CN101903010B - 含有非成蛋白质性氨基酸的局部组合物以及治疗皮肤的方法 - Google Patents

Abstract

公开了含有非天然的、非成蛋白质性氨基酸的化妆品组合物和使用该组合物给皮肤提供抗衰老益处的方法。认为非天然的、非成蛋白质性氨基酸具有对抗一种或多种涉及皮肤老化生化途径的调控活性，并且这些氨基酸特别是LOXL-1的增强剂。

Description

含有非成蛋白质性氨基酸的局部组合物以及治疗皮肤的方法

发明领域

本发明总地涉及含有非成蛋白质性氨基酸的用于局部施用于皮肤的组合物，以及该组合物给皮肤提供益处的用途。

发明背景

弹性纤维是含有藉由富含微纤维蛋白的微纤维套膜包围的弹性蛋白核心的必需胞外基质大分子(Kiety等，J.Cell Sci.，2002年7月15日；115(Pt 14)：2817-28)。弹性纤维为诸如皮肤及肺等的组织提供弹性及回弹性。产生成熟及功能弹性纤维的过程极为复杂，因为其涉及多种组分且需要紧密调控的沉积及多步骤分级组装。弹性蛋白单体(弹性蛋白原)藉由一个或多个赖氨酰基氧化酶家族成员在胞外间隙中交联形成弹性蛋白聚合物，其是成熟蛋白的功能形式。认为含有微纤维蛋白的微纤维藉由在弹性蛋白原内作为排列交联结构域的支架而在组装过程中起重要作用。

赖氨酰氧化酶样-1(LOXL1)是赖氨酰基氧化酶家族的成员，其通过赖氨酸或羟基赖氨酸侧链的氧化脱胺作用来催化胶原蛋白和弹性蛋白的交联。所得到的ε-醛赖氨酸残基可以自发地与邻近肽醛或与肽酰基赖氨酸的ε-氨基缩合产生共价交联键(Lucero等，Cell Mol.LifeSci.，2006年10月；63(19-20)：2304-16)。LOXL1是与弹性蛋白纤维有关的胞外酶(Noblesse等，J.Invest.Dermatol.，2004年3月；122(3)：621-30.)。LOXL1在皮肤等效物的表皮及真皮中以及在人类皮肤中表达。LOXL1对于弹性纤维形成和弹性纤维体内平衡的保持极为重要。LOXL1敲除小鼠所具有的结缔组织表型的特征在于由弹性蛋白含量降低所导致的雌性动物中骨盆松弛和肺部空气间隙增大(Liu等，Nat.Genet.，2004年2月，36(2)：178-82)。超结构分析显示肺和皮肤中的弹性纤维发育不良、支离破碎和不连续。另外，缺少LOXL1的小鼠在产后子宫中不会沉积正常的弹性纤维并伴随弹性蛋白原积聚产生了皮肤松弛和血管异常。最近的研究显示，与儿童的成纤维细胞相比，成人皮肤成纤维细胞中的LOXL1mRNA水平下降(Genizo等，Exp.Dermatol.，2006年8月；15(8)：574-81)。

U.S.专利公开No.2005/0188427，将其公开内容在此引入作为参考，其公开了治疗患有与弹性纤维丧失有关病症(如皮肤松弛或起皱纹)的患者的方法，该方法包括向患者给予治疗有效量的LOXL1增强剂。认为LOXL1增强剂是LOXL1多肽或其活性片段，或编码LOXL1多肽或其活性片段的核酸。还认为LOXL1增强剂包括通过该专利公开中公开的筛选方法所识别的小分子或其他治疗性化合物。U.S.专利公开No.2005/0188427中未公开肽形式以外的氨基酸来增强LOXL1表达的用途。

氨基酸已经成为化妆品中日益重要的成分。例如，已经将多种天然氨基酸掺入化妆品中作为胶原蛋白和弹性蛋白合成的结构单元，用于保湿、增强皮肤屏障、降低皮脂腺活力及其他功能特性。然而，非天然、非成蛋白质性氨基酸的使用在化妆品工业中受到较少关注。迄今为止，非天然氨基酸的使用主要受限于赋予功能肽水解稳定性。按照定义，非成蛋白质性氨基酸不会在新蛋白质合成中结合至蛋白质中，且因此预测局部使用非成蛋白质性氨基酸不会在皮肤中导致新蛋白质的合成和皮肤回春益处。非天然、非成蛋白质性氨基酸的内在功能在很大程度上被忽略。迄今为止，认为并不了解非天然、非成蛋白质性氨基酸增强LOXL-1及调节与皮肤衰老有关的其他途径的能力。

因此，本发明的目的在于提供使用非天然、非成蛋白质性氨基酸来增强皮肤中LOXL-1产生的新型化妆品组合物和方法。本发明的再一个目的在于提供使用非天然、非成蛋白质性氨基酸来改善皮肤外观的化妆品组合物和方法，这些方法包括治疗、逆转和/或预防衰老现象(例如，皮肤皱纹)。

提供以上的讨论仅为更好地了解该技术领域所遇到问题的实质，且不应以任何方式理解为认可是现有技术且不应将本文对任何参考文献的引用理解为认可该参考文献构成本申请的“现有技术”。

发明概述

根据之前的目的和其他的，令人惊讶地发现特定的非成蛋白质性氨基酸是LOXL-1的强效刺激剂，并且由于LOXL-1能够重塑和保持皮肤中的弹性蛋白纤维，因此期望能提供多种皮肤益处。如本文更全面地描述，除了LOXL-1刺激外，预期非成蛋白质性氨基酸能在涉及皮肤衰老的一种或多种额外生物途径中起有益作用，尽管这些额外益处并不严格需要。

在本发明的一个方面中，提供用于治疗与弹性蛋白纤维丧失有关的皮肤状况的化妆品组合物，其在化妆上可接受的载体中含有有效量的增强LOXL-1的非成蛋白质性氨基酸或其衍生物。在优选的实施方案中，非成蛋白质性氨基酸将含有具有杂环基团(优选杂芳基)的侧链。根据本发明目前优选的非成蛋白质性氨基酸是L-4-噻唑基丙氨酸，其具有如下的结构：

在另一个方面中，提供了化妆品组合物，其在化妆品上可接受的载体中含有能有效增强皮肤中的LOXL-1的噻唑基丙氨酸或其衍生物。噻唑基丙氨酸通常为L-噻唑基丙氨酸或其衍生物，优选L-4-噻唑基丙氨酸或其衍生物。

还提供了治疗与皮肤中弹性蛋白纤维丧失有关的皮肤状况的方法，其包括将能有效增强LOXL-1的非成蛋白质性氨基酸或其衍生物局部施用于有需要的皮肤上。该非成蛋白质性氨基酸可进一步能够具有一种或多种选自以下的附加活性：抑制钙神经素、增强β1整合素的表达、增强纤维连接蛋白的表达、刺激B-内啡肽和增强CGRP的表达。

在本发明的另一个方面中，提供了治疗、改善和/或预防人类皮肤的细纹或皱纹或下垂的方法，其包括将含有能增强LOXL-1的非成蛋白质性氨基酸的组合物局部施用于有需要的皮肤上。在特定的实施方案中，非成蛋白质性氨基酸是噻唑基丙氨酸或其衍生物，更通常为L-噻唑基丙氨酸或其衍生物，并且优选L-4-噻唑基丙氨酸或其衍生物。因此，根据本发明该方面的治疗细纹或皱纹的优选方法包括将含有L-4-噻唑基丙氨酸的组合物局部施用于细纹或皱纹上。

通过参考以下的详述和附图将更好地理解本发明的这些和其他方法。

附图简述

图1说明了根据本发明的各种非成蛋白质性氨基酸。图1中的氨基酸仅是示例性的，而非旨在构成限定。

详述

除非另外提供，否则本发明中所用的所有术语皆意欲具有其通常的意思。

术语“氨基酸”通常指的是在同一分子中含有氨基和羧基的有机分子。术语“α-氨基酸”指其中氨基和羧基与同一碳分子连接的氨基酸。术语“β-氨基酸”指其中氨基和羧基与相邻碳原子连接的氨基酸。

“天然氨基酸”指的是通过自然界中的生物体合成的任何氨基酸，其包括但不限于，标准氨基酸L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-甲硫氨酸、甘氨酸、L-丝氨酸、L-酪氨酸、L-苏氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸和其他非标准氨基酸(如L-鸟氨酸)及衍生物(如L-4-羟基脯氨酸)。

“非天然氨基酸”广义地指除了“天然氨基酸”以外的任何氨基酸，且包括但不限于，具有未在天然氨基酸中发现的侧链的α-氨基酸，以及β-氨基酸。“非天然氨基酸”也指虽然立体化学构型不同但具有与天然氨基酸相同结构的氨基酸。

“非成蛋白质性”氨基酸广义地指不能通过活生物体结合至肽或蛋白质中的任何氨基酸，并且包括非天然氨基酸。

本发明提供了用于局部施用的组合物，其含有有效量的一种或多种非成蛋白质性氨基酸，用于治疗、逆转、改善和/或预防皮肤衰老迹象。这些皮肤衰老迹象包括但不限于以下的：

(a)治疗、减少和/或预防细纹或皱纹；

(b)缩小皮肤毛孔大小；

(c)改善皮肤厚度、丰满度和/或紧实度；

(d)改善皮肤柔顺度和/或柔软度；

(e)改善肤色、光亮度和/或透明度；

(f)改善前胶原和/或胶原产生；

(g)改善弹性蛋白的保持和重塑；

(h)改善皮肤纹理和/或促进恢复原有纹理；

(i)改善皮肤屏障修复和/或机能；

(j)改善皮肤轮廓的外观；

(k)恢复皮肤光泽和/或亮度；

(l)补充皮肤中必需的营养素和/或成分；

(m)改善因衰老和/或绝经而减退的皮肤外观；

(n)改善皮肤润湿性；和/或

(o)增强皮肤弹性和/或回弹性。

在实践中，将本发明的组合物施用于需要治疗的皮肤上。即，患有任何上述属性的缺陷或丧失的皮肤，或否则将受益于任何上述皮肤属性改善的皮肤。

在特定的优选实施方案中，本发明的组合物和方法针对预防、治疗和/或改善皮肤中的细纹和/或皱纹。在这种情况下，将组合物施用于需要治疗的皮肤上，其意思是具有皱纹和/或细纹的皮肤。优选，将组合物直接施用于细纹和/或皱纹上。这些组合物和方法适于治疗任何皮肤表面上的细纹和/或皱纹，包括但不限于，脸部、颈部和/或手部的皮肤。

通常，这些组合物和方法可用于治疗与弹性纤维丧失有关的任何皮肤状况。认为这些益处至少部分是由化合物能够刺激LOXL-1产生的能力而引起的。换言之，本发明的非成蛋白质性氨基酸是LOXL-1增强剂。

本发明的氨基酸呈“游离”或单体形式，其意思为不与其他氨基酸共价结合，但或者可以官能化成本文中所述的前药等。

在本发明的实践中有用的氨基酸可以是能够减少、治疗或预防一种或多种衰老迹象的任何非成蛋白质性氨基酸。通常，本发明的非成蛋白质性氨基酸能够刺激LOXL-1。在一个实施方案中，非成蛋白质性氨基酸具有通式I的结构：

其中n是0(零)至4的整数，通常为0至2，并且优选为0或1，使得在n为0的情况中，氨基酸是α-氨基酸，而在n为1的情况中，氨基酸是β-氨基酸。

R是含有任何有机取代基的侧链，前提条件为在n为0(即，α-氨基酸)的情况中，侧链不是通式I的氨基酸呈L(左旋)构型的情况中存在于成蛋白质性天然存在的氨基酸中的侧链。

R通常为含有1-20个碳原子并任选包括一个或多个杂原子(如，氧、硫和原子)的烃基。优选，R是选自取代或未取代的支链、直链或环状C₁-C₂₀烷基、烯基、炔基、芳基、苄基、杂芳基、烷基-芳基、芳基-烷基、烷基-杂芳基、杂芳基-烷基、杂芳基-芳基、二环烷基、芳基或杂芳基基团及其组合；其中上述基团可以由包括以下的任何部分取代：例如，羟基、氨基、氰基、卤素、氧、羧基、甲酰胺基、硝基、偶氮基、烷氧基、烷基、烷基亚胺基、烷基氨基、二烷基氨基、硫代烷氧基及其组合。

在优选的实施方案中，R将包括杂环。杂环可以是单环或二环，并且可以是芳香族的，部分饱和或完全饱和。优选的杂环将包括氮原子。代表性的杂环包括但不限于氮杂环丁基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、咪唑啉基、异喹啉基、异噁唑基、异噁唑烷基、异噻唑基、异噻唑啶基、吲哚基、噁唑基、噁唑啶基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯啶基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑啶基、吡啶基、哌啶基、吡嗪基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、N-甲基氮杂环丁基、嘧啶基、哒嗪基、吗啉基、喹啉基、噻唑基、噻唑啶基、噻吩基、三唑基等。

虚线意欲表示R可以是与氮原子形成环的二价基团，例如，如在脯氨酸和羟基脯氨酸类似物的情况中，尽管这些结构是不太优选的。

在一个实施方案中，氨基酸是根据通式Ia的包括杂环基团的α-氨基酸和β-氨基酸：

其中n是0(α-氨基酸)或1(β-氨基酸)；

Z可以表示键(即，Z被省略)或Z可以表示在α-碳连接的连接体部分，其随后通过取代基Y与杂环Q连接；其中Z通常包括1至10个碳原子，任选包括一个或多个杂原子取代基，如氧、硫和氮。通常，Z将选自氧、硫、NR^N、C_1-10烷基、烯基、炔基、芳基、羰基、羧基、氨甲酰基，其中R^N是氢、C_1-10烷基、烯基、炔基、芳基等。

Z优选是键或选自取代或未取代的支链或直链C_1-6烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基，或烷基-芳基基团的部分，包括但不限于-(CH₂)_a-形式的直链烷基部分，其中“a”是1至6的整数，包括，例如，-CH₂-(亚甲基)、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-；通式-(CH₂)_aO-或-O(CH₂)_a-)的直链烷氧基部分，其中“a”是1至6的整数，包括，例如，-CH₂O-或-OCH₂-、-CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂O-或-OCH₂CH₂CH₂-；-O(CH₂)_aO-，其中“a”如上文所定义；或形式-(CH₂)_bO(CH₂)_c-、-(CH₂)_bS(CH₂)_c-或-(CH₂)_bNR^N(CH₂)_c-的部分，其中“b”和“c”独立地为O(零)至6的整数，并且R^N如上文所定义。优选，Z表示Y与α-碳之间的单键，或Z是基团-CH₂-或-CH₂CH₂-、-CH₂O-、-CH₂S-、-CH₂NR^N-或-(C＝O)-。在一个示例性的实施方案中，Z是(-CH₂-)_1-3，并更优选为-CH₂-；

Y是环Q与连接体或键Z的连接点并且通常为碳或杂原子，更通常选自C、CN、N或NR^N，其中R^N如上文所定义；和

Q是3-14元杂环基团，其包括Y并且可以是单环、二环或三环，包括稠合环系统，并且其在环系统中包括一个或多个通常选自氧、氮和硫的杂原子，并任选由一个或多个在任何合适的连接点上(例如，在任何碳或氮原子上)连接环系统的基团R₁所取代，

其中R₁在每次出现时独立地选自氢；卤素(F、Cl、Br、I)；-OH；-NR^NR^N；-SH；-CN；氧；-CHO；-CO₂H；-O-(C＝O)-H；-O-(C＝O)-C_1-10烷基；-O-(C＝O)-Ar；-(C＝O)-O-C_1-10烷基；-(C＝O)-O-Ar；-(C＝O)-NR^NR^N；-O-C_1-10烷基；-O-Ar；-S-C_1-10烷基；-S-芳基；-Ar；-C_1-10烷基；-NR^N-CHO；-NR^N-(C＝O)-C_1-10烷基；-C_1-10烷基-O-C_1-10烷基；全氟烷基；环氧基；叠氮基；硫氰酸酯基；-SO₂-R^N；硝基等；其中Ar表示任选取代的芳基，R^N如上文所定义，并且在取代基包括两个R^N基团的情况中，它们可一起形成环；前提条件是在n＝0时的α氨基酸的情况中，通式Ia化合物不是L-组氨酸或L-色氨酸。

在一些实施方案中，在Y也是杂原子的情况中，除了Y以外，Q还包括至少一个其它杂原子，其选自N、O、S、B、Si、As、P等，更通常选自N、O和S。

三元杂环的非限制性实例包括但不限于氮丙啶、环氧乙烷、硫杂环丙烷、二氮丙啶和氧氮丙啶。四元杂环的非限制性实例包括但不限于氮杂环丁烷、环氧丙烷、硫杂环丁烷、二氮杂环丁烷、氧氮杂环丁烷和1，2-氧硫杂环丁烷。

五元杂环表示本发明目前对于取代基Q的优选实施方案。五元杂环的非限制性实例包括但不限于吡咯啶、四氢呋喃、四氢噻吩、噁唑啶、噻唑啶、1，3-dioiane、1，3-氧硫杂环戊烷、1，3-二硫杂环戊烷、咪唑啶、吡唑啶、吡咯、呋喃、噻吩、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、1，3，4-噁二唑、1，2，4-噁二唑、1，3，4-噻二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-三唑、1，2，3-三唑等。Q可以选自，例如，以下的五元杂环，其是芳香族的、完全饱和的，或包含一个或两个双键：

在包括环取代基O和/或S的每个上述五元环中，应当理解与环的连接点不是硫或氧原子，意思是指Y是C、CH或N，而非O或S。这些五元环可以任选由如上文所定义的一个或多个R₁基团官能化，特别可以提及卤素、羟基、氧、硫醇基、C_1-4烷基(例如，甲基、乙基、异丙基等)、氨基和二烷基氨基。此外，任何氮原子任选氧化成N-氧化物，并且任何硫原子可以任选氧化成亚砜。

对于Q合适选择地的六元环的非限制性实例包括但不限于2H-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1，4-二噁烷、玛琳、哌嗪、1，4-二噻烷、硫吗啉、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶、1，2，3-三嗪、1，2，4-三嗪、1，3，5-三嗪、1，2，3，4-四嗪和五嗪，这些仅仅是一些实例。Q可以选自，例如，以下的六元杂环，其是芳香族的、完全饱和的，或包含一个、两个或三个双键：

在包括环取代基O和/或S的每个上述六元环中，应当理解与环的连接点不是硫或氧原子，意思是指Y是C、CH或N，而非O或S。这些六元环可以任选由如上文所定义的一个或多个R₁基团官能化，特别可以提及卤素、羟基、氧、硫醇基、C_1-4烷基(例如，甲基、乙基、异丙基等)、氨基和二烷基氨基。此外，任何氮原子任选氧化成N-氧化物，并且任何硫原子可以任选氧化成亚砜。

七元杂环包括但不限于1H-氮杂，氧杂(oxepin)、硫杂(thiepin)、1，4-二氮杂、1，3-二氧杂、1，3-二硫杂、1H-1，3，5-三氮杂、1，2-氧氮杂、1，3-硫氮杂、1，3，6-硫二氮杂、四氮杂、1，2，4，7-硫三氮杂等。八元杂环包括但不限于，氮杂环辛间四烯、2H-氧杂环辛三烯、2H-硫杂环辛三烯、1，2-二氮杂环辛间四烯、2H-1，4-氧氮杂环辛间四烯、1，3，4-三氮杂环辛间四烯等。

Q还可以表示稠合杂环系统，例如，吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、吲嗪、异吲哚、二氢吲哚、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、1H-吲唑、喹啉、异喹啉、异嗪鎓、喹唑啉、噌啉、喹喔啉、酞嗪、1，5-萘啶、喋啶、9H-嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤和萘啶，这些仅仅是一些实例。适于取代基Q的稠合杂环系统的非限制性实例包括但不限于：

(i)以下的八元稠合杂环：

(ii)以下的九元稠合杂环：

和(iii)以下的十元稠合杂环：

所有这些只是各种落入本发明范围内的各种杂环的说明。

在包括环取代基O和/或S的每个上述杂环中，应当理解与环的连接点不是硫或氧原子，意思是指Y是C、CH或N，而非O或S。在稠合环系统中，连接点可以在任何环上，在任何合适的位置。这些环可以任选由如上文所定义的一个或多个R₁基团官能化，特别可以提及卤素、羟基、氧、硫醇基、C_1-4烷基(例如，甲基、乙基、异丙基等)、氨基和二烷基氨基。此外，任何氮原子任选氧化成N-氧化物，并且任何硫原子可以任选氧化成亚砜。

在优选实施方案中，Q是在环系统中包含至少一个非Y杂原子的5或6元环，该杂原子选自氧、硫或氮。在另一个优选实施方案中，Q包括芳环。在多个实施方案中，Q是选自以下的六元环：吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、2H-吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、噻嗪基；1，2-二噻烷基、1，3-二噻烷基和1，4-二噻烷基；1，2-二噁烷基、1，3-二噁烷基和1，4-二噁烷基；1，3，5-三嗪基；或上文所提供的任何六元杂环，在六元杂环上任选包括基团R₁取代。更优选，基团Q包括以下所讨论的五元环、

在一个实施方案中，本发明的非成蛋白质性氨基酸包括根据通式Ib的5-元杂环基团，优选杂芳基基团：

其中环Q进一步由取代基Y、T、U、V和W来限定；

n如上文所定义，并且优选是0(零)或1，使得各自限定α-氨基酸或β-氨基酸。

Z如上文所定义，并且优选表示单键或基团(CH₂)_k单元，其中k是1至3的整数，优选1至2，更优选k是1；优选Z是亚甲基-CH₂-；

Y是C、CH或N；和

T、U、V和W独立地选自CH、CR₁、N、NR^N、O和S，其中R₁和R^N如上文所定义；并且其中环内的虚线圈表示环任选是芳香族的或可以包括零、一个或两个双键；并且在其中T、U、V和/或W表示N(氮原子)的情况中，氮原子可以任选氧化成N-氧化物，并且在其中T、U、V和/或W表示S(硫原子)的情况中，硫原子可以任选氧化成亚砜；并且其中R₁优选C_1-4烷基(例如，甲基、乙基等)、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫醇基、羟基、氧或卤素。

在一个实施方案中，Y是C(碳原子)或N，并且T、U、V和W中的至少一个是N(氮原子)。在一个优选的实施方案中，一对相邻或非相邻的选自T、U、V和W的取代基表示CH或CR₁，而另一对独立地表示O(氧原子)、N(氮原子)、NR^N或S(硫原子)；其中R₁和R^N如上文所定义。

在一些实施方案中，取代基Y、T、U、V和W将总地包括选自以下的五元环：噻吩基(2-噻吩基或3-噻吩基)；呋喃基(2-呋喃基或3-呋喃基)；2-或3-氧杂环戊基；2-或3-四氢苯硫基；1，2-dithiolanyl；1，3-dithiolanyl；2H-吡咯基(2H-吡咯-3-基，2H-吡咯-4-基或2H-吡咯-5-基)；吡咯基(1-吡咯基、2-吡咯基或3-吡咯基)；咪唑基(2-咪唑基、4-咪唑基或5-咪唑基)；吡唑基(1-吡唑基、3-吡唑基、4-吡唑基或5-吡唑基)；异噻唑基(3-异噻唑基、4-异噻唑基或5-异噻唑基)；异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基或5-噁唑基)；3-呋呫基；吡咯啶基(1-吡咯啶基、2-吡咯啶基或3-吡咯啶基)；吡咯啉基(1-吡咯啉-2-基、2-吡咯啉-2-基、2-吡咯啉-3-基、2-吡咯啉-4-基、2-吡咯啉-5-基)；咪唑啶基(1-咪唑啶基、2-咪唑啶基或4-咪唑啶基)；咪唑啉基(2-咪唑啉-2-基、2-咪唑啉-4-基或2-咪唑啉-5-基)；吡唑啶基(2-吡唑啶基、3-吡唑啶基或4-吡唑啶基)；吡唑啉基(3-吡唑啉-1-基、3-吡唑啉-2-基、3-吡唑啉-3-基、3-吡唑啉-4-基、3-吡唑啉-5-基)；噻唑基(噻唑-2-基、噻唑-4-基或噻唑-5-基)；噁唑基(噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基)；1，2，3-三唑基(1，2，3-三唑-1-基、1，2，3-三唑-4-基或1，2，3-三唑-5-基)；1，2，4-三唑基(1，2，4-三唑-1-基、1，2，4-三唑-3-基或1，2，4-三唑-5-基)；异噻唑基(异噻唑基-3-基，或异噻唑基-5-基)；1H-四唑基(1H-四唑-1-基或1H-四唑-5-基)；和亚胺唑基或1，3-二唑基(1，3-二唑-1-基、1，3-二唑-2-基、1，3-二唑-4-基、1，3-二唑-5-基)，这些仅仅为一些实例；其中括号中所示的物质是这些基团的各种可能连接性的代表，并且就连接点而言，并不意味着是限制性的。应当了解，上述的每一种都代表了本发明的单个实施方案。

在一些实施方案中，根据本发明的氨基酸具有通式Ic的结构：

其中Ω是杂环，优选五元杂环，并且优选选自以下任选的芳环：

其中ε₁、ε₂和ε₃独立地选自N、NH、NR^N、S和O；前体条件为其中连接点是ε₁、ε₂或ε₃，该位置表示N；并且优选不是连接点的ε₁、ε₂和ε₃中的至少一个表示N；并且其中不是连接点的碳原子可以任选由如上文所定义的基团R₁来取代，其中R^N和R₁如上文所定义，R₁优选是C_1-4烷基(甲基、乙基、丙基、异丙基等)、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫醇基、羟基、C_1-4烷氧基(甲氧基、乙氧基等)、硫代烷基、羟烷基(例如，羟甲基、羟乙基等)、全氟甲基或卤素(氟、氯、溴、碘)。虚线圈意欲表示每一个环任选是芳环，但另外可以包含零个、一个或两个双键。

在根据通式Ic的优选实施方案中，Ω选自：

其中X是氧原子、NR^N或硫原子；和

R₂和R₃独立地选择并可以是上文对R₁所定义的任何基团，并且优选表示氢、羟基、卤素(F、Cl、Br、I)、NR^NR^N、硫醇基或C_1-4烷基(优选甲基)；其中R^N如上文所定义，并且在每次出现时优选为氢；并且其中氨基酸可以包含R或S对映异构体。在优选的实施方案中，X是硫，而R₂和R₃各自是氢。

更优选，氨基酸是α-氨基酸(n＝0)；Ω是上述基团(i)；其中X是硫，而R₂和R₃各自表示氢，由此限定了具有以下结构的4-噻唑基丙氨酸(噻唑-4-基丙氨酸)：

在一个实施方案中，4-噻唑基丙氨酸将是4-D-噻唑基丙氨酸或4-L-噻唑基丙氨酸(CAS No.119433-80-6)，并优选4-L-噻唑基丙氨酸。4-L-噻唑基丙氨酸的结构如下所示。

4-L-噻唑基丙氨酸

4-L-噻唑基丙氨酸可从PepTech(Burlington，MA)和Synthetech(Albany，OR)购得。4-L-噻唑基丙氨酸的合成在Dickman等的U.S.专利No.5,275,950中有描述，在此将其公开内容引入作为参考。

预期适于本发明实践的氨基酸的其他非限制性实例包括通式IIa或IIb的脯氨酸类似物(L或D)：

其中R如上文所定义，并且其中氨基酸在α-碳可以具有R或S构型。

根据本发明的非天然氨基酸还包括在α-碳上具有反转手性的天然存在的氨基酸的变体，包括D-丙氨酸、D-缬氨酸、D-亮氨酸、D-异亮氨酸、D-脯氨酸、D-色氨酸、D-苯丙氨酸、D-甲硫氨酸、D-丝氨酸、D-酪氨酸、D-苏氨酸、D-半胱氨酸、D-天冬酰胺、D-谷氨酰胺、D-天冬氨酸、D-谷氨酸、D-赖氨酸、D-精氨酸和D-组氨酸；或，在异亮氨酸和苏氨酸的情况中，令人关注的非天然氨基酸是[R，R]、[S，S]、[S，R]和[R，S]非对映异构体。非天然氨基酸也可以是基于D.Seebach等，Helv.Chim.Acta 1998，81，932，D.Seebach等，Helv.Chim.Acta1996，79，913中所述的天然氨基酸的β类似物，在此将其公开内容引入作为参考。

如本领域技术人员显而易见的，本发明的氨基酸可以以两性离子的形式存在。此外，本发明包括使用这些氨基酸在化妆品或药物学上可接受(例如，无毒性和/或无刺激性)的盐。这些盐可以是无机或有机酸或碱加成盐。合适的酸式盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、环戊丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷硫酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷硫酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。尤其可提及盐酸盐。碱加成盐包括与诸如锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾等的金属阳离子形成的那些，或与从氨、N，N-二苄基乙二胺、D-葡萄糖胺、四乙铵或乙二胺等形成的阳离子形成的那些。包括氨基官能团的含氮基团和含氮侧链(例如，杂环)可以使用一些低级烷基卤化物来四级化，这些低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基溴化物，这些仅仅为一些实例。

本发明还包括这些氨基酸的前药形式用于改善真皮穿透等的用途。如在此所用的，前药是指在体内转化成本发明的氨基酸的化合物。前药可以衍生自氨基、羧基或两者。用于修饰这些官能团的合适前药衍生物是本领域技术人员公知的并且描述于，例如，Textbook of DrugDesign and Discovery(药物设计与发现的教科书)，第三版(2002)，第14章，第411-458页，在此将其引入作为参考。

本发明还考虑了可以将根据本发明的非成蛋白质性氨基酸官能化成N-酰基衍生物(包括C_1-16酰基衍生物)或酯衍生物(包括但不限于C_1-10烷基酯衍生物)，不加限制，不管所得化合物是否在体内水解成游离氨基酸。在一个实施方案中，为非成蛋白质性氨基酸提供C_1-16 N-酰基衍生物以增强其亲脂性。

盐、前药、N-酰基衍生物和酯在此总称为游离氨基酸的“衍生物”。

根据本发明的化妆品组合物可以以多种形式配制以用于局部施用，并且包含约0.0001％至约90％重量的一种或多种上述非成蛋白质性氨基酸，并且优选包含约0.0001％至约20％重量，更优选约0.001％至约10％重量，最优选约0.001％至约1％。

可将组合物配制成油包水或水包油乳液、洗剂、乳霜、浆液、喷雾、棒状物或适于局部施用的其他形式。

该组合物可以任选包含本领域技术人员公知的其他化妆品用的活性物质和赋形剂，包括但不限于，填充剂、乳化剂、抗氧化剂、表面活性剂、成膜剂、螯合剂、胶凝剂、增稠剂、润肤剂、润湿剂、保湿剂、维生素、矿物质、粘度和/或流变性改良剂、防晒剂、角质软化剂、脱色剂、类维生素A、激素化合物、α-羟酸、α-酮酸、抗分枝杆菌剂、抗真菌剂、抗微生物剂、抗病毒剂、镇痛剂、脂质化合物、抗过敏剂、H1或H2抗组胺剂、抗炎剂、抗刺激剂、抗肿瘤剂、免疫系统加强剂、免疫系统抑制剂、抗痤疮剂、麻醉剂、防腐剂、驱虫剂、冷肤化合物、护肤剂、皮肤渗透增强剂、磨砂剂(exfollient)、润滑剂、芳香剂、着色剂、脱色剂、色素淡化剂、防腐剂、稳定剂、药剂、光稳定剂、防晒剂及其混合物。除了上述物质之外，本发明的化妆品组合物还可以含有用于治疗皮肤病征的任何其他化合物。

本发明还提供治疗衰老皮肤的方法，其通过将包含本发明组合物的组合物局部施用于受影响部分上保持足以减少、改善衰老的皮肤学迹象的时间段来实施。通常将该组合物每24小时1至3次施用于皮肤上，持续获得所需抗衰老效果需要的时间段。治疗方案可以包含每日施用，持续至少一周、至少两周、至少四周、至少八周或至少十二周。

该方法包括治疗与年龄皮肤衰老和内在皮肤衰老有关的皮肤变化。该方法对于治疗UV损伤的皮肤特别有用。

本发明的组合物和方法通常并不意欲用于治疗牛皮癣，并且因此，在一个实施方案中，本发明涉及将在此所述的一种或多种氨基酸(如，4-L-噻唑基丙氨酸)局部施用于未受牛皮癣侵袭影响的皮肤上。然而，倘若皮肤还受皮肤衰老迹象(例如，皱纹、下垂等)的影响，则将这些氨基酸组合物局部施用于受牛皮癣影响的皮肤上以治疗相同的皮肤区域也在本发明的范围之内。

实施例

1.1实施例1：通过L-4-噻唑基丙氨酸刺激LOXL1的活性。

已经发现酶，赖氨酰氧化酶样-1(“LOXL1”)为弹性蛋白聚合物更新的重要调控剂，该弹性蛋白聚合物是使结缔组织(包括皮肤)具有弹性特性的胞外基质组分。认为青春期后不再产生弹性蛋白，青春期后弹性蛋白纤维的保持是抗弹性蛋白酶-弹性蛋白酶活性竞争的结果。随着年龄增长，注意到竞争活性不平衡，导致含有弹性蛋白的组织丧失弹性。就皮肤而言，该弹性丧失最常见地是作为皱纹被观察到。

尽管并不了解更新/降解(即，抗弹性蛋白酶/弹性蛋白酶活性)的准确机制，但已经确定LOXL1为“抗弹性蛋白酶”因子，其通过弹性蛋白原单体聚合而介导弹性蛋白纤维的更新(参见，例如，Kaganet等，2003，J.Cell.Biochem.，88：660-672；和Li等，2004，Nat.Genet.36：178-182，在此将每篇的全部内容引入作为参考)。因此，预期能够增强LOXL1转录和/或翻译或LOXL1活性的物质可以增强“抗弹性蛋白酶”活性，促进弹性蛋白纤维更新并形成实现含弹性蛋白的组织的弹性改善。使用荧光素酶报告基因系统对L-4-噻唑基丙氨酸诱导LOXL1表达的能力进行分析。已经发现向包含LOXL1调控元件的培养物中添加L-4-噻唑基丙氨酸可诱导明显超过对照的报告基因表达。

1.1.1材料和方法

载体构建、转染和表达：

通过本领域技术人员已知的标准方法和根据制造商的说明将LOXL1基因的启动子区域分离并克隆至pGL 3荧光素酶报告基因质粒(Promega)中。使用LipofectAMINE^TMLTX试剂(Invitrogen)按照制造商的指示将LOXL1/pGL3载体和不含有调控元件的对照载体pRL-NULL(Promega)共转染至人类纤维肉瘤系HT1080中。

使经转染细胞恢复24h。随后用含有多种浓度的L-4-噻唑基丙氨酸的新鲜培养基代替该培养基，并将经转染细胞再培养24h。

随后用PBS洗涤培养物并将其暴露于100μl细胞裂解缓冲液/25cm²培养区域中并在室温下轻轻振荡30min。随后立即将含有细胞裂解物的培养烧瓶置于-80℃。

报告基因活性的测定：

按照制造商的说明(双荧光素酶(Dual-限告基因分析系统，Promega)测定报告基因萤火虫荧光素酶的活性。简而言之，相对于编码来自海肾(Renilla reniformis)的第二荧光素酶基因的对照载体的活性来测定该报告基因的活性。比较来自测试和对照培养物的基因的相对活性以测定调控序列活性的百分比改变。

1.1.2结果

因为pGL3载体缺少调控荧光素酶基因所必需的启动子片段，因此该基因的表达是通过克隆的调控元件来控制的，在该情形中为LOXL1基因的调控元件。在重复三次的测试中，已经发现添加1μg/ml L-4-噻嗪基丙氨酸可以使得报告基因的表达增强57％(p＜0.05)。因此显示L-4-噻吩基丙氨酸是LOXL1表达的阳性调控剂，表明对弹性蛋白更新具有次级效应。

1.2实施例2：L-4-噻唑基丙氨酸抑制炎性途径

常见的皮肤衰老症状是出现湿疹样损伤，表现为局部发红和干燥、呈鳞状的皮肤。尽管并不了解病因学，但已知这些区域与慢性炎症有关。过去，通常用局部肾上腺皮质类固醇来治疗这些损伤；然而，已经发现长期使用类固醇会伴随本领域技术人员公知的许多副作用(例如，皮肤萎缩、条纹、脱色和毛细管扩张)。在2000年，FDA批准了两种用于局部治疗湿疹的新药：(他克莫司)和(吡美莫司)，随后显示了这两种药物可有效治疗多种炎症性皮肤病。

他克莫司和吡美莫司是丝氨酸/苏氨酸蛋白酶钙神经素(也称为蛋白磷酸酶2B(“PP2B”))的抑制剂。抑制钙神经素可阻断NFAT(激活性T-细胞的细胞核因子)去磷酸化以预防炎性细胞因子的产生(参见，例如，Bekersky等，2001，J.Am.Acad.Dermatol.441：S17-S27，在此将其全部内容引入作为参考)。当局部使用时，钙神经素抑制剂可以正向控制局部皮肤刺激。

利用离体磷酸酶分析来评价L-4-噻唑基丙氨酸调节钙神经素活性的能力。已经发现L-4-噻唑基丙氨酸以剂量依赖性模式调控钙神经素活性。

1.2.1材料和方法

离体磷酸酶分析：使用本领域技术人员熟知的DiFMUP(6，8-二氟-7-羟基-4-甲基香豆素磷酸酯)磷酸酶分析来检测钙神经素活性的调节(参见，例如，Wegner等，2007，Methods Mol.Biol.365：61-69，在此将其全部内容引入作为参考)。DiFMUP的去磷酸化导致形成具有高荧光性且稳定的产物：Di4MU。

将多种浓度的L-4-噻唑基丙氨酸添加至由50mM Tris-HCl(pH7.4)、0.0125％BSA、0.1mM CaCl、400U/ml钙调蛋白和1mM NiCl组成的反应缓冲液中。将L-4-噻唑基丙氨酸/反应缓冲液混合物在37℃下培养30min。随后添加DiFMU底物至10μM浓度，并将混合物返回至37℃，再培养15min。在荧光分光光度计上测定荧光强度。

1.2.2结果

已经发现在所测试的最低浓度下的L-4-噻唑基丙氨酸略微地增强了钙神经素活性，在0.0001％重量/体积浓度下使活性增强6％。然而，增大L-4-噻唑基丙氨酸的浓度可能导致钙神经素活性的剂量依赖性抑制，在0.001％和0.01％浓度下分别使活性降低11％和63％。估计化合物的IC-50值为0.064％。这些结果表明局部施用包含L-4-噻唑基丙氨酸的组合物可以改善与炎症性皮肤状况有关的症状。

1.3实施例3：L-4-噻唑基丙氨酸调节β1整合素表达

β1整合素是跨膜整合素异二聚体复合物的一种组分，该复合物介导细胞与胞外基质蛋白及与其他细胞的结合。整合素能够与多种胞外基质组分(包括胶原、层粘连蛋白和纤维连接蛋白)结合，并能维持皮肤结构完整性。已经显示β1整合素表达降低会降低皮肤弹性，例如，在衰老和/或受日光侵害的皮肤中。

使用全细胞ELISA分析来评价L-4-噻唑基丙氨酸暴露对β1整合素表达的影响。已经发现L-4-噻唑基丙氨酸暴露会使人成纤维细胞中的β1整合素的表达增强。

1.3.1材料和方法

细胞培养：

将人真皮成纤维细胞(Cascade Biologics)在生长培养基(DMEM，5％FBS，1％L-Glut和1％抗生素)中于60mm培养皿中以3.5×10⁵细胞/ml培养过夜。将细胞用稀释于生长培养基中的测试活性物质或载体对照进行处理并在37℃下培育24小时。

全细胞ELISA：用L-4-噻唑基丙氨酸处理后使用来自ChemiconInternational的B1整合素试剂盒对B1整合素在细胞表面上的表达进行分析。吸出培养基并将板在37℃下与细胞离解缓冲液(与试剂盒一起提供)培育20-25分钟，将细胞离心并重悬浮于无补充物的DMEM中。将100μl细胞悬浮液加入预涂覆有非特异性结合已经阻断的鼠抗人β1抗体(Chemicon International)的微量滴定板上，并将平板在37℃下培养2h。根据制造商的说明通过细胞染色体试剂盒(Chemicon International)将粘附细胞定量。简而言之，在PBS中洗涤平板并通过在室温下在试剂盒染色溶液中培养5min对粘附细胞进行染色。将经过染色的细胞在PBS中进行洗涤并进行空气干燥10min。随后向每一个孔中加入提取缓冲液并在分光光度计上于570nm下对板进行读数。

1.3.2结果

按照以下的等式计算β1整合素表达的百分比变化：

在L-4-噻唑基丙氨酸浓度为0.01％(w/v)时量，测到B1整合素的表达增强225％。该结果表明局部施用包含L-4-噻唑基丙氨酸的组合物会使β1整合素的表达增强，使皮肤的完整性和/或弹性增强。

1.4实施例4：L-4-噻唑基丙氨酸调节纤维连接蛋白的表达

纤维连接蛋白是有助于形成调控结缔组织(包括皮肤)的结构和行为的胞外基质的分泌蛋白。纤维连接蛋白介导细胞与其他细胞(通过整合素，参见实施例3)以及与胞外基质组分(例如，胶原，纤维蛋白和肝素)两者的结合。因此，纤维连接蛋白对于保持皮肤的完整性甚为重要，且在伤口愈合过程中尤其重要。已知UV暴露会降解皮肤中的纤维连接蛋白，导致在日光暴露和/或受UV侵害的皮肤区域中该蛋白的表达降低。另外，已经发现在衰老皮肤的乳突状真皮中的纤维连接蛋白的表达降低。

利用竞争性抑制ELISA分析来评价L-4-噻唑基丙氨酸对来自正常成人成纤维细胞的纤维连接蛋白表达的影响。发现L-4-噻唑基丙氨酸以剂量依赖性方式提高来自成纤维细胞的纤维连接蛋白的表达。

1.4.1材料和方法

细胞培养：

将人真皮成纤维细胞(Cascade Biologics)在12-孔组织培养板中于生长培养基(DMEM，5％FBS，1％L-Glut和1％抗生素)中进行培养并在37℃下培育24小时。用稀释于生长培养基中的测试活性物质对细胞进行处理并在37℃下培育72小时，此后收集条件培养基并测试纤维连接蛋白的存在。随后将成纤维细胞培养物再培育72hr。

竞争性抑制ELISA：

通过竞争性ELISA试剂盒(Chemicon International)分析了测试样品中纤维连接蛋白的存在。简而言之，将条件培养基的测试和对照样品与偶联HRP的兔单克隆抗人纤维连接蛋白抗体在室温下培育约10分钟。随后将样品/抗体混合物转移至预先涂覆有标准量的非特异性结合已经阻断的人纤维连接蛋白的微量滴定板上。将该平板在室温下培育1小时，随后进行PBS洗涤并通过本领域技术人员公知的常规方法检测结合的抗体(即，检测结合的HRP)。结合抗体的量与样品中纤维连接蛋白的量成反比。

1.4.2结果

按照下式计算由于L-4-噻唑基丙氨酸处理而引起的纤维连接蛋白表达的百分比变化：

L-4-噻唑基丙氨酸浓度的增加使得纤维连接蛋白的表达和/或产生增加(表1)：

表1：

浓度	百分比变化
		0.001％	36.11％(P＜0.05)
0.0001％	31.03％(P＜0.05)
		0.00001％	54.34％(P＜0.05)

这些结果表明局部施用包含了L-4-噻唑基丙氨酸的组合物会使纤维连接蛋白的表达增强，使得皮肤的完整性增强和/或皮肤结构改善。

1.5实施例5：L-4噻唑基丙氨酸增加了体内的真皮基质分子

为确定L-4-噻唑基丙氨酸对活体内人皮肤中的胶原含量的影响，对约25名年龄为35-65岁的女性进行了测试。该人临床研究在研究开始之前已经由机构审查委员会(Institutional Review Board)批准并取得受试者的知情同意。根据联邦法规第21篇第50和56部分进行该研究。

在丙二醇∶乙醇∶水比例为70∶20∶10的介质中配制0.01％的L-4-噻唑基丙氨酸溶液。本测试的实验设计如下：将噻唑基丙氨酸溶液或无噻唑基丙氨酸的介质溶液施用于外前臂上2×2的皮肤区域上(以2mg/cm2的量施用)，在半封闭贴片下保持24小时，此后移除贴片并施用新鲜贴片。将这重复5天(周一-周五)，随后使受试者周末休息。在接下来的两周里以相同方式连续实施贴片施用，总共施用15次。在研究结束时，由委员会认证的皮肤科医生(Board certifiedDermatologist)从施用贴片的区域采集3mm皮肤样品，在福尔马林中固定，包埋于石蜡中并进行组织学处理。将皮肤样品切片，并用可使胶原纤维显影的三色染色剂(Trichrome stain)和使糖胺聚糖(GAG)显影的艾尔逊蓝染色剂(Alcian blue stain)进行染色。在显微镜下目测评估胶原和GAG染色的强度。来自噻唑基丙氨酸处理部位的样品与介质处理部位的样品的比较表明，在18/21(86％)受试者中，在L-4-噻唑基丙氨酸处理的部位中观察到胶原染色增强。13/21(62％)的用L4-噻唑基丙氨酸处理的受试者也显示出相对于介质处理皮肤而言的GAG染色增强。皮肤中胶原和GAG的增加随后可改善衰老迹象外观，如，细纹，皱纹，紧致和下垂。

1.6实施例6：L-4-噻唑基丙氨酸诱导降钙素基因相关肽(CGRP)

CGRP是当前已知的最强效的血管扩张剂，并且因此特别关注它在帮助伤口愈合和/或局部施用时增加特定组织循环的潜在用途。

利用市售CGRP酶联免疫分析来评价L-4-噻唑基丙氨酸对来自神经元细胞的CGRP的表达的影响。发现L-4-噻唑基丙氨酸可诱导CGRP在体外细胞培养物中的表达增强。

1.6.1材料和方法

细胞培养：

按照本领域已知的常规方法在补充有神经生长因子的FK12培养基中培养PC-12细胞。PC12细胞源自大鼠嗜铬细胞瘤并且在暴露于神经伸长因子时最终分化。一旦细胞开始分化，它们表达CGRP。将培养物在含有L-4-噻唑基丙氨酸的培养基中再培育24h，此后收集条件培养基并分析CGRP的存在。

CGRP免疫分析：

通过夹心ELISA免疫分析试剂盒来分析测试样品中CGRP的存在。简而言之，将条件培养基的测试和对照样品与偶联乙酰胆碱酯酶的抗CGRP抗体(“示踪剂抗体”)混合，并将混合物加入预涂覆有非特异性结合已经阻断的单克隆抗CGRP抗体(结合与示踪剂抗体不同的CGRP的表位)的平板上。在板中对样品进行培育并将板洗涤，并根据本领域已知的常规方法使用Ellman试剂对结合乙酰胆碱酯酶活性进行测定。试剂吸光度与样品中的CGRP浓度成正比。

1.6.2结果

按照以下等式计算由于L-4-噻唑基丙氨酸处理而引起的CGRP表达的百分比变化：

在L-4-噻唑基丙氨酸浓度为0.01％时，CGRP的表达增强69.93％(p＜0.05)。该结果表明局部施用含L-4-噻唑基丙氨酸的组合物会使CGRP的表达增强，使皮肤修复和总体皮肤状况得到改善。

在此引用的包括专利申请和公开的所有参考文献的全部内容出于所有目的在此都引入本文中作为参考，其引入程度就如同每一篇公开出版物或专利或专利申请都是特别地且单独地指出其全部内容出于所有目的引入本文中作为参考一般。本领域技术人员应当了解，可以对本发明进行多种修改和改变，而没有脱离本发明的精神和范围。在此所述的特定实施方案仅以实施例的方式提供，且本发明仅受限于所附的权利要求，连通这些权利要求所授权的等效物的全部范围。

Claims (12)

1.用于治疗与弹性蛋白纤维丧失相关的皮肤状况的化妆品组合物，其在化妆品上可接受的载体中包含占总组合物重量0.001％至10％的增强LOXL-1的非成蛋白质性氨基酸，

其中所述非成蛋白质性氨基酸是根据通式Ia的包含杂环基团的α-氨基酸或β-氨基酸：

其中n是0或1；

Z是键、C_1-4烷基或羧基；

Y选自C、CH、N或NR^N，其中R^N是氢、C_1-10烷基、烯基、炔基或芳基；和

其中Q表示选自以下的五元杂环：

其中X是硫原子；

R₂和R₃独立地选自氢、羟基、F、Cl、Br、I、NR^NR^N、硫醇基或C_1-4烷基；其中R^N如上所定义；和

其中氨基酸包含R或S对映异构体；

前提条件是通式Ia的化合物不是L-组氨酸或L-色氨酸。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述通式Ia的非咸蛋白质性氨基酸是L构型的。

3.根据权利要求1的组合物，其中Z表示单键。

4.根据权利要求1的组合物，其中X是硫，R₂和R₃各自是氢。

5.根据权利要求1的组合物，其中所述非成蛋白质性氨基酸具有如下结构：

6.根据权利要求1的组合物，其中所述非咸蛋白质性氨基酸是噻唑基丙氨酸。

7.根据权利要求6的化妆品组合物，其中所述噻唑基丙氨酸是L-4-噻唑基丙氨酸。

8.权利要求5中所定义的增强LOXL-1的非成蛋白质性氨基酸在制备用于提供皮肤益处，即治疗皮肤中与弹性蛋白纤维丧失相关的皮肤状况的局部组合物中的用途。

9.根据权利要求8的用途，其中所述非咸蛋白质性氨基酸进一步具有一种或多种选自抑制钙神经素、提高β1整合素表达、提高纤维连接蛋白表达、刺激B-内啡肽和提高CGRP表达的其他活性。

10.根据权利要求8或9的用途，其中所述皮肤益处选自：

(a)治疗、减少和/或预防细纹或皱纹；

(b)缩小皮肤毛孔大小；

(c)改善皮肤厚度、丰满度和/或紧实度；

(d)改善皮肤柔顺度和/或柔软度；

(e)改善肤色和/或透明度；

(f)改善前胶原和/或胶原产生；

(g)改善弹性蛋白的保持和重塑；

(h)改善皮肤纹理和/或促进恢复原有纹理；

(i)改善皮肤屏障修复和/或机能；

(j)改善皮肤轮廓的外观；

(k)恢复皮肤光泽和/或亮度；

(l)补充皮肤中必需的营养素和/或成分；

(m)改善因绝经而减退的皮肤外观；

(n)改善皮肤润湿性；或

(o)增强皮肤弹性和/或回弹性。

11.根据权利要求8或9的用途，其中所述皮肤益处是治疗、缓解和/或预防人皮肤中的细纹或皱纹或下垂。

12.根据权利要求10的用途，其中所述皮肤益处是治疗、缓解和/或预防人皮肤中的细纹或皱纹。