TWI334929B - Screening method for prediabetic state and regent for screening - Google Patents

Description

1334929 五、發明說明（1) [技術領域] 本發明係有關一種可簡便地檢出耐糖能力障害所導致 之前期糖尿病狀癌之筛選方法及其筛選用試藥者。 [技術背景] 目前曰本之糖尿病患者推測約有6 9 〇萬人，若進一步 加上可視為前期糖尿病狀態之耐糖能力障害的患者，則其 人數推測約為1 3 7 0'萬人。又’特別是，對4 〇歲以上之日^ 人而言’可說每1 0人中即有1位糖尿病患者。

就糖尿病而言，一般均係經由所謂臨界型之耐糖能力 障害階段而演變成糖尿病’此狀態若能早日檢出而提早進 行治療，則可抑制糖尿病之發展。 目前為止，臨床上診斷耐糖能力障害之方法為測定空 腹時之血糖值及經口攝取7 5 g糖（糖負荷試驗）後1小時及/ 或2小時之血糖值。空腹血糖值（以下簡稱FBS)因身體負擔 少而常被用於_選’根據日本糖尿病學會之判定基準，未 滿110mg/dl為正常型，11〇至i25mg/dl為臨界型，高於 1 2 6rag/dl為糖尿病型。然後根據上述診斷結果，再對疑似 糖尿病患者的人進一步進行經口攝取75g糖之糖負荷試 驗’並根據下列基準進行最後之判定：糖負荷試驗2小時 之血糖值不滿140mg/dl為正常型，140至190mg/dl為臨界 型’大於200mg/dl為糖尿病型。 然而’上述根據F B S之判定法對不安定型之糖尿病、 以及受檢查前一天晚上之飲食内容的影響而言，並不能說 是一定正確。又，75g糖之糖負荷試驗至少在2小時内要頻

第7頁 1334929 五、發明說明（2) 頻採血，對患者身體而言是多餘的負擔，並不能說是一種 良好的方法。 目前為止，前期糖尿病狀態及糖尿病狀態之檢出方法 包括，例如，下述所揭示之方法。 ①糖攝取後經過一定時間時測定哺乳動物患者尿中之 •D-指肌醇（D-chiroinositol)之量或增加率，同時同樣地 測定正常人之尿中之D -指肌醇之量或增加率，然後藉相互 比較而檢出前期糖尿病狀態之方法（特開2 0 0 0 - 2 9 8 1 3 1號公 報）。 «②針對哺乳動物患者之糖尿病狀態之可能存在情形， 該患者之尿樣品進行篩選之方法，其特徵包括：（1 )將 該樣品保持於無細菌之環境、（2 )分析該樣品中D -指肌醇 是否存在，如果不存在，或顯示無生體内效果之顯著低程 度者為具有糖尿病狀態之微候，此低程度至少為非糖尿病 患者之1 0-3之低程度（特許第2834321號公報）。 ③根據與糖尿病症狀具有關連性之指肌醇含量作為胰 島素抵抗性指標之方法，其特徵為測定哺乳動物患者之尿 樣品或血清樣品中之指肌醇含量，藉以檢出與糖尿病症狀 具有關連性之胰島素抵抗性之方法I特許第3 1 1 8 4 5 8號公

④根據胰島素耐性對人類進行篩選之方法，包括測定 體液中之D -指肌醇濃度之步驟、測定體液中肌醇 (myoinositol)濃度之步驟、計算肌醇對D -指肌醇之比值 的步驟、以及將算出之比值與胰島素耐性之特徵比相互對

第8頁 1334929 五、發明說明（3) 照之步驟，若該算出比值超過胰島素耐性之特徵比，則斷 定該被測試的人為胰島素耐性者（特表平1 0 - 5 0 7 8 2 6號公 報）。上述①至④之篩選方法係利用尿液而不須採血之檢 查方法，但是須在糖負荷後一定之時間採取尿液，對受驗 者而言有一定程度之時間上的拘束，因此還稱不上是一種 適合之般檢驗之方法。此外，測定方法複雜，有無法處理 多數檢體之缺點。' [發明之内容] 因此，本發明之目的係提供一種不會帶給受驗者在身 體上、時間上及費用上太多之負擔，而又可以更正確地判 定經由耐糖能力障害所導致之前期糖尿病狀態、同時可處 理多數檢體之篩選方法、以及提供該篩選用之試藥。 為達成上述目的，本發明之前期糖尿病狀態之篩選方 法之一的特徵為：測定採自受驗者之體液的D -甘露糖濃 度，然後將此D -甘露糖濃度與預先設定之D -甘露糖濃度之 基準值進行比較。 又，本發明之另一種前期糖尿病狀態之篩選方法的特 徵為：測定採自受驗者之體液之D-甘露糖濃度及葡萄糖濃 度，然後將此測得之D -甘露糖濃度及葡萄糖濃度分別與預 先設定之D -甘露糖濃度基準值及葡萄糖濃度基準值進行比 較。 於本發明之筛選方法中，上述體液較好是受驗者空腹 時之血液、血漿或血清。又，上述之D -甘露糖濃度基準值 較好是健康者空腹時所採取血液、血漿或血清之測定值經

1334929 « » 五、發明說明（4) 統計學處理所得之上限值。 又，根據本發明之篩選方法，對於以往藉F B S判定方 法容易遺漏之不安定型糖尿病患以及F BS顯示正常值之潛 _在性耐糖能力障害等前期糖尿病患可更正確地判定。 另一方面，本發明之前期糖尿病狀態之篩選用試藥之 -特徵為：包含在電子接受體存在下對甘露糖具有脫氫之氧 化能力的酵素及可·被該酵素利用之上述電子接受體。 在本發明之篩選用試藥中較好是進一步含有葡萄糖去 除劑。又，上述酵素較好是分類為酵素編號E C類1、1、 119之葡萄糖去氫酶，更好是由屬於葡萄糖酸菌屬 luconobacter)之微生物來源的六碳酸糖去氫酶。又， 上述葡萄糖去除劑較好是含有葡萄糖6位磷酸轉化酶及腺 苷三磷酸（ATP)者。此外，上述電子接受體較好是輔酶 NADP ° 根據本發明之篩選用試藥，不須經由複雜之酵素組合 系列反應，而可直接使用對D -甘露糖具有脫氫作用之氧化 酵素，因此可簡易地定量D -甘露糖，並可處理多數檢體。 又，在使用葡萄糖去除劑時，因不易受到樣品中葡萄糖之 影響，因此可獲得較正確之D -甘露糖的定量結果。 #施發明之最佳型態] 以本發明之篩選方法檢出之前期糖尿病狀態，係指由 飲食等而來之糖分流入血中之際，血中之糖不能充分吸收 至骨骼肌、肝臟、脂肪組織等末梢組織中，血糖值呈現上 升狀態者，亦即所謂耐糖能力障礙。又，本發明之適用對

第10頁 1334929 五、發明說明（5) 象係以人類為主，但亦適用於家畜、寵物等哺乳動物。本 發明中「受驗者」係包含此類哺乳動物。 本發明之前期糖尿病狀態之篩選方法係測定採自受驗 者之體液中的D-甘露糖濃度，將該濃度與預先設定之基準 值進行比較。又，更正確的是進行篩選之際，同時測定D -甘露糖濃度及葡萄糖濃度，分別將各濃度與各基準值進行 比較。 上述體液可例舉如受驗者之尿、血液等尤其同時進行 血糖值之測定時，以血液、血楽·或血清為佳，最好是空腹 時採取者更佳。 依據自受驗者之體液中測得之D -甘露糖濃度，判定為 前期糖屎病狀態所用之D -甘露糖濃度基準值，係測定預先 依據糖尿病診斷基準診斷為無前期糖尿病或糖尿病之多數 (較好數十人至數百人）健康者之體液（較好為血液、血 漿或血清）中之D -甘露糖濃度，由該結果以統計學處理而 求得之正常範圍，而可採用該正常範圍之上限值等為基準 而設定。 該基準值若對為數眾多之受驗者進行預備試驗，可更 正確的決定，本發明中並無特別限定，但依據下述實施例 判斷血中D-甘露糖濃度之基準值為9 # g/ml左右。因此， 於下述實施例中判定血中D -甘露糖濃度小於9 " g / m 1者為 正常，9 // g / m 1以上者為疑似前期糖尿病狀態。 D -甘露糖濃度之測定方法可採用週知方法，其中以可 處理眾多檢體之方法為佳，最好使用下述篩選用試藥進

第11頁 1334929 五、發明說明（6) 行。 又，葡萄糖濃度之基準值，較好採用以往之FBS基 .準，依據曰本糖尿病學會診斷基準（以小於110mg/dl者為 正常型，110至125mg/dl者為臨界型，126mg/dl以上者為 _ 糖尿病型）。葡萄糖濃度之測定係使用市售之自動分析裝 -置用試藥等。 以下，列舉有關本發明之前期糖尿病狀態篩選方法之 較佳樣式說明之。 首先，以常法採取較好是空腹時之受驗者之血液，較 «分離成為血聚或血清（以下簡稱為樣品）。此處之受驗 係指健康者、疑似糖展病患者、糖尿病患者等欲受檢是 否為前期糖尿病狀態之所有人士。 繼之，使該樣品於輔酶NADP等電子接受體之存在下， 與六碳醛糖去氫酶等對甘露糖具有脫氫之氧化能力的酵素 作用，藉由定量所生成之電子接受體之還原體量而測定D-甘露糖濃度。又，使用市售之分析試藥亦可測定同一樣品 中之葡萄糖濃度。 將如上所測得血中之D-甘露糖濃度及葡萄糖濃度之測 定結果，分別與各自之基準值比較以判定是否為前期糖尿 φ狀態。有關具體結果之判定為例如，D -甘露糖濃度超過 基準值而葡萄糖濃度在診斷基準值之正常範圍内之受驗 者，由於疑似耐糖能力障礙，而建議以口服7 5 g之糖負荷 試驗進行再檢查。 ' 又，葡萄糖濃度超過診斷基準值之受驗者，耐糖能力

第12頁 1334929 五、發明說明（7) '~~~' ---- Ϊ ΐ t可能性高’但D-甘露糖濃度未超過基準值時，由於 判斷是否為耐糖能力障礙。 飲，寺之攝取而 =此，藉由測定空腹時血中之D —甘露糖濃度，即可簡 便的檢出僅依據F B S判定# $ & & & & % / 礙。又^ 士 义矸難以檢出之潛在性耐糖能力障 ^ 中之D_甘路糖濃度與來自飲食等之血糖值之變 :相：其變動較小，，因此對疑似暫時性之血糖上 =可旎由D-甘露糖濃度而.判定是暫時性之血糖上升。 *外，測定空腹時血中之D-甘露糖濃度及葡萄糖遭 度，分別將其與各基準值進行比較，亦 葡萄糖，辰 夕她a从. ％订t匕权 处月匕檢出以口服7 5 2 負何試驗能檢出為耐糖能力障礙及糖尿病之 負荷後2小時之血糖值為14〇mg/dl以上）。 之試：了說明有關本發明之前期糖尿病狀態筛選方法所用 本發明所使用之酵素只要於電子接受體之存在 具有脫氫之氧化能力的酵素即可，i無特殊限制，’ 而較佳者為例如分類為酵素編號EC類1 · 1.丨.}丨9之酵素。 具體而言，為例如OKAMOTO文獻（J_ Bi〇chem 53 ( 5 )、。 1 96 3 p p 3 4 8 - 3 5 3 )所記載得自弱氧化醋桿菌 (Acetobacter suboxy dans )之NADP依存性葡萄糖去扣 酶、AVIGAD 等文獻（J.Biol.Chem. 243 (8) 1968 氮 ppl936-1941)所記載得自壤酸葡萄糖酸桿菌屬 (Gluconobacter cerinus)之NADP依存性六碳駿糖去λ 酶、DAHMS 等文獻（J.Biol.Chem· 247 (?) 1972 ^

1334929 五、發明說明（8) pp2222-2227)所記載之NAD依存性六碳酸 W糖'去亂莖 於本發明中’上述酵素以源自葡萄糖酸桿菌屬= 之六碳搭糖去氫酶最佳。葡萄糖酸桿菌屬微生物 葡萄糖酸桿菌（G· asai i ) IFO 327 6、螺龄一 & 例舉如 屬（G. cerimis ) IFO 3 2 6 7、弱氧化葡萄檐酸桿从干囷 -(G.frateurii) IFO 3 2 6 4、氧化葡萄糖酸桿 (0_〇又7(18115)]^014819等，培養此等機 m生物後，回收喆 體並以超音波處理等粉碎該菌體，所得之 又困 可藉由硫酸錢區分、離子交換層析、疏水層析、 二^ ♦膠體、膠體過濾等管柱層析之組合加以 t 土 火 。 仰从純化而獲得酵 但以0. / m 1範圍為 成以下述方 又’甘露糖去氫酶之使用濃度雖無特別限定 1至100單位（u) /ml，特別是1至丨(3單位（u 佳。此處之酵素1單位（u )係指1分鐘内可生 法測得之N A D P Η為1 /z m ο 1之酵素量。 亦即’於 2 0 0mM Tris-HCl (pH9.〇)丨.51111中，混合以 10mM NADP 0· 3ml、精製水 〇· 85ml、5〇〇mM D —甘露糖 0. 3ml，於37°C下預保溫5分鐘後’於該預保溫液中添加樣 品0. 05ml，並於37°C開始反應’測定每分鐘内34〇nm吸光 φ之增加。又，使用蒸餾水替代甘露糖作為對照。力價係 自前述測定法求得之樣品吸光度、對照之各值依據下式而 求得。 [數1 ] u/ml=(( △ 0D樣品 / min-△ 0D對照 / min)X3/6. 3*0_ 05)x稀釋

第14頁 1334929 五、發明說明（9) '~ 倍率 本發明中電子接受體可適當選擇NAD、NADP等輔酶、 氣 ％ 井甲氧琉酸醋（phenazinemethosuifate)、二氯 酚吲卩木酚、鐵氰化合物等之1或2種以上使用，特別以辅酶 NADP為佳。電子接受體之使用濃度以〇_丨至1〇_〇1/1，特 別是0· 5至2mmol/l範圍為佳。 此外’為定量電子接受體之還原體，亦可併用會因電 子接受體還原而發色之發色劑。此等發色劑可視所使用之 電子接受體而適當選擇之’例如於定量輔酶NADP2還原體 NADPH時，可於電子攜載體吩哄曱氧硫酸酯或心肌普酶盥 四唑鎗鹽存在下，比色定量生成之甲臢色素之方法。” 再者，由於本發明所用之甘露糖本—職丄 »路概古虱酶去除甘霡糖 外’對葡萄糖亦有作用，特別是測定血、、主十丄于瓦路總以 品中之甘露糖時，受到葡萄糖之影響不小。 寻工t m 高對生體樣品之測定精確度，以併用葡萄 因此’為更提 該葡萄糖去除劑以使用含有葡萄糖6 _仿 去除劑為佳。

者為佳。 位^酸轉化酶與ATP 上述葡萄糖6 -位磷酸轉化酶可例舉如_ 糖激酶，屬EC2.7.1.2.、EC2_7.1_i分類葡糖激酶、六碳 限定，可使用市售商品，較好是使用對^_者/P可並無特殊 葡糖激酶。其使用量係因樣品中葡萄掩1萄糖特異性高之 1至50u/ml。又，葡萄糖碌酸化所必里而異’ 一般為0_ 乃^ < A T P旦 葡萄糖量而異，一般為1至2 0 m Μ。再者， I係因樣品中 反應之物一般係含有5至50mM左右鎂離子促進葡糖磷酸化 < &機或有機鹽

1334929 五、發明說明（ίο) 類。用於去除葡萄糖之葡萄糖磷酸化反應係於PH6至10之 缓衝液中，於20至50 °C，較好於25至37 °C下添加後隨即進 #行1 (3分鐘左右。 又，去除葡萄糖之方法亦可採用使用葡萄糖氧化酶與 '過氧化氫酶方法等周知方法。 - 可使用之緩衝液為pH6至10之磷酸緩衝液、甘胺酸缓 衝液、Tris-HCl緩’衝液、葛得（Good)緩衝液、硼酸緩衝 液等，一般常用者即可。 本發明之前期糖尿病狀態篩選用試藥，亦可分別將葡 ♦糖去除劑與定量用酵素劑組合使用。更具體而言，以由 電子接受體與葡萄糖去除劑之第1試藥與含甘露糖去氫 酶之第2試藥組成者為佳。 於樣品中添加上述甘露糖定量用試藥進行反應後，反 應液中被還原之電子接受體之測定可藉由測定電子接受體 之還原體所特有之吸收波長之吸光度，或使電子接受體之 還原體發色之發色劑的發色強度而進行。 下文，列舉實施例具體說明本發明，但本發明並非受限於 此。 酵素製造例（源自葡萄糖酸桿菌屬（Gluconobacter fa i i )之六碳醛糖去氫酶之製造） 將葡萄糖酸桿菌（寄存編號：IF0 3276，寄存機構：曰 本大阪府大阪市淀川區十三本町2丁目17番85號，財團法 人發酵研究所）接種於0.5%酵母萃取物與1%果糖構成之培 •養基中，於28 °C下震盪培養24小時，離心分離而得菌體。

第16頁 1334929 五、發明說明（11) 將該菌體懸濁於20mM磷酸缓衝液（pH7 )中冰冷下以超音 波粉碎裝置處理之，所得之粉碎液離心分離去除菌體殘渣 即得粗酵素液。 於該粗酵素液中添加硫酸銨粉末至溶解後達30 %飽和 度，並離心分離去除析出之蛋白質。所得之上清液通過丁 基東洋珠粒管柱（Butyl Toyopear column)吸附酵素， 再以硫酸銨含量為’3 0%至0飽和量之20mM磷酸缓衝液（pH7 )溶出酵素。

測定各溶出區分之酵素活性以回收活性區分’活性區 分以20mM磷酸缓衝液（pH7)透析脫鹽後，使其通過DEAE 東洋珠粒管柱以吸附酵素，以含0至0.25M NaCl之20mM磷 酸緩衝液（pH7)溶出酵素。 測定各溶出區分之酵素活性以回收活性區分，活性區 分以20 mM磷酸緩衝液（pH7 )透析脫鹽後，再度使其通過 經基構灰石管柱以吸附酵素，並以20至150mM填酸缓衝液 (p Η 7 )溶出酵素，測定各溶出區分之酵素活性以回收活 性區分，將其作為純化酵素液。 [實施例]

對59名疑為糖尿病患之受驗者進行口服75g葡萄糖之 糖負荷試驗，於糖負荷之前刻（空腹時）、糖負荷後3 0分 鐘、6 0分鐘、1 2 0分鐘，分別使用血糖測定用採血管採血 並分離血漿，以市售之自動分析裝置用試藥「純自動 S-Glu(Pureauto S-Glu)」（商品名，第一化學藥品股 份有限公司製）測定各血漿中之葡萄糖濃度。

第17頁 1334929 五、發明說明（12) 另一方面，D-甘露糖濃度之測定係使用由下述之第1 試藥與第2試藥組成之定量用試藥進行。亦即，於各血漿 樣品8m 1中，添加256// 1第1試藥於37 °C反應5分鐘，再添 加56//1第2試藥同樣於37°C反應5分鐘後，以450nm為主波 長、7 0 0 n m為副波長，測定2點分析下之吸光度。此項操作 係使用曰立7 1 5 0型自動分析裝置進行。又，標準品係使用 市售D -甘露糖溶於水而成之水溶液。此外，對溶血等可能 使本測定系產生誤差之虞的樣品，可另外調製自第2試藥 去除六碳醛糖去氫酶之對照試藥，與各樣品同時測定後， #由減去所得之非特異性發色度而修正其誤差。 1試藥： 1 25mM Tris-HCl緩衝溶液

1.25mM NADP 0. 75mM WST-1 1.25% T w e e η 2 0 6 . 2 5 u / m 1 心肌黃酶 12. 5 u / m 1 葡糖激酶

1 OmM ATP 2 tn M 乙酸鎮 • pH8. 5 ) 第2試藥： 20mM 磷酸緩衝溶液 2 3 u / m 1 六碳搭糖去氫酶（前述製造例所得之酵 素）

第18頁 1334929 五、發明說明（13) (pH7. 0 ) 上述試驗結果示於第1圖。 亦即，由口服7 5 g之糖負荷試驗結果，依據日本糖尿 病學會診斷基準將受驗者分類為正常型、臨界型、糖尿病 型三群。結果分類為正常型24名、臨界型15名、糖尿病型 2 0名。於第1圖中，判定為正常型者以♦表示，判定為臨 界型者以〇表示、'判定為糖尿病型者以X表示。

另一方面，第1圖係以D -甘露糖濃度為縱轴，糖負荷 前刻血漿中之葡萄糖濃度（空腹時之血糖值：FBS)為橫 軸。對上述受驗者作圖。 將FBS小於110mg/dl者分類為正常型，110至125mg/dl 者為臨界型，126mg/dl以上者為糖尿病型。僅依據該FBS 判斷分類為正常型46名、臨界型7名、糖尿病型6名。

又於該實施例中，D -甘露糖濃度之基準值係依據上述 曰本糖尿病學會診斷基準將判定為正常型之24名受驗者之 D -甘露糖濃度以統計學方法計算求得。具體言之，假定判 定為正常型之24名受驗者之D -甘露糖濃度係呈現正常分 布，推論健康者之正常值範圍為平均值± 2x標準偏差即為 6. 6± 2. 4 // g/ml，求得上限值為9 /z g/ml。此外，求得該 上限值之9 5 %信賴區為7 . 3至1 0 . 7 # g / m 1。於本實施例係將 基準值設定為上限值之9// g/ml。 該結果，可4知超過FBS之基準值110mg/dl者由糖負 荷試驗結果判定為臨界型及糖尿病型之受驗者1 3名中有1 0 名，其血漿中之D-甘露糖濃度超過基準值。亦即以FBS檢

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五、發明說明（14) 出之臨界型及糖尿病型之受驗者中有70至80%亦可藉由測 定D -甘露糖之濃度而檢出。 此外，以F B S之結果判定為正常之4 6名中，包含由糖 負荷試驗結果而診斷為疑似耐糖能力障礙之臨界型及糖尿 病型之受驗者22名。此等受驗者不論是臨界型、糖尿病 型，就以往之診斷體制僅進行FBS—次診斷會有失察被判 定為正常型者，而·依據血漿中之D-甘露糖濃度則可分辨其 中8名係超過基準值。 麝第 $過 另一方面，以FBS及糖負荷試驗二者均判定為正常型 1圖之♦)之24名，其血漿中之D-甘露糖濃度並未有 基準值者。 由此等結果可知，藉由測定血漿令之D -甘露糖濃度， 可檢出以往FBS呈現正常值而遺漏未檢出之輕度耐糖能力 障礙之臨界型受驗者，亦即可以更高之精確率檢出前期糖 尿病狀態之受驗者。 [產業上利用之可能性] 如以上說明，依據本發明係提供對以往以空腹時血糖 值判斷容易錯失之不安定型糖尿病患者或輕度耐糖能力障 礙之前期糖尿病狀態患者，可更正確判定前期糖尿病狀態 φ篩選方法。結果能早期發現由於耐糖能力障礙導致之前 期糖尿病狀態受驗者，而可用預防用藥劑等防止發展為糖 尿病而適當地進行早期治療，再者亦可偵測治療之過程。 此外，藉由將本發明之篩選方法與目前所用之糖尿病 檢查組合併用，亦可應用於檢查項目表格化、為此目的之

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Claims (1)

1334929 申請. 香1秦1 |f|· —- li -;~·秦年5¾ F :1沒)正本 科年R月二曰 1 · -種前期糖尿病狀態之篩選方法，其特徵為測定採自 受驗者之體液中的D-甘露糖濃度及葡萄糖濃度，將前 述D-甘露糖濃度與預先設定之D-甘露糖濃度之基準值 比較，同時將前述葡萄糖濃度與預先設定之葡萄糖濃 度之基準值比較，以檢測出顯示D -甘露糖濃度值超過 前述D-甘露糖濃度之基準值且顯示葡萄糖濃度值不超 過前述葡萄糖濃度之基準值之受驗者，該體液中之D-甘露糖濃度之測定係藉由使該體液於輔酶NADP等電子 接受體之存在下，與對甘露糖具有脫氫之氧化能力的 酵素作用，並定量所生成之電子接受體之還原體量而 進行，該體液係受驗者空腹時之血液、血衆或血清。 2. 如申請專利範圍第1項之前期糖尿病狀態之篩選方法， 其中該葡萄糖濃度之基準值係以血糖值為指標之糖尿 病之診斷基準值。 3. 如申請專利範圍第1項之前期糖尿病狀態之篩選方法， 其中，該D -甘露糖濃度之基準值係採取健康者空腹時 之血液、血漿或血清所測得之D-甘露糖濃度以統計學 處理而求得之上限值者。 4. 一種前期糖尿病狀態之篩選用試藥，係申請專利範圍 第1項之前期糖尿病狀態篩選方法所使用之試藥，其特 徵為：含有於電子接受體之存在下對甘露糖具有脫氫 之氧化能力的酵素、及可被該酵素利用之上述電子接 受體。 5. 如申請專利範圍第4項之前期糖尿病狀態之篩選用試

3]3336修正版.1^ 第23頁 1334929 修正 案號 91104781 六、申請專利範圍 藥，係另含葡萄糖去除劑者。 6 .如申請專利範圍第4或5項之前期糖尿病狀態之篩選用 試藥，其中，該酵素係被歸類為酵素編號EC 1. 1. 1. 1 1 9 之葡萄糖去氫酶者。 7. 如申請專利範圍第4或5項之前期糖尿病狀態之篩選用 試藥，其中，該酵素係源自葡萄糖酸桿菌屬微生物之 六碳醛糖去氫酶者。 8. 如申請專利範圍第5項之前期糖尿病狀態之篩選用試 藥，其中，該葡萄糖去除劑係含有葡萄糖6位璃酸轉 化酶與腺ΤΓ三磷酸者。 9. 如申請專利範圍第4或5項之前期糖尿病狀態之篩選用 試藥，其中，前述之電子接受體係輔酶氧化型煙醯胺 腺嗓吟二核符酸碟酸（NADP)者。

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