TWI524893B - ６－胺基喹唑啉或３－氰基喹啉類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用 - Google Patents

Description

6-胺基喹唑啉或3-氰基喹啉類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用

本發明涉及一種新的6-胺基喹唑啉或3-氰基喹啉類衍生物、其製備方法及含有該衍生物的醫藥組成物以及其作為治療劑特別是作為蛋白激酶抑制劑的用途。

信號傳導作為細胞的一種基礎調節機制，將胞外的各種信號傳遞到細胞內部，使細胞做出相應的生物應答，實現諸如增殖、分化、凋亡等過程。大多數的信號傳導是利用蛋白質可逆的磷酸化過程實現的，其中涉及到特定蛋白激酶和磷酸酶。

蛋白激酶(PKs)可以分成兩類：蛋白酪胺酸激酶(PTKs)和絲胺酸－蘇胺酸激酶(STKs)。PTKs可使蛋白質上的酪胺酸殘基磷酸化，STKs可以磷酸化絲胺酸、蘇胺酸殘基。酪胺酸激酶又可以分為受體型(receptor tyrosine kinase，RTKs)和非受體型(non-receptor tyrosine kinase)。目前，在人類基因中已有90種酪胺酸激酶編碼基因被識別，其中約60種是受體型，約30種是非受體型。

RTKs家族可劃分為許多亞族：諸如(1)表皮生長因子受體家族，成員包括EGFR,HER-2，HER-3，HER-4；(2)胰島素受體家族，包括胰島素受體IR、胰島素樣生長因子I受體(IGF-IR)和胰島素受體相關性受體(IRR)；(3)III型家族，如血小板衍生生長因子受體PDGFR，幹細胞因子SCF(c-Kit)，fms-相關酪胺酸激酶3(Flt3)受體和集落刺激因子1受體(CSF-1R)等等。此外，如肝細胞生長因子受體c-Met，血管內皮生長因子受體VEGFR等也屬於RTKs家族成員。它們在調節細胞週期和分化凋亡方面均起著關鍵作用，也是誘導生長因子等細胞因子生成的信號通路上的關鍵信號傳遞者，參見Schlessinger and Ullrich,Neuron 1992,9,383。

EGFR(ErbB，HER)亞族在調控細胞增殖和存活的諸多過程中都扮演著非常重要的角色。結構上，該家族受體由胞外的配體結合區域、跨膜區域及胞內催化區域三部分組成。其酪胺酸激酶活性經由配體介導的受體間同型或異型二聚化過程被啟動，二聚化使受體催化區內的酪胺酸殘基磷酸化，並作為後續信號分子的結合位元點(binding site)，從而啟動下一級信號級聯，諸如絲裂原啟動蛋白激酶(MAP激酶)和磷脂醯肌醇激酶(PIP-3激酶)，這些信號級聯的啟動能夠調節細胞週期和細胞調亡。在大部分人類實體腫瘤中，如乳腺癌、前列腺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌等，都有EGFR、HER-2發生突變異常活化或過度表現的情況，從而使其與腫瘤發生發展的關聯性得到了進一步確認。

作為RTKs Class III成員的血小板衍生生長因子受體(PDGFR)，c-Kit和fms-相關酪胺酸激酶3(FLT-3)，其結構和活化過程均與EGFR家族類似，經由二聚化過程活化傳遞信號，從而調節細胞的增殖，分化和遷移，以及血管生成過程。因而該家族成員與腫瘤的發生發展也有著密切的關係。例如對不同實體瘤中的c-Kit表現情況進行研究，在小細胞支氣管癌、睾丸瘤、黑素瘤、乳房癌、成神經細胞瘤中都發現c-Kit的高度表現，尤其是胃腸道膠質瘤(GIST)，參見Weber等,J. Clin. Oncol. 22(14S),9642(2004)。大多數的(50至80%)GIST均是由於c-Kit基因發生突變而產生。突變能夠使c-Kit具有持續活化的酪胺酸激酶活性，從而使細胞分裂率增加，導致基因組的不穩定，從而誘發癌變。

受體酪胺酸激酶家族的另外一個重要成員是血管內皮生長因子受體(VEGFR)。VEGFR與血管生成密切相關，VEGF與其結合後可啟動相關信號通路促進血管生成。最近的證據表明，VEGF能夠誘導內皮細胞增殖和遷移促進毛細血管生成，從而形成超滲透、不成熟的血管網路，提供營養幫助腫瘤生長。除了其促血管生成活性，VEGFR及VEGF也可以在腫瘤細胞內直接經由促存活(pro-survival)性質促進腫瘤生長。研究發現，VEGFR在各種惡性實體腫瘤中，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和黑素瘤中均有強烈表現，因此經由抑制VEGFR活性而實現抑制腫瘤生長，對於腫瘤治療有很大的應用價值。

此外，作為RTKs成員的肝細胞生長因子受體c-Met(HGFR)，經大量文獻證實其與腫瘤生成、侵襲和轉移，細胞運動性增強等也密切相關(參見Ma,P.C等(2003b). Cancer Metastasis Rev.,22,309-25;Maulik,G.等(2002b). Cytokine Growth Factor Rev,13,41-59)。

作為PTKs的另一成員，非受體型酪胺酸激酶[縮寫為NRTKs或CTKs(細胞質酪胺酸激酶)]，是細胞質中的蛋白酪胺酸激酶，與RTKs相比缺少胞外功能域和跨膜域結構。CTKs的酪胺酸活性與腫瘤也有密切關係，關於CTKs更為詳盡的描述，可參見iBolen,1993,Oncogen 8：2025-2031。

癌症的兩個最主要特徵是腫瘤細胞基因組不穩定和調節細胞週期和增殖分裂相關的信號通路的失控。基因組不穩定導致部分信號傳導的關鍵調節蛋白的生物功能發生改變或喪失，使信號傳導過程遭到干擾或破壞，異常的信號通路無法正常調節控制細胞週期進程和細胞凋亡，使得腫瘤細胞能夠在基因損傷的狀態下持續存活和增殖。作為實現這些調節過程的根本，PKs，包括上面討論的受體RTKs和細胞質PTKs(CTKs)與腫瘤的發生發展過程息息相關，從而成為治療腫瘤疾病的重要靶點。

人們期待著能夠合成具有抑制腫瘤細胞增殖活性的化合物，希望能夠經由抑制RTKs、CTKs或者STKs中的一種或者多種，從而有效地治療和改善非正常條件下由RTKs、CTKs或者STKs以及血管生成作用介導的細胞非正常增殖造成的生理紊亂。

目前已公開一系列的蛋白激酶抑制劑的文獻，如WO00/18761A1、WO2003089439A1、WO2005028443A1和WO2007055514A1等公開了喹啉或喹唑啉衍生物的藥物，其用途及製備方法。Hwei-Ru Tsou等，在J. Med. Chem. 48,1107-1131(2005)中也公開了喹啉類衍生物作為蛋白激酶抑制劑。

儘管目前已公開了一系列的治療腫瘤的蛋白激酶抑制劑，但仍需要開發新的具有更好的藥效、藥代結果的化合物，經過不斷努力，本發明設計具有通式(I)所示的化合物，並發現具有此類結構的化合物表現出優異的效果和作用。

為了克服現有技術的不足之處，本發明的目的在於提供一種通式(I)所示的新的6-胺基喹唑啉或3-氰基喹啉類衍生物，以及它們的互變異構體、對映體、非對映體、消旋體和可藥用的鹽，以及代謝產物和代謝前體或前藥，

其中：A選自碳原子或氮原子；當A為碳原子時，R¹選自氫原子或烷氧基，其中所述的烷氧基視需要進一步被一個或多個選自鹵素或烷氧基的取代基所取代，R²選自氰基；當A為氮原子時，R¹選自氫原子或烷氧基，其中所述的烷氧基視需要進一步被一個或多個選自鹵素或烷氧基的取代基所取代，R²無取代；R³具有下列結構：或─D；其中：D選自芳基或雜芳基，其中所述的芳基或雜芳基各自獨立地視需要進一步被一個或多個選自鹵素、烷基或三氟甲基的取代基所取代；T選自-(CH₂)r-，-O(CH₂)r-，-NH(CH₂)r-或-S(CH₂)r；L選自芳基或雜芳基，其中所述的芳基或雜芳基各自獨立地視需要進一步被一個或多個鹵素或烷基所取代；R⁴和R⁵各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、羥基、羥烷基、鹵素、羰基、胺基、氰基、硝基、羧酸或羧酸酯；B選自碳原子、氧原子或S(O)r基團；當B為碳原子時，R⁶和R⁷各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、羥基、羥烷基、鹵素、羰基、胺基、氰基、硝基、羧酸或羧酸酯；當B為氧原子或S(O)r基團時，R⁶和R⁷無取代；R⁸選自氫原子或烷基；R⁹選自氫原子、烷基、環烷基、芳基、羧基或羧酸酯；r為0、1或2；且n為1、2、3、4或5。

較佳地，一種通式(I)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中包括通式(IIA)或(IIB)所示的的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽：

其中，所述的A、B、R¹至R⁹和n的定義如通式(I)中所定義。

較佳地，一種通式(IIA)或(IIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中A為碳原子，R¹選自烷氧基，且R²選自氰基。

較佳地，一種通式(IIA)或(IIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中A為氮原子，R¹選自氫原子，且R²無取代。

較佳地，一種通式(IIA)或(IIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中n為2。

較佳地，一種通式(IIA)或(IIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中包括通式(IIIA)或(IIIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽：

其中：A、R¹至R³、R⁶、R⁹和n的定義如通式(IIA)或(IIB)所定義。

較佳地，一種通式(IIA)或(IIB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，其中包括通式(IVA)或(IVB)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽：

其中：A、R¹至R³、R⁶和R⁹的定義如通式(IIA)或(IIB)所定義。

本發明的較佳化合物包括，但不限於：

或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽。

本發明的另一方面涉及一種如下列通式(V)所示的化合物，其作為通式(I)化合物合成的中間體：

其中：R¹為烷氧基；A、R¹至R³如通式(I)所定義。

本發明的另一方面涉及一種製備通式(V)化合物的方法，所述方法包括以下步驟：

通式(V_1)化合物轉化為通式(V)化合物；其中：A和R¹至R³的定義如通式(V)中所述。

本發明的另一個方面是提供一種製備通式(I)的化合物或其可藥用的鹽的方法，所述方法包括以下步驟：

通式(V)化合物與通式(VI)化合物反應得到通式(I)化合物。

其中：R¹為烷氧基；A、B、n和R¹至R⁹的定義如通式(I)中所述。

本發明的另一個方面是提供一種製備通式(IIA)或(IIB)的化合物或其可藥用的鹽的方法，所述方法包括以下步驟：

通式(V)化合物與通式(VIA)化合物反應得到通式(IIA)化合物；或者，

通式(V)化合物與通式(VIB)化合物反應得到通式(IIB)化合物；其中：A、B、n、R¹至R⁹的定義如通式(IIA)或(IIB)中所述。

本發明涉及作為抑制VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合的激酶的藥物的本發明通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽。

本發明涉及本發明通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽在製備VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合的激酶抑制劑中的用途。

本發明涉及通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽在製備治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物中的用途，所述蛋白激酶選自受體酪胺酸激酶、非受體酪胺酸激酶或絲胺酸-蘇胺酸激酶，其中所述的受體酪胺酸激酶選自VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合。

本發明還涉及治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物的通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽，所述蛋白激酶選自受體酪胺酸激酶、非受體酪胺酸激酶或絲胺酸-蘇胺酸激酶，其中所述的受體酪胺酸激酶選自VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合。

本發明涉及本發明通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽在製備治療癌症的藥物中的用途，其中所述的癌症為肺癌、乳腺癌、表皮鱗癌或胃癌。

本發明還涉及作為治療癌症的藥物的本發明通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽。

本發明的一個方面是提供一種醫藥組成物，含有通式(I)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽或其前藥和可藥用的載體或賦形劑。所述醫藥組成物在製備治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物中的用途，所述蛋白激酶選自VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合激酶。所述醫藥組成物在製備治療癌症的藥物中的用途，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鱗癌或胃癌。

本發明的一個方面涉及一種製備醫藥組成物的方法，所述方法包括將通式(I)所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽或其前藥與可藥用載體或稀釋劑相結合。

本發明的另一個方面是提供一種蛋白激酶催化活性的調節方法，包括使蛋白激酶與通式(I)的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽相接觸，所述蛋白激酶選自VEGFR、EGFR、HER-2、HER-3、HER-4、c-Met、Jak3受體酪胺酸激酶或它們的組合激酶。

本發明涉及一種治療腫瘤的方法，該方法包括將通式(I)化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、及其混合物形式、及可藥用的鹽單獨給藥，或與其他藥物聯合給藥。聯合給藥的藥物包括抗腫瘤類藥物，其中所述的抗腫瘤藥物包括曲妥珠單抗(Trastuzumab，Herceptin)，西妥昔單抗(Cetuximab)，拉帕替尼(Lapatinib)，來那替尼(neratinib)，來曲唑(Letrozole)，卡培他濱(Capecitabine)，拓撲替康(Topotecan)和多西他賽(Docetaxel)等藥物。

(發明的詳細說明)

除非有相反陳述，在說明書和權利要求書中使用的術語具有下述含義。

“烷基”指飽和的脂族烴基團，包括1至20個碳原子的直鏈和支鏈基團。較佳含有1至12個碳原子的烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更較佳的是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。

“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包括3至20個碳原子，較佳包括3至12個碳原子，更較佳環烷基環包含3至10個碳原子。單環環烷基的非限制性實施例包含環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等。多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。

“螺環烷基”指5至20員，單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺環烷基、雙螺環烷基基或多螺環烷基，較佳為單螺環烷基和雙螺環烷基。更較佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實施例包含

“稠環烷基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，較佳為雙環或三環，更較佳為5員/5員或5員/6員雙環烷基。稠環烷基的非限制性實施例包含

“橋環烷基”指5至20員，任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實施例包含

所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯並環庚烷基等。環烷基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。

“芳基”指6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共用毗鄰碳原子對的環)基團，具有共軛的π電子體系的多環(即其帶有相鄰對碳原子的環)基團，較佳為6至10員，例如苯基和萘基。所述芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，非限制性實施例包含：

芳基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。

“雜芳基”指包含1至4個雜原子，5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子包括氧、硫和氮。較佳為6至10員。雜芳基較佳為是5員或6員，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包含：

雜芳基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。

“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包括3至20個環原子，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)n(其中n是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包括3至12個環原子，其中1至4個是雜原子，更較佳環烷基環包含3至10個環原子。單環環烷基的非限制性實施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基等。多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。“螺雜環基”指5至20員，單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)_p(其中p是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺環烷基和雙螺環烷基。更較佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實施例包含

“稠雜環基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)_p(其中p是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環烷基，較佳為雙環或三環，更較佳為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實施例包含

“橋雜環基”指5至14員，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)_p(其中p是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更較佳為7至10員。7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實施例包含：

所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，非限制性實施例包含：

等。雜環基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。

“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未取代的環烷基)，其中烷基的定義如上所述。非限制性實施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基等。烷氧基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自為烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羰基、羧酸或羧酸酯。“羥基”指-OH基團。

“羥烷基”指-烷基-OH，其中烷基定義如上所述。

“鹵素”指氟、氯、溴或碘，較佳為氟或氯。

“羰基”指-C(=O)-。

“硝基”指-NO₂。

“氰基”指-CN。

“胺基”指-NH₂。

“羧酸”指-C(=O)OH。

“羧酸酯”指-C(=O)O烷基。

“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“視需要被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

(本發明化合物的合成方法)

為了完成本發明的目的，本發明採用如下技術方案：本發明通式(I)化合物或其可藥用的鹽的製備方法，包括以下步驟：

在縮合試劑存在的條件下，將通式(V_1)化合物與磷酸二乙酯基乙酸反應製備通式(V)化合物；乾冰浴冷卻下，通式(V)化合物與雙三甲基矽基胺基鋰反應，反應液升至室溫與通式(VI)化合物發生Wittig反應得到通式(I)化合物；其中：基團A，B，n和R¹至R⁹的定義如通式(I)中所述。

本發明通式(IIA)或(IIB)化合物或其可藥用的鹽的製備方法，包括以下步驟：

乾冰浴冷卻下，通式(V)化合物與雙三甲基矽基胺基鋰反應，反應液升至室溫與通式(VIA)化合物發生Wittig反應得到通式(IIA)化合物；或者，

乾冰浴冷卻下，通式(V)化合物與雙三甲基矽基胺基鋰反應，反應液升至室溫與通式(VIB)化合物發生Wittig反應得到通式(IIB)化合物；其中：基團A，n，R¹至R⁹的定義如通式(IIA)或(IIB)中所述。

以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。

(實施例)

化合物的結構是經由核磁共振(¹H NMR)和/或質譜(MS)來確定的。¹HNMR位移(δ)以百萬分之一(ppm)的單位給出。¹H NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代甲醇(CD₃OD)、氘代氯仿(CDCl₃)，六氘代二甲基亞碸(DMSO-d ₆ )，內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用FINNIGAN LCQAd(ESI)質譜儀(生產商：Thermo,型號：Finnigan LCQ advantage MAX)。

HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150×4.6mm色譜柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18 150×4.6mm色譜柱)。

IC₅₀值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)。

薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15 mm至0.2 mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4 mm至0.5 mm。

矽膠柱一般使用煙臺黃海矽膠200至300目矽膠為載體。

鹼性氧化鋁柱一般使用國藥層析用FCP200至300目鹼性氧化鋁為載體。

本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可以於ABCR GmbH & Co. KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)和達瑞化學品等公司處購買。

實施例中無特殊說明，反應均在氮氣或氬氣氛圍下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1 L容積的氬氣或氮氣氣球。

氫氣氛是指反應瓶連接一個約1 L容積的氫氣氣球。

加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。

氫化反應通常抽真空，充入氫氣，反複操作3次。

實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫。

室溫為最適宜的反應溫度，為20℃至30℃。

實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑的體系有：二氯甲烷和甲醇體系，正己烷和乙酸乙酯體系，石油醚和乙酸乙酯體系，丙酮，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節。

純化化合物採用的柱層析的洗脫劑的體系和薄層色譜法的展開劑的體系包括：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：二氯甲烷和丙酮體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺等鹼性或醋酸等酸性試劑進行調節。

實施例1 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 (2S)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛

乾冰浴下將草醯氯(1.1 mL，13.02 mmol)溶解於二甲亞碸(1.9 mL，26.04 mmol)中，反應30分鐘，滴加25 mL[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇1a(1 g，8.68 mmol)的二氯甲烷溶液，-30℃繼續攪拌45分鐘，滴加三乙胺(6.15 g，60.77 mmol)，室溫反應12小時。向反應液中加入250 mL二氯甲烷，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(100 mL)，飽和氯化銨溶液(100 mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(100 mL)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用鹼性氧化鋁柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(2S)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛1b(308 mg,淡黃色液體)，產率：31.4%。

第二步 N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺

將N,N’-羰基二咪唑(487 mg,3 mmol)溶解於4 mL四氫呋喃中，油浴升溫至40℃，向反應液中滴加4 mL磷酸二乙酯基乙酸(588 mg,3 mmol)的四氫呋喃溶液，反應30分鐘備用。

40℃下將6-胺基-4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-7-乙氧基-喹啉-3-腈1c(446 mg，1 mmol，採用公知的方法“WO2005028443”製備而得)溶解於4 mL四氫呋喃中，滴加上述備用反應液，反應12小時。反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30 mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘留物，得到標題產物N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(624 mg，淡黃色固體)，產率：99.9%。

MS m/z(ESI): 624[M+1]

第三步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

-78℃下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(50 mg，0.08 mmol)溶解於2 mL四氫呋喃中，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(80μL，0.08 mmol)，攪拌45分鐘，向反應液中加入(2S)-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛1b(20 mg，0.17 mmol)，繼續攪拌1小時後，室溫反應12小時。向反應液中加入1 mL水和1 mL甲醇。用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘留物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺　1(25 mg，黃色固體)，產率：53.5%。

MS m/z(ESI): 583[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ9.63(s,2H),8.95(s,1H),8.60(d,1H),8.48(s,1H),7.89(t,1H),7.59(d,1H),7.37(m,3H),7.27-7.20(m,2H),6.80-6.60(m,2H),5.29(s,2H),4.34(dd,2H),2.33-2.24(m,3H),2.23-2.15(m,2H),1.99-1.88(m,3H),1.80-1.78(m,2H),1.49(t,3H)

實施例2 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 (2S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

冰浴下將[(2S)-吡咯烷-2-基]甲醇2a(5.06 g，0.05 mmol)和三乙胺(10.12 g，0.10 mmol)溶解於100 mL二氯甲烷中，分批加入二碳酸二叔丁基酯(16.37 g，0.08 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產物(2S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2b(10 g,淡黃色液體)，產率：99.9%。

第二步 (2S)-2-甲醯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

乾冰浴下將草醯氯(3.2 mL，0.04 mol)和二甲亞碸(4.3 mL，0.06 mol)溶解於100 mL二氯甲烷中，反應30分鐘，滴加20 mL(2S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2b(2 g，0.01 mol)的二氯甲烷溶液，繼續攪拌45分鐘，滴加三乙胺(7.08 g，0.07 mol)，0℃攪拌反應1小時。向反應液中加入500 mL二氯甲烷，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌(100 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(2S)-2-甲醯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2c(1.10 g,淡黃色液體)，產率：55.4%。

第三步 (2S)-2-[(E)-3-[[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]胺基]-3-氧代-丙-1-烯基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(156 mg，0.25 mmol)溶解於3 mL四氫呋喃中，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(375μL，0.38 mmol)，攪拌反應45分鐘，向反應液中加入2 mL(2S)-2-甲醯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2c(100 mg，0.50 mmol)的四氫呋喃溶液，反應1小時，室溫繼續反應12小時。反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(2S)-2-[(E)-3-[[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]胺基]-3-氧代-丙-1-烯基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2d(161 mg，淡黃色固體)，產率：96.2%。

MS m/z(ESI): 669[M+1]

第四步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

將(2S)-2-[(E)-3-[[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]胺基]-3-氧代-丙-1-烯基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯2d(161 mg，0.24 mmol)溶解於25 mL 2M1,4-二氧六環的氯化氫溶液中，反應12小時。反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺2(20 mg，黃色固體)，產率：14.6%。

MS m/z(ESI): 569.4[M+1]

¹H NMR(400M Hz,DMSO-d ₆ ):δ10.01(s,1H),9.76(s,1H),9.71(s,2H),9.40(s,1H),8.92(s,1H),8.61(s,1H),8.60(s,1H),7.90(t,1H),7.60(d,1H),7.58-7.41(s,2H),7.39-7.38(m,2H),6.95(dd,1H),6.79(d,1H),5.29(s,1H),4.35(t,2H),4.21-4.20(m,1H),3.23-3.22(m,3H),2.21-2.20(m,1H),2.039-1.94(m,1H),1.84-1.76(m,1H),1.49(t,3H)

實施例3 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 (2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯

冰浴下將(2S,4R)-4-羥基-吡咯烷-2-羧酸甲酯3a(5.53 g，38 mmol)溶解於80 mL甲醇中，加入40%甲醛溶液(31 mL，380 mmol)，緩慢分批加入氰基硼氫化鈉(12 g，190 mmol)，攪拌反應0.5小時，室溫繼續攪拌3小時。加入40mL水淬滅反應，減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(80 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到標題產物(2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯3b(粗品，無色油狀物)，直接用於下步反應。

第二步 (2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯

將(2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯3b(6 g，37 mmol)溶解於100 mL二氯甲烷中，依次加入咪唑(7.70 g，113 mmol)和二甲基叔丁基氯矽烷(6.80 g，45 mmol)，反應12小時。用100 mL二氯甲烷稀釋反應液，依次用水(50 mL)，飽和氯化鈉溶液洗滌(50 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯3c(粗品，無色油狀物)，產物不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI): 274[M+1]

第三步 [(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲醇

冰浴下將(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯3c(2.50 g，9.10 mmol)溶解於50 mL二氯甲烷中，緩慢滴加二異丁基氫化鋁(18 mL，18 mmol)，反應6小時。加入1 mL甲醇淬滅反應，用200 mL二氯甲烷稀釋反應液，再向其中加入無水硫酸鈉攪拌30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，用鹼性氧化鋁柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物[(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲醇3d(570 mg，黃色油狀物)，產率：50.0%。

MS m/z(ESI): 246[M+1]

第四步 (2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛

乾冰浴下將二甲亞碸(174μL，2.45 mmol)溶解於20 mL二氯甲烷中，待體系溫度穩定後，緩慢滴加草醯氯(156μL，1.80 mmol)，反應30分鐘，滴加2 mL[(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲醇3d(300 mg，1.20 mmol)的二氯甲烷溶液，反應45分鐘，加入三乙胺(510μL，3.67 mmol)，繼續攪拌反應10分鐘，室溫反應1小時，用100 mL二氯甲烷稀釋反應液，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(20 mL)，飽和氯化銨(20 mL)，飽和氯化鈉溶液洗滌(20 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到標題產物(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛3e(320 mg，黃色油狀物)，粗品直接下一步反應。

第五步 (E)-3-[(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]丙-2-烯醯胺

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(418 mg，0.67 mmol)溶解於2.5 mL四氫呋喃中，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(1 mL，1 mmol)，反應45分鐘，向反應液中加入2.5 mL(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛3e(326 mg，1.34 mmol)的四氫呋喃溶液，反應1小時，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-3-[(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]丙-2-烯醯胺3f(292 mg，黃色固體)，產率：61.2%。

MS m/z(ESI): 713[M+1]

第六步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

將(E)-3-[(2S,4R)-4-(叔丁基(二甲基)矽基)氧基-1-甲基-吡咯烷-2-基]-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]丙-2-烯醯胺3f(50 mg，0.07 mmol)和四丁基氟化銨(51 mg，0.21 mmol)溶解於5 mL四氫呋喃中，反應12小時。加入1 mL水，反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2S,4R)-4-羥基-1-甲基-吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺3(17 mg，黃色固體)，產率：40.4%。

MS m/z(ESI): 599.4[M+1]

¹H NMR(400M Hz,DMSO-d ₆ ):δ9.63(s,1H),9.52(s,1H),8.97(s,1H),8.61-8.60(m,1H),8.48(s,1H),7.904-7.862(m,1H),7.60(d,1H),7.41-7.36(m,3H),7.28-7.20(m,2H),6.76(dd,1H),6.61(d,1H),5.29(s,2H),4.82(s,1H),4.35-4.29(m,2H),4.21(d,1H),3.42-3.38(m,2H),3.36-3.33(m,3H),2.93(d,1H),2.41-2.37(m,1H),2.20-2.18(m,1H),1.49(t,3H)

實施例4 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 4-氯-6-硝基-喹唑啉

將6-硝基-3H-喹唑啉-4-酮4a(18.88 g,99.40 mmol)加入到五氯化磷(31.03 g,149 mmol)中，混合液加熱至160℃，反應3小時。將反應液趁熱加入到250 mL正己烷中，攪拌有大量固體析出，過濾，濾餅用正己烷洗滌，真空下乾燥，得到粗品4-氯-6-硝基-喹唑啉4b(18.14g，黃色固體)，產率：87.2%。

第二步 N-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]-6-硝基-喹唑啉-4-胺

將粗品4-氯-6-硝基-喹唑啉4b(6.06 g，28.90 mmol)溶解於100 mL異丙醇中，加入3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺4c(7.47 g，31.8 mmol)，加熱回流反應5小時。反應液冷卻至室溫，有固體析出，過濾，濾餅依次用乙酸乙酯，飽和氯化鈉溶液(50 mL)和水洗滌(150 mL)，真空下乾燥，得到N-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]-6-硝基-喹唑啉-4-胺4d(8.38 g，黃色固體)，產率：74.8%。

MS m/z(ESI): 319[M+1]

第三步 N4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]喹唑啉-4,6-二胺

將N-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]-6-硝基-喹唑啉-4-胺4d(4.07g，10 mmol)和濃鹽酸(2 mL，24 mmol)溶解於130 mL 95%乙醇和水的混合溶劑(V/V=10:3)中，加入鐵粉(11.17 g，200 mmol)，反應液加熱回流反應2小時。趁熱過濾，濾液在減壓下蒸出乙醇，殘留液用胺水調節至pH>7，過濾，濾餅在真空下乾燥，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得固體，得到N4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]喹唑啉-4,6-二胺4e(2.04 g，白色固體)，產率：54.1%。

MS m/z(ESI): 378[M+1]

第四步 N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺

冰浴下將磷酸二乙酯基乙酸(1.04 g,5.30 mmol)溶解於10 mL二氯甲烷中，向反應液中滴加草醯氯(1.34 g,10 mmol)和1滴N,N-二甲基甲醯胺，反應1小時，室溫繼續攪拌1小時，減壓濃縮，加入10 mL四氫呋喃備用。

冰浴下將N4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]喹唑啉-4,6-二胺4e(1 g，2.65 mmol)溶解於N,N-二異丙基乙胺中(1.03 g，7.94 mmol)，滴加上述備用溶液，室溫反應1小時。將反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘留物，得到標題產物N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺4f(671 mg，棕色固體)，產率：45.7%。

MS m/z(ESI): 556[M+1]

第五步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺4f(277 mg，0.50 mmol)溶解於2.5 mL四氫呋喃中，攪拌下滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(750μL，0.75 mmol)，攪拌反應45分鐘，向反應液中加入(2S)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛1b(113 mg，2 mmol)，繼續攪拌反應1小時，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺4(85 mg，黃色固體)，產率：33.0%。

MS m/z(ESI): 515.3[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ10.47(s,1H),9.82(s,1H),8.79(s,1H),8.61(d,1H),8.52(s,1H),8.00(s,1H),7.91-7.89(m,2H),7.78-7.69(m,2H),7.61(d,1H),7.38(d,1H),7.28(d,1H),6.78-6.72(m,1H),6.47(d,1H),5.30(s,2H),3.14-3.00(m,2H),3.001(s,1H),2.31(m,4H),2.10-2.07(m,1H),1.81(m,2H),1.63(m,1H)

實施例5 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 [(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇

冰浴下分批將氫化鋁鋰(230 mg，6 mmol)和N-叔丁氧羰基-R-脯胺醇5a(400 mg，2 mmol)加入10 mL乾燥的四氫呋喃溶液中，待無明顯氣體產生後，回流反應2小時。冰浴下緩慢滴加5 mL甲醇後再滴加5 mL水，加入無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產物[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇5b(221 mg，無色液體)，產率：77%。

MS m/z(ESI): 116[M+1]

第二步 (2R)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛

乾冰浴下將二甲亞碸(820 μL，11.46 mmol)加入二氯甲烷5 mL中，緩慢滴加草醯氯(968 mg，7.64 mmol)，反應45分鐘，滴加2 mL[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇5b(220 mg，1.91 mmol)的二氯甲烷溶液，繼續攪拌反應45分鐘，加入三乙胺(1.9 mL，13.37 mmol)，反應10分鐘，室溫反應1小時，反應液依次用水(20 mL)和飽和鹽水洗滌(10 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用鹼性氧化鋁色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(2R)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛5c(300 mg，黃色液體)，粗品不經純化直接進行下一步反應。

第三步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(250 mg，0.40 mmol)溶解於10 mL無水四氫呋喃中，逐滴加入1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(440μL，0.44 mmol)，反應30分鐘，逐滴加入5 mL(2R)-1-甲基吡咯烷-2-甲醛5c(90 mg，0.80 mmol)的四氫呋喃溶液，攪拌反應30分鐘，室溫繼續反應12小時，反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺5(46 mg，黃色固體)，產率：19.7%。

MS m/z(ESI): 583.4[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ9.16(s,1H),8.63(d,1H),8.56(s,1H),8.26(s,1H),7.83-7.80(dd,1H),7.76-7.50(m,2H),7.57-7.56(m,1H),7.40(s,1H),7.38(s,1H),7.19(d,1H),7.06-7.03(m,2H),6.34-6.31(d,1H),5.35(s,2H),4.39(m,2H),4.27-4.26(m,1H),3.32(m,1H),3.10(m,1H),2.73(s,3H),2.37-2.36(m,2H),2.07-2.01(m,2H),1.64(t,3H)

實施例6 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基-2-哌啶基)丙-2-烯醯胺

第一步 1-甲基-哌啶-2-甲醛

乾冰浴下將二甲亞碸(3.3 mL，46 mmol)溶解於15 mL二氯甲烷中，緩慢滴加草醯氯(2.6 mL，31 mmol)，攪拌反應45分鐘，滴加5 mL(1-甲基-2-哌啶)甲醇6a(1 g，7.74 mmol)的二氯甲烷溶液，繼續反應45分鐘，加入三乙胺(7.2 mL，52 mmol)，攪拌反應10分鐘，室溫反應1小時，反應液依次用水(20 mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(20 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用鹼性氧化鋁柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1-甲基-哌啶-2-甲醛6b(300 mg，棕色液體)，產率：31.0%，粗品不經純化直接進行下一步反應。

第二步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基-2-哌啶基)丙-2-烯醯胺

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(300 mg，0.48 mmol)溶解於10 mL四氫呋喃中，逐滴加入1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(530μL，0.53 mmol)，反應30分鐘，逐滴加入5 mL 1-甲基-哌啶-2-甲醛6b(120 mg，0.96 mmol)四氫呋喃溶液，繼續攪拌反應30分鐘，室溫反應12小時，反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基-2-哌啶基)丙-2-烯醯胺6(14 mg，黃色固體)，產率：4.9%。

MS m/z(ESI): 597.3[M+1]

¹H NMR(400 MHZ,DMSO-d ₆ ):δ9.09(s,1H),8.63(d,1H),8.51(s,1H),7.83-7.79(m,2H),7.58-7.56(m,1H),7.30-7.27(m,3H),7.14-7.12(m,2H),7.04(d,1H),6.69-6.66(m,1H),5.32(s,2H),4.32-4.29(m,2H),4.27-4.24(m,2H),3.60-3.40(m,2H),2.71(s,3H),2.05-1.72(m,6H),1.62(t,3H)

實施例7 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺

將N,N’-羰基二咪唑(292 mg,1.80 mmol)溶解於4 mL四氫呋喃中，油浴升溫至50℃，向反應液中滴加3 mL磷酸二乙酯基乙酸(353 mg,1.8 mmol)的四氫呋喃溶液，反應1.5小時備用。

N4-(3-氯-4-氟-苯基)-7-乙氧基-喹唑啉-4,6-二胺7a(200 mg，0.60 mmol，採用公知的方法“WO2005028443”製備而得)溶解於10 mL四氫呋喃中，在50℃滴加上述備用反應液，在40℃反應3小時。反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(50 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺7b(100 mg，淡黃色固體)，產率：33.3%。

MS m/z(ESI): 511.1[M+1]

第二步 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

將N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺7b(100 mg，0.20 mmol)溶解於10 mL四氫呋喃中，在乾冰浴冷卻至-78℃下，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(400μL，0.40 mmol)，攪拌45分鐘，向反應液中加入(2S)-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛1b(100 mg，0.85 mmol)，繼續攪拌1小時後，室溫反應12小時。向反應液中加入1 mL水和1 mL甲醇。用二氯甲烷萃取(100 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺7(60 mg，黃色固體)，產率：65.2%。

MS m/z(ESI): 470.2[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ9.78(s,1H),9.53(s,1H),8.91(s,1H),8.52(s,1H),8.13-8.15(m,1H),7.79-7.81(m,1H),7.39-7.43(m,1H),7.26(s,1H),6.67-6.69(m,2H),4.26-4.31(m,2H),4.09-4.10(m,1H),3.17-3.15(m,2H),3.08-3.04(m,1H),2.77-2.79(m,1H),2.87-2.82(m,1H),2.23(s,3H),1.74-1.76(m,1H),1.47(m,3H)

實施例8 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基-喹唑啉-4-胺

將甲氧基乙醇(152 mg，2 mmol)溶解於30 mL二甲基亞碸中，冰浴冷卻下，加入60%氫化鈉(80 mg，2 mmol)，升溫至40℃攪拌2小時後，加入N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-氟-6-硝基-喹唑啉-4-胺8a(336 mg，1 mmol)，在40℃攪拌4小時，在50℃攪拌12小時。在反應液中加入20 mL水，過濾固體，依次用水洗滌(50 mL)，真空下乾燥，得到N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基-喹唑啉-4-胺8b(392 mg，黃色固體)，產率：100%。產物直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI): 393.0[M+1]

第二步 N4-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4,6-二胺

N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基-喹唑啉-4-胺8b(392 mg,1 mmol)和鐵粉(392 mg，7 mmol)溶解於20 mL醋酸中，回流4小時。減壓濃縮反應液，加入100 mL飽和碳酸氫鈉溶液，用二氯甲烷萃取(100 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(50 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到標題產物N4-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4,6-二胺8c(200 mg，淡黃色固體)，產率：55.2%。

MS m/Z(ESI): 363.1[M+1]

第三步 N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺

將N,N’-羰基二咪唑(292 mg,1.80 mmol)溶解於4 mL四氫呋喃中，油浴升溫至50℃，向反應液中滴加3 mL磷酸二乙酯基乙酸(353 mg,1.8 mmol)的四氫呋喃溶液，反應1.5小時備用。

N4-(3-氯-4-氟-苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4,6-二胺8c(200 mg，0.55 mmol)溶解於10 mL四氫呋喃中，在50℃滴加上述備用反應液，在40℃攪拌反應3小時。反應液減壓濃縮，用二氯甲烷萃取(50 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(50 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺8d(150 mg，淡黃色固體)，產率：50.5%。

MS m/z(ESI): 541.2[M+1]

第四步 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

將N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺8d(200 mg，0.37 mmol)溶解於10 mL四氫呋喃中，在乾冰浴冷卻至-78℃，氬氣保護下，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(740 μL，0.74 mmol)，攪拌30分鐘，向反應液中加入(R)-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛5c(84 mg，0.74 mmol)，繼續攪拌1小時後，室溫反應12小時。濃縮反應液，加入10 mL水，用二氯甲烷萃取(25 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺8(100 mg，黃色固體)，產率：54.2%。

MS m/z(ESI): 500.2[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ9.82(s,1H),9.58(s,1H),8.89(s,1H),8.53(s,1H),8.12-8.13(m,1H),7.79-7.81(m,1H),7.40-7.44(m,1H),7.32(s,1H),6.57-6.75(m,2H),4.36-4.37(m,2H),3.80-3.81(m,2H),3.35-3.32(m,4H),3.15-3.13(m,1H),2.5(s,3H),2.40-2.31(m,2H),2.08(m,1H),1.90-1.81(m,1H),1.70-1.64(m,1H)

實施例9 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

第一步 (E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺

將N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺7b(300 mg，0.59 mmol)溶解於10 mL四氫呋喃中，在乾冰浴冷卻至-78℃，氬氣保護下，滴加1 M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(1.2 mL，1.18 mmol)，攪拌30分鐘，向反應液中加入(R)-1-甲基-吡咯烷-2-甲醛5c(133 mg，1.18 mmol)，繼續攪拌1小時後，室溫反應12小時。濃縮反應液，加入10 mL水，用二氯甲烷萃取(25 mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(30 mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[(3-氯-4-氟-苯基)胺基]-7-乙氧基-喹唑啉-6-基]-3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]丙-2-烯醯胺9(130 mg，黃色固體)，產率：47.3%。

MS m/z(ESI): 470.2[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ9.79(s,1H),9.53(s,1H),8.93(s,1H),8.53(s,1H),8.12-8.15(m,1H),7.79-7.83(m,1H),7.40-7.45(m,1H),7.27(s,1H),6.67-6.73(m,1H),6.56-6.60(m,1H),4.27-4.32(m,2H),4.09-4.10(m,1H),3.17(m,2H),3.04(m,1H),2.77-2.79(m,1H),2.18-2.16(m,1H),2.21(s,3H),1.74-1.76(m,1H),1.47(t,3H)

實施例10 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基吡咯烷-2-基)-丙-2-烯醯胺

第一步 吡咯烷-2-羧酸甲酯

冰浴條件下，將7 mL二氯亞碸滴加到50 mL甲醇中，加入吡咯烷-2-羧酸10a(5 g，43.40 mmol)，在室溫攪拌24小時。將反應液在減壓下濃縮，得到粗品吡咯烷-2-羧酸甲酯10b(10 g,白色固體)，產物不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI): 130.1[M+1]

第二步 1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯

將粗品吡咯烷-2-羧酸甲酯10b(5 g)溶解於100 mL甲醇中，將反應液在冰浴下冷卻至0至5℃，加入13 mL40%甲醛溶液，反應液升至室溫攪拌2小時後，冰浴繼續冷卻至0至5℃，分批加入氰基硼氫化鈉(5.45g，87.20 mmol)，在室溫攪拌24小時。將反應液在減壓下濃縮，加入5 mL水，用二氯甲烷萃取(5 mL×3)，合併的有機相依次用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到粗品1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯10c(4.7g，棕色液體)，產率：70.1%。

MS m/z(ESI): 144.1[M+1]

第三步 (1-甲基-吡咯烷-2-基)-甲醇

將二異丁基氫化鋁(60 mL，66 mmol)滴加至50 mL 1-甲基-吡咯烷-2-羧酸甲酯10c(4.7 g，33 mmol)的二氯甲烷溶液中，反應液在冰浴下反應6小時後，加入10 mL甲醇。反應液在減壓下濃縮，得到標題產物得到(1-甲基-吡咯烷-2-基)-甲醇10d(1.8 g，棕色液體)，產率：47.4%。

第四步 1-甲基-吡咯烷-2-甲醛

將二甲基亞碸(2.2 mL，31.20 mmol)溶解於20 mL二氯甲烷中，乾冰丙酮浴下加入草醯氯(2 mL，23.40 mmol)，並在-18℃反應45分鐘後，加入(1-甲基-吡咯烷-2-基)-甲醇10d(1.8 g，15.60 mmol)，45分鐘後加入三乙胺(6.5 mL，46.80 mmol)，自然升至室溫，反應1小時。將反應液用飽和氯化鈉溶液洗滌(50 mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓下濃縮，用鹼性氧化鋁柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到1-甲基-吡咯烷-2-甲醛10e(1 g，棕色液體)，產率：56.8%。

第五步 (E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基吡咯烷-2-基)-丙-2-烯醯胺

乾冰浴下將N-[4-[[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-2-磷酸二乙酯-乙醯胺1d(3 g，4.40 mmol)溶解於30 mL四氫呋喃中，逐滴加入1M雙三甲基矽基胺基鋰的甲苯溶液(9.6 mL，8.80 mmol)，攪拌反應30分鐘，逐滴加入5 mL 1-甲基-吡咯烷-2-甲醛10e(1 g，8.80 mmol)四氫呋喃溶液，繼續反應30分鐘，室溫反應24小時，反應液減壓濃縮，用矽膠柱色譜法以洗脫劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物(E)-N-[4-[[3-氯-4-(2-啶啶基甲氧基)苯基]胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-3-(1-甲基吡咯烷-2-基)-丙-2-烯醯胺10(500 mg，黃色固體)，產率：20.8%。

MS m/z(ESI): 583.2[M+1]

¹H NMR(400 MHz,DMSO-d ₆ ):δ11.59(s,1H),11.28(s,1H),9.19(s,1H),9.05(s,1H),8.71(d,1H),8.09-8.07(m,1H),7.74-7.68(m,3H),7.56-7.55(m,1H),7.45-7.37(m,2H),7.04-7.00(m,1H),6.88-6.84(m,1H),5.43(s,2H),4.38(dd,2H),4.10(m,2H),3.63-3.60(m,1H),3.13-3.08(m,1H),2.73-2.72(m,3H),2.31-2.29(m,1H),2.08-2.02(m,2H),1.53(t,3H)

測試例： 生物學評價 例1 EGFR抑制細胞增殖測試

下面的體外試驗是用來測定本發明化合物對於EGFR高表現的細胞株人表皮鱗癌A431的增殖抑制活性。

以下所述的體外細胞試驗可測定受試化合物的對高表現EGFR的腫瘤細胞的抑制增殖活性，其活性可用IC₅₀值來表示。此類試驗的一般方案如下：首先選擇高表現EGFR的人類腫瘤細胞A431(購於Institute of biochemistry and cell biology)，以適宜細胞濃度(e.g. 5000個細胞/mL medium)接種在96孔培養板上，然後將細胞在二氧化碳恒溫箱內進行培養，當它們生長至85%匯合，更換培養基為加有一系列濃度梯度(一般6或7個濃度)受試化合物溶液的培養基繼續培養。72小時後，用磺醯羅丹明B(SRB)方法進行測試化合物對於抑制細胞增殖活性。IC₅₀值可經由一系列不同濃度下，受試化合物對於細胞的抑制數值進行計算。

本發明化合物的活性

本發明化合物的生化學活性經由以上的試驗進行測定，測得的IC₅₀值見下表。

結論：本發明化合物對A431細胞具有明顯的抑制增殖活性。

例2.EGFR激酶活性測定

體外EGFR激酶活性經由以下的方法進行測試。

下面所述的方法是用來測定本發明化合物的抑制EGFR激酶活性。化合物的半抑制濃度IC₅₀(把酶活性抑制至50%時所需的化合物的濃度)是以固定的酶混合特定底物及不同濃度的待測化合物來測定的。本實驗所用的EGFR激酶為人源重組蛋白(購於Cell signaling technology #7908)，該酶在含有60 mM HEPES(pH7.5)，5 mM MgCl₂，5 mM MnCl₂，3μM Na₃VO₄，1.25 M DTT(1000x)和20 μM ATP的緩衝溶液中與多肽底物以及不同濃度的受試化合物共同進行反應(25℃，45分鐘)，使用時間分辨螢光的方法對該蛋白激酶活性加以定量測定。

本發明化合物的活性

本發明化合物的生化學活性經由以上的試驗進行測定，測得的IC₅₀值見下表。

結論：本發明化合物對EGFR激酶具有明顯的抑制增殖活性。

藥物代謝動力學評價 測試例1　本發明實施例1和實施例5化合物的藥物代謝 動力學測試 1、摘要

以大鼠為受試動物，應用LC/MS/MS法測定了大鼠分別灌胃給予實施例1化合物與實施例5化合物後不同時刻血漿中的藥物濃度。研究本發明化合物在大鼠體內的藥物代謝動力學行為，評價其藥動學特徵。

2、試驗方案 2.1　試驗藥品

實施例1化合物和實施例5化合物

2.2　試驗動物

健康成年SD大鼠8隻，雌雄各半，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產許可證號：SCXK(滬)2003-0002。

2.3　藥物配製

稱取適量藥物，加入0.5%羧甲基纖維素鈉研磨至樣品均勻混懸，吐溫(Tween)80終濃度為1%，樣品濃度為2.5 mg/mL。

2.4　給藥

健康成年SD大鼠8隻，雌雄各半，禁食過夜後分別灌胃給藥，給藥劑量均為25.0 mg/kg，給藥體積10 mL/kg。

2.5　樣品採集

SD大鼠8隻，雌雄各半，平均分成2組，禁食一夜後灌胃給藥，劑量為25 mg/kg。於給藥前及給藥後0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,7.0,9.0,12.0,24.0,30.0小時由眼眶采血0.2 mL，置於肝素化試管中，3500轉/分鐘，離心10分鐘分離血漿，於－20℃保存，給藥後2小時進食。

3、操作

取給藥後大鼠各大鼠血漿50μL，分別加入標準系列溶液50μL，使血藥濃度為50.0,100,200,500,1000,2000,5000 ng/mL，甲醇50μL，混勻後渦旋混合3分鐘，離心10分鐘(13500轉/分鐘)，取上清液10μL進行LC-MS/MS分析。主要藥物代謝動力學參數採用DAS 2.0軟體計算。

4、藥物代謝動力學參數結果

本發明化合物的藥物代謝動力學參數如下：

結論：本發明實施例化合物藥代數據較好，藥代動力學性質明顯改善。

人肺癌Calu-3裸小鼠移植瘤的療效評價 1、摘要

評價並比較實施例1對人肺癌Calu-3裸小鼠移植瘤的療效。實施例1明顯抑制人肺癌Calu-3的生長，小鼠能很好地耐受。

2、實驗目的

評價並比較實施例1和實施例5化合物對人肺癌Calu-3裸小鼠移植瘤的療效。

3、受試藥物

藥物名稱和批號：實施例1化合物和實施例5化合物

配製方法：實施例1和實施例5化合物用含0.1% Tween-80的蒸餾水配成所需濃度。

4、實驗動物

BALB/cA-nude裸小鼠，6至7周，，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司。合格證號：SCXK(滬)2007－0005。飼養環境：SPF級。

5、實驗步驟

裸小鼠皮下接種人肺癌Calu-3細胞，待腫瘤生長至150至250 mm後，將動物隨機分組(d0)。

每週測2至3次瘤體積，稱鼠重，記錄資料。

腫瘤體積(V)計算公式為：V=1/2×a×b2其中a、b分別表示長、寬。

6、結果

實施例1明顯抑制人肺癌Calu-3的生長。實施例1化合物低劑量(100 mg/kg)導致2/6個腫瘤縮小，高劑量(200 mg/kg)導致1/6個腫瘤縮小，另外1/6腫瘤完全消退，實施例5化合物低劑量(100 mg/kg)導致3/6個腫瘤縮小，高劑量(200 mg/kg)導致4/6個腫瘤縮小。按照目前的給藥方案，小鼠對實施例1和實施例5化合物均能很好地耐受。

Claims (9)

1. 一種如下所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽，
2. 如申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽，其係作為治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物，其中該蛋白激酶選自EGFR受體酪胺酸激酶或HER-2受體酪胺酸激酶。
3. 如申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽，其係作為治療癌症之藥物。
4. 一種醫藥組成物，含有治療有效劑量的申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽；及可藥用的載體或稀釋劑。
5. 如申請專利範圍第4項所述醫藥組成物，其係作為治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物，其中該蛋白激酶選自EGFR受體酪胺酸激酶或HER-2受體酪胺酸激酶。
6. 一種製備申請專利範圍第4項所述的醫藥組成物的方法，該方法包括將申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽與可藥用的載體或稀釋劑相結合。
7. 一種使用如申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽或如申請專利範圍第4項所述的醫藥組成物在製備治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物中的用途，其中該蛋白激酶選自EGFR受體酪胺酸激酶或HER-2受體酪胺酸激酶。
8. 一種使用如申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽或如申請專利範圍第4項所述的醫藥組成物在製備EGFR受體酪胺酸激酶或HER-2受體酪胺酸激酶抑制劑中的用途。
9. 一種使用如申請專利範圍第1項所述的化合物或其混合物形式、或可藥用的鹽或如申請專利範圍第4項所述的醫藥組成物在製備治療癌症的藥物中的用途，其中該癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鱗癌或胃癌。