UA118374C2 - Імуномодуляторна композиція та спосіб стимуляції імунної відповіді у суб'єкта - Google Patents

Abstract

Винахід належить до імуномодуляторних композицій та способів їх застосування. Імуномодуляторні композиції включають імуностимулювальні плазміди або послідовність ДНК, що є здатними викликати імунну відповідь у суб'єкта-реципієнта. Крім того, імуностимулювальні плазміди або послідовність ДНК не містять послідовності, що кодує резистентність до антибіотиків, для того, щоб допомогти знизити потенціал горизонтальної передачі стійкості до антибіотиків у популяції.

Description

Область техніки, до якої відноситься даний винахід

Даний винахід в загальному розумінні відноситься до імуностимулювальних плазмід. Ці плазміди не містять гену резистентності до антибіотика. Плазміди можуть містити маркерний ген для селекції або скринінгу, який не є геном резистентності до антибіотика (наприклад, ген

І ас). В альтернативному варіанті здійснення винаходу плазміди можуть бути позбавлені будь- яких маркерних генів для селекції або скринінгу.

Передумови створення винаходу

Неметильовані Сраї мотиви трапляються значно частіше серед ДНК бактерій, ніж серед ДНК хребетних. Ці мотиви активують захисні механізми організму-хазяїна і приводять до активації відповіді вродженого та набутого імунітету. Ср мотиви та їх імуностимулювальні ефекти розглядаються у Ктієд, Апп. Неум. ІмМипої!. 20:709-760 (2002).

Імуностимулювальна плазміда, що містить ряд Сраї мотивів, була попередньо розроблена, також було продемонстровано, що вона є ефективною для посилення імунної відповіді, коли вона застосовується до представників птахів та великої рогатої худоби у імуномодуляторній композиції, що складається з плазміди та катіонного ліпосомального носія для доставки. Див. опубліковані патентні заявки США Ме 2012/0064151 АТ (представники птахів) та Ме 2013/0295167

АТ (представники великої рогатої худоби), зміст яких повністю включений в даний документ як посилання. Ця плазміда, РМВ75.б6, має довжину 4242 п.о. і містить 288 Сра динуклеотидів.

Карта рмвВ75.6 продемонстрована у Фігурі 1 і послідовність нуклеотидів РМВ75.6 надається як

ЗЕО ІО МО: 2. Як було описано в опублікованій патентній заявці США Мо 2012/0064151 АТ, імуномодуляторна плазміда, що містить РМВ75.6, посилювала неспецифічну для антигену імунну відповідь, що захищала курей від інфекційного захворювання, коли вона застосовувалась іп омо. Ця неспецифічна для антигену імунна відповідь була додатково посилена за допомогою застосування принаймні одного біологічного агенту, такого як вакцина.

Крім того, було виявлено, що імуномодуляторна композиція, що містить плазміду РМВ75.6, проявляє ад'ювантний ефект та посилює ефективність вакцин. Подібним чином, як це було описано в опублікованій патентній заявці США Мо 2013/0295167, імуномодуляторна композиція, що містить РМВ75.6, посилює неспецифічну для антигену імунну відповідь у представників великої рогатої худоби, що захищає велику рогату худобу від інфекційних захворювань.

Зо Проте, як продемонстровано на Фігурі 1, плазміда РМВ75.6 містить ген резистентності до канаміцину (Кап"). Селекція за допомогою антибіотиків та продукційні системи стають все менш бажаними через проблеми, які пов'язані з горизонтальним переносом генів резистентності антибіотиків у бактерій навколишнього середовища. Можливе горизонтальне перенесення генів резистентності до антибіотиків є таким, що викликає особливо занепокоєння для векторів, що безпосередньо застосовується до суб'єкта (наприклад, імуностимулювальні плазміди, такі як рМВ75.6, або вектори, що використовуються для генної терапії або ДНК вакцинації). Таким чином, існує потреба в галузі техніки в імуностимулювальних плазмідах, що здатні посилювати імунну відповідь у суб'єкта та також не містять генів резистентності до антибіотиків.

Стислий виклад суті винаходу

Даний винахід відноситься до імуностимулювальних плазмід. Імуностимулювальна плазміда може включати послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 8995 ідентичності послідовності з послідовністю 5ЕО ІО МО: 1, 5БО ІЮО МО: 4 або комбінаціями таких послідовностей. У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда може включати послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 ідентичності послідовності з послідовністю ЗЕО 10

МО: 4. У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда може включати послідовність ЗЕО ІЮ

МО: 1. У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда може включати послідовність ЗЕО ІЮ

МО: 4.

В інших аспектах імуностимулювальна плазміда може складатися з послідовності нуклеїнової кислоти, що має принаймні 89 95 ідентичності послідовності з послідовністю ЗЕО ІЮ

БО МО: 1, ЗЕБЕО ІЮ МО: 4 або комбінаціями таких послідовностей. У інших аспектах імуностимулювальна плазміда може складатися з послідовності нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 ідентичності послідовності з послідовністю З5ЕО ІЮО МО: 4. В інших аспектах імуностимулювальна плазміда може складатися з послідовності зЕО 1Ю МО: 1. В інших аспектах імуностимулювальна плазміда може складатися з послідовності ЗЕО ІЮО МО: 4.

У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда переважно не включає послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує повнорозмірний або функціональний маркер для селекції або скринінгу. В інших аспектах імуностимулювальна плазміда включає послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує маркер для селекції або скринінгу, який не є геном резистентності до антибіотиків.

Даний винахід також відноситься до фармацевтичних композицій, що включають будь-які імуностимулювальні плазміди або послідовності ДНК, які описані у даній заявці, та фармацевтично прийнятні носії.

Даний винахід також відноситься до імуномодуляторних композицій, що включають катіонний ліпосомальний носій для доставки та будь-які імуностимулювальні плазміди або ДНК послідовності, що описані у даній заявці.

У деяких аспектах даний винахід відноситься до способів застосування імуностимулювальних плазмід або ДНК послідовностей, що описані у даній заявці. Прийнятні способи застосування включають терапевтичне застосування до суб'єкта. Таке терапевтичне застосування включає профілактичне лікування, метафілактичне лікування та лікування після інфекції суб'єкту або суб'єктів.

Даний винахід відноситься до способів стимулювання або посилення імунної відповіді у суб'єкта. У деяких аспектах способи включають стимулювання імунної відповіді у суб'єктів за допомогою застосування до суб'єкту імуномодуляторних композицій, що описані в даній заявці.

У деяких аспектах способи включають стимулювання імунної відповіді у суб'єктів за допомогою застосування до суб'єктів імуностимулювальної плазміди або ДНК послідовності, що описані у даній заявці.

Інші об'єкти та характеристики будуть більш очевидними та будуть вказані далі в цьому документі.

Короткий опис креслень

Наступні креслення утворюють частину опису винаходу та включені для того, щоб продемонструвати окремі аспекти даного винаходу. Винахід можна краще зрозуміти за допомогою посилання на одне або більше креслень у комбінації з детальним описом окремих втілень, що описані у даній заявці.

ФІГ. 1 показує карту плазміди РМВ75.6;

ФІГ. 2 показує карту плазміди росСмМВ75.6;

ФІГ. З показує карту плазміди рі ас275.6 та,

ФІГ. 4 графічно ілюструє той факт, що імуномодуляторні композиції, які описані у даній заявці, збільшують ймовірність виживання суб'єктів-пецепієнтів, які піддаються впливу

Зо патогенного вірусу (ФІГ. 4А та ФІГ. 4В).

Докладний опис суті винаходу

Згідно з даним винаходом розкрито композицію, яка здатна посилювати імунну відповідь у суб'єкта, що отримує її, а також способи її застосування. Зокрема, даний винахід відноситься до нових композицій нуклеїнової кислоти або до імуномодуляторних композицій та способів їх застосування. Було відкрито, що такі імуномодуляторні композиції можуть включати послідовності ДНК, які описані у даній заявці та які мають підвищений вміст С, мотивів Сро та здатні репродукції за відсутності гену резистентності до антибіотиків або кодуючих послідовностей. Послідовність нуклеїнової кислоти даного винаходу може бути застосована для стимулювання або посилення імунної відповіді у суб'єкта для профілактики або лікування інфекційних захворювань зі значно підвищеним рівнем безпеки у порівнянні з іншими способами профілактики та лікування, що відомі у даній галузі техніки. Даний винахід є особливо корисним для лікування і профілактики інфекційних захворювань, викликаних мікроорганізмами, такими як, але без обмеження, віруси, бактерії, цвіль, грибок, дріжджі, паразити та інші мікроби, які відомі в даній галузі техніки. Композиції та способи застосування імуномодуляторних композицій викладені більш детально нижче.

Ї. Композиції

Композиції, що є корисними у даному винаході, такі як ті, що описані у даній заявці, у широкому розумінні можуть бути застосовані у профілактичній терапії, метафілактичній терапії або для терапії при лікуванні інфекційних захворювань. Такі композиції відносяться у даній заявці до імуномодуляторних композицій. Імуномодуляторні композиції включають принаймні імуностимулювальну плазміду або імуностимулювальну послідовність ДНК, яка здатна підсилювати імунну відповідь у суб'єкта, що одержує її. У деяких аспектах імуномодуляторні композиції можуть також включати ліпосомальний носій для доставки.

А. Нуклеїнові кислоти

У деяких аспектах даний винахід відноситься до молекул нуклеїнової кислоти, які є корисними для лікування та профілактики агентів, що викликають інфекційні захворювання.

Молекули нуклеїнової кислоти, що описані у даній заявці можуть бути включені в імуностимулювальну плазміду у вигляді лінійної дволанцюгової або одноланцюгової ДНК, амінокислотної послідовності, послідовності рибонуклеїнової кислоти (РНК) або їх комбінацій. У 60 деяких аспектах даний винахід відноситься до молекул нуклеїнової кислоти, векторів та клітин-

хазяїв (іп омійго, іп мімо або ех мімо), які містять імуностимулювальну плазміду або імуностимулювальну послідовність ДНК.

У деяких аспектах даний винахід відноситься до імуностимулювальних плазмід або послідовностей ДНК, які не містять гену резистентності до антибіотиків. Плазміди можуть бути позбавлені будь-яких маркерних генів для селекції або скринінгу. Наприклад, плазміда рОосСМмМВ75.6, що описана у даній заявці, не містить будь-яких повнорозмірних або функціональних маркерних генів для селекції або скринінгу. Послідовність РОСМВ75.6 є наведеною у 5ЕО ІЮ МО: 1.

У деяких аспектах імуностимулювальні плазміди, що описані у даній заявці, переважно не включають послідовості нуклеїнової кислоти, що кодує повнорозмірний або функціональний маркер для селекції або скринінгу. У деяких аспектах імуностимулювальні плазміди не включають гену резистентності до антибіотиків. Наприклад, плазміди не включають гену резистентності до канаміцину. У деяких аспектах плазміди, що описані у даній заявці, переважно не кодують імуноген.

У деяких аспектах імуностимулювальні плазміди можуть включати послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує маркерний ген для селекції або скринінгу, що не є геном резистентності до антибіотиків. Наприклад, плазміда рі асаМВ75.6, що описана у даній заявці, включає ген І ас як маркер для скринінгу. Карта рі асаМВ75.6 наведена на Фігурі 3, а послідовність нуклеїнової рі ас7мМВ75.6 забезпечується як 5ЗЕО ІО МО: 4. Як показано на Фігурі 3, рі ас2МВ75.6 є подібною до росСМВ75.6, але містить маркер для скринінгу ГІ ас.

Слід зазначити, що нуклеотидні послідовності плазміди рРОСМВ75.6 або рі ас2мМвВ75.6 можуть варіювати в деякій мірі без суттєвого погіршення імуностимулювальних властивостей. У деяких аспектах даний винахід відноситься до імуностимулювальної плазміди, що включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 8995 ідентичності послідовності з послідовністю расмМВ75.6 (ЗЕО ІО МО: 1). Імуностимулювальна плазміда переважно включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95 або принаймні 99 95 ідентичності послідовності з послідовністю РаСМВ 75.6 (ЗЕО ІЮО МО: 1). У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда більш переважно включає послідовність

Зо расмв75.6 (5ЕО ІО МО: 1).

У деяких аспектах даний винахід відноситься до імуностимулювальної плазміди, що включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 ідентичності послідовності з послідовністю рі асаМВ75.6 (5ЕО І МО: 4). Імуностимулювальна плазміда переважно включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 85 95, принаймні 86 95, принаймні 87 95, принаймні 88 90, принаймні 89 9о, принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95 або принаймні 99 95 ідентичності послідовності з послідовністю рі ас2МВ75.6 (5ЕО ІО МО: 4). У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда більш переважно включає послідовність ріас2мМВ75.6 (5ЕО ІО МО: 4).

У деяких аспектах даний винахід відноситься до імуностимулювальної плазміди, що складається з послідовності нуклеїнової кислоти, що має принаймні 8995 ідентичності послідовності з послідовністю росСМмМВвВ75.6 (5БО ІЮ МО: 1). Імуностимулювальна плазміда переважно складається з послідовності нуклеїнової кислоти, що має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95 або принаймні 99 95 ідентичності послідовності з послідовністю рОсмМВв75.6 (5ЕО ІО МО: 1). У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда більш переважно складається з послідовності рОСМВ75.6 (ЗЕО ІО МО: 1).

У деяких аспектах даний винахід відноситься до імуностимулювальної плазміди, що складається з послідовності нуклеїнової кислоти, яка має принаймні 84 95 ідентичності

БО послідовності з послідовністю рі ас2МВ75.6 (ЗЕО ІЮО МО: 4). Імуностимулювальна плазміда переважно складається з послідовності нуклеїнової кислоти, що має принаймні 85 95, принаймні 86 96, принаймні 87 95, принаймні 88 95, принаймні 89 95, принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 956, принаймні 9895, або принаймні 9995 ідентичності послідовності з послідовністю ріас2МВ75.6 (5ЕБО І МО: 4). У деяких аспектах імуностимулювальна плазміда більш переважно складається з послідовності рі асМВ75.6 (5ЕО І МО: 4).

Інший важливий аспект даного винаходу забезпечується для імуностимулювальних послідовностей ДНК або імуностимулювальних плазмід, здатних стимулювати імунну відповідь, включаючи послідовності нуклеїнових кислот, що гібридизуються за умов високої жорсткості з бо ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 4. Підходящі послідовності нуклеїнової кислоти включають такі,

що є гомологічними, головним чином, подібними або ідентичними до послідовностей нуклеїнових кислот даного винаходу. У деяких аспектах гомологічні послідовності нуклеїнових кислот будуть мати принаймні приблизно 89 95, 90 9, 91 9», 92 Фо, 93 У, 94 9о, 95 У, 96 Фо, 97 9, 9895, 9995 або 10095 подібності послідовності до 5ЕО ІЮ МО: 1 або до відповідної комплементарної послідовності. В інших аспектах гомологічні послідовності нуклеїнових кислот будуть мати принаймні приблизно 84 95, 85 95, 86 о, 88 95, 89 Ус, 90 о, 91 95, 92 Фо, 93 о, 94 95, 95 95, 96 95, 97 Ув, 98 95, 99 95 або 100 95 подібності послідовності до 5ЕО ІЮ МО: 4 або до відповідної комплементарної послідовності. Подібність послідовності може бути розрахована за допомогою ряду алгоритмів, відомих в даній галузі техніки, таких як ВІ АЄТ, що описані у

АЇївсНиї, 5. Е., еї аї., У. Мої. Віої. 215:403-10, 1990. Нуклеїнові кислоти можуть відрізнятися у послідовності від описаних вище нуклеїнових кислот за рахунок виродження генетичного коду. У загальному випадку еталонна послідовність буде мати 18 нуклеотидів, а частіше 30 або більше нуклеотидів, та може включати всю послідовність нуклеїнової кислоти композиції з метою порівняння.

Послідовності нуклеотидів, які можуть гібридизуватися з 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 4, є передбаченими у даному винаході. Жорсткі умови гібридизації включають умови, такі як гібридизація при 50 "С або вище та при 0,1Х 550 (15 мМ хлориду натрію /1,5 мМ цитрату натрію). Іншим прикладом є інкубація протягом ночі при 42 "С у розчині 50 95 формаміду, 5Х

ЗЗС (150 мМ Масі, 15 мм тринатрій цитрату), 50 мМ фосфату натрію (рН 7,6), 5Х розчин

Денхардта, 10 95 сульфат декстрану та 20 мкг/мл денатурованої фрагментованої ДНК сперми лосося з наступним промиванням у 0,1Х 55С при температурі близько 65 "С. Типовими жорсткими умовами гібридизації є умови гібридизації, що є принаймні приблизно на 80 95, 85 9, 90 95 або 95 95 такими жорсткими, як наведено у конкретних умовах, приведених вище. Інші жорсткі умови гібридизації є відомими у даній галузі техніки та можуть бути застосовані для знаходження гомологів нуклеїнових кислот згідно з даним винаходом (Ситепі Ргоїосої5 іп

Моїесшіаг Віоіоду, Розділ 6, пуб. ЧУопп Уміеу 5 Зоп5, М.У. 1989).

Мутантні нуклеотиди молекул ДНК, що описані у даній заявці, можуть бути застосовані до тих пір, поки мутанти включають послідовність нуклеїнових кислот, що зберігає здатність стимулювати імунну відповідь, як описано у даній заявці. Послідовність ДНК такої мутації буде зазвичай відрізнятися одним або більше нуклеотидами або амінокислотами. Зміни у послідовності можуть являти собою заміни, вставки, делеції або їх комбінацією. Методики для мутагенезу клонованих генів є відомим у даній галузі техніки. Способи для сайт-специфічного мутагенезу можуть бути знайдені у Сивіїйп та ін., Віоїесппідев 14:22, 1993; Вагапу, Сепе 37:111- 23, 1985; Соїісеїїї та ін., Мої. еп. Сепеї. 199:537-9, 1985; та затьгоок та ін., Моїесшаг Сіопіпд: А

І арогаїогу Мапиаї, С5Н Ргез5 1989, ст. 15.3-15.108, та інших джерелах, введених у дану заявку як посилання. Таким чином, даний винахід відноситься до послідовностей нуклеїнових кислот, що здатні стимулювати імунну відповідь у суб'єкта, та їх варіантів або мутантів. Також даний винахід охоплює проміжні молекули РНК, що кодуються описаними вище послідовностями нуклеїнових кислот, а також будь-які одержані амінокислотні послідовності, що кодуються ними.

В той час як нуклеотидна послідовність імуностимулювальної плазміди варіює від послідовності, наведеної у ЗЕО ІЮ МО: 1 та 5ЕО ІЮ МО: 4, динуклеотиди Сро у плазміді бажано залишаються незмінними. Альтернативно, якщо нуклеотидна послідовність плазміди змінюється таким чином, що динуклеотиди Сро видаляються, то послідовність плазміди може бути замінена в іншому положенні таким чином, щоб сумарна кількість динуклеотидів Сро у плазміді залишалася тією самою. Переважно динуклеотиди Сро на доповнення до тих, що вже є присутніми у нуклеотидних послідовностях РОСМВ75.6 або рі ас2МВ75.6, можуть також бути введені у плазміду. Таким чином, наприклад, імуностимулювальні плазміди, що описані у даній заявці, переважно включають принаймні приблизно 200, принаймні приблизно 220, принаймні приблизно 240, принаймні приблизно 260, принаймні приблизно 270, принаймні приблизно 275, принаймні приблизно 280, принаймні приблизно 283, принаймні приблизно 285, або принаймні приблизно 288 динуклеотидів Сро. Наприклад, імуностимулювальна плазміда може включати 283 динуклеотидів Сро.

Зокрема даний винахід відноситься до фармацевтичних композицій, що включають будь-які імуностимулювальні плазміди або послідовності ДНК, що описані у даній заявці, та фармацевтично прийнятний носій.

В. Імуномодулятор

Підходящі імуномодуляторні композиції для застосування разом з імуностимулювальними плазмідами, що описані у даній заявці, описуються в опублікованих патентних заявках Мо 2012/0064151 АТ (представники птахів) та 2013/0295167 А1 (представники великої рогатої бо худоби), зміст яких повністю включений в дану заявку як посилання.

Імуномодуляторна плазміда включає ліпосомальний носій для доставки та принаймні одну імуностимулювальну плазміду або послідовність ДНК, що описана у даній заявці.

Прийнятний ліпосомальний носій для доставки включає ліпідну композицію, що здатна доставляти молекули нуклеїнової кислоти до тканин суб'єкта, що піддається лікуванню.

Ліпосомальний носій для доставки переважно є здатним залишатися стабільним у суб'єкта протягом достатнього проміжку часу, щоб доставити молекулу нуклеїнової кислоти та/або біологічний агент. Наприклад, ліпосомальний носій для доставки є стабільним у суб'єкта, що одержує його, протягом принаймні приблизно п'яти хвилин, протягом принаймні приблизно 1 години або протягом принаймні приблизно 24 годин.

Ліпосомальний носій для доставки згідно з даним винаходом включає ліпідні композиції, що

Є здатними до злиття з плазматичною мембраною клітини з метою доставки молекули нуклеїнової кислоти до клітини. Коли молекула нуклеїнової кислоти кодує один або більше білків, комплекс нуклеїнової кислоти і ліпосоми переважно має ефективність трансфекції, що складає принаймні приблизно 1 пікограм (пг) експресованого білка на міліграм (мг) загального білка тканини на мікрограм (мкг) нуклеїнової кислоти, що доставляється. Наприклад, ефективність трансфекції комплексу нуклеїнова кислота: ліпосома може складати принаймні приблизно 10 пг експресованого білка на мг загального білка тканини на мкг нуклеїнової кислоти, що доставляється; або принаймні приблизно 50 пг експресованого білка на мг загального білка тканини на мкг нуклеїнової кислоти, що доставляється. Ефективність трансфекції комплексу може бути настільки низькою, як 1 фемтограм (фг) експресованого білка на мг загального білка тканини на мкг доставленої нуклеїнової кислоти враховуючи той факт, що більш високі значення є більш бажаними.

Розмір переважного ліпосомального носія для доставки згідно з даним винаходом знаходиться у межах приблизно від 100 до 500 нанометрів (нм) у діаметрі. Наприклад, розмір ліпосомального носія для доставки може знаходиться у межах приблизно від 150 до 450 нм або у межах приблизно від 200 до 400 нм у діаметрі.

Підходящі ліпосоми включають будь-які ліпосоми, такі як ті, що зазвичай використовуються, наприклад, у способах доставки генів, відомих для спеціаліста у даній галузі техніки. Переважно ліпосомальні носії для доставки включають ліпіди мультиламелярної везикули (МІ М) та

Зо екструдовані ліпіди. Способи отримання МІ М є добре відомими у даній галузі техніки. Більш переважно ліпосомальні носії для доставки включають ліпосоми, що мають полікатіонні ліпідні композиції (наприклад, катіонні ліпосоми) та/або ліпосоми, що мають холестериновий кістяк, злитий з поліетиленгліколем. Типові катіоні ліпосомальні композиції включають, але не обмежені такими, як М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М, М,М-триметиламоній хлорид (ОТМА) та холестерин, / М-(/1-(2,3-діолеоїлокси)пропіл|-М, М,М-триметиламоній хлорид (ООТАР) та холестерин, 1-(2-(олеоїлоксі)етил|-2-олеїл-3-(2-гідроксіетил)імідазолін хлорид (ООТІМ) та холестерин, диметилдіоктадециламоній бромід (ОСАВ) та холестерин та їх комбінацією.

Найбільш переважна ліпосомальна композиція для застосування як носія для доставки включає

БОТІМ та холестерин.

Підходяща молекула нуклеїнової кислоти включає будь-які імуностимулювальні плазміди, що описані у даній заявці. Кодуюча послідовність нуклеїнових кислот кодує принаймні частину білка або пептиду в той час, як некодуюча послідовність не кодує будь-яку частину білка або пептиду. Згідно з даним винаходом "некодуючі" нуклеїнові кислоти можуть включати регуляторні ділянки транскрипційної одиниці такі, як промоторні ділянки. Термін "порожній вектор" може бути використаний як взаємно замінювані з терміном "некодуючий" та, зокрема, відноситься до послідовності нуклеїнової кислоти, яка не має ділянки, що кодує білок, такої як плазмідний вектор без генної вставки. Експресія білка, який кодується плазмідами, що описані у даній заявці, не є необхідною для того, щоб викликати неспецифічну для антигену імунну відповідь; таким чином плазміди не потребують того, щоб містити будь-які кодуючі послідовності, функціонально зв'язані з послідовністю, що відповідає за контроль транскрипції. Незважаючи на це, наступні переваги можуть бути досягнуті (наприклад, специфічний для антигену та посилений імунітет) шляхом включення у композицію послідовності нуклеїнової кислоти (ДНК або РНК), що кодує імуноген та/або цитокін. Така послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує імуноген та/або цитокін, може бути включена до імуностимулювальних плазмід, що описані у даній заявці, або може бути включена до окремої нуклеїнової кислоти (наприклад, окрема плазміда) у композиції.

Утворення комплексу ліпосоми з імуностимулювальними плазмідами, що описані у даній заявці, може бути досягнуто при використанні типових для даної галузі техніки способів або так, як описано у патенті США Мо 6,693,086, зміст яких включений в дану заявку як посилання у свої 60 цілісності. Підходяща концентрація плазміди для додання до ліпосоми включає таку концентрацію, що є ефективною для доставки достатньої кількості плазміди до суб'єкта, щоб посилити системну імунну відповідь. Наприклад, приблизно від 0,1 мкг до приблизно 10 мкг плазміди може бути поєднано приблизно з 8 нмолями ліпосом, приблизно від 0,5 мкг до приблизно 5 мкг плазміди може бути поєднано приблизно з 8 нмолями ліпосом, або приблизно 1,0 мкг плазміди може бути поєднано приблизно з 8 нмолями ліпосом. Співвідношення плазмід до ліпідів (мкг плазміди: нмоль ліпідів) у композиції може складати принаймні приблизно 1:1 за вагою (наприклад, 1 мкг плазміди: 1 нмоль ліпідів). Наприклад, співвідношення плазмід до ліпідів може складати принаймні приблизно 1:5 плазміди:ліпіди, принаймні приблизно 1:10 або принаймні приблизно 1:20. Співвідношення, зазначене у даній заявці, базується на кількості катіонних ліпідів у композиції, а не на сумарній кількості ліпідів у композиції. Співвідношення плазмід до ліпідів у композиції даного винаходу складає переважно від приблизно 1:1 до приблизно 1:80 плазміди:ліпіди за вагою; від приблизно 1:2 до приблизно 1:40 плазміди:ліпіди за вагою; від приблизно 1:3 до приблизно 1:30 плазміди:ліпіди за вагою; або від приблизно 1:6 до приблизно 1:15 плазміди:ліпіди за вагою. б. Біологічний агент

Будь-які імуномодуляторні плазміди, що описані у даній заявці, можуть додатково включати принаймні один біологічний агент додатково до ліпосомального носія для доставки та принаймні однієї плазміди, що описана у даній заявці.

Підходящі біологічні агенти являють собою агенти, що є ефективними для лікування захворювань птахів та великої рогатої худоби. Такі біологічні агенти включають білки- енхансери, імуногени, вакцини, антимікробні препарати та будь-які їх комбінації. Прийнятні білки-енхансери є такими білками, що є відомі як такі, що здатні підсилювати імунітет. Як необмежувальний приклад можна навести будь-який цитокін, який належить до родини білків, яка є відомою як така, що здатна підсилювати імунітет. Підходящі імуногени є білками, що підсилюють гуморальну та клітинну імунну відповідь так, що при застосування до суб'єкта імуногену викликає специфічну для імуногенну імунну відповідь на ті самі або подібні білки, які зустрічаються у тканинах суб'єкта. Імуноген може включати патогенний антиген, що експресується бактерією, вірусом, паразитом або грибком. Переважні антигени включають антигени, що походять від організмів, що викликають інфекційні захворювання у суб'єкта. Згідно

Зо з даним винаходом імуноген може бути частиною білка, що має природне або синтетичне походження та посилює гуморальну та/або клітинну імунну відповідь. Як такий розмір антигену або імуногену може бути настільки малим, як приблизно 5-12 амінокислот, та настільки великим як повнорозмірний білок, включаючи всі можливі розміри між ними. Антиген може являти собою мультимерний білок або злитий білок. Антиген може бути очищеним білком. Альтернативно білок або імуноген, що підсилює імунітет, може бути закодованим в імуностимулювальній плазміді або іншій нуклеїновій кислоті, що включена до імуномодуляторної плазміди. У випадку, коли білок або імуноген, що підсилює імунітет, є закодованими нуклеїновою кислотою у імуномодуляторній плазміді, послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок або імуноген, який підсилює імунітет, є функціонально зв'язаною з такою послідовністю, що відповідає за контроль транскрипції, яка дозволяє імуногену експресуватися у тканині суб'єкта і, таким чином, підсилювати специфічну для імуногену імунну відповідь у суб'єкта на доповнення до неспецифічної імунної відповіді. Методи, що використовуються для скринінгу на імуногенність, такі як імуногенність до патогенного антигену або активність цитокінів, є відомими для спеціаліста у даній галузі техніки, та включають різноманітні аналізи іп міїго та іп мімо.

У випадку, коли біологічний агент являє собою вакцину, то вакцина може включати живу, інфекційну вірусну, бактеріальну або паразитарну вакцину або неживу, інактивовану вірусну, бактеріальну або паразитарну вакцину. Одна або більше вакцин, живих або неживих, можуть бути застосовані у комбінації разом з імуномодуляторною плазмідою згідно з даним винаходом.

Підходящі вакцини включають такі, які є відомими у даній галузі техніки для представників птахів та великої рогатої худоби.

Типові вакцини для представників птахів включають без обмежень такі, які застосовуються у даній галузі техніки для захисту від вірусу хвороби Марека (МОМ), вірусу хвороби Ньюкасла (МОМ), вірусу курячої анемії (САМ), вірусу хвороби інфекційного бурситу (ІВОМ), вірусу інфекційного бронхіту (ІВМ), вірусу герпесу індичок (НМТ), вірусу інфекційного ларинготрахеїту (І-ТМ), вірусу пташиного енцефаломієліту (АЕМ), вірусу віспи курей (ЕРМ), пташиної холери, вірусу пташиного грипу (АЇМ), реовірусу, вірусу пташиного лейкозу (АЇМ), вірусу ретикулоендотеліозу (КЕМ), аденовірусу птахів та вірусу геморагічного ентериту (НЕМ), кокцидій та від інших захворювань, що є відомими у даній галузі техніки. В іншому прикладі вакцина може бути вакциною, що описана у патентах США МоМо 5,427,791, 6,048,535 та 6,406,702.

Наприклад, вакцина для захисту від хвороби Марека може бути застосована у комбінації з імуномодуляторною плазмідою згідно з даним винаходом.

Типова вакцина для представників великої рогатої худоби включає без обмежень такі, які застосовуються у даній галузі техніки для захисту від інфекційного ринотрахеїту великої рогатої худоби (ІВЕ) (тип 1 бичачого вірусу герпесу (ВНМ1)), вірусу парагрипу 3-го типу (РІЗ), бичачого респіраторно-синцитіального вірусу (ВК5М), бичачого вірусу вірусної діареї (ВМОМ типу 1 та 2),

Нівіорпіш5 зотпі, Мусоріазта бБомів та від інших захворювань, що відомі у даній галузі техніки.

Наприклад, вакцина для захисту від Мапппєїтіа Наєтоїуїса може застосовуватися у комбінації з імуномодуляторною плазмідою згідно з даним винаходом.

Біологічний агент може являти собою антимікробний препарат. Підходящі антимікробні препарати включають хіноліни, в основному фторхіноліни, бета-лактам, та макролід-лінкозамід- стрептограмінових (МІ 5) антибіотиків.

Підходящі хінолони включають бенофлоксацин, бінфлоксацин, циноксацин, ципрофлоксацин, клінафлоксацин, данофлоксацин, дифлоксацин, еноксацин, енрофлоксацин, флероксацин, геміфлоксацин, ібофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин, марбофлоксацин, моксифлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, орбіфлоксацин, пазуфлоксацин, прадофлоксацин, перфлоксацин, сарафлоксацин, спарфлоксацин, темафлоксацин та тосуфлоксацин. Бажані фторхінолони включають ципрофлоксацин, данофлоксацин, енрофлоксацин, моксифлоксацин та прадофлоксацин. Переважні нафтиридони включають налідиксову кислоту.

Підходящі бета-лактами включають пеніциліни (наприклад, амоксицилін, ампіцилін, азлоцилін, бензатин пеніцилін, бензилпеніцилін, карбеніцилін, клоксацилін, ко-амоксиклав

Інаприклад, амоксицилін/клавуланова кислота|, диклоксацилін, локсацилін, флуклоксацилін, метицилін, мезлоцилін, нафцилін, оксацилін, феноксиметилпеніцилін, піперацилін, прокаїн пеніцилін, темоцилін та тикарцилін); цефалоспорини (наприклад, цефаклор, цефалоніум, цефамандол, цефапрірин, цефазолін, цефепім, цефіксим, цефотаксим, цефокситин, цефпірим, цефподоксим, цефхіном, цефтазидим, цефтіофур, цефтриаксон, цефуроксим, цефалексин, цефалотин та дефотетан); карбапенеми та пенеми (наприклад, дорипенем, ертапенем, фаропенем, іміпенем та меропенем); монобактами (наприклад, азтреонам, нокардіцин А,

Зо табтоксинін-В-лактам, та тігемонам); та інгібітори В-лактамаз (наприклад, клавуланова кислота, сульбактам, та тазобактам). Переважні бета-лактами включають цефалоспорини, зокрема, цефазолін.

Підходящі антибіотики МІ 5 включають кліндаміцин, лінкоміцин, спіраміцин та будь-які інші макролідні антибіотики. Переважний антибіотик лінкозамід явояє собою пірліміцин.

Інші антибактеріальні препарати включають аміноглікозиди, клопідол, диметрідазоли, еритроміцин, фраміцетин, фуразолідон, галофугінон, 2-піридон, робенідин, сульфаніламіди, тетрацикліни, триметоприм, різноманітні плевромутиліни (наприклад, тіамулін та валнемулін) та різноманітні стрептоміцини (наприклад, моненсин, наразин та саліноміцин).

ІІ. Способи

Мета даного винаходу полягає у забезпеченні імуномодуляторних композицій, імуностимулювальних плазмід (або послідовностей ДНК), та способів, що підсилюють захисний імунітет неінфікованих суб'єктів, захисний імунітет інфікованих суб'єктів, підвищують імунітет неінфікованих суб'єктів, підвищують імунітет інфікованих суб'єктів, терапевтичний імунітет неінфікованих суб'єктів або їх комбінації. Як така композиція даного винаходу може бути застосована для профілактичної імунізації суб'єкта або може бути застосована для лікування суб'єкта. Способи, що описані у даній заявці включають застосування до суб'єкта імуностимулювальної плазміди або послідовності ДНК, що описані у даній заявці.

А. Способи стимуляції імунітету

Даний винахід відноситься до способів підсилення імунної відповіді у суб'єкта, що одержує його. Способи включають застосування до суб'єкта ефективної кількості імуномодуляторної композиції для підсилення імунної відповіді. У деяких аспектах імуномодуляторна композиція підсилює неспецифічну антигену імунну відповідь, яка сама по собі є ефективною. У деяких аспектах імуномодуляторна композиція підвищує ефективність дії принаймні одного біологічного агенту, такого як вакцина, коли застосовується попередньо до такої вакцини, застосовується разом з вакциною, застосовується після вакцинації або коли є змішаною з вакциною. У деяких аспектах способи забезпечують нові стратегії лікування для захисту суб'єкта, що одержує його, від інфекційних захворювань та для лікування популяцій, де це захворювання поширене. У деяких аспектах способи забезпечують більш швидкий, довготривалий та кращий захист від захворювання, коли імуномодулятор застосовується у бо комбінації з вакциною, у порівнянні із застосуванням вакцини без імуномодуляторної композиції.

Їмунна відповідь може бути підсилена шляхом застосування ефективної кількості імуномодуляторної композиції, що включає будь-які ліпосомальні носії для доставки, що описані у даній заявці, будь-які імуностимулювальні плазміди (для послідовностей ДНК), що описані у даній заявці, та будь-які біологічні агенти, що описані у даній заявці, у суб'єкта, що одержує її.

Припускається, що біологічний агент може бути змішаний з або може бути застосований разом з імуномодулятором або незалежно від такого. Незалежне застосування може здійснюватися до або після застосування імуномодулятора. Також припускається, що більше одного застосування імуномодуляторного або біологічного агенту може бути використано для продовження дії підвищеного імунітету. Крім того, більше одного біологічного агенту може бути застосовано разом з імуномодулятором, застосовано до введення імуномодулятора, застосовано після введення імуномодулятора або одночасно з імуномодулятором.

Ефективна кількість будь-якої з імуномодуляторних композицій, що описані у даній заявці, може бути застосована до суб'єкта. Ефективна кількість є достатньою для підсилення імунної відповіді у суб'єкта, що одержує її. Така ефективна кількість представляє собою будь-яку кількість, що викликає імунну відповідь у суб'єкта, що одержує її. Способи вимірювання імунної відповіді є добре відомими у даній галузі техніки. Крім того, для спеціаліста у даній галузі техніки є зрозумілим, що ефективна кількість буде залежати від співвідношення віку до ваги, стадії інфекції, а також від інших факторів, що відомі у даній галузі техніки. Підходящі ефективні кількості можуть варіювати у діапазоні від приблизно 0,1 мкг до приблизно 1000 мкг на суб'єкт. У деяких аспектах ефективна кількість може варіювати у діапазоні від приблизно 0,1 мкг до приблизно 10 мкг, від приблизно 0,1 мкг до приблизно 5 мкг, від приблизно 0,5 мкг до приблизно 5 мкг, від приблизно 0,25 мкг до приблизно 5 мкг, від приблизно 0,05 мкг до приблизно 10 мкг, від приблизно 5 мкг до приблизно 15 мкг, від приблизно 10 мкг до приблизно 15 мкг, від приблизно 10 мкг до приблизно 20 мкг, від приблизно 20 мкг до приблизно 30 мкг, від приблизно мкг до приблизно 40 мкг, від приблизно 40 мкг до приблизно 50 мкг, від приблизно 50 мкг до приблизно 70 мкг, від приблизно 70 мкг до приблизно 90 мкг, від приблизно 50 мкг до приблизно 100 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 150 мкг, від приблизно 150 мкг до приблизно 200 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 250 мкг, від приблизно 250 мкг до приблизно 300 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 350 мкг, від приблизно 350 мкг до приблизно 400 мкг, від

Ко) приблизно 400 мкг до приблизно 450 мкг, від приблизно 450 мкг, до приблизно 500 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 550 мкг, від приблизно 550 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 600 мкг до приблизно 650 мкг, від приблизно 650 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 700 мкг до приблизно 750 мкг, від приблизно 750 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 800 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 850 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 900 мкг до приблизно 950 мкг, від приблизно 950 мкг до приблизно 1000 мкг.

Переважно у деяких аспектах ефективна кількість може варіювати у діапазоні від приблизно 0,5 мкг до приблизно 10 мкг. При цьому переважно в інших аспектах ефективна кількість може варіювати від приблизно 50 мкг до приблизно 100 мкг. А також переважно в інших аспектах ефективна кількість може варіювати від приблизно 40 мкг до приблизно 70 мкг.

У деяких аспектах імунна відповідь може бути підсилена у представника птахів шляхом застосування ефективної кількості будь-якої з імуномодуляторних композицій, що описані у даній заявці, до представника птахів. Ефективна кількість є достатньою для підвищення імунної відповіді у представника птахів. Наприклад, ефективна кількість імуномодулятора для видів птахів може складати від приблизно 0,05 мкг до приблизно 10 мкг, від приблизно 0,1 мкг до приблизно 5 мкг, від приблизно 0,5 мкг до приблизно 1,5 мкг або від приблизно 1,0 мкг до приблизно 10 мкг. Як приклад, прийнятні ефективні кількості можуть складати приблизно 0,1 мкг, 0,2 мкг, 0,3 мкг, 0,4 мкг, 0,5 мкг, 0,6 мкг, 0,7 мкг, 0,8 мкг, 0,9 мкг, 1,0 мкг, 1,2 мкг, 1,4 мкг, 1,6 мкг, 1,8 мкг, 2,0 мкг, 2,5 мкг, 3,0 мкг, 3,5 мкг, 4,0 мкг, 4,5 мкг, 5,0 мкг, 5,5 мкг, 6,0 мкг, 6,5 мкг, 7,0 мкг, 7,5 мкг, 8,0 мкг, 8,5 мкг, 9,0 мкг, 9,5 мкг, 10,0 мкг, 9,5 мкг, 10,0 мкг, 10,5 мкг, 11,0 мкг, 12 мкг,

БО 13 мкг, 14 мкг або 15 мкг для суб'єкту, що являє собою представника птахів.

У деяких аспектах імунна відповідь може бути підсилена у члена представників великої рогатої худоби шляхом застосування ефективної кількості будь-якої з імуномодуляторних композицій, що описані у даній заявці, до члена представників великої рогатої худоби.

Ефективна кількість є достатньою для підвищення імунної відповіді у члена представників великої рогатої худоби. Наприклад, ефективна кількість імуномодулятора для представників великої рогатої худоби може бути від приблизно 1 мкг до приблизно 1000 мкг на тварину, від приблизно 5 мкг до приблизно 500 мкг на тварину, від приблизно 10 мкг до приблизно 100 мкг на тварину, від приблизно 10 мкг до приблизно 50 мкг на тварину або від приблизно 40 мкг до приблизно 60 мкг на тварину. Як приклад, п підходящі ефективні кількості можуть складати 60 приблизно 30 мкг, 35 мкг, 40 мкг, 45 мкг, 50 мкг, 55 мкг, 60 мкг, 65 мкг, 70 мкг, 75 мкг, 80 мкг, 85 мкг, 90 мкг, 95 мкг, 100 мкг, 110 мкг, 120 мкг, 130 мкг, 140 мкг, 150 мкг, 160 мкг, 170 мкг, 180 мкг, 190 мкг, 200 мкг або аж до 500 мкг або аж до 1000 мкг для суб'єкту, що являє собою представника великої рогатої худоби.

В. Умови використання

Способи згідно з даним винаходом підсилюють імунну відповідь у суб'єкта таким чином, що суб'єкт є захищеним від хвороби, яка піддається лікуванню шляхом підсилення імунної відповіді.

Як використовується у даній заявці, фраза "є захищеним від хвороби" відноситься до послаблення симптомів захворювання; зменшення частоти захворюваності; зменшення клінічної та патологічної тяжкості захворювання; або зменшення виділення патогена, що спричинює захворювання. Захист суб'єкта може відноситися до здатності терапевтичної композиції згідно з даним винаходом, при застосуванні до суб'єкта, запобігти прояву захворювання, виліковувати тал"або послаблювати або зменшувати симптоми захворювання, клінічні прояви, патологію або причини. Наприклад, клінічні прояви респіраторної інфекції великої рогатої худоби (ВАС) без обмежень включають ураження легень, підвищену температуру, депресію (наприклад, анорексію, зниження чутливості до зовнішніх подразників, сильну втомлюваність), виділення з носа та респіраторні прояви (наприклад, частота дихання, дихальні зусилля). Імуномодуляторні композицій, що описані у даній заявці, можуть бути застосовані до великої рогатої худоби, коли є підозри щодо контакту з ВАО, для запобігання або зменшення важкості описаних вище клінічних проявів ВАО. Як наступний приклад, клінічні прояви хвороби Марека у представників птахів без обмежень включають зменшення виводковості та виживання птахів. Імуномодуляторні композиції, що описані у даній заявці, можуть бути застосовані до представників птахів, коли є підозри щодо контакту з вірусом хвороби Марека, з метою запобігання або зменшення важкості описаних вище клінічних проявів хвороби Марека.

Як такий захист суб'єкта від захворювання охоплює як запобігання проявів захворювання (профілактичне лікування), так і лікування суб'єкта що має захворювання (терапевтичне лікування). Зокрема, захист суб'єкта від захворювання досягається шляхом підсилення імунної відповіді у суб'єкта шляхом стимулювання ефективної або захисної імунної відповіді, що може у деяких випадках додатково пригнічувати зменшувати, інгібувати або блокувати гіперактивну або шкідливу імунну відповідь. Термін "захворювання" відноситься до будь-якого відхилення від нормального здорового стану суб'єкта та включає стан, при якому є присутніми як симптоми захворювання, так і прояви, при яких відхилення (наприклад, інфекція, мутація гену, генетичний дефект і т. д.) виникли, але симптоми ще не проявилися.

Способи згідно з даним винаходом можуть використовуватися для запобігання захворюванню, стимулювання імунітету ефекторних клітин проти захворювання, усунення захворювання, послаблення захворювання та запобігання вторинного захворювання, що виникло як наслідок первинного захворювання.

У деяких аспектах способи, що описані у даній заявці, можуть бути використані для покращення набутої імунну відповідь суб'єкта, коли застосовуються разом з вакциною у порівнянні із застосуванням однієї вакцини. В цілому вакцина не відразу захищає суб'єкт після її застосування, оскільки стимуляція набутого імунітету потребує деякого часу. Термін "покращення" у даному винаході відноситься до підсилення вродженої імунної відповіді у суб'єкта до того моменту, коли вакцина починає захищати суб'єкт та/або продовження періоду захисту за рахунок набутого імунітет, що забезпечується вакциною.

У деяких аспектах способи даного винаходу включають застосування композиції для захисту від інфекцій широкого кола патогенів. Композиції, що застосовуються, можуть або не можуть, включати специфічний антиген для підсилення специфічної імунної відповіді. Передбачається, що способи згідно з даним винаходом будуть захищати суб'єкт, що одержує їх, від захворювань, що спричинюються різними інфекційними мікробними агентами, що без обмежень включають віруси, бактерії, грибки та паразитів. Спеціаліст у даній галузі техніки визнає та оцінить той факт, що імуномодуляторна композиція, як описано у даній заявці, є ефективною проти великої кількості інфекційних агентів, яких дуже багато, щоб перераховувати. Інфекційні агенти, що наведені у даній заявці, забезпечуються лише з метою прикладу та не є такими, що обмежують галузь застосування.

Типові вірусні інфекційні захворювання у представників птахів включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням курячим вірусом інфекційної анемії (СІАМ), вірусом хвороби

Марека (МОМ), вірусом герпесу курчат (НСМ), вірусом герпесу індичок (НТУ), вірусом інфекційного бурситу (ІВОМ), вірусом хвороби Ньюкасла (МОМ), вірусом інфекційного бронхіту (ІВМ), вірусом інфекційного ларинготрахеїту (ТМ), параміксовірусом типу 3, пташиним бо енцефаломієлітом (АЕМ), вірусом віспи курей (ЕРМ), птгашиною холерою, вірусом пташиного грипу (ВГП), реовірусами, вірусом пташиного лейкозу (АЇМ), вірусом ретикулоендотеліозу (КЕМ), аденовірусом птахів, вірусом геморагічного ентериту (НЕМ), пневмовірусами, вірусом віспи голубів, їх рекомбінантами та іншими вірусами, що є відомими у даній галузі техніки.

Типові бактеріальні інфекції у представників птахів включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням грам-позитивними бактеріями, грам-негативними бактеріям або грибками, такими як Вогаєїеа 5рр., Сатруобасієг |є|шпі, Сіовігдійт бБоїціпит, СіобММашт соїїпит, Сіовігідійт репгіпдеп5, Егузіреоїйгіх іпзідіоза, ЕзсНегісніа соїї, Неторнішв5 даїЇйпагит,

Мусоріазта даїїзеріїсит, Мусоріазта теївєавдгіді5, Мусоріазта з5зупоміає, РазівшеПНа типйосіда,

Віетегеїіа апаїїрезійег, Заітопеїа 5рр., Заітопеїйа епіепііаів, Заітопеїйа даїїпагит, ЗаІтопеїїа риїйогит та іншими бактеріями, що відомі у даній галузі техніки.

Типові інфекції, спричинені грибками або пліснявими грибками, у представників птахів включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням Азрегадїїи5 Памив, АзрегоїПи5

Титідаїе5з, Сапаїда аїрбісапе та іншими інфекціями, спричиненими грибками або пліснявими грибками, що відомі у даній галузі техніки. Типові прояви захворювання включають без обмежень такі, що спричинюються токсинами грам-позитивних бактерій, грам-негативних бактерій або такими грибків, наприклад токсин Сіовіпдішт Боїцііпит, токсин Сіовзійайт репііпдеп5, ентеротоксин ЕзсПегіспіа соїї, мікотоксини Еизагйт, лейкотоксин РабвієцгеїІа, токсини біарнуіососсиз та інші токсини, що відомі у даній галузі техніки.

Типові паразитарні інфекції представників птахів включають без обмежень такі, що спричинені Азсагідіа даїї, Саріїана аппиїайа, СаріїПата сопіопа, СаріПата обзідпаїа, соссідіа врр.,

Еітепа теієадгіадів, Неїегаків даїІпає, Зупдатив Ігаснєа та інші паразитарні хвороби, що відомі у даній галузі техніки.

Типові вірусні інфекційні захворювання представників великої рогатої худоби включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням вірусом синього язика овець, бичачим аденовірусом, бичачим кальцивірусом, бичачим коронавірусом (ВСУ), бичачим ентеровірусом, вірусом бичачого герпесу типу 1 (ВНМІІ), бичачим вірусом герпесу типу 4 (ВНМ4), бичачим вірусом лейкозу, бичачим парвовірусом, бичачим реовірусом, бичачим респіраторно- синцитіальним вірусом (ВК5М), риновірусом великої рогатої худоби, вірусом бичачої вірусної діареї типу 1 (ВМОМ'1), вірусом бичачої вірусної діареї типу 2 (ВМОМ2), інфекційним

Зо ринотрахеїтом великої рогатої худоби (ІВК), злоякісною катаральною лихоманкою великої рогатої худоби, вірусом парагрипу 3-го типу (РІМ3), вірусом сказу, вірусом везикулярного стоматиту (М5М), їх рекомбінантами та іншими вірусами, що є відомими у даній галузі техніки.

Типові бактеріальні інфекції у представників великої рогатої худоби включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням грам-позитивними бактеріями, грам- негативними бактеріям або грибками, такими як Агсапобасієгішт руогенів, Васійшв5 апінгасів,

Васійи5 апінгах, Вгисеїа абопиз, Сатруіобасієг Тейи5, Сатруобасіег |є|Їшпі, Сіовігідіит Боїшіпит,

Сіозійаіит спацймеої, Сіовійаішт соїїпит, Сіовігаійт Нетоїуїйсит, Сіовійадішт помуї, Сіовійаіййт репііпдепе, Сіозігідішт веріїсит, Сіозійаішт ієїапі, Согуперасієгішт, ЕвсПегісніа сої,

Еизоврасіейцт песторпогит, Еивобасівелйт 5рр., Нівіорпйи5 5отпі, Нізіорпійш5 5рр., І еріозріга 5рр., МаппПпеїтіа Наєтоїуїїса, Могахеїйа 5рр., МиеїПепив5 5рр., Мусобасієгпит рагаїшрегсиов5ів,

Мусобасіегіит 5рр., Мусоріазхта бБоміптіпі5, Мусоріазта ромі5, Мусоріаєта аїізраг, Мусоріазта 5рр., Разієшейа тийосіда, ЗаІтопейПа в5рр., Теропета з5рр., Отєаріазта аімегзит та іншими бактеріями, що відомі у даній галузі техніки.

Типові інфекції, спричинені грибками або пліснявими грибками, у представників великої рогатої худоби включають без обмежень такі, що спричинюються інфікуванням Асііпобасіегіт 5рр., Азрегойи5 5рр., та Нізіотопах 5рр., та інші інфекції, спричинені грибками або пліснявими, що відомі у даній галузі техніки.

Типові паразитарні інфекції представників великої рогатої худоби включають без обмежень такі, що викликаються Апаріазта 5рр., Апаріазєта тагдіпаІє, Варевзіа 5рр., СПогіоріе5 5рр., Соорегіа, Сувіїсегсив5 врр., Сатаїмнпіа ромі5, Оептайорнішв5 в5рр., Оісіуіосаціив 5рр., Еітеїпа 5рр.,

Ерегуїпто2ооп 5рр., Разсіоісіде5 5рр., Наєтопспив5 5рр., МеІорпадив 5рр., МиеїІегпив 5рр.,

Метайїйодіги5 5рр., Меозрога 5рр., Оєвігив 5рр., Озіепадіа 5рр., Рзогорієв 5рр., Загсорієв 5рр.,

Зегрепе5 5рр., Зігопдуіоіде5 5рр., Тохоріазта 5рр., Піспорпуюп врр., Тісповігопдуїшв, ПТіспигів 5рр., та Тійпспотопаз 5рр., та іншими паразитами, що відомі у даній галузі техніки.

Типові інфекційні агенти, що спричинюють захворювання у представників великої рогатої худоби, також включають агенти, що викликають мастит, метрит, криптоспоридіоз та будь-яке інше інфекційне захворювання великої рогатої худоби, до якого вона є чутливою.

С. Застосування

Існують різноманітні шляхи застосування. Конкретно вибраний режим буде залежати, бо звичайно, від конкретно вибраних біологічних агентів, віку та загального стану здоров'я суб'єкта,

конкретного прояву, що піддається лікуванню, та дози, необхідної для терапевтичної ефективності. Способи даного винаходу можуть бути застосовані на практиці при використанні будь-якого режиму застосування, що приводить до ефективних рівнів імунної відповіді без створення клінічно неприйнятних шкідливих впливів. Композиція може бути представлена зручним чином у формі одиничних доз та може бути одержана будь-яким способом, що є добре відомим у даній галузі техніки.застосовуватися внутрішньовенно, внутрішньом'язово, внутрішньошкірно, інтраперитонеально, підшкірно, у формі аерозолю, іп омо, методом введення у фолікул пір'я, перорально, інтраокулярно, трахеально, інтраназально або іншими способами, що є відомими у даній галузі техніки. В одному аспекті імуномодулятор застосовується підшкірно. В іншому аспекті імуномодулятор може застосовуватися внутрішньом'язово. В іншому аспекті імуномодулятор застосовується у формі аерозолю. У іншому аспекті імуномодулятор може застосовуватися перорально.

В одному аспекті імуномодулятор може застосовуватися сам по собі до суб'єкта до зараження (або інфікування). В іншому аспекті імуномодулятор може застосовуватися сам по собі до суб'єкта після зараження (або інфікування). В іншому аспекті імуномодулятор може бути застосований сам по собі до суб'єкта в той самий час, що й зараження (або інфікування).

У деяких аспектах імуномодуляторна композиція може сумісно вводитися у той самий час, що й вакцинація, до зараження. У деяких аспектах імуномодуляторна композиція може сумісно вводитися у той самий час, що й вакцинація, одночасно із зараженням або інфекцією). У деяких аспектах сумісне застосування може включати застосування вакцини та імуномодулятора на тій самій ділянці у суб'єкта у двох різних сайтах, що знаходяться один біля одного (наприклад, ін'єкції одна біля одної на шиї суб'єкта), на протилежних сторонах суб'єкта на тій самій загальній ділянці (наприклад, на кожній стороні шиї), або на різних ділянках того самого суб'єкта. У деяких аспектах імуномодуляторна композиція може застосовуватися до вакцинації та зараження. У деяких аспектах імуномодуляторна композиція може застосовуватися після вакцинації, але до зараження. Імуномодуляторна композиція може застосовуватися після зараження до суб'єкта, який був вакцинований попередньо, до зараження (або інфекції).

Спеціаліст у даній галузі техніки зрозуміє, що шляхи застосування можуть варіювати в залежності від суб'єкта та стану здоров'я суб'єкта. Шляхи застосування, що представлені для представників птахів та великої рогатої худоби, наведені як приклади та забезпечуються без обмежень.

Вакцинація представників птахів може бути виконана у будь-якому віці. Вакцинації можуть бути застосовані до ембріонів віком 18 днів (іп омо) та пізніше для живих мікроорганізмів, та З тижні та пізніше для інактивованих мікроорганізмів та інших типів вакцин. При вакцинації іп омо вакцина може бути застосована в останній чверті розвитку. Вакцина може застосовуватися підшкірно, методом введення у фолікул пір'я, у формі аерозолю, перорально, інтраокулярно, трахеально, інтраназально, іп омо або за допомогою інших способів, що відомі у даній галузі техніки. Пероральні вакцини можуть бути застосовані разом з питною водою. Крім того, передбачається, що способи згідно з даним винаходом можуть базуватися на звичайних схемах вакцинації.

Імуномодуляторна композиціяа може також застосовуватися до представників птахів підшкірно, методом введення у фолікул пір'я, у формі аерозолю, перорально, інтраокулярно, трахеально, інтраназально, іп омо або за допомогою інших способів, що відомі у даній галузі техніки. Наприклад, імуномодуляторна композиція може застосовуватися іп о омо.

Альтернативно, імуномодуляторна композиція може застосовуватися у формі аерозолю.

Імуномодуляторна композиція може застосовуватися іп омо до пташиного ембріона в останній чверті його розвитку. Наприклад, імуномодуляторна композиція може застосовуватися іп омо до ембріона віком 18 днів або 19 днів. Її застосування до яйця може бути проведене до зараження (або інфекції) або після зараження.

Імуномодулятор може застосовуватися до тварин, що належать до представників птахів або до великої рогатої худоби, від приблизно 1 до приблизно 14 днів перед до зараженням або від приблизно 1 до приблизно 14 днів після зараження. Наприклад, імуномодулятор може застосовуватися від приблизно 1 до приблизно 7 днів перед зараженням або від приблизно 1 до приблизно 7 днів після зараження. Імуномодулятор застосовується переважно за 1,2, 3,4,5,6, 7 днів перед зараженням або за 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 днів після зараження.

Вакцинація представників великої рогатої худоби може бути виконана у будь-якому віці.

Вакцина може застосовуватися внутрішньовенно, внутрішньом'язово, підшкірно, внутрішньошкірно, інтраперитонеально, підшкірно, у формі аерозолю, перорально, інтраокулярно, трахеально, інтраназально або за допомогою інших способів, що відомі у даній галузі техніки. Більш того передбачається, що способи даного винаходу можуть базуватися на звичайних схемах вакцинації.

Інші системи доставки можуть включати системи доставки повільного вивільнення, затриманого вивільнення або тривалого вивільнення. Такі системи можуть допомогти уникнути потребі у повторних застосуваннях композиції збільшуючи, таким чином, зручність. Велика кількість систем доставки з вивільненням є доступною та є відомою для середніх спеціалістів у даній галузі техніки. Вони включають системи на основі полімерів, таких як сополімер лактиду з гліколідом, со-поліоксилати, полікапролактони, поліефіраміди, поліортоефіри, полігідроксимасляну кислоту та поліангідриди. Мікрокапсули вищезгаданих полімерів, що містять лікарський препарат, описуються, наприклад, у патенті США Мо 5,075,109.

Системи доставки також включають неполімерні системи, що включають системи на основі стеролів, таких як холестерин, складні ефіри холестерину, та такі на основі жирних кислот або нейтральних жирів, таких як моно-, ди-, та тригліцериди; системи на основі гідрогелю; системи на основі силікону; системи на основі пептидів; воскові покриття; пресовані таблетки з використанням типових зв'язувальних речовин та наповнювачів; частково вживлені імпланти; та подібні до них. Конкретні приклади включають, але не обмежуються такими, як ерозійні системи, в яких агент згідно з даним винаходом міститься усередині матриксу у таких формах, що описані у патентах США МоМо 4,452,775, 4,675,189 та 5,736,152, та системи дифузії, в яких активний компонент проникає при контрольованій швидкості з такого полімеру, як описано у патентах США МоМо 3, 854,480, 5,133,974 та 5,407,686. Крім того, можуть використовуватися апаратні системи доставки на основі насосу, при чому деякі з них є адаптованими для імплантації.

Оскільки різноманітні зміни можуть бути внесені у згадані вище композиції, продукти та способи без відхилення від об'єму даного винаходу, передбачається, що уся приведена у даному описі інформація та приклади, що представлені нижче, повинні бути інтерпретовані як такі, що носять, а не обмежувальний характер.

Визначення

Термін "ефективна кількість" відноситься до кількості, що є необхідною або достатньою для реалізації бажаного біологічного ефекту. Наприклад, ефективна кількість імуномодулятора для

Зо лікування або запобігання інфекційного захворювання є такою кількістю, що необхідна для того, щоб викликати розвитку імунної відповіді при впливі мікробів тим самим спричинюючи зменшення кількості мікробів у суб'єкта та переважно знищення мікробів. Ефективна кількість для будь-якого конкретного застосування може варіювати в залежності від таких факторів, як хвороба або стан, що піддається лікуванню, розмір суб'єкта, важкість хвороби або прояву.

Середній фахівець у даній галузі техніки може емпірично встановити ефективну кількість імуномодулятора без потреби у додаткових експериментах.

Термін "цитокін" відноситься до родини білків-енхансерів, що підсилюють імунітет. Родина цитокінів включає гемопоетичний фактор росту, інтерлейкіни, інтерферони, молекули надродини імуноглобулінів, молекули родини фактору некрозу пухлин та хемокіни (наприклад, білки, які регулюють міграцію та активацію клітин, зокрема, фагоцитарних клітин). Типові цитокіни включають, але без обмеження, інтерлейкін-2 (ІІ -2), інтерлейкін-12 (ІІ -12), інтерлейкін- 15 (1-15), інтерлейкін-18 (1-18), інтерферон-а (ІЕМоа), та інтерферон-у (ІЄМУ).

Термін "підвищувати" може бути використаний як взаємно замінювані поряд з термінами активувати, стимулювати, генерувати або викликати підвищення.

Термін "підвищувати імунну відповідь" у суб'єкта відноситься до специфічного контролю та впливу на активність імунної відповіді та може включати активацію імунної відповіді, одержання підвищення імунної відповіді, підсилення імунної відповіді та/або зміну імунної відповіді (наприклад, за рахунок підвищення деякого типу імунної відповіді, що, у свою чергу, змінює переважний тип імунної відповіді у суб'єкта з того, який є шкідливим та неефективним, на той, який є корисним та здатним до захисту суб'єкта).

Термін "функціонально зв'язаний" відноситься до зв'язування молекули нуклеїнової кислоти з послідовністю контроля транскрипції у такий спосіб, що молекула здатна експресуватися, коли є введеною (наприклад, трансформована, трансдукована або трансфікована) у клітину-хазяїна.

Послідовності транскрипційного контролю представляють собою послідовності, що контролюють ініціацію, елонгацію та термінацію транскрипції. Особливо важливі послідовності транскрипційного контролю являють собою такі, що контролюють ініціацію транскрипції, такі як промоторні, енхансерні, операторні та репресорні послідовності. Різноманіття таких послідовностей транскрипційного контролю є відомими для спеціаліста у даній галузі техніки.

Переважні послідовності транскрипційного контролю включають такі, що функціонують у бо клітинах птахів, риб, ссавців, бактерій, рослин та комах, а також у вірусах. В той час як будь-які послідовності транскрипційного контролю можуть бути застосовані у відповідності 3 даним винаходом, ці послідовності можуть включати послідовності транскрипційного контролю, що зустрічаються у природі та які асоційовані з послідовністю, що кодує імуноген або білок, що стимулює імунітет.

Терміни "молекула нуклеїнової кислоти" та "послідовність нуклеїнової кислоти" можуть бути використані як взаємно замінювані та включають ДНК, РНК або похідні ДНК або РНК. Ці терміни також включають олігонуклеотиди та великі послідовності, такі як плазміди, такі як імуностимулювальні плазміди, що описані у даній заявці, та включають як молекули нуклеїнової кислоти, що кодує білок або його фрагмент, так і молекули нуклеїнової кислоти, що включають регуляторні ділянки, інтрони або інші некодуючі ділянки ДНК або РНК. Типово олігонуклеотид має послідовність нуклеїнової кислоти розміром від приблизно 1 до приблизно 500 нуклеотидів, та більш типово має довжину принаймні приблизно 5 нуклеотидів. Молекула нуклеїнової кислоти може бути отримана з будь-якого джерела, що включає ссавців, риб, бактерій, комах, віруси, рослини, синтетичні джерела, а також їх комбінації. Молекула нуклеїнової кислоти може бути одержана за допомогою способів, що зазвичай відомі у даній галузі техніки, таких як технологія рекомбінантної ДНК (наприклад, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), ампліфікація, клонування) або за допомогою хімічного синтезу. Молекули нуклеїнової кислоти включають природні молекули нуклеїнової кислоти та їх гомологи, включаючи, але не обмежуючись природними алельними варіантами та модифікованими молекулами нуклеїнової кислоти, в яких нуклеотиди були вбудовані, видалені, заміщені, інвертовані у такий спосіб, що такі модифікації не сильно заважають можливості молекули нуклеїнової кислоти підсилювати імунну відповідь, що є корисною у способах згідно з даним винаходом. Гомологи нуклеїнової кислоти можуть бути одержані за допомогою великої кількості способів, що відомі для спеціалістів у даній галузі техніки (дивись, наприклад, затогоокК та ін., МоїІесшаг СіІопіпд: А

І арогаїогу Мапиа!Ї, Соїй Зргіпд Натбог Іар5 Рге55, 1989), які включені в дану заявку як посилання.

Терміни "маркер для селекції" та "маркерний ген для селекції" відноситься до гену, що кодує продукт, який захищає організм, у якому даний ген експресується, від селективного агенту (наприклад, антибіотика) або умов, які б в нормі спричинили загибель організму або затримали

Зо б його ріст. Маркерні гени для селекції зазвичай представляють собою гени резистентності до антибіотиків (наприклад, гени резистентності до канаміцину, гени резистентності до ампіциліну, гени резистентності до хлорамфеніколу, гени резистентності до тетрацикліну і т. д.). Таким чином, наприклад, коли клітини Е. соїї піддаються процедурі трансформації для введення плазміди, що кодує ген резистентності до канаміцину, та потім вирощуються на або у середовищі, що містить канаміцин, тільки ті клітини Е. соїї, що успішно отримали плазміду та експресують ген резистентності до канаміцину, залишаться життєздатними. Терміни "маркер для селекції" та "маркерний ген для селекції" також включають гени, що кодують ферменти, які є залученими у синтезі сполуки, яка є необхідною для росту організму. При введенні в ауксотрофний організм, який не здатен синтезувати необхідну сполуку, такі гени дозволяють організму рости у середовищі, що не збагачене необхідною сполукою. Наприклад, бактеріальні клітини, які є ауксотрофними за амінокислотою лізином внаслідок мутації у ферменті або відсутності ферменту, що залучений у біосинтез лізину, в нормі не можуть рости на середовищі, що не збагачене лізином. Коли такі бактерії піддаються процедурі трансформації з метою введення плазміди, що кодує фермент, залучений у біосинтез лізину, бактерії, що успішно поглинули плазміду та експресують фермент, залишаться життєздатними, коли ростуть на середовищі, яке не було збагачене лізином. Терміни "маркер для селекції" та "маркерний ген для селекції! також включають гени, що дозволяють проводити селекцію на основі отрути/антидоту. Наприклад, ген ссав кодує білок, що зв'язується з ДНК гіразою, необхідним ферментом для поділу клітин. При зв'язуванні з ДНК гіразою продукт гену ссав порушує реплікацію та призводить до смерті клітини. Таким чином, бактерії, що експресують продукт гену ссав, не можуть вижити. Ген ссдА кодує білок (антидот), що діє як природний інгібітор продукту гену ссаВв. Таким чином, коли бактерії, що містять ген ссаВ ген в своєму бактеріальному геномі, піддаються процедурі трансформації для введення плазміди, що кодує продукт гену ссаА, залишаться життєздатними тільки ті клітини, що успішно поглинули плазміду та експресують ген ссдА.

Терміни "маркер для скринінгу" та "маркерний ген для скринінгу" відносяться до гену, що кодує продукт, який дозволяє спостерігачу відрізнити клітини, які експресують маркерний ген для скринінгу, від клітин, які експресують маркерний ген для скринінгу. Системи на основі маркерного гену для скринінгу є добре відомими у даній галузі техніки та включають, наприклад, бо гени Іас та гени, що кодують флуоресцентні білки, такі як зелений флуоресцентний білок

(СЕР), жовтий флуоресцентний білок (МЕР), червоний флуоресцентний білок (КЕР), синій флуоресцентний білок (ВЕР) або ціановий флуоресцентний білок (СЕР).

Як використано у даній заявці, термін "суб'єкт" відноситься до живого організму, який має центральну нервову систему. Зокрема, суб'єкти включають, але не обмежуються суб'єктами, що являють собою людьми або пацієнтів та домашніх тварин. Типові домашні тварини можуть включати приручених ссавців (наприклад, собак, котів, коней), ссавців зі значним комерційним значенням (наприклад, представників птахів, представників великої рогатої худоби, молочних корів, велику рогату худобу м'ясних порід, спортивних тварин), ссавців з великим значенням для науки (наприклад, вільноживучі або поневолені види, що знаходяться під загрозою зникнення) або ссавців, що у той або інший спосіб мають певне значення. Підходящі суб'єкти також включають: мишей, щурів, собак, котів, копитних, таких як велика рогата худоба, свині, вівці, коні та кози, зайцеподібних, таких як кролі та зайці, інших гризунів та приматів, таких як мавпи, шимпанзе, виші мавпи. Суб'єктами також можуть виступати будь-які члени представників птахів як приручені, так і дикі, та які можуть бути комерційно вирощені для розведення, виробництва м'яса або яєць. Типові представники птахів включають, але без обмеження, курей, індичок, гусей, качок, фазанів, перепілок, голубів, страусів, птахів, що утримуються у клітках, птахів із зоологічних колекцій та вольєрів та подібних до них. Суб'єктами можуть виступати будь-які члени представників великого рогатого скоту як приручені, так і дикі, та які можуть бути комерційно вирощені для розведення, виробництва м'яса або молока. Типові представники великої рогатої худоби включають, але без обмеження, антилоп, буйволів, яків, корів, биків, бізонів та подібних до них. Представники великої рогатої худоби включають, але без обмеження, корів, биків, волів, телиць, буйволів, велику рогату худобу м'ясних порід, молочних порід та подібних до них. Суб'єктами може бути будь-який член представників рибоводного господарства, що включає без обмеження будь-які види риби, ракоподібних, молюсків, що живуть в прісній воді або солоній воді. У деяких аспектах суб'єкти можуть мати діагноз інфекційного захворювання, можуть бути схильні до ризику інфекційного захворювання або можуть страждати від інфекційного захворювання. Суб'єкти можуть бути будь-якого віку, включаючи ненароджених особин, новонароджених, особин пубертатного періоду, дорослих особин, особин середнього віку та похилого віку.

Приклади

Приведені нижче необмежувальні приклади забезпечуються для додаткової ілюстрації даного винаходу.

Приклад 1: Одержання плазміди ЗСМВ75.6.

Карта рОоСМВвВ75.6 є представленою на ФІГ. 2. У роОСМВ75.6 ген резистентності до канаміцину РМВ75.6 (див. ФІГ. 1) був замінений на некодуючу послідовність з Е. соїї К-12. Для одержання плазміди рОоСМВ75.6 одиничний рестрикційний сайт АбсІ вводили у рРМВ75.6 у положенні 5" гена резистентності до канаміцину для одержання рмвВ75.6 Авбсі (ЗЕО ІО МО: 3).

Для введення рестрикційного сайту Азсі аденін, що є присутнім у послідовності РаСМВ75.6, піддавали мутації на гуанін, змінюючи, таким чином, послідовність АОСОСОСС у плазміді росСмМВвВ75.6 на ОБСОСОСС. Цю модифікаці здійснювали при використанні підходу на основі мутагенезу шляхом лігування під час проведення ампліфікації. Використовували один праймер, який мав рестрикційний сайт Авзсі усередині.

Фрагмент Авсі (ССС СОаСс) /Хно! (СТССІАС) довжиною 1779 нуклеотидів було синтезовано за допомогою І йе Тесппоіодіеє стр (ЮРаптвіайді, Німеччина). Цей фрагмент містив п'ять ділянок, що включають некодуючу послідовність з ЕЕ. соїї К-12 (заміни 1-5, скорочено позначаються як "ехс. 1", "ехс. 2", тощо, на ФІГ. 2), Е1 оріджин реплікації та вкорочений ген Іас/ (див. ФІГ. 2). У випадку заміни4 послідовність Е. соїї у ручному режимі піддавали змінам у декількох положеннях для того, щоб підвищити вміст СС плазміди. Крім того, у випадку заміни 2 замінювали один нуклеотид для того, щоб делетувати рестрикційний сайт Огаї, у такий спосіб, щоб у плазміді залишився тільки один сайт Огаї.

Як показано на ФІГ. 2, расСмМВ75.6 містить декілька регуляторних елементів (Е1 оріджин реплікації СММ промотор та риОС початок реплікації) та сайт множинного клонування. расСмМВ75.6 також містить вкорочений ген іас7. Проте раСМВ75.6 не включає будь-яких повнорозмірних або функціональних маркерних генів для селекції або скринінгу. РаСМВ75.6 має довжину 4242 пар нуклеотидів та містить 283 Сра динуклеотиди.

Один позитивний клон, що несе новий введений сайт Абсі (рмВ75.6 Азсі), піддавали розщепленню при використанні Авсі (З5СОС(СсСС) /Хпо! (СТООАС) для одержання фрагменту розміром 2463 нуклеотидів, що містить промотор СММ, сайт множинного клонування та рус початок реплікації (див. ФІГ. 2). Синтезований фрагмент розміром 1779 нуклеотидів АФвсі бо (боСОоСОсс) /Хпо! (СТООАС) також піддавали розщепленню при використанні Авзсі /ХпоЇ.

Обидва фрагменти (векторний фрагмент розміром 2464 нуклеотиди та вбудований фрагмент розміром 1779 нуклеотидів) піддавали елююванню з 1 Фо-ного агару при використанні набору ОіІАдиніск сеї! Ехігасіоп Кії від Оіадеп. Лігування здійснювали при використанні 600 нг фрагменту розміром 1779 нуклеотидів та 400 нг векторного фрагменту РМВ75.6 Ав5сі розміром 2463 нуклеотидів у загальному об'ємі 20 мкл протягом ночі при 16 "С. 20 мкл суміші потім піддавали діалізу протягом 2 годин проти 20 мл НгО на льоду та потім змішували з 5 мкл електро-компетентних клітин Е. соїї ОН5ба та 40 мкл НгО (Іпмйгодеп Е-ї180іасгАМ15 А (Іас2МА- ан) 0169 гесАт епад1! пзант (и, тк") дагрпоА з,ирЕЯ44 А- їпі-1 дугА96 геіА1; серійний номер 1376481, номер партії 44-0097). Після трансформації та однієї години регенерації у БОС середовищі, клітини висаджували на ЇВ планшети без канаміцину при розведенні 107. Таке розведення дозволяло здійснювати ізоляцію індивідуальних клонів.

ПЛР колоній проводили на індивідуальних клонах при використанні наступних праймерів, приведених у Таблиці 1.

Таблиця 1

Праймери ПЛР

Розміщення праймерів АН-13 зворотн. та АН-22 прям. є представленим на ФІГ. 2.

Використовували попередньо підготовлену суміш, яка містить Тад полімеразу. ПЛР реакції завантажували на 1 95 агарозний гель, що включає бромід етидію. Позитивні клони, які містили правильну плазміду (рОСМВ75.6), продемонстрували продукт розміром 606 пар нуклеотидів.

Загалом більше, ніж 10000 клонів, піддавали скринінгу для ідентифікації трьох позитивних клонів. Три позитивні клони негайно переносили на свіжі ЇВ чашки та використовували для створення З банків клітин для дослідження (КСВ; бу5 3733, Зу5 3734 та був 3735).

У паралельному експерименті середовище інокулювали при використанні цих трьох клонів та одержували плазмідну ДНК. Здійснювали повну сертифікацію послідовності кожного з цих трьох субклонів при використанні наступних праймерів, які є представленими у Таблиці 2.

Таблиця 2

ПЛР для сертифікації послідовності

Приклад 2: Одержання плазміди рі асгмМВ75.6.

Для одержання плазміди рі асамМВ75.6 (ФІГ. 3; 5БО ІО МО: 4) фрагмент розміром 1307

Зо нуклеотидів ХпоїЇ (СТООАС) /Ога! (ТТТААА) синтезували за допомогою І їе ТесппоЇодіез СТЬЕН (ЮОаптзайії, Німеччина). Цей фрагмент розміром 1307 нуклеотидів включав частину гену І ас (265 нуклеотидів). Таким чином, при лігуванні у рОСМВ75.6 цей фрагмент подовжував вкорочений ген Гас7, розташований вище від Хпої рестрикційного сайту, та дозволяв проводити експресію гену Гас2 (порівняй ФІГ. 2 та ФІГ. 3). Крім того, сайт множинного клонування розміром 91 нуклеотид замінювали на некодуючу послідовність Е. соїї для того, що усунути гомологію послідовності з новою введеною ділянкою гена ас та уникнути рекомбінації. Крім того, видаляли 5" ділянку промотора СММ (265 нуклеотидів) для того, щоб одержати плазміду того самого розміру, що й плазміда росСмМВ75.6.

Як рОосСМмМВ75.6, так і синтезований фрагмент розміром 1311 нуклеотидів, піддавали рестрикції при використанні Хо! та ОгаІ. Обидва фрагменти виділяли елююванням з 1 95-ного агарозного гелю при використанні набору ОіІАдпціск сеї Ехігасійоп Кії від Оіадеп.

Лігування здійснювали при використанні 240 нг фрагменту розміром 1311 нуклеотидів та 240 нг векторного фрагменту у загальному об'ємі 20 мкл протягом ночі при 16 "С. З мкл суміші змішували з 10 мкл електро-компетентних клітин Е. соїї ОН5ба (Іпмігодеп Е-ї80іас7аМ15 АД (ас уА-ага) 0169 гтесАї епахл! пзан1ії1 (ик-, тК-я) даі-рпоА 5зирЕ44 А- їпі-ї дугА9Уб тгеійАт; серійний номер 1376481, номер партії 44-0097) та 40 мкл 1095 розчину гліцерину. Після трансформації та регенерації протягом 1 години у БОС середовищі клітини висаджували на І В х-сайиРТО без канаміцину при розведенні 102 та 107. Таке розведення дозволяло ізолювати індивідуальні клони.

Ідентифікацію колоній з плазмідою здійснювали за допомогою селекції блакитного/білого, та проводили ПЛР колоній для підтвердження при використанні наступних праймерів, які приведені у Таблиці 3.

Таблиця З

Праймери ПЛР для підтвердження колоній

Розміщення АН-15 і АН-39 праймерів показане на ФІГ. 3. Використовували попередньо підготовлену суміш, яка містить Тад полімеразу. ПЛР реакції завантажували на 1 95 агарозний гель, що включає бромід етидію. Позитивні клони, які містили правильну плазміду (р асЯмМВ75.6), продемонстрували продукт розміром 777 пар нуклеотидів.

Чотири позитивні клони негайно переносили на свіжі ЇВ чашки та використовували для створення банків клітин для дослідження (КСВ; Зуб 3736, Зу5 3737, Зуб5 3738 та був 3739)

У паралельному експерименті середовище інокулювали при використанні цих чотирьох клонів та одержували плазмідну ДНК. Здійснювали повну сертифікацію послідовності кожного з цих чотирьох субклонів при використанні тих самих праймерів, що й для рОСМВ75.6, але замість праймера АН-16 (ЗЕО ІЮ МО: 10) використовували праймер АН-24 (див. Таблицю 4).

Таблиця 4

ПЛР праймери для АН-24

Приклад 3: Імуномодуляторна композиція

Зо Імуномодулятор являє собою композицію, що включає катіонний ліпід та некодуючу послідовність ДНК, описану в даній заявці. Синтетичні ліпідні компоненти імуномодулятора (|1- (2-І9-(24)-оксадеценоїлокси)|-2-І8І(27)-гептадеценіл/|-3-І(гідроксіетиліімідазоліній хлорид (ООТІМ) та синтетичний нейтральний ліпід холестерин рецептували для одержання ліпосом розміром приблизно 200 нм у діаметрі (див. патент США Мо 6,693,086). Компонент ДНК являв собою рОосСмМВ75.6 або рі ас2МВ75.6. Оскільки плазмідна ДНК є негативно зарядженою, то вона асоціюється з позитивно зарядженими (катіонними) ліпосомами (див. патент США Мо 6,693,086).

Приклад 4: Введення імуномодуляторної композиції у моделі ссавця підвищує здатність до виживання при вірусному зараженні

Ефективність композицій імуномодулятора, що описані в даній заявці, оцінювали на моделі ссавця, зараженого патогеном. Мишам вводили композицію імуномодулятора, що містить ДНК расмМвВ?75.6 та катіонні ліпосоми, за допомогою інтраперитонеальної ін'єкції. Імуномодуляторну композиція вводили у концентраціях 0,01 мкг, 0,02 мкг, 0,04 мкг та 1,00 мкг. Контрольним мишам вводили 0,9 956 розчин Масі шляхом інтраперитонеальної ін'єкції. Через двадцять чотири години після введення імуномодулятора всіх тварин заражали вірусом, який вводили шляхом інтраперитонеальної ін'єкції ї (0,2 мл 103,4 КІОБ5О/мл). Вірус для зараження представляв собою хворобу Ауескі (РК). Показники здатності до виживання є представленими на ФІГ. 4. Миші, які отримували імуномодуляторну композицію, що описана в даній заявці, мали більш високі показники здатності до виживання, ніж контрольні миші, у залежності від дози.

Приклад 5: Введення імуномодуляторної композиції у моделі птахів підвищувало вилуплення пташенят та здатність до виживання при зараженні патогеном.

Ефективність композицій імуномодулятора, що описані в даній заявці, оцінювали в моделі птахів, заражених патогеном, шляхом розпилення у день Е19 (ембріональний день 19). У курячі яйця вводили імуномодуляторну композицію, що містить ДНК росмМВ75.6 та катіонні ліпосоми, за допомогою введення іп омо у день Е18 (ембріональний день 18). У контрольні яйця вводили плацебо у формі контрольного розчинника (05МУМ) (іп омо). ВНІ бульйон (розпилення) використовували як імітацію зараження (11). Детальна інформація щодо груп дослідження представлена у Таблиці 5 що приведена нижче.

Таблиця 5

Опис імуномодуляторної композиції для лікування птахів

Група Кіл-сть Опис композиції для Кількість обро- яєць у Іп омо застосування зараження шляхом |Кіл-сть| вивод- |Кіль-сть бки досліді у (день Е18) розпилення лотків2г| кових гнізд" день Е18! (день Е19) лотківЗ

Плацебо ВНІ рідке т 896 Контроль середовище 56 т/Лл4 14

Розчинник (ОБ5УУ імітація

Плацебо т2 896 Контроль АРЕС» 56 т/Лл4 14

Розчинник (ОБУ 1 День 18 інкубації яєць; 2 16 яєць на лоток; З 64 яєць на контейнер (розділений для розміщення двох груп на лоток); 7" Курчат, що вилупилися з кожної секції лотка, переносили до одного гнізда; ? Патогенна для птахів ЕхсПегіспіа соїї (АРЕС).

ДНК компонент імуномодуляторної композиції включав один з трьох клонів ізольованої ДНК росмМВІ75.6 (тобто, Уум77, Х5872 або Х5928). Як можна побачити з результатів, підсумованих у

Таблиці 6, що представлена нижче, як показник середньої вилуплення, так і середня здатність до виживання, були покращені, коли вводили імуномодуляторну композиція, що описана у даній заявці, у порівнянні з яйцями, які отримували контрольну обробку.

Таблиця 6

Показники вилуплення та здатності до виживання птахів "7

Загальн

Смерт. ІСмертн. при! Смертн. | Смерт- а при вилупленні | після ність Загальна | смертн.

Група лікування Кіл-сть| вилуп- | (відмін. від| вилуп- | (відмін. Ісмертність)| (відмін. ленні контр. лення |від контр.| (серед.) від (серед.) зараж.) (серед.) | зараж.) контр. зараж. 01-Контроль без о о о 02-Контрольне о о о

Зараж. 03-Ум77: 1,0 мкг 20,2 96 26,5 96 40,6 96 , о 4 -о о кИо 38,6 96 йдо

Зараж. 04-дм77: 0,1 мкг 20,8 95 22,4 95 5,4 95 о-0,0368 4,9 9о , 17,6 95 йдо о кто 36,3 до 7809

Зараж. 05-Х5872: 1,0 мер 14 о-0,0110 22,1 95 5,7 9 о-0,0023 7,2 9

Зараж. 06-Х5872:0,1 мкг| 14 | 23,0 95 24,6 95 42,0 9ь , 15,5 96 упо о ко 33,9 96 вро

Зараж. 07-Х5928: 1,0 мер 14 о-0,0003 22,3 90 5,5 У 0-0,0001 9,6 9

Зараж. 08-Х5928:0,1 мкг| 14 | 21,2 95 27.7 9 43,0 Зо х Всі аналізи пройшли перевірку (порівняння між двома контрольними групами).

Спостерігалася значна відмінність у порівнянні з контрольною групою зараження.

При введенні елементів винаходу або бажаного(их) варіанту(ів) його реалізації (частини), слова "будь-який", "даний" і "вказаний" є призначеними для того, щоб означати, що існує один або декілька з елементів. Терміни "містить", "включає" і "має" передбачають включення і означають, що можуть бути й інші, додаткові до перерахованих елементи.

З урахуванням зазначеного вище можна побачити, що досягаються деякі об'єкти винаходу та одержуються інші корисні результати.

Оскільки різні зміни можуть бути зроблені у вказаних вище продуктах, композиціях і способах без відходу від об'єму винаходу, передбачається, що усю інформацію, яка міститься у наведеному вище описі та представлена на малюнках, що додаються, слід інтерпретувати як ілюстративну, а не таку, що є обмежувальною.

сЛяСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «ММ» БТСКає, Апігед «120» їІМУНОСТИМУЛЮВАЛЬНІ ПЛАЗМІДЕ «АНІ» вВАХУЯ 65436 РО «ЗБ» 17 «170» оРабевітїп вевсія 3.5 «М» 1 кеї1іх 4242 «вій» ДНК | І «вії» Штучна послідовність «ВО «вай» Нуклесотидна послідовність плазміди ВОСМВУ5, В «НН Її товссоссся асозсссско сссвтїчаса бсазтавсов сутагаєтос саЄазєвасо

БО ссавасаззув стсссатсо асоатсаведо озсЗавосаке тасопозсаває тасскастта 120 дсацпізсатс аааїотатсв сатоссааче ссдссссста гтоасаїсвла товсзозсана

Не сдасссрссе сФзсаттатує ссадтасако вссттасоо асевеісстає сіЗосавотає 34;

Кк У зісстасотат тазжксастсоє татїтквссата зсзацасваї сстоаосвоата сага 200 снозатвас застоавескс звсоапочакЕх ссвазЕстсс вссссвитоа сага ода

Зо застати с сосвссваза ссзасойоас тссванакх зчзтсоасавсва стссассска 42о тсрасосвав Тодесоадізоа зсотасасоц содовпуссх всасазоасац зУстсаєкеа 4і50 чтовассотс асаатсоссто дасасоєсак ссасоктатх ттазссісса гзовзоасас

АЙ їй за свпозчассвзак ссассстксс сстспанассое атсточатнває зоїассаакта вассдесчас мюЮ счагстазаєт асвочзаасто чісогозоазс астозоасала савзотассва закеасавоа

БО сквапстсаво сини савка Зазастопосє стоассовзас воводававст сс то бтаабвавсви стажеазест тТастовсвЕє сасєїткоєсст тіссогесВо ВНУ есКкає

ТО есставозЕс завіт асваЄєЄ стбаавцєтоє сосвассс втассовасє сс с

Зазосзатсся ставу ствоа адсвєссєєс азососоченю востспває атснаЗісоа

ЗЦО ктазЕдваста тесжсвавза теж гтзосежЖеЕ зате тава поста Ата зав а зазвзататиє сатосатаах зесттпаста сзоазссасза хсдоссасас своя

НЯ паза кяаЄ ства чзаасстссса св сзаассКоза асвіаааао 1 затцезвіба Стасів ва ста осзасттвата зі тзсова зівазасває ї4о зас сав вуса сзав сзааосаке сет астас вето КЕ 14 задстсаєса атотаєсття сстатотстЗа асгсатсвовс стоассенеЄх ссстатвого

Те заїсоатасів асттєдасав шссаоастаз сстосаесав созаксасє яса сей іо

ЗО са сЧа стос соОоптассвеє ссастсвааоа зсзотзастас ЗоакаКксяе

І зазаксаацо са ВасЯсвВОа еващннна пів Зоссачсзааа щира ва ї500 ссозсаззазоа Зсесесатас гас с ссакннс сс сосна іо савазассов сесхсваціє звзазосоасо авессспаса зрвастазтаза сахассаоає пкжжКкссссх поазвастеєєс ссатасоцске ссстестєсеа дсссмнсос стассозаїа

ХВ скетассссс СКС ст соасоавсоє сесоссєст сзтлостсає оастоатзооха ай тессвостсо зона тсКо іа Ясне Є Чкосясаває секс і50О чессовассос тосЧсстаАЕ ссоаталста тест їссазаєсссов базавсасод сттатсоасса стос ссастооеза сеанс зоазссоваає за ацсоє таставсзовО сс завос ен стай стасчесєтас ассзоаааяаа саЗіаУско

У ; Ме не чу З се їв квтстосасЄ стосіоааоасє своїтасстЕ сорозааавовВ зіїаотаосї стезасссо й ЕЙ: ві й сназсвааасс ассчстоааса сопе СКЗ вапсвста кеасасеао цю зазна ссегсаазазоа ас аК спасе са така стаді зазазав ботсазозаа асо аЄ сист сстаска сс тоася ста й казазастсв сопе систоаптсах дЗадсеасчкек Вас стасЄ алеля савоззасм замнниюаїс зетсосвЧє сетсажІсї пастасавсоо спра анх такій скстогоєю аіїїзаавзаза заст еєтов саосаосєтес ЄЧавстезЕЕ зсессОо ме зшкаазства застає всссваска совасєсаєс сн естова зма с заївісвіса содсавассо Ззксзсакссс сстазсзацє собзівззаза озазасастаї

А зе т ж а аташе и ж титул г зас ща т гри вжи їх гри в тт вра и «кіКастаса сс сова часа вг Коса Час 5Ео асшдкннісза саосставетс гатссатзак сісооссаою соус состасоує сссоєпстсцо Ззгатоааосс згтазозвоає созссосВасо соаасеопесео пссооісно еБ5Я0 стуасстстоЄє совВесстче Єєтессвсобеєс сЄсчичзкка асссзссЯх сс

Не тацпастссаоа заЕсоасозвссс сдозасоЗаєс стадасссва ззосзоасска тоасазає

БО сн саасча ссасастс зосастНаст дссаєсс ссаакосккКО сан ее зссвасся їзоасзаазав Кбаоасссахо ссозвісосча зствсаасс пасок сов З Ку мм їх я КК Ем В ей5О акгцчнУчнс єесзатовсю тестова зсатіНТсе тассвааєтак сталозаоаєа

ЄЮ твтвсас зазчасестс ахаастсто соасаосатаст атак звана нео»

НН засодосчакє аїсвасаєає бобссвозвлає ссззаасачи ссусоцааєє сонюостсо

З05О зазісассзча ссавьаасоа сссавсскас сатсвсоаоа стжсзатесс пвесоссцЄссх 2 ссівховвад зЗссснтіє зав есКК осока є создстеата весссеса 150

Чебан свсостодВо штсссссє зссстводсо сосєсатово содатаєвка

АВ хгтозагета сстазаазав бзадсаваєв опа сяс зсасвісс ссоваала се

ЗО стдсстзваї сосаавсо заз таЄ тзазасткус зукааасске сагтзавеса 350 псжсактттх сзассазіз) пссосаанїсо освзавсссс ссасззвастса заззавнсвов 32 ссововісн зстОацеКк ЯсЕссацзекк созвасвасва тесастаєти азиаасеоє

АВ зсїссаасих сзавочЧосов азазссетск ассаозасаз соопсссаста соатопавссах

З

Кассскацис везе соосзссосачах зссозсвавс аствазесо азассстаава

КН чес ЗЕбтиннт соазсоснва воссоосоза сага ваза їіБ5ББО зчаазпсува аповусодос посаоаосос сЧесзаоє аусбассасо ссосасоутия ко сксквссасансс сосок закоасассос сасвезасозє зЕсссабсса ссасссвоцє

УВО саЄдсавесто смкниазаоа сезссозоасас соаассЕсЕс сестастасоас слаассоцсоЗ

БЕН задню ато тост сваоО созетавчтЄ сЗогаассс аа сачсвеоае

ЗщюЮ

ЗіХоасвайас асапссає баосососаєЄ забесеаске зстасаВооас азс

ЗО ссооаосессс сессавосво заїссвсаса ксцазіснає зсбоснас зоссакаха еВ пісастоцск зоні аусСата заїсазсатх застастоос саїсосатає зстасастя 08 їтатсасзахта соїасаїста їафїдосісв фтссзатат сассеассая голзасасеов тЕаІтоавВста зїісзвусазтв осоказссватї зсосзостсах стад тсвЕЗОо соска Ката що

ЗачссессЗсо їсасакайст асо с сс с цс аа «ей» й «11» МАХ

Мо те Ви вну хеїк» ДЕК І «ії» штучна послідовність хе «ай» Муклестидна песлтдавність плазміди Юма 75.5 «НН стзааїкатя вщкеїтвака стТКЕуЄєЄвна збесаєзста закєтЕтее зате

ОО вкстстзак сазізассо авассоачказ вазосссктат азабсзвзаззо забачассоя 120 паівшвасто зоба с сао а савоваєса сстастзазпй асатаваЄєт

МО савсоаїсаза сни алаза кс ствЕка поса с се асасо аа ассс а ставісавцк тт созатассе аа асія аатсозааск став ншай

Зю ше ЕХ щита подозаашсє сосоавсосо спадна зааЗдцочацаа

ЗК

ЗІ зосожааацаз ссооаусоста сгасточє запсасаусо чсавсостос ас аес зи свсвсссчсс зсчестаако сессоаствсв сцоссотєє сакісоссах ссащастоКиа

З5О свасскао сзщшююкаае снресзайе скоса стасеассВасє сова ша ссазвозсвах аа нни азсассво сс сао

БО таазасоавсОа пссваєЗаоє чсососзаєз єоастсаєта сзпоЗсовах тацесассцо

Ба жфесссссєтс паосвоадВсс свтасасєкоз атсазтаєто псзактвоасєс азтатсаЗкеа тео тіпа ттатве аосасзааєс аабактечст ато аК зсатесуєтоа какстахатє 7 КО зізататЗія свтКтатакт опстсавсУсс сСлатажовос зссетаєтоа сао Е

ЩО тзастаата стзасзосав ссавесзоса оса бсаівосссе Сас о щезає акаЗетесвсоЯ ссзаабецсє соссмнитеа зсссссзас пасе єє збо саттозсоес захтавсннояо сажзЕссссв сзасзасосс азів Тека ас ца пссзакоапах Зоазосакста сеазсаваста сесвсжсає засесвесаз зас

ОО шВисавакск чсессстакс шасатсвабь ассеоїзавчр косо своє 110 зиатасасовк сесасоває сс стАсСЄ сосні асає срасосажта зов а 1-0 ттзосаки загесеоЕЄ содсвосвоа жовта со саван СЕКС 1250

Чо зависає сссаксаасоЯ ССлааточЗас состав сассАянаАКе о заасцецчасст сссавааіОЕ совок ссосссеВо засосазвато Фо кацоє з35о

Зіна со доаОЗЕстах віваацВво стсесттаає часова аррзсстоца що цаспесаксс асестс пасстссвтя дФазпаєвссй зоавссоахсс асстссссЕ ню севлессоае стат ноз бада спнєсскоа астагштає задав ТецЕ не сасашнвас сеаосаЧека звасасоваз сбтасваася Ффи таза асо 1520 австдоостЄ сссоазасєво Вованестсє сосостссто зсвоусасст аск а 155 совсвоєса сосассКЕ сссоссосасва згас сВстс ссвовсесваа своя

Тай тавасазссо сааесстоах зісоаакКсс ТасвосссчЯ соочатссасх важке аоо

ЗК ше скас соскоЧзссава стсозастас сазвесовтс ватзастако стсвзаавахтх змассккї ацпежеттав сс стаааоє састаасана сзатакетоай Сага сзаКоЄ сло о 5 М ЩО О.О З ЯК

То сиавсіава зассатазвкс зассакхаєса сатетасацеа ефе аЄкЕ дека пая

ТЗ зЕстсссаєв сстсссеєстЗ васетозаас відачаєсуай гесвассвЗЕЕ застав уче :

ЕВ каст тос вості втвас от ссалат завосвасвяо саксасавиє ссдозаата з вазсажшкЕх стсастасаї сої Час ссав Зстсвіснах За с 21650 аієссстловс сассацавсє осссеазвтстсс став ьне ска ставе сісцакавоє

Ї З ? че - СС ьо З З с сан тав Чат натО зассслассва сососооЯчоя запас осо ке сстетжссо сЕКсстснсх сВзссовстсеа ста стсеа кекс се зссаако я зсвссВвостс зстсааме ообсватасоий ствОссасвоа заїсвВвоцоаза азс саОа

АД запазсатоаЄ дацкааавоО ссваслааао бпссводавоє зегяаазааеє сао 2450 ос атадосєтесеа сссссстоаас ні свсв аваасеасо се есВу з зас сасова всссобасвоз зМосазсвазаВ ассвпасах кс ессс аа ссКє

БАК : хе В МУ 5 5 ка Ви паса стскс сід сс зссооаеНес секс ССС

ОО чававасчкоЗ сосеКестсв сВостсвсоає стада какс ссааЗесоо ага

ГО састссавос состава асасовассс сссохісвос осоассастео сасстасе

ТЯ БО

Ффтавстасс ЗсКсоає савоссфа есе тассессасе песакачес

КО зстозізаса дозЕсвусад аосенюак отаЗоєс ссасмвисх стояв тов оКВО цист васе всзЗстасасє зола Застава ссхзсостю оса 340 чЧегаКстз паза саосзшсске сссЗаса авсоваасевє сао

Звю

ЧчснтІхЕ тот тосза ссвосвоаат всезсосаоаа азааазеаес ссавовацах ню сота зес сІкстасооа Згстоасост сабтазаасЗ завастевасв сови акк зх кзоссатов ссзсчестаа чесна ззатсазося пояса сеча воеака сс У с о у чи І чачО Х

З180 стсЗсатдає тоззсвазах зозастосясО сао Тсс роса зимно ет х іх ЕХ і х т х ХУ п Де В вила ан 3340 гаттсвоасєта тоовстацеса саасаозвсаа беоЗоастасє вес сс ттссоОе

ЗБ хассвоусоася. зоасосассско яКтсЕКсКо ССЗ ссатссас асо 3350 засссазаа солодсаасо соусах Фестаоссає засачасех сскасоса іо сін тсоа соска савсх Зазасзоаза поза азс зстаохшеасє заз оо

ЗАВО цЗасвазовкс сет свжсх сасесс стасссоза заакесВвес віастаахе

Ка спатаасчасе ост сзсЗ стсваєсся стасстассє абссраєтає сааосоаває

НЯ зісцедісна ссзачсасн астсеатоа падссоаЗжеє таїсозвЕсво заковестица 3550 асашиннса хсацацестс чсассачесоа зассчєссас саочстсаВо пса

Тк сеспасосза спаси псом ссата сс скЄчссоває асан КоЗ

ХУ5о зазастлзасскоа «сти стеза схсаКсЯаєх отоцеесвосє соком со чассосхаЕс

І зацвсакаоєс асісосєтасс січ акКа стоаадаєт тооссоссаа сесоостоВоє задо осттсстсЕ сег тасвоє ассогссесіс ссоатеча ососатсосс сстаїсосе

ЕНН тжсстазсоЗ остов осооааєтсяЕ ооо кЕсоза вгвссоасс засос сє зо свасстессав ссоасовоааЕх топа ссссас сСессессєс таспазаох мс соо а захсаїсс сшчасаска зстазатааї сосен оаєЄ саецааоска цеха ло стскасссВс сстадеасосв сссозоаасо заїасакаєх сова їекахх безаааачеа 2 дасзаасачоа зас сах Ессос паза чи «в 4 «вії» Як «1 ДНК іо о смуги че ож их, «кіз штТУчна послідовність «ех» «ВаЇх Нуклеотидна посвідовність плазміди ру. АС «НН З тавссЗссєса зсчаасКсесоа сссСсатсазса ссзаєвзатоаВ соїажосЕсс сакавсвасо

БО севасщнвюа сткссасто асеєсаатео зсоЗаоЕвЕЕ твер каває гас Кастко 1250 зсзетасаєс азосотаїтса састссавО ссЧесссства сеЗвсоссаа беасоз над 155 чесспсст опчсассасас ссватасвсто асостасав зсЕсссювс сосаокає 249 вистасотає тасєсаксв тастасєсатеа зтЗатосаЗЕ тесоассвата своя 00 скашжющасиє засне асозацасткє сс е зесссве ша сода і150 зак досассзава хсавенннє сбрсспаває згсЗснасва сссасссВ 42О стаасосзна СЗЗоасСоціа зсотатасоя содою асзезваосла аостсЗЕта 450 проазасстптє азаксосеста наасосеа севосастаєт стовсевся гадзаувосво

У сешоассоак ссВасстссс стоааосся абстовзеаас сасасспака вас

БО спзктазасх асзозаеакто отсотолооє астодосашоа тазатассва оостасзада

БО сачЗатстава ема ссваса паазссшас стоссоазас зазпзайаст стае тай тзавсзачсає стагтдеавс сасїасвЕс света х жтстотссвВо п скає

ТВО тсссвоазекє звасбасасЄ сктавеасває сосавесЕка зЕаСсЄвавсу ссоасаеске що зЗзодозатсса сіацттсєтао зосоаЗссєє вссасоч веастсоцвате зісвавесоу що

Жтваєсваєта гостсовзава сії саско сівустек зас тваз педа ставеа ще воЗазсактт зас віх зестіаєтв озоаксакаа ссвассовівс савоветтага 122о задостсас їїастттаза зазсстоєса сассісвессє прасссав асзіаваака

ОКО азіїцсааіка сота тав сітка псаостсвта атіоцттїзсаз атазаосаВх мо щикатсаєва аєсттсвсева завше астх створ ассесваско еп ЕТаКсе

ТЕО зазстсасся атекатстта това кстао зісассваЕ соски ссстакнахо і850 вассататств астссдакаа ессвовскав сєстасяісва товаєсосс аасасесочя шефасс ттоасосвето сосчсескс состсссса ство Сас се

М петевссдЧо сезсозсВоа соротатклес скастсзаво зкоЗзіватас спе авсса 144 заалесевщо часзасосна пазаднасяе зсбаосааана одоссаосааа закона ню ссекаазазу дссасоаскос СвКессЕ сова сює соссесесек асожщнатса сазззааєсяв ссестсавмс заз тчосоа азаєскцаса сдзассатавяа засвоює 1620 чЕскссссст соозаостесє бсеКасоєтє тсстаЄкссо ассссоссас стасспавта 150 сетшїссасс стЕісжссстЕ стпюазосет чосоУстЕес сазезосткає остогаса 4 тсЕсасо ІНК поч ссая еассувастах зтосеасовас соска я ЯК їв псссовссос трсоссЕКак ссосптавств ссассЕтоВво тссавсссоа Тазове 15650 сттасасса сінна ссасбовкаа сзозаттаЗЄ вегзКкНює заз

Не тоастасвова стос ават сбіЧцеасстаа ствевтяс зссалвацаз паза тасстосаст стестНаоє саустаєске срзазавзазаа пса секта

Ні сзазсазасс авссоостаака сеча срстастас заосезсвая сасЗссає

Мю азазазазца ссотсазазач ассесткм сте стасо се вса сесао кода 21060 сцлавастсз соаїгазчоца Оса теві зацезсоаест ачастто Зк зазаодатсоа ке: сазоавЗтчсао дасолЗзаєс ссстсоасаго зссоавасзао аклозЗоасяа сенс ек сне сасУЄ сооасозазао остаттсоос гзсоастоза свсвасєввсє патефтас ек тствасшсв ссосостссо четотсвосЯ сан асс соте соссазиВсе

НЮ засествсссоЯ счсіосссотаая саяастасав аасзацасень сесасЗс часа 2460 зсващчнисо тЕсстсек воастетастс паса гене сталося ваеншастоє кістю чейдзаовес пф євачає стостесає стсвссттає тестассааа зазвотвссса ссасоЗстеава тусзасчсєпо сопстосаєв сасЕсоВКск сссасстає вад сао асєс пссасчаз зсасскосаїє сшнчникасє част сЗчаЄ сова з ства аооаассє фрасозаца саонннює сососсс соавастаеке

Б чесне їсв адосомнаК чсссоасоєс спаповссссо ссаСовссса соосоВх

ВВ тосстоассов атак чбазазкеє состігссте засссассвА стат аВ

КО сша сосассЯста ЄсезЗоасаєя зФсассозоста ската сСоскоВаОно

КЗ40 сЕтасоасо забобостов сссссосс аКтосткнсо отаке тес о я Уч КЕ ї У кШе ше - :

БИНТ сим есвіса ссстатев сс заст тех засне схо

МБО азасцзскЧа ссавосчасоа сссвасстасє свісвсовеВ ссср стсс весссКесх зі тетагозаха пЕтеззсЕкс зЗозаесК тссоазавсас сосок астскаде іо

Яка саке ср асссіазасо сс созЧесасака 1540 тстозасесв сттаозалза тазасававта сс ссоєЄ чсасвтвсє ссовавяЧчео 300 сепскстааає сеансах завше К саззЗавсск атак гасла са

З1650 четсВстЖеЕ слассвасвВо ссссаавіст зчсваазасссс ттабзаатсв завлозятаоа

З 4 й о ссскшатало зстозакекх зкссвасї позасаов сссестаха заовасакоо

ЗаВО зсєссавсоє сзаавчосов зазассоксх вісвоцеасча соосссвесв сотовассає 1540 скассствасс ав ЄсКсаЇ ЗачЧесає соссотанчає ага жасеставзо

Зоо пиавесссссв згттвавасе совсоФооаз воассчОсона сесЗзасоваа аасовзООда

МО щас зоааасаНс ста сає хЗасалпх все саса сзсасааа

А Мчч 5 яко Зм че ОК, у МеВ

Зам сезвссвсасс сассвсаЄєте азтасссаЄ бТасшнкнвеє оісссвіса соастєвоае

І сег З чу х Ж ЖЕ ц За 3 - г г ій ке ца г Зі С ще ЕЗ то. ак СЕ в ж СЕ ах важ ЕЕ вх д уд ся. иа «каска Союз созкоцо с секс ска асис кас 84 зацЗазцаве ст асавм сова осот запас свое пітославаєс завсдУсесяох овососоасої загасааєтс астатавазс заз ка

З са ссссс сстсоавасва пасставівса тточвассазв зекЗзасаакх Висока ча з З 4820 шиассЗате азбатзоасасв звІсзвоВсо постакне сактосиовс зга таєств зо таїсаізаєз тозтасаткса сзітЗасЕса стссвасаЄ зассассако гтоагаттода з140 таза за стната зіанісватє зом касстсасноа состава 4280 за ссозсо хсвсвтазсЕ Єзспесавах засос с

ОА

«віх 4 «віїз Я «вій ДНЕ «вій» йШтУчнНІ ПОСЛІДОВНІСТЬ

ТУ и «аїх НуУуКкАВОоТеиДнНа послідовність плазніди піастМВУ. в «Ох 4 їзассчссса асоаасссссо сссвісцасо ссзатвнаков соїасуєосє сесзоаєваса

БО ксватвопЗа ската зсЗсвасос сосоВааКх тасоаптааає сс

Те зсвоустасакс заосатакся сатуссават ссоссссста стос ссва коасооКаяа їКО цадессассю дасвсмеє ссазтасвто аессттвсооза аоссстсостає соодсаокас ве ащіасотакх таптсатсеє бтаттассата чола ссНЕ гетоссВа сао

КІН скасчасвох Зохетовскс асодзоатеє ссаааїєтес зссссветоа сзсааа ї5О0

ВЖК Зосассазав стсаспоазчає стіІссовааах пса саа стека ах їтовсасвааа Содосечеве ЧсотоївсодО Сода атабаасво востсоееа з чіФчассвтЄ адаїчнста ашннчесак ссасоскоЕе гтоасскеся база

Б сзовсса сс стбсоаннже зсстзакавс зоаївзссзака встаю

БО сЧастазаст всазаачісо зссотазаас стшосваао бавотассва сс асваів

БО свачіставо бзоассвасВ пвавВстоеас стостсоовоавс лового х сонна інф

Те ш-щактапосас статок састовсвтс сасстасст ст ссаєс вовка 7 тсссвазїс вВзсевсвосЄ сбіаавсаОс СоаСсазавса зааїтессссов авнатсассв ва їсозатчане ЗотЗаватна стїсСсєстаза сбвааєтотацє зо чезо сасодсвкав

НюЮ тлаассвмни в сЧсссвазва стае сек аа лаз зов тавея

ЗБ ззпаакаєтЕ застав Е Зессв та зазаєсаєна хсаЗссвсаЄє сасаБкса. що питає стоастстзва ваз сассссссс сова сова асасзавасо 1050 заїоасватн соток таз ста а ослосттака аідостасва зкаавосаах

Ам визгсасва азстсасвла базаЗзсасТК тс стеас висстазета ЕТ еє ї-0О заавстсовзвса зсзсатсуа бавтеїстоз зва стос ссесіаако вуса акжтссозкаа сосСсачскаа сстасактна саван ваКкОасусоцо

ТЗ сФесадасочх скасатаєс озсоктеєтс сосссссєсо стевссчакх сзстсасте їз25о пессестсей ссаслзсавВа соосвісвоас ос соваа сова ас са ассса: 144 зааассСсцню часа зазапавсях зас азаВв зоассвасааа мода ї550 ссоатазазває псососаіс Сас сен є сасссссстЯ зсоаоасатся 1566 сазаваісцв сосісвазЕс вовчЗісннкоа зазсссзаєсв ооастатваа заївссвооЄ 1529

Пт тсссеск сравсєстесю їсотассте сестер стска асостостає стассоуата че сет Тесс содцазоасає оасСосЕЕст сакачстсвс зстакавота 1740 1800 щссаасєс рве стаї сзютавста ссассттем сссазссспе садове вспа

НЕ сттатчнсв стос ссастостаяа савватеває зезасовчає ас саааесов їз

Тассавсаоннца тест заавК сЗспчссіай Стас ає зстаоаазЗав апа Оов таїстеасесе стос с касеЕ соозазазвоа зо сас стос - 55 у зе іх З іх з МЕ хх х м я сазасзааски авсофсєзка сосок ссгсостоасє аваслоасваа сТтасососаа аю азазаааоца сстсазпввоа аксстосеав сток тстасо Зазистаасо стсватодаа

ОО смвваавсссв сегнасн кто сочасоасасст зво оас аа з З т д Я вл лок м У хм за кл саволозсвоа Чаїовечаєс зотсстсазе стажі ст частосвасо оиасватвацче

ЕКО сісСтосзтоа аставназав заоч Естоав Саосаостеє тозастаУєх всссасска

Мі ев азазшказ азаттстатєта зсктзазатса сстваносасс что спасає застав зпзсазоасса аствсассс сстзасзаос бас аааса паватастає

РУ сссаттоаса чес стос пасогНаеас загс зассазсцує

КУ зссоалатаз свесскаажс свІссатаак стодессвоя сову аоє сеанс ве сиза ссабавшс зстазаласє соасссяасоа саассчоасоЯ чес

Кая й аа сктасскстас колеса стає сбиесоссо сассснсоє сетсвісоао що твпестссоц зтсосовесс сОовеоск стоцосссво одвосочеєта ковсааацоє

БО соесвосов тс актЄ зосаттвс дсосясоачає созатсскто саопаасскЕ еВ авиБсесоасси їассазаввя Соааосссаво ссватсосов за тоаксс саке зака | і | | | І аа, акцент с осзасоасо ссстатотва осот сса Кассавежкох ставав аа хатівсастаєс озоЗасасєко асазвсЕсто соатаосатає асозцОоЕкЕ огаталаваАх

ЗО деасобасовх ассвасно сессзовазає ссоавасвах стоасочаєкх стос но зазсавоесиа ссозаЧсоак сесавсскає сала ТЕ тскавЕтсс всех

Зо мств зазаз зссоцастже чЧозвесаКо ссосЗОас своасточаАка асскскксВак

КК чсоспзЗасст састоссоспвоа сте с зссссворКкоа сестсакзва сопакасака зе тттазатата їттївазазна тавасачаатия поза зоевовіссоє ссеопнаввОєу

КК Є БО ко З ня в; ссасставих гогавдосов зага ксоз сСвазастсес зсївавжетЕ тестааахса

Іо зЗстсаксстІх сзвссзатво зссозаатсо Осазавієсс Єтаївватся зазовахешв сстпзаатзоад зстазватаке чт ссацЕт Зозасвваза хссзстаттв аззазасакаВ з45О астссвасає сааасеоасця авзассЯєх зісвнюнеа бозсоссаєта сотпвавссах ї540 касета заз зоаассскНнюх зскЗсазме аск ща

Мч зазасєсссса агіїннн їх товсзоЗоаза засссоав сзсаосозоа ааодлавав

ЗАД вив ззаавасойа зосазсон астаоасоє соепсаеакає зсопеесасо сносокад

Зо сивссзсасс сессопскаск засо сосеас тес с аск Ко сс

Т78о їасосвасєо сісозаеов спасає посох остастасосє свостоасоа

ЗВ дазоачочато теастосавза созсталоаст спа авасесє ат сао сцає

ЗНАК

УК огааяас частссвах сзшсесасоє забасфнє вствіноЗос зааітовОа зз5О ссодассесс сстсзаодзіс засзасасєсо асзаосєтоая сасспааето стос 5020

Ззозцасссає ктазссстаза осооссоссв сосен астсквоасте кате

КО сином ає савсбсоесе сссоасесаз сов вас тебя

ЕІ зак такссує бсавсааттєс зсзсавсата селоссодая осатазачта тазАасстоо

СУ жусстзає сассзчацества астсзсвіта аттоасаєтах з че4у «ах 5 «ії» 20 «ам ДНК «24іїз Штучна песлідсвність «ей» «ве Пранмер «МНЕ 5 псососоцав ссссотасто о «Ох б «ії» 20 «їй ДНК | , «їх штучна послідовність «ох «вай» Ппранмеюр «а: 5 чек ссос секс сасе

КЕ

«МН 7 «Ех «21їз ДНК «вії» ШтУчна послідовність «Мах «гаї» Йраимер «КН у честоасасх снроовасо ве «Ах 8 чо са «ім ке «Тих днк «Кіїз Втучна песлідсвність «сах булу т. уж в вжи «ек йїм Праймер

НЮХ Кк

ЧегссовоєтЕ сузасанана те г кам З «із В «12» ДНК «ем ЩІ Уч послав Ссь «Ох

Коль оч «б23з Пйраннер «Нюх З зве зас КК сах зе пАя З я- М «і 10 «Й» 9

Ж. ра аж ж «Тї0» ДНК «ії» щтТУЧчЧНа ПОСЛІДОВНІСТЬ «ва «веЗх пранмер «Ні 0 педвоазостса сссвосоаас со ще каз І «іх кі «Різ ДНК «Їх штучна послідовність «лк «ве Пранмер «кН чвісатаатс аоссВівсса с

Кая «й» 5 «Ії» й зряту зі «10» ДНК кеша Штучна ПОСЛІДОВНІСТЬ «а» «ем пПранмев «ані 13 сеасксав ссавсссчеє часа

ЯР

Зб ке» 15 «ії» 4 «Рій НЕ «ії» ШУ чНаЯА послідовність гук ке» «ваї» пвайМЕр «НК 13 скасавотае созстссса оо

Я

«Мій» 14 «вії» і «віз ДНК «вії» тУЧчЧНаЯА ПОСЛІДОВНІСТЬ а» дк щи «ей праймер «НН» 14 сізатсжню састатавсах є ур «М 15 «їх ох «ай» ДНК «ії» Штучний послідовність «ей» «ек» праймер «ніх 5 тссасвовах саеавозЗатаа со с: ка» 15 «КЛ» 23 кед» ДЕК «кіЗ» ВтУучна іннлідОовніств «ке» п, З кекси» пПЮдИиМмеЮ «В» о еїсвстсаї тазасасссс Зоо

З

«ав 17 «ех ек «їй ДНК

Ве Трек сіху 5 злу ні не «3» шШтТучНня ПОСЛІДОВНІСТЬ з ек й» «ВІЗ Правимер «В» У косохватас часте о ак

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

   1. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК, яка включає молекулу нуклеїнової кислоти, що має принаймні 89 95 гомології послідовності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1.

   2. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 1, де молекула нуклеїнової кислоти, що являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, яка має гомологію послідовності з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 1, є вибраною з групи, що складається з 91 об, 92 95, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 95 та 99 95.

   3. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 1, де молекула нуклеїнової кислоти включає ЗЕО ІЮ МО: 1.

   4. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 1, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій.

   5. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК, що включає молекулу нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 гомології послідовності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 4.

   6. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 5, де молекула нуклеїнової кислоти має принаймні 85 95 гомології послідовності з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 4.

   7. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 5, де молекула нуклеїнової кислоти має принаймні 86 95 гомології послідовності з послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 4.

   8. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 5, де молекула нуклеїнової кислоти являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, що має гомологію послідовності з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 4, вибрану з групи, що складається з 87 95, 88 95, 89 Фо, 90 Фо, 91 Фо, 92 95, 93 9, 94 о, 95 90, 96 95, 97 Фо, 98 90 та 99 95.

   9. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 5, де молекула нуклеїнової кислоти включає ЗЕО ІЮ МО: 4.

   10. Композиція імуностимулювальної послідовності ДНК відповідно до пункту 5, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій.

   11. Імуномодуляторна композиція, що включає: а) послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 8995 гомології послідовності з Ко) послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1; та р) ліпосомальний носій для доставки.

   12. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 11, де молекула нуклеїнової кислоти являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, що має гомологію послідовності з послідовністю ЗЕО ІО МО: І, вибрану з групи, що складається з 91 95, 92 95, 93 95, 94 9о, 95 Фо, 96 о, 97 Фо, 98 90 та 99 95.

   13. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 11, де молекула нуклеїнової кислоти включає ЗЕО ІЮО МО: 1.

   14. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 11, де ліпосомальний носій для доставки включає пари ліпідів, вибрані з групи, що складається з М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М, М, М- триметиламоній хлорид (ООТМА) та холестерин; М-(1-(2,3-діолеоїлокси)пропіл|-М, М, М- триметиламоній хлорид (ООТАР) та холестерин; 1-(2-(олеоїлоксі)етил|-2-олеїл-3-(2- гідроксіетил)імідазоліній хлорид (ООТІМ) та холестерин; та диметилдіоктадециламоній бромід (ОБАВ) та холестерин.

   15. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 11, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій.

   16. Імуномодуляторна композиція, що включає: а) послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 гомології послідовності з послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 4; та р) ліпосомальний носій для доставки.

   17. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 16, де молекула нуклеїнової кислоти являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, що має гомологію послідовності з послідовністю ЗЕО ІО МО: 4, вибрану з групи, що складається з 85 95, 86 95, 87 95, 88 Ус, 89 95, 90 Фо, 91 95, 92 Фо, 93 9, 94 Фо, 95 Уо, 96 95, 97 9о, 98 95 та 99 Ор.

   18. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 16, де молекула нуклеїнової кислоти включає ЗЕО ІЮО МО: 4.

   19. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 16, де ліпосомальний носій для доставки включає пари ліпідів, вибрані з групи, що складається з М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М, М, М- триметиламоній хлорид (ООТМА) та холестерин; /М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М, М, М- триметиламоній хлорид (ООТАР) та холестерин; 1-(2-(олеоїлоксі)етил|-2-олеїл-3-(2-

   гідроксіетил)імідазоліній хлорид (ООТІМ) та холестерин; та диметилдіоктадециламоній бромід (ОБАВ) та холестерин.

   20. Імуномодуляторна композиція відповідно до пункту 16, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій.

   21. Спосіб стимуляції імунної відповіді у суб'єкта, що включає введення суб'єкту імуномодуляторної композиції де імуномодуляторна композиція включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 89 95 гомології послідовності з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 1, та ліпосомальний носій для доставки.

   22. Спосіб відповідно до пункту 21, де ліпосомальний носій для доставки включає ліпіди, вибрані з групи, що складається з ліпідів мультиламелярної везикули та екструдованих ліпідів.

   23. Спосіб відповідно до пункту 21, де ліпосомальний носій для доставки включає пари ліпідів, вибрані з групи, що складається з М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М,М,М-триметиламоній хлорид (ООТМА) та холестерин; М-(1-(2,3-діолеоїлокси)пропіл|-М,М,М-триметиламоній хлорид (ООТАР) та холестерин; 1-(2-(олеоїлоксі)етил|-2-олеїл-3-(2-гідроксіетил)імідазоліній хлорид (ООТІМ) та холестерин; та диметилдіоктадециламоній бромід (ОБАВ) та холестерин.

   24. Спосіб відповідно до пункту 21, де введення є вибраним з групи, що складається з внутрішньовенного, внутрішньом'язового, внутрішньошкірного, інтраперитонеального, підшкірного, при використанні розпилювання, у формі аерозолю, введення іп омо, перорального, інтраокулярного, трахеального та інтраназального.

   25. Спосіб відповідно до пункту 21, де імуномодуляторна композиція додатково включає біологічний агент.

   26. Спосіб відповідно до пункту 25, де біологічний агент є вибраним з групи, що складається з білків, що підсилюють імунну відповідь, імуногенів, вакцин, антимікробних засобів та будь-яких їх комбінацій.

   27. Спосіб відповідно до пункту 21, де введення здійснюють перед контактом з інфекційним агентом.

   28. Спосіб відповідно до пункту 21, де введення здійснюють після контакту з інфекційним агентом.

   29. Спосіб відповідно до пункту 21, де імунна відповідь, що стимулюється, є вибраною з групи, Зо що складається з неспецифічної для антигену імунної відповіді, специфічної для антигену імунної відповіді, вродженої імунної відповіді, адаптивної імунної відповіді, гуморальної імунної відповіді, опосередкованої клітинами імунної відповіді або їх комбінації.

   30. Спосіб відповідно до пункту 21, де суб'єкт є вибраним з групи, що складається з представників ссавців, представників рибоводного господарства та представників птахів.

   31. Спосіб відповідно до пункту 21, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій.

   32. Спосіб стимуляції імунної відповіді у суб'єкта, що включає введення суб'єкту імуномодуляторної композиції де імуномодуляторна композиція включає послідовність нуклеїнової кислоти, що має принаймні 84 95 гомології послідовності з послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 4, та ліпосомальний носій для доставки.

   33. Спосіб відповідно до пункту 32, де ліпосомальний носій для доставки включає ліпіди, вибрані з групи, що складається з ліпідів мультиламелярної везикули та екструдованих ліпідів.

   34. Спосіб відповідно до пункту 32, де ліпосомальний носій для доставки включає пари ліпідів, вибрані з групи, що складається з М-(1-(2,3-діолеїлокси)пропіл|-М,М,М-триметиламоній хлориду (ООТМА) та холестерину; /М-І(1-(2,3-діолеоїлокси)пропіл|-М,М,М-триметиламоній хлориду (ООТАР) та холестерину; 1-(2-(олеоїлоксі)етил|-2-олеїл-3-(2- гідроксіетил)імідазоліній хлориду (ООТІМ) та холестерину; та диметилдіоктадециламоній броміду (ОБАВ) та холестерину.

   35. Спосіб відповідно до пункту 32, де введення є вибраним з групи, що складається з внутрішньовенного, внутрішньом'язового, внутрішньошкірного, інтраперитонеального, підшкірного, при використанні розпилювання, у формі аерозолю, введення іп омо, перорального, інтраокулярного, трахеального та інтраназального.

   36. Спосіб відповідно до пункту 32, де імуномодуляторна композиція додатково включає біологічний агент.

   37. Спосіб відповідно до пункту 36, де біологічний агент є вибраним з групи, що складається з білків, що підсилюють імунну відповідь, імуногенів, вакцин, антимікробних засобів та будь-яких їх комбінацій.

   38. Спосіб відповідно до пункту 32, де введення здійснюють перед контактом з інфекційним агентом.

   39. Спосіб відповідно до пункту 32, де введення здійснюють після контакту з інфекційним агентом.

   40. Спосіб відповідно до пункту 32, де імунна відповідь, що стимулюється, є вибраною з групи, що складається з неспецифічної для антигену імунної відповіді, специфічної для антигену імунної відповіді, вродженої імунної відповіді, адаптивної імунної відповіді, гуморальної імунної відповіді, опосередкованої клітинами імунної відповіді або їх комбінації.

   41. Спосіб відповідно до пункту 32, де суб'єкт є вибраним з групи, що складається з представників ссавців, представників рибоводного господарства та представників птахів.

   42. Спосіб відповідно до пункту 32, що додатково включає фармацевтично прийнятний носій. ВУ НЯю я яв шк Меамірню пріжни ЕВ СУ МЕрм ЗИ дня ше талі МВ с: ва ІН Яеяи Каб В 000001 Ку ра щ З НН НОВ, Вищі МІ; ОС шк . вм Б: ваниню З ши ННЯ ВСУ епхівро Соя кн зріяжив З у о Ши офисе МмуУ СЯ ск, й Шк ЗНО 5. нання Нет ох їй С вювмитвво 0 бер п вч КОЖНИМ В Не х Ві Кма 7 МЕ й Сх вав отв» НЕ ми ЕЕ "Вжіпх) / нив ХУ Ночі А)

   ФГ. хвої. х - т смут "у сви ще вкорочений ас й Віпсн я 7 ; ЕсоНУ шк і ЕсоВІ ий х у З) п ж бота З Вахжні Ї сем мов Хва! ; Мой АНІзОвюр) Й 8756 Фо ре Засії ! 3000 4242 п. ! 5 5 ши / У зво / а : ї / бь ехо, З 2 РИС орі

   "о. ехо. ! Ав

   ФІГ. 3 Кп І ро Я ай в АН-ЗО й "в де» ра ДЖ вкорочений СМІУ Ри ОВ хх у | ізсй, зих вВаК М и і ій хі х ОО АНІ І / б, вхо. мов у І ріаасМВ75,6 - Дт ; ке смюз ЗЯЕ п; У ехо. 5 / КО ваза / : і / ЗБ ехо и й я ра З й ехсуй РОС орі ра ра зх шани а Ж КОДИ тек ШО й в заай рай І Ава

   ФІГ. 4А

   100. ср Н я зх з щ- Я УЗ ь фена но | в е і ЕНН я я 70 З Кк ї нпнененетеесеютсвевсссннт» ме мі но ние Ж А із їх еко РОК) муку вМ0В?5:6 ке: іх 5о 1 3 теенждомрМВІУЮ 00 а : - 50 хя знавнннть 02 яКгрМІВТ5.6 ГЕ Бан Ж щі жяею бОгМКОРМА?56 00 В Е 4оа ! я і зе ох одматроєМВтяє с ед в і а х сет ді мк РОСМВТ ВК ко Й : пої - 30 ее У ен обох роюМмнияє од З | у у луки кухИ чи окт пеню кохтрол» - СЕ г. т ва 2 І У а зх - 10 1 Др ВХ це чьх 0 ре ртетттт врнт вне 1 2 3 4 .щД.56797 8 9 10 Днів н.ї.

   ФІГ. 48

   109. -неоюсовюттюютєтккоку й ! 5 що Н я

   І і. ре й х яа 4 Є зим жене 2555 сб» зх З 73 ; і З БОТИ 75 5 Е Ше ЖИ Е І! і» ! те ійа корм Я око Вр и 4 і ее зФе«Ззвьегае Фей мкрМВтяйХ 00 В А ! 5 В Френе и зе ваметтьо З: мат рН Т5 а плоту о Н З З з ДИМ ой 4) 55 4 8 й Кк "всевекоег вкажи ТІ мку ВМТ ПЕ еВ ' : . же «фе 8 «ке з2ввеже ав схе МюзкроСМВІЗЮ ЗВО 404 5 ва кн впркеиююмнтх я А Н ї 5 о мк ром о ПЛ що ї я 5 "Чронкемннюввювввквих мову мету й ВВ за 4 х пит ях Н З вною і мкерОЄМВТя Є СО ОВТ 2 4 у р У В В яякк ке Ковувиль дл як А а іч Ма 3 р свячення ртуттю КК хю седіню ню, - ЗК» - ЗК - -пЯЯя- авт. ИДЖая» ї 2 Є я 5 5 7 В З І Двів вп.