TWI706784B - 包含山竹萃取物之傳遞體、其製備方法及其用途 - Google Patents

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吳姵萱
郭億清
江享訓
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Abstract

本發明提供一種包含山竹萃取物之傳遞體,其係由下列步驟製得:提供一第一溶液、提供一第二溶液、進行一乳化反應以及進行一均質步驟。第一溶液用以作為水相並包含一山竹萃取物。第二溶液用以作為油相並包含一卵磷脂及一邊活化劑,且卵磷脂與邊活化劑係以體積百分比1:1至4:1的比例混合。乳化反應係混合第一溶液與第二溶液,以形成一乳化物。均質步驟係震盪乳化物,以製得包含山竹萃取物之傳遞體。藉此,本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可有效地包覆山竹萃取物並於生物組織中傳遞,並具有相關的市場潛力。

Description

包含山竹萃取物之傳遞體、其製備方法及其用途
本發明係關於一種傳遞體、傳遞體的製備方法及傳遞體的用途,特別是關於一種包含山竹萃取物之傳遞體、包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法及包含山竹萃取物之傳遞體的用途。
活性氧物質(Reactive oxygen species,ROS)是生物有氧代謝過程中的一種副產品,其包括氧離子、過氧化物和含氧自由基等,且活性氧物質因存在未配對的自由電子而十分活躍。適量的活性氧物質為維持正常生理機能所必需,然而,當活性氧物質因回應發炎現象而過度產生時,將會與體內的抗氧化防禦機轉(Antioxidant defence mechanisms)之間發生不平衡現象,進而導致氧化壓力(Oxidative stress)的發生。
山竹(Garcinia mangostana)又名莽吉柿、山竺、山竹子、倒捻子或鳳果,為藤黃科藤黃屬之一種常綠喬木的果實,由於滋味甜美及盛產於南洋熱帶地區,素有「熱帶果后」的美稱。山竹富含蛋白質、脂類和多種營養成分, 除可直接進行食用外,傳統上更將其用以治療脾虛腹瀉、口渴口乾、燒傷、燙傷、濕疹、口腔炎等病症。
近期的研究顯示,山竹中所含的倒捻子素具有高效的抗氧化活性,並有增強身體免疫力、抗發炎及抗過敏等效用。然而,山竹的倒捻子素等抗氧化有效成分的含量甚少,須從大量的山竹原料萃取並濃縮而得,且山竹萃取物在施用後於人體中的半衰期較短,並無法有效傳遞至深層組織而發揮效果,而為了使山竹萃取物能深入深層組織而發揮抗氧化功效,其施用劑量需大幅提升,然山竹萃取物中的倒捻子素在高濃度時會影響細胞之粒線體功能而有毒害作用,是以利用增加山竹萃取物劑量的方式進行施用並無法獲得最佳之抗氧化效用。
因此,如何發展一種載體,以有效地包覆山竹萃取物並於生物組織中傳遞,並可在防止高濃度的山竹萃取物影響細胞的活性的前提下有效釋放山竹萃取物的抗氧化活性物質,實為本領域之技術人員所共同努力的目標。
本發明之一態樣在於提供一種包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,包含下述步驟:提供一第一溶液、提供一第二溶液、進行一乳化反應以及進行一均質步驟。第一溶液用以作為水相並包含一山竹萃取物。第二溶液用以作為油相並包含一卵磷脂及一邊活化劑,且卵磷脂與邊活化劑係以體積百分比1:1至4:1的比例混合。乳化反應係混合第 一溶液與第二溶液,以形成一乳化物。均質步驟係震盪前述之乳化物,以製得一包含山竹萃取物之傳遞體。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中邊活化劑可為山梨醇酯型邊活化劑或糖苷型邊活化劑。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中乳化反應中,第二溶液的一混合百分比可為3%至5%。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中前述之乳化物可以一高壓均質機進行均質。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中前述之高壓均質機之一高壓均質壓力可為600巴至1500巴。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中前述之山竹萃取物的包覆率可為55%至85%。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中包含山竹萃取物之傳遞體的一平均粒徑可為50nm至300nm。
依據前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中包含山竹萃取物之傳遞體的一多分散性指數可為0.280至0.410。
本發明之另一態樣在於提供一種包含山竹萃取物之傳遞體,其係利用前述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法製得。
本發明之又一態樣在於提供一種包含山竹萃取物之傳遞體的用途,其係用以製備一抗氧化之組合物。
藉此,本發明之包含山竹萃取物之傳遞體透過第二溶液包含卵磷脂及邊活化劑以及卵磷脂與邊活化劑以體積百分比1:1至4:1的比例混合的方式,可有效地對山竹萃取物進行包覆,進而使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體具有高可變性、易於吸收之特性,並可快速滲入深層組織而釋出山竹萃取物的抗氧化活性物質,以發揮相應之抗氧化效果。
100‧‧‧包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法
110‧‧‧提供一第一溶液
120‧‧‧提供一第二溶液
130‧‧‧進行一乳化反應
140‧‧‧進行一均質步驟
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂,所附圖式之說明如下:第1圖係繪示本發明一實施方式之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法的步驟流程圖;第2圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率分析結果圖;第3圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體之平均粒徑的分析結果圖;第4圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的DPPH自由基清除能力的分析結果圖;第5圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的相對總酚含量測試的分析結果圖;第6圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的 ABTS+自由基清除能力的分析結果圖;第7圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的總還原力測試的分析結果圖;第8圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體之經皮傳輸的累積穿透量的分析結果圖;以及第9圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體處理B16F10黑色素瘤細胞之細胞存活率的分析結果圖。
<本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法>
請參照第1圖,其係繪示本發明一實施方式之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法100的步驟流程圖。包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法100包含步驟110、步驟120、步驟130以及步驟140。
步驟110為提供一第一溶液,其中第一溶液用以作為水相並包含一山竹萃取物。詳細而言,前述之山竹萃取物為藤黃科藤黃屬之常綠喬木山竹(Garcinia mangostana)之果實的萃取物,且前述之山竹萃取物係溶於一極性溶液中,以形成前述之第一溶液。較佳地,前述之山竹萃取物可為山竹果皮萃取物。
步驟120為提供一第二溶液,其中第二溶液用以作為油相並包含一卵磷脂及一邊活化劑,且卵磷脂與邊活化劑係以體積百分比1:1至4:1的比例混合。詳細而言,前述之卵磷脂將會形成包含山竹萃取物之傳遞體的磷脂雙 層膜結構,以將山竹萃取物包覆於其中,而邊活化劑的分子則會均勻分布於磷脂雙層膜結構的內膜與外膜中,以增加本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的變形能力。較佳地,前述之邊活化劑可為山梨醇酯型邊活化劑或糖苷型邊活化劑,山梨醇酯型邊活化劑可為Tween 20或Tween 80,而糖苷型邊活化劑可為BASF公司之月桂基葡糖苷Plantacare® 1200 UP(以下簡稱為“1200 UP”以利於說明),但本發明並不以此為限。
步驟130為進行一乳化反應,其係混合第一溶液與第二溶液,以形成一乳化物。較佳地,前述之乳化反應中,第二溶液的一混合百分比可為3%至5%。
步驟140為進行一均質步驟,其係震盪前述之乳化物,以製得一包含山竹萃取物之傳遞體,其中山竹萃取物的包覆率可為55%至85%,包含山竹萃取物之傳遞體的一平均粒徑可為50nm至300nm,而包含山竹萃取物之傳遞體的一多分散性指數可為0.280至0.410。較佳地,前述之乳化物可以一高壓均質機進行均質,且高壓均質機之一高壓均質壓力可為600巴至1500巴,以進一步調整包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑、包覆率與多分散性指數。
藉此,本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法100透過第二溶液包含卵磷脂及邊活化劑以及卵磷脂與邊活化劑以體積百分比1:1至4:1的比例混合的方式,可有效地對山竹萃取物進行包覆,進而使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法100所製得之包含山竹萃取物 之傳遞體具有高可變性、易於吸收之特性,並具有適當的平均粒徑、包覆率與多分散性指數,以快速滲入深層組織而釋出山竹萃取物的抗氧化活性物質,進而增進後續之應用效果。
茲以下列具體試驗例進一步示範說明本發明,用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者,可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明,而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制,但用於說明如何實施本發明的材料及方法。
<製備包含山竹萃取物之傳遞體>
在製備包含山竹萃取物之傳遞體前,需先製備山竹萃取物。
在製備山竹萃取物時,首先將山竹之果肉與果皮分離洗淨後以粉碎機磨碎,接著將山竹果皮與50%之乙醇溶液以體積百分比1:6的比例均勻混合並浸泡12小時後,以80℃的水浴鍋隔水加熱二小時,以得一混合物。接著,將前述之混合物利用紗布過濾去除其中的固體成分,以獲得包含山竹萃取物的一山竹醇類萃取液,並將前述之山竹醇類萃取液以減壓濃縮機濃縮後進行冷凍乾燥,即得本發明之山竹萃取物。
在完成山竹萃取物的製備後,取定量之山竹萃取物溶於重量百分比為5%之乙醇水溶液中,即為本發明之第一溶液。接著,將包含卵磷脂與邊活化劑的第二溶液加入第一溶液中均勻攪拌,以形成一乳化物,並將前述之乳化物 以間歇性超音波振盪2分鐘以及在轉速500rpm的條件下攪拌處理3小時後,以高壓均質機於高壓均質壓力為600巴至1500巴的條件下均質5次,以製得本發明之包含山竹萃取物之傳遞體。
<高壓均質壓力對於脂質體的物理性質影響評估>
本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法中所使用之高壓均質機的高壓均質壓力係以不添加邊活化劑之測試例1至測試例3的包含山竹萃取物之脂質體進行測試,藉以評估最適之高壓均質壓力。詳細而言,前述之包含山竹萃取物之脂質體係根據本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法進行製備,但其第二溶液中並不包含邊活化劑,其中測試例1所使用的高壓均質壓力為1000巴,測試例2所使用的高壓均質壓力為1200巴,而測試例3所使用的高壓均質壓力為1500巴。測試例1至測試例3的包含山竹萃取物之脂質體的山竹萃取物的包覆率、包含山竹萃取物之脂質體平均粒徑及多分散性指數結果列於表一。
Figure 108126039-A0101-12-0008-2
由表一的結果可見,測試例1至測試例3的包含山竹萃取物之脂質體在山竹萃取物的包覆率、包含山竹萃取物之脂質體的平均粒徑及多分散性指數的結果差距甚小,顯示高壓均質機的高壓均質壓力在600巴至1500巴的範圍時皆可有效地包覆山竹萃取物,是以本發明之包含山竹萃取物 之傳遞體的製備方法可使用高壓均質壓力為600巴至1500巴的高壓均質機進行均質,以獲得平均粒徑、包覆率與多分散性指數皆優的包含山竹萃取物之傳遞體。
<實施例>
以下將提出本發明之具體實施例以詳細說明本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,並進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法所製得之包含山竹萃取物之傳遞體的物理性質及抗氧化的效果。而本發明之各實施例皆以高壓均質壓力為1000巴的高壓均質機進行均質,而其第一溶液中的山竹萃取物的含量、第二溶液的邊活化劑種類、第二溶液中的卵磷脂與邊活化劑的比例、第二溶液的混合百分比等製備條件則列於表二。
Figure 108126039-A0101-12-0009-3
以下將以實施例1至實施例15之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法所製得之包含山竹萃取物之傳遞體 進行山竹萃取物的包覆率、包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑及其多分散性指數等物理性質評估,以及測定本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化功效、體外經皮傳輸能力及其細胞存活率。
<包含山竹萃取物之傳遞體的包覆率與平均粒徑評估> 1.第二溶液的一混合百分比對於山竹萃取物的包覆率與包含山竹萃取物之傳遞體平均粒徑的影響
在本實驗中係以前述實施例1至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以分析不同種類之邊活化劑在第二溶液的不同混合百分比時對於包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率與其平均粒徑的影響。
在山竹萃取物的包覆率測試實驗方面,首先將本發明之包含山竹萃取物之傳遞體以10000rpm轉速離心15分鐘後,取上清液以甲醇稀釋,並以過濾膜(PhreeTM Phospholipid Removal,Phenomenex)過濾後,將濾液利用高效液相層析方法(HPLC)進行分析,而高效液相層析方法的檢測條件則列示於表三。
Figure 108126039-A0101-12-0010-4
上述之高效液相層析方法的分析結果則進一步以包覆率之計算公式I進行運算,以得包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率,而包覆率之計算公式I如下:
Figure 108126039-A0101-12-0011-5
在包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑測試實驗方面,首先將本發明之包含山竹萃取物之傳遞體以去離子水進行稀釋並以超音波振盪5分鐘,接著取1ml的樣品以雷射粒徑分析儀(Zetasizer Nano-ZS,Malvern)測量三次,並將三次結果進行平均,以得包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑及其多分散性指數。
請參照表四,其係實施例1至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率、包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑及其多分散性指數測試結果。
Figure 108126039-A0101-12-0011-6
由表四的結果可見,實施例1至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率均達50%以上,其中又以第二溶液的混合百分比為5%的實施例7至實施 例9為佳,其山竹萃取物的包覆率皆可達75%以上。而實施例1至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑範圍則為50nm至140nm,並具有良好的多分散性指數,顯示以本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法不僅可有效包覆山竹萃取物,其所製得之包含山竹萃取物之傳遞體亦具有良好的平均粒徑範圍與均勻的分子量分布,以利於後續的應用。
2.卵磷脂與邊活化劑的不同混合比例對於包含山竹萃取物之傳遞體的包覆率與平均粒徑的影響
在本實驗中係以前述實施例7至實施例15之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以分析不同種類之邊活化劑在不同之第二溶液的卵磷脂與邊活化劑以不同的比例混合時對於山竹萃取物的包覆率與包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑之影響。而包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率、平均粒徑及其多分散性指數的分析方法請參考前段所述,在此則不再贅述。
請參考第2圖與第3圖,第2圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物的包覆率分析結果圖,第3圖係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體之平均粒徑的分析結果圖。
如第2圖所示,實施例7至實施例15之包含山竹萃取物之傳遞體的山竹萃取物在製備後0天的包覆率均達55%以上,其中又以第二溶液的卵磷脂與邊活化劑以體積百分比3:1的比例混合之實施例7至實施例9的山竹萃取物的 包覆率最高,而在包含山竹萃取物之傳遞體以室溫條件儲放二周後(製備後14天),實施例7至實施例15之竹萃取物的包覆率僅些微下降。而如第3圖所示,實施例7至實施例9的包含山竹萃取物之傳遞體的平均粒徑最小,其平均粒徑約為50nm至70nm,且實施例7至實施例15之包含山竹萃取物之傳遞體以室溫條件儲放二周後,其平均粒徑大致維持恆定。
由上述結果可見,本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法不僅可有效包覆山竹萃取物,其所製得之包含山竹萃取物之傳遞體亦具有廣泛的平均粒徑範圍,並具有良好的穩定性,有利於後續的應用。
<包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化功效> 1.包含山竹萃取物之傳遞體的DPPH自由基清除能力測定
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體對於DPPH自由基的清除能力,藉以評估本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化能力。
在試驗上首先將以乙醇溶液進行序列稀釋之不同濃度的本發明之包含山竹萃取物之傳遞體分別加入96孔細胞分析盤中的不同孔洞以作為實驗組,接著於各個孔洞加入180μL濃度為2.4×10-4M的DPPH乙醇溶液,均勻混合後於室溫避光靜置反應30分鐘,再以免疫分析儀測定於波長517nm下之吸光值(OD517),並使用乙醇溶液作為控制組,以計算不同樣品之DPPH自由基清除率的IC50數值。 上述實驗將進行三重複,並將三次實驗的結果平均以進行分析,而DPPH自由基清除率之計算公式II如下:
Figure 108126039-A0101-12-0014-7
在本試驗中另包含未以任何載體進行包覆之山竹萃取物的對照組1,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體對於DPPH自由基的清除能力。
請參照第4圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的DPPH自由基清除能力的分析結果圖。如第4圖所示,對照組1的DPPH自由基清除率的IC50約為248μg/mL,而實施例7至實施例9的DPPH自由基清除率的IC50則分別為237.81μg/mL、239.32μg/mL及246.86μg/mL,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的DPPH自由基清除率與未經任何載體包覆的山竹萃取物相當,使其可在快速滲入深層組織的前提下有效發揮山竹萃取物的抗氧化功效,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
2.包含山竹萃取物之傳遞體的相對總酚含量測定
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以利用磷鉬酸酚試劑(Folin-Ciocalteu phenol reagent)測定本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的相對總酚含量,藉以評估本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化能力。
在試驗上首先取40μL之不同濃度的包含山竹萃取物之傳遞體至不同的微量離心管中以作為實驗組,並於各個微量離心管中加入40μL濃度2M的磷鉬酸酚試劑震盪5分鐘後,加入400μL濃度7%的Na2CO3於並以3000rpm的轉速離心20分鐘後於室溫下避光反應90分鐘。接著,於各個微量離心管中取200μL之反應90分鐘後的反應液至96孔細胞分析盤中的不同孔洞,以免疫分析儀測定於波長760nm下之吸光值(OD760),且每組實驗組進行三重複測試。
在本試驗中另包含以濃度為50μg/mL至1000μg/mL之沒食子酸做為正對照組以及前述之對照組1,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的相對總酚含量。
請參照第5圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的相對總酚含量測試的分析結果圖。如第5圖所示,對照組1的相對總酚含量約為223mg GAE/g,而實施例7至實施例9的相對總酚含量則分別為259.51mg GAE/g、255.26mg GAE/g及221.24mg GAE/g,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體並不會因其山竹萃取物受到傳遞體的包覆而降低酚類物質的釋出,使其可在快速滲入深層組織的前提下快速釋放酚類物質並發揮抗氧化功效,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
3.包含山竹萃取物之傳遞體的ABTS + 自由基清除能力測定
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以測定本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的ABTS+自由基清除能力,藉以評估本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化能力。
在試驗上首先將以乙醇溶液進行序列稀釋之不同濃度的本發明之包含山竹萃取物之傳遞體分別加入96孔細胞分析盤中的不同孔洞以作為實驗組,接著於各個孔洞加入720μL的ABTS溶液,均勻混合後於室溫避光靜置反應10分鐘,再以免疫分析儀測定於波長734nm下之吸光值(OD734),並使用乙醇溶液作為控制組,以計算不同樣品之ABTS+自由基清除率的IC50數值。上述實驗將進行三重複,並將三次實驗的結果平均以進行分析,而ABTS+自由基清除率之計算公式III如下:
Figure 108126039-A0101-12-0016-8
在本試驗中另包含前述之對照組1,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體對於ABTS+自由基的清除能力。
請參照第6圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的ABTS+自由基清除能力的分析結果圖。如第6圖所示,對照組1的ABTS+自由基清除率的IC50為216.35μg/mL,而實施例7至實施例9的ABTS+自由基清除率的IC50則分別為191.31μg/mL、184.10μg/mL及211.60μg/mL,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的ABTS+ 自由基清除率與未經任何載體包覆的山竹萃取物相當,使其可在快速滲入深層組織的前提下有效發揮山竹萃取物的抗氧化功效,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
4.包含山竹萃取物之傳遞體的還原能力測定
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,以測定本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的還原能力,藉以評估本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的抗氧化能力。
在試驗上首先取300μL之不同濃度的本發明之包含山竹萃取物之傳遞體至離心管中以作為實驗組,並於各個微量離心管中加入300μL濃度為1%的赤血鹽與300μL濃度0.2M的磷酸鉀緩衝溶液後,於50℃之水浴鍋反應20分鐘後再加入300μL濃度10%的三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA),並以3000rpm的轉速離心20分鐘。接著,於各個離心管中取1000μL之離心20分鐘的上清液至不同的全新離心管中,並加入1200μL的蒸餾水與240μL濃度為0.1%的FeCl3後於室溫避光反應10分鐘,再從各個離心管中取200μL的反應液至96孔細胞分析盤中的不同孔洞,以免疫分析儀測定於波長700nm下之吸光值(OD700),並使用乙醇溶液作為控制組,以計算不同樣品之還原能力數值。上述實驗將進行三重複,並將三次實驗的結果平均以進行分析,而還原能力之計算公式IV如下:
Figure 108126039-A0101-12-0018-9
在本試驗中另包含前述之對照組1,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的還原能力。
請參照第7圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的總還原力測試的分析結果圖。如第7圖所示,實施例7至實施例9的還原能力數值係隨著樣本濃度升高而提升,並與對照組1的還原能力數值相當,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可在快速滲入深層組織的前提下有效發揮山竹萃取物的抗氧化功效,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
<包含山竹萃取物之傳遞體的經皮傳輸的能力測定>
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體進行實驗,並以人工合成膜StratM® Membrane模擬人體的皮膚,以測定本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的經皮傳輸能力。
在試驗上首先將StratM® Membrane於包含2%之Tween 20的PBS緩衝溶液中水合30分鐘後,於StratM® Membrane的受藥側加入500mL包含2%之Tween 20的PBS緩衝溶液,接著於施藥側加入1mL之不同濃度的本發明之包含山竹萃取物之傳遞體,並分別於反應0.5小時、1小時、2小時、4小時與6小時取出300μL之樣 品以高效液相層析方法進行分析,以計算包含山竹萃取物之傳遞體於受藥側的累積穿透量。
在本試驗中另包含前述之對照組1,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的經皮傳輸能力。
請參照第8圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體之經皮傳輸的累積穿透量的分析結果圖。如第8圖所示,實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體的累積穿透量係隨著反應時間增加而提升,並明顯優於對照組1的累積穿透量,其中又以實施例7的累積穿透量為最佳,其於反應6小時後的累積穿透量可達10.867μg/cm2,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可快速並有效地滲入皮膚的深層組織,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種經皮吸收之外用抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
<包含山竹萃取物之傳遞體處理細胞後之細胞存活率測定>
在本實驗中係以前述實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體處理B16F10黑色素瘤細胞,以說明本發明之包含山竹萃取物之傳遞體對於B16F10黑色素瘤細胞的細胞存活率影響。
在實驗上先於96孔盤中分別植入每孔6x103個B16F10黑色素瘤細胞,於37℃、5% CO2的培養箱中培養24小時後更換新的培養基,並分別以150μM之本發明之包含山竹萃取物之傳遞體處理B16F10黑色素瘤細胞,在完成處理24小時後於每孔加入100μL之MTT試劑,於37℃ 的條件下孵育30分鐘,接著以免疫分析儀測試波長540nm之吸光度值(OD540),並以未經本發明之包含山竹萃取物之傳遞體處理之組別作為控制組,以計算不同樣品之細胞存活率,而細胞存活率之計算公式V如下:
Figure 108126039-A0101-12-0020-10
在本試驗中另包含未以任何載體進行包覆之山竹萃取物的比較例1至比較例5,其中比較例1的山竹萃取物濃度為50μM,比較例2的山竹萃取物濃度為100μM,比較例3的山竹萃取物濃度為150μM,比較例4的山竹萃取物濃度為200μM,而比較例5的山竹萃取物濃度則為250μM,以進一步分析本發明之包含山竹萃取物之傳遞體處理B16F10黑色素瘤細胞後之細胞存活率。
請參照第9圖,其係繪示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體處理B16F10黑色素瘤細胞之細胞存活率的分析結果圖。如第9圖所示,由於山竹萃取物中的倒捻子素在高濃度時會對細胞產生毒殺作用,是以經比較例1至比較例5處理之B16F10黑色素瘤細胞的細胞存活率係隨著濃度增加而降低,而以實施例7至實施例9之包含山竹萃取物之傳遞體處理之B16F10黑色素瘤細胞的細胞存活率在其濃度為150μM的情況下,其細胞存活率分別為實施例7之91.61%、實施例8之97.47%與實施例9之82.89%,相較於相同濃度之比較例3之細胞存活率顯著提升,顯示本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可有效攜帶高濃度之山竹萃取 物,並可在影響細胞活性的前提下有效發揮其抗氧化的效果,使其具有相關市場的潛力。
綜上所述,本發明之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法透過第二溶液包含卵磷脂及邊活化劑,以及卵磷脂與邊活化劑係以體積百分比1:1至4:1的比例混合的方式,可有效地對山竹萃取物進行包覆,並具有優異的抗氧化能力及經皮傳輸能力,進而使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體具有高可變性、易於吸收之特性,並可快速滲入深層組織而釋出山竹萃取物而發揮相應之抗氧化效果,使本發明之包含山竹萃取物之傳遞體可用以製備一種經皮吸收之外用抗氧化之組合物,並具有相關市場的潛力。
然本發明已以實施方式揭露如上,然其並非用以限定本發明,任何熟習此技藝者,在不脫離本發明的精神和範圍內,當可作各種的更動與潤飾,因此本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。
100:包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法
110:提供一第一溶液
120:提供一第二溶液
130:進行一乳化反應
140:進行一均質步驟

Claims (6)

  1. 一種包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,包含下述步驟:提供一第一溶液,該第一溶液用以作為水相並包含一山竹萃取物,其中該山竹萃取物為一山竹(Garcinia mangostana)果皮的萃取物,且該山竹萃取物係溶於一極性溶液中,以形成該第一溶液;提供一第二溶液,其中該第二溶液用以作為油相並包含一卵磷脂及一邊活化劑,該邊活化劑為山梨醇酯型邊活化劑或糖苷型邊活化劑,且該卵磷脂與該邊活化劑係以體積百分比1:1至4:1的比例混合;進行一乳化反應,其係混合該第一溶液與該第二溶液,以形成一乳化物,其中該第二溶液的一混合百分比為3%至5%,且該乳化物係以一高壓均質機進行均質;以及進行一均質步驟,其係震盪該乳化物,以製得一包含山竹萃取物之傳遞體;其中,該山竹果皮係與體積百分濃度為50%之一乙醇溶液以體積百分比1:6的比例均勻混合並浸泡12小時後,以80℃隔水加熱二小時以得一混合物,並去除該混合物之一固體成分以獲得包含一山竹醇類萃取液,且該山竹醇類萃取液係濃縮後並冷凍乾燥,以得該山竹萃取物。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中該高壓均質機之一高壓均質壓力為600巴至1500巴。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中該山竹萃取物的包覆率為55%至85%。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中該包含山竹萃取物之傳遞體的一平均粒徑為50nm至300nm。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法,其中該包含山竹萃取物之傳遞體的一多分散性指數為0.280至0.410。
  6. 一種包含山竹萃取物之傳遞體,其係利用如申請專利範圍第1項至第5項任一項之包含山竹萃取物之傳遞體的製備方法製得。
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CN106138032A (zh) * 2016-08-25 2016-11-23 皖南医学院弋矶山医院 α‑倒捻子素在类风湿关节炎治疗中的应用及其自微乳制剂

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Title
魏吟秋,微乳經皮給藥系統研究進展,醫療前沿,中國藥物經濟學,2012年第5期,頁184-185 *
魏吟秋,微乳經皮給藥系統研究進展,醫療前沿,中國藥物經濟學,2012年第5期,頁184-185。

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