TWI650313B

TWI650313B - 雜環化合物及其用途

Info

Publication number: TWI650313B
Application number: TW106130797A
Authority: TW
Inventors: 翁紹華; 葉修華; 趙伯寬; 全石
Original assignee: 財團法人國家衛生研究院
Priority date: 2017-09-08
Filing date: 2017-09-08
Publication date: 2019-02-11
Also published as: TW201912628A

Abstract

本案揭露一種式(I)之化合物或其藥學上可接受之鹽類：其中，每個變數R¹-R⁶、L、m以及n在本文中定義。本案也揭露一種以式(I)之化合物治療鴉片受體相關病症之方法，以及包含其之醫藥組成物。

Description

雜環化合物及其用途

本發明提供一種雜環化合物及包含其之醫藥組成物，可用於治療鴉片受體相關病症。

鴉片被分為天然鴉片(例如嗎啡)、半合成鴉片(例如海洛因)、合成鴉片(例如美沙酮(methadone))、以及內源性鴉片(endogenous opioids)(例如腦內啡(endorphins))。參見例如Piestrzeniewicz等人發表之Postepy Biochem,2006,52：313-319。

他們作用於中樞和周圍神經系統以產生各種藥理作用，包含止痛(analgesia)、及降低胃腸蠕動(gastrointestinal motility)等。鴉片長期以來作為最有效的止痛藥，以用來治療急性疼痛(例如手術後疼痛(post-operative pain))、和慢性疼痛(例如癌症疼痛)。參見例如Waldhoer等人發表之Annu Rev Biochem,2004,73：953-990。

鴉片主要活化鴉片受體的三種典型亞型，即μ-鴉片受體(mu-opioid receptor，MOR)、δ-鴉片受體(delta-opioid receptor，DOR)和κ-鴉片受體(kappa-opioid receptor，KOR)。已經使用各種雜環化合物作為非選擇性或選擇性之MOR促效劑(agonists)，以用於治療鴉片受體相關之病症，例如疼痛、免疫功能、胃食道逆流(esophageal reflux)、以及咳嗽。然而，普通的雜環化合物通常會產生不良效應(adverse effect)，例如呼吸抑制(respiratory depression)。此外，長時間使用這些化合物來控制慢性疼痛會產生嚴重副作用，例如耐受性、依賴及成癮性。參見Tao等人發表之J Pharmacol Exp Ther,2002,303：549-556。

有需要開發用於治療用途時具有更少和/或較少有害副作用之新穎MOR調節劑(modulator)。

本發明涉及某些雜環化合物作為鴉片受體調節劑，用於治療鴉片受體相關病症。意外地，這些化合物作為μ-鴉片受體/痛敏肽受體(nociceptin receptor)(MOR/NOP)雙重促效劑，產生鎮痛的效果(anti-nociceptive effects)，而不產生嚴重的副作用。

本發明之一態樣涉及下式(I)之化合物或其藥學上可接受之鹽類：

在此式中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CN、CF₃、NH₂、NO₂、SO₂、COOH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_2-6烯基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、C_1-6烷氨基、C_2-6二烷氨基、C_7-12芳烷基、C_1-12雜芳烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-NRC(O)R’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、-NRS(O)₂R’、-C(O)R、-C(O)NRS(O)₂R’、-C(O)NRS(O)₂NR’R”、或-NRS(O)₂NR’R”；R⁵為H、OH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、或-C(O)R；R⁶為C_1-6烷基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基；L為O、S、NR、-CRR’-、-C(O)-、-NRC(O)-、或-C(O)NR-；m為1或2；以及n為0或1，R、R’、R”各自獨立為H、鹵素、OH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基。

在此，術語「烷基」是指直鏈或支鏈之烴基團，包含1-20個(例如1-10個和1-6個)碳原子。例子包含甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、和叔丁基。術語「鹵烷基」是指烷基經一或多個鹵原子(氯、氟、溴、或碘)取代。例子包含三氟甲基、溴甲基、和4,4,4-三氟丁基。術語「烯基」是指直鏈或支鏈之烴基團，包含2-20個(例如2-10個和2-6個)碳原子以及一或多個雙鍵。例子包含乙烯基、丙烯基、和丁烯基。

術語「環烷基」是指飽和及部分不飽和之單環、雙環、三環、或四環具有3-12個碳原子之烴基團。例子包含環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環庚基、和環辛基。術語「雜環烷基」是指非芳香族具有一或多個雜原子(例如O、N、P、和S)的5-8員之單環、8-12員之雙環、或11-14員之三環系統。例子包含哌嗪基(piperazinyl)、咪唑啶基(imidazolidinyl)、氮雜環庚基(azepanyl)、吡咯啶基(pyrrolidinyl)、二氫噻二唑基(dihydrothiadiazolyl)、二氧環己基(dioxanyl)、嗎啉基(morpholinyl)、四氫吡喃基(tetrahydropuranyl)、和四氫呋喃基(tetrahydrofuranyl)。

術語「烷氧基」是指-O-烷基之基團。例子包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、和異丙氧基。術語「鹵烷氧基」是指烷氧基經一或多個鹵素原子取代。例子包含-O-CH₂Cl、和-O-CHClCH₂Cl。

術語「鹵素」是指氟、氯、溴、或碘。術語「氨基」是指衍生自未經取代或經烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、或雜芳基單-/二-取代之氨基基團。術語「烷氨基」是指烷基-NH-。術語「二烷氨基」是指烷基-N(烷基)-。

術語「芳烷基」是指經芳基基團取代之烷基。例子包含苄基和萘甲基。術語「雜芳烷基」是指經雜芳基基團取代之烷基基團。例子包含吡啶甲基(pyridylmethyl)、和呋喃甲基(furylmethyl)。

術語「芳基」是指6-碳單環、10-碳雙環、14-碳三環之芳香族環系統。芳基基團例子包含苯基、萘基、和蒽基(anthracenyl)。術語「雜芳基」是指具有一或多個雜原子(例如O、N、P、和S)的5-8員之單環、8-12員之雙環、或11-14員之三環系統。例子包含三唑基(triazolyl)、噁唑基(oxazolyl)、噻二唑基(thiadiazolyl)、四唑基(tetrazolyl)、吡唑基(pyrazolyl)、吡啶基(pyridyl)、呋喃基(furyl)、咪唑基(imidazolyl)、苯並咪唑基(benzimidazolyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、噻吩基(thienyl)、喹啉基(quinolinyl)、吲哚基(indolyl)、噻唑基(thiazolyl)、和苯並噻唑基(benzothiazolyl)。

本文所提及之烷基、烯基、環烷基、雜環烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷氧基、芳基、和雜芳基皆包含經取代和未經取代之基團。環烷基、雜環烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷氧基、芳基、和雜芳基之可能的取代基包含但不限於C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_3-20環烷基、C_3-20環烯基、C_1-20雜環烷基、C_1-20雜環烯基、C_1-10烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、氨基、C_1-10烷氨基、C_1-20二烷氨基、芳氨基、二芳氨基、C_1-10烷磺醯胺基(alkylsulfonamino)、芳磺醯胺基(arylsulfonamino)、C_1-10烷亞胺基(alkylimino)、芳亞胺基(arylimino)、C_1-10之烷磺醯亞胺基(alkylsulfonimino)、芳磺醯亞胺基(arylsulfonimino)、羥基、鹵素、硫基、C_1-10烷硫基(alkylthio)、芳硫基(arylthio)、C_1-10烷磺醯基(alkylsulfonyl)、芳磺醯基(arylsulfonyl)、醯胺基(acylamino)、胺醯基(aminoacyl)、胺基硫代醯基(aminothioacyl)、醯胺基(amido)、甲脒基(amidino)、胍基(guanidine)、脲基(ureido)、硫脲基(thioureido)、氰基、硝基、亞硝基、疊氮基(azido)、醯基(acyl)、硫醯基(thioacyl)、醯氧基(acyloxy)、羧基(carboxyl)、和羧酸酯基(carboxylic ester)。另一方面，烷基或烯基可能的取代基包含上述除了C_1-10烷基以外的所有取代基。環烷基、雜環烷基、芳基、和雜芳基也可以彼此稠和。

除了上述式(I)之化合物外，其適用的藥學上可接受之鹽類和溶劑合物(solvate)也包含在本發明內。可以在化合物上的陰離子和帶正電的基團(如氨基)間形成鹽類，合適的陰離子包含氯、溴、碘、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽(citrate)、甲磺酸鹽(methanesulfonate)、三氟醋酸鹽(trifluoroacetate)、醋酸鹽、蘋果酸鹽(malate)、甲苯磺酸鹽(tosylate)、酒石酸鹽(tartrate)、延胡索酸鹽(fumurate)、麩胺酸鹽(glutamate)、葡萄糖醛酸鹽(glucuronate)、乳酸鹽(lactate)、戊二酸鹽(glutarate)和順丁烯二酸鹽(maleate)。也可以在陽離子和帶負電的基團間形成鹽類，合適的陽離子包含鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子和銨陽離子(例如四甲基銨離子)。鹽類進一步包含那些含有四級氮原子的鹽類。溶劑合物是指在活性化合物和藥學上可接受的溶劑之間形成的複合物，藥學上可接受的溶劑包含水、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺(ethanolamine)。

本發明之另一態樣為用於治療鴉片受體相關病症之醫藥組成物。

該醫藥組成物包含上述式(I)之化合物的一者或其藥學上可接受之鹽類，以及藥學上可接受之載體。

本發明還包含這種組成物在製備用於治療鴉片受體相關病症之藥物的用途。

用於口服給藥之組成物可以是任何口服可接受之劑型，包含膠囊、片劑、乳劑和水性懸浮液、分散劑和溶液。在片劑的情況下，常用的載體包含乳糖和玉米澱粉，通常還加入潤滑劑(lubricating agent)，如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式口服給藥，有用的稀釋劑包含乳糖和乾的玉米澱粉。當以水性懸浮液或乳劑口服給藥時，活性成分可以懸浮或溶解在與乳化劑或懸浮劑結合的油相中。如果需要，可以加入一些甜味劑、矯味劑或著色劑。口服固體劑型可以藉由噴霧乾燥技術製備；熱熔擠出方式、微粉化(micronization)、以及奈米研磨技術製備。

鼻噴劑(nasal aerosol)或吸入組合物可以根據藥物製劑領域已知的技術製備，例如組合物可以製備成鹽水溶液，採用苯甲醇或其他合適的防腐劑、吸收促進劑、碳氟化合物及/或其他本領域已知的助溶劑或分散劑。具有活性化合物之組成物也可以透過用於直腸給藥的栓劑形式給予。

藥學組合物中的載體必須是「可接受的」，在意義上其與組成物的活性成分相容(並且優選為能夠穩定該活性成分)，且對於治療者無害。一或多種助溶劑可以用來作為輸送活性化合物之藥物賦形劑。其他載體的例子包含膠質氧化矽(colloidal silicon oxide)、硬脂酸鎂，纖維素、硫酸月桂酯鈉(sodium lauryl sulfate)和D&C Yellow # 10。

治療鴉片受體相關病症之方法仍然在本發明之範圍內。

該方法包含向有需要的主體施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受之鹽類。

上述化合物或含有一或多種此化合物之醫藥組成物可以通過口服、腸道外(parenterally)、藉由吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰(buccally)、陰道或經由植入式儲藥槽(implanted reservoir)給予至主體。本文所用術語「腸道外」包含皮下(subcutaneous)、皮內(intracutaneous)、靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、關節內(intraarticular)、動脈內(intraarterial)、滑囊(腔)內(intrasynovial)、胸骨內(intrasternal)、蜘蛛膜下腔(intrathecal)、疾病部位內(intralesional)、和頭顱內(intracranial)注射，或灌注技術。

術語「治療」是指將該化合物施用或給予主體，目的是治癒、減輕、緩解、改變、補救、改善或影響該疾病、其症狀或傾向。術語「有效劑量」是指賦予主體期望效果所需的化合物的量。如本領域技術人員所認知的，有效劑量會依據施用途徑、賦形劑用法、以及與其他治療(例如使用其他活性劑)共同使用的可能性而變化。

在下面的描述中闡述了本發明之一或多個實施例的細節。本發明的其他特徵、目的及優點將於說明書和請求範圍中顯而易見。

首先，本文詳細公開了下式(I)之化合物或其藥學上可接受之鹽類：其中，每個變數R¹-R⁶、L、m、及n如發明內容段落之定義。

通常，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；且R⁵為H、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、或-S(O)₂R。例如R¹-R⁴各自為H且R⁵為H或C_1-6烷基。

R⁶可以是C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基。R⁶之例子包含但不限於

關於變數L、m、及n，優選的L為-NRC(O)-，例如-NHC(O)-，且m及n各自為1。

在示例性化合物中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；R⁵為H、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、或-S(O)₂R；R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基；L為-NHC(O)-；且m及n各自為1。優選地，R¹-R⁴各自為H，R⁵為H或C_1-6烷基，且R⁶為以下基團之一者：

在一實施例中，參考式(I)，連接到苯環和氮原子的碳具有R或S的立體異構構型，且該化合物具有90%或大於90%之鏡像異構物超越值(enantiomeric excess)(例如≧95%和≧99%)。

這些實施例包含的化合物具有R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；R⁵為H、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、或-S(O)₂R；R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基；且L為-NRC(O)-。優選地，這些化合物具有R¹-R⁴各自為H，R⁵為H或C_1-6烷基，且R⁶為C₆芳基，其中，C₆芳基選擇性地為單-、二-、或三-取代基取代，該取代基為鹵素、OH、CN、CF₃、NH₂、NO₂、SO₂、COOH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_2-6烯基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、C_1-6烷氨基、C_2-6二烷氨基、C_7-12芳烷基、C_1-12雜芳烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-NRC(O)R’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、-NRS(O)₂R’、或-C(O)R；或選擇性地與C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基稠和。更優選地，R⁶為以下基團之一者：最優選地，這些化合物具有L為-NHC(O)-，且m及n各自為1。

用於治療鴉片受體相關病症(例如疼痛)之醫藥組成物也在本發明之內，該組成物包含上述式(I)化合物之一者或其藥學上可接受之鹽類，及藥學上可接受之載體。

本發明進一步包含用於治療鴉片受體相關病症之方法，該方法包含向有需要的主體施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受之鹽類。

鴉片受體相關病症之例子包含但不限於疼痛、免疫疾病、胃食道逆流(esophageal reflux)、腹瀉(diarrhea)、焦慮(anxiety)、以及海洛因成癮(heroin addiction)。尤其是，該方法用於治療疼痛，即鴉片受體相關疼痛。該疼痛可以是癌症疼痛、手術後疼痛(post-operative pain)、胃絞痛(renal colic pain)、急性胰臟炎疼痛(acute pancreatitis pain)、心絞痛(angina pain)、下背疼痛(low back pain)、類風濕性關節炎疼痛(rheumatoid arthritis pain)、骨關節炎疼痛(osteoarthritis pain)、神經性疼痛(neuropathic pain)、纖維肌疼痛(fibromyalgia pain)、或複雜的局部疼痛綜合症狀(complex regional pain syndrome)。

必須說明的是，在這種方法中，式(I)化合物通過雙重機制，即作為μ-鴉片受體/痛敏肽受體(nociceptin receptor)(MOR/NOP)雙重促效劑，發揮鎮痛的效果(anti-nociceptive effects)，而不產生嚴重副作用的促效劑。NOP與典型的鴉片受體具有相似的序列同源性。已報導NOP促效劑產生鎮痛作用伴隨較少的副作用，例如濫用、呼吸抑制、和胃腸抑制(gastrointestinal inhibition)。參見Lin等人發表之ACS Chemical Neuroscience,2013,4：214-224。MOR/NOP雙重促效劑，例如式(I)之化合物，可以用於治療鴉片受體相關病症，例如疼痛，同時比普通的MOR促效劑產生較少的副作用。

參考式(I)，上述方法使用的化合物通常具有R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；R⁵為H、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、或-S(O)₂R；R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基；且L為-NRC(O)-。

合成式(I)化合物之方法為本領域所熟知的。參見例如R.Larock,Comprehensive Organic Transformations(2nd Ed.,VCH Publishers 1999)；P.G.M.Wuts and T.W.Greene,Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis(4th Ed.,John Wiley and Sons 2007)；L.Fieser and M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis(John Wiley and Sons 1994)；L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis(2nd ed.,John Wiley and Sons 2009)；P.Roszkowski, J.K.Maurin,Z.Czarnocki“Enantioselective synthesis of(R)-(-)-praziquantel(PZQ)”Tetrahedron：Asymmetry 17(2006)1415-1419；以及L.Hu,S.Magesh,L.Chen,T.Lewis,B.Munoz,L.Wang“Direct inhibitors of keap1-nrf2 interaction as antioxidant inflammation modulators,”WO2013/067036。

如此製備的式(I)化合物可以體外測定法初步篩選，例如下文實施例68所描述之FLIPR®鈣離子測定法(calcium assay)，來篩選其在細胞中活化MOR的效價，隨後可使用體內測定法評估，例如實施例68所描述之閃尾測試(tail-flick test assay)。選擇的化合物可以進一步測試以驗證其在疾病相關疼痛和副作用模型中的藥效。根據結果，可以確認適當劑量範圍和給藥途徑。

在用來鑑定MOR促效劑的示例性體外測定法中，在細胞鈣離子螢光分析法(cellular calcium fluorescent assay)中以待測試化合物處理表達MOR的細胞，接著測量螢光強度以判定MOR是否被活化，如果MOR被活化，鑑定測試化合物為MOR促效劑。

通常在上述測定法中使用兩種參數，即EC₅₀和AUC，以測量測試化合物活化MOR的程度。本文中EC₅₀是指在特定暴露時間後引發於基準線和最大值間半數效應的化合物濃度。AUC是指反應曲線下的面積，其為化合物活化MOR之能力的指標。

在用來證實測試化合物為MOR促效劑的示例性體內測定法中，將測試化合物注入小鼠疼痛模型(mouse pain model)中(例如透過靜脈注射)，在處理前記錄基礎延遲時間(basal latency)，以及在注射後於各種特定時間記錄測試延遲時間(test latency)，並記錄時間-反應曲線(time-response curve)和計算AUC值，以判定是否對小鼠發揮止痛效果。在觀察止痛效果時，用來證實測試化合物為MOR促效劑。

在用來鑑定NOP促效劑的示例性體外測定法中，將細胞設計為過度表達NOP，且設計用來檢測在細胞內cAMP的濃度變化，從而反映待測化合物活化NOP的程度。施體-cAMP複合物(donor-cAMP complex)酵素與受體互補且形成活化的酵素，隨後活化的酵素水解基質以產生化學發光訊號，此發光訊號強度正比於在細胞中cAMP的量。因此這些細胞經修飾後，可用於鑑定NOP促效劑。

即便未進一步詳細描述，相信本領域技術人員可基於以上描述最大程度地利用本發明。因此，以下的具體實施例，即實施例1-69應被解釋為僅僅是說明性的，而不以任何方式限制本公開的其餘部分，本文引用的所有出版物均併入本發明以供參考。

在具體實施例中，實施例1一67闡述了某些中間體和56種示例性式(I)化合物的製備方法，以及由此製備的化合物的分析數據；以及實施例68和69列出了測試這些化合物的步驟。

下表顯示了56種示例性式(I)化合物的結構和名稱。發現所有56種化合物以不同程度活化MOR，如下表EC₅₀和AUC所示。

以下描述用於合成上述56種示例性化合物的步驟。須注意的是，這些化合物的合成描述已於新穎性優惠期內由發明人揭露，即陳等人，於European Journal of Medicinal Chemistry,2017,126,202-217.

所有試劑和溶劑皆是從商業來源購買，除非另有說明，否則使用時不需進一步純化。所有反應在乾燥的氨氣或氬氣下進行，並使用Merck矽膠60 F₂₅₄玻璃背板的薄層層析法(TLC)監測。管柱層析法使用Merck矽膠60(0.040-0.063mm，230-400網目(mesh))進行。¹H NMR和¹³C NMR光譜以Varian Mercury-300和Varian Mercury-400光譜儀測量，且相對於溶劑峰共振之化學位移(δ)以百萬分之一(ppm)紀錄。多重峰具有以下縮寫：s(單峰)、d(雙重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quin(五重峰)、m(多重峰)、或br(寬峰)。低解析質譜以HP Hewlett Packard 1100系列測量。

依照以下四種流程合成式(I)之化合物。

流程1. 試劑和條件：(a)三乙胺、二氯甲烷、室溫、2小時(94%)；(b)三氯氧磷、乙腈、回流、60小時(65%)；(c)三乙醯氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)₃)、二氯甲烷、醋酸、室溫、6小時(81%)；(d)1.聯胺(99%)、乙醇、回流、40分鐘，以及2.38%鹽酸、回流、40分鐘(100%)；(e)醯氯、乙腈、吡啶、2N鹽酸、氯仿、室溫、2小時(16-69%)。

流程2. 試劑和條件：N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA)、二氯甲烷、室溫、2小時。

流程3. 試劑和條件：(a)二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)、碳酸氫鈉、二氯甲烷、室溫、1小時(100%)；(b)聯胺(99%)、乙腈、回流、32小時(100%)；(c)醯基胺基甲酸酯(acyl carbamate)、三乙胺、二氯甲烷、室溫、8小時(91-95%)；(d)三氟醋酸、二氯甲烷、室溫、3小時(41-99%)。

流程4. 試劑和條件：醛、三乙醯氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)₃)、乙腈、室溫、6小時(37-96%)。

實施例1

2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-N-(2-苯基乙基)乙醯胺

2-(1,3-Dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)-N-(2-phenylethyl)acetamide

取鄰苯二甲醯甘胺醯氯(phthalylglycyl chloride，6.46g，28.9mmol)於二氯甲烷(80mL)的溶液，加人β-苯基乙基胺(3.55mL，28.2mmol)和三乙胺(7.61mL，56.4mmol)，溶液在室溫下攪拌1.5小時後，加入水(30mL)並以二氯甲烷(2×40mL)萃取，有機層以硫酸鎂乾燥，並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由甲醇(50mL)結晶純化，得到白色固體的醯胺(8.20g，94%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.90-7.85(m,2H),7.78-7.74(m,2H),7.27-7.15(m,5H),5.69(br t,1H),4.29(s,2H),3.54(q,2H),2.82(t,2H)；MS(ESI)m/z 309.1(M+H).

實施例2

2-(3,4-二氫-1-異嗪啉基甲基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮

2-(3,4-Dihydro-1-isoquinolinylmethyl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione

取2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)-N-(2-苯基乙基)乙醯胺1(12.4g，40.3mmol)於乙腈(124mL)的溶液，加入三氯氧磷(11.3mL，121mmol)，將溶液回流63小時後，冷卻至室溫並減壓濃縮，殘餘物以二氯甲烷(50mL)溶解，並以氫氧化鈉溶液(100mL)和食鹽水(2×50mL)洗，有機層以硫酸鎂乾燥，並以減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色固體的二氫異喹啉(7.61g，65%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.89-7.87(m,2H),7.73-7.71(m,2H),7.52(d,1H),7.41-7.28(m,2H),7.20(d,1H),4.92(s,2H),3.61(dd,2H),2.68(t,2H)；MS(ESI)m/z 291.1(M+H),158.0.

實施例3

2-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基]-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮

2-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione

取2-(3,4-二氫-1-異喹啉基甲基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮2(0.100g，0.340mmol)於二氯甲烷(1.72mL)的溶液，加入三乙醯氧基硼氫化鈉(NaBH(OAc)₃，0.370g，1.72mmol)和醋酸(0.02mL)，溶液在室溫下攪拌1小時後，以二氯甲烷(40mL)稀釋並以水(2×10mL)洗，有機層以硫酸鎂乾燥，並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由急速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的四氫異喹啉(80.0mg，81%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91-7.82(m,2H),7.76-7.68(m,2H),7.34-7.28(m,1H),7.24-7.08(m,2H),4.39(dd,1H),4.09(dd,1H),3.90(dd,1H),3.34(dt,1H),2.98(dt,1H),2.81-2.78(m,2H)；MS(ESI)m/z 293.0(M+H)

實施例4

1-(1,2,3,4-四氫-1異喹啉基)甲胺

1-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinyl)methanamine

取2-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮3(1.01g，3.46mmol)於乙醇(29.6mL)的溶液，加入聯胺，將溶液回流40分鐘後冷卻至室溫，在減壓下濃縮，再與鹽酸溶液(37%，17.4mL)回流40分鐘，將沉澱物過濾並以固體氫氧化鈉中和濾液，接著以二氯甲烷萃取(3×100mL)，有機層以硫酸鎂乾燥，濃縮後得到黃色液體的二胺(0.560g，100%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)；δ 7.22-7.03(m,4H),4.10-3.98(m,1H),3.25-3.17(m,1H),3.11-2.98(m,3H),2.91-2.69(m,2H)；MS(ESI)m/z 163.1(M+H).

按照以下製備化合物5的步驟(步驟A)合成化合物38-60。

實施例5

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclohexanecarboxamide

取1-(1,2,3,4-四氫-1異喹啉基)甲胺4(0.900g，5.54mmol)、吡啶(0.600mL)和2N鹽酸(2.70mL，5.39mmol)於乙腈(8.99mL)的溶液，在45分鐘期間，緩慢加入溶於氯仿(4.24mL)的環己烷羰醯氯(1.10mL，8.31mmol)溶液，溶液在室溫下攪拌2小時後減壓濃縮，加入乙醚(50mL)至殘餘物中，溶液以1N鹽酸(3×30mL)萃取，水層以固體氫氧化鈉中和，並以二氯甲烷萃取(3×30mL)，有機層以硫酸鎂乾燥，減壓蒸發溶劑。粗產物以快速管柱層析法純化，(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色固體的醯胺(1.04g，69%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.22-7.05(m,4H),6.32(br t,1H),4.11(dd,1H),3.78(ddd,1H),3.36(ddd,1H),3.22-3.11(m,1H),3.09-2.99(m,1H),2.88-2.70(m,2H),2.07(tt,1H),1.88-1.59(m,5H),1.48-1.00(m,5H)；MS(ESI)m/z 273.1(M+H).

按照以下製備化合物6的步驟(步驟B)合成化合物7-19和22。

實施例6

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環己烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclohexanecarboxamide

取N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(40.0mg，150μmol)和N,N-二異丙基乙基胺(30.0μL，150μmol)於二氯甲烷(0.4mL)的溶液，加入4-溴-2-(三氟甲氧基)苯-1-磺醯氯(30.0μL，150μmol)，溶液在室溫下攪拌2小時後，加入水(10mL)並以二氯甲烷(3×10mL)萃取，有機層以硫酸鎂乾燥並以減壓蒸發溶劑。粗產物以急速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(80.0mg，97%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91(d,1H),7.48(d,1H),7.34(s,1H),7.22-7.10(m,3H),6.99(d,1H),6.12(br t,1H),5.15(dd,1H),3.83(dd, 1H),3.67-3.48(m,3H),2.60(ddd,1H),2.42(ddd,1H),2.14(tt,1H),2.02-1.75(m,4H),1.71-1.62(m,overlapped with br s at 1.66,1H),1.46(q,2H),1.37-1.13(m,3H)；MS(ESI)m/z 575.0(M+H).

實施例7

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環己烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethyl)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-溴-2-(三氟甲基)苯磺醯氯(80.0mg，0.240mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到白色固體的磺醯胺(0.110g，90%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.93(d,1H),7.86(d,1H),7.68(dd,1H),7.25-7.15(m,3H),7.04-7.02(m,1H),6.04(br t,1H),5.09(t,1H),3.87(dd,1H),3.61-3.51(m,3H),2.72-2.52(m,2H),2.08(tt,1H),1.97-1.74(m,4H),1.70-1.51(m,overlapped with br s at 1.60,1H),1.42(q,2H),1.32-1.12(m,3H)；MS(ESI)m/z 581.0(M+Na).

實施例8

N-({2-[(4-溴-2-甲基苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Bromo-2-methylphenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-溴-2-甲基苯磺醯氯(70.0mg，0.240mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到白色固體的磺醯胺(0.100g，92%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.79(d,1H),7.39(d,overlapped with s at 7.37,2H),7.25-7.13(m,3H),7.03(d,1H),6.13(br t,1H),5.14(d,1H),3.74-3.61(m,2H),3.52-3.39(m,2H),2.65-2.42(m,2H),2.35(s,3H),2.18-2.06(m,1H),2.00-1.75(m,4H),1.71-1.58(m,overlapped with br s at 1.63,1H),1.46(q,2H),1.36-1.19(m,3H)；MS(ESI)m/z 527.1(M+Na).

實施例9

N-({2-[(4-溴苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Bromophenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahyaro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

化合物9

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-溴苯-1-磺醯氯(60.0mg，0.220mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(0.100g，97%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.56(d,2H),7.46(d,2H),7.22-7.08(m,3H),6.92(d,1H),6.20(br t,1H),5.04(dd,1H),3.96-3.84(m,1H),3.67(ddd,1H),3.57-3.32(m,2H),2.62-2.35(m,2H),2.16(tt,1H),2.03-1.58(m,overlapped with br s at 1.69,5H),1.48(q,2H),1.38-1.13(m,3H)；MS(ESI)m/z 491.3(M+H).

實施例10

N-({2-[(2,4-二溴苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(2,4-Dibromophenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(50.0mg，0.180mmol)和2,4-二溴苯磺醯氯(70.0mg，0.200mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(90.0mg，88%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.02(d,1H),7.81(s,1H),7.56(d,1H),7.23-7.15(m,3H),7.08-7.01(m,1H),6.04(br t,1H),5.24(dd,1H),3.76(dt,1H),3.66(ddd,1H),3.56-3.45(m,2H),2,64-2.59(m,2H),2.07(tt,1H),1.99-1.75(m, 4H),1.72-1.62(m,1H),1.44(q,2H),1.37-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 591.0(M+Na).

實施例11

N-({2-[(4-溴-2-氯苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Bromo-2-chlorophenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(50.0mg，0.180mmol)和4-溴-2-氯苯磺醯氯(60.0mg，0.200mm0l)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(90.0mg，90%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.97(d,1H),7.57(s,1H),7.51(d,1H),7.21-7.14(m,3H),7.03(d,1H),6.08(br t,1H),5.23(dd,1H),3.82-3.71(m,1H),3.67-3.47(m,3H),2.66-2.49(m,2H),2.09(tt,1H),2.00-1.75(m,4H),1.71-1.53(m,overlapped with br s at 1.59,1H),1.44(q,2H),1.37-1.13(m,3H)；MS(ESI)m/z 547.0(M+Na).

實施例12

N-({2-[(4-溴-2-氟苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Bromo-2-fluorophenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexcmecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(50.0mg，0.180mmol)和4-溴-2-氟苯磺醯氯(60.0mg，0.200mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(80.0mg，89%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.76(t,1H),7.35(dd,1H),7.21-7.12(m,4H),6.99(d,1H),6.14(br t,1H),5.14(dd,1H),3.91(ddd,1H),3.63-3.47(m,3H),2.68-2.47(m,2H),2.14(tt,1H),2.02-1.74(m,4H),1.71-1.59(m,overlapped with br s at 1.65,1H),1.46(q,2H),1.37-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 531.1(M+Na).

實施例13

N-[(2-{[2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環己烷甲醯胺

N-[(2-{[2-(Trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(50.0mg，0.180mmol)和2-(三氟甲氧基)苯磺醯氯(50.0mg，0.200mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(80.0mg，87%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.05(d,1H),7.53(t,1H),7.34(t,1H),7.21-7.10(m,4H),6.96(d,1H),6.16(br t,1H),5.24-5.10(m,1H),3.86(dd,1H),3.64-3.48(m,3H),2.59-2.50(m,1H),2.59-2.50(m,1H),2.39(ddd,1H),2.14(tt,1H),2.03-1.74(m,4H),1.71-1.58(m,overlapped with br s at 1.64,1H),1.46(q,2H),1.37-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 519.1(M+Na).

實施例14

N-({2-[(2-甲氧基苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(2-Methoxyphenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(40.0mg，0.150mmol)和4-甲氧基苯磺醯氯(30.0mg，0.160mmol)進行反應。粗產物藉由急速層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(30.0mg，45%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.99(d,1H),7.45(t,1H),7.28(d,1H),7.20(t,1H),7.12(t,1H),7.01(t,1H),6.95(d,1H),6.72(d,1H),6.30(br t,1H),5.35(dd,1H),3.84-3.70(m,2H),3.50-3.37(m,2H),3.16(s,3H),2.41(dd,1H),2.24-2.14 (m,2H),2.06-1.94(m,2H),1.87-1.75(m,2H),1.70-1.55(m,overlapped with br s at 1.59,1H),1.49(q,2H),1.38-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 465.1(M+Na).

實施例15

N-[(2-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環己烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Fluoro-2-(trifluoromethyl)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-氟-2-(三氟甲基)苯磺醯氯(60.0mg,0.220mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到白色固體的磺醯胺(0.100g，90%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.04(dd,1H),7.51(dd,1H),7.26-7.14(m,4H),7.02(d,1H),6.07(br t,1H),5.11(t,1H),3.86(dd,1H),3.61-3.51(m,3H),2.70-2.48(m,2H),2.10(tt,1H),2.00-1.78(m,4H),1.73-1.60(m,overlapped with br s at 1.66,1H),1.43(q,2H)1.34-1.18(m,3H)；MS(ESI)m/z 499.2(M+H).

實施例16

N-({2-[(4-氟-2-甲基苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Fluoro-2-methylphenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-氟-2-甲基苯磺醯氯(40.0mg，0.240mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到白色固體的磺醯胺(90.0mg，96%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.97(dd,1H),7.28-7.15(m,overlapped with s at 7.26,3H),7.02(d,1H),6.98-6.89(m,2H),6.15(br t,1H),5.15(dd,1H),3.76-3.63(m,2H),3.50-3.39(m,2H),2.62-2.40(m,2H),2.36(s,3H),2.13(tt,1H),1.98-1.78(m,4H),1.72-1.58(m,overlapped with br s at 1.63,1H),1.46(q,2H),1.38-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 467.1(M+Na).

實施例17

N-({2-[(4-氯苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Chlorophenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-氯苯磺醯氯(60.0mg，0.260mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98.5/1.5)，得到白色固體的磺醯胺(0.110g，100%)。¹H NMR(300NHz,CDCl₃)δ 7.64(d,2H),7.30(d,2H),7.20-7.10(m,3H),6.92(d,1H),6.18(br t,1H),5.05(dd,1H),3.91(dd,1H),3.68(ddd,1H),3.50(ddd,1H),3.39(ddd,1H),2.61-2.50(m,1H),2.43(ddd,1H),2.17(tt,1H),2.04-1.73(m,5H),1.48(q,2H),1.38-1.14(m，3H)；MS(ESI)m/z 469.1(M+Na).

實施例18

N-({2-[(4-甲基苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Methylphenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(40.0mg，0.150mmol)和對-甲苯磺醯氯(30.0mg，0.160mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(40.0mg，69%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.58(d,2H),7.20-7.07(m,5H),6.90(d,1H),6.28(br t,1H),5.04(dd,1H),3.91(ddd,1H),3.69(ddd,1H),3.48(ddd,1H),3.36(ddd,1H),2.58-2.37(m,2H),2.32(s,3H),2.17(tt,1H),2.04-1.75(m,4H), 1.71-1.58(m,overlapped with br s at 1.63,1H),1.48(q,2H),1.37-1.14(m,3H)；MS(ESI)m/z 449.2(M+Na).

實施例19

N-({2-[(4-甲氧基苯基)磺醯基]-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基}甲基)環己烷甲醯胺

N-({2-[(4-Methoxyphenyl)sulfonyl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl}methyl)cyclohexanecarboxamid

按照步驟B，將N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺5(60.0mg，0.220mmol)和4-甲氧基苯磺醯氯(50.0mg，0.220mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到白色固體的磺醯胺(70.0mg，76%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.66-7.61(m,2H),7.25-7.07(m,3H),6.91(d,1H),6.81-6.76(m,2H),6.28(br t,1H),5.03(dd,1H),3.89(ddd,1H),3.78(s,3H),3.70(ddd,1H),3.46(ddd,1H),3.35(ddd,1H),2.57-2.39(m,2H),2.17(tt,2H),2.04-1.91(m,2H),1.86-1.75(m,2H),1.72-1.62(m,overlapped with br s at 1.67,1H),1.48(q,2H),1.38-1.18(m,3H)；MS(ESI)m/z 443.2(M+H).

實施例20

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-4-甲基環己烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-4-methylcyclohexanecarboxamide

取4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺39(50.0mg，0.170mmol)和N,N-二異丙基乙基胺(30.0μL，0.170mmol)於二氯甲烷(0.5mL)的溶液，加入4-溴-2-(三氟甲氧基)苯-1-磺醯氯(40.0μL，0.190mmol)，溶液在室溫下攪拌2小時後，加入水(5mL)並以二氯甲烷萃取(2×10mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到白色固體的磺醯胺(90.0mg，88%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91(dd,1H),7.48(d,1H),7.34(s,1H),7.23-7.11(m,3H),6.99(d,1H),6.25-6.03(m,1H),5.16(dd,1H),3.83(dd,1H),3.68-3.47(m,3H),2.66-2.54(m,1H),2.43(ddd,1H),2.30(tt,1H),2.13-1.18(m,overlapped with br s at 1.61,9H),0.96(d,2H),0.89(d,1H)；MS(ESI)m/z 611.1(M+Na).

實施例21

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環戊烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclopentanecarboxamide

取N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環戊烷甲醯胺43(50.0mg，0.190mmol)和N,N-二異丙基乙基胺(30.0μL，0.190mmol)於二氯甲烷(0.5mL)的溶液，加入4-溴-2-(三氟甲氧基)苯-1-磺醯氯(40.0μL，0.200mmol)，溶液在室溫下攪拌2小時後，加入水(5mL)並以二氯甲烷萃取(2×10mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98.5/1.5)，得到白色固體的磺醯胺(80.0mg，75%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91(d,1H),7.48(d,1H),7.34(s,1H),7.22-7.13(m,3H),6.99(d,1H),6.10(br t,1H),5.15(dd,1H),3.83(dd,1H),3.67-3.50(m,3H),2.65-2.51(m,2H),2.50-2.36(m,1H),2.01-1.68(m,6H),1.68-1.47(m,overlapped with br s at 1.64,2H)；MS(ESI)m/z 561.0(M+H).

實施例22

2-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮

2-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-1H-isoindole-1,3(2H)-dione

按照步驟B，將2-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮3(40.0mg，0.150mmol)和4-溴-2-(三氟甲氧基)苯-1-磺醯氯(30.0μL，0.160mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，乙酸乙酯/己烷=1/3)，得到白色固體的磺醯胺(60.0mg，63%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.82-7.72(m, 5H),7.3227.27(m,2H),7.26-7.20(m,2H),7.18-7.10(m,1H),6.97(s,1H),5.37(dd,1H),4.14-4.01(m,2H),3.86-3.73(m,2H),2.81-2.76(m,2H)；MS(ESI)m/z 595.0(M+H).

實施例23

1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺

1-(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methanamine

取2-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮22(2.35g，3.95mmol)於乙醇/氯仿(10.2/24.1mL)的溶液，加入聯胺，將溶液回流72小時後，冷卻至室溫並減壓濃縮，殘餘物以二氯甲烷(100mL)溶解並過濾，於濾液中加入水(50mL)並以二氯甲烷萃取(2×100mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑，得到棕色固體的胺(1.89g，100%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.95(d,1H),7.49(d,1H),7.35(s,1H),7.20-7.07(m,3H),6.99(d,1H),4.96(dd,1H),3.86(ddd,1H),3.51(ddd,1H),3.04-2.90(m,2H),2.63-2.49(m,2H)；MS(ESI)m/z 465.0(M+H).

按照以下製備化合物24的步驟(步驟C)合成化合物25-29。

實施例24

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]苯甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]benzamide

取1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(0.100g，0.210mmol)和N,N-二異丙基乙基胺(70.0μL，0.410mmol)於二氯甲烷(2.15mL)的溶液，加入苯甲醯氯(30.0μL，0.250mmol)，溶液在室溫下攪拌1.5小時後，加入水(5mL)並以二氯甲烷萃取(2×10mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷)，得到粉末狀的醯胺(0.120g，98%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.90(d,1H),7.85(d,2H),7.54-7.43(m,4H),7.30(s,1H),7.23-7.17(m,3H),7.05(d,1H),6.85(br t,1H),5.34-5.24(m,1H),3.92(dd,1H),3.80-3.77(m,2H),3.61(ddd,1H),2.67(ddd,1H),2.55(ddd,1H)；MS(ESI)m/z 569.0(M+H).

實施例25

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-1-哌啶甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-1-piperidinecarboxamide

按照步驟C，將1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(70.0mg，0.150mmol)與1-哌啶羰醯氯(20.0μL，0.180mmol)和三乙胺(40.0μL，0.300mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=97/3)，得到黃色固體的醯胺(80.0mg，89%)。¹H NMR(300MHz,(CD₃)₂CO)δ 7.96(d,1H),7.73(d,1H),7.57(s,1H),7.23-7.13(m,3H),7.05(d,1H),5.95(br t,1H),5.20(t,1H),3.99(dd,1H),3.66(ddd,1H),3.44(t,2H),3.34-3.20(m,4H),2.75-2.54(m,2H),1.62-1.42(m,6H)；MS(ESI)m/z 576.0(M+H).

實施例26

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-1-吡咯啶甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-1-pyrrolidinecarboxamide

按照步驟C，將1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(70.0mg，0.150mmol)與1-吡咯啶羰醯氯(20.0μL，0.180mmol)和三乙胺(40.0μL，0.300mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的醯胺(70.0mg，85%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.90(d,1H),7.48(d,1H),7.35(s,1H),7.22-7.12(m,3H),7.00(d,1H),5.15(t,1H),4.87(br t,1H),3.84(dd,1H),3.62-3.54(m,3H),3.45-3.24(m,4H),2.66-2.55(m,1H),2.46(ddd,1H),2.00-1.79(m,4H)；MS(ESI)m/z 562.0(M+H).

實施例27

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環丁烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclobutanecarboxamide

按照步驟C，將1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(70.0mg，0.150mmol)和環丁烷羰醯氯(20.0μL，0.170mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色液體的醯胺(50.0mg，61%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91(d,1H),7.48(d,1H),7.34(s,1H),7.22-7.13(m,3H),7.00(d,1H),6.00(br t,1H),5.14(dd,1H),3.81(dd,1H),3.68-3.48(m,3H),3.07(quin,1H),2.66-2.55(m,1H),2.49-2.12(m,5H),2.04-1.80(m,2H)；MS(ESI)m/z 547.0(M+H).

實施例28

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯胺}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]環丙烷甲醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]cyclopropanecarboxamide

按照步驟C，將1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(60.0mg，0.130mmol)和環丙烷羰醯氯(10.0μL，0.150mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=97/3)，得到黃色固體的醯胺(60.0mg，93%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.92(d,1H),7.50(d,1H),7.37(s,1H),7.25-7.13(m,3H),7.01(d,1H),6.16(br t,1H),5.14(t,1H),3.89(dd,1H),3.60-3.49(m,3H),2.63(ddd,1H),2.51(ddd,1H),1.37(tt,1H),1.05-0.93(m,2H),0.84-0.71(m,2H)；MS(ESI)m/z 533.0(M+H).

實施例29

N-[(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-2,2-二甲基丙醯胺

N-[(2-{[4-Bromo-2-(trifluoromethoxy)phenyl]sulfonyl}-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-2,2-dimethylpropanamide

按照步驟C，將1-(2-{[4-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]磺醯基}-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺23(60.0mg，0.130mmol)和三甲基乙醯氯(20.0μL，0.150mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色固體的醯胺(60.0mg，88%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91(d,1H),7.48(d,1H),7.33(s,1H),7.22-7.13(m,3H),6.99,(d,1H),6.40(br t,1H),5.18(dd,1H),3.81(dd,1H),3.67-3.50(m,3H),2.59(ddd,1H),2.39(ddd,1H),1.26(s,9H)；MS(ESI)m/z 549.0(M+H).

實施例30

2-甲基-2-丙基1-[(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)甲基]-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯

2-Methyl-2-propanyl 1-[(1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)methyl]-3,4-dihydro-2(1H)-isoquinolinecarboxylate

取2-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮3(0.100g，0.340mmol)於二氯甲烷(2.08mL)的溶液，加入二叔丁基二羧酸酯(0.330mL，14.5mmol)和碳酸氫鈉(0.130g，1.59mL)，溶液在室溫下攪拌1小時後，以二氯甲烷(25mL)稀釋並以水洗(2×25mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的胺基甲酸酯(0.140g，100%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.91-7.82(m,2H),7.78-7.65(m,2H),7.40-7,33(m,1H),7.29-7.16(m,3H),5.59(dd,0.4H),5.43(dd,0.6H),4.26(dd,0.6H),4.14-3.94(m,1.4H),3.86(td,1H),3.52-3.34(m,1H),3.01-2.75(m,2H),1.12(s,3.5H),1.03(s,5.5H)；MS(ESI)m/z 415.1(M+Na).

實施例31

2-甲基-2-丙基1-(胺基甲基)-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯

2-Methyl-2-propanyl 1-(aminomethyl)-3,4-dihydro-2(1H)-isoquinolinecarboxylate

取2-甲基-2-丙基1-[(1,3-二側氧基-1,3-二氫-2H-異吲哚-2-基)甲基]-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯30(2.35g，5.99mmol)於乙腈(24mL)的溶液，加入聯胺(1.14mL，35.9mmol)，將溶液回流40小時候減壓濃縮，加入水(25mL)於殘餘物中並以二氯甲烷萃取(2×25mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑，得到黃色液體的一級胺(1.57g，100%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-6.99(m,4H),5.20-4.85(m,1H),4.29-3.67(m,1H),3.45-3.11(m,1H),3.08-2.79(m,3H),2.76(t,0.6H),2.71(t,0.4H),1.48(s,9H)；MS(ESI)m/z 263.1(M+H).

按照以下製備化合物32的步驟(步驟D)合成化合物33-34。

實施例32

2-甲基-2-丙基1-{[(1-哌啶基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯

2-Methyl-2-propanyl 1-{[(1-piperidinylcarbonyl)amino]methyl}-3,4-dihydro-2(1H)-isoquinolinecarboxylate

取2-甲基-2-丙基1-(胺基甲基)-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯31(80.0mg，0.290mmol)於二氯甲烷(0.960mL)的溶液，加入哌啶羰醯氯(piperdinecarbonyl chloride，40.0μL，0.340mmol)和三乙胺(80.0μL，0.570mmol)，溶液在室溫下攪拌8小時後，加入水(10mL)並以二氯甲烷萃取(3×15mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色固體的尿素(0.100g，91%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.08(m,4H),5.76(br t,0.6H),5.30(dd,1H),4.76(br s,0.2H),4.25(br s,0.2H),4.01-3.85(m,0.6H),3.79-3.52(m,1H),3.50-3.03(m,6.4H),3.03-2.56(m,2H),1.66-1.49(m,overlapped with br s at 1.61,6H),1.47(s,9H)；MS(ESI)m/z 374.1(M+H).

實施例33

2-甲基-2-丙基1-{[(1-吡咯啶基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯

2-Methyl-2-propanyl 1-{[(1-pyrrolidinylcarbonyl)amino]methyl}-3,4-dihydro-2(1H)-isoqutinolinecarboxylate

按照步驟D，將2-甲基-2-丙基1-(胺基甲基)-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯31(0.400g，1.52mmol)和吡咯啶羰醯氯(0.200mL，1.83mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的尿(0.520g，95%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.08(m,4H),5.34-5.13(m,1.6H),4.50(br t,0.2H),4.36-3.20(m,0.2H),4.02-3.87(m,0.6H),3.82-3.53(m,1H),3.50-3.06(m,6.4H),3.03-2.64(m,2H),1.99-1.76(m,4H),1.46(s,9H)；MS(ESI)m/z 360.2(M+H).

實施例34

2-甲基-2-丙基1-{[(4-嗎啉基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯

2-Methyl-2-propanyl 1-{[(4-morpholinylcarbonyl)amino]methyl}-3,4-dihydro-2(1H)-isoquinolinecarboxylate

按照步驟D，將2-甲基-2-丙基1-(胺基甲基)-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯31(0.400g，1.52mmol)和4-嗎啉羰醯氯(0.210mL，1.83mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的尿素 (0.540g，95%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.03(m,4H),5.94(br s,1H),5.40-5.20(m,1H),4.03-3.81(m,1H),3.81-3.52(m,5H),3.52-3.01(m,6H),3.01-2.54(m,2H),1.48(s,9H)；MS(ESI)m/z 376.2(M+H).

按照以下製備化合物35的步驟(步驟E)合成化合物36和37。

實施例35

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-1-哌啶甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-1-piperidinecarboxamide

取2-甲基-2-丙基1-{[(1-哌啶基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯32(0.200g，0.530mmol)於二氯甲烷(7.96mL)的溶液，加入三氟醋酸(1.33mL)，溶液在室溫下攪拌3小時後，加入碳酸氫鈉水溶液(50mL)並以二氯甲烷萃取，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑，得到黃色液體的尿素(0.140g，96%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.04(m,4H),5.67(br t,1H),4.29(dd,1H),3.79(ddd,1H),3.39(ddd,1H),3.31(t,4H),3.27-3.05(m,2H),2.93-2.77(m,2H),1.64-1.45(m,6H)；MS(ESI)m/z 274.1(M+H).

實施例36

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-4-嗎啉甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-4-morpholinecarboxamide

按照步驟E，將2-甲基-2-丙基1-{[(4-嗎啉基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯34(0.460g，1.21mmol)和三氟醋酸(3.04mL)進行反應，得到黃色液體的尿素(0.140g，41%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.05(m,4H),5.75(br t,1H),4.20(dd,1H),3.78(ddd,1H),3.64(t,4H),3.40-3.22(m,5H),3.22-3.13(m,1H),3.11-3.03(m,1H),2.80(t,2H)；MS(ESI)m/z 276.1(M+H).

實施例37

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-1-吡咯啶甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-1-pyrrolidinecarboxamide

按照步驟E，將2-甲基-2-丙基1-{[(1-吡咯啶基羰基)胺基]甲基}-3,4-二氫-2(1H)-異喹啉羧酸酯33(0.430g，1.21mmol)和三氟醋酸(3.02mL)進行反應，得到黃色固體的尿素(0.310g，99%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.25-7.09(m,4H),5.97(br t,1H),4.58(d,overlapped with br s at 4.43,1H),3.82-3.73(m,1H),3.54(ddd,1H),3.43-3.15(m,6H),2.96(t,2H),1.92-1.75(m,4H)；MS(ESI)m/z 260.1(M+H).

實施例38

4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

4-Methyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.300g，1.85mmol)和對-甲苯甲醯氯(p-toluoyl chloride，0.260mL，1.94mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色液體的醯胺(0.280g，53%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.70(d,1H),7.28-7.07(m,overlapped with s at 7.26,7H),4.25(dd,1H),4.03(ddd,1H),3.51(ddd,1H),3.24-3.04(m,2H),2.90-2.72(m,2H),2.38(s,3H)；MS(ESI)m/z 281.1(M+H).

實施例39

4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺

4-Methyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.300g，1.85mmol)和4-甲基環己烷羰醯氯(0.300mL，1.94mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色液體的醯胺(0.320g，61%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.24-7.03(m,4H),6.42(br t,0.6H),6.39(br t,0.4H),4.16(td,1H),3.83-3.70(m,1H),3.48(ddd,0.7H),3.38(ddd,0.3H),3.25-3.00(m,2H),2.92-2.71(m,2H),2.24(tt,0.7H),2.01(tt,0.3H),1.89-1.15(m,9H),0.91-0.89(m,3H)；MS(ESI)m/z 287.2(M+H).

實施例40

4-乙基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺

4-Ethyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-乙基環己烷羰醯氯(0.110mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色液體的醯胺(60.0mg，30%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.22-7.03(m,4H),6.28(br s,0.5H,6.22(br s,0.5H),4.11(td,1H),3.83-3.70(m,1H),3.44(ddd,0.5H),3.34(ddd,0.5H),3.22-3.00(m,2H),2.88-2.69(m,2H),2.25(tt,0.5H),2.02(tt,0.5H),1.91-1.61(m,overlapped with br s at 1.72,2H),1.58-1.04(m,9H),0.96-0.78(m,3H)；MS(ESI)m/z 301.2(M+H).

實施例41

2-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺

2-Methyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和2-甲基環己烷羰醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的醯胺(90.0mg，50%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.23-7.05(m,4H),6.22(br s,1H),4.15(d,1H),3.85-3.70(m,1H),3.52-3.34(m,1H),3.24-2.98(m,2H),2.90-2.69(m,2H),2.34-1.99(m,1H),1.93-1.11(m,overlapped with br s at 1.63,8H),1.02-0.68(m,4H)；MS(ESI)m/z 287.2(M+H).

實施例42

4-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環己烷甲醯胺

4-Methoxy-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclohexanecarboxamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-甲氧基環己烷羰醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=92/8)，得到黃色液體的醯胺(40.0mg，19%)。 ¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.21-7.06(m,4H),6.39(br s,1H),4.15(dd,1H),3.79(ddd,1H),3.40(ddd,1H),3.34(s,3H),3.23-3.02(m,3H),2.91-2.72(m,2H),2.15-1.66(m,overlapped with br s at 1.86,5H),1.57-1.37(m,2H),1.30-1.09(m,2H)；MS(ESI)m/z 303.1(M+H).

實施例43

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環戊烷甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclopentanecarboxamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.580g，3.59mmol)和環戊烷羰醯氯(0.460mL，3.76mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色液體的醯胺(0.400g，43%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.23-7.05(m,4H),6.29(br s,1H),4.12(dd,1H),3.79(ddd,1H),3.37(ddd,1H),3.22-3.11(m,1H),3.09-2.99(m,1H),2.87-2.70(m,2H),2.52(quin,1H),2.27-1.44(m,overlapped with br s at 1.97,8H)；MS(ESI)m/z 259.1(M+H).

實施例44

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)環丁烷甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)cyclobutanecarboxamide

化合物44

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.640mmol)和環丁烷羰醯氯(80.0μL，0.670mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色液體的醯胺(80.0mg，53%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.23-7.04(m,4H),6.27(br s,1H),4.09(d,1H),3.84-3.72(m,1H),3.40-3.27(m,1H),3.20-2.92(m,3H),2.85-2.68(m,2H),2.33-1.74(m,6H)；MS(ESI)m/z 245.1(M+H).

實施例45

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的醯胺(70.0mg，40%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.80-7.77(m,2H),7.52-7.38(m,3H),7.26-7.24(m,overlapped with s at 7.26,1H),7.22-7.13(m,2H),7.13-7.02(m,overlapped with br s at 7.07,2H),4.20(dd,1H),4.02(ddd,1H),3.49(ddd,1H),3.21-3.13(m,1H),3.11-3.04(m,1H),2.86-2.72(m,2H)；MS(ESI)m/z 267.1(M+H).

實施例46

4-甲氧基N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

4-Methoxy-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-甲氧基苯甲醯氯(90.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=92/8)，得到黃色液體的醯胺(90.0mg，48%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.78(d,2H),7.28-7.23(m,overlapped with s at 7.26,1H),7.22-7.08(m,4H),6.92-6.90(d,2H),4.26(dd,1H),4.03(ddd,1H),3.84(s,3H),3.51(ddd,1H),3.25-3.16(m,1H),3.13-3.05(m,1H),2.89-2..76(m,2H)；MS(ESI)m/z 297.1(M+H).

實施例47

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-4-(三氟甲氧基)苯甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-4-(trifluoromethoxy)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-三氟甲氧基苯甲醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的醯胺(60.0mg，28%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.82(d,2H),7.32-7.09(m,overlapped with s at 7.26,6H),7.00(br s,1H),4.17(dd,1H),4.00(ddd,1H),3.48(ddd.1H),3.20-3.04(m,2H),2.87-2.73(m,2H)；MS(ESI)m/z 351.1(M+H).

實施例48

4-氟-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

4-Fluoro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-氟苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=93/7)，得到黃色固體的醯胺(80.0mg，47%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.79(dd,2H),7.24-7.07(m,6H),6.99(br s,1H),4.19(dd,1H),4.01(ddd,1H),3.48(ddd,1H),3.22-3.04(m,2H),2.82-2.78(m,2H)；MS(ESI)m/z 285.1(M+H).

實施例49

4-氯-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

4-Chloro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和4-氯苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=93/7)，得到黃色液體的醯胺(30.0mg，16%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.75(d,2H),7.38(d,2H),7.29-7.07(m,overlapped with s at 7.26,5H),4.25(dd,1H),4.02(ddd,1H),3.52(ddd,1H),3.25-3.05(m,2H),2.89-2.74(m,2H)；MS(ESI)m/z 301.1(M+H).

實施例50

4-乙基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

4-Ethyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.200g，1.23mmol)和4-乙基苯甲醯氯(0.220mL，1.48mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的醯胺(0.170g，48%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.71(d,2H),7.31-7.08(m,overlapped with s at 7.26,6H),6.98 (br s,1H),4.19(dd,1H),4.03(ddd,1H),3.48(ddd,1H),3.23-3.02(m,2H),2.87-2.75(m,2H),2.69(q,2H),1.24(t,3H)；MS(ESI)m/z 295.1(M+H).

實施例51

3-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3-Methoxy-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和3-甲氧基苯甲醯氯(90.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色液體的醯胺(60.0mg，32%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.37(d,1H),7.35-6.99(m,overlapped with s at 7.26,8H),4.21(dd,1H),4.02(ddd,1H),3.84(s,3H),3.50(ddd,1H),3.22-3.03(m,2H),2.87-2.74(m,2H)；MS(ESI)m/z 297.1(M+H).

實施例52

3-氟-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3-Fluoro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

化合物52

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和3-氟苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色固體的醯胺(60.0mg，37%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.54-7.48(m,2H),7.43-7.36(m,1H),7.24-7.10(m,5H),7.02(br s,1H),4.18(dd,1H),4.01(ddd,1H),3.48(ddd,1H),3.21-3.04(m,2H),2.82-2.78(m,2H)；MS(ESI)m/z 285.1(M+H).

實施例53

3-氯-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3-Chloro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和3-氯苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色固體的醯胺(60.0mg，31%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.80(t,1H),7.67(dt,1H),7.45(dt,1H),7.35(t,1H),7.29-7.08(m,overlapped with s at 7.26,5H),4.25(dd,1H),4.03(ddd,1H),3.52(ddd,1H),3.25-3.06(m,2H),2.90-2.74(m,2H)；MS(ESI)m/z 301.1(M+H).

實施例54

3-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3-Methyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和鄰-甲苯甲醯氯(90.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色液體的醯胺(70.0mg，40%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.62(s,1H),7.57(t,1H),7.33-7.04(m,overlapped with s at 7.26,7H),4.23(dd,1H),4.03(ddd,1H),3.50(ddd,1H),3.25-3.02(m,2H),2.90-2.73(m,2H),2.34(s,3H)；MS(ESI)m/z 281.1(M+H).

實施例55

2-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

2-Methoxy-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和2-甲氧基苯甲醯氯(90.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=94/6)，得到黃色液體的醯胺(90.0mg，50%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.31(br s,1H),8.17(dd,1H),7.42(td,1H),7.30-7.26(m,1H),7.24-7.09(m,3H),7.05(t,1H),6.92(d,1H),4.33(dd,1H),4.07(ddd,1H),3.83(s,3H),3.63(ddd,1H),3.32-3.22(m,1H),3.12-3.01(m,1H),2.93-2.73(m,2H)；MS(ESI)m/z 297.1(M+H).

實施例56

N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)-2-(三氟甲氧基)苯甲醯胺

N-(1,2,3,4-Tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)-2-(trifluoromethoxy)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和2-三氟甲氧基苯甲醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的醯胺(80.0mg，37%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.96(dd,1H),7.48(td,1H),7.42-7.31(m,2H),7.31-7.07(m,5H),4.17(dd,1H),4.05(ddd,1H),3.50(ddd,1H),3.25-3.02(m,2H),2.85-2.71(m,2H)；MS(ESI)m/z 351.1(M+H).

實施例57

2-氟-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

2-Fluoro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和2-氟苯甲醯氯(80.0μL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色固體的醯胺(70.0mg，41%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.07(td,1H),7.48-7.42(m,2H),7.26-7.07(m,overlapped with s at 7.26,6H),4.23(dd,1H),4.04(ddd,1H),3.56(ddd,1H),3.20(ddd,1H),3.07(dt,1H),2.87-2.74(m,2H)；MS(ESI)m/z 285.1(M+H).

實施例58

3,4-二甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3,4-Dimethyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和3,4-二甲基苯甲醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色固體的醯胺(0.100g，56%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.59(s,1H),7.51(d,1H),7.29-7.06(m,overlapped with s at 7.26,6H),4.23(dd,1H),4.01(ddd,1H),3.49(ddd,1H),3.25-3.02(m,2H),2.89-2.74(m,2H),2.28(s,6H)；MS(ESI)m/z 295.1(M+H).

實施例59

3,4-二氯-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

3,4-Dichloro-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(1.90g，6.16mmol)和3,4-二氯苯甲醯氯(1.55g，7.40mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=96/4)，得到黃色固體的醯胺(1.01g，49%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.89(d,1H),7.61(dd,1H),7.48(d,1H),7.25-7.08(m,5H),4.19(dd,1H),3.99(ddd,1H),3.47(ddd,1H),3.22-3.03(m,2H),2.87-2.75(m,2H)；MS(ESI)m/z 335.0(M+H).

實施例60

2,4-二甲基-.N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺

2,4-Dimethyl-N-(1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinylmethyl)benzamide

化合物60

按照步驟A，將1-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲胺4(0.100g，0.620mmol)和2,4-二甲基苯甲醯氯(0.100mL，0.650mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=95/5)，得到黃色固體的醯胺(80.0mg，46%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.31-7.07(m,overlapped with s at 7.26,5H),7.03-6.93(m,2H),6.65(br t,1H),4.25(dd,1H),3.91(ddd,1H),3.64(ddd,1H),3.23-3.10(m,1H),3.08-2.95(m,1H),2.89-2.69(m,2H),2.33(s,3H),2.30(s,3H)；MS(ESI)m/z 295.1(M+H).

按照以下製備化合物61的步驟(步驟F)合成化合物62-67。

實施例61

4-甲基-N-[(2-甲基-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]苯甲醯胺

4-Methyl-N-[(2-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]benzamide

取4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺38(0.100g，0.360mmol)於乙腈(5.1mL)的溶液，加入甲醛(90.0μL，1.25mmol)和NaBH(OAc)₃(0.300g，1.43mmol)。溶液在室溫下攪拌7小時後，於減壓下濃縮，殘餘物以二氯甲烷(30mL)溶解，並以碳酸氫鈉水溶液洗(2×10mL)，有機層以硫酸鎂乾燥並減壓蒸發溶劑。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=97/3)，得到黃色液體的三級胺(90.0mg，85%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.61(dd,2H),7.25-7.08(m,6H),6.91(br s,1H),3.91(ddd,1H),3.71(dd,1H),3.62(ddd,1H),3.21- 3.11(m,1H),2.95-2.85(m,1H),2.81-2.72(m,2H),2.53(s,3H),2.37(s,3H)；MS(ESI)m/z 295.1(M+H).

實施例62

N-[(2-丁基-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]-4-甲基苯甲醯胺

N-[(2-Butyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]-4-methylbenzamide

按照步驟F，將4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺38(0.100g，0.360mmol)和丁醛(0.110mL，1.25mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色固體的三級胺(80.0mg，66%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.68(d,2H),7.25-6.98(m,7H),3.98(ddd,1H),3.81(dd,1H),3.32(ddd,1H),3.22(ddd,1H),3.02-2.86(m,2H),2.72-2.50(m,3H),2.40(s,3H),1.61-1.44(m,2H),1.37(sextet,2H),0.90(t,3H)；MS(ESI)m/z 337.2(M+H).

實施例63

4-甲基-N-{[2-(2-甲基丙基)-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基]甲基}苯甲醯胺

4-Methyl-N-{[2-(2-methylpropyl)-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl]methyl}benzamide

化合物63

按照步驟F，將4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺38(0.100g，0.360mmol)和異丁醛(0.110mL，1.25mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=99/1)，得到黃色液體的三級胺(80.0mg，69%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.67(d,2H),7.25-7.00(m,7H),4.01-3.92(m,1H),3.75(dd,1H),3.39-3.16(m,2H),3.04-2.80(m,2H),2.61-2.30(m,overlapped with s at 2.41,6H),1.83(heptet,1H),0.96(d,3H),0.92(d,3H)；MS(ESI)m/z 337.2(M+H).

實施例64

N-{[2-(2-氯乙基)-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基]甲基}-4-甲基苯甲醯胺

N-{[2-(2-Chloroethyl)-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl]methyl}-4-methylbenzamide

按照步驟F，將4-甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺38(0.100g，0.360mmol)和氯乙醛(0.160mL，1.25mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=98/2)，得到黃色固體的三級胺(50.0mg，37%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.68(d,2H),7.33-7.09(m,overlapped with s at 7.26,6H),6.79(br s,1H),4.08-3.96(m,1H),3.94-3.85(m,1H),3.70(t,2H),3.48-3.25(m,2H),3.01-2.78(m,4H),2.68-2.54(m,1H),2.38(s,3H).

實施例65

4-乙基-N-[(2-甲基-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]苯甲醯胺

4-Ethyl-N-[(2-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]benzamide

按照步驟F，將4-乙基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺50(0.170g，0.590mmol)和甲醛(0.150mL，2.05mmol)進行反應。粗產物藉由快速管柱層析法純化(二氧化矽，二氯甲烷/甲醇=97/3)，得到黃色液體的三級胺(0.170g，96%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.62(d,2H),7.32-7.07(m,overlapped with s at 7.26,6H),6.86(br s,1H),3.91(dt,1H),3.73-3.55(m,2H),3.22-3.08(m,1H),2.97-2.83(m,1H),2.82-2.73(m,2H),2.67(q,2H),2.52(s,3H),1.23(t,3H)；MS(ESI)m/z 309.1(M+H).

實施例66

3,4-二甲基-N-[(2-甲基-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]苯甲醯胺

3,4-Dimethyl-N-[(2-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]benzamide

按照步驟F，將3,4-二甲基-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺58(0.100g，0.340mmol)和甲醛(90.0μL，1.19mmol)進行反應，得到黃色固體的三級胺(0.100g，91%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.50(s,1H),7.40(dd,1H),7.29-7.05(m,overlapped with s at 7.26,5H),6.84(br s,1H),3.91(ddd,1H),3.74-3.67(m,1H),3.65-3.55(m,1H),3.22-3.10(m,1H),2.97-2.83(m,1H),2.83-2.69(m,2H),2.53(s,3H),2.28(s,6H)；MS(ESI)m/z 309.1(M+H).

實施例67

3,4-二氯-N-[(2-甲基-1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基)甲基]苯甲醯胺

3,4-Dichloro-N-[(2-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-1-isoquinolinyl)methyl]benzamide

實施例67

按照步驟F，將3,4-二氯-N-(1,2,3,4-四氫-1-異喹啉基甲基)苯甲醯胺59(0.100g，0.300mmol)和甲醛(80.0μL，1.04mmol)進行反應，得到黃色固體的三級胺(90.0mg，90%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.78(d,1H),7.55-7.42(m,2H),7.24-7.09(m,4H),6.89(br t,1H),3.89(ddd,1H),3.73-3.56(m,2H),3.22-3.08(m,1H),2.97-2.84(m,1H),2.83-2.70(m,2H),2.53(s,3H)；MS(ESI)m/z 349.0(M+H).

實施例68

動物

將雄性野生型(wild-type)C57BL/6小鼠(25-30g)和μ-鴉片受體剔除之小鼠(由台灣國家衛生研究院提供(National Health Research Institutes))隨機分配到研究組。動物試驗經由台灣國家衛生研究院的實驗動物照護及委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)批准。所有動物實驗按照神經科學研究之動物使用政策(Policies on the Use of Animals in Neuroscience Research)和國際疼痛研究會(International Association for the Study of Pain)之有意識動物疼痛實驗之探討道德規範來進行。將動物放置在溫度控制的動物房中，實施12：12小時光/暗循環。

藥物

嗎啡鹽酸鹽由台灣台北市衛生福利部食品藥物管理署(Food and Drug Administration,Ministry of Health and Welfare,Taipei,Taiwan)取得。[³H]二丙諾啡([³H]diprenorphine)和[³H]致痛素([³H]nociceptin)由PerkinElmer Inc.,Boston,MA,USA取得。[Met5]腦啡肽([Met5]enkephalin，Met-5)和奧沙利鉑(oxaliplatin)由Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO,USA取得。孤蛋白(orphanin)FQ和西普地米(cyprodime)由Tocris Biosciences,Bristol,UK取得。BANORL24由Abcam；Cambridge,MA,USA取得。

FLIPR®鈣離子測定法

在測定前一天，將0.1mg/mL聚-L-離胺酸(Poly-L-Lysine)溶液塗覆在CORNING®黑色具有透明平底的96-孔測定盤中，將CHO-K1/MOR/Gα15細胞懸浮在F12培養基中，並以約8×10⁴個細胞/孔(200μL培養基)的密度種植細胞，將細胞在37℃下且於10%CO₂的潮濕氣氛中培養至隔夜，使其在測定前達到80-90%均分佈單層細胞(confluent cell monolayer)。在測定當天，從盤中移除150μL培養基/孔，並於每孔中加入50μL的溶解於1x的測定緩衝液(Hank’s緩衝鹽溶液或HBSS： KCl 5mM、KH₂PO₄ 0.3mM、NaCl 138mM、NaHCO₃ 4mM、Na₂HPO₄ 0.3mM、d-葡萄糖5.6mM，並額外添加20mM的HEPES和13mM的CaCl₂，pH=7.4)之FLIPR®鈣離子測定試劑及2.5mM的丙磺舒(probenecid)。將測定盤在37℃下培養1小時。將化合物和其他試劑溶解於測定緩衝液中。使用FlexStationIII(Molecular Devices Corp.)，在化合物或其他試劑機器注入後，以激發波長485nm和放射波長525nm每隔1.52秒監測[Ca²⁺]_i螢光增加量。在促效劑注入後，測量[Ca²⁺]_i螢光達90秒。將6-12孔的細胞螢光強度進行平均，並將[Ca²⁺]_i螢光平均值的AUC進行積分，求出[Ca²⁺]_i釋放的相對量。

在測試化合物中，化合物5-13、8、15、17-21、24-29、35-40、和42-67各自EC₅₀值小於10μM；以及化合物5-7、9-13、15-18、20、21、24-29、35、36、38-43、45-54和56-67各自AUC值大於5000。

cAMP測定法(Cyclic adenosine monophosphate(cAMP)assay)

將表達人類μ-鴉片受體的人類胚胎腎臟上皮細胞293(Human Embryonic Kidney 293)，以添加有10%胎牛血清(fetal bovine serum)、100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素、400μg/mL G418和2mM L-麩醯胺酸(L-glutamine)的高葡萄糖Dulbecco's改良的Eagle培養基(DMEM,GIBCO)在T-175組織培養瓶中培養，並用胰蛋白酶/伸乙二胺四乙酸(EDTA)(trypsin/ethylenediaminetetraacetic acid)溶液(GIBCO)收穫。將表達人類NOP受體的中國倉鼠卵巢細胞，以包含10%胎牛血清、100單位/mL青黴素、100g/mL鏈黴素、200g/mL G418和20g/mL潮黴素B(Hygromycin B)的F12培養基(GIBCO)在T-175組織培養瓶中培養，並以細胞脫離劑(Cell Detachment Reagent(DiscoveRx))收穫。將細胞(每孔72,000個)接種在含有DMEM(100μL/孔)和藥物(溶於HBSS，50μL/孔)、毛喉素(forskolin、最後濃度 1μM)和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine，最後濃度500μM)的96-孔固體底部白色盤中，在室溫下培養30分鐘後，使用LANCE超級cAMP測試套組(PerkinElmer)測定環單磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate)的濃度。兩小時過後，使用Victor 2讀盤器以激發330nm以及放射615nm和665nm測量測試盤的螢光。

內化作用測定法(Internalization assay)

在表達人類MOR的骨肉瘤U2OS細胞(U2OS-MOR)中，透過酵素互補測試測量MOR內化作用。須注意的是，U2OS細胞表達人類MOR，伴隨有β-半乳糖苷酶的互補片段，其與受體和胞吞囊泡(endocytic vesicle)的成分基因融合。當活化時，MOR接著與本研究中的胞內體(endosome)作用，2個融合的蛋白形成一個完整的酵素，可透過化學發光(chemiluminescence)測定其活性。

根據製造商的步驟執行PathHunter G蛋白-偶合受體內化作用(DiscoveRx,Fremont,CA,USA)。細胞以含有10%胎牛血清(fetal bovine serum)、100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素、20μg/mL G418(Sigma)、5μg/mL潮黴素B(Hygromycin B)(InvivoGen,San Diego,CA,USA)、和25mM HEPES的McCoy’s 5A培養基(GIBCO,Waltham,MA,USA)在T-175組織培養瓶(Corning,Corning,NY,USA)中成長至飽和(confluence)，並以細胞脫離劑(Cell Detachment Reagent(DiscoveRx))收取。將細胞(每孔5,d000個)以CP5試劑(DiscoveRx)接種至黑色384-孔盤(Corning)中，並在測試前培養24小時。每次處理後，細胞在室溫下培養1.5小時，接著加入8μL的PathHunter Detection套組(DiscoveRx)培養1小時，並以Victor 2讀盤器(PerkinElmer,Waltham,MA,USA)分析化學發光。在同一天進行實驗，使用同代細胞來確保數據的準確比較。

β-抑制蛋白-2募集測定法(β-arrestin-2 recruitment(β-arrestin)assay)

根據製造商的步驟執行PathHunter G蛋白-偶合受體β-抑制蛋白-2測定(DiscoveRx)。簡要地說明，當β-抑制蛋白-2轉位(translocate)到活化受體時，與受體融合的互補的β-半乳糖苷酶片段和β-抑制蛋白-2作用形成功能酵素，其可藉由化學發光測定。

將表達人類MOR或人類NOP受體的中國倉鼠卵巢細胞，以包含10%胎牛血清(fetal bovine serum)、100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素、200μg/mL G418、和20μg/mL潮黴素B(Hygromycin B)的F12培養基(GIBCO)在T-175組織培養瓶中成長至飽和，並以細胞脫離劑(DiscoveRx)收穫。將細胞(每孔5,000個)以CP2試劑(DiscoveRx)接種至黑色384-孔盤(Corning)中，並在測試前培養24小時。每次處理後，細胞在室溫下培養1.5小時，接著加入8μL的PathHunter Detection試劑(DiscoveRx)培養1小時，以Victor 2讀盤器分析化學發光。在同一天進行實驗，使用同代細胞來確保數據的準確比較。

膜電位測定法(Membrane potential assay)

在膜電位測定中，在myc-MOR表達小鼠垂體AtT-20細胞中測定G-蛋白-偶合內向性整流型鉀離子(GIRK)通道的活化。將AtT-20細胞，以包含10%胎牛血清、100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素的DEME在T-175組織培養瓶中培養，並以胰蛋白酶/EDTA溶液收穫。使用NEPA21電穿孔儀基因轉染系統(Nepa Gene,Ichikawa-City,Japan)以myc-標記的人類MOR質體(plasmid)(由Dr.Ping-Yee Law,University of Minnesota,USA提供)短暫轉染(trarisiently transfect)細胞(每孔25,000個)，接著接種至黑色96-孔透明平底盤(Corning)中。電穿孔儀的穿孔脈衝條件如下：110V，脈衝長度7.5ms，脈衝間隔(inter-pulse intervals)50ms，以及具有10% 正極性的衰減速率。轉移脈衝條件如下：20V，脈衝長度50-ms，脈衝間隔50-ms，以及具有40%正和負極性的衰減速率。24小時後，根據製造商說明書(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)使用螢光成像讀盤器(Fluorometric Imaging Plate Reader，FLIPR)膜電位測定法，將細胞在血清飢餓(serum-starved)下培養3小時以測定鉀離子導電變化。簡單地說，在25℃下將細胞以藍色膜電位染料處理0.5小時，在FlexStation 3桌上型多模式微量讀盤器(bench-top multi-mode microplate reader(Molecular Devices))處理後，以1.52秒的間隔，最多150秒，偵測螢光信號(激發：485nm，放射：525nm)。

閃尾測試(tail-flick test)

使用閃尾計數器(Tail-Flick Analgesia Meter)(Columbia Instruments,Columbus,OH,USA)評估藥物誘導的鎮痛反應對急性熱痛敏感反應。在治療前紀錄基礎延遲時間(basal latency)，收集2.5-3.5s基礎延遲時間的小鼠，並隨機分至各組。在靜脈注射、腹膜內，皮下或口服藥物後的不同時間點記錄閃尾延遲時間。嗎啡和納洛酮(naloxone)溶於鹽水中。化合物67的皮下和口服給藥溶液以5% DMA、5%Solutol、4.5%Captisol(磺丁醚-β-環糊精)和85.5%鹽水製備。西普地米(cyprodime)和納洛酮(naloxone)鹽酸鹽以5% DMSO和95%鹽水製備。BANORL24的溶液以鹽水製備。為了避免組織損傷，實驗截止時間為10秒，鎮痛效果(antinociceptive effect)被定義為在每個時間點閃尾延遲時間和基礎延遲時間之間的差異。藉由計算藥物治療後的鎮痛效果的時間-反應曲線下的面積，以獲得曲線下面積(AUC)。根據以下等式計算最大可能效果的百分比(MPE的%)：MPE的%=[(閃尾延遲時間-基礎延遲時間)/(截止時間-基礎延遲時間)]×100。參考例如Mathews et al.,the Journal of Neuroscience：the official journal of the Society for Neuroscience,2008,28：12183-12189。

尾夾測試(Tail-clip test)

將每隻B6小鼠放置在壓克力盒(直徑10cm，高30cm)中，並在測試前適應5分鐘，接著施加夾子至距離尾部1cm處，在施加夾子至尾部的期間測量咬或抓住夾子的延遲時間。參考例如Cao et al.,Nature,1998,392：390-394。設置實驗截止時間為20秒以避免組織損傷。

奧沙利鉑-和癌症-誘發的疼痛和機械性異常疼痛(mechanical allodynia)測試

為了誘導神經性疼痛，動物在習慣測試環境後，於每隻B6小鼠腹膜內注射奧沙利鉑(3.0mg/kg)或載體(生理食鹽水)，並進行疼痛敏感性基準線測量。參考例如Ta et al.,Molecular Pain,2009,5：9-9。對於癌症疼痛模型，將小鼠B16-F1黑色素瘤細胞，以包含10%胎牛血清、100單位/mL青黴素、和100μg/mL鏈黴素的DMEM培養基在T-175組織培養瓶中培養，並以胰蛋白酶/EDTA溶液收穫。為了誘導癌症疼痛，在接種第0天後，在異氟烷麻醉下，於每隻B6小鼠的右後爪的腳墊中注射20μL磷酸鹽緩衝鹽水或細胞(6×10⁵個細胞/20μL磷酸鹽緩衝鹽水)。在接種第19天後(即測試日)，將小鼠放置在具有5×5mm孔的網格板上，蓋上杯子以防止視覺刺激，並允許在測試前適應1小時。將黑色素瘤細胞注射的小鼠靜脈內給予載體、嗎啡、或化合物67，接著使用典型的上下測定法(up-and-down method)與von Frey細絲觸覺測量(von Frey filament)(範圍：0.1-1g；IITC Life Science)評估50%的退縮閥值。參考例如Chaplan et al.,Journal of Neuroscience Methods,1994,53：55-63。以0.5g力開始試驗。簡單來說，每當發生退縮反應時，施加下一個較弱的von Frey力道。另一方面，每當沒有發生退縮反應時，施加下一個較強的von Frey力道。機械性異常疼痛我們定義為引發後爪退縮的壓力的變化量。

胃腸道蠕動功能分析(gastrointestinal transit analysis)

將B6小鼠在實驗前禁食至少16小時，但可自由獲得水分供應。在木炭餐測試(charcoal meal test)中，在施用水性活性碳懸浮液(10%活性碳+5%阿拉伯膠；0.3mL)30分鐘前，向小鼠施用各種劑量的藥物。30分鐘後，小鼠通過腹膜內施用氯胺酮/甲苯噻嗪(ketamine/xylazine)(Sigma)進行安樂死，接著頸椎脫臼，並從小腸的幽門到迴腸連接處測量木炭餐的總遷移長度。測量從幽門到盲腸的腸子長度以及碳行進的距離。根據下式計算所得的蠕動木炭餐相對於小腸總長度行進的距離百分比，為遷移指數。

胃腸輸送%=碳飲食的距離/小腸全長×100%

胃腸推進計算為碳飲食相對於小腸總長度行進的距離的百分比，以控制個體差異。相對於控制組的抑制百分比也計算為：腸胃抑制(GI)%=(對照組-藥物治療組)/控制組×100%

在珠粒排出測試中，如上所述對小鼠進行禁食以進行木炭餐試驗。給予小鼠皮下注射鹽水、嗎啡(7.2mg/kg)、或化合物67(1.8mg/kg)，20分鐘後，用異氟烷麻醉動物(1-2分鐘)，以在距離肛門3cm處將單個2mm玻璃珠插入末端結腸。將小鼠放入單獨的籠中並監測珠子的排出時間。參考例如Ross et al.,the Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,2008,327：561-572。

呼吸功能測試

呼吸抑制是大部分傳統鴉片的主要副作用，例如急性嗎啡治療。呼吸分析的步驟包含，在小鼠以嗎啡或化合物67進行急性或亞慢性(subchronically)治療後，測量呼吸頻率及潮氣容積(tidal volume)。在藥物注射前，先將小鼠置於Buxco腔室內適應15分鐘，同時記錄呼吸活動5分鐘，以作為基準線。這項研究委外(台灣小鼠診所(Taiwan Mouse Clinic))進行。

心肺功能(cardiovascular function)測試

將小鼠於腔室空間內習慣15分鐘後，測定嗎啡和化合物67對心肺功能之影響。使用BP-2000血壓分析系統，藉由尾夾體積描記法(tail cuff plethysmography)在有意識的老鼠身上測量血壓和脈搏率(pulse rate)。速率壓力積(rate-pressure product)計算為心率和收縮壓的乘積。這項研究委外(台灣小鼠診所(Taiwan Mouse Clinic))進行。

丙酮液滴測試(acetone drop test)

在癌症誘導的模型中，藉由使用丙酮測試來評估低溫痛覺敏感測試(cold allodynia test)。將體積為5μL的絕對丙酮(100%)放置於小鼠的腳掌底部，測量在丙酮施用到後腳掌於30秒內立即移開的時間，以評估低溫痛覺敏感測試。參考Kukkar等人，Journal of the Formosan Medical Association,2014,113：921-928。

制約場域偏好反應(conditioned place preference，CPP)

為了檢測化合物67對反轉恢復嗎啡CPP的影響，使用可得的CPP裝置(MED Associates,East Fairfield,VT)。該系統由一個面積18cm X 20cm且具有粗糙地板的白色腔室與一個面積18cm X 20cm且具有光滑地板的黑色腔室所組成。將小鼠注射與嗎啡相當量的鹽水並設為鹽水組(saline-paired side)，每天下午皮下注射10mg/kg嗎啡並設為預分配的嗎啡組(morphine-paired side)，在腔內關閉30分鐘。在制約後(post-conditioning)的一天(表達測試)，小鼠沒有接受藥物或鹽水並放置於側面通道中，且允許自由進入整個箱子15分鐘。至於消減程序(extinction procedure)，是將動物放置於側邊通道中，並給予自由進出箱子30分鐘，消減測試15天後，直到沒有制約的跡象。消減後，將老鼠平均分配成3組，分為低劑量嗎啡(2.5mg/kg)-誘導制約的恢復組、高劑量嗎啡(5mg/kg)-誘導制約的恢復組、或化合物67-誘導制約的恢復組。各個藥物-誘導的恢復組的小鼠在恢復日(21天)接受治療。參考Homji等人，International Journal of Clinical and Experimental Medicine,2012,5：105-123.

統計分析

重複多次體外和體內研究，以確保個別值(individual value)的可靠性。所有研究中使用的樣本尺寸均基於先前經驗。沒有從分析報告中排除樣本、小鼠、或數據點。研究人員對測試條件不知情。在所有研究中，一個人向細胞或動物施用藥物，另一個對藥物施用不知情的人觀察反應並分析數據。數據表示為平均值±標準誤差(SEM)(GraphPad Prism version 5.0,GraphPad Software,San Diego,CA,USA)。對於時間-反應曲線，使用Bonferroni’s事後檢測(post-hoc test)的雙向變異分析(two-way analysis of variance)(ANOVA)。對於時間-反應曲線的定量分析結果，使用Student’s t-檢驗或使用Newman-Keuls事後檢測的單向ANOVA。P<0.05被認為具有統計顯著(statistically significant)。

實施例69

化合物67對鴉片受體信號通道的調控

鴉片受體活化雙向G蛋白耦合受體(GPCR)信號通道：一種是透過第二級訊息因子(messenger)例如cAMP，導致cAMP水平下降；另一種是通過β-抑制蛋白(β-arrestin)導致受體內化的誘導。

研究評估化合物67對MOR-和NOP-驅動的訊號通道的效果。

由於MOR屬於GPCR家族，MOR的活化導致細胞內cAMP水平下降。評估化合物67對細胞內cAMP水平的作用，以研究化合物67是否為MOR的促效劑。藉由組成表達MOR(HEK-MOR)的人類胚胎腎臟293(Human embryonic kidney 293，HEK-293)細胞中cAMP積累的抑制來測量G蛋白耦合。同時以化合物67、Met-5、和嗎啡處理細胞進行比較；且藉由螢光強度追蹤細胞內cAMP的量。化合物67、Met-5、和嗎啡以劑量變化方式顯著抑制在HEK-MOR細胞中cAMP的產生。

觀察到化合物67(EC₅₀=0.63nM)意外地表現出類似於Met-5(EC₅₀=0.38nM)的G蛋白耦合效力，但效果高於嗎啡(EC₅₀=3.7nM)。

過去報導鴉片受體與不依賴G蛋白的(G protein-independent)β-抑制蛋白-2-驅動的(β-arrestin-2-mediated)路徑相耦合。參見Al-Hasani et al,Anesthesiology,2011,115：1363-1381。基於表達人類MOR(CHO-K1-MOR)的中國倉鼠卵巢(CHO)-K1細胞中的酵素互補，進一步檢查上述三種分子在β-抑制蛋白-2聚集分析(recruitment assay)(PathHunter)中的藥效。化合物67、Met-5、和嗎啡均觸發β-抑制蛋白-2聚集反應。化合物67比嗎啡誘導更多β-抑制蛋白聚集，但誘導的β-抑制蛋白聚集比Met-5更少。化合物67、Met-5、和嗎啡對β-抑制蛋白聚集的EC₅₀測定值分別為1.9μM、0.28μM、和1.6μM，且化合物67的Emax比嗎啡高三倍。

也研究化合物67以檢測其對G蛋白耦合的內流性鉀離子(GIRK)通道(inwardly rectifying potassium channel)的影響，因為這是另一種MOR G蛋白依賴性信號通道，有助於鴉片受體驅動的止痛。

腦下垂體細胞(AtT-20 cell line)高度表達內源的(endogenous)GIRK1/GIRK2通道，其以myc-MOR表達質粒轉染以進行鉀通道測定。參見Lee et al.,Nucleic Acids Research,2014,42：13012-13025。觀察到化合物67具有EC₅₀為59.9nM，顯示出高度活化GIRK通道之功效，高於嗎啡所表現的140.6nM。此外，化合物67和嗎啡兩者皆在myc-標記的MOR-表達的AtT-20細胞中造成MOR-依賴性膜電位的過極化(hyperpolarization)，而且化合物67的Emax稍微高於嗎啡。

此外，藉由在表達人類MOR的U2OS細胞(U2OS-MOR)中的高靈敏度酵素互補測定來測量MOR內化。觀察到嗎啡顯示出最小的受體內化反應，且相比之下，化合物67在此次測定中造成MOR的顯著內化，其水平大約是嗎啡最大反應的兩倍。化合物67觸發MOR內化的效價和藥效均高於嗎啡。

上述結果證明化合物67是MOR促效劑。

研究化合物67作為NOP促效劑，以檢查其對NOP-驅動的細胞內cAMP量的影響。使用表達人類NOP的CHO-K1細胞(CHO-K1-NOP)中的PathHunter酵素互補測定法測定。作為孤啡肽FQ(orphanin FQ)，化合物67在CHO-K1-NOP細胞中比嗎啡誘導更多NOP-驅動的cAMP抑制反應，在降低cAMP水平上，化合物67的EC₅₀(2.2nM)低於嗎啡，且化合物67的Emax與孤啡肽FQ相近。

此結果表示化合物67也是NOP的促效劑。

除了cAMP路徑外，進一步進行β-抑制蛋白-2聚集測定以確定化合物67對NOP的功效。在CHO-K1-NOP細胞中，化合物67的EC₅₀低於孤啡肽FQ，且化合物67的劑量-反應曲線與嗎啡相似。

簡言之，化合物67具有與嗎啡相似的G蛋白-耦合和的GIRK通道活化效力，並且在人類MOR表達細胞中比嗎啡誘導更多的MOR內化和β-抑制蛋白聚集反應。此外，化合物67也引起顯著的NOP-驅動的cAMP抑制反應和β-抑制蛋白-2聚集反應。

這些結果顯示，化合物67是MOR和NOP的雙重促效劑(dual agonist)。

化合物67在小鼠中產生的鎮痛作用(antinociception)

為了研究體內急性鴉片藥理，使用閃尾測試的熱刺激和尾夾測試的機械刺激來評估化合物67和嗎啡的鎮痛效果。在皮下注射單次劑量後，於指定時間點(30、60、90、和120分鐘)檢測B6小鼠的熱疼痛行為。在檢測到基礎延遲時間後，給每隻小鼠注射嗎啡或化合物67以檢測後測試延遲時間(post-test latencies)。計算時間-反應曲線並以MPE和AUC的百分比表示。嗎啡在2.4-7.2mg/kg劑量下誘導鎮痛作用(所有P<0.001；雙向ANOVA)。定量結果(AUC)顯示載體控制組和嗎啡處理的小鼠之間的顯著差異(所有P<0.001；單向ANOVA)。化合物67在0.6-1.8mg/kg劑量下產生均等的止痛效果(所有P<0.001；雙向ANOVA)。時間-反應曲線和AUC皆顯示載體控制組和化合物67處理的小鼠之間的顯著差異(所有P<0.001；單向ANOVA)。嗎啡和化合物67兩者的最大鎮痛作用持續到注射後30-60分鐘。

這些結果表明化合物67在小鼠中產生的鎮痛作用。

進一步進行研究以確定化合物67誘導的鎮痛作用是否依賴於MOR活化。將MOR移除小鼠皮下注射載體(vehicle)、7.2mg/kg嗎啡、或等效止痛效果劑量的化合物67。在MOR移除的小鼠模型中，嗎啡(所有P>0.05；雙向ANOVA)或化合物67(所有P>0.05；雙向ANOVA)沒有誘導的鎮痛作用。定量結果(AUC)也顯示載體控制組和嗎啡處理組之間或載體控制組和化合物67處理組之間(P>0.05；單向ANOVA)沒有顯著差異。此外，在尾夾測試中評估嗎啡和化合物67在野生型B6小鼠的機械疼痛的鎮痛作用(P<0.001；單向ANOVA)。出乎意料的是，化合物67對機械刺激顯示出比嗎啡高的止痛效果。

這些結果顯示，化合物67在急性機械疼痛中表現出依賴於MOR活化的止痛效果，且優於嗎啡表現出的效果。

化合物67和嗎啡之間的耐受性和交叉耐受性(cross-tolerance)

進行研究以調查化合物67是否產生止痛的耐受性和化合物67與嗎啡之間是否存在交叉耐受性。

以每天兩次連續治療5天，在等劑量的化合物67和嗎啡30分鐘後進行閃尾測試。時間-反應曲線表明化合物67處理組和嗎啡處理組之間沒有顯著差異(處理；P>0.05，日；P<0.001，相互作用；P>0.05；雙向ANOVA)。

這些結果表明嗎啡和化合物67在亞慢性治療後產生相似的止痛耐受性。

為了研究化合物67和嗎啡之間的交叉耐受性相互作用，在第6天分別用載體、嗎啡、或化合物67再給予這些產生耐受性的小鼠，在用等效止痛劑量(equianalgesic dose)的嗎啡(7.2mg/kg)(P<0.001；Student’s t-檢驗)而不是化合物67治療後，化合物67耐受的小鼠中的止痛作用回復(rescued)。與載體處理相比，以等效止痛劑量的化合物67(1.8mg/kg)再給予嗎啡耐受的小鼠，出乎意料地在止痛效果顯示出顯著的增加(P<0.001；Student’s t-檢驗)，這在用嗎啡處理的小鼠中未觀察到。

與用等效止痛劑量的化合物67再給予嗎啡的耐受小鼠相比，等效止痛劑量的嗎啡之後再給予化合物67的耐受小鼠產生顯著較低的止痛效果(P<0.01；Student’s t-檢驗)。

這些結果表明嗎啡和化合物67之間存在不對稱的交叉耐受性。

化合物67在小鼠中的便秘潛力(Constipating potency)

單次皮下注射嗎啡和化合物67的便秘效果通過在小鼠中木炭餐(charcoal meal)和玻璃珠測試來評估。使用木炭餐測試來研究嗎啡和化合物67的GI抑制潛力。化合物67和嗎啡均表現出GI抑制效價。以嗎啡處理的小鼠具有胃腸道蠕動抑制(gastrointestinal transit inhibition)的ED₅₀，即1.8mg/kg，明顯低於鎮痛作用，即2.4mg/kg。相比之下，以化合物67處理的小鼠具有鎮痛作用的ED₅₀，即0.78mg/kg，明顯低於產生胃腸蠕動抑制的劑量，即1.6mg/kg。化合物67和嗎啡的最大止痛效果在他們各自單獨的高止痛劑量下相似(P>0.05；Student’s t-檢驗)。出乎意料地，在等量止痛劑量下(P<0.05；Student’s t-檢驗)，化合物67的給藥引起的胃腸功能障礙比嗎啡輕微。

此外，使用玻璃珠測試研究嗎啡和化合物67以評估他們對結腸蠕動(colon motility)的影響。與載體組相比，化合物67和嗎啡都增加了玻璃珠排出時間(P<0.001；單向ANOVA)。然而，化合物67組的玻璃珠排出時間明顯短於嗎啡處理組，因此，使用化合物67作為止痛劑產生鎮痛作用，同時產生比嗎啡輕微的便秘反應。

化合物67對呼吸和心血管功能異常的作用

鴉片已被證明可以調節呼吸和心血管功能，參見例如Feng et al.,Current Drug Targets,2012,13：230-246。在B6小鼠中透過以等效止痛劑量的嗎啡或化合物67，以檢測其止痛、呼吸及心血管調節等急性作用。在治療前檢測基準線。將小鼠以嗎啡或化合物67處理，接著經歷10分鐘至60分鐘的紀錄。在急性注射後，嗎啡在20分鐘(單向ANOVA)或化合物在10分鐘(P<0.05；單向ANOVA)產生止痛作用，並持續至60分鐘。

所有用嗎啡或化合物67治療的小鼠在10分鐘後均引起呼吸頻率抑制(P<0.05；單向ANOVA)。值得注意地，嗎啡在10至20分鐘時顯著降低呼吸振幅(respiratory amplitude)(潮氣容積(tidal volume))(P<0.05；單向ANOVA)，但化合物67沒有(P>0.05；單向ANOVA)。出乎意料地，以嗎啡治療的小鼠在10分鐘時表現出顯著的呼吸抑制，並且呼吸頻率持續下降60分鐘；相反地，以化合物67治療的小鼠在30分鐘後保持呼吸頻率的恢復。該結果表明化合物67顯示出肺功能的早期恢復。

儘管嗎啡對小鼠血壓沒有顯著的影響(P>0.05；單向ANOVA)，但有脈搏(心率)和速率-壓力積(rate-pressure product)(心率x收縮壓(systolic blood pressure))向下調控(downregulated)(P<0.05；單向ANOVA)的情形。以嗎啡治療的小鼠從10至30分鐘顯示心率降低，且從10至20分鐘速率-壓力積顯示降低。相反地，以化合物67治療的小鼠對心血管功能的影響最小(收縮壓：P>0.05，單向ANOVA；脈搏：P<0.05，單向ANOVA；速率壓力積：P<0.05，單向ANOVA)。

這些結果表明化合物67在止痛的起效時間(onset time)短於嗎啡。此外，以嗎啡治療的小鼠在急性注射後，顯示出顯著的收縮功能異常(contractile dysfunction)，而以化合物67治療的小鼠表現比嗎啡更少的呼吸抑制和心血管功能異常反應。

化合物67在神經性和癌症疼痛模型中對小鼠的鎮痛效果

使用奧沙利鉑(oxaliplatin)-誘導的神經性疼痛模型來探討化合物67的鎮痛效果。在該神經性疼痛模型中，在奧沙利鉑單次注射3至5天後，機械性異常疼痛(mechanical allodynia)產生最大感覺敏感(hyposensitive)。參見例如Nassini et al.,PAIN,2011,152：1621-1631。使用von Frey試驗來量測注射奧沙利鉑的小鼠的機械閾值，以檢測每種治療的止痛性效果，並在接種後的(postinoculation)第3天(PID 3)，與假處理的(sham-treated)小鼠相比的機械閾值顯著下降(P<0.05；Student’s t-檢驗)。遵循這種治療模式產生神經性疼痛小鼠。

在這些PID 3的小鼠注射等量止痛劑量的載體、化合物67、或嗎啡。與載體組相比，以化合物67和嗎啡處理的小鼠在治療後30分鐘發揮相似的鎮痛效果(P>0.05；Student’s t-檢驗)。在奧沙利鉑-誘導的感覺性異常疼痛(sensory allodynia)中，化合物67的鎮痛效果與嗎啡相當。也檢測了化合物67在皮膚癌疼痛模型中的鎮痛作用。在小鼠的足底(intraplantar)植入黑色素瘤(melanoma)細胞2週後，感覺性異常疼痛幾乎達到最大狀態，與假處理的小鼠相比，在PID 18於黑色素瘤細胞植入的足部的機械性異常疼痛閥值顯著下降(P<0.05；Student’s t-檢驗)。

使用丙酮液滴測試來測試低溫痛覺敏感，並使用von Frey測試量測機械性異常疼痛，以檢測每種藥物治療的止痛性效果。將小鼠注射等量止痛劑量的化合物67或嗎啡。在丙酮液滴測試中，在PID 18於黑色素瘤細胞植入的小鼠，在治療後30分鐘化合物67處理組的舔和甩動頻率少於嗎啡(P<0.05；單向ANOVA)。在von Frey測試中，在PID 19於黑色素細胞植入的小鼠，在治療後30分鐘化合物67 處理組的縮回閥值(withdrawal threshold)大於嗎啡(P<0.05；單向ANOVA)。在PID 19化合物67和嗎啡均發揮止痛性效果，在每日注射2次後，在PID 21和PID 23化合物67的止痛性效果比嗎啡更高。

這些結果顯示，化合物67在化療藥物誘導的神經性疼痛模型中產生與嗎啡相當的機械性止痛性效果。此外，化合物67在癌症誘導的疼痛模型中產生優於嗎啡的機械性止痛效果和低溫痛覺敏感止痛效果。

化合物67的止痛性和胃腸的活動性(gastrointestinal mobility)效果與NOP信號路徑有關

如上所述，化合物67在調節MOR和NOP顯示了顯著的潛力。為了確定化合物67產生的鎮痛和胃腸的活動性是否與NOP有關，使用選擇性的NOP拮抗劑(即BANORL24)預處理，藉由使用閃尾測試和尾夾測試進行止痛效果測試，以及使用木炭餐測試進行胃腸道蠕動抑制測試，以檢測化合物67的活性。以BANORL24進行30分鐘預處理，在開始的30分鐘期間沒有抑制化合物67產生的鎮痛作用。然而，在化合物67處理組和化合物67添加BANORL24處理組之間，注射後60至120分鐘觀察到顯著差異(所有P<0.001；雙向ANOVA)。值得注意地，在尾夾測試中，化合物67誘導的機械性疼痛的鎮痛作用不受BANORL24抑制(P<0.01；單向ANOVA)。

此外，為了確定化合物67產生的胃腸的抑制是否依賴於NOP活化，野生型B6小鼠在化合物67(1.8mg/kg)注射前30分鐘，以載體或BANORL24(10mg/kg，靜脈內)預處理。在30或90分鐘後進行木炭餐測試。在90分鐘後，觀察到BANORL24沒有減弱(attenuate)化合物67產生的胃腸的功能異常，但增加了化合物67產生的胃腸的抑制(P<0.001；單向ANOVA)。

這些結果顯示化合物67誘導了與NOP活化相關的長期熱鎮痛效果(thermal antinociception)。

化合物67對嗎啡CPP恢復的影響

嗎啡處理的小鼠在給藥測試期間顯示出制約偏好，並藉由重複消減測試(extinction test)減弱制約偏好。在嗎啡給藥組的消減測試和恢復之間觀察到顯著差異，但在化合物67給藥組中不顯著(P<0.001；單向ANOVA)。此外，此研究也顯示在化合物67和嗎啡給藥組之間有顯著的差異(P<0.001；單向ANOVA)。它表示嗎啡會誘導嗎啡CPP的再次恢復，而不會誘導化合物67恢復CPP。

這些結果表示，化合物67的施用減弱了鴉片成癮相關的(addiction-related)行為。

其他實施例

在本說明書揭露之所有特徵可以以任何組合進行結合，本說明書揭露之每一特徵可以由具有相同、等同或類似目的之替代特徵來替換，因此，除非另有明確說明，本揭露之每一特徵僅為等同或類似特徵的一般系列之例子。

此外，從以上描述中，本領域之技術人員可以容易的確定本發明之基本特徵，且在不背離本發明之精神及範圍下，可以對本發明進行各種改變和修飾以適應各種用途和條件。因此，其他實施例也在所附權利要求的範圍內。

Claims

一種式(I)之化合物或其藥學上可接受之鹽類：其中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CN、CF₃、NH₂、NO₂、SO₂、COOH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_2-6烯基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、C_1-6烷氨基、C_2-6二烷氨基、C_7-12芳烷基、C_1-12雜芳烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-NRC(O)R’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、-NRS(O)₂R’、-C(O)R、-C(O)NRS(O)₂R’、-C(O)NRS(O)₂NR’R”、或-NRS(O)₂NR’R”；R⁵為H、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、或-S(O)₂R；R⁶為C_1-6烷基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基；L為-NHC(O)-；m為1或2；以及n為0或1，其中當R⁵為C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基或-S(O)₂R時，R⁶為C_1-6烷基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基；當R⁵為H時，R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C₆芳基、或C_1-13雜芳基，其中C₆芳基為單-、二-、或三-取代基取代，該取代基為鹵素、OH、CN、CF₃、NH₂、 NO₂、SO₂、COOH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_2-6烯基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、C_1-6烷氨基、C_2-6二烷氨基、C_7-12芳烷基、C_1-12雜芳烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-NRC(O)R’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、-NRS(O)₂R’、或-C(O)R；以及R、R’、R”各自獨立為H、鹵素、OH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_6-14芳基、或C_1-13雜芳基。
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基。
如申請專利範圍第2項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自為H，且R⁵為H或C_1-6烷基。
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基。
如申請專利範圍第4項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R⁶選自以下基團所組成之群組：
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中m和n各自為1。
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基；以及m和n各自為1。
如申請專利範圍第7項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自為H；R⁵為H或C_1-6烷基；以及R⁶選自以下基團所組成之群組：
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，連接到苯環和氮原子的碳具有R或S的立體異構構型，且該化合物具有90%或大於90%之鏡像異構物超越值(enantiomeric excess)。
如申請專利範圍第9項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基；以及m和n各自為1。
如申請專利範圍第9項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；以及R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基。
如申請專利範圍第11項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R¹-R⁴各自為H；R⁵為H或C_1-6烷基；且R⁶為C₆芳基，其中當R⁵為C_1-6 烷基時，C₆芳基可選擇性地為單-、二-、或三-取代基取代，而當R⁵為H時，C₆芳基為單-、二-、或三-取代基取代；其中該取代基為鹵素、OH、CN、CF₃、NH₂、NO₂、SO₂、COOH、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_2-6烯基、C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、C_1-6烷氨基、C_2-6二烷氨基、C_7-12芳烷基、C_1-12雜芳烷基、C_6-14芳基、C_1-13雜芳基、-C(O)OR、-C(O)NRR’、-NRC(O)R’、-S(O)₂R、-S(O)₂NRR’、-NRS(O)₂R’、或-C(O)R。
如申請專利範圍第12項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，R⁶選自以下基團所組成：
如申請專利範圍第13項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，m和n各自為1。
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，其中，該化合物為下列化合物中之一者：
如申請專利範圍第15項所述之化合或其藥學上可接受之鹽類，其中，該化合物為下列化合物中之一者：
一種用於治療鴉片受體相關病症之醫藥組成物，該醫藥組成物包含如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類，以及一藥學上可接受之載體。
一種如申請專利範圍第1項所述之化合物或其藥學上可接受之鹽類之用途，其係用於製備治療鴉片受體相關病症的醫藥組成物。
如申請專利範圍第18項所述之用途，其中，該鴉片受體相關病症為疼痛、免疫疾病、胃食道逆流(esophageal reflux)、腹瀉(diarrhea)、焦慮(anxiety)或海洛因成癮(heroin addiction)。
如申請專利範圍第19項所述之用途，其中，該鴉片受體相關病症為疼痛。
如申請專利範圍第20項所述之用途，其中，該疼痛為癌症疼痛、手術後疼痛、胃絞痛、急性胰臟炎疼痛、心絞痛、下背疼痛、類風濕性關節炎疼痛、骨關節炎疼痛、神經性疼痛、纖維肌疼痛、或複雜的局部疼痛綜合症狀。
如申請專利範圍第18項所述之用途，其中，該式(I)之化合物的R¹-R⁴各自獨立為H、鹵素、OH、CF₃、C_1-6烷基、C_3-8環烷基、或C_1-6烷氧基；以及R⁶為C_3-8環烷基、C_2-8雜環烷基、或C_6-14芳基。
如申請專利範圍第22項所述之用途，其中，該化合物為下列化合物中之一者：