TWI791941B

TWI791941B - 一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途

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Publication number: TWI791941B
Application number: TW109102010A
Authority: TW
Inventors: 陳美杏; 呂昀陞; 沈立言; 楊淑惠
Original assignee: 行政院農業委員會農業試驗所
Priority date: 2019-01-31
Filing date: 2020-01-20
Publication date: 2023-02-11
Also published as: TW202041226A

Abstract

本發明提供係提供一種菇類及/或其培養基質萃取物的用途，可應用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物，其中菇類係選自蜜環菌、蛹蟲草、茯苓和/或靈芝。

Description

一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途

本發明係有關於一種菇類及/或其培養基質萃取物，以及使用此菇類及/或其培養基質萃取物製備舒緩情緒與抗憂鬱組成物的用途。

憂鬱症號稱是二十一世紀的健康殺手，根據世界衛生組織的報告，全球共有超過3.5億人罹患憂鬱症，但因為憂鬱症的汙名化嚴重，許多人不願承認自己生病了，因此從未尋求治療。

依照世界衛生組織的研究，憂鬱症的女性的終身盛行率約在10-25%，男性為5-12%，每五個女性就有一個在一生中有一次的憂鬱症發作的危機。2020年造成人類失能(disability)前十名的疾病，第一名是憂鬱症。另外根據哈佛大學的研究，造成人類社會整體疾病負擔(Global burden of Disease)前十名的疾病，第二名也是憂鬱症。

在台灣，衛生署國民健康局憂鬱症調查指出，調查按人口比例估算顯示：8.9%的人有憂鬱症狀，約200萬人，其中重度憂鬱者，約佔5.2%，約125萬人。而以流行病學盛行率估算，憂鬱症在台灣造成的經濟成本一年為405億元，其中藥費、醫療照顧等直接成本只占百分之廿二，約89億元；但因憂鬱症無法工作造成的生產損失，占了百分之七十六點三，金額高達309億元。

進一步，根據健保資料統計，截至2016年底，國內經醫師處方服用抗憂鬱劑的國人有121萬2659人，人數不但明顯逐年增加，更較5年前的用藥人數98萬3490人，大幅增加了近23%。值得一提的是，不論國內醫師處方抗憂鬱劑用藥人口總人數如何增加，歷年來男性與女性的用藥比例幾乎都維持在4：6。

目前於臨床上大至約有近30種抗憂鬱藥物，其中可分為：1.血清素再攝取抑制劑(SSRI，或簡稱為「血清素」)；2.血清素及去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)；3.去甲腎上腺素及特定血清素抗鬱劑(NaSSA)；4.血清素拮抗劑及血清素再攝取抑制劑(SARI)；5.血清素及多巴胺再攝取抑制劑(NDRI)。然而，前述抗憂鬱藥物仍存有許多副作用，例如服用血清素再攝取抑制劑(SSRI)之患者，常出現出汗、失眠、疲倦、神經緊張、手震等副作用，服用血清素及去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)之患者，常出現嘔吐、便秘、嗜睡、神經緊張等副作用，服用去甲腎上腺素及特定血清素抗鬱劑(NaSSA)之患者，常出現便祕、口乾、嗜睡、體重上升等副作用，服用血清素拮抗劑及血清素再攝取抑制劑(SARI)之患者，常出現疲勞、口乾、頭暈、頭痛等副作用，服用血清素及多巴胺再攝取抑制劑(NDRI)之患者，常出現口乾、噁心、嘔吐、頭痛、失眠等副作用。

有鑑於此，如何發展一種源自天然作物成分來改善現有藉由化學合成藥物來舒緩人們情緒、減緩憂鬱症患者症狀，甚至進一步改善現有天然作物栽培技術、製備方法，且具來源穩定、成分安全的優勢，解決現有技術之缺失，實為相關技術領域者目前所迫切需要解決問題之一。

鑒於以上所述，如何降低現有服用化學成分之抗憂鬱藥劑副作用等情形，實為相關技術領域者目前所迫切需要解決之問題。

緣此，本發明之目的係以解決目前憂鬱症患者服用化學成分之抗憂鬱藥劑所面臨副作用等問題，藉由本發明提供天然作物栽培技術、製備方法而得具來源穩定、成分安全的萃取物而達到舒緩人們情緒、減緩憂鬱症狀之目的，維持穩定的除硫效率，進而改善現有技術之問題。

有鑑於此，本發明係提供一種無副作用之用於抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物，及含此菇類及/或其培養基質萃取物的複方。

本發明係提供一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該萃取物選自一蜜環菌萃取物，其中蜜環菌萃取物係以蜜環菌液態結合靜置培養產生菌索而獲得，進而改善現有技術僅以液態發酵為主之缺失。

在本發明一實施例中，其中該萃取物係選自一蛹蟲草萃取物、一蛹蟲草固態基質萃取物。

在本發明一實施例中，其中該蛹蟲草固態基質萃取物係選自一穀物。

在本發明一實施例中，其中該萃取物係選自一茯苓萃取物。

在本發明一實施例中，其中茯苓萃取物至少經一調整酸鹼值步驟經萃取而獲得。

在本發明一實施例中，其中該萃取物係選自一靈芝萃取物。

〔圖1〕係為顯示根據本發明一實施例蜜環菌萃取物對強迫游泳試驗之大鼠不泳動時間及慢性溫和壓力試驗之糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數之影響。

〔圖2〕係顯示根據本發明實施例蛹蟲草萃取物對強迫游泳試驗之大鼠不泳動時間及慢性溫和壓力試驗之糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數之影響。

〔圖3〕係顯示根據本發明實施例茯苓萃取物對強迫游泳試驗之大鼠不泳動時間及慢性溫和壓力試驗之糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數之影響。

〔圖4〕係顯示根據本發明實施例靈芝萃取物對強迫游泳試驗之大鼠不泳動時間及慢性溫和壓力試驗之糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數之影響。

〔圖5〕係為顯示根據本發明實施例複數種菇類及/或其培養基質萃取物複方於慢性溫和壓力模式試驗對於大鼠的糖水偏好性之影響。

〔圖6〕係為顯示根據本發明實施例複數種菇類及/或其培養基質萃取物複方於慢性溫和壓力模式試驗對於大鼠的總移動距離與穿越區塊次數之影響。

〔圖7〕係為顯示根據本發明實施例蜜環菌與蛹蟲草複方萃取物對大鼠前額皮質中血清素(5-HT)(圖7A)及其代謝物(5-HIAA)(圖7A)濃度之影響。血清素代謝速率以5-HIAA/5-HT之百分比表示(圖7C)。

〔圖8〕係為顯示根據本發明實施例蜜環菌與蛹蟲草複方萃取物對大鼠前額皮質中多巴胺(DA)(圖8A)及其代謝物(DOPAC)(圖8B)濃度之影響(n=5~6)。多巴胺代謝速率以DOPAC/DA之百分比表示(圖8C)

〔圖9〕係為顯示蛹蟲草萃取物(圖9A)與蛹蟲草固態基質萃取物(圖9B)之蟲草素與腺苷含量分析。

以下藉由特定的具體實施形態說明本發明之技術內容，熟悉此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容而瞭解本發明之優點與功效。然本發明亦可藉由其他不同的具體實施形態加以施行或應用。

除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。

蜜環菌(Armillaria mellea)是一種在夏、秋季節發生，能兼性寄生於多種木本、草本植物的野生食用菌，屬傘菌綱(Agaricomycetes)、傘菌目(Agaricales)、蜜環菌屬，其學名為Armillariamellea(Vahl).P.Kumm.。蜜環菌又名榛蘑、臻蘑、蜜蘑、蜜環蕈、櫟蕈，分布於全球各地區。子實體肉質，菌傘寬度可達4cm~14cm，全株可食，顏色為土黃色或蜜黃色，由於會分泌蜜狀黏液，且菇柄上有菌環，故稱為蜜環菌。另外，蜜環菌(A.mellea)是一種與天麻或豬苓共生的藥用真菌，在天麻的生長過程中是不可缺少的共生菌。

蛹蟲草是北冬蟲夏草(Cordyceps militaris)的簡稱，也叫北蟲草或蛹草，分類上屬真菌界，子囊菌門(Ascomycota)，肉座菌目(Hypocereales)，麥角菌科(Clavicipitaceae)蟲草屬(Cordyceps)。其與冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis=Cordyceps sinensis)為近緣種而同屬於子囊菌門。相較於冬蟲夏草僅可寄生於蝙蝠蛾之幼蟲，蛹蟲草的寄主範圍較為廣泛，目前已知有19種昆蟲，其中有16種屬於鱗翅目，子實體多數為叢生，從蟲體頭部或節間膜長出，少數為單生，長2-5公分，橙黃色，子實體頂部有乳狀突起的子囊殼，內含子囊孢子，子囊孢子可藉助風力傳播到寄主昆蟲體上，孢子萌發長出芽管，菌絲可自體表侵入蟲體內繼續寄生生長。

茯苓(Poria cocos)，又稱玉靈、茯靈、萬靈桂、茯菟、茯苓神、朱雲苓、赤茯苓、白茯苓、伏靈、雲苓，野生茯苓通常寄生或是腐生於松科植物的樹木根部。在分類上茯苓屬於真菌類、擔子菌門、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科。茯苓作為藥用的主要部份並不是菇體，而是其在地表下形成巨大圓形至卵圓形的菌核，直徑最大可達數十公分，重量可達數公斤甚至數十公斤，外皮淡棕色或黑褐色，內部粉色或白色，精製後稱為白茯苓或者雲苓。

靈芝(學名：Ganoderma lucidium)，又稱靈芝草、萬年茸、福草、木靈芝、神芝、芝草、仙草、瑞草等名稱，廣義上靈芝包括靈芝科及其近緣科屬的種類，狹義上則是指廣泛栽培的特定種類。在分類上屬於擔子菌門、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目、靈芝菌科(Ganodermataceae)、靈芝屬(Ganoderma)。靈芝屬於白腐真菌，多生於闊葉樹上，在高溫多濕的環境下生長良好，目前人工栽培以太空包為主，少數以段木栽培。

本發明係有關於一種用於製備舒緩情緒抗憂鬱組成物之菇類萃取物的用途具抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物的用途，其中該萃取物來自於一蜜環菌萃取物。前述蜜環菌萃取物可以一般習知發酵方式獲得。在一實施例中，蜜環菌萃取物係以蜜環菌液態結合靜置培養產生菌索而獲得。本發明蜜環菌萃取物具有抗憂鬱、舒緩情緒、鎮靜等功效，因此可用於製備治療、抑制、改善憂鬱的保健產品或藥品。

在本發明另一實施例中，本發明菇類及/或其培養基質更包括一蛹蟲草固態基質萃取物，其中係藉由蛹蟲草菌種接種於該蛹蟲草固態基質再經萃取而獲得。於本發明再一實施例中，蛹蟲草固態基質係選自一穀物，其中該穀物係包括，但不限於稻米、小麥、玉米、小米、高粱、燕麥、薏仁米等。於本發明又一實施例中，稻米係選自糙米，固態基質萃取物係包括，但不限於蟲草素(cordycepin)。

再者，於另一實施例中，本發明菇類及/或其培養基質更包括一茯苓萃取物，前述茯苓萃取物的萃取步驟中是至少包含一調整pH值的步驟。

換句話說，於本發明一實施例中，蜜環菌(AM)萃取物、蛹蟲草(CM)萃取物、蛹蟲草固態基質(CMR)萃取物、茯苓(PC)萃取物或靈芝(GL)萃取物可分別單獨以低(L)、中(M)、高(H)劑量而施予一動物。舉例而言，蜜環菌(AM)萃取物可以低、中、高劑量為250、500、1000毫克/每公斤體重(mg/kg)而施予一動物，蛹蟲草(CM)萃取物可以低、中、高劑量為125、250及500毫克/每公斤體重(mg/kg)而施予一動物，茯苓(PC)萃取物可以低、中、高劑量為100、300、900 毫克/每公斤體重(mg/kg)而施予一動物，靈芝(GL)萃取物可以低、中、高劑量為20、100、500毫克/每公斤體重(mg/kg)而施予一動物。

當然，本發明不限於此，於本發明另一實施例中，蜜環菌(AM)萃取物、蛹蟲草(CM)萃取物、蛹蟲草固態基質(CMR)萃取物、茯苓(PC)萃取物或靈芝(GL)萃取物可組合成不同的複方而藉由低(L)、中(M)、高(H)劑量施予一動物。舉例而言，蜜環菌萃取物與蛹蟲草萃取物可以重量百分比為2~4：1~2之劑量施予一動物。蜜環菌萃取物與蛹蟲草固態基質萃取物可以重量百分比為6~10：1~2之劑量施予一動物。茯苓(PC)萃取物與蛹蟲草固態基質(CMR)萃取物可以重量百分比為4~8：1~2之劑量施予一動物。蛹蟲草萃取物與茯苓萃取物可以重量百分比為2~3：1~2之劑量施予一動物。蜜環菌萃取物與茯苓萃取物可以重量百分比為2~4：1~2之劑量施予一動物。靈芝萃取物與蛹蟲草固態基質萃取物之重量百分比為4~8：1~2。

另一方面，本發明之具抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物製備為一組合物時，該組合物一藥品、一飼料、一飲料、一營養補充品、一乳製品、一食品或一保健食品，該組合物的形態可為粉劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、液劑噴劑或塞劑。換言之前述組合物可作為例如，經口投予用之內服用固形劑、內服用液劑或非經口施予用之注射劑(皮下、靜脈內、肌肉內、腹腔內注射等)等。經口施予用之內服用固形劑可為，例如錠劑、丸劑、膠囊劑、粉劑或顆粒劑等。

在內服用固形劑中可使用之添加劑包括賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、安定劑或潤濕劑。賦形劑包括，但不限於，白糖、乳糖、葡萄糖、澱粉或甘露醇等。黏合劑包括，但不限於，阿拉伯膠、羧甲基纖維素(carmellose)、明膠、結晶纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素或聚維酮(povidone)等。崩解劑包括，但不限於，羧甲基纖維素、澱粉、結晶纖維素或低取代羥丙基纖維素等。潤滑劑包括，但不限於，滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或矽石等。安定劑、潤濕劑包括，但不限於，檸檬酸酐、月桂酸鈉或甘油等。此等添加劑係能單獨使用，此外也能併用2種以上使用。經口投予用之內服用液劑可舉例如：水劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑或酏劑(elixir)等。可使用於此種液劑之添加劑可為，例如純化水、乙醇或該等之混合液等溶劑。並且在內服用液劑中，也可含有懸浮化劑(例如：阿拉伯膠、寒天、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素等)、乳化劑(例如：聚山梨醇酯(polysorbate)80、阿拉伯膠等)、調味劑(例如：單糖漿、蜂蜜、白糖、酒石酸等)、芳香劑(例如：水楊酸甲酯、茴香油、橙油、薄荷腦等)、防腐劑(例如：安息香酸、安息香酸鈉等)、緩衝劑(例如：檸檬酸、碳酸氫鹽等)等。添加劑可單獨使用，也能合併2種以上使用。

不僅如此，本發明之具抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物製備為一食品或一藥劑之形態時，於較佳實施例中係進一步含有糖分。糖分無特別限定，例如，核醣、去氧核醣、葡萄糖、果糖或半乳糖等單醣類；麥芽糖、海藻糖(trehalose)、蔗糖或乳糖等雙醣類；或者澱粉、支鏈澱粉、肝醣等多醣類。糖分中較佳為單醣類，而以在生物體內可迅速利用做為能源之葡萄糖為特佳。

換言之，本發明之具抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物係以製劑學上所容許之添加物同以一藥品之形態，或與已為食品衛生法上所認可之添加物同以一食品之形態而提供。

具抗憂鬱與舒緩情緒之菇類及/或其培養基質萃取物係能與製劑學上所容許之添加物一同以藥品之形態，或與已為食品衛生法上所認可之添加物一同以食品之形態提供。

實施例

實施例一、蜜環菌菌索的培養及萃取

蜜環菌的菌索培養分成兩個階段：第一階段為菌絲液態發酵，第二階段為靜置培養至菌索大量形成。將蜜環菌菌絲培養在馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基中14天後，將培養皿的菌絲切成小塊，移至500ml的三角搖瓶中，內含300ml液態培養基，配方每公升10%穀類抽出物、10克麥芽抽出物和20克葡萄糖，於24℃定溫的震盪培養箱中培養7天(轉速150rpm)。接著進行放大生產，將上述液態菌種接種於滅菌後之600公升的發酵槽中培養，其中培養基每公升含有穀類抽出物100ml，麥芽抽出物10g，葡萄糖20g。於發酵槽中通氣培養14天後，再將液態發酵菌絲連同培養液分裝至2公升滅過菌的塑膠瓶子中，靜置30天，待菌索生長至瓶子底部後，將菌索及培養液倒出，冷凍乾燥或以烘箱烘乾。換言之，本發明蜜環菌(Armillaria mellea，AM)萃取物是藉由液態發酵結合靜置培養誘使產生菌索之方法而獲得。

實施例二、蛹蟲草子實體之培養與萃取物之製備

取50克穀類基質，如糙米或是其他穀類，添加50克的RO水以高溫高壓進行滅菌，冷卻後接種10ml蛹蟲草液體菌種，經60天的培養長成子實體。將收穫後之子實體和基部的蛹蟲草固態基質(或稱為米基質、蟲草米)分開，以烘箱烘乾。蛹蟲草子實體萃取物的製備：係將乾燥蛹蟲草子實體磨成粉末，並以60目過篩，再以重量10~20倍之RO水加熱至100℃萃取1小時之後過濾，萃取液再經過減壓濃縮之後，以冷凍乾燥機凍乾。蟲草固態基質萃取物製備：將烘乾後的蛹蟲草固態基質磨成粉末，再以重量10~20倍之熱水或50%酒精加熱至90~100℃萃取1小時，經過減壓濃縮與冷凍乾燥製程後而獲得本發明所述蛹蟲草固態基質萃取物。

進一步，另請參閱圖9，蛹蟲草萃取物(如圖9A所示)與蛹蟲草固態基質萃取物(如圖9B所示)之蟲草素與腺苷含量分析：以HPLC分析蛹蟲草萃取物與固態基質萃取物中蟲草素和腺苷之含量，每克蛹蟲草萃取物含有5.4~6.4mg之蟲草素，2.89~3.77mg之腺苷，而每克蛹蟲草固態基質萃取物則含有18.7~24.2mg之蟲草素，2.44~3.32mg之腺苷。

實施例三、茯苓菌核的培養及萃取

將松樹段木裁切成20公分以上長寬高大小，滅菌後接種茯苓菌種，待菌絲長滿段木表面即可覆土，約3個月之後形成菌核。去除菌核表面的土粒後，以烘箱烘乾。茯苓萃取物之製備：將茯苓皮和內部的白茯苓分開，將白茯苓磨成粉末，並以60目過篩，2公斤白茯苓粉末添加40~80公升RO水，然後加入食用級小蘇打粉將pH調整至7.5~8.0，然後加熱至100℃，萃取1小時之後過濾，經減壓濃縮之後凍乾。換句話說，本發明茯苓(Poria cocos，PC)萃取物並非藉由本領域習知傳統中藥泡製的方式進行乾燥處理而獲得，而是藉由本發明創新開發之新穎調整酸鹼值的方式進行萃取製程而獲得。

實施例四、靈芝子實體萃取液之製備

靈芝乾燥子實體磨成粉末，取2公斤粉末加入40~80公升50%酒精，然後加熱至80~100℃萃取1小時，將殘渣過濾，再以同樣的方法萃取一次，合併兩次萃取之上清液經過減壓濃縮之後進行冷凍乾燥。

實施例五、強迫游泳試驗(forced swimming test，FST)

本實施例使用4週齡之雄性SD大鼠。先預養2週後，於6週齡時開始進行試驗，餵食28天。將動物分成6組，包括空白對照組(control，CTL)、負對照組(negative control，NCTL)、正對照組(Fluoxetine，PCTL)以及3組實驗組(菇類及/或其培養基質萃取物低(L)、中(M)、高(H)劑量)，數值以平均值±標準差表示。以單因子變異數分析(one-way ANOVA)搭配Dunnett’s事後檢定與負控制組比較組間差異(* p<0.05,** p<0.01,*** p<0.001)。對於動物模式而言，強迫游泳試驗係屬急性試驗。

實施例六、不可預期慢性溫和壓力試驗(unpredictable chronic mild stress，UCMS)動物試驗

本實施例使用4週齡之雄性SD大鼠。先預養2週後，於6週齡時開始進行試驗，餵食35天。將動物分成6組，包括控制組(control，CTL)、負控制組(negative control，NCTL)、正控制組(positive control，PCTL)(fluoxetine 20mg/kg bw)以及3組實驗組(菇類及/或其培養基質萃取物單方或複方之低(L)、中(M)、高(H)劑量)，每組動物8-12隻。事後以單因子變異數分析(one-way ANOVA)搭配Dunnett’s事後檢定與負控制組比較組間差異。慢性溫和壓力試驗係採下述建議項目，包括：(a)、連續光照：持續光照24小時，每週1次；(b)、中斷光/暗週期：週期中斷之持續時間為2小時，每週2次；(c)、禁食/水：中斷持續時間為24小時，每週2次；(d)、限制飲食：一次1小時，每週1次；(e)、空瓶：一次1小時，每週1次；(f)、籠舍傾斜：傾斜角度45度，每週2次，分別持續12小時及18小時；(g)、潮濕環境：弄濕墊料持續24小時，每週1次；(h)、噪音：每次100dB，每次3小時，每週2次。亦即，本發明進行不可預期慢性溫和壓力試驗時，每週皆使用前述6~8個以下之慢性壓力建議項目進行測試，並於下一週開始時，打亂前述6~8個實驗項目之次序而以隨機分配的方式進行操作來確保測試實驗之不可預測性。換言之，本實施例係以蔗糖水偏好試驗(sucrose preference test)、開放空間試驗(open field test)等模式分析動物之行為，並記錄動物每週之體重、攝食量、飲水量及死亡率，藉以評估菇類及/或其培養基質萃取物單方或複方之舒緩情緒功效。蔗糖偏好程度數據為評估慢性壓力誘導的成功與否，同時亦為評估菇類及/或其培養基質萃取物之抗憂鬱效果指標之一，蔗糖攝取量越高代表憂鬱程度越低。對於動物模式而言，不可預期慢性溫和壓力試驗係屬慢性試驗。

實施例七、蜜環菌(Armillaria mellea，AM)萃取物對於大鼠舒緩情緒之試驗

請參閱圖1，本發明於其中一實施例中，係藉由快速游泳試驗水中不泳動時間以及不可預期溫和壓力試驗來測試經由餵食蜜環菌萃取物對於大鼠舒緩情緒之效果。其中AM250為每次餵食動物每公斤250毫克之蜜環菌(AM)萃取物劑量，AM500為每次餵食動物每公斤500毫克之蜜環菌(AM)萃取物劑量，AM1000為每次餵食動物每公斤1000毫克之蜜環菌(AM)萃取物劑量。圖1A為顯示蜜環菌萃取物在強迫游泳試驗中大鼠的不泳動時間。大鼠餵食蜜環菌萃取物連續28天後，於強迫游泳試驗時，隨著蜜環菌萃取物劑量的增加，在水中不泳動時間顯著降低，明顯低於負控制組(圖1A所示)。另如圖1B、圖1C、圖1D為顯示蜜環菌萃取物在慢性溫和壓力試驗(unpredictable chronic mild stress，UCMS)中大鼠的糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數。在此溫和壓力試驗中，比較所有不同劑量蜜環菌之實驗組和負控制組，實驗組的大鼠糖水偏好性(圖1B)明顯增加，而低劑量之蜜環菌可以增加大鼠穿越區塊之次數(圖1D)。換句話說，所有不同劑量的蜜環菌萃取物在快速游泳模式可以顯著降低大鼠不泳動時間，而在不可預期溫和壓力試驗中，所有不同劑量之蜜環菌實驗組的糖水偏好性相較於負控制組均明顯增加，代表不同劑量之蜜環菌萃取物可以改善大鼠類憂鬱症狀。

實施例八、蛹蟲草(Cordyceps militaris，CM)萃取物對於大鼠舒緩情緒之試驗

請參閱圖2，本發明於其中一實施例中，係藉由強迫游泳試驗以及慢性溫和壓力試驗來測試經由餵食蛹蟲草(C.militaris)萃取物對於大鼠舒緩情緒之效果。其中CM125為每次餵食動物每公斤125毫克之蛹蟲草(CM)萃取物劑量，CM250為每次餵食動物每公斤250毫克之蛹蟲草(CM)萃取物劑量，CM500為每次餵食動物每公斤500毫克之蛹蟲草(CM)萃取物劑量。圖2A為顯示蛹蟲草萃取物在強迫游泳試驗中大鼠的不泳動時間。如圖2A所示，在強迫游泳試驗中，高劑量蛹蟲草(C.militaris)萃取物可顯著降低大鼠在水中不泳動時間。進一步，圖2B、圖2C、圖2D為顯示蛹蟲草萃取物在慢性溫和壓力試驗(unpredictable chronic mild stress，UCMS)中大鼠的糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數，不同劑量之蛹蟲草萃取物可以顯著增加大鼠的糖水偏好性、總移動距離與穿越區塊次數。亦即如圖2B-圖2D所示，在慢性溫和壓力試驗中，不同劑量之蛹蟲草(C.militaris)萃取物可以改善大鼠類憂鬱症之效果(圖2B、圖2C、圖2D)。

實施例九、茯苓(Poria cocos，PC)萃取物對於大鼠舒緩情緒之試驗

請參閱圖3，本發明於其中一實施例中，係藉由強迫游泳試驗以及慢性溫和壓力試驗來測試經由餵食茯苓萃取物對於大鼠舒緩情緒之效果。其中PC100為每次餵食動物每公斤100毫克之茯苓(PC)萃取物劑量，PC300為每次餵食動物每公斤300毫克之茯苓(PC)萃取物劑量，PC900為每次餵食動物每公斤900毫克之茯苓(PC)萃取物劑量。圖3A為顯示茯苓萃取物在強迫游泳試驗中大鼠的不泳動時間。其中利用不同劑量之茯苓水萃物連續餵食大鼠28天後，於強迫游泳試驗時，正控制組以及低、中、高三劑量實驗組別在水中不泳動時間皆顯著低於負控制組(如圖3A所示)。圖3B、圖3C、圖3D顯示茯苓萃取物在慢性溫和壓力試驗(unpredictable chronic mild stress，UCMS)中大鼠的糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數。亦即於慢性溫和壓力試驗中，不同劑量之茯苓萃取物可增加大鼠之糖水偏好性(圖3B)、總移動距離(圖3C)和穿越區塊之次數(圖3D)。

實施例十、靈芝(Ganoderma lucidium，GL)萃取物對於大鼠舒緩情緒之試驗

請參閱圖4，本發明於其中一實施例中，係藉由強迫游泳試驗以及慢性溫和壓力試驗來測試經由餵食靈芝萃取物對於大鼠舒緩情緒之效果。低、中、高劑量分別為每公斤20、100和500mg之劑量，圖4A為顯示靈芝萃取物在強迫游泳試驗中大鼠的不泳動時間。其中利用不同劑量之靈芝水萃物連續餵食大鼠28天後，於強迫游泳試驗時，正控制組以及中、高劑量實驗組別在水中不泳動時間皆顯著低於負控制組(如圖4A所示)。圖4B、圖4C、圖4D顯示靈芝萃取物在慢性溫和壓力試驗(unpredictable chronic mild stress，UCMS)中大鼠的糖水偏好性、總移動距離及穿越區塊次數，中，高劑量之靈芝萃取物可增加大鼠之糖水偏好性(圖4B)，總移動距離(圖4C)和穿越區塊之次數(圖4D)。

實施例十一、數種菇類及/或其培養基質萃取物複方對於大鼠舒緩情緒之試驗

以強迫游泳試驗測試蜜環菌萃取物、蛹蟲草萃取物、蛹蟲草固態基質萃取物、茯苓萃取物與靈芝萃取物組合成不同的複方對於大鼠舒緩情緒之效果。以單方最低有效劑量蜜環菌萃取物250mg/kg bw、蛹蟲草萃取物125mg/kg bw、蛹蟲草固態基質萃取物31.2mg/kg bw、茯苓萃取物100mg/kg bw和靈芝萃取物100mg/kg bw，分別以有效劑量1：1的混合方式作為1X試驗劑量，然後分別將各種組合以1/8、1/4、1/2及1X劑量進行快速游泳試驗，試驗結果決定不同複方之低、中、高劑量進行不可預期慢性溫和壓力試驗。其中蛹蟲草固態基質萃取物的有效劑量，係由蟲草素的含量分析推測其與子實體的活性成分相近，且其蟲草素含量為子實體含量的4倍，因此蛹蟲草固態基質萃取物的有效劑量僅需蛹蟲草萃取物的1/4。

進一步，圖5A、圖5C、圖5C圖為顯示在溫和壓力試驗中，蜜環菌(AM)萃取物、茯苓(PC)萃取物或靈芝萃取物(GL)與蛹蟲草(CM)萃取物或蛹蟲草固態基質(CMR)萃取物，組合成不同的菇類或其培養基質萃取物低(L)、中(M)、高(H)劑量複方皆可增加大鼠的糖水偏好性。其中AM-CM複方之低劑量為兩者組合1倍劑量的1/8(AM 31.3mg/kg bw+CM 16.6mg/kg bw)，中劑量為1/4(AM 62.5mg/kg bw+CM 31.3mg/kg bw)，高劑量為1/2(AM 125mg/kg bw+CM 62.5mg/kg bw)。PC-CMR複方之低劑量為兩者組合一倍劑量的1/4(PC 25mg/kg bw+CMR 7.8mg/kg bw)、中劑量為1/2(PC 50mg/kg bw+CMR 15.6mg/kg bw)、高劑量為3/4(PC75mg/kg bw+CMR 23.4mg/kg bw)。GL-CMR複方之低劑量為兩者組合1倍劑量的1/4(GL 25mg/kg bw+CMR 7.8mg/kg bw)、中劑量為1/2(GL 50mg/kg bw+CMR 15.6mg/kg bw)、高劑量為3/4(GL 75mg/kg bw+CMR 23.4mg/kg bw)。由糖水偏好性的試驗結果得知AM-CM的組合僅需低劑量(1/8劑量)、PC-CMR的組合中劑量(1/2劑量)、和GL-CMR的組合複方高劑量(3/4劑量)即可改善大鼠的類憂鬱症狀，達到1+1>2的加乘效果。亦即其中AM-CM複方之配比可以為蜜環菌(AM)萃取物200~300mg/kg與蛹蟲草(CM)萃取物100~150mg/kg組合而成，因此AM-CM是為蜜環菌(AM)萃取物與蛹蟲草(CM)萃取物以重量百分比為2~ 4：1~2組合而成。PC-CMR是為茯苓萃取物100~200mg/kg與蛹蟲草固態基質25~50mg/kg萃取物之重量百分比為4~8：1~4組合而成。GL-CMR是為靈芝萃取物100~200mg/kg與蛹蟲草固態基質萃取物25~50mg/kg之重量百分比為4~8：1~4組合而成。

不僅如此，於另一慢性溫和壓力試驗中，低劑量蜜環菌萃取物與蛹蟲草萃取物組合的複方可增加大鼠的總移動距離(圖6A)和穿越區塊次數(圖6D)。

實施例十、複數種菇類萃取物複方對於腦部多巴胺及血清素及其代謝物之含量影響

請參閱圖7及圖8，藉由複數種菇類萃取物複方可降低大鼠的血清素代謝速率(如圖7C所示)與多巴胺代謝速率(如圖8C所示)，其中圖7之代謝率(turnover rate)以5-HIAA/5-HT之百分比來表示，圖8之代謝率(turnover rate)以DOPAC/DA之百分比來表示。所有數值均以mean±SD表示。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001與NCTL比較(n=6,One way ANOVA followed by Dunnett’s Multiple Comparison Test)，前述結果顯示菇類萃取物及/或其複方具有舒緩情緒之效果，可能和腦部的血清素及多巴胺之代謝速率相關。

詳細言之，圖7A係顯示蜜環菌和蛹蟲草組合成複方一中劑量可以顯著增加大鼠前額皮質中血清素的含量，圖7B係顯示低、中、高劑量之複方均可降低大鼠前額皮質中血清素代謝物之濃度，圖7C係顯示低、中、高劑量之複方均可降低大鼠前額皮質中血清素及其代謝物之代謝率。圖8B係顯示低、中、高劑量之複方均可降低大鼠前額皮質中多巴胺代謝物之濃度，圖8C係顯示中、高劑量之複方均可降低大鼠前額皮質中多巴胺及其代謝物之代謝率。

上述實施例僅為說明本發明之原理及其功效，其目的在使熟習前述技術者能瞭解本發明之內容並據以實施，並非限制本發明。因此習於此技術之人士對上述實施例進行等效修飾、修改及變化仍不脫本發明之精神。本發明之權利範圍應如後述之申請專利範圍所列。

Claims

一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一蜜環菌萃取物、及一蛹蟲草萃取物；其中該蜜環菌萃取物係以蜜環菌液態發酵結合靜置培養誘使產生菌索而獲得；其中該蛹蟲草萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質而經收獲蛹蟲草子實體再經萃取獲得；其中該蜜環菌萃取物與該蛹蟲草萃取物係以重量百分比為2~4：1~2組合而成；其中該蜜環菌萃取物係以每次31.3~62.5毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草萃取物係以每次16.6~31.3毫克/公斤(mg/kg)體重組合施予一個體而達舒緩情緒的功效；其中該個體係為一具憂鬱症狀個體。
一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一蜜環菌萃取物、及一蛹蟲草萃取物；其中該蜜環菌萃取物係以蜜環菌液態發酵結合靜置培養誘使產生菌索而獲得；其中該蛹蟲草萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質而經收獲蛹蟲草子實體再經萃取獲得；其中該蜜環菌萃取物係以每次31.3毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草萃取物係以每次16.6毫克/公斤(mg/kg)體重組合施予該個體。
一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一蜜環菌萃取物、及一蛹蟲草萃取物；其中該蜜環菌萃取物係以蜜環菌液態發酵結合靜置培養誘使產生菌索而獲得；其中該蛹蟲草萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質而經收獲蛹蟲草子實體再經萃取獲得；其中該蜜環菌萃取物係以每次62.5毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草萃取物係以每次31.3毫克/公斤(mg/kg)體重組合施予該個體。
一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一茯苓萃取物、及一蛹蟲草固態基質萃取物；其中該茯苓萃取物係藉加入食用級小蘇打粉而將pH調整至7.5-8.0之調整酸鹼值步驟後再經萃取獲得；其中該蛹蟲草固態基質萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質再經萃取獲得；其中該茯苓萃取物與該蛹蟲草固態基質萃取物之重量百分比為4~8：1~2，其中該茯苓萃取物係以每次至少包含50毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草固態基質萃取物組合施予一個體而達舒緩情緒的功效；其中該個體係為一具憂鬱症狀個體。
一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一茯苓萃取物、及一蛹蟲草固態基質萃取物；其中該茯苓萃取物係藉加入食用級小蘇打粉而將pH調整至7.5-8.0之調整酸鹼值步驟後再經萃取獲得；其中該蛹蟲草固態基質萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質再經萃取獲得；其中該茯苓萃取物係以每次50毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草固態基質萃取物係以每次15.6毫克/公斤(mg/kg)體重組合施予該個體。
一種菇類及/或其培養基質萃取物用於製備抗憂鬱與舒緩情緒組合物之用途，其中該組合物係包含一茯苓萃取物、及一蛹蟲草固態基質萃取物；其中該茯苓萃取物係藉加入食用級小蘇打粉而將pH調整至7.5-8.0之調整酸鹼值步驟後再經萃取獲得；其中該蛹蟲草固態基質萃取物係藉一糙米作為蛹蟲草液體菌種之培養基質再經萃取獲得；其中該茯苓萃取物係以每次75毫克/公斤(mg/kg)體重與該蛹蟲草固態基質萃取物係以每次23.4毫克/公斤(mg/kg)體重組合施予該個體。
如請求項1或請求項2或請求項3或請求項4或請求項5或請求項6所述之用途，其中該組合物係為一藥品、一飼料、一飲料、一營養補充品、一乳製品、一食品或一保健食品，其中該組合物的形態為粉劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、液劑噴劑或塞劑，其中該組合物更包含一種選自下列群組的添加劑：賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、安定劑、潤濕劑或其組合。