TWI641376B - Use of okra extract for the preparation of a composition for reducing intestinal bacteria - Google Patents

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Abstract

本發明係揭露一種秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其係將秋葵予以加熱後，再以水進行萃取後，得到一秋葵多醣。而藉由本發明所揭方法萃取所得之秋葵多醣，其係具有調整腸胃道菌叢及提昇腸胃道機能之功效。

Description

秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途
本發明係有關於植物萃取方法及其所得萃取物之用途，特別係指一種秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途。
按，腸胃道不僅具有消化吸收之功能，其內之菌相係與個體之免疫力息息相關。詳言之，當人體腸道中之有害菌種增加，會使體內菌相平衡改變，有害菌種成為腸道內之優勢菌種後而分泌毒素，導致宿主產生健康問題，如免疫力下降、發生過敏性疾病。相反地，當益生菌為腸道內之優勢菌種時，係能壓制體內致病菌生長，減少有害菌種危害宿主身體健康之可能，並且，能使腸道酸鹼值維持正常，使營養素之代謝及吸收能夠正常。由此可知，腸道內益生菌數量之維持係有助於個體健康之維護。
秋葵，又名黃秋葵，其含有豐富礦物質、植化素及膳食纖維等，其中，膳食纖維包含如水溶性果膠黏液及半乳聚糖等，能夠幫助腸胃道消化、預防大腸癌發生。而秋葵最特別之處在於具有黏液，黏液可以附著於胃黏膜上保護胃壁，用以促進胃液分泌、提高食慾，達到改善消化不良之症狀。惟，秋葵黏液使其具有特殊口感及味道，以致於雖然其營養價值高，卻無法被大多數人接受或是長期食用。再者，秋葵本身鉀含量偏高，如腎臟病患者則需控制食用量，並且，容易腹瀉者亦會因為大量食用秋葵導致不適之症狀產生。因此，尋求一種有效率獲得秋葵內功能性成分之方 法，並加以應用於健康維護之用途上乃為目前研究者之重要課題。
本發明之主要目的係在於提供一種秋葵多醣之萃取方法，其係能有效率地自秋葵中萃取出大量之多醣成份。
本發明之另一目的係在於提供一種秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其能用以調整腸道菌叢及提昇腸胃機能。
據此，本發明係揭露一種秋葵多醣之萃取方法，其係將秋葵予以加熱後，再以水進行萃取後，得到一秋葵多醣。
較佳地，萃取時間至少為12小時。
較佳地，該秋葵多醣係至少包含有L-鼠李糖及D-木糖，其中，該秋葵多醣又以包含有L-鼠李糖、D-木糖、D-甘露糖及L-岩藻糖為佳。
以本發明所揭方法萃取得到之秋葵多醣係能用以製備成為一組合物，藉由投予該含有有效量秋葵多醣之組合物至一個體，可促進個體腸道內益菌之生長，減少有害菌之增生，以達到調整個體腸道菌叢及提昇腸胃機能之功效。
較佳地，該有效量對於人體來說係為0.13~0.16公克/公斤體重/天。
第一圖係為生秋葵萃取物之HPLC圖譜，其中，1為D-甘露糖，6為L-阿拉伯糖，7為L-岩藻糖。
第二圖係為熟秋葵萃取物之HPLC圖譜，其中，1為D-甘露糖，2為L-鼠李糖，5為D-木糖，7為L-岩藻糖。
第三圖A係為測定對照組之雙叉桿菌菌落數目。
第三圖B係為測定生秋葵萃取物組之雙叉桿菌菌落數目。
第三圖C係為測定熟秋葵萃取物組之雙叉桿菌菌落數目。
第四圖A係為測定對照組之乳酸桿菌菌落數目。
第四圖B係為測定生秋葵萃取物組之乳酸桿菌菌落數目。
第四圖C係為測定熟秋葵萃取物組之乳酸桿菌菌落數目。
第五圖係表示各組雙叉桿菌菌落數目。
第六圖係表示各組乳酸桿菌菌落數目。
第七圖係表示各組產氣莢膜梭菌菌落數目。
第八圖係分別為對照組及熟秋葵萃取物組小鼠之肝臟切片H&E染色之結果。
第九圖係分別為對照組及熟秋葵萃取物組小鼠之腎臟切片H&E染色之結果。
為能更進一步地說明本發明，以下茲舉若干實例，並搭配圖式做詳細說明如后。
實例一：製備生秋葵萃取物
取去蒂頭之生秋葵50公克，粉碎後加入1000毫升之二次水，於4℃下磁石攪拌至少12小時，進行過濾，將濾體進行冷凍乾燥，得到生秋葵萃取物。
實例二：製備熟秋葵萃取物
將生秋葵以100℃熱水川燙3分鐘，冷卻後去蒂頭，秤取50公克，粉碎後加入1000毫升之二次水，於4℃下磁石攪拌至少12小時，過濾後之濾液進行冷凍乾燥，得到熟秋葵萃取物。
實例三：總糖測定
利用phenol-sulfuric acid法測定實例一及實例二所製備之生、熟秋葵萃取物中之總糖含量。詳言之，分別將生、熟秋葵(1mg/ml)1毫升以1毫升之二次水稀釋。在待測液中加入1毫升之5%石碳酸(phenol)及5毫升之98%硫酸，並充分混合。再置於90℃熱水中，水浴20分鐘。最後，偵測各該待測液吸光值490nm，以內插法算出其總醣含量。
依上述方法所分別測得生、熟秋葵之總糖含量為15.61%及30.09%。由此結果可知，熟秋葵之總糖含量係顯著高於生秋葵之總糖含量。
實例四：分析糖類種類及含量
進一步以HPLC分析生、熟秋葵內各種糖之含量，其中，所分析之糖包含下列七種：D-甘露糖(D-(+)-Mannose)、L-鼠李糖(L-Rhamnose monohydrate)、D-葡萄糖(D-(+)-Glucose)、D-半乳糖(D-(+)-Galactose)、D-木糖(D-(+)-Xylose)、L-阿拉伯糖(L-(+)-Arabinnose)、L-岩藻糖(L-(-)-Fucose)，而測定結果係如第一圖、第二圖及下表一所示。
由上表一可知，熟秋葵中之D-甘露糖及L-岩藻糖之含量係顯著高於生秋葵，並且，較生秋葵多出L-鼠李糖及D-木糖。
實例五：動物試驗
將ICR小鼠分為兩組，各組小鼠數量為五隻，分別餵食1%生秋葵萃取物及1%熟秋葵萃取物，劑量為0.05公克，餵食8週，並且，於試驗期間，各該組小鼠之飼料餵食量為4.95公克/隻/天。試驗完成後犧牲各該組小鼠，分別取其盲腸內容物、肝、腎，進行以下測試。
實例六：檢測腸道菌叢
取各該組小鼠之盲腸內容物，培養48小時，以行政院衛生署公布的「保健食品對胃腸道功能改善之評估方法」檢測並計算各該組小鼠腸胃管道內有益菌種指標：雙叉桿菌及乳酸桿菌及有害菌指標：產氣莢膜梭菌之數量，其中，各菌種之菌落數目測定方法如下：雙叉桿菌菌落數目之測定：將衛生署健康食品法所推薦之BIM-25培養基(Bifidobacteria iodoacetate medium-25)之Reinforced clostridial agar(Difco社製)，再加奈啶酸(Nalidixic acid)，硫酸多黏菌素B(polymyxin B sulfate)，硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate)，碘乙酸(Iodoacetic acid)， 氯化三苯基四唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride；Sigma)等抗生素，所製備成一選擇性培養基。以該選擇性培養基於37℃厭氧條件下培養2天，取出後計算其菌落數目。各該組小鼠之培養結果如第三圖所示。
乳酸桿菌菌落數目之測定：將Difco社製之乳桿菌MRS培養基，添加萬古黴素(vancomycin)及作為酸鹼指示劑之溴甲酚綠(Sigma)，製備出一LAMVAB(Lactobacillus Anaerobic MRS with Vacomycin and Bromocresol green)選擇性培養基。將該LAMVAB選擇性培養基於37℃厭氧條件下培養2天，取出後計算其菌落數目。各該組小鼠之培養結果如第四圖所示。
產氣莢膜梭菌菌落數目之測定：依Mackie氏等人所揭方法，利用市售BBL社製之厭氧性血液培養基(CDC Anaerobe blood agar)，於37℃厭氧條件下，培養2天再取出，算出其菌落數目，可求得厭氧細菌之總數。而為避免有些菌類於厭氧環境下仍會呈增殖的情形，因此，可再利用BBL社製之TSA(Trypticase Soy Agar)培養基於非厭氧狀態、37℃下培養2天，而後取出計算其菌落。再將TSA培養基上所得的菌落數扣除CDC厭氧性血液培養基所得之菌落數，所得值係為產氣莢膜梭菌實際之菌數值。
而依據上述方法所檢測出各該組小鼠中之各種菌菌落數目結果如第五圖至第七圖所示。
由第五圖至第七圖之結果顯示，相較於對照組及生秋葵組，熟秋葵組小鼠之雙歧桿菌菌落數係顯著提昇(p<0.05)，並且能夠顯著減少產氣莢膜梭菌於腸道中生長之情形(p<0.05)。
一般周知者，腸道中有害菌菌數增加，會影響有益菌菌種之 生長，當有害菌增加，成為腸道中之優勢菌種時，其代謝物會在體內產生毒素，進而影響宿主之免疫功能。由此可知，相較於不餵食秋葵或是餵食生秋葵，餵食本發明所揭熟秋葵係能有效增加腸胃道益菌數量，並且減少腸胃道內如產氣莢膜梭菌之有害菌之生長，達到調節腸道菌叢之功效。
更進一步來說，綜合實例四及實例七之結果顯示，熟秋葵萃取物中之L-鼠李糖及D-木糖係能分別作為腸內益菌之能量來源，以活化如乳酸桿菌及雙歧桿菌等益菌生長，藉此改變腸道內優勢菌種為益菌，提高個體免疫能力。而反觀生秋葵萃取物中係缺少L-鼠李糖及D-木糖，因此，無法有效增加腸道內益菌生長。是以，本發明所揭萃取方法所得之秋葵多醣確實能夠達到調節腸道菌叢、促進益菌生長之功效。
實例七：組織切片
取熟秋葵組小鼠及對照組小鼠之肝、腎組織，分別割成1平方公分大小之組織，放入固定液中(福馬林：乙酸：70%酒精=1：1：20)中固定24小時。接著依序75%酒精、95%酒精、100%酒精24小時進行脫水，再浸泡於二甲苯(xylene)中，之後將組織至於60℃環境，並將石蠟及二甲苯以1：1比例浸泡24小時，再以石蠟及二甲苯比例為2：1之溶液浸泡24小時，最後浸泡於全石臘中，24小時後更換新之石蠟，再浸泡1~2天後進行包埋。包埋完成後，以切片機切出每片厚度為5μm的組織切片，並至於玻片上備用及染色。
實例八：組織染色結果
將熟秋葵組及對照組小鼠之肝臟及腎臟切片分別依序以二甲苯、100%酒精、95%酒精、75%酒精進行脫蠟，再以蘇木素-伊紅染色套 組進行染色，染色後，各該肝臟切片以靜脈竇為中心，各該腎臟切片係以腎絲球為中心，而使用100倍及200倍之倍率進行拍攝，結果如第八圖及第九圖所示。
由第八圖之結果顯示，熟秋葵組小鼠之肝臟組織切片與對照組小鼠肝臟組織切間係無明顯差異，亦無發現有脂肪空泡、纖維化之情形。再者，由第九圖之結果顯示，秋葵組小鼠之腎臟組織切片與對照組小鼠腎臟組織切間係無明顯差異，兩組小鼠之腎絲球皆完整且明顯，未發現有損傷之情形。
由此可知，餵食熟秋葵對於肝臟及腎臟係不會產生毒性，因此，本發明所揭熟秋葵萃取物係可安全地作為保健食品或是醫藥組合物之有效成份。
藉由上述說明可知，藉由本發明所揭秋葵多醣之萃取方法所得之秋葵多醣，其組成確實與生秋葵中之多醣不相同，而具有良好改善腸胃道菌叢及提昇腸道機能之功效，並且，該秋葵多醣係不具有肝腎毒性，因此，可安全地被製造成為如營養補充品之組合物。而依據人及不同種類動物之間藥物劑量換算標準，可以推得本發明所得秋葵多醣之投予劑量為0.13~0.16公克/公斤體重/天。
以上僅是藉由各該實例詳細說明本發明，熟知該技術領域者於不脫離本發明精神下，而對於說明書中之實施例所做的任何簡單修改或是變化，均應為本案申請專利範圍所得涵攝者。

Claims (6)

  1. 一種以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該秋葵萃取物係將秋葵予以加熱後，再以水進行萃取而得者。
  2. 依據申請專利範圍第1項以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該秋葵萃取物係包含L-鼠李糖及D-木糖。
  3. 依據申請專利範圍第2項以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該秋葵萃取物更包含有D-甘露糖及L-岩藻糖。
  4. 依據申請專利範圍第1項以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該害菌係為產氣莢膜梭菌。
  5. 依據申請專利範圍第1項以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該秋葵萃取物係不包含阿拉伯糖。
  6. 依據申請專利範圍第1項以秋葵萃取物用於製備減少腸道害菌之組合物之用途，其中，該秋葵萃取物中含有約30%之秋葵多糖。
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閔莉靜及李敬芬，黃秋葵多糖結構分析及細胞毒性研究，北方園藝，2013 (4)，167-170 *
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