TWI453037B

TWI453037B - 包含非產蛋白質之胺基酸之外用組合物及治療皮膚之方法

Info

Publication number: TWI453037B
Application number: TW097146473A
Authority: TW
Inventors: Dmitri S Ptchelintsev; Laurence Dryer; Xiaochun Luo
Original assignee: Avon Prod Inc
Priority date: 2007-12-19
Filing date: 2008-11-28
Publication date: 2014-09-21
Also published as: EP2229138A4; AR069648A1; US20100261769A1; BRPI0819931B1; WO2009079126A1; CA2707768C; CN101903010A; US8168212B2; HK1145982A1; BRPI0819931A2; CN101903010B; PL2229138T3; US20160038384A1; TW200930412A; CA2707768A1; JP5554720B2; ES2756350T3; EP2229138A1; JP2011507864A; EP2229138B1

Description

包含非產蛋白質之胺基酸之外用組合物及治療皮膚之方法

概言之，本發明係關於用於外敷施用於皮膚上之包含非產蛋白質之胺基酸的組合物及該等組合物為皮膚提供益處之用途。

彈性纖維係包含藉由富含微纖維蛋白之微纖維套膜包圍之彈性蛋白核心的基本細胞外基質大分子(Kiety等人，J. Cell Sci .，2002年7月15日；115(Pt 14):2817-28)。彈性纖維為諸如皮膚及肺等組織提供彈性及回彈性。產生成熟及功能彈性纖維之過程極為複雜，因為其涉及多種組份且需要緊密調控之沈積及多步驟分級組裝。彈性蛋白單體(原彈性蛋白)藉由一或多個離胺醯氧化酶家族成員在細胞外間隙中交聯形成彈性蛋白聚合物，其為成熟蛋白之功能形式。吾人認為含有微纖維蛋白之微纖維藉由在原彈性蛋白內作為排列交聯結構域之支架而在組裝過程中起重要作用。

類離胺醯氧化酶-1(LOXL1)係離胺醯氧化酶家族成員，其藉由離胺酸或羥基離胺酸側鏈之氧化脫胺作用催化膠原與彈性蛋白交聯。所得ε-醛離胺酸殘基可自發地與鄰近肽醛或與肽基離胺酸之ε-胺基縮合產生共價交聯鍵(Lucero等人，Cell Mol. Life Sci .，2006年10月；63(19-20):2304-16)。LOXL1係與彈性蛋白纖維有關之細胞外酶(Noblesse 等人，J. Invest. Dermatol .，2004年3月；122(3):621-30.)。LOXL1在皮膚等效物之表皮及真皮中及在人類皮膚中表現。LOXL1對於彈性纖維形成及彈性纖維內穩態之保持極為重要。LOXL1基因剔除小鼠所具有之結締組織表型之特徵在於由彈性蛋白含量降低所導致之雌性動物中骨盆鬆弛及肺部空氣間隙增大(Liu等人，Nat. Genet .，2004年2月；36(2):178-82)。超微結構分析顯示肺及皮膚中之彈性纖維發育不良、支離破碎及不連續。另外，缺少LOXL1之小鼠之產後子宮中不會沈積正常彈性纖維且伴隨原彈性蛋白積聚會發生皮膚鬆弛及血管異常。最近之研究顯示，與兒童成纖維細胞相比成人皮膚成纖維細胞中之LOXL1 mRNA的含量降低(Genizo等人，Exp. Dermatol .，2006年8月；15(8):574-81.)。

美國專利公開案第2005/0188427號(其揭示內容以引用方式併入本文中)揭示治療患有與彈性纖維喪失有關之狀況(例如皮膚鬆弛或起皺紋)之個體的方法，該方法包含向個體投與治療有效量之LOXL1增強子。吾人認為LOXL1增強子為LOXL1多肽或其活性片段、或編碼LOXL1多肽或其活性片段之核酸。吾人亦認為LOXL1增強子包括藉由揭示於彼公開案中之篩選方法所識別之小分子或其他治療性化合物。美國專利公開案第2005/0188427號中未揭示肽形式之外的胺基酸增強LOXL1表現之用途。

胺基酸已成為化妝品之日益重要的成份。例如，已將多種天然胺基酸納入化妝品中作為膠原及彈性蛋白合成之結構單元、用於保濕、增強皮膚屏障、降低皮脂腺活力及其他功能特性。然而，非天然非產蛋白質之胺基酸之使用在化妝品工業中受到較少關注。迄今，非天然胺基酸之使用主要受限於賦予功能肽水解穩定性。按照定義，非產蛋白質之胺基酸不會在新蛋白質合成中納入蛋白質中，且因此預測外敷使用非產蛋白質之胺基酸不會在皮膚中達成新蛋白質合成及皮膚回春益處。非天然非產蛋白質之胺基酸之內在功能在很大程度上被忽略。迄今，吾人並不瞭解非天然非產蛋白質之胺基酸增強LOXL-1及調節與皮膚衰老有關之其他途徑的能力。

因此，本發明之目的在於提供使用非天然非產蛋白質之胺基酸來增強皮膚中之LOXL-1產生的新穎化妝品組合物及方法。本發明之又一目的在於提供使用非天然非產蛋白質之胺基酸來改善皮膚外觀的化妝品組合物及方法，該等方法包括治療、逆轉及/或預防衰老迹象(例如皮膚皺紋)。

提供上文論述僅為更好地瞭解此技術領域所遇到問題之實質且不應以任何方式理解為認可為先前技術且不應將本文引用任何參考文獻理解為認可該參考文獻構成本申請案之"先前技術"。

與上述目的及其他一致，吾人驚奇地發現某些非產蛋白質之胺基酸係LOXL-1之強效刺激劑，且由於LOXL-1能夠重塑及保持皮膚中之彈性蛋白纖維，故期望提供數種皮膚益處。如本文更全面論述，除LOXL-1刺激外，預期非產蛋白質之胺基酸在與皮膚衰老有關之一或多種額外生物途徑中起有利作用，儘管該等額外益處並不嚴格需要。

在本發明之一個態樣中，提供用於治療與彈性蛋白纖維喪失有關之皮膚狀況之化妝品組合物，該等化妝品組合物在化妝品上可接受之媒劑中包含有效量的可增強LOXL-1之非產蛋白質之胺基酸或其衍生物。在較佳實施例中，非產蛋白質之胺基酸包含具有雜環基團(較佳為雜芳基)之側鏈。較佳之胺基酸包含含氮雜環或雜芳環。本發明之當前較佳之非產蛋白質之胺基酸係具有以下結構之L-4-噻唑基丙胺酸：

在另一態樣中，所提供之化妝品組合物在化妝品上可接受之媒劑中包含可有效增強皮膚中之LOXL-1之量的噻唑基丙胺酸或其衍生物。噻唑基丙胺酸通常為L-噻唑基丙胺酸或其衍生物，較佳為L-4-噻唑基丙胺酸或其衍生物。

本發明亦提供治療與皮膚中之彈性蛋白纖維喪失有關之皮膚狀況的方法，該方法包含將可增強LOXL-1之非產蛋白質之胺基酸或其衍生物以可有效增強LOXL-1之量外敷施用於有需要之皮膚上。該非產蛋白質之胺基酸可進一步具有一或多種選自由下列組成之群之額外活性：抑制鈣神經素、增強β1整合素之表現、增強纖維連接蛋白之表現、刺激B-內啡肽及增強CGRP之表現。

在本發明之另一態樣中，提供治療、改善及/或預防人類皮膚之細紋或皺紋或下垂的方法，其包含將包含可增強LOXL-1之非產蛋白質之胺基酸的組合物外敷施用於有需要之皮膚上。在特定實施例中，非產蛋白質之胺基酸係噻唑基丙胺酸或其衍生物，更通常為L-噻唑基丙胺酸或其衍生物，且較佳為L-4-噻唑基丙胺酸或其衍生物。因此，本發明該態樣之治療細紋或皺紋的較佳方法包含將包含L-4-噻唑基丙胺酸之組合物外敷施用於細紋或皺紋上。

藉由參考以下詳細闡述及附圖可更好地理解本發明之該等及其他態樣。

除非另有規定，否則本文所用之所有術語皆意欲具有其普通含義。

術語"胺基酸"通常係指在同一分子中含有胺基及羧基之有機分子。術語"α-胺基酸"係指其中胺基及羧基與同一碳原子結合之胺基酸。術語"β-胺基酸"係指其中胺基及羧基與相鄰碳原子結合之胺基酸。

"天然胺基酸"係指藉由自然界中之生物體合成之任何胺基酸，其包括但不限於標準胺基酸L-丙胺酸、L-纈胺酸、L-白胺酸、L-異白胺酸、L-脯胺酸、L-色胺酸、L-苯丙胺酸、L-甲硫胺酸、甘胺酸、L-絲胺酸、L-酪胺酸、L-蘇胺酸、L-半胱胺酸、L-胱胺酸、L-天冬醯胺、L-麩胺醯胺、L-天冬胺酸、L-麩胺酸、L-離胺酸、L-精胺酸、L-組胺酸、及其他非標準胺基酸(例如L-鳥胺酸)、及衍生物(例如L-4-羥基脯胺酸)。

廣義而言，"非天然胺基酸"係指除"天然胺基酸"之外的任何胺基酸，且包括但不限於具有未在天然胺基酸中發現之側鏈的α-胺基酸以及β-胺基酸。"非天然胺基酸"亦係指雖然呈不同立體化學組態但結構與天然胺基酸相同之胺基酸。

廣義而言，"非產蛋白質"之胺基酸係指不能藉由活生物體納入肽或蛋白質中之任何胺基酸且包括非天然胺基酸。

本發明提供用於外敷施用之組合物，其包含有效量之一或多種非產蛋白質之胺基酸以治療、逆轉、改善及/或預防皮膚衰老迹象。該等皮膚衰老迹象包括但不限於以下：

(a)治療、減少及/或預防細紋或皺紋；

(b)減小皮膚毛孔大小；

(c)改善皮膚厚度、豐滿度及/或緊實度；

(d)改善皮膚柔順度及/或柔軟度；

(e)改善皮膚色調、光亮度及/或透明度；

(f)改善前膠原及/或膠原產生；

(g)改善彈性蛋白之保持及重塑；

(h)改善皮膚紋理及/或促進恢復原有紋理；

(i)改善皮膚屏障修復及/或機能；

(j)改善皮膚輪廓之外觀；

(k)恢復皮膚光澤及/或亮度；

(l)補充皮膚中之必需營養素及/或成份；

(m)改善因衰老及/或絕經而減退之皮膚外觀；

(n)改善皮膚濕潤性；及/或

(o)增強皮膚彈性及/或回彈性。

實際上，將本發明組合物施用於需要治療之皮膚上。即，皮膚患有任何上述屬性之缺失或喪失或否則將受益於任何上述皮膚屬性之改善。

在某些較佳實施例中，本發明之組合物及方法係針對預防、治療及/或改善皮膚細紋及/或皺紋。在該情形中，將該等組合物施用於需要治療之皮膚上，所謂需要治療之皮膚意指具有皺紋及/或細紋之皮膚。較佳地，將該等組合物直接施用於細紋及/或皺紋上。該等組合物及方法適於治療任何皮膚表面上之細紋及/或皺紋，包括但不限於臉、頸及/或手之皮膚。

通常而言，該等組合物及方法可用於治療與彈性纖維喪失有關之任何皮膚狀況。吾人認為該等益處至少部分係由化合物能夠刺激LOXL-1產生而引起。換言之，本發明之非產蛋白質之胺基酸係LOXL-1增強子。

本發明之胺基酸呈"游離"或單體形式，所謂呈"游離"或單體形式意指其不與其他胺基酸共價結合，但或者可官能化成本文所述之前藥及諸如此類。

用於實施本發明之胺基酸可為能夠減少、治療或預防一或多種衰老迹象之任何非產蛋白質之胺基酸。通常，本發明之非產蛋白質之胺基酸能夠刺激LOXL-1。在一個實施例中，該非產蛋白質之胺基酸具有式I之結構：

其中n係0(零)至4之整數，通常為0至2，且較佳為0或1，以使在n係0之情形中胺基酸係α-胺基酸且在n係1之情形中胺基酸係β-胺基酸；

R係包含任何有機取代基之側鏈，條件為在式I之胺基酸呈L(左旋)組態之情形中，當n係0(即，α-胺基酸)時，側鏈不為存在於產蛋白質之天然存在的胺基酸中之側鏈；

R通常為包含1-20個碳原子及視情況包括一或多個雜原子(例如氧、硫及氮原子)之烴基團。較佳地，R係選自經取代或未經取代之具支鏈、直鏈或環狀C₁ -C₂₀ 烷基、烯基、炔基、芳基、苄基、雜芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-雜芳基、雜芳基-烷基、雜芳基-芳基、二環烷基、芳基或雜芳基基團及其組合；其中上述基團可經包括以下之任何部分取代：例如，羥基、胺基、氰基、鹵素、側氧基、羧基、甲醯胺基、硝基、偶氮基、烷氧基、烷基、烷基亞胺基、烷基胺基、二烷基胺基、硫代烷氧基及其組合。

在較佳實施例中，R包含雜環。雜環可為單環或二環且可為芳族部分飽和或完全飽和之雜環。較佳之雜環包含氮原子。代表性雜環包括但不限於氮雜環丁基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、咪唑啉基、異喹啉基、異噁唑基、異噁唑啶基、異噻唑基、異噻唑啶基、吲哚基、噁唑基、噁唑啶基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯啶基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑啶基、吡啶基、六氫吡啶基、吡嗪基、六氫吡嗪基、N-甲基六氫吡嗪基、N-甲基氮雜環丁基、嘧啶基、嗒嗪基、嗎啉基、喹啉基、噻唑基、噻唑啶基、噻吩基、三唑基及諸如此類。

虛線意欲表示R可為與氮原子形成環之二價基團，如在(例如)脯胺酸及羥基脯胺酸類似物之情形中，儘管該等結構較不佳。

在一個實施例中，胺基酸係包含式Ia之雜環基團的α-胺基酸或β-胺基酸：

其中n係0(α-胺基酸)或1(β-胺基酸)；

Z可表示鍵(即，Z被省略)或Z可表示與α-碳結合之連接體部分，α-碳又通過取代基Y與雜環Q結合；其中Z通常包含1個至10個碳原子，視情況包括一或多個雜原子取代基，例如氧、硫及氮。通常，Z係選自由下列組成之群：氧、硫、NR^N 、C_1-10 烷基、烯基、炔基、芳基、羰基、羧基、胺甲醯基，其中R^N 係氫、C_1-10 烷基、烯基、炔基、芳基或諸如此類。

Z較佳係鍵或選自由下列組成之群之部分：經取代或未經取代之具支鏈或直鏈C_1-6 烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、或烷基-芳基，包括但不限於呈-(CH₂ )_a -形式(其中"a"係1至6之整數)之直鏈烷基部分，包括(例如)-CH₂ -(亞甲基)、-CH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ CH₂ -、或-CH₂ CH₂ CH₂ CH₂ -；一般形式為-(CH₂ )_a O-或-O(CH₂ )_a -(其中"a"係1至6之整數)之直鏈烷氧基部分，包括(例如)-CH₂ O-或-OCH₂ -、-CH₂ CH₂ O-或-OCH₂ CH₂ -、-CH₂ CH₂ CH₂ O-或-OCH₂ CH₂ CH₂ -；-O(CH₂ )_a O-，其中"a"係如上文所定義；或呈-(CH₂ )_b O(CH₂ )_c -、-(CH₂ )_b S(CH₂ )_c -或-(CH₂ )_b NR^N (CH₂ )_c -形式(其中"b"及"c"獨立為0(零)至6之整數且R^N 係如上文所定義)之部分。較佳地，Z表示介於Y與α-碳之間之單鍵或Z係基團-CH₂ -或-CH₂ CH₂ -、-CH₂ O-、-CH₂ S-、-CH₂ NR^N -或-(C=O)-。在一個實例性實施例中，Z係(-CH₂ -)_1-3 且更佳為-CH₂ -；

Y係環Q與連接體或鍵Z之結合點且通常為碳或雜原子，且更通常選自C、CH、N或NR^N ，其中R^N 係如上文所定義；且

Q係3-14員雜環基團，其包括Y且可為單環、二環或三環(包括稠合環系統)，且在環系統中包含一或多個通常選自氧、氮及硫之雜原子，且視情況經與環系統在任何適宜結合點上(例如，在任何碳或氮原子上)結合之一或多個R₁ 基團取代，

其中R₁ 在每次出現時均獨立選自氫；鹵素(F、Cl、Br、I)；-OH；-NR^N R^N ；-SH；-CN；側氧基；-CHO；-CO₂ H；-O-(C=O)-H；-O-(C=O)-C_1-10 烷基；-O-(C=O)-Ar；-(C=O)-O-C_1-10 烷基；-(C=O)-O-Ar；-(C=O)-NR^N R^N ；-O-C_1-10 烷基；-O-Ar；-S-C_1-10 烷基；-S-芳基；-Ar；-C_1-10 烷基；-NR^N -CHO；-NR^N -(C=O)-C_1-10 烷基；-C_1-10 烷基-O-C_1-10 烷基；全氟烷基；環氧基；疊氮基；硫氰酸酯基；-SO₂ -R^N ；硝基或諸如此類；其中Ar表示視情況經取代之芳基，R^N 係如上文所定義且在取代基包含兩個R^N 基團之情形中，其可共同形成環；條件為當n=0(在α-胺基酸情形中)時，式Ia化合物不為L-組胺酸或L-色胺酸。

在一些實施例中，在Y為雜原子之情形中，Q除Y外亦包含至少一個雜原子，該至少一個額外雜原子係選自N、O、S、B、Si、As、P及諸如此類，但更通常選自N、O及S。

三員雜環之非限制性實例包括但不限於氮丙啶、環氧乙烷、硫雜環丙烷、二氮丙啶(diaziridine)及氧氮丙啶(oxaziridine)。四員雜環之非限制性實例包括但不限於氮雜環丁烷、環氧丙烷、硫雜環丁烷(thietane)、二氮雜環丁烷、氧氮雜環丁烷(oxazetidine)及1,2-氧硫雜環丁烷(oxathietane)。

五員雜環表示本發明取代基Q之當前較佳實施例。五員雜環之非限制性實例包括但不限於吡咯啶、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑啶、噻唑啶、1,3-dioiane、1,3-氧硫、1,3-二硫、咪唑啶、吡唑啶、吡咯、呋喃、噻吩、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、咪唑、吡唑、1,3,4-噁二唑、1,2,4-噁二唑、1,3,4-噻二唑、1,2,4-噻二唑、1,3,4-三唑、1,2,3-三唑及諸如此類。Q可選自(例如)以下芳族完全飽和或包含一個或兩個雙鍵之五員雜環：

應理解，在包含環取代基O及/或S之每一上述五員環中，與環之結合點不為硫或氧原子，意指Y為C、CH或N，而非O或S。該等五員環可視情況經如上文所定義之一或多個R₁ 基團官能化，可尤其提及鹵基、羥基、側氧基、硫醇基、C_1-4 烷基(例如，甲基、乙基、異丙基等)、胺基及二烷基胺基。此外，任何氮原子皆可視情況氧化成N-氧化物，且任何硫原子皆可視情況氧化成亞碸。

適宜選擇用於Q之六員環之非限制性實例包括但不限於2H-吡喃、四氫吡喃、六氫吡啶、1,4-二噁烷、嗎啉、六氫吡嗪、1,4-二噻烷、硫嗎啉、吡啶、吡嗪、嗒嗪、嘧啶、1,2,3-三嗪、1,2,4-三嗪、1,3,5-三嗪、1,2,3,4-四嗪及五嗪，此僅為幾個實例。Q可選自(例如)以下芳族完全飽和或包含一個、兩個或三個雙鍵之六員雜環：

應理解，在包含環取代基O及/或S之每一上述六員環中，與環之結合點不為硫或氧原子，意指Y為C、CH或N，而非O或S。該等六員環可視情況經如上文所定義之一或多個R₁ 基團官能化，可尤其提及鹵基、羥基、側氧基、硫醇基、C_1-4 烷基(例如，甲基、乙基、異丙基等)、胺基及二烷基胺基。此外，任何氮原子皆可視情況氧化成N-氧化物，且任何硫原子皆可視情況氧化成亞碸。

七員雜環包括但不限於1H-氮呯、氧呯、硫呯、1,4-二氮呯、1,3-二氧呯、1,3-二硫呯、1H-1,3,5-三氮呯、1,2-氧氮呯、1,3-硫氮呯、1,3,6-硫二氮呯、四氮呯、1,2,4,7-硫三氮呯及諸如此類。八員雜環包括但不限於氮雜環辛間四烯、2H-氧雜環辛三烯、2H-硫雜環辛三烯(thiocin)、1,2-二氮雜環辛間四烯、2H-1,4-氧氮雜環辛間四烯、1,3,4-三氮雜環辛間四烯及諸如此類。

Q亦可表示稠合雜環系統，例如，吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、吲嗪、異吲哚、二氫吲哚、苯并噁唑、苯并異噁唑、苯并噻唑、苯并異噻唑、苯并咪唑、1H-吲唑、喹啉、異喹啉、喹嗪鎓、喹唑啉、啉、喹喔啉、酞嗪、1,5-萘啶、喋啶、9H-嘌呤、腺嘌呤、鳥嘌呤及萘啶，此僅為幾個實例。適於取代基Q之稠合雜環系統之非限制性實例包括但不限於：

(i)以下八員稠合雜環：

(ii)以下九員稠合雜環：

及(iii)以下十員稠合雜環：

所有該等皆僅為舉例說明在本發明範圍之內的各種雜環。

應理解，在包含環取代基O及/或S之每一上述雜環系統中，與環之結合點不為硫或氧原子，意指Y為C、CH或N，而非O或S。在稠合環系統中，結合點可在任一環之任何適宜位置上。該等環可視情況經如上文所定義之一或多個R₁ 基團官能化，可尤其提及鹵基、羥基、側氧基、硫醇基、C_1-4 烷基(例如，甲基、乙基、異丙基等)、胺基及二烷基胺基。此外，任何氮原子皆可視情況氧化成N-氧化物，且任何硫原子皆可視情況氧化成亞碸。

在較佳實施例中，Q係在環系統中包含至少一個非Y雜原子之5或6員環，該雜原子係選自氧、硫或氮。在另一較佳實施例中，Q包含芳環。在多個實施例中，Q係選自以下之六員環：吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、嗒嗪基、2H-吡喃基、六氫吡啶基、六氫吡嗪基、嗎啉基、6H -1,2,5-噻二嗪基、2H ,6H -1,5,2-二噻嗪基、噻嗪基；1,2-二噻烷基、1,3-二噻烷基及1,4-二噻烷基；1,2-二噁烷基、1,3-二噁烷基及1,4-二噁烷基；1,3,5-三嗪基；或在六員雜環上視情況包括基團R₁ 取代之上文所提供之任何六員雜環。更佳地，基團Q包含如下文所論述之五員環。

在一個實施例中，本發明之非產蛋白質之胺基酸包含式Ib之5-員雜環基團(較佳為雜芳基)；

其中環Q進一步藉由取代基Y、T、U、V及W定義；

n係如上文所定義且較佳為0(零)或1以分別定義α-胺基酸或β-胺基酸；

Z係如上文所定義且較佳表示單鍵或基團(CH₂ )_k 單元，其中k係1至3之整數，較佳為1至2，且仍更佳地，k為1；較佳地，Z係亞甲基-CH₂ -；

Y係C、CH或N；且

T、U、V及W獨立選自CH、CR₁ 、N、NR^N 、O及S，其中R₁ 及R^N 係如上文所定義；且其中環內部之虛線圓環表示該環視情況為芳族環且可包含零個、一個或兩個雙鍵；且在其中T、U、V及/或W表示N(氮原子)之情形中氮原子可視情況氧化成N-氧化物，且在其中T、U、V及/或W表示S(硫原子)之情形中硫原子可視情況氧化成亞碸；且其中R₁ 較佳為C_1-4 烷基(例如，甲基、乙基等)、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、硫醇基、羥基、側氧基或鹵素。

在一個實施例中，Y係C(碳原子)或N且T、U、V及W中至少一個為N(氮原子)。在較佳實施例中，選自T、U、V及W之一對相鄰或非相鄰取代基表示CH或CR₁ ，且另一對獨立表示O(氧原子)、N(氮原子)、NR^N 或S(硫原子)；其中R₁ 及R^N 係如上文所定義。

在一些實施例中，取代基Y、T、U、V及W共同包含選自以下之五員環：噻吩基(2-噻吩基或3-噻吩基)；呋喃基(2-呋喃基或3-呋喃基)；2-或3-氧雜環戊基；2-或3-四氫苯硫基；1,2-二硫基；1,3-二硫基；2H -吡咯基(2H -吡咯-3-基、2H -吡咯-4-基、或2H-吡咯-5-基)；吡咯基(1-吡咯基、2-吡咯基或3-吡咯基)；咪唑基(2-咪唑基、4-咪唑基、或5-咪唑基)；吡唑基(1-吡唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、或5-吡唑基)；異噻唑基(3-異噻唑基、4-異噻唑基、或5-異噻唑基)；異噁唑基(3-異噁唑基、4-異噁唑基、或5-異噁唑基)；3-呋呫基；吡咯啶基(1-吡咯啶基、2-吡咯啶基或3-吡咯啶基)；吡咯啉基(1-吡咯啉-2-基、2-吡咯啉-2-基、2-吡咯啉-3-基、2-吡咯啉-4-基、2-吡咯啉-5-基)；咪唑啶基(1-咪唑啶基、2-咪唑啶基或4-咪唑啶基)；咪唑啉基(2-咪唑啉-2-基、2-咪唑啉-4-基、或2-咪唑啉-5-基)；吡唑啶基(2-吡唑啶基、3-吡唑啶基、或4-吡唑啶基)；吡唑啉基(3-吡唑啉-1-基、3-吡唑啉-2-基、3-吡唑啉-3-基、3-吡唑啉-4-基、3-吡唑啉-5-基)；噻唑基(噻唑-2-基、噻唑-4-基、或噻唑-5-基)；噁唑基(噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基)；1,2,3-三唑基(1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-4-基、或1,2,3-三唑-5-基)；1,2,4-三唑基(1,2,4-三唑-1-基、1,2,4-三唑-3-基、或1,2,4-三唑-5-基)；異噻唑基(異噻唑-3-基、異噻唑-4-基、或異噻唑-5-基)；1H -四唑(1H -四唑-1-基或1H -四唑-5-基)；及亞胺唑基(imidizolyl)或1,3-二唑基(1,3-二唑-1-基、1,3-二唑-2-基、1,3-二唑-4-基、1,3-二唑-5-基)；此僅為幾個實例,其中括號中所列示之種類係該等基團之多種可能連接之代表且就結合點而言並不意欲具有限制意義。應瞭解，上述之每一者皆代表本發明之各個實施例。

在一些實施例中,本發明之胺基酸具有式Ic之結構：

其中Ω係雜環，較佳為五員雜環，且較佳選自以下可選芳環：

其中ε₁ 、ε₂ 及ε₃ 獨立選自N、NH、NR^N 、S及O；條件為當結合點係ε₁ 、ε₂ 或ε₃ 時，彼位置表示N；且較佳地不為結合點之ε₁ 、ε₂ 及ε₃ 中之至少一個表示N；且其中不為結合點之碳原子可視情況經如上文所定義之R₁ 基團取代，其中R^N 及R₁ 係如上文所定義，R₁ 較佳為C_1-4 烷基(甲基、乙基、丙基、異丙基等)、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、硫醇基、羥基、C_1-4 烷氧基(甲氧基、乙氧基等)、烷硫基、羥基烷基(例如，羥基甲基、羥基乙基等)、全氟甲基、或鹵素(氟、氯、溴、碘)。虛線圓環意欲表示每一環皆視情況為芳族環，但或者可包含零個、一個或兩個雙鍵。

在式Ic之較佳實施例中，Ω係選自：

其中X係氧原子、NR^N 或硫原子；且

R₂ 及R₃ 獨立經選擇且可為上文對於R₁ 所定義之任何基團，且較佳表示氫、羥基、鹵素(F、Cl、Br、I)、NR^N R^N 、硫醇基、或C_1-4 烷基(較佳為甲基)；其中R^N 係如上文所定義且在每次出現時均較佳為氫；且其中胺基酸可包含R或S對映異構體。在較佳實施例中，X係硫且R₂ 及R₃ 各為氫。

仍更佳地，胺基酸係α-胺基酸(n=0)；Ω係上文所列示之基團(i)；其中X係硫且R₂ 及R₃ 各表示氫，由此定義具有以下結構之4-噻唑基丙胺酸(噻唑-4-基丙胺酸)：

在一個實施例中，4-噻唑基丙胺酸為4-D-噻唑基丙胺酸或4-L-噻唑基丙胺酸(CAS編號為119433-80-6)，其中4-L-噻唑基丙胺酸較佳。4-L-噻唑基丙胺酸之結構顯示於下文中。

4-L-噻唑基丙胺酸

4-L-噻唑基丙胺酸可自PepTech(Burlington,MA)及Synthetech(Albany,OR)購得。4-L-噻唑基丙胺酸之合成闡述於Dickman等人之美國專利第5,275,950號中，其揭示內容以引用方式併入本文中。

預期適於實施本發明之胺基酸之其他非限制性實例包括式IIa或IIb之脯胺酸類似物(L或D)：

其中R係如上文所定義且其中胺基酸之α-碳可為R或S組態。

本發明之非天然胺基酸亦涵蓋在α-碳上具有反轉對掌性之天然存在之胺基酸的變體，包括D-丙胺酸、D-纈胺酸、D-白胺酸、D-異白胺酸、D-脯胺酸、D-色胺酸、D-苯丙胺酸、D-甲硫胺酸、D-絲胺酸、D-酪胺酸、D-蘇胺酸、D-半胱胺酸、D-天冬醯胺、D-麩胺醯胺、D-天冬胺酸、D-麩胺酸、D-離胺酸、D-精胺酸、及D-組胺酸；或在異白胺酸及蘇胺酸之情形中，令人關注之非天然胺基酸係[R,R]、[S,S]、[S,R]、及[R,S]非對映異構體。非天然胺基酸亦可基於闡述於(例如)D. Seebach等人，Helv. Chim. Acta 1998,81,932；D. Seebach等人，Helv. Chim. Acta 1996,79,913(其揭示內容以引用方式併入本文中)中之天然胺基酸的β類似物。

熟習此項技術者應瞭解，本發明之胺基酸可呈兩性離子形式存在。此外，本發明涵蓋使用該等胺基酸之化妝品上或醫藥上可接受(例如，無毒性及/或無刺激性)之鹽。該等鹽可為無機或有機酸或鹼加成鹽。適宜酸式鹽包括但不限於乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環戊丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷硫酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷硫酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。尤其可提及鹽酸鹽。鹼加成鹽包括彼等與諸如鋅、鈣、鉍、鋇、鎂、鋁、銅、鈷、鎳、鎘、鈉、鉀及諸如此類等金屬陽離子或與自氨、N,N-二苄基乙二胺、D-葡萄糖胺、四乙基銨或乙二胺等形成之陽離子所形成之鹽類。包括胺基官能團在內之含氮基團及含氮側鏈(例如，雜環)可使用以下低碳數烷基鹵化物四級化，如：甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲基酯、硫酸二乙基酯、硫酸二丁基酯及硫酸二戊基酯；長鏈鹵化物，如：癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物，如：苄基及苯乙基溴化物，此僅為幾個實例。

本發明亦涵蓋該等胺基酸之前藥形式，以改善真皮穿透等的用途。本文所用之前藥係指可在活體內轉化成本發明胺基酸之化合物。前藥可衍生自胺基、羧基或二者。適於修飾該等官能團之前藥衍生物已為熟習此項技術者所熟知且闡述於(例如)藥物設計與發現教科書(Textbook of Drug Design and Discovery)，第三版(2002)，第14章，第411-458頁中，其以引用方式併入本文中。

本發明亦涵蓋，可將本發明之非產蛋白質之胺基酸官能化成N-醯基衍生物(包括C_1-16 醯基衍生物)或酯衍生物(包括但不限於C_1-10 烷基酯衍生物)，不加限制，不管所得化合物是否可在活體內水解成游離胺基酸。在一個實施例中，為非產蛋白質之胺基酸提供C_1-16 N-醯基衍生物以增強其親油性。

鹽、前藥、N-醯基衍生物及酯在本文中統稱為游離胺基酸之"衍生物"。

本發明之化妝品組合物可以多種形式調配以用於外敷施用且包含約0.0001重量%至約90重量%之一或多種上述非產蛋白質之胺基酸，且較佳包含約0.0001重量%至約20重量%、更佳約0.001重量%至約10重量%、且最佳約0.001重量%至約1重量%。

可將組合物調配成油包水或水包油乳液、洗劑、乳霜、漿液(serum)、噴霧劑、棒狀物或適於外敷施用之其他形式。

該組合物可視情況包含彼等熟習此項技術者所瞭解之其他化妝品用活性物質及賦形劑，包括但不限於填充劑、乳化劑、抗氧化劑、表面活性劑、成膜劑、螯合劑、膠凝劑、增稠劑、潤膚劑、潤濕劑、保濕劑、維他命、礦物質、黏性及/或流變性改性劑、防曬劑、去角質劑、色素脫失劑、類視色素、激素化合物、α-羥基酸、α-酮基酸、抗分枝桿菌劑、抗真菌劑、抗微生物劑、抗病毒劑、鎮痛劑、脂質化合物、抗過敏劑、H1或H2抗組胺劑、抗炎劑、抗刺激劑、抗腫瘤劑、免疫系統加強劑、免疫系統抑制劑、祛痘劑、麻醉劑、防腐劑(antiseptics)、驅蟲劑、冷膚化合物、護膚劑、皮膚促滲劑、磨砂劑、潤滑劑、芳香劑、著色劑、色素脫失劑、色素淡化劑、防腐劑(preservative)、穩定劑、藥劑、光穩定劑、防曬劑及其混合物。除上述外，本發明之化妝品組合物亦可含有用於治療皮膚病症之任何其他化合物。

本發明亦提供治療衰老皮膚之方法，其藉由將包含本發明組合物之組合物外敷施用於受侵襲區域上保持足以減少、改善衰老之皮膚病學迹象之時間段來實施。通常將該組合物每24小時1至3次施用於皮膚上保持達成期望抗衰老效果所需要之時間段。治療方案可包含每日一次施用保持至少一週、至少兩週、至少四週、至少八週、或至少十二週。

該方法包括治療與年齡性及內在皮膚衰老二者有關之皮膚變化。預期該方法尤其可用於治療受UV侵害之皮膚。

本發明組合物及方法通常並不意欲用於治療牛皮癬，且因此，在一個實施例中，本發明係關於將本文所述之一或多種胺基酸(例如4-L-噻唑基丙胺酸)外敷施用於未受牛皮癬侵襲之皮膚上。然而，倘若皮膚亦患有皮膚衰老迹象(例如皺紋、下垂等)，則將該等胺基酸組合物外敷施用於受牛皮癬侵襲之皮膚上以治療相同皮膚區域在本發明之範圍內。

實例 1.1　實例1：藉由L-4-噻唑基丙胺酸刺激LOXL1活性

已發現酶類離胺醯氧化酶-1("LOXL1")為彈性蛋白聚合物更新之重要調控劑，該彈性蛋白聚合物係使結締組織(包括皮膚)具有彈性特性之細胞外基質組份。吾人認為青春期後不再產生彈性蛋白，青春期後彈性蛋白纖維之保持係競爭抗彈性蛋白酶-彈性蛋白酶活性之結果。隨著年齡增長，注意到競爭活性不平衡，導致含有彈性蛋白之組織喪失彈性。就皮膚而言，此彈性喪失最常見地可導致觀察到皺紋。

儘管吾人並不瞭解更新/降解(即，抗彈性蛋白酶/彈性蛋白酶活性)之準確機制，但已確定LOXL1為"抗彈性蛋白酶"因子，其藉由使原彈性蛋白單體聚合而介導彈性蛋白纖維更新(參見，例如，Kaganet等人，2003，J. Cell. Biochem .，88:660-672；及Li等人，2004，Nat. Genet. 36:178-182，每一文獻之全部內容均以引用方式併入本文中)。因此，預期能夠增強LOXL1轉錄及/或轉譯或LOXL1活性之藥劑可增強"抗彈性蛋白酶"活性，促進彈性蛋白纖維更新並達成含有彈性蛋白之組織之彈性改善。使用螢光素酶報導基因系統對L-4-噻唑基丙胺酸誘導LOXL1表現之能力進行分析。已發現，向包含LOXL1調控元件之培養物中添加L-4-噻唑基丙胺酸可誘導較對照顯著之報導基因表現。

1.1.1　材料及方法

載體構君、轉染及表現 :藉由熟習此項技術者所習知之標準方法並按照製造商說明書將LOXL1基因之啟動子區域分離並選殖至pGL3螢光素酶報導基因質粒(Promega)中。使用LipofectAMINE^TM LTX試劑(Invitrogen)按照製造商指示將LOXL1/pGL3載體及不含有調控元件之對照載體pRL-NULL(Promega)共轉染至人類纖維肉瘤系HT1080中。

使經轉染細胞恢復24h。隨後用含有多種濃度之L-4-噻唑基丙胺酸之新鮮培養基代替該培養基，並將經轉染細胞再培養24h。

隨後用PBS洗滌培養物並將其暴露於100μl細胞裂解緩衝液/25cm² 培養區域中並在室溫下輕輕振蕩30min。隨後立即將含有細胞裂解物之培養燒瓶置於-80℃下。

報導基因活性之測定 ：

按照製造商說明書(雙螢光素酶(Dual-Luciferase)報導基因分析系統，Promega)測定報導基因螢火蟲螢光素酶之活性。簡言之，相對於編碼第二螢光素酶基因之來自海洋腔腸動物(Reni11a reniformis )之對照載體的活性來測定該報導基因之活性。比較來自測試及對照培養物之基因的相對活性以測定調控序列活性之百分比改變。

1.1.2　結果

因為pGL3載體缺少調控螢光素酶基因所必需之啟動子區域，故該基因之表現係藉由經選殖之調控元件來控制，在該情形中為LOXL1基因之調控元件。在一式三份測試中，已發現添加1μg/ml L-4-噻唑基丙胺酸可使報導基因之表現增強57%(p<0.05)。因此顯示L-4-噻唑基丙胺酸係LOXL1表現之正性調控劑，意指對彈性蛋白更新具有次級效應。

1.2　實例2：L-4-噻唑基丙胺酸抑制炎症性途徑

皮膚衰老之常見症狀係出現濕疹樣損傷，表現為區域發紅及皮膚乾燥呈鱗狀。儘管並不瞭解病因學，但已知該等區域與慢性炎症有關。過去，通常用外用腎上腺皮質類固醇來治療該等損傷；然而，已發現長期使用類固醇會伴隨熟習此項技術者所熟知之許多副作用(例如，皮膚萎縮、條紋、色素脫失及毛細管擴張)。在2000年，FDA批准了兩種用於外敷治療濕疹之新穎藥物：PROTOPIC(他克莫司(tacrolimus))及ELIDEL(吡美莫司(pimecrolimus))，其後顯示該兩種藥可有效治療多種炎症性皮膚病。

他克莫司及吡美莫司係絲胺酸/蘇胺酸蛋白酶鈣神經素(亦稱為蛋白磷酸酶2B("PP2B"))之抑制劑。抑制鈣神經素可阻斷NFAT(激活性T-細胞之細胞核因子)去磷酸化以預防產生炎症性細胞因子(參見，例如，Bekersky等人，2001，J. Am. Acad. Dermatol. 441:S17-S27，其全部內容以引用方式併入本文中)。當外敷使用時，鈣神經素抑制劑可正性控制局部皮膚刺激。

利用離體磷酸酶分析來評價L-4-噻唑基丙胺酸調節鈣神經素活性之能力。已發現L-4-噻唑基丙胺酸以劑量依賴性模式調控鈣神經素活性。

1.2.1　材料及方法

離體磷酸酶分析 ：使用熟習此項技術者所熟知之DiFMUP(6,8-二氟-7-羥基-4-甲基香豆素磷酸酯)磷酸酶分析來監測鈣神經素活性之調節(參見，例如，Wegner等人，2007，Methods Mol. Biol. 365:61-69，其全部內容以引用方式併入本文中)。DiFMUP去磷酸化導致形成具有高螢光性且穩定之產物：Di4MU。

將多種濃度之L-4-噻唑基丙胺酸添加至由50mM Tris-HCL(pH 7.4)、0.0125% BSA、0.1mM CaCl、400U/ml鈣調蛋白及1mM NiCl組成之反應緩衝液中。將L-4-噻唑基丙胺酸/反應緩衝液混合物在37℃下培育30min。隨後添加DiFMU受質至10μM濃度，並將混合物返回到37℃，再培育15min。在螢光分光光度計上測定螢光強度。

1.2.2　結果

已發現在所測試之最低濃度下L-4-噻唑基丙胺酸略微增強鈣神經素活性，在0.0001%重量/體積濃度下使活性增強6%。然而，增大L-4-噻唑基丙胺酸之濃度可達成鈣神經素活性之劑量依賴性抑制，在0.001%及0.01%濃度下分別使活性降低11%及63%。估計化合物之IC-50值為0.064%。該等結果顯示外敷施用包含L-4-噻唑基丙胺酸之組合物可改善與炎症性皮膚狀況有關之症狀。

1.3　實例3：L-4-噻唑基丙胺酸調節β1整合素之表現

β1整合素係跨膜整合素異二聚體複合物之一種組份，該複合物介導細胞與細胞外基質蛋白及其他細胞之結合。整合素能夠與多種細胞外基質組份(包括膠原、層黏連蛋白及纖維連接蛋白)結合，並起保持皮膚結構完整性之作用。已顯示β1整合素表現降低會降低皮膚彈性，例如皮膚衰老及/或受日光侵害。

使用全細胞ELISA分析來評價L-4-噻唑基丙胺酸暴露對β1整合素表現之影響。已發現L-4-噻唑基丙胺酸暴露會使人類成纖維細胞中之β1整合素的表現增強。

1.3.1　材料及方法

細胞培養：將人類真皮成纖維細胞(Cascade Biologics)在生長培養基(DMEM，5% FBS，1% L-麩胺酸，及1%抗生素)中於60mm培養皿中以3.5x10⁵ 個細胞/ml培養過夜。將細胞用稀釋於生長培養基中之測試活性物質或媒劑對照進行處理並在37℃下培育24小時。

全細胞ELISA：於L-4-噻唑基丙胺酸處理後使用來自Chemicon International之B1整合素套組對B1整合素在細胞表面上之表現進行分析。吸出培養基並將板在37℃下與細胞離解緩衝液(與套組一起提供)培育20-25分鐘，將細胞離心並再懸浮於無補充物之DMEM中。將100μl細胞懸浮液添加至預塗覆有鼠科動物抗人類βl抗體(Chemicon International)(非特異性結合已經阻斷)之微量滴定板上，並將板在37℃下培育2h。藉由細胞染色套組(Chemicon International)按照製造商說明書定量黏附細胞。簡言之，在PBS中洗滌板並藉由在室溫下於套組染色溶液中培育5min對黏附細胞進行染色。將經染色之細胞在PBS中進行洗滌並容許空氣乾燥10min。隨後向每一孔中添加提取緩衝液並在分光光度計上於570nm下對板進行讀數。

1.3.2　結果

按照下式計算β1整合素表現之百分比變化：

在L-4-噻唑基丙胺酸濃度為0.01%(w/v)時量測到B1整合素之表現增強225%。該等結果顯示外敷施用包含L-4-噻唑基丙胺酸之組合物會使β1整合素之表現增強，使皮膚之完整性及/或彈性增強。

1.4　實例4：L-4-噻唑基丙胺酸調節纖維連接蛋白之表現

纖維連接蛋白係有助於形成調控結締組織(包括皮膚)之結構及性質之細胞外基質的分泌性蛋白質。纖維連接蛋白介導細胞與其他細胞(經由整合素，參見實例3)及細胞外基質組份(例如，膠原、纖維蛋白及肝素)二者之結合。因此，纖維連接蛋白對於保持皮膚之完整性甚為重要，且在傷口癒合過程中尤其重要。已知UV暴露會降解皮膚中之纖維連接蛋白，導致在日光暴露及/或受UV侵害之皮膚區域中該蛋白之表現降低。另外，已發現在衰老皮膚之乳突狀真皮中纖維連接蛋白之表現降低。

利用競爭性抑制ELISA分析來評價L-4-噻唑基丙胺酸對來自正常人類成人成纖維細胞之纖維連接蛋白之表現的影響。已發現，L-4-噻唑基丙胺酸以劑量依賴性模式使來自成纖維細胞之纖維連接蛋白之表現增強。

1.4.1　材料及方法

細胞培養 ：將人類真皮成纖維細胞(Cascade Biologics)在12-孔組織培養板中於生長培養基(DMEM、5% FBS、1% L-麩胺酸、及1%抗生素)中進行培養並在37℃下培育24小時。將細胞用稀釋於生長培養基中之測試活性物質進行處理並在37℃下培育72小時，此後收集條件培養基並分析是否存在纖維連接蛋白。隨後將成纖維細胞培養物再培育72hr。

競爭性抑制ELISA ：藉由競爭性ELISA套組(Chemicon International)來分析測試樣品中是否存在纖維連接蛋白。簡言之，將條件培養基之測試及對照樣品與偶聯HRP之兔單株抗人類纖維連接蛋白抗體在室溫下培育約10分鐘。隨後將樣品/抗體混合物轉移至預塗覆有標準量之人類纖維連接蛋白(非特異形結合已經阻斷)之微量滴定板上。將該板在室溫下培育1小時，隨後實施PBS洗滌並藉由熟習此項技術者所習知之常規方法檢測結合抗體(即，檢測結合之HRP)。結合抗體的量與樣品中纖維連接蛋白的量成反比。

1.4.2　結果

按照下式計算由於L-4-噻唑基丙胺酸處理而引起之纖維連接蛋白表現之百分比變化：

L-4-噻唑基丙胺酸濃度增加使得纖維連接蛋白之表現及/或產生增加(表1)：

該等結果顯示外敷施用包含L-4-噻唑基丙胺酸之組合物會使纖維連接蛋白之表現增強，增強皮膚之完整性及/或改善皮膚結構。

1.5　實例5：L-4-噻唑基丙胺酸使活體內之真皮基質分子增加

為確定L-4-噻唑基丙胺酸對活體內人類皮膚中之膠原含量的影響，對約25名年齡為35-65歲的女性實施測試。該人類臨床研究已經由機構審查委員會(Institutional Review Board)批准並在研究開始之前先取得受試個體同意。根據聯邦法規(the Code of Federal Regulations)第21篇第50及56部分實施該研究。

在丙二醇：乙醇：水比率為70:20:10之媒劑中配製0.01%之L-4-噻唑基丙胺酸溶液。本測試之實驗設計如下：將噻唑基丙胺酸溶液或無噻唑基丙胺酸之媒劑溶液施用於外前臂上2×2之皮膚區域上(以2mg/cm² 之量施用)，在半封閉貼片下保持24小時，此後移除貼片並施用新鮮貼片。此重複5天(周一-周五)，隨後使個體周末休息。在接下來的兩週裏以相同方式連續實施貼片施用，總共施用15次。在研究結束時，由委員會認證之皮膚科醫生(Board certified Dermatologist)自施用貼片之區域採集3mm皮膚樣品，在福爾馬林(formalin)中固定，包埋於石蠟中並進行組織學處理。將皮膚樣品切片，並用可使膠原纖維顯影之三色染色劑(Trichrome stain)及使糖胺聚糖(GAG)顯影之艾爾遜藍染色劑(Alcian blue stain)進行染色。在顯微鏡下目測評估膠原及GAG染色之強度。比較來自經噻唑基丙胺酸處理之部位的樣品與經媒劑處理之部位的樣品顯示，在18/21(86%)之個體中在經L4-噻唑基丙胺酸處理之部位中觀察到膠原染色增強。13/21(62%)之經L4-噻唑基丙胺酸治療之個體亦顯示相對於經媒劑治療之皮膚而言GAG染色增強。皮膚中之膠原及GAG增加可隨後改善衰老迹象外觀(例如細紋、皺紋、緊致及下垂)。

1.6　實例6：L-4-噻唑基丙胺酸誘導降鈣素基因相關肽(CGRP)

CGRP係當前已知的最強效血管擴張劑，且因此其幫助傷口癒合及/或當外敷使用時增加至特定組織之流通之潛在用途尤其令人關注。

利用市售CGRP酶聯免疫分析來評價L-4-噻唑基丙胺酸對來自神經元細胞之CGRP之表現的影響。已發現L-4-噻唑基丙胺酸可誘導CGRP在活體外細胞培養物中之表現增強。

1.6.1　材料及方法

細胞培養 ：按照熟習此項技術者所習知之常規方法在補充有神經生長因子之FK12培養基中培養PC-12細胞。PC12細胞係自大鼠嗜鉻細胞瘤獲得且在暴露於神經生長因子時終末分化。在細胞開始分化後，其表現CGRP。將培養物在含有L-4-噻唑基丙胺酸之培養基中再培育24h，此後收集條件培養基並分析是否存在CGRP。

CGRP免疫分析 ：藉由夾心ELISA免疫分析套組來分析測試樣品中是否存在CGRP。簡言之，將條件培養基之測試及對照樣品與偶聯乙醯膽鹼酯酶之抗CGRP抗體("示蹤劑抗體")混合，並將混合物添加至預塗覆有非特異性結合已經阻斷之單株抗CGRP抗體(其所結合之CGRP之抗原決定部位與示蹤劑抗體不同)之板上。在板中對樣品進行培育並洗滌板並使用Ellman試劑按照熟習此項技術者所習知之常規方法對結合乙醯膽鹼酯酶之活性進行測定。試劑之吸光度與樣品中之CGRP的濃度成正比。

1.6.2　結果

按照下式計算由於L-4-噻唑基丙胺酸處理而引起之CGRP表現之百分比變化：

在L-4-噻唑基丙胺酸濃度為0.01%時，CGRP之表現增強69.93%(p<0.05)。該等結果顯示外敷施用包含L-4-噻唑基丙胺酸之組合物會使CGRP之表現增強，使皮膚修復及總體皮膚狀況得以改善。

包括專利申請案及公開案在內之本文所引用之所有參考文獻的全部內容出於所有目的皆以引用方式併入本文中，其併入程度就如同每一公開案或專利或專利申請案皆特別地且個別地指出其全部內容出於所有目的以引用方式併入本文中一般。彼等熟習此項技術者應瞭解，可在不背離本發明精神及範圍下對本發明實施多種修改及改變。本文所述之具體實施例僅以實例方式提供，且本發明僅受限於各項隨附申請專利範圍以及該等申請專利範圍所授權之等效物之全部範圍。

圖1舉例說明本發明之各種非產蛋白質之胺基酸。顯示於圖1中之該等胺基酸僅為舉例說明且並不意欲具有限制意義。

(無元件符號說明)

Claims

一種化妝品組合物，其在化妝品上可接受之媒劑中包含可有效增強皮膚中之LOXL-1之噻唑基丙胺酸。
如請求項1之化妝品組合物，其中該噻唑基丙胺酸係L-噻唑基丙胺酸。
如請求項2之化妝品組合物，其中該L-噻唑基丙胺酸係L-4-噻唑基丙胺酸。
如請求項3之化妝品組合物，其中該L-4-噻唑基丙胺酸係呈化妝品上可接受之鹽型式。
如請求項1至4中任一項之化妝品組合物，其中該有效量為該總組合物之約0.0001重量%至約20重量%。
如請求項5之化妝品組合物，其中該有效量為該總組合物之約0.001重量%至約10重量%。
如請求項6之化妝品組合物，其中該有效量為該總組合物之約0.001重量%至約1重量%。
如請求項1至4中任一項之化妝品組合物，其中該化妝品上可接受之媒劑包含油包水乳液。
如請求項1至4中任一項之化妝品組合物，其中該化妝品上可接受之媒劑包含水包油乳液。
如請求項1至4中任一項之化妝品組合物，其係與選自下列所組成之群之一或多種化妝品用活性物質併用：填充劑、乳化劑、抗氧化劑、表面活性劑、成膜劑、螯合劑、膠凝劑、增稠劑、潤膚劑、潤濕劑、保濕劑、維他命、礦物質、黏性及/或流變性改性劑、防曬劑、去角質劑、色素脫失劑、類視色素、激素化合物、α-羥基酸、α-酮基酸、抗分枝桿菌劑、抗真菌劑、抗微生物劑、抗病毒劑、鎮痛劑、脂質化合物、抗過敏劑、H1或H2抗組胺劑、抗炎劑、抗刺激劑、抗腫瘤劑、免疫系統加強劑、免疫系統抑制劑、祛痘劑、麻醉劑、防腐劑(antiseptics)、驅蟲劑、冷膚化合物、護膚劑、皮膚促滲劑、磨砂劑、潤滑劑、芳香劑、著色劑、色素脫失劑、色素淡化劑、防腐劑(preservative)、穩定劑、藥劑、光穩定劑、防曬劑及其混合物。
一種噻唑基丙胺酸之用途，其係用於製備處理與皮膚中之彈性蛋白纖維喪失有關之皮膚狀況的組合物，其中該組合物係用於外敷施用於皮膚上。
如請求項11之用途，其中該組合物可進一步具有一或多種選自由下列組成之群之額外活性：抑制鈣神經素、增強β1整合素之表現、增強纖維連接蛋白之表現、刺激B-內啡肽及增強CGRP之表現。
如請求項12之用途，其中該組合物能夠抑制鈣神經素。
如請求項12之用途，其中該組合物能夠增強β1整合素之表現。
如請求項12之用途，其中該組合物能夠增強纖維連接蛋白之表現。
如請求項12之用途，其中該組合物能夠刺激B-內啡肽。
如請求項12之用途，其中該組合物能夠增強CGRP之表現。
一種如請求項1至10中任一項之化妝品組合物之用途，其係用於製備提供皮膚益處之製品，其中該製品係施用於皮膚上，且其中該皮膚益處係選自由下列組成之群：(a)處理、減少及/或預防細紋或皺紋；(b)減小皮膚毛孔大小；(c)改善皮膚厚度、豐滿度及/或緊實度；(d)改善皮膚柔順度及/或柔軟度；(e)改善皮膚色調、光亮度及/或透明度；(f)改善前膠原及/或膠原產生；(g)改善彈性蛋白之保持及重塑；(h)改善皮膚紋理及/或促進恢復原有紋理；(i)改善皮膚屏障修復及/或機能；(j)改善皮膚輪廓之外觀；(1k)恢復皮膚光澤及/或亮度；(l)補充皮膚中之必需營養素及/或成份；(m)改善因絕經而減退之皮膚外觀；(n)改善皮膚濕潤性；或(o)增強皮膚彈性及/或回彈性。
一種如請求項1至10中任一項之化妝品組合物之用途，其係用於製備處理、改善及/或預防人類皮膚之細紋或皺紋或下垂的製品，其中該製品係外敷施用於皮膚上。
一種L-4-噻唑基丙胺酸之用途，其係用於製備處理細紋或皺紋之組合物，其中該組合物係外敷施用於細紋或皺紋上。