TWI733026B - 昭和草萃取物於治療乳癌之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於一種於一需要此等治療之個體中治療乳癌及/或治療乳癌轉移之方法，其包含給予該個體有效量之昭和草(Crassocephalum rabens
)萃取物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
Description
本揭露係關於昭和草(Crassocephalum rabens
)萃取物之用途，特定言之，係關於昭和草萃取物於治療乳癌之用途。
三陰性乳癌(Triple negative breast cancer，TNBC)為一種侵襲性乳癌亞型，其特徵為可當標靶之雌激素(ER)、孕酮(PR)及人類表皮生長因子(HER2)受體的缺乏或較低表現 (Sledge GW, Mamounas EP, Hortobagyi GN等人, (2014) Past, present, and future challenges in breast cancer treatment. J Clin Oncol 32(19):1979-1986)。於手術之後，一般利用具有細胞毒性之化學療法來預防腫瘤患者之腫瘤生長及轉移 (Zeichner SB, Terawaki H及Gogineni K (2016) A review of systemic treatment in metastatic triple negative breast cancer. Breast Cancer (Auckl) 10:25-36)。當今市面上最常給予的TNBC化學治療藥物之一為多柔比星(doxorubicin)(Adriamycin®；調配為多柔比星鹽酸鹽)(Piccart-Gebhart MJ, Burzykowski T, Buyse M等人, (2008) Taxanes alone or in combination with anthracyclines as first-line therapy of patients with metastatic breast cancer. J Clin Oncol. 26:1980-1986)。在臨床上，其與其他紫杉烷或蒽環黴素[諸如多烯紫杉醇(docetaxel)及環磷醯胺(cyclophosphamide)]分別組合使用(Wahba HA及El-Hadaad HA. (2016) Current approaches in treatment of triple-negative breast cancer. Cancer Biol Med 12(2):106-116)。然而，此等組合療法之功效有限且具不當副作用，因而促使人們努力開發新穎且可靶向之TNBC特異性機制。舉例而言，已顯示最新化學治療方法主要通過誘導TNBC腫瘤發生細胞凋亡腫瘤反應而作用(O'Reilly EA, Gubbins L, Sharma S等人, (2015) The fate of chemoresistance in triple negative breast cancer (TNBC). BBA Clinical 3:257-275)。然而，因化學療法造成腫瘤抗性或癌轉移， TNBC患者轉移復發率較高，使得最佳化有效化學療法之組合具挑戰性(Collignon J, Lousberg L, Schroeder H及Jerusalem G (2016). Triple-negative breast cancer: treatment challenges and solutions. Breast Cancer: Target & Ther 8, 93-107)。另外，包括體重損失、免疫反應受損、惡病質及疲勞之副作用，通常與此等治療策略相關(Hanna AD, Lam A, Tham S, Dulhunty AF及Beard NA. (2014) Adverse effects of doxorubicin and its metabolic product on cardiac RyR2 and SERCA2A. Mol Pharmacol 86(4):438-449)。多柔比星療法亦熟知可誘導心肌病，對TNBC患者而言為更嚴重且致死性之化學治療副作用之一(Chatterjee K, Zhang J, Honbo N及Karliner JS. (2010) Doxorubicin cardiomyopathy. Cardiology 115(2):155-162)。因此，需要對正常細胞具較弱細胞毒性效應、但具有針對癌細胞較高功效的更有效化合物(Craig DW, O'Shaughnessy JA, Kiefer JA等人, (2013) Genome and transcriptome sequencing in prospective metastatic triple-negative breast cancer uncovers therapeutic vulnerabilities. Mol Cancer Ther 12(1):104-116)。
本揭露提供昭和草於治療乳癌之用途。
本揭露提供一種於一需要此等治療之個體中治療乳癌及/或治療乳癌轉移之方法，其包含給予該個體有效量之昭和草萃取物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供昭和草萃取物於製備治療乳癌及/或治療乳癌轉移藥物之用途。
本揭露提供一種治療乳癌及/或治療乳癌轉移之醫藥組合物，其包含有效量之昭和草萃取物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供昭和草萃取物，其用於治療乳癌及/或治療乳癌轉移。
本揭露提供一種於一需要此等治療之個體中治療乳癌及/或治療乳癌轉移之方法，其包含給予該個體有效量之如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑；
式I 其中R1
及R2
獨立為C(O)Ra
，其中Ra
為具有0至3個雙鍵之C15-17
烷基，及R3
為單半乳糖基或二半乳糖基。
本揭露提供如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物於製備治療乳癌及/或治療乳癌轉移藥物之用途。
本揭露提供一種治療乳癌及/或治療乳癌轉移之醫藥組合物，其包含有效量之如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物，其用於治療乳癌及/或治療乳癌轉移。
以下部分詳細描述了本發明。本發明的其他特徵、目的和優點描述 於發明實施方式和申請專利範圍中。
本揭露提供一種於一需要此等治療之個體中治療乳癌及/或治療乳癌轉移之方法，其包含給予該個體有效量之昭和草萃取物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供昭和草萃取物於製備治療乳癌及/或治療乳癌轉移藥物之用途。
本揭露提供一種治療乳癌及/或治療乳癌轉移之醫藥組合物，其包含有效量之昭和草萃取物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供昭和草萃取物，其用於治療乳癌及/或治療乳癌轉移。
本揭露提供一種於一需要此等治療之個體中治療乳癌及/或治療乳癌轉移之方法，其包含給予該個體有效量之如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
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-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑；式I 其中R1
及R2
獨立為C(O)Ra
，其中Ra
為具有0至3個雙鍵之C15-17
烷基，及R3
為單半乳糖基或二半乳糖基。
本揭露提供如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
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-α-棕櫚醯基3-O
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-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
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-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
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-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物於製備治療乳癌及/或治療乳癌轉移藥物之用途。
本揭露提供一種治療乳癌及/或治療乳癌轉移之醫藥組合物，其包含有效量之如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
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-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
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-甘油(18：3/18：1)、1,2-二-O
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-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物及視情況之醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本揭露提供如式I所示之化合物：1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
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-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油、或其醫藥上可接受之衍生物，其用於治療乳癌及/或治療乳癌轉移。
經由參考以下詳細說明之本揭露各種具體實施例、實例以及化學圖和表及其相關描述，可以更容易地理解本發明。應理解者，除非於申請專利範圍中另外特別指出，否則本發明不限於特定的製備方法、載體或製劑，或將本揭露之萃取物調劑為用於局部、口服或腸胃外之產品或組合物之特定模式，因本發明所屬技術領域中具通常知識者很清楚，前述項目當然可以變化。還應理解者，本文使用的術語僅用於描述特定具體實施例之目的，而非用以限制性。
除非另外指出，否則如本發明所用之以下術語應解釋為具有以下含義：
如本文所用之術語「醫藥學上可接受之衍生物」表示自本發明化合物改質而來，但性質及功效與本揭露化合物相同或更佳的化合物。醫藥學上可接受之衍生物較佳為本揭露化合物之醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、水合物或前藥。
本揭露之化合物亦可以溶劑合物及水合物形式存在。因此，此等化合物可與例如水合水或一個、許多或任何分率之母液溶劑分子一起結晶。該等化合物之溶劑合物及水合物包括在本發明之範疇內。
範圍在本文中通常表述為「約」一個特定值及/或至「約」另一個特定值。當表述此類範圍時，一態樣為包括一個特定值及/或至另一個特定值之範圍。類似地，當值藉由使用字「約」表述為近似值時，應瞭解特定值可形成另一態樣。另外應瞭解，每一範圍之各端點皆有顯著性，一端點與另一端點既有相關性，亦彼此獨立。
「視情況」或「視情況地」意謂隨後所述之事件或狀況可能發生或可能不發生，且該描述包括該事件或狀況發生之情況及其未發生之情況。舉例而言，「視情況包含藥劑」意謂該藥劑可能存在或可能不存在。
必須指出，除非上下文另外清楚規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一」及「該」包括複數個所指標的物。因此，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
如本文所用之術語「個體」表示任何動物，較佳為哺乳動物，且更佳為人類。個體之實例包括人類、非人類靈長類動物、齧齒動物、天竺鼠、兔、綿羊、豬、山羊、母牛、馬、狗及貓。
術語如本文所提供之化合物的「有效量」意謂該萃取物之量足以提供對所需功能之所需調節。如下文所指出，確實的需要量將在個體之間有變化，此視個體之疾病病況、身體狀況、年齡、性別、物種及體重、組合物之特性及配方等而定。給藥方案可經調整以誘導最佳治療反應。舉例而言，可每日投予若干分次劑量，或可依治療情形之緊急程度按比例減少劑量。因此，很難指定確實的「有效量」。然而，本發明領域中具有通常知識者使用常規實驗即可確定適當的有效量。
如本文所用之術語「治療」表示逆轉、減輕或改善此術語所適用之病症或病狀、或該病症或病狀之一或多種症狀，或抑制其進展。
如本文所用之術語「載劑」或「賦形劑」係指自身並不為治療劑，而是用作用於將治療劑傳遞至個體之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑或媒劑，或添加至調配物中以改善調配物之處理或儲存性質或允許或有助於組合物之劑量單位形成適於投予之劑量單位的任何物質。適合之載劑或賦形劑為一般熟習製造醫藥調配物或食品之通常知識者所熟知。載劑或賦形劑可包括(舉例而言但不限於)緩衝劑、稀釋劑、崩解劑、黏合劑、黏著劑、濕潤劑、聚合物、潤滑劑、滑動劑、為遮蔽或抵消不良味道或氣味而添加之物質、調味劑、染料、芳香劑及為改善組合物之外觀而添加之物質。可接受之載劑或賦形劑包括檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、碳酸氫鹽緩衝劑、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、碳酸鎂、滑石、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、果膠、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、澱粉、明膠、纖維素物質(諸如烷酸之纖維素酯及纖維素烷基酯)、低熔點蠟、可可脂、胺基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、磷脂、蛋白質(例如血清白蛋白)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二甲亞碸(DMSO)、氯化鈉或其他鹽、脂質體、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油或粉末、聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇及聚乙二醇)、及其他醫藥學上可接受之物質。載劑不應破壞治療劑之藥理學活性，且在以足以傳遞治療量之藥劑的劑量投予時應無毒性。
植物化合物調節癌症和免疫細胞代謝中的關鍵過程，是開發更有效化學治療劑之豐富資源。其可單獨使用或與現有藥物組合使用，以增強其有效性或使其副作用最小化。
根據本發明之昭和草(Crassocephalum rabens
)亦可知為C. rabens
S. Moore、C. rubens
S. Moore、C. crepidioides
S. Moore及Crassocephalum crepidioides
。如本文中所使用，昭和草植物可為整個植株或其一或多個部位，包含但不限於種子、花、葉、枝幹及根。於本發明之一具體實施例中，該昭和草植物為整個植株。於本發明之另一具體實施例中，該昭和草植物為種子、花、葉或其任意組合。於本發明之一較佳具體實施例中，該昭和草植物係經乾燥及粉碎。
根據本發明之昭和草萃取物較佳為醇萃取物。較佳地，其中該醇為C1至C4醇。本文中所言之「C1至C4醇」乙詞係指直鏈或支鏈、具取代或不具取代、單元或多元、飽和或不飽和之醇，較佳係為不具取代、單元及飽和醇。於本發明之一較佳具體實施例中，該C1至C4醇係為甲醇、乙醇、正丙醇(n-propanol)、異丙醇(isopropanol)、正丁醇、異丁醇(iso-butanol)、仲丁醇(sec-butanol)、叔丁醇(tert-butanol)。尤佳地，該C1至C4醇係為甲醇或乙醇。該C1至C4醇可單獨使用或混合多種使用。
於本揭露之一較佳具體實施例中，該昭和草萃取物為該醇萃取物之一乙酸乙酯亞組份。於本揭露之一更佳具體實施例中，進一步之純化如高效液相層析可用於從該醇萃取物或其乙酸乙酯亞組份中分離活性化合物。
在本揭露之一較佳具體實施例中，該昭和草萃取物係由下述方法所製備，該方法包含將昭和草植物與醇混合以形成一第一溶液的方法；從第一溶液中除去醇以獲得一第二溶液；於該第二溶液中加入乙酸乙酯，並形成一有機部分和一無機部分(或水部分)；將該有機部分分成多個組份；及收集含有半乳糖脂化合物的組份。例如，該有機部分可以在矽膠管柱上以含有二氯甲烷和甲醇的溶液分離，得到含有半乳糖脂化合物的組份。
包含於根據本發明之該昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物包括但不限於1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(1,2-di-O
-α-linolenoyl-3-O
-β-galactopyranosyl-sn
-glycerol，dLGG)、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-亞油醯基3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)［1(2)-O
-α-linolenoyl-2(1)-O
-α-linoleoyl 3-O
-β-galactopyranosyl-sn
-glycerol (18:3/18:2)］、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-棕櫚醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)［1(2)-O
-α-linolenoyl-2(1)-O
-α-palmitoyl 3-O
-β-galactopyranosyl-sn
-glycerol (18:3/16:0)］、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-α-油醯基3-O
-β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)［1(2)-O
-α-linolenoyl-2(1)-O
-α-oleoyl 3-O
-β-galactopyranosyl-sn
-glycerol (18:3/18:1)］及1,2-二-O
-α-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn
-甘油［1,2-di-O
-α-linolenoyl-3-O
-(6-O
-α-galactopyranosyl-β-galactopyranosyl)-sn
-glycerol，DGDG］。
該萃取物可包含如式I所示之半乳糖脂化合物：
式I 其中R1
及R2
獨立為C(O)Ra
，其中Ra
為具有0至3個雙鍵之C15-17
烷基，及R3
為單半乳糖基(monogalactosyl)或二半乳糖基(digalactosyl)。於本發明之一具體實施例中，該單半乳糖機二半乳糖基甘油係選自由1,2-二-O
-a-亞麻醯基-3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油、1(2)-O
-α-亞麻醯基-2(1)-O
-a-亞油醯基3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18:3/18:2)、1(2)-O
-a-亞麻醯基-2(1)-O
-a-棕櫚醯基3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O
-a-亞麻醯基-2(1)-O
-a-油醯基3-O
-b-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(18：3/18：1)及1,2-二-O
-a-亞麻醯基-3-O
-(6-O
-a-吡喃半乳糖b-吡喃半乳糖)-sn
-甘油所組成之群。較佳地，該化合物係為dLGG。
根據本揭露之化合物可通過任何已知方法進一步轉化為醫藥上可接受的衍生物，例如藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。
該昭和草萃取物較佳係包含於一萃取組合物中。
根據本發明之該萃取組合物較佳係為一醫藥組合物、食品組合物或一化妝品組合物。
本發明之醫藥組合物可藉由本發明領域中已知之任何方法局部或全身投予，包括但不限於藉由肌肉內、皮內、靜脈內、皮下、腹膜內、鼻內、經口、黏膜或外部途徑投予。適當的投藥途徑、調配方法及投藥時程可由本發明領域中具有通常知識者來決定。在本發明中，醫藥組合物可根據相應投藥途徑以多種方式調配，諸如液體溶液、懸浮液、乳液、糖漿、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放調配物、散劑、顆粒、安瓿、注射液、輸注液、套組、軟膏、洗劑、擦劑、乳膏或其組合。視情況，其可經滅菌或與任何醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合，其中有許多醫藥學上可接受之載劑或賦形劑已為一般技術者所知。
本發明所言之外部途徑亦可稱為局部投藥，包含但不限於以吹氣或吸入投藥。局部投藥之各類製劑實例包含軟膏、乳液、乳霜、凝膠、發泡體，以經皮貼片輸送之製劑，吸入或吹氣用之粉末、噴霧劑、氣溶膠、膠囊或藥匣，或滴劑(例如眼睛用或鼻子用滴劑)，供霧化用溶液/懸浮液、栓劑、陰道藥栓、駐留灌腸劑及咀嚼劑或可吸入之錠劑或藥片或脂質或為膠囊製劑。
軟膏、乳霜及凝膠可例如配合水性或油性基質，且添加適用增稠劑及/或膠凝劑及/或溶劑調配。該基質因此可包含例如水及/或油，如液態鏈烷或植物油，如花生油或蓖麻油，或溶劑如聚乙二醇。可依據基質性質使用之增稠劑及膠凝劑包含軟質鏈烷、硬脂酸鋁、鯨醯硬脂基醇、聚乙二醇、毛脂肪、蜜蠟、羧基聚亞甲基及纖維素衍生物，及/或單硬脂酸甘油酯，及/或非離子性乳化劑。
乳液可配合水性或油性基質調配，且通常亦含有一或多種乳化劑、安定劑、分散劑、懸浮劑或增稠劑。
外塗用粉末可配合任何適用之粉末狀基質形成，例如滑石、乳糖或澱粉。滴劑可配合水性或非水性基質調配，且亦包括一或多種分散劑、溶解劑、懸浮劑或保存劑。
噴霧組合物可例如調配成水溶液或懸浮液，或調配成自預加壓袋輸送之氣溶膠，如劑量吸入器，且配合使用適用之液化推進劑。適用於吸入用之氣溶膠組合物可為懸浮液或溶液，該氣溶膠組合物可視情況含有額外之技藝中習知之調配佐藥，如介面活性劑例如油酸或卵磷脂及共溶劑例如乙醇。
局部用製劑可藉由每天對欲作用之區域施用一或多次投藥；且在皮膚區域上較佳使用覆蓋貼片。可藉由黏著劑儲存系統持續或延長輸送。
根據本發明之化妝品組合物可為水相調配物，其本質上包括水；其亦可包含水及與水互溶溶劑之混合物(在25℃為大於50重量%之水互溶力)，例如含1至5個碳原子之低碳單醇，如乙醇或異丙醇，含2至8個碳原子之二醇，如丙二醇、乙二醇、1,3-丁二醇、或二丙二醇，C3-C4酮與C2-C4醛，及甘油。該水相調配物較佳為水性凝膠或水凝膠調配物之形式。水凝膠調配物包含增稠劑以將液態溶液增稠。增稠劑之實例包括但不限於碳合物、纖維素為主材料、膠、海藻素、瓜爾膠、果膠、鹿角菜苷、明膠、礦物性或經改質礦物性增稠劑、聚乙二醇與多醇、聚丙烯醯胺、及其他之聚合增稠劑。較佳為使用對組合物賦與安定性及最適流動特性之增稠劑。
根據本發明之化妝品組合物可為乳液或乳霜調配物之形式。其可含乳化界面活性劑，這些界面活性劑可選自陰離子及非離子界面活性劑。對於界面活性劑之性質及功能(乳化)，可參考文件"Encyclopedia of Chemical Technology, Kirk-Othmer"，第22卷，第333-432頁，第3版，1979，Wiley，對於陰離子及非離子界面活性劑，特別是該參考資料之第347-377頁。
較佳地，用於本發明組合物之界面活性劑係選自：非離子界面活性劑：脂肪酸，脂肪醇，聚乙氧化或聚乙二醇化脂肪醇，如聚乙氧化硬脂醇或鯨蠟基硬脂醇，蔗糖之脂肪酸酯，烷基葡萄糖酯，特別是C1
-C6
烷基葡萄糖之聚氧伸乙基化脂肪酸酯，及其混合物；陰離子界面活性劑：經胺、氨水或鹼鹽降低之C16
-C30
脂肪酸，及其混合物。較佳為使用可得到水包油或水包蠟乳液之界面活性劑。
根據本發明之化妝品組合物可進一步包含有效量之生理上可接受抗氧化劑，其選自由丁基化對甲酚、丁基化氫醌一甲醚與生育酚組成之群組。
本發明之組合物可進一步包含天然或改質胺基酸、天然或改質固醇化合物、天然或改質膠蛋白、絲蛋白或大豆蛋白。
本發明之組合物較佳為調配成局部應用於角蛋白材料，如皮膚、毛髮、睫毛、或指甲。其可為正常用於此型應用之任何表現形式，特別是水性或油性溶液、水包油或油包水乳液、聚矽氧乳液、微乳液或奈米乳液、水性或油性凝膠或液體、漿狀或固態水合產物之形式。
本發明通常可為流體且可具有白色或有色乳霜、軟膏、乳汁、洗劑、漿液、漿料、慕斯、或凝膠之外觀。其可視需要以氣溶膠、貼片或粉末之形式局部地應用於皮膚上。其亦可為固態形式，例如棒形式。其可作為皮膚用保養產品及/或化妝產品使用。或者，其可調配成洗髮精或潤絲精。
在已知方式中，本發明之組合物亦可含化妝品常用之添加劑及佐劑，如親水性或親脂性膠化劑、防腐劑、抗氧化劑、溶劑、香料、填料、顏料、臭味吸收劑、與染料。
根據本發明之食品組合物中，該萃取組合物可在食品製造過程中，添加於習用之食品組合物中(亦即可食用之食品或飲品或其前驅物)。幾乎所有之食品組合物皆可添加根據本發明之該萃取組合物。可添加根據本發明之該萃取組合物之食品組合物包含，但不限於糖果、烘焙食品、冰淇淋、乳製品、甜品及風味小點、小吃、肉類替代產品、快餐食品、湯類、麵食、麵條、罐頭食品、冷凍食品、乾製食品、冷藏食品、油脂、嬰兒食品、軟食物、或麵包塗醬或其混合物。
如本文所用，術語「轉移」是指癌症從初始或主要部位擴散到一個體內的不同或次要部位。癌細胞可從其最初形成之處擴散到身體的另一部分。在轉移中，癌細胞脫離原始(原發)腫瘤，穿過血液或淋巴系統，並在身體的其他器官或組織中形成新的腫瘤。較佳地，該昭和草萃取物或包含於該昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物係有效於治療乳癌轉移至肺或肝。於本揭露之一具體實施例中，經昭和草萃取物或純半乳糖脂化合物處理後，降低了轉移部位(肺和肝)中細胞增殖標記物之表現水平，並呈劑量依賴模式。在本揭露之另一具體實施例中，經昭和草萃取物或純半乳糖脂化合物處理後，也降低了肝和肺組織中腫瘤轉移誘導之發炎。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效降低與癌轉移相關蛋白質之表現水平，其選自由Src、FAK、Rac 1、Cav-1、CYP2C19和COX-2所組成之群。於本揭露之一具體實施例中，西方墨點法之結果顯示經昭和草萃取物或純半乳糖脂化合物處理後，降低了對腫瘤微環境感知(Src及FAK)、膜重組(Rac1及Cav-1)及生物活性脂質代謝(CYP2C19及COX-2)有關之重要蛋白質之表現。
根據本揭露之乳癌係為自乳房組織發展之癌症。該乳癌包含乳癌細胞。乳癌細胞之例包括但不限於ER+乳癌細胞、Her2+乳癌細胞及ER-、PR-與Her2-乳癌細胞。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效抑制乳癌細胞之增殖。於本揭露之一具體實施例中，與腫瘤控制組相比，經昭和草萃取物或純半乳醣脂化合物處理後，顯著減小了腫瘤體積。再者，於本揭露之一具體實施例中，經昭和草萃取物或純半乳糖脂化合物處理後，降低了於腫瘤組織中增殖標記物之表現水平，並呈劑量依賴模式。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效促進乳癌細胞之細胞凋亡。於本揭露之一具體實施例中，與腫瘤控制組相比，經昭和草萃取物或純半乳糖脂化合物處理後，增加了於組織中腫瘤細胞凋亡標記物之表現水平。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效抑制腫瘤誘導之發炎或轉移誘導之發炎。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效增加該個體之存活率。於本揭露之一具體實施例中，與抗腫瘤藥多柔比星(doxorubicin，Dox)處理組及腫瘤控制組(賦形劑處理)相比，昭和草萃取物或純半乳醣脂化合物增加了腫瘤接種動物之存活率。
於本揭露之一較佳具體實施例中，該處理係與其他抗癌藥劑合併。根據本發明之抗腫瘤藥劑例包括但不限於多柔比星；紫杉烷類(taxanes)或蒽環類抗生素(anthracyclines)，例如多西他賽(docetaxel)及環磷醯胺(cyclophosphamide)；表柔比星(epirubicin)；貝伐單抗(bevacizumab)；吉西他濱(gemcitabine)；5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)；卡培他濱(capecitabine)；環磷醯胺；卡鉑(carboplatin)；順鉑(cisplatin)；奧沙利鉑(oxaliplatin)或長春鹼(vinblastine)；較佳為多柔比星。
較佳地，昭和草萃取物或包含於昭和草萃取物中之半乳糖脂化合物可有效降低該抗癌藥劑之副作用。該副作用之例包括但不限於體重減輕、免疫反應受損、惡病質、疲勞、心肌病和COX-2過度表現。於本揭露之一些具體實施例中，低劑量半乳糖脂化合物聯合治療可減弱Dox誘導的體重減輕，而單獨使用昭和草萃取物或半乳糖脂化合物治療之組則無觀察到明顯的體重減輕。此外，遠端器官中，因抗癌藥劑處理所誘導之COX-2過度表現亦因Dox和半乳糖脂化合物組合治療而減弱。
以下實例之提供僅用於說明之目的，並不意圖限制本發明的範圍。昭和草萃取
新鮮完整的Crassocephalum rabens
S. Moore (Asteraceae) (亦稱為C.crepidioides
S. Moore)植物用70%乙醇萃取一週且重複兩次。粗萃取物使用配有SNAP濾筒KP-C18-HS的Biotage-Flash純化系統進一步分級分離，且用乙醇水溶液(76%-100%，w/w)溶離。收集cv9至cv12之間的萃取液(cv:濾筒體積)以產生CR-API萃取物。在配有二極體陣列偵測器(UV/DAD)的Agilent 1100系列HPLC系統中，以Phenomenex Luna C18(2)管柱(5 µm，250×4.6 mm)對CR-API的代謝物進行特徵分析。溶離條件係使用移動相為等梯度98%甲醇溶離，流量為1 mL/min。波長設置在190-400 nm範圍內且獲取210 nm代表性層析圖。CR-API的代表性管柱層析圖顯示於圖1中，其中指數及生物活性化合物dLGG於約15分鐘呈現。dLGG 的分離
CR-API萃取物進一步使用製備型RP-HPLC (Cosmosil，5C18-AR-II管柱，250×20 mm)純化，以收集純dLGG。dLGG滯留時間為約37分鐘(98%甲醇，5 mL/min，210 nm)，且dLGG的純度(＞98%)及結構藉由分析型RP-HPLC (Phenomenex Luna 5 µm C18(2)管柱，250×4.6 mm)及NMR光譜法[藉由Bruker AVII 500 NMR儀器測得 (資料未展示)]檢查。實例 ： 用於治療乳癌及 / 或治療乳癌轉移的昭和草萃取物及半乳糖脂化合物 材料及方法
試劑及抗體
3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)及二甲亞碸(DMSO)購自Sigma-Aldrich。用於SDS-PAGE的分子量標記物係藉由使用染色前的蛋白質標記物(Bioman，臺灣臺北)估算。使用針對肌動蛋白(Millipore)、Ki-67、裂解半胱天冬酶-3、Src、磷酸基-(419及547) Src (abcam)、CAV-1 (Thermoscientific)及COX-2、FAK、磷酸基-FAK、CYP2C19、Rac1 (Santa Cruz) 的初級抗體。所有其他化學品及溶劑為試劑級或高效液相層析級。 細胞株及培養條件
永生化正常人類乳腺上皮細胞(MCF10A)及乳癌細胞株，包括HER2+ (SKBR3)、ER+ (MCF7)、三陰性(MDA-MB-231)及鼠類TNBC細胞株4T1，係獲自ATCC (USA)。接收原始儲備液之後，擴增細胞且在在低繼代下冷凍。將細胞解凍且在15次繼代內使用。細胞在製造商推薦的培養基中、在37℃、增濕的5% CO2
培育箱中培養，該培養基補充有10% FBS、100個單位/mL青黴素及100 mg/mL鏈黴素。 動物
BALB/cByJNar1雌性小鼠(4週齡)由國立實驗室動物中心(臺灣臺北)供應，且讓其任意取用標準實驗室膳食及蒸餾水，並保持22±2℃、依12小時亮/暗循環。此研究係根據機構準則執行且由中央研究院(臺灣)機構動物照護及利用委員會(IACUC)批准。 細胞存活率分析
將細胞(3×103
個細胞/槽)接種於96孔盤中隔夜且處理24小時。藉由基於MTT比色分析測定細胞生長。經單獨媒劑(0.5% DMSO)處理的細胞存活率定義為100%存活率。化合物處理之後的細胞存活率係使用下式計算：活細胞數目(%) = [OD570
(經處理的細胞)/OD570
(媒劑對照物)] × 100。 CR-API及dLGG針對TNBC的活體內作用
來自昭和草之dLGG或富含dLGG之CR-API溶離分針對TNBC的治療效果係使用原位腫瘤模型評估。簡言之，小鼠在異氟醚麻醉下，將4T1 (鼠類TNBC)細胞(5x106
個細胞/100 μl PBS及50 μl基質膠/小鼠)皮下注射至第四乳腺脂肪墊中。每天監測腫瘤生長及體重。腫瘤在植入後第7天生長至約150 mm3
尺寸之後，將測試小鼠隨機分為不同組(每組8隻小鼠)且進行三週化合物治療方案(圖2)。測試小鼠相應地如下分組：假處理對照組(PBSo.p.
)；腫瘤對照組(PBSo.p.
)；每3天以5 mg/kg靜脈內投與多柔比星(Dox5)；分別進行的低劑量及高劑量dLGG治療，每天5及25 mg/kg，o.p.
(dLGG5及dLGG25)；多柔比星及低劑量dLGG組合療法(Dox5+dLGG5)；及分別進行的低劑量及高劑量CR-API治療，每天200及400 mg/kg，o.p.
(CR-API200及CR-API400)。多柔比星治療劑量及頻率係基於動物研究中常用之濃度範圍內的最大可耐受劑量，其由內部毒性實驗確定(Bao L, Haque A, Jackson K等人, (2011) Increased Expression of P-Glycoprotein Is Associated with Doxorubicin Chemoresistance in the Metastatic 4T1 Breast Cancer Model. The American Journal of Pathology. 2011;178(2):838-852)。藉由一週三次監測腫瘤尺寸及體重來評估藥物/化合物/萃取物的作用。腫瘤植入後第30天，藉由頸椎脫位術進行安樂死。立即收集腫瘤、器官組織(肺、肝、腎臟、脾)及血清且加以分配以用於西方墨點法(立即使用液態氮急驟冷凍且在-80℃下儲存)或用於石蠟固定(立即浸沒於10%福馬林溶液中維持至少一週)。石蠟包埋的組織在室溫下儲存。此動物研究的詳細實驗設計示於圖2中。 組織學及免疫組織化學
將腫瘤及器官組織固定於10% 緩衝福馬林中且包埋於石蠟中。將石蠟包埋的樣品切片(6 μm)且進行蘇木精及曙紅(H&E)或免疫組織化學(IHC)染色。使石蠟包埋的組織切片熱固著且使用二甲苯脫蠟且在一系列分級乙醇中復水，最後用蒸餾水洗滌。使用檸檬酸鹽修復緩衝液及Decloaking Chamber (Biocare Medical) 進行抗原修復。使用AxioVision軟體(Carl Zeiss MicroImaging, Inc.) 捕捉影像。 西方墨點法
將來自各小鼠之腫瘤組織的總蛋白質(0.1 g)在混合球磨機(MM301, Retsch, Haan, Germany)中均質化2分鐘，藉由添加0.4 mL RIPA溶解緩衝液來萃取且在4℃下以15,000×g
離心30分鐘。收集上清液，且藉由使用DC蛋白質分析套組(Bio-Rad)來測定樣品總蛋白質濃度。藉由10%梯度SDS-PAGE解析蛋白質且使用增強型化學發光試劑(ECL, Amersham)及針對指定蛋白質的抗體進行免疫墨點分析。 資料分析
來源於動物實驗之所有資料的定量均以平均值±SEM表示。在不能同時完全提供的情況下，提供代表所有治療組的3-5隻小鼠。結果及討論 dLGG 抑制各種乳癌細胞增殖
首先使用人源MCF10A (正常乳腺上皮細胞)、MCF7 (ER+乳癌細胞)、SKBR3 (Her2+乳癌細胞)、MDA-MB-231 (ER-、PR-及Her2-TNBC細胞)及鼠源4T1 TNBC細胞評估CR-API或dLGG的抗增殖作用(圖3)。CR-API在MDA-MB-231細胞株中之IC50
在65 µg/mL下達到。對於人源與鼠源TNBC細胞而言，dLGG的IC50
為55 µM，而其他人源乳癌細胞在測試濃度範圍(5-100 µM)內均未達到IC50
。有趣的是，24小時dLGG治療之後，未觀測到MCF10A的細胞存活率發生顯著變化。此等結果突出顯示了CR-API及dLGG抑制TNBC細胞增殖的功效，而對正常乳腺上皮細胞不具毒性效應。在 TNBC 小鼠模型中 ， CR-API 或 dLGG 治療展示的存活率優於 Dox 治療
探究富含dLGG之CR-API溶離分及純dLGG化合物對小鼠乳腺4T1原位腫瘤生長及同種移植小鼠中之轉移的功效。商業上使用的化學治療藥物多柔比星用作陽性對照物。亦使用dLGG及多柔比星進行組合療法(Dox5+dLGG5)，以評估dLGG減少多柔比星誘導之副作用的潛力。低(dLGG5)及高(dLGG25)劑量的dLGG及低(CR-API200)及高(CR-API400)劑量的CR-API經口治療係用於評估化合物/萃取物對腫瘤植入動物的劑量依賴性作用。結果表明，在30天治療期結束時，所有CR-API及dLGG及Dox5+dLGG5治療組中的存活動物百分比顯著地高於腫瘤對照組及Dox5治療組(圖4A)。dLGG5、dLGG25、CR-API400及Dox5+dLGG5療法獲得100%存活率。此等結果表明，富含dLGG溶離分或dLGG純化合物治療不誘導任何不當的毒性且對腫瘤植入小鼠的總體福祉具有正面影響。此亦表明dLGG組合療法可以在TNBC中緩解多柔比星誘導的體重損失或副作用。與低劑量 dLGG 組合療法緩解多柔比星誘導測試動物體重的損失
在持續治療期間，每3天記錄所有測試動物的體重(圖4B)。第30天，觀測到相較於所有治療組，僅Dox5治療組展示顯著的體重損失(測試動物初始體重的10%)。此現象在Dox5+dLGG5治療組中減少(P
= 0.0014)，表明dLGG緩解了與多柔比星治療相關的體重損失。單獨CR-API或dLGG治療組經觀測無顯著的體重損失。dLGG 及 CR-API 減小 TNBC 腫瘤塊具劑量依賴性
在整個實驗期期間監測所有組的腫瘤負荷(圖5A)。所測腫瘤體積在腫瘤對照組與Dox5 (P
＜0.0001)、Dox5+dLGG5 (P
= 0.0015)或dLGG25 (P
= 0.0015)治療小鼠之間具有較高的統計差異。亦量測所有治療組的腫瘤重量且與終點時的腫瘤對照組腫瘤重量進行比較(圖5B及5C)。相較於腫瘤對照組，dLGG療法使腫瘤體積顯著地且劑量依賴性地減小18% (dLGG5)及47% (dLGG25)(P
＜ 0.05)。觀測到經Dox5及Dox5+dLGG5治療之測試動物的腫瘤重量分別減少60%及62% (P
＜ 0.05)。觀測到CR-API200及CR-API400療法分別使腫瘤重量減少12% (P
= 0.1526)及24% (P
= 0.0528)。綜合而言，此等結果表明dLGG以劑量依賴型方式緩解TNBC腫瘤生長。在腫瘤組織中 ， CR-API 及 dLGG 療法減少 Ki-67 表現且增加半胱天冬酶 -3 表現
為了展現CR-API或dLGG療法對TNBC腫瘤組織的作用，進行IHC染色。使用Ki67 (一種細胞增殖標記物)來見證本發明之萃取物是否對腫瘤細胞增殖具有直接作用(圖6A)。觀測到Ki-67過度表現於腫瘤對照組中，此表示快速生長及增殖的細胞。不論使用CR-API或dLGG的劑量，均減少此現象。Dox5及Dox5+dLGG5治療動物亦存在類似的效果。此等結果表明dLGG抑制腫瘤細胞增殖且可能會有效地阻滯TNBC的腫瘤生長。
使用裂解半胱天冬酶-3 (一種細胞凋亡標記物)之表達量測試化合物療法對腫瘤組織細胞之細胞凋亡的作用(圖6B)。相較於媒劑對照組，所有治療組均展示裂解半胱天冬酶-3的表現增加。值得注意的是，Dox5、CR-API400及dLGG25治療組中，半胱天冬酶-3表現高於低劑量療法及Dox5+dLGG5組合療法。此等結果表明，CR-API或dLGG療法誘導TNBC腫瘤發生細胞凋亡，類似於多柔比星療法的細胞凋亡效應。此等結果為CR-API或dLGG作為腫瘤生長抑制劑的重要指標。CR-API 及 dLGG 治 療抑制腫瘤遠端轉移至肺及肝臟
在腫瘤對照組中，可偵測到自發的腫瘤肺及肝臟轉移。因此對兩種器官中的Ki-67使用H&E及IHC染色，以確定高增殖或轉移癌細胞在腫瘤對照小鼠及化合物治療小鼠之此等遠端臟器轉移位點的存在。如圖7及8中所見，相較於腫瘤對照組，經Dox5、Dox5+dLGG5、dLGG5與dLGG25、或CR-API200與CR-API400治療之小鼠之肺及肝組織中的腫瘤轉移結節較少。此等結果表明，dLGG或CR-API治療抑制TNBC腫瘤轉移且類似於多柔比星的作用。CR-API 及 dLGG 療法抑制腫瘤或多柔比星誘導的肺臟及肝臟發炎
腫瘤組織及肝及肺器官中之促炎性COX-2表現總體增加表示發炎加強，此可能加劇腫瘤生長及轉移或作為其他潛在副作用的指標(Minn JA, Gupta GP, Siegel PM等人, (2005) Genes that mediate breast cancer metastasis to lung. Nature 436(7050): 518-524；Chiang AC及Massague J. (2014) Molecular basis of metastasis. N Engl J Med 359(26): 2814-2823)。比較測試動物之肝(圖9A)及肺(圖9B)組織中的COX-2蛋白質表現量。dLGG或CR-API治療組之動物器官中的COX-2表現依藥物劑量依賴性的方式減少，並類似於假處理對照組的表現量。另一方面，並觀測到Dox5治療法進一步誘導此等器官中的COX-2表現。有趣的是，在Dox5+dLGG5組合治療組中，COX-2表現減少且類似於單獨dLGG5或CR-API200療法的表現量。此等結果表明dLGG或CR-API療法抑制可能容易發生TNBC轉移之器官發炎。另外，此等結果表明，dLGG療法減少與多柔比星療法相關之全身/多器官發炎。CR-API 及 dLGG 減少 TNBC 腫瘤中之轉移相關蛋白質的表現
使用西方墨點分析來探究支持dLGG或富含dLGG之萃取物如何減少腫瘤組織之TNBC轉移的可能機制(圖10)。分析發炎標記物COX-2及腫瘤中之生物活性脂質代謝標記物CYP2C19 (Panigrahy D, Kaipainen A, Greene ER, Huang S. (2015) Cytochrome P450-derived eicosanoids: the neglected pathway in cancer. Cancer Metastasis Reviews 29(4):723-735)。對於所有dLGG及CR-API治療組而言，觀測到使這兩種蛋白質表現量減少具劑量依賴性作用。相較於單獨Dox5治療組，組合療法Dox5+dLGG5亦使此等蛋白質的含量減少。此等結果表明，dLGG可以抑制腫瘤組織中之受CYP2C 19或COX-2催化衍生之代謝物而影響促炎性腫瘤概貌，該等代謝物導致其抗增殖及抗轉移效應。另外，亦檢查膜重塑及微環境感測蛋白質的表現量。在dLGG、CR-API、Dox5及Dox5+dLGG5高劑量治療中，Cav-1及Rac1 (細胞遷移及囊泡形成中的兩種重要作用因子)(Diaz J, Mendoza P, Silva P, Quest AF, Torres VA. (2014) A novel caveolin-1/p85α/Rab5/Tiam1/Rac1 signaling axis in tumor cell migration and invasion. Commun Integr Biol 7(5):e972850)表現量顯著減少。另外，相較於腫瘤對照組，在Dox5+dLGG5組中，所有dLGG及CR-API療法均使Src (p-Src419
)活化受到顯著抑制；在Dox5治療組中偵測到的效應少得多或根本偵測不到效應。高劑量的dLGG、CR-API、Dox5及Dox5+dLGG5療法使FAK磷酸化受到顯著抑制。綜合而言，此等結果表示dLGG及CR-API藉由抑制促炎性腫瘤微環境、膜重塑及腫瘤微環境感測來緩解腫瘤轉移。
雖然已經參考本揭露的具體實施例描述和說明了本揭露，但是這些描述和說明非為限制性。本發明所屬技術領域中具通常知識者應該理解，在不脫離由所附申請專利範圍限定的本揭露的真實精神和範圍情況下，可以進行各種改變並且可以替換等同物。圖式可能不一定按比例繪製。由於製造工藝和限度，本揭露中的技藝再現與實際裝置之間可能存在區別。可能存在未具體示出的本揭露的其他實施例。說明書和附圖應被視為說明性的而非限制性的。可以進行修改以使特定情況、材料、物質組成、方法或過程適應本揭露的目的、精神和範圍。所有這些修改都在所附申請專利範圍之範疇內。儘管已經參考以特定順序執行的特定操作描述了本文揭露的方法，但是應當理解，可以組合、細分或重新排序這些操作以形成等效方法而不悖離本發明之教導。因此，除非在此具體指出，否則操作的順序和分組不成為本揭露之限制。
圖1顯示來自昭和草之CR-API萃取物的HPLC特徵曲線，其在210 nm吸光度下測定。生物活性化合物1,2-二-O-
α-亞油醯基-3-O-
(6 -O-α-吡喃半乳糖基-β-吡喃半乳糖基)-sn
-甘油(DGDG)及1,2-二-O-
α-亞油醯基-3-O-
β-吡喃半乳糖基-sn
-甘油(dLGG)的滯留時間(Rt)經偵測分別為約12及15分鐘。
圖2顯示4T1原位乳癌模型的實驗設計及治療方案，該乳癌模型用於評估來源於昭和草之dLGG及富含dLGG之萃取物 (CR-API)的作用。多柔比星用作陽性對照組。每3天監測藥物及化合物/萃取物對腫瘤尺寸的作用。所有測試動物在第30天安樂死。
圖3顯示在體外試驗中dLGG處理顯著降低TNBC細胞的存活率。細胞(3×103
個細胞/孔)用指定濃度的dLGG (µM) 或 CR-API (µg/mL)處理24小時。細胞存活率利用MTT分析測定。所呈現的資料代表3次獨立實驗，每次實驗5次技術重覆。
圖4A至4B表明CR-API及dLGG療法延長腫瘤植入動物的存活期且維持腫瘤植入動物的正常體重。帶有腫瘤之小鼠用以下治療：PBS (腫瘤對照)、Dox5 (5 mg/kg/每3天；i.v.
)、dLGG5 (每天5 mg/kg；o.p.
)、dLGG25 (每天25 mg/kg；o.p.
)、CR-API200 (每天200 mg/kg；o.p.
)、CR-API400 (每天400 mg/kg；o.p.
)及Dox5+dLGG5組合療法。圖4A是存活曲線，其表明CR-API及dLGG治療組的死亡率低於腫瘤對照組及Dox治療組。圖4B表明dLGG5組合療法使Dox誘導的體重損失減少。單獨CR-API或dLGG治療組經觀測無顯著的體重損失。資料呈現以平均值±SEM，N
= 8。
圖5A至5C表明CR-API及dLGG抑制小鼠的4T1腫瘤生長具有劑量依賴性。圖5A表明癌細胞植入之後每3天量測所有治療組的腫瘤體積。在觀測期(30天)結束時，觀測到 Dox5 (P
＜0.0001)、Dox5+dLGG5 (P
= 0.0015)及dLGG25 (P
= 0.0015)治療小鼠之後的腫瘤體積相較於腫瘤對照組顯著減小。圖5B表明第30天，收集腫瘤且記錄重量。Dox5、Dox5+dLGG5、CR-API400、dLGG5及dLGG25治療組的腫瘤重量顯著低於腫瘤對照組。圖5C顯示所有不同治療組的代表性腫瘤。此外亦顯示以腫瘤對照組之腫瘤重量為100%之其他處理組所減少腫瘤重量的％ (比例條：5 mm)。
圖6A及6B表明，CR-API及dLGG療法減少腫瘤細胞增殖，同時誘導細胞凋亡。圖示經以下抗體分別染色且用核指示劑蘇木精共染色(淺藍色)之腫瘤組織的代表性IHC影像：(圖6A) Ki67 (淺棕色)(一種細胞增殖標記蛋白質)，及(圖6B)裂解半胱天冬酶3 (一種細胞凋亡標記蛋白質)(比例條：50 µm)。
圖7A及7B表明CR-API及dLGG治療小鼠減少TNBC對遠端肺器官的轉移。圖7A顯示所有治療組之肺組織的代表性H&E影像。該等影像顯示轉移性腫瘤結節在腫瘤對照組、dLGG5及CR-API200組中可見，但在dLGG25、CR-API400、Dox5及Dox5+dLGG5組中偵測不到。圖7B為IHC影像分析顯示測試動物之肺中出現Ki67高表現之轉移性TNBC腫瘤結節 (比例條：50 µm)。
圖8A及8B表明CR-API及dLGG治療小鼠減少TNBC對遠端肝器官的轉移。肝組織中之Ki67過度表現細胞的代表性H&E影像(圖8A)及IHC分析(圖8B)表明腫瘤對照組之肝中存在轉移性腫瘤結節，而在化合物或萃取物治療組中則減少許多。影像中的紅色箭頭突出顯示代表性的Ki67過度表現腫瘤結節(比例條：50 µm)。
圖9A及9B表明CR-API及dLGG治療緩解腫瘤或多柔比星(Dox)誘導的肺臟及肝臟發炎。經促發炎性COX-2免疫染色之所有組之肝(圖9A)及肺(圖9B)組織的代表性IHC影像表明dLGG或CR-API治療減少腫瘤或Dox誘導TNBC轉移器官部位的發炎 (比例條：50 µm)。
圖10表明CR-API及dLGG治療負調節腫瘤組織中的癌轉移相關信號傳導。西方墨點分析結果表明，CR-API或dLGG治療減弱Src/FAK信號聯級且影響癌細胞之膜重塑及脂質代謝相關蛋白質的表現量。
Claims (11)
- 一種昭和草萃取物之用途，其係用以製造於一需要此等治療之個體中增加乳癌及/或乳癌轉移個體存活率之藥物。
- 如請求項1之用途，其中該昭和草萃取物包含如式I所示之化合物：
- 如請求項2之用途，其中該式I所示之化合物係選自由1,2-二-O-α-亞麻醯基-3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(1,2-di-O-α-linolenoyl-3-O-β-galactopyranosyl-sn-glycerol，dLGG)、1(2)-O-α-亞麻醯基-2(1)-O-α-亞油醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/18：2)[1(2)-O-α-linolenoyl-2(1)-O-α-linoleoyl 3-O-β-galactopyranosyl-sn-glycerol(18：3/18：2)]、1(2)-O-α-亞麻醯基-2(1)-O-α-棕櫚醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/16：0)[1(2)-O-α-1inolenoyl-2(1)-O-α-palmitoyl 3-O-β-galactopyranosyl-sn-glycerol(18：3/16：0)]、1(2)-O-α-亞麻醯基-2(1)-O-α-油醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/18：1)[1(2)-O-α-1inolenoyl-2(1)-O-α-oleoyl 3-O-β-galactopyranosyl-sn-glycerol(18：3/18：1)]及1,2-二-O-α-亞麻醯基-3-O-(6-O-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn-甘油[1,2-di-O-α-linolenoyl-3-O-(6-O-α-galactopyranosyl-β-galactopyranosyl)-sn-glycerol，DGDG]所組成之群。
- 如請求項1之用途，其中該乳癌包含乳癌細胞，該乳癌細胞係選自ER+乳癌細胞、Her2+乳癌細胞及ER-、PR-與Her2-乳癌細胞所組成之群。
- 如請求項1之用途，其中乳癌轉移係轉移至肺或肝。
- 如請求項1之用途，其中該藥物係與一抗腫瘤藥劑合併使用；該抗腫瘤藥劑係為多柔比星、表柔比星、貝伐單抗、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、卡培他濱、環磷醯胺、卡鉑、順鉑、奧沙利鉑或長春鹼。
- 一種如式I所示之化合物或其醫藥上可接受之衍生物之用途，其係用以製造於一需要此等治療之個體中增加乳癌及/或乳癌轉移個體存活率之藥物，
- 如請求項7之用途，其中該式I所示之化合物係選自由1,2-二-O-α-亞麻醯基-3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油、1(2)-O-α-亞麻醯基-2(1)-O-α-亞油醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/18：2)、1(2)-O-α-亞麻醯基-2(1)-O-α-棕櫚醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/16：0)、1(2)-O-α-亞 麻醯基-2(1)-O-α-油醯基3-O-β-吡喃半乳糖基-sn-甘油(18：3/18：1)及1,2-二-O-α-亞麻醯基-3-O-(6-O-α-吡喃半乳糖β-吡喃半乳糖)-sn-甘油所組成之群。
- 如請求項7之用途，其中該乳癌包含乳癌細胞，該乳癌細胞係選自ER+乳癌細胞、Her2+乳癌細胞及ER-、PR-與Her2-乳癌細胞所組成之群。
- 如請求項7之用途，其中乳癌轉移係轉移至肺或肝。
- 如請求項7之用途，其中該藥物係與一抗腫瘤藥劑合併使用；該抗腫瘤藥劑係為多柔比星、表柔比星、貝伐單抗、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、卡培他濱、環磷醯胺、卡鉑、順鉑、奧沙利鉑或長春鹼。
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