TWI808655B

TWI808655B - 蛹蟲草的培養方法

Info

Publication number: TWI808655B
Application number: TW111105979A
Authority: TW
Inventors: 楊明潔
Original assignee: 立萬利創新股份有限公司
Priority date: 2022-02-18
Filing date: 2022-02-18
Publication date: 2023-07-11
Also published as: TW202334389A

Abstract

本發明公開一種蛹蟲草的培養方法及一種蛹蟲草子實體萃取物。蛹蟲草的培養方法包括：提供一蛹蟲草菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；將於該無光照條件培養的該蛹蟲草菌株接種於一蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃無光照條件培養至少5天以使一蛹蟲草菌絲體生長分佈於該蛹蟲草固態培養基；將分佈於該蛹蟲草固態培養基的該蛹蟲草菌絲體於20-30℃以一第一間歇光照條件下培養至少3天，以使該蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；以及將呈現金黃色的該蛹蟲草菌絲體以基於一第一溫度變化的一第二間歇光照條件培養至少4天以使該蛹蟲草菌絲體轉化為一蛹蟲草子實體。

Description

蛹蟲草的培養方法

本發明涉及一種蛹蟲草的培養方法，特別是涉及一種使用紅藜以提升蛹蟲草子實體活性物質含量的培養方法及使用該培養方法所培養而成的蛹蟲草子實體的萃取物。

蛹蟲草(Cordyceps militaris)又稱北冬蟲夏草、蛹草、北蟲草等，屬於真菌界的蟲草屬。蛹蟲草中的活性物質及其藥效作用都已經接近甚至超過冬蟲夏草，因此已逐漸使用人工培養的蛹蟲草作為冬蟲夏草的替代品。蛹蟲草主要包含蟲草素及腺苷等活性物質。蟲草素具有護肝、潤肺、保腎、提升免疫力的功效，腺苷具有鎮靜、血管擴張、助眠、降低膽固醇的功效。此外，人工培養的蛹蟲草又比野生冬蟲夏草來的便宜，因此人工培養的蛹蟲草是較好的選擇。

蛹蟲草子實體固態培養，一般以糙米、米、麥等為基底，但糙米、米、麥的蛋白質多半缺乏一種或兩種以上必需胺基酸，所以固態培養基會額外添加蛋白質，如：大豆蛋白、牛肉萃取物、雞肉萃取物、魚肉萃取物、蠶蛹，也會額外添加礦物質，如：碳酸鈣、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂，藉此來增加培養基中的營養成份，使蛹蟲草子實體提升蟲草素及腺苷的含量。

紅藜為原住民的傳統糧食作物，紅藜具有易栽種，生長旺盛及適應性強等特性，且紅藜具有高豐富性蛋白質、礦物質、膳食纖維及充足必需胺基酸和多種抗氧化物質，紅藜含有離胺酸及羥丁胺酸，是一般穀類所缺乏的胺基酸，礦物質含量也比其他穀類還高，具有穀類紅寶石之美名。

故，如何通過培養方法的改良，來提升蛹蟲草子實體的活性物質進而增強其功效，已成為該項事業所欲解決的重要課題之一。

本發明所要解決的技術問題在於，現有的蛹蟲草培養技術需額外添加動、植物性蛋白及礦物質才能提升蛹蟲草子實體活性物質，利用本發明培養方法及培養基使用紅藜，就能大幅增加蛹蟲草子實體活性物質。

為了解決上述的技術問題，本發明所採用的其中一技術方案是提供一種蛹蟲草的培養方法，其包括提供一蛹蟲草菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；將該無光照條件下培養的該蛹蟲草菌株接種於一蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃的無光照條件下培養至少5天以使一蛹蟲草菌絲體生長分佈於該蛹蟲草固態培養基；將分佈於該蛹蟲草固態培養基的該蛹蟲草菌絲體於20-30℃以一第一間歇光照條件下培養至少3天，以使該蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；以及將呈現金黃色的該蛹蟲草菌絲體以一基於一第一溫度變化的一第二間歇光照條件培養至少4天以使該蛹蟲草菌絲體轉化為一蛹蟲草子實體。

為了解決上述的技術問題，本發明所採用的另外一技術方案是提供一種蛹蟲草子實體萃取物，其包括萃取通過如前述的培養方法所培養而成的蛹蟲草子實體而製成。

本發明的其中一有益效果在於，本發明所提供的蛹蟲草的培養方法及蛹蟲草子實體萃取物，其能通過“提供蛹蟲草菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；將無光照條件下培養的蛹蟲草菌株接種於蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃的無光照條件下培養至少5天以使蛹蟲草菌絲體生長分佈於蛹蟲草固態培養基；將分佈於蛹蟲草固態培養基的蛹蟲草菌絲體於20-30℃以第一間歇光照條件培養至少3天，以使蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；以及將呈現金黃色的蛹蟲草菌絲體以基於第一溫度變化的第二間歇光照條件培養至少4天以使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體”的技術方案，以提升蛹蟲草子實體的活性物質含量及其抗氧化能力。

為使能更進一步瞭解本發明的特徵及技術內容，請參閱以下有關本發明的詳細說明與圖式，然而所提供的圖式僅用於提供參考與說明，並非用來對本發明加以限制。

S1~S5:步驟

圖1為本發明一實施例的蛹蟲草的培養方法的流程圖。

圖2為本發明另一實施例的蛹蟲草的培養方法的流程圖。

圖3為本發明第二實施例的蛹蟲草使用不包括紅藜的固態培養基培養的蛹蟲草子實體萃取物(空白組)的高效液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)圖譜。

圖4為本發明第二實施例的蛹蟲草使用包括紅藜的固態培養基培養的蛹蟲草子實體萃取物(實驗組一)的HPLC圖譜。

圖5為本發明一實施例的蛹蟲草使用不包括紅藜但包括葡萄糖、酵母粉、大豆蛋白、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀及硫酸鎂的固態培養基培養的蛹蟲草子實體萃取物(對照組)的HPLC圖譜。

圖6為本發明的蛹蟲草的培養方法及不同培養基影響蛹蟲草子實體萃取物中蟲草素含量的分析圖。

圖7為本發明的蛹蟲草的培養方法及不同培養基影響蛹蟲草子實體萃取物中腺苷含量的分析圖。

圖8為本發明的蛹蟲草的培養方法及不同培養基影響蛹蟲草子實體萃取物的α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除能力的分析圖。

以下是通過特定的具體實施例來說明本發明所公開有關“蛹蟲草的培養方法及蛹蟲草子實體萃取物”的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所公開的內容瞭解本發明的優點與效果。本發明可通過其他不同的具體實施例加以施行或應用，本說明書中的各項細節也可基於不同觀點與應用，在不背離本發明的構思下進行各種修改與變更。另外，本發明的附圖僅為簡單示意說明，並非依實際尺寸的描繪，事先聲明。以下的實施方式將進一步詳細說明本發明的相關技術內容，但所公開的內容並非用以限制本發明的保護範圍。另外，本文中所使用的術語“或”，應視實際情況可能包括相關聯的列出項目中的任一個或者多個的組合。

參閱圖1所示，本發明提供一種蛹蟲草子實體的培養方法，其至少包括步驟S1：提供一蛹蟲草菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；步驟S2：將於無光照條件下培養的蛹蟲草菌株接種於一蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃的無光照條件下培養至少5天以使蛹蟲草菌絲體生長分佈於蛹蟲草固態培養基；步驟S3：將分佈於蛹蟲草固態培養基的蛹蟲草菌絲體於20-30℃以一第一間歇光照條件培養至少3天，以使蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；步驟S4：將呈現金黃色的蛹蟲草菌絲體以基於一第一溫度變化的一第二間歇光照條件培養至少4天以使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體。

在一實施例，在步驟S1中，無光照培養較佳為於22℃進行。此外，無光照培養可以包括無光照固態培養及無光照液態培養，且無光照固態培養及無光照液態培養的時間可以依據需求及實際應用進行調整。

在一實施例中，在步驟S2中，無光照培養較佳為於22℃進行。此外，蛹蟲草固態培養基包括至少一穀類，穀類可以為糙米、米、小麥、大麥、燕麥、黑麥、蕎麥、藜麥、紅藜、大豆、紅豆、綠豆或其任意組合，但本發明不限於此。在一實施例，蛹蟲草固態培養基包括紅藜，較佳地，紅藜的產地為台灣或祕魯，且紅藜為經過脫殼處理的紅藜。基於100重量百分比的蛹蟲草固態培養基，蛹蟲草固態培養基包括0%~45.45%的紅藜。在另一實施例，蛹蟲草固態培養基包括糙米及紅藜，且基於100重量百分比的蛹蟲草固態培養基，蛹蟲草固態培養基包括45.45%~0%的糙米及0%~45.45%的紅藜，較佳地，蛹蟲草固態培養基包括35%~0%的糙米及10%~45%的紅藜，更佳地，蛹蟲草固態培養基包括35%~10%的糙米及10%~35%的紅藜。

在一實施例中，在步驟S3中，第一間歇光照條件較佳為於22℃以一週期性的方式進行。此外，第一間歇光照條件可以是一紅間歇光照，紅間歇光照可以使用波長620nm~660nm LED進行紅光照射，且可以為紅光照射18小時及無光照6小時的間歇光照時間。

在一實施例中，在步驟S4中，第二間歇光照條件可以是另一紅間歇光照，紅間歇光照可以使用波長620nm~660nm LED進行紅光照射，且可以為紅光照射15小時及無光照9小時的間歇光照時間。

在一實施例中，在步驟S4中，第一溫度變化可以是6~8℃的溫度差變化。舉例來說，在步驟S4中，可以於22℃紅光照射15小時及於16℃無光照9小時，也可以於24℃以紅光照射15小時及於16℃無光照9小時，或是於24℃以紅光照射15小時及於18℃無光照9小時，但本發明不限於此。

在一實施例中，如圖2所示，在步驟S4之後，還可以實施步驟 S5：將蛹蟲草子實體以一第三間歇光照條件搭配一第二溫度差變化，且空氣濕度為60~80%的環境下持續培養至少30天。

在一實施例中，在步驟S5中，第三間歇光照條件可以是又一紅間歇光照，紅間歇光照可以使用波長620nm~660nm LED進行紅光照射，且可以為紅光照射12小時及無光照12小時的間歇光照時間。

在一實施例中，在步驟S5中，第二溫差變化可以是3~6℃的溫度差變化。舉例來說，在步驟S5中，可以於22℃紅光照射12小時及於19℃無光照12小時，但本發明不限於此。

本發明還提供一種蛹蟲草子實體萃取物，其為萃取通過前述的培養方法所培養而成的蛹蟲草子實體而製成。

進一步來說，蛹蟲草子實體可以通過習知的萃取方法進行萃取，並可以依據需求及實際應用進行調整萃取方法中的各步驟，本發明不予限制。在一實施例中，蛹蟲草子實體是通過超音波萃取而製成。

此外，蛹蟲草子實體萃取物可以水、水溶性有機溶劑或超臨界流體作為溶劑進行萃取而製成。在一實施例中，蛹蟲草子實體是以水為溶劑進行萃取而製成。

藉由以下具體實施例，可進一步說明並支持本發明可實際應用的範圍，但並非因此侷限本發明的申請專利範圍。

[第一實施例]

本發明第一實施例提供一種蛹蟲草的培養方法，其至少包括下列步驟：步驟一：將一蛹蟲草菌株接種於potato dextrose agar(PDA)培養基上，並於無光照下於22℃培養至少5天，再自至少培養5天的PDA培養基上分離出3mm×3mm方塊，接種至200mL的Potato dextrose broth(PDB) 液態培養基中，並於無光照下於22℃、100~130rpm振盪培養至少5天；步驟二：自至少培養5天的PDB液態培養基中取3~5mL添加至蛹蟲草固態培養基上，並於無光照環境下於22℃培養至少5天以使蛹蟲草菌絲體生長分佈於蛹蟲草固態培養基；步驟三：以紅光LED照射18小時及無光照6小時於22℃培養至少3天以使蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；步驟四：於22℃以紅光LED照射15小時及於16℃無光照9小時培養蛹蟲草菌絲體至少4天以使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體。

此外，在蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體後，還可以再進行步驟五：於22℃以紅光LED照射12小時及於19℃無光照12小時，且空氣濕度為60~80%的環境下持續培養30至40天以使蛹蟲草子實體生長。

在本實施例中，在步驟二中，蛹蟲草固態培養基主要包括糙米、紅藜及水，且基於100重量百分比的蛹蟲草固態培養基，蛹蟲草固態培養基包括45.45%~0%的糙米及0%~45.45%的紅藜。在一較佳實施例，蛹蟲草固態培養基包括35%~0%的糙米及10%~45%的紅藜。在一更佳實施例，蛹蟲草固態培養基包括35%~10%的糙米及10%~35%的紅藜。然而，蛹蟲草固態培養基中的糙米及紅藜含量比例可以依照需求及實際應用進行調整，本發明不限於此。

在本實施例中，在步驟三中，紅光LED可以是具有發光峰值介於600nm至760nm的紅光LED。在一較佳實施例，紅光LED為具有發光峰值介於620nm至660nm的紅光LED，但本發明不限於此。

在本實施例中，在步驟四中，使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體可以是在一特定溫度差變化進行，特定溫度差變化可以為介於6℃至8℃的溫度變化。舉例來說，可以於24℃以紅光LED照射15小時及於16℃無光照9小時，或是於24℃以紅光LED照射15小時及於18℃無光照9小時，持續培養蛹蟲草菌絲體以使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體，但本發明不限於此。

[第二實施例]

根據第一實施例所述的培養方法，所培養的蛹蟲草子實體進一步進行萃取及分析，萃取方法至少包括下列步驟：步驟一：自培養基上移除長成後的蛹蟲草子實體，並於40℃~50℃烘乾48小時；步驟二：將乾燥的蛹蟲草子實體進行微細粉碎化，並通過200目之篩網使其達到均質化，以得到蛹蟲草子實體粉末；步驟三：取400mg之蛹蟲草子實體粉末溶解於8mL去離子水，得到蛹蟲草子實體水溶液；步驟四：將蛹蟲草子實體水溶液於55℃進行超音波萃取2小時；步驟五：靜置冷卻後於8000×g離心3分鐘，移取上清液並以0.45μm濾膜過濾後，得到蛹蟲草子實體萃取物。

在本實施例中，在步驟一中，可以根據實際應用調整烘乾蛹蟲草子實體的溫度及時間。舉例來說，蛹蟲草子實體也可以於60℃烘乾12~24小時。此外，蛹蟲草子實體也可以其他方式進行乾燥，例如真空冷凍乾燥、微波真空乾燥或低溫冷風乾燥等，但本發明不限於此。

在本實施例中，在步驟二中的微細粉碎化可以使用一均質機進行。舉例來說，均質機可以是一Oster均質機，但本發明不限於此，可以根據習知技術選擇均質機或其他均質方法以使蛹蟲草子實體進行微細粉碎化。此外，篩網之目數也可根據實際應用進行擇用，本發明不予限制。

在本實施例中，在步驟三中，蛹蟲草子實體粉末可以根據實際應用溶解於水及/或水溶性有機溶劑中。水溶性有機溶劑可以是甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丁醇、乙二醇、丙二醇、甘油中的一種或多種的混合物，但本發明不予限制。此外，本發明的蛹蟲草子實體也可以使用超臨界流體作為溶劑來萃取蛹蟲草子實體，且超臨界流體可以為，例如但不限於，超臨界二氧化碳等超臨界氣體。

在本實施例中，在步驟四中，可以根據習知技術選擇超音波裝置或其他方法以使蛹蟲草子實體進行超音波萃取，此外，超音波萃取時的作用溫度及時間亦可根據需求進行調整，本發明不予限制。另一方面，當使用超音波裝置進行蛹蟲草子實體超音波萃取時，超音波功率可以為5W、10W、50W、100W、200W、300W、400W、500W、600W、700W、800W、900W或1000W，但本發明不限於此。在一較佳實施例，在步驟四中，蛹蟲草子實體係以300W的功率於55℃進行超音波萃取2小時，以獲得所需的蛹蟲草子實體萃取物。

承上述，蛹蟲草子實體萃取物進一步進行活性成分分析。在本實施例中，所使用的高效液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)儀器為Hitachi Primaide^TM UV system系統，其包括PM1110 pump幫浦、PM1210 autosampler自動注射器及PM1430 DAD-detector光二極體陣列檢出器。分析條件如下表一。

此外，在HPLC分析中，還使用腺苷及蟲草素對照用標準品(購自於Sigma-Aldrich)並以去離子水稀釋至50、100、200、300、400μg/mL，供作標準溶液進行HPLC分析檢驗，並以其分析結果製作標準曲線，進一步推算蛹蟲草子實體萃取物中腺苷及蟲草素的含量。

本實施例還提供了空白組及對照組與利用本發明的蛹蟲草的培養方法所獲得的蛹蟲草子實體萃取物(以下稱實驗組)進行比較分析。為比較蛹蟲草固態培養基中包括紅藜及糙米對於蛹蟲草子實體培養的影響，實驗組進一步分為包括紅藜及糙米(以下稱實驗組一)與僅包括紅藜(以下稱實驗組二)的蛹蟲草固態培養基。空白組及對照組與本發明的蛹蟲草的培養方法大致相同，其主要差異在於空白組的蛹蟲草固態培養基中不包括紅藜，而對照組的蛹蟲草固態培養基中除了不包括紅藜外，還包括了葡萄糖、酵母粉、大豆蛋白、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀及硫酸鎂等成分(即常見的含高營養成分的蛹蟲草固態培養基)。有關空白組、實驗組一、實驗組二及對照組的蛹蟲草固態培養基成分組成及相對含量百分比請見下表二及表三。此外，空白組及對照組的萃取方法與實驗組相同，不再贅述。

如圖3至圖5所示，通過培養於不同固態培養基上培養的蛹蟲草子實體的萃取物經HPLC分析後，其所含成分所呈現的HPLC圖譜型態大致相同。但值得注意的是，在蛹蟲草培養過程當中，如圖3至圖5的HPLC圖譜中滯留時間5.0-5.3分鐘的色譜峰所示，使用包括有紅藜的固態培養基來培養蛹蟲草(在此為實驗組一)可有效提升蛹蟲草子實體內的腺苷含量。

如圖6所示，實驗組一、實驗組二(即本發明的蛹蟲草的培養方法所獲得的蛹蟲草子實體萃取物)及對照組所含的蟲草素濃度皆顯著高於空白組。此外，實驗組二的蟲草素含量顯著大於對照組的蟲草素含量，顯示使用包括有紅藜的蛹蟲草固態培養基來培養蛹蟲草可有效提升蟲草素含量。

如圖7所示，實驗組一所含的腺苷濃度顯著高於空白組及對照組，顯示在蛹蟲草培養過程當中，使用包括有紅藜的蛹蟲草固態培養基來培養蛹蟲草可有效提升蛹蟲草子實體內的腺苷含量。

在本實施例中，進一步以α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除能力試驗評估蛹蟲草子實體的抗氧化能力，其方法如下所述。

首先，取各組別子實體萃取液0.1mL，添加在0.9mL之含有1mM DPPH的甲醇溶液中充分混合均勻，於室溫下避光靜置反應30分鐘後，將混合液於517nm的波長下以分光光度計來測量吸光值(OD₅₁₇)。並以0.1mL的去離子水作為空白對照組並進行相同的實驗。若測得的吸光值(OD₅₁₇)越低，代表清除DPPH自由基的能力越強，抗氧化能力越高。DPPH自由基清除率(radical scavenging rate)(%)是藉由將所測得的吸光值(OD₅₁₇)代入下列公式(1)計算而得：A=[1-(B/C)]×100 (1)

其中，A為DPPH自由基清除率(%)，B為各組所測得的OD₅₁₇吸光值，C為空白對照組所測得的OD₅₁₇吸光值。

如圖8所示，空白組、實驗組一、實驗組二及對照組皆顯示出良好的DPPH自由基清除能力，表示蛹蟲草子實體對於自由基有很強的防護能力。此外，使用包括有紅藜的蛹蟲草固態培養基來培養蛹蟲草(即實驗組一及實驗組二)能更加提升DPPH自由基清除能力，顯示使用包括有紅藜的蛹蟲草固態培養基來培養蛹蟲草可以有效提升蛹蟲草子實體的抗氧化能力。

[第三實施例]

在本實施例中，進一步調整蛹蟲草固態培養基中紅藜的含量以分析紅藜對於蛹蟲草生長的影響，培養蛹蟲草的方法、萃取方法及分析方法如第一實施例及第二實施例所述，在此不再贅述。

在本實施例中，如下表四所示，蛹蟲草固態培養基中主要包括糙米、紅藜及水，且基於100重量百分比的蛹蟲草固態培養基，蛹蟲草固態培養基包括45.45%~0%的糙米及0%~45.45%的紅藜(表四中以糙米：紅藜=4：0、糙米：紅藜=3：1、糙米：紅藜=2：2、糙米：紅藜=1：3及糙米：紅藜=0：4分為五組別表示)。

如下表五所示，在糙米：紅藜=3：1及糙米：紅藜=2：2的組別中，蛹蟲草子實體萃取物的腺苷濃度較其他組別顯著提升，顯示在蛹蟲草固態培養基包括44.45%~22.73%的糙米及0%~22.73%的紅藜的培養條件下，可以有效提升蛹蟲草子實體萃取物中的腺苷含量。

表五、蛹蟲草在含有不同比例的糙米及紅藜的固態培養基培養後的子實體萃取物腺苷濃度

如下表六所示，在糙米：紅藜=2：2、糙米：紅藜=1：3及糙米：紅藜=0：4的組別中，蛹蟲草子實體萃取物的蟲草素濃度較其他組別顯著提升，顯示在蛹蟲草固態培養基包括22.73%~0%的糙米及22.73%~45.45%的紅藜的培養條件下，可以有效提升蛹蟲草子實體萃取物中的蟲草素含量。

[實施例的有益效果]

本發明的其中一有益效果在於，本發明所提供的蛹蟲草的培養方法，其能通過“提供蛹蟲草菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；將無光照條件下培養的蛹蟲草菌株接種於蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃的無光照條件下培養至少5天以使蛹蟲草菌絲體生長分佈於蛹蟲草固態培養基；將分佈於蛹蟲草固態培養基的蛹蟲草菌絲體於20-30℃以第一間歇光照條件培養至少3天，以使蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；以及將呈現金黃色的蛹蟲草菌絲體以基於第一溫度變化的第二間歇光照條件培養至少4天以使蛹蟲草菌絲體轉化為蛹蟲草子實體”的技術方案，以提升蛹蟲草子實體的活性物質含量及其抗氧化能力。

以上所公開的內容僅為本發明的優選可行實施例，並非因此侷限本發明的申請專利範圍，所以凡是運用本發明說明書及圖式內容所做的等效技術變化，均包含於本發明的申請專利範圍內。

S1~S4:步驟

Claims

一種蛹蟲草的培養方法，其包括：步驟S1：提供一蛹蟲草(Cordyceps militaris)菌株於20-30℃的無光照條件下培養至少10天；步驟S2：將於該無光照條件培養的該蛹蟲草菌株接種於一蛹蟲草固態培養基上，並於20-30℃的無光照條件下培養至少5天以使一蛹蟲草菌絲體生長分佈於該蛹蟲草固態培養基；步驟S3：將分佈於該蛹蟲草固態培養基的該蛹蟲草菌絲體於20-30℃以光照18小時及無光照6小時的光照條件培養至少3天，以使該蛹蟲草菌絲體顏色呈現金黃色；以及步驟S4：將呈現金黃色的該蛹蟲草菌絲體以於22℃光照15小時及於16℃無光照9小時培養至少4天以使該蛹蟲草菌絲體轉化為一蛹蟲草子實體；其中，該蛹蟲草固態培養基包括紅藜。
如請求項1所述的培養方法，其中，在步驟S1中，該蛹蟲草菌株於22℃的無光照條件下培養於一固態環境或一液態環境中。
如請求項1所述的培養方法，其中，在步驟S2中，該無光照條件培養是於22℃進行。
如請求項1所述的培養方法，其中，該紅藜產地為台灣或秘魯，且該紅藜經脫殼處理。
如請求項1所述的培養方法，其中，基於100重量百分比的蛹蟲草固態培養基，紅藜的含量為34.09%~45.45%。
如請求項1所述的培養方法，還包括：步驟S5：將蛹蟲草子實體以於22℃紅光照射12小時及於19℃無光照12小時，且空氣濕度為60~80%的環境下持續培養至少30天。