мух. ТІВ Меи ОХ 1711 ПОМ ВЕЛИКУКИК Тим МАНКУ ВВА КЕ КН пути под уЦеВИ 211 ПІМХУЕОЕПоДК ТК КТК ОКО и МИ КМ ТАМННОЇ

Мут. чзмипьпюжаіирких пі МУКМТКеСИСУОюю МКМ УРИВКІВ МІНА муха. зисІЗАЮКОАИ У ПІ МЕЖ УК М АМКУ КЕ ТІДТТВТН СУМКИ ТКУ пути поді цеВИЇ 1711 ПІМХУЕОЕПоДК ТК КТК ОКО и МИ КМ ТАМННОЇ «о дошжідимиунтТо Кі ТА ПДВ КУТ ВМ КК КИТ КУ КЕ МКК МКК дир. поОшДІДКОМУЄКО ДА 1ТАХ ПДОХУКВВИВО МКУ ТКА КИ ЗИ ВАХ. МУМІМКУЮ МУ ТНУКАМИ: чне ще

Фіг. 2Е и пи меж УМуМуеІх ті жех зе а с во ов ав По зп вк КК Я пули. ЗМецомушмевихомх ЇАІІ ХЕХДИ АКУЛ КУКИ у ВАК лржіню. змо зМмиМейІМої ПЕЖАЛ ЕХ ГІВВІКИЕКК УМ ЛКК ЗрЕтм. сімю ати 121» МЕКІТДЕРІМІВ ККУ КУМ РИН ІВ КИ ММ МОУ ЕМ ТІКАТИ зуУтмо пеліцеамнстеє СР пЕБУТОЖКІМЕЕМОЕ УВІМК КМУ ОК ДМЕ КМТ КТ ех

УЖ. сЗІПІЦОЖМІМИЄИ ОЗТЖІ ВЕКУЛОЖКАКЕВМАКТОСК УВО АТ ТЕКИ ММК ОДЕЖУ Та чом. ФМІМІДОЮКМІМУЮМХ ТЕЖІ УКЛ ВЕК КТ УЧ АТМ и ИАЕДЕП КК ЕПАКА и Т ОИК зуУтд. спеиміцахошлеї ІБ ШЕБІВІЖКІКДЕКККу ВКМ дме Рут КК чаУжм. МІПІДоеЖМІМОЮХ СУМІ пЕКТЛАЖКУКЕВМАКИИК УВА КИМ АКТОМ ДИ ЛЕН КМ КУТ Ки чом. ФМІМІДОЮМІМІУЮИ ТЕЖІ УКЛ ВЕК КТ УЧ АТМ и ИАЕДЕП КК ЕПАКА и Т ОИК чежх. хИиМмдкжкІМТи и 2141, ЕМВ ОВІ КОТ УЧАО КТК ПОМ ПЛОВУ КІТ и ЗуУи. ММ МмеитМиМ ТАЖ ЛЕК КИ КИ ХУ МК УК уІВАК ТК по Зм ухкевішоїял 1. пЕХЛДУККІВКВЖА АМКУ ОКУ пржіню. змо зМмимейтжої ІШЛИ пЕХдПІКІКІЕВІ УМ КИ ПК КК КОТА примх. сммомомеатже їй 111 МЕБЦІДЕРІМКІЕ ІК РЕКОМЕН И КИМ Мао КІ Ах зум. песлідсвхістеїй (Ж ПЕБУПІЖрІМОКЛ ККУ УНК ИХ До ЖИМТ Ему КАХ уж. ФФОПЛІКОЖМІМІжАВ ЛУДІ ВЕКУЛИЖКАКЕИКАВТС УВА КИТ АЛ МИ ХП КУКА зожк. ФиМміІДеЖЖІМУЖАТ ЗІ: ПЕТЯ ВАК МТ УКХ о ЛВ М КТ АКА ВАХ ЗуУтмо песліцевмстеїй (їж ХЕБЗГОЖКІМДЕМОК УКВ МТ ПДМ ОМи ВТК УТ КУ чаУЖ. МІПІДОЖМІМІеАМ СУМІ пЕКТЛАЖКУКЕВМАКИИК УВА и оо В У А АНЯ чех. ФмиМмІжОжкІМУЮИДИ СІК ЕМ ТЛІД ЕВ ТХТ АТМ и ОЛЦ АКА я А Чужх. спмимдджінтийі СІТІ: БЕХ ДЕТЕКВЕ КУ УМАЦО КІЛО ЕМ КИ ОВК Тими юКи цу. УММФУУКИАКТНТХ 1511 КРЕМ КЛВУКЕМНУК МІУ ик Км КИ ВОК уводити

Фіг. 20 Ах Тт-х тхіфк.Щхоюащнкикоюв ЩІ ЯКУ ТАЖ КО ОТЖЕ ТА ВН УК КК КТК ККУ ПЕКИ ето мисі дпжихиові ПШО1О3 ПОМ ТАККО НИМИ ОМ УМО КК ати Кок

УФ. пешдідсвмкуєте ДІВИ ПИТВО КІ УМА ВТМ КК служ. песмдідеюмім ке ТАТЛІ КОКУКТВУКАМУМИУ УТ ЦО Аме МУКУ ММ ту чужм. МОбІМІМоюжіхУе ІШТЛІ ЛТД КИТ ЕК ех. а и ее. пМУМІіПеюАіНІХВ І(ПІЛІ ПРУТА У КК МУК КІВ ЕТА БЕЕННЕ ДИТ КО КТ ОТАТАТКХ муж. сим ецитю ТАЖ; БУК УЖИКО ММ У ВИДИ МИ АТОМ МКМ АКА

Ух . ЗТ Л МАХ ПТЖІХ пІЖЕВУМКРОВТМИтх кю юки кю юю юю сю юю юю юю дис. пМІМІЛююАітй І0ІЛІ ПРУТІВ У МКК МУК ПЛИТ ОВТЯ НК ЛОККА

МЕ. пиМІИшКедфАт ЇЇДЛ СЕМУКУКУВВ ТИМ У у КІСОК У КОНИК ЕХ Муха. зміпюаюЮТКедИА ВВ ПИЛ. БРИТВА ДОМИ КТК ЦКУ ТТ Мухо. мисюаоюижетма і ПШТ11 ЛУКА ПІКИ МТК КЕ ОК ЦКУ Фет леми уств А 2ШТ1О ПММ ТАКОСЦИМН ТМ ОВО МОУ МКК ТАК ВМ УК ТОК УКХ

«о. посМІдевмустЬїй СКМ)» БУКУКТКУ ММК тя ю житт тя тяктятт тт тжтт тях Чутєм. посмідоюхімхеї3 МТА) ПЕБУБВІМІК Я МПП ЛИМАН К ІІТ ТТ МТ ОКУ чужа. МлІМІМОМЖмЗХ Ж МІДІ ЖУКІВ УММТМИЯ. ІМК МІМУМ КО МВ ІК УТ МІУ ТО АЗК ПАТЛУЄ БЕТУХ

МУ. ФИМІМЛЛюЖАТ ЛИ же дІМУІ пУМУФХеОКІКІМИМІМУМДІИММУМиК КОМІРОМ НОмМІМІ у ТІМ ТОК ЦЕХ

Му. поміж ацеМії ПЕАЗІ ШшРЕУЖТВ ТЕКУ МОДИ К ТОК Ти кЕЕВИУ МИХ МУКУ мух. зміпалюмеедеотаА МО ПІ ЯЕЕХЛЛКТЕЬЕ. ПОСюНУ У КОДОМ КК ОМ ОКТАВИ У ТЛ КУЄ дис. пМІИлюжКістМі1В ЗМІЇ ПРЕУБТРЕВІВУМСМ ММ КОД ТАМИ ЕК ЕТ ЦЕХ

Му. пМміІМИшюкаециевии ПЕАЗІ ШшРЕУЖТВ ТЕ ЕОМ ММК шу ие мук цех мух. зміпалюмеедетА і ПІ ЯЕЕХЛЛКТЕЬЕ. ПАСю НІКОМ СК МОТИВ МИ У ТАЛУ ККУХ ММ о. запит МАШІ Км З МЕМ ТЕКУ ле СМдАТеМКИХ МІХ ЕМІТЕРОМ. МОДУ и Я

Фіг. 20 дах хай пмійм.тисмбднемююсх. ЖІ: ММУМЕИМОММІК кує ост еконо ух зуутм. сМмУсміцдпамуєтаї ШК: ММОМІОПЕХІХКУЮМОКМЮКІ КЕ ЕК Кеті КІШНОМОКМО юку Цен Кх

Ада. пмсліцсвкуттех ЗУЖІ) МУУМЕБОЦЕХХХУХ Ву ВпН Му КК І Коко ин у ВК еКия

Чо. пФмціДФЮМІМУЄІ ЗУБА) МОЖМІКОФККО ВТ КК ТТ КИ КИМ я КК Кн Ук к Чужм. МхеІМіІдожжІінУухй ДОЛІ МОМ ПОХКУЖ ЦЕ МЕМ Е Ід ПЕИКИКЕКУКУТЕ ЦИ еККЕ ЧужИ. ТУМІМЛОкИіпІМЕ ШІ: МХОМНИХХАКиТ КН ЦеМУ ут КІ КІНЧИК окис Кок уки цени ЧЕХИ. ЗМММУЮІМеиМй УЖ: МОЖККИМУКУИ КР УК ЕКО УК Ме СКК НЕ с п нн А п в ЧуЖИ. ТММ ЛОКАіПІХКІАЦІЇ ВКУМКНУОХХИК УТІМ Ток ІІ КОМОДИ МкекусирКу НК прЕжд ЗМММДИМеЦИМ ВАХ КМУ ДІ УМ ЕК ІКАО КККК ТИМ Ум

РЕЖ. ЗМІЮ МОАИ І ІІІ ВИТОКИ К ТВ УК ВИК ТИВИ ХІТИ Е и КК КН люта. Іпоміди мує: ПК ММЕМЕМІБОХІ КУЄ МОХУ КТ ВВЕ ЕК ІІкМо ОЕМ ето

ЗМУ. ПеТМіЦЦИаксте МІДІЇ КУН ЕККХК КМУ У УВК ДпКЕМІКЬУМуо КК

ЗДУ. ПОИЦІДОТЕМІУЄІВІКВІЇ ВУЖ МАУ МНМА УК КОМЕТ

ЧИЖ. МІМІНОЮКІМУКІХ ЗИМІ МОКМУКМКХМИХТК В КТ ТК У КК и ККУ КЕ МЕ паж. МІХ тІНУМ іх ДОМІ ХОКМОМОКККК ЕК УК Т ЕЕ ТОК АКНЕ КУТУ КЕКВ. пЕжИ. ММ ДІЇ ЗИКНТМуККАСУКК УК УКХ УБУТКУ Ки Ка МДЕ ПЕЖО ЗМІН КОиІ ШАПЦІ ВУДКУ КИТ Ж УК Ки РКК ит камо ух цим. пміхідектіМтМіЙ СЩМІ УКНОМУККІСУЕКУЄМУКУК ММК МКУ МИХ КОКСУ У АК ЧЕЖШ. МІД ИМИВ ІДТІ УСКНОМЦОМК ЕК У КУ КАН КОТУ Ко ДЕ ПЕЖО ЗМУ ОоеНуї ДЖ НКОИРОУЄКИ КУКИ КИ КИТА Ки

ДЕК. ММиТюП МАТ ПК. МКМР МКМ

Фіг. 2Е КЗ хте плекфкосмсмідежтимом 003: Мокрі прех вісник ЕНе и ем Етики цу. сУмімідекліптМй ІХИЗІ МОКУМУВКІІ ОВ ПРЕМУККІКТУСМО МІ КИКМЕКІКОКУТЕХОХОК УМ МК МЗЕМІ МІЖ ЕРИ пух. іммикаикеаст кій: ЗрУІДККС ОКОМ ВИ Кому КМУ КуВ лриф. Змоснзуимайожих ІЛ КОУУМТВДТ КУТИ ТМ КК УМХ МЕМ КЕ Жуут. создания ХХ МОКТМІМЕЛІХІНОСВЕМОВМІ ВВ ОККО МІ ВЕК НІВ ЖИВ руш. скеМІріИхістоВ ІІ: ОКОМ ІХККОВКМУ ІМК Ап ІМІ КУМ ЕК Крута.

МУ. ПМІПІДОЮХІйТоВ САЖІ) ДУМІ ВАХ ДТОКОВК АК дея КИ пІ А Ка Кит и УИ ККУ.

Ед. сМОММІЗИДИМеКтим 0ЙЖЛИ МПОУМІВЛЕУМТ ВИХ КДКА КІД ММК І КЕ зууїд. пмимірцовхмстої ПІ КугУМІКМОХ МИМО КУ ОЕМ КІВ маки КИх хурукщ. хпідеюкіштеїм ЗМЖЕЛО МИТ УКВ КОТ МПК КИ ІОНАМИ Тек

Чех. ФХМІЩОЮХІМУКУ БІ МОКУМАМИЦІ ОМ ИМЕНИ ВИ ОТО КУКА КИНЕ МЕ КОТУ ЕК Чужх. під ккІпУХИ ВІ: КОТУМІКВ ВЕК ККАТЮХ УК КК ЕМП АМІ ВК МИТК ЕТИКИ КЕ В ЗЕЖИ. Мука ЛИТІ МОКУМУВКЦІІ ОВТ М УКХ КІ КЕКВ НІМІ МИ ІВ МК ЕК пу. Ми молі МИРУ ИХУ УЮ КК УКХ я НІКИМ НМА. сряйО. МОМ мейтхІ (ЙЖЛІ ЯПТУМІВЛ КУТ КК МКК УМ ПАК КИМ К А КІЕ ЗБУТ. смідовасюеУї ДЖ КПФУМІАМОКТКМТВННЕЦОЖМ СХ КК ІП ІИКІКММ АКНЕ хруФ. спкемпіцовмістеїй (БЖ КуКУМЦКМОУТИКОВККТ УК МЛН МК ПІКІВ ТАМИ КІ:

аЕЖ. поКИІДОЮХІМЕейЙ? ЗИ: МУКУ ВУ КК КЕ АТ У ТИВ МК КУНА КУПУ Мет ЗБУТ. МДж ІК МПОУМІЮМОККВМТВКНЕЦО СХ МК ПЕКІН КОМЕТ.

МОУ. пееіідевкістой ІМЛІ ХУКУЕМИКМУ ХМК КК КК КК МК КК КМ к МУКИ,

ве. поКідФЮМІМНейУ УКЖИЛО МІК КИКХМУЛУ МКК ЛИКУ РУКАМ Купи вих: що

Фіг. 2Е чКх ха ев З кох ШИХ УЗ КВ ие КК І я ЗК С ЗНАК КК В ОН ШуЕХО. ЖІмоАОЮУЮТМОВУ 24013 ЯЛюПЕТЕМТЕ МКМ и Ме КОВКИ пуф песо дижеХисьї 24ЩІ1 ВОБЛУСЕМТЕМОКОІЮТІІМІКМВОІ УМО ПО МЕТИ ЕОМ КЕКВ суще. Фі дивихстЬ я 0ЯЖАУ БОКИЛУСЕМ МКУ, ПИТИ МУК УК амп МКК КК спуФаї. пФомІіМоюнУскей ДЯЖАУ ВТКДТСМИИТу КК ук ТКА КВТ КВУ К УКХ сдусм. кОсхІМоюкісує ЛИХА ВОЖВИПИНЕШ УМ КТК Ти АК К ІТ АИВОТЕ КНТУ ЕМ ІМ чутм. МОсМІіМОМКісук ЩІ) ВОЖБІПАНЕТНО УВК КИ ТОК ЕКІВІБДВСТЕКМИОККОКК КИ суша. пепІйОвкУусхею ДЯЖАУ МТЖДТСКМТУОСК, КК ТО КОМИ ТАЛА К МЕЖАХ сдосм. кОсхІМоюкісуУ ЛИХА) ВОЖВІПЕНЕШ УМ К МТ УК Ти КО ІТТ ККУ ЕК ем. пММІіпОюкісухіІй 253 ВОЖВІСЕНЕСКО УВУ МТС КІМ ТОК ЕК ІІІ ДВ СТЕК ККОК ЖИ

МЕЖ. ЗВІМУХІНюЖЕіКІ ЖЖ МОЖЕТЕ МУЛУ У ОХ Оя ККУ ВІТА КУКИ ух. МИМО Т ІІ ІЩАІІЇ ВОЖЖТТВМКОККИ МІ ТК МАТКИ КЕ ут вуяК ІКТ муха. сисюаижернових 22013 МЛюПЛЕТЕМЕ МИКИТИН Фут соми устав С4КІ15 ВИКЛУСЕМУЕМОКВІ МТ МІК ЖУК ОПР ЕТО КЕШ МКК суші попід вкуєтьїЙй 34ЖІУ ВЕКИУСЕН УКХ МУЛ оку ТОМУ Кп МУ ВУ УК І КІ Чи, пФощІдоюЮхіхуої ХА) ВИКЛ ЛИНЕУУУЄ ТИМ УК ТИМИ Кп Лу КМУ Кит сдоєм. МосМІМоюкісукІВ ДИ) ВОЖВИПУЕВИ ВУХ ТУ Те ТОТАЛІ ВЕК КИМ ее. пМІМІпПехлісІМІЙ 253 НІЖНІ СЯНЕСКО ВУСІ КАК КОДЕК ДВ СТЕМИ суФа. пеоміІіМоюнУсхеАЙ ДАХУ ПКДТСМИТу КК ук ЖКП ТАМ КТК АКИХ сдоєм. МоІМІМоюкісуУєйі 4ЖІК) МУХХУХУИ ХМК ММК Х ие. пМІМІПеХЛісІХОЙ 253 ВІЖНТСЕХЕТКОУВУ МС КАК КОДЕК ІВУДЕСТК ВМТ ЖКиИ '

Фіг. 205 Зх мкг пІхІйк.мсмифошехню 0 Т1ШІ) ЯМАФИІ МКМ пив ТКУ НАНУ оси ТОК ЗрЕтТох. смУгмідстюуєтеї 24ЩІ» УМЕВКІІКИ ММК НАЕК ІКТ ІА УМА УЯВІМО ККУХ зЗуищї. пхлідсжкіуєтей ЛАВИ МУММДШ ІКОНКУ ке КОМУ ККУ ОКА І суша. пескідеюмІМУЄ ПЯЗА ПУуМЦрлюукинХуа от ку КИМ и КТК ВА ке Чужм. МесхіІжеюкІМмУЮХ 2420 СМНІТЖУХУКАМК ТМ НМУ ВІКУ АК и Ки ЧЕжМ. ТПМІМІМОХтІМУМй 202 СМНОКРОХУМОУКІ ТЕМІ КИНЕ КОКО КК КК АИКОЛЕК ВАДУ ЗУЖжЩ. МУМЮМеЕуМК ТОМІ КІТТУВІХСК КІМ нах ВК ХК КУ КК КУ КОТИК Чужм. МесІМІДОЮКІМУЄХ 2420 СТМНИЛВОХИККЕУХ ТМ КВІТ ея УКУТАТИ Ки чЕжм. ПпМІМІМОХКІПІУХЄ ОМ СрМНОКРОХУМІМКІТТ ТММ НК УВІ ЕК КОКО КАК ОЗЛОЕК ВДЕ ЗЕЖИ. ТММУМЮОМаЦИОМВ ІІ ДБН УРДУ КМУ КІМ КВК ККУ ЕМ ІКТ МОДУ аКа ЧЕХИ. іМхиМмеиії ІЯТІІ ПЛАЦТВТ ВУХ МТА МК ВК ОЄКІ КАК ККУ В и КУ цжКХ. ЗМІИОБОНІМУтхо І ЇЖІ. ПАН ПІДЦУМИМИАСТ КНЕУ КУКИ Футх. Ііпплідпамусхоїа ЯКО ЕН БІДТУМЕМЕАСТТМНІ ВІВ КАРЕ КНІ ХМК КУГУ КВК ІКЦЕНУЮ ЗдуФ. песлідовкістеїй ЛЯБУ» ДУМАВ МИ МЕНЕ РКМХ ЕМ ККИТТ ТИ КК ІКК У

Фу. песлідсемійУЗІЙ ЗЯБА) ПУ АКОНТНХУВ ТУ АНТИ КНОМИКМТя НИВКИ х Чужм. МесІМІДОЮКІМУКІ? 42 СТМНИЛВДХИККЕУК ТМ НКУ Ря УКВ МИТ КОТИ Ки чЕжм. пМІМІЛОХКІіПІУХіМ 2 СрМНОКРОХУМІМКІТТ ТММ НК УВІ ЕК КОКО КАТКИ ЗУЖжщ. МУММЮМЕуІМ ІВ МІ КІТУЖУХОМК МКІ он охВК ух ик Ка Ку КУКИ Уа

Чиж. похліІДФеМІМУЄКИ ЛЗА) СІМ ОЛДМУ МКУ ЕК І у ИМЯ УКВ ТК Ку У чужм. МесхіІдожкІінУуХИХ ЯКІ ХОХХОХУХ ХХХ ХУ ХІЕ МОХИ ЕМ Кк ди и чЕжи. сУМіиМмдеЮхтніпІМШЕ ОБО) сІМНоКРМОКЦоМІТУ МІЧНИХ ХУкІХ ох ХУкох ох ХкУхХохх

Фіг. 2Н

БЕ кп жі х сових МІ денс тя ХОХЕЕКІЧ ІП МИКІВКІУМКИ Ко ВТ І ВКМ ІТ и кІК. зухт. сім деивм те ШК БІОТИ КРОН МОХ ІОВ У КМ Ка МОМ рІХУММОМисиТМКІКОМІХ ХЕШКЦЦОМИ КК цЬ хухщд. пхепіщенкстей ЩИЩА) ВАМИ ОМуА КРОВО Кук тиме уміст

Чох. КехціЙФЮМІМУЄЙ ПВШИ) ШИХТИ ЕВКІ КУ РОКУ КІВ КВК У ря МКК т КТ ХА чих. МиМІМЕККіІлУюК ТЕЖ ІМЕНИТІ МІ МІХ ВОК ЕІМІК МІП УККЕ ПУХ БЕ МУЛ КІ МИ.

Уж. УМІИМмдОЖЖІіпІМЕ СИМ РІХИМИІЛМРЕЛ ММ МІ МОХ КОМУ КІШУ ПММ КК МУК КМ Ме

УЖ. іме йгй ШОВ: РОУКУЦПрЛуВХМИММ КОТ КІ ЦАВІК ТММ НКИ иа я жи чЧежх. пОиМІМОЮЖІМУХМИЕИ ФСК МИИИПТ ВОМ МНИХ МК ІМК МУКИ КМ Е и ММ МТВ

Уж. УМІМмдЖжКіпІМш СИМ РІХИМИММРЕЛОМММІМОХ КОМИ КІНУКІК УМ МЕП КЕР ММ и МАМО.

УЖ. ім мейгВ ШОВ: РОУКУЦПрЛуВХ КИМ КОТ КІ ЦАВІК ТММ НКИ иа я жи рух. ЖхсмуюихолеюиЗї МІ. ЯМУТЕМТЬЛІВИ ВМ У ПЕКАР КТ КІ ие

Луч. спосоззидлиме ти ШКІЛ ВТК МСВ ТІК АИЛІВМ ККУ І УМОВІ ВМІВ хІКцх яхт. смів ате їх ШІ БІО ПкРОНЯМОХІОВУ КМ Ка МИХ рІХУММОМисиТМюКІКОМІХ ХЕШКЦЦОМИ КК цЬ хухщд. пхеспідежкстеїй ЩА» ВАМИ КРОВО Кук КК теме ви ок

Чох. песціЦФЮМІМУЄІ ЗВФІ) ДИСУВПІМВТИКІЕВКІ КИ РОКУ ЦВК ИКК ПІ ря МКК т КТ ХА

Чиж. поиМіІдДежжІлУХ АЙ ЯМИ ДЖИП ЛУТОВІ ОКОМ КОХ ЕК КОМІ МП МЕ ПИ ЕМ КАМИ КМи.

уж. УМІМІДжЖЖІіПІМИХМ ЦІ вВЕХУКІМЦВКЛОвМКМІМОХ КМУ ОКІСТ КЕ КОМУ ДУМИ пут. іммомрмейса ОРІ РОУКУЦПрЛуВХ КИМ Короп ДАНІ МНКИ КЕ Н КТ Ви иа я жи чих. пміІМІДеЖЖІУХЙИ ЗЕ) пПІХЖЕОПЛУТМОВІ ОКОМ: КОХ ВОК УКХ МИХ МПа МОМ КИ КУМ МИМО.

пух. УМІМмдеЖжЖіпІМШІ СВБУКІ ФІХУМИБЛИВКЕЛ ММ МІ МОМ УКІЦ УКІК УМ ЕМ ИТ М МК М, пута. змоцеаммецимд МИ сухим лехем ким МВА МК АЖ КТК МЖК

Фіг. 2 3 ща СЕК мийкою БУХ ХК ИЛВУ КА ТУ УМ КК РУХ КК ІК КУ мех мужх. щоисхдткінтн СІ І ЛЮЖЕКОДХКАТТИІ МОМ УМ ТИКИ КИЕВ

Чу. ЖИХІАдУММИТстЬИ 2523) ЛюМОКОКУК УТІХ МКУ МЕТІ МТК КК ЕК КМ

Чу. педамасмехетаОх ПУШІЇ РУХАМ УМуЄ КАТ у УК МТ МТУ У УК КОМ УКХ КОН АКХ ЛбУЮ. ПсОМІйМюкеий ПАЖІХ ФКБЛВУ УК М УА УК УИКК УМ У ТО ИЕ ТК и ОКУ Кука КАХ лржюю. Мотмідеаюювткх ЦЕЖІ) ДШУФІЛНХ ДЛ ВИМ ТЕМ КМТ КЕ ТУ ПИКА тд ХНибл. помітки МІ) ШУБІЛЕЛХКІ ТІВ ЕММИМУ ТУТ ММК КУ ММ КК КТК ЕМВ мус. пою жетюх СЕІ ЖДЕ ВУ ЦИХ ММ ТИМ Мт У Км м Ко о дим ему лою. МооМмІійМеюктхиХ 4И5І ДУМКАХ ДИМТТУ А ВХ М ТК КМТ КК ТУ ПИ КК КАК Хебл. МосмІпюююіІхеіМ МІ БУДІВЛІ ДМЕ ТИМ КУМ ЕК КК ККУ КТК Ме МК мус. попіпюжнітюй ЖЕ ЖДЕ ЦИХ ММ УТ МУКУ Км ум Ко су диму мука. ВиледйекииийХ УБЩІ ЖИМУ КИТИПТ и МН УНН УК КЕКВ мужх. шоисхдткінтнй ЗІ ЛИЖЕКОХКАТТИІ МОМ УМ ТК МКК КК КК

Чу. ЖИ МУАІстТМОХ 2523) ЛюМОКОКУК УТІХ МКУ МЕТІ МТК КК ЕК кла

Му. песлідсмохстВІй Оті: ФюХАМОХУМуЄІТ МУ ЕК су оо МЕ ККУ НКия ЛеУЮ. ПсОМІКеюксиї КЖІХ ФКБЛПВУ УКУТАТИ и ОКУ Кука КАХ лржюю. Мотміделюеюфткеій ЦИХ) ДШУФОЛНХ ДЛ КИМ ТЕМ КМТ КЕ ТУ ПИКА тв ХНибл. Мом мітЕеї М МІ) ШМБІЛЕЛХКІ ДІВ ЕММИМУ ТММ ККУ ММ ПКУ ТК Ко ККУ

Ми. пі юкамиИи ТЕЖ ХМДуОКДУКАВУЦИУ ММ еп ям ув ес ев лою. МооМмІійМОюкткеІ ЕТ ШКОЛАХ Д МТА ВХ М ТК КМТ КК ТУ КК КК УК

Хе. МосмІЦюююітхе и БО) БУДОВІ КИВЕ МИМО И ВЕК ТОК КОМ МЕХ

Фіг. 2.4 З чт ІЕМЕМО МОМОТ ІХИОІ МеЖДККИ УР УВА КМУ ТК ВІКІ У ТКУ КК КК МКУ МЕТИ, пухабо ЗміитйахонкунсиУ ЇМ02І ПеТДУМЯ РІК ККУ КК ІЕЕ Ж КМ Ж КЕ Фумо спсизйдимюУтхі 213 ШКЕІДЖОК РЕМ МИВКИВМ УКМТ ттттяхнтиякнкн киютяуія ятки чууто УЛ УЄтТЬХ 01) ШКІДУОК РЕКС ТКУ ДІ У тили ти мл мити то миля тики тя

«ус. пепідоеюнуєтех ПМА) ХДІДУВЕ КОМ ДУМКИ ЕК ТКУ ит тю тюлі ткю тю тют тя чужа. пехціцеюхІіхмує ЗИМА) БЖІЦІВЮКЕМТ УКР УИКЛИКИК ит тюєті ит ятки ких ож. мепхІхежжімуєм Ж МА) ДСІВ ВКМ МОЖ хх яка як тикхі кит кякют ик чужі. ТМІМІДеКМІісІЖИ 2УУМІ ЗМОЕЦІКУВКИСУМКУЙМИКХ МКМ МКК ли мит т м и т я М ТИ Ж Ля Кто пат тт ти.

ау. пехмлідоемІ ХУ А ЖАХІВ КЕН ЦЕ АК жжию юю жиє юю

Мох. меплімежжімУуєй ХАІ ЗЛІ ОКНТУМЕ МИМО МЕМ ТІК ШУ ТКИ МУМОКЕ КИМ К МІВ ЕМЕМЕК цу. ТМІМІДОЖМІІЖИЇ ХМ) ЗОХЦІКУРТКИСКОКУЙМИХМРК ЕХО КУМ ТУ лили мли КИ КИ КК КА КАТ тити ти ПЕЖИ. ТММИМІЮОКЕИ А ВИІ ХПІ МЕТІ КЯ РУС ВМ ККУ ММК КІДУМ УМ тин тут тт т тя тях туука. ЗМІОЖаМОЬНен ЇХ ПІІ Ж ДУКЯ УМ ТТ КК УКВ яю тюки йу кою сюжтю тю тх Футмо смт ми их 232 ШКІДЕЗК РЕМ ТІТМММИ КМ УМ КОТ тк кикк ку хкт хх кт чут УМА Уг ть І ПТ ЦІ) КІШУОК ТЕМУ КИКОУЄК ОМ У ХО тили то мли ом тити то мит тт ит

Фу. подо уєтЬу? ПИ) ДІДІВ УКМЦ КУТКУ МДУ июля ит тт ятки я чужа. пФоМІйОЮМІМУЄІЇЙ ОЖЩИ) ЗДОЗТКЕКЕКТУ КТК НКИ КІ ХЕ итт тот вся тютю тя ож. мепхІхожжімуєВ ХАІ ДОСІ ОКИ КМУ МКМ МІУ ткання тику яик кн ких ких Чужі. ТМІМІДОМКІІХИЙ СУМІ ПЖООІ БУРЕ КРАЄМ КВК ОК ММК КМ ТУ ЕТ ли мили и поли пуття зу. песціІйеМіІмуУ А Ж А ВЕКЕМІСИВУТКИВММиииксю яки юяеяк тю єтю тики е кити жиєтк екю Чдуюм. МоихІМОюКІМУИйЙ ЗБЕ) ІДИ ВЕ КУЦ АККИКОККМКВККТУЕтткинтитетт етики кита ктттик тях

Фіг. 2К тп каз ттіЖкобммшммимекитм 00 ІМТ тУАУУ ШИХТИ КМ Ка Ка Ти ем Вуа КУ сужоню. Змообміимодежиї ПУТІ САУ ЦЕМИУСМ КМТ ОПО КАМІН МреМІ Один луутх. мотзимимехтхеї 111 ХМОКУФЕМНДОЮХТЕТ МИТІ ТОМ ОКЛПЕМЕВІКО МІК УІККО Ки ек ЕК ех. Же сміжкотмимоумектйтх 0ТУВІ КепрмКеУТюоМрОМІКМЦІКО КОЮ емо по МОМ доме Ким чут. ЗМК МеМІ 11511 КХКРМИТУХ КОХАВ ЕМ Ж, ДЦ ткжи тя

Чех. хІБІДОКЮКІЙТУХАЙ ОК: ОКРІМ ТЕ КК МІК ОКХ ОЕМ УК КМ міх зад лиц -псемофмивкусо 0 ПКТІЗ ЕМРОПФМУФКІММОУУМЮИКМИКІМРММІКМОХРОЦ ПИ ХК ИККМОКИТУКИККХ УКМиУКаа Б 1їх пер ЖМ ММ 00 МРІ; феувпуую коми Ко УКЛ КТ А ЖИ ККІУ КАТ уткі м седдеоссніІЩОЮММИЄ (ДШОЕІ ПФОТЯДУХУ КК І ШКЛО ТЕТУ КОХ я ЯМКУ КЕ іще Іди севйхотУмиМмоумкайитх СЕІЙЇ: ЖРИХЕХІХМК Кук кс ЩІ

Фіг. 21. х У пай. похо. РІЗ МЕКУУТЕКУТМУ КК КМТ КК РК ККУ МУХИ ЕН пектини чеком. од 11: ржхоУтЮюц- ОХОМІЮЮУМуМИХІ КК ЦМВ МІМНІКЧІК ОМ ОКУКТІМРУ КОМІ МОМЦКИККУ сі пешіцоХ ТЕ екс УЮ КІВ су КІМ Ж МЛК В Те КЕ ОКУ КК чує. пеющіщ. сх Ії ВЕУ СЕЖСЕ АКТИВ ТЕЖ ІТК ПА ВА КЕ ЛВ КУ КК КВ ОМ КОВИХ ТЕМА ТК КУКИ чохм. МбтМІМ. Я 11 ОМЕФУУЧКОУМУАЕТЬИІК ТІКАТИ КВ КОМЕТ КИ КОЛОТ КУ ТАКТ МКУ мих. пМІМіШО і МЕЕКуХХУМУРЕ ХЕ ХИНІК І МУОМ ВІ Ока ОККО КУСОК УюМ «Чую» пеощід. сх и КІ чую. МотМІМ.ї нн в в екв кекя пут. пис х ТК СЕУ УЮХНІАШИКТМІ В ЕК МКІККІАІКЧІК ДУМОК ТІМ КОТ Е КІ МЕЦНКІ шк ект. од Ії: РЕХОУТЮМоКдОХО ІМК МИ КККККІККІІКЧІКОМОМ ОК УК МНУ КОМУКХ ХМК Х В КиКК Муди. ЗЄВА.ЩИ ЗУБІ МИЖМУДЖТ Я ТРАТ КТК КК КТК КАК АЖ.

пух. мйтюМЖ.ХІ 022 БЕЖ УЄЕЩ- ЕК К ТИМИ К ХЕ ВКККІКІ НКТ А ДІВИ КО КТК ТтМя ВЕ ТКА НКИ Здеютох. рад КЕ 0021 ФЕКОУТЮМ МІК ІКТ КІ ІЖСТК ОМ ТІМ КОТЕНКО зе МВ в о в КО Чую, йеощіІД. Я 0001 МКУСУУТМО ТММ КТК КА КЖА ТК УВК КЕ УВК ТК КАК чуюм. МотМІМ.Їй 001 МДЖ УЧЩУМ- ТРИМАТИ КЕЛЛІ МКК ОК КА УВК ТК КАК Ех Межі. ТИМУМІШ. ІК 00011 МЕФХУУХЦВИМ С ТЕДНОКУТОКОІДТМ ТЯ Ко КІЛ ЕЕ ДОМИ ККУ В АЕТКОС СТИ КАЛНУ ЮК Мухи. ЛиМмащаш УТ УВК ОКЖЖТУУКУДУВЕТУЄНКВУТНИК УК КВК ХУ КІ КУКИ Ку Ту ККУ КК муж. БИЄМАЖ.АХ ЗБ МИТ УЛИІВИ ТК КРУК ВУ КУТ Пет Ту КВ КК КЕ.

пу. мйтИМеХЯ 22 БЕЖ УЄЕЩ- СЕКТ ВКМ ЕТИКА ДІВИ КО КТК ТМ ЕВ ТАНКИ Здежтох. рН 0021 ФЕКОУТЮМ. МІК ІІ ЕК ІУМІКІККІІЖСТІК ОМВК ОКЕАНІВ ее а М и о п п В ПО В ОВ ОО С с зд ан Я Муфта. МЕФММЖ.ЙТ ОБ сет тото тес с КОМУН ЖИВІ ЖИ КА КЕ КТІ МЕККА КА ОВК ТК.

Фіг. ЗА їх дяк пехес меха ІІ ЕУМКТЖК ПИВ У КО КПК МЕ ПТМ КИ оУ Шумх. схптім.ї ПЦМ ТЕМОПІКСКЖУТТАСОМУИ КАМ КМК МОЛОКО ВУО МОВУ МІК МИТА иТТМ НИХ

Чу. МИМО 0ПЛМІ МОХУТЕРМММКІКЕКУ ТОК МД ХМИКУМОМ МОУ МІКС ВОМ МІНИ МОХ РИХ ек КН ВН с ке КО во КВ ФК ЕКО со ока оо ОН о зро ев ле о лу. ЗМооміМ Я ОПИМЩІ нтТУХУВЕИИ КУЄ У Ку К ХНИ ВКМ КИТ вки лрЕбюМ. Мотмім.ВМ 0 4Ж3І НІМ ЕАТЮВУИКУЄТАКІКОСХ КА ККУ ЮК ОК КИ КЕ Ми Ки МІ ОКІВУН хр. ПпФопій.ЇХ сі красудхлюсоюкуУєтиКМокоокоюцчьокМхоКУтОМО крик М ХОМИН мат. спини. ТЩЖ) МюЕЖЖЕКМІСИК У АДМ ММК У и КУН мух. йбмикіж.Ж ІТ) БКФЛУТЯМХТЬЯТУ УТ КМ МОХ ВУХ МИМО МАТ ЕТ ДОА ЕХ УК АТМ ншХ хр. ПФоиЇЦ.й ОСТІ КрехудхлусоюкУЄТО Кок ОскоюцЬьо коор Ко Ми МІ ОКІЮМОНОЄ миша. ппиїй. 2 сЕЩі кфрехехЦву УТ удо ж ам Купи ку рухах ких КІ нИЄ арх. ЖоміиіЖ.їХ ПД) ХЕТКККМХЛЬКТЖУ УТІМ МО ЖИМУ УТ ЕТ ВУД КИ неХ Шумх. схптім. ій ОПЛЦО МЕХУТЕМОПІКСКЖУТТАСО МИСКА КК МОЛОКО ВУО МОВУ МІК МИТА иТТМ НИК

Чу. Жим ПИЖІ МОХУТЕРММНКІКЕКУ ТОК МИ ХМКИКУМОМ МОУ МІК ОкОМВциК МІНИ МКО РИХ ек НК Є МНН кс ко КО во КВ ФК ЕКО асо ока оо ОН о зро ев ле о

Лу. МІК Ж ПЙЩІ нТУХУВЕИИ УК У ЕК К ХНИ ВКМ КИТ вки лрЕбюМ. Мстмім. М 4Ж3І НІМ ЕАТЮВУИК УСТ АКІКОСХ КА ККУ ЮК ОК КИ КЕ Ми Ки МІ ОКІВУН хр. ПпФопій.ЇТ ОсЖі КресудхлуюсоюкуУЄти Коко коюццьок МК УтОМО КРИК КО КІШМОНИК ж. смій. ТЕДДІ) ПЕЮРУХЕМуОМ У КУДИ В МКК уки ракову им зр. ЖомііЖ.їХ ПД) ХЕТКККМХЛЬКТЖУ УТІМ МО ЖИМУ ТЕТ ВУВАТИ неХ Шумх. схптім.йИи ОПЛЦО МЕ ТЕМОПІКТЕКУ ТАС ЦМВ ИКККИМІКИ МДЕ ПОМ КВОТ ЕМ ПеиТІ МИХ

Му. ПН. ЖЕ ЖД) КЮВУХЕКІО УТ УДК МКУ У МЕ КПК Кук Кен КВ МН ко ко КО во КО ФК ЕКО асо ок конф Я ДЕ КТ осені ока док кою . -

Фіг. ЗВ її Ще мфжЖе. цимим. тіж жих. УКОСУ УВК КУ ит хКих З УКМЦ ЦКМ У У ЛІКИ МКУ МУ КК КУА ДУКМ Мржщ. ехмесцюем.ї СТАТ пІМПЕСЖ ВИМИ КК ЄХНЕКИА УСЕ КОЛІТУ ІАЕ ЦИ ЛУК МТ Х ХК ТЕКУ уж. хомисіж.й ТБФАІ ДОМОФОН ПЕ КМ ХСК МІ МОП я Ту кта ак Х

ЧУ. ШМихиМИМ ОЇ 0Я5: ХФХуСФоКуквМх пи сковцоІ ММК МІКМИ ОО ТУ МО КиКТя ди ЧУШОО ЗМОЖЕ. ДЯ; МОХУ Д ВІКИ КМУ ТИ У ПИТИ КИ их МТУ КУМ лю. МмехмІм М ІЩа1; УМІЛІ ВІКИ К УЧИ І ККАЛ ЛИХ ТИМИ КИМ рЕсю. метмімоВ ІШЯЛІ МШЕХМОПОКРІКВОІЖККМА КЛІ ДОПОКИ ТПОМ ІДУ КУТІ КИ МОВО хуутам пом. 0 ІЖФ; пуопІШК у КРЮХІКУЄУЄКОТИ ТК ЮХИМ ВІДОМИМ УК ВНУКИ ЮА муж. сип. ТВА) ПУЛ ЕАЙКВ МАНКУ ЄМ КВК КУКИ ДИ ККУ ХАКІ УК Х жрЕсю. метмімох ІШЯЛІ МШЕХМОПОКРІКВОІЖУКМА КЛІ ДОПОКИ ТПОМІДВКМ КІТТІ КИ МОЮ хуутам псоєліц.їО ЦЯ» попі ІКРюХІКУЄ УМО МІОМИ ОоК Іо КІ Крук ХОМ ЮК мжж. УМ. СОТИХ МпУЄИ КАЖЕ АКУЄЄНА ТИ УСЕ ИДХиМ ОДКеМ ЖУК ТИ мржжщ. жехмесцеж. Й ЖТЛАЇ ПІП ВИМИ АК ЄХНЕИХ УТЕ КОЛЕ ОУКВЕЦЛУКУМТХ ХК МТМ Мужх. жоимисід. їх ПФЖІ дохкопФЕЕпе КІ си М Копил я ТК Еита МК Х Чуше. МпихимуМ ій сІЯ5; ХФХУуСФоКуквМи пи сковцоІ ММК МІКМИ ОО ТУ МО КиКтя ди

Чу». ЗМмосІЕ.і В дя; ХеХдпЕДеуНЕ ЕК КТИХ у у ІВ ту вд зон ен нн нен и и М М І и М С рес. послідом ІЩЯЛІ пЕМОСИШЕРІНКЕЛІЖТ УМА ІОВ ИСК ЕПОХ ТХВКУКОУВРІ ВКА и рим. псепіцУ ПД: пуЗИУуКЕ ІМЕН ІКУ МАМИ КВІТИ Ку ТІ ХК КЕ муж. міц. їх ТА) МУЖИКА КВ АЖУКЄМЕХИА УВК КИМ А КНУ ЖУКИ КТ Ух мрхн. симіВІД.ЙИ Бу ЩпІОДЕКТЕТАВЕМККВАКТ УТА КИПІТИ УК МТ ТИХ

МЕЖ. ПИ фДоМЕ ШБЖА) НУМТЦІАХ КІКАВК ККУ ХР УКВ ВИК КЕ ККЮ Ж ТУ Х УКХ У КК УМ цуУШО- ЗД ЛЕ ЇЩЯ11 ХФХІПЕДЖ РИНКОМ Ки Кп ви КМУ УКВ ву тх

Фіг. З М пух деМЕх. спмпід. ЩИ5Іі5 ОБУЄКТКЕУ МКК У ЦО: коксу ДЖЕМ КУКУ ВАКУУМУ Х

ЛЕ. оеомЗю. В ЇХ ТЛІ ДОКУКТВЕКАМИМИТУ ВОМ УККА УК ОКУ ДУМУ У ЦІ ТАКУ МИТИ ЗрЕх. метмів ТІДІЛІ ПЕФЧУОАЖЕВИВМКТ ММК МКУ АТ ЛК Зретм. псУгліщ. ВХ ІДИБІ БОЛЕМ ЕРЕВОНМСМ КМ К ІМК ТЕТ КМИН ДЕ КК ХА уж. пелпід. її ТАТІ БеКУЖУЄЮУОКУЖУУИМІКО ІТК МУКУ УВК ККУ МОУ аж. ахкихід.2 ТАТЛ; ОВК УЖТУКУКАМУМИТ У КОМУ МУК ТК КАН У МОУ МТК ЛИХ ЗуЕтм. спесмідо ВІдІ14 ПВЕК ЮК ММК КМ К КТ І ВК І МІЛУ

КУМ. ПеЄЛіЩ.Ї ТІЖЖІ ПОКИ КУВУ ККУ няття ут тет меж. пюпліщ.ш ТАТІ соком о АК СК В о ВК Зк ном З МИТЬ чЧужх. ФиМіЖ. ІДІ3І ПЕУИІКЕКЦ ВИК Х ЕМКОН АТХ чУухх. ФхиМм. и ЩО ОФХУВЕМЕРІВ ММК и и КМ на Мет о ОКЕІХІКУ тити. ЗмМмУмМ. 1 ГЛИ: МУЖУКІВЕрІКІ МУ ДУ ТОК КТК КК ДАК КУ пре. ЗМмОмиЗм. ЗЕ ТХИлІ БМК ЕКІИВМуУУ ДОА МК ОКА А КАК ВТ И

ЖБК. МОоМів. ІДЕ: КЕКВ ЕКО нити сн тот тт тт соктоя Зретм. песмідо її ІШІ1Ї ЯЕУХИТАЕКВКВОКИЛУТИ КІ ХУКЕ МОЄ УНК окопу ие

ЗМУ. пюснтій. Їй ЇЖА КФУЄМУКЕРУ УК УК ЕД ДТ КТК Я КО КВ ТК пчЕжм. ХІІ. КУА) ПИШНЕ ВуНІ ММК КИ КУМ КК ЛАУМЕ Зретм. петлі ІШІ1: ВУХА КИЛУИЦКІ МУКИ М ТИТА ЕН ОВУ ЗМУВХ. пхУБЛІій. 2 12541 ОФУУМІКУР ВИТ У КК УВК КИ КО КК УКХ меж. пхМІЩід. КЕ КУА) ЖЕНЕ ОК Я З М и НК о ВЕНУ чржм. ФМІМІД.СИ УА СТЕЕВЕМІКОВОММОУ ДОМИ МКМ ЕТО ККУ чухх. Фхим.Ші ЩО: ОФХУВЕРІРІВІМ М ОКИС и имеет ТОК Ки ІУ

Пл. ММЗ. МЕ ТЗІ ПУКУКТВЕКАМУМКОУ ЗЕДОдДНДКНХ ЩУКМАК КЕ С ие ок в соя кох щеух зв т

Фіг. 70 КМ ще пІКЩХ. диМИМ. ІД ВИКЖВЕЖКуАКАНХ тек ТУЖТТМИКЕАТАИ УуУИВУ АК МКК КЕ соте вжк. и ж.1 Туш) мХщВЕМОАЯХ ТКУ КИТА У УВК КИМ КК ПЕКИ КМ дик. МОЖ. СТИ ЖЕНЕ КД ТК ТЕ ТКА НВ ПЕКИ ОК ЕК

Чу. ХМІОМ.Й ІДИ УК КОККРТ КУМ ІМТ ТК ТВЕН ТУ ЕИК пчУШИ- меча. ШИ кожи Уест КНУ у Ки срЕШЮ. сЗМ В СЕПКХ ВИК ККМОАКТМВИХ УМ КИМ ТУТ ХІТ ХАВТКІ КМ Ух КМ жрЕбмм. МотМмім.к СВЙ ФЕКЦЕМИИКІМУЮЕ УМ ДМІУМКІМ ТУ ЕКО КІВ ДІМ КЕМ кеВ МІХ ТЕ ТУ НК срЕШЮ. ПФеМІМ-ЖІЙА» ХНЕМЕМОВ КМ ЖИ КК ЕТ ТТ ТИПИ КВК ких лрЕю. моетмімоВЗІВОХІ ХНЕММОІВІМ КЕКВ ВОНИ ЕКО КУМ хиби. Ммослій.ї ІШЖ1І МХОМІМОЦеХІСМУЮЮКВОМУСУ УТ МВ ЦЕКІ ЯКО КМОІКОКОМН МОСК ККУКЦяМиХ муж. тими. МО Тужи) межМЕМуеХІми ним УЖ КК І КК МОНУ КНМХ прищ. оМІцНЖ. КІДХІ ЖИМ ЕМКИХТ УМХ ТИВ АКОТ Ми Чудо. МІХ. ІБІШІ КХЕМРМНОЦЕЕОУКТ КМИН КТ ЕІ ПИ ВК ХО КЕУК УТ Е ЕМ ЧУШО- МИФЖІД.іВ ДИТ УКНКНОКМИКИК ХМК УТ ВК у КМ Е МКС у Уа

ТЕХ. ОЗ З ІА: МКК МНК К ТК УТА МКМ АДМ рю. потмімОїЇ ІДФЖЛІ МЕМ НІМЕККМ ВМТ ЕТ ПУНКТ ие «рута. суми. Ме ЇЙ; МОМЕМОСИОПІХиУКМ ММК ТІНИ КМ О Кит ИЕЦоКУ лю. опФехаом 5 ДІ КМУ ИУКТАТККИМУИМИи Ми Ки и с КМ иоВКуКВКх лює. петмімо т ІВЖІ КЕН МІ ПКУ КУТ ЕЛІТ ПЛ Ж ЕК МІМІКУ ТАТ ЕК хрЕтм. псФоіп.оЩІ ІФ МХОМЕМОІММУЄМОМ УК МУХИ Х ЕХ Укххх,

МЖЖ. МІ Ц.ЖИ ЦІЇ МУМЕМОЦЕКИ МАКИ МЛК КУМ КК КУКИ КИМ КИ КИМ АК.

Фіг. ЗЕ ЗЕ дух сек. МКМ. Бе Кот ПІЖЛКПЛОДММ ЕН УКЦИ В М КИХ хни ех дЕМЦИМУ г. деки

Пул. ММЗ. ЇЖІ МОКУКЖРАКИТУ МАКЕТА ЕТИКИ НІКОМ УКХ

ЗЕ. ЗММИО. ВХ КОТУТКТЯВМАТИКО ВК ККУ И ПІВ У МУК УДК пряшх. змі. х ТЛІ: МОМ ІКП КК М КЛІПІ ТИХЕ МАНІ ЕЕ Зрутх. псслідой ММ ЗОКУМЖВЕТІХУТЮСКВХУЦКІКВ УТА КВК ЕК ЕК ПІ МОІШМОК УНК МУТХ. пПесіДОВ ЇЙ; ВОКУМІВЕКХУ КІ ЕВИА КУ ККД КВК КМ І М МХОК УВКОКЕЕ лржик. ЗМмеммаю ОМ ПМОММІ МЕЖУЄ ЛІМІТИ Я У Кп и КИЕВЕ ру оспсогоіидих ТК ІІ ЗИОКЄМІШЖОУЮМООКМ МЕ НК ПМК ПІ МІ Ю Хом КЕ КЕ зМутж. спсУмТещ.ї ОІЙБІ: жОУеМІЮКОУВЛКОМИМ ЕК ЦМ ДИМКОКМОКІНІЕМІЮХО МО МЕН ІК КК КОЮ зу. песпплідоїй ІЗ КОМІ КОУ ХО КеКЕХ М КУ и іі у КМУ иККх Чаже. мому м. І ВАТ ККАЛ УМУМУ КИТИ МКМ Жим я ТАКІ НК КЕ чех. сміМд І1ШІЙКІЇ МИМУУМІЖДОХУВУСИМН ВМ ЕМО ОМ МК ОМІ ВМ оЕ МОМ Ки цу. ХУМІБІВ. Ж ІШМУ МУтУЄХАЖИТУЦ МКК иУДА ІК УВК МОВИКОКІЛКМІХІЮОМЧМОМКИ МЕ КІМ КОКІШЕОХ ЧЕ ЗММЩОКО-МІММАЇ МУХА ОУ ММА И КК КМ и МКК Ку І КИНЕ АК КИТК КК лжтик. мем ю ж УЛ: ИУКУМТЯИ УЮ УМ МЕТА ПІКИ ТІ УМ МС ті ВК КяТя прути. оспесготзищО КТ ЗИКІЇ ЗЕОУЄМІДВО УЮ ВКМ КАЛУ МК КІ ПІ МІЮ ХК ри МІНІ ММК хумт. сісимтіщ. МО ІП хоУєМІДХОРУЮМОЗМИТЬСІ КО ХЦИ МІНИ КІ оМІЮХИМКоКМРЕ мили Машею лужок. оЗмеоІВЮ М УЛ: ИУКУМТВЯИ УЮ УМ МЕТА ПІКИ ТІ УМІСТ ті ВК КяТя ру. опоготфид ШИ ЗЛКІІ ЗИОУЄМІЕЖО УЮ М ПКП МІЮ Хр МОН КЕ КЕ зумтм. спсемтіщ. і ІПЖЗ дхусХхах хіх УкХах МохлехУХМОХУоХУХХУКІХ сх ХУуУКУЕХХаХХОМУЮХУКХЕХ Ух ХХ зУт. пемсіц. КАХ ІА КидККИхИХКИ Є Кев КЕ КИ Ки ВИМ ее ие

Фіг. ЗЕ

ХХХ. Сея слешщео Мих. РЕ рек же ХО КЦЕМ ТО УК в І я Кт тних чтжх. спхимщ.ї ОІХИ) ВОЖЕТИМНК КИ ХИТ, УМО ОАЕ КУН КОгКЕМЕ ке пих ЧуЖЩ. ЇММУМ. ЇЖІ МУЖМТІУРИКУНОМ ВТ ПОМ У О МО КЕЦОКдККТ Вуд КЕ ККИККи Кі х

ПД. імотОМа-ї КЗЗ: БПЕЗТУВНУУКЦИК ТТ КТ ММ ККУ ПРОТ КУя МКК прю. ЗМонОЗМ) й ЗМІ ЗПУТЕІВМУХМИТІ ВИТЬ МІКРО ПТК ТНЕУ Зрутх. псслід» їх Ї4Й3: ВОКОЖІВМРЕКОКМІДВК ТІ МІМІКИ ОеК ЕХ ВИ КОВО ЕК МІВТЕКОХІКЕВ зуУжд. кими: В О1Я4Ж3 ВИХХХЛЕМУВМОКОІ КТК МЕ ОВ КЕи ТИШУ КК НІМУККИКІКТЙ зжш. спеці. Ж ІА ШИМОТсЕДУХТТИІ В ут КМ пОини вто Ву вики ЗЕжс. пХКІД. ІА ВИЖКУДИОУ ВТ КТ А МНК УМО ПрА питну Кк инУ ак зум. псумід»МО 1421: вИМОХІЕМЕМОКІцОВ МІК КК КПК КИ ЕТ и КІМ КІ НИХ уж. песцід.їй ІА БИМаТскдеИтуІевт ук Криму о у ик вувиои а Кух

Чож. спомхін.ЇХ ІЗ) ВОКХТЛИУУ УК, У Кук ТУ КОдІпови яви стук аукмахти ких Чуже. сиБіД.їЖ ІІІ ДОФХТПАНЕЕКТМИХТММТУ МУ повлЕ КІВІ ОДяОСКМОТОКИпУТИкІХ Чужих. їм іщ.їВ ЇЛИ: КОЖХІМРЮКоУЄХІКУтТ Маму УК моринцокдЕк У ІВВДКОСКУМУТоКЕМУсЕКІХ

ПУ. 3ммхка.иВ КМ: ктТЖжУТуМУ куту Кт улица е яке Му мети лужйхх. зможе. ТАЗ ВПКТЄТЯМУХМИВТ КИТ ІМТ УК Т Кк яр Х УК аку Зряхх. смхтмуа В ТЗ0ФІ ВПУФХІМХУТЕМОКМІДМ ТМ УК КОП Ко КОВИХ УК МІЮТОМЦОМ УК КУ зум. песо» ї 1423: вИМОХІЕМеЕМОКЦІЦОн ІМК КЕ мех КИ ЕО ТУ ККІМТЕМЕККІМУХ ух. песці.дт ІЧуАЮ ШИМОТскметуІ ви ут Ми емувк нти вику виОх І Кух

Чож. помхІМ.ЖА ІЙТЖ) МЕЖ ХУИХОКМИКХ МИХ КК КЕ КК КхКих

Чех. хиВіх.йЕ ІІІ ДОФХТЛАСКЕМИУИХТММТУ УПМ УМО пови КІВІКМДяОТЮМОтокИХчи МІХ

Фіг. 305 ке хе сфе. ШимиоМи. ПММ: пІдБЖеМуМУкКМ Кут польотах ке ке ік ато чех. фиіщ.1 ІБ ПІЗНІМ ОВОМОМЖХ ТИМКІВ ТУТ УКХ Чужа. пмшеуя.й ІА ПОМКОЕРУМУМОНК ІЕМ КІ МІ ТЕМІ ВЕК ОК ЕІ ЕлУХ ЦУдЖо УМХ. ТЖКМ ПОМОЖЕ КК КЕ ККУ КК КК ККУ

ПЕН. ЗМО. Я; КИТ ВДТ КАК КК УК Кока лрЕФІМ. ЗМогНІМ. й ІЗИ1І КОМУНИ ВИКО ТМ ПОВНУ ЖД ТПУ ТАКУ КК КІ ВиК Зржта. пФ). 14Ж1: ПОЕМУ П ЕМ ВІКО О ТКА ЕТИКЕТ КІ ЦЕЮ ПЕЛИМ. ЗМОВА ЯР; КИОЖЛТВ ККД КДКА КУ ККУ КК УК ОКУ лрЕФІМ. ЗМОгНІМ. ІЗЙ1І КОМУНІ ВИ МКГ М ПТН ТАКУ К КК КЦІВиК Зрета. пз. о 1451: ПОЕМУ М ДО П ЕМ ВІККА КТК КТК УА КІКЦЕВИУК ж. пПсесліц. ше ТЯЖХ КИЕВЕ МТМ ЖУКА БУ КИТИ УА КТ КЕ КЕ КУХ мм. сХМІЦЩ.2 КЯЖА) ТОСТИ КОКО ККУ КИТ ТИВИ ТВ КТ КЕ чЧужх. ФищіЖ.ІЖ КАХ ПОМЕККАМУКИ ЯК МТ КВН КІ ТИВ МТВ УВК хи КК

Чем. му. ІІ ПОМКОЖРОМУМОН КМУ КАМИ Кам и у ЕК К УК ЕУх ЧУЖИХ. ММ. В ЇЖІ СІМОМА ЕТИКЕТКУ УХ КЕ І КО ТКдКУ ПЕЖО. ЗМОЗІ ІЗ; КОМПЕ Т КА ИКК ЕудуК я ЕК Вуду

ЕЕ. ОМФт3. КЕ ЗІ ЯКИМ ВИК ТІК КВТ КАТ КТ КУКИ Зруто. пссгіц. М І4Ж11 ПФК ККУ МИКИТИН ВІККА МТК КАТІВ К УКРА КІМ ВИ ПЕШОХ. МФ М3К. М І; ДИЛИ ДІВ КАТКИ КВТ У КУ КВК ТК ря. Мети). Мі ІЗ) ХМУЖХУКХКМХМУМУКМ КК КМ О в Зрита. пссгіщ. І ЇІ4Ж11 ПФУ МИТ ЕМ ВІККА МУК ХМК КК и Ух

Фіг. ЗН я хх штаАйж. димі ЗМО) век фермами о Меп у м ку куски Мік дк киоше

МЕЖ. МУХИ. КЕ ХИЖКИК УВК КУ КУПУ У У ВВА УТ пухма. ЮИТЮДЖ.Х ЗМІ МОХЕМИИМОКІ МИТИ ОТ ЛИТІ КУ ККУ К ВЕ УМХ пут. мисом. ЗБИВ: АЕХВМИМІМОВИМеК КИМ и ПІКУ КИ КЕ Мід КЦМ ШИ икІКНО зеютд о етмідех ЇБЕТ: вЕЖХРМЮМОПЦВКЦМ ОК ІМ УИОМІНІМ В МК МУКУ ККоКОМІЮМІДУ ДИКЕ хІЖцЬ спиФа. пеМЦІДМ ІПЖІК ВЕК ПуВКІТМеК ККУ ЛКК МТМО КАМ ПЕК АХ ІДУ ОЦК ІЖУЬ

«уж. МФеЩІЙ.В (БІ ВІДТАК ПЕЖО КИ УКВ КО КУПУ ТУАЛЕТ КК КК ох. МеХтМІМ. ВІВЦІ МЕМЛМИ ВОНА ИМИ МК ЕОК КТ ОМІВ УВК МІК ЕТАПИ К Тих Мити. ТМУХІій. С ФЕВ хід ЛУКОМ КВК КК ІВ ОК МК ПОМІТКУ МКК ВИК

«уж. МФеМІЙ. ЇЙ (БІВ ВІЛРМТТ ПЕКИ УКВ КУПУ АТХ МК ЖЕ КУКА КК КК чую. МХІМІМХ.ЇА (ЖІ: ВІХРЛА НО ПІВВИМІК ВМО Мем ях ВІКІ К МЕУМТАТ МКК КеН Кк Мити. ТМУхІій. Й ЕФ хід ЛУКОМ КВК ІВ ОК МК ПОМІТКУ МКК ВИК МЕЖжИ. ТИМИМАФ.Х КЕР ХІЖЕКММТКе КККУ Пу Ву К ККУ МИНА АТМ ТК Як Пуха. ЮИТЮДЖ.ХВМ ЗМІ МОХЕМИИМОКІ МИТИ ОТ ЛИТІ ІКУ ККУ К ВЕ УМХ пут. МиФИМАщ МЕ ЗИТІ АЕХВМИМІМОВИМеК КИМ и ПІКУ КИ КЕ Мід КЦМ ШИ икІКНО зеютд о етміде Мі іБЕР: вЕЖХРМЮМОПЦВКЦМ ОК ІМ УИОМІНІМ НКИ МУКУ ККоКоМІЮМІДУ ДИКЕ ХІЖцЬ спиФа. пеЦІДМ ІПБЦІЕ ВЕК ВКТре КК КУ ЛКК КУМ О АЕН ТЕКА МІ дУНИУКИ КК о

«уж. пФеМІЙ. ЇЙ (БІВ ВІДТАК ПЕЖО КИ УКВ КО КУПУ ТАТИ ВТ ЖЕ ККУ КК КК чую. МбІМІМ.ЇИ ЖІ: ВІХРНЛА НОВИМИ Мах ФПМ ях ВОК УКТ ОТ КЕКВ Мухи. ТМУХІМ.СЬ ФЕТР ХІХКЛ УМОВІ ВОК ВК ОК МК ПОМІТКУ МКК ВИК МЕЖИ. ТИМИМАФОИ УБІР КИХКИМУМ ТК ККУ Ку ККУ МИНА ІТК Як

Фіг. ЗІ я зей ч ч :

тю. мттмІід. іхжІ» Дкцахаулетах ост Ме кет цекк ки пемимнехя пзешео Можоад.і. ЇЗДІ; вилкою Х Кмин Умка КуМ УК геКа МІНИ су. пек ІЇЩ31; ЕМО ТМАЦДТМИІУ УТА У УКВ КОМ КАДМІ КВ ЛЕуФн. йФощІій.я 10515 ЕЕДКАЛеТТТИХ У КУ ТЕМИ ТИЖ КК носи чути. метхім: я 151: ФММ КЕНУКИДЛИОК УМ Мом тик То КК КК моде Кл

Му. МІДІ. ОМ ЖІ: КОХ КЕІХІД КиМУ Ти Мо Ко оМуКоиК ХІІ Ку о и дк крон ЛБуФя. йФодІх.В (10515 ЕКДКЛеХЛКТТТ КИ У КУ ТИМ КУТИ КТК КО ок ях чути. мегхімх. В 151: ФММ КЕНУКЦДЛМОКУ МТ Мом тк коп Кок

Му. Темі: СМ: КОХ КЕІХІД КиМУ Ти Мо Ко оМуКоиК ХІІ Ку о и дк крон Хужц. мих. М 2ЖБЛИХ ЖЕКу ЕМ К АК в КК дух мух. шиАЖ.І5 МДУ: ФММ СКЕОТМПТ ХМ КИТИ УВІ КИНУВ щ шутг. мисехщ.: ММ тЕМІЛМИХМОТЕпІХ Ми ТЕМИ МПК УК КК МКК ВЕ МІК пошео Мод. ЩІ; иМрлКІюМоуИи ХК Ук Кум иа ек Інни «елФж. Дейк. М ІЗ53Ї ЛИМОНИ КМОЦУ КИ У ТК ТЕ УР КИМ г КІ сем. полін їх 1515 ДКМАНЯНУТДТИ КУ ІЛИК ТИМИ МЖК АК ВИКО КОН чути. пеохід0 т 211: ФМЦКВНУКОдВЦ ОКУ КУМ КЕ ТУ Как КАК муж. ЩУМОИІ. КК ОСФОО БМК КІТ ККУ КК Му АК У ВИ КВУ МКК КК ЛБуФн. пФбощІмх. В 10515 ЕКДКЛЯХ ТИ У КУ ТЕМИ КУТА но Кия чути. пеомід0 Ше 251: ФЕН УКІДЖЕ ОКУ КМТ Мо КМУ КЕ ТУ Вик ковтка муж. ЩМОХИЦ. КИ СБУ) БМК ТО КУМ КОМ Му КУКИ КТК КК

МУК. МІБАФ. ХУ ОБЖ: ЖИУМУКИ КОМА КИТА УВО ВИ ВИК АКА си

Фіг. За тя ле

ЛЕ. МІМУК. ІІ тет уФКАУ ВУ КЕ Уся МУКИ КОМИ У УВУ КИТІВ ЖИМ,

муж. слі. ПА ДШЛОТВЕЮКОМЕТАУКВИМ КК МЕТУ КЕ МКК ЕНН

Чу. ЯихиМд.й СБММО ЗКІЦІНУМИІТТТКУКХ МР МКК УТ ол тити тя Акти т Кия цу. ЗМОВА. СУМ; КУЩІ КЧЖТК РУКИ КЕ июня т лржиюЮ. УМО 1 Ж3; ХТО АВЕ МИТТЮ ХУ КК ВИМИ июня тю тки тккті жрЕтю. мсетм3моВ 1723 ФМІДЕОК РЕМ Имя ют тіки кн тях кхняи кю ут. пПОсіЦ.-Я О(ОЛІ пхТахЕнуКуММУКа УК ТКУ мя мах АМАНИ МАМ МА МАСАМИ ЖЖ ТІ ВКМ Коста кт

Ж. ХМК. ГОД) КМИДУВУУЕМУ В МЕ КК уд те ат я тю тюя ткє тт тих мрим. самє. ПИФАХ ЗЖЛДТВЕ ЄКМТ СР УКВ КМ ий ииитиюик тю тю тктютю кт тю ють тюиють ния ут. пссліц.їО П(ЛФОЛІ ОМІДКЕМІШМУХМВУКІИУЄК МИ ТММ МОКОМУс УКМЦ ЕНЕХІВШКИХ

Му. ПКПІЩ. 1 ГА) ХЖИДУЄУЕМУСОВ МКК МКК ВУ Щити юю ит ти тютюн я тя мрим. ЗХКИІЖ.Щ1И КІ МОДІКЕККВТУЄСР МКК ІК титее єкти ткетютиююкєтке нія муж. спо СИМ шШЕЦІВККИТУЄВУККИМОЕ ІМ КИ МЕ ККУ хттнтантиюікнекехунян ник ня Чума. пхиМОЬ В (ЖИМ; ЗКЕЦІМУРИИ РУКУ КОМЕТ Х У или тити Кия яти ких ПуУИМ ЗМОВ. ІМ; КУЩ МЯ ЕКО МИ ВИХ МКК УЮ Ум тини ти тю тю тжиютия титтю тю лруию. БУМ. 13; ХТД ВЕ МИСТ УКХ ВУ КК ВИМИ июня тю тки тккті ритм. песмій. МО ІС; ОКІДБУКРОМТО СУКИ ВУ ВО КОДУ тних ча. пої ІІ ИВАНУШКИ ТМ тк ми. слід. ДИ ІФА) СЕХДУВЖЕКМУ ЦИМИ КВК Куди ик тия ит тю тю тити тя пежх. ХІІ. ІД СХОДІ ТУ АК конянєттиютиюию ск сюЕиютиюнюию кити ткяиєтнєнке ких Чужих. (УХИМ. ЛЕ СМ ЖІ КЕЦІКЕЮВКНТТОАУКЕИКМР КОМ ПЕКИ КЦКЦІТХ УТ ххх нюх кот ко АХАКЮТ Ж Хе Кя ХА КИТИ КЖКУ Кот, Ух СУ пхійк. систміх. «ЖІ УХАУТМУМОМКМ ЕК КЕР НИК ПОН ЕК ИЛОМ ВОМ мот Мсумиц.Ої ОПТ: хХомЕуУМЕюХИл Ми МИМО МЕИЦ КМ О ИКУВКІнНІАМІМУ КОБУМИМИХОКИХ хи. пис. 10 МИХ МАХ УМА ИтИИХ ММК УМ у КОТУ І ЕМ КК ЕК їм Ах ТюБЖе. пемІ3д ПИЖІІ БЕКОВЛИМТЕ ЕП ХЮ КИМ Ко мода МКТП ИВоЕ кеВ яНся я ЧУТИ. МІЖИМИМХ ТЯМ ЕКОН ЛЕУТЕКМІ КІ МІНІМУМИ МКК. Пд я м мм А МуУЩО- ПечжУд. М ЯТІ ЕММА КУВЕХ КУКИ. Урух юю ти тию тютюн вх т5а ЯК ЗМ ЖИЛІ ТЕЛ УТКИТЛАУУ УСУНУТИ УКВ АХА - ЕН ск. псід. ПЕЖІ; ЖШЕХУВООУХМНІТОМІЖ КИ КІН ВОККККТМ ЕКУКАКАСМ УПКЕЕ тик КЕ птіжшк. симими. ОПО) ХоМЕФИЧЕВИ ХІМІЯ МТМ У КК ИКМІУ Ус МоИ КОМ РІК ІШМОКИ Ух кїхх СюЮХМе. ихмуо. ЖТДЖІІ ДУПОВЖКяМИ СУМУ УЮКИК МУ ТУТ пяти ТХ.

Фіг. ЗІ КОХ Ко аннанннняннннний те т КК Кк ую. ий ні ак сова зххух як вання На зЯ

ЖК. Ха п жКх ЕХ Й пИИИОИИ ї ОКХ КХУюМ Щи з виккюмкивютиттив ну Ки хзававвввввваа В пдв ненні» ш КУЄ УХ В ак чаває Ж : хехехе. 5 Й х ті тки з Не МЕКЖХКМ, х т «УЖУЕМ ї ї ху. р ї демо Й кої мем. ї : Ж У У : ШО т : кох : : ххх й т З КУ Я : в и с їх дк ЗО ЯКО ЗК Ок ОС ЗМО МЖ оф їх За ЗМ ЩЕ Ж 0 щЖо ЗО ЖЖ М де дик їй ощЯ; ко ЩЕ скохжке окт тк

Фіг. 4