TWI732372B - 一種雙功能血管生成抑制劑及其用途 - Google Patents

一種雙功能血管生成抑制劑及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI732372B
TWI732372B TW108144682A TW108144682A TWI732372B TW I732372 B TWI732372 B TW I732372B TW 108144682 A TW108144682 A TW 108144682A TW 108144682 A TW108144682 A TW 108144682A TW I732372 B TWI732372 B TW I732372B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
polynucleotide
retinal
angiogenesis inhibitor
cell
bifunctional
Prior art date
Application number
TW108144682A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202033562A (zh
Inventor
姜靜
健民 房
欒雪晶
姚雪靜
王凌王凌
Original Assignee
大陸商榮昌生物製藥（煙臺）有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商榮昌生物製藥（煙臺）有限公司 filed Critical 大陸商榮昌生物製藥（煙臺）有限公司
Publication of TW202033562A publication Critical patent/TW202033562A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI732372B publication Critical patent/TWI732372B/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • A61K38/1866—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明涉及一種雙功能血管抑制劑，其具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性，能夠抑制VEGF和FGF雙因數或者高糖誘導的細胞增殖、細胞遷移和/或管腔成形。本發明還涉及該雙功能血管抑制劑抑制視網膜血管生成的用途，如糖尿病視網膜病變，年齡相關黃斑變性等。

Description

一種雙功能血管生成抑制劑及其用途
本發明涉及一種雙功能血管生成抑制劑及其用途，具體涉及一種具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性的融合蛋白及其在抑制VEGF和FGF雙因數或者高糖誘導的細胞增殖、細胞遷移和/或管腔成形中的用途，如抑制視網膜血管生成血管新生相關眼部疾病，糖尿病視網膜病變，年齡相關黃斑變性等。
眼底新生血管是多種眼部疾病的嚴重併發症，新生血管可以在角膜、虹膜睫狀體、脈絡膜、視網膜、黃斑及視訊光碟等幾乎眼內所有組織中出現，它能夠引起這些部位的組織出血、滲出及增生等一系列病理改變，因而造成眼球結構和功能的破壞，嚴重損害視功能。這一系列的眼底病變包括糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)、早產兒視網膜病(retinopathy ofprematurity，ROP)、年齡相關性黃斑變性(age-related macular degeneration，AMD)等，嚴重影響視力，甚至致盲。
研究表明，VEGF是目前所知對血管新生最特異、最有效的生長因數。1990年代以來，以VEGF為靶標，通過阻斷VEGF信號通路 抑制眼底血管新生的藥物成為開發的熱點。蘭尼單抗(Ranibizumab，商品名Lucentis)可特異性地結合VEGF-A，已獲美國FDA批准用於治療濕性老年黃斑變性和糖尿病性黃斑水腫。VEGF Trap-Eye(阿柏西普或Eylea)是美國Regeneron製藥公司開發的抗VEGF重組蛋白，臨床研究結果顯示對DME(糖尿病性黃斑水腫)的療效令人滿意，已遞交治療DME補充申請。KH902(康柏西普，Conbercept)是成都康弘公司開發的針對老年黃斑變性(AMD)的VEGFR-Fc重組蛋白，2013年12月批准上市用於治療AMD。以VEGF為靶標的雷珠單抗等成功用於DR的臨床研究和臨床應用中表明VEGF是DR的主要有效靶標之一。
儘管針對VEGF靶標的藥物在臨床上取得了很大的進展，由於血管新生受多種因數的調節，血管新生的調控是一個十分複雜的動態平衡過程。現有的藥物在臨床治療中也存在很大的局限性，因此如何進一步提高抗血管新生的臨床治療效果是研究者需要解決的問題，也是研究開發下一代抗血管新生藥物的重點。
成纖維細胞生長因數(FGF)是一種結合肝素的生長因數家族，其在多種生物學功能上具有重要作用，例如細胞增殖、分化、遷移、血管新生和腫瘤發生。其通過結合並活化細胞表面FGF受體(FGFR)發揮其多種生物學功能。成纖維細胞生長因數受體(fibroblast growth factor receptor，FGFR)是與成纖維細胞生長因數(FGF)家族成員相結合的受體，其一部分參與疾病過程。
申請人在專利CN201110131029.X公開了一種靶向VEGF和FGF的雙特異性融合蛋白(專利CN 201110131029.X的28#融合蛋白， 以下簡稱VF28)，研究結果表明VF28融合蛋白具有良好的生物學活性，能夠有效的靶向VEGF和FGF靶點，在治療或預防腫瘤和/或眼科血管新生性疾病方面有顯著的療效。但是，在研究過程中發現，製備的VF28隨著保存時間的延長存在活性不穩定的問題，在開展的3批次VF28原液長期試驗中(-80℃±10℃長期試驗條件)，放置0時、1個月、3個月、6個月，進行結合活性(ELISA法)分析，資料顯示，在1個月、3個月、6個月各監測時間點分別有1批次、2批次、3批次VF28原液結合活性檢測結果不符合評價標準要求(FGF端的結合活性不符合導致)；在開展的3批VF28成品加速試驗條件穩定性試驗中，25℃±2℃加速試驗條件下放置1個月，進行細胞活性分析。結果顯示：三個批次中有一個批次的VF28成品細胞活性檢測結果超出評價標準要求，不符合評價標準要求。
針對上述問題，本發明提供了一種改構的、靶向VEGF和FGF的雙功能血管生成抑制劑RC28-05，其不僅具有良好的生物學活性，能夠有效的抑制視網膜血管生成，在諸如糖尿病視網膜病變，年齡相關黃斑變性等眼部疾病中有顯著的療效，並且製備的產品保存穩定，不易降解，對儲藏溫度、環境等要求較低。
具體的，本發明提供了一種雙功能血管生成抑制劑，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
進一步的，所述的雙功能血管生成抑制劑，具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性。
進一步的，所述的雙功能血管生成抑制劑，能夠抑制VEGF和FGF雙因數或者高糖誘導的細胞增殖、細胞遷移和/或管腔成形。
本發明提供了上述雙功能血管生成抑制劑在製備用於抑制視網膜血管生成的藥物中的用途。
進一步的，提供了上述雙功能血管生成抑制劑在製備用於治療血管新生相關眼部疾病的藥物中的用途。
優選的，所述血管新生相關眼部疾病選自：年齡相關性黃斑變性例如幹性AMD和濕性AMD，糖尿病視網膜病變例如非增殖型DR、增殖型DR和DME，糖尿病性黃斑水腫，早產兒視網膜病和視網膜血管阻塞。
進一步的，提供了上述雙功能血管生成抑制劑在糖尿病物件中改善視網膜損傷之藥物中的用途。
優選的，所述的視網膜損傷為短期視網膜損傷。
進一步的，所述短期視網膜損傷選自減少視網膜血管網中凋亡細胞的數量、降低血-視網膜屏障的滲漏、抑制視網膜膠質細胞反應性增生、以及改善神經視網膜和視網膜血管的超微結構。
優選的，所述的視網膜損傷為長期視網膜損傷。
進一步的，所述長期視網膜損傷選自改善視網膜屏障滲漏以及抑制毛細血管基底膜的增厚。
進一步的，提供了上述雙功能血管生成抑制劑在製備用於在視網膜病物件中改善視網膜無血管灌注區或者降低視網膜新生血管細胞核數之藥物中的用途，優選的，視網膜病物件為早產兒。
進一步的，提供了上述雙功能血管生成抑制劑在製備用於在物件中降低視網膜血管內皮細胞增殖、移行和/或管腔形成之藥物中的用途。
本發明還提供了一種包含編碼雙功能血管生成抑制劑的核苷酸序列的分離的多核苷酸，其中所述雙功能血管生成抑制劑的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的。
本發明還提供了一種包含上述多核苷酸的核酸構建體，所述多核苷酸可操作地連接於一個或幾個調控序列，所述調控序列指導所述多肽在表達宿主中的產生。
本發明還提供了一種包含上述多核苷酸的載體，優選的，所述載體為表達載體，所述的多核苷酸可操作地連接於一個或多個調控序列，所述調控序列指導所述多肽在表達宿主中的產生。
本發明還提供了一種包含上述多核苷酸或核酸構建體或表達載 體的宿主細胞，所述多核苷酸可操作地連接於一個或多個調控序列，所述調控序列指導多肽的產生。優選的，所述細胞為哺乳動物細胞或人源細胞。更優選的，所述細胞為CHO細胞。
本發明還提供了一種製備所述的雙功能血管生成抑制劑的方法，該方法包括在允許表達該雙功能血管生成抑制劑的條件下培養前述任一項所述的宿主細胞，並且回收該抑制劑。
本發明還提供了一種包含前述任一項所述的多肽和/或載體的藥物組合物。
本發明還提供了一種包含上述組合物的試劑盒。
圖1 VF28和RC28-05對VEGF165刺激HUVECs細胞增殖抑制結果。
圖2 VF28和RC28-05對bFGF刺激HUVECs細胞增殖抑制結果。
定義：
除非另有定義，本文使用的所有科技術語具有本領域普通技術人員所理解的通常含義。關於本領域的定義及術語，專業人員具體可參考Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel)。氨基酸殘基的縮寫是本領域中所用的指代20個常用L-氨基酸之一的標準3字母和/或1字母代碼。
儘管本發明的廣義範圍所示的數字範圍和參數近似值，但是具體實施例中所示的數值盡可能準確的進行記載。然而，任何數值本來就必然含有一定的誤差，其是由它們各自的測量中存在的標準差所致。另外，本文公開的所有範圍應理解為涵蓋其中包含的任何和所有子範圍。例如記載的“1至10”的範圍應認為包含最小值1和最大值10之間(包含端點)的任何和所有子範圍；也就是說，所有以最小值1或更大起始的子範圍，例如1至6.1，以及以最大值10或更小終止的子範圍，例如5.5至10。另外，任何稱為“併入本文”的參考文獻應理解為以其整體併入。
本文使用的術語“可溶性”蛋白是指在生物學相關的溫度、pH水準和滲透壓下可溶於水溶液的蛋白。在某些特定技術方案中，本發明的融合蛋白是可溶性融合蛋白。
如本文所用，術語“分離的”是指以下物質和/或實體，(1)與起初產生時(在天然環境中和/或在試驗設置中)和其相關聯的至少一些組分相分離和/或(2)通過人工生產、製備和/或製造。分離的物質和/或實體可與至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約98%、約99%、基本100%或100%的其初始相關聯的其他組分相分離。在某些特定技術方案中，本發明的融合蛋白是分離的融合蛋白。
本文使用的術語“VEGF”是指血管內皮生長因數。本文使用的術語“VEGFR”是指血管內皮生長因數受體，其可以是VEGFR1、VEGFR2和/或VEGFR3。優選地，本發明中的VEGFR是VEGFR1和/或VEGFR2，優選人的VEGFR。
本文使用的術語“FGF”是指成纖維細胞生長因數。本文使用的術語“FGFR”是指成纖維細胞生長因數受體，其可以是FGFR1、FGFR2、FGFR3和/或FGFR4。優選地，本發明中的FGFR是FGFR1，更優選人FGFR1。
本文所使用的術語“物件”包括哺乳動物人類等哺乳動物如家養動物(如狗、貓等)，家畜(如牛、羊、豬、馬等)或實驗動物(如猴子、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠等)。
本發明的融合蛋白還可包含翻譯後修飾。這樣的修飾包括但不限於乙醯化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂化和醯基化。結果，經修飾的蛋白可包含非氨基酸組分，例如聚乙二醇、脂質、多糖或單糖以及磷酸。這樣的非氨基酸組分對蛋白功能的作用可如本文所述的那樣進行測試。當蛋白在細胞中產生時，翻譯後加工對於正確折疊和/或融合蛋白功能可能也是重要的。不同的細胞(例如CHO、HeLa、MDCK、293、WI38、NIH-3T3或HEK293)擁有針對這些翻譯後活性的特定細胞機器和特有機制，並且可以選擇不同的細胞以確保蛋白的正確修飾和加工。
本文所述的蛋白可通過任何本領域已知的方法產生。例如化學合成或從核酸表達來產生。可根據本領域已知的完善的標準液體或優選固相肽合成方法容易地製備用於本發明的肽(參見，例如J.M.Stewart和 J.D.Young,Solid Phase Peptide Synthesis,2nd edition,Pierce Chemical Company,Rockford,Illinois(1984),in M.Bodanzsky和A.Bodanzsky,The Practice of Peptide Synthesis,Springer Verlag,New York(1984))。可以使用本領域已知技術產生所述融合蛋白以在位於預期包含在所述蛋白中的多肽序列內的半胱氨酸殘基之間形成一個或多個分子內交聯(參見例如美國專利No.5478925)。另外，本文所述融合蛋白可以通過在所述融合蛋白的C端或N端添加半胱氨酸或生物素進行常規修飾。
本文使用的術語“治療有效量”或“有效量”是指足以顯示其對於所施用物件益處的劑量。施用的實際量，以及施用的速率和時間過程會取決於所治療者的自身情況和嚴重程度。治療的處方(例如對劑量的決定等)最終是全科醫生及其它醫生的責任並依賴其做決定，通常考慮所治療的疾病、患者個體的情況、遞送部位、施用方法以及對於醫生來說已知的其它因素。
本文使用的術語“VF28”表示特定的VEGFR-FGFR融合蛋白，其包含VEGFR1的第二Ig樣結構域、VEGFR2的第三Ig樣結構域、源自FGFR Ig樣結構域中間功能性序列區的部分、FGFR第二Ig樣結構域、FGFR第三Ig樣結構域和Fc片段。VF28是中國專利201110131029.X中28#融合蛋白的縮寫，其構建過程和其他資訊可參見中國專利201110131029.X的公開文本中。具體地，VF28的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本文使用的術語“原液”為經純化後分裝於中間貯存容器中的融合蛋白液，本發明中的原液是將細胞培養液經親和層析、去病毒處理、粗濾層析、精純後得到的；本文使用的術語“成品”為將原液經除菌過濾後分裝於無菌終容器中並經封包後的融合蛋白液，本發明中的成品是將原液添加一定配比的輔料(磷酸二氫鈉、氯化鈉、蔗糖、聚山梨酯80)後，除菌過濾獲得。
本文使用的術語“FGF-Trap”是指FGFR-Fc融合蛋白，其可用作FGF的Trap，從而拮抗FGF。具體地，本發明實施例中所用的FGF-Trap是26# FGFR融合蛋白，其構建過程和其他資訊可參見CN102219860A。
本文使用的術語“VEGF-Trap”是指VEGFR-Fc融合蛋白，其可用作VEGF的Trap，從而拮抗VEGF。具體地，本發明實施例中所用的VEGF-Trap是美國Regeneron製藥公司開發的抗VEGF重組蛋白(ETLEA，艾力亞)，其可從市場上購得。
實施例是對本發明進行進一步的闡述和解釋，而不應被看作是對本發明的限制。
實施例1：宿主細胞的選擇
二氫葉酸還原酶(DHFR)基因缺陷的中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary Cell,CHO/dhfr-)購自美國ATCC，目錄號CRL-9096，批號(Lot number)3691620。CHO/dhfr-細胞在添加次黃嘿嶺和胸苷(HT)及10%胎牛血清(FBS)的IMDM完全培養基培養，細胞呈多邊形，貼壁生長，傳代3次後，置細胞於液氮凍存。為獲得適應無血清懸浮培養的CHO/dhfr-細胞，取凍存的細胞一支，在37℃水浴中解凍，將細胞懸浮於含10%FBS和HT的Ex-Cell 302 CHO培養基(Sigma)，在細胞培養瓶中讓細胞貼壁生長，待細胞生長良好後，將細胞懸浮於30mL含5%胎牛血清的Ex-Cell 302 CHO培養基，搖瓶培養。待細胞長至1-2×106/mL，轉入含2.5%胎牛血清的Ex-Cell 302 CHO細胞培養基，搖瓶培養。如此逐級分別在含1.5%和0.5%胎牛血清的Ex-Cell 302培養基中搖瓶培養適應。最後，將細胞懸浮於無血清的Ex Cell 302 CHO培養基，搖瓶培養。細胞生長良好後，離心收集細胞，將細胞懸浮於含10% DMSO的Ex-Cell 302 CHO培養基中，液氮凍存，該為經無血清培養馴化的CHO細胞原始細胞庫。經無血清培養馴化的CHO細胞在懸浮培養條件下呈圓形或近圓形。
實施例2：目的基因
RC28-05融合蛋白為雙功能血管生成抑制活性的融合蛋白，其由VEGFR和FGFR的部分氨基酸序列，與人免疫球蛋白Fc片段融合而成，其氨基酸序列如下所示(如SEQ ID NO：1所示)：
Figure 108144682-A0101-12-0008-1
RC28-05的核苷酸序列如下所示(1923bp)(如SEQ ID NO：3所示)：：
Figure 108144682-A0101-12-0009-2
在RC28-05目的基因序列兩端引入雙酶切位點後插入常規表達載體，採用通用方法轉染CHO細胞，篩選出RC28-05表達細胞株，進行RC28-05融合蛋白的表達。
實施例3：融合蛋白的親和力實驗
用ForteBio Octet(PALL公司)對VF28、RC28-05的親和力進行檢測，將檢測板A-E行第1列各孔加入PBS(pH 7.4)作為平衡液，探 針浸泡活化10min；用PBS分別稀釋RC28-05和VF28至濃度為50nM，加入96孔測定板A-E行第2列，設定程式為Loading，300 s；檢測板A-E行第3列各孔加入PBS作為平衡液，設定程式為Baseline，180 s；以PBS為稀釋液，將rhVEGF(R&D)和rhFGF(R&D)分別稀釋至濃度為500nM和400nM，然後1：2向下系列稀釋3個梯度(共四個梯度)至濃度為62.5nM和50nM，將系列稀釋樣品分別加入96孔板A-D行的第4列，同時將稀釋液加入E行的第4列，作為陰性對照，設定程式為Association，600 s；A-E行第5列各孔加入PBS作為解離液，設定程式為Dissociation，1800 s；A-E行第6和7列分別加入10mM甘氨酸(pH1.5)和PBS作為重生液和中和液，程式分別設定為Regeneration和Neutralization，各15 s，反復5次。共計檢測3個迴圈。使用Data analysis7.0軟體對資料進行分析。以對應的未結合rhVEGF/rhFGF的感測器為對照扣減背景，計算平衡常數(KD)值。結果如表1所示，結果顯示RC28-05和VF28與rhVEGF、rhFGF均具有良好的親和力。
Figure 108144682-A0101-12-0010-3
實施例4：融合蛋白的細胞活性實驗
取10代內HUVECs細胞，調整密度為5×104個/mL，接種至96孔板，100μL/孔(即5000個細胞/孔)。細胞貼壁後，加入條件培養液或VEGF165或bFGF因數(40ng/mL)或VEGF165+不同濃度的RC28-05或VF28藥物(終濃度為0、0.0125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、5、25nM)或bFGF+不同濃度的RC28-05或VF28藥物(終濃度為0、0.0156、0.0625、0.25、0.5、1、2、8、32nM)，100μL/孔，培養終體積200μL/孔，每樣品3複孔；37℃，5% CO2培養箱繼續培養。在加藥72小時後，甩幹96孔板中培養液，每孔加入含10% CCK-8的內皮細胞基礎培養液，100μL/孔。37℃孵育4小時，酶標儀檢測OD450。以細胞增殖抑制率%=(OD因數-OD(因數+藥物))/OD因數×100計算每一濃度下相應藥物對VEGF165/bFGF促HUVECs增殖抑制率，利用Prism軟體計算藥物的IC50值，測試最大藥物濃度的抑制率採用實測值，比較RC28-05 與VF28對VEGF165/bFGF刺激下HUVECs細胞增殖的抑制作用差異。VF28和RC28-05對VEGF165/bFGF刺激HUVECs細胞增殖的抑制結果見圖1和圖2，最大抑制率和IC50值統計見表2。結果表明RC28-05與VF28對VEGF165/bFGF刺激下HUVECs細胞增殖的均有顯著的抑制作用。
Figure 108144682-A0101-12-0011-4
實施例5：RC28-05原液及成品的製備
RC28-05原液及成品的製備與VF28的製備方法相同，具體為：
1)將細胞培養液離心後，收集上清液進行蛋白A親和層析；
2)將收集的全部洗脫液進行有機溶劑/去污劑處理(S/D)後，將處理後的洗脫液中加入1%聚山梨酯80(W/V)和0.3%磷酸三釘酯(W/V)，20-25℃放置6h，滅活脂包膜類病毒；
3)經上述處理後，再經Sepharose陽離子交換層析去除聚合體和降解物等相關雜質；
4)將收集的全部洗脫液再進行陰離子交換層析去除少量聚體、CHO宿主細胞蛋白、宿主DNA和細胞內毒素等；
5)收集上述層析後的穿透液，再進行納米膜過濾去除非脂包膜類病毒；
6)將納米膜過濾後的蛋白液超濾濃縮至一定濃度後(10-15mg/mL)，使用10-12倍於濃縮蛋白體積的緩衝液(0.02mol/L磷酸二氫鈉、0.015mol/L氯化鈉、0.2mol/L蔗糖、PH 6.8)進行置換透析，再將蛋白液濃縮(40-45mg/mL)，添加0.02%(W/V)的聚山梨酯80攪拌溶解後，使用0.45+0.2μm膜過濾後所得蛋白液即為RC28-05原液，蛋白濃度40-45mg/mL。
7)成品製備：1000支規格為40mg/mL(0.2ml/支)的成品的製備方法如下，測定上述蛋白原液中RC28-05蛋白的濃度，定義為C mg/mL，考慮到10%的灌裝損耗，總計需要配製220ml蛋白液。則需要的總蛋白量為 220ml*40mg/mL*0.2ml=8.8g蛋白。則需要使用蛋的白原液體積為V=8.8/C*1000(mL)，取V mL蛋白原液，向其中加入緩衝液(0.02mol/L磷酸二氫鈉、0.015mol/L氯化鈉、0.2mol/L蔗糖、0.02%(W/V)聚山梨酯80)至220mL，混合均勻，用孔徑不大於0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝、軋鋁蓋、裝盒後，即為RC28-05成品。
實施例6：RC28-05(原液/成品)穩定性試驗
1. RC28-05原液穩定性試驗
(1)不同放置時間(-80℃±10℃)的純度分析
①SEC-HPLC法
3批RC28-05原液(批號為：RC28-05-YY20160329、RC28-05-YY20160330、RC28-05-YY20160331)於-80℃±10℃長期試驗條件下放置0時、6個月、9個月、12個月，進行純度(SEC-HPLC法)分析，各監測時間點檢驗樣品SEC純度檢測結果主峰均
Figure 108144682-A0101-12-0012-31
95.0%，詳見表14。
Figure 108144682-A0101-12-0012-5
②SDS-PAGE法
3批RC28-05原液(批號為：RC28-05-YY20160329、RC28-05-YY20160330、RC28-05-YY20160331)於-80℃±10℃長期試驗條件下放置0時、6個月、9個月、12個月，進行純度(SDS-PAGE法)分析，結果見表15所示，資料顯示隨著放置時間的延長，RC28-05原液的SDS-PAGE還原純度檢測結果均高於90%。
表15 RC28-05原液(-80℃±10℃)SDS-PAGE純度檢驗結果(單位：%)
Figure 108144682-A0101-12-0013-6
(2)不同放置時間(-80℃±10℃)原液的細胞活性實驗
3批RC28-05原液(批號為：RC28-05-YY20160329、RC28-05-YY20160330、RC28-05-YY20160331)於-80℃±10℃長期試驗條件下放置12個月，進行細胞活性分析；結果顯示，RC28-05原液於-80℃±10℃條件下放置12個月，經細胞活性分析，試驗週期內各個檢測時間點細胞相對活性均符合品質要求。詳見表16。
Figure 108144682-A0101-12-0013-7
(3)不同放置時間(-80℃±10℃)原液的結合活性實驗
3批RC28-05原液(批號為：RC28-05-YY20160329、RC28-05-YY20160330、RC28-05-YY20160331)於-80℃±10℃長期試驗條件下放置12個月，進行結合活性(ELISA法)分析；結果顯示，RC28-05原液於-80℃±10℃條件下放置12個月，經相對結合活性檢驗分析，試驗週期內各個檢測時間點細胞相對活性均符合品質要求。詳見表17。
表17 RC28-05原液(-80℃±10℃)相對結合活性檢驗結果(單位：%)
Figure 108144682-A0101-12-0014-8
2. RC28-05成品穩定性試驗
(1)不同放置時間的純度分析
①SEC-HPLC法
3批RC28-05成品(批號為：RC28-05-20160401-1、RC28-05-20160401-2、RC28-05-20160401-3)分別於5℃±3℃長期試驗條件下放置12個月，25℃±2℃加速試驗條件下放置1個月，進行純度(SEC-HPLC法)分析，實驗結果顯示，5℃±3℃長期試驗條件下放置12個月，經純度(SEC-HPLC法)分析，實驗週期內各檢測時間點檢驗樣品的SEC純度檢測結果均大約95%；25℃±2℃加速試驗條件下放置1個月時，各監測時間點檢驗樣品SEC純度檢測結果主峰均
Figure 108144682-A0101-12-0014-32
95.0%，詳見表18和表19。
Figure 108144682-A0101-12-0014-9
表19 RC28-05成品(25℃±2℃)SEC純度檢驗結果(單位：%)
Figure 108144682-A0101-12-0015-10
②SDS-PAGE法
3批RC28-05成品(批號為：RC28-05-20160401-1、RC28-05-20160401-2、RC28-05-20160401-3)分別於5℃±3℃長期試驗條件下放置12個月，25℃±2℃放置1個月，進行純度(SDS-PAGE法)分析，結果顯示，RC28-05成品在5℃±3℃放置12個月，經純度(SDS-PAGE)分析，試驗週期內各個測時間點檢驗樣品的SDC-PAGE還原純度檢測結果均大於90.0%；RC28-05成品在25℃±2℃放置6個月，經純度(SDS-PAGE)分析，試驗週期內各個測時間點檢驗樣品的SDC-PAGE還原純度有下降趨勢，但是檢測結果均大於90.0%。詳見表20、表21。
Figure 108144682-A0101-12-0015-11
Figure 108144682-A0101-12-0015-12
Figure 108144682-A0101-12-0016-13
(2)不同放置時間成品的細胞活性實驗
3批RC28-05成品(批號為：RC28-05-20160401-1、RC28-05-20160401-2、RC28-05-20160401-3)分別於5℃±3℃長期試驗條件下放置12個月，25℃±2℃放置1個月，進行細胞活性分析。結果顯示：5℃±3℃條件下放置12個月，經細胞活性分析，試驗週期內各監測時間點檢驗樣品相對細胞活性結果均符合評價標準要求；25℃±2℃條件下放置1個月，經細胞活性分析，試驗週期內各監測時間點相對細胞活性檢測結果均符合品質要求。詳見表22、表23。
Figure 108144682-A0101-12-0016-14
Figure 108144682-A0101-12-0016-15
(3)不同放置時間成品的結合活性實驗
3批RC28-05成品(批號為：RC28-05-20160401-1、RC28-05-20160401-2、RC28-05-20160401-3)分別於5℃±3℃長期試驗條件下放置12個月，25℃±2℃放置1個月，進行結合活性分析。結果顯示：5℃±3℃條件下放置12個月，經結合活性分析，試驗週期內各監測時間點檢驗樣品相對結合活性結果均符合評價標準要求；25℃±2℃條件下放置1個月，經結合活性分析，試驗週期內各監測時間點相對結合活性(VEGF端和FGF端)檢測結果均符合品質要求。詳見表24、表25。
Figure 108144682-A0101-12-0017-16
Figure 108144682-A0101-12-0017-17
3.實驗結論
通過對3批RC28-05原液(批號為：RC28-05-YY20160329、RC28-05-YY20160330、RC28-05-YY20160331)於-80℃±10℃長期試驗條件下儲存進行考察，其考察結果為：
①SEC純度：3批RC28-05原液在-80℃±10℃條件下放置12個月，其SEC純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-33
90%。
②SDS-PAGE還原純度：3批RC28-05原液在-80℃±10℃條件下放置12個月，其還原純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-34
90%。
③細胞活性：3批RC28-05原液於-80℃±10℃條件下放置12個月，經細胞活性分析，試驗週期內各個檢測時間點細胞相對活性均符合品質要求。
④結合活性：3批RC28-05原液於-80℃±10℃條件下放置12個月，經細胞活性分析，試驗週期內各個檢測時間點細胞相對活性均符合品質要求。
對3批RC28-05成品(批號為：RC28-05-20160401-1、RC28-05-20160401-2、RC28-05-20160401-3)分別於5℃±3℃、25℃±2℃條件下儲存進行考察，其考察結果為：
①SEC純度：
3批RC28-05成品在5℃±3℃條件下放置12個月，其SEC純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-35
90%；
3批RC28-05成品在25℃±2℃條件下放置1個月，其SEC純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-36
90%。
②SDS-PAGE還原純度：
3批RC28-05成品在5℃±3℃條件下放置12個月，其SDS-PAGE還原純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-37
90%；
3批RC28-05成品在25℃±2℃條件下放置1個月，其SDS-PAGE還原純度均
Figure 108144682-A0101-12-0018-38
90%。
③細胞活性：
3批RC28-05成品在5℃±3℃條件下放置12個月，各監測時間點檢驗樣品細胞活性檢測結果均符合評價標準要求；
3批RC28-05成品在25℃±2℃條件下放置1個月，各監測時間點檢驗樣品細胞活性檢測結果均符合評價標準要求。
④結合活性：
3批RC28-05成品在5℃±3℃條件下放置12個月，各監測時間點檢驗樣品細胞活性檢測結果均符合評價標準要求；
3批RC28-05成品在25℃±2℃條件下放置1個月，各監測時間點檢驗樣品細胞活性檢測結果均符合評價標準要求。
由此可以得出以下結論：
①RC28-05原液於-80℃±10℃條件下可穩定存儲至少12個月，而VF28原液在相同條件下6個月時即已經不符合活性要求。
②RC28-05成品於5℃±3℃條件下儲存性質可保護穩定至少12個月，VF28在相同條件下6個月內儲存性質穩定。
③RC28-05成品於25℃±2℃條件下至少1個月儲存性質穩定，VF28原液在相同條件下有1/3批次不符合活性要求。
綜上所述，RC28-05原液在-80℃±10℃穩定，RC28-05成品在5℃±3℃條件(至少12個月)、25℃±2℃條件(至少1個月)條件下儲存性質穩定。其相同條件下穩定儲存時間大幅長於VF28。
本發明已通過各個具體實施例作了舉例說明。但是，本領域普通技術人員能夠理解，本發明並不限於各個具體實施方式，普通技術人員在本發明的範文內可以作出各種改動或變型，並且在本說明書中各處提及的各個技術特徵可以相互組合，而仍不背離本發明的精神和範圍。這樣的改動和變型均在本發明的範圍之內。
<110> 榮昌生物製藥(煙臺)有限公司REMEGEN,LTD
<120> 一種雙功能血管生成抑制劑及其用途
<130> CP0019-TW-0679
<150> CN201811491023.1
<151> 2018-12-07
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 641
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Figure 108144682-A0305-02-0022-1
Figure 108144682-A0305-02-0023-3
Figure 108144682-A0305-02-0024-4
Figure 108144682-A0305-02-0025-5
<210> 2
<211> 658
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Figure 108144682-A0305-02-0025-6
Figure 108144682-A0305-02-0026-7
Figure 108144682-A0305-02-0027-8
Figure 108144682-A0305-02-0028-9
<210> 3
<211> 1923
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
Figure 108144682-A0305-02-0028-11
Figure 108144682-A0305-02-0029-12

Claims (20)

  1. 一種雙功能血管生成抑制劑，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
  2. 一種分離的包含編碼雙功能血管生成抑制劑的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述雙功能血管生成抑制劑的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
  3. 根據請求項2所述的多核苷酸，其具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
  4. 一種核酸構建體，其包含請求項2或3所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地連接於一個或多個調控序列，所述調控序列指導所述多肽在表達宿主中的產生。
  5. 一種載體，其包含請求項2或3所述的多核苷酸，其中請求項2或3所述的多核苷酸可操作地連接一個或多個調控序列。
  6. 根據請求項5所述的載體，所述載體為表達載體，所述調控序列指導所述多肽在表達宿主中的產生。
  7. 一種宿主細胞，其包含請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項6所述的表達載體，所述多核苷酸可操作地連接於一個或多個調控序列，所述調控序列指導多肽的產生。
  8. 根據請求項7所述的宿主細胞，所述細胞為哺乳動物細胞或人源細胞；所述哺乳動物細胞進一步優選為CHO細胞。
  9. 一種藥物組合物，其特徵在於所述藥物組合物包含如請求項1中所述的多肽或請求項2或3中所述的多核苷酸或請求項4中所述的核酸構建體或請求項5或6中所述的載體。
  10. 一種試劑盒，其特徵在於所述試劑盒包含請求項9所述的藥物組合物。
  11. 一種請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑或請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項5或6所述的載體在製備用於抑制VEGF和FGF雙因數或者高糖誘導的細胞增殖、細胞遷移和/或管腔成形中的藥物中的用途。
  12. 一種請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑或請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項5或6所述的載體在製備用於抑制視網膜血管生成的藥物中的用途。
  13. 一種請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑或請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項5或6所述的載體在製備用於治療血管新生相關眼部疾病的藥物中的用途。
  14. 根據請求項13的用途，其中所述血管新生相關眼部疾病選自：年齡相關性黃斑變性例如幹性AMD和濕性AMD，糖尿病視網膜病變例如非增殖型DR、增殖型DR和DME，糖尿病性黃斑水腫，早產兒視網膜病和視網膜血管阻塞。
  15. 一種請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑或請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項5或6所述的載體在製備用於在糖尿病物件中改善視網膜損傷藥物中的用途。
  16. 根據請求項15所述的用途，其中所述的視網膜損傷為短期視網膜損傷或長期視網膜損傷。
  17. 根據請求項16所述的用途，其中所述短期視網膜損傷選自減少視網膜血管網中凋亡細胞的數量、降低血-視網膜屏障的滲漏、抑制視網膜膠質細胞反應性增生、以及改善神經視網膜和視網膜血管的超微結構；所述長期視網膜損傷選自改善視網膜屏障滲漏以及抑制毛細血管基底膜的增厚。
  18. 一種請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑或請求項2或3所述的多核苷酸或請求項4所述的核酸構建體或請求項5或6所述的載體在製備 用於在視網膜病物件中改善視網膜無血管灌注區或者降低視網膜新生血管細胞核數藥物中的用途。
  19. 根據請求項18所述的用途，其中所述的視網膜病對象為早產兒。
  20. 一種製備如請求項1所述的雙功能血管生成抑制劑的方法，該方法包括在允許表達該雙功能血管生成抑制劑的條件下培養如請求項7-8中任一項所述的宿主細胞，並且回收該抑制劑。
TW108144682A 2018-12-07 2019-12-06 一種雙功能血管生成抑制劑及其用途 TWI732372B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811491023 2018-12-07
CN201811491023.1 2018-12-07

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202033562A TW202033562A (zh) 2020-09-16
TWI732372B true TWI732372B (zh) 2021-07-01

Family

ID=70974494

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108144682A TWI732372B (zh) 2018-12-07 2019-12-06 一種雙功能血管生成抑制劑及其用途

Country Status (12)

Country Link
US (1) US11629180B2 (zh)
EP (1) EP3812402A4 (zh)
JP (2) JP7516381B2 (zh)
KR (2) KR20210087016A (zh)
CN (1) CN111328336B (zh)
AU (1) AU2019394227B2 (zh)
BR (1) BR112021003275A2 (zh)
CA (1) CA3092320C (zh)
RU (1) RU2760738C1 (zh)
SG (1) SG11202101354RA (zh)
TW (1) TWI732372B (zh)
WO (1) WO2020114411A1 (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101219859A (zh) * 2007-11-30 2008-07-16 华南理工大学 纳米油性ato隔热浆料与制备方法及其应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL99120A0 (en) 1991-08-07 1992-07-15 Yeda Res & Dev Multimers of the soluble forms of tnf receptors,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
JP3725473B2 (ja) * 1999-09-15 2005-12-14 モーガン バイオテクノロジー リサーチ インスティテュート 新規血管形成阻害剤
NZ565511A (en) * 2005-07-22 2011-03-31 Five Prime Therapeutics Inc Compositions and methods of treating disease with FGFR fusion proteins
CN100502945C (zh) * 2006-03-31 2009-06-24 成都康弘生物科技有限公司 Vegf受体融合蛋白在治疗眼睛疾病中的应用
WO2010017198A2 (en) * 2008-08-04 2010-02-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Fgfr extracellular domain acidic region muteins
CN102219860B (zh) 2011-05-20 2012-09-12 烟台荣昌生物工程有限公司 FGFR-Fc融合蛋白及其用途
CN102219859B (zh) 2011-05-20 2012-09-12 烟台荣昌生物工程有限公司 拮抗血管新生诱导因子的融合蛋白及其用途
CN112206309A (zh) * 2019-07-11 2021-01-12 滨州医学院 双靶点血管抑制剂在制备预防或治疗纤维化药物中的用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101219859A (zh) * 2007-11-30 2008-07-16 华南理工大学 纳米油性ato隔热浆料与制备方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
AU2019394227B2 (en) 2023-04-06
CA3092320C (en) 2023-09-19
US11629180B2 (en) 2023-04-18
JP2023052623A (ja) 2023-04-11
US20210324039A1 (en) 2021-10-21
KR20210087016A (ko) 2021-07-09
CN111328336B (zh) 2024-01-30
RU2760738C1 (ru) 2021-11-30
SG11202101354RA (en) 2021-03-30
CA3092320A1 (en) 2020-06-11
WO2020114411A1 (zh) 2020-06-11
TW202033562A (zh) 2020-09-16
KR20240014579A (ko) 2024-02-01
CN111328336A (zh) 2020-06-23
JP7516381B2 (ja) 2024-07-16
AU2019394227A1 (en) 2020-10-01
EP3812402A1 (en) 2021-04-28
EP3812402A4 (en) 2022-04-20
JP2021534825A (ja) 2021-12-16
BR112021003275A2 (pt) 2021-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8216575B2 (en) Inhibition of neovascularization with a soluble chimeric protein comprising VEGF FLT-1 and KDR domains
US9657084B2 (en) Fusion protein inhibiting angiogenesis or growth and use thereof
CN112739323A (zh) 含有高浓度vegf受体融合蛋白的制剂
EP2846836B1 (en) Method of treating amd in patients refractory to anti-vegf therapy
JP2009531036A (ja) Ｖｅｇｆ受容体融合タンパク質およびそれらの使用
JP2009263360A (ja) Ｇｄｎｆリガンドファミリーのメンバーである、アルテミンの新たな使用
CN101677537A (zh) 解联蛋白变体及其药学用途
KR101008734B1 (ko) 유사분열촉진 활성을 가진 Ｂｖ８ 핵산 및 폴리펩티드
TWI732372B (zh) 一種雙功能血管生成抑制劑及其用途
CN105983093A (zh) 血管新生因子融合蛋白在制备用于治疗与血管新生相关的眼部疾病药物中的应用
US9925238B2 (en) Use of peptide for treating angiogenesis-related diseases
CN110339345B (zh) 一种重组人截短型角质细胞生长因子-1滴眼液及其制备方法和应用
RU2669787C2 (ru) Средство для лечения заболевания, сопровождающегося отеком макулы вследствие повышенной экспрессии VEGF-A
CN113645994A (zh) 使用色素上皮衍生因子(pedf)治疗疾病的方法
US20230279090A1 (en) Non-covalent protein-hyaluronan conjugates for long-acting ocular delivery
Arokiasamy et al. QM107, a novel CD148 (RTP Type J) activating peptide therapy for treating neovascular age‐related macular degeneration
Davidson et al. Anti-Vascular Endothelial Growth Factor Agents for Diabetic Macular Edema
CN116761634A (zh) 用于长效眼部递送的非共价蛋白质-透明质酸缀合物
CN108348579A (zh) 神经生长因子组合物及注射粉剂