UA116221C2 - Спосіб отримання рослини petroselinum crispum, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність - Google Patents
Спосіб отримання рослини petroselinum crispum, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність Download PDFInfo
- Publication number
- UA116221C2 UA116221C2 UAA201506110A UAA201506110A UA116221C2 UA 116221 C2 UA116221 C2 UA 116221C2 UA A201506110 A UAA201506110 A UA A201506110A UA A201506110 A UAA201506110 A UA A201506110A UA 116221 C2 UA116221 C2 UA 116221C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- plant
- protoplasts
- cytoplasmic male
- male sterility
- plants
- Prior art date
Links
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 title claims abstract description 133
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 240000009164 Petroselinum crispum Species 0.000 title description 6
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 claims abstract description 86
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 claims description 40
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 claims description 40
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 claims description 12
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims description 12
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 claims description 12
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 10
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 8
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 claims description 6
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 3
- 241001611408 Nebo Species 0.000 claims 1
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 claims 1
- 241000208317 Petroselinum Species 0.000 abstract description 26
- 240000006927 Foeniculum vulgare Species 0.000 abstract description 25
- 235000004204 Foeniculum vulgare Nutrition 0.000 abstract description 22
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 abstract description 4
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 abstract description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 abstract description 2
- 240000004370 Pastinaca sativa Species 0.000 abstract description 2
- 235000002764 Apium graveolens Nutrition 0.000 abstract 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 description 21
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 9
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 9
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 240000004133 Petroselinum crispum Radicosum Group Species 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 4
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 4
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 3
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 3
- 241000256626 Pterygota <winged insects> Species 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 3
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N trans-Zeatin Natural products OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 description 3
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 description 3
- 229940023877 zeatin Drugs 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 244000078127 Eleusine coracana Species 0.000 description 2
- 235000013499 Eleusine coracana subsp coracana Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 2
- BNWJOHGLIBDBOB-UHFFFAOYSA-N myristicin Chemical compound COC1=CC(CC=C)=CC2=C1OCO2 BNWJOHGLIBDBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002079 ragi Nutrition 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- NTDLXWMIWOECHG-UHFFFAOYSA-N 7-labden-3beta,15-diol Natural products O1CC(O)(CO)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC(C=1)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C=C1 NTDLXWMIWOECHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYLBTCQBKAKUTJ-UHFFFAOYSA-N 7-methyl-6,8-bis(methylsulfanyl)pyrrolo[1,2-a]pyrazine Chemical compound C1=CN=CC2=C(SC)C(C)=C(SC)N21 MYLBTCQBKAKUTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 7h-purin-6-amine;sulfuric acid;dihydrate Chemical compound O.O.OS(O)(=O)=O.NC1=NC=NC2=C1NC=N2.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000662 Anethum graveolens Species 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000018436 Coriandrum sativum Species 0.000 description 1
- 235000002787 Coriandrum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 244000304337 Cuminum cyminum Species 0.000 description 1
- 235000007129 Cuminum cyminum Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000007265 Myrrhis odorata Nutrition 0.000 description 1
- 241001077878 Neurolaena lobata Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 description 1
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000017769 Pastinaca sativa subsp sativa Nutrition 0.000 description 1
- 240000004760 Pimpinella anisum Species 0.000 description 1
- 235000012550 Pimpinella anisum Nutrition 0.000 description 1
- 208000037062 Polyps Diseases 0.000 description 1
- 241000435574 Popa Species 0.000 description 1
- 241000257185 Sarcophagidae Species 0.000 description 1
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- NTDLXWMIWOECHG-YRCFQSNFSA-N apiin Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@](O)(CO)CO1)O)O)CO)C(C=1)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C=C1 NTDLXWMIWOECHG-YRCFQSNFSA-N 0.000 description 1
- NTDLXWMIWOECHG-WJAPLXOZSA-N apiin Natural products O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1Oc1cc(O)c2C(=O)C=C(c3ccc(O)cc3)Oc2c1)[C@H]1[C@@H](O)[C@@](O)(CO)CO1 NTDLXWMIWOECHG-WJAPLXOZSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 235000005473 carotenes Nutrition 0.000 description 1
- 150000001746 carotenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000010154 cross-pollination Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002298 density-gradient ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 235000021189 garnishes Nutrition 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005849 recognition of pollen Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 229950001870 spizofurone Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- -1 vitamins (bispega Chemical class 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/06—Apiaceae, e.g. celery or carrot
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
- A01H1/021—Methods of breeding using interspecific crosses, i.e. interspecies crosses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
- A01H1/022—Genic fertility modification, e.g. apomixis
- A01H1/023—Male sterility
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/12—Leaves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/02—Preparation of hybrid cells by fusion of two or more cells, e.g. protoplast fusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/14—Plant cells
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Винахід належить до способу надання рослини Petroselinum crispum, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність. Спосіб включає надання перших протопластів, отриманих з рослини Foeniculum vulgare Mill., в якій перші протопласти мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму, надання других протопластів, отриманих з Petroselinum crispum, в якій другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті немодифікований ядерний геном, злиття вказаного першого і другого протопластів і отримання зі злитого продукту вказаних першого і другого протопластів цитоплазматичної рослини Petroselinum crispum, яка має чоловічу стерильність.
Description
Еоепісшит миїдаге Мі), в якій перші протопласти мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму, надання других протопластів, отриманих з Ретгозеїйпит спієрит, в якій другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті немодифікований ядерний геном, злиття вказаного першого і другого протопластів і отримання зі злитого продукту вказаних першого і другого протопластів цитоплазматичної рослини
Реїтозеїїпит спзрит, яка має чоловічу стерильність.
Р Ко лот КАК ККАЛ КК КАХ ХК ОХ усе КАК КК КК КК Ко УК Ко о АК КК КК о ою как сх жен, ! ва за Тк індевс БРожем Середня Понна Глен сук
ВаьТЕ звяК аж « чи ча «ча ла
Заіка раною ЖЕ Ві кафе ; с ше ше Ж, ОЗ, екранні ані Іва кана Я а ЩО 5 о ев зао м пн ех пн о Я ем. ще ; ї ї : ї і ва 1 ! ї
Е ї і і с Жю 5 Ї ноя ї і ; ! ї З !
ОН з : ! ї Н шк ; і ; ; З о і ; і . ї 5 ве мае до перен етеру учет трекер ! ї З БІВ ча 158 ЗО ЗО де м ИН во рення в он ОКО ККУ нн ; с сосни нн ам ооц Кон ах зоінннннння ій анна вен і РАХ Я ї»ь Ще З Цвнакнзьции кі 3 ВАМ щі Б.В ! а Маю в КОЖ 0 Чевнайм ої 3
ЗХ чі ях ІЗ 2 З З р оїхоеб яю ше і
ФГ, Я
Даний винахід стосується способів надання цитоплазматичної рослини Реїгозеїїпит стігрит, яка має чоловічу стерильність, рослини Реїгозеїїпит сгізрит, що має цитоплазматичну чоловічу стерильність, і насіння, клітин, тканин і їх рослинних частин.
Реїгозеїїпит стігрит або петрушка належить до сімейства Зонтичні або Селерові. Членами цього сімейства є плосколиста петрушка (Р. сгізрит маг. пеароїйапит), петрушка з листками, що закручуються (Р. сіізрит маг. сгізрит), і петрушка Натбигуд або коренева петрушка (Р. сгізрит маг. шрегозит).
Петрушка листового типу часто застосовується як гарнір і має типовий аромат, викликаний типовими леткими оліями, подібними міристицину, і флавоноїдами у вигляді апіїну.
Коренева петрушка має довгий, м'ясистий, білий стрижневий корінь, що звичайно застосовується як овоч або що використовується в супах або рагу. Корінь багатий на каротини, вітаміни В2 і С. Листки рослини готують подібно листовій петрушці. Коренева петрушка особливо популярна в Німеччині, Австрії, Угорщині і Росії. У Західній Європі ця культура в цей час є такою, що заново відкривається, особливо в органічному плодівництві.
Іншими членами сімейства Зонтичні є, наприклад, пастернак (Разііпаса займа), морква (Оацйсивх сагоїа І..), селера (Аріит дгамеоіепз І.), фенхель (Боепісшит мицїЇдаге МІЇЇ.), кмин (Сагит сагмі), аніс (РітріпеПа апізит), кріп (Апеїйит дгамеоіепв) і коріандр (Согіапагит заїїмит).
Для культивації петрушки в цей час доступні тільки перехреснозапильні кросбредні сорти.
Внаслідок відсутності чоловічої стерильності або, наприклад, самонесумісності сільськогосподарської культури, неможливе утворення Е1 гібридів.
Е1 гібриди загалом мають переваги над перехреснозапильними культурами. Відповідно до керівництва "Ргіпсіріеєз ої Ріапі Сепеїіс5 апа Вгеедіпд" Бу а. Асдиаай (Віаскмеї! Рибіївпіпоу, ІЗВІМ- 13: 978-1-4051-3646-4; 2007; спарієег 18) гібридний сорт являє собою Е1 приплід планованого схрещування між інбредними лініями. Критична вимога до виробництва гібридів полягає в тому, що батьки повинні бути неідентичними. Ця дивергенція надає гібридам їх перевершуючі характеристики через задіювання гетерозису або гібридну силу. Гібридна сила може бути визначена як збільшення розміру, сили, родючості і загальної продуктивності гібридної рослини порівняно з середньою продуктивністю двох батьківських рослин (ІБід, радез5 334-335).
Придатність Е1 гібридів для петрушки вважається такою, що має перевагу над існуючими в
Зо цей час перехреснозапильними кросбредними сортами через ряд причин. Е1 гібриди порівняно з доступними перехреснозапильними сортами звичайно мають поліпшену схожість, більш високу врожайність, велику силу і/або високу одноманітність.
У цілому Е1 гібриди сільськогосподарської культури можуть бути продуковані із застосуванням батьківських ліній, які мають чоловічу стерильність, які є по суті нездатними самоопилятися і застосовуються як материнські лінії. Альтернативою, відомою для культур
Вгазвзіса, є застосування самонесумісних рослин, які не можуть самоопилятися і, отже, це робить можливим виробництво НЕ1 гібридів.
Батьківські лінії, які мають чоловічу стерильність, надають генетичну композицію потомства, оскільки успадковування ознак по суті фіксовано. Половина ядерного генетичного матеріалу потомства, тобто ядерного геному, походить від чоловічої батьківської лінії (що має чоловічу фертильність), тоді як інша половина ядерного генетичного матеріалу потомства, тобто ядерного геному, походить від жіночої (що має чоловічу стерильність) батьківської лінії, з якої отримане насіння Е1.
Рослини петрушки, однак, звичайно є як чоловічими, так і жіночими (тобто однодомними), і відсутність батьківських рослин, які мають чоловічу стерильність, таких, як в перехреснозапильних кросбредних сортах, унеможливлює на 10095 достовірний прогноз генетичної структури або (ядерного) генотипу потомства. Щонайменше деяке потомство у відсутність рослин, які мають чоловічу стерильність, в результаті самоопилення містить генетичний матеріал або ядерний геном, що походить тільки з однієї батьківської лінії.
Термін гібрид, Е1 гібрид або цибрид часто застосовується в даній галузі для позначення того, що рослини, до яких це стосується, є гетерозиготними щонайменше по декількох (таких, що комерційно цікавлять) генотипічних ознаках. Звичайно, гібрид, ЕТ гібридний або цибрид позначається в даній галузі як такий, що містить гетерозиготний ядерний геном.
Чоловіча стерильність у рослин звичайно стосується цитоплазматичної чоловічої стерильності, в якій визначальний генетичний чинник розташований в цитоплазмі. Для багатьох рослин продемонстровано, що цей визначальний генетичний чинник знаходиться в мітохондріях і звичайно містить в собі мутацію в мітохондріальній ДНК.
Мітохондрії успадковуються потомством через яйцеклітину або, іншими словами, жіночим успадковуванням, і не за допомогою пилку, або, іншими словами, чоловічим успадковуванням. бо Цитоплазматичну чоловічу стерильність також позначають в даній галузі абревіатурою ЦЧС.
У деяких рослинах, крім цитоплазматичної чоловічої стерильності, також спостерігається ядерна (чоловіча) стерильність. Для ядерної (чоловічої) стерильності, на відміну від цитоплазматичної кодованої стерильності генетичний чинник в ядерному геномі або ДНК ядра відповідальна за стерильність, що спостерігається. Ця ядерна стерильність може належать до чоловічої, жіночої або загальної стерильності.
Обидва типи стерильності, тобто цитоплазматична чоловіча стерильність і ядерна (чоловіча) стерильність можуть бути легко визначені. Цитоплазматична чоловіча стерильність успадковується тільки через жіночу батьківську лінію. На відміну від цього як невід'ємний результат присутності в ядрі ядерна стерильність звичайно виявляє успадковування по
Менделю.
За допомогою застосування ЦЧС перехресне запилення буде приводити в результаті до на 10095 "чистих" або "справжніх" Е1 гібридів. На відміну від цього, при застосуванні нормальних однодомних рослин петрушки в наступному поколінні буде відбуватися деякий процент самоопилення.
Фенхель є різновидом сімейства Селерові, в якому ЦЧС є загальною ознакою, застосування
Е1 гібридів для фенхелю є загальновідомим. У фенхелі не відомий жоден ген, який відновлює фертильність; отже, він є ідеальним джерелом ЦЧС.
Було продемонстровано, що можливо отримати схрещування між петрушкою і фенхелем.
Іншими словами схрещування, в якому одна батьківська лінія, запильник, є петрушкою, і інша батьківська лінія є ЦЧС фенхелем. Однак це схрещування виявилося дуже неефективним; замість очікуваної кількості з щонайменше 2500 насіння тільки дуже обмежена кількість насіння змогла бути отримана за допомогою цвітіння цих рослин в присутності м'ясних мух. Також більшість цього насіння були нежиттєздатними. Після проростання насіння необхідне потомство дійсно було отримане.
Хоча, зрештою, за допомогою ембріонального порятунку це отримане потомство могло бути схрещене надалі з петрушкою, тим самим зменшуючи кількість ядерного геному фенхелю, після декількох генерацій поворотного схрещування була потрібна інбредна генерація, здійснювана самоопиленням.
Із застосуванням інбредної генерації по суті можливо відбирати потомство, що має
Зо необхідний фенотип (геном петрушки без характеристик фенхелю). Незважаючи на цю велику кількість поколінь все ще буде містити невеликі кількості фенхелю ДНК, приводячи до небажаної характеристики або ознак в отриманому гібриді. Не можна передбачити, в якій часовій точці ця ДНК фенхелю, що залишається, буде елімінована з ядерного геному.
Однак, в цьому випадку для фенхелю, що має цитоплазматичну чоловічу стерильність (ЦЧС), необхідна інбредна генерація гібриду фенхель-петрушка не можлива через те, що рослини, необхідні для цього, обов'язково є такими, що мають чоловічу стерильність, отже, здійснення інбредної генерації технічно неможливе.
Беручи до уваги серед іншого вищенаведені переваги Е1 гібридів, такі, як поліпшена схожість, більш висока врожайність, велика сила і/або більш висока одноманітність, в даній галузі існує потреба в наданні цитоплазматичних рослин РеїгозеїЇпит стгівритв, які мають чоловічу стерильність (ЦЧС). Відповідно, серед інших задач, задача даного винаходу полягає в задоволенні цієї потреби.
Вищенаведена потреба серед інших потреб, задоволена відповідно до першого аспекту даного винаходу, надання способу, як визначено в пункті 1 прикладеної формули винаходу.
Особливим чином, вищенаведена потреба серед інших потреб задоволена відповідно до першого аспекту даного винаходу за допомогою способу для надання рослини РеїгозеЇїпит сгігрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, що містить: а) надання перших протопластів, отриманих з рослини, вибраної з групи, що складається з
Райсив5 сагоїа І., Роєпісцит миЇдаге МІіїЇ., Арішт дгамеоїєп5 ГІ. і Равзііпаса 5аїїма Г., де перші різновиди протопластів мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму порівняно з рослинними клітинами, з яких вони зроблені; ці перші протопласти можуть також бути позначені як донорні протопласти;
Б) надання других протопластів, отриманих з рослини Реїгозеїїпит сгізрит, в якій другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті немодифікований ядерний геном порівняно з рослинними клітинами, з яких вони зроблені; ці другі протопласти можуть також бути позначені як акцепторні протопласти; с) злиття вказаних перших і других протопластів з отриманням злитого продукту між акцепторним протопластом і донорним протопластом;
49) отримання рослини Реїгозеїйпит сгізрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, із злитого продукту вказаного першого і другого різновиду протопластів, і, необов'язково, е) отримання гібриду схрещуванням отриманої рослини Реїгозеїїпит сгізрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, по етапу (а) з однодомною рослиною Р. стігрит.
У контексті даного винаходу рослинний гібрид, гібрид ЕЇ або цибрид є рослинами, які містять щонайменше гетерологічні або чужерідні органели, такі, як мітохондрії або хлоропласти.
Іншими словами цей рослинний гібрид, гібрид Е1 або цибрид містить органели, що походять з іншого рослинного сорту, і ці органели не виявляються в цих рослинах в природі. Рослинний гіорид, гібрид Е1 або цибрид можуть також бути позначені як рослини, які щонайменше частково містять цитоплазму, яка походить або отримана, з іншого сорту або різновиду.
Генотип ядра рослин відповідно до даного винаходу по суті є ідентичним одній з батьківських рослин, а саме - акцепторній рослині. Однак, ДНК цитоплазми рослин відповідно до даного винаходу відрізняється від цієї батьківської рослини. Ця цитоплазма щонайменше частково отримана від іншої батьківської рослини, донорної рослини. Ця інша батьківська рослина є рослиною іншого сорту або різновиду, ніж перша батьківська рослина.
Технології і способи для надання протопластів, тобто рослинних клітин з щонайменше частково видаленою клітинною стінкою, відомі в даній галузі. Загалом, протопласти отримують розщепленням виділених рослинних клітин або тканин із сумішшю придатних руйнуючих полісахарид ферментів, таких, як целюлази, пектинази і/або ксиланази.
Технології і способи злиття або комбінування наявних протопластів відомі в даній галузі.
Злиття протопластів, наприклад, може бути забезпечене комбінуванням наявних протопластів в суміші і згодом піддаванням цієї суміші електрошоку або піддаванням цієї суміші композиції, що містить полімер, такий, як полієтиленгліколь, і катіон, такий, як Саг2-, з лужним рн.
Технології і способи для надання рослини з наявного злитого продукту відомі в даній галузі.
Наявний злитий продукт може, наприклад, бути стимульований застосуванням гормонів для генерування клітинних стінок, для формування калюсу внаслідок і регенерування в повноцінні рослини. Надання необов'язково може містити, як, наприклад, у випадку надання РЕ1 гібриду, один або більше загальноприйнятих етапів схрещування, переважно із сортами петрушки, що
Зо становлять комерційний інтерес.
Термін "інактивований ядерний геном" в контексті даного винаходу, означає ядерний геном, який більше не здатний до мітозу і/або мейозу. Іншими словами протопласт або рослинна клітина, зроблена з нього, з "інактивованим ядерним геномом" більше не є здатними до клітинного розподілу. Дана інактивація ядерного геному, наприклад, може бути забезпечена за допомогою застосування радіаційної обробки даних протопластів з рентгенівською (Х) або гамма (у) радіацією. Альтернативно, ядро клітини може бути видалене ультрацентрифугуванням в градієнті густини.
Термін "інактивована цитоплазма" в контексті даного винаходу означає, що органели в цитоплазмі більше не здатні до участі в клітинному розподілі. ІншИМИ словами, протопласт або рослинна клітина, зроблена з нього, з "інактгивованою цитоплазмою" більше не є здатною до клітинного розподілу. Дана інактивація цитоплазми, наприклад, може бути забезпечена за допомогою піддавання даних протопластів реагентам, таким, як йодацетамід або йодацетат.
Термін "немодифікована цитоплазма" в контексті даного винаходу означає, що цитоплазма по суті подібна цитоплазмі вихідної клітини. Іншими словами, протопласти з "немодифікованою цитоплазмою" розглядаються як первинна цитоплазма, незалежно від клітини, з якої зроблений протопласт.
Термін "немодифікований ядерний геном" в контексті даного винаходу означає, що ядерний геном по суті подібний ядерному геному вихідної клітини. Іншими словами протопласти з "немодифікованим ядерним геномом" розглядаються як такі що мають первинний ядерний геном, незалежно від ядерного геному клітини, з якої зроблений протопласт.
За допомогою застосування даного способу генетична композиція, яка кодується ядром, або ядерний геном других протопластів по суті не змінюється. У результаті рослина Реїгозеїйпит сгігрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, надається безпосередньо, без необхідності в подальших (поворотних) етапах схрещування.
Однак, додаткові етапи схрещування можуть бути застосовані для надання додаткових (що становлять комерційний інтерес) ознак даній рослині РеїгозеїЇйпит сгізрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність. Ці схрещування також охоплюються даним винаходом, при умові, що потомство зберігає цитоплазматичну чоловічу стерильність.
Відповідно до переважного варіанта здійснення даного винаходу донорна рослина, вибрана з групи, що складається з Юайсиб5 сагоїа Ї., Боепісшит миЇдаге МІЇ., Арішт дгамеоіепз 1. і
Равіїпаса заїїма Г.., має фенотип з цитоплазматичною чоловічою стерильністю.
Відповідно до додаткового переважного варіанта здійснення даного способу, спосіб додатково після етапу (с) або (4) містить відбір диплоїдних злитих продуктів і/або диплоїдних рослин.
У ряді випадків деякі злиті продукти і/або рослини, отримані після злиття протопластів, мають рівень девіантної плоїдності, такий, як тетраплоїдний, октаплоїдний й іноді анеуплоїдний рівень. Ці девіації часто в результаті приводять до небажаних рослин, таких, як рослини, які мають жіночу стерильність. Отже, вигідно відбирати тільки такий злитий продукт і/або рослини, наприклад, проточну цитометрією, які з точки зору вмісту ядерної ДНК є подібними диплоїдній акцепторній рослині.
Додатково, проточна цитометрія надає можливість детектувати і згодом елімінувати генетичні девіації, що зустрічаються, такі, як несподіваний і небажаний ядерний геномний матеріал від перших протопластів, що виявляються в злитому продукті.
Відповідно до ще одного переважного варіанта здійснення даного способу, вищенаведені описані перші протопласти отримані з РГоепісшит миїЇдаге МІіїЇ., переважно з рослини РоєпісшШит уцідаге МІіЇїї, що має цитоплазматичну чоловічу стерильність.
Відповідно до іншого переважного варіанта здійснення даного способу вищенаведені описані перші протопласти, що мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму, отримують піддаванням радіаційному іонізуючому опроміненню, переважно гамма-радіації з дозою щонайменше 200 Грей (Гр), переважно щонайменше 300
Грей і більш переважно щонайменше 400 Гр.
Відповідно до ще одного переважного варіанта здійснення даного способу вищенаведені описані другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті неінактивований ядерний геном за допомогою піддавання впливу йодацетаміду, переважно в концентрації щонайменше 5 мМ, більш переважно щонайменше 10 мМ, найбільш переважно щонайменше 15 мм.
Відповідно до переважного варіанта здійснення даного способу етап (с) містить
Зо опосередковане полієтиленгліколем злиття протопластів.
Даний спосіб переважно надає рослини Реїгозеїїпит сгієрит, які мають чоловічу цитоплазматичну стерильність. Отже, відповідно до подальшого аспекту, даний винахід стосується рослини Реїгозеїїпит сгізгрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, що отримується за даним способом, що містить мітохондрії і/або хлоропласти, отримані з рослини, переважно рослини, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, вибраної з групи, що складається з Юацйсив сагоїа І.., Роепісшит миїЇдаге МІЇ., Аріит дгамеоіепз Г. і Разііпаса заїма ї, переважно, що містить мітохондрії і/або хлоропласти, отримані з Гоепісшит мціЇдаге МІЇ..
Відповідно до переважного варіанта здійснення цього аспекту, перший протопласт отриманий з рослини ЕРоєпісшит мцїдаге МІіїЇ. з номером доступу МСІМВ 42055 (депоновано 26 вересня, 2012 в МСІМВ ца, Регдизоп Виїйадіпод, Стаіб5іопе Ехіаге, Виск5бигп, Абегаееп АВ21 9Ма,
ОК) йабо другий протопласт отриманий з рослини Реїгозеїйпит сгізрит маг. їШбего5ит з номером доступу МСІМВ 42056 (депоновано 26 вересня, 2012 в МСІМВ ЦО).
Відповідно до ще одного аспекту даний винахід стосується застосування рослини
Реїгозеїйпит сгізрит, які мають цитоплазматичну чоловічу стерильність, відповідно до даного винаходу для надання Н1 гібридів Реїгозеїїпит стігрит.
Відповідно до ще одного іншого аспекту даний винахід стосується насіння, частин рослини, тканин або клітин, отриманого з або що походить з рослини ЦЧС петрушки, що є, як описано вище.
Відповідно до ще одного іншого аспекту даний винахід стосується застосування цитоплазми, отриманої з рослини, що переважно має чоловічу цитоплазматичну стерильність, вибраної з групи, що складається з ЮОайсив сагоїа Ї., Роепісшит миїЇдаге МІійї., Аріит агамеоіепз 1. і
Разііпаса займа Г., переважно Роепісціит миїЇдаге МіїЇ, для надання рослини Реїгозеїпит сгігрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність.
Даний винахід надалі детально описаний в наступних прикладах переважних варіантів здійснення. У прикладах здійснені посилання на прикладені фігури, в яких:
Фігура 1: демонструє зображення гель-електрофорезу продуктів ампліфікації. Треки 1 і 2 демонструють "утікачів", тобто рослини з клітинного злиття, що демонструють модель цитоплазми петрушки; треки 3-8, 10 ї 11 демонструють злиті рослини відповідно до даного винаходу, таким чином це є петрушкою з цитоплазмою фенхелю; трек 9 демонструє маркер
ДНК 100 п. о0о.; треки 12-15 демонструють первинний акцепторний матеріал петрушки, і треки 16 і 17 демонструють донорний матеріал фенхелю;
Фігура 2: демонструє репрезентативну проточну цитограму фенхелю;
Фігура 3: демонструє репрезентативну проточну цитограму петрушки;
Фігура 4: демонструє репрезентативну проточну цитограму гібриду з фенхелю і петрушки відповідно до даного винаходу.
Приклади
Приклад 1: Загальний протокол
Насіння Р. сгіврит маг. Тибрегозит (акцептор), а також насіння донорної рослини стерилізували подальшою обробкою з гарячою водою, промиванням з 7095 етанолом і обробкою з розбавленим побутовим відбілювачем. Після споліскування насіння стерильною водою насіння пророщували на М530 або подібному середовищі.
Використали тільки черешки з паростків. Протопласти виділяли обробкою матеріалу після попереднього плазмолізу з руйнуючими клітинну стінку ферментами, такими, як пектиназа і целюлаза в плазмолізуючому розчині. Після фільтрації і центрифугування протопласти донорів обробляли гамма радіацією. Протопласти акцептор обробляли йодацетамідом (І0А). Обидва різновиди протопластів комбінували і згодом зливали. У час поліетиленгліколь(ПЕГ)- опосередкованого злиття протопласти не перемішували, для того, щоб уникнути порушення процесу злиття.
Після злиття ПЕГ поступово вимивали і протопласти заливали в альгінат. Зрізи середовища з альгінатом, що затверділо, які включали в себе злиті протопласти, переносили в рідке середовище, що стимулює клітинний розподіл. У цьому середовищі були присутнім цукор у вигляді глюкози і гормони у вигляді 2,4 0, зеатину і їм подібного.
Після появи калюсу мікрокалюси видаляли з середовища з альгінатом, що затверділо, і переносили в середовище для росту твердого калюсу. Після досягнення діаметра 8 мм і деякого ступеня позеленіння калюси переносили на середовище для регенерації. Регенеровані калюси переносили на свіже середовище для регенерації кожні З тижні. На цьому середовищі розвивалися живці стебла і іноді соматичний зародок. Розвинені живці стебла вміщували в середовище ВВУМ для вкорінення. Соматичний зародок вміщували в середовище для росту
Зо зародка і згодом вміщували на М530 або подібне середовище.
Під час перенесення з середовища для клітинного розподілу (СРР) за допомогою середовища для росту (СРРО)) в середовище для регенерації (М2-) і, зрештою, середовище
М530 осмотична концентрація середовища поступово знижувалася.
Рівень плоїдності отриманих рослин досліджували за допомогою проточної цитометрії зразка листа, що визначає відносний вміст ДНК. Рослини з відносним вмістом ДНК, який відповідає вмісту ДНК в первинних рослинах петрушки, зберігали, всі інші рослини знищували.
Збережені рослини надалі аналізували за допомогою застосування молекулярних біологічних технологій. Із застосуванням ДНК, виділених з листка, перевіряли наявність необхідних мітохондрій (тобто від донора) за допомогою праймерів для ПЛР, що є специфічними до мітохондріальної ДНК фенхелю. Рослини з цитоплазмою акцепторів (які можна було вважати утікачами) вибраковували.
Рослини, що залишаються, підтримували схрещуваннями в тепличних і польових умовах з дослідженням їх практичної застосовності. Характеристиками, що становлять інтерес, були чоловіча стерильність, формування насіння і якість рослини.
Приклад 2: Поверхнева стерилізація насіння
Кожну з насінин кореневої петрушки (Реїгоз5еїпит сгігрит маг. шШбрегозит) як акцептор і з фенхелю (Роеєепісшит мицЇдаге МіїІ.) як донор вміщували в окремі чайні сита. Сита вміщували у водяну баню з 5020; на 10 хв. Згодом чайні сита занурювали в суміш, що складається з 7095 етанолу і 3095 води на 10 секунд. За цим слідувала 20 хв. обробка з 0,395 (мас./о0б. Маосі їж 0,0195 Тмееп 80. Цю і все наступні обробки виконували у витяжній шафі з ламінарним потоком повітря.
Згодом чайні сита з насінням промивали З рази зі стерильною водою протягом 1, З і 5 хвилин відповідно.
Приклад 3: Посів стартового матеріалу для виділення протопластів
Насіння акцептора і донора відбирали з чайних сит прикладу 2 в стерильних умовах і вміщували в середовище М530 в скляні контейнери. Контейнери з 8 насінинами в кожному вміщували в приміщення з мікрокліматом при 2520 (16 годин світла, 4000 люкс). Після від З до 5 тижнів пророслі рослини були придатні для виділення протопластів.
Приклад 4: Виділення протопластів
Черешки пророслих акцепторних рослин збирали в чашках Петрі діаметром 9 см з 15 мл
МІ Р. Коли всі черешки були зібрані, ці черешки розрізали на шматки з середньою довжиною 1,5
ММ.
Черешки пророслих донорних рослин також збирали і розрізали в МІ Р. Однак, коли кількості доступного матеріалу було недостатньо (наприклад, внаслідок слабкого проростання насіння) додавали саме листя.
Розчин МІР видаляли аспірацією і заміняли на 20 мл свіжого розчину ферменту з розрахунку на чашку Петрі. Цей розчин ферменту має дуже специфічну силу ваги відносно протопластів. Чашки Петрі інкубували при 252Сб протягом ночі в темряві; їх вміщували на орбітальний струшувач з амплітудою 15 мм і швидкістю 30 об./хв. Після цього інкубування суспензії фільтрували через нейлонові фільтри з розміром пор 110 мкм і 53 мкм відповідно.
Фільтрат переносили в 12 мл пробірки для центрифугування, в які переносили 8 мл фільтрату з розрахунку на пробірку.
На цей шар суспензії фермент-протопласти обережно піпетували З мл промивального розчину МУ5 (з більш низькою специфічною силою ваги) з подальшим центрифугуванням протягом 7 хв. при 100х9. Після центрифугування смуги чистих протопластів були помітні в пробірках (на межі розділу ферменту і промивального розчину). Зруйновані протопласти, клітинні стінки і їм подібне збирали на дні пробірки.
Смугу, яка містить протопласти, збирали із застосуванням піпетки і в нові пробірки збирали максимальну кількість 4 мл суспензії. У ці пробірки додавали додатковий промивальний розчин
МУ5 до кінцевого об'єму 12 мл. Пробірки центрифугували знову протягом 7 хв. при 100ха4 і, згодом, промиті протопласти ставали помітні у вигляді осаду на дні пробірки. Рідкий супернатант декантували і протопласти обережно ресуспендували в кінцевому об'ємі промивального розчину УУ5 11 мл.
З кожної суспензії (донорної і акцепторної) відбирали 1 мл як контроль; зразок цього контролю піддавали обраховуванню із застосуванням гемоцитометра для визначення загального кількість виділених протопластів.
Пробірку з протопластами донорів завертали в алюмінієву фольгу і вміщували на лід. Гамма опромінення виконували із застосуванням радіації з дозою 400 Гр. Після радіації зразок
Зо культивували окремо як контроль.
Протопласти акцептора обробляли таким чином: з відповідного стокового розчину в МУ5 ІА додавали до кінцевої концентрації 15 мМ. Інкубування виконували при кімнатній температурі;
Інкубування припиняли центрифугуванням протопластів, декантуванням супернатанту і ресуспендуванням протопластів у промивальному розчині УуУб5. Загальна кількість часу інкубування становила 15 хв., включаючи час центрифугування.
Згодом акцепторні протопласти промивали один раз із промивальним розчином УУ5 за допомогою центрифугування. Після цієї обробки ІСА відбирали контрольний зразок клітин, що обробляються, і культивували окремо.
Приклад 5: Злиття протопластів
Протопласти з обох суспензій протопластів змішували в співвідношенні 1 акцептор:2 донорні протопласти. Цю суспензію розподіляли в достатню кількість 10 мл пробірок для аналізів, таким чином, що в кожній тестовій пробірці містився 1 мільйон протопластів.
Після центрифугування (7 хв. при 100х9) об'єм доводили до 0,3 мл. До цієї суспензії протопластів додавали 400 мкл розчину ПЕГ. Надавали пробіркам з протопластами можливість відстоюватися 30 хв. без збурювального впливу. Згодом додавали 800 мкл розбавляючого розчину ПЕГ з подальшим етапом очікування 15 хв.
Потім в кожну пробірку додавали 5 мл розчину СРМ/Са"" з подальшим центрифугуванням (7 хв. при 100х9; без сповільнення згодом). Супернатант обережно декантували і осад ресуспендували в 5 мл свіжого розчину СРУМ/Са": і центрифугували знову в тих же умовах.
Після видалення супернатанту осад ресуспендували в 10 мл розчину встановленого розчину А з розрахунку на пробірку. Клітини промивали за допомогою центрифугування, ресуспендували в урівноваженому розчині А і центрифугували знову, як описано вище.
Зрештою, клітини комбінували в одній або, коли необхідно, в більшій кількості 50 мл пробірок для аналізу і ресуспендували в урівноваженому розчині А до досягнення густини 400000 клітин на мл.
До цієї суспензії додавали однаковий об'єм розчину альгінату і, згодом, суспензію висівали частинами по 800 мкл на маленькі чашки Петрі (ф 6 см) з розчином В. Після 1 години краплі тверднули через полімеризацію альгінату.
Приклад 6: Регенерація
Альгінатні зрізи зі злитими протопластами промивали в середовищі СРР і переносили на чашки Петрі зі свіжим середовищем СРР; застосовували 5 мл середовища СРР в розрахунку зріз 800 мкл. Щотижня повне середовище оновлювали видаленням старого середовища аспірацією і додаванням свіжого середовища на чашки Петрі. Після приблизно З тижнів були генеровані калюси. У момент, коли ці калюси досягали діаметра приблизно З мм, їх видаляли з альгінату. Для цього зрізи розрізали на 8 частин і середовище заміняли 15 мл 50 мМ Ма- цитратного розчину. Чашки Петрі вміщували на орбітальний струшувач з амплітудою 15 мм і швидкістю 30 об./хв.
Після 1 години альгінатний матрикс руйнували і калюси вивільняли, збирали за допомогою центрифугування (7 хв. при 100х9) і вміщували на тверде середовище СРРО. Після 1 тижня адаптації чашки Петрі вміщувала на світло. Кожні З тижні зростаючі калюси переносили на свіже середовище. В момент, коли калюси зеленіли і досягали діаметра приблизно 8 мм, їх вміщували на середовище для регенерації М2ж. Кожні З тижні середовище оновлювали перенесенням калюсів на нові чашки Петрі з тим же середовищем.
Стеблові живці, які генерувалися на середовищі, піддавали прискоренню в середовищі
ВВУУ. Соматичний зародок, що з'являвся, вміщували в середовище М520-АЗ. Зрілі рослини, вирощені на цьому середовищі, переносили в середовище М520. Коли вкорінені рослини досягали З-листкової стадії, їх переносили в грунт для подальшого розвитку в теплиці.
Приклад 7: Проточна цитометрія
Рівень плоїдності регенерованих рослин визначали проточною цитометрією. З цією метою зразок відомої диплоїдної рослини вимірювали як стандарт, і зразки регенерованих рослин порівнювали з ним. Для кожної рослини відбирали частину 1 см листка і розрізали в буфері
БАРІ (Рагіес, Мипегіег, Сегтапу) із застосуванням леза бритви.
Зразок фільтрували із застосуванням фільтра 30 мкм СеїЇТтісвеФ (Рагіес і вимірювали з
Рапес РА (Рагпес, Мипвіег, Сегптапу). Результати продемонстрували відносну величину плоїдності відносно контролю. В подальшій експериментальній роботі застосовували тільки рослини з диплоїдною моделлю кореневої петрушки.
Приклад 8: Молекулярні дослідження
Для рослин з доведеним диплоїдним характером визначали наявність фрагмента ДНК, що
Зо становить інтерес (з цитоплазми фенхелю і, отже, такого, що стосується необхідної ознаки
ЦЧС).
Зразок листка або калюсу з масою від 100 до 200 мг заморожували в пробірці епендорф при -2020. Після розморожування зразок роздрібнювали в 350 мкл буфера для екстракції ДНК.
Згодом додавали додаткову кількість 350 мкл буфера для екстракції ДНК. Після центрифугування (10 хв. при 10000х9) супернатант декантували і осад переносили в 125 мкл буфера для екстракції ДНК; після цього за допомогою змішування додавали 175 мкл буфера для ядерного лізису і 60 мкл 1095 М-лаурилсаркозину.
Цю суміш інкубували при 6520 протягом 20 хв. з подальшою екстракцією з 50-100 мкл суміші хлороформ:ізоаміловий спирт. Екстракт центрифугували при 10000хо протягом 10 хв. і супернатант переносили в нову пробірку епендорф. 500 мкл ізопропанолу з температурою - 202б додавали в цю пробірку для аналізу, і пробірку центрифугували при 10000х9 протягом 2 хв.
Після декантування супернатанту осад промивали з 100 мкл 7095 етанолу (42С) і, після висушування, осад розчиняли в 125 мкл буфера ТЕ. Зрештою, цей розчин ДНК розбавляли (10х) стерильною водою.
Виділену цитоплазматичну ДНК аналізували за допомогою технології ПЛР на наявність характерного фрагмента. Для кожної комбінації донор-акцептор розробляли протокол для забезпечення виразного розрізнення між обома можливими партнерами по злиттю.
Таблиця 1
Комбінація праймерів, яка приводить до поліморфізму для петрушки (акцептор) порівняно з декількома донорами цитоплазми
Донор: ; уУуцЇдаге сагоїа агамеоЇеп5 займа
Розщеплення.їд | 7 Мп! | они | таз? | Ам програма М/Р1 1 9326 2 хв. 2 622С 1 хв.
З 7226 1,75 хв. 4 932 30 секунд б2С 1 хв. (в 7226 1,75 хв. 7 Повторення етапів 4- 39 разів б 8 7226 5 хв. 9 2026 20 хв. програма М/Р2 1 9490 5 хв. 2 БОС 1 хв.
З 7226 1 хв. 4 9456 30 секунд 5 БОС 1 хв. 6 7226 2 хв. 7 Повторення етапів 4- 29 разів б 8 7226 5 хв. 9 2026 20 хв. 5
Таблиця 2
Розщеплення ампліфікованих продуктів 11111111 ме! | они | Ттад/ | Ам
МЕВ буфера (Ох). | Тоамкл | Чамкл | - | Чомкл
МЕВбуфер3(10х).///СССЇ771117 11111111, ломкл розчин ВБА(100х). | Олоамкл | /- | Облоами | -
Розщеплення відбувається протягом 8 годин при 3720.
Таблиця З
Послідовність застосовуваних праймерів
Приклад 9: Гель-електрофорез
У випадку, якщо відмінності в розмірі між фрагментами маркера є досить великими, відмінності в моделі смуг індивідуальних рослин можна візуалізувати, наприклад, за допомогою гель-електрофорезу. Агарозні гелі, що застосовуються, були складені з 1,595-агарозного буфера
ТАЕ їі забезпечені бромідом етидію для візуалізації смуг ДНК із застосуванням УФ світла.
Ілюстративні результати такого гель-електрофорезу отриманих ампліфікацією продуктів продемонстровані на фігурі 1. Фігура 1 демонструє, що рослини відповідно до даного винаходу (треки 3-8, 10 ї 11) забезпечували цитоплазматичну ампліфікацію продукту з ідентичним розміром продукту ампліфікації донорної рослини фенхелю, тоді як продукт ампліфікації акцепторної рослини кореневої петрушки був відсутній. Відповідно, це демонструє, що фенотипічно кореневі рослини петрушки відповідно до даного винаходу мають цитоплазму, отриману з фенхелю.
Приклад 10: Гібриди
Десять вибраних кореневих рослин петрушки 410666 і десять рослин фенхелю 531, які мають чоловічу стерильність, яровизували в камері, що не заморожується протягом зими.
Навесні ці рослини переносили разом в теплицю. Після візуальної перевірки перших суцвіть фенхелю на чоловічу стерильність рослини виділяли в непроникній для комах камері. У ці камери вміщували лялечок крилатих комах, забезпечуючи наявність крилатих комах для запилення. Коли необхідно, вводили нових лялечок крилатих комах доти, поки рослини не завершували цвітіння.
Насіння збирали після дозрівання рослин фенхелю, які мають чоловічу стерильність.
Незапилене суцвіття контрольної рослини фенхелю не формувало насіння. Це демонструє, що ці рослини були дійсно такими, що мають чоловічу стерильність. З усіх зібраних 39 насінин тільки 1 насінина проросла. Проточноцитрометричний і молекулярний аналіз продемонстрував, що ця рослина дійсно була проміжною між фенхелем і кореневою петрушкою. Результати проточноцитрометричного аналізу продемонстровані на фігурах 2-4, де третє зображення демонструє гібридний характер ідентифікованої рослини.
Зо Композиція середовищ
Якщо не вказане інше, середовища і розчини, наведені нижче для тканинного культивування, були підданими автоклавуванню (при 12020 протягом 20 хв.).
Середовище М520, в розрахунку на
М530 літр
Солі М5, включаючи вітаміни (биспега,
Наалет, МІ, ай МО221) 4,40 грама
Сахароза 20 гезр. 30 грамів
Агар Оаїспіп 8 грамів рн 5,6
Розчин ферменту
Розчин ЕКМУ, який містить:
Целюлаза К10 1,596
Мацерозим 0,195 рН 5,6; стерилізований фільтром
М
І. Мепсгеї, Е, Маду, 4. Ків5 и Р. Маїїда. Тпеог. Аррі. Сепеї 70: 590-594 (1981).
Розчин ПЕГ 50 мл
ПЕГбООО 15 грамів
Сахароза 2 грами
Сасі 2020 0,075 грама рН 5,7; стерилізований фільтром
Розбавлений розчин ПЕГ 50 мл
Гліцин 0,188 грама
Глюкоза (Зідта) 2,1 грама
Сасі» 2020 0,368 грама рН 10,5 (доведений з 10н КОН); 520
МО см/кг; стерилізований фільтром
СРМ/Са- 200 мл
СРУМ 10 х сток 20 мл
Маніт 13,3 грама
СасСі»2нНгОо 1,47 грама рН 5,7; 530 мосм/кг; стерилізований фільтром
СРУМ 10х стоковий розчин
Егеагзоп, Е. М., Ромег, у. В., СосКіпд Е. С. ОемеІортепгіаї! Віоіоду, 33, 130-137 (1973).
Урівноважений розчин А 250 мл
СасСі»2нНгОо 36,8 мг
Маніт 19,7 грама рН 5,8, автоклавований
Розчин альгінату; розчин В
В. Сбатт, К. Зсптідї апа С. УМіПті»ег. Мої. Сеп. Сепеї. 217: 6-12 (1989). 50 мм Ма-цитратний розчин, МІ Р, ЕКМУ, СРР і СРРО
В. Оіїкв, М. бідогом апа С. Тиїтапе: Тнеог. Аррі. Сепеї. 93 809-815 (1996).
Середовище СРР доповнювали з 0,2 мг/л 2,40 і 0,1 мг/л зеатину.
Середовище СРРО доповнювали з 0,1 мг/л МАА і 0,2 мг/л зеатину.
М2- середовище з розрахунку на літр;
У.Г. Мапаетооніеі!е, 9. Р. ВіПага, У. Воисаца апа Т. Сазраг (1994). Мед. Рас. І апароимли. Опім.
Сепі 59: 1455-1459 (1994).
Описане середовище М2 доповнене з 20 мг/л аденінсульфату і позначене Мак.
Середовище ВВМ/ в розрахунку на літр
Солі М5 (Оиспега аг
МО221) 4,40 грама
Сахароза 20 грамів
ІАА 2 мг
Агар Оаїспіп 8 грамів рн,
М520-АЗ в розрахунку на літр
Солі М5 (Оиспега аг
МО221) 4,40 грама
Сахароза 20 грамів
САз 1 мг
Агар Оаїспіп 8 грамів рн 5,68
ДНК буфер для екстракції 0,35 М сорбіт 0,1 М основа Тріс (рН 7,5) 0,005 М Маг-ЕОТА 0,02 М Манзоз (свіжододаний)
Буфер для ядерного лізису 0,2 М основа Тріс (рН 7,5) 0,05 М Маг-ЕОТА 2 М масі 2956 СТАВ (цетилтриметиламонію бромід)
Хлороформ:ізоаміловий спирт 24 об'єму хлороформу « 1 об'єм ізоамілового спирту
ТЕ буфер 10 мМ Тріс-маон (рн 8,0) 2 ММ Ма2-ЕОТА
МЕВ буфер 2, МЕВ буфер З і розчин ВЗА
Отримували у Мем Епдіапа Віоїабв, Ірхул/ісп, МАО1938, ОБА
ТАЕ буфер (кінцеві концентрації) 40 мм тріс-оцтова кислота, рН 8,5 2 ММ Маг-ЕОТА
Агароза 1,595 (мас./об.)
Бромід етидію 0,5 мкг/мл
ПИУЖМІМ КУТ ДИНИ свій Ви бдлюм МО «ій» Вело дача Б.У. мам іп суми їм йіо фхлАйшеНи МИМО ХМ пт о вже, МИ МЛИНИ ВД МІ МУ «вах сІшкдНМИ ОугЕМВИНИ РОБЛЮ ВЖшЕКОНКВХВОМ СТРУМ, ЯКО МЕшЕВ ЦЕУСІИЧУММУТУСИКУ мулом І УРЕ ЦІ т сим лік ФРІ. УМИМ СОМ Фо ммщятм ПМ М КИВ МИ мІ МАХ злі У СПЕКИ ЦЬНІСТтТІ, ШПЕУЛИНИ БЕТЕОМКОВІМОМ сСБІВВИМ, ЯКЕ МЕЖ ПИТОМИМ ТУМІВУ оо НН НН КО
АМцИМІЯХ МИХ тив, ТОЖ М.МИММоО Ал ПТМ УАНИМІ СКК УНТИ «ій» УПМ
АХДО» У ММ У? «іо» З сих вішид і «ав ВІЖЩАВ М. «жі А «ВМЕх Еш ср ЦЕ «ВМ ДНК «АК» шиУчиА ПОЗДМЛ МИТИ дич» «А УКЕОИ
ВІ 10. «ЕХХ В... ХХ «СМ ХМ Михишхуйн я ПИ шк ВО У С ТДІ МОЛ КУЧИТУ С МУ: бядУ МИНА тА дод те праймета КМУ" тт ме МіуюміІ ПОЛІП ДОЮММИІМІВ УМ сани З папозадеолу зе хх «Вій «ЖКБіхМ Зх кали ПУ
ХА ДНК ле сжучий Утім хІ хКАди МЖУМУА лТИТІ ДУМКИ М Х «ду» «ХМ лк лИ сузіх тми мМулакчлме Мих жа ТІМ: МупДИихУли МИХ сЕшаУукаюоавниде спі дсвміств праймахх ЩЕЛКМЮ? бомжів им пойплідоши ми" «Мих Х
УВК ЕККщ Кеті МУх ту де тек ККіця сом З ща «хх 3 «йМХх п ззаи пих
УМ МИ
ХА МКУ ЗНКА ЛИТІ ДМА АТЕ
«М
ХХХ ДИКИЙ
Я ї 2 хшеЕМ о ж, е«ййх там мохалуюматонх До" свийУвайишнисУ чле ппідсміи ія ПМайМеуМ: щі ЦЗ гм Адле це утищі. ул дилшмМиА «Кз З лсоувзусууе хадЗаапаця дп 43 «Ві З -еЖвКіх 3 «Жах ДНЕ су мехкинкї мем муимииві
АЖ ШИШКА ТМ ПТУ Х
- З : й ДИКЕ МО «доз х ле я с ц молекули дн" гааукмажниМие тесті ДЦ прациквиа ВАШИХ"
Торги ч"дежчні послідов ВА
АЙ» д абибмимчу сауни с 3 «Вій дих
АХ пути йлювулюхкми их попа И пихдиср рудоу" деасовєнв дЕвспиках оц ХА
Claims (19)
1. Спосіб отримання рослини Реїгозейпит спзрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, який включає: а) надання перших протопластів, отриманих з рослини Роелісшит муиідаге Мі/., в якій перші протопласти мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму; р) надання других протопластів, отриманих з Реїтозе/пит сгієрит, в якій другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті немодифікований ядерний геном; с) злиття вказаних першого і другого протопластів; а) отримання зі злитого продукту вказаних перших і других протопластів рослини Регозеїпит спзрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність.
2. Спосіб за п. 1, в якому вказана рослина Роепісшит ушцідаге Мі/. має фенотип з цитоплазматичною чоловічою стерильністю.
3. Спосіб за п. 1 або 2, який додатково містить після етапу (с) або (4) відбір диплоїдних злитих продуктів або рослин, переважно диплоїдних Реїгозеї/їпит стізрит злитих продуктів або рослин.
4. Спосіб за будь-яким із пп. 1-3, в якому вказані перші протопласти отримані з Роепісшит уцідаге МІЛ., з номером доступу МСІМВ 42055.
5. Спосіб за будь-яким із пп. 1-4, в якому вказані перші протопласти, що мають по суті інактивований ядерний геном і по суті немодифіковану цитоплазму, отримані за допомогою впливу радіаційної дози, переважно гамма-радіаційної дози щонайменше 200 Гр, переважно щонайменше 300 Гр і більш переважно щонайменше 400 Гр.
б. Спосіб за будь-яким із пп. 1-5, в якому вказані другі протопласти отримані з Регозейпит спзрит маг. Тирегозит з номером доступу МСІМВ 42056.
7. Спосіб за будь-яким із пп. 1-6, в якому вказані другі протопласти мають по суті інактивовану цитоплазму і по суті неіїнактивований ядерний геном за допомогою впливу йодацетаміду, переважно в концентрації щонайменше 5 мМ, більш переважно щонайменше 10 мМ, найбільш переважно щонайменше 15 мМ. Зо
8. Спосіб за будь-яким із пп. 1-7, в якому етап (с) містить опосередковане поліеєтиленгліколем злиття протопластів.
9. Рослина Реїтозеїпит сгізрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, отримана способом за будь-яким із пп. 1-8, що містить мітохондрії і/або хлоропласти, отримані з рослини Еоепісшит уцідаге МІЛ., що має цитоплазматичну чоловічу стерильність.
10. Рослина Реїозеї/пит стпізрит за п. 9, яка має чоловічу цитоплазматичну стерильність, що містить мітохондрії і/або хлоропласти, отримані з Роепісшит уцідаге МІЙ.
11. Рослина Ретозейпит сіізрит за п. 9 або 10, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, що містить мітохондрії і/або хлоропласти рослини Роепісшит ушідаге, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, які надають цитоплазматичну чоловічу стерильність.
12. Рослина Реїозеїїпит сгізгрит за будь-яким із пп. 9-11, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, де вказана рослина є рослиною Реїгозе/пит сгізрит маг. шбегозит.
13. Рослина Реїозеїїпит сгізгрит за будь-яким із пп. 9-11, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, в якому вказана рослина є рослиною Реїгозе/пит сгізрит маг. співрит.
14. Рослина Реїозеїїпит сгізгрит за будь-яким із пп. 9-11, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, де вказана рослина є рослиною Реїгозе/пит сгізрит маг. пеароїйапит.
15. Рослина Реїозеїїпит сгізгрит за будь-яким із пп. 9-14, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, де вказана рослина Реїгозеїїпит сгізрит є гібридом.
16. Застосування рослини Реговзе/їпит стізрит за будь-яким із пп. 9-14, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність, для отримання Н1 гібридів Реггозе/їпит сгігрит.
17. Насіння, частини рослини, тканини або клітини, отримані з рослини за будь-яким із пп. 9-14.
18. Застосування цитоплазми, отриманої з рослини Роепісшит уцідаге Міл., яка переважно має цитоплазматичну чоловічу стерильність, для отримання рослини Реїгозе/пит сгізрит, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність.
19. Застосування за п. 17, в якому вказана цитоплазма отримана з Роепісшит уиїдаге МІ/. т с
3. ша но й зо по 0 вне а небо ак вк НК ВЕ ек то 3 4 03 45 8 5 з 8 ож 30 35 з 33 3538 35
Фіг. і кн мм і З несху. ще чт зву З З а чел «В і кет Її 5 : Е Її І ЇЇ Е Н ї 1 ям Я НІ З Н 1 ї . ї ше г. Е і Я і Е Її | і ! їе 4 Н ІЗ ; 11 | ! їОоНФф ом ї 1 ; і ! : Е ї ї ї ; г ї ї Н і і У дея зно тофу. Ек ук у м кит жетіктрткете Кк КУ МУ тд тя тд куєчу кексу ЕЗ Я а В од: І з М В ДИ ; раз ІВ їх ЗБ іказкильйвінтЯ 3а МАН їз КЗ: І їз ОБОХ в У ЗК Заказ у Ж Короб зв Гей Фіг, а
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/EP2012/073328 WO2014079498A1 (en) | 2012-11-22 | 2012-11-22 | Methods for providing cytoplasmic male sterile petroselinum crispum plants, cytoplasmic male sterile petroselinum crispum plants and seeds and plant parts thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA116221C2 true UA116221C2 (uk) | 2018-02-26 |
Family
ID=47351583
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201506110A UA116221C2 (uk) | 2012-11-22 | 2012-11-22 | Спосіб отримання рослини petroselinum crispum, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10021848B2 (uk) |
| EP (1) | EP2922958B1 (uk) |
| AU (1) | AU2012395191B2 (uk) |
| EA (1) | EA032108B1 (uk) |
| ES (1) | ES2675995T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20180807T1 (uk) |
| HU (1) | HUE038376T2 (uk) |
| PL (1) | PL2922958T3 (uk) |
| RS (1) | RS57258B1 (uk) |
| TR (1) | TR201810193T4 (uk) |
| UA (1) | UA116221C2 (uk) |
| WO (1) | WO2014079498A1 (uk) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108047166B (zh) * | 2018-01-26 | 2021-05-25 | 遵义医科大学 | 一种南鹤虱提取物及其提取方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986007379A1 (en) * | 1985-06-11 | 1986-12-18 | The Upjohn Company | Transfer of male sterility in carrots |
| ES2131760T5 (es) * | 1995-11-02 | 2007-03-01 | Enza Zaden Beheer B.V. | Celula vegetal macho esteril citoplasmica de hortalizas de la familia de las compositae y metodo para obtener una planta de este tipo. |
-
2012
- 2012-11-22 UA UAA201506110A patent/UA116221C2/uk unknown
- 2012-11-22 HU HUE12799098A patent/HUE038376T2/hu unknown
- 2012-11-22 TR TR2018/10193T patent/TR201810193T4/tr unknown
- 2012-11-22 AU AU2012395191A patent/AU2012395191B2/en not_active Ceased
- 2012-11-22 EA EA201590996A patent/EA032108B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-11-22 US US14/646,521 patent/US10021848B2/en active Active
- 2012-11-22 RS RS20180619A patent/RS57258B1/sr unknown
- 2012-11-22 WO PCT/EP2012/073328 patent/WO2014079498A1/en active Application Filing
- 2012-11-22 ES ES12799098.4T patent/ES2675995T3/es active Active
- 2012-11-22 EP EP12799098.4A patent/EP2922958B1/en active Active
- 2012-11-22 PL PL12799098T patent/PL2922958T3/pl unknown
-
2018
- 2018-05-22 HR HRP20180807TT patent/HRP20180807T1/hr unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2675995T3 (es) | 2018-07-16 |
| EA201590996A1 (ru) | 2015-09-30 |
| US10021848B2 (en) | 2018-07-17 |
| TR201810193T4 (tr) | 2018-08-27 |
| RS57258B1 (sr) | 2018-08-31 |
| HRP20180807T1 (hr) | 2018-06-29 |
| EP2922958B1 (en) | 2018-04-18 |
| US20150296734A1 (en) | 2015-10-22 |
| AU2012395191B2 (en) | 2018-11-08 |
| EP2922958A1 (en) | 2015-09-30 |
| AU2012395191A1 (en) | 2015-07-02 |
| HUE038376T2 (hu) | 2018-10-29 |
| NZ709007A (en) | 2018-11-30 |
| PL2922958T3 (pl) | 2018-09-28 |
| EA032108B1 (ru) | 2019-04-30 |
| WO2014079498A1 (en) | 2014-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8247655B2 (en) | Rucola plants with cytoplasmic male sterility (CMS) | |
| JP4139429B2 (ja) | 細胞質雑種Ｌａｃｔｕｃａ属植物およびその作出方法 | |
| Mwangangi et al. | Plant hybridization as an alternative technique in plant breeding improvement | |
| Deng et al. | Combination of multiple resistance traits from wild relative species in Chrysanthemum via trigeneric hybridization | |
| Usman et al. | Mandarin (Citrus reticulata blanco) breeding | |
| Kovalsky et al. | Evidence of the production of 2 n eggs in diploid plants of the autopolyploid complex Turnera sidoides L.(Passifloraceae) | |
| UA72420C2 (uk) | Рослина виду brassica oleracea з чоловічою стерильністю і спосіб її отримання | |
| Harvey et al. | Analysis of plants obtained by embryo rescue from an interspecific Actinidia cross | |
| ES2699989T3 (es) | Cebolla con pungencia reducida que no genera componente lacrimógeno | |
| NL8803089A (nl) | Cms-brassica oleracea planten en methoden om ze te verkrijgen. | |
| UA116221C2 (uk) | Спосіб отримання рослини petroselinum crispum, яка має цитоплазматичну чоловічу стерильність | |
| Squirrell et al. | Cell lines and plants obtained after protoplast fusions of Rosa+ Rosa, Rosa+ Prunus and Rosa+ Rubus | |
| US20200120885A1 (en) | Methods for promoting production of viable seeds from apomictic guayule plants | |
| WO1997009873A1 (en) | Cytoplasmic male sterile brassica oleracea plants which contain the polima cms cytoplasm and are male sterile at high and low temperatures | |
| JP6268292B2 (ja) | 細胞質雄性不稔キクニガナ属植物 | |
| TW202107981A (zh) | 低溫生長性經改良之細胞質雄性不稔萵苣（Ｌａｃｔｕｃａ）屬植物 | |
| GERMANA | USE OF IN VITRO TISSUE CULTURE IN PROPAGATION AND GENETIC IMPROVEMENT OF FRUIT TREES | |
| Grosser | The role of biotechnology in the development of improved Citrus scion and rootstock cultivars | |
| NZ709007B2 (en) | Methods for providing cytoplasmic male sterile petroselinum crispum plants, cytoplasmic male sterile petroselinum crispum plants and seeds and plant parts thereof | |
| CN116648134A (zh) | 细胞质雄性不育碧冬茄属植物、其属间杂交植物、及其制造方法 | |
| HUT78057A (hu) | "Polima" CMS citoplazmát tartalmazó, magas és alacsony hőmérsékleten citoplazmikusan hímsteril Brassica oleracea növények | |
| CA2231423A1 (en) | Cytoplasmic male sterile brassica oleracea plants which contain the polima cms cytoplasm and are male sterile at high and low temperatures |