TWI624654B

TWI624654B - 細胞之封入方法及細胞之觀察方法

Info

Publication number: TWI624654B
Application number: TW102101011A
Authority: TW
Inventors: 平山賢哉; 藪崎次郎; 山崎和廣
Original assignee: 寶露化成工業股份有限公司
Priority date: 2012-01-13
Filing date: 2013-01-11
Publication date: 2018-05-21
Also published as: TW201333441A; CN103207448A; JPWO2013105363A1; CN203324569U; JP6126536B2; WO2013105363A1; CN103207448B

Abstract

課題在於提供一種在百貨公司專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端，即便銷售員亦能簡單地製作的用於相位差顯微鏡觀察的細胞之封入方法、及使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法。

解決手段為一種細胞之封入方法，係為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法，其特徵為將細胞配置於透明膠帶的黏著層與透明膠帶的黏著層之間，將細胞以該兩膠帶的黏著層夾持貼合。

Description

細胞之封入方法及細胞之觀察方法

本發明係有關一種為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法、及使用相位差顯微鏡之新穎的細胞之觀察方法。

在選擇適合肌膚狀態的化妝料之時，極為重要的是瞭解其所適用之肌膚的特性。就此種為了瞭解肌膚特性之方法而言，業已研究利用角質細胞的方法。因角質細胞易於採取，且具有大量的肌膚資訊，已有提案觀察採取的角質細胞，並嘗試將既得資訊利用於化妝料的選擇(例如參照專利文獻1)。

專利文獻1中係記載，以色素將採取自皮膚的角質細胞染色，並以利用光學顯微鏡觀察角質細胞，而將其結果評鑑皮膚屏障機能是否良好，適用於化妝料的選擇。

當使用光學顯微鏡時，為了觀察細胞之類的無色透明試料，則必需使用染色液，專利文獻1中亦採用了蘇丹黑B。然而，欲觀察活體試料時，會有因染色而使試料死亡的情形，此種情況下，透過使用相位差顯微鏡，毋需將近似無色透明的試料染色即可進行觀察(參照非專利文獻1)。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開2007-151899號公報

[非專利文獻]

[非專利文獻1]「相位差顯微鏡」，玩味科學[2011年8月26日檢索]、網路<URL：http：//www.rikagaku.info/microscope9908/microscope07.htm>

由於進行肌膚狀態的諮詢、建議而選擇化妝品，主要是在百貨公司的專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端進行，因此，較佳為可簡便地觀察角質細胞。由於若使用上述相位差顯微鏡，則可觀察無色透明試料而毋需使用染色液，對於簡便的角質細胞觀察係為較佳之方法。

另一方面，當使用相位差顯微鏡觀察角質層等的各種細胞時，如未將細胞封入而直接觀察，則會在觀察影像上的物體的周邊出現被稱為「光暈(halo)」的光輪。因此，使用相位差顯微鏡觀察細胞時，需利用液體封入劑及蓋玻片將細胞封入。此種封入作業，在實際觀察肌膚的角質細胞，並基於其結果來選擇化妝料的百貨公司專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端係極耗費工時，而且蓋玻片薄而容易破裂等，作業的難易度亦高。本發明係於此種狀況下而進行者，茲提供一種在百貨公司專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端，即便銷售員亦能簡單地操作的細胞之封入方法、及使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法。

本發明人等為解決上述課題、謀求簡單的封入法而致力進行研究的結果發現，藉由採用一種使用具黏著層的膠帶並利用該膠帶由兩側夾持貼合細胞的簡便方法，問題便得以迎刃而解，從而完成本發明。

即，本發明如下所述：

(1)一種細胞之封入方法，係為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法，其特徵為：將細胞配置於透明膠帶的黏著層與透明膠帶的黏著層之間，將細胞以該兩膠帶的黏著層夾持貼合。

(2)如(1)之細胞之封入方法，其中前述透明膠帶之光的直線穿透率為80%以上。

(3)如(1)或(2)之細胞之封入方法，其中前述透明膠帶的光折射率與前述細胞的光折射率之差為0.03以上。

(4)如(1)之細胞之封入方法，其中前述兩透明膠帶之間沒有氣泡。

(5)如(1)之細胞之封入方法，其中前述細胞為角質細胞。

(6)一種細胞之觀察方法，係使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法，其包含：製備貼附有細胞於黏著層的透明膠帶之步驟；將前述貼附有細胞之透明膠帶的黏著層與另一透明膠帶的黏著層貼合，而製備封入有細胞的透明膠帶積層體之步驟；及以相位差顯微鏡觀察前述步驟中製備之積層體之步驟，並使用相位差顯微鏡。

(7)一種透明膠帶積層體，係將包含薄膜層與黏著層的透明膠帶，以彼此的黏著層為對向的方式貼附之透明膠帶積層體，其中細胞係被封入於黏著層與黏著層之間。

(8)如(7)之透明膠帶積層體，其係用於相位差顯微鏡之觀察。

依本發明細胞之封入方法，可簡便地作成封入有細胞的膠帶積層體，縱使未具備專門的技能，在百貨公司專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端，銷售員亦能簡單地觀察角質細胞等。此外，本發明之封入有細胞的膠帶積層體，在使用相位差顯微鏡進行觀察之時不會產生光暈，而在觀察角質細胞時可充分觀察角質細胞內的黑色素、核、序列規則性等，從而得以簡便且即時地獲得來自角質細胞的資訊。

1‧‧‧透明膠帶積層體

2、3‧‧‧膠帶

4‧‧‧角質細胞

5‧‧‧薄膜層

6‧‧‧黏著層

7‧‧‧膠帶剝離套組

8‧‧‧臉

9‧‧‧相位差顯微鏡

第1圖係為本發明之封入有細胞的透明膠帶積層體的剖面模式圖。

第2圖係表示本發明之用於細胞的製作之構件的實例。

第3圖係為表示本發明之使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法之步驟的一例的示意圖。

第4圖係為本發明之實施例1中，以相位差顯微鏡觀察角質細胞之結果的照片(圖式替代用照片)。

第5圖係為本發明之參考例中，以相位差顯微鏡觀察角質細胞之結果的照片(圖式替代用照片)。

[實施發明之形態]

本發明第一形態乃一種為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法。本發明之封入方法為了能夠使用相位差顯微鏡觀察細胞，係將細胞配置於透明膠帶的黏著層與透明膠帶的黏著層之間，並以該兩膠帶的黏著層夾持貼合。在本發明中觀察的細胞並無特別限定，尤可較佳地例示角質細胞、角質化細胞(角質細胞)、纖維母細胞等為了評估皮膚狀態所使用的細胞。以下，列舉角質細胞為例加以說明。

角質細胞係構成角質層之厚1μm左右的扁平狀細胞，因其具有大量肌膚資訊，透過評定角質細胞，便可瞭解選擇化妝料時應予考量的肌膚特性。於角質細胞內，主要成分的角蛋白係形成纖維而充滿，建構出極為強固的細胞構造，而自外界的各種刺激保護皮膚內部。然而，在角質層最外層，由於角質細胞彼此間的黏著力減弱而能夠容易地採取。本發明中，由於係使用既已自人體取得的角質細胞，因此，由人體採取角質細胞的步驟並未包含於本發明之範圍內。

本發明係一種為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法。相位差顯微鏡乃一種可將光線的相位差轉換成對比而觀察的光學顯微鏡，能夠無染色‧非侵入性地觀察標本。

本發明之特徵係為了將細胞封入而使用透明膠帶。在本發明，透明係指可使光穿透過而能夠看見前方的物品之意，只要能以相位差顯微鏡觀察到對象物，對於其程度或帶有顏色則無任何限定。光的直線穿透率較佳為80%以上，更佳為90%以上。另，透明膠帶較佳為光學特性之濁度HAZE低於1.5%，更佳為低於1.0%。又較佳為無色。再者，濁度HAZE(霧度)係為表示物體模糊程度的值(%)，數值愈小表示透明膠帶愈無模糊，透明性愈高。(濁度HAZE(%)=Td/Tt×100(Td：擴散穿透率Tt：總光線穿透率)又，「光的直線穿透率(平行穿透率)」及「濁度HAZE(霧度)」係表示基於日本工業規格JISK7136(國際標準化機構規格ISO14782)、JISK7361(國際標準化機構規格ISO13468)所測得的值，例如可使用日本電色工業股份有限公司製HASE METER NDH500來測定。惟，「光的直線穿透率」及「濁度HAZE」係表示針對透明膠帶的剖面方向所測得的值。

本發明所使用的膠帶可使用包含透明的薄膜層及黏著層的一般膠帶，可使用市售品。具體可列舉Scotch(註冊商標)透明美色(3M公司製)、Scotch(註冊商標)313(3M公司製)、Scotch(註冊商標)3450(3M公司製)、Scotch(註冊商標)PRO(3M公司製)、Diahallow(註冊商標)(三菱樹脂公司製)、Cellotape(註冊商標)(NICHIBAN公司製)、Dunplon(註冊商標)(日東電工公司製)、Sekisui Orien‧Sekisui Cutlon‧Sekisui Tough light‧Sekisui Evercel‧Sekisui Supreme(註冊商標)(積水化學公司製)等。

此等當中，如考量到相位差顯微鏡的特性，係以使用具有與細胞的折射率相異之折射率的膠帶為佳，更佳的是，以使用膠帶的折射率與細胞的折射率的差為0.03以上的膠帶為佳。折射率的上限未特別限定，通常為0.60以下。再者，角質細胞的折射率為1.55。

膠帶之薄膜層的材質只要滿足上述透明之要件則未特別限定，且關於黏著層的材質亦未特別限定。薄膜層的材質一般係使用聚乙烯、聚丙烯、玻璃紙(化學名：纖維素)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、聚烯烴等；黏著層的材質一般使用丙烯酸系共聚物、烯烴系共聚物、胺基甲酸酯系共聚物、環氧系共聚物、合成橡膠、天然橡膠等。又對於膠帶的厚度也未特別限定，只要能以相位差顯微鏡進行觀察即可。

本發明之封入方法係以「將細胞配置於兩膠帶的黏著層之間，而將細胞以兩膠帶的黏著層夾持貼合」為特徵。如此，藉由將細胞夾持而貼附於膠帶之間，即便未使用液體封入劑及蓋玻片也不會產生光暈，可使用相位差顯微鏡對細胞進行觀察。

本發明之封入方法中，較佳為兩膠帶的黏著層之間沒有氣泡。在氣泡進入黏著層之間的情形，依該氣泡的位置，係會有藉由氣泡(空氣)所致之折射率的變化而產生光暈的情形。

依本發明之封入方法而封入有細胞的透明膠帶積層體係本發明第二形態。即，本發明第二形態乃一種透明膠帶積層體，係將包含薄膜層與黏著層的透明膠帶，以彼此的黏著層對向的方式貼附之透明膠帶積層體，其中細胞係被封入於黏著層與黏著層之間。

再者，本發明第三形態乃一種細胞之觀察方法，係使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法，其包含：製備貼附有細胞於黏著層的透明膠帶之步驟；將前述貼附有細胞之透明膠帶的黏著層與另一透明膠帶的黏著層貼合，而製備封入有細胞的透明膠帶積層體之步驟；及以相位差顯微鏡觀察前述步驟中製備之積層體之步驟，並使用相位差顯微鏡。

以下，利用圖式對此等本發明第一形態至第三形態進行說明。

第1圖表示本發明第二形態，係封入有細胞之透明膠帶積層體的剖面示意圖。且，封入之細胞為角質細胞。

本發明之透明膠帶積層體1係膠帶2與膠帶3彼此的黏著層6以對向的方式貼附。而且，黏著層6與黏著層6 之間封入有角質細胞4。利用第3圖說明本發明之透明膠帶積層體1之製造方法、及藉由本發明之透明膠帶積層體1而使用相位差顯微鏡的角質細胞之觀察方法。

第3圖係表示使用相位差顯微鏡的角質細胞之觀察方法之步驟的一例的示意圖。首先，本發明中，係製備貼附有角質細胞於黏著層的透明膠帶。貼附有角質細胞的透明膠帶雖可依任何方法來製備，若使用第2圖所示之膠帶剝離套組7則較為簡便。第2圖之膠帶剝離套組係包含塑膠材質板，於中央部具有採集孔。採集孔係自圖示之深側貼有膠帶，於採集孔部分露出膠帶2的黏著層。因此，將膠帶剝離套組7的採集孔在人的皮膚按壓，便可簡單地採取角質細胞。

如第3圖(a)所示，藉由在人的臉頰等按壓膠帶剝離套組7，而製備貼附有角質細胞於黏著層的透明膠帶。此外，將膠帶剝離套組7在人的臉頰按壓之步驟並未包含於本發明內。

其次，將貼附有角質細胞之透明膠帶的黏著層與另一透明膠帶的黏著層貼合，而製備封入有角質細胞的透明膠帶積層體。貼附有角質細胞4於黏著層的透明膠帶係如第3圖(b)所示，藉由使其黏著層與另一膠帶3的黏著層對向，將黏著層彼此間貼合，而將存在的角質細胞4封入。此時，較佳為以氣泡不進入的方式封入。如此一來，即可製造本發明第二形態的透明膠帶積層體1。

接著，如第3圖(c)所示，以相位差顯微鏡觀察製備的積層體。若以相位差顯微鏡9觀察本發明透明膠帶積層體1，則毋需使用封入液或蓋玻片，亦能以簡便的方法觀察角質細胞。

[實施例]

以下舉出實施例與比較例，更詳細地說明本發明，惟不應僅限定地解釋為以下實施例所示之具體形態。

<實施例1>

利用第2圖所示膠帶剝離套組(塑膠的板狀構件)，自受試者的臉頰採集角質細胞。用於第2圖所示之膠帶剝離套組的膠帶係為Diahollow Tape(三菱樹脂公司製)，折射率為1.48~1.50、光的直線穿透率為92.374%、濁度HAZE為0.55。此外，光的直線穿透率(平行穿透率)及濁度HAZE使用日本電色工業股份有限公司製HASE METER NDH500，測定Diahollow Tape的剖面方向5次所得之平均值。

採集之角質細胞，係使用同樣的膠帶，使黏著層與黏著層對向貼合而將角質細胞封入，製成膠帶積層體1。此時，以目視確認，並無空氣氣泡混入。

將膠帶積層體1載置於相位差顯微鏡上，觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。將角質細胞的觀察照片示於第4圖。

<實施例2>

除將膠帶更改為3M公司製Scotch透明美色以外，與實施例1同樣地，以相位差顯微鏡觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。另，3M公司製Scotch透明美色的光的直線穿透率為91.882%、濁度HAZE為0.82%。

<實施例3>

除將膠帶更改為NICHIBAN公司製Cellotape以外，與實施例1同樣地，以相位差顯微鏡觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。另，NICHIBAN公司製Cellotape的光的直線穿透率為89.608%、濁度HAZE為2.31%。

<實施例4>

除將膠帶更改為3M公司製Scotch313以外，與實施例1同樣地，以相位差顯微鏡觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。另，3M公司製Scotch313的光的直線穿透率為92.30%、濁度HAZE為0.88%。

<實施例5>

除將膠帶更改為3M公司製Scotch3450以外，與實施例1同樣地，以相位差顯微鏡觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。另，3M公司製Scotch3450的光的直線穿透率為91.76%、濁度HAZE為1.29%。

<實施例6>

除將膠帶更改為積水化學公司製透明包裝用膠帶P83T以外，與實施例1同樣地，以相位差顯微鏡觀察角質細胞的結果，亦未產生光暈，可清晰地觀察到角質細胞。另，積水化學公司製透明包裝用膠帶P83T的光的直線穿透率為92.45%、濁度HAZE為0.48%。

<參考例>

以在相位差顯微鏡觀察一般所進行之方法的方法來進行角質細胞的觀察。利用第2圖所示之膠帶剝離套組採取角質細胞後，在採集孔滴入一滴液體封入劑，並使用蓋玻片封入。將角質細胞的觀察照片示於第5圖。

即便是本發明之使用膠帶的簡易方法，亦能和以往在相位差顯微鏡觀察所進行的方法同樣地，清晰地觀察到角質細胞。

[產業上之可利用性]

本發明封入方法、觀察方法、膠帶積層體在百貨公司專櫃、店鋪或化妝品使用者的客戶端，於選擇化妝料之際，即便銷售員亦能容易地觀察角質細胞，而得以基於該觀察結果來選擇適確的化妝料並販售。

Claims

一種細胞之封入方法，係為了用於以相位差顯微鏡之觀察的細胞之封入方法，其特徵為：將細胞配置於透明膠帶的黏著層與透明膠帶的黏著層之間，將細胞以該兩膠帶的黏著層夾持貼合；及前述透明膠帶的光折射率與前述細胞的光折射率之差為0.03以上。
如申請專利範圍第1項之細胞之封入方法，其中前述透明膠帶之光的直線穿透率為80%以上。
如申請專利範圍第2項之細胞之封入方法，其中前述兩透明膠帶之間沒有氣泡。
如申請專利範圍第1項之細胞之封入方法，其中前述兩透明膠帶之間沒有氣泡。
如申請專利範圍第1至4項中任一項之細胞之封入方法，其中前述細胞為角質細胞。
一種細胞之觀察方法，係使用相位差顯微鏡的細胞之觀察方法，其包含：製備貼附有細胞於黏著層的透明膠帶之步驟；將前述貼附有細胞之透明膠帶的黏著層與另一透明膠帶的黏著層貼合，而製備封入有細胞的透明膠帶積層體之步驟；及以相位差顯微鏡觀察前述步驟中製備之積層體之步驟，前述透明膠帶的光折射率與前述細胞的光折射率之差為0.03以上，並使用相位差顯微鏡。
一種透明膠帶積層體，係將包含薄膜層與黏著層的透明膠帶，以彼此的黏著層為對向的方式貼附之透明膠帶積層體，其中細胞係被封入於黏著層與黏著層之間，前述透明膠帶的光折射率與前述細胞的光折射率之差為0.03以上。
如申請專利範圍第7項之透明膠帶積層體，其係用於相位差顯微鏡之觀察。