TWI676483B

TWI676483B - 醫藥套組及其用途

Info

Publication number: TWI676483B
Application number: TW107124827A
Authority: TW
Inventors: 季匡華; Kwan-Hwa Chi; 王愈善; Yu-Shan Wang; 黃逸君; Yi-Chun Huang; 江欣蒨; Hsin-Chien Chiang
Original assignee: 強普生技股份有限公司; Johnpro Biotech Inc.
Priority date: 2017-08-06
Filing date: 2018-07-18
Publication date: 2019-11-11
Also published as: US20200163995A1; TW201909917A; WO2019029351A1; CN111107855A; JP2020530485A; KR20200038942A

Abstract

本揭示內容是關於一種用以治療癌症之醫藥套組。本發明醫藥套組包含一藥劑及一經改造的自然殺手細胞。該藥劑可增加癌細胞之腫瘤相關抗原的表現量，而經改造的自然殺手細胞則具有一腫瘤相關抗原專一的嵌合型抗原受器，可標的及破壞該癌細胞。本揭示內容亦提供本發明醫藥套組於治療癌症之用途。

Description

醫藥套組及其用途

本揭示內容是關於治療癌症的領域。更具體來說，本揭示內容是關於一種醫藥套組，及其於製備用以治療癌症之藥物的用途。

癌症是一種與細胞異常增生相關的複雜性疾病。癌細胞與正常細胞有許多不同之處，包含：(1)細胞訊息傳遞：相較於正常細胞，癌細胞對於調控細胞生長或死亡的訊息較不具反應性；(2)侵犯能力：癌細胞會表現較少量之細胞黏附分子；因此，該種較不受限制的細胞可藉由血液或淋巴系統輕易轉移或擴散至身體其他區域；(3)細胞特化：相較於正常細胞，癌細胞為未特化(unspecialized)或分化程度較低的細胞；以及(4)免疫抑制：癌細胞可藉由活化免疫抑制細胞(例如，調控型T細胞(regulatory T cell, Treg)或源自骨髓之抑制細胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC))及/或刺激免疫抑制因子(例如，血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、轉形生長因子-β (transforming growth factor-beta, TGF-β)或介白素-10 (interleukin-10, IL-10))的表現來抑制免疫反應。

常見的抗癌療法包含外科手術、放射治療及化學治療。不幸地，除了抑制腫瘤生長，該些治療方式往往伴隨著傷害或毒殺正常組織的風險。此外，設計用以毒殺癌細胞而不產生副作用的替代性療法則尚在研究及臨床前試驗階段。在該些治療策略中，免疫治療是最具潛力的治療策略之一，其藉由活化腫瘤專一的免疫細胞(例如，T細胞、B細胞、樹突細胞(dendritic cell, DC)、自然殺手細胞(natural killer cell, NK cell)及自然殺手T細胞(natural killer T cell, NKT cell))，及/或刺激抗腫瘤因子(例如，干擾素-γ (interferon-γ, IFN-γ)及顆粒酶(granzyme))的表現/釋放，來達到清除腫瘤的目的。該些經活化之免疫細胞具有標的專一性；亦即，該些免疫細胞可藉由辨識及結合至過量或僅表現於癌細胞的腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen, TAA)，而專一地標的癌細胞。然而，基於癌細胞往往會降低或不表現主要組織相容複合體(major histocompatibility complex, MHC)及表現於其上之TAA (一種逃避免疫反應的機制)，免疫治療於臨床試驗階段的療效並不令人滿意。此外，亦有報導指出，癌細胞釋出的免疫抑制因子(例如，TGF-β或IL-10)會降低NK細胞的治療功效。

有鑑於此，相關領域亟需一種用以有效治療癌症病患之改良方法，據以改善癌症病患的生活品質及/或壽命。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本揭示內容的第一態樣是關於一種用以治療一罹患或疑似罹患癌症之個體的醫藥套組。本發明醫藥套組包含一第一容器及一第二容器，其中該第一容器包含一藥劑，而該第二容器則包含一經改造的(engineered)自然殺手細胞。依據本揭示內容實施方式，該藥劑可增加癌細胞上TAA之表現量，而該經改造的NK細胞則具有一對該TAA具有專一性之嵌合型抗原受器(chimeric antigen receptor, CAR)。

本揭示內容的另一態樣是關於一種利用本發明醫藥套組來治療一罹患或疑似罹患癌症之個體的方法。該方法包含對該個體投予一第一有效量之本發明藥劑，以增加癌細胞表現TAA；以及對該個體投予一第二有效量之本發明經改造的NK細胞，其具有對TAA專一之CAR。

依據本揭示內容某些實施方式，該TAA是癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)。在該些實施方式中，CAR之變異域(variable domain)、鉸鏈域(hinge domain)及效應域(effector domain)分別包含至少85%相似於序列編號：1、2及3之胺基酸序列。依據一操作實施例，CAR包含一至少85%相似於序列編號：4的胺基酸序列。

一般來說，該藥劑是選自由5-氮胞嘧啶苷(5-azacytidine)、5,6-二氫-5-氮胞嘧啶苷(5,6-dihydro-5-azacytidine)、5-氮-2'-去氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine)、阿拉伯呋喃糖-5-氮胞嘧啶(arabinofuranosyl-5-azacytosine)、曲古菌素A (trichostatin A, TSA)、苯丁酸鹽(phenylbutyrate, PB)、丁酸鈉(sodium butyrate, NaB)、丙戊酸(valproic acid, VPA)及辛二醯苯胺異羥肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA)所組成的群組。依據一操作實施例，該藥劑為5-氮胞嘧啶苷或丁酸鈉。

例示性之可以本揭示內容之醫藥套組及/或方法治療的癌症包含，但不限於，胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌。依據本揭示內容某些實施方式，該癌症對化學治療、放射治療或免疫治療具有抗性。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

1. 定義

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

此處針對多肽序列所述的「胺基酸序列相似度百分比」(Percentage (%) amino acid sequence identity)係指候選序列的胺基酸殘基與參考多肽序列的胺基酸殘基完全相同的百分比；於進行上述比對時，可將所述的候選多肽片段與所述的特定多肽片段並排，並於必要時引入間隙，以使二序列形成最高的序列相似度；在計算相似度時，保守性置換的胺基酸殘基視為不同的殘基。相關領域已有多種方法可用以進行上述並排，譬如可公開取得的軟體如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)等。本發明所屬技術領域中具有通常知識者在進行並排時，可選擇適當的參數與計算方式，以得到最佳的排列方式。在本說明書中，二多肽序列間的序列比較是採用美國國家生物科技資訊中心(Nation Center for Biotechnology Information，NCBI)所提供的蛋白質-蛋白質BLAST分析資料庫Blastp來進行。候選多肽序列A相較於參考多肽序列B的胺基酸序列相似度(在本說明書中亦稱之為多肽序列A與多肽序列B具有特定百分比(%)的胺基酸序列相似度)的計算方式如下：% 其中X是利用BLAST序列並排程式對序列A、B進行排列後所得到的相同胺基酸殘基數目(identical matches)，而Y是A、B二序列中較短者的胺基酸殘基總數。

在本揭示內容中，「週期」(cycle)、「治療週期」(cycle of treatment或treatment cycle)為可互換之詞彙，是指對病患投予治療的一段時間。一般來說，治療癌症時，完成一治療週期後會接續一段完全不給予任何治療的休息時間。在該段休息時間後，可再次投予一或多次治療週期，每次治療週期後皆會接續另一段休息時間。

「治療」(treat)一詞包含部份或完全預防、改善、減輕及／或處理與癌症相關之病徵(symptom)、次要病徵(secondary disorder)或症狀(condition)。「治療」(treat)一詞於此說明書中亦指應用或施予本揭示內容之一或多種化合物/細胞至一個體，其係患有與癌症相關之病徵、次要病徵或症狀，以達到部份或完全減輕、減緩、治癒疾病、延遲發病、抑制病程發展、降低疾病嚴重性，及／或降低一或多個與癌症相關之病徵、症狀、或次要病徵的發生。與癌症相關之病徵、次要病徵及／或症狀包含，但不限於，發燒、虛弱、疲倦、體重減輕、疼痛、咳嗽、出血、皮膚改變、腹瀉或便秘、噁心、嘔吐及食慾不振。在此「治療」亦可以是施用至患有早期該些病徵或症狀之個體，以降低該個體發展成為與癌症相關之病徵、次要病徵及／或症狀的風險。在此「治療」為可以有效地減少一個或多個病徵或臨床標記。換句話說，在此治療亦可以是降低、減緩或終止疾病病程、病徵或症狀的發展。

「有效量」(effective amount) 在此處係指一藥物的用量足以產生欲求的療效反應。有效量亦指一種化合物或組合物，其治療利益效果超越其毒性或有害影響。具體的有效量取決於多種因素，如欲治療的特定狀況、患者的生理條件(如，患者體重、年齡或性別)、接受治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續時間、目前療法(如果有的話)的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。舉例來說，可將有效量表示成藥物的總重量(譬如以克、毫克或微克為單位)或表示成藥物重量與體重之比例(其單位為毫克/公斤(mg/kg))。或者是，可將有效量表示成活性成分(例如，本發明經改造的NK細胞)的密度，例如每體積培養液中的細胞數量；或將有效量表示成活性成分(例如，本發明藥劑)的濃度，，例如莫耳濃度、重量濃度、體積濃度、重量莫耳濃度、莫耳分率、重量分率及混合比值。具體來說，「治療有效量」(therapeutically effective amount)一詞若與本揭示內容之藥劑或經改造的NK細胞共同使用時，是指藥劑或經改造的NK細胞的投予量，其足以減緩或減輕個體與癌症相關之病徵。習知技藝者可依據動物模式的劑量來計算藥物(如本揭示內容之藥劑或細胞) 的人體等效劑量(human equivalent dose, HED)。舉例來說，習知技藝者可依據美國食品藥物管理局(US Food and Drug Administration, FDA)所公告之「估算成人健康志願者在初始臨床治療測式之最大安全起始劑量」(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)來估算人體使用之最高安全劑量。

在本揭示內容中，「腫瘤相關抗原」(tumor-associated antigen或TAA)一詞包含偏好表現於腫瘤/癌細胞表面的蛋白或多肽。「偏好表現」(preferentially expressed)一詞在此是指一抗原於腫瘤/癌細胞的表現量至少10% (例如，10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、150%、200%、400%或更多)高於該抗原於非腫瘤/癌細胞中的表現量。在某些實施方式中，該抗原為偏好表現於一腫瘤細胞之表面的抗原，其中該腫瘤係選自由胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌所組成的群組。

在本揭示內容中，「嵌合型抗原受器」(chimeric antigen receptor或CAR)一詞是指一經改造的受器，賦予一抗體對一細胞(例如一T細胞或一NK細胞)之專一性。更具體來說，經改造的受器包含一可結合至一抗原之胞外域、一源自一多肽之穿膜域(該穿膜域與該胞外域係源自不同之多肽)，以及至少一胞內域。有時亦將一「嵌合型抗原受器」稱為一「嵌合型受器」(chimeric receptor)、一「T-體」(T-body)或一「嵌合型免疫受器」(chimeric immune receptor或CIR)。「可結合至一抗原的胞外域」是指任何可結合至抗原的寡肽或多肽。「胞內域」則是指任何可傳遞一訊息以活化或抑制一細胞之生物反應的寡肽或多肽。「穿膜域」是指任何穿經細胞膜，且連接該胞外域與訊息傳遞域之寡肽或多肽。嵌合型抗原受器可非要性地包含一「鉸鏈域」(hinge domain)，其作為一連接子，以連接該胞外域及該穿膜域。

「經改造的」(engineered)一詞在本揭示內容是指經基因處理或修飾之生物分子，例如DNA、RNA及/或蛋白，或是生物技術領域所熟知之相似技術。

「個體」(subject)一詞是指可接受本發明方法治療之包含人類的哺乳動物。除非特定指出，否則「個體」(subject)一詞同時意指男性及女性。

2. 本揭示內容實施方式

TAA的表現/過量表現往往與腫瘤形成相關。舉例來說，已知某些 TAA (例如，生長因子或其受器、訊息傳遞因子及轉錄因子)會誘發細胞增生或侵襲，而其他TAA (例如，細胞激素或其受器，以及免疫檢查點)則與逃避免疫反應相關。此外，有報導指出，TAA亦與癌細胞對化學治療產生抗性相關。基於TAA之促腫瘤特性，目前多數治療皆著重於中和或降低TAA的表現，以達到抗腫瘤之目的。本發明至少部分是基於發明人首次發現增加TAA表現之藥劑不但不會促使癌化反應，反而會相加地或加乘地增加免疫治療的抗癌功效。

據此，本揭示內容的第一態樣是關於一種用以治療有需要之個體(舉例來說，一罹患或疑似罹患癌症之個體)的醫藥套組。依據本揭示內容實施方式，本發明醫藥套組包含一第一容器及一第二容器，其中該第一容器包含一第一藥劑，其可增加癌細胞之TAA的表現量，而該第二容器則包含一經改造的NK細胞，其具有一可專一辨識及結合至該TAA的CAR。一旦將本揭示內容之醫藥套組投予至個體，該具有TAA專一CAR之改造 NK細胞可專一標的並破壞具有TAA表現之癌細胞。

一般來說，該可增加癌細胞之TAA表現量的藥劑可以是一組蛋白去乙醯酶(histone deacetylase, HDAC)抑制劑，舉例來說，曲古菌素A、苯丁酸鹽、丁酸鈉、丙戊酸，以及辛二醯苯胺異羥肟酸。或者是，該藥劑可以是一DNA 去甲基化藥劑，例如5-氮胞嘧啶苷、5,6-二氫-5-氮胞嘧啶苷、5-氮-2'-去氧胞苷，以及阿拉伯呋喃糖-5-氮胞嘧啶。依據本揭示內容一操作實施例，該藥劑為5-氮胞嘧啶苷。依據本揭示內容另一操作實施例，該藥劑為丁酸鈉。

具選擇性地，該藥劑可以是一多肽，其可刺激或增加癌細胞表現TAA (例如，表現CEA)；舉例來說，一重組干擾素(例如，重組IFN-α、IFN-β及IFN-γ)。可利用習知技藝人士所熟知之方法來製備該多肽；舉例來說，將一用以編碼該多肽的多核苷酸導入一適當的細胞(例如，293T)，藉以表現及製備該多肽。或者是，可利用諸如t-BOC或FMOC保護α-胺基等方法來合成該多肽。二種方法皆採逐步合成，由胜肽的C端為起始點，每步驟加入單一個胺基酸。亦可由習知之固相胜肽合成法來合成本發明多肽。

例示性之TAA包含CEA、CD19、CD20、CD23、CD30、CD56、CD73、CD123、α-胎兒蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)、癌抗原125 (cancer antigen 125, CA-125；亦稱為黏液素16 (mucin 16)或MUC 16)、黏液素1 (MUC-1)、CO17-1A (亦稱為GA733、KS1-4、KSA或EpCAM)、前列腺專一抗原(prostatic specific antigen, PSA)、前列腺幹細胞抗原(prostate stem cell antigen, PSCA)、黑色素瘤相關抗原(melanoma-associated antigen, MAA)、酪胺酸酶(tyrosinase)、彈性蛋白酶(elastase)、細胞自溶酶G (cathepsin G, CatG)、Wilms氏腫瘤(Wilms tumor, WT1)、纖維母細胞生長因子5 (fibroblast growth factor 5, FGF-5)、類胰島素生長因子受器-1 (insulin-like growth factor receptor-1, IGF-1R)、Lewis(y)抗原、突變之p53、突變之ras、人類上皮生長因子2 (human epidermal growth factor receptor 2, HER2；亦稱為Neu、ErbB-2或CD340)、上皮生長因子受器(epidermal growth factor receptor, EGFR)、血管內皮生長因子2 (vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)、血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor receptor, PDGFR)、葉酸鹽結合蛋白(folate binding protein, FBP)、HIV-1外膜醣蛋白gp120、HIV-1外膜醣蛋白gp41、GD2、GD3、c-Met (亦稱為肝細胞生長因子受器或HGF受器)、間皮素(mesothelin, MSLN)、人類內生性反轉錄病毒-K (human endogenous retrovirus-K, HERV-K)、IL-11R-α、存活素(surviving)，以及硫酸軟骨素蛋白多醣4 (chondroitin sulfate proteoglycan 4, CSPG4)。依據本揭示內容某些實施方式，該TAA為CEA。

本發明醫藥套組之NK細胞較佳為經改造之會表現嵌合型受器的細胞，其中該嵌合型受器可專一辨識並與癌細胞之相對應TAA結合。用以改造NK細胞的方法包含，但不限於，轉染法(即，利用物理及/或化學處理，將一多核苷酸導入NK細胞中)、病毒轉導法(即，利用病毒或病毒載體將一多核苷酸導入NK細胞中)，以及核染法(nucleofection；即，對NK細胞施予特定電壓或試劑，藉以將一多核苷酸導入NK細胞中)。依據本揭示內容一實施方式，是以慢病毒轉導來製備本發明經改造的NK細胞。

較佳地，改造本揭示內容之NK細胞使其表現對CEA專一的CAR，其中該CAR由N端到C端包含一變異域、一鉸鏈域及一效應域。依據本揭示內容某些實施方式，該用以辨識CEA的變異域包含一至少85%相似於序列編號：1的胺基酸序列；亦即，該CEA專一變異域的胺基酸序列與序列編號：1具有85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的相似度。較佳地，該CEA專一變異域的胺基酸序列至少90%相似於序列編號：1。更佳地，該CEA專一變異域的胺基酸序列至少95%相似於序列編號：1。依據本揭示內容一操作實施例，該CEA專一變異域包含100%相似於序列編號：1的胺基酸序列。

該鉸鏈域作為連接該變異域及該效應域的連接子。一般來說，該鉸鏈域會影響CAR的穩定性、表現及功能。依據本揭示內容某些實施方式，本發明CAR的鉸鏈域包含一至少85%相似於序列編號：2的胺基酸序列，舉例來說，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相似於序列編號：2的胺基酸序列。較佳地，該鉸鏈域的胺基酸序列至少90%相似於序列編號：2。更佳地，該鉸鏈域的胺基酸序列至少95%相似於序列編號：2。依據本揭示內容一特定實施例，該鉸鏈域包含100%相似於序列編號：2的胺基酸序列。

本發明CAR的效應域可將活化訊息傳遞至NK細胞，據以誘導NK細胞破壞會表現CEA的癌細胞。依據本揭示內容某些實施方式，本發明CAR之效應域包含一至少85%相似於序列編號：3的胺基酸序列，舉例來說，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相似於序列編號：3的胺基酸序列。較佳地，該效應域的胺基酸序列至少90%相似於序列編號：3。更佳地，該效應域的胺基酸序列至少95%相似於序列編號：3。依據本揭示內容之一操作實施例，該效應域包含100%相似於序列編號：3的胺基酸序列。

依據本揭示內容某些實施方式，本發明CAR包含一至少85%相似於序列編號：4的胺基酸序列，舉例來說，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相似於序列編號：4的胺基酸序列。較佳地，本發明CAR的胺基酸序列至少90%相似於序列編號：4。更佳地，本發明CAR的胺基酸序列至少95%相似於序列編號：4。依據本揭示內容一操作實施例，本發明CAR包含100%相似於序列編號：4的胺基酸序列。

可以諸如玻璃或塑膠等不同材料來製備適合用以承載本揭示內容之藥劑及/或經改造之NK細胞的容器。第一容器可承載一有效量之本揭示內容之藥劑或其藥學劑型，其中該有效量可增加癌症表現TAA。第二容器可承載一有效量之本揭示內容之經改造的NK細胞或其藥學劑型，其中該有效量可消滅該癌症。該套組可更包含一隨附於容器之標籤或包裝內含物。該標籤或包裝內含物指示分別置於第一及第二容器之藥劑及經改造的NK細胞是用以治療特定癌症。或是或此外，套組可更包含一第三容器，其包含一藥學上可接受之緩衝液，例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏液或葡萄糖溶液。其可更包含其他商業或使用者所需要的材料，包含其他緩衝液、稀釋液、過濾器、針頭及注射器。套組可包含用以說明投予藥劑及經改造之NK細胞的指示說明。

本揭示內容的第二態樣是關於一種利用本發明醫藥套組來治療一有需要之個體(例如，一罹患癌症之個體，或一疑似罹患癌症之個體)的方法。該方法包含： (a)對該個體投予一第一有效量之本發明藥劑；以及 (b)對該個體投予一第二有效量之本發明經改造的NK細胞。

在步驟(a)中，是對該個體投予本發明藥劑，以增加癌細胞的TAA表現量。依據某些實施方式，該個體為一小鼠，其中是對該個體投予每日每公斤個體體重0.1毫克到1公斤(即，0.1毫克-1公斤/公斤/日)的藥劑。較佳地，是對該個體投予1毫克-100公克/公斤/日的藥劑。更佳地，是對該個體投予10毫克-10公克/公斤/日的藥劑。依據本揭示內容一操作實施例，100-500毫克/公斤/日之本揭示內容藥劑即足以增加癌細胞之TAA表現量，藉此增加本發明經改造之NK細胞的抗癌功效。

本發明所屬技術領域具有通常知識者可依據由動物模式所決定的劑量來計算本發明藥劑的人體等效劑量(human equivalent dose, HED)。據此，投予至人體之藥劑的劑量約為每日每公斤個體體重1微克- 100公克(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980或990微克，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980或990毫克，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100公克)。較佳地，投予至人體之藥劑的劑量為10微克-10公克/公斤/日。更佳地，投予至人體之藥劑的劑量為100微克-1000毫克/公斤/日。

或者是，可依據個體之體表面積來投予該藥劑。舉例來說，當個體為一小鼠時，則藥劑的投予劑量為每日每平方公尺個體體表面積0.1毫克-1公斤(0.1毫克- 1公斤/平方公尺/日)。在該種情況下，HED約為1微克-100公克/平方公尺/日。

依據治療目的之不同，可以任何適當路徑來投予藥劑，舉例來說，腸內、口服、鼻腔、非口服(例如腫瘤內、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮下、腹腔內、顱內、腦室內或鞘內注射)、局部或經黏膜投予。

為有效增加TAA的表現量，可對該個體投予一或多次之藥劑。舉例來說，可於完整療程中投予一次藥劑。或者是，可每日投予藥劑，至少投予7日；舉例來說，投予7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或更多日。依據本揭示內容某些實施方式，是每日對個體投予丁酸鈉，共投予9劑，以增加癌細胞之TAA的表現量。

在步驟(b)中，是對個體投予每日每平方公尺個體體表面積1 x 10⁴ - 5 x 10¹¹ (例如，1 x 10⁴ 、1.5 x 10⁴ 、2 x 10⁴ 、2.5 x 10⁴ 、3 x 10⁴ 、3.5 x 10⁴ 、4 x 10⁴ 、4.5 x 10⁴ 、5 x 10⁴ 、5.5 x 10⁴ 、6 x 10⁴ 、6.5 x 10⁴ 、7 x 10⁴ 、7.5 x 10⁴ 、8 x 10⁴ 、8.5 x 10⁴ 、9 x 10⁴ 、9.5 x 10⁴ 、1 x 10⁵ 、1.5 x 10⁵ 、2 x 10⁵ 、2.5 x 10⁵ 、3 x 10⁵ 、3.5 x 10⁵ 、4 x 10⁵ 、4.5 x 10⁵ 、5 x 10⁵ 、5.5 x 10⁵ 、6 x 10⁵ 、6.5 x 10⁵ 、7 x 10⁵ 、7.5 x 10⁵ 、8 x 10⁵ 、8.5 x 10⁵ 、9 x 10⁵ 、9.5 x 10⁵ 、1 x 10⁶ 、1.5 x 10⁶ 、2 x 10⁶ 、2.5 x 10⁶ 、3 x 10⁶ 、3.5 x 10⁶ 、4 x 10⁶ 、4.5 x 10⁶ 、5 x 10⁶ 、5.5 x 10⁶ 、6 x 10⁶ 、6.5 x 10⁶ 、7 x 10⁶ 、7.5 x 10⁶ 、8 x 10⁶ 、8.5 x 10⁶ 、9 x 10⁶ 、9.5 x 10⁶ 、1 x 10⁷ 、1.5 x 10⁷ 、2 x 10⁷ 、2.5 x 10⁷ 、3 x 10⁷ 、3.5 x 10⁷ 、4 x 10⁷ 、4.5 x 10⁷ 、5 x 10⁷ 、5.5 x 10⁷ 、6 x 10⁷ 、6.5 x 10⁷ 、7 x 10⁷ 、7.5 x 10⁷ 、8 x 10⁷ 、8.5 x 10⁷ 、9 x 10⁷ 、9.5 x 10⁷ 、1 x 10⁸ 、1.5 x 10⁸ 、2 x 10⁸ 、2.5 x 10⁸ 、3 x 10⁸ 、3.5 x 10⁸ 、4 x 10⁸ 、4.5 x 10⁸ 、5 x 10⁸ 、5.5 x 10⁸ 、6 x 10⁸ 、6.5 x 10⁸ 、7 x 10⁸ 、7.5 x 10⁸ 、8 x 10⁸ 、8.5 x 10⁸ 、9 x 10⁸ 、9.5 x 10⁸ 、1 x 10⁹ 、1.5 x 10⁹ 、2 x 10⁹ 、2.5 x 10⁹ 、3 x 10⁹ 、3.5 x 10⁹ 、4 x 10⁹ 、4.5 x 10⁹ 、5 x 10⁹ 、5.5 x 10⁹ 、6 x 10⁹ 、6.5 x 10⁹ 、7 x 10⁹ 、7.5 x 10⁹ 、8 x 10⁹ 、8.5 x 10⁹ 、9 x 10⁹ 、9.5 x 10⁹ 、1 x 10¹⁰ 、1.5 x 10¹⁰ 、2 x 10¹⁰ 、2.5 x 10¹⁰ 、3 x 10¹⁰ 、3.5 x 10¹⁰ 、4 x 10¹⁰ 、4.5 x 10¹⁰ 、5 x 10¹⁰ 、5.5 x 10¹⁰ 、6 x 10¹⁰ 、6.5 x 10¹⁰ 、7 x 10¹⁰ 、7.5 x 10¹⁰ 、8 x 10¹⁰ 、8.5 x 10¹⁰ 、9 x 10¹⁰ 、9.5 x 10¹⁰ 、1 x 10¹¹ 、1.5 x 10¹¹ 、2 x 10¹¹ 、2.5 x 10¹¹ 、3 x 10¹¹ 、3.5 x 10¹¹ 、4 x 10¹¹ 、4.5 x 10¹¹ 或5 x 10¹¹ )之經改造的NK細胞。

依據本揭示內容某些實施方式，個體為一小鼠。在某些實施方式中，是對該個體投予每日每平方公尺個體體表面積1 x 10⁶ 到5 x 10¹¹ 之經改造的NK細胞；較佳地，投予每日每平方公尺個體體表面積1 x 10⁷ 到5 x 10¹⁰ 細胞；更佳地，投予每日每平方公尺個體體表面積1 x 10⁸ 到5 x 10⁹ 細胞。可每週對個體投予2-4次(例如，2、3或4次；較佳地，2次)經改造的NK細胞，共投予4週；或於第一週對個體投予4-6次(例如，4、5或6次；較佳地，5次)經改造的NK細胞，於第二週投予1-3次(例如，1、2或3次；較佳地，2次)經改造的NK細胞，而於第三週投予1-3次(例如，1、2或3次；較佳地，1次)經改造的NK細胞。或者是，每日對個體投予1 x 10⁴ 到1 x 10¹¹ 之經改造的NK細胞；較佳地，每日1 x 10⁵ 到1 x 10¹⁰ 細胞；更佳地，每日1 x 10⁶ 到1 x 10⁹ 細胞，其中可每5-8日對個體投予一次(例如每5、6、7或8日一次)經改造的NK細胞，至少投予1個月。在一操作實施例中，每4日對個體投予一次經改造的NK細胞。

當個體為一人類時，可投予每日每平方公尺個體體表面積1-5 x 10⁹ 之經改造的NK細胞。依據某些實施方式，連續二日對個體投予經改造的NK細胞。依據某些實施方式，於一或多治療週期中，對個體投予經改造的NK細胞，其中各次治療的間隔時約為12小時到數個月。依據治療目的之不同，治療間隔時間可為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23小時；為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或25日；或為1、2、3、4或數月。較佳地，於每治療週期之第1、3及5日對個體投予經改造的NK細胞。舉例來說，可於治療第1日對個體投予每平方公尺體表面積1 x 10⁹ 之經改造的NK細胞，於治療第3日投予每平方公尺體表面積3 x 10⁹ 之經改造的NK細胞，以及於治療第5日投予每平方公尺體表面積5x10⁹ 之經改造的NK細胞。

或者是，臨床醫護人員可依據個體的身體及生理因素來決定本發明藥劑及經改造之NK細胞的實際投予劑量，該些因素包含，但不限於，年齡、性別、體重、體表面積、欲治療之疾病、疾病的嚴重程度、先前病史、其他藥物服用與否及投予路徑等。

例示性之投予路徑包含，但不限於，腸內、口服、鼻腔、非口服、局部或經黏膜投予，其中非口服可以是腫瘤內、肌肉內、靜脈內、動脈內、皮下、腹腔內、顱內、腦室內或鞘內注射。

依據本揭示內容實施方式，該表現TAA專一CAR之經改造的NK細胞，對經本發明藥劑處理或前處理之癌細胞具有結合親和性及專一性。在該些實施方式中，本發明藥劑可相加地或加乘地增加本發明經改造之NK細胞的抗癌功效。

當可想見，本發明藥劑可於投予本揭示內容之經改造NK細胞之前或同時，投予至個體體內。較佳地，本發明藥劑是於投予經改造的NK細胞之前，投予至個體體內。非必要性地，先投予至少2劑本發明藥劑後，再投予經改造的NK細胞。舉例來說，先對個體投予3、4、5、6、7、8、9、10或更多次之本發明藥劑，其中各劑之間的間隔時間約為1天；之後再投予1、2、3或更多次之經改造的NK細胞。

適用以本發明醫藥套組及/或方法治療之癌症可為一對化學治療(例如，5-氟尿嘧啶(5- fluorouracil, 5-FU))、一放射治療(例如，紫外線(ultraviolet, UV)照射)或一免疫治療(例如，免疫輸入療法(adoptive immune cell therapy或AIT))具有抗性的癌症。據此，本揭示內容之醫藥套組及/或方法可用以治療對癌症療法產生抗性的癌症病患。

或者是，本發明經改造的NK細胞可在不經本發明藥劑處理(例如，共同處理或前處理)的情況下，單獨投予至癌症病患體內。更具體來說，當癌症病患之TAA表現量高於正常個體之表現量時，可在不投予本揭示內容之藥劑的情況下，直接以本發明經改造的NK細胞治療該癌症病患。舉例來說，當癌症病患之CEA表現量高於健康個體之表現量時，則可對該病患投予包含CEA專一CAR (例如，包含一變異域之CAR，其中該變異域包含序列編號：1之胺基酸序列)之經改造的NK細胞，藉以清除會表現CEA之癌細胞。

例示性之可以本揭示內容之經改造的NK細胞、醫藥套組及/或方法治療的癌症包含，但不限於，胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌。依據本揭示內容一特定實施例，該癌症為結腸癌或直腸癌。

基本上，該個體為一哺乳動物，舉例來說，人類、小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔子、狗、貓、牛、山羊、綿羊、猴子及馬。較佳地，該個體為人類。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。實施例

材料及方法

製備 NK92MI-CEA 細胞

以下述方法製備NK92MI-CEA細胞。利用重疊PCR反應來擴增及組合分別用以編碼mAb T84.66之重鏈(heavy chain, V_H )及輕鏈(light chain, V_L )變異區的序列。將用以編碼抗-CEA scFv片段及CD8α鉸鏈區域(胺基酸105-165)的序列轉殖至質體pcDNA3.1/V5-HIS^© TOPO^® TA中。由製得之pcDNA3.1-scFv (抗-CEA)-CD8a-CD3z構建體製備完整的CAR序列，並藉由Sfi I及Cla I轉殖位點將該CAR序列轉殖至一包含前導序列及HA標籤之經改造的反轉錄病毒pLNCX載體中，藉以製備重組反轉錄病毒載體pLNCX-scFv (抗-CEA抗體)-CD8α-CD3ζ。接著將該載體pLNCX-scFv (抗-CEA抗體)-CD8α-CD3ζ與質體pVSV-G (外膜質體)共轉染至細胞株GP2-293。轉染48小時後，由細胞培養液收集包含反轉錄病毒顆粒之上清液，並以一0.45微米之低蛋白結合過濾器進行過濾。接著，在包含聚凝胺(polybrene，每毫升5微克)的環境中，將經過濾的上清液加至NK92MI細胞株。於37°C培養24小時後，以硫酸新絲菌素(neomycin sulfate-G418，每毫升500毫克)篩選經轉形之NK92MI細胞，以製備NK92MI-CEA細胞，其具有一腫瘤抗原CEA專一之CAR (序列編號：4)。

細胞培養

將人類結腸癌細胞株LS174T (ATCC^® CL-188^™ )及WiDr細胞 (ATCC^® CCL-218^™ )培養於包含每公升1.5公克碳酸氫鈉及10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)之α-MEM培養液中。將HCT116細胞 (ATCC^® CCL-247^™ )培養於包含每公升1.5公克碳酸氫鈉、每公升4.5公克葡萄糖、10 mM HEPES、1.0 mM丙酮酸鈉及10% FBS之McCoy's 5A培養液中。將NK92MI及NK92MI-CEA細胞培養於包含每公升1.5公克碳酸氫鈉、0.2 mM肌醇、0.02 mM葉酸、0.01 mM 2-巰乙醇、10% FBS及12.5 %馬血清之α-MEM培養液中。所有的細胞皆係培養於包含5% CO₂ 之37°C潮溼培養箱中。

決定 CEA 表現

以流式細胞儀決定癌細胞上CEA的表現量。以人類CEA專一抗體染色癌細胞後，利用流式細胞儀進行分析。記錄至少10⁵ 細胞的螢光強度，並以軟體分析。選擇幾何平均值作為平均螢光強度(mean fluorescence intensity, MFI)。

細胞毒殺試驗

本實驗是以癌細胞(即，HCT116或WiDr細胞)及the NK細胞(即，NK92MI或NK92MI-CEA細胞)分別作為標的及效應細胞。簡單來說，將10:1、5:1、1:1及0.5:1等不同比例之標的細胞與效應細胞共同培養於圓底96孔洞培養盤中。於37°C培養24小時後，收集50微升之上清液，並於平底96孔洞酵素分析盤中與50微升之CYTOTOX 96^® 試劑混合。將混合物置於室溫反應30分鐘後，加入50微升之中止溶液(H₂ SO₄ )以中止反應。測量490奈米時的吸光值。以下列公式計算各效應：標的細胞比例之細胞毒殺百比分： (實驗值-培養液背景值) - (效應細胞自發釋放值-培養液背景值) - (標的自發釋放值-培養液背景值) / (標的最大釋放值-體積校正對照值-標的自發釋放值-培養液背景值) × 100。

動物試驗

將2 × 10⁶ WiDr細胞皮下種植於9週大之SCID小鼠的背部。當腫瘤體積約為100-200立方毫米時，連續5日以腹腔注射方式對小鼠投予每公斤200毫克之丁酸鈉。之後，將小鼠分為5組：(1)對照組，每日口服投予PBS，且每4日腹腔投予PBS；(2) NaB組，每日口服投予每公斤5公克之丁酸鈉，且每4日腹腔投予PBS；(3) NK92MI組，每日口服投予PBS，且每4日腹腔投予NK92MI細胞；(4) NK92MI-CEA組，每日口服投予PBS，且每4日腹腔投予NK92MI-CEA細胞；以及(5) NK92MI-CEA + NaB組，每日口服投予每公斤5公克之丁酸鈉，且每4日腹腔投予NK92MI-CEA。每2-3日測量一次腫瘤大小，並以下列公式計算腫瘤體積：長度x (寬度)² ÷ 2 (*p ＜ 0.05)。

統計分析

在分析活體實驗時，是以單向Anova試驗與Bonferroni事後檢測法進行多方比對，以比對腫瘤之體積。

實施例 1 CEA表現與藥物抗性之相關性

有報導指出，CEA的表現會與化學治療之抗性相關。本實施例將探討CEA過量表現對5-氟尿嘧啶抗性的影響。

以丁酸鈉(0.1 mM)或5-氮胞嘧啶苷(1 μM)及不同濃度之5-氟尿嘧啶(1.2、2.4、4.8、9.6或19.2 μM)共同處理HCT116及WiDr細胞72小時。相較於僅投予5-氟尿嘧啶之組別，同時投予丁酸鈉或5-氮胞嘧啶苷會增加細胞之5-FU的IC₅₀ 值(表1及2)。該些數據證實投予5-氮胞嘧啶苷或丁酸鈉會增加癌細胞對藥物的抗性。表1 丁酸鈉或5-氮胞嘧啶苷誘發HCT116細胞產生藥物抗性以三次獨立實驗之平均值 ± SD來表示結果。 P值(與投予5-氟尿嘧啶之組別進行比對)。表2 丁酸鈉或5-氮胞嘧啶苷誘發WiDr細胞產生藥物抗性以三次獨立實驗之平均值 ± SD來表示結果，每次三重覆。 P值(與投予5-氟尿嘧啶之組別進行比對)。

實施例 2 NK92MI-CEA細胞對會表現CEA之癌細胞的功效

為評估CEA的表現是否會影響經改造之NK細胞的細胞毒殺功效，先以流式細胞儀來分析HCT細胞、WiDr細胞及LS174T細胞上CEA的表現狀況。如第1圖所示，相較於HCT116及WiDr細胞，LS174T具有最高之CEA表現量。NK92MI-CEA細胞對三種癌細胞的細胞毒殺功效與其於第1圖所示之CEA表現量相關；結果顯示在三種細胞中，LS174T具有顯著較高之細胞溶解百分比(第2圖)。

該些結果證實NK92MI-CEA細胞對會表現 CEA之癌細胞具有結合親和性及細胞毒殺功效，其中該細胞毒殺功效係與CEA的表現量呈正相關。

實施例 3 NK92MI-CEA細胞對經抗癌藥物前處理之癌細胞的功效

在本實施例中，先以不同抗癌藥物處理癌細胞，之後再投予NK92MI-CEA細胞。結果指出，某些抗癌藥物(例如，5-氮胞嘧啶苷及丁酸鈉)會使癌細胞對化學治療及放射治療產生抗性(結果未顯示)。此外，癌細胞治療抗性與CEA的表現量相關(結果未顯示)。依據該結果，投予5-氮胞嘧啶苷或丁酸鈉會顯著增加癌細胞上CEA的表現量(結果未顯示)。

基於該些結果，將經5-氮胞嘧啶苷或丁酸鈉處理之HCT116細胞與NK92MI-CEA細胞共同培養，其中效應細胞/標的細胞比例(E/T比)為10:1、5:1、1:1或0.5:1。相較於對照組(即，共同培養HCT116及未經改造的NK細胞)及未處理組(即，共同培養HCT116及經改造的NK細胞)，投予5-氮胞嘧啶苷(第3A圖)或丁酸鈉(第3B圖)會顯著增加NK92MI-CEA細胞的細胞毒殺功效。

實施例 4 NK92MI-CEA細胞於動物模式之功效

本實施例將評估NK92MI-CEA細胞於活體內的抗腫瘤功效。依據材料及方法所述流程處理小鼠，第4A-4C圖闡述該些結果。

第4A圖之結果指出，相較於對照組、NaB組及NK92MI組，投予NK92MI-CEA細胞可顯著抑制腫瘤生長。此外，結果亦顯示共同投予丁酸鈉會明顯增加NK92MI-CEA細胞的抗腫瘤功效。

如第4B圖之結果所示，相較於對照組，投予丁酸鈉或NK-92MI細胞不會明顯抑制腫瘤生長。然而，投予 NK92MI-CEA細胞可顯著減少腫瘤體積，而合併投予NK92MI-CEA細胞及丁酸鈉則可達到更顯著的抑制功效。

ELISA數據證實，投予丁酸鈉(不論是單獨投予丁酸鈉，或合併投予丁酸鈉及NK92MI-CEA細胞)後，小鼠血清中循環CEA (cCEA)的表現量會高於對照組(即投予PBS、NK92MI細胞或NK92MI-CEA細胞之小鼠)血清中cCEA的表現量(第4C圖)。小鼠血清中cCEA的表現量分別為每毫升520微微克(對照組)、每毫升990微微克(NaB組)、每毫升200微微克(NK92MI組)、每毫升540微微克(NK92MI-CEA組)，以及每毫升870微微克(NK92MI-CEA + NaB組)。

總結上述，本揭示內容提供一種包含一第一元件及一第二元件的醫藥套組，其中該第一元件包含一可增加欲治療之癌細胞上TAA (例如，CEA)表現量的藥劑(例如，5-氮胞嘧啶苷或丁酸鈉)；而該第二元件則包含經改造之NK細胞，該經改造之NK細胞會表現對TAA專一之受器(例如，NK92MI-CEA細胞)。本發明醫藥套組可用以治療癌症，特別是該些對傳統癌症療法無反應之癌症；據此，本揭示內容可用以改善癌症病患之生活品質或壽命。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

無

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖依據本揭示內容實施例 2所繪示之柱狀圖，其係關於特定癌細胞中CEA的表現量。第2圖依據本揭示內容實施例 2所繪示之線性圖，其闡述NK92MI-CEA細胞對特定癌細胞的毒殺功效。第3A及3B圖依據本揭示內容實施例 3所繪示的線性圖，其分別闡述NK92MI-CEA細胞對經5-氮胞嘧啶苷處理之癌細胞(第3A圖)，以及經丁酸鈉處理之癌細胞(第3B圖)的毒殺功效。第4A-4C圖為依據本揭示內容實施例 4所繪示之線性圖及柱狀圖，其分別闡述在投予特定治療後，小鼠的腫瘤體積(第4A及4B圖)及CEA血清量(第4C圖)。

<110> 強普生技股份有限公司

<120> 醫藥套組及其用途

<150> PCT/US62541778

<151> 2017-08-06

<160> 4

<170> BiSSAP 1.3

<210> 1

<211> 270

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CAR序列之變異域

<400> 1

<210> 2

<211> 46

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CAR序列之鉸鏈域

<400> 2

<210> 3

<211> 138

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CAR序列之效應域

<400> 3

<210> 4

<211> 462

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CAR序列

<400> 4

Claims

一種用以治療一個體之癌症的醫藥套組，包含一第一容器，包含一組蛋白去乙醯酶(histone deacetylase,HDAC)抑制劑及/或一DNA去甲基化藥劑，據以增加該癌症之癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)之表現；以及一第二容器，包含一經改造的自然殺手細胞，其具有一對該CEA具有專一性之嵌合型抗原受器(chimeric antigen receptor,CAR)，其中該CAR包含一變異域、一鉸鏈域及一效應域，分別具有序列編號：1、2及3之胺基酸序列。
如請求項1所述之醫藥套組，其中該藥劑是選自由5-氮胞嘧啶苷、5,6-二氫-5-氮胞嘧啶苷、5-氮-2'-去氧胞苷、阿拉伯呋喃糖-5-氮胞嘧啶、曲古菌素A、苯丁酸鹽、丁酸鈉、丙戊酸及辛二醯苯胺異羥肟酸所組成的群組。
如請求項1所述之醫藥套組，其中該癌症是選自由胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌所組成的群組。
如請求項3所述之醫藥套組，其中該癌症對化學治療、放射治療或免疫治療具有抗性。
一種包含一藥劑及經改造之自然殺手細胞的醫藥套組之用途，其中該醫藥套組係用以製備治療一個體的癌症之藥物，其中該藥劑為一組蛋白去乙醯酶(histone deacetylase,HDAC)抑制劑及/或一DNA去甲基化藥劑，據以增加該癌症之癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表現，且該經改造的自然殺手細胞具有一對該CEA具有專一性之嵌合型抗原受器(chimeric antigen receptor,CAR)，其中該CAR包含一變異域、一鉸鏈域及一效應域，分別具有序列編號：1、2及3之胺基酸序列。
如請求項5所述之用途，其中該藥劑是選自由5-氮胞嘧啶苷、5,6-二氫-5-氮胞嘧啶苷、5-氮-2'-去氧胞苷、阿拉伯呋喃糖-5-氮胞嘧啶、曲古菌素A、苯丁酸鹽、丁酸鈉、丙戊酸及辛二醯苯胺異羥肟酸所組成的群組。
如請求項5所述之用途，其中該癌症是選自由胃癌、肺癌、膀胱癌、乳癌、胰臟、腎臟癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、卵巢癌、腦癌、前列腺癌、肝癌、黑色素瘤、食道癌、多發性骨髓瘤，以及頭頸部鱗狀細胞癌所組成的群組。
如請求項7所述之用途，其中該癌症對化學治療、放射治療或免疫治療具有抗性。