TWI237059B

TWI237059B - Enzymatic resolution of selective estrogen receptor modulators

Info

Publication number: TWI237059B
Application number: TW090110515A
Authority: TW
Inventors: Kevin Kun-Chin Liu
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2000-05-08
Filing date: 2001-05-02
Publication date: 2005-08-01
Also published as: ID30106A; CA2346426A1; JP2002000293A; PL347407A1; AU782597B2; HK1040264A1; RU2213778C2; YU31101A; EP1156120A3; KR100488385B1; EP1156120B1; CN1322842A; IL168341A; HUP0101874A3; US20070249025A1; KR20010102942A; CA2346426C; MXPA01004626A; ZA200103666B; AR031844A1

Description

A7 1237059 __ _B7_ 五、發明説明（彳）發明背景 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係關於用於製備作爲雌激素激動劑有用的5 -經取代之一 6 —環系一 5 ，6 ，7 ，8 —四氫萘一 2 —酉旱化合物之方法。天然形成的雌激素及展現”雌激素”活性之合成化合物的價値是其在醫學及治療法中的用途。以單獨或與其它活性劑組合之雌激素在傳統上的治療應用包括：口服避孕藥、減輕停經徵候群、避免先兆性或習慣性流產、減輕痛經、減輕功能障礙之子宮出血、輔助卵巢發展、治療青春痘、減少婦女體毛的過度成長（多毛症）、避免心血管疾病、治療骨質疏鬆症、治療攝護腺癌及產後哺乳期的壓抑〔Good man 及 Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (第 1 7 版) Macmillan Publishing

Company，1 985，第 1421 — 1423 頁〕。因此，已增加找出新合成化合物及先前已知是明確的雌激素之化合物（即能夠減低雌激素在雌激素組織中的作用）的新用途的興趣。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製自發展用於治療人類疾病及特殊生理症狀有用的新藥物有興趣的藥理學家的觀點而言，最重要的是獲得具有部份表現出似雌激素功能，但是全無增殖副作用之化合物。以實例說明後者的觀點，以使用全活性雌激素改善骨質疏鬆症，其是一種骨頭會漸漸變得更脆弱之疾病；但是，因爲經確認會增加長期以活性雌激素治療之病患的子宮癌風險，故在臨床上不建議長期以全活性雌激素治療處女之骨本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4- 1237059 A7 B7 五、發明説明（2 ) 質疏鬆症。因此，雌激素激動劑是主要的興趣及焦點° 骨質疏鬆症是一種全面性的骨骼疾病，其特徵在於低骨質及退化的骨組織’結果是增加骨頭脆弱性及容易罹患骨折，在美國，該症狀影響超過二千五百萬人及造成每年一百三十萬人骨折，包括每年5 0 0，0 0 0例脊椎、 2 5 0 ，0 0 ◦例臀部及2 4〇，〇〇〇例腰部骨折◦這些花費超過$ —百億的國家費用。以臀部骨折最嚴重，每年有5% — 2 0%的病患死亡及超過5 0%存活者失能。年長者具有最大的骨質疏鬆症風險，並因此預定該問題會隨著老化人口顯著增加。預測全世界的骨折發生率在未來6 0年會增加3倍，並且有一項硏究評估在2 0 5〇年將有四百五十萬的臀部骨折。婦女比男人更具骨質疏鬆症的風險。婦女會在停經之後的五年期間急速流失骨質。其它增加風險的因素包括抽煙、酒精成癮、久坐的生活型態及低鈣攝取。雌激素是一種避免婦女的骨質疏鬆症或停經後骨質流失之選擇試劑，其只是確定減少骨折的治療。但是，雌激素會刺激子宮及與增加子宮內膜癌的風險有關連。雖然以並存使用孕激素類被視爲會減低子宮內膜癌的風險，但是仍會憂慮以使用雌激素可能有增加乳癌的風險。本發明的槪述本發明係關於用於製備下式化合物之方法（方法A ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ------ -5- I 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1237059 A7 B7 五、發明説明（3)

Z1-G 其中： A係選自p 曰C H 2及n R ; B 、D 及 / 係獨立選自CH及NHY是 (a ) 代基取代；(b ) 代基取代；苯基，視需要將其以1 一 3個獨立選自R 4之取蔡基，視需要將其以1 一 3個獨立選自R 4之取 V > II------------IT------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 c 3 一 C 8環烷基，視需要將其以1 一 2個獨立进自R之取代基取代； (d ) C 3 - C 8環炔基，視需要將其以1 一 2個獨立選自R 4之取代基取代； (e ) 5員雜環，其包括多達2個選自由一〇一、一 N R 一及〜S (〇）《 —所構的群組之雜原子，視需要將該雜環以1〜3個獨立選自R 4之取代基取代； (f ) 6員雜環，其包括多達2個選自由—〇一、一本紙張尺度適用中國國家檩準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -6 - 1237059 A7 B7 五 '發明説明（4 N R 2 —及一s (〇）n 該雜環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代；或 (g )由融合成苯環之5或6歸雜严玄π α ◊口+ A 人ϋ貝木隹b系ϊ哀所組成的雙環系環系統，該雜環系環包括多達2個選自由一〇一、一 N R 2 一、N R 2 —及—s ( 〇 ) u 一所構的群組之雜原子，視需要將該環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代；Z 1 是土 ’ (a ) - ( C Η 2 ) ρ W ( G Η 2 ) q —; (b) — 〇 (CH2) pCR5r6 —; (c ) - 〇(C H 2 ) p W ( c H 2 )—； (d) —〇CHR2CHR3 —;或 (e) -SCHR2CHR3; G是所構的群組之雜原子’視需要將 m. 1-...... i - I— « - —ϋ - -I- 1^1 ml -11 i - - i— - - i^n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

a ) — N R 7 R b (⑶〜 (CHe)n 畢經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中n是0

或 2;m 是 1、2 或 3;Z2 是一 NH

—〇一、一S —或一CH ，視需要在鄰接的fe原t 上與1或2個苯基環融合，並視需要在碳上獨立以1或3 個取代基取代，並視需要在氮上獨立以選自r 4之化學上適合的取代基取代；或 (c )包括5至1 2個或架橋或融合之碳原子之雙環本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1237059 A7 B7五、發明説明（5 ) 1—Η 之 R 白選立是獨以以可要合需組見， ί 之並G ，與胺1 系 Ζ 代取基代取個

是 w

Η C Η c II Η c (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) \)/ c d 0 •， 2 〇 I R ( 〇 N s h 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(R 2 2 R 〇 R c c N Η 〇〇 c

或

\)y k 或 ( 氫是 R c 三 c 基烷 6 c 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -8- A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1237059 B7 五、發明説明（6) R 2及R 3係獨立是 ( a ) 氫 y 或 ( b ) C 1 - -C 4烷基； 1是 ( a ) 氫 J ( b ) 鹵素 j ( c ) c 1 - -c 6烷基； ( d ) c 1 · -c 4院氧基； ( e ) c 1 - -c 4酸氧基； ( f ) c 1 一 -c 4烷硫基； ( g ) c l - -c 4烷亞硫醯基； ( h ) c 1 - -c 4烷磺醯基； ( i ) 羥基 (c 1 — C 4 ) 院基 ( j ) 芳基 (c 1 — C 4 ) 院基 ( k ) — c 〇2 Η ； ( 1 ) — c N ； ( m ) — c 〇N Η〇R ; ( n ) — s 〇2 N H R ； ( 〇 ) — N H 2 > ( P ) c 1 - -C 4烷胺基； ( q ) c 1 - -C 4二烷胺基； ( r ) — N H S 0 2 R ； ( s ) — N 〇2 ( t ) 芳基；或 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -9- 1237059 A7 B7_____ 五、發明説明（7 ) (u )—〇 Η， R5及R6係獨立是Ci—Cs烷基或一起形成C3 - CiQ碳 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 環系環； R ,及R 8係獨立是 (a )苯基； (b )飽和或不飽和C 3 - C 1 ◦碳環系環； (c ) c 3 — C 1 〇雜環系環，其包括多達2個選自一〇一、—N —及一 S -之雜原子； (d ) Η ; (e ) c i — C 6烷基；或 (f )與R 5或R 6形成3至8員包括環之氮；可視需要以或線型或環形式之R 7及R 8以多達3個獨立選自C ^ 一 C 6烷基、鹵素、烷氧基、羥基及羧基之取代基取代；經濟部智慧財產局員工消費合作社印製可視需要以R ^與R 8形成的環融合成苯基環； e是0、1或2 ; m是1、2或3 ; η是〇、1或2 ; Ρ是〇、1 、2或3 ; Q是〇、1 、2或3 ; 及其旋光與幾何異構物；該方法包含將下式化合物在水解酵素及水性緩衝溶液的存在下以選擇性脫乙醯化本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） •10- 1237059 A7 B7

五、發明説明（8)

A 其中R1是（Cl— C6)院基、（C2 — C6)烯基、（ c 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代。以” GC — 4，PS30，AY30，PGE，AK ，N，L 一 10，AP - 12，FAP-15，R - 10 ，G，M A P 1 0及S A Μ I I ”係本發明所使用的脂肪酶酵素名稱，並由 Amano Chemical Co.，1157 North Main Street, Lombard， I L 6 〇 1 4 8 所銷售的。 “來自螢光假單胞菌之脂肪酶，來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶，來自m i e h e i毛霉菌之脂肪酶，來自小麥胚芽之脂肪酶，來自arrhizus根霉菌之脂肪酶，來自javanicus 白霉之脂肪酶，來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自cadia lipolytica之脂肪酶及來自婁地青霉roqueforti之脂肪酶” 術語係本發明所使用的脂肪酶酵素名稱，並由 Fluka Chemical Co., 1001 West St. Paul Avenue, Milwaukee， W I 5 3 2 3 3所銷售的。 “脂蛋白脂肪酶c a # 7 0 — 6 5 7 1 — 0 1及脂蛋白脂肪酶c a # 7 0 — 1 4 8 1 —〇1 ”術語係本發明所本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -11 - 1237059 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ____B7五、發明説明（9) 使用的脂肪酶酵素名稱，並由Genzyme Chemical Co.， One Kendall Square, Cambridge，MA 〇 2 1 3 9 所銷售的。 “來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶，來自黏質色桿菌之脂肪酶’來自miehei毛霉菌之脂肪酶，來自螢光假單胞菌之脂肪酶及來自白酒麩菌之脂肪酶”術語係本發明所使用的脂肪酶酵素名稱，並由 Recombinant Biocatalysis Chemical Co ·，512 Elmwood Avenue，Sharon Hill， P A 1 9 〇 7 9所銷售的。 “ I I型P P L ”術語係本發明所使用的脂肪酶酵素名稱，並由 Sigma Chemical Co_，P.〇.Box 14508, St. Louis，M〇6 3 1 7 8所銷售的。 “ L i p - 3 0 0 ”術語係本發明所使用的脂肪酶酵素名稱，並由 T〇Y〇B〇 Chemical Co · ， 1 4 5〇 Broadway, New York, N Y 1 〇〇 1 8 所銷售的。 “來自閹豬胰腺之固定式閹豬肝酯酶，來自熱厭氧菌 brockii之酯酶，來自桿菌屬之酯酶及來自miehei毛霉菌之酯酶”術語係本發明所使用的酯酶酵素名稱，並由Flu ka Chemical Co . ， 10 0 1 West St. Paul Avenue, Milwaukee，W I 5 3 2 3 3 所銷售的。 “來自豬胰腺之膽固醇酯酶，來自牛胰腺之膽固醇酯酶，來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶，來自豬肝之膽固醇酯酶，來自兔腺之膽固醇酯酶，膽鹼酯酶，來自電鰻之膽鹼酯酶，膽鹼酯酶，chol oyl甘胺酸水解酶及豬肝E - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12- 1237059 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ B7_五、發明説明（1C)3 1 2 8 ”術語係本發明所使用的酯酶酵素名稱，並由 Sigma Chemical Co.，P_ 〇.Box 1 4508，St. Louis， M〇6 3 1 7 8所銷售的。 “膽固醇-酯酶及來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶” 術語係本發明所使用的酯酶酵素名稱，並由 B 〇 e h r i n g e r Mannheim Chemical Co . ，9 1 1 5 Hague Road, Indianapolis， I N 4 6 2 5 0 所銷售的。 “來自貓I 一 1256，狗17379，鰻魚I — 1266，馬I 9627，小牛17876，天竺鼠 I 1631，鼷鼠 18254，山羊 I 2635，雞 I 8〇〇1 ，綿羊I〇1 3 2 ，鴿子I 8 3 7 6 ，海獅 I 7 6 2 7，響尾蛇I 9 8 8 5，鱒魚I 5 1 3 1 ，海龜 I 0 7 5 7 ，鼠I 1 3 8〇，肺魚I 7 3 7 7 ，鮭魚 I 7 5 0 2 ’鰻魚（起電盤式電鰻）I 8 3 8 0及檸檬鯊 ί 1 1 3 0 ’’術語係本發明所使用的肝丙酮粉酵素名稱，並由 Sigma Chemical Co.，Ρ·〇 Box 1 4 5 0 8， St.Louis，M〇 6 3 1 7 8所銷售的。本發明進一步係關於其中水解酵素是脂肪酶之方法A 〇本發明進一步係關於其中水解酵素是酯酶之方法A ◦ 本發明進一步係關於其中水解酵素是肝丙酮粉之方法 A。本發明進一步係關於其中脂肪酶是G C - 4、 PS30、AY3〇、Pge、AK、N、L-1〇、巧張尺度適财關家縣（公釐）- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -13- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1237059 A7 A 7 B7五、發明説明（11) AP— 12、FAP— 15、R— 10、G、MAP1〇、S A Μ I I 、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶、L 1 p - 3 0 0、來自黏質色桿菌之脂肪酶、來自m i e h e i毛霉菌之脂肪酶、來自胰臟之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自白酒麩菌之脂肪酶、I I型P P L、來自小麥胚芽之脂肪酶，來自a r r h i z u s 根霉菌之脂肪酶，來自javanicus白霉之脂肪酶，來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自cadia lipolytica之脂肪酶、來自青霉roqueforti之脂肪酶、脂蛋白脂肪酶c a # 7〇一 6 5 7 1 - 0 1、來自豬胰腺之脂肪酶及脂蛋白脂肪酶 c a #7〇一1 48 1 —〇1之方法A 。本發明進一步係關於其中脂肪酶是P L E — A、來自 .閹豬胰腺之固定式閹豬肝酯酶、豬肝E — 3 1 2 8、膽固醇-酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬胰腺之膽固醇酯酶、來自牛胰腺之膽固醇酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬肝之膽固醇酯酶、來自兔肝之膽固醇酯酶、膽鹼酯酶、來自電鰻之膽鹼酯酶、膽鹼酯酶，choloyl甘胺酸水解酶、來自熱厭氧菌brockii之酯酶、來自桿菌屬之酯酶及來自m i e h e i毛霉菌之酯酶之方法A。本發明進一步係關於其中肝丙酮粉是來自貓I 一 1 2 5 6 ，狗 I 7 3 7 9 ，鰻魚 I — 1 2 6 6，馬 I 9 6 2 7，小牛I 7 8 7 6 ，天竺鼠I 1 6 3 1 ，鼷鼠 I 8 2 5 4 ，山羊I 2 6 3 5 ，雞I 8 0〇1 ，綿羊 I〇1 3 2 ，鴿子I 8 3 7 6 ，海獅I 7 6 2 7 ，響尾蛇本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •14- A7 1237059 _ B7 五、發明説明（12) I 9 8 8 5 ，鱒魚I 5 1 3 1 ，海龜I〇7 5 7 ，鼠 1 1 3 8 0 ，肺魚 I 7 3 7 7 ，鮭魚 I 7 5 0 2 ，鰻魚（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

起電盤式電鰻）I8380及檸檬鯊I1130之方法A 〇本發明進一步係關於其中水解酵素係固定在固態載體上之方法A。本發明進一步係關於其中水解酵素具有純結晶形式之方法A。本發明進一步係關於其中水性緩衝溶液是磷酸鹽、檸檬酸或硼酸溶液之方法A。本發明進一步係關於其中水性緩衝溶液具有p Η介於約Ρ Η 6至約ρ Η 8之間之方法Α。本發明係關於用於製備下式化合物之方法

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其包含將下式化合物在水解酵素及水性緩衝溶液的存在下以選擇性脫乙醯化本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -15- 1237059 A7 B7 五、發明説明（13)

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中R1是（Cr— C6)烷基、（C2— C6)烯基、（ C 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代。本發明係關於用於製備下式化合物之方法（方法B )

其中： A係選自CH2及NR ; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16- N R 2 . 該雜環 1 一 1237059 五、發明説明（14)

及E係獨I選自c η及NH (a )本基’視需要將其以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； (b )奈基’視需要將其以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； (c ) C 3 — C δ環烷基，視需要將其以一 2個獨立選自R1之取代基取代； (d ) c 3〜C 8環炔基，視需要將其以丄_ 2個獨立選自R 4之取代基取代； e ) 5員雜環’其包括多達2個選自由—〇—、〜一及一 S (〇）u -所構的群組之雜原子，視需要將個獨立選自R 4之取代基取代； (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (ί ) 6員雜環，其包括多達2個選自由一〇一、— N R 〜及一 S (〇）η -所構的群組之雜原子，視需要將 δ亥雑ΐ哀以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代；或 (g )由融合成苯環之5或6員雜環系環所組成的雙 ί哀系環系統，該雜環系環包括多達2個選自由一〇一、一 N R 2 ——N R 2 — ’視需要將該環以1 Ζ 1是 (a ) — ( C Η 及

S 〇所構的群組之雜原子 3個獨立選自R 4之取代基取代； W ( C Η 2 ) (b)-〇(C Η 2 ) ρ C R 5 R 6 (c )—〇(C H 2 ) p W ( C H 2 ) q — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -17 1237059 五、發明説明（Μ) A7 B7 d e

一〇CHR2CHR —S CHR2CHR •，或 G是 b 一< (CH2^n 其中n是〇、i或2 ;m是i 或 Z 2 是一N Η (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇

一 S 或 C Η —;視需要在鄰接的碳原子上與1或2個苯基環融合，視需要在碳上獨立以丨或3個取代基取代，視需要在氮上獨立以選自R 4之化學上適合的取代基取代；或 (C)包括…2個或架橋或融合之碳原子之雙環系妝’並視需要以1 一 3個獨立選 v 曰之取代基取代； 2 與G之組合可以是經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18、 1237059 A7 B7 五、發明説明（16) X)/ \)/ d e /{V /|\

R N

S 〇

OMC \)y \)y 0 h

2 2 R 〇 R c c N H 〇

R

〇 C

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ( k ) -c 三c — 是氫或 C 1 — C 6烷基 y 2及 R ' 5係獨立是 ( a ) 氣；或 ( b ) Cl —c ^ 1院基 4是 ( a ) 氫； ( b ) 鹵素 y ( c ) C 1 -C ( 3院基 j ( d ) C 1 一 c 烷氧基 ( e ) Cl 一 c 1醯氧基 ( f ) C 1 一 c 1院硫基本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -19- 1237059 A7 B7 五、發明説明（17) (g ) C 1 一 C 4烷亞硫醯基 (h ) C 1 一 C 4院磺驢基； (1 L )羥基（C i _ -C 4 )烷基 (、 i )芳基（c i - -C 4 )烷基經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (k ) - C 0 2 Η ； (1 ) - C Ν ； (m ) - C Ο Ν Η Ο R ； (η ) - S Ο 2 Ν Η R ； (〇）—Ν Η 2 ; (Ρ ) C ! - C 4烷胺基； (Q ) C i — C 4 二烷胺基； (r ) - Ν H S 0 2 R ； (s ) - N 0 2 ； (t ) 一芳基；或 (u ) - 〇 Η， R 5及R6係獨立是〇 : — C 8烷基或一起形成C 3 -（：\〇碳環系環； R 7及R 8係獨立是 (a ) 苯基； (b )飽和或不飽和C 3 — C i 〇碳環系環； (c ) C 3 - C :。雜環系環，其包括多達2個選自一〇一、一N—及一S—之雜原子； (d ) Η ； (e ) C 1 - C 6烷基；或 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20- 1237059 A7 B7 形成的環融合成苯基環； ΐ 21 V— ΕΗΜΠ 五、發明説明（18) (f )與R5或R6形成包括環之3至8員氣；可視需要將或線型或環形式之R 7及R 8以多_ ^ ^姻觸t _ 自C! 一 C6烷基、鹵素、烷氧基、羥基及羧基之 ^ ^ 代；逐取可視需要以R 7與R e是〇、1或2 m是1、2或3 η是〇、1或2 Ρ是〇、1 、2或3 ; Q 是 0、1、2 或 3 ; 及其旋光與幾何異構物；該方法包含（a )將下式化合物在脂肪酶及水性緩衝溶液的存在下以酵素性解析

其中R 1是（C i 一 C 6 )烷基、（C 2 - C 6 )烯基、（ c 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代；及（b )將所形成的式I V化合物本紙張尺度適用中國榡準（CNS ) A4規格（21〇Χ297公釐） ---------——Ί,-I、玎.————聲 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -21 - 1237059 A7 B7 五、發明説明（19)

其中R 1係如以上的定義，與鹼在極性非質子惰性溶劑的存在下反應。本發明進一步係關於其中水性緩衝溶液是磷酸鹽、檸檬酸或硼酸溶液之方法B。本發明進一步係關於其中脂肪酶係來自m i e h e i 毛霉菌之方法B。本發明進一步係關於其中鹼是甲醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鋰或氫氧化鉀之方法B。本發明進一步係關於其中極性非質子惰性溶劑是甲醇、乙醇或水之方法B。本發明進一步係關於其中脂肪酶係固定在固態載體上之方法B。本發明進一步係關於其中脂肪酶是一種交聯酵素之方法B ◦ 本發明進一步係關於其中脂肪酶具有純結晶形式之方法B 〇本發明係關於用於製備下式化合物之方法尽、.氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) Γ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -22- [237059 A7 B7 五、發明説明（20)

VII 其包含（a )將下式化合物在脂肪酶及水性緩衝溶液的存在下以酵素性解析經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R1^ 〇

VIII 其中R1是（C l—C6)院基、（C2— C6)燒基、（ C 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代；及（b )將所形成的式X化合物本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） r V II------黉— — — Ί,-I1T丨_——辱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 23-

1237059 a7 A7 B7 五、發明説明（21)

X 其中R 1係如以上的定義，與鹼在極性非質子惰性溶劑的存在下反應。本發明係關於用於製備下式化合物之方法（方法C )

Z1 -G

其中： A係選自CH2及NR; β、D及E係獨立選自CH及NH ; Y是 (a )苯基，視需要將其以1 — 3個獨立選自R 4之取代基取代；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -------------—、訂——----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產¾員工消費合作社印製 -24- 1237059 五、發明説明（22) A7 B7 (b)萘基，視需要將其以1 代基取代； )C 3 - C 8環院基’視需要將其以1 一 2個獨立 ®自R之取代基取代； )C 3 - C 8環快基，視需要將其以1 一 2個獨立選自R 4之取代基取代；，員雜環，其包括多達2個選自由一〇一、〜 S (〇）n 一所構的群組之雜原子，視需要將 3個獨立選自R 4之取代基取代； (f) 6員雜環，其包括多達2個選自由一〇—、— N R 及一 S (〇）^ 一所構的群組之雑原子，視需要將 g亥雑環以1 一 3個獨立選自r 4之取代基取代；或 (g )由融合成苯環之5或6員雜環系環所組成的雙環系環系統，該雜環系環包括多達2個選自由一〇一、一 N R 2 —及該雜環以1

N R 經濟部智慧財產^員工消費合作社印製一戶斤構的群組之雜原，視需要將該環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； Z 1是 (a ) - ( C Η 2 ) p W ( C Η 2 ) q ^ ； (b ) - 0 ( C H 2 ) p C R 5 R 6 -;

N R

及一S 〇）

c ) - 0 ( C H

W

C H

d) -〇CHR2CHR e) -SCHR2CHR :或 G是 a ) - N R 7 R 8 ; 私紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐）個獨立選自R 1之取子

{請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -25 - 1237059 A7 五、發明説明（23) b (CH〇) (CHp>n- /、 11疋〇、1 或 2;m是 1、2 或 3 — Λ 〜Q __ m 、〜、〜S —或—c η 2 — ；視需要在鄰接的碳原子或2個本基S哀融合，視需要在碳上獨立以1或3個取代，視需要在氮上獨立以選自R 4之化學上適合的取代基取代；或、巳括5至1 2個或架橋或融合之碳原子之雙環系妝’並視需要以1 — 3傭鸿丄、邱 4 ^個獨此選自R之取代基取代； 2 〃 G之組合可以是

Z 2 是一N H

一 0CH

W是 r > ---I----------^!、訂------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 a ) — C Η 2 —; b) - CH-CH-c ) ; d ) ~ N R 2 - e)— S ( 0 ) η — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -26- 1237059 A7 B7 五、發明説明（24) one (g) - cr2(〇h) — (h ) - C 〇 N R 2 -(l ) - N R 2 C 0 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產¾員工消費合作社印製 ( k ) -c 三c — R : 是氫或 C 1 — C 6院基 y R : 2及 R 3 係獨立是 ( a ) 或 ( b ) C 1 —c 4院基， R 1是 ( a ) 氫； ( b ) 鹵素 ( c ) C 1 —c 6院基 y ( d ) C 1 —c 4烷氧基 y ( e ) C 1 —c 4醯氧基 y ( f ) C 1 —c 4院硫基 y ( g ) Cl -c 4院亞硫醯基 ( h ) C 1 -c 4院磺醯基；

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -27- 237059 A7 B7 五、發明説明（25)

(1 )羥基（C i — C , (j )方基（Ci—C^ (k ) 一 C 〇 2 Η ; (1 ) - C Ν ； (m ) - C Ο Ν Η Ο R (η ) - S Ο 2 Ν Η R 烷基；烷基；〇）一 Ν Η Ρ

C C 4烷胺基

Q

C c (r ) — Ν Η S 〇 2 R ; (s ) — Ν 〇 2 ; 芳基；或

(u )—〇 Η， R 5及R 6係獨立是C

C8烷基或一起形成C3 - C 碳 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

環系環； R 7及R 8係獨立是 (a )苯基； (b )飽和或不飽和C 經濟部智慧財產苟員工消費合作社印製

C

C 〇

C 碳環系環雜環系環，其包括多達2個選自- N-及一S-之雜原子； (d ) Η ； (e) Ci - C6院基；或 (ί )與R 5或R 6形成包括環之3至8員氮；可視需要將或線型或環形式之R 7及R 8以多達3個獨立選本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28- 1237059 A7 B7 五、發明説明（26) 自Ci — Ce院基、鹵素、院氧基、經基及代；之取代可視需要以R 7與R 8形成的環融合成苯基環· e是〇、1或2 ; m是1、2或3 ; η是〇、1或2 ; Ρ是〇、1 、2或3 ; Q是〇、1 、2或3 ; 及其旋光與幾何異構物；該方法包含（a )將下式化合物在脂肪酶及乙醯化試劑的存在下以酵素性解析

.21-G

—I:------Φ—------—tr——-----^9. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製及（b )將所形成的式I V化合物本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29- 1237059 A7 B7

IV R1 五、發明説明（27) 又

其中R 是（Cl — C6)院基、（C2— C6)燦基、（ c 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代，與鹼在極性非質子惰性溶劑的存在下反應 Ο

本發明進一步係關於其中水解酵素是脂肪酶之方法C 〇本發明進一步係關於其中脂肪酶是G C — 4、 PS30、AY30、PGE、AK、N、L— 1〇、 AP - 12、FAP — 15、R—1〇、G、MAP10 、S A Μ I I 、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶、L i p - 3 0 0、來自黏質色桿菌之脂肪酶、來自m i e h e i毛霉菌之脂肪酶、來自胰臟之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自白酒麩菌之脂肪酶、I I型P P L、來自小麥胚芽之脂肪酶，來自arrhizus 根霉菌之脂肪酶，來自j a v a n i c u s白黴之脂肪酶’來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自cadia lipolytica之脂肪酶、來自青霉素r 〇 q u e f 〇 r t i之脂肪酶、脂蛋白脂肪酶c a # 7〇— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） I ^ 訂 . (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -30- 1237059 A7 B7 五、發明説明（28) 6 5 7 1 - 0 1 、來自豬胰腺之脂肪酶及脂蛋白脂肪酶c a#7〇一 1481 —〇1之方法C。本發明進一步係關於其中乙醯化試劑是醋酸乙酯、醋酸乙烯酯、氯醋酸酯或三氟醋酸酯之方法C。本發明進一步係關於其中鹼是甲醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鋰或氫氧化鉀之方法C。本發明進一步係關於其中極性非質子惰性溶劑是甲醇、乙醇或水之方法C。本發明進一步係關於其中脂肪酶係固定在固態載體上之方法C。本發明進一步係關於其中脂肪酶是一種交聯酵素之方法C。本發明進一步係關於其中脂肪酶具有純結晶形式之方法C 〇本發明係關於用於製備下式化合物之方法 I--------MWI----Ί,--1T-------^9— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -31 - 1237059 A7 B7 五、發明説明（29)

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製其包含（a )將下式化合物在脂肪酶及乙醯化試劑的存在下以酵素性解析

及（b )將所形成的式X化合物本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -32- 1237059 A7 B7 五、發明説明（30) N 〇

X (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇 1人其中R1是（Cl 一 C6)院基、（ C2— C6)燒基、（ C 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1至 3個鹵基取代，與鹼在極性非質子惰性溶劑的存在下反應〇本發明係關於用於製備下式化合物之方法（方法D )

Z1—G 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

其中： A係選自CH2及NR;

B、D及E係獨立選自CH及NH 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） -33- 1237059 A7 -____ B7 五、發明説明（31) Y是個獨立選自R 4 $ φ (a )苯基，視需要將其以代基取代； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} (b )萘基，視需要將其以代基取代； (C ) C 3 — C 8環烷基，視需要將其以丄—2個獨立選自R 4之取代基取代； (d ) C 3 一 C 8環炔基，視需要將其以i 一 2個獨立選自R 4之取代基取代； (e)5員雜環，其包括多達2個選自由一〇—、一 N R 一及一 S (〇）π 一所構的群組之雜原子，視需要將該雜環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； (ί ) 6貝雑環’其包括多達2個選自由一〇—、一 N R —及一 S (）11 一所構的群組之雜原子，視需要將該雜環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代；或 (g )由融口成本環之5或6員雜環系環所組成的雙環系環系統，該雜環系環包括多達2個選自由一〇一、一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 N R 2 —、N R 2 一及一 s ( ^ ) η 一所構的群組之雜原子 ’視需要將該環以1 一 3個獨立選自r 4之取代基取代； Ζ 1是 (a ) - ( C Η 2 ) p W ( C Η 2 ) μ -; (b ) - Ο ( C Η 2 ) ρ C R 5 R 6 -; (c )-〇（C Η 2 ) μ W ( C Η 2 ) q —; (d)—〇CHR2CHR3 —;或本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -34 - 1237059 A7 B7 五、發明説明（32) )—SCHR2CHr G是 7 -η 8

a ) - N R R b (CH2〉m~\ -/ Z2 \(CH2>n—」 N Η

〇一、一S —或一CH ~ ;視需要在鄰接的碳原子上與1或2個苯基ί哀嘁合，視需要在碳上獨立以丨或3個取代基取代，視需要在氮上獨立以選自R 4之化學上適合的取代基取代；或 (C )包括5至1 2個或架橋或融合之碳原子之雙環系胺，並視需要以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； z 1與G之組合可以是 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 W是一 C Η - och2

b (c )-〇—； (d ) -NR2 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -35- 1237059 A7 B7 五、發明説明（33) (e) - S (〇）η — (f ) Ο ιι -c-; (g) - cr2(〇h)-(h ) - C 〇 N R 2 -(l ) — N R 2 C 〇一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (k ) — C = C —; R是氫或C i 一 Ce院基； R 2及R 3係獨立是 (a ) 氫；或 (b) Ci—C/ι 院基； R 1是 (a )氫； (b )鹵素； (C ) Cl — C6 院基； (d) Ci— C 4垸氧基； (θ ) C 1 一 C 4酿氧某； (f ) C 1 一 C 4院硫基；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -36- 1237059 A7 B7 五、發明説明（34) (g ) Cl- - C 4院亞硫釀基 (h ) C 1 - _ C 4院擴釀基； ( 1 )羥基（C i - -C 4 ) 院基 ( J )芳基（C i - -C 4 )烷基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (k ) 一 C 〇 2 Η ; (1 ) - C Ν ； (m ) - C Ο Ν Η 0 R ； (n) -S〇2NHR ； (ο ) - Ν Η 2 ； (Ρ ) C ! - C 4烷胺基； (Q ) C 1 - C 4 二烷胺基； (r ) - Ν H S Ο 2 R ； (s ) — Ν 〇 2 ; (t ) 一芳基；或 (u ) - 〇 Η， R5及R6係獨立是〇 i — C8烷基或一起形成C 3 - C "碳環系環；經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R 7及R 8係獨立是 (a )苯基； (b )飽和或不飽和C 3 - C i Q碳環系環； (c ) C 3 - C : 〇雜環系環，其包括多達2個選自一〇一、一N—及一S—之雜原子； (d ) Η ； (e) Ci - C6院基；或本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -37- 1237059 A7 B7 五、發明説明（35) (f )與R5或R6形成包括環之3至8員氮； (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 可視需要將或線型或環形式之R 7及R 8以多達3個獨立選自C i 一 c 6烷基、鹵素、烷氧基、羥基及羧基之取代基取代；可視需要以R 7與R 8形成的環融合成苯基環； e是〇、1或2 ; m是1、2或3 ; η是〇、1或2 ; Ρ是〇、1 、2或3 ; Q是〇、1 、2或3 ; 及其旋光與幾何異構物；該方法包含將下式化合物在脂肪酶的存在下以酵素性解析

xz1_G 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本發明進一步係關於其中脂肪酶係來自miehei毛霉菌之方法D。本發明進一步係關於其中脂肪酶係固定在固態載體上之方法D。本發明進一步係關於其中脂肪酶是一種交聯酵素之方本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -38- 1237059 A7 B7 五、發明説明（36) 法D。本發明進一步係關於其中脂肪酶具有純結晶形式之方法D。本發明係關於用於製備下式化合物之方法

其包含將下式化合物在脂肪酶的存在下以酵素性解析 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

XII 明說細詳的明發本本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -39- 1237059 A7 B7 五、發明説明（37) 方程式

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -40- 1237059 A7 B7 五、發明説明（38) 方程式2

G +

IV ---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Υ

G

V 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -41 - 237059 A7 B7 五、發明説明（39) 方程式

Z1—G

E \D

VI (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局ϋ貝工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -42- 1237059 A7 B7 五、發明説明（40) 方程式4

IT

G

G ----------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂華· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Λ

D—ΛΒί- )e 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -43- 1237059 A7 B7 五、發明説明（41) 方程式5

IV 11-------—φ^----Ί,--IT-------φ— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) -44 - 1237059 A7 _ B7 五、發明説明（42) 根據美國專利申請案第5 ，5 5 2 ，4 1 2號製備用於本發明的原料，將其全文倂入本文以供參考。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在方程式1之反應I中，以在水解酵素、在不同的固態載體上的流動式或固定式酵素、交聯酵素或結晶式酵素的存在下’以I I之酵素性解析法將式I I化合物轉化成式I及I I I之對應化合物。水解酵素包括（a )脂肪酶 (GC-4、PS30、AY3〇、PGE、AK、N、 L— 1〇、AP — 12、FAP-15、R- 1〇、g、經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 M A P 1 〇、S A Μ I I 、來自螢光假單胞菌之脂肪酶 '來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶、L i p - 3 0 0、來自黏質色桿菌之脂肪酶、來自miehei毛霉菌之脂肪酶、來自胰臟之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自白酒麩菌之脂肪酶、I I型P P L、來自小麥胚芽之脂肪酶，來自arrhizus根霉菌之脂肪酶，來自javanicus白霉之脂肪酶，來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自c a d i a I i ρ ο I y t i c a之脂肪酶、來自青霉素roqueforti之脂肪酶、脂蛋白脂肪酶 c a # 7 0 - 6 5 7 1 - 0 1、來自豬胰腺之脂肪酶及脂蛋白脂肪酶ca#70— 1481 — 01) ，（b)酯酶 (P L E - A、來自閹豬胰腺之固定式閹豬肝酯酶、豬肝 E - 3 1 2 8、膽固醇一酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬胰腺之膽固醇酯酶、來自牛胰腺之膽固醇酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬肝之膽固醇酯酶、來自兔肝之膽固醇酯酶、膽鹼酯酶、來自電鰻之膽鹼酯酶、膽鹼酯酶，choloyl甘胺酸水解酶、來自熱厭氧本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） •45- 1237059 A7 B7 _______ 五、發明説明（43) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 菌brockii之酯酶、來自桿菌屬之酯酶及來自miehei毛霉菌之酯酶或（c )肝丙酮粉（貓I 一 1 2 5 6，狗 I 7 3 7 9，鰻魚 I — 1 2 6 6，馬 I 9 6 2 7，小牛 17876 ，天竺鼠11631 ，鼷鼠18254，山羊 I 2 6 3 5 ，雞I 8〇〇1 ，綿羊I 〇 1 3 2 ，鴿子 I 8 3 7 6 ，海獅I 7 6 2 7，響尾蛇I 9 8 8 5 ，鱒魚 I 5131 ’ 海龜 10757 ’ 鼠 I 1380，3巾魚 I 7 3 7 7，鮭魚1 7 5 0 2，擴魚（起電盤式電鰻） I 8 3 8 0及檸檬鯊I 1 1 3 0。該反應係在具有或不具有有機溶劑（如二氯甲烷、四氫呋喃、丙酮、二甲基甲醯胺或二噁烷）之水性緩衝溶液中進行，如磷酸鹽、檸檬酸或硼酸緩衝液。緩衝溶液具有約6之p Η至約8之p Η，以約ρ Η 7較佳。反應係在介於室溫至約6 5 °C之間的溫度下（以約2 5 °C至約4 0 °C較佳）攪拌，攪拌的時間期限係依據所使用的酵素及外消旋混合物預期的對掌性異構物的過度轉化作用而定。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在方程式2之反應I中，根據以上方程式1之反應I 說明的步驟，藉由脂肪酶（如m i e h e i毛霉菌），以I I之酵素性解析法將式I I化合物轉化成式I V及V之對應化合物。在方程式.3之反應I中，在乙醯化試劑的存在下，如醋酸乙酯、醋酸乙烯酯、氯醋酸酯或三氟醋酸酯，藉由脂肪酶（GC — 4 、PS3〇、AY3〇、PGE 、AK、 N、L 一 1〇、AP - 12、FAP - 15、R—10、本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -46- 1237059 A7 B7 _ 五、發明説明（44) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本貢) G、ΜΑΡΙΟ、SAM I I 、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶、L i p - 3 0 〇、來自黏質色桿菌之脂肪酶、來自miehei毛霉菌之脂肪酶、來自胰臟之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自白酒麩菌之脂肪酶、I I型P P L、來自小麥胚芽之脂肪酶，來自arrhizus根霉菌之脂肪酶，來自javanicus白黴之脂肪酶，來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自 cad ia lipolytica之脂肪酶、來自青霉素roqueforti之脂肪酶、脂蛋白脂肪酶c a # 7 0 — 6 5 7 1 —〇1 、來自豬胰腺之脂肪酶及脂蛋白脂肪酶c a # 7 0 — 1 4 8 1 — 0 1 )，以V I之酵素性解析法將式V I化合物轉化成式I V及V 之對應化合物。該反應係在質子惰性溶劑（如二氯甲烷、 .乙二醇、二甲醚、二氯乙烷、己烷、四氫呋喃及二噁烷）及介於室溫至約6 5 °C之間的溫度下（以約2 5 °C至約 4〇°C較佳）攪拌，攪拌的時間期限係依據所使用的酵素及外消旋混合物預期的對掌性異構物的過度轉化作用而定〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在方程式4之反應I中，藉由脂肪酶（如m i e h e i毛霉菌），以I I之酵素性解析法將式V I化合物轉化成式i 及I I I之對應化合物。該反應係在質子惰性溶劑（如二氯甲院、乙一醇、一甲醚、二氯乙院、己院、四氫咲喃及二噁烷）及介於室溫至約6 5 °C之間的溫度下（以約2 5 °C至約4 0 °C較佳）攪拌，攪拌的時間期限係依據所使用的酵素及外消旋混合物預期的對掌性異構物的過度轉化作本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） '~~一~~' -47- 1237059 Α7 Β7 五、發明説明（45) 用而定。 (請先閱讀背面之注意事項存填寫本頁) 在方程式5之反應I中，以在極性非質子惰性溶劑中 (如甲醇、乙醇或水）的鹼（如甲醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鋰或氫氧化鉀）使I V脫乙醯化，將式I V化合物轉化成式I之對應化合物。該反應係在室溫下以介於1小時至約2 4小時之時間期間（以約6小時較佳）攪拌。實例1 -ί___二）川頁式—6 ( S )—本基—5 ( R ) —〔4 — ( 2 二肶咯烷一1—基乙氧某）苯基〕一 5，6 ，7，8 —四氬· 1 - 2 - 醇將對應於標題化合物之外消旋乙醯化物、以 5 I G Μ Α市售之來自豬胰腺之膽固醇酯酶（C 一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9 5 3 0 )與具有p Η 7之0 . 1 Μ磷酸鹽緩衝液之混合物以室溫攪拌。在3 0至5 0 %之轉化作用時終止酵素性解析法，並以高壓液相色層法監控該解析法。接著將溶液以醋酸乙酯萃取。將有機層以水，繼而以食鹽水淸洗，在硫酸鎂上乾燥，過濾及濃縮，以產生棕色固體。將殘餘物溶解在二氯甲烷中，並以比例9 : 1之二氯甲烷/甲醇及數滴Ν Η 4〇Η作爲溶離劑之S 1〇2上以閃蒸色層法純化，以產生成爲灰白色泡沫之產物。 'HNMR (2 5 0MHz，CDCl3): d 7 · 0 4 ( m，3 Η )， 6 · 7 4 ( m，2 Η )，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -48 - 1237059 A7 B7 五、發明説明（46) d 8 3 Η z ， 2 Η 〇(m Η 4 . 8 ( d ，J =8 · 6 H z ，2 H )， 4 ( d ，J =4 · 9 H z ，1 H )， 4 ( t ，J =5 · 3 H z ，2 H )， 4 ( d d ， J = 1 2 5 ，4 1 H z ， 1 H ) • 78 .6 8 m m m

4 H 1 H 1 H 1 · 8 8 ( m，4 H )，以對掌性Η P L C鑑定方式測定 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 產物之旋光純度經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -49-

Claims

附件2 A : 第9 Ο Π Ο 5 1 5號專利申請案 ' 中文申請專利範圍替換本民國94年]月26日修正種用於製備下式化合物之方法

其中= Α係選自CH2及NR ; B、D及E係獨立選自CH及N ; Y是取代基取代；本基，視需要將其以1 一 3個獨立選自R4之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} -ΙΛ 、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (b )萘基，視需要將其以；L 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； C - C 8環烷基，視需要將其以1 一 2個獨立選自R 4之取代基取代； -C 8環炔基，視需要將其以1 一 2個獨立選自R 4之取代基取代； (e ) 5員雜環，其包括至多2個選自由一〇一、 1237059 Α8 Β8 C8 D8 所構成的群組之雜原子，視需 r、申請專利範圍一 NR2 —及一S (〇）n 要將該雜以1 一 3個獨ΛΙ選自R 4之取代基取代； (f ) 6員雜環，其包括至多2個選自由—〇一、一 N R 2 —及一 S (〇）n 一所構成的群組之雜原子，視需要將該雜環以1 - 3個獨立選自R 4之取代基取代；或 (g )由5或6員雜環與苯環稠合而成的雙環系統，該雜環包括至多2個選自由一〇一、—nr2 —、Nr2 一及—S (〇）n -所構成的群組之雜原子，視需要將該環以1 一 3個獨立選自R 4之取代基取代； V 1 曰 L 疋 (a) -（CH2)Pw(CH2)q—; (b) -〇（CH2) PCR5R6—; (c) -〇(CH2)PW(CH2)q-； (d) —〇CHR2CHR3 —;或 (e) - SCHR2CHR3; G是 (a ) - N R 7 R 8 ; b II------Ρ! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -< (ch2v (CH2)n- 其中n是0、1或2 ; m是1、2 ·或3 ; Z 2是一 N Η - 〇 S —或一C Η -;視需要其鄰接的碳原子與1或2個苯基環稠合，並視需要在碳上獨立以本紙張尺度適用中國國家禚準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 1237059 a8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍或3個取代基取代，並視需要在氮上獨立以選自R 4之化學上適合的取代基取代；或 (c )包括5至1 2個碳原子之雙環胺，可爲架橋或稠合，並視需要以獨立選自R 4之1 一 3個取代基取代； Z 1與G —起可爲是 w II------1#! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) a Ηc \)y b Ηc II Ηc c /l\ d /l\ I R 〇 N 訂 6 /IV s 〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 NJ \)y g h /IV /(V (R 2 2 R 〇 R c c N Η 〇〇c 0 ο 一

η 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） 1237059 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍

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或 (k ) — C = C —; R是氯或C i — C6院基； R 2及R 3係獨立是 (a )氫；或 (b) Ci— C4 院基； R 4是 (a )氫； II------f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 b ) c ) d ) e ) f ) g ) h ) i ) j ) k ) 1 ) m ) n ) 〇 ) 鹵素； C C 6院基， Cl — C 4院氧基， Cl 一 C 4酿氧基， C 1 — C 4垸硫基， C 1 — C 4院亞硫釀基； C i — C 4烷磺醯基；羥基（C i 一 C 4 )烷基芳基（C ! 一 C 4 )烷基 —C 〇 2 Η，一 C N ; -C Ο N Η 0 R ；一 S 〇 2 N H R N H 訂私紙張尺度適用中國國家禚準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） 1237059 A8 Β8 C8 D8 申請專利範圍 (P ) C 1 - -C 4院胺基； (q ) Ci- -C 4 一垸胺基 (r ) - N H S Ο 2 R ； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (s ) - N Ο 2 ； (t )—芳基；或 (u )—〇 Η， R5及R6係獨立是〇 i — C8烷基或一起形成C3-C 1 (3碳環； R 7及R 8係獨立是 (a )苯基； (b )飽和或不飽和C 3 - C ! 〇碳環； (c) C3— C1〇雜環，其包括至多2個選自一〇一、一 N —及—S —之雜原子； d ) Η ； e ) C ί - -C 6烷基；或 f ) 與R 1 5或 R 6形成 3至8員之含氮的環經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R 7及R 8可爲線性或環形式，可視需要以至多3個獨立選自C ! 一 C 6烷基、鹵素、烷氧基、羥基及羧基之取代基取代；由R 7與R 8形成的環可視需要地與苯環稠合； e是〇、1或2 ; m是1、2或3 ; η是0、Ί或2 ; Ρ 是 0、1、2 或 3 ; _ -5-_ ϋ紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2】0Χ 297公釐） 1237059 A8 B8 C8 D8 t、申請專利範圍 Q是〇、1 、2或3 ; 及其光學與幾何異構物； (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 該方法包含在水性緩衝溶液及選自脂肪酶、酯酶和肝丙酮粉之水解酵素的存在下選擇性脫醯化下式化合物 E Λ

其中 R1 是（Ci— Ce)院基、（C2—Ce)M 基、 (C 2 - C 6 )炔基，其中視需要將烷基、烯基或炔基以1 至3個鹵基取代。 2 ·根據申請專利範圍第1項之方法，其中水解酵素是脂肪酶。 3 。根據申請專利範圍第1項之方法，其中水解酵素是酯酶。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 ·根據申請專利範圍第1項之方法，其中水解酵素是肝丙_粉。 5 ·根據申請專利軺圍弟1項之方法，其中水解酵奉是來自豬胰腺之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇醋酶及來自豬胰腺之膽固醇酯酶。 6 ·根據申請專利範圍第2項之方法，其中脂肪酶是 A K、N、L GC — 4、PS3〇、AY30、PGE 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) A4規格（210\29<7公董） 1237059 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —1〇、AP - 12、FAP-15、R-10、G、 MAP 10、SAM I I 、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自螺旋狀假絲酵母之脂肪酶、L 1 p - 3 0 0 '來自黏質色桿菌之脂肪酶、來自miehei毛霉菌之脂肪酶、來自胰臟之脂肪酶、來自螢光假單胞菌之脂肪酶、來自白酒麩菌之脂肪酶、I I型P P L、來自小麥胚芽之脂肪酶，來自arrhizus根霉菌之脂肪酶，來自javanicus白黴之脂肪酶，來自假洋蔥單胞菌之脂肪酶，來自cadia lipolytica之脂肪酶、來自青霉素「〇quefo「ti之脂肪酶、脂蛋白脂肪酶 c a # 7〇一6 5 7 1 — 0 1 、來自豬胰腺之脂肪酶及脂蛋白脂肪酶ca#7 0. — 1481 —〇1 。 7 ·根據申請專利範圍第3項之方法，其中酯酶是經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 P L E — A、來自閹豬胰腺之固定式閹豬肝酯酶、豬肝E 一 3 1 2 8、膽固醇一酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬胰腺之膽固醇酯酶、來自牛胰腺之膽固醇酯酶、來自螢光假單胞菌之膽固醇酯酶、來自豬肝之膽固醇酯酶、來自兔肝之膽固醇酯酶、膽鹼酯酶、來自電鰻之膽鹼酯酶、膽鹼酯酶，c h ο I 〇 y I甘胺酸水解酶、來自熱厭氧菌 brockii之酯酶、來自桿菌屬之酯酶及來自miehei毛霉菌之酯酶。 8 .根據申請專利範圍第4項之方法，其中肝丙酮粉是貓 I — 1 2 5 6，狗 I 7 3 7 9 ，鰻魚 I 〜1 2 6 6 ，馬I 9 6 2 7 ，小牛I 7 8 7 6 ，天竺鼠I 1 6 3 1 ，鼷鼠I 8 2 5 4 ，山羊I 2 6 3 5 ，雞I 8〇〇1 ,綿羊本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一(一〜 1237059 A8 B8 C8 D8 V、申請專利範圍 I 0 1 3 2 ，鴿子I 8 3 7 6 ，海獅I 7 6 2 7 ，響尾蛇 I 9 8 8 5 ，鱒魚I 5 1 3 1 ，海龜I〇7 5 7 ，鼠 I 1 3 8 0 ，肺魚I 7 3 7 7 ，鮭魚I 7 5〇2 ，鰻魚（起電盤式電鰻）I 8 3 8 0及檸檬鯊I 1 1 3 0。 9 .根據申請專利範圍第1項之方法，其中水解酵素係固定在固態載體上。 1 0 .根據申請專利範圍第1項之方法，其中水解酵素是一種交聯酵素。 1 1 ·根據申請專利範圍第1項之方法，其中脂肪酶具有結晶形式。 1 2 ·根據申請專利範圍第1項之方法，其中水性緩衝溶液是磷酸鹽、檸檬酸或硼酸溶液。 1 3 ·根據申請專利範圍第1項之方法’其中水性緩衝溶液具有介於約p Η 6至約p Η 8之間的P H ° 1 4 ·根據申請專利範圍第1項之方法，其係用於製備下式化合物 . -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、可經濟部智慧財產局員工消費合阼fi印製 ,Ν CT

VII 木紙張尺度適用中國國家襟準（CMS ) Α4規格（210Χ297公釐） 1237059 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其包含在水性緩衝溶液及選自脂肪酶、酯酶和肝丙酮粉之水解酵素的存在下選擇性脫醯化下式化合物 R C OUMnu^

V (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) C (基、烷基將烷要 ,需 \)/ 6視 C 中 I 其 C1基 ( ο 炔戈 RC 基中 | 鹵其 2 個 C 3 C至是 C 基以烯基 }炔或基烯經濟部智慧財產局員工消費合作社印製尺張紙 I本 NS C /\ 一準 I榇一家國一國 I中用 I適釐公