TWI506026B - 純化之吡咯并喹啉基-吡咯啶-2,5-二酮組成物以及製造與使用彼之方法 - Google Patents

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Description

純化之吡咯并喹啉基-吡咯啶-2,5-二酮組成物以及製造與使用彼之方法
本發明係有關純化之吡咯并喹啉基-吡咯啶-2,5-二酮組成物以及製造與使用彼之方法。
相關申請案之交互參照
本申請案主張在2009年12月23日提出申請之美國臨時申請案第61/289,563號之利益。整個地以引用方式併入本文。
發明背景
在美國癌症為僅次於心臟病之第二種主要死亡原因(Cancer Facts and Figures 2004,American Cancer Society,Inc.)。儘管在癌症診斷及治療上之最新進展使得手術及放射線治療可能得以治癒性早期發現之癌症,但是目前用於轉移性疾病之藥物治療大多為緩和治療,很少提供長期療效。即使新的化學治療不斷進入市場,仍然持續需要:有效之單一治療或與現存之藥劑組合作為第一線治療,及作為治療頑固性腫瘤之第二及第三線治療的新穎藥物。
癌細胞就定義而言係異質性。舉例來說,在單一組織或細胞類型之中,多種突變‘檄制’可導致癌症發生。就其本身而言,從源自不同個體之相同組織及相同類型的腫瘤所取得之癌細胞之間通常存在異質性。與一些癌症有關之常見突變‘機制’在一種組織類型與另一種組織類型之間可能不同(例如導致結腸癌之常見突變“機制”可能與導致白血病之常見‘機制’不同)。因此通常難以預測特定癌症是否將對特定化學治療劑有所反應。(Cancer Medicine,第5版,Bast等人編輯,B.C. Decker Inc.,Hamilton,Ontario)。
當調節正常細胞生長及分化之細胞訊息傳遞途徑的成分受到異常調節時,可導致細胞增生性疾病及癌症的發生。細胞傳訊蛋白質之突變可能造成該等蛋白質在細胞週期當中以不適當之量或在不適當之時間變為表現或活化,其接著可能導致不受控制之細胞生長或細胞-細胞附接性質之改變。例如,因突變、基因重排、基因放大及受體、配體二者之過度表現所導致之受體酪胺酸激酶調節異常已涉及人癌症之發生及進展狀態。
c-Met受體酪胺酸激酶為肝細胞生長因子(HGF),亦稱為分散因子,唯一已知之高親和性受體。HGF與c-Met細胞外配體結合域之結合導致c-Met之細胞內部份中之多個酪胺酸殘基之受體多聚化及磷酸化。c-Met之活化導致接器(adaptor)蛋白質諸如Gab-1、Grb-2、Shc及c-Cb1之結合及磷酸化,及後續活化訊息傳遞物諸如PI3K、PLC-γ、STAT、ERK1、ERK2及FAK。c-Met和HGF表現於很多組織中,它們的表現一般主要各限於上皮和間質來源之細胞。在人癌症中c-Met及HGF受到異常調節,且可在疾病進展及轉移期間促成細胞生長調節異常、腫瘤細胞散佈及腫瘤侵入(參見,例如Journal of Clinical Investigation 109:863-867(2002)及Cancer Cell pp 5-6 July 2004)。相對於周圍組織,c-Met及HGF在許多癌中係被高度表現,且彼等之表現與不良預後並缺乏對標準臨床治療之反應有關(參見,例如Journal of Cellular Biochemistry 86:665-677(2002);Int. J. Cancer(Pred. Oncol.)74:301-309(1997);Clininal Cancer Research 9:1480-1488(2003);及Cancer Research 62:589-596(2002))。不意欲被理論所束縛,c-Met及HGF可保護腫瘤免於DNA損害劑引發之細胞死亡,且因此可能促成腫瘤之抗化學性及抗放射線性。不意欲被任何理論限制,c-Met之抑制劑可用作治療增生性疾病包括乳癌之治療劑(參見,例如Cancer and Metastasis Reviews 22:309-325(2003))。因此,需要調節這些因子和治療癌的新穎化合物和方法。本發明設法解決這些需要。
發明概述
本發明提供一種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰。在一些體系中,該多形體其特徵也可為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、15.5、17.8、19.9和25.6°的2θ峰。在其他體系中,該多形體其特徵也可為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、14.9、15.5、17.1、17.8、19.4、19.9、21.1、21.9、23.0、25.6和28.4°的2θ峰。
本發明也提供一種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰。在一些體系中,該多形體其特徵也可為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、16.7、20.1和22.8°的2θ峰。在其他體系中,該多形體其特徵也可為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、13.2、16.4、16.7、17.2、20.1、20.3、20.8、22.8、23.7、28.6和30.4°的2θ峰。
本發明也提供一種(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷和一種包含(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷之組成物。組成物可包含大於90%、大於95%或大於99%(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷。
本發明也提供一種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼或一種包含(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼之組成物。組成物可包含大於90%、大於95%或大於99%(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼。在一些體系中,組成物可包含小於1%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮假麻黃鹼。
本發明也提供一種掌性純化之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,其包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮與(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼混合於第一溶劑中以形成固體(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼;(b)用第一溶劑的水混合物洗滌步驟(a)中所形成之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼固體;(c)使得自步驟(b)之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼與酸在有機溶劑中反應且分離所得溶液之有機層;(d)洗滌得自步驟(c)之有機層;(e)將第二溶劑加至該有機層;(f)將有機層濃縮至第二溶劑在溶液中之量小於5%;及(g)從步驟(f)中之有機層結晶並在真空下乾燥所得(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶液,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
較佳地,所製得之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
第一溶劑可為非水溶劑。較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇、環己基乙胺、乙腈、或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑可為甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。在一些體系中,第二溶劑係與該第一溶劑相同。在其他體系中,第二溶劑係與該第一溶劑不同。在該步驟(c)中有機溶劑可為甲基四氫呋喃。在一些體系中,在步驟(d)中有機層係用鹽溶液洗滌。較佳地,鹽溶液為氯化鈉溶液。
該方法可在步驟(g)之後另外包含沖洗(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮晶體。在一些體系中,(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮晶體係用醇沖洗。較佳地,該醇係選自乙醇和甲醇。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)混合(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-引哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼和酸;(b)將醇加至得自(a)之混合物以形成槳料;(c)加熱並攪拌在(b)中所形成之漿料;(d)冷卻並分離(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(e)用第一溶劑洗滌步驟(d)中所分離之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(f)將得自步驟(e)之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶解在第二溶劑中以形成溶液;(g)將第三溶劑加至(f)中之溶液且將溶液蒸餾至該第二溶劑在溶液中之量小於5%;(h)從(g)中之溶液結晶(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(i)隨意地,添加第四溶劑(較佳水)以使得自(h)之晶體成熟;(j)藉由過濾分離得自(i)之晶體;(k)用第三溶劑和第四溶劑的混合物洗滌得自(j)之晶體;及(l)在真空下乾燥得自(k)之晶體,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
較佳地,所製得之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
該醇可為甲醇、乙醇、或其混合物。第一溶劑可為非水溶劑。較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇、或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑為四氫呋喃。第三溶劑可為非水溶劑。較佳地,第三非水溶劑可為甲醇、乙醇、或其混合物。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶解在二氯甲烷中並分離(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷;(b)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷溶解在第一溶劑中;(c)將步驟(b)之溶液蒸餾至二氯甲烷在溶液中之含量為<0.1重量%;(d)將步驟(c)之溶液稀釋於第二溶劑中;(e)將步驟(d)之溶液引進包含適合於掌性分離之填充物的多管柱層析系統中;(f)集中得自步驟(e)中的系統之所得萃餘液;及(g)從得自步驟(f)之萃餘液結晶並過濾所得(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或將得自步驟(f)之萃餘液蒸發至乾,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
較佳地,所製得之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇、或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑可為甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。更佳地,第二非水溶劑為甲醇和乙腈的混合物。
除非另外定義,否則本文中所使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬之領域中一般技術之人士所通常了解之相同意義。在本說明書中,單數形式亦包括複數形式,除非上下文清楚地另外說明。雖然與此處所描述之方法及材料類似或等效者可被用於實施或測試本發明,但適當之方法及材料係描述於下。本文中所有提及之公開公報、專利申請案、專利及其他參考文獻係以引用方式納入本文中。本文中所引證之參考文獻不被承認為是該申請發明之先前技術。在衝突之情況下,將以本說明書(包括定義)為主。此外,該材料、方法及實例僅供說明但不意欲作為限制。
本發明之其他特色及優點將自下列詳細說明及申請專利範圍中顯而易見。
發明之詳細說明
吡咯并喹啉基-吡咯啶-2,5-二酮化合物
本發明提供(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,其具有以HPLC測定之大於99%掌性純度且包含小於1%(+)-反-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
本發明也提供一種組成物,其包含具有以HPLC測定之掌性純度大於99%之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。組成物可包含一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
較佳地,本發明所提供的高純化之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮具有大於99.3%、大於99.5%、大於99.6%、大於99.7%、大於99.8%或大於99.9%之掌性純度。
較佳地,含有本發明所提供的高純化之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的組成物包含小於0.7%、小於0.5%、小於0.4%、小於0.3%、小於0.2%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij)喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
本發明化合物的所有形式皆被預期,不論是呈摻合物或純的或實質上純的形式,包括消旋混合物之晶型及個別異構物之晶型。本發明特別地包含具有特定活性的經分離之光學異構物。該消旋形式可藉由物理方法諸如,例如,非鏡像異構物衍生物之分離或結晶、藉由掌性管柱層析法或超臨界流體層析法之分離來解析。該個別光學異構物可藉由習知方法,諸如,例如,與光學活性酸或鹼之鹽形成,接著結晶而從消旋物獲得。
某些本發明化合物可以互變異構形式存在。所有該等化合物的互變異構形式被認為是在本發明範圍內,除非另有指明。
除此之外,可存在但不限晶體多形現象,且任何晶型可為單一或晶型混合物,或無水或水合晶型。
術語“晶體多形體”或“多形體”或“晶型”表示其中化合物(或其鹽或溶劑合物)可以不同的晶體堆積排列而結晶的晶體結構,所有的結構皆具有相同的元素組成。不同的晶型經常具有不同的X-射線繞射圖、紅外線光譜、熔點、密度、晶體形狀、光學和電性質、穩定性及溶解度。結晶溶劑、結晶速度、貯存溫度及其他因素可造成一種晶型成為優勢。化合物的晶體多形體可藉由在不同的條件下結晶而製造。
本發明提供二種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之多形體。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰。在一些體系中,該多形體其特徵也可為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、15.5、17.8、19.9和25.6°的2θ峰。在其他體系中,該多形體其特徵也可為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、14.9、15.5、17.1、17.8、19.4、19.9、21.1、21.9、23.0、25.6和28.4°的2θ峰。
本發明也提供(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰。在一些體系中,該多形體其特徵也可為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、16.7、20.1和22.8°的2θ峰。在其他體系中,該多形體其特徵也可為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、13.2、16.4、16.7、17.2、20.1、20.3、20.8、22.8、23.7、28.6和30.4°的2θ峰。
本發明也提供一種組成物,其包含(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1的°2θ峰。組成物可包含一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明也提供一種組成物,其包含(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰。組成物可包含一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
另外,本發明化合物,例如化合物的鹽類,可以水合或非水合(無水)形式或以具有其他溶劑分子的溶劑合物形式存在。水合物的非限制例包括單水合物、二水合物、等等。溶劑合物的非限制例包括乙醇溶劑合物、丙酮溶劑合物、等等。
本發明也提供一種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼可包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮假麻黃鹼。
本發明也提供一種組成物,其包含具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮假麻黃鹼。組成物可包含一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
較佳地,本發明所提供的高純化之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼具有大於99.5%、大於99.6%、大於99.7%、大於99.8%或大於99.9%之非鏡像異構物純度。較佳地,該包含本發明所提供的高純化之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼之組成物包含小於0.5%、小於0.4%、小於0.3%、小於0.2%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮假麻黃鹼。
“溶劑合物”表示包含化學計量或非化學計量溶劑之溶劑的溶劑加成形式。一些化合物具有捕陷固定莫耳比之溶劑分子於結晶固態中的傾向,因此形成溶劑合物。若溶劑為水,則所形成的溶劑合物為水合物,當溶劑為醇時,則所形成的溶劑合物為醇合物。水合物係藉由令一或多個水分子與一分子物質組合而形成,其中水保留其分子態為H2 O,該組合能夠形成一或多種水合物。例如,溶劑合物可為二氯甲烷(DCM)溶劑合物。
本發明也提供一種(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷和一種組成物,其包含(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷。組成物可包含大於90%、大於95%或大於99%(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷。組成物可包含一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
一些本發明之化合物存在互變異構形式,其也意欲包含在本發明的範圍內。“互變異構物”係指其結構在原子排列上顯著不同,但其以容易且迅速的平衡存在之化合物。應了解本發明之化合物可描述為不同互變異構物。也應了解當化合物具有互變異構形式時,所有互變異構形式意欲包含在本發明的範圍內,和化合物的命名不排除任何的互變異構形式。
本發明之化合物、鹽類和前藥可存在數種互變異構形式,且該等互變異構形式係包括在本發明範圍內。互變異構物在溶液中以互變異構物組之混合物存在。在固體形式中,經常以一種互變異構物佔優勢。即使可能描述一種互變異構物,本發明包括本發明化合物的所有互變異構物。
如使用於本文中,術語"鹽"為醫藥上可接受之鹽且可包括酸加成鹽,包括鹽酸鹽類、氫溴酸鹽類、磷酸鹽類、硫酸鹽類、硫酸氫鹽、烷基磺酸鹽類、芳基磺酸鹽類、乙酸鹽類、苯甲酸鹽類、檸檬酸鹽類、順丁烯二酸鹽類、反丁烯二酸鹽類、琥珀酸鹽類、乳酸鹽類、及酒石酸鹽類;鹼金屬陽離子諸如Na+ 、K+ 、Li+ 、鹼土金屬鹽諸如Mg2+ 或Ca2+ 、或有機胺鹽。
如使用於本文中,術語"代謝物"表示本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽、多形體或溶劑合物之代謝產物,其顯示與該本發明之化合物相似的活體內活性。
如使用於本文中,術語"混合"表示組合、摻合、攪拌、振動、旋轉或攪動。術語"攪拌"表示混合、振動、攪動或旋轉。術語"攪動"表示混合、振動、攪拌或旋轉。
本發明化合物亦可製造成前藥,例如醫藥上可接受之前藥。術語“前-藥(pro-drug)”及“前藥”在本文中可交換使用且係指活體內釋出活性母藥物的任何化合物。因為已知前藥會增強藥劑的許多所要性質(例如,溶解度、生物利用率、製造等),所以本發明化合物可以前藥形式輸送、因此,本發明意欲涵蓋目前主張之化合物的前藥、輸送前藥之方法及含有前藥之組成物。術語"前藥"包括共價連接至一或多個前部分諸如胺基酸部分或其他水溶性部分之本發明化合物。本發明化合物經由水解、氧化及/或酶釋放機制從前部分釋放出來。在一體系中,本發明之前藥組成物顯示增加之水溶解度、改良之穩定性和改良之藥代動力學分佈的附加利益。可選擇前部分以獲得所要之前藥特性。例如,可根據溶解度、穩定性、生物利用率、及/或活體內遞送或吸收來選擇前部分(例如,胺基酸部分或其他水溶性部分諸如磷酸酯)。術語“前藥”也意欲包括任何共價鍵結之載劑,當該等前藥投予至對象時於活體內釋出本發明的活性母藥物。在本發明中的前藥係藉由修改存在於化合物中的官能基而製造,以此方式使修改物以例行操作或於活體內裂解成母化合物。前藥包括其中羥基、胺基、氫硫基、羧基或羰基鍵結至任何可於活體內裂解而分別形成游離羥基、游離胺基、游離氫硫基、游離羧基或游離羰基之基團的本發明化合物。
前藥的實例包括但不限於在式I化合物中的羥基官能基之酯(例如,乙酸酯、二烷胺基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)及胺甲酸酯(例如,N,N-二甲胺基羰基)、羧基官能基之酯(例如,乙酯、嗎啉乙醇酯)、胺基官能基之N-醯基衍生物(例如,N-乙醯基)、N-曼尼希(Mannich)鹼、雪夫(Schiff)鹼及烯胺酮、酮和醛官能基之肟、縮醛、縮酮及烯醇酯、等等,參見Bundegaard,H.,“Design of Prodrugs”,第1-92頁,Elesevier,New York-Oxford(1985)。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮化合物的合成
用於製造有機分子及官能基轉變和操作的標準合成方法和步驟(包括保護基之使用)可從相關的科學文獻或從該領域中的標準參考書獲得。雖然不限於任何一或數種來源,但是有機合成的公認參考書包括:Smith,M. B.;March,J. March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第5版;John Wiley & Sons:New York,2001;和Greene,T.W.;Wuts,P.G. M. Protective Groups in Organic Synthesis,第3版;John Wiley & Sons:New York,1999。下列合成方法之述旨在說明(而不是限制)用於製造本發明化合物之一般步驟。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮與(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼混合於第一溶劑中以形成固體(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼;(b)用第一溶劑的水混合物洗滌步驟(a)中所形成之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼固體;(c)使得自步驟(b)之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)‧(+)-假麻黃鹼與一種酸在有機溶劑中反應且分離所得溶液之有機層;(d)洗滌得自步驟(c)之有機層;(e)將第二溶劑加至該有機層;(f)將有機層濃縮至第二溶劑在溶液中之量小於5%;及(g)從步驟(f)中之有機層結晶並在真空下乾燥所得(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶液,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。較佳地,所製得之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
第一溶劑可為非水溶劑。較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑可為甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。在一些體系中,第二溶劑係與該第一溶劑相同。在其他體系中,第二溶劑係與該第一溶劑不同。在該步驟(c)中有機溶劑為可甲基四氫呋喃。在一些體系中,在步驟(d) 中該有機層係用鹽溶液洗滌。較佳地,該鹽溶液為氯化鈉溶液。
該方法可在步驟(g)之後另外包含沖洗(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮晶體。在一些體系中,(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮晶體係用一種醇沖洗。較佳地,該醇為選自乙醇和甲醇。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)混合(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼和一種酸;(b)將一種醇加至得自(a)之混合物以形成槳料;(c)加熱及攪拌(b)中所形成之漿料;(d)冷卻及分離(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(e)用第一溶劑洗滌步驟(d)中所分離之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(f)將得自步驟(e)之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶解在第二溶劑中以形成一種溶液;(g)將第三溶劑加至(f)中之溶液並將溶液蒸餾至第二溶劑在溶液中之量小於5%;(h)從(g)中之溶液結晶(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮;(i)隨意地,將添加第四溶劑(較佳水)以使得自(h)之晶體成熟;(j)藉由過濾分離得自(i)之晶體;(k)用第三溶劑和第四溶劑的混合物洗滌得自(j)之晶體;和(1)在真空下乾燥得自(k)之晶體,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
該醇可為甲醇、乙醇或其混合物。第一溶劑可為非水溶劑。較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑為四氫呋喃。第三溶劑可為非水溶劑。較佳地,第三非水溶劑可為甲醇、乙醇或其混合物。第四溶劑可為水溶劑。較佳地,第四溶劑為水。
本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之方法,其包含:(a)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮溶解在二氯甲烷中並分離(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷;(b)將(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷溶解在第一溶劑中;(c)將步驟(b)之溶液蒸餾至二氯甲烷在溶液中之含量為<0.1重量%;(d)將步驟(c)之溶液稀釋於第二溶劑中;(e)將步驟(d)之溶液引進包含適合於掌性分離之填充物的多管柱層析系統中;(f)集中得自步驟(e)中的系統之所得萃餘液;及(g)從得自步驟(f)之萃餘液結晶並過濾所得(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或將得自步驟(f)之萃餘液蒸發至乾,藉此製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。較佳地,所製得之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮包含小於1%、小於0.7%、小於0.5%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
較佳地,第一非水溶劑可為甲醇、乙醇或其混合物。第二溶劑可為非水溶劑。較佳地,第二非水溶劑可為甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。更佳地,第二非水溶劑為甲醇和乙腈的混合物。
流程I提供一種製造包含高純化(>99%掌性純度)之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的本發明組成物之概要,其具有最小量(<1%)之不要的鏡像異構物,(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,存在。較佳地,該組成物包含具有掌性純度大於99.3%、大於99.5%、大於99.6%、大於99.7%、大於99.8%或大於99.9%之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。較佳地,該組成物包含小於0.7%、小於0.5%、小於0.4%、小於0.3%、小於0.2%或小於0.1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
如流程I中所示且詳細地描述在下列實例中,各種步驟係利用於製造和分離這些包含高掌性純度的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之組成物,其包括但不限於多管柱層析解析、非鏡像異構物鹽解析或動態動力解析。
在流程I之步驟1中,里多來定(lilolidine)(化合物4)係用草醯氯處理以在甲基第三丁基醚(MTBE)反應溶劑中產生醯基氯。甲醇之添加足以產生提供中間酮酯,5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)乙醛酸甲酯(化合物5)。在反應之步驟2中,合併化合物5和吲哚-3-乙醯胺(化合物5a)以產生3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(lH-吲哚-3-基)吡咯-2,5-二酮(化合物6)。如下列實例所詳細地描述,不需要分離中間化合物5來產生化合物6。在進行步驟2之前必需把溶劑從MTBE換成四氫呋喃(THF),因為5和5a二者在MTBE中具有非常差的溶解度。在添加化合物5a以在鹼存在下於THF中消耗化合物5之後,添加HCl以完成反應而提供粗製化合物6。然後從DCM和庚烷純化粗製化合物6以提供進行下個步驟之足夠純度的化合物6。此方法的詳細描述顯示於實例1中。
化合物6係用氫氧化鈀、THF和第三丁醇鉀氫化以產生粗製反式消旋物,(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物8)。如實例中所述,化合物8的製造,不需要分離粗製順式消旋物(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物7)。然而,在化合物6之氫化期間,修正條件以就地產生所得化合物7之異構化作用。所得方法提供一種控制化合物8中的主要雜質(具體來說化合物6)之方法。具體來說,反應係在THF溶劑中進行,且所使用之觸媒為氫氧化鈀。第三丁醇鉀也加至反應混合物中以促進異構化作用。此方法的詳細描述係顯示實例2中。
化合物8中最常見的雜質通常為化合物7。因為化合物7本身為掌性,所以當利用較低純度(<99%)的化合物8時,特別難以預知來自多管柱層析(MCC)的化合物7之異構物的溶析。為了確定高純度產物,因此需要在以MCC鏡像異構物解析之前增加消旋物(化合物8)之純度。已查明:透過從各種溶劑選擇性結晶可以改良化合物8之純度。一種由二氯甲烷(DCM)形成之該溶劑合物產生具有非常高化學純度(>99%)之化合物8 DCM。如流程I中所示,藉由將粗製化合物8溶解在DCM中及然後以DCM晶體種晶而形成化合物8 DCM。使晶床生長臨界質量之後,添加庚烷以驅使結晶完成。藉由過濾分離及在真空下除去大量剩餘溶劑之後,化合物8 DCM通常包含相對於化合物8之0.8-0.9莫耳DCM。此溶劑合物結晶除去由於氫化和異構化作用而存在於粗製(95-98%)化合物8中的方法雜質。方法之詳細描述係顯示於實例3中。
本發明提供化合物8 DCM的二種鏡像異構物之藉由MCC的掌性解析,如流程I中所顯示。MCC鏡像異構物分離方法提供優於藉由HPLC分批層析分離在於其可以大於分批製造之規模(>20公斤)提供高掌性純度(>99%)。MCC解析可在甲醇、甲醇和乙醇(1:1體積)或甲醇和乙腈(9:1體積/體積)的混合物中進行。所利用之掌性靜相(CSP)為購自掌性技術公司之Chiralpak AD或AZ。消旋物進料溶液之濃度係在20-50克/升之範圍。較佳地,分離之指定掌性純度為>99%之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物10)且包含<1%之(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物9)。
具體來說,分離係藉由製造消旋化合物8在所選擇之移動相中的進料溶液來進行。此溶液係藉由最初將材料溶解在甲醇中而從化合物8 DCM製造。在製造之前評估層析參數,和最後的最佳化係在進料溶液的分離的開始數小時或數天期間進行。在所收集之最初部分組不符合掌性純度規格時,將材料回收於進料溶液內以重複解析。一旦符合規格之操作參數已經被建立,該等條件適用於分離進料溶液的整個體積。在整個操作中,收集化合物10成萃餘液流,集中和濃縮。然後將濃縮萃餘液濃縮至乾(<5公斤規模)或濃縮並種晶以發誘化合物10之結晶(>5公斤規模)。此步驟的詳細描述係顯示於實例4中。
除了MCC解析之外,已採用一種透過非鏡像異構物鹽類之形成來解析掌性酸類或鹼類之古典方法。在化合物10的情況中,因為分子為兩性的,所以可使用酸類或鹼類。在掌性鹼的詳細篩選之後,顯示:從具有假麻黃鹼的化合物8的鏡像異構物形成的鹽類在一些溶劑中具有非常不同的溶解度分佈。將此關係最佳化以使使用(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼之化合物8的解析選擇性產生(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(化合物10‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼)。此步驟的詳細描述係顯示於實例6中。本發明所提供之另一方法為就地使用動態動力學解析(DKR)使不想要的鏡像異構物,(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物9)外消旋化。此步驟的詳細描述係顯示於實例7中。
在MCC解析和古典非鏡像異構物鹽解析方法二者中,分離不想要的鏡像異構物,化合物9。可將此不想要的鏡像異構物異構化以獲得消旋化合物8。此係藉由實施異構化順式異構體(化合物7)之相同步驟以提供粗製反式消旋物化合物8而完成。異構化作用係使用氫氧化鈉作為鹼在甲醇或乙醇中進行。此步驟的詳細描述係顯示於實例5中。
流程I中所述之合成方法係以大規模(例如,10公斤、20公斤、30公斤、40公斤、50公斤和60公斤及更高來容易地重現,提供>45%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物10)之總產率,以吲哚乙醯胺作為限制試劑。較佳地,1公斤之里多來定(lilolidine)(化合物4)產生大約l公斤的具有純度>99%之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(化合物10)。本發明也提供一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的多形體之方法。藉由將所得混合物加熱至50℃而將粗製化合物10溶解在溶劑(例如,THF)中。將所得混合物精密(polish)過濾、接著添加第二溶劑(諸如甲醇)和化合物10之型1種晶。
種晶之使用賦予結晶方法之多形體控制。在缺乏種晶下,型1或型2可以高純度自發性地結晶。因此,為了提供型1或型2種晶,允許自發性地結晶;及一旦形成,晶體產物可使用x-射線粉末繞射之定量分析示性以測定所產生之晶型和其多形體純度。該示性之後,此晶體產物可用作"種晶"或"種晶"以在如本文中所述之隨後的結晶期間控制多形體(型1或型2)產生。
然後將溶液共沸且在大氣壓下藉由蒸餾濃縮以減少溶劑(例如,THF)之體積。將溶液之溫度減至50℃並攪拌至少4小時。將等分試樣移出以確定所要多形體的形成。如果需要,可將多形體再溶解於THF(批料體積之30%)中,精密(polish)過濾、濃縮和種晶以獲得所要多形體結果。當獲得所要多形體型時,在50℃下添加50%甲醇水溶液並將溶液攪動另外2-3小時。然後將溶液冷卻至周圍溫度並固定至少2小時以使結晶。一旦完成,藉由過濾分離晶體,用另外50%甲醇水溶液洗滌,和在真空下於65℃乾燥至少12小時。將化合物10之多形體型1分離呈紅褐色固體。
如果以型2種晶替換型1種晶,也可用上述方法製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體。
治療方法
本發明提供用於治療需要其之對象的細胞增生症之方法,其係藉由將治療有效量之包含下列之醫藥組成物投予至需要該治療之對象:(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b))-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1。的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
細胞增生症可為癌症或癌前症狀。本發明進一步提供下列之組成物用於製造有效治療細胞增生症之藥物的用途:(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
本發明亦提供用於使需要其之對象免受細胞增生症之方法,其係藉由將治療有效量之包含下列之醫藥組成物投予需要該治療之對象:(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。細胞增生症可為癌症或前癌症狀。本發明也提供下列化合物用於製造有效防止細胞增生症之藥物的用途:(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
如使用於本文中,“需要其之對象”為具有細胞增生症之對象,或相對於全部族群而具有增加發展出細胞增生症風險之對象。需要其之對象可具有前癌症狀。較佳地,需要其之對象患有癌症。“對象”包括哺乳類動物。哺乳類動物可為例如任何哺乳類動物,例如人類、靈長類動物、鳥類、小鼠、大鼠、家禽、狗、貓、牛、馬、山羊、駱駝、綿羊或豬。較佳地,哺乳類動物為人類。
如使用於本文中,術語"細胞增生症"係指其中未經調節或不正常生長或二者之細胞的情況可導致非所要之症狀或疾病發展,其可為或可不為癌症。本發明典型的細胞增生症包含其中細胞分裂失調的各種症狀。典型細胞增生症包括但不限於贅瘤、良性腫瘤、惡性腫瘤、前癌症狀、原位腫瘤、有膜腫瘤、轉移性腫瘤、液體腫瘤、固態腫瘤、免疫性腫瘤、血液腫瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤及快速分裂細胞。術語“快速分裂細胞”如使用在本文中係定義成以超過或比在相同組織內相鄰或並置的細胞之間所預期或觀察之速度更快的速度分裂之任何細胞。細胞增生症包括初癌或前癌症狀。細胞增生症包括癌症。較佳地,本文中所提供之方法被用於治療或減輕癌症徵候。術語“癌症”包括固態腫瘤以及血液腫瘤及/或惡性腫瘤。“初癌細胞”或“前癌細胞”為表明細胞增生症為初癌或前癌症狀之細胞。“癌細胞(cancer cell)”或“癌性細胞(cancerous cell)”為表明細胞增生症為癌症之細胞。任何可重現的測量方式可用於鑑定癌細胞或前癌細胞。癌細胞或前癌細胞可藉由組織樣品(例如,生物檢體樣品)的組織學分類或分級鑑定。癌細胞或前癌細胞可經由使用適當的分子標記物鑑定。
典型非癌症狀或病症包括但不限於類風濕性關節炎;發炎;自體免疫疾病;淋巴增生症狀;肢端肥大症;類風濕性脊椎炎;骨關節炎;痛風;其他關節性症狀;敗血症;敗血性休克;內毒性休克;革蘭(gram)陰性敗血症;毒性休克症候群;氣喘;成人呼吸窘迫症候群;慢性阻塞性肺疾病;慢性肺發炎;發炎性腸病;克隆氏(Crohn)病;牛皮癬;濕疹;潰瘍性結腸炎;胰纖維化;肝纖維化;急性和慢性腎疾病;腸躁症;pyresis;血管再狹窄症;大腦瘧疾;中風和局部缺血傷害;神經創傷;阿耳滋海默氏病(Alzheimer’s disease);亨爾頓氏病(Huntington’s disease);帕金森氏病(Parkinson’s disease);急性和慢性疼痛;過敏性鼻炎;過敏性結膜炎;慢性心臟衰竭;急性冠狀動脈症候群;惡病體質;瘧疾;麻瘋;萊什曼原蟲病;萊姆(Lyme)病;萊特氏(Reiter)症候群;急性滑膜炎;肌肉退化;滑囊炎;肌腱炎;腱鞘炎;椎間板軟骨脫出、破裂或突出症候群;骨硬化症;血栓;血管再狹窄症;矽肺病;肺肉瘤;骨再吸收疾病(諸如骨質疏鬆症);移植對宿主反應;多發性硬化症;狼瘡;纖維肌痛;AIDS和其他病毒性疾病(諸如帶狀疱疹;單純疱疹I或II;流行性感冒病毒和細胞巨大病毒);及糖尿病。
典型癌症包括但不限於腎上腺皮質癌、AIDS相關癌症、AIDS相關淋巴瘤、直腸癌、肛門癌、肛道癌、闌尾癌、兒童小腦星狀細胞瘤、兒童大腦星狀細胞瘤、基底細胞癌、皮膚癌(非黑色素癌)、膽管癌、肝外膽管癌、肝內膽管癌、膀胱癌(bladder cancer)、泌尿膀胱癌(urinary bladder cancer)、骨頭和關節癌症、骨肉瘤和惡性纖維組織球瘤、腦癌、腦瘤、腦幹膠質細胞瘤、小腦星狀細胞瘤、大腦星狀細胞瘤/惡性神經膠質瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、天幕上原始性神經外胚細胞腫瘤、視覺路徑和腦下垂體之腦神經膠質瘤、乳癌、支氣管腺瘤/類癌、類癌腫瘤、胃腸道、神經系統癌症、神經系統淋巴瘤、中樞神經系統癌症、中樞神經系統淋巴瘤、子宮頸癌、兒童癌症、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生症、結腸癌、結直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、淋巴贅瘤、蕈狀肉芽腫、Seziary症候群、子宮內膜癌、食道癌、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、肝外膽管癌、眼癌、眼內黑色素瘤、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃(gastric)(胃(stomach))癌、胃腸道類癌、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞腫瘤、卵巢生殖細胞腫瘤、妊娠滋養層細胞神經膠質瘤、頭頸癌、肝細胞(肝)癌、何杰金(Hodgkin)淋巴瘤、咽下癌、眼內黑色素瘤、眼癌、胰小島細胞腫瘤(內分泌胰腺瘤)、卡波西(Kaposi)肉瘤、腎癌、腎癌(renal cancer)、腎臟癌(kidney cancer)、喉頭癌、急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性白血病、絲狀細胞白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、AIDS相關淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、沃登斯翠(Waldenstram)巨球蛋白血症、神經管胚細胞瘤、黑色素瘤、眼內(眼腈)黑色素瘤、梅克爾(merkel)細胞癌、惡性間皮瘤、間皮瘤、轉移性鱗狀頸部癌、口腔癌、舌癌、多發性內分泌贅瘤症候群、蕈狀肉芽腫、骨髓增生異常症候群、骨髓增生異常/骨髓增生症、慢性骨髓性白血病、急性髓系白血病、多發性骨髓瘤、慢性骨髓增生症、鼻咽癌、神經母細胞瘤、口癌、口腔癌、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、低惡性度卵巢腫瘤、胰臟癌、胰小島細胞胰臟癌、鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、松果體母細胞瘤和天幕上原始神經外胚層腫瘤、腦下垂體腫瘤、漿細胞腫瘤/多發性骨髓瘤、胸膜肺母細胞瘤、前列腺癌、直腸癌、腎盂和輸尿管、移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾腺癌、尤文(ewing)家族腫瘤、卡波西肉瘤、軟組織肉瘤、子宮癌、子宮肉瘤、皮膚癌(非黑色素瘤)、皮膚癌(黑色素瘤)、梅克爾細胞皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃(胃)癌、天幕上原始神經外胚層腫瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、腎盂和輸尿管與其他的泌尿器官的移行細胞癌、妊娠滋養細胞腫瘤、尿道癌、子宮內膜癌、子宮肉瘤、子宮肌瘤、陰道癌、外陰癌及威爾姆氏(Wilm’s)腫瘤。
“血液系統的細胞增生症”為一種涉及血液系統之細胞的細胞增生症。血液系統的細胞增生症可包括淋巴瘤、白血病、骨髓贅瘤、肥胖細胞贅瘤、骨髓發育不良、良性單株球蛋白症、淋巴瘤樣肉芽腫、淋巴瘤樣丘疹、真性紅血球增多症、慢性骨髓細胞白血病、原因不明性骨髓化生及原發性血小板增多症。血液系統之細胞增生症可包括血液系統之細胞過度增生、發育不良和化生。較佳地,本發明之組成物可用以治療選自由本發明之血液癌或本發明之血液細細胞增生症所組成之群組的癌。本發明之血液癌可包括多發性骨髓瘤;淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、孩童淋巴瘤和淋巴球及皮膚起源淋巴瘤);白血病(包括孩童白血病、髮樣細胞白血病、急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、和肥胖細胞性白血病);骨髓瘤;和肥胖細胞瘤。
“肺的細胞細胞增生症”為一種涉及肺細胞的細胞增生症。肺的細胞增生症可包括影響肺細胞的所有類型之細胞增生症。肺的細胞增生症可包括肺癌、肺的初癌或前癌狀態、肺之良性生長或病灶、肺之惡性生長或病灶、和體內除肺以外的其他組織和器官內的轉移性病灶。較佳地,本發明之組成物可用以治療肺癌或肺的細胞增生症。肺癌可包括所有類型之肺癌。肺癌可包括惡性肺贅瘤、原位癌、典型類癌瘤及非典型類癌瘤。肺癌可包括小細胞肺癌("SCLC")、非小細胞肺癌("NSCLC")、非鱗狀非小細胞肺癌、鱗狀非小細胞肺癌、鱗狀細胞癌、非鱗狀細胞癌、腺癌、小細胞癌、大細胞癌、腺鱗狀細胞癌及間皮瘤。肺癌可包括“瘢痕癌”、支氣管肺泡癌、肺巨細胞癌、梭形細胞癌、和大細胞神經內分泌癌。肺癌可包括具有組織及超微結構異質性(例如,混合細胞類型)的肺贅瘤。
肺的細胞增生症可包括影響肺細胞的所有類型之細胞增生症。肺的細胞增生症可包括肺癌、肺的前癌狀態。肺的細胞增生症可包括肺的增生、化生及發育不良。肺的細胞增生症可包括石棉誘發之增生、鱗狀化生及良性反應性間皮化生。肺的細胞增生症可包括以層狀鱗狀上皮置換柱狀上皮及黏膜發育不良。暴露於吸入有害環境試劑(諸如香煙及石棉)的個體可增加發展出肺的細胞增生症之風險。可使個體易發展出肺的細胞增生症的先前肺疾病可包括慢性間質肺病、壞死性肺病、硬皮病、類風濕病、肉狀瘤病、間質性肺炎、肺結核、重複性肺炎、特發性肺纖維化、肉芽腫、矽肺病、纖維硬化之肺泡炎及霍奇金氏病。
“結腸的細胞增生症”為一種涉及結腸細胞的細胞增生症。較佳地,結腸的細胞增生症為結腸癌。較佳地,本發明組成物可用以治療結腸癌或結腸的細胞增生症。結腸癌可包括所有類型之結腸癌。結腸癌可包括偶發性和遺傳性結腸癌。結腸癌可包括惡性結腸贅瘤、原位癌、典型類癌瘤及非典型類癌瘤。結腸癌可包括腺癌、鱗狀細胞癌及腺鱗狀細胞癌。結腸癌可與選自由遺傳性非息肉症結腸直腸癌、家族性腺瘤息肉症、嘉氏(Gardner)症候群、皮捷(Peutz-Jeghers)症候群、透氏(Turcot)症候群及幼年型息肉症所組成之群組的遺傳性症候群有關聯。結腸癌可由選自由遺傳性非息肉症結腸直腸癌、家族性腺瘤息肉症、嘉氏症候群、皮捷症候群、透氏症候群及幼年型息肉症所組成之群組的遺傳性症候群引起。
結腸的細胞增生症可包括影響結腸細胞的所有類型之細胞增生症。結腸的細胞增生症可包括結腸癌、結腸的前癌病狀、結腸的腺瘤性息肉及結腸的異時性病灶。結腸的細胞增生症可包括腺瘤。結腸的細胞增生症可以結腸的增生、化生及發育不良為特徵。可使個體易發展出結腸的細胞增生症的前結腸疾病可包括前結腸癌。可使個體易發展出結腸的細胞增生症的當前疾病可包括克隆氏病及潰瘍性結腸炎。結腸的細胞增生症可與在選自由p53、ras、FAP及DCC所組成群組之基因中的突變有關聯。由於在選自由p53、ras、FAP及DCC所組成群組之基因中的突變存在,故個體會具有發展出結腸的細胞增生症之提高風險。
“前列腺的細胞增生症”為一種涉及前列腺細胞的細胞增生症。前列腺的細胞增生症可包括影響前列腺細胞的所有類型之細胞增生症。前列腺的細胞增生症可包括前列腺癌、前列腺的初癌或前癌狀態、前列腺良性生長或病灶、前列腺惡性生長或病灶、和身體內除前列腺以外的組織和器官內的轉移性病灶。前列腺的細胞增生症可包括前列腺的增生、化生、和發育不良。
“皮膚的細胞增生症”為一種涉及皮膚細胞的細胞增生症。皮膚的細胞增生症可包括影響皮膚細胞的所有類型之細胞增生症。皮膚的細胞增生症可包括皮膚的初癌或前癌病狀、皮膚的良性生長或病灶、黑色素瘤、惡性黑色素瘤和皮膚的其他惡性生長或病灶、及在除了皮膚以外的身體組織與器官中的轉移性病灶。皮膚的細胞增生症可包括皮膚的增生、化生及發育不良。
“卵巢的細胞增生症”一種涉及卵巢細胞的細胞增生症。卵巢的細胞增生症可包括影響卵巢細胞的所有類型之細胞增生症。卵巢的細胞增生症可包括卵巢的初癌或前癌病狀、卵巢的良性生長或病灶、卵巢癌、卵巢的惡性生長或病灶、及在除了卵巢以外的身體組織與器官中的轉移性病灶。卵巢的細胞增生症可包括卵巢細胞的增生、化生及發育不良。
“乳房的細胞增生症”為一種涉及乳房細胞的細胞增生症。乳房的細胞增生症可包括影響乳房細胞的所有類型之細胞增生症。乳房的細胞增生症可包括乳癌、乳房的初癌或前癌病狀、乳房的良性生長或病灶、乳房的惡性生長或病灶、及在除了乳房以外的身體組織與器官中的轉移性病灶。乳房的細胞增生症可包括乳房的增生、化生及發育不良。
乳房的細胞增生症可為一種乳房的前癌狀態。本發明之組成物可用以治療乳房的前癌狀態。乳房的前癌狀態可包括乳房的非典型增生、原位導管癌(DCIS)、導管內癌、小葉原位癌(LCIS)、小葉瘤、乳房的0期或0級生長或病灶(例如0期或0級乳癌、或原位癌)。乳房的前癌狀態可根據美國癌症聯合委員會(AJCC)所接受的TNM分類方案進行分期,其中原發腫瘤(T)已指定為T0或Tis期;及其中區域淋巴結(N)已指定為N0期;及其中遠距轉移(M)被指定為M0期。
乳房的細胞增生症可為乳癌。較佳地,本發明組成物可用以治療乳癌。乳癌包括所有形式之乳房癌症。乳癌可包括原發性上皮乳癌。乳癌可包括其中乳房涉及其他腫瘤諸如淋巴瘤、肉瘤或黑色素瘤之癌症。乳癌可包括乳癌、乳房之導管癌、乳房之小葉癌、乳房之未分化癌、乳房之葉狀囊肉瘤、乳房之血管肉瘤及乳房之原發性淋巴瘤。乳癌可包括第I、II、IIIA、IIIB、IIIC和IV期乳癌。乳房之導管癌可包括侵襲性癌、具有優勢導管內成分之侵襲性原位癌瘤、發炎性乳癌及乳房之導管癌,其具有選自由下列所組成群組之組織類型:粉刺、黏液素(膠體)、髓、含淋巴浸潤液之髓、乳頭狀、硬性及管狀。乳房之小葉癌可包括具有優勢原位成分之侵襲性小葉癌、侵襲性小葉癌及浸潤性小葉癌。乳癌可包括佩吉特氏病(Paget’s disease)、具有導管內癌之佩吉特氏病及具有侵襲性導管癌之佩吉特氏病。乳癌可包括具有組織及超微結構異質性(例如混合細胞類型)之乳房贅瘤。
較佳地,本發明之化合物可用以治療乳癌。欲治療之乳癌可包括家族性乳癌。欲治療之乳癌可包括偶發性乳癌。欲治療之乳癌可發生於男性個體中。欲治療之乳癌可發生於女性個體中。欲治療之乳癌可發生於停經前女性個體或停經後女性個體中。欲治療之乳癌可發生於等於或大於30歲之個體或小於30歲之個體中。欲治療之乳癌可發生於等於或大於50歲之個體或小於50歲之個體中。欲治療之乳癌可發生於等於或大於70歲之個體或小於70歲之個體中。
可將欲治療之乳癌定型,以確認在BRCA1、BRCA2、或p53中的家族性或自發性突變。可將欲治療之乳癌定型為具有HER2/neu基因擴增、過度表現HER2/neu或具有低、中或高度HER2/neu表現。可將欲治療之乳癌對選自由雌激素受體(ER)、黃體素受體(PR)、人表皮生長因子受體-2、Ki-67、CA15-3、CA27-29及c-Met所組成之群組標記物定型。可將欲治療之乳癌定型為ER-未知、ER-豐富或ER-匱乏。可將欲治療之乳癌定型為ER-陰性或ER-陽性。乳癌之ER-定型可藉由任何可重現的方式執行。乳癌之ER定型可如Onkologie 27: 175-179(2004)中所述執行。可將欲治療之乳癌定型為PR-未知、PR-豐富或PR-匱乏。可將欲治療之乳癌定型為PR-陰性或PR-陽性。可將欲治療之乳癌定型為受體陽性或受體陰性。可將欲治療之乳癌定型為與CA 15-3或CA 27-29或二者的血液含量提高有關聯。
欲治療之乳癌可包括局部性乳房腫瘤。欲治療之乳癌可包括與陰性前哨淋巴結(SLN)生物檢體有關聯的乳房腫瘤。欲治療之乳癌可包括與陽性前哨淋巴結(SLN)生物檢體有關聯的乳房腫瘤。欲治療之乳癌可包括與一或多個陽性腋下淋巴結有關聯的乳房腫瘤,其中腋下淋巴結已藉由任何可適用方法分期。欲治療之乳癌可包括已定型為具有淋巴結陰性狀態(例如,淋巴結陰性)或淋巴結陽性狀態(例如,淋巴結陽性)的乳房腫瘤。欲治療之乳癌可包括已轉移至身體其他區域的乳房腫瘤。可將欲治療之乳癌分類為已轉移至選自由骨骼、肺、肝或腦所組成之群組的區域。可將欲治療之乳癌根據選自之轉移性、局部性、區域性、局部區域性、局部進行期、遠端、多中心、兩側、單側、對側、新診斷、復發及無法手術所組成之群組的特徵分類。
本發明化合物可用以治療或預防相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象的乳房之細胞增生症,或用以治療或預防乳癌。相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象為具有乳癌的家族史或個人病史之女性對象。相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象為在BRCA1或BRCA2或二者中具有生殖系列突變或自發性突變之女性對象。相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象為具有乳癌之家族史及在BRCA1或BRCA2或二者中具有生殖系突變或自發性突變之女性對象。相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象為大於30歲、大於40歲、大於50歲、大於60歲、大於70歲、大於80歲或大於90歲之女性。相對於全部族群而具有增加發展出乳癌風險之對象為患有非典型乳房增生、原位導管癌(DCIS)、導管內癌、小葉原位癌(LCIS)、小葉腫瘤或乳房之0期生長或病灶(例如,0期或0級乳癌或原位癌)之對象。
可將欲治療之乳癌根據史考夫-布姆-瑞查森(Scarff-Bloom-Richardson)系統以組織學分級,其中乳房腫瘤已以1、2或3的有絲分裂計數分數;1、2或3的核多形性分數;1、2、或3的細管形成分數;及介於3與9之間的史考夫-布姆-瑞查森總分評等。可將欲治療之乳癌根據乳癌治療的國際共識評審(International Consensus Panel on the Treatment of Breast Cancer)以選自由1級、1-2級、2級、2-3級或3級所組成之群組的腫瘤等級指定。
可將欲治療之癌症根據美國癌症聯合委員會(AJCC)TNM類系統分期,其中將腫瘤(T)指定成TX、T1、T1mic、T1a、T1b、T1c、T2、T3、T4、T4a、T4b、T4c或T4d期;及其中將區域淋巴結(N)指定成NX、N0、N1、N2、N2a、N2b、N3、N3a、N3b或N3c期;及其中將遠端轉移(M)指定成MX、M0或M1期。可將欲治療之癌症根據美國癌症聯合委員會(AJCC)分類分期為I期、IIA期、IIB期、IIIA期、IIIB期、IIIC期或IV期。可將欲治療之癌症根據AJCC分類指定為GX級(例如,無法評估的等級)、1級、2級、3級或4級。可將欲治療之癌症根據pNX、pN0、pN0(I-)、PN0(I+)、PN0(mol-)、PN0(mol+)、PN1、PN1(mi)、PN1a、PN1b、PN1c、pN2、pN2a、pN2b、pN3、pN3a、pN3b或pN3c的AJCC病理類別(pN)分期。
欲治療之癌症可包括已測定為小於或等於約2公分直徑的腫瘤。欲治療之癌症可包括已測定從約2至約5公分直徑的腫瘤。欲治療之癌症可包括已測定為大於或等於約3公分直徑的腫瘤。欲治療之癌症可包括已測定為大於5公分直徑的腫瘤。欲治療之癌症可藉由顯微外觀分類為完全分化、中度分化、不良分化或未分化。欲治療之癌症可藉由關於有絲分裂計數(例如,細胞分裂數量)或核多形性(例如,細胞改變)的顯微外觀分類。欲治療之癌症可藉由與壞死面積(例如,瀕死細胞或退化細胞的面積)有關的顯微外觀分類。欲治療之癌症可分類為具有異常核型、具有異常的染色體數目或具有一或多個外觀異常的染色體。欲治療之癌症可分類為非整倍體、三倍體、四倍體或具有改變倍體的染色體。欲治療之癌症可分類為具有染色體轉位或整個染色體刪除或倍增,或一部分染色體之刪除、倍增或擴增的區域。
欲治療之癌症可藉由DNA細胞計量術、流動式細胞測量術或影像細胞計量術評估。欲治療之癌症可定型為在細胞分裂的合成期(例如,在細胞分裂的S期)具有10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%細胞。欲治療之癌症可定型為具有低S-期細胞分率或高S-期細胞分率。
如使用於本文中,“正常細胞”為不可分類為“細胞增生症”的部分之細胞。正常細胞缺乏可能造成非所願的症狀或疾病發展的失調或異常生長或二者。較佳地,正常細胞具有正常作用的細胞週期檢查點控制機制。
如使用於本文中,“接觸細胞”係指其中化合物或其他物質之組成物與細胞直接接觸或足夠接近以在細胞中誘發所要生物效應的狀況。
如使用於本文中,“候選化合物”係指已於或將於一或多項試管內或活體內生物分析法中測試的本發明化合物,以便測定該化合物是否可能在細胞、組織、全身、動物或人體中誘發硏究員或臨床醫師尋求的所要生物或醫學反應。候選化合物為一種醫藥組成物,其包含(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以Cu Ka輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。生物或醫藥反應可為癌症的治療。生物或醫學反應可為細胞增生症的治療或預防。試管內或活體內生物分析法可包括(但不限於)酵素活性分析法、電泳位移分析法、報導基因分析法、試管內細胞存活率分析法及本文中所述之分析法。
如使用於本文中,“單一療法”係指將單一活性化合物或治療性化合物投予至有需要其之對象。較佳地,單一療法包含投予治療有效量之活性化合物。例如,癌症單一療法係以本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物中之一者投予至需要癌症治療之對象。可將單一療法與組合療法作對照,其中組合療法係投予多種活性化合物之組合,較佳地組合的每個組份係以治療有效量存在。在一個觀點中,在誘發所要生物效應方面,使用本發明化合物的單一療法比組合療法更有效。
如使用於本文中,“治療(treating或treat)”描述以對抗疾病、症狀或病症為目的來管理與照護病人,且包括投予本發明化合物來減輕疾病、症狀或病症的徵候或併發症,或消除疾病、症狀或病症。
本發明化合物亦可用於預防疾病、症狀或病症。如使用於本文中,“預防(preventing或prevent)”描述減少或消除疾病、症狀或病症的徵候或併發症之肇始。
治療癌症可產生腫瘤大小之減少。腫瘤大小的減少亦可稱為〝腫瘤消退〞。較佳地,治療之後,相對於其治療前的大小,腫瘤大小較佳地減少5%或更多;更佳地,腫瘤大小減少10%或更多;更佳地,減少20%或更多;更佳地,減少30%或更多;更佳地,減少40%或更多;甚至更佳地,減少50%或更多;及最佳地減少大於75%或更多。腫瘤大小可藉由任何可重現的測量方式測量。腫瘤大小可以腫瘤之直徑測量。
治療癌症可產生腫瘤體積之減少。較佳地,治療之後,相對於其治療前的大小,腫瘤體積減少5%或更多;更佳地,腫瘤體積減少10%或更多;更佳地,減少20%或更多,更佳地,減少30%或更多,更佳地,減少40%或更多,甚至更佳地,減少50%或更多,及最佳地減少大於75%或更多。腫瘤體積可藉由任何可重現的測量方式測量。
治療癌症可產生腫瘤數目之減少。較佳地,治療之後,相對於治療前的數目,腫瘤數目減少5%或更多,更佳地,腫瘤數目減少10%或更多,更佳地,減少20%或更多,更佳地,減少30%或更多,更佳地,減少40%或更多,甚至更佳地,減少50%或更多,及最佳地減少大於75%。腫瘤數目可藉由任何可重現的測量方式測量。腫瘤數目可藉由裸眼目測或以特定放大倍率計數腫瘤來測量。較佳地,特定放大倍率為2x、3x、4x、5x、10x或50x。
治療癌症可產生在遠離原發性腫瘤位置的其他組織或器官中之轉移病灶數目的減少。較佳地,治療之後,相對於治療前的數目,轉移病灶的數目較佳地減少5%或更多,更佳地,轉移病灶的數目減少10%或更多,更佳地,減少20%或更多,更佳地,減少30%或更多,更佳地,減少40%或更多,甚至更佳地減少50%或更多;及最佳地減少大於75%。轉移病灶數目可藉由任何可重現的測量方式測量。轉移病灶的數目可藉由裸眼目測或以特定放大倍率計數轉移病灶來測量。較佳地,特定放大倍率為2x、3x、4x、5x、10x或50x。
治療癌症可產生治療對象族群的平均存活時間相較於接受單獨載劑之族群的增加。較佳地平均存活時間增加超過30天;更佳地,超過60天;更佳地,超過90天;而最佳地,超過120天。族群的平均存活時間之增加可藉由任何可重現的方式測量。族群的平均存活時間之增加可例如藉由在以活性化合物開始治療後計算族群的平均存活長度來測量。族群的平均存活時間之增加亦可例如藉由在以活性化合物的第一回合治療完成後計算族群的平均存活長度來測量。
相較於未經治療之對象族群,治療癌症可產生治療對象族群的平均存活時間的增加。較佳地,平均存活時間增加超過30天;更佳地,超過60天;更佳地,超過90天;且最佳地,超過120天。族群的平均存活時間之增加可藉由任何可重現的方式測量。族群的平均存活時間之增加可例如藉由在以活性化合物開始治療後計算族群的平均存活長度來測量。族群的平均存活時間之增加亦可例如藉由在以活性化合物的第一回合治療完成後計算族群的平均存活長度來測量。
相較於接受不是本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物的藥物之單一療法的族群,治療癌症可產生治療對象之族群的平均存活時間之增加。較佳地,平均存活時間增加超過30天;更佳地,超過60天;更佳地,超過90天;且最佳地,超過120天。族群的平均存活時間之增加可藉由任何可重現的方式測量。族群的平均存活時間之增加可例如藉由在以活性化合物開始治療後計算族群的平均存活長度來測量。族群的平均存活時間之增加亦可例如藉由在以活性化合物的第一回合治療完成後計算族群的平均存活長度來測量。
相較於接受單獨載劑之族群,治療癌症可產生治療對象之族群的死亡率之減少。相較於未經治療之對象族群,治療癌症可產生治療對象之族群的死亡率之減少。相較於接受不是本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物的藥物之單一療法之族群,治療癌症可產生治療對象之族群的死亡率之減少。較佳地死亡率減少超過2%;更佳地,超過5%;更佳地,超過10%;及最佳地,超過25%。治療對象之族群的死亡率之減少可藉由任何可重現的方式測量。族群的死亡率之減少可例如藉由在開始以活性化合物治療後計算族群每單位時間與疾病有關的死亡之平均數目來測量。族群的死亡率之減少亦可例如藉由在以活性化合物的第一回合治療完成後計算每單位時間與疾病有關的死亡之族群平均數目來測量。
治療癌症可產生腫瘤生長速率之減少。較佳地,治療之後,相對於治療前的腫瘤生長速率,腫瘤生長速率減少至少5%;更佳地,腫瘤生長速率減少至少10%,更佳地,減少至少20%,更佳地,減少至少30%,更佳地,減少至少40%,更佳地,減少至少50%,甚至更佳地減少至少50%,且最佳地減少至少75%。腫瘤生長速率可根據任何可重現的測量方式測量。腫瘤生長速率可根據每單位時間腫瘤直徑的改變來測量。
治療癌症可產生腫瘤再生長之減少。較佳地,治療之後,腫瘤再生長較佳地小於5%;更佳地,腫瘤再生長小於10%;更佳地,小於20%;更佳地,小於30%;更佳地,小於40%;更佳地,小於50%;甚至更佳地,小於50%;及最佳地,小於75%。腫瘤再生長可藉由任何可重現的測量方式測量。腫瘤再生長可例如藉由測量在治療後先前腫瘤縮小後腫瘤直徑的增加來測量。腫瘤再生長之減少顯示治療停止後腫瘤無法復發。
治療或預防細胞增生症可產生細胞增生之速率的減少。較佳地,治療之後,細胞增生減少至少5%;更佳地,至少10%;更佳地,至少20%;更佳地,至少30%;更佳地,至少40%;更佳地,至少50%;甚至更佳地,至少50%;及最佳地至少75%。細胞增生之速率可藉由任何可重現的測量方式測量。細胞增生之速率可例如藉由測量每單位時間在組織樣品中分裂細胞的次數來測量。
治療或預防細胞增生症可產生增生細胞比例之減少。較佳地,治療之後,增生細胞比例減少至少5%;更佳地,至少10%;更佳地,至少20%;更佳地,至少30%;更佳地,至少40%;更佳地,至少50%;甚至更佳地至少50%;及最佳地至少75%。增生細胞之比例可藉由任何可重現的測量方式測量。較佳地增生細胞之比例係例如藉由定量在組織樣品中分裂細胞數目相對於未分裂細胞數目的來測量。增生細胞之比例可等於有絲分裂指數。
治療或預防細胞增生症可產生細胞增生面積或區域大小之減少。較佳地,治療之後,細胞增生面積或區域大小相對於其治療前的大小減少至少5%;更佳地,減少至少10%;更佳地,減少至少20%;更佳地,減少至少30%;更佳地,減少至少40%;更佳地,減少至少50%;甚至更佳地,減少至少50%;及最佳地減少至少75%。細胞增生面積或區域大小可藉由任何可重現的測量方式測量。細胞增生面積或區域大小可以細胞增生區或區段直徑或寬度測量。
治療或預防細胞增生症可產生具有異常外觀或形態的細胞之數目或比例減少。較佳地,治療之後,具有異常形態的細胞數目相對於其治療前的大小減少至少5%;更佳地,減少至少10%;更佳地,減少至少20%;更佳地,減少至少30%;更佳地,減少至少40%;更佳地,減少至少50%;甚至更佳地,減少至少50%;及最佳地減少至少75%。異常的細胞外觀或形態可藉由任何可重現的測量方式測量。異常的細胞形態可藉由顯微術(例如使用反相組織培養顯微鏡)測量。異常的細胞形態可呈現核多形性之形式。
如使用於本文中,術語“選擇性地”表示傾向在一族群中發生的頻率比在另一組族群中更高。比較的族群為細胞族群。較佳地,本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物選擇性地作用於癌細胞或前癌細胞,但不作用於正常細胞。較佳地,本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物選擇性地調控一種分子標靶(例如,c-met),但不顯著地調控另一分子標靶(例如,蛋白質激酶C)。本發明亦提供一種選擇性地抑制酵素(諸如激酶)活性之方法。較佳地,若一個事件在族群A中比在族群B中更頻繁地發生超過二倍時,則較佳地該事件係相對於族群B而選擇性地發生於族群A中。若一個事件在族群A中更頻繁地發生超過五倍時,則該事件係選擇性地發生。若一個事件在族群A中比在族群B中更頻繁地發生超過十倍;更佳地在族群A中比在族群B中更頻繁地超過50倍;甚至更佳地超過100倍;而最佳地超過1000倍時,則該事件係選擇性地發生。例如,若在癌細胞中的細胞死亡比正常細胞更頻繁地發生超過二倍時,則細胞死亡可謂選擇性發生於癌細胞中。
本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物可調控分子標靶(例如,c-met)之活性。調控係指刺激或抑制分子標靶之活性。較佳地,若相對於在相同條件下但僅缺乏該化合物存在下的分子標靶之活性,本發明化合物刺激或抑制分子標靶之活性至少2倍時,則該化合物較佳地調控分子標靶活性。更佳地,若對於在相同條件下但僅缺乏該化合物存在下的分子標靶之活性時,本發明化合物刺激或抑制分子標靶之活性至少5倍,至少10倍,至少20倍,至少50倍,至少100倍相則該化合物調控分子標靶之活性。分子標靶之活性可藉由任何可重現方式測量。分子標靶之活性可於試管內或活體內測量。例如,分子標靶之活性可藉由酵素活性分析法或DNA結合分析法而於試管內測量,或分子標靶之活性可藉於分析報導基因的表現而於活體內測量。
若相對於在相同條件下但僅缺乏該化合物存在下的分子標靶之活性,化合物的添加不刺激或抑制分子標靶之活性大於10%,則本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物不顯著地調控分子標靶之活性。
如使用於本文中,術語“同功酵素選擇性”表示相較於酵素的第二同功型,優先抑制或刺激酵素之第一同功型(例如,相較於激酶同功酵素β,優先抑制或刺激激酶同功酵素α)。較佳地,本發明化合物證明與達成生物效應所需之劑量中有最少4倍差異,較佳為10倍差異,更佳為50倍差異。較佳地,本發明化合物證明此跨越抑制範圍的差異,且對感興趣之分子標靶的差異係以IC50 (亦即50%之抑制作用)舉例說明。
本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形物或溶劑合物投予至需要之細胞或對象可產生感興趣激酶之活性的調控作用(亦即刺激或抑制作用)。
本發明提供評估一種組成物的生物活性之方法,該組成物包含(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰。
在一方法中,可利用以酵素活性為基準之分析法。在一種特殊的酵素活性分析法中,酵素活性係來自激酶。如使用於本文中,“激酶”係指催化γ-磷酸酯從ATP轉移至蛋白質及肽中的Ser/Thr或Tyr之側鏈上的羥基且密切涉及各種重要細胞功能的控制(也許最顯著地控制:訊號轉導、分化及增生)的大類別酵素。評估在人體中有約2,000種不同的蛋白質激酶,且雖然每一種該等激酶使特別的蛋白質/肽受質磷酸化,但是該等全部以高保存袋結合相同的第二受質ATP。約50%已知的致癌基因產物為蛋白酪胺酸激酶(PTK),且該等激酶活性已顯示導致細胞形成。較佳地,所分析之激酶較佳為酪胺酸激酶。
由本發明化合物所引起的酵素活性之改變可以所揭示之分析法測量。酵素活性的改變可以某些受質的磷酸化程度的改變特徵化。如使用於本文中,“磷酸化作用”係指添加磷酸基團至受質(包括蛋白質及有機分子)中;且扮演調節蛋白質之生物活性的重要角色。較佳地,所分析且測量之磷酸化作用包含添加磷酸基圍至酪胺酸殘基中。受質可為肽或蛋白質。
在一些分析法中使用免疫試劑,例如抗體和抗原。可在一些分析法中利用螢光測量酵素活性。如使用於本文中,“螢光”係指一種過程,透過該過程相同分子吸收較高能量的入射光子而使分子發射光子。
本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物投予至需要其之細胞或對象可產生c-Met之活性的調控作用(亦即刺激或抑制作用)。如使用於本文中,c-Met之活性係指由c-Met進行的任何生物功能或活性。例如,c-Met的功能包括下游標靶蛋白質的磷酸化作用。c-Met的其他功能包括自磷酸化作用、接器(adaptor)蛋白質(諸如Gab-1、Grb-2、Shc、SHP2及c-Cb1)的結合及訊號轉導子(諸如Ras、Src、PI3K、PLC-γ、STATs、ERK1和2及FAK)的活化作用。
本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物投予至需要其之細胞或對象產生ERK 1或ERK 2或二者的調控作用(亦即刺激或抑制作用)。如使用於本文中,ERK 1或ERK 2之活性係指由ERK 1或ERK 2進行的任何生物功能或活性。例如,ERK 1或ERK 2之功能包括下游標靶蛋白質的磷酸化作用。
活化係指將物質(例如,蛋白質或核酸)之組成物處於適合進行所欲生物功能之狀態。能夠被活化的物質之組成物亦具有未活化狀態。物質之活化組成物可具有抑制或刺激的生物功能或二者。
升高係指增加物質(例如,蛋白質或核酸)之組成物的所欲生物活性。升高可經由增加物質之組成物的濃度而發生。
如使用於本文中,“細胞週期檢查點路徑”係指涉及細胞週期檢查點之調控的生化路徑。細胞週期檢查點路徑可對一或多個包含細胞週期檢查點的功能具有刺激或抑制效應或二者。細胞週期檢查點路徑係由至少兩種物質之組成物所組成,較佳為蛋白質,其二者促成細胞週期檢查點之調控。細胞週期檢查點路徑可透過細胞週期檢查點路徑中之一或多個成員的活化作用而活化。較佳地,細胞週期檢查點路徑較佳為生化傳訊路徑。
如使用於本文中,“細胞週期檢查點調節劑”係指可至少部分具有調控細胞週期檢查點之功能的物質之組成物。細胞週期檢查點調節劑可對一或多個包含細胞週期檢查點的功能具有刺激或抑制效應或二者。細胞週期檢查點調節劑可為蛋白質或不為蛋白質。
治療癌症或細胞增生症可造成細胞死亡,且較佳地細胞死亡造成族群中的細胞數目減少至少10%。更佳地,細胞死亡表示減少至少20%;更佳地,減少至少30%;更佳地,減少至少40%;更佳地,減少至少50%;最佳地,減少至少75%。在族群中的細胞數目可藉由任何可重現的方式測量。在族群中的細胞數目可藉由螢光活化之細胞分選(FACS)、免疫螢光顯微術和光顯微術測量。測量細胞死亡之方法顯示於Li等人,(2003),Proc Natl Acad Sci U S A. 100(5): 2674-8。在一觀點中,細胞死亡係由細胞凋亡而發生。
較佳地,有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物對正常細胞不具有顯著的細胞毒性。若投予治療有效量之化合物不誘發大於10%之正常細胞的細胞死亡,則治療有效量之化合物對正常細胞不具有顯著的胞毒性。若投予治療有效量之化合物不誘發大於10%之正常細胞的細胞死亡,則治療有效量之化合物不顯著地影響正常細胞的存活。在一觀點中,細胞死亡係由細胞凋亡而發生。
使細胞與本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物接觸可在癌細胞中選擇性地誘發或活化細胞死亡。將本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物投予至需要其之對象可在癌細胞中選擇性地誘發或活化細胞死亡。使細胞與本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物接觸可在受細胞增生症影響的一或多種細胞中選擇性地誘發細胞死亡。較佳地,將本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物投予需要其之對象可在受細胞增生症影響的一或多種細胞中選擇性地誘發細胞死亡。
本發明關於一種藉由將本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物投予至需要其之對象而治療或預防癌症之方法,其中投予本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物產生一或多種下列作用:在細胞週期的G1期及/或S期中細胞之聚積、經由癌細胞中的細胞死亡而正常細胞中沒有顯著的細胞死亡量的胞毒性、在具有治療指數至少2之動物中的抗腫瘤活性、及細胞週期檢查點的活化作用。如使用於本文中,“治療指數”為最大耐受劑量除以有效劑量。
熟諳此技藝者可參考在本文所討論之已知技術或同等技術之詳細說明的一般參考文本。該等工具書包括Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley and Sons,Inc.(2005);Sambrook等人,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(3d ed.),Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,New York(2000);Coligan等人,Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,N.Y.;Enna等人,Current Protocols in Pharmacology,John Wiley & Sons,N.Y.;Fingl等人,The Pharmacological Basis of Therapeutics(1975),Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,18版(1990)。當然亦在進行或使用本發明的觀點時參考這些文本。
如使用於本文中,“組合療法”或“共同療法”包括投予本發明化合物及至少第二劑,該第二劑為意欲從這些治療劑的共同作用提供有利效應的特殊治療方案的一部分。有利的組合效應包括(但不限於)從治療劑組合而得到的藥物動力學或藥力學共同作用。該等治療劑的組合投予典型地經限定的期間內進行(視所選擇之組合而經常為數分鐘、數小時、數天或數週)。“組合療法”可意欲(但是通常不意欲)包含投予二或多種該等治療劑,該等治療劑為分開的單一療法方案的一部分,其附帶或任意地導致本發明的組合。
“組合療法”意欲包含以順序方式投予該等治療劑(其中每一治療劑以不同的時間投予),及以實質上同時的方式投予該等治療劑或治療劑中之至少兩者。實質上同時投予可例如藉由將具有固定比率之每一治療劑的單一膠囊,或以多個每一治療劑的單一膠囊投予至對象而實現。每一治療劑的順序投予或實質上同時投予可藉由包括(但不限於)口服途徑、靜脈內途徑、肌肉內途徑及經由黏膜組織直接吸收的任何適當途徑產生。治療劑可以相同的途徑或不同的途徑投予。例如,經選擇組合之第一治療劑可經靜脈內注射投予,而組合的其他治療劑可經口服投予。或者,例如所有的治療劑可經口服投予或所有的治療劑可經靜脈內注射投予。投予治療劑的順序沒有嚴格的要求。
“組合療法”亦包含投予如上述之治療劑與其他生物活性成分及非藥物療法(例如,手術或輻射治療)的進一步組合。在組合療法進一步包含非藥物治療時,非藥物治療可在任何適合的時間進行,只要從治療劑與非藥物治療組合的共同作用產生有利效果。例如,在適當的情況下,當非藥物治療暫時從投予治療劑撤出(或許數天或甚至數週)時,仍達成有利效果。
本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物可與第二種化學治療劑組合投予。第二種化學治療劑可為紫杉烷、芳香酶抑制劑、蒽環素(anthracycline)、微管靶定藥物、拓樸異構酶毒性藥物、標靶單株或多株抗體、分子標靶或酵素之抑制劑(例如,激酶抑制劑)、或胞苷類似藥物。較佳地,該化學治療劑可為(但不限於)他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)、來曲唑(letrozole)、(曲妥珠單抗(trastuzumab))、(依馬替尼(imatanib)(太平洋紫杉醇(paclitaxel))、環磷醯胺、洛伐他汀(lovastatin)、含羞草素(minosine)、araC、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氨甲喋呤(MTX)、(多西他賽(docetaxel))、(戈舍瑞林(goserelin))、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑(nocodazole)、替尼泊苷(teniposide)、依托泊苷(etoposide)、(吉西他濱(gemcitabine))、埃博黴素(epothilone)、溫諾平(navelbine)、喜樹鹼(camptothecin)、柔紅黴素(daunonibicin)、更生黴素(dactinomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、安吖啶(amsacrine)、阿黴素(doxorubicin)(阿德力黴素(adriamycin))、表阿黴素(epirubicin)或去甲氧基柔紅黴素(idarubicin)。第二種化學治療劑可為細胞介素諸如今G-CSF(粒細胞集落刺激因子)。本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物可與輻射治療組合投予。本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物可與標準化學療法組合諸如(但不限制於)CMF(環磷醯胺、氨甲喋呤和5-氟尿嘧啶)、CAF(環磷醯胺、阿德力黴和5-氟尿嘧啶)、AC(阿德力黴和環磷醯胺)、FEC(5-氟尿嘧啶、表阿黴素和環磷醯胺)、ACT或ATC(阿德力黴、環磷醯胺和太平洋紫杉)、或CMFP(環磷醯胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶和強體松(prednisone))。
本發明化合物,或其醫藥上可接受之鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑合物可與酵素抑制劑(諸如受體或非受體激酶)一起投予。本發明的受體及非受體激酶為例如酪胺酸激酶或絲胺酸/蘇胺酸激酶。本發明的激酶抑制劑為小分子多核酸、多肽或抗體。
典型酪胺酸激酶包括但不限於貝伐珠單抗(Bevacizumab)(標靶VEGF)、BIBW2992(標靶EGFR和Erb2)、西妥昔單抗(Cetuximab)/Erbitux(標靶Erbl)、依馬替尼(imatinib)/Gleevec(標靶Bcr-Abl)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(標靶Erb2)、吉非替尼(Gefitinib)/Iressa(標靶EGFR)、電珠單抗(Ranibizumab)(標靶VEGF)、培加他尼(Pegaptanib)(標靶VEGF)、埃羅替尼(Erlotinib)/Tarceva(標靶Erbl)、尼羅替尼(Nilotinib)(標靶Bcr-Abl)、拉帕替尼(Lapatinib)(標靶Erb1和Erb2/Her2)、GW-572016/拉帕替尼二甲苯磺酸鹽(lapatinib ditosylate)(標靶HER2/Erb2)、帕尼單抗(Panitumumab)/Vectibix(標靶EGFR)、凡德替尼(Vandetinib)(標靶RET/VEGFR)、E7080(包括RET和VEGFR的多重標靶)、賀癌平(Herceptin)(標靶HER2/Erb2)、PKI-166(標靶EGFR)、卡奈替尼(Canertinib)/CI-1033(標靶EGFR)、舒尼馬替尼(Sunitinib)/SU-11464/Sutent(標靶EGFR和FLT3)、馬妥珠單抗(Matuzumab)/Emd7200(標靶EGFR)、EKB-569(標靶EGFR)、Zd6474(標靶EGFR和VEGFR)、PKC-412(標靶VEGR和FLT3)、瓦他拉尼(Vatalanib)/Ptk787/ZK222584(標靶VEGR)、CEP-701(標靶FLT3)、SU5614(標靶FLT3)、MLN518(標靶FLT3)、XL999(標靶FLT3)、VX-322(標靶FLT3)、Azd0530(標靶SRC)、BMS-354825(標靶SRC)、SKI-606(標靶SRC)、CP-690(標靶JAK)、AG-490(標靶JAK)、WHI-P154(標靶JAK)、WHI-P131(標靶JAK)、索拉非尼(Sorafinib)/Nexavar(標靶RAF激酶、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、KIT、FLT-3和RET)、達沙替尼(Dasatinib)/Sprycel(BCR/ABL和Src)、AC-220(標靶Flt3)、AC-480(標靶所有的HER蛋白質,〝panHER〞)、莫特塞尼二磷酸鹽(Motesanib diphosphate)(標靶VEGF1-3、PDGFR和c-kit)、地諾單抗(Denosumab)(標靶RANKL,抑制SRC)、AMG888(標靶HER3)及AP24534(包括Flt3的多重標靶)。
典型絲胺酸/蘇胺酸激酶包括但不限於雷帕霉素(Rapamune)(標靶mTOR/FRAP1)、狄羅莫司(Deforolimus)(標靶mTOR)、卓定康(Certican)/依維莫司(Everolimus))(標靶mTOR/FRAP1)、AP23573(標靶mTOR/FRAP1)、伊利盧(Eril)/法舒地爾鹽酸鹽(fasudil hydrochloride)(標靶RHO)、夫拉平度(Flavopiridol)(標靶CDK)、希利西力伯(Seliciclib)/CYC202/Roscovitrine(標靶CDK)、SNS-032/BMS-387032(標靶CDK)、魯伯斯塔(Ruboxistaurin)(標靶PKC)、Pkc412(標靶PKC)、拜由斯達汀(Bryostatin)(標靶PKC)、KAI-9803(標靶PKC)、SF1126(標靶PI3K)、VX-680(標靶極光(Aurora)激酶)、Azd1152(標靶極光激酶)、Arry-142886/AZD-6244(標靶MAP/MEK)、SCIO-469(標靶MAP/MEK)、GW681323(標靶MAP/MEK)、CC-401(標靶JNK)、CEP-1347(標靶JNK)及PD 332991(標靶CDK)。
較佳組合療法包括但不限於(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吲咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑,與埃羅替尼一起投予,(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并(3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑與吉西他濱一起投予,和(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑與索拉非尼一起投予。在一些體系中,對象或病患接受埃羅替尼之組合,每日以150毫克投予一次,併用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,每日以360毫克投予二次。在其他體系中,對象或病患接受吉西他濱之組合,每週一次以1000毫克/米2 靜脈輸液投予30分鐘,併用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,每日以360毫克經口投予二次或以120毫克經口投予一天二次連續。在另一體系中,對象或病患接受索拉非尼之組合,每日以200毫克投予二次,併用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,每日以360毫克投予二次。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之較佳劑型包括但不限於膠囊和劑。
醫藥組成物
本發明也提供醫藥組成物,其包含(a)具有以HPLC測定之掌性純度大於99%且包含小於1%(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮及醫藥上可接受之載劑;(b)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑;或(c)(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體,其特徵為以CuKα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰,及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
“醫藥組成物”為一種適合投予對象之形式的包含本發明化合物之調配物。在一體系中,醫藥組成物呈散裝或單位劑型。單位劑型為任何各種形式,包括例如膠囊、IV袋、錠劑、在氣霧劑吸入器上的單泵劑量或小瓶。在單位劑量組成物中的活性成分(例如,所揭示之化合物或其鹽、水合物、溶劑合物或異構物之調配物)的量為有效量且根據所涉及之特別治療而改變。一般熟諳此技術者將理解有時必需視病患年齡和症狀而進行例行的劑量改變。劑量亦取決於投予途徑而定。可預計各種途徑,包括口服、肺、直腸、非經腸、穿透皮膚、皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內、吸入、頰內、舌下、胸膜內、椎管內、鼻內、等等。本發明化合物用於局部或穿透皮膚投予之劑型包括粉劑、噴霧劑、膏劑、漿劑、霜劑、乳劑、凝膠、溶液、貼片及吸入劑。在一體系中,活性化合物係在無菌條件下與醫藥上可接受之載劑及任何有必需的防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。
如使用於本文中,詞句“醫藥上可接受之”係指該等在健全的醫學判斷範圍內適合使用於與人類及動物之組織接觸而沒有過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症,具有相稱合理的利益/成本比的化合物、材料、組成物、載劑及/或劑型。
“醫藥上可接受之賦形劑”表示可用於製造醫藥組成物之通常為安全、無毒性且不是生物學上及在其他方面不想要的賦形劑,且包括該等獸醫使用以及人類醫藥使用可接受為的賦形劑。“醫藥上可接受之賦形劑”如使用於說明書及申請專利範圍中同時包括一或一種以上該賦形劑。
將本發明的醫藥組成物調配成與其意欲之投予途徑可相容。投予途徑的例子包括非經腸(例如,靜脈內、皮膚內、皮下)、口服(例如,吸入)、穿透皮膚(局部)及穿透黏膜投予。用於非經腸、皮膚內或皮下施予的溶液或懸浮液可包括下列成分:無菌稀釋劑諸如注射用水、食鹽水溶液、不揮發油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑;抗細菌劑,諸如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯;抗氧化劑,諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉;螯合劑,諸如乙二胺四乙酸;緩衝劑,諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽,及用於張力調節之試劑,諸如氯化鈉或葡萄糖。pH可以酸或鹼(諸如鹽酸或氫氧化鈉)調整。非經腸製劑可封裝於玻璃或塑膠所製成之安瓶、可棄式注射器或多劑小瓶中。
本發明化合物或醫藥組成物可以許多目前用於化學治療的熟知方法投予至對象。例如,對於治療癌症,本發明化合物可直接注射於腫瘤中、注射於血流或體腔中,或以口服或以貼片經由皮膚施予。所選擇之劑量應足以構成有效治療但又不會過高而引起不可接受之副作用。疾病狀態(例如,癌症、初癌、等等)及病患健康較佳地應在治療期間和治療後一段合理的期間內緊密地監控。
術語“治療有效量”,如使用於本文中,係指用於治療、改善或預防經鑑定之疾病或症狀或顯示可偵測之治療或抑制效果之藥劑的量。效果可藉由此技藝中已知的任何分析方法偵測。用於對象的精確有效量將取決於對象體重、身材和健康;症狀本性和程度;及經選擇用於投予之治療或治療組合而定。用於既定情況的治療有效量可藉由在臨床醫師的技巧及判斷範圍內按慣例經驗來決定。在較佳的觀點中,欲治療之疾病或症狀為癌症。在另一個觀點中,欲治療之疾病或症狀為細胞增生症。
對於任何化合物,治療有效量可以例如贅瘤細胞的細胞培養分析法或經常以大鼠、小鼠、兔、狗或豬的動物模式初步評估。動物模式亦可用以測定適當的濃度範圍及投予途徑。該資訊接著可用以測定投予至人類的有效劑量及途徑。治療/預防效力及毒性可在細胞培養物或實驗動物中以標準醫藥程序測定,例如ED50 (在50%之族群中有療效的劑量)及LD50 (對50%之族群的致死劑量)。在毒性與療效之間的劑量比率為治療指數,且其可以LD50 /ED50 之比率表示。以顯示大的治療指數之醫藥組成物較佳。劑量可視所使用之劑型、病患敏感度及投予途徑而在此範圍內變動。
劑量及投予係經調整以提供足夠的活性劑含量或維持所要效應。可列入考慮的因素包括病況嚴重性、對象的一般健康狀況、對象的年齡、體重和性別、飲食、投予時間和頻率、藥物組合、反應敏感度及對治療的耐受性/反應。長效醫藥組成物可視特別的調配物之半生期及清除率而以每3至4天、每週或每兩週投予一次。
包含本發明活性化合物的醫藥組成物可以一般已知的方式製造,例如以習知的混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、磨光、乳化、囊封、捕捉或凍乾法方式。醫藥組成物可以習知方式使用一種或多種醫藥上可接受之載劑調配,該載劑包含促使活性化合物加工成可使用於醫藥的製劑之賦形劑及/或輔助劑。當然,適當的調配物係視所選擇之投予途徑而定。
適合於注射使用的醫藥組成物包括即席製造無菌可注射溶液或分散液的無菌水溶液或分散液及無菌粉末。對於靜脈內投予,適當載劑包括生理食鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM (BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)。在所有情況中,組成物必須為無菌且應為以易注射性存在的程度之流體。其在製造及貯存條件下必須為安定的且必須以對抗微生物(諸如細菌和真菌)的污染作用予以保存。載劑可為包含例如水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇及液體聚乙二醇、等等)及其適當混合物之溶劑或分散介質。適當的流動性可例如藉由使用塗膜(諸如卵磷脂)、在分散液的情況中藉由維持所需的粒徑及藉由使用界面活性劑而維持。預防微生物作用可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑(例如對羥苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗壞血酸、硫柳汞、等等)而達成。在許多情況下,較佳的是在組成物中包括等張劑(例如,糖)、多元醇(諸如甘露醇、山梨醇)、及/或氯化鈉。可注射組成物的延長吸收可藉由在組成物中包括延遲吸收之試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)而引起。
無菌可注射溶液可藉由將活性化合物以所需的量與上述列舉之成分中之一或組合一起併入適當的溶劑中,若必需時,接著過濾滅菌而製造。通常分散液係藉由將活性化合物併入含有基本分散介質及來自上述列舉之所要其他成分的無菌媒液中而製造。在用於製造無菌可注射溶液之無菌粉末的情況中,製造方法為真空乾燥及凍乾,其產生活性成分加上來自其先前經無菌過濾之溶液的任何額外所要成分之粉末。
口服組成物通常包括惰性稀釋劑或可食用的醫藥上可接受之載劑。彼等可封裝於明膠膠囊內或壓縮成錠劑。為了口服治療投予之目的,可將活性化合物與賦形劑合併且以錠劑、菱形錠或膠囊形式使用。口服組成物亦可使用用作為漱口水的流體載劑製造,其中在流體載劑中的化合物係經口施予且漱口,並吐出或吞嚥。醫藥上可相容之黏合劑及/或佐劑材料可包括作為組成物的一部分。錠劑、丸劑、膠囊、菱形錠等等可包含任何下列成分或類似性質之化合物:黏合劑,諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠;賦形劑,諸如澱粉或乳糖;崩散劑,諸如交聯羧甲纖維素鈉(croscarmellose sodium)、乙醇酸澱粉鈉、羧甲基澱粉鈉、藻酸、普姆膠(Primogel)、交聯聚維酮(crospovidone)或玉米澱粉;潤滑劑諸如硬脂酸鎂、硬脂酸、硬脂富馬酸鈉或史特羅(Sterotes);助滑劑,諸如膠體二氧化矽;甜味劑,諸如蔗糖或糖精;或調味劑,諸如薄荷、柳酸甲酯或柳橙口味。
對於經由吸入投予,化合物係以氣溶膠噴霧形式從包含適合的推進劑(例如,氫氟烷、氟氯碳化物、二氧化碳)之加壓容器或配送器,或噴霧器輸送。
全身性投予亦可藉由穿透黏膜或穿透皮膚的方式。對於穿透黏膜或穿透皮膚投予,適合於穿透障壁的穿透劑係用於此調配物中。該等穿透劑通常為此技藝中已知,且包括例如用於穿透黏膜投予,清潔劑、膽鹽及梭鏈孢酸(fusidic acid)衍生物。穿透黏膜投予可經由使用鼻噴霧劑或栓劑而實現。對於穿透皮膚投予,活性化合物係調配成通常為此技藝中已知的軟膏、油膏、凝膠或乳膏。
活性化合物可用防止化合物從身體快速消除的醫藥上可接受之載劑製造,諸如控制釋放調配物,包括植入物及微囊封輸送系統。可使用生物可降解且生物可相容之聚合物,諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸或聚酯類之混合物或共聚物。備製該等調配物之方法為那些熟諳此技藝者顯而易見者。材料亦可商業上得自Alza公司及Nova藥學公司。微脂體懸浮液(包括以對病毒抗原之單株抗體靶定受感染之細胞的微脂體)亦可用作為醫藥上可接受之載劑。這些可根據那些熟諳此技藝者已知的方法製造,例如美國專利案第4,522,811號中所述。
為了劑量之容易投予及均勻,將口服或非經腸組成物調配成單位劑型尤其有利。單位劑型如使用在本文所中係指適合作為用於欲治療之對象的單一劑量的物理分離單位;每個單位包含與所需醫藥載劑結合的經計算以產生所欲療效之預定量的活性化合物。本發明的單位劑型規格係由且直接取決於活性化合物的獨特特徵及欲達成之特別療效而指定。
在治療應用中,根據本發明所使用之醫藥組成物的劑量係視試劑、服藥病患的年齡、體重和臨床症狀、及投予治療的臨床醫師或執業醫師之經驗和判斷而改變,除其他影響所選劑量因素之外。通常,劑量應足以導致腫瘤生長減慢,且較佳地消退,且亦較佳地引起癌症完全消退。劑量可在從每天約0.01毫克/公斤至每天約5000毫克/公斤為範圍。在較佳觀點中,劑量可在從每天約1毫克/公斤至每天約1000毫克/公斤為範圍。在一觀點中,劑量將在約0.1毫克/天至約50公克/天;約0.1毫克/天至約25公克/天;約0.1毫克/天至約10公克/天;約0.1毫克/天至約3公克/天;或約0.1毫克/天至約1公克/天之範圍內,其為單次、分次或連續劑量(該劑量可以公斤計之病患體重、以平方公尺計之體表面積及以歲計之年齡而調整)。在較佳應用中,劑量可為大約400毫克每天二次(b.i.d.)。在特殊應用中,劑量為360毫克(mg)每天二次(b.i.d.)。更佳地,劑型為膠囊或錠劑且投予二或三個膠囊或錠劑,其合併劑量為360毫克(mg)。此劑型為每天投予二次720毫克(mg)之總劑量。有效量之藥劑係提供如臨床醫師或其他合格觀察員所註明客觀可鑑定之改善。例如,在病患中的腫瘤消退可參考腫瘤直徑測量。腫瘤直徑之減少表示消退。消退亦藉由停止治療後腫瘤不再復發來表示。如使用於本文中,術語“劑量有效方式”係指在對象或細胞中產生所要的生物效果之活性化合物的量。
醫藥組成物可與投予指示一起包括於容器、包裝或配送器內。
本發明化合物能夠進一步形成鹽類。亦將所有這些形式預計於所主張之本發明範圍內。
如使用於本文中,“醫藥上可接受之鹽”係指本發明化合物的衍生物,其中母化合物係製成其酸或鹼鹽而予以修改。醫藥上可接受之鹽的例子包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺類)之無機或有機酸鹽、酸性殘基(諸如羧酸)之鹼或有機鹽、等等。醫藥上可接受之鹽包括例如從無毒性無機或有機酸所形成之母化合物的習知無毒性鹽或四級銨鹽。例如,該等習知無毒性鹽包括(但不限於)該等從選自下列的無機和有機酸所衍生者:2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙烷磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、雙碳酸、碳酸、檸檬酸、乙二胺四乙酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、麩胺酸、乙醇酸、乙二醇對胺苯胂酸、己基間苯二酚酸、哈胺酸(hydrabamic)、氫溴酸、氫氯酸、氫碘酸、羥基順丁烯二酸、羥萘酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖醛酸、月桂基磺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、杏仁酸、甲烷磺酸、萘磺酸(napsylic)、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、聚半乳糖酸、丙酸、柳酸、硬脂酸、鹽基性酢酸(subacetic)、琥珀酸、胺磺酸、磺胺酸、硫酸、單寧酸、酒石酸、甲苯磺酸及最常出現的胺酸,例如甘胺酸、丙胺酸、苯基丙胺酸、精胺酸等。
醫藥上可接受之鹽的其他例子包括己酸、環戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羥苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、第三丁基乙酸、黏康酸、等等。本發明亦包含當存在於母化合物中的酸性質子以金屬離子(例如,鹼金屬離子、鹼土金屬離子或銨離子)置換時;或與有機鹼(諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、胺基丁三醇、N-甲基葡萄糖胺等等)配位時所形成的鹽。
應瞭解所有述及之醫藥上可接受之鹽包括相同的鹽之溶劑加成型(溶劑合物)或晶型(多形體),如本文中所定義。
本發明化合物亦可製造成酯,例如醫藥上可接受之酯。例如,在化合物中的羧酸官能基可轉化成其對應酯,例如甲酯、乙酯或其他酯。在化合物中的醇基亦可轉化成其對應酯,例如乙酸酯、丙酸酯或其他酯。
本發明化合物亦可製造成前藥,例如醫藥上可接受之前藥。術語“前藥(pro-drug及prodrug)”在本文中可交換使用且係指活體內釋出活性母藥物的任何化合物。因為已知前藥會增強藥劑的許多所要特性(例如,溶解度、生物利用率、製造等),所以本發明化合物可以前藥形式輸送。因此,本發明意欲涵蓋目前主張之化合物的前藥、輸送前藥之方法及含有前藥之組成物。“前藥”意欲包括任何共價鍵結之載劑,當該等前藥投予對象時於活體內釋出本發明的活性母藥物。在本發明中的前藥係藉由修改存在於化合物中的官能基而製造,以此方式使修改物以例行操作或於活體內裂解成母化合物。前藥包括其中羥基、胺基、氫硫基、羧基或羰基鍵結至任何可於活體內裂解而分別形成游離羥基、游離胺基、游離氫硫基、游離羧基或游離羰基之基團的本發明化合物。
前藥的例子包括(但不限於)在本發明化合物中的羥基官能基之酯(例如,乙酸酯、二烷胺基乙酸酯、羥基、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)及胺甲酸酯(例如,N,N-二甲胺基羰基);羧基官能基之酯(例如,乙酯、嗎啉乙醇酯)、胺基官能基之N-醯基衍生物(例如,N-乙醯基)、N-曼尼希(Mannich)鹼、雪夫(Schiff)鹼及烯胺酮、酮和醛官能基之肟、縮醛、縮酮及烯醇酯、等等,參見Bundegaard,H.,Design of Prodrugs,第1-92頁,Elesevier,New York-Oxford(1985)。
化合物或其醫藥上可接受之鹽、酯或前藥係經口服、鼻、經皮、肺、吸入、頰內、舌下、腹膜內、皮下、肌肉內、靜脈內、直腸、胸膜內、椎管內及非經腸投予。在一體系中,化合物係經口服投予。熟諳此技藝者將理解某些投予途徑的優點。
使用化合物的劑量方案係依照各種因素選擇,包括病患類型、物種、年齡、體重、性別和醫學症狀;欲治療之症狀嚴重性;投予途徑;病患的腎和肝功能;及所使用之特別化合物或其鹽。一般熟諳的臨床醫師或獸醫師可輕易測定且開出用於預防、反擊或遏止症狀進展所需之藥物有效量。
用於調配及投予本發明所揭示之化合物的技術可發現於Remington: the Science and Practice of Pharmacy,第19版,Mack出版公司,Easton,PA(1995)。在一體系中,本文中所述之化合物及其醫藥上可接受之鹽係用於與醫藥上可接受之載劑或稀釋劑組合的醫藥製劑中。適當醫藥上可接受之載劑包括惰性固體填充劑或稀釋劑及無菌水性或有機溶液。化合物係以足以提供本文中所述範圍內的所要劑量之量存在於該等醫藥組成物中。
本文中所使用之所有百分比及比率係以重量計,除非另有指示。
本發明的其他特徵及優點係從不同的實例顯而易見。所提供之實例說明可用於實施本發明的不同成分及方法。實例不限制所主張之本發明。熟諳此技藝者可根據本揭示確認且使用可用於實施本發明的其他成分及方法。
實例
實例1.
本實例描述3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯-2,5-二酮的製造。
將里多來定(lilolidine)[CAS 102280-97-7](70公斤)(流程I中之化合物4)進料至適當乾淨且乾燥之反應容器接著進料甲基第三丁基醚(MTBE)(375公斤)。里多來定商業上可購得或如美國專利申請案公開號碼2006/0223760中所述製造。將所得批料在15-25℃下攪動最少10分鐘。在獨立容器中製造草醯氯(56.6公斤)在MTBE(370公斤)中之溶液。然後將里多來定溶液以將溫度維持於32℃以下之速率添加至草醯氯溶液。用額外MTBE(162公斤)沖洗容器並加至反應混合物。在以HPLC分析之前將批料在15-32℃下攪拌最少二小時。當反應以HPLC分析測定為完全時,添加甲醇(90公斤),並將批料攪拌最少二小時。當反應以HPLC分析測定為完全時,將批料蒸餾至大約80加侖。不需要分離中間物的5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)乙醛酸甲酯(流程I中之化合物5)。將四氫呋喃(THF)(840公斤)加至該批料且再次藉由蒸餾將體積減至大約80加侖。此溶劑替換方法持續到存在於批料之MTBE的量在批料中為<1重量%。將吲哚-3-乙醯胺[CAS 879-37-8](61.3公斤)(流程I中之化合物5a),接著THF(840公斤)進料至新容器。然後以將溫度維持於15-25℃之速率將所得溶液進料至批料。包含吲哚-3-乙醯胺之溶液的容器用THP(140公斤)沖洗,並沖洗液加至該批料。然後將第三丁醇鉀溶液(在THF中之1.6 M,581公斤)和THF(350公斤)進料至空容器。也將溶液加至該批料,並將所得溶液在20-32℃下攪拌最少三小時。當起始原料如以HPLC分析已確認為耗盡所時,將溫度維持於50℃以下之速率添加HCl水溶液(濃,273公斤)。將批料在40-50℃攪拌最少30鐘。
當反應以HPLC分析已確認為完全時,添加氫氧化銨水溶液(濃),同時將在反應溫度維持40℃以下,直到混合物之pH為9-10。接著添加乙酸乙酯(EtOAc)(462公斤)和攪動批料,分離該等層。用鹽水(182公斤NaCl和1022公斤水)洗滌有機層。將所得有機溶液蒸餾到大約初始體積的三分之一。添加乙醇(2B,1120公斤),並繼續蒸餾以將批料體積減少至大約240加侖。再添加乙醇(2B,1120公斤),並將體積減少至大約240加侖。然後將水(1400公斤)加至該批料以誘發產物之沈澱。將批料攪動最少二小時,且藉由過濾分離固體。然後將固體溶解在二氯甲烷(DCM)(840公斤)中,並添加庚烷(442公斤)以純化產物。將批料攪拌至少二小時之後,藉由過濾分離產物。在過濾器上調節之後,分離大約115公斤(88%)之3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯-2,5-二酮(流程I中之化合物6)呈紅色粉。此化合物4至化合物6的轉化係顯示於流程II中。
實例2.
本實例描述(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之製造。
將氫氧化鈀(20重量wt%Pd/碳,11.5公斤)進料至適當準備之反應容器。添加THF(340公斤)以產生漿料,且將觸媒用氫(50-75 psi)預還原。將化合物6(115公斤)進料空容器接著進料THF(353公斤)。攪拌所得混合物至溶解完全。然後將化合物6之溶液轉移到觸媒之漿料。將第三丁醇鉀之溶液(在THF之1.6 M,36公斤)進料至空反應器接著進料THF(21公斤)。將此所得溶液轉移到反應混合物接著用THF(340公斤)額外沖洗。然後將批料在65-80 psi之氫下加熱至45-55℃。不需要分離中間物順式消旋物(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(流程I中之化合物7)。
當反應以HPLC分析已確認為完全時,將批料經矽藻土過濾以除去觸媒並用異丙基乙酸酯(iPrOAc)(810公斤)稀釋。將有機溶液用HCl水溶液(28公斤濃HCl,290公斤水)洗滌。將此方法重複第二次。然後將有機溶液在藉由蒸餾濃縮至大約300加侖之前用鹽水(580公斤)洗滌。添加iPrOAc(1690公斤),和將批料蒸餾至大約400加侖。藉由添加iPrOAc(1000公斤)重複蒸餾方法直到在溶液中THF含量為<2重量%。然後添加庚烷(2000公斤)以誘發產物之沈澱。將粗製(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(流程I中之化合物8)藉由過濾分離並調節以提供具有~96%之HPLC純度的111公斤(95%)。此材料也包含1.7%iPrOAc和6.3%庚烷。此材料透過實驗室規模“使用”測試確認為進行製造(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮二氯甲烷(DCM),和藉由多管柱層析(MCC)之解析或直接用於非鏡像異構物鹽之結晶的足夠純度,如下列實例中所進一步詳細描述。
實例3.
本實例描述(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮DCM之製造。
其較佳為在藉由MCC之鏡像異構物解析的方法之前,藉由製造晶體(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮DCM(流程I中之化合物8 DCM)而將化合物8化學純化。
在一實例中,將甲醇(125公斤)和化合物8(52.5公斤)進料至反應容器並將所得混合物加熱至55-65℃。將DCM(557公斤)進料至乾淨反應器。然後將化合物8之溶液通過在線過濾器轉移至包含DCM之反應器。用DCM(134公斤)沖洗反應器,其也通過過濾器轉移至轉移包含反應混合物之反應器。在引入化合物8 DCM種晶(0.1公斤)之前,將批料攪動最少30分鐘。將批料攪拌至少四小時及然後取樣以評估結晶之程度。當化合物8之濾液濃度低於65毫克/毫升時,添加庚烷(718公斤)並將批料攪拌至少一小時。然後將批料冷卻至0-5℃,並藉由過濾分離產物。在過濾器上調節固體並在真空乾燥盤中於45-55℃下乾燥至少四小時。將化合物8 DCM(48.3公斤,92%,HPLC 99.0%)分離呈棕褐色固體。實例2和3中所述之化合物6至化合物8 DCM的轉化係顯示於流程III中。
實例4.
本實例描述(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮DCM藉由MCC之掌性解析和(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之分離。
多管柱層析(MCC)之進料溶液係藉由將化合物8 DCM溶解在甲醇中製造。將所得DCM/甲醇共溶劑蒸餾至DCM在進料溶液中之殘餘含量達到與掌性靜相(CSP)接觸可接受之含量,即<0.1重量%。將批料稀釋於甲醇/乙腈(9:1)的混合物中至50毫克/毫升之濃度並引進層析系統中。可利用Chiralpak AZ(CSP)。以掌性HPLC分析監測萃餘液及調整層析參數以獲得>99%掌性純度之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(流程I中之化合物10)。集中和分批濃縮萃餘液作為分離進行。將所收集之萃餘液放進較大的反應器中並減少體積。然後以結晶分離化合物10。
實例5.
本實例描述從不想要的鏡像異構物(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮分批產生(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
在一些情況下,例如當使用MCC達成解析時,想要的是以分批方式將不想要的鏡像異構物,(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(流程I中之化合物9)分離和外消旋化。
在一從經分離之化合物9產生粗製化合物8的方法之例子中,將不想要的鏡像異構物(6.46公斤)進料至100-升反應器。進料乙醇(60升)接著添加固體NaOH(1.05公斤,1.5當量)。將所得漿料加熱至65℃經13小時且然後使冷卻至周圍溫度經4小時。將混合物取樣並藉由掌性HPLC分析,顯示54/46比率之鏡像異構物。以HPLC測定化學純度為94.6%(AUC)。然後使漿料通過矽藻土精密(polish)過濾,和將濾墊用乙醇(13升)沖洗。移出之材料為固體的褐色薄膜而沒有大厚塊。然後將溶液再進料至100升反應器並添加2M HCl(13.1升,1.5當量)經35分鐘。在添加期間,稀漿料形成。然後在周圍溫度下攪拌混合物(5小時之後獲得稠淡橘色漿料)。然後經45分鐘添加水(25升),並將混合物攪拌2小時。移出等分試樣並過濾。然後將批料加熱至60℃並攪拌8小時,及然後使慢慢地冷卻以改良固體之過濾性質,分離粗製化合物8[5.12公斤,75.7%(佔4.5重量%乙醇)]而具有藉由HPLC之99.39%(AUC)的化學純度。在此情況下,藉由MCC處理此材料是足夠的。如果需要,透過DCM的形成可提高純度。
實例4中所述之化合物8 DCM至化合物10之掌性解析和實例5中所述之化合物9至化合物8之回收係顯示於流程IV中。
實例6.
本實例描述藉由(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之非鏡像異構物鹽形成和分離之掌性解析。
作為藉由MCC之掌性解析的替代,鏡像異構物(化合物10和化合物9)之解析也可藉由優先形成化合物10之非鏡像異構物鹽達成。
在一實例中,粗製化合物8可使用下列代表性步驟轉化至(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(流程I中之化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼)。在約50℃下將(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(601克,0.6當量)溶解在乙腈(CH3 CN)(11.2升,5體積)中且在溶解之後攪拌大約30分鐘。將粗製化合物8[2.24公斤,藉由HPLC之96.4%(AUC)]在約50℃下溶解在CH3 CN(11.2升,5體積)中及然後通過矽藻土墊精密(polish)過濾。經20-30分鐘在約50℃下經由滴槽將化合物8溶液添加至(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼溶液。一旦所得溶液開始結晶,在化合物8添加完成之後不久,將混合物攪拌至其慢慢地冷卻到周圍溫度,然後繼續攪拌過夜(冷卻和攪拌總計約11小時)。淺褐色的粒狀固體經過18"不鏽鋼nutche過濾器過濾且使用CH3 CN(7升,3.2體積)沖洗/再成漿。過濾漿料,和再用CH3 CN(5升,2.3體積)將固體再成漿。利用nutche過濾器乾燥1小時之後,以HPLC分析樣品。如果固體包含高於不想要的非鏡像異構物鹽之所要量,可在重複分析之前使用CH3 CN將固體再成漿和乾燥。然後將固體在熱N2 (51℃)下乾燥過夜。典型地,化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼之分析顯示藉由HPLC之>99%(AUC)的總化學純度和>99%化合物10之掌性純度。使用1 H NMR分析,典型的樣品估計為包含<0.5重量%CH3 CN。
化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼然後藉由用酸之處理和從甲醇或乙醇結晶可轉化成化合物10。代表性步驟如下:將化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(50克)成漿於甲基四氫呋喃(MeTHF)(500毫升)和水(250毫升)中。將1 M HCl(110毫升)加至混合物以到達1.6的最後pH。將具有微量固體之所得溶液攪拌約一小時以溶解固體。然後將有機層和水層分離。將有機層用水/鹽水溶液(1:1,250毫升)洗滌,分離,和添加2-B乙醇(1000毫升)。然後將溶液濃縮至200毫升和分析MeTHF含量(4.8重量%)。將溶液精密(polish)過濾,和添加化合物10種晶(0.2克)(T=25 C)。將混合物攪拌約三天且定期採取樣品並分析留在母液中的化合物10。過濾所得漿料,並將固體用2-B乙醇(70毫升)洗滌。將固體在真空烘箱中於約60℃下乾燥約三小時以產生化合物10[28.84克,82.7%,藉由HPLC之99.60%(AUC),0.54重量%乙醇,0.08重量%MeTHF]呈淺褐色固體。
描述於實例6之化合物8至化合物10的非鏡像異構物鹽解析和描述於實例5之化合物9至化合物8的回收係顯示於流程V中。
實例7
本實例描述藉由動態動力學解析(DKR)之掌性分離。
作為藉由MCC之掌性解析或藉由非鏡像異構物鹽形成之傳統動力學解析的替代,鏡像異構物化合物10和化合物9之動態動力學解析(DKR)也可藉由化合物10之非鏡像異構物鹽的優先形成與化合物9的同時就地消旋作用達成。
在此方法中,可使用下列代表性步驟將粗製化合物8轉化成化合物10‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼。將粗製化合物8(1.25公斤,96%AUC,9.1重量%溶劑含量)和(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(559克,1.0當量)成漿於2B-乙醇(11.25 L,9體積)並加熱至50℃經3小時。將漿料用21重量%NaOEt在甲醇或乙醇(110克,0.1當量)中處理並加熱至50℃。40小時之後,藉由經5分鐘添加在水(786毫升中,~10%水相對於乙醇)中之1M HCl(338毫升,0.1當量)將混合物止反應。將混合物在50℃下攪拌1小時,及然後使冷卻至周圍溫度經0.5小時。將漿料在室溫下攪拌另3小時,且然後過濾。將固體用10%水/2B-乙醇(3.75升,3體積)洗滌並在真空烘箱中(50℃,2盤)乾燥18小時。分析固體且顯示化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼[1.22公斤,74%,藉由HPLC之99.3%(AUC),藉由掌性HPLC之99.2%(AUC)]。利用20公斤化合物8進行此步驟以提供化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼[18.9公斤,70%,藉由HPLC之98.8%(AUC),藉由掌性HPLC之99.1%(AUC)]。
化合物8經由化合物10,(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼至化合物10之動態動力學解析係顯示於流程VI中。
實例8.
本實例描述藉由動態動力學解析(DKR)進行掌性分離。
作為藉由MCC之掌性解析或藉由非鏡像異構物鹽形成之傳統動力學解析的替代,鏡像異構物化合物10和化合物9之動態動力學解析(DKR)也可藉由化合物10之非鏡像異構物鹽的優先形成與化合物9的同時就地消旋作用達成。
在此方法中,將粗製化合物8(111.4公斤)、Pd清除劑樹脂(PL-TMT-MP,3.5公斤)和甲醇(1507升)添加至容器並加熱至45℃經至少16小時。一旦反應完成,過濾混合物以除去Pd清除劑樹脂。用甲醇(104升)沖洗容器。將合併之濾液蒸餾到~600升。將(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(51.4公斤)和甲醇(416升)添加至濾液。將所得溶液在45℃下加熱3-4小時。使固體沈澱並用HPLC分析以確定反應選擇性進行。然後添加甲醇鈉在甲醇中之溶液(21重量%,6.1公斤)接著添加甲醇(11升),並將所得混合物加熱至45℃經另18小時。以HPLC分析反應混合物之結晶完全。一旦結晶完全,將反應混合物用HCl溶液(3.5公斤)處理以中和鹼。將所得混合物冷卻至周圍溫度並攪動最少3小時。然後藉由過濾分離固體,並用甲醇和水之溶液(411升對46升,分別地)洗滌濾餅。濾餅為無色的(如果固體持續存在顯著顏色,重複洗滌以除去顏色)。將固體在過濾乾燥機中在真空下於55℃乾燥最少8小時且以化合物10.(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(101公斤)釋出以使用在下一步驟中。
實例9.
本實例描述一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之漿料方法。
混合化合物10‧(1S,2S)-(+)-假麻黃鹼(100.7公斤)及HCl之水溶液(1M,250公斤)和甲醇(240公斤),並將所得漿料加熱至50℃和攪拌至少2小時。一旦反應完成,將漿料冷卻至周圍溫度並攪拌最少1小時。藉由過濾分離固體,用甲醇之50%水溶液(200升)洗滌,並在真空下於65℃乾燥至少6小時。藉由將混合物加熱至50℃而將粗製化合物10溶解在THF(96公斤)中。將所得溶液精密(polish)過濾,接著添加甲醇(200公斤)。然後將溶液共沸且在大氣壓下藉由蒸餾濃縮以減少THF含量。一旦溶液體積減少至250升,添加另外的甲醇(200升),並重複濃縮程序。重複直此程序至THF含量被減少到小於5%(體積/體積)。在添加甲醇期間,也引入化合物10之一或多種晶體(300克)以便促進結晶。藉由過濾分離晶體,用另外50%甲醇水溶液洗滌,和在真空下於65℃乾燥至少12小時。將粗製化合物10(60.6公斤)分離呈紅褐色固體。
實例10.
本實例描述一種製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體的漿料方法。
如實例9中所述製造粗製化合物10。藉由將混合物加熱至50℃而將粗製化合物10溶解在THF(96公斤)中。將所得溶液精密(polish)過濾,接著添加甲醇(200公斤)和化合物10之型1作為種晶以賦予結晶方法之多形體控制。用以賦予多形體控制之種晶係從示性數據已確認晶體材料為所要多形體型之晶體材料的代表性批料取得。然後將溶液共沸且在大氣壓下藉由蒸餾濃縮以減少THF含量。一旦溶液體積減少至250升,添加另外的甲醇(200升),並重複濃縮程序。重複直此程序至THF含量被減少到小於5%(體積/體積)。然後將溶液之溫度減至50℃並攪拌至少4小時。將等分試樣移出以確定所要多形體的形成。如果需要,可將多形體再溶解於THF(批料體積之30%)中,精密(polish)過濾,濃縮和種晶以獲得所要多形體。當獲得所要多形體型時,在50℃下添加50%甲醇水溶液並將溶液攪動另外2-3小時。然後將溶液冷卻至周圍溫度並保持至少2小時以使結晶。一旦完成,藉由過濾分離晶體,用另外50%甲醇水溶液洗滌,和在真空下於65℃乾燥至少12小時。將化合物10之多形體型1(60.6公斤)分離呈紅褐色固體。
如果以型2種晶替換型1種晶,則也可用上述方法製造(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體。
實例11.
實例11描述一種產生(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之多形體的XRPD繞射圖之方法。
X-射線粉末繞射圖係在使用CuKα輻射(40kV,40mA)、θ-θ測角計、V20和接收狹縫之發散、石墨副單色器和閃爍計數器之Siemens D5000繞射計上收集。使用公認金剛砂標準(NIST 1976)檢查該儀器性能。用於數據收集之軟體為Diffrac Plus XRD Commander v2.3.1且數據係使用Diffrac Plus EVA v 11,0.0.2或v 13.0.0.2分析及呈現。
將粉末樣品製成平板樣品。將大約35毫克之樣品輕輕地裝進切成拋光零背景(510)矽晶片之空腔中。在分析期間將樣品在其本身平面中旋轉。數據收集的具體情況為:
角度範圍:2至42°2θ
步階大小:0.05°2θ
收集時間:4秒/步階。
實例12.
實例12描述一種產生(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之多形體的XRPD繞射圖之方法。
X-射線粉末繞射圖係在使用CuKα輻射(40kV,40mA)、θ-2θ測角計、V4和接收狹縫之發散、Ge-單色器和Lynxeye檢測器之Bruker D8繞射計上收集。使用公認金剛砂標準(NIST 1976)檢查該儀器性能。用於數據收集之軟體為Diffrac Plus XRD Commander v2.5.0且數據係使用Diffrac Plus EVA v 11,0.0.2或v 13.0.0.2分析及呈現。
樣品係使用原樣粉末在周圍條件下製成平板樣品。將大約100毫克之樣品輕輕地裝進切成拋光零背景(510)矽晶片之圓形空腔中。在分析期間將樣品在其本身平面中旋轉。數據收集的具體情況為:
角度範圍:2至42°2θ
步階大小:0.05°2θ
收集時間:5秒.步階-1
實例13.
實例13描述得自(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之多形體的XRPD圖
二種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之非溶劑合多形體:型1和型2(參見,圖12和13)。
型1顯示包含8.2、10.8和14.1度之2θ值的XRPD圖,(參見,圖12和表1)
型2顯示包含6.5、9.9和12.0度之2θ值的XRPD圖,(參見,圖13和表1)
實例14.
在相互轉變實驗中,型1比型2更為熱力學上穩定的。型1為斜方晶且每個晶胞包含四個(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之分子。型1具有以DSC記錄之~218℃的熔點(參見,圖16)。
型2由雙折射棒狀晶體組成。一旦型2之多批料在40℃/75%RH下儲存最多至六個月和25℃/60%RH儲存最多至12個月時,晶型或純度沒有觀察到可識別的改變。型2之空間群為P21 或P2:在單元晶胞中具有二個(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之分子(一分子在不對稱單元中),和在單元中沒有過度體積被溶劑分子佔領。型2具有以DSC記錄之~216℃的熔點(參見,圖16)。
一旦按比例增加化合物10方法至>5公斤以單批次製造時,自發地產生型1。紅外線(IR)和X-射線粉末繞射(XRPD)係確定為用於確認和區別該二種晶型的有效分析工具(參見,圖14和15)。該方法於7公斤規模係經由種晶容易地控制。
當適當條件用以控制結晶方法時,二種多形體可以互相轉換。型2可由將型1溶解在甲醇中,用型2種晶且藉由旋轉蒸發將混合物蒸發至乾而獲得。成功轉變以IR分析測定和以XRPD分析證實為型2。
實例15.
型1之IR光譜顯示集中在~3300 cm-1 之強振動,其在型2中沒有觀察到(圖15,畫面A),而型2之IR光譜顯示集中在~800cm-1 之較強振動,其在型1中沒有觀察到(圖15,畫面B)。
型1及型2具有不同的平衡溶解度:型2=0.61毫克/毫升和型1=0.51毫克/毫升。圖17,畫面A顯示型1和2在甲醇中於從0-70℃之溶解度。圖17,畫面B顯示型1和2在50 mM pH 6.8磷酸鹽緩衝劑/1%SLS中之固有溶解度。
實例16.
指數生長之MDA-MB-231細胞或MIA PaCa-2(也稱為PACA-2)細胞以每孔1,000細胞種入六孔板且使附接24小時。MDA-MB-231和MIA PaCa-2細胞係在補充10%(體積/體積)胎牛血清(FBS)和5毫升青黴素/鏈黴素之DMEM中於37℃下在5%CO2 培養。MDA-MB-231和MIA將PaCa-2分別地確立於雌激素受體陰性人類乳癌和胰腺癌細胞株中。(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮各以10 mM之濃度溶解在DMSO中,且以0.1、0.25、0.5、1或2 μM之濃度分開地加至細胞。對照組板單獨接受在與最高藥濃度相同的總培養體積百分比之DMSO。每天觀察細胞培養經10-15天,然後用修正之Wright-Giemsa染色(Sigma)固定和染色。用(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之處理造成MDA-MB-231細胞或Paca-2細胞之細胞死亡。參見,例如,圖2。(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之IC50 發現為0.5μM。(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之IC50 發現為0.5μM。
實例17.
將MDA-MB-231細胞(ATCC #HTB-26),在DMEM加15%熱不活化胎牛血清加10 mM HEPES pH 7.5中生長,覆蓋(plating)在60毫米2 板上(每板2×105 細胞)。在二天之後候選化合物在DMSO中以各種濃度稀釋於介質中且加至各個板以使最終DMSO濃度在細胞介質中為0.1%。培養二天之後將培養物胰酶消化,將細胞用介質洗滌,使用血球計計算並將500細胞(包括細胞體)覆蓋在介質中之100毫米2 板上。二星期之後將介質移出且將細胞群落用甲醇固定10分鐘,用1%結晶紫染色10分鐘,用水洗滌和空氣乾燥。當有大於50個細胞每群落存在,則以目視計算細胞群落。覆蓋效率被定義為形成群落的平均數除以500。存活分率被定義為候選化合物之覆蓋效率除以DMSO的覆蓋效率乘100。為了候選化合物滴定,IC50 值係藉由將方程式y=AeBx 擬合於數據點和外推濃度,其存活分率等於50而測定。用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之處理造成MDA-MB-231細胞之細胞死亡。參見,例如,圖3。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之IC50 發現為0.62 μM。(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之IC50 發現為4.1 μM。
實例18.
將重組蛋白質激酶C(Calbiochem)(100奈克)用於0.05、0.5或10μM之(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在室溫下培養15分鐘,隨後,將在包含20 μM ATP、0.2 μCi/微升γ32 P-ATP、0.2微克/微升組織蛋白H1(Upstate Biotechnology/Millipore,Bedford,MA)之激酶緩衝液(20 mM Tris-HCl pH 7.5,10 mM MgCl2 )中之放射性標記混合物加至各樣品。激酶反應在室溫下進行5分鐘。以12%SDS-PAGE和放射攝影術分析反應產物。
相較於單獨用載劑之處理,重組蛋白質激酶C在室溫下用於測試濃度之(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮處理15分鐘不減少激酶活性。參見,例如,圖4。
實例19.
在指示濃度之分離鏡像異構物(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮和(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮不存在或存在下將MDA-MB-231細胞進行血清剝奪過夜(16小時)。細胞用100奈克/毫升重組人類肝細胞生長因子/分散因子(HGF/SF)(R&D Systems #294-HG)處理10分鐘。整個細胞萃取物係製造於溶解緩衝液(20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM Na2 EDTA、1 mM EGTA、1%Triton X-100、2.5 mM焦磷酸鈉、1 mM β-甘油磷酸酯、1 mM Na3 VO4 、1微克/毫升亮肽素、1 mM苯甲基磺醯氟)中且音波振動。根據製造商指示使用BioRad試劑(BioRad,Hercules,CA)之Bradford分析測量蛋白質濃度。將樣品(50微克之蛋白質)在還原條件下以8%SDS-PAGE溶解並轉移至PVDF膜(BioRad)上。將膜在TBS-T(50 mM Tris-HCl(pH=7.6)、200 mM NaCl、0.05%Tween 20)與5%牛乳中培養1小時。蛋白質係藉由在4℃下於TBS-T與5%牛乳和抗磷酸化c-Met之多株抗體(#3121)或抗β-肌動蛋白之單株抗體(A-5441)(Sigma),其用作總數蛋白質載入之對照組,中培養過夜來檢測。在TBS-T中大量洗滌之後,經1小時添加辣根過氧化物酶-結合抗兔子IgG(1:5000)或抗小鼠IgG(1:2000)(Amersham Biosciences),且根據製造商的指令使用增強化學發光檢測系統(Amersham Biosciences)可看見特異性蛋白質帶。參見,例如,圖5。
用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之處理於至少30nM之濃度抑制基本和HGF-誘發之c-Met的自磷酸化作用。對比之下,(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在較大濃度(20μM)對c-Met磷酸化作用只具有最小抑制效果。參見,例如,圖5。
實例20.
A549人類肺癌細胞在添加1:200螢光Annexin V(綠色)和1:500碘化丙錠(紅紫色,1微克/毫升之最終濃度)之前,在96-孔板(Costar 3603,5,000/孔)中以A)DMSO作為對照組;B)1.2 μM(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮處理38小時。使標記步驟在37℃處理20分鐘,接著使用IC 100圖像血球計數器(貝克曼公司)並10倍放大之圖像採集和分析。
為了測定(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮是否主要透過細胞生長抑制或細胞凋亡機制而作用,將暴露於(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之癌細胞用螢光標記之Annexin V(綠色螢光)和碘化丙錠(亮紫紅色螢光)染色。Annexin V為良好確認之試劑,其對外部化膜磷脂醯絲胺酸具有親合性之特異性結合,其為細胞凋亡開始的早期標記物,而碘化丙錠為死細胞的標記物。人類肺癌細胞(A549)用1.2 μM(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮培養38小時誘發細胞進行細胞凋亡,如強Annexin V染色所證實。用Annexin V和碘化丙錠二者將小百分比的細胞(~10-20%)共染色,指示(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮處理之細胞的次族群已經在38小時內死亡。這些數據與透過細胞凋亡機制之活化而大量地誘發細胞死亡的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮一致。(參見,圖6)。
實例21.
MDA-MB-231細胞用所指示濃度之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮預處理24小時。300微升之各細胞懸浮液(在無血清培養基中之0.5x106 細胞/毫升之濃度)放進個別插入物內並在37℃下培養24小時。安置插入物之底孔包含500微升之含10%FBS的培養基。在24小時從每個插入物抽吸培養基,和從插入物內部用尖端包棉拭子逐漸地除去無法侵入的細胞。然後將每個插入轉移到包含細胞染色溶液的乾淨孔並在室溫下培養10分鐘。藉由在萃取溶液中培養將插入物的底部脫色和在560 nM下測量OD。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在MDA-MB-231癌細胞之鋪滿培養中抑制遷移整個空隙。數據表示二個獨立實驗方法的平均。(參見圖7)。
由大多數癌導致的發病率和死亡率為從原發性腫瘤局部入侵和轉移至其他組織之結果。此過程大部份依腫瘤細胞的運動性和生長而定。c-Met被HGF之活化誘發各種細胞反應,包括運動性、入侵、傷口癒合和組織再生。已確立c-Met的迷行活化在原發性腫瘤和繼發性轉移之發展和前進中扮演關鍵角色。HGF具有分離上皮表和透過細胞外間質受質(matrix substrates)刺激細胞運動性和入侵之能力,且HGF產生與活體內腫瘤轉移有相互關係。
如上所示,(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮抑制MDA-MB-231乳癌細胞之侵入表現型,具有大約500nM的估計IC50 值。用腦和肺癌細胞可看到相似的結果。即,結果顯示:(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮抑制轉移性癌細胞入侵。
實例22.
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在人類乳癌異體移植中顯示功效。將MDA-MB-231人類乳癌細胞皮下接種於雌無胸腺裸鼠(8.0x106 細胞/小鼠)且使形成可觸知的腫瘤。一旦腫瘤到達大約60毫米3 ,將動物用於200毫克/公斤之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或媒液對照組每天口服治療(連續5天,接著2天量假期)。將(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮調配於PEG 400:20%維他命E TPGS(60:40)中。動物接受總計20劑量的(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或媒液對照組。在整個治療中和治療後觀察時期測量腫瘤。每點表示十個腫瘤之平均±SEM(參見,圖8)
用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(IH-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮作為單一療法之治療有效減慢腫瘤生長。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之腫瘤生長抑制係計算為79%且具有統計學意義(p=0.009)。在體重上沒有由於口服投予200毫克/公斤之媒液或(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3.2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之顯著改變。
實例23.
在人類結腸癌異體移植模式中將HT-29人類結腸癌細胞皮下接種於雌無胸腺裸鼠(5x106 細胞/小鼠)且使形成可觸知的腫瘤。一旦腫瘤到達大約60毫米3 ,將動物用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮以200毫克/公斤或300毫克/公斤或媒液對照組每天口服治療(連續5天,接著2天量假期)。將(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮調配於PEG 400:20%維他命E TPGS(60:40)中。動物接受總計20次(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或媒液對照組的治療。在整個治療中和治療後觀察時期測量腫瘤。每點表示十個腫瘤之平均±SEM(參見,圖9,畫面A)。
在此高攻擊性結腸異體移植模式中,以200毫克/公斤或300毫克/公斤作為單一療法劑量之動物顯示顯著腫瘤生長抑制,且300毫克/公斤比200毫克/公斤更有效。劑量200毫克/公斤之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮顯示39%之最佳腫瘤生長抑制(p=0.006),而300毫克/公斤顯示55%之最佳腫瘤生長抑制(p=0.00001)。在體重上沒有由於口服投予200毫克/公斤或300毫克/公斤之媒液或(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3.2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之顯著改變。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之功效也以異體移植模式用一些其他癌細胞株測試:人類胰臟癌MIA PaCa2(圖9,畫面B)、人類前列腺癌PC3(圖9,畫面C)和人類胃癌MKN45(圖9,畫面D)。用所指示濃度之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮作為單一療法治療細胞。在所有這些模式中,(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮顯著抑制腫瘤生長。
實例24.
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮顯示顯著扺抗多發癌細胞株之細胞毒性。各種癌細胞株以範圍從0.03至30 μM之所指示濃度之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮處理。這些細胞對(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之敏感性以標準細胞毒性MTS分析測量(圖10)。表現c-Met及/或磷酸-c-Met之人類癌細胞株對(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮敏感。對比之下,沒有免疫可檢測的c-Met或磷酸-c-Met之人類癌細胞株(圖10,SK-MEL-28,MCF-7和NCI-H661)顯示一點點敏感性。
實例25.
評估(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮其抑制大量品評員(n=230)的人類激酶之活性。顯示於表2中之數據証明:(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮只抑制c-Met至顯著程度並証明扺抗少數其他激酶之適中活性。(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮顯示扺抗c-Met之~360 nM的抑制常數(Ki )。
實例26.
如實例23中所述確立使用HT-29人類結腸癌細胞之人類結腸癌異體移植模式。用單劑量之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮(300毫克/公斤)治療帶瘤小鼠。24小時後採用免疫組織化學方法檢測磷酸-c-Met之減少。以採用二胺基聯苯胺之免疫過氧化酶系統使磷酸-c-Met之量的顯著減少具體化,其產生不溶解的褐色反應產物(圖11,畫面A)。磷酸-c-Met之腫瘤樣品的西方墨點法確認免疫組織化學分析(圖11,畫面B)。
實例27.
本實例描述在透明細胞肉瘤和MiT(眼球轉錄因子)相關腫瘤中c-Met受體酪胺酸激酶之抑制。本發明之化合物也在具有透明細胞肉瘤之病患中証明功效。在本實例中所述之硏究使用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮,受體酪胺酸激酶之小分子抑制劑。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮為c-Met受體酪胺酸激酶之選擇性抑制劑。當異常活化時,c-Met在人類癌方面扮演扮多重角色,包括癌細胞生長、存活、血管生成、入侵和轉移。上述數據証明:(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在廣泛人類腫瘤細胞株(包括透明細胞肉瘤)中抑制c-Met活化作用,且顯示扺抗數種人類腫瘤異體移植之抗腫瘤活性。在臨床實驗中,用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之治療已經良好耐受並造成腫瘤反應且橫跨廣泛範圍之腫瘤和劑量的延長穩定疾病。
將(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮投予至具有透明細胞肉瘤之病患。特別地,(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮証明在具有透明細胞肉瘤之病患中的部分反應,如以RECIST(固態腫瘤反應評估標準(Response Evaluation Criteria In Solid腫瘤))定義。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮投予之客觀反應參見一群受沒有有效治療的肉瘤腫瘤類型之分子連接組影響的病患。根據此反應,以每日兩次(b.i.d.)360毫克(mg)之劑量投予(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮。
將(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮投予至具有MiT(眼球轉錄因子)相關腫瘤之病患。MiT腫瘤,其可包括透明細胞肉瘤(CCS)、腺泡狀軟組織肉瘤(ASPS)和轉移相關性腎細胞癌(RCC),係經由反應造成這些腫瘤發育之c-Met的過表現之一般染色體異常而生物上連接。具有此異常之腫瘤扺抗現有治療是且在缺乏成功的外科切除術下,總是致命的。
在硏究第一段階期間,登記23位病患並以120毫克之(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮b.i.d治療。這些病患中的十四位顯示是可評估的功效。除了證實部分反應的病人,可評估病患中的十位証明穩定疾病。
(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之經証明的客觀臨床回應建立在顯示藉由shRNA抑制之c-Met表現擊倒MiT表現和妨礙人類透明細胞肉瘤細胞試管內和活體內生長的數據上。此發現導致發展使用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮的具有MiT-相關腫瘤之病患的臨床試驗,其已顯示抗癌活性,包括客觀腫瘤反應,以及在來自用藥治療之病患的腫瘤生物檢體中之抑制c-Met蛋白質的能力。
圖1說明(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮和(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之化學結構。
圖2說明(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮對MDA-MB-231或Paca-2細胞試管內之存活的效果。
圖3說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮對MDA-MB-231細胞試管內之存活的效果。
圖4說明(±)-順-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(±)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮對蛋白質激酶C活性試管內的效果。
圖5,畫面A說明c-Met之自磷酸化被(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮抑制;畫面B說明誘發之c-Met磷酸化被(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮或(+)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮抑制。
圖6說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮在癌細胞中誘發細胞凋亡的效果。
圖7說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮抑制轉移性癌細入侵的效果。
圖8說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮對乳癌異體移植模式的效果。
圖9說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮對人類結腸癌異體移植模式(畫面A)、人類胰臟癌異體移植模式(畫面B)、人類前列腺癌異體移植模式(畫面C)和人類胃癌異體移植模式(畫面D)的效果。
圖10說明多細胞株對(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之細胞毒敏感性。
圖11說明藉由免疫組織化學(畫面A)或藉由西方墨點法(畫面B)之在用(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮治療之病理樣品中磷酸化c-Met之量的減少。
圖12,畫面A說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體的XRPD圖;畫面B說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1多形體的XRPD圖之典型2θ值。
圖13,畫面A說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體的XRPD圖;畫面B說明(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型2多形體的XRPD圖之典型2θ值。
圖14說明比較(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1和2多形體的XRPD圖之圖示。
圖15畫面A和B說明顯示(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之型1和2的IR譜之圖示。
圖16說明顯示(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮型1和2之熱(熔化)特性的圖示。
圖17,畫面A和B分別地說明顯示(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并[3,2,1-ij]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮型1和2(描述為型B和A)之溶解度和固有溶解的圖示。

Claims (8)

  1. 一種(-)-反-3-(5,6-二氫-4H-吡咯并〔3,2,1-ij〕喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯啶-2,5-二酮之多形體,其特徵為(i)以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8和14.1°的2θ峰;或(ii)以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9和12.0°的2θ峰。
  2. 如申請專利範圍第1項之多形體,其中以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、15.5、17.8、19.9和25.6°的2θ峰。
  3. 如申請專利範圍第1項之多形體,其中以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約8.2、10.8、14.1、14.9、15.5、17.1、17.8、19.4、19.9、21.1、21.9、23.0、25.6和28.4°的2θ峰。
  4. 如申請專利範圍第1項之多形體,其中以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、16.7、20.1和22.8°的2θ峰。
  5. 如申請專利範圍第1項之多形體,其中以Cu Kα輻射的X-射線粉末繞射圖包括於大約6.5、9.9、12.0、13.2、16.4、16.7、17.2、20.1、20.3、20.8、22.8、23.7、28.6和30.4°的2θ峰。
  6. 一種醫藥組成物,其包含如申請專利範圍第1至5項中任一項之多形體及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
  7. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之多形體,與醫藥上可接受之載劑組合係用於治療癌症。
  8. 如申請專利範圍第7項之多形體,其中該癌症係選自肺癌、結腸癌、乳癌、胰臟癌、前列腺癌、慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、卵巢癌、腎癌、肝癌、腦癌和多發性骨髓瘤。
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