TWI284532B - Use of (3-(2-ethylphenyl)-5-(3-methoxy)phenyl)-1H-[1,2,4]-triazole for the treatment of autoimmune diseases - Google Patents

Description

1284532 (1) 玖、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種自體免疫疾病之治療方法，其藉投 服化合物（3-(2-乙基苯基）-5-(3 -甲氧基）苯基）-1Η-[1，2,4]-三唑而有效地治療。 【先前技術】 I 發明背景 多發性硬化（MS)是中樞神經系統（CNS)之炎性脫髓鞘 疾病，被認爲受針對CN.S髓鞘質抗原之自體免疫侵襲而間 介。基於動物模型，以及由患有MS之病人的白血球及組織 的分析所收集之資料，抗原特殊性被認爲位於表達α θ Τ 細胞受體（TCR)之Τ細胞內，具有依Th-1型遺傳表型之細胞 激素（cytokine)側面圖特性表達而定之引起腦炎的活性， Th-Ι型遺傳表型是干涉病毒蛋白素-r (IFN r )淋巴毒素 !) (LT)及腫瘤壞死因子-a (TNF α )。表現Th-2型細胞激素側 面圖（IL-4，IL-5及IL-13)或調節的細胞激素如變形成長因 子-yS (TGF冷）及IL-10的T細胞被認爲會藉阻斷Th-Ι型遺傳 表型之獲得及/或藉阻斷作用器細胞激素之下游標的，如 巨噬細胞之活化而干擾此方法。 抗原-反應性α ^ Τ細胞之細胞間質側面圖的重要本質 對疾病表現會引起有關抗原辨識方法本質的問題，該辨識方 法導致這些特定細胞間質側面圖的獲得。雖然已知有時候佐 藥的存在及抗原出現途徑是動物中引起腦炎的重要決定因素 -6- 1284532, (2) ，然而，這些方法將後天免疫反應本質具體化，並且，其它 非抗原-特定白血球族群的貢獻近來己僅開始更激烈地專注 於不同細胞族群之擴張辨識，該細胞族群作用在先天及後天 免疫反應間的介面。 先天免疫反應作用爲防禦廣範圍感染及毒劑之第一線。 歷史上，此反應已歸因於具有吞噬細胞的活性的細胞，如 巨噬細胞及多形核細胞，及/或潛在的細胞毒的活性，如 天然殺手細胞（NK細胞），肥胖細胞及嗜依紅細胞。這些不 同細胞族群的活性被很多不同之可溶的分子，集合性地已 知爲急性期蛋白質，如干涉病毒蛋白素，補體系列產物之 特定成份和細胞動素（其用來加強呑噬細胞和細胞毒的活 性以及導致在細胞受傷位置上這些細胞之累積）所幫助及 煽動。若這些第一線防禦被破壞，則調節免疫反應的活化 會因而發生，導致可顯出很多不同特徵之任一者的特定免 疫反應。後天免疫反應的產生是淋巴球的獲特性。 近來，然而，已承認：少數次族群的淋巴球也可作爲 部分的先天免疫反應。雖然，淋巴球之這些特化的次群的 完全功能角色可能尙不甚了解，現在對它們的興趣集中在 它們限制細胞激素環境在損傷位置處，影響所產生之調節 免疫反應的本質。因此，很多這些硏究已集中在IFN r和 IL-12在限制Th-Ι型細胞激素側側面圖和IL-4在限制Th-2型 細胞激素側面圖上的角色。所有這些三種淋巴球的主群的 次族群一 α β Τ細胞，r 6 T細胞和B細胞可能落入此領 域中。這些淋巴球族群特徴在於高度保守的抗原受體複體 1284532 (3) 之使用，另外之圖形辨識受體的表現，如鳴鐘型受體族或一 般在NK細胞上被偵測的受體的成員，及在與特定的配體交 互作用後高濃度之細胞激素和化學激素之快速釋出。 7 δ Τ細胞：表現r 5 T細胞受體（TCR)之T細胞構成 總循環T細胞族群之少數族群。與a /3 Τ細胞同樣的，7 5 T細胞表現經重組的TCR，但在TCR多樣性的取得中所牽涉 的機轉以及所承認之抗原的本質是明顯不同的（Chien Y.H. 〇 等人 Annu_Rev.Immunol.1996 ; 14: 511-32)。CDR3 長度分佈 的分析以及結晶學硏究已提議r 5 tcr對免疫球蛋白重鏈基 因之較大的結構相似性，得到以下結論之進一步的支持：藉 7 δ Τ細胞之抗原辨識的分子本質原則上異於藉α ^ Τ細 胞所利用者。r 5 τ細胞也異於α石 Τ細胞，因大部份r 5 Τ細胞共表達在天然殺手細胞（NK-R)上所發現之受體（ Battistini.L等人；J.Immunol » 1 997 ； 1 59 : 3723-30) 〇 這些 受體在T細胞上之表達已顯示會調節數種T細胞功能。包括 (^)胞毒素，細胞激素釋出及經內皮細胞移動（Reyburn Η等人. ，Immunol.Rev. 1 997 ； 155 ： 119-25)。這些資料指明 r δ Τ 細胞功能的調節可能異於在大部分α θ Τ細胞中所發現者 ，包含藉傳信號經TCR及NK-R所致之活化（或抑制）。已建議 ·· MK-R作用爲肋調節（c〇stimulatory)分子，其對感染所調 節之MHC之細胞表面表現的改變或細胞之活化態是劇烈反 應的（Reyburn H.等人 ibid)。 在健康成年人中，大部分的7 (5 T細胞表現會利用 V r 9V 5 2基因片斷的TCR。7 5 T細胞之此種特定族群的 1284532, (4) 擴張被認爲是起因於對非蛋白質細菌抗原如茈耳（pyrenil) — 焦磷酸鹽衍生物及細菌細胞壁之其它成份的反應，而無典 型的 MHC 限制（Salerno A等人；Crit.Rev.Immunol，1998; 1 8 : 32 7-5 7)。對這些型式之抗原的反應已被發現是精密地 依胚線（germline)編碼之賴胺酸殘基在J7 1.2片斷中之使用 而定（Miyagawa F 等人）J.Immunol，2001 ; 167 ; 6773-6779) 。因此，雖然對磷酸抗原之反應在本質上是多株的，經保存 的元素藉反應細胞而被使用。r 5 τ細胞之經保存序列已 在由具有ms之病人中所分離之細胞及/或組織中被注意到 ，此含示對普通抗原的反應。 r 5 T細胞分享很多與a々TCR + NK-T細胞同樣的特徵 ，包括ΝΚ受體的表現，IL-2 r yS之構成的表現，對高度保 守TCR序列之使用及至少對一些次群而言，受CD1分子之限 制（Spada F.M·等人，J.Exp.ed 2000 ; 1 91 : 937-48)。這含示 :一些T 5 T細胞可以在先天及後天免疫反應間提供類似 連終（Poccia F 等人，Immunol.T oday 1998; 19: 253-6)。與 此種槪念一致的是用磷酸鹽抗原對V6 2 + T細胞之活化已顯 示會導致大量的細胞激素和化學激素的快速釋出（Poccia F等 人，J.Immunol，1997 ； 159 ： 6009-1 7 ; Cipriani B 等人， Blood 2000 ; 95 ·· 3 9-47)。有趣地，很多累積的資料提議： V區使用可能含示特定次群之r 5 T細胞在中介Thl或Th2 型反應一 V(5 2 +細胞顯示Th-1型偏斜且V5 1+細胞顯示Th-2 型偏斜。以致例如，已顯示在MS4損害中r 5 T細胞表現 優勢地 V5 2 遺傳表型（Battistini L等人，Mol.Med.1 995 ; 1 (5) 1284532 :554-62)且V 5 2細胞在具有MS之病人的末梢血液中顯出活 化的證據。在CSF中，然而，V 5 1細胞是優勢的r 5 T細 胞族群（De Libero G. ， Springer Semin ，Immuno pathol.2000 ； 22 : 21 9-38) ° 已檢查7(5 T細胞在脫髓鞘疾病中之潛在角色的硏究 進一步支持以下結論：雖然r 6 τ細胞顯示在具有ms或 Guillian Barre症候群（GBS)之病人中活化的證據，但在二此 Q 疾病中這些細胞之遺傳表型和功能性質中存在有差異。特別 地，資料指明在具有MS之病人中V 2次群被活化且這些細 胞可被誘發以分泌高濃度的發炎前的細胞激素。 一旦經由TCR而被活化，7* 5 T細胞也作用爲NK細胞 ，對NK細胞標的反應正或負式樣（Battistini L.等人 J.Immunol 1 997 ； 159 ： 3723-30 ； De Libero G.Microbes

Inf ect.l 999 ; 1 : 263-7)。再者，在有活性疾病之MS病人中 ，共表現NKRP1A(NK1.1之人類同系物）的循環的V5 2 + T細 胞的百分比已發現比健康之捐贈者有明顯的增加。當V (5 2 + 和V 5 1+Τ細胞由MS病人及健康之志願者中分類出且植種時 ，所有的V (5 2 +株表現NKRP1 A。NKRP1 A藉著用IL-12來培 養而強烈地在V5 2 +細胞上向上調節，而藉IL-12在V 5 1+株 上並沒有看到NKRP1 A之向上調節。在經內皮移動分析中’ V 5 2 + NKRP1 A株比V 5 1 +株移動地更有效率，且此種移動 的潛能在用IL-12培養後更加強。移動受抗NKRP1A抗體之 F(ab’）2所強烈地抑制，此含示對普遍的血球凝集物質 (lectins)而言，此受體包含在經內皮細胞移動過程中。也顯 (6) 1284532 示：在由MS病人所新鮮分離的PBMC中，經移動之族群在V 5 2 + NKRP1 A +細胞中有加多。因此，NKRP1 A在V ά 2 +細胞 上之表現與經血管內皮之移動的經增加的能力有關，亦即可 以藉在微環境中存在之IL-12所向上調節的活性（Poggi Α.等 人，J.Immunol.1 999 ; 1 62 : 4349-54)。總之，這些資料提 示-r 5 τ細胞可以快速地被再維持在cns中之發炎位置上 ，其中它們可以有助於損害之細胞激素/化學激素平衡，如 EAE 中己證明的（Spahn T.W·等人，Eur.J .Immunol 1 999 ; 29 :4060-71 ; Raj an A.J.等人，J .Immunol，2000 ； 164 ·· 2120-30) ° 因此，在作用器r (5 +t細胞之先天免疫反應上具有免 疫調節性質之化合物的適用性對於需要之病人有大的助益。 【發明內容】 本發明之摘錄 現已發現之3，5-二芳基-S-三唑類分子之化合物更精確 地（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三唑（下文 也稱爲ST 1 959)有效地治療自體免疫疾病。亦已發現：依本 發明之化合物藉非胞毒性機轉抑制r 6 T細胞作用器。 因此，本發明之一目的是一種治療患有自體免疫疾病之 患者的方法，其包括投服有效量之（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲 氧基）苯基）-1Η-[1,2,4]-三唑給該患者。 特別地，依本發明之方法，該患者患有自體免疫，如多 發性硬化，全身性紅斑狼瘡及類風濕關節炎（RA)。 (7) 1284532 在本發明之另一方面，本發明之進一步的目的是一種在 需要之患者中抑制r 5 τ細胞的方法，該方法包括投服有 效量之（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）_iH-[1，2,4]-三 唑給該患者。 在本發明之較佳的實體中，該患者是哺乳類，更爲較佳 地，是人類。 (3-(2-乙基苯基）-5-(3 -甲氧基）苯基）-lH-[l，2,4]-三唑 Q 在1 983年4月5日公告之美國專利4,375，155中，被描述成具 有抗生育活性之1，2,4-三唑類之大類中的一部分。此化合物 完全地被硏究成抗生育劑（Galliani等人，Pharm.Dyn.5，55-6 1 (1 982))。稍後，讓與給Geange Ltd·而在2001年11月27曰 公告之美國專利6,323,230揭示一大族之氮雜環芳族衍生物 ，其有用於局部治療上皮組織疾病，特別是牛皮癬，異位性 皮膚炎，潰瘍性結腸炎及克隆氏病且投服途徑是皮外的，口 服的及直腸的。依上述美國專利6,3 23，230之揭示，口服途 途據了解是作爲一種口服配方，其適於特定地傳遞化合物在 作用位址，亦即在低腸之上皮粘膜處。事實上，當考慮到原 始之抗生育活性時，口服途徑相對於非經腸胃的注射，並非 正確的選擇（Galliani 等人，Pharm·Dyn· 5，5 5 -6 1 (1 9 8 2))， 因快速且廣泛的肝首次通過效應，導致鈍性代謝產物的形成 (Assandri A 等人 Drug Interactions，IV，237-261 (1 982); Assandri A等人 Xenobio tica 14，429-433(1984))。相同之參 考資料教導：依本發明之化合物並不保存有荷爾蒙或抗荷爾 蒙或淋巴活性，會抑制對corpuscolar抗原（ram紅血球）之抗體 1284532, (8) 的形成，當在此劑後投服時，並不對淋巴球B及/或T賦與 選擇性作用。化合物之免疫側面圖描述在Mistrello G·等人 之Immunopharmacology vol.10，1985，163-169中。在此參考 資料中，本發明之化合物顯出對治療關節炎不具活性。 本發明之化合物對r 5 T細胞具有抑制活性，因此’ 有用於疾病的治療，該疾病藉投服抑制r 6 τ細胞用之化 合物而被有效地治療。 本發明之化合物的投服藉一般的醫藥組成物來完成，例 如，在上述美國專利4,379，155及美國專利6,323,230中揭示。 投服之較佳途徑（雖然非排至性地）是皮下者。 以下實例進一步說明本發明。 【實施方式】 實例1 多發性硬化 血液樣品取自1 8名志願者和1 8名患有臨床活性MS而在 疾病之復發期中或在第一偶發時間中有不正常之磁共振影像 腦掃描之病人沒有一位在進入硏究之至少三個月前接受免疫 抑制治療。病人和1 8位健康捐贈者在性別和年齡上配合。

周邊和索血液單核細胞藉Ficoll-Hypaque(Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)自已使用肝燐脂以制血液凝固之 血液中離析出且以1.5 xlO6細胞/毫升之濃度在完整培養基 (RPMI1 640，10%ν/ν經熱鈍化之FCS，2mM L-榖胺醯胺， 10U/ml盤尼西林/鏈黴素）中來培養。來自對照之捐贈者或MS -13 - 1284532 Ο) 病人之PBMC在30/z Μ異戊烯基焦磷酸酯（IPP : Sigma-Aldrich ，St.Louis MO)及 50U/ml 7 IL-2(Boehringer Mannheim， Mannheim Germany)存在下在試管中刺激9天。在3天培養後 ，相當於一半培養之上清液的體積用帶有r IL-2之完整培養 基來代替。在6天培養後V r 9V (5 2 + T細胞之擴張藉使用分別 偶合至PE或FITC之抗-CD3和抗- TCR-V 5 2mAbs的雙重染色 的細胞計分析（cytome-ric analysis)來測定。V 5 2擴張指數 q 是將經刺激培養物中V 5 2 + T細胞之絕對値除以未經刺激培 養物中V (5 2 + T細胞絕對値來計算。 細胞激素產製藉如前述之流動細胞計分析來偵測。人類 PBMC 用 ΙΡΡ(100 β m ; Sigma-Aldrich)及 / 或 100U/ml γ IL-2(Boehringer Mannheim)來刺激6小時。在刺激1小時後添加 Brefeldin A(10 // g/ml)以阻斷細胞內輸送，使細胞激素在 Golgi中累積。細胞在PBS，1%BSA和0.1 %疊氮化鈉中洗二 次，且在4°C下用對上述薄膜Ags特定之mAbs來染色15分鐘 Q 。樣品而後固定在4°C下之1%仲甲醛中10分鐘，用在1倍PBS ，1%BSA和0.5°/。皂角苷中稀釋之抗-IFN-mAb來保溫。細胞 最終在1倍PBS，1%PSA，0.1%皂角苷中洗二次且在 FACScan(BD B io s ci ences)上獲得。非特定染色之對照組用 同型-配合（rsotype-matched)的mAbs來偵測且非特定染色總 是被扣除。 IFN- r濃度藉上述標準夾層ELIS A來測定。抗體和標準 物由PharMingen購得。使用經加強之蛋白質一結合ELISA皿 (Nunc Maxisorb ; Nunc Maxi Corp ; Roskilde，Denmark) 〇 (10) 1284532

V r 9V 5 2TCR之相當特殊的特徵是其辨識天然發生和 合成非肽之磷酸抗原的能力。這些抗原可在病原微生物如瘧 原蟲屬，Francisella及分枝桿菌屬中發現。這些之一是異戊 烯基焦磷酸酯（IPP)，其是一種具有5碳異戊烯鏈和焦磷酸根 部分的246-Da分子。在藉這些化合物活化後，V r 9V 6 2細 胞擴張且快速地分泌發炎前細胞激素如TNF- α和IFN- 7且 得到潛在的胞毒活性，暗示這些細胞在Ag辨識位置處是重 要的發炎介體。已知：IPP獨特地刺激V 6 2V r 9細胞次群的 增殖且也引發在相同r 5 τ細胞族群中細胞激素產製，爲決 定（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-1Η-[1，2,4]-三唑是 否會在IPP刺激後抑制V5 2 T細胞擴張，由健康捐贈者或MS 病人所新鮮離析之PBMCs用IL-2，IL-2 + IPP或IL-2 + IPP + (3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-1Η-[1，2,4]-三唑（3 0从Μ 或60 // Μ)來培養且在刺激後第6天進行流動細胞計分析以測 定在表現V5 2基因產物之培養物中存在之細胞的百分比。 本發明化合物以劑量反應（dose response)方式有效地抑制V 5 2 + T細胞之擴張，當與IPP共同培養時（圖1)。擴張之抑制 百分比分別是39%及38%，當化合物以30 // Μ濃度在由MS病 人或由健康個體所離析之細胞中使用時。注意到所硏究之二 組中，在較高濃度下（60// M)由（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧 基）苯基）-1Η-[1，2,4]-三唑引起之抑制會有差異，在由MS病 人所離析之細胞中發現71%抑制，相對於由健康個體離析之 細胞中有88%。 -15- (11) 1284532 爲決定本發明化合物是否對V5T細胞有毒，未固定之 細胞用PI來染色以評估細胞膜整體性且用流動細胞計來分析 。在用11^2單獨培養6天之細胞中，5.96%細胞是？1+，而用 IPP + IL + 2來挑戰之細胞則顯示9.66%PI +細胞。當ST1 95 8(3 0 /zM或60//M)被添加時，PI +細胞分別是15%及17.65%(圖2)。 添加（3-(2-乙基苯基.）-5-(3-甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三唑 之培養物中PI +死細胞比單獨用IPP者有稍微增，說明此化合 Q 物在IPP刺激後藉非胞毒性機轉導致V 5 T細胞擴張之健康的 抑制（在30//“下56%抑制及在6(^1^下91%抑制）（圖2)。 爲決定（3-(2-乙基苯基）-5-(3 -甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三唑是否會藉著用磷酸酯Ags所活化之V 5 2T細胞來 抑制發炎前介體的釋出，PBMC在化合物以30从Μ及60 // Μ下 存在或不存在下用IPP(30 // Μ)來活化，且IFN- r之釋出藉 ELISA24小時刺激後來測定。化合物存在於培養中以劑量依 賴方式潛在地抑制IFN- r由這些細胞中之釋出（當添加30// Μ化合物時，分別在MS及健康捐贈者所離析之細胞中有55% V ." 及65%之抑制；當添加60// Μ化合物時，分別在MS及健康捐 贈者所離析之細胞中有74%及82%抑制圖3)。 在用IPP刺激6小時後（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯 基）-111-[1，2,4]-三唑對¥(52 + ：^1^5+細胞丁細胞之誘發的效 果被測試。這些資料顯示本發明之化合物以劑量依賴的方式 決定在以IPP刺激後，產生IFN- r之V 5 2 + T細胞之數目的淨 減低。 以30 // Μ濃度被使用之（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基） (12) 1284532 苯基）-1幵-[1，2,4]-三唑在由健康捐贈者及“3病人所分離之 細胞中分別導致由IPP誘發之V δ 2 + IFN- 7細胞之50%及25% 的抑制。相反地，用60 // Μ化合物所發現之抑制程度對二 群病人而言是類似的：在由健康捐贈者所分離之細胞中，由 1??所誘發之\^52 + 1尸15細胞之93%的抑制且在由]\48病人所 分離之細胞中有92%抑制（圖4)。 (3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三唑 對來自MS病人和健康個人之r 5 T細胞具有抑制效果。在 所有測試情況中，在衍生自MS病人之細胞上之抑制效果比 衍生自健康個人者有稍微但明顯的差異，因r 5 τ細胞功 能之抑制在健康之被實驗者中是更有效的。Poggi，A.等人 ，J.Immunol.1 62 : 4349先前已描述：MS病人中之r 5 T細 胞比那些衍生自健康個人者更具活性，因爲它們表現對內皮 之交互作用很重要之分子且因此易於移入已發炎之組織中， 放大發炎反應（其構成脫髓鞘作用之基礎，且結合放大神經 官能異常。可以想像：預先活化的細胞的抑制比其餘族群者 更難辛，因爲它需要關閉已被啓動之細胞機轉。然而，在很 多分析中，在MS病人中r 5 T細胞功能的抑制達60_ 70%。 假設由這些Vr 9V6 2 + T細胞所辨識之Ags之廣分佈及 經由一些顯然異於α ΘΤ細胞者之途徑而產生發炎前細胞激 素如IFN- 5及TNF- α以及化學激素如ΜΙΡ-1 α及ΜΙΡ-1冷之 速度，則這些細胞藉偏向Th-Ι型反應的諸反應，在由先天 至後天免疫反應的變換中可能扮演重要角色。這提示：在 Ag辨識位址處（3-(2-乙基苯基）-5-(3 -甲氧基）苯基）-1Η- -17- 1284532 (13) [1，2,4]-三唑能有效地抑制7* 5 T細胞活化，其可能廣泛 包含先天和後天免疫反應之活化。 實例2 狼瘡

約6周大之鼠MRL/lpr(雌性）由JackS〇n(USA)獲得。這 些鼠自發性地在約第8周時發展類似狼瘡的病理學。 g ST1959投服在第6周開始且每周實施2次皮下注射2.5毫克/ 公斤於0.1毫升之芝蔴油中。硏究中包括一治療組和一對 照組（芝蔴油），每組1 2隻。每周一次，藉偵測尿蛋白和尿 白血球以探測腎損害。圖5a中報告之資料代表在二組中尿 蛋白高於100毫克/dl之動物的平均％。方格b指明尿白血球 之刻度（刻度0-3)。所有測定藉使用Multistix 10SG(UK)來 實施。方格c顯示二組之存活％且指明經ST 1 959治療之動 物比對照組在死亡開始時刻的延遲且有較高之整體存活率 q 即分別是60%及25%。如在方格d中顯示：ST 1 959之投服不 影響經治療之動物的體重，因此含示是沒有毒性的。 實例3 經膠原誘發之關節炎 由Charles Rivers(義大利）得到鼠DBA/1J。藉著在第〇天 和+21天皮內投服100//1/鼠之乳液以進行關節炎之誘發，讓 乳液由等體積之完整Freund’s佐藥+2毫克/毫升結核分枝桿 菌和4毫克/毫升牛型II膠原。鼠隨機地被指定硏究組（8隻鼠/ -18- (14) 1284532

組），包括二ST 1 95 9經口治療，環胞素（cs A)經口治療，載 劑（芝蔴油）。Sham鼠用不含膠原之乳液治療且不接受進一步 之投服。在第0天或第21天開始化合物在0.1毫升芝蔴油中被 皮下或經口投服每周3次。對每一肢而言，發炎和anchilosis 之刻度是介於0-3之間。如圖6中所示，經ST1 959皮下治療顯 著降低發炎（6a)和anchilosis(6b)。相反地，口服並不產生任 何治療效果。ST1 959之皮下劑量是其LD5G之1/1 500。在極高 劑量（100毫克/公斤）下環胞素治療被包括在正對照組中。 實例4 實驗的自體免疫腦脊髓炎（EAE) 雌性路易士大鼠（7周大）購自Harlan。藉著注射100 /z g/200 // L/大鼠之髓鞘質基本蛋白質（MBP)入每一後腳趾進 行EAE誘發，該MBP在含有經熱殺死之結核分枝桿菌 (Mt)H3 4Ra(3 5 0 // g/200 // L/鼠）之不完整 Freund’s佐藥（200 // L/鼠）中乳化（Hoban C.J.，Exp.Opin.Ther.Patents，8，7，831- (籲 854，1998 ; Ledeen R.W.et al.,Neurochemical Research j 23， 3，277-289，1998 ; Nagai Het al.，Gen.Pharmac.，30，2， 16 卜 166，1 998 ; Sommer N.et al.，Nature Medicine，1，3， 1995 ; Simmonds S.et al.，Immnology Methods Manual ，

Academic Press Ltd.1997) o 在引起腦炎的挑戰之後，鼠每曰被觀察且EAE之臨床顯 示被畫在0至6之刻度上，如下： 〇 :無臨床徵候；1 ··弛緩的尾；2 :後腳之部分的麻痺；3 : -19- 1284532 (15) 後腳完全麻痺；4 :前腳麻痺。 鼠隨機被指定至硏究組，包括：對照組（乳液+MBP)， sham(乳液），治療組（乳液+MBP + ST1 959，皮下地，在芝蔴油 中，0.25，0.50，1.58或5· 00毫克/5毫升/公斤）。ST195 9在免 疫化後自第3至第22天，每日投服。 對照組動物從免疫化之第1 〇天開始顯示單相EAE臨床徵 候且在22天後完全恢復；SI1 959在四種不同劑量下減低疾病 <、 之嚴重性，發生率及開始（圖7，8)。 實例5 實驗的自體免疫葡萄膜炎（EAU) 雄性路易士大鼠（7周大）購自Harlen。藉注射125 // g/200 // L/大鼠合成的人類腎抗原S-Ag入每一後腳趾以進行EAU之 誘發，該抗原S-Ag在含有經熱殺死之結核分枝桿菌 (Mt)H34Ra(800 # g/200 // L/大鼠）之不完整 Freund’s 佐藥（200 f ; // L/大鼠）中乳化。在免疫化之後大鼠在尾血管中立即接受 百日咳球桿菌毒素（l/zg/300/zL/大鼠於PBS中）(Barton K.et al.,Eye，8 ，60-65， 1994 ； Forrester J.V.et al.? Chem.

Immunol.Basel，Karger，73，1 59-1 85，1999； Smith J.R.et al.，Immunology及 Cell Biology，76，497-512，1998 ; Zamir E.et al.，Free Radical Biology & Medicine，27(1-2)，7-15， 1999) 〇 在引起腦炎的挑戰後，鼠每日被觀察且記錄EAU之臨床 顯示，如下： 1284532 ，. * · / (16) 無臨床徵候：Ο 虹膜充血： - 低：1 - 中：2 嚴重：3 前房積膿： 低：1 中：2 · 嚴重：3 雙眼之最大累積臨床刻度：12 大鼠隨機被指定至硏究組，包括：對照組（乳液+S-Ag) ，sham(乳液），治療組（乳液+S-Ag + ST1959皮下注射地，在 芝蔴油中，0.50毫克/5毫升/公斤）。ST1 95 9在免疫化後之3 至22天每日投服。 對照組動物自免疫化後第10天顯出EAU臨床徵候且在 20天後改良但未完全恢復；ST1 959在0.5毫克/5毫升/公斤 （· 劑量下減低疾病嚴重性（圖9)。 【圖式簡單說明】 圖1關於多發性硬化測試所得到之結果並代表本發明 之化合物以劑量反應之模式能有效地抑制V δ 2 + T細胞（當 與IPP(焦磷酸異戊烯酯）一起培養時）擴張之活性。如實施 例1之說明。 圖2關於評估化合物之抑制活性的作用機轉。該化合 -21 - 1284532 (17) 物藉由非胞毒性機轉導致強烈之V (5 2 + T細胞的抑制作用（ 圖2)。如實施例1之說明。 圖3關於評估化合物之抑制活性的作用機轉。存在於 基質中之該化合物能有效地抑制自V 5 2 +T細胞釋出INF- r 。如實施例1之說明。 圖4說明化合物於健康個體和感染多發性硬化之個體 中抑制活性的劑量功效。如實施例1之說明。

圖5說明化合物於鼠狼瘡模式中經由評估顯著測試參 數以控制腎損害。如實施例2之說明。 圖6說明化合物ST959經皮下注射後顯著地減輕發炎和 anchilosis。相對地，口服投遞並未產生任何治療功效。 非常高劑量（l〇〇mg/kg)之環胞素治療係作爲陽性對照組。 如實施例3之說明。

圖7和8說明化合物ST 1 95 9於4個不同之劑量下減輕實 驗性自體免疫腦脊髓炎之嚴重性、發生及開始。如實施例 4之說明。 圖9說明化合物ST959減輕實驗性自體免疫葡萄膜炎之 嚴重性。如實施例5之說明。 22-

Claims (1)

1284532 aV ,j4-

sa 拾、申請專利範圍

1—種（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三嗖供製造藉由抑制患者之r 5 T細胞以治療該患者之自 體免疫疾病的藥物上之用途。 2·如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病是多發性 硬化。

3 ·如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病是全身性 紅斑狼瘡。 4.如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病是類風濕 關節炎。 5·如申請專利範圍第1項之用途，其中該疾病是葡萄膜 炎。 6·如申請專利範圍第1項之用途，其中該患者是哺乳類 7.如申請專利範圍第1項之用途，其中該患者是人類。 8 · —種藉由抑制患者之7 5 T細胞以治療該患者之自 體免疫疾病之醫藥組成物，其包含治療該自體免疫疾病有效 量之（3-(2-乙基苯基）-5-(3-甲氧基）苯基）-111-[1，2,4]-三唑 和醫藥上可接受之載劑。 9·如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該疾病是 多發性硬化。 10.如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該疾病逶 全身性紅斑狼瘡 •23- 1284532 (2) 11. 如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該疾病是 類風濕關節炎。 12. 如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該疾病是 葡萄膜炎。 13. 如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該患者是 哺乳類。

14. 如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該患者是 ^ 人類。

-24- 1284532 陸、（一）、本索指定代表圖為：笫1圖 (二）、本代表圈之元件代表符號簡單說明：

柒、本案若有化學式時，請揭示最能顢示發明特徵的化學 式：

-4-