TWI376364B - A pharmaceutical composition comprising an n, n-dihalogenated amino acid or a derivative thereof, and methods for use of the pharmaceutical composition - Google Patents

Description

1376364 這些起始原料可以其酯類或鹽類的形式使用。膦酸的 低碳烧基醋類是製備本發明之二自代胺基膦酸及其衍生物 的較佳酯類。本說明書所使用的齒素一詞包括氯、溴和破。 ν，ν-二齒代胺基酸之起始原料是一般已知的化合物或 可用已知的方法製備。這些原料說明於《四面體》：不對 稱性，1997年’第8期（13);《FEMS微生物通信》，第70 期’第23-28頁（1990年）；《合成通信》，第2725-2731頁 (1994年），《FEMS微生物通信》，第ι〇8期，第225 23〇 頁（1993年）；《神經科學通信》，第21期，第77_92頁（1981 年）；《英國藥理學期刊》，第75期，第65頁和例如在R. Noyori在2001年12月8日所給的諾貝爾演講《不對稱催 化作用 ： 科學與 機會》 (www.nobel.se/chemistry/jaureates/7nol/n〇ypri-lecturp. ρΗΠ ο s午多Ν，Ν- 一鹵代胺基酸是已知的。關於這些胺基酸及 其衍生物’我們提供具有殺細菌、抗細菌、抗感染、抗微 生物、抗真菌和抗病毒性質的新穎組成物。 本發明亦關於許多種具有殺細菌、抗細菌、抗感染、 殺抱子、抗微生物、抗真菌和抗病毒性質的新穎Ν，Ν_二鹵 代胺基酸及其衍生物。 【先前技術】 2.發明背景 身體的免疫細胞一嗜中性細胞與巨噬細胞已知具有清 1376364 除感染的此力’可產生破壞微生物和正常或贅瘤（癌）細胞之 具反應性的氧代謝物，並且調節免疫的反應。 嗜中性細胞可由於對炎性刺激、細菌感染及/或其他膜 病變之反應而被活化。結果是，他們會產生超氧自由基， 如：HOCT、02·及0H-。氣離子（〇1.)在100·150 mM的生理 濃度會被H2〇2氧化，其被髓過氧化物酶（在嗜中性細胞内之 酶）催化，而形成次氣酸（H0C1)和HCI。 生理的HOC1的產生係緊密地經由生物化學訊號之複 雜網路的迴饋抑制而調節。H0C1被產生的濃度是每1 〇6個 活化的嗜中性細胞為2x 1 0 7 Μ。此H0C1的量估計可殺死約 15 Ox 106 E. coh細菌。H0C1 —旦被產生出來，其經由與在 複雜的細胞系統内之多種可氧化的受質反應而快速裂解。 因此，反應性氧·代謝物的濃度預期在數小時内會降到偵測 不到的程度。然而，已證明嗜中性細胞能利用他們的H〇cl 來產生大量的較長久（long-lived)的氣化劑，如N-氣胺。這 些較長久的氧化劑是以牛磺酸（NCT，或N_氣牛磺酸）之單氯 胺及牛磺酸（NNDCT，或N，N-二氯牛磺酸）之二氯胺產生， 其係取決於細胞環境之pH值。這些氧化劑是強力的抗微生 物劑，且在宿主身體之防禦系統及調控細胞介素和生長因 子上扮演關鍵角色。 ' 3.相關技藝的説明 德國專利申請案4041703 W.Gottardi係說明队氣牛磺 酸的鹼金屬鹽。該申請案提到當以原位（in situ)方式製備= /OJ04 y不可月b分離出純物質的N_氯牛磺酸，只能分離出稀釋溶 液的形式。較晚的研究則建立N-氯牛磺酸能用以下的說明 方法製備。德國專利申請案也說明呈結晶形式的N_氯牛磺 ^之純的驗金屬鹽類。該專利亦揭示使用這些鹽作為人之 醬藥應用上的消毒劑和殺細菌劑，該德國專利案說明藉著 將牛磺酸與鹼金屬的氣醯胺，如N_氯苯磺醢胺鈉（氣胺_B) 或Ν·氣_4-曱基苯磺醯胺鈉（氯胺_τ)反應來製備鹼金屬鹽 類。氯胺-Β和氯胺·τ登錄在默克藥廠索引（Merck Index)， 第1:3版’ 2001年’第.356頁的第2〇84和2〇85項。 WO0222118 W.Gottardi等人說明N-氯牛績酸，尤其是 呈其鋼鹽形式者有用於治療真菌感染，如急性的或慢性的 鼻竇炎或其他真菌感染如耳炎、皮膚炎、支氣管炎、分歧 幵/式的肺炎’如卡氏肺囊蟲症，性器 g之真菌感染，如陰道炎、子宮内膜炎、陰莖頭炎、腸胃 道之真菌感染’如胃炎、食道炎、腸炎、.或.尿道之真菌感 染’如腎盂腎炎、輸尿管炎、膀胱炎、或尿道炎。 最近Gelder等人已經合成並且分離出呈粉末狀的N，N-一氯牛項酸（Gelder，N.M. ; Bowers, R.〈Ν,Ν-二氯化胺基酸 的合4與特徵鑑定：牛磺酸、高牛磺酸、GABA和L-亮胺 酸〉’《神經化學研究雜誌》，2001年；第26期：第575-578 頁）。N•氯牛磺酸（NCT)和N，N-二氣牛磺酸（NNDCT)可藉尤 其UV光譜來鑑認。NNDCT在302nm具有最大吸光值而其 莫耳吸光係數為。這些數值係得自Gottardi， W ; Nagl， μ.《藥物醫學化學雜誌》 1376364 2002 年，第 9 期，第 411-421 頁。 NCT在252nm具有最大吸光值而其莫耳吸光係數為

Juan M_Antelo等人在《化學學會雜誌，户》， 第2期，2000年，第頁說明在N_氣牛磺酸之可 逆歧化反應中的一般酸鹼催化作用。該作者亦說明藉著在 PH2-2.5將N·氯牛磺酸歧化.反應以製備N，N•二氣牛磺酸溶 液以及N，N-二氣牛績酸在咖丨88的穩定性。在_小時 之後N，N-二氯牛續酸的損失少於5〇/。。 【發明内容】 發明概要 …吾人應瞭解本發明的㈣方面或特性無論是被鑑認為 較佺的或不被鑑認為較佳者可與本發明之任何其他方面或 特性結合，無論這些其他特性被鑑認為較佳的或不被鑑認 為較佳者。例如，一種被說明為較佳的特徵例如pH範圍， 或—種特別組成物（例如一種特定調配物中的特別N，N_二 函代胺基酸）的特定pH值可與其他組成物（另—種特定職 =中的N，N-二鹵代胺基酸）合併而不會偏離本發明。這項申 明也適用於任何取代物的組合。例如，一種被鑑認為較佳 的取代物可與任何不被鑑認為較佳的其他取代物結合，因 1 ’本發明之最廣的方面提供包含式⑴之Ν，Νκ戈胺基 A*C(RlR〇)R(CH2)n-C(YZ)-X, 1376364 曰或其^生物的醫藥組成物β A是氫或Hal2N_ ;其中㈣ 是選自由氯、漠和蛾組成之組群的齒基；R是碳碳單鍵或 具有三到六個碳m價伸環烧基；Rl是氫、低級烧基 和基團-C〇〇H;R(>是氫或低級院基；η是0或一個！到13 的整數；R。與它們所連接的碳原子一起形成一個 (CrC6)環院基的環；γ是氫、低級炫基，或顧2或_臟12 ; 且Ζ是氫及低級烷基；且χ，是氫、_c〇〇H、c〇NH2、_s〇e、 -S〇2nH2 ' _P(=0)(0H)2 或 _B(〇H)2。若 r 是二價伸環烧基， n是不超過11的整數，亦即η可為0,^2.,3,4,5,6, 9 10或11。換句話說，包含酸性基團X的胺基酸 具有高達16個鏈上的原子。在二價伸環烧基或二價基 _(CH2)n-中，一個氫可被-NHal2取代。雖然本發明的N，N_ 一鹵代胺基酸可包含高達3個·ΝΗ312基團，但是以具有一 個或兩個-NHaL基團的Ν，Ν_二函代胺基酸為較佳。最佳的 疋具有一個-NHal2基團的Ν，Ν_二鹵代胺基酸。這個基團可 在酸性基團R〗（若是Ri-COOH)之α-、/5-、r·、5-、ε-等等到Ω -位置或在χ，。 式1化合物的衍生物包括醫藥上可接受的鹽類、與低 級坑醇所成之醋類、-ΝΗ2基連接到取代基X或χ，所連接的 碳原子上之低級烷醯基衍生物。「’低級」一詞在此方面包 / 括具有1到6個，較佳是1到4個碳原子的殘基。 在一項較佳的具體實例中，及是碳-碳單鍵且η是〇或 從1到7的整數，更佳是〇或從！到5的整數，最佳是〇 或從1到3的整數，亦即-丨、2或3 ^同樣感興趣的是η：=4 1376364 或n-5或n-6或n=7或n=8或n=9的N，N-二鹵代胺基酸。 本發明之一項較佳的組成物包含N，N_:鹵代胺基酸或 其衍生物的濃度介於0.1至100mM且pH範圍在大約3到 大約4.8、3.0至4.5，或3.5至4.5之間或大約3.5的組成 物。 另一項組成物具有濃度介於〇」至5〇mM的Ν，Ν·二函 代胺基酸或其衍生物且pH範圍在大約2到大約7、約3至 約6 ’ 3至約4_8，約3至4.5 ’或3.5至4.5之間或大約3.5。 本發明亦提供新穎殺細菌、抗細菌、抗感染、微生物、f #又抱子、消毒、抗病毒和抗真菌之組成物，其包含式（Η)的 Ν，Ν-二齒代胺基酸

Hal2N-C(RIR°)-(CH2)n-C(YZ)-X (Π) 或其衍生物。 式中Hal是選自由氯、溴和碘組成之組群的鹵基；Rl 是氮、低級烧基和基團-COOH ; R❶是氫、低級烷基；或Rl 和R與它們所連接的碳原子一起形成一個（C3_C6)環烷基.的 環；η是〇或一個}到3的整數；γ是氮、低級烧基、_而2参 或-NHal2 ;且Ζ是氫及低級烷基；X是_c〇〇h、_c〇NH2、 -S03H、或-s〇2NH2。， 式π化合物的衍生物包括醫藥上可接受的鹽類、與低 - 級烷醇所成之酯類、·ΝΗ2基連接到取代基X所連接的碳原 . 子上之低級烷醯基衍生物。「低級」一詞在此方面包括具 有1到6個，較佳是丨到4個碳原子的殘基。 式（1)、（Π)、（III)或（IV)之化合物的醫藥上可接受之鹽 11 1376364 類包含具有醫藥上可接受之陽離子的鹽類。式（III)和（IV)的 化合物說明於以下* N，N-二鹵代胺基酸的鹽類包括具有 -COOH、-CONH2、-S03H或-S02NH2基圏之鹼的鹽類。醫 藥上可接受的鹽類亦包括敍鹽、驗金屬鹽、鎂鹽、或弼鹽 和任何有機胺鹽。驗金屬鹽、Mg、Ca和A1鹽是吾人有興 趣的。吾人對鹼金屬鹽尤其有興趣，尤其是鋰鹽、納鹽或 鉀鹽。 酸加成鹽的實例包括但不限於鹼性殘基如胺的礦物酸 或有機酸鹽；酸性殘基如羧酸的鹼性或有機鹽，以及類似 者。醫藥上可接受的鹽包括但不限於鹵化氫、硫酸鹽、甲 氧基硫酸鹽、甲基硫酸鹽、曱基苯磺酸鹽、硝酸鹽、填酸 鹽、順丁稀二酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽及類似者。 適當鹽類的列表可在《雷明頓氏醫藥科學》 (Remington’s Pharmaceutical Sciences) ’ 第 17 版，Mack 出 版公司’位於賓州的Easton市，198 5年，第1418頁或《莫 克藥典》（Merck Index) ’第13版’ 2001年，由莫克藥廠的 莫克研究實驗室部門出版’在第MISC-22和MISC-23頁中， 其揭示的内容完整的以參考文獻的方式併於本說明書中。 -NH2基連接到取代基X所連接的碳原子上之醫藥上可 接受的酸加成鹽尤其包括具有鹽酸、磺酸、磷酸、硝酸、 苯磺酸、甲笨磺酸、曱磺酸、樟腦磺酸及其他酸的鹽。 更進一步式（I)、（II)、（III)或（IV)之化合物的衍生物包 括-COOH或-S03H與低級烷醇類之酯類，及胺基連接至取 代基X所連接的碳原子上之低級烷醯基衍生物。 1376364 更進一步式（i)、（II)、（III)或（ιν)之化合物的衍生物也 包括N，N-二鹵代胺基酸，其中胺基酸分子的某個基團被保 護基所保護者。「保護基」意指（a)保留反應基使不參與不 被希望之化學反應；及（b)可以很容易的在不再需要保護反 應基之後將之移除掉之化學基。 「胺基保護基」意指保留反應基否則該反應基會被某 些化學反應修改的保護基《胺基酸保護基之非限制實例包 括曱醯基或具有2到4個碳原子之低級烷醯基，尤其是乙 醯基或丙醯基’三苯甲基或-經取代的三苯甲基，如單曱氧 基二本甲基、二甲氧基三苯甲基如4，4’-二甲氧基三苯基甲 基（dimethoxytrityl or dimethoxytriphenyl methyl group)、三 氟乙基、和N-(9-苐基甲氧基羰基）或「jpMOC」基、稀丙基 氧基羰基或其他衍生自鹵基碳酸鹽如（C6_Ci2)芳基低級烧基 碳酸鹽（如衍生自苄基氯碳酸鹽的N_苄氧基羰基）的保護 基，如苄氧基羰基（CBZ基團）、或衍生自二苯基烷基鹵基碳 酉欠鹽或二級炫基鹵基碳酸鹽的保護基，如三級丁基_美碳 酸鹽，尤其是三級丁基氯碳酸鹽，、或二（低級）烷基二碳酸 鹽，尤其是二-(三級丁基）_二碳酸鹽，以及駄基。 「組成物」一詞用於本說明書係指本發明之各種形式 的化合物或組成物，包括固體如粉末、粉末的混合物及類 似者、乳液、懸浮液以及溶液。 在一方面，該組成物及其用途包括已知的N，N_二鹵代 胺基酸及其衍生物。在另一方面，該組成物及其用途包括 新穎的N，N-二齒代胺基酸及其衍生物。在任一情形中，該 13 1376364 成物可維持在酸性的形式，亦即pH低於7，例如6.8， 2就是pH介於大約2到大約7之間，也就是pH範圍介於 6·8 、 2.5 至 6.5 、 2.5 至 6.0 、或 2.5 至 5.0 ，或 3.0 ; 之間，或pH大約3.5。在不同情洱下，該ρΗ可維持在 • ; 5’也就是pH範圍在約3至4.5，或3.5至4.5，或ρΙί 在大约3.5。要項是該組成物的ρΗ是酸性的。ρΗ的挑選視 午夕因素而定，包括Ν，Ν-二鹵代胺基酸的特定用途（是在體 ^或體内）、所治療的感染形式（例如，是否該感染是由細 I酵母菌、真菌或病毒引起）、感染的部位（例如，其為眼春 目月、咽喉或尿道或任何標靶組織或器官受感染）、感染的嚴 重程度、病患的敏感度等等。 在另一方面，該組成物，本發明的溶液含有濃度範圍 在0.1至100毫莫耳濃度（mM)之ν,Ν-二_代胺基酸。 在還有一方面，該組成物為等張且生理性平衡的。 N，N-二鹵代胺基酸與Η〇α顯著不同，因為它們保持具 有顯著殺細菌活性的氧化潛勢，而且它們比Η〇α較不具毒 ° Ν，Ν-二鹵代胺基酸在氧化易受作用的標靶分子之前亦 f 有足夠的穩定性能擴散到某個距離。其n=〇或高達5之整 數的本發明之低分子量沭队二鹵代胺基酸是較為親水的分 〇 · 令人驚奇的是吾人發現當本發明的N，N_二鹵代胺基酸 · 具有強的殺細菌、抗細菌、抗感染、微生物、殺孢子、消 毒、抗真菌和抗病毒活性時，其具有低的細胞毒性。 在還有一方面’本發明的組成物穩定而能符合可用在 14 1376364 治療或預防細菌、微生物、孢子、真菌和病毒感染或污染 之組成物的需求。 在另一方面，該組成物的穩定性是由哼存該組成物在 能確保其充分穩定性以控制細菌、微生物 '孢子、真菌和 病毒感染或污染的貯藏器中來提供的。 本發明提供包含式（III)之N，N-二函代胺基酸或其衍生 物的醫藥組成物 A-C(R,R2)-R(CH2)n-C(YZ)-X* (III) A是氫或HahN-，其中Hal是選自.由氯、溴和碘組成 之組群中的鹵基；R是碳-碳單鍵或具有三至六個碳原子之 二價（CrC6)伸環烷基，R1是氫、低級烷基和基團_c〇〇H ; R2是低級烷基；或R1和R2與它們所連接的碳原子一起形 成一個（C：3-C6)環院基的環；η是〇或從1到13的整數；γ 是氫、低級焼基或-ΝΗ2或-NHal2 ;且ζ是氫及低級烷基； 且 X’是氫、-COOH、-CONH2、-S03H、-S〇2NH2、·Ρ(=〇)(〇Η)2 或-Β(0Η)2。若R是二價（C3_C6)伸環烷基，η是不超過u 的整數。換句話說，包含酸性基團χ，的胺基酸具有高達16 個鏈原子。視需要在二價（Cs-C6)伸環烷基或二價基_(cH2)n-中，一個氫可被-NHah取代。雖然本發明的N，N_:鹵代胺 基酸可包含咼達三個-NHa〗2基團，但以具有一個或兩個 -NHal2基團的N，N-二齒代胺基酸為較佳。最佳的是具有一 個-NHal2基團的N，N-二鹵代胺基酸。這個基團可在酸性基 團Ri(若是Ri-COOH)之α -、万-、r _、占_、£ •等等到Ω _ 位置或在X’。 15 13/0304 式III或IV化合物之朽 '生物（說明於下）包括醫藥上可接

受的鹽類、與低級烷醇所A 成之ga類，·ΝΗ2基連接到取代基 X或X’所連接的碳斤；μ A , ’、 之低級烧酿基衍生物。「低級」 一詞在此方面包括具有]h | 至J 6個’較佳是1到4個碳原子 的殘基。 在-項較佳的具體實例中，R是碳碳單鍵且η是〇或 1到7的整數，更佳是〇或丨到5的整數，最佳是^到 3的整數。 在另方面，提供具有殺細菌、抗細g、抗感染、抗 微生物、殺抱子、消喜、亩；j 一生、 抗真菌和抗病毒活性之組成物， 其包含式（IV)

Hal2N-C(R,R2)-(CH2)n-C(YZ)-X 之N，N-二齒代胺基酸或其衍生物； 其中Hal是選自由氯、溴和碘組成之組群中的鹵基； R是氫、低級烧基和基團_COOH ; R2是低級烷基；或ri 和R與它們所連接的碳原子一起形成一個（C3-C6)環烷基的 環；η是0 .或一個1到3的整數；γ是氫、低級烷基或_Nh2 ; 且Z是氫及低級烧基；且X是_c〇〇h、-CONH2、-S03H、 -S〇2NH2 ;該衍生物係選自由醫藥上可接受的鹽類、與低級 烷醇所成之酯類，及-NH2基連接到取代基X所連接的碳原 子上之低級烷醯基衍生物組成之組群。 另一方面’以上說明之包含式（IV)之新穎N，N-二鹵代 胺基酸的組成物是R1為氫或低級烷基；n是〇，1或2 ; Y 是氫或低級烷基；Ζ是氫及低級烷基；且X是-S03H或 16 1376364 細節陳示在實施例中。 當用於製備本發明之化合物的膦酸起始物質無法購得 時’可以根據熟習本技藝者已經詳知的方法製備之。請參 考例如：Yuan，C等人，〈合成官能化膦酸之新穎策略〉， 《雜原子化學》，1997年，第8期（2)102-122頁；Yuan，C. 等人’〈合成官能化膦酸之新穎策略〉，《純粹應用化學》， 1996年’第68期（4)9〇7_12頁；〈達成經取代有機膦酸之 多方面途徑〉，《美國化學會誌》，1990年，第3 1期’第 2933 頁；G.M.K〇s〇lap〇ff，〈膦酸與次膦酸（ph〇sphinic)的 合成〉，《有機反應》’第6卷（1951年），及其中所引用 的參考資料。 侧酸起始物質及其酯類可購自例如尤其是Acros 〇rgamcs(Fischer Scientific)公司或 Ryscor Science 公司（位 於北卡羅萊納州的Raleigh市），或可根據熟習本技藝者既 知的步驟去製備。請參考例如Webb，K.S.和Levy D.《四面 體通信》’（1995年），第36期，第5117頁；SUZUki，A.《純 粹應用化學》，1994年，第66期’第213頁；Miyaura，N. 和Suzuki，A.，《化學評論》，1995年，第95期，第2457-2483 頁，Suzuki，A. ’《有機金屬化學》，1999年，第576期， 第 147-168 頁，Kamatani，A 和〇verman，L.E.《有機化學雜 德》，1999 年’第 64 期，第 8743_8744 頁，Yang，w ; Ga〇，s ;

Wang，B.〈硼酸化合物作為有潛力的醫藥用劑〉，《醫學研 究評論》，2003年’第23期；第346-368頁’以及其中所 引用的參考資料和 Br〇wn，H.C·; Midland，M.M·; Levy’A.B.; 21 1376364

Kramer’G.w· ’《經硼烷的有機合成》，紐約的 Wiley-Interscience 公司出版，1975 年 ^ 根據本發明的化合物亦可包括其個別的立體異構物（鏡 像異構物和非鏡像異構物）以及該化合物的消旋混合物。個 別的異構物如純的R、s、RR、ss、RS、SR等可以藉著以 光學活性的解析劑處理該異構物的混合物以形成一對非鏡 像異構的化合物來製備。該非鏡像異構的化合物可以分離 並且可利用本技藝中已知的方法單離出光學上純粹的鏡像 異構物或非鏡像異構物。因為非鏡像異a構物具有獨特的物 理性質（如熔點、沸點、溶解度、反應活性等），因此其可以 很谷易的藉著利用這些不相似性來做分離。該非鏡像異構 物可以用色層分析術或較佳是藉由根據溶解度差異的分離 或解析技術予以分離。可應用於將化合物的立體異構物從 其消旋混合物中解析出來之技術上的更詳細說明可以在

Jean Jacques Andre Collet，Samuel H. Wilen 等人的《鏡像 異構物、消旋體和解析》，John Wiley & Sons公司（1981年） 和其中所引用的參考資料中找到。 製備N，N-二鹵代胺基酸的典型的反應流程圖可描述如 下： HC1

HzN-CiR'R2)-^)!! · C(YZ)-X + 2NaOCl -> Cl2N-C(R'R2)-(CH2)n-C(YZ)-X +CY +H+ 其中R1、R2、η、X、Y和z具有以上說明的意義。 將胺基酸起始物質溶解在低級烷醇中（例如曱醇或乙醇） 並使其變酸性。對此溶液添加NaOCl水溶液β該反應造成 胺基被氣化且將氣化鈉沉澱出來。在例如低於30〇C的低溫 22 1376364 下將溶劑蒸發，並獲得殘留物。把殘留物溶解在溶劑中， 並且使用不與低級烷醇相水溶液混合的溶劑萃取以分離出 N，N-二鹵代胺基酸。相似的，可以藉著將胺基酸起始物質 與H0C1反應來製備N，N-二鹵代胺基酸。 因此，亦可用NaOBr做為鹵化劑以製備溴代類似物。 根據J. Marcinkiewicz等人在2000年（《發炎研究雜 誌》，第49期，第280-289頁），NNDCT(N，N-二氣牛磺酸） 可以在溶液中藉著將HOC1和牛磺酸在pH5反應來合成。 NNDCT亦可藉由在以次氣酸鹽（C102·)氧化班特氏鹽（Bunte salt，H2NCH2CH2S-S03H)(Chinake 等人，〈氧基鹵素-硫化 學：用次氯酸鹽氧化班特氏鹽2-胺基乙烷硫代硫酸的動力 學和機制〉，《物理化學與化學物理》，200 1年；第3期： 4957-4964 頁）和次牛磺酸（H2NCH2CH2S02H)來產生 (Martincigh，B. S. ; Mundoma，C ; Simoyi，R. +H.〈抗氧化物 化學：用次氣酸鹽氧化次牛磺酸-牛磺酸〉.《物理化學雜誌》 A.1988 年；第 102 期：9838-9846 頁）。 該反應顯示於反應式1-6 : 2Cl〇2. + h2nch2ch2s-so3h —C1NHCH2CH2S03H + S042· +cr +H+ (1) 班特鹽 N-氣化牛磺酸 N-氣牛磺酸在酸性溶液中歧化形成N,N-二氣牛磺酸和 牛磺酸： 2C1NHCH2CH2S03H — C12NCH2CH2S03H + NH2CH2CH2S03H (2) N，N-二氯牛磺酸 牛磺酸 C102—+ H2NCH2CH2S02H + H+ — H2NCH2CH2S03H+H0C1 (3) 次牛磺酸 牛磺酸 23 1376364 H0C1可以迅速的把剩下的次牛磺酸氧化成牛磺酸： HOC1 + H2NCH2CH2S02H — H2NCH2CH2S03H +C1+H+ (4) 或把次牛磺酸氧化成N-氯次牛磺酸： H0C1 + h2nch2ch2so2h ^ cihnch2ch2so2h +h2o (5) 在高度酸性的條件下，H0C1把N-氯次牛磺酸氧化成 N，N-二氣牛磺酸。 H0C1 + CIHNCH2CH2S02H C12NCH2CH2S03H +H20 +HC1 (6) 具有至少一個低級烷基連接在胺基所連接的碳原子上 之化合物是較為穩定的二鹵代胺基酸。 這些化合物可以用如下方法製備： OBu-t i.MeS02Cl，Et3N CH2C12

C HN>〇〇H h3c’ \ 2.HC1，二噁烷 CH3 3. Na2S03，水

Tet. Let 1996, 37(40), 73J9-7322

N，N-二鹵基胺基酸的衍生物可以藉著用如本說明書所 揭示的胺基保護劑保護胺基，例如藉著形成苄氧基羰基 (CBZ)衍生物，接著形成可能轉變成磺醯胺類的磺醯氯，例 如與低級烷基胺，如曱胺而製備。相似的，該磺醯氣可與 苄基胺反應，且所得到的苄基磺醯氯可以轉變成S02NH2基 24 1376364 團。而後保護基可以藉由熟習本技藝的化學家而言本身已 知的方法予以移除。可使用之適當保護基的詳細^表可以 在T.W. Greene，《有機合成中的保護基》，第三版，切心 Wiley& Sons公司於1999年出版。 本發明之化合物的醫藥上可接受之鹽類可以藉著將這 些化合物之自由酸或鹼的形式與化學計量或較大^之適當 的驗或酸在水中或有機溶劑中’或二者的混合物中反應來 製備；一般而言例如是在非水的介質中像乙醚、乙酸乙酯、 乙醇、異丙醇。本發明的鹽類可以藉由例如離子交換來製 備。 鹽類也可以藉著將N，N-二鹵代胺基酸以其他本身已知 的方式包括相似於德國專利申請案第4〇417〇3 W g⑽訂心 所說明的方法反應來製備。 N，N-二函代胺基酸的鈉鹽可以藉著將鈉鹽與低級硫酸 二烷基酯（如琉酸二甲酯或硫酸二乙酯）在碳酸氫鈉存在下 反應轉變成低級烷基酯類。 取代基X或X’為-C02-NH2的醯胺類以熟習本技藝的化 學家所詳知的方式產生。 N，N-二鹵基胺基酸及斩哇物的伸用方法 N，N- 一鹵基胺基酸及其衍生物是抗微生物劑，其能以 較低的濃度殺死微生物並且在顯著的高濃度下能被真核細 胞心觉。考慮到氣化胺類在體内破壞病原體的生理角色， 這項治療活性的範圍和適當的治療指數是絕對重要的。對 25 1J76364 於-種施用於組織如眼睛、皮膚或任何其他㈣區域的抗 微生物產品而言，它的安全性和效力無法折衷互讓。因此， 吾人的正面結果支持了此種（等）產品於人體治療感染的用 途0 式（I) (II) (III)或（IV)之化合物具有以下具潛力的應 用領域：隱形眼鏡的清潔劑、使細菌失活m手 術準備'手術儀器消毒、醫學器具和儀器消毒、牙科的儀 器消毒和應用於食品衛生包括表面區域的消毒。它們亦有 用於疫苗誠物（作為㈣劑和可能的佐劑），做為具有殺病 毒作用的化合物，用於DNA和RNA兩類病毒的病毒去活 性，該病毒包括HIV、肝《A、呼吸融合病毒、西尼羅病毒、 ^ Hsν 2 sARS、流行性感冒病毒、副流行性感冒病 母picornaviruses和牛痘病毒（作為痘病毒的模型”此外， 這些化合物亦有用於治療真菌感染如急性或慢性的鼻寶炎 或其他真菌感染如或其他真菌感染如耳炎、皮膚炎、支氣 管炎1炎如卡氏肺囊蟲症㈣⑺咖⑴性器官 之真菌感染’如陰道炎、子宮内膜炎、陰莖頭炎、腸胃道 之真菌感染’如胃炎、食道炎、腸炎、或尿道之真菌感染， 如腎盂腎炎、輸尿管炎、膀胱炎、或尿道炎。而且，說明 ;本說月曰的組成物具有對抗許多其他微生物的抗微生物 活性包括大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌“·α ）、金黃葡萄球菌⑻—oc⑽⑽㈣）、對 甲氧苯月#素有抗藥性的金黃葡萄球菌（mrs 、綠腺桿菌 (p卿㈣咕晴小乳酸桿菌（Lactmius)、酵母 26 1376364 菌、對萬古黴素有抗藥性的腺过 # 罙往的腸球產、霉和孢子，包括炭疽 囷的孢子。尤其，本發明的溶液 我有用於治療數種不同的炭 症桿菌菌株。對萬古徽辛有相·盖 〆 两慨系畀抗樂性的細菌、MRSA及其他者 很容易被本發明的組成物破壞。 在本發明的還有一方面’其提供治療各種醫學上狀況 的方法，其挑選自由下列所組成之組群：促進創傷疾癒、 降低在開放性創傷的病原體、創傷 到煬的去巧染、眼球消毒或 去污染、口腔消毒、抗真菌療法、眼科、口腔手術和牙科 學、耳科學的應用，降低肺部不感染中的病原體、降低燒 傷、灌洗中的病原體、降低移植器官中的感染負荷、降: 自體或人工組織移植的細菌負荷、口服消毒抗真菌療法、_ 囊腫纖維化或其他會產生生物膜的疾病之生物膜治療、病 毒感染之治療 '皮膚病之治療、以及組織修補和再生，該 方法包括使用本發明的溶液，把該溶液施 部位。 要治療的 使用於大約25平方公分大小的慢性創傷之劑量在人有 2到200毫克活性成分之3〇毫升溶液的範圍， ▲ x、中該活性 成分疋NNDCT，每天施用1到1 〇次。在某此 ‘ w況之中， 該組成物可包含〇. 1至i 〇〇mM活性成分。复仙由 、 /、他應用的劑量 可被調整到該表面積，視何處需要抗微生物活、 的嚴重性而定。 U及感染 本發明的組志,物 過的 在一方面’溶液形式的組成物是經滲透墨平货 27 並且具有最小的細胞毒性。 在另方面本5兒明書所說明的組成物具有大約丨〇〇〇 至大約5000的治療指數’該指數的定義係藉由其在—小時 中對k L929取肺上皮細胞與初級人類纖維母細胞二者的 5〇%抑制濃度細胞毒性指數（IC5〇)相對於其在37〇c對抗大 腸桿菌ATCC 1 1229 -小時的最小殺細g濃度之比值。 *因4本發明的組成物是非毒性的並且具有抗細菌的性 貝匕們有用於任何希望有抗微生物性質的應用。此種應 =包括但不限於治療創傷、燒傷、以及口瘡；沖洗；組織 部位的清理（例如：手術前和手術後）；眼科學的應用（例如， 在隱形眼鏡的清潔液中或在眼科手術之前 '期間或之後的 眼睛沖洗）；用於皮膚學的應用，牛皮蘚；以及許多對於熟 習本技藝者立即顯見之應用。應用也包括消除或降低包括 醫學設備、儀器、裝置或食物（不限於肉、水果、蔬菜）的表 面病原體，以及食物的接觸面包括消除或降低細菌的生物 膜。不同於許多用於相似應用之抗感染組成物，本發明的 組成物具有最小至無的副作用。 包含式（I)、（II)、（III)或（IV)的N，N-二函代胺基酸及其 衍生物之本發明的組成物可併入許多應用之中，包括端帶 或創傷敷裹料之中。生理性平衡的酸性溶液形式之組成物 可與特定設計的繃帶一併用於創傷治療方法之中。專門的 端帶可包括一個開口或「窗口」，經由該開口或窗口可施 用局部治療物質如本發明的溶液。 本說明書亦揭示的是一種包含被包裝在容器中之本發 28 1376364 f，’且成物之製造物件。與本發明的組成物接觸的容器表面 是用不與氧化劑反應的材料製作的。 n’n-—鹵代胺基酸及其衍生物之溶液的穩定性容許使 用對病患使用而言為實用的不同之包裝形式。該溶液可包 裝在數個單次使用之3G毫升具有鐵福龍内襯栓蓋的破轴色 :璃瓶中並且用膠帶密封以確保氣密。在一方面，同樣的 冷液可以包裝在250毫升琥珀色玻璃瓶中或毫升不具 反應性的塑膠瓶裡。然而，可使用高彡5公升的瓶子，因 為：種較大的體積對於治療燒傷是實用的。貯存在這些貯 藏盗中確保了本說明書所詳細說明的組成物之用途所需的 ，期穩^性。例如，貯存在冰箱中的小瓶裡之本說明書所 。兄明的濃度範圍内之N，N•二氣牛石黃酸溶液在三個月的期間 =後於㈣時損失不超過13%的N，N.二氣牛續酸。此外， 包含一個雙槽系統’其中成分A與成分B混合以形 最，s的產物一N，N-二齒代胺基酸或其衍生物。 在面’本發明的溶液可以者貯存在單次使用的容 盗，。另—方面，本發明的溶液可貯存在各種不同大小、 構型並且具有適用於如本說明所揭示 同體藉$ a# J W罵之應用上的不 二=之早次使用容器卜在某些應用之中，例如本發明 •冷飞可以貯存在單次使用的3〇毫升， 容器中。— 饥而要為可丟棄的 形劑在室、”方面本發明的組成物可與醫藥上可接受的賦 在至&•下於惰性的氣體中以粉末貯存。 本發明的組成物可包括以下醫藥切接受 化以$1丨榮pp / 秋背彳 氣 到專張性、緩衝劑、穩定劑、溶劑、風味劑（在口 29 1376364 服或鼻咽施用及食品工業的情形中)、防腐劑、稀釋劑、延 展劑和其他輔助的物質或賦形劑。可使用之醫藥上可接受 盥2齊丨和賦形劑的特定貫例說明在《雷明頓氏：製藥科學 與貫務》，A.Gennaro 編著，第 2〇 版，Lippinc〇tt， i^iams&Wilkms公司出版’位於賓州費城市；《高等藥物 科子》（David Ganderton，Trevor Jones 編著，1992 年）；《高 等藥物科學》，第 7 版，（DavidGandert〇n Trev〇rj_s、 hmes McGinity編著，1995年）；其等所揭示的内容完整的 併入本6兒明書之中。一般而言，水、適當的油、生理食鹽 火低級醇類以及二醇類如丙二醇或聚乙二醇可為溶液的 適當載劑。在—方面’溶液包含呈水溶形式或水溶液介質 可溶形式之活性成分，例如鹽與適當的穩定劑一起，且若 需要包含緩衝物質。此外’溶液可含有防腐劑，如氣化苯 曱羥敍、對羥笨甲酸曱酯或丙酯、和氯丁醇。適當的醫 藥載劑說明於《雷明頓氏：製藥科學與實務》，其為以上 鑑認之本領域的標準參考書。 該組成物可進一步包含其他的活性成分，如H〇c丨或其 他杬細菌劑，只要他們不會干擾本發明之N，N•二鹵代胺基 酸之穩定性或功能。 本發明之組成物中的N，N_二鹵代胺基酸之量或濃度可 在廣的I!圍之中變化。例如，組成物可以含有該組成物之 從0.001到100重量％之N，N二齒代胺基酸。在的情 形下，該組成物可以粉末的形式施用而不需任何載劑物 質。該組成物的典型範圍包含該組成物之〇丨至95重量％ 1376364 的N，N_二鹵代胺基酸，例如〇1至5〇%，或〇】至ι〇%，例 如0.5至5%。在溶液中’通常施用較低濃度的N，N二鹵代 胺基酸。例如，i到2%的濃度適用於潤洗或喷灑的情形。 在鼻咽施用的情形中，可使用含有1%N，N_二鹵代胺基 酸或其鹽之溶液，pH 3.5到5之鼻用的導管，對每一次治 療使用大約10到15亳升的溶液經數週之久。在每次治療 之後，把潤洗液抽吸掉。 使用本發明組成物的特定太法 ' 1 - ♦. 在一方面，本發明的組成物是局部施用或使用的。 本發明的酸性溶液可用力治療—些有深度創傷的病 患，該病患是對於常見的醫藥品和局部施用的洽療沒有反 應者。在一方面，本發明提供治療各種醫學狀況的方法， 如促進創傷癒合、降低在開放性創傷的病原體、.創傷去污 染、眼睛消毒或去污染、口腔消毒、抗真菌療法.、眼科學 的施用、降低肺部感染的病原體、降低燒傷、灌洗的病原 體、降低移植器官的感染負荷、降低自體或人工組織移植 的細菌負m肖毒抗真菌療法、囊腫纖維化和相關疾 病的生物膜治療、病毒感染之治療、丨膚病之治療、以及 組織修補和再生’該方法包括使用本發明的溶液，把該溶 液施加到需要治療的部位。可用本發明溶液處理生物膜之 非限制性的實例包括引用s. Kjelleberg和M〇iin於pmid . ⑽7677(MEDL訓之PubMed索引），標題為〈在細菌生 物膜中特選隊員（quorum)信號是否扮演著一項角色？〉之呷 31 6364 論文章。 本發明的溶液對於降低細菌負荷可能有效，因此會增 進創傷疾癒。S亥溶液較諸於先前技藝的溶液可以良好耐 又、增進創傷組織長成肉芽、降低清創術的需求，且病患 在其治療期間報告較無疼痛。 口腔謨理 本發明的酸性溶液可藉由潤洗受感染區而用於治療口 瘡（口部潰瘍）或單純疱疹（cold sores)。例如，可使用該溶液 將單純疱疹泡浸3-4次/天，每次施用2-3次，並將該溶液 接觸瘡處經20-30秒來使用該溶液。該溶液亦可用作為口腔 漱洗以俾牙齒和口腔的衛生並且控制感染。在此情況之 _1_ ，該溶液可以用作為漱口液以對抗喉嚨的感染。.該溶液 ° 乂仏助棉花擦栻以對更多特定區域施用。該溶液可以根 據病患的需求與狀況一天使用一次或數次。 _眼科的雜扭. 本發明之生理性平衡的酸性溶液可用於替代生理食鹽 將外來物從眼晴上移除、潤洗或灌洗眼部。其可在手術 剐或後局部施用以消毒眼睛和週圍的組織。該溶液可以根 :内心的而求和狀況一天施用一次或數次。該溶液可依需 二由直接滴加到眼睛來施用。其亦可藉著浸泡紗布並將 飽和的紗布施用到眼部1分鐘或數分鐘來施用。其亦可藉 ^ ^的用飽和的紗布擦適眼睛來使用於眼部清潔。該溶 32 1376364 液亦可倒入小的眼用洗濯器，然後將該洗濯器倒轉至眼睛 上並使眼皮打開和關閉數次。 本發明之生理性平衡的酸性溶液可用於處理眼部的消 毒或去污染。此外，其可用作代替硝酸銀消毒新生兒眼睛。 本發明的溶液可以用於清潔成人與小兒的眼睛。例 如，各種病毒感染、細菌或真菌的感染、或病原體可以用 本發明的溶液有效的治療。可以成功的用本發明的溶液處 理之病原體的非限制性實例包括砂眼小體（Chlamydia trachomatis)、淋病以及其他細菌的、真菌的和病毒的感染。 6貝者會發現本發明的溶液具有治療許多不同形式創傷 的應用丨生，包括但不限於糖尿病的潰瘍、壞疽、靜脈潰瘍、 褥瘡潰瘍、壓力潰瘍，咬傷、急性傷口的創傷、手術創傷 和燒傷。本發明的組成物也有用於做為灌洗溶液，例如在 牙科牙周的和眼科的程序當中。本發明的組成物亦可用 於手術前和手術後清潔組織部位，並做為漱口液以治療口 瘡。 利用溶液造杆皮膚洁卷的方法 本發明的溶液亦可用於治療受感染的皮膚。在病患顯 不感染的醫學徵狀之皮膚上，本發明的溶液可以直接施用 到文感染的皮膚部位。在使用本技藝已知的標準施用方法 至少將溶液施用一次到受感染的皮膚上之後，該溶液的消 毒性質即可被注意到。 降低肺部感染的症，轉 33 / VJ JUH- 如，容液可以用於降低肺部感染的病原體。例 有效地户療=或細菌的和真菌的感染可用本發明的溶液 包括在；！ 本發明溶液有效治療的非限制性之實例 及類彳的炭錢子，以及降低細菌包括鏈狀细菌 及類似者在肺部所引起的肺炎。 菌 用於婦种學岣卞十 本發明的組成物可用於治療婦科的感染，如 :類：者。例如，各種微生物、酵母菌(例如念珠l ^ tit ^ n Candida albicans f ^ ) i ^ ^ . HS:-2、HIV或其他病原體可被本發明的溶液有效的處理。 視而要本發明的;容液之施用7以與其他醫藥品一起使用以 治療婦科的感染。例如，用做為疑有花柳病之懷孕女病患 產道的清洗，並且可作為嬰兒在醫院產間剛出生的洗浴和 清潔溶液’或做為透析室中導管和分流器的消毒劑。 ii_療局部减染的伸用方法 本發明的化合物可藉著將其併入用於局部感染狀況的 乳霜、軟膏或洗液以用於治療局部感染。此種乳霜、軟膏 或洗液可使用於廣泛種類的皮膚狀況並可併入穿透促進劑 已將該化合物的抗微生物活性運輸到存在於皮膚之外層（上 皮）以下的徼生物。 g防手術部位感染的傕用太法 34 1376364 為灌洗劑以預防手 延長住院並且偶而 水實質上可以降低 延長的手術’其感 本發明的等張溶液可在手術中用作 術邛位感染的產生，該感染經常會導致 會導致死亡。使用本發明的溶液替代鹽 此種感染的風險，尤其是在胃部手術和 染比例可高達10%。 和手街器妯 •本發明的溶液可詩降低醫療裝置和手㈣器材表面 的病原體’以預防使用該器材和裝置或被植入的 感染。 該溶液亦可用於降低或消除發生在尤其易於受到感染 之導管和分流器入口之感染。 的傕用方法 本發月的冷液可以直接施用或經由能產生喷霧（霧化 的裝置輪送到一個房間、運輸工具内部或其他此等大型自 受限制的空間以減少或消除懷疑可能存在之具感染力的^ 原體在此種應用f中，其可用於使已被搞測到有具感寄 力病原體的手術房、或是生物武器用劑已經被散… 間、運輸工具和其他表面除去污染。 全的#用古汰 本發明的溶液可以用於降低食品（包括但不限於肉、水 果和4菜）_L的病原體。該溶液可以沖洗液或喷霧的形式施 35 1^/0364 加到食品上’或可將食品沾浸到溶液中。牛項酸可能是這 種施用法的主要殘留產4勿，並且牛橫酸是一種被認為在人 類食品上是安全的必需營養素。 本發明的溶液亦可施用於製備食品的表面和器材以防 止病原體從此種表面和器材轉移到食品上。 用作抗微生物防腐齊丨的方法 本發明的化合物可用作為確保微生物無法存活在意圖 使用於庄射、灌流或意圖使用於眼睛的溶液中之工具，其 係藉由將適當量的此種化合物在製造之時併入到溶液中。 通作抗微生物劑的方沐_ 本心明的/谷液可用做為安全和迅速消毒外科醫師和護 士的手部以降低感染劑輸送到手術房之風險的方法。此 外本發明的溶液可用於消除來自病患（手術前及後）皮膚在 手術傷口區域之感染劑。 創傷鑊理的方法 有長久不癒之創傷的病患應以本發明之生理性平衡的 酸性組成物每天處理’典型上是一天一次或兩次。 本發明的溶液可以如下方法使用：將一塊紗布材料或 ’>布塾用足夠的溶液預先浸泡以使其飽和，然後擠塵以除 去過量的溶液^這樣移除掉紗布中會與本發明的溶液反應 並降低其效果的物種。在此程序之後紗布已經濕潤，但卻 36 1376364 非浸泡。然後施加更多的溶液使紗布完全濕潤，立即施用 到創傷上。或者，可將紗布施用於創傷上然後施用更多溶 液。典型上該創傷部位用溶液浸泡的紗布包紫，並且視需 要可在包紮的創傷上方施用一塊凡士林紗布以保持其濕湖 且無π染的微生物。然後如本技藝之標準將創傷部位用創 傷敷裹料包袤起來。該溶液亦可用於清潔創傷藉著直接 將它倒在創傷的部位以便藉由機械程序移除掉任何壞死的 組織，並且也用作為清潔劑或灌洗劑。 病患亦可利用NovaCal公司提供的「創傷護理套组」， 其容許病患週期性的將本發明的溶液倒到創傷部位而不」 要移除掉敷農料。該套組提供容易使用、可攜帶性和顯著 降低創傷曝露和再感染。該創傷護理套組包括含有本發明 的溶液以及端帶材料的包裝物。經常該套組含有本發明溶 液和用於和該溶液合併的專門的端帶之包裝物。當創傷經 治療時。該專Η的繃帶保持創傷周圍的皮膚乾燥。而且， 該繃帶可以在醫師的診所或醫院中施用；對在家持續護理 的病患而言，可在醫師的指示下在家施用和使用，·或 於小傷，該創傷護理套组可由* m由病患本身制作為「櫃檯鎖 售（over the counter)」的治療。 用於某些用徐的句.声 明的另一方面’本發明的溶液可以經過包 谷液包3於個別的單次使㈣以巾。該單次使用的笔 盗可以使用於例如施用於單次更換敷裹料或其相等物。才 37 1376364 發明之早次用途的容器可愈堂田 益』與*用的繃帶聯合使用。在本 明的另一方面，創傷護理套组可白 x 。。 1包含本發明溶液的單次使 用各窃與用於許多次施用的專門的繃帶。 在本發明的另一方面，本發 个赞明的溶液可以原位的方式 製造’藉由一個雙槽的裝置.白 衣直急包裝物，如下圖所示具有或 不具有第三個混合用容器。 就地製備NNDCT的雙槽容器

該雙槽可包含兩個針筒或貯囊。為了製造例如濃度為 3.2mM ’ ρΗ3·5的NNDCT的溶液，A槽裝滿】2 8mM 溶液，B槽裝滿溶解在酸化的丨8%生理食鹽水之3 3mM牛 磺酸。B槽溶液的酸性經以1MHC]調整，使得兩槽的溶液 在共同的輸送管中或在C混合槽中相混時，其反應會產生 所需的NNDCT濃度和ΡΗ值。由於牛磺酸在酸性溶液甲是 穩定的，並且NaOC]在室溫下是穩定的，所以使用以上說 38 1376364 明的就地（on-site)製備法可避免掉NNDCT的穩定性問題。 【實施方式】 實施例 1 製備方法 試劑：所有的溶液均以去離子水或Millipore水製備。 NaOCl(6%)溶液購自VWR公司。牛磺酸係購自Sigma公司。 NaCl和HC1是試藥級的。 Ν,Ν-二氯牛碏酸（NNDCT)的合成與鑑定 在本研究中，NNDCT是藉著將牛磺酸粉末溶在H0C1 溶液（pH 3.5)中以HOC1/牛磺酸比例為2製備的。 H2N-CH2-CH2-S03H + 2 HOCI— C12N-CH2-CH2-S03- +H+ +2H20 為 了製造 1 公升 1.6mM NNDCT 於 0.9%NaCl，pH 3.5 溶液，將8.6公克NaCl添加到1000毫升的定量瓶中，然後 把5 00毫升Millipore水添加到瓶中以使鹽溶解。把2毫升 1M HC1力口入NaCl溶液中，接著添加22毫升0.158M的 NaOCl 〇將溶液混合。然後添加0.207公克牛磺酸到瓶中並 且在定量瓶中裝入Millipore水至標線。將溶液攪拌5分鐘。 NNDCT在300nm下具有最大吸光值，其莫耳吸光係數 為。當Ocl_溶液（pH 9.5)添加到牛磺酸溶液中 時，N-氯牛磺酸（NCT)(C1HN_CH2-CH2-S03_)是唯一形成的 產物。 h2n-ch2-ch2-s〇3H + ocr cihn-ch2-ch2-so3' + h2o NNDCT和NCT在光譜分析術上是可區辨的。NCT在 39 1376364

252nm有最大吸光值。NNDCT的產率是從其在300nm的吸 光值計算而得。這種製備法產生產率為91%的NNDCT。碘 滴定得到的I2/NNDCT比率為2。這提示了 NNDCT保留了 HOC1的兩個氧化當量。NNDCT中兩個氯分子部分都能使 Γ氧化成12。NNDCT在溶液中會分解，但是在低溫則較為 穩定。NNDCT溶液（pH3.5)的穩定性研究是在三種溫度下進 行的：4°C、室溫和40°C。該溶液被封裝在安瓿中。NNDCT 在三種溫度下的穩定性順序如下：4°C>室溫>40DC。在4週 裡，當貯存在冰箱中（4 °C)時，損失5.4%的NNDCT([NNDCT] 初始=1。 N，N-二氯牛磺酸在pH 1到10的範圍裡非常能溶於水 中。Ν,Ν-二氯牛磺酸可用UV光譜分析術來鑑認和定量測 定。Ν，Ν-二氯牛績酸在300nm有最大的UV吸光值且其莫 耳吸光係數為370 M^cnT1。

NNDCT不會揮發。把1.47mM於0.9%生理食鹽水， pH3.5的溶液裝入兩個玻璃瓶内。把一個瓶子蓋緊，而另一 瓶則鬆鬆的蓋上。於室溫下4週以後兩瓶中NNDCT的濃度 並無差異。 分離出純的粉末形式之NNDCT並貯存在鈍氣之中，這 樣提供較穩定的NNDCT來源。此外，將固體基質的NNDCT 重新調配成藥片的形式有助於NNDCT的穩定化。這種藥片 調配物被挑選以防止分解，而其在意欲的醫藥施用上（隱形 眼鏡消毒、其他應用）也提供了使用的方便性。 實施例 2 40 1376364 抗微生物活性 殺細菌的活性·· 為了測定殺細菌活性，五 (AT⑽⑽）。將細菌培養物稀釋在腸桿菌 備接種物。把各種試驗物質倒入乙 ^水裡以製 菌落形成單位（咖)/毫升細菌的個別心中:到2·〇Χΐ〇5 振動混合’然後在37。(：培養】或二一且以溫和的 田/«· 4 >7 Βϋ· h ^ β右試驗物質# =防腐劑，為了儘可能模仿該狀況，則可在體内生產， 在私疋的接觸時間之後於不加 Λ Λ ^ 7 d的狀況下立即將細菌 ίΓΓ 培養，並且在添加中和劑的狀況下獨立 二板:養（做為對照組）。從而在i小時或24小時的接觸時 間之後將（M亳升移出並？平板培養，平板培育在m 並且，直接菌落計數器來計算細菌的數量以便將存活的細 菌數ΐ化為CFU/毫升。用無菌〇·9%生理食鹽水做正的生長 對照組。所有的試驗物件均測試三次。將結果表格化以顯 示H〇a、ocr、NNDCT> 〇·9%生理食鹽水在各種ρΗ程度 的抗微生物效果之範圍比較。在ρΗ 3 5，NNDCT顯示於6〇 分鐘其有效的抗微生物濃度範圍介於〇 〇149至丨49mM，並 且於24小時其有效的抗微生物濃度範圍介於〇 〇〇〇149至 1.49mM，然而H0C1的有效抗微生物濃度範圍於6〇分鐘是 攸0.016開始而在24小時是從0·001 6mM開始。在pH3.5， NNDCT係優於H〇ci或如HOC1 —樣有效於對抗E c〇li。 在這些第一次的研究當中，吾人已經（平行）展示了 N-氣胺類與各種試驗物件之殺細菌與細胞毒性輪廓圖β N_氣 1376364 牛磺酸（NCT)與Ν,Ν-二氯牛磺酸（NNDCT)係根據以上說明 的方法以控制的pH在0.9%生理濃度的NaCl中合成的。這 些溶液在分析其生物活性以前先測試其生理化學的性質。 稀釋的NCT和NNCDT溶液是無色並且等張的且展現極為 快速的抗微生物活性。這些抗氧化劑的生產似乎是pH依賴 性。NCT唯獨在鹼性的pH中形成，而NNDCT是在酸性的 pH中形成。

利用NNDCT在pH5.0和3.5之本發明溶液中和NCT 在pH9.5之比較性的抗微生物檢驗顯示在37°C 60分鐘之 接觸時間内，NNDCT在pH3.5時大約超過NNDCT在ρΗ5·0 時殺細菌（大腸桿菌）效率的300倍，且NNDCT在ρΗ3.5時 之殺菌效率與NCT在ρΗ9·5相較高出1000倍（表1)。 表1 :產物的總結： 產物 顏色 pH 張力 物理狀態 MBC (微克/毫升） NCT 澄清 9.5 等張 溶液 142.5 NNDCT 澄清 5.0 等骯 溶液 38.0 NNDCT 澄清 3.5 等張 溶液 0.136

MBC是最小殺細菌濃度。 抗微生物活性和殺死的時間不僅是濃度依賴性的並且 經由降低pH而顯著地增加。在相等的濃度基礎下，NCT要 比NNDCT較不抗微生物1000倍。 實施例 3 細胞毒性檢驗： 42 1376364 細胞毒性的研究疋用最初由Scudiero等人描述，利用 3-(苯胺基羰基）-3,4-四唑鐫-雙（4-甲氧基-6-硝基）笨續酸水 合物（XTT)的比色分析檢驗系統、ProCheckTM細胞存活率檢 驗（可溶性四唑鑌/甲潛（formazane)檢驗對於用人或其他腫 瘤細胞系之中細胞生長與藥物敏感性的評估，由Scudiero DA、Shoemaker RAH、Paul KD、Monks K、Tierney S、

Nofziger TH.、Currens MJ、Seniff D、Boyd MR.在《癌症 研究》’ 1988年9月1日發表；第48期（17) : 4827-33頁）。 其他研究者使用相似的方法測定細胞盼存活率。三種細胞 形式被使用：老鼠的肺部上皮細胞（L929)、培養在Dulbecco 氏修改的Eagle氏培養基和以角質形成細胞定義之具有對 應生長·因子加上抗體的培養基中之初級人類皮膚纖維母細 胞和初級人類角質形成細胞。將細胞用胰蛋白酶處理並且 在顯微鏡下計算數目，且以1〇〇〇-2〇〇〇細胞/每孔播種到％ 孔平盤的平坦盤底。容許細胞在37〇c隔夜生長。隔天，將 組織細胞培養基去除並將細胞用新鮮的培養基1χ潤洗然後 留置在5〇微升的組織培養基中。把試驗物件製備成兩倍的 稀釋物並且對每組4孔（每孔總體積=25〇微升）添加入2〇〇 微升。在室溫下使細胞接觸於試驗物件6〇分鐘。在接觸時 間後立即將試驗物件從每孔中移除並對細胞餵以25〇微升 的新鮮培養基。將平盤培育在37〇c下經過ι8·2〇小時。以 下日數的培養基再次被移出並且置換上含# 1()/刚微升 XT〇T試劑的100微升/孔新鮮培養基。在生長條件下（在 5 /〇C02的溼氣化培育箱中）培育細胞，避免照光， 43 1376364 直到顏色產生。用 Molecular Device ThermoMax Plate reader(分子設計公司出品的最大溫度平盤讀取機）在45Onm 下讀取吸光值並且用750nm做為參考波長，在只有培養基 的檢驗用空白孔中使平盤歸零。用僅接受XTT試劑的未經 處理細胞做為陽性的細胞增殖對照組。 當細胞抑制濃度毒性指數（CCI5G)經測定時（以50%細胞 仍存活來測定），在XTT檢驗，NNDCT的CCI5〇是在7mM， 並且顯示出實質上較高的初級人類皮膚纖維母細胞之細胞 存活.率，其高於 HOCl(IC50 = 0.8mM.)、優碘（IC5〇=0.01mM) 或OCr(IC5〇=0.66mM)的CI5〇。在老鼠肺部上皮細胞（L929) 上進行的XTT檢驗得到相似的結果，其中對NNDCT而言 在濃度7mM觀察到高於90%存活率，相對地對OCl_而言在 濃度0.6mM和優碘而言在濃度0.02mM觀察到實質上少於 5 0%的存活率。 細胞毒性與治療指數 利用美國藥典之標準細胞檢驗（老鼠肺部上皮細胞， L929)以及初級人類皮膚細胞對NNDCT進行嚴密的體外安 全性檢驗。吾人發現與其他消毒試驗的物件：HOC1和普威 隆碘相比，NNDCT在兩種細胞型式：初級人類纖維母細胞 和L929細胞之尹均具有非常低的細胞毒性指數（請見下 方）。不像普威隆碘，其細胞毒性是主要的考量，NNDCT顯 示其為細胞可相容者，具有更為安全的毒性輪廓圖。事實 上，NNDCT之治療指數（其定義為受檢驗細胞可容忍之濃度 44

Claims (1)

1376364 申請專利範圍： 丨公告丰 101年9月必曰修正替換頁 1‘ 一種用於控制或預防細菌、微生物、抱子、真菌或病 毋之生長或感染物及感染源增生之醫藥組成物，其包含式（J) 的N，N-二函代胺基酸或其衍生物， A-C(R'R0)R(CH2)n-C(YZ)-X5 ⑴ 其中A是Hal2N-; Hal是選自由氣、溴和碘組成之組群中的齒基； R是碳-碳單鍵或具有三到六個碳原子的二價伸環烷 基；

R疋氮、C丨院基和基圑-COOH; RQ是cv6烷基；或 R和R與它們所連接的碳原子—起形成（C3_C6)環烷 基環； η是0或1到13的整數； Υ疋氫、C丨·6烷基，_Νη2或_NHal^ Z是氫及CU6烷基；且 價伸環院基’ n是〇或高達且包含i】的整

若R 該二價基R或-(CH2)n-視需要經_NHai2取代； 該衍生物為醫筚上可垃Α λα @ v處辫匕1-6烷醇所成 或-ΝΗ2基連接到取代Αχ，料接㈣原子 衍生物。 樂上了接文的鹽、與CN6烷醇所成之 炫 2 ·根據申請專利範圍 -石炭單鍵且η是〇或}到 第1項之醫藥組成物，其中 7的整數。 R是碳 50 1376364 101年9月β日修JL替換頁 3. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組成物，其中η是〇 或1到5的整數。 4. 根據中請專利範圍帛1項之醫藥組成物，其巾Ν，Ν-二鹵代胺基酸包含1個或2個_NHal2基。 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組成物其中n,n_ 二鹵代胺基酸包含1個_NHal2基。 6. 根據申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其中A是 -NHal2。 7. 根據申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其中_刪2每 基係連接到二價基R或_(CH2)n-基。 8·根據中請專利範圍第丨項之醫藥組成物其中叫是 氣基。 9. 根據中請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中該衍生 物是醫藥上可接受的鹽。

10. 根據申請專利範圍第i項之醫藥組成物，該組成物 /、有N，N-一鹵代胺基酸或其衍生物之濃度在〇 1至 之間且pH範圍在大約2至大約7之間。 U.根據申請專利範圍帛1項之醫藥組成物，其中R 疋石厌-¼單鍵且η是〇或丨到5的整數。 12.根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中言! 樂：成物是含在貯藏器中確保其殺細菌、抗細菌、抗感I 抗=物、殺孢子、消#、抗真菌或抗病毒用途所需之 期穩定性。 13.—種包含式（π)的 Ν，Ν'二_代胺基酸或其衍生物之 51 1376364 101年9月ι没曰修正替換頁 奏且成物的用途， Hal2N-C(R YZ)-X (n) 其中Hal是選自由氣、溴和碘組成之組群的鹵基； R1是氫、Ci.6烷基和基團-COOH; R〇是C,.6烷基；或 R1和R。與它們所連接的碳原子一起形成一個（C3_C6) 環烧基的環； η是0或1到3的整數；

Υ是氮、C!_6烧基或-ΝΗ^ ; Ζ是氣和C!_6炫•基；且 X 是-so3h ; 該衍生物係選自由醫藥上可接受的鹽類、與cl-6院醇 所成之酯類，及-NH2基連接到取代基X所連接的碳原子上 之C〗·6烷醯基衍生物組成之組群；和一種醫藥上可接受的 載劑； 。玄組成物具有pH範圍在大約2至大約7之間，於製備 用於殺細菌、抗細菌、抗感染、抗微生物、殺孢子、消毒、| 抗真菌和抗病毒用途的醫藥品之用途。 14.根據申請專利範圍第13項的用途，其中該組成物具 有n，n-二_代胺基酸或其衍生物之濃度在介於〇1至 lOOmM之間的濃度。 1 5.根據申請專利範圍第13項的用途，其中該醫藥品是 在射藏斋中確保其殺細菌、抗細菌、抗感染、抗微生物、 权化子、消毒、抗真菌或抗病毒用途所需之長期穩定性。 52 1^/6364 101年9月1公日修正替換頁 I6.根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其為等張 且為生理性平衡的。 17·根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其具有大 勺1000至大約5000的治療指數，此係以其對L929鼠肺上 皮細胞和初級人類纖維母細胞二者於一小時之IC5G相對於 . 對大腸桿菌於—小時的最小殺細菌濃度之比值所定義 的。 18. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中Ri是 風或C】.6貌基；〇是〇、i或2; γ是氫或Ci6烧基；z是氫· 及c,_6烷基；且X，是_s〇3H;或其衍生物；該衍生物係選自 由醫藥上可接受的鹽類或與Cm烷醇所成之酯類組成之組 群。 ’ 19. 根據申請專利範圍第18項之醫藥組成物，其中γ 矛Z每個係氫，X ’是-S〇3H ;該衍生物係選自由醫藥上可 接受之鹽類所成的組群。 2〇·根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中N，n_ 二函代胺基酸是選自由N，N-二氯-2,2-二甲基牛磺酸、ν，ν· % 二氯-1，1，2,2·θ甲基牛續酸、N，N_u，2二甲基牛續酸、 N’N 一肩1’1’2’2-四甲基牛石黃酸、N，N_二氣_2_甲基牛確酸、 N，N-一虱-3,3·二甲基高牛磺酸、或其衍生物組成之組群的 · -員；該衍生物係選自由醫藥上可接受的鹽類和與。烷 . 醇所成之酯類組成之組群。 21·—種根據中請專利範圍第1項之醫藥組成物的用 途，其係用於控制或預防細菌、微生物、孢子'真菌或病 53 1376364 101年9月Θ日修正替換頁 :之生長或感染物及感染源增生的方法，其包括施用有效 量之組成㈣需要該控㈣㈣生長或增±的排除人體或 動物之區域、空間或物質上。 22.根據申請專利範圍第21項的用途，其中待處理的物 質係選自由食品、動物飼料、手術儀器、手術設備、醫療 裝置和用於此等目的之設備所組成的類別。 十一、圖式：

(無）

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