TWI658831B - 牛樟芝萃取物的用途 - Google Patents

牛樟芝萃取物的用途 Download PDF

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葉宗凱
黃嘉新
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Abstract

一種牛樟芝萃取物供應用於製備用來治療藍光誘導的視網膜發炎的醫藥品的用途，其中，該牛樟芝萃取物是牛樟芝經水萃取的產物或牛樟芝經乙醇萃取的產物。

Description

牛樟芝萃取物的用途
本發明是有關於一種牛樟芝萃取物的用途，特別是指一種牛樟芝萃取物用來治療藍光誘導的視網膜發炎的用途。
眼睛是感知光線的器官，而光線會聚焦於眼睛的視網膜上，以產生影像。醫學研究顯示，藍光會對視網膜產生傷害而產生發炎現象，甚至會導致黃斑部病變。若長時間過量照射藍光，容易導致視網膜細胞產生大量自由基，而使視網膜色素上皮細胞層的過氧化物質增加，因而對視網膜細胞造成氧化壓力，並啟動細胞凋亡機制，引起視網膜色素上皮細胞及感光細胞的凋亡。
因此，如何降低藍光對視網膜的傷害是一亟需解決的重要問題，尤其是對於現今大多仰賴許多具有發出藍光的電子產品(包括平板顯示器、電腦顯示器，或手機等)的社會。
因此，本發明的目的，即在提供一種牛樟芝萃取物供應用於製備用來治療藍光誘導的視網膜發炎的醫藥品的用途，其中，該牛樟芝萃取物是牛樟芝經水萃取的產物或牛樟芝經乙醇萃取的產物。
以下將就本發明內容進行詳細說明。
該牛樟芝萃取物是牛樟芝經水萃取的產物或牛樟芝經乙醇萃取的產物。較佳地，該牛樟芝萃取物是牛樟芝經乙醇萃取的產物。該牛樟芝為牛樟芝子實體、牛樟芝菌絲體，或上述的組合。較佳地，該牛樟芝為牛樟芝子實體。
較佳地，該藍光為波長在420nm至460nm的藍光。
在本發明中，選用視網膜色素上皮細胞(retinal pigment epithelium cells)。該視網膜色素上皮細胞例如人類視網膜色素上皮細胞ARPE-19。
依據本發明，該醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地(topically)投藥的劑型。
本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。
製備例1
將購自神農真菌生技有限公司的牛樟芝子實體利用一台高速研磨機(廠牌：五加國際)進行5分鐘的研磨處理，且研磨至形成目數(mesh number)為50的牛樟芝子實體粉末。
製備例2
人類視網膜色素上皮細胞ARPE-19細胞株[購自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)且目錄編號為CRL-2302]與培養基質設置於直徑為10公分的培養皿內，然後，將該培養皿放置於37℃且含有5%的CO 2的培養箱中進行一個月的培養處理，且每週繼代一次，共繼代兩次，而獲得繼代的ARPE-19細胞，且細胞量為1×10 6個。該培養基質包含DMEM/F12培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium: Nutrient mixture F-12；廠牌：Invitrogen Ltd)及胎牛血清(fetal bovine serum，簡稱FBS)。該DMEM/F12培養基包括D-葡萄糖、L-麩醯胺酸及丙酮酸鈉，但不包括酚紅。在該DMEM/F12培養基中該D-葡萄糖的濃度為3151mg/L、該L-麩醯胺酸的濃度為2.5mM，且該丙酮酸鈉的濃度為0.5mM。在該培養基質中該胎牛血清的濃度為10vol%。
比較例1
於37℃且含有5%的CO 2的培養箱中，將3×10 4個製備例2的繼代的ARPE-19細胞以波長為420nm至460nm且照射強度為6.1W/m 2的藍光燈管照射4小時，然後，停止照射並靜置20小時，接著，取出並進行離心處理，然後取出上清液並利用酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA)對該上清液進行細胞激素介白質-8(interleukin-8，簡稱IL-8)的測定。
比較例2
比較例2與比較例1不同在於：比較例2未以該藍光燈管照射。
實施例1
將100克的製備例1的牛樟芝子實體粉末與1000克的水混合並於100℃下回流1小時以進行第一次萃取處理。接著，進行第一次過濾處理，而獲得第一水萃取液及第一濾餅，然後，將該第一濾餅與1000克的水混合並於100℃下回流1小時以進行第二次萃取處理。接著，進行第二次過濾處理，而獲得第二水萃取液及第二濾餅。將該第一水萃取液與該第二水萃取液合併，並置於80℃的烘箱中72小時以將水移除，形成牛樟芝經水萃取的產物。將0.1克的牛樟芝經水萃取的產物及1mL的水混合後，再加入9mL的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養基，然後，進行過濾處理及滅菌處理，而形成10mg/mL的第一溶液。該DMEM培養基含有胎牛血清，但未含有盤尼西林及鏈黴素。利用該DMEM培養基將該第一溶液稀釋成一個混合液，且在該混合液中該牛樟芝經水萃取的產物的濃度為1mg/mL。於37℃且含有5%的CO 2的培養箱中，放置一個96-井培養盤(96-well plate)並於每一井中放入3×10 4個製備例2的繼代的ARPE-19細胞與0.2mL的該混合液，且以波長為420nm至460nm且照射強度為6.1W/m 2的藍光燈管照射4小時，接著，停止照射並靜置20小時，然後，取出並進行離心處理，接著，取出上清液並利用ELISA對該溶液進行IL-8的測定。
實施例2至3
該實施例2至3是以與該實施例1相同步驟進行，不同主要在於：混合液中牛樟芝經水萃取的產物的濃度不同，且依序為1.5mg/mL及2mg/mL。
實施例4
將100克的製備例1的牛樟芝子實體粉末與1000克的濃度為95vol%的乙醇水溶液混合並於60℃進行萃取處理。接著，進行過濾處理，而獲得乙醇萃取液，然後，使用減壓濃縮機(EYELA N-1200A)於40℃下將乙醇及水自該乙醇萃取液中移除，形成牛樟芝經乙醇萃取的產物。將0.1克的牛樟芝經乙醇萃取的產物及1mL的乙醇混合後，再加入9mL的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培養基，然後，進行過濾處理及滅菌處理，而形成10mg/mL的第二溶液。利用該DMEM培養基將該第二溶液稀釋成一個混合液，且在該混合液中該牛樟芝經乙醇萃取的產物的濃度為0.5mg/mL。於37℃且含有5%的CO 2的培養箱中，放置一個96-井培養盤(96-well plate)並於每一井中放入3×10 4個製備例2的繼代的ARPE-19細胞與0.2mL的該混合液，並以波長為420nm至460nm且照射強度為6.1W/m 2的藍光燈管照射4小時，接著，停止照射並靜置20小時，然後，取出並進行離心處理，接著，取出上清液並利用ELISA對該溶液進行IL-8的測定。
實施例5至6
該實施例5至6是以與該實施例4相同步驟進行，不同主要在於：混合液中牛樟芝經乙醇萃取的產物的濃度不同，且依序為0.75mg/mL及1mg/mL。
酵素結合免疫吸附分析法：(1)建立標準曲線，使用Human IL-8 ELISA MAX TMDeluxe套組(廠牌：BioLegend)並配置IL-8的濃度分別為0pg/mL、1.5pg/mL、2.5pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、20pg/mL、40pg/mL，及80pg/mL的標準溶液，接著，利用酵素免疫分析儀器(廠牌：BioTek；型號：EL808)量測450nm的吸光值，然後，以濃度值為橫軸，而吸光值為縱軸，繪製出標準曲線。(2)利用Human IL-8 ELISA MAX™ Deluxe套組及該酵素免疫分析儀器，獲得比較例1至2的上清液及實施例1至6的上清液在450nm的吸光值，接著，利用上述標準曲線，計算出在比較例1至2的上清液及實施例1至6的上清液中IL-8的濃度。
表1
實施例 比較例
4 5 6 1 2 3 1 2
IL-8 (pg/mL) 260.1± 5.3 40.3± 4.9 1.5± 0.9 318.5± 10.5 287.5± 1.3 249.7± 3.3 345.1± 7.5 138.2± 6.9
在表1中，由比較例2的實驗數據可知，在未照射藍光的條件下，IL-8的含量為138.2±6.9，而由比較例1的實驗數據可知，照射藍光後，IL-8的含量增加至345.1±7.5，由上述可知，藍光的存在會使得ARPE-19細胞株分泌出更多的IL-8。再者，由實施例1至6的實驗數據可知，在藍光的照射後，該牛樟芝經水萃取的產物及牛樟芝經乙醇萃取的產物的存在會使得IL-8減少。
綜上所述，本發明牛樟芝經水萃取的產物及牛樟芝經乙醇萃取的產物確實能夠用來治療藍光誘導的視網膜發炎，故確實能達成本發明的目的。
惟以上所述者，僅為本發明的實施例而已，當不能以此限定本發明實施的範圍，凡是依本發明申請專利範圍及專利說明書內容所作的簡單的等效變化與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋的範圍內。

Claims (6)

  1. 一種牛樟芝萃取物供應用於製備用來治療藍光誘導的視網膜色素上皮細胞ARPE-19發炎的醫藥品的用途，其中，該牛樟芝萃取物是牛樟芝經水萃取的產物或牛樟芝經乙醇萃取的產物。
  2. 如請求項1所述的用途，其中，該藍光為波長在420nm至460nm的藍光。
  3. 如請求項1所述的用途，其中，該牛樟芝為牛樟芝子實體。
  4. 如請求項1所述的用途，其中，該醫藥品進一步包含有藥學上可接受的載劑。
  5. 如請求項4所述的用途，其中，該藥學上可接受的載劑包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑、緩衝液、乳化劑、懸浮劑、分解劑、崩解劑、分散劑、黏結劑、賦形劑、安定劑、螯合劑、稀釋劑、膠凝劑、防腐劑、潤濕劑、潤滑劑、吸收延遲劑以及脂質體。
  6. 如請求項1所述的用途，其中，該醫藥品是呈供局部投藥的劑型。
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