TWI508972B - 製造個別的載脂蛋白、轉鐵蛋白及阿法１抗胰蛋白酶（ａ１ａｔ）或組合的轉鐵蛋白／載脂蛋白／人類白蛋白／ａ１ａｔ及所有新發現的蛋白質之第ｉｖ部分中發現的複合蛋白之製備及純化方法 - Google Patents

製造個別的載脂蛋白、轉鐵蛋白及阿法１抗胰蛋白酶（ａ１ａｔ）或組合的轉鐵蛋白／載脂蛋白／人類白蛋白／ａ１ａｔ及所有新發現的蛋白質之第ｉｖ部分中發現的複合蛋白之製備及純化方法 Download PDF

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Description

製造個別的載脂蛋白、轉鐵蛋白及阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)或組合的轉鐵蛋白/載脂蛋白/人類白蛋白/A1AT及所有新發現的蛋白質之第IV部分中發現的複合蛋白之製備及純化方法
下列各者之一複合物：目前在血漿中發現的所有蛋白、冷凍沉澱品、第III部分及所辨識出之新發現的多種蛋白、凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)、(白蛋白(AlbuRAAS®)第VIII因子(HemoRAAS®)、血纖維蛋白原(FibroRAAS®)高濃度血纖維蛋白原(FibrinGluRAAS®)凝血酶(ThrombiRAAS®)供血纖維蛋白黏合劑所用之凝血酶(FibrinGluRAAS)、AT-III蛋白、蛋白C、蛋白S、蛋白M、蛋白G、阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)、HDL載脂蛋白A1、載脂蛋白A2、載脂蛋白A4、精液凝固蛋白-1、肝球蛋白、波形蛋白、Nesprin-2干擾素阿法1/13、HP蛋白、維生素B結合蛋白、阿法-胎兒蛋白、鈣/調鈣素依賴型絲胺酸蛋白激酶蛋白、類澱粉蛋白前驅物、神經黏附素(Neurexin)類、Syndecans、蛋白rankl及來自其他抗體免疫球蛋白(GammaRAAS®)、B型肝炎免疫球蛋白(HepaRAAS®)A型肝炎抗體、細胞巨大病毒抗體、抗D抗體、水痘帶狀皰疹(Varizella Zoster)抗體、RSV抗體、SARS抗體、H1N1抗體、H1N5抗體、西尼羅(West Nile)病毒抗體或人類所有抗體或單株抗體、白血球細胞、紅血球細胞、血小板、乳糜微粒、電解作用、白蛋白、球蛋白、肽、組織、胎盤、過氧化氫酶、所有因子、冷凍沉澱品、人類血液與血漿之第I、II、III、IV、V部分等五部分、單株抗體、重組DNA蛋白、基因轉殖蛋白、顆粒或身為含有良好的健康細胞的已知蛋白 或未知蛋白之任何物質及含有該等良好的健康細胞如嗜中性白血球、淋巴球、嗜伊紅性白血球、嗜鹼性白血球及巨噬細胞中任一者之該等已知或未知蛋白中任一者之組合物，及其等用於下列之可能用途：精神分裂症、膽固醇、憂鬱症、愛滋病、所有具套膜病毒(所有A型、B型、C型、D型、E型、G肝炎、SARS、H1N5、H1N1)及不具套膜病毒、清除斑塊、肝臟脂肪、心臟病發作、中風、壽命、肥胖症之控制、血壓之控制、高血壓、中風引起之癱瘓。所有實體性腫瘤癌症：愛滋病相關癌症、肛門癌、闌尾癌、膽管、膀胱、骨肉瘤、腦、乳房、子宮頸、結腸、食道、眼睛、膽囊、胃、其他胃腸、腸、頭頸部、心臟、肝臟、下咽、腎臟、喉部、唇與口腔、肺臟、口、鼻Parasal、卵巢、胰臟、副甲狀腺、陰莖、前列腺、直腸、腎細胞癌、唾腺、皮膚、脾臟、咽喉、睪丸、尿道、陰道。白血病、(急性骨髓性白血病(M0-M7)、淋巴瘤、骨髓惡性腫瘤、急性淋巴性白血病(小型、中型、大型)MDS、髓性功能障礙症候群及貧血。
敗血症、高炎性疾病、急性胰臟炎、急性呼吸窘迫症候群、缺血再灌流損傷、肝硬化、腎衰竭及抗氧化劑。阿茲海默氏症、自閉症、帕金森氏症、糖尿病。化學療法、放射線療法與細胞介素療法毒性、TNF及終止組織蛋白與內毒素的活化作用。自體免疫疾病。類風濕性關節炎、結核病、瘧疾。腦部紅斑硬化症、A1AT缺乏症、肺氣腫、肺癌、氣喘、普里昂蛋白(Prion)(狂牛症)、炭疽熱與所有細菌、 食物中毒、第VII因子缺乏症及A型血友病、B型血友病之手術、最終將增加凝結作用之Wwb、所有的其他未知病毒、細菌感染、替換健康細胞來保持年輕。阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)、C1酯酶抑制劑及人體中的所有抑制劑/缺乏症。
相關申請案之交互引述
本申請案係於2011年5月16日提出申請之第13/108,970號先前申請案之部分延續，第13/108,970號先前申請案在此完整地併入本案以為參考資料及其係於2011年3月4日提出申請之第13/064,070號先前申請案之部分延續，第13/064,070號先前申請案在此完整地併入本案以為參考資料及其係於2008年7月15日提出申請之第11/990,203號先前申請案之部分延續，第11/990,203號先前申請案在此完整地併入本案以為參考資料。在此依據專利法第35號法典第120條主張於2011年3月14日提出申請之第61/457,380號暫准申請案及於2011年3月14日提出申請之第61/457,380號暫准申請案及於2011年3月15日提出申請之第61/452,860號暫准申請案及於2011年4月7日提出申請之第61/472,930號暫准申請案的申請日期之利益，其中所有申請案皆在此完整地併入本案以為參考資料。
發明領域
本發明係有關於製造個別的載脂蛋白、轉鐵蛋白及阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)或組合的轉鐵蛋白/載脂蛋白/人類白蛋白/A1AT及所有新發現的蛋白質之第IV部分中發現的複合蛋白之製備及純化方法。
 發明之說明及其目的：
人類數百年患有各種的疾病、癌症、阿茲海默氏症、糖尿病、帕金森氏症、自閉症，及尤其是吾等必須經歷愛滋病、B型肝炎與C型肝炎之苦痛，而新型病毒感染與疫情之發生使世界經濟憂心及受到影響，如2003年在中國、臺灣、香港、越南、新加坡、加拿大發生的SARS，2004年在歐洲、越南、泰國爆發的禽流感(H1N5)，及最近在2010年在墨西哥爆發的禽流感(H1N1)，造成國家停擺幾個星期及嚴重影響其經濟。
另一方面，世界各國不僅面對經濟問題，同時也面對各國醫療費用增加之問題。醫療體系在醫療上花費大筆金錢，而拖累了經濟。
該等產品之發明將有助於各國在醫療上省下許多金錢。
然而，當受益於該等發明的病患以非常健康的狀態活得更久並且無阿茲海默氏症、任何類型的疾病、癌症、心臟病發作、中風之時，必須瞭解其等的社會責任，及其等的預防工作。
死亡的定義是心臟終止跳動。AFODRAAS 1-85、AFCC 1-85及ProthoRAAS®將清除體內的所有斑塊，及有助於血液流經身體所有部分包括心臟在內。AFODRAAS 1-85(在此亦稱作“AFODRAAS 1”、“AFODRAAS”及AFOD”)含有載脂蛋白ApoA1、ApoA2、ApoA4、Apo-B48、ApoB100、ApoCI、ApoCII、ApoCIII、Apo-D、Apo-E、Apo-H及Apo(a) 的各種組合物及其中所有者皆含有良好的健康細胞，以及已知亦含有良好的健康細胞之阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)、含有良好的健康細胞之轉鐵蛋白及人類白蛋白即另一種良好的健康細胞蛋白，連同目前正在中國科學院協助下進行辨識與特性分析之所發現及未經辨識的至少20種蛋白所組成之一群組，該群組含有良好的健康細胞。各組合物將適用於一特定數量的疾病，包括實體性與血液癌症。
AFCC 1-85(在此亦稱作“AFCCRAAS 1-85”、“AFCCRAAS 1”、“AFCCRAAS”及“AFCC”)包含包括第III部分中發現的所有13種因子之凝血酶原複合濃縮劑、阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)、轉鐵蛋白、人類白蛋白及抗凝血酶III之各種組合物，其中所有皆含有良好的健康細胞蛋白。AFCC 1-85的組合物亦可包含含有良好的健康細胞之轉鐵蛋白及人類白蛋白即另一種良好的健康細胞蛋白，連同目前正在中國科學院協助下進行辨識與特性分析之所發現及未經辨識的至少20種蛋白所組成之一群組，該群組含有良好的健康細胞。各組合物將適用於一特定數量的疾病，包括實體性與血液癌症。
死亡之定義係歸屬於心臟的跳動，但是如果肝臟不生產、調控、調節及分送良好的血液細胞至心臟，心臟將無法運作。
因此，在本發明中發現：肝臟已成為體內最重要的器官，因為肝臟產生用於治療疾病及病毒以及細菌感染之抗體與蛋白。肝臟是體內最大的器官，其重量約1.4公斤。肝臟係位於腹部右側。在胸骨正下方。肝臟有兩葉。右葉較 大及由三小葉一起組成。左葉較小，位於胃的正上方及鄰近喉嚨。肝臟結構係由自50,000至100,000個肝小葉所組成，其中央有肝門靜脈。從肝門靜脈，數百個肝細胞與膽道系統及非常微小的血管混雜在一起。具有約三千億個細胞(約為體內一兆個細胞的30%。在因為任何原因喪失90%肝臟的情況下，肝臟有能力修復及維持其功能。沒有其他器官在僅剩10%的情況下，還能在體內發揮功用。若肝臟因疾病而100%受損，該個體惟有靠肝臟移植方能存活。肝臟接受經由肝門靜脈與動靜脈之血液。該等血管每分鐘輸送約1.5公升的血液至肝臟。動靜脈中的血液含有大量的氧氣，而肝門靜脈中的血液則輸送來自消化作用的所有廢棄物。肝臟被認為是一個複雜的化學生產者/調控者/調節者/配送者，具有數百種不同的重要任務：
1.肝臟係接收來自小腸的葡萄糖及儲存為肝醣之倉庫。每餐後，當血壓增加時，來自胰臟的胰島素將協助肝臟將葡萄糖轉化為肝醣。在幾個小時後，當血壓下降時，肝臟再度將肝醣轉化為葡萄糖，然後將葡萄糖送至血液中，然後分送至需要葡萄糖的其他器官或部分。糖尿病人由於來自食物的葡萄糖在肝臟中積累，而無法接收胰臟所產生的胰島素。
2.除了上述任務之外，肝臟亦將葡萄糖與脂肪轉化為蛋白質，及亦將蛋白質與脂肪轉化為葡萄糖。
3.肝臟每天產生約0.5至0.9公升的膽汁。膽汁係黃藍色的液體，其具有苦味，及其最重要的結構是膽鹽，食物 中的脂肪之消化作用需要膽鹽。
4.肝臟可排除部分毒性如酒精及一些藥物如乙醯胺酚。
5.肝臟產生尿素，尿素是由蛋白質而來的廢棄物及經由腎臟排除。
6.肝臟銷毀所有損壞或老舊的紅血球，以及殺滅腸道食物中的所有細菌。
7.肝臟含有維生素A、B、D、E及K。
8.肝臟產生血液中的蛋白如白蛋白、球蛋白及凝結作用。
肝臟上的脂肪：
當得知肝臟上的脂肪時，人們通常感到驚訝與害怕，並質疑一個人何以在肝臟上具有脂肪時存活。實際上，肝臟如同身體的其他器官，吾等處處都有脂肪。
脂肪是細胞的一種創造性元素。每當肝臟中的脂肪超過約5%的肝臟，而攻擊及佔領所有健康細胞時，將造成問題。此時，肝臟將具有脂肪性黃色，及肝臟比其正常狀態來得大與重。
切下一片無疾病的肝臟，吾等可透過顯微鏡觀察到血液充滿肝細胞之間的空間。
血管周圍的組織因子細胞會帶走毒性、細菌、脂肪，而淨化血液。肝臟就像是過濾器。若在肝細胞中及在肝細胞之間的空間中充滿了脂肪，則肝臟的過濾作用及其他功能會降低，而導致不良後果。
所有脂肪中的大部分係屬於三酸甘油酯。
在吾等的臨床前動物研究中，使用實驗室規模的 AFODRAAS(1-85)產品，及在10星期的高脂肪飼料期間，60隻兔子中總共有14隻因胃及脂肪積累在肝臟上而死亡。
巨噬細胞(源自希臘文makros“巨”+Phagein(食)而指巨食者)係由組織中之單核白血球分化作用所產生的白血球細胞。人類巨噬細胞的直徑約為21微米。單核白血球與巨噬細胞係吞噬細胞。巨噬細胞同時作用於非特異性防禦(先天性免疫)以及主動防禦機制(適應性免疫)。其等的角色係吞噬(吞噬然後消化)細胞碎片與病原體。巨噬細胞是重要與良好的健康細胞，其藉由吞噬然後消化細菌及其他外來粒子，而在體內防禦系統諸如肝臟中扮演非常重要的角色。
在肝臟中具有互補作用者，係在免疫系統對抗感染的防禦中扮演一角色之一群組的蛋白。
因其等在吞噬作用中所扮演的角色，巨噬細胞涉及免疫系統的多種疾病。如同HIV感染，巨噬細胞在人類免疫不全症病毒(HIV)之感染中扮演一角色。如同T細胞，巨噬細胞可感染HIV，甚至成為整個身體的進行性病毒複製之儲存處。由於在體內缺乏良好的健康細胞，不良的受感染細胞通過肝臟中的系統，及不良細胞再度吞食不良細胞，這就是為何病毒複製的原因。吾等藉由第一型、第二型HIV的核酸檢測法之陽性核酸檢測研究，在第一型、第二型HIV陽性血漿中引入吾等的AFODRAAS 1與AFCCRAAS 1三天後，顯示以國際單位/毫升為單位之數值降低。
心臟疾病：巨噬細胞係涉及動脈粥狀硬化的漸進性斑塊損傷產生之主要細胞。這是為何降低三酸甘油酯、 VLDL、LDL及增加HDL不會移除一外來物質如化學品所造成的斑塊損傷，該化學品不含有一良好的健康巨噬細胞細胞或尚未被發現的其他一些良好的健康細胞，正如吾等已觀察到在研究中的血漿第III部分中所發現的更多蛋白。吾等在52隻兔子所進行的研究中已證明這點。
結核病：一旦被巨噬細胞吞沒後，結核病的病原體即結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberlosis )避開細胞防禦及使用該細胞來複製。
癌症：
據信巨噬細胞亦協助癌症細胞增生。其等受到缺氧(乏氧性)腫瘤細胞之吸引，及促進慢性發炎。巨噬細胞所釋出的炎性化合物諸如腫瘤壞死因子(TNF)將基因開關核因子-kappa B.NF-kB活化，然後進入腫瘤細胞的細胞核，及開啟終止細胞凋亡及促進細胞增生與發炎的蛋白之生產作用。
就吾等所試驗之8種不同癌症細胞株而言，在2%蛋白時，所有癌症細胞已某種程度被吃掉；而在10%蛋白時，已完全被吃掉。
 發明：
下列所有發明的製備與純化方法，其最終產物應含有下列良好細胞中之一者：嗜中性白血球、淋巴球、嗜伊紅性白血球、嗜鹼性白血球及巨噬細胞
1.第IV部分中發現的蛋白之複合體的製備與純化作用，而製造 個別的(HDL)載脂蛋白A1，轉鐵蛋白，阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)。
2.一種組合的載脂蛋白/轉鐵蛋白/人類白蛋白/A1AT，
3.一種組合的載脂蛋白轉鐵蛋白/人類白蛋白、免疫球蛋白
4.一種組合的載脂蛋白阿法1抗胰蛋白酶(AT1A)人類白蛋白及免疫球蛋白
5.從含有A1AT、載脂蛋白、血纖維蛋白原、人類白蛋白、免疫球蛋白的血纖維蛋白原濃縮之凝血酶原複合體的製備與純化作用。
6.從含有第II因子、第VII因子、第IX因子、第X因子、轉鐵蛋白、人類白蛋白、ATA1及載脂蛋白的第III部分(ProthoRAAS®)濃縮之凝血酶原複合體的製備與純化作用。
7.由所有13種因子、PCC、凝血酶、AT-III、A1AT、HDL及在該第III部分中發現的其他新蛋白(研究中)所組成之第III部分(組合)中發現的蛋白之複合體的製備與純化作用。
8.現有產品線的上述製備與純化方法中之一者之組合，產品為1.人類白蛋白(AlbuRAAS®)靜脈內免疫球蛋白。2.GammaRAAS®。第VIII因子(3HemoRAAS®)。4.凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)。5.血纖維蛋白原(FibroRAAS®)。6.高濃度血纖維蛋白原(FibrinGluRAAS®)。7.凝血酶(ThrombiRAAS)。8.供血纖維蛋白黏合劑所用之凝血酶(FibrinGluRAAS®)、B型肝炎免疫球蛋白 (HepaBRAAS)。
上述之任一單一蛋白或組合蛋白，該蛋白含有良好細胞即嗜中性白血球、淋巴球、嗜伊紅性白血球、嗜鹼性白血球及巨噬細胞中之任一者及可能發現的新細胞，正如吾等已在研究中的血漿第III部分中發現更多蛋白。
經由試管內與活體內研究，已證明其等殺滅(或吃掉)所有癌細胞、細菌、具套膜病毒及吃掉斑塊中所累積的所有高脂肪(三酸甘油酯)之潛在能力。環繞蛋白質中的血管之上述健康的良好組織因子細胞會帶走毒性、細菌、脂肪而淨化血液(良好的血液)，然後經過肝臟過濾作用，然後壞脂肪通過腎臟而以尿素形式的液體廢棄物排除，尿素由尿液排出身體。
曾使用尿液來製造用於治療中風之尿激酶。此外，多年來使用尿素肥料來殺滅土壤中的所有蟲、殺蟲劑、嫩芽，及在土壤施肥以供種植稻米、蔬菜、水果。當我五歲住在越南的一個貧窮鄉村時，我不知道為什麼我的祖母要求我解尿在一個罐子裏，然後祖母把我與其他人的尿液加水混合，及施肥在土壤上而供種植蔬菜與水果。
針對52隻兔子所進行的研究中，吾等觀察到在對照組存在下，所研究的兔子之體重減輕，第1治療組的體重減輕10.00%及第2治療組的體重減輕14.52%。該二組均餵食高脂肪膳食。因此，肥胖症之控制是可能的。總三酸甘油酯為-3.07%，總膽固醇為-30.07%與-37.05%，VLDL-C為-44.42%與-41.87%，LDL-C為-21.59%與-33.96%，HDL為92.36%、 54.15%，TC/HDL-C為-55.55%與-40.48%。具有用於所有心血管疾病之可能用途。
脂肪在斑塊面積中之積累已降低38.43%與29.05%，及相較於對照組為-27.36與-20.69。具有用於中風；心臟病發作；及因中風、血壓、高血壓引起的癱瘓之可能用途。
該研究的肝指數在AFODRAAS 1治療後並無變化，這證明具潛力的該蛋白不會造成肝臟損傷，這是容易理解的，因為該蛋白係來自大自然、人類血漿，而非來自通常與肝臟反應及造成損傷之外來物質、化學品。
有人猜測人體中有10億種抗體及至少1兆個細胞，目前為止，已發現大約三百種抗體，而從人類血漿中已發現多少種蛋白？
從1975年追溯至今，1975年發現B型肝炎病毒(HBV)，1983年發現HIV(人類免疫不全症病毒，1990年發現C型肝炎抗體病毒(HCV)，2000年發現庫賈氏(Creutzfeldt-Jakob)症普里昂蛋白(Prion)(CJD)、變異體庫賈氏症普里昂蛋白(v-CJD)。2004年發現SARS-CoV(嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒)，2005年發現西尼羅(WestNile)病毒(WNV)，2005年發現禽流感病毒(H1N5)，及2010年發現A型流感病毒亞型H1N1。
從1975年亞培(Abbott)實驗室推出B型肝炎表面抗原的放射免疫分析(RIA)，甚至使用試驗套組來測試血漿單位是否存在B型肝炎表面抗原以來，血液製品仍受到血纖維蛋白原、第VIII因子、第IX因子產品中的B型肝炎病毒之污染， 因該試驗方法的敏感度不足。由吾等表格中經測試為ELISA偽陽性的血漿單位數量即可證明，但吾等必須使用該方法，因該方法是排除潛在捐血者之快速試驗方法。
直到1984年才發現HIV病毒，及直到1985年中，紐約血液中心才發現藉由溶劑/清潔劑(S/D)的有效病毒去活化方法，因而幾乎所有的血友病患都受到第一型HIV病毒污染。
1990年發現C型肝炎病毒(HCV)，及稍後推出用於檢測C型肝炎抗體的酵素連結分析法，然而在巴西仍發生免疫球蛋白受到C型肝炎污染之事件。
A型肝炎係一種不具套膜的病毒及無法藉由溶劑清潔劑方法殺滅，在歐洲多國發生第VIII因子受到A型肝炎污染之事件。
從2000年開始，藉由在不具套膜病毒及包括普里昂蛋白(Prion)在內的具套膜病毒之去活化作用中採取更加有效的措施，及在用於生產血漿衍生醫藥產品的混合血漿之核酸檢測法協助下，已獲得顯著改善。
然而在2010年，歐洲一公司的免疫球蛋白由於其等用以最大化產量之製程攜帶其他部分，如含有在病患體內造成血栓形成的凝血酶之第III部分，而造成病患心臟病發作及中風。否則，今日的血漿衍生醫藥產品係比2000年之前更加安全。
‧1975年HBV(B型肝炎病毒)
‧HIV(人類免疫不全症病毒(1983年)
‧1990年HCV(C型肝炎病毒)
‧CJD(庫賈氏(Creutzfeldt-Jakob)症普里昂蛋白(Prion))
‧2000年v-CJD(變異體庫賈氏(Creutzfeldt-Jakob)症普里昂蛋白(Prion))
‧2004年SARS-CoV(嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒)
‧2005年WNV(西尼羅(WestNile)病毒)
‧H1N5(禽流感病毒)
‧2010年A型流感病毒亞型H1N1
就病毒而言：藉由核酸檢測法，在與不同劑量的AFODRAAS1與AFCCRAAS 1混合之HIV陽性血漿試樣的核酸檢測法中，顯示以國際單位/毫升為單位的數值之大幅降低。具有殺滅第一型、第二型HIV病毒以及其他具套膜及不具套膜病毒之潛力。
我們在防止病毒污染血漿衍生醫藥產品方面已有改善，然而美國在1996年仍發生人類白蛋白受到細菌污染之事件。
細菌污染不會放過任何產品。吾等認為吾等提出的rDNA第VIII因子應該不可能受到病毒污染；然而美國一家公司在2003年發生RDNA第VIII因子之污染，造成了2003年與2004年全球RDNA第VIII因子的嚴重短缺。
在2004年，在英國發生流感疫苗受到細菌污染事件。
在2010年，在美國發生藥物受到細菌污染事件。
在2010年，蛋(用於生產疫苗之受質)受到腸炎沙門桿菌 (Salmonella enteritidis )污染。
‧2003年之重組DNA產品如rDNA第VIII因子
‧2004年之疫苗(英國)
‧蛋(用於生產疫苗之受質)受到腸炎沙門桿菌(Salmonella enteritidis )之污染(2010年)
就細菌而言：
AFODRAAS 1與AFCC RAAS1均已殺滅一些種類的致命性細菌，如對於目前的抗生素武器具有抗藥性的金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus )。根據2011年2月14日的富比士(Forbes)雜誌，目前MARSA(具二甲氧苯青黴素抗藥性的金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus ))每年在美國造成約20,000人死亡。針對所有細菌的潛在適應症顯示，在美國患有高劑量的敗血症之700,000人中，每年約有200,000死於敗血症。
細菌污染本來就不應該發生，然而與高劑量的AFODRAAS1-85及AFCCRAAS1-85組合之任何藥物，將阻止細菌污染。
就實體性腫瘤癌症與血液(液體性)癌症而言：使用結腸癌細胞Hct-116、結腸癌細胞株LS174T、乳癌細胞MCF-7、肝癌細胞HepG2、胰臟癌細胞PAC-1、胃癌細胞7901、胃癌細胞AGS及胃癌細胞株等總共八種不同細胞，及使用各類型2000個細胞來試驗2%蛋白，該蛋白殺滅特定數目的癌細胞，及殺滅數目之多寡係依細胞類型而定；但在10%蛋白時，所有上述癌細胞皆被殺滅。具有用於所有實體性腫瘤 癌症與血液(液體性)癌症之可能用途。
疾病、癌症、抑制劑、免疫缺乏症中之所有者，皆由轉變成細菌、病毒、普里昂蛋白(Prion)之不良細胞造成。
現今，吾等藉由本發明可得出皆由於缺乏健康細胞之結論，健康細胞係位於血液中及通過肝臟而用於製造、緩和、調節及分配至身體的其他器官與其他部分，諸如腦(由於缺乏該等健康細胞，人們患有阿茲海默氏症/自閉症/帕金森氏症)。
就歸因於葡萄糖(同時亦為脂肪)積累作用之糖尿病而言，藉由該等健康細胞可吃掉所有脂肪，及將良好的血液細胞送至腎臟來協助產生胰島素。
就A、B及VwB型血友病患而言，肝臟的功能之一係產生凝血劑，然而該等血友病患缺乏供肝臟產生凝血劑之良好的健康細胞。
所有良好的健康細胞及其等係來自亦由肝臟產生的蛋白，可阻止內毒素(轉鐵蛋白)、細胞介素、毒性、TNF的生產作用，及阻止組織蛋白的活化作用。
所有良好的健康細胞及其等係來自亦由肝臟產生的蛋白或抗體，可阻止吾等體內的所有缺乏症。
來自蛋白或抗體之所有良好的健康細胞可與目前市售或未來的其他藥物併用，以阻止損害肝臟、腎臟或身體其他任何器官之副作用以及如在威而鋼(Viagra)情況下之心臟病發作，及與降低三酸甘油酯之藥物如阿伐他汀(Arvostatin)與立普妥(Lipitor)在降低LDL之效用更好。遑論 該等眾所周知的藥物，其與目前市售的其他數千種藥物及未來研發的任何藥物併用，亦可發揮良好作用。
背景
肝臟是唯一產生蛋白與抗體之器官，蛋白與抗體二者均在保護人們免於疾病、病毒、細菌感染方面扮演重要角色。這項發現揭示含有一良好的健康細胞之任何蛋白將可妥善用於對抗我們體內的任何疾病、病毒、細菌、缺乏症、抑制劑、普里昂蛋白(Prion)，及從現在起人類將受到保護而免於各種疾病、癌症、流行病、病毒、細菌，及盲、聾、啞人可能受益。
血液細胞可分為：白血球、紅血球及血小板。
紅血球細胞或紅血球是最常見的血液細胞類型，也是經由循環系統(動脈)將氧氣輸送到身體組織的主要方式。紅血球在肺臟中載負氧氣及在循環通過身體微血管(傳導血液的最小構造)時釋出，紅血球在微血管中載負二氧化碳，二氧化碳是代謝作用的一種廢棄產物，及紅血球將二氧化碳帶到肺臟而經由呼吸作用棄置。該等細胞富含血紅素，血紅素係含鐵及可結合氧氣的一種分子(也是造成血液紅色的原因)。
紅血球在骨髓中產生及在體內循環約100至120天，然後藉由巨噬細胞將其等的組分回收。紅血球細胞並不參與免疫系統。
血小板係細胞片段(亦即不具有細胞核的細胞，直徑為2至3微米，其係由稱為“巨核細胞”的前驅細胞的碎裂作用所衍生。血小板的平均壽命通常僅為5至9天。血小板藉由形成血 栓而在止血作用中扮演重要角色，但其等並不參與免疫系統。
白血球細胞或白血球係免疫系統的細胞，免疫系統涉及保護身體免於感染性疾病及外來物質。存在五種不同的及類型多樣的白血球，但其等皆由骨髓中稱為造血幹細胞的一種多潛能細胞所產生與衍生。在全身各處皆可發現白血球，不侷限於血液與淋巴系統。
血液中的白血球數目通常是疾病的一個指標。每毫升通常有介於5’000至10’000之間的白血球。白血球數目若增加超過上限值則稱為白血球增多症，若減少至低於下限值則稱為白血球減少症。
蛋白質輸送作用中之另一重要角色係乳糜微粒(主要為三酸甘油酯及眾多文獻將其視為不良及可能導致心臟病發作與中風。然而，若無三酸甘油酯，則脂肪與膽固醇無法在血流的水基溶液中移動。
乳糜微粒係大型的脂蛋白顆粒，其係由三酸甘油酯(85至92%)、磷脂(6至12%)、膽固醇(1至3%)及蛋白(1至2%)[1]所組成。其等將膳食脂質從腸輸送至體內其他地點。乳糜微粒是脂蛋白的五個主要群組之一(乳糜微粒、VLDL、IDL、LDL、HDL)，脂蛋白使得脂肪與膽固醇能在血流的水基溶液內移動。
功能：乳糜微粒將外源脂質輸送至肝臟、脂肪組織、心臟組織及骨骼肌組織，其中藉由脂蛋白脂酶之作用而將其等的三酸甘油酯組分卸載。因此，遺留下乳糜微粒的殘餘部分及由肝臟吸收。
起源
乳糜微粒係在小腸吸收細胞中所產生的脂蛋白類型，更明確地在十二指腸絨毛內的上皮細胞中所產生。
階段
乳糜微粒的“生命週期”有三個階段： 新生型乳糜微粒
成熟型乳糜微粒
乳糜微粒殘餘物
新生型乳糜微粒
乳糜微粒係由稱為腸道細胞的小腸吸收細胞產生。其 等相對較大型，直徑為75至1,200奈米。該等新生型乳糜微粒係藉由胞吐作用從腸道細胞釋出至乳糜管，即起源於小腸絨毛的淋巴管，然後分泌至胸管與左鎖骨下靜脈連接處的血流中。
新生型乳糜微粒係主要由三酸甘油酯(85%)組成及含有一些膽固醇與膽固醇酯類。主要的載脂蛋白組分為載脂蛋白B-48(APOB48)。
成熟型乳糜微粒
當在淋巴與血液中循環時，乳糜微粒與高密度脂蛋白(HDL)交換組分。HDL將載脂蛋白C-II(APOC2)與脂蛋白E(APOE)捐給新生型乳糜微粒，及因而將其轉化為成熟型乳糜微粒(通常簡稱為“乳糜微粒”)。APOC2係脂蛋白脂酶(LPL)活性的輔因子。
乳糜微粒殘餘物
一旦將三酸甘油酯儲存分配之後，乳糜微粒將APOC2還給HDL(但保留APOE)，及因而變成乳糜微粒殘餘物，這時僅30至50奈米。APOB48與APOE攸關肝臟中的乳糜微粒殘餘物之辨識，而供進行胞吞與分解作用。
參考文獻1.^ M Mahmood Hussain於2000年期刊Arterosclerosis“”第148期第1-15頁之“文獻回顧：針對乳糜微粒總成所提出之一模式(A proposed model for the assembly of chylomicrons)”乙文；發明：一蛋白的數種製造方法，該蛋白含有所述健康的良好細胞中之一者。在本文中說明其中一些，及其餘者 可藉由不同方法而將蛋白與蛋白分離，可將一蛋白與其他蛋白組合而含有該等健康的良好細胞中之一者。
載脂蛋白之第三代純化作用
主要差異在於不再需要尿素，但需要二個層析步驟，如第1圖所示。
1.一種由血漿第IV部分純化載脂蛋白之方法，1)將第IV部分再懸浮於pH值為3.00至10.00的一緩衝液中，及藉由壓濾器或離心作用分離矽藻土與其他雜質，然後收集所產生的上清液，2)藉由添加氯化鈉而沉澱上清液中的載脂蛋白，然後旋轉收集糊狀物，3)然後將所產生的載脂蛋白再懸浮及過濾，4)所產生的懸浮液然後進行DEAE離子交換層析法與丁基層析法，2.將第IV部分懸浮於pH值為3.00至10.00的NaAc緩衝液中
3.藉由pH值為3.0至10.0的氯化鈉將載脂蛋白沉澱，冷卻至-1至1℃
4.可將載脂蛋白的糊狀物再懸浮於注射用水(WFI)或pH值為3.00至10.00及0至10℃的氯化鈉溶液中
5.用0.45微米過濾器過濾所產生的懸浮液。
6.步驟4中的層析法係Canion(DEAE)與丁基層析法
7.藉由層析法之載脂蛋白純化作用，其包含Canion層析法，將經過濾的載脂蛋白懸浮液的pH值調 整為3.0至10.0及離子強度調整為15至25 mM，添加至DEAE層析法上，低鹽清洗該DEAE層析法，然後高鹽清洗該DEAE層析法，收集所產生的載脂蛋白洗提液，丁基層析法，將DEAE層析法所產生的載脂蛋白洗提液之pH值調整為3.0至10.0，及低鹽清洗雜質，用注射用水(WFI)或鹼性緩衝液清洗而收集富集載脂蛋白的洗提液
8.低鹽緩衝液係pH值為3.00至10.0之含有Tris的一緩衝液，高鹽緩衝液係含有氯化鈉之一緩衝液，低鹽洗提緩衝液係含有Tris之一緩衝液，鹼性緩衝液係pH值為3.0至10.0之含有氫氧化鈉的緩衝液
9.然後將所產生的高純度載脂蛋白透析及用病毒去活化作用濃縮，添加安定劑及加以冷凍乾燥。
第4號方法
將第IV部分分離成四種蛋白之一方法，如從第2圖可瞭解：
1.轉鐵蛋白
2.人類白蛋白
3.載脂蛋白
4.阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)
5.轉鐵蛋白+人類白蛋白+載脂蛋白+免疫球蛋白
6.人類白蛋白+載脂蛋白+阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)+免疫球蛋白
7.人類白蛋白+載脂蛋白+免疫球蛋白
8.人類白蛋白+載脂蛋白+免疫球蛋白+轉鐵蛋白+抗胰蛋白酶。
或者可分別加工處理來自第5號至第8號的所有產品，及一起置於非無菌最終產品-無菌過濾作用-裝填-最終產物。
1.第IV部分之再懸浮與預處理
1)將第IV部分再懸浮於pH值為3.00至10.00的一緩衝液中，2)藉由壓濾器或離心作用分離矽藻土與其他雜質；然後收集所產生的懸浮液，3)然後藉由SD病毒去活化作用處理該懸浮液，4)所產生的懸浮液然後進行Canion層析法如DEAE，5)洗提出位於不同部分中的蛋白，6)然後進一步純化不同的洗提部分，2.將第IV部分溶於低溫緩衝液中而獲得非均質懸浮液，3.可藉由壓濾器或離心作用，將所產生的懸浮液中之矽藻土移除，4.然後藉由深層過濾器清理該懸浮液
5.然後藉由供病毒去活化作用所用的妥文(Tween)-80與TNBP，在25℃處理所產生的懸浮液6小時，6.調整所產生的懸浮液之pH值與離子強度，然後進行Canion層析法如DEAE。標的蛋白然後與Canion層析樹脂結合，標的蛋白為轉鐵蛋白、人類白蛋白、載脂蛋白及A1AT。第一洗提作用係藉由鹽溶液洗提轉鐵蛋白。第二洗提作用則藉由高濃度鹽溶液洗提載脂蛋白。第三洗提部分係藉由低pH值溶液洗提之人類白蛋白。最後，第四洗提作用係藉 由高濃度鹽溶液洗提A1AT。
7.所產生的不同洗提部分然後進行不同的層析法，而進一步純化達到高純度。第一洗提部分係進行CM層析法。第二洗提部分係進行丁基層析法。第三洗提部分係進行藍色層析法。第四洗提部分係進行藍色層析法及隨後進行丁基層析法。
8.所產生的蛋白部分然後進行透析與濃縮。調整pH值，然後添加安定劑。
9.所產生的蛋白溶液進行DV20過濾作用，以移除人類白蛋白以外的病毒。
10.人類白蛋白可藉由雙重巴斯德殺菌法進行病毒去活化作用。
11.可進行所產生的轉鐵蛋白、載脂蛋白、人類白蛋白及A1AT之裝填作用。
AFCCRAAS 1：下列方法1與方法3中之含有健康的良好細胞之蛋白的該等方法，係在1980年代早期尚未推出具套膜病毒的有效去活化方法時，專為被HBV、HCV及特別是HIV感染的A、B及WvB型血友病所設計。
1.從第III部分分離第II、VII、IX及X因子轉鐵蛋白、人類白蛋白、載脂蛋白及A1AT(ProthoRAAS®)之方法，第III部分亦含有所發現的至少20種其他蛋白。
2.分離第II、VII、IX及X因子(ProthoRAAS®)+人類白蛋白(AlbuRAAS®)+免疫球蛋白(GammaRAAS)之方法
3.從冷凍糊狀物分離第II、VII、IX及X因子之方法
4.從冷凍糊狀物分離第II、VII、IX及X因子+ATA1載脂蛋白+人類白蛋白(AlbuRAAS®)及免疫球蛋白(GammaRAAS)之方法
5.從第III部分分離凝血酶(ThrombiRAAS®)之方法
6.組合來自第III部分的所有蛋白之方法。
 說明
1.如第3圖中可見，該方法說明由冷凍沉澱作用純化凝血酶原複合物之一種方法，其包括
1)在含有3,000單位/公斤的肝素之緩衝液中重組冷凍糊狀物，2)調整pH值與溫度
3)在室溫完全混合3至5小時
4)用10CP+90SP過濾器過濾所產生的懸浮液
5)所產生的懸浮液進行溶劑清潔劑病毒去活化作用
6)經SD病毒去活化的懸浮液進行弱陰離子交換層析
7)清洗弱陰離子交換層析二次
8)洗提弱陰離子交換層析二至三次
9)收集所產生的洗提部分及用10K膜進行超過濾
10)調整所產生的洗提部分之pH值
11)調整在所產生的洗提部分中之人類FIX的活性
12)進行無菌過濾作用與奈米過濾作用而除去病毒
13)裝填與冷凍乾燥
說明
2.如第4圖中可見，該方法說明從第III部分純化凝血酶原複合物之一種方法，其包括
14)在緩衝液中重組冷凍糊狀物， 15)調整pH值與溫度
16)進行所產生的第III部分懸浮液之PEG沈澱作用
17)離心及收集上清液
18)用10CP+90SP過濾器過濾所產生的懸浮液
19)所產生的懸浮液進行溶劑清潔劑病毒去活化作用
20)經SD病毒去活化的懸浮液進行弱陰離子交換層析
21)清洗弱陰離子交換層析二次
22)洗提弱陰離子交換層析二至三次
23)收集所產生的洗提部分及用10K膜進行超過濾
24)調整所產生的洗提部分之pH值
25)調整在所產生的洗提部分中之人類FIX的活性
26)進行無菌過濾作用與奈米過濾作用而除去病毒
27)裝填與冷凍乾燥
AFOD係高密度脂蛋白(載脂蛋白A1)：
參照第5與6圖。在吾等的AFOD分析中之三點皆為載脂蛋白A1。第6圖之二維電泳中所示之差異，可能歸因於載脂蛋白家族之載脂蛋白A1或載脂蛋白的不同異構體。
1. HDL(載脂蛋白A1)：含有第1號(所授予的中國專利200610147503.7)、第1與2號(US 2009/0286960 A1)、第3與4號(US 61/457,380)所述方法中的純化載脂蛋白A1之AFOD RAAS 1(商標)純度為96%，該等產品必須完全不含有第1 型、第2型HIV、HCV、HBV病毒，及含有非常良好的高密度脂蛋白(HDL)水平，高密度脂蛋白是好膽固醇，其中並無VLDL(非常低密度脂蛋白)數值或其數值非常低，及並無LDL(低密度脂蛋白)數值或其數值非常低，VLDL與LDL均為壞膽固醇。可能用途：膽固醇、心絞痛、高脂血症、清除斑塊、肝臟脂肪、壽命、肥胖症之控制、高血壓、預防心臟病發作、預防中風、預防中風引起之癱瘓及所述的其他可能適應症。
2. AFODRAAS 2(人類白蛋白+載脂蛋白A1)除了AlbuRAAS®的目前臨床應用之外，具有用於創傷管理/關節炎/精神分裂症/憂鬱症/特定類型的肺癌、胰臟癌、腎臟癌、肝癌、前列腺癌、乳癌及其他可能適應症之可能用途。
3. AFODRAAS 3(靜脈內免疫球蛋白+載脂蛋白A1)供用於GammaRAAS®的目前臨床應用及供用於如摘要中所述之所有血液(液體性)癌症的可能用途
4. AFODRAAS 4(第VIII因子+載脂蛋白A1)供用於HemoRAAS®的目前臨床應用及供用於B型肝炎；C型肝炎及第一型、第二型HIV；A型血友病病患之出血併發症/骨科手術之可能用途(矯形外科、肝臟、胰臟、腸胃管癌及最終建立凝結作用而使得病患不再需要使用供A型血友病及所有實體性腫瘤及血液癌症所用的第VIII因子/
5. AFODRAAS5(凝血酶原複合濃縮劑+載脂蛋白A1)供用於ProthoRAAS®的目前臨床應用及供用於B型肝炎、肝硬化與其他肝臟問題如膽道阻塞、C型肝炎；第一型、第二 型HIV；B型血友病與A型血友病之出血/骨併發症及用抑制劑之手術及最終建立凝結作用而使得病患不再需要使用第IX因子或PCC；及所有實體性腫瘤與血液癌症之可能用途
6. AFODRAAS6(凝血酶+載脂蛋白A1)供用於ThrombiRAAS®的目前臨床應用及供用於胃與十二指腸潰瘍、結腸(大腸)潰瘍與其他問題之可能用途
7. AFODRAAS7(血纖維蛋白原+載脂蛋白A1)供用於FibroRAAS®的目前臨床應用及供用於創傷管理及所述的其他可能適應症之可能用途
8. AFODRAAS8(血纖維蛋白黏合劑+載脂蛋白A1)供用於FibrinGluRAAS®的目前臨床應用及供用於可開刀的所有實體性腫瘤癌症及已擴散到身體其他部分的癌症之可能局部應用。
9. AFODRAAS 9(載脂蛋白A1+人類白蛋白(AlbuRAAS)+阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)+轉鐵蛋白供用於所述的所有可能適應症
10. AFODRAAS 10(載脂蛋白A1+人類白蛋白+阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)供用於所述的所有可能適應症。
11. AFODRAAS 11(載脂蛋白A1+人類白蛋白+轉鐵蛋白)供用於所述的所有可能適應症。
12. AFODRAAS 12(載脂蛋白A1+阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)供用於所述的所有可能適應症。
13. AFODRAAS 13(載脂蛋白A1+轉鐵蛋白供用於所述的所有可能適應症。
14. AFODRAAS 14(阿法1抗胰蛋白酶(A1AT)+轉鐵蛋白)供用於所述的所有可能適應症。
15. AFODRAAS 15(轉鐵蛋白)供用於所述的所有可能適應症。
在吾等藉由二維電泳之第IV部分懸浮液分析中，如第圖7所示，在第IV部分懸浮液中發現下列蛋白：第IV部分懸浮液中所發現的主要蛋白為：-轉鐵蛋白、人類白蛋白、阿法1抗胰蛋白酶及載脂蛋白A1
其餘的蛋白為：精液凝固蛋白-1、肝球蛋白、波形蛋白、NESPRIN-2、干擾素阿法1/13、HP蛋白、維生素D-結合、阿法胎兒蛋白、CASK、類澱粉蛋白前驅物、神經黏附素(Neurexin)類及SYNDECANS。
精液凝固蛋白-1：由該基因所編碼的蛋白係精液中的主要蛋白
肝球蛋白：在血漿中，肝球蛋白以高親和性與紅血球所釋出的游離血紅素(Hb)結合，及從而抑制其氧化活性。
波形蛋白係中間絲家族之一員，中間絲家族係特別存在於結締組織之蛋白。其等連同微管與肌動蛋白微絲構成細胞骨架
NESPRINS係主要存在於外核膜中之一蛋白家族。Nesprin-1及Nesprin-2係與肌動蛋白細絲結合。
維生素D結合蛋白連同人類血清白蛋白與阿法-胎兒蛋白皆屬於白蛋白基因家族。其係一種多功能蛋白及存在於 血漿、腹水、腦脊髓液及多種類型的細胞表面。其與維生素D及其血漿代謝物結合及將其等輸送至標的組織。
CASK蛋白：人類的周邊細胞膜蛋白CASK係由CASK基因編碼之一蛋白。該蛋白係一種多域鷹架式蛋白，其在突觸跨膜蛋白錨定及離子通道輸送中扮演一角色。其與轉錄因子TBR1交互作用，及與數種細胞表面蛋白結合，該等細胞表面蛋白包括類澱粉蛋白前驅物蛋白、神經黏附素(Neurexin)類及syndecans。
第8圖係有關於Q8基因符號=GC維生素D結合蛋白前驅物-周邊細胞膜蛋白CASk的Cask第3型異構體-VIM波形蛋白
第圖9係有關於Q13基因符號=周邊細胞膜蛋白CASK的CASK第3型異構體-HP HP蛋白
第10圖係有關於Q15基因符號-周邊細胞膜蛋白CASK的CASK第3型異構體-IFNA13；IFNA1干擾素阿法-1/13
AFCC係凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)，其係第II、VII、IX及X凝血因子或第IX因子之組合物。
第IX因子係在肝臟中所製造及具有類似的結構特性之數個因子中之一者。
第IX因子(B型抗血友病因子)連同第II因子(凝血酶原)、第VII因子(前轉化素)及第X因子(斯圖爾特-普勞爾(Stuart-Prower)因子)構成所謂因子的凝血酶原複合物群組，亦稱為PPSB因子。
由於其等的相似性，在柯恩(Cohn)酒精分餾方法中， 該群組中的蛋白通常一起分離在第III部分中。
然後將其等純化而得含有所有四種因子之製劑，即凝血酶原複合濃縮劑(PCC)。
ProthoRAAS目前適用於：
-B型血友病-預防、出血、手術
-A型血友病-抑制劑治療
肝臟疾病-急性與慢性-活動性肝炎、肝硬化
維生素K缺乏症-口服抗凝血劑、阻塞性黃疸、吸收不良、腸道菌群變化(抗生素、克羅恩氏症、潰瘍性結腸炎)
DIC(瀰漫性血管內血凝症)-感染、肝臟疾病、產科緊急事故、手術併發症。
16. AFCCRAAS1(商標)(ProthoRAAS®+載脂蛋白A1+AT-III)供用於上述的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
17. AFCCRAAS2(商標)(凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)+載脂蛋白A1+人類白蛋白(AlbuRAAS®))，供用於上述的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
18. AFCCRAAS3(商標)(凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)+載脂蛋白A1+靜脈內免疫球蛋白(GammaRAAS®))，供用於上述的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
19. AFCCRAAS4(商標)(凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)+載脂蛋白A1+靜脈內免疫球蛋白(GammaRAAS®)+人類白蛋白(AlbuRAAS®))，供用於上述 的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
20. AFCCRAAS5(商標)(凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)+載脂蛋白A1+靜脈內免疫球蛋白(GammaRAAS®)+人類白蛋白(AlbuRAAS®)及血纖維蛋白原(FibroRAAS®))，供用於上述的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
21. AFCCRAAS6(商標)(凝血酶原複合濃縮劑(ProthoRAAS®)+載脂蛋白A1+血纖維蛋白原(FibroRAAS®))，供用於上述的目前適應症連同所述的所有可能適應症。
PCC之二維電泳：
如第11圖中可見，PCC之二維電泳結果不僅顯示上述四種因子蛋白，亦顯示正進行辨識的更多蛋白(點)。
第III部分之二維電泳：
如第12圖中可見，如同第IV部分，第III部分之二維電泳除凝血酶、凝血酶原複合物以外尚含有更多蛋白。所有的該等蛋白亦正進行辨識。
冷凍糊狀物之二維電泳：
如第13圖中可見，冷凍糊狀物之二維電泳結果除了顯示血纖維蛋白原與第VIII因子以外，亦顯示正進行辨識的一些其他蛋白。
試管內/活體內研究
首次生產10批總共200克，以供在中國上海復旦大學進行兔子的活體內研究。
在華東理工大學使用第1號方法純化首次200克AFOD，其流程圖係示於第14圖。該實驗室的試產能力約為每次5公斤。依據其等的現場設備修正純化方法，但流程係與吾等在十二月所進行者相同。主要差異如下：
1)生產投入5公斤的第IV部分糊狀物，及每次產生約25克AFOD。Li Chun Zhou博士生產10批而得200克AFOD；2)用於純化AFOD的管柱係約5公升的DEAE層析法；3)用於收集富集AFOD的粒狀物之離心作用係旋翼式轉子離心機
4)採用靜置沈澱作用而除去矽藻土；5)就裝填而言，採用人工裝填；6)在整個製程中並未使用病毒去活化作用。
所生產總共10批的AFOD約為200克，將所有的AFOD冷凍乾燥。
所用的安定劑為甘露糖醇，及該產物曾在2008年夏天用於52隻兔子的臨床研究上。
在上海萊士(RAAS)血液製品有限公司進行第二次試產三批。
在下列試管內研究中使用2000小瓶的AFOD RAAS(約200克)：
1.中國上海瑞金(RuiJin)醫院研究5種癌細胞株。
2.在上海萊士(RAAS)公司的R/D實驗室研究3種癌細胞株。
3.在上海萊士(RAAS)公司的微生物實驗室研究細菌
4.在上海萊士(RAAS)公司的NAT實驗室研究病毒第1型、第2型HIV
最近的試產係去年12月在吾等的工廠進行，吾等總共生產3批。第一批是25公斤的第IV部分，其餘二批是50公斤。總產量約為2000小瓶的AFOD(約200克)。約有440瓶的冷凍乾燥型產物，660小瓶之使用人類白蛋白作為安定劑之液態產物，及另外880瓶之使用甘露糖醇作為安定劑之液態產物。
1)吾等使用連續管式離心作用來收集富集AFOD的粒狀物；2)藉由過濾作用除去矽藻土；3)藉由15公升的DEAD層析法純化AFOD；4)病毒去活化作用包括SD與DV 20；5)自動化裝填。
AFCC RAAS1：係上海萊士(RAAS)血液製品有限公司目前獲核准銷售的一產物，已出口到全球某一國家。該產品已在大型產業規模上生產。
已在上海萊士(RAAS)血液製品有限公司，使用該產品進行試管內研究：
1.在R/D實驗室研究3種癌細胞株
2.在微生物實驗室研究細菌
3.在NAT實驗室進行第1型+第2型HIV試驗
癌細胞株之試管內研究： 在中國上海瑞金(RuiJin)醫院之癌細胞試驗程序 藉由使用CCK 8試驗套組之細胞增生分析法
在分析之至少3天前檢查所有試劑。
試劑：
1.癌細胞株：人類結腸癌細胞株(HCT-116)、人類乳癌細胞株(MCF-7)、人類肝癌細胞株(HepG2)、人類胰臟癌細胞株(PAC-1)
2. CCK 8(細胞計數套組-8)：同仁化學分子技術(Dojindo molecular technologies)有限公司(美國馬里蘭州)，產品代碼為# CK04-11
3.細胞培養基：
4. AFOD：冷凍乾燥型調配物
程序： 治療之三天前
1.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/10%胎牛血清/抗生素)
2.將細胞植入15公分培養皿中，讓細胞生長2至3天而達到2*108
治療之一天前
1.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/2%胎牛血清/抗生素)
2.以2000個細胞/孔的密度將細胞植入96孔式平皿中。在每個處理條件進行三重複。
1)0% AFOD
2)2% AFOD
3)10% AFOD
3.讓細胞生長過夜
治療當天
1.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/2%胎牛血清/抗生素)
2.在各者中更換新的細胞培養基如下：
1)0% AFOD：癌細胞+新DMEM/2%胎牛血清/抗生素
2)2% AFOD：癌細胞+用新DMEM/2%胎牛血清/抗生素稀釋1至4次的10% AFOD
3)10% AFOD：癌細胞+溶於新DMEM/2%胎牛血清/抗生素中的冷凍乾燥型AFOD
4)負對照組：僅有溶於新DMEM/2%胎牛血清/抗生素中的冷凍乾燥型AFOD
3.培養細胞2至3天及每天觀察細胞生長
治療後1至2天
在顯微鏡下觀察細胞之增生。
治療後第3天
1.棄置細胞培養基
2.拍攝細胞的照片
3.依據製造商之說明書，進行CCK8分析
添加在細胞培養基中的抗生素基本上是阻止培養期間的可能細菌或真菌污染。所添加的抗生素包含盤尼西林、鏈黴素及雙性黴素B。它基本上不會殺死細胞，及為動物細 胞培養中的一個常規配方。及其等亦包括一對照組，其中細胞僅用DMEM/胎牛血清/抗生素培養。
參照第15至28圖。
試管內之AFOD抗腫瘤試驗結果
上海萊士(RAAS)公司R/D實驗室用於產物AFODRAAS 1與AFCCRAAS 1之癌細胞LS 174T(結腸)、AGS(胃)及45(胃癌細胞)的試驗程序
藉由CCK8分析法測定之AFOD的劑量依賴性細胞殺滅效應係示於第29圖。
癌細胞照片係示於第30與31圖。
上海萊士(RAAS)血液製品有限公司R/D所用之方法與材料試劑：
1.癌細胞株：人類結腸癌細胞株(HCT-116)、人類乳癌細胞株(MCF-7)、人類肝癌細胞株(HepG2)、人類胰臟癌細胞株(PAC-1)
2. CCK 8(細胞計數套組-8)：同仁化學分子技術(Dojindo molecular technologies)有限公司(美國馬里蘭州)，產品代碼為# CK04-11
3.細胞培養基：
4. AFOD：冷凍乾燥型調配物
程序： 治療之三天前
5.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/10%胎牛血清/抗生素)
6.將細胞植入15公分培養皿中，讓細胞生長2至3天而達到2*108
治療之一天前
4.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/2%胎牛血清/抗生素)
5.以2000個細胞/孔的密度將細胞植入96孔式平皿中。在每個處理條件進行三重複。
4)% AFOD
5)2% AFOD
6)10% AFOD
6.讓細胞生長過夜
治療當天
4.將細胞培養基預先加溫至37℃(DMEM/2%胎牛血清/抗生素)
5.在各者中更換新的細胞培養基如下
7. 0% AFOD：癌細胞+新DMEM/2%胎牛血清/抗生素
8. 2% AFOD：癌細胞+用新DMEM/2%胎牛血清/抗生素稀釋1至4次的10% AFOD
9. 10% AFOD：癌細胞+溶於新DMEM/2%胎牛血清/抗生素中的冷凍乾燥型AFOD
10.負對照組：僅有溶於新DMEM/2%胎牛血清/抗生素中的冷凍乾燥型AFOD
6.培養細胞2至3天及每天觀察細胞生長
治療後1至2天
在顯微鏡下觀察細胞之增生
治療後第3天
11.棄置細胞培養基
12.拍攝細胞的照片
13.依據製造商之說明書，進行CK8分析
更多癌細胞株之進一步的試管內研究係示於第32至61圖。
細菌的試管內研究係在上海萊士(RAAS)公司的微生物實驗室進行，由於殺滅細菌所需的大型劑量，及可用的產品有限及需保留供其他疾病與癌症的動物研究之用，該研究並未完全殺滅所有細菌。
吾等藉由同時增加FOD RAAS 1的劑量及減少試驗細菌的密度，而進行AFOD RAAS 1的細菌實驗。目前的結果係列於下列表中：下列表中的“+”數目並不代表培養之後留存於培養基中的試驗細菌之準確數量；其代表其等的相對數量。
1.使用AFOD RAAS 1在金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus )(一種好氧菌)所進行之微生物試驗
在該實驗中，吾等增加培養基中的AFOD劑量(8毫升；10毫升；12毫升)。當吾等在液態培養基中添加8毫升或更多的AFOD及培養24小時之際，吾等發現液態培養基轉變為固態培養基。吾等認為主要原因在於所添加的AFOD濃度過高。即使當吾等在培養基中添加12毫升的AFOD時，所試驗的金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus )仍可生長，因此進一步增加AFOD劑量(諸如14毫升；16毫升)可能有困難。
2.使用AFOD RAAS 1在藤黃微球菌(Micrococcus luteus )(一種好氧菌)所進行之微生物試驗
3.使用AFOD RAAS 1在白色念珠菌(Candida albicans )(一種真菌)所進行之微生物試驗
4.使用AFOD RAAS 1在黑麴菌(Aspergillus niger )(一種真菌)所進行之微生物試驗
參照第62至64圖。
AFODRAAS 1與AFCC RAAS 1之HIV核酸檢測法
上表左側所顯示的HCV、第1型與第2型HIV及HBsAg係Elisa試驗HCV-RNA、HIVRNA、HBV DNA，其等係自2006年至2010年的五年期間在上海萊士(RAAS)公司NAT實驗室針對總共2,486,188單位血漿進行核酸檢測的結果。在這些單位數目中，藉由Elisa測出241單位為HCV陽性，經由核酸檢測法確認其中僅有5單位為HCV陽性，因而藉由Elisa方法所測出者中，總共有236單位為偽陽性。從2007年至2010年，在吾等的捐血族群中並無HCV陽性，因此吾等並無B 型肝炎病毒可供用於吾等研究中之試驗。當收到來自上海傳染病醫院的試樣時，將進行進一步的研究，該醫院亦將進行所有HIV、HCV及HBV的動物研究。
就第一型、第二型HIV而言，藉由Elisa測出331單位為陽性，但經由核酸檢測法確認僅16單位為陽性，因此有315單位為偽陽性。吾等的的R/D幸運地仍有一個第1型、第2型HIV陽性試樣供進行該研究。就HBV而言，藉由Elisa測出吾等總共有602單位為陽性，但經由核酸檢測法確認31單位為陽性，藉由Elisa所測出的偽陽性總數為571試樣。在2009年與2010年，吾等沒有經由核酸檢測法確認的陽性試樣。
為避免以大劑量使用有限的AFODRAAS與AFCC RAAS，NAT實驗室稀釋陽性血漿試樣，將第1型、第2型HIV病毒的存在量弱化至1：3200之水平，及使用HIV陽性血漿作為對照組之第一試驗的結果如下。
HIV陽性血漿(60051215)為5.9E+6國際單位/毫升
血漿(1：100)為3E+5國際單位/毫升
血漿(1：200)為1.1E+5國際單位/毫升
血漿(1：400)為5.4E+4國際單位/毫升
血漿(1：800)為2.9E+4國際單位/毫升
血漿(1：1600)為1.4E+4國際單位/毫升
血漿(1：3200)為5.7E+3國際單位/毫升
試樣在室溫培養直至第3天的濃度
20毫升的血漿(1：800)+2瓶的AFODRAAS1為2.3E+4國際單位/毫升
20毫升的血漿(1：1600)+2瓶的AFODRAAS 1為5.9E+3國際單位/毫升
20毫升的血漿(1：3200)+2瓶的AFODRAAS1為1.9E+3國際單位/毫升
20毫升的血漿(1：800)+2瓶的AFCCRAAS 1為1.3E+4國際單位/毫升
20毫升的血漿(1：1600)+2瓶的AFCC RAAS 1為2.9E+3國際單位/毫升
20毫升的血漿(1：3200)+2瓶的AFCC RAAS 1為56國際單位/毫升
如上表所示，吾等觀察到與AFODRAAS 1及AFCC RAAS 1混合的第1型、第2型HIV陽性試樣之國際單位/毫升的數值降低
第二試驗結果係如下所示，由於血漿中第1型、第2型HIV病毒之衰變，陽性血漿對照組從29000國際單位/毫升顯著降至4500國際單位/毫升；因而即使吾等必需增加AFODRAAS1與AFCCRAAS1的劑量來因應高濃度的第1型、第2型HIV病毒，吾等使用未稀釋試樣，進行進一步的測試來確認。然而這是一項需要進一步研究的實驗試驗。
活體內研究 先導性規模之實驗與結果 --針對抗動脈粥樣硬化與降低膽固醇之性質 1.實驗目的： 1.1試驗AFOD RAAS 1用於抑制脂肪斑紋病灶之效應 1.2試驗建立動脈粥狀硬化的動物模式之效率 1.3試驗AFOD RAAS 1在抑制脂肪斑紋病灶及與膽固醇相關的血漿指數之效能與劑量 2.實驗設計 2.1實驗動物：在實驗中使用雄性紐西蘭白耳兔或其他品系的健康兔子(體重2.0公斤，每組4隻)。 2.2實驗模式之建立
在一般的實驗室條件下，餵食兔子正常膳食5至10天。兔子在實驗開始之前，禁食12小時。然後檢測血液參數作為血漿指數的正常水平。然後將動物隨機分成該實驗的各組。
2.3處理
在分組之後，實驗動物換成高脂肪膳食。檢測體重與 血漿參數及每二個星期記錄一次，直到指數顯示患有脂質代謝失調症及在血管中形成明顯的脂肪斑紋病灶。動物從高脂肪膳食換成正常膳食。實驗動物之分組如下：(1)正對照組，(2)AFOD RAAS1-AI治療組係進一步分成高、中、低之三種劑量亞組。在AFOD RAAS 1治療之頭四個星期期間，仔細監測與記錄血漿參數與動物整體狀況。在實驗結束時，犧牲該等實驗動物而供病理與解剖分析之用。
2.4所試驗之參數：
1)與膽固醇相關之血液參數： TC：總膽固醇
TG：三酸甘油酯
LDL-C：低密度脂蛋白-LDL
VLDL-C：非常低密度脂蛋白-VLDL
HDL-C：高密度脂蛋白-HDL
TC/HDL-C或(LDL-C+VLDL-C)/HDL-C：比例
2)病理試驗
主動脈(大動脈)病理
3)肝指數
3.實驗方法
總共52隻在不同時間購得的兔子，其中四隻作為正常對照組及在整個實驗期間餵食正常膳食。其餘動物則換成高脂肪膳食。
其中一些實驗動物在換成高脂肪膳食之後出現胃部症狀，及在4個星期內死亡。從第7星期至第10星期，另有6隻 實驗動物死於相同原因。在第10與11星期，犧牲2隻動物作為動物模式對照組。將該二動物解剖取得主動脈、心臟及肝臟組織試樣。
觀察：觀察及記錄主動脈與肝臟的外觀。主動脈的內表面具有明顯的脂肪斑紋沈積與病灶。肝臟組織具有白色脂肪組織沈積。二者綜合起來，而成功地建立動物模式。也犧牲及解剖正常對照組中的2隻實驗動物。觀察到主動脈與肝臟組織並無異常。
然後將剩餘的34隻兔子換成正常膳食，及分為動物模式組、正對照組及低、中與高劑量AFOD RAAS 1-AI治療組。
動物模式組(無AFOD RAAS 1及餵食正常膳食)：4隻
正對照組：5隻
AFOD RAAS 1-AI治療組： 高劑量組(每隻100毫克)，平均體重2.8公斤：11隻
中劑量組(每隻50毫克)：8隻
低劑量組(每隻25毫克)：6隻
在治療4個星期之後，犧牲與解剖高劑量組中的2隻實驗動物。未觀察到脂肪斑紋病灶的明顯變化。基於該項觀察，將該實驗組的所有實驗動物換為高劑量AFOD RAAS 1治療，亦即每隻領受100毫克的AFOD RAAS 1。
4.實驗結果 4.1建立動物模式之期間
在餵食實驗動物高脂肪膳食(1.5%膽固醇、3%豬油及正常飼料)四個星期之後，所有與膽固醇相關的血漿參數皆明 顯增加(見所附數據表)。在第4個星期，犧牲1隻實驗動物，及其顯現數量有限的脂肪斑紋病灶。在第10個星期與第11個星期，犧牲與解剖5隻實驗動物。可在主動脈的內表面觀察上觀察到明顯的脂肪斑紋病灶。亦可在肝臟組織上觀察到脂肪沈積。
結論：在第10至11個星期，形成脂肪斑紋病灶。
4.2建立模式之成功率
在建立動物模式期間，7隻動物在高脂肪膳食的頭4個星期因胃部症狀而死亡。在第7至10星期之間，另外6隻實驗動物因高脂肪而死。死亡率為16.7%。亦解剖該等實驗動物，其中90%動物的主動脈組織顯示，脂肪斑紋病灶佔總面積的20%。
結論：建立模式之成功率為60%。
模式(高脂肪膳食、在10星期後犧牲、主動脈的照片、斑塊面積為24.3%)係示於第65圖。亦參照第66圖。
如從第67圖可瞭解，對照組(建立動物模式、無AFOD RAAS 1、然後餵食正常膳食4個星期)之斑塊面積為45.3%。
對照組建立動物模式、無AFOD RAAS 1、然後餵食正常膳食8個星期)。第68圖顯示斑塊面積為98.5%，及第69圖顯示斑塊面積為78.94%。
4.3血漿參數
1)前8個星期的治療(n=7，就前4個星期而言，每星期投予AFOD RAAS 1一次及每隻投予100毫克；在接下來的4個星期中，每星期投予各隻50毫克二次)
2)在實驗之第11個星期(n=7，就前4個星期而言，每星期投予AFOD RAAS 1一次及每隻投予100毫克；在接下來的4個星期中，每星期投予各隻50毫克二次，就最後3個星期而言，每星期投予各隻100毫克一次)
3)正對照組(投予冠脂妥(Crestor)四個星期)
4)對照組(司他汀(statin))(n=4)
5)血漿參數數據概要
模式組第8星期
AFOD RAAS 1組 第8星期
結論：在AFOD RAAS 1治療8個星期之後，所有與膽固醇相關的血漿參數皆降低。在模式對照組中亦降低。僅在VLDL-C與TC/HDL-C觀察到顯著變化(p<0.05)。其餘參數並無顯著變化。
結論：所有與膽固醇相關的參數皆顯示顯著的降低。但相較於對照組，並無統計上的顯著性。
6)HDL-C之變化：
比較治療前後的HDL-C數值，顯示HDL-C在AFOD RAAS 1-AI治療之後升高。
結論，靜脈輸注AFOD RAAS 1可經由形成HDL而降低血液膽固醇。
本發明揭示所有健康的良好細胞已吃掉所有脂肪(不良細胞與受損細胞，如肝臟功能所述，而非經由形成HDL。在該初步與小型研究中，本發明者已發現即使用AFOD RAAS 1第2組之較長與較高的劑量，HDL形成作用已從AFOD RAAS 1第1組的92.36%降至54.15%，及總TC/HDL-C為-53.55%，其係遠高於AFODRAAS1第2組所具有之-40.48%的TC/HDL-C。
為了證明這點，當與對照組相比較時，在該研究中亦使用阿托伐他汀(Atorvastatin)®，其TG顯著降低即-60.73%及HDL增加至64.69%；然而TCH已增加至61.74%，VLDL-C增加87.40%，LDL-C增加46.56%及TC/HDL-C為5.47%。總之，其可降低TG與增加HDL，但不會降低壞膽固醇VLDL-C、LDL-C、TCH及TC/DHL-C。
藥物如阿托伐他汀(Atorvastatin)®無法從斑塊移除脂肪，而AFODRAAS1與AFCCRAAS1可從斑塊移除脂肪，清理動脈。
在高中一年級時，吾等開始學習當黃色與藍色混合時，會變為綠色。在一藥物中，如果你的最終產物必須有黃色與藍色，則最終產物不可能變為綠色。這就是化學品反應的原因，及為何由化學製成的藥物具有副作用之原因。
可產生保有黃色與藍色的產物之唯一生產者、調控者、調節者及配送者係肝臟，肝臟每天產生約0.5至0.9公升的膽汁。膽汁係一種具有黃色與藍色的液體。
參照第70至76圖。
因此在這種情況下，阿托伐他汀(ATORVASTATIN)®係可與AFODRAAS1-85或AFCC RAAS1-85組合而提高藥物效能之數千種藥物之一。在本發明之前，如阿托伐他汀(ATORVASTATIN)®與立普妥(LIPITOR)®之藥物已經幫助具有高膽固醇的許多人。
肝臟
1)肝臟表面：當首次建立動物模式時，動物模式組之實驗動物的肝臟表面顯示異常的白點。組織分析顯示其為？？？。感覺該肝臟的表面比正常組織來得硬。從AI治療組取得的肝臟試樣具有較少的？？？。該表面不像首次建立動物模式時那般硬。未治療組亦顯示在？？？方面之疏緩及變軟。可能的原因在於因為高膽固醇與動脈粥狀硬化模式係在短時間內建立，換成正常膳食亦有助於紓解症狀。
2)肝指數
肝指數並未在AFOD RAAS 1治療之後顯示任何變化。
1)脂肪斑紋病灶外觀：來自非AFOD RAAS 1組(模式對照組)之組織的表面上有凸起。用赤手觸摸來感覺組織的軟硬。解剖血管後顯示脂肪沈積在組織的橫截面。脂肪斑紋病灶係隨著主動脈之下降而減少。相較於模式對照組，AFOD RAAS 1組的血管表面並不具有凸起。當用赤手觸摸時，感覺出該組織是柔軟的。
2)脂肪斑紋病灶面積之測量：相較於模式對照組，脂肪斑紋病灶的表面積增加77%與104%，及非AFOD RAAS 1-治療組增加187%。相較於非AFOD RAAS 1-AI治療組，AFOD RAAS1組的脂肪斑紋病灶在第8星期降低38.43%，及在第11星期降低29.05%。
結論：在患有動脈粥狀硬化的實驗動物之AFOD RAAS 1投藥作用，係明顯抑制脂肪斑紋病灶之進一步發生。
藥物如阿托伐他汀(Atorvastatin)®無法從斑塊移除脂 肪，而AFOD RAAS 1-85與AFCC RAAS 1-85可從斑塊移除脂肪，清理動脈。
第77圖顯示正常(正常膳食達8星期)，及第78圖顯示斑塊面積為0。
第79與80圖顯示用AFOD RAAS 1-A1治療8個星期而建立動物模式。
第79圖顯示斑塊面積為13.29%，及第80圖顯示斑塊面積為20.5%。
第81與82圖顯示用AFOD RAAS 1-A1治療8個星期而建立動物模式(另一種兔子)。第81圖顯示斑塊面積為58.4%，及第82圖顯示斑塊面積為82.17%。
第83至85圖顯示用AFODRAAS1治療11個星期之組別。第83圖顯示斑塊面積為47.27%，第84圖顯示斑塊面積為40.32%，及第85圖顯示斑塊面積為51.13%。
3)所解剖的主動脈之脂質含量分析
結論：相較於模式對照組，AFOD RAAS 1治療組之所解剖的主動脈的三酸甘油酯含量明顯降低。該項降低具有統計顯著性。(p<0.05)。
5.實驗摘要
該先導規模的AFOD RAAS 1臨床前動物試驗之目 的，係在於建立動脈粥狀硬化的動物模式之成功率與時間估算、人類AFOD RAAS 1-AI的投藥劑量及對於血液膽固醇相關水平與抑制脂肪斑紋病灶發生之效應。
基於實驗中所收集的數據，成功建立高膽固醇的兔子模式需要4至5個星期。形成動脈粥狀硬化脂肪斑紋病灶需要超過10個星期的高脂肪膳食(在第10至11個星期之脂肪斑紋病灶的平均表面積為24%)。建立模式的成功率為60%。在第8至11星期靜脈內輸注100毫克/星期的人類AFOD RAAS 1之後，高膽固醇血症與肝臟病灶有顯著改善，但未終止主動脈的脂肪斑紋病灶之形成作用。因此，高膽固醇血症與肝臟病灶可在換成低脂肪膳食之後緩慢地消退，但動脈粥狀硬化脂肪斑紋病灶惡化及需要治療。
實驗顯示對於高膽固醇血症實驗動物的AFOD RAAS 1投藥作用，係減少主動脈的脂肪斑紋病灶之表面積及降低病灶組織的三酸甘油酯含量；因此AFOD RAAS 1具有研發作為一種抗動脈粥樣硬化與降膽固醇藥物之潛力。
第1表. 血漿脂質參數之變化
1.第0星期、第10星期及第18星期係指各參數的實際值。
2.第18星期-第0星期(或第21星期-第0星期)係指藉由將第18星期(或第21星期)的數值與第0星期的數值相比較而計算所得之變化。其係指整個過程中的整體結果，及係指(高脂肪膳食+換成正常膳食+不同的治療)。其係由變化%=(第18星期的數值-第0星期的數值)/第0星期的數值而計算得之。
3.第18星期-第10星期(或第21星期-第10星期)係指藉 由比較第18星期(或第21星期)的數值與第10星期的數值而計算所得之變化。其代表後半段過程的結果，及係指(換成正常膳食+不同的治療)。其係由變化%=(第18星期的數值-第10星期的數值)/第10星期的數值而計算得之。
4.實驗設計請參照第2表
AFODRAAS 1治療8個星期
AFODRAAS 1治療11個星期
阿托伐他汀(Atorvastatin)達4個星期
對照組
相較於對照組之研究結果
第1圖係根據本發明由血漿第IV部分純化APO的方法之流程圖。
第2圖係根據本發明由血漿第IV部分純化APO的另一方法之流程圖。
第3圖係根據本發明由冷凍糊狀物純化凝血酶原複合物的AFCC方法之流程圖。
第4圖係根據本發明由第III部分純化凝血酶原複合物的AFCC方法之流程圖。
第5圖顯示包括轉鐵蛋白、人類白蛋白、APO、A1及A1AT的蛋白質之陽離子層析法的電泳結果。
第6圖顯示AFOD的二維電泳結果。
第7圖顯示藉由二維電泳之第IV部分懸浮液的分析。
第8圖係顯示Q8基因符號=GC維生素D結合蛋白前驅物-周邊細胞膜蛋白CASk的Cask第3型異構體-VIM波形蛋白隨著時間的相對富含量之圖表。
第9圖係顯示Q13基因符號=周邊細胞膜蛋白CASK的CASK第3型異構體-HP HP蛋白隨著時間的相對富含量之圖表。
第10圖係顯示Q15基因符號-周邊細胞膜蛋白CASK的CASK第3型異構體-IFNA13 IFNA1干擾素阿法-1/13隨著時間的相對富含量之圖表。
第11圖係顯示凝血酶原複合濃縮劑之二維電泳結果。
第12圖係顯示第III部分之二維電泳結果。
第13圖係顯示冷凍糊狀物之二維電泳結果。
第14圖係顯示純化AFOD的方法之流程圖。
第15圖係顯示在不同濃度之AFOD溶液存在下結腸癌及乳癌細胞株之3天的試管內研究期間癌細胞生長之圖表。
第16圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示結腸癌細胞HCT 116在0% AFOD溶液中之生長。
第17圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示結腸癌細胞HCT 116在2% AFOD溶液中之生長。
第18圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示結腸癌 細胞HCT 116在10% AFOD溶液中之生長。
第19圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示乳癌細胞MCF-7在0% AFOD溶液中之生長。
第20圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示乳癌細胞MCF-7在2% AFOD溶液中之生長。
第21圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示乳癌細胞MCF-7在10% AFOD溶液中之生長。
第22圖係顯示在不同濃度之AFOD溶液存在下肝及胰臟癌細胞株之3天的試管內研究期間癌細胞生長之圖表。
第23圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示肝癌細胞HepG2在0% AFOD溶液中之生長。
第24圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示肝癌細胞HepG2在2% AFOD溶液中之生長。
第25圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示肝癌細胞HepG2在10% AFOD溶液中之生長。
第26圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示胰臟癌細胞PAC-1在0% AFOD溶液中之生長。
第27圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示胰臟癌細胞PAC-1在2% AFOD溶液中之生長。
第28圖係在處理後第3天所拍攝之照片，其顯示胰臟癌細胞PAC-1在10% AFOD溶液中之生長。
第29圖係顯示在不同濃度之AFOD存在下各種癌細胞在3天的試驗期之生長的圖表。
第30圖係顯示第16-21圖的照片彼此鄰接以供比較。
第31圖係顯示第23-28圖的照片彼此鄰接以供比較。
第32圖係顯示子宮頸癌細胞株Hela在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第33圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示子宮頸癌細胞株Hela在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第34圖係顯示胃癌細胞AGS在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第35圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示胃癌細胞AGS在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生 長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第36圖係顯示乳癌細胞株SK-BR-3在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第37圖含有處理後第3天所拍攝之9張照片，其顯示乳癌細胞株SK-BR-3在不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL及TB 5 U/mL。
第38圖含有處理後第3天所拍攝之7張照片，其顯示乳癌細胞株SK-BR-3在不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第39圖係顯示卵巢癌細胞株SK-OV-3在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長 之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第40圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示卵巢癌細胞SK-OV-3在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第41圖係顯示肺腺癌細胞株SPC-A-1在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第42圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示肺腺癌細胞株SPC-A-1在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第43圖係顯示食道癌細胞株TE-1在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第44圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示食道癌細胞株TE-1在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第45圖係顯示肝癌細胞株BEL-7402在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第46圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示肝 癌細胞株BEL-7402在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第47圖係顯示胰臟癌細胞株PANC-1在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第48圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示胰臟癌細胞株PANC-1在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第49圖係顯示白血病癌細胞株Dami在列於x軸上之16種不同溶液存在下在3天的試管內研究期間的細胞生長之圖表，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第50圖含有處理後第3天所拍攝之16張照片，其顯示白血病癌細胞株Dami在16種不同溶液(列於各照片上)存在下的生長，該等溶液為CK、HA 10%、HA 2%、IVIG 10%、IVIG 2%、HemoRAAS 25 U/mL、HemoRAAS 5 U/mL、TB 25 U/mL、TB 5 U/mL、AFCC 33 U/mL、AFCC 6 U/mL、rFVIII 65 U/mL、rFVIII 15 U/mL、AFOD 2.5%、AFOD 0.5%及AFOD 0.1%。
第51圖係顯示白血病細胞(急性前髓細胞性白血病細胞T24)在0%蛋白質、2%蛋白質及10%蛋白質存在下以及膀胱癌細胞(膀胱癌細胞NB4)在0%蛋白質、2%蛋白質及10%蛋白質存在下，在試驗期間(3天)內的生長之簡要資料的圖表。
第52圖係顯示試驗後(處理後第3天)所拍攝之6張照片，其顯示白血病細胞(急性前髓細胞性白血病細胞T24)在0%蛋白質、2%蛋白質及10%蛋白質存在下以及膀胱癌細胞(膀胱癌細胞NB4)在0%蛋白質、2%蛋白質及10%蛋白質存在下，在試驗期間內的生長。
第53圖係顯示子宮頸癌細胞(人類子宮頸癌細胞株Hela)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第54圖係顯示胃癌細胞(人類胃癌細胞株AGS)在列於x 軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第55圖係顯示卵巢癌細胞(人類卵巢癌細胞SK-OV-3)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第56圖係顯示乳癌細胞(人類乳癌細胞株SK-BR-3)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第57圖係顯示食道癌細胞(人類食道癌細胞株TE-1)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第58圖係顯示肝癌細胞(人類肝癌細胞株BEL-7402)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第59圖係顯示肺癌細胞(肺腺癌細胞株SPC-A-1)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第60圖係顯示胰臟癌細胞(人類胰臟癌細胞株PANC-1)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第61圖係顯示白血病細胞(人類淋巴球白血病細胞株Jurkat)在列於x軸上之各種溶液，分別為0%、2%及10%濃度之蛋白質，存在下的生長之簡要資料的圖表。
第62圖係在以AFOD RAAS 1對金黃葡萄球菌做微生 物試驗期間細菌的五個樣品管之照片，由左而右為已加入8mL AFOD、已加入10mL AFOD、已加入12mL AFOD、正對照組及負對照組。
第63圖係在以AFOD對金黃葡萄球菌做微生物試驗期間在不同時間所拍攝之細菌的三個樣品管之一系列照片。
第64圖係在以AFCC對金黃葡萄球菌做微生物試驗期間在不同時間所拍攝之細菌的五個樣品管之一系列照片。
第65圖係顯示實驗室動物給予高脂肪膳食10周後主動脈之照片，其具有24.3%之斑塊面積。
第66圖係顯示實驗室動物在10周之高脂肪膳食後肝組織(具有脂肪沉積)之照片。
第67圖係顯示無AFOD RAAS 1且而後正常膳食歷時4周之實驗室動物的主動脈之照片，其具有45.3%之斑塊面積。
第68圖係顯示無AFOD RAAS 1且而後正常膳食歷時8周之實驗室動物的主動脈之照片，其具有98.5%之斑塊面積。
第69圖係顯示無AFOD RAAS 1且而後正常膳食歷時8周之實驗室動物的主動脈之照片，其具有78.94%之斑塊面積。
第70-76圖各圖係含有膽汁的容器之照片。
第77圖係顯示給予正常膳食8周的實驗室動物之動脈的照片。
第78圖係顯示兩實驗室動物之主動脈的照片，該等主 動脈具有0之斑塊面積。
第79圖係顯示有AFOD RAAS 1-A1歷時8周之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至13.29%之斑塊面積的照片。
第80圖係顯示有AFOD RAAS 1-A1歷時8周之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至20.5%之斑塊面積的照片。
第81圖係顯示有AFOD RAAS 1之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至58.4%之斑塊面積的照片。
第82圖係顯示有AFOD RAAS 1之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至82.17%之斑塊面積的照片。
第83圖係顯示有AFOD RAAS 1歷時11周之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至47.27%之斑塊面積的照片。
第84圖係顯示有AFOD RAAS 1歷時11周之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至40.32%之斑塊面積的照片。
第85圖係顯示有AFOD RAAS 1歷時11周之實驗室動物的主動脈中斑塊之增長至51.13%之斑塊面積的照片。

Claims (1)

  1. 一種第IV部分之再懸浮作用與預處理1)將第IV部分再懸浮於pH值為3.00至10.00的一緩衝液中，2)藉由壓濾器或離心作用分離矽藻土與其他雜質；然後收集所產生的懸浮液，3)然後用SD病毒去活化作用處理該懸浮液，4)所產生的懸浮液然後進行陽離子層析法如DEAE，5)洗提出位於不同部分中的蛋白，6)然後進一步純化不同的洗提部分。
TW101107176A 2011-03-04 2012-03-03 製造個別的載脂蛋白、轉鐵蛋白及阿法１抗胰蛋白酶（ａ１ａｔ）或組合的轉鐵蛋白／載脂蛋白／人類白蛋白／ａ１ａｔ及所有新發現的蛋白質之第ｉｖ部分中發現的複合蛋白之製備及純化方法 TWI508972B (zh)

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