TWI617313B

TWI617313B - 經單離成分、具抗炎性活性的提取物及其用途

Info

Publication number: TWI617313B
Application number: TW106103857A
Authority: TW
Inventors: 吳天賞; 洪欣儀; 林哲緯
Original assignee: 吳天賞; 洪欣儀; 林哲緯
Priority date: 2017-02-06
Filing date: 2017-02-06
Publication date: 2018-03-11
Also published as: TW201828968A

Abstract

本發明係關於經單離成分、具抗炎性活性的提取物及其用途，具體而言，本發明係關於自台灣白芨的地下莖獲得的提取物、自該提取物單離的活性成分，以及該提取物及活性成分的用途。

Description

經單離成分、具抗炎性活性的提取物及其用途

本發明係關於自台灣白芨(Bletilla formosana(Hayata)Schltr)的地下莖(rhizomes)獲得的提取物、自該提取物單離的活性成分，以及該提取物及活性成分的用途。

蘭科(Orchidaceae)白芨屬(Bletilla sp.)植物主要分布於大陸及日本，且已知使用於民間醫藥及傳統醫藥用以治療出血、寒症、食管炎、糜爛性胃炎及燒燙傷。本技術領域已知白芨屬植物已顯示縮短出血凝集的時間，以提供黏膜保護，以及具有抗細菌、抗真菌、抗氧化、抗酪胺酸酶、抗炎性及細胞毒性的功效。台灣白芨(Bletilla formosana(Hayata)Schltr)是該種植物僅見於台灣的唯一成員且為多年生草本植物，可見於海拔高達約2200公尺的山坡。關於白芨屬的先前研究已單離菲類衍生物、芪類、聯苯甲基類、黃烷酮類以及酚類化合物。然而，至今僅有二個研究係針對台灣白芨(參照非專利文獻1及2)。

【先前技術文獻】

[非專利文獻]

[非專利文獻1] Lin, Y. L.; Chen, W. P.; Macabalang, A. D. Chem. Pharm. Bull. 2005, 53, 1111-1113.

[非專利文獻2] Chen, Y. C.; Lee, T. -H.; Hung, H. C.; Chang, C.; Chang, L. Z.; Wei, F. M. Bull. Taichung District Agric. Res. Exten. Stat. 2009, 103, 31-39.

本發明係有鑑於上述問題，自台灣白芨的地下莖的提取具抗炎性活性的提取物，並自該提取物中單離及鑑定活性成分。

具體而言，本發明係關於下述者：一態樣中，本發明係關於台灣白芨的地下莖的提取物，該提取物具有抗炎性活性。

一具體例中，上述提取物為乙醇提取物。

另一具體例中，該提取物包含自下列化合物1至化合物55所成群組選擇之至少一種活性成分：化合物1：3,4-二甲氧基-8-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇，化合物2：3,4-二甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇，化合物3：3-甲氧基-1-[2-羥基-4-(2-(3-羥基)苯基)乙基-6-甲氧基]菲-2,7-二醇，化合物4：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-4-甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物5：1-(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,6-二醇，化合物6：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,7-二醇，化合物7：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4,8-二甲氧基菲-2,7-二醇，化合物8：1-(2,7-二羥基-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物9：1-(2,7-二羥基-3,4-二甲氧基菲-1-基)-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物10：(2Z)-3-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯基丙-2-烯酸4-(D-吡喃葡萄糖基)苯基甲基酯，化合物11(Nudol)：3,4-二甲氧基菲-2,7-二醇，化合物12：3,4,6-三甲氧基菲-2,7-二醇，化合物13：2,4-二甲氧基菲-3,7-二醇，化合物14：1-(4-羥基苯甲基)-4-甲氧基菲-2,7-二醇，化合物15：4-甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物16：3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物17：3,4,6-三甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物18：4-甲氧基-3-(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物19：4-甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物20：4-甲氧基-1,3-貳(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物21：7-羥基-2-甲氧基-9,10-二氫菲-1,4-二酮，化合物22：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-4-甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物23(Phochinenin K)：7-甲氧基-8-[4-羥基-2-甲氧基-6-(3-羥基苯乙基)苯基]-9,10-二氫菲-2,5-二醇，化合物24：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-5-甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物25：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-5-甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物26：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4-甲氧基菲-2,7-二醇，化合物27：1-(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,7-二醇，化合物28：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4-甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物29：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-4,6-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇，化合物30：3-甲氧基-5-(2-苯基乙基)酚，化合物31：3-[2-(3-羥基苯基)乙基]-5-甲氧基酚，化合物32：3-[2-(3-甲氧基苯基)乙基]-5-甲氧基酚，化合物33：3-[2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)乙基]-5-甲氧基酚，化合物34：3-[2-(3-羥基-5-甲氧基苯基)乙基]-5-甲氧基-4-(4-羥基苯甲基)酚，化合物35：2-(4-羥基苯甲基)-3-甲氧基-5-(3-羥基苯-1-基)酚，化合物36：2,6-貳(4-羥基苯甲基)-3-(3-羥基苯-1-基)-5-甲氧基酚，化合物37：2-(4-羥基苯甲基)-3-(3-羥基苯-1-基)-5-甲氧基酚，化合物38：2,4-貳(對-羥基苯甲基)-3-(3-甲氧基苯-1-基)-5-甲氧基酚，化合物39：2,4-貳(對-羥基苯甲基)-3- -(3-羥基苯-1-基)-5-甲氧基酚，化合物40：β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷，化合物41：4-羥基苯甲基乙基醚，化合物42：4-羥基苯甲醛，化合物43(Militarin)：(2R)-2-羥基-2-(2-甲基丙基)丁二酸貳[[4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥基甲基)氧雜環己烷-2-基]氧基苯基]甲基]酯，化合物44：(2E)-3-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯基丙-2-烯酸4-(D-吡喃葡萄糖基)苯基甲基酯，化合物45：馬來酸1-(4-β-D-吡喃葡萄糖基氧基苯甲基)(2R)-4-甲基-2-異丁基酯，化合物46(天麻素(Gastrodin))：(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(羥基甲基)-6-[4-(羥基甲基)苯氧基]氧雜環己烷-3,4,5-三醇，化合物47(Dactylorhin A)：(2R)-2-(2-甲基丙基)-2-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥基甲基)氧雜環己烷-2-基]氧基丁二酸貳[[4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥基甲基)氧雜環己-2-基]氧基苯基]甲基]酯，化合物48：5-羥基甲基呋喃甲醛，化合物49(Densiflorol B)：7-羥基-2-甲氧基菲-1,4-二酮，化合物50：(2S)-5,2’-二羥基-7-甲氧基黃烷酮，化合物51：3-[2-(3,5-二甲氧基苯基)乙基]酚，化合物52(β-谷甾醇(sitosterol))：17-(5-乙基-6-甲基庚烷-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊并[a]菲-3-醇，化合物53(豆甾醇(stigmasterol))：(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-[(E,2R,5S)-5-乙基-6-甲基庚-3-烯-2-基]-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-十二氫-1H-環戊并[a]菲-3-醇，化合物54：(E)-4-羥基桂皮酸乙酯，化合物55：(Z)-4-羥基桂皮酸乙酯。

較佳具體例中，該提取物包含自化合物1至化合物10所成群組選擇之至少一種活性成分。

另一態樣中，本發明係關於自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離的活性成分。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物1：3,4-二甲氧基-8-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物2：3,4-二甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物3：3-甲氧基-1-[2-羥基-4-(2-(3-羥基)苯基)乙基-6-甲氧基]菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物4：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-4-甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物5：1-(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,6-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物6：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物7：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4,8-二甲氧基菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物8：1-(2,7-二羥基-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物9：1-(2,7-二羥基-3,4-二甲氧基菲-1-基)-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇。

一具體例中，該活性成分為本發明之化合物10：(2Z)-3-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)苯基丙-2-烯酸4-(D-吡喃葡萄糖基)苯基甲基酯。較佳具體例中，本發明係關於一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖1至圖3所示者(化合物1)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖4至圖6所示者(化合物物2)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖7至圖9所示者(化合物3)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖10至圖12所示者(化合物4)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖13至圖15所示者(化合物5)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖16至圖18所示者(化合物6)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖19至圖21所示者(化合物7)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖22至圖24所示者(化合物8)；一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹3C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖25至圖27所示者(化合物9)；以及一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖28至圖30所示者(化合物10)。

再一態樣中，本發明係關於包含上述提取物或活性成分的醫藥組成物。

一具體例中，該醫藥組成物包含自本發明化合物1至化合物55所成群組選擇之至少一種。

一較佳具體例中，該醫藥組成物包含自本發明化合物1至化合物10所成群組選擇之至少一種。

又一態樣中，本發明係關於上述提取物或自本發明化合物1至化合物55所成群組選擇之至少一種活性成分的用途，其係用於製備抗炎症藥物。

一具體例中，該藥物包含自本發明化合物1至化合物55所成群組選擇之至少一種活性成分。

一較佳具體例中，該藥物包含自本發明化合物1至化合物10所成群組選擇之至少一種活性成分。

可參考說明書、隨附之申請專利範圍、與圖式更佳了解本發明，其中：圖1為本發明化合物1之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖2為本發明化合物1之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖3為本發明化合物1之IR光譜圖。

圖4為本發明化合物2之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖5為本發明化合物2之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖6為本發明化合物2之IR光譜圖。

圖7為本發明化合物3之¹H NMR(700MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖8為本發明化合物3之¹³C NMR(175MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖9為本發明化合物3之IR光譜圖。

圖10為本發明化合物4之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖11為本發明化合物4之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖12為本發明化合物4之IR光譜圖。

圖13為本發明化合物5之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖14為本發明化合物5之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖15為本發明化合物5之IR光譜圖。

圖16為本發明化合物6之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖17為本發明化合物6之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖18為本發明化合物6之IR光譜圖。

圖19為本發明化合物7之¹H NMR(700MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖20為本發明化合物7之¹³C NMR(175MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖21為本發明化合物7之IR光譜圖。

圖22為本發明化合物8之¹H NMR(400MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖23為本發明化合物8之¹³C NMR(100MHz，丙酮-d ₆)光譜圖。

圖24為本發明化合物8之IR光譜圖。

圖25為本發明化合物9之¹H NMR(300MHz，CDCl₃)光譜圖。

圖26為本發明化合物9之¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)光譜圖。

圖27為本發明化合物9之IR光譜圖。

圖28為本發明化合物10之¹H NMR(400MHz，CD₃OD)光譜圖。

圖29為本發明化合物10之¹³C NMR(100MHz，CD₃OD)光譜圖。

圖30為本發明化合物10之IR光譜圖。

I. 植物材料

台灣白芨的地下莖係於2013年7月於台灣新竹縣寶山鄉採集。植物材料係經國立成功大學生命科學系郭長生副教授鑑定。證據標本(TSWu-20130711)係寄存於國立成功大學化學系。

II. 提取及單離

經研磨、空氣乾燥之台灣白芨的地下莖(10公斤)係於 60℃以乙醇提取(50公升，7次)且回流8小時。合併乙醇提取物且於減壓下蒸發得到殘質(818公克)。該殘質進行Diaion HP-20管柱層析，以水及乙醇混合物洗脫，根據TLC分析得到分液BF1(水100%洗脫)、BF2(水及乙醇混合物洗脫(水：乙醇=7：3))、BF3(水及乙醇混合物洗脫(水：乙醇=1：1))、BF4(水及乙醇混合物洗脫(水：乙醇=3：7))及BF5(乙醇100%洗脫)。

分液BF3(205.7公克)進行逆相-18管柱層析，以水及甲醇進行分級梯度洗脫，得到分液BF3-1至BF3-6。BF3-2重複進行逆相-18管柱層析，以水-甲醇(1：1)混合物洗脫，得到分液BF3-2-1至BF3-2-7。分液BF3-2-1進行逆相-18矽膠層析，以水-甲醇(7：3)混合物洗脫，得到本發明化合物46(Gastrodin)(21.5毫克)。分液BF3-2-4進行逆相-18矽膠層析，以水-甲醇(1：1)混合物洗脫，得到本發明化合物47(Dactylorhin A)(37.5毫克)、化合物44(Shancigusin I)(4.8毫克)、化合物48(0.8毫克)及化合物10(2.6毫克)。分液B3-2-5藉由再結晶醇化而獲得本發明化合物43(Militarin)(35公克)。分液BF3-3的分離係藉由矽膠層析進行，以正己烷-二異丙基醚(1：3)洗脫，獲得分液BF3-3-1至BF3-3-7。分液BF3-3-3進行矽膠層析，以二氯甲烷-甲醇(10：1)洗脫，獲得化合物45(29.3毫克)。

分液BF4(52.4公克)進行矽膠管柱層析，以氯仿及甲醇混合物進行分級梯度洗脫，獲得分液BF4-1至BF4-11。分液BF4-4的分離係進一步進行矽膠層析，以正己烷-二異丙基醚(2.5：1)洗脫，獲得分液BF4-4-1至BF4-4-11。分液BF4-4-3進行矽膠層析，以正己烷-氯仿梯度混合物(1：4)洗脫，獲得分液BF4-4-3-1及BF4-4-3-2。分液BF4-4-3-1係藉由HPLC(甲醇-水，70：30，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物32(7.33毫克)、化合物51(1.71毫克)及化合物50(2.7毫克)。分液BF4-4-3-2的純化係藉由HPLC(甲醇-水，65：35，流速2.0毫升/分鐘)，獲得化合物55(1.0毫克)及化合物54(1.6毫克)。分液BF4-4-6進行矽膠層析，以正己烷-氯仿(1：3)洗脫，獲得化合物17(6.2毫克)。分液BF4-4-7進行矽膠層析，以正己烷-氯仿(1：4)洗脫，獲得化合物12(4.9毫克)。

分液BF4-5重複進行矽膠管柱層析，以正己烷-二異丙基醚(1：1)洗脫，獲得分液BF4-5-1至BF4-5-11。分液BF4-5-2藉由再結晶純化，獲得化合物44(67.3毫克)。分液BF4-5-3進行矽膠層析，以正己烷-二異丙基醚梯度混合物(2：1)洗脫，獲得化合物42(18.3毫克)。分液BF4-5-4進行矽膠層析，以正己烷-二異丙基醚(2：1)洗脫，獲得化合物16(11.0毫克)。分液BF4-5-5進行逆相-18HPLC層析(甲醇-水，60：40，流速2.0毫升/分鐘)，獲得化合物11(2.6毫克)。分液BF-4-5-5-4藉由HPLC(甲醇-水，50：50，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物8(3.6毫克)及化合物9(1.8毫克)。分液BF4-5-6及BF2-5-7係藉由再結晶純化，分別獲得化合物33(15.1毫克)及化合物13(36.4毫克)。分液BF4-5-8進行矽膠層析，以氯仿-二異丙基醚 (19：1)洗脫，獲得化合物2(5.5毫克)。分液BF4-5-8-1藉由HPLC(甲醇-水，80：20，流速2.0毫升/分鐘)，獲得化合物21(3.6毫克)及化合物49(1.4毫克)。分液BF4-5-10進行矽膠層析，以正己烷-丙酮(2：1)洗脫，獲得化合物27(7.3毫克)及化合物5(4.0毫克)。

分液BF4-6重複進行矽膠管柱層析，以正己烷-乙酸乙酯(1：1)洗脫，獲得分液BF4-6-1至BF4-6-14。分液BF4-6-2及BF4-6-5藉由再結晶純化，分別獲得化合物31(499毫克)及化合物15(160毫克)。

分液BF2-6-10進行矽膠層析，以二氯甲烷-二乙丙基醚(20：1)洗脫，獲得化合物6(7.4毫克)。分液BF4-6-10-6藉由HPLC(甲醇-水，60：40，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物7(1.0毫克)。

分液BF4-7重複進行矽膠管柱層析，以正己烷-二異丙基醚(1：4)洗脫，獲得分液BF4-7-1至BF4-7-18。分液BF4-7-5進行矽膠層析，以氯仿-二異丙基醚(10：1)洗脫，獲得化合物18(11.6毫克)。分液BF4-7-6藉由再結晶純化，獲得化合物35(10.1毫克)。分液BF4-7-8進行矽膠層析，以二氯甲烷-丙酮(29：1)洗脫，獲得化合物19(152毫克)、化合物34(56.1毫克)、化合物1(5.7毫克)、化合物37(18.9毫克)、化合物14(20.4毫克)及化合物20(2.1毫克)。分液BF4-7-9進行矽膠層析，以氯仿-二乙丙基醚(6：1)洗脫，獲得化合物38(12.2毫克)及化合物36(15.5毫克)。分液BF4-7-11進行矽膠層析，以氯仿-二異丙基醚(6：1)洗脫，獲得化合物39(190毫克)。分液BF-4-7-12較行矽膠層析，以氯仿-甲醇(30：1)洗脫，獲得化合物29(29.5毫克)、化合物22(6.7毫克)、化合物25(9.3毫克)及化合物24(3.6毫克)。

分液BF4-7-13進行矽膠層析，以氯仿-甲醇(30：1)洗脫，獲得分液BF4-7-13-1至BF4-7-13-7。分液BF4-7-13-2藉由HPLC(甲醇-水，50：50，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物28(12.4毫克)及化合物26(8.9毫克)。分液BF4-7-13-5藉由HPLC(甲醇-水，60：40，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物23(11.5毫克)及化合物4(18.6毫克)。分液BF4-7-13-3藉由HPLC(甲醇-水，55：45，流速2.0毫升/分鐘)純化，獲得化合物3(12.2毫克)。

分液BF5進行矽膠管柱層析，以氯仿及甲醇分級梯度洗脫，得到11個分液BF5-1-11。分液BF5-3重複進行矽膠管柱層析，以正己烷-乙酸乙酯(7：1)洗脫，獲得分液BF5-3-1至BF5-3-17。分液BF5-3-10藉由再結晶純化，獲得化合物40(97.1毫克)。BF5-4進行矽膠層析，以正己烷-二異丙基醚(2：1)洗脫，獲得分液BF5-4-1至BF5-4-10。分液BF5-4-3進行矽膠層析，以正己烷-二氯甲烷(1：2)洗脫，獲得化合物30(15.7毫克)。分液BF5-4-4進行矽膠層析，以正己烷-二氯甲烷(1：2)洗脫，獲得化合物52及化合物53的混合物。

III. 醫藥組成物

自台灣白芨的地下莖所獲得的提取物，以芨自該提取物所單離的活性成分，亦可調配為醫藥組成物。本發明醫藥組成物中之提取物或活性成分的含量會隨下列因子而變化，如：特定化合物、疾病症狀及其嚴重性、需要治療之個體之特徵(例如：年齡、體重、條件、一般健康、其他藥物及過去病史)，但仍由所述技術領域者依慣例決定。通常此等醫藥組成物係製成適合所選擇投藥途徑，如：經口投藥或非經腸式投藥之單位劑型。本發明醫藥組成物中之活性成分實際劑量可以變化，以使所得到之活性成分用量可以針對特定個體、組成物、與投藥模式有效達到所需醫療反應，且不會對該個體造成毒性。所選擇之劑量程度會隨各種不同藥物動力學因素變化，包括特定醫療劑之活性、投藥途徑，投藥時間、所使用特定化合物之排泄速率、病症之嚴重性、影響該個體之其他健康考量、及該個體之肝臟與腎臟功能之狀況。

本發明之醫藥組成物包括醫療有效量之藥理活性成分與惰性之醫藥上可接受之載劑或稀釋劑。此等載劑可以讓本發明化合物調配成錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、溶液、懸浮液等。可採用各種不同醫藥型式，若使用固體載劑時，該製劑可壓成錠、呈粉末或丸粒型置入硬明膠囊中、或呈藥片或含片型。

在不妨礙本發明之提取物或活性成分的功效的情況下，本發明之醫藥組成物可包含其他成分，如安定劑、懸浮劑、勻散劑、抗氧化劑、螯合劑、潤滑劑、著色劑、或調味劑等。

本發明之醫藥組成物，可與其他製劑或藥劑組合投藥。當投藥超過一種製劑或藥劑時，該等製劑可以同時或實質上同時投藥或可依序投藥。當該等製劑依序投藥時，若該等製劑可組合成沒有不良之製劑之間交互作用之組成物且若該等製劑可呈單一醫藥組成物投藥，或者該等製劑可呈分開醫藥組成物投藥。

【實施例】

試驗步驟

旋光性係使用0.5dm細胞以JASCO P-2000數位偏光儀測定。

UV光譜係以Hitachi UV-3210光譜儀獲得。

IR光譜係以Shimadzu FTIR Prestige-21光譜儀測定。

¹H NMR光譜及¹³C NMR光譜係使用Bruker AVIII-100及AVIII-700NMR光譜儀測定，使用TMS作為內標準，以δ單位(ppm)表現化學位移。

關於HPLC，使用Merck Hibar Purospher Star RP-18e(10mm×250mm，直徑5μm)。

管柱層析使用矽膠(70至230及230至400篩孔，M默克)、Diaion HP-20樹脂(三菱化學，東京，日本)以及Spherical 100逆相矽膠(RP-18，粒徑20至40微米；Silicycle)。

TLC係使用矽膠60 F₂₅₄(默克)及RP-18 F₂₅₄₅(默克)

測定化合物10的糖構型

D-葡萄糖及L-葡萄糖之真實樣品(1毫克)係分別溶解於含有L-半胱胺酸甲基酯(5.0毫克)的吡啶(0.5毫升)中，且於60℃加熱1小時，然後對混合物添加異硫氰酸鄰甲苯酯(5毫克)後於室溫再反應1小時。反應混合物(2毫升)藉由HPLC(purospher STAR RP-18e管柱；5μm，250×4.6mm)且於250偵測。於29.6及32.3分鐘的峰係來自L-葡萄糖及D-葡萄糖的衍生物。

化合物10(0.5毫克)係藉由於0.5M鹽酸中加熱而水解且使用Amberlite IRA400中和。真空乾燥後，殘質溶解於含有L-半胱胺酸甲基酯鹽酸鹽(5.0毫克)的吡啶(0.5毫升)中，且於60℃加熱1小時。對混合物添加異硫氰酸鄰甲苯酯(0.5毫克)於吡啶之溶液0.1毫升後，該混合物於室溫再反應1小時。化合物10的水解物4-(R)-羧酸2-(多羥基己基)-3-(鄰甲苯基胺硫甲醯基)-噻唑啶酯的HPLC分析，顯示對應於D-葡萄糖衍生物之虞32.1分鐘的峰。

製備人類嗜中性球

人類嗜中性球係採用於Ficoll Hypaque裝置的離心及紅血球的低滲透壓裂解前聚葡萄糖沉降的標準方法單離。使用成功紀念醫院的機構審查委員會所核准的方案(IRB方案編號：102-1595A3)，藉由靜脈穿刺，分別自健康捐贈者(20至30歲)獲得全血。經純化的嗜中性球係重懸於pH7.4的無鈣離子漢克斯平衡鹽溶液(Ca²⁺-free Hank’s balanced salt solution)緩衝液且於使用前維持於4℃。

測定超氧化物陰離子的產生

本發明所使用的超氧化物陰離子產生分析係根據藉由超氧化物岐化酶(SOD)所抑制的鐵細胞色素c的降低。具體地，嗜中性球(6×10⁵細胞/毫升)係以0.5毫克/毫升的鐵細胞色素c及1mM Ca²⁺於37℃平衡2分鐘，然後與各測試化合物或等量的媒劑(0.1% DMSO，陰性對照)培養5分鐘。細胞與細胞鬆弛素(cytochalasin)B(CB，1微克/毫升)培養3分鐘，之前藉由甲醯基-L-甲硫胺醯基-L-白胺醯基-L-苯丙胺醯基(FMLP，100nM)活化。具有鐵細胞色素c的降低的吸收變化，於550nm持續偵測，採用雙光束的具有持續攪拌的可放置6個測光管的光度計(Hitachi U-3010，東京，日本)。藉由反應中有或無SOD(100U/毫升)的差異除以對於鐵細胞色素c的降低的消光係數(ε=21.1/mM/10mm)進行計算。使用CAL-101(Idelalisib)作為陽性對照。結果示於表1。

彈性蛋白酶釋放分析

嗜苯胺顆粒的去顆粒化係藉由彈性蛋白酶釋放予以測定。試驗係使用MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺作為彈性蛋白酶的受質而進行。具體地，嗜中性球(6×10⁵細胞/毫升)係以MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺(100μM)於37℃平衡2分鐘，然後與各測試化合物或等量的媒劑(0.1% DMSO，陰性對照)培養5分鐘。細胞藉由100nM的FMLP及0.5μM/毫升的CB活化。於405nm的吸收變化係持續偵測以分析彈性蛋白酶釋放。結果以無藥物對照系統，表現為經FMLP/CB或化的彈性蛋白酶釋放百分比。使用CAL-101作為陽性對照。結果示於表1。

結果顯示，於FMLP-活化之人類嗜中性球中，抑制超氧化物陰離子的產生及彈性蛋白酶的釋放的IC₅₀值，分別範圍為0.2至6.5μM及0.3至5.7μM。本發明之自台灣白芨的地下莖的提取物所單離之活性成份，具有抗炎性活性。

本文說明之本發明可在缺少本文未明確揭示之任何元素或元素群、限制或多重限制下操作，因此，本發明說明書中所揭示及使用的術語應廣義解讀且沒有限制。應了解，雖然本發明已利用較佳具體例及選用之特徵明確說明，但所屬技術領域中具有通常知識者仍可在本文所揭示本發明範疇內進行修飾與變化，且此等修飾與變化均視為本文所揭示本發明範疇內。本發明已於本文中廣義且一般說明。

若本發明之特色或態樣採用馬庫西群組(Markush group)說明，所屬技術領域中具有通常知識者應了解，本發明亦可利用馬庫西群組之任何個別組員或組員之小組說明，亦應了解，上述說明係例示性說明，並無限制性。許多具體例係所屬技術領域中具有通常知識者從上述說明即可了解。因此本發明的範圍不應由上述說明決定，而應由隨附之申請專利範圍連同此等申請專利範圍所主張之均等物之全範圍來決定。所有文件與參考文獻以引用之方式併入本文中。

Claims

一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物1：3,4-二甲氧基-8-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物2：3,4-二甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)菲-2,7-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物3：3-甲氧基-1-[2-羥基-4-(2-(3-羥基)苯基)乙基-6-甲氧基]菲-2,7-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物4：3-(2,7-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-4-甲氧基-1-(4-羥基苯甲基)-9,10-二氫菲-2,7-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物5：1-(2,7-二羥基-4,6-二甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,6-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物6：1-(2,7-二羥基-4-甲氧基菲-1-基)-4,6-二甲氧基菲-2,7-二醇。
一種活性成分，其係自台灣白芨的地下莖獲得的提取物所單離者，其中，該活性成分為化合物8：1-(2,7-二羥基-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-1-基)-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲-2,7-二醇。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖1至圖3所示者(化合物1)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖4至圖6所示者(化合物2)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖7至圖9所示者(化合物3)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖10至圖12所示者(化合物4)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖13至圖15所示者(化合物5)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖16至圖18所示者(化合物6)。
一種化合物，其係具有¹H NMR光譜圖、¹³C NMR光譜圖及IR光譜圖，分別相同於圖22至圖24所示者(化合物8)。
一種醫藥組成物，其係包含申請專利範圍第1至7項中任一項之活性成分或申請專利範圍第8至14項中任一項之化合物作為活性成分，以及醫藥上可接受之載劑。
一種如申請專利範圍第1至7項中任一項之活性成分的用途，其係用於製備抗炎性藥物。
一種如申請專利範圍第8至14項中任一項之化合物的用途，其係用於製備抗炎性藥物。