TWI235151B - Lactam compound - Google Patents

Description

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發明範圍 本發明係關於藥學及有機化學領域，並與抑制β·殿粉狀 蛋白肽釋放及/或其合成作用之化合物有關。 發明背景 在PCT申請案第PCT/US97/22986號說明供抑制卜殿粉狀 蛋白肽釋放及/或其合成作用之特定的内醯胺，並因此有助 於治療阿耳滋海默氏病。 本發明係提供新穎結晶物（N)_((S)_2_羥基甲基丁醯基） 丙胺酸基胺基甲基-2,3,4,5_四氫化_ih_3_ 私并氮呼-2-酮二水合物、其組合物與使用其之方法、製造 其之方法及製造其中間物之方法。本發明的結晶二水合物 有助於抑制β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用，並因此 有功於治療阿耳滋海默氏病。 因為（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L·丙胺酸基） -(S)_l-胺基·3 -甲基_2,3,4,5-四氫化-1H-3-苯并氮呼·2_酮有 助於治療阿耳滋海默氏病，故有需要生產成為純、穩定及 結晶形式之該產物，以滿足實際的藥學需求及規格。本發 明的新穎結晶二水合物具有適合於方便以商業規模調配例 子用於口服投藥之藥片的特性。 供生產（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基丙胺酸基） 胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化苯并氮呼-2-酮之 方法也必須是一種方便於以工廠規模生產之方法。此外， 產品應該具有可輕易過濾、輕易乾燥及方便貯存的形式。 而且，本發明的結晶二水合物具有適合的加工及貯存特性。 -4 - i張尺度適财關家鮮(CNS) M規格(謂χ挪公石 1235151 A7 五、發明説明

已發現可_以製備具有有利的特性之二水合物形式之 (N)(⑻2 基.3.甲基丁醯基）小(L•丙胺酸基卜⑻小胺基 -3-甲基-2,3,4,5-四氫化苯并氮呼·2•酮二水合物，並 且新形式之製造方法會滿足上述希望的特點。 本發明的概述 本發明係提供（NH⑻领基_3_甲基丁酿基）小(L_丙胺 酸基HSW-胺基甲基_2,3,4,5_四氫化_1H 3•苯并氮外 -2-11¾二水合物。 〜在另-個具體實施例中，本發明係提供包含（nm⑻1 趙基-3-甲基了 g|基卜叩-丙胺酸基 >⑻-}胺基|甲基 2’3’4’5 w氫化苯并氮呼_2_酮二水合物及在藥學上 可接受之稀釋液之藥學組合物。 在其中一種該方法的觀點中，本發明係專注於一種抑制 β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用之方法，其包含以有 效劑量之（N)_((S)l#i基-3·甲基丁醯基丙胺酸基） -(8)-1-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-出|苯并氮呼-2_嗣二 水合物投予需要其之病患。在特殊的方法具體實施例中， 本發明係提供-種治療阿耳滋海默氏病之方法，其包本以 有效劑量之（ΝΗ(8)-2_羥基_3·甲基丁酸基）-ML·丙胺二其 )-(S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化_111-3_苯并氮呼_2_酉土同 一水&物投予需要其之病患。本發明也提供一種預或抑制 阿耳滋海默氏病進展之方法，其包含以有效劑量之 (Ν)-((8)-2-羥基甲基丁·醯基卜^仏—丙胺酸基•胺基 -3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼_2-酮二水合物投予 -5-

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需要其之病患。 =發明係提供（NH(S)_2_膝3_甲基丁㈣）_叩_丙 g基MSW.胺基_3·甲基.2,3,4,5•四Α化秦3•苯并氮吁 二水合物供製造用於抑 廿人丄 ？ρ制卜殿粉狀蛋白肽釋放及/或 其：成作用(包括供治療阿耳滋海默氏病)之藥劑的用途。 在另—個具體實施例中，本發明係提供—種用於製造 -3-甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3 # # e η·、 虱 夂丰并氮呼-2-酮二水合物之方 法0 在延有的另一個具體實施例中，本發明係提，供一種用於 製造包括（NH⑻_2_經基.3_甲基丁酿基）]_(L_丙胺酸基） -(SW-胺基-3.甲基_2,3,4,5_四氣化_1h_3_苯并氮呼_2-銅之 内醯胺之方法及用於製造其中間物之方法。 本發明的詳細說明 根據本文所使用的術語具有以下指定的意義。 ee”或”對映異構過量”術語係指在兩個異構物之混合物 中（E〗+E2)具有以方程式+ X i〇〇〇/0== ee所計 算出過量的一個對映異構物（Ει)之百分比。如本技藝所熟 知，以毛細管電泳及化合物或其衍生物的對掌性HPLC可以 測定對映異構過量。 在本文使用（R)-與（S)-之Cahn-Prelog_Ing〇ld命名及以相 對於甘油醛異構物之立體化學的L-與D-命名代表特殊的異 構物。 ' 本發明係提（N)-((S)-2-#至基-3·甲基丁醯基）丙胺酸 -6 - 本紙張尺⑪用帽Η家標準(CNS) A4規格(21GX，涵 1235151 五、發明説明（4 基）-(8)_1-胺基_3-甲基-2,3,4,5-四氫化“1^3_苯并氮呷_2- 酮二水合物，持別是結晶（Ν)_((8)-2_羥基-3-甲基丁醯基） 丙胺酸基胺基_3·甲基 苯并氮呼-2-酮二水合物。 有許多適合於記述有機化合物結晶形之方法。例如，這 些方法包括差示掃描量熱法、固態NMR光譜測定法、紅外 線光譜學及X-射線粉末繞射法。其中以χ —射線粉末繞射法 及固態NMR光譜測定法非常有助於證實及區別結晶形式。 X-射線粉末繞射分析的進行如下。以或具有或不具有瑪 瑙研缽及杵研磨之樣品裝入X-射線粉末繞射測量之樣品固 疋架中。利用在50仟伏特及40毫安培下操作配備CuKa來源 1·54056Α)之Siemens D5000X-射線粉末繞射儀利用i 笔米之發散縫隙尺寸、1毫米之接收縫隙及〇·丨亳米之偵測 器縫測量X·射線粉末繞射圖案。將每一個樣品在4。至35。 (2Θ)之間以〇.〇2。的階段尺寸及3秒/階段之最大掃描速度掃 描。利用Kevex固態矽鋰偵測器收集數據。最適合以矽標準 依慣例進行儀器準線的核對。 "" 在結晶學技藝中熟知可以因為許多因素（包括較佳的定 向作用及/或粒子尺寸效應）而改變任何既定的結晶形式之 繞射峰的相對強度及峰寬度。可在出現較佳的定向作用及/ 或粒子尺寸效應之處改變峰強度，但是不會改變多晶形之 特性峰位置。參考例如The United States pharmac〇p〇eia #24, National F〇rmulary #19 ,第 1 843-1844 頁，2〇〇〇年。 利用研磨使本文揭示的部份繞射譜之峰強度之強度變化

I紙張尺度適财® ®家鮮(CNS) A4規格(2iGx297aD 1235151 五 Λ發明説明（ T至最低。但是，⑹果研磨已明顯改變繞射峰或會改變樣 -的結晶狀態時，則應該使用未研磨樣品之繞射譜。在小 的瑪碯研砵及杵中進行研磨。將在研磨期間的研ς固定及 以輕微的壓力施加於杵。 獲得以2Θ值之峰位置，並利用雙導數峰摘選法測量最突 出（大於20%之相對強度)的峰強度。 因此’本發明係專注於以陳列針對未研磨樣品與在研磨5 和1〇分鐘之後的樣品及利用以。心照射之上述方法所測 量的2Θ值及大於20%之相對強度⑴…⑽）之表〗的χ射線粉 末繞射圖案為特徵之結晶（NM(S)_2_羥基_3_〒基丁醯美 丙胺酸基HSH.胺基_3_甲基_2,3,4,5_四氫化_1Η；·3_ 丰并氮呼-2-酮二水合物： 2Θ (°) "836Τ 1Ζ433 15344 Τ9.224 20.495" ~206Γ I研磨 _ Ι〇/Ιιοο (%) ~'100 5ΪΤ 49.8 2Θ (°) ~8349 12^29^ 1324 Ϊ5336 Τ6.858 —19.233 "2048^ 20Μ4 12254 ~2Ζ63 24ΜΒ 研磨5分鐘 Ι〇/Ιιοο (%) ~~8^6~ 18J ~TL9 loo 283^ 47^" 44j "43 1975 以研磨5及10分鐘之樣品的強度更具有 性，在此希望達到最小的較佳的定向作用 2Θ (°) ~8.367 Ϊ2Α24 T3.254 15.352 Ί6Μ~ l924~ 20.601 研磨10分鐘 J〇/Iioo(%) 88JJl6 ^304 loo31 22.654 23.388 24.387 27J44 22.237 繞射圖案的代表^ 及/或粒子尺寸效 -8 - 1235151 A7 ___B7_ 五I發明説明（6 ) ' " 應。也應該注意在該表中所陳列以電腦產生的不符合的數 字。 因此可以利用具有在表i中所說明的峰之CuKa照射之2Θ 值之X-射線繞射圖案將以適當製備之樣品結晶（n)_((s)_2_ 經基-3-甲基丁醯基丙胺酸基胺基-3_甲基 -2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼-2-酮二水合物特徵化，並 且特別的是具有在 8.36、12.43、15.34、19.22、20· 50 或 20.63 的毕’更特別的是具有在8.36、12.43或15.34的峰；在8.36 及 12.43 的峰；在 8.36 及 15.34 的峰；在 8.36、12.43 及 15.34 的峰；或在 8.36、12.43、15.34、19.22、20.50及20.63的峰。 也可將結晶（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基丙胺酸 基HS)-1-胺基-3 -甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3-苯并氮呼-2- 酮二水合物以固態譜測法特徵化。固態化學位移 不僅反映分子結構，並也反映在結晶中的分子之電子結構。 可以利用13c交叉極化作用/標記角度旋轉（CP/MAS)完成 固態NMR (13C)分析。利用在i〇0 58〇 MHzi碳頻率操作、 配備完整的固體配件及Varian 7微米VT CP/MAS探針之 Varian Unity 400 MHz光譜測定儀獲得NMR(固或 SSNMR)光譜。取得數據如下：9〇。質子r f•脈衝寬度4 〇微秒 、接觸時間1.0毫秒、脈衝重複時間5秒、MAS頻率7.0 kHz 、光譜寬度50 kHz及取得時間50亳秒。化學位移係參考外 六甲基苯之甲基（δ=17·3 ppm)，即以六甲基苯置換樣品。 將（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基卜^仏-丙胺酸基）_(8)_卜 月文基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-113-苯并氮呼-2-酮二水合物 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 x 297公釐) 1235151

之化學位移數據（以以下的峰排列為基準）展示在表2中。

位置 在DMSO中的溶液 -水合物(固體） 2 ， 13 ， 16 169.27，171·73，172.89 169.9*，174.1*，176.7* 3，1卜 14 51.45，47.05，47.72 46.9，51.3 4 134.14 134.8* 5，6 124.18 ^ 125.99 124.0 7 127.19 127.9，128.9 8 130.38 132.1 9 135.32 136.9* 10，18 30.73，31.29 31.1 17 75.01 75.6 19 ， 20 ， 22 15.99，18.66，19.13 16.6* » 21.4* 21 34.18 35.3* 星號（*)代表出現在間歇的脫偶合光譜中的峰。 因此，以具有 16.6、176.6、174.1、169.9、136.9、134 8 、132.1、127.9、128.9、124.0、75.6、51.3、46.9、35.3 、31.1、21.4或16_6之化學位移（ppm)之固態13C核磁共振可 使結晶（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基） •(S)-l -胺基-3-甲基_2,3,4,5-四鼠化-111-3-苯并氮吁-2-酮二 水合物特徵化；更特別的是以75.6、35.3、21.4或16.6 ;任 何其中兩個75.6、35.3、21.4及16.6;75.6、35.3、21.4及16.6 -10-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（ ;或在 176.7、174.1、169.9、136.9、134.8、132.1、127.9、 128.9、124.0、75.6、51.3、46.9、35.3、31.1、21.4或 16.6。 在另一個具體實施例中，本發明係提供製造（N)-((S)-2-羥基_3_甲基丁醯基）-l_(L-丙胺酸基）-(s)-l-胺基_3_甲基 •2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼-2-酮二水合物之方法，其 包含將（N)-((S)-2-羥基·3·甲基丁醯基丙胺酸基 )-(S)-l-胺基-3 -甲基-2,3,4,5·四氫化-1H-3-苯并氮吁-2-酮 在產生（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基丙胺酸基 HS)-1-胺基-3·甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3·苯并氮呼-2-酮 二水合物之條件下自水溶劑結晶。 可以實驗測定形成（N)-((S)-2-羥基冬甲基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）_(S)-1-胺基-3_甲基·2,3,4,5-四氫化-1H-3·苯并氮 呼-2-酮二水合物的明確條件，並且只可能得到已發現適合 於實際應用的許多方法。 因此，例如，可在受控制的條件下以結晶作用製備 (N)-((S)-2·羥基-3-甲基丁醯基丙胺酸基）·胺基 -3-甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3-苯并氮呼酮二水合物。自 溶液的結晶作用及成漿技術屬於本發明方法的範圍内。特 別可自水溶劑的結晶作用製備本發明的二水合物。適合的 落劑是能夠在所使用的條件下包括足夠水份的溶劑，以形 成本發明的二水合物。較佳的溶劑是那些與水互溶之溶劑 ，如丙酮、低碳醇（如甲醇、乙醇及異丙醇）、醋酸及乙腈 。已特別發現以水丙酮較佳。關於既定的水溶劑，所使用 的水量將依據（NH(S)-2-羥基_3_甲基丁酸基）_ WL_丙胺酸 -11 - 1235151

五、發明説明（9 ) 基）-(S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5·四氫化-1H-3-苯并氮呼-2-酉同二水合物在與水比較之溶劑中的溶解度及是否使用結晶 作用或成漿技術而定。 通常以（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基） 胺基-3 -甲基-2,3,4,5-四氫化_111-3-苯并氮呼-2-酮溶 解在水溶劑中及接著允許以加入或不加入更多的水使其冷 卻，以得到固體，以完成結晶作用。典型係在约4〇t至所 選擇的水溶劑之回流溫度之初溫度下完成結晶作用。接著 將混合物冷卻’以得到結晶二水合物，以播種可能是有利 的。將結晶落液緩慢冷卻較佳。最方便將結晶作用冷卻至 室溫至約-20°C之溫度。 在還有的另一個具體實施例中，本發明係提供用於製造

之方法及用於製造其中間物之方法。

供用於製造式I之内醯胺的方法

其中 R1是健基、烯基、块基、環挺基、環埽基、經取代之燒

1235151 A7 B7 五、發明説明（10 ) 基、經取代之烯基' 經取代之炔基、經取代之環烷基、經 取代之環晞基、芳基、雜芳基及雜環系； R2是烷基、經取代之烷基、埽基、經取代之埽基、炔基 、經取代之炔基、環烷基、芳基、雜芳基及雜環系； R3是炊*基’ X!是氫、羥基或氟基， X2是氫、幾基或氟》基’或 Xi*X2—起形成氧基；及 V是從1至3個獨立選自由氫、羥基、醯基、醯氧基、燒 基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、烯基、經 取代之烯基、決基、經取代之块基、胺基、胺醯基、燒芳 基、芳基、芳氧基、歎基、幾燒基、氰基、齒基、硝基、 雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基及三_甲基所 構成的群組之基團； 該方法包含： (al)式（4)之内醯胺

(其中R3及V係如式I化合物之說明）的解析作用其係藉由 刀餾作用成為其二苯醯基酒石酸鹽、（化)-(-)-1〇_棒腦續酸及 ⑴）-㈠扁桃酸鹽類，以得到式（10)化合物 13 本紙張尺度相巾國國家標準(CNS) A4規格(21(^297公着） 1235151 A7 B7 五、發明説明（彳彳）

(b)以適當的式PgNH-CHR2_C(0)-A之經胺基保護之胺基 酸（其中R2係如式I化合物之說明及A是活化基，例如，_qh 、-Br或-C1及Pg是胺保護基）偶合，以得到式（11)化合物 v

裝 訂 (d)以式（12)化合物與適當的式RiCXiX^CCCOA〗化合物 (其中R!、X!及X2係如式I化合物之說明及A1是活化基，例 如，-OH、-Br或-C1)偶合；或 (a2)以式（10)化合物與式 R^cXiXrCCCONH-CHRr C(0)-A化合物（其中、r2、χ^χ2係如式I化合物之定義 及Α是活化劑，例如，·〇Η、-Br或-C1)偶合。 根據本文所使用的術語具有以下指定的意義： -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（12 ) ’’烷基n係指單價烷基，以具有從1至10個碳原子較佳及以 1至6個碳原子更佳。以如甲基、乙基、正丙基、異丙基、 正丁基、異丁基、正己基及類似物之類的基為實例說明該 燒基。 ’’CVC4烷基”術語係指單價烷基，以具有從1至4個碳原子 較佳。以如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁 基、第二丁基及特丁基之類的基為實例說明該術語。 ’·以經取代之烷基”係指具有從1至5個取代基（並以1至3 個取代基較佳）之從1至10個碳原子（較佳）之烷基，該取代基 係選自由烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環 燒基、環烯基、經取代之環晞基、醯基、醯胺基、醯氧基 、胺基、胺醯基、胺醯氧基、氰基、齒素、羥基、羧基、 酮基、硫代酮基、羧烷基、硫醇基、硫代烷氧基、經取代 之硫代燒氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環 系、幾胺基、烷氧胺基、硝基、_s〇•烷基、_8〇_經取代之 燒基、-SO-芳基、_so·雜芳基、-S〇2_烷基、_S(V經取代之 基、-S02_芳基、-s〇2_雜芳基及單·和二_燒胺基、單-和 二-(經取代之烷基）胺基、單-和二-芳胺基、單-和二_雜芳胺 基、單-和二-雜環系胺基及具有不同的取代基（選自烷基、 經取代之城基、芳基、雜芳基及雜環系）之不對稱二-取代 之胺所構成的群組。 燒撐”係指二價烷撐基，以具有從1至1 0個碳原子較佳及 以1至6個碳原子更佳。以如甲撐（_CH㈠、乙撐（_CH2CH2 J 丙心異構物（例如，-CH2CH2CH2_及_ch(cH3)CH2_)及類似 ___ _15_ Ϊ：紙張尺銳财關家辟格(綱X 297公釐)------ 1235151 A7 B7 五、發明説明（13 物之類的基為實例說明該術語。 ”以經取代之烷撐”係指具有從1至3個取代基之從丨至1〇 個碳原子（較佳）之烷撐基，該取代基係選自由烷氧基、經 取代之烷氧基、醯基、醯胺基、醯氧基、胺基、胺酸基、 胺醯氧基、氰基、卣素、羥基、羧基、酮基、硫代酮基、 複烷基、硫醇基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳 基、雜芳基、雜環系、硝基及單-和二-烷胺基、單_和二_ (經取代之烷基）胺基、單-和二-芳胺基、單_和二_雜芳胺基 、單-和二-雜環系胺基及具有不同的取代基（選自烷基、經 取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系）之不對稱二_取代之 胺所構成的群組。此外，這些經取代之烷撐基包括那些在 此將在烷撐基上的2個取代基稠合之烷撐基，以形成一或多 個稠合成烷撐基之環烷基、芳基、雜環系或雜芳基。這些 經稠合之環烷基以包括1至3個稠合之環結構。 ”烯撐”係指二價烷撐基，以具有從2至1〇個碳原子較佳及 以2至6個碳原子更佳。以如乙晞撐（-ch = CH-)、丙婦撐異構 物（例如，-CH2CH=CHK(CH3) = CH-)及類似物之類的基 為實例說明該術語。 ”以經取代之烯撐”係指具有從i至3個取代基之從2至10 個碳原子（較佳）之晞撐基，該取代基係選自由烷氧基、經 取代之烷氧基、醯基、醯胺基、醯氧基、胺基、胺醯基、 胺醯氧基、氰基、_素、羥基、羧基、酮基、硫代酮基、 幾fe基、硫醇基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳 基、雜芳基、雜環系、硝基及單-和二-烷胺基、單-和二- -16- 本紙張尺度賴中關家料(CNS) Μ規格(21()χ挪公楚) 1235151

(經。取代之烷基）胺基、單_和二_芳胺基、單_和二-雜芳胺基 單和一-雜銥系胺基及具有不同的取代基（選自烷基、經 取代之&基、芳基、雜芳基及雜環系）之不對稱二取代之 胺所構成的群組。此外，這些經取代之婦撐基包括那些在 此將在烷撐基上的2個取代基稠合之婦撐基，以形成一或多 個稠合成烷撐基之環烷基、芳基、雜環系或雜芳基。 烷芳基n係指-烷撐-芳基，以在烷撐部份中具有從i至8 個碳原子及在芳基邵份具有從6至1〇個碳原子較佳。以如芊 基、苯乙基及類似物之類的基為實例說明這些烷芳基。 烷氧基"係指π燒·0-”基。較佳的烷氧基包括以實例說明 的甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、特 丁氧基、第二丁氧基、正戊氧基、正己氧基、丨，2_二甲丁 氧基及類似物。 經取代之坑氧基’’係指”經取之燒基"基，在此經取代 之fe基係如以上的定義。 ”烷基烷氧基”係指，，-烷撐燒基，，基，其包括以實例說明 的甲撐甲乳基（-CH20CH3)、乙撐甲氧基（-CH2CH20CH3)、 正丙撐異丙氧基（·<：Η2(：Η2(：Η20(：Η(<：Η3)2)、甲樓特丁氧基 (-CH2-0-C(CH3)3)及類似物。 ’·烷基硫代烷氧基”係指烷撐4_烷基”基，其包括以實例 說明的甲撐硫代甲氧基（-CH2SCH3)、乙撐硫代甲氧基 (-CH2CH2SCH3)、 正丙撐硫代異丙氧基 (-CH2CH2CH2SCH(CH3)2)、甲撐硫代特 丁氧基 (-ch2sc(ch3)3)及類似物。 -17-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1235151 A7 ——____ B7 五、發明説明（15 ) ’’烯基’’係指具有從2至10個碳原子（較佳，並以2至6個碳 原子更佳）及具有至少1個烯基不飽和位置（並以從1-2個位 置較佳）之婦基。較佳的烯基包括乙晞基（_CH = CH2)、正丙 烯基（-CH2CH=CH2)、異丙婦基（-C(CH3)=CH2)及類似物。 ”經取代之晞基，’係指具有從1至3個取代基之如以上定義 之稀基，該取代基係選自由烷氧基、經取代之烷氧基、醯 基、醯胺基、醯氧基、胺基、胺醯基、胺醯氧基、氰基、 鹵素、羥基、羧基、酮基、硫代酮基、羧烷基、硫醇基、硫 代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、雜芳基、雜環系、 硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-S02-烷基、-S〇2-經取代之烷基、-S02-芳基、-S02-雜芳基及單-和二-烷胺基、單-和二-(經取代之烷基）胺基、 單-和二-芳胺基、單-和二_雜芳胺基、單-和二_雜環系胺基 及具有不同的取代基（選自烷基、經取代之烷基、芳基、雜 芳基及雜環系）之不對稱二-取代之胺所構成的群組。 ’’炔基”係指具有從2至10個碳原子（較佳，並以2至6個碳 原子更佳）及具有至少1個炔基不飽和位置（並以從1-2個位 置較佳）之烯基。較佳的炔基包括乙烯基（_CHsCH2)、丙炔 基（-CH2C=CH)及類似物。 ”經取代之炔基π係指具有從1至3個取代基之如以上定義 之块基，該取代基係選自由燒氧基、經取代之垸氧基、醯 基、醯胺基、醯氧基、胺基、胺醯基、胺醯氧基、氰基、 鹵素、羥基、羧基、酮基、硫代酮基、羧烷基、硫醇基、 硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、雜芳基、雜環 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（16 ) 系、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-S0-雜芳基、-S02-烷基、-S02-經取代之烷基、-SOy芳基、-so2-雜芳基及單-和二-烷胺基、單-和二-(經取代之烷基）胺基、 單-和二-芳胺基、單-和二-雜芳胺基、單-和二-雜環系胺基 及具有不同的取代基（選自烷基、經取代之烷基、芳基、雜 芳基及雜環系）之不對稱二-取代之胺所構成的群組。 π醯基’’係指烷基-c(o)-、經取代之烷基_c(o)-、環烷基 -c(o)·、經取代之環烷基-c(o)-、芳基-c(o)-、雜芳基-c(o)_ 及雜環系-C(0)-，在此燒基、經取代之燒基、環燒基、經 取代之環烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 ’’醯胺基’’係指-C(0)NRR基，每一個R基係獨立是氫、烷 基、經取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、 經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 π胺醯基π係指-NRC(0)R基，每一個R基係獨立是氫、烷 基、經取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基、 經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定義。 ’’胺醯氧基’’係指-NRC(0)0R基，每一個R基係獨立是氫、 烷基、經取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中烷基 、經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文的定 義。 ’’醯氧基”係指烷基-c(o)o_、經取代之烷基-C(0)0-、環 烷基-C(0)0-、芳基-C(0)0-、雜芳基-C(0)0-及雜環系 -c(o)o-，其中烷基、經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環 系係如本文的定義。 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1235151 A7 B7

五、發明説明（ ”芳基π係指具有單環（例如，苯基）或多縮合（稠合）環（例 如，莕基或蒽基）之從6至14個碳原子之不飽和芳族碳環系 基。較佳的芳基包括苯基、萘基及類似物。 除非以另外方式限制關於芳基取代基之定義，否則可視 需要將這些芳基以從1至5個選自由醯氧基所構成之群組之 取代基、1至5個（並以1至3個較佳）選自由羧基、醯基、烷 基、燒氧基、晞基、決基、經取代之燒基、經取代之燒氧 基、經取代之缔基、經取代之炔基、胺基、胺醯基、醯胺 基、坑芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、複基、幾燒基、氰 基、i基、硝基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、硫 代芳氧基、硫代雜芳基、-so-烷基、-so-經取代之烷基、 -S0_芳基、-SO-雜芳基、-S〇2_烷基、-S02-經取代之烷基、 -S〇2_芳基、-S〇2_雜芳基、三鹵甲基、單-和二-烷胺基、單 -和二-(經取代之烷基）胺基、單-和二-芳胺基、單_和二_雜 芳胺基、單-和二-雜環系胺基及具有不同的取代基（選自烷 基、經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系）之不對稱二_ 取代之胺及類似所構成的群組之取代基取代。較佳的取代 基包括烷基、烷氧基、_基、氰基、硝基、三齒甲基及硫 代烷氧基。 ’’芳氧基’’係指芳基-0-基，其中芳基係如以上的定義，包 括如以上定義之視需要經取代之芳基。 π羧烷基”係指-c(o)o烷基"基，在此烷基係如以上的定義。 π環烷基π係指具有單環系環或多縮合環之從3至12個碳 原子之環系烷基，包括經稠合-架橋及螺旋雙環系或多環系 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐)

1235151 A7 ___B7 五、發明説明（18 ) 化合物。這些環烷基包括以實例說明的環丙基、環丁基、 環戊基、環辛基及類似物，或多環結構，如金鋼燒基及類 似物。 ’·經取代之環烷基π係指具有從1至5個（以1至3個較佳）取 代基之環烷基，該取代基係選自由羥基、醯基、醯氧基、 烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、缔基、 經取代之締基、炔基、經取代之炔基、胺基、胺醯基、烷 芳基、芳基、芳氧基、酮基、硫代酮基、羧基、羧烷基、 氰基、li基、硝基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代 燒氧基、三_甲基及類似物所構成的群組。 %晞基係指具有早環系環及至少一點内部不飽和之4 至8碳原子之環系晞基。適合的環婦基實例包括例如環丁 -2-晞基、環戊-3-稀基、環辛-3-烯基及類似物。 ”經取代之環烯基”係指具有從1至5個取代基之環婦基， 遠取代基係選自由基、醯基、醯氧基、燒基、經取代之 燒基、燒氧基、經取代之烷氧基、缔基、經取代之晞基、 炔基、經取代之炔基、胺基、胺醯基、烷芳基、芳基、芳 氧基、羧基、酮基、硫代酮基、羧烷基、氰基、_基、硝 基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、三鹵甲 基及類似物所構成的群組。 ’’鹵基”或π鹵素”係指氟基、氯基、溴基及碘基，並以或 氟基或氯基較佳。 雜芳基係扣從1至1 5個碳原子及在至少一個環内（如果 有超過一個以上的環時）具有丨至4個選自氧、氮及硫之雜原 -21 _ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公菱) ~ " -- 1235151 A7 ________B7 五、發明説明（π ) 子之芳族碳環系基。 除非以另外方式限制關於雜芳基取代基之定義，否則可 視需要將這些雜芳基以1至5個選自由烷基、經取代之烷基 、烷氧基、經取代 < 烷氧基、芳基、芳氧基、函基、硝基 、雜芳基、硫醇基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、 硯代芳氧基、三函甲基及類似所構成的群組之取代基取代 。這些雜芳基可以具有單環（例如，吡啶或呋喃基）或多縮 合環（例如，旧哚嗪基或苯并嘧嗯基），包括經稠合_、架橋 及螺旋雙環系或多環系化合物。較佳的雜芳基包括吡啶基 、吡咯基及呋喃基。 雜環或雜環系’’係指具有單環或多縮合環（包括經稠合 -、架橋及螺旋雙環系或多環系化合物）、具有從1至15個碳 原子及在環内具有從1至4個選自由氮、硫或氧之雜原子之 單價飽和或不飽和基。 除非以另外方式限制關於雜環系取代基之定義，否則可 视需要將這些雜芳基以丨至5個選自由烷基、經取代之烷基 、烷氧基、經取代之烷氧基、芳基、芳氧基、函基、硝基 、雜芳基、硫醇基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、 硯代芳氧基、三卣甲基及類似所構成的群組之取代基取代 。廷些雜芳基可以具有單環或多縮合環。較佳的雜環系包 括嗎P林代基、喊啶基及類似物。 氮雜環及雜芳基之實例包括（但不限於此）吡咯、咪唑、 吡唑、吡啶、吡阱、嘧啶、噠嗪、啕哚嗪、異吲哚、啕哚 、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘吡啶、喹 -22- i紙張尺度適用巾關家鮮(CNS) A4^格(21GX297公嫠) - --- 1235151 A7 B7 20 ) 五、發明説明（ 嗔淋、’淋、噪淀、叶p林、菲淀、P 丫咬、菲繞琳、異VT塞峻 、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻唤、咪唑烷、咪唑淋、旅 淀、喊嗪、4丨嗓啦、嗎淋代、喊淀基、四氫吱喃基及類似 物與包括雜環之N-烷氧基氮。 ’’氧醯胺基’’係指-〇C(0)NRR基，在此每一個R基係獨立是 氫、燒基、經取代之烷基、芳基、雜芳基或雜環系，其中 基、經取代之烷基、芳基、雜芳基及雜環系係如本文之 定義。 ”硫醇π係指-SH基。 π硫代烷氧基”係指-S-烷基。 •’經取代之硫代烷氧基”係指-S-經取代之烷基。 為lb代方氧基”係指芳基_ § _基，其中芳基係如以上的定義 ’包括也如以上定義之視需要經取代之芳基。 ’’雜芳氧基’’係指雜芳基·〇-基，其中雜芳基係如以上的定 義’包括也如以上定義之視需要經取代之芳基。 在特殊的方法具體實施例中，本發明係提供用於製造式 (4)化合物之方法，如在方程式1及2的說明。在以下的方程 式中，所有的取代基係如先前的定義，除非有其它的定義 ’並且所有的試劑係本技藝熟知及認知的試劑。 方程式1 -23- 本紙張尺度適用中國國家標竿(CNS) Α4規格(210X 297公酱) 1235151 A7 B7 五、發明説明（21

在方程式1之步驟1中，將適當的式（丨）之义烷基苯乙胺以 適合的雙烷氧羰基醋酸酯轉移劑醯化，以得到式（2)化合物 。適當的式（1)之N-烷基苯乙胺是一種其中v及心係如最終 的式I產物所預期的。以2_溴基或氯基乙基苯與式H2N_R3 之胺在本技藝熟知及認知之條件下反應，可輕易製備這些 N-烷基苯乙胺。適合的雙烷氧羰基醋酸酯轉移劑是一種其 中R4是c「C4烷基及將雙烷氧羰基乙醯基轉移成式化合 物又試劑，如雙烷氧羰基醋酸及雙烷氧羰基乙醯氣。（參考 斑-意薛（Ben-Ishai)之丁etrahedron，43, 439-450 (1987))。 例如，將適當的式（1)之N —烷基苯乙胺與適合的雙烷氧羰 基醋酸接觸，以得到式（2)化合物。這些偶合反應是肽合成 作用中¥見的反應’並可以利用在其中所使用的合成方法 。例如，可以使用熟知的偶合劑促進該醯化作用，如使用 或不使用熟知的添加劑（如經基琥珀醯亞胺、丨_羥基苯并 -24- 1235151

一唑等）之碳化一亞胺。這些偶合反應常使用適合的鹼清除 在反應期間產生的酸。適合的鹼包括以實例說明的三乙胺 、N，N-二異丙基乙胺、N.甲基嗎淋及類似物。該反應依慣 例係在惰性的質子惰性極性溶劑中進行，如二甲基甲醯胺 、一氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃及類似物。該反應典 型係在從約Ot至約6(TC之溫度下完成及典型係需要從約1 至、24小時。旦反應元成時，則以熟知的方法回收式（2) 產物，包括以革取、沉澱、色層分離法、過濾、濕磨、結 晶及類似的方法。 另一選擇係例如以適當的式（1)之沐烷基苯乙胺與適合 的雙烷氧羰基乙醯氯接觸，以得到式（2)化合物。以本技藝 熟知的方法’可自對應的酸輕易製備這些醯基氯，如具有 或不具有少量二甲基甲醯胺之三氯化磷、磷醯氣、五氯化 磷、亞硫醯氯或草醯氯在惰性溶液中（如甲苯、二氯甲烷或 氯仿）以從約0-80°C之溫度下作用。典型係在從1小時至24 小時為範圍之時間期間内完成該反應。可將醯基氯分離及 純化或時常是直接使用，即以或不以分離及/或純化作用。 這些醯化反應通常使用適合的鹼清除在反應期間產生的酸 。適合的鹼包括以實例說明的吡啶、三乙胺、N，N_二異丙 基乙胺、N -甲基嗎琳及類似物。該反應依慣例係在惰性的 質子惰性極性溶劑中進行，如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃 及類似物。典型係在從約_20°C至約80°C之溫度下完成反應 ’並典型係需要從約1至約24小時。一旦反應完成時，則以 熟知的方法回收式（2)產物，包括以萃取、沉澱、色層分離 -25-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（23 ) 法、過滤、濕磨、結晶及類似的方法。 在方式程1之步驟2中，將式（2)化合物環化，以得到式（3) 化合物。 例如，以式（2)化合物與酸（如三氟甲烷磺酸或硫酸）反應 。典型係利用經選擇之酸作為溶劑完成該反應。該反應典 型係在從約-20°C至約〇°C的溫度下開始混合，並接著溫熱 至約室溫至約60°C之溫度。環化反應典型係需要從約12至 72小時。一旦反應完成時，則以熟知的方法回收式（2)產物 ，包括以萃取、沉殿、色層分離法、過滤、濕磨、結晶及 類似的方法。 在方程式1之步驟3中，將式（3)化合物去保護，以得到式 (4)化合物。 在本技藝中熟知及認知除去這些烷氧羰胺保護基之作用 ° 例如，參考 Protecting Groups in Organic Synthesis, Theodora Greene (1st and 2nd Editions, Wiley-Interscience) 及斑-意薛之 Tetrahedron· ϋ 439-450 (1987))。 方程式2 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

訂 1235151 A7

五、發明説明

在方程式2之步驟1中，將適當的式⑺之苯基醋酸衍生物 與適當的式（6)之祕偶合，以得到式⑺化合物。適當的式 (5)之苯基醋酸衍生物是一種其中v係如最終的式丨產物所 預期的及A2是活化基，例如，_〇H、_cl*_Br。適當的式（6) 之縮酸是一種其中R3係如最終的式I產物所預期的及R5是 Ci-C4垸基。這些偶合反應是肽合成作用中常見的反應，並 可以利用如在方程式1之步驟1中所使用的合成方法。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（25 ) 在方私式2之步驟2中所描述的偶合作用也可以在 Schotten-Baumann條件下利用適當的式（5)之苯基醋酸之醯 基鹵與適當的式（6)之縮合在混合的溶液中（如甲基特丁醚 、醋酸乙酯、四氫呋喃、丙酮或二乙醚與水）完成。利用適 合的鹼完成這種反應，如氫氧化鈉、氫氧化鉀 '碳酸鈉、 碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀。典型係將該反應劇烈攪拌 或揽動，並在-20°C至約80。(：之溫度下完成及典型係需要從 約1至約24小時。一旦反應完成時，則以熟知的方法回收式 (7)產物，包括以萃取、沉殿、色層分離法、過滤、濕磨、 結晶及類似的方法。 在方程式2之步驟2中’將式（7 )化合物環化，以得到式（8) 化合物。在酸中完成這些環化反應，如硫酸。典型係使用 私作為各劑。通常在從約-2 0 C至約1 5 0 °C的溫度下完成反 應，並典型係需要從約1至約24小時。一旦反應完成時，則 以沾知的方法回收式（8)產物，包括以萃取、沉澱、色層分 離法、過濾、濕磨、結晶及類似的方法。 在方秋式2之步驟3中’將式（8 )化合物進行胺轉移反應， 以得到式（9)化合物。在方程式2中描述肟化作用。以式（8) 化合物之晞酸酯與肟轉移試劑（如烷基亞硝酸酯）接觸會達 成辟化作用。以式（8)化合物與適合的驗（如特丁醇种、二異 丙基醯胺鋰、六甲基二矽疊氮鋰、六甲基二矽疊氮鈉、六 甲基二矽疊氮鉀及類似物）反應可以製備.式（8)化合物之晞 酸酯。以輝勒（Wheeler)等人之 Organic Syntheses，Coll. Vol. VI第840頁為實例說明這些肪化作用，其係說明以亞硝酸異 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1235151 A7 B7 五、發明説明（26 ) 戊酯與酮的反應製備預期的肟。典型係在溶劑中完成反應 ，如四氫呋喃。通常在從約-20°C至約50°C之溫度下完成反 應，並典型係需要從約1至約24小時。一旦反應完成時，則 以熟知的方法回收式（8)產物，包括以萃取、沉殿、色層分 離法、過濾、濕磨、結晶及類似的方法。 另一選擇可經由疊氮化物達成這種胺轉移反應。以式（8) 化合物之晞酸酯與疊氮化物轉移試劑（如甲苯磺醯疊氮化 物及三異丙基苯橫酸疊氮化物）之反應可以形成疊氮化物 。以伊凡斯（Evans)等人之 J. Am. Chem. Soc. 1 12: 401 1.403 0 (1990) 41為實例說明這些反應。典型係在溶劑中完成該反 應，如四氫呋喃。通常在從約-20°C至約50°C之溫度下完成 反應，並典型係需要從約1至約24小時。一旦反應完成時， 則以熟知的方法回收具有以疊氮化物代替肟之式（8)產物 ，包括以萃取、沉澱、色層分離法、過濾、濕磨、結晶及 類似的方法。 根據在方程式2之步驟4中的描述，將肋還原成式（4)化合 物。以氫及適合的觸媒（如雷尼（Raney)-觸媒或鈀觸媒，如 在碳上的鈀）處理會達成這些還原作用。典型係在溶劑中完 成該反應，如四氫呋喃、醋酸乙酯或低碳醇（如甲醇、乙醇 及異丙醇）、醋酸、水、水性氨及類似物與其混合物。通常 在從大氣壓至約600磅/平方英吋（413 7仟巴斯卡）為範圍之 氫壓下冗成該反應。通常在從約2〇艺至約1〇〇 t的溫度下完 成該反應，並典型係需要從約丨至約24小時。一旦反應完成 時，則以熟知的方法回收式（4)產物，包括以萃取、沉澱、 -29- 1235151 A7 B7 五、發明説明（27 色層分離法、過濾、濕磨、結晶及類似的方法。 另一選擇係在經由疊氮化物轉移胺之處，將疊氮基還原 。以上述的還原作用完成這些還原作用。 在進一步的有具體實施例中，本發明係提供用於製造包 括（N)-((S)-2_羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）_(s)_u^ 基-3 -甲基-2,3,4,5-四氫化·1Η-3-苯并氮吁酮之内醯胺（ 式I化合物）之立體有擇法及製造其對掌性中間物之方法。 在方程式Α中說明這些方法。

方法式A

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在方程式A之步驟1描述適當的式（4)之内醯胺的立體化 學解析作用，以得到式（1〇)之内醯胺。根據熟練的技術家 的認知，不必要將本發明的方法限制成單一異構物的製備 作用。本發明的方法寧可能夠製備内醯胺的任何一種特殊 的對映異構物，並特別適合製備1-胺基-3-烷基·2,3,4,5-四 氫化_1Η·3_苯并氮呼-2-酮之異構物。 本發明最適用於相當純的（s)_異構物之製備作用，因為 在2,3,4,5-四氫化_1H_3_苯并氮呼酮部份的（8)_異構物結 合更大的生物活性。如本文所使用的”相當純的"術語係指 (R)_或（s)-内醯胺之對映異構純度，並特別是（R)_及 胺基-3·甲基_2,3,4,5-四氫化-1H_3-苯并氮吁-2酮。根據本發 月 了以製備相當純的（S)-2 -胺基-3-甲基-2,3，4,5-四氫化 -1H-3-苯并氮吁_2•酮，包含大於8〇%之（s)_對映異構物，以 大於90%較佳，以大於95%更佳，以大於97%最佳。 例如，以二苯醯基酒石酸酯、（R)_〇_1〇_樟腦磺酸及 (DH_)扁桃酸鹽類之分餾作用可以解析式化合物的各個 異構物。預期各種廣泛的二苯醯基酒石酸酯會適合於該目 的。特別以具有選自由氫、齒素、Ci_C4烷基及Ci_C4烷氧 基所構成的群組之對位取代基之二苯醯酯較佳，以二-對_ 甲苯醯基酒石酸酯最佳。使用二-對·甲苯醯基酒石酸酯獲 得（S)-異構物。 义 在方程式A之步驟1較佳的具體實施例中，式（4)化合物是 一種其中V是氫及&是CrC4烷基（包括甲基、乙基、丙基、 異丙基、丁基、異丁基及第二丁基）之化合物，並以使用其 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1235151 A7

中V是氫及&是甲基之式（4)化合物最佳。 :據本發明的方法，將式⑷化合物與經選擇之酸接觸。 通吊可以使用從約0.4莫耳當量至超量的經選擇之酸以約 〇·4至1.5莫耳當量較佳，並以約耳當量更佳。 典型係以自溶液使酸加成鹽結晶的方式完成該方法如 低碳醇之類的溶劑特別適合，包括甲#、乙醇、正丙醇、 異丙醇、丁醇、第二丁醇、異丁醇、特丁醇、戊醇、異戊 轉、特戊#、己醇、環戊醇及環己醇，以甲醇、乙醇及異 ^醇較佳。可以方便使用抗溶#卜如本文所使用的，，抗溶劑 Π術語係指其中與溶劑比較使鹽顯然比較不可溶之溶劑。在 使用抗溶劑時，則以與經選擇之溶劑可互溶較佳。適合的 抗溶劑包括醚類（如二乙醚、甲基特丁醚及類似物）、低碳 醋酸烷基酯（如醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸異丙酯、醋酸丙 酯、醋酸異丁酯、醋酸第二丁酯、醋酸丁酯、醋酸戊酯、 醋酸異戊酿及類似物）及鏈院（如戊虎、己燒、庚燒、環己 烷及類似物）。在以自外消旋混合物使酸加成鹽結晶的方式 完成本發明的方法時，則必須小心使用抗溶劑，以避免不 希望的非對映異構物鹽的鹽結晶作用。 典型係在約40 C至經選擇之溶劑的回流溫度之初溫度下 及在從約0.05莫耳至約0.25莫耳之初濃度下完成結晶作用 。接著將混合物冷卻，以得到鹽。以播種可能是有利的。 可方便將初沉澱物攪拌從約4至48小時。使結晶溶液緩慢冷 卻較佳。最方便將結晶作用冷卻至室溫至約-2〇°c之溫度。 可利用本技藝熟知的技術收集鹽，包括過濾、傾析、離心 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)

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五、發明説明（3〇 、蒸發、乾燥及類似的技術。可直接使用式（1〇)化合物作 為經選擇之酸的酸加成鹽。另一選擇係在使用之前，可將 式（10)化合物分離成在酸交換之後的另一個酸加成鹽，或 在根據本技藝熟知或認定的驗性條件下以萃取作用可將其 分離成鹼。 、 在較佳的具體實施例中，本發明係提供相當的對映異構 純度之（S)-l-胺基-3 -甲基-2,3,4,5-四氫化-1H_3_苯并氮呼 2-酮之動態解析作用，其包含在芳族酸的存在下以動態法 將1胺基-3 -甲基_2,3,4,5_四虱化_1Η-3·苯并氮呼·2_酮結晶 成選自由二·對·甲苯基_L·酒石酸、（r)_g)_1〇•樟腦磺酸及 (DH-l·爲桃酸所構成的群組之酸的其酸加成鹽。動態法具 有使1-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-1^3-苯并氮呼_2_酮在 結晶期間進行轉化成單一異構物之好處，因此改進產量及 避免包括不希望的異構物之廢水流。 預期各種廣泛的醛會適合於本發明的方法，吾等已發現 實際上各種醛特別適合。吾等特別發現在本發明的動態解 析法中以水楊酸較佳，並以水楊醛、％硝基水楊醛及3，5_ *一氣水楊酸更佳。 因此’以動態解析法完成本發明的方法，以丨_胺基_3_甲 基-2,3,4,5-四氫化苯并氮呼-2-酮與經選擇之酸在醛 的存在下接觸。動態解析作用通常使用從約〇·9至丨·2莫耳當 量之酸，以約1莫耳當量較佳。通常使用催化量的醛。典型 係使用約0.5至0.001莫耳當量之醛，以約〇1至約〇 〇1莫耳 當量較佳。 -33-

1235151 A7 B7 五、發明説明（ ▲典型係在具有或不具有如上述的抗溶劑之溶劑中完成動 態法。將1-胺基_3_甲基_2,3,4,5-四氫化_1H_3_笨并氮呷-2_ 酮、經選擇之酸及醛之混合物攪拌，允許轉化成預期的異 構物。通常在從室溫至溶劑的回流溫度之溫度下完成該轉 化作用。轉化作用通常需要6至48小時。 根據熟練的技術家的認知，在以動態解析作用完成本發 明的方法時，則在分離的產物中有少量的酸存在下會使 (S)-l-胺基-3 -甲基-2,3,4,5_四氫化_1H-3-苯并氮呼-2_酮之 酸加成鹽的使用複雜化。因此，在動態解析作用之後，在 使用其或形成鹼之前，最好以鹽交換作用分離胺基 -3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呷_2-酮，以成為氫氯 酸鹽較佳。 根據熟練的技術家的認知，可在各種方法中使用式（i 〇) 化合物製備用於治療阿耳滋海默氏病有用的化合物。在 1997年12月22日提出申請的PCT申請案第pc T/US 9 7/22 98 6 號說明這些方法，並說明如下。本發明方法的特徵在於其 係利用以方程式A之步驟1所描述的解析作用生產式j化合 物。 以方程式A之步驟2描述適當的式pgNH-CHR2-C(0)-A之 經胺基保護之胺基酸與適當的式（1 〇)之内醯胺之偶合反應 。適當的經胺基保護之胺基酸是一種其中Pg是胺保護基， R2係如最終的式I產物所預期的及A是活化劑（例如，-〇H或 •C1)之胺基酸，其能夠與式（1〇)化合物之胺基偶合。熟悉本 技藝的人可輕易取得這些經胺基保護之胺基酸。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210X297公釐)

1235151 A7 __B7 五、發明説明（32 ) " 較佳的式PgNH-CHR2-C(0)-A之經胺基保護之胺基酸是 那些其中Pg是特丁羰基及苄氧羰基，r2甲基及那些具有L_ 胺基酸立體化學之胺基酸。 在方程式A之步驟2所描述的偶合反應包含依慣依以肽 合成作用進行的反應，並也可以使用在其中所使用的合成 方法。在方程式1之步驟1中詳細說明這些方法。 以反應方程式A之步驟3描述式（11)化合物之去保護作用 ’以得到式（12)化合物。這些係本技藝熟知及認知胺基保 護基之去保護作用。 以反應方程式A之步驟4描述適當的式（13)化合物、 RiCXA^C^COAi與式（12)化合物之偶合反應，以得到式I化 合物之去保護作用，以得到式（12)化合物。適當的式（13) 化合物是其中R!、X】&X2係如最終的式I產物所預期的，並 是本技藝熟知的化合物，包括在1997年12月22日提出申請 的PCT申請案第PCT/US97/22986號）及如本文所說明的化 合物。適當的式（13)化合物也可以具有在最終的式I化合物 所預期的立體化學。以類似於在方程式1之步驟1所指導的 那些方式，利用式（13)之酸（其中AiS-OH之化合物）或以其 衍生之醯基鹵（其中AiS-Cl或-Br*之化合物）完成在步驟3所 描述之偶合反應。 以反應方程式A之步驟5描述另一製備式I化合物之選擇 方法，其展示適當的式（10)化合物與適當的式（14)化合物， RiCXAyC^ohNH-CHRrC^COAa之偶合反應，以直接得到 式I化合物。適當的式（1 0)化合物係如步驟2的說明。適當的 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（33 ) 式（14)化合物是其中Rl、Xl、X2及R2係如最終的式I產物所 預期的化合物。適當的式（14)化合物也是其中立體化學係 如最終的式I產物所預期的化合物。 以羧基保護之胺基酸，H2N-CHR2-C(0)0Pgl與如上述的 式（13)化合物偶合可輕易製備式（14)化合物。再者，這些係 本技藝所熟知及會供給產物之偶合反應，在去保護作用之 後，以其提供式（14)化合物。 由以下的實例及製備作用進一步例證本發明。這些實例 及製備作用只做為例證而已，並不是企圖以任何方式限制 本發明。 在實例及製備作用中所使用的術語具有其一般的意義， 除非有其它的指定。例如，”。c，，係指攝氏度數，，，mm〇i，，係 指毫莫耳或數毫莫耳；” brine，’係指氯化鈉飽和水溶液； ’’THF”係指四氫呋喃；” HPLC，，係指高壓液態色層分離法等。 實例1 甲基-2,3,4,5_四氫化-1士3-苯#氡呼-21同夕合1 作用 口 將在1 0耄升DMF中成為溶液之2,3,4,5-四氫化苯并 氮呼-2-酮（0.0042莫耳）加入在15毫升無水DMF中的氫化鈉 (1 · 1當量）之泥漿中。接著加入甲基碘（約2當量）。以TLC確 定完成時’則將反應混合物倒在冰上及萃取至醋酸乙酯中 。將有機層以水及接著以氣化納飽和水溶液清洗。接著將 有機層經NaJO4乾燥，過濾及在減壓下濃縮。將殘餘物以 醋酸乙酯/己烷系統溶離之HPLC (LC 2000)純化，以得到3_ -36 -

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甲基_2,3,4,5_四氫化·1Η·3·苯并氮呼-2_酮。

將3 -甲基-2,3,4,5-四氫化苯并氮呼-2·酮（1當量）溶 解在THF中，並加入亞硝酸異戊酯（1·2當量）。將混合物在 冰浴中冷卻至〇°C。逐滴加入NaHMDS (1.1當量，在THF中 2 1M溶液）。在攪拌丨小時之後或直到反應完成為止，將混 否物;辰縮，接著以1N氫氣酸水溶液酸化及以醋酸乙酯萃取 。將有機部份乾燥及濃縮，以產生粗產物，將其以矽膠色 層分離法純化，以得到丨-羥亞胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化 -1Η·3-苯并氮呼_2·酮··質譜學（μ+η)+，205.1。

將1-經亞胺基-3 -甲基-2,3,4,5·四氫化-1Η-3-苯并氮呼-2-酮溶解在EtOH/NH3 (20 : 1)中，並在彈管中利用雷尼鎳及 氫（500磅/平方英吋/3447仟巴斯卡）在i〇〇t：氫化1〇小時。將 所得混合物過濾及濃縮，以提供油，將其以矽膠色層分離 法純化，以得到標題化合物。 實例2

IjJg基-3-甲基-2·3·4,5-四氫化-1H-3-茉并ft,呼同々合成 作用 將MTBE (5.52公升，7份體積）及（N-甲胺基）乙醛二甲基 縮酸（614公克，5莫耳）加入20公升馬頓（morton)燒瓶中，在 室溫下形成溶液。將加入碳酸氫鈉（546公克，6.5莫耳）及水 (6.31公升，8份體積）製備的碳酸氫鈉溶液加入馬頓反應燒 瓶中。將混合物冷卻至低於1〇。〇，並將苯基乙醯氣（789公 克，5莫耳）之MTBE (7 89毫升）溶液以經1小時逐滴加入冷卻 的反應混合物中。在加完之後，將反應混合物在室溫下攪 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（35 ) 拌1小時。在此階段以HPLC分析顯示反應完全。以mtBE (4 份體積）完成萃取，以無水硫酸鎂乾燥，接著在旋轉蒸發器 上濃縮，以提供1.187公斤（98%)成為液體之N-甲基_ν·(2,2-二甲氧基乙基）苯基乙醯胺，（Μ+Η)+=23 7·9。將H2S〇4 (1·42 公升）加入在強氮氣下的5公升馬頓燒瓶中，並將Ν-甲基 -Ν-(2,2-二甲氧基乙基）苯基乙醯胺（7 12公克，3莫耳）逐滴加 入反應燒瓶中，以其生成放熱（22至78°C )。接著將所得反 應加熱至1 1 0°C經3小時，然後冷卻至室溫，並轉移至2〇公 升馬頓燒瓶中。在低於10°C下，將反應混合物以水性氫氧 化鈉（9.18公升，5當量）中止。以醋酸乙酯（2X2.85公升）完 成萃取，以硫酸鈉乾燥，接著濃縮成固體，以提供520公克 (73.5%)成為固體之3 -甲基-4,5-二氫化-1H-3-苯并氮呼-2-酉同。可將该物質自MTBE再結晶，以得到增加純度之固體， 熔點=81-82°C ; (Μ + Η) + =174·2。 將3 -甲基-4,5-二氫化-1Η-3-苯并氮呼-2-酮（113.8公克， 0.657莫耳）之THF (0.5公升）溶液冷卻至〇。〇，並逐滴加入亞 硝酸異戊酯（100.75公克，0.86莫耳）。將NaHMDS (1當量之 THF溶液’ 854毫升，0.854毫莫耳）以使溫度維持在低於1〇 C之速度加入所得混合物中。在加完之後，允許反應在室 溫下攪拌2-3小時，同時以HPLC監控反應進度。一旦反應 完成時，則將混合物冷卻至〇°C，並利用水性HC1 (2N)將pH 從1 2調整至2-3。將所得的沉澱物攪拌丨丨6小時，接著以 過濾分離及乾燥，以提供86.3公克（64.9%) 1-羥亞胺基-3-甲基-4,5-一氲化-1H-3-苯并氮p平-2-酮；溶點=225-226°C ; -38 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公爱) 1235151 A7 B7 五、發明説明（36 ) (M+H)+= 203.0 〇 將1-羥亞胺基-3·甲基-4,5-二氫化苯并氮呼-2-酮 (35公克，0.173莫耳）之乙醇（525毫升）溶液與在碳上的鈀 (10%，3.5公克）一起成為稀釋的HCi泥漿（在17毫升水中的 1 7 · 5公克濃縮水溶液）加入加壓爸中。將所得混合物在5 〇 及250磅/平方英吋（1723仟巴斯卡）下氫化，直到反應完全為 止。將反應混合物經由利用乙醇作為溶劑之C鹽墊過濾，並 將過濾物濃縮成90亳升。將水（3 50毫升）加入濃縮物中，並 將所得溶液進一步濃縮成約2〇〇毫升。將二氯甲烷（35〇毫升 )加入水落液中，然後以水性氫氧化鈉（丨N)將pH調整至 11-11.5。將有機部份分離，並將水部份以二氯甲烷（175毫 升）萃取。將合併的萃取液濃縮成殘餘物，其會在靜置時結 晶’以得到標題化合物··熔點=69-81。〇；（M+H)+=191〇。 實例3 -~基-3-甲基-2,3,4·5-四氣化-1H-3 -笨并氣呼-2 -嗣之合成 作用 將二氣甲烷（4.73公升，8份體積）、Ν-甲基苯乙胺（591公 克’ 4.33毫莫耳）及水性碳酸氫鈉（436·7公克，5.2莫耳，在 4.73公升水中）加入22公，升馬頓燒瓶中。將混合物冷卻至低 於5°C ’並將氯基乙醯氣（513·7公克，4.55莫耳）之二氯甲烷 (887毫升）溶液以經7〇分鐘逐滴加入冷卻的反應混合物中 。在加完之後，以HPLC分析顯示反應完全。將層分離，並 將水層以二氯甲烷萃取。將合併的有機層經無水硫酸鎂乾 燥及在旋轉蒸發器上濃縮，以提供915.7公克（99.8%) Ν·甲 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(Cns) Α4規格(210X297公爱） 1235151 A7 _____B7_ 五、發明説明（37 ) 基-N-(2-苯乙基）-1_氯基乙醯胺，（μ+Η)+=212·1。 將Ν-甲基苯乙基）-1-氯基乙醯胺（883_3公克，4·17 莫耳）及對-二氯（6 · 1 8公升）加入在氮氣下的12公升燒瓶中 。加入氯化銨（13 19公克，10· 13莫耳），以其生成放熱（22至 5〇°C)。接著將所得反應加熱至165。(：經2.5小時，然後經約 14小時冷卻至室溫。將反應混合物冷卻至約〇〇c，並以四份 加入冷水中（8.86公升，約5°C)，以維持至約40°C的放熱作 用。將層分離，並將水層以二氯甲烷（7·〇7公升）萃取，並將 層分離。將有機層合併，並以水性氫氯酸（8.83公升，1N) 及接著以飽和碳酸氫鈉水溶液（7.〇7公升）萃取，經硫酸鎂乾 燥’與矽膠（883公克）合併，並加入矽膠管柱中（3.53公斤， 在燒結的玻璃漏斗中，包裝成在二氣甲烷中的泥漿）。將管 柱以二氯甲烷溶離，直到收集到25公升為止，接著以醋酸 乙酿溶離，以提供產物。將包括餾份之產物蒸發成608公克 (83%)成為黃褐色固體之3·甲基-2,3,4,5-四氫化]H_3-苯并 氮呼-2酮。 以在丁1^(7.88公升）中的3-甲基-253,4,5-四氫化-111-3-苯 并氮吁-2· (606公克，3.46莫耳）及亞硝酸異戊酯（543公克 ’ 4·5莫耳）在氮氣下的22公升馬頓燒瓶中。將混合物冷卻 至約〇°C，接著將LiHMDS (1當量之THF溶液，4.5公升，4.5 毫莫耳）以使得溫度維持在低於7 °C之速度加入所得混合物 中。在加完之後，允許反應在室溫下攪拌約2小時，同時以 HPLC監控反應進度。一旦反應完成時，則將混合物冷卻至 0°C，並利用水性HC1 (2N)將pH從12調整至約2'1。將所得 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 38 1235151 五、發明説明（ 沉澱物攪拌約6小時，然後以過濾分離及乾燥，以提供6〇47 公克（85.6%) 1·羥亞胺基甲基。，^弘四氫化-出-弘苯并 氮呼-2 -嗣。 將1-羥亞胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-1Η·3-苯并氮呼-2-酮（625公克，3.06莫耳）及3Α乙醇（15.6公升）成為溶液成為 稀釋的HC1泥漿（在320亳升水中的3 12公克濃縮的水性氫氯 酸），將其與在碳上的鈀（1〇%，12〇公克）一起加入加壓釜中 。將所得混合物在50°C及250磅/平方英吋（1723仟巴斯卡） 下以劇烈攪動氫化，直到反應完全為止（約4小時）。將反應 混合物經由利用乙醇作為溶劑之c鹽墊過濾，並將過濾物^ 縮，以得固體。將固體以二氯甲烷（6公升）處理，並加入以 氫氧化鈉水溶液，直到水層的pH介於u_115為止。將混合 物攪動，將層分離，並將水層以二氯f烷（2公升）萃取。將 有機層經硫酸鎂乾燥，過滤及在旋轉蒸發器中蒸發，以得 到477公克（81.9%)標題化合物。 實例4 合成作用 將1-胺基-3-甲基-2,3,4,5_四氫化.3_苯并氮吁I酉同 (1.544公克，8.12毫莫耳）在15毫升甲醇中緩慢加熱，以形 成溶液。將二-對·甲苯酿基小酒石酸（312公克，8 〇8毫莫 耳）在另-個燒瓶中溶解在15毫升甲醇中，並經由滴管加入 溫熱的胺溶液中。在固體沉科，則將混合物加熱。加入 另外30毫升甲醇’以獲得溶液，將其回流3〇_4〇分鐘，並接 -41 - 本紙張尺度適财關家鮮(CNS) Μ規格(靠挪公⑻_ 39 1235151 五、發明説明（ 著緩慢冷卻至室溫，以得到固體1 以過濾收集固體，並以少量的冷 ’、.+時《後， 克（S)-l-胺基_3_甲基_2 3 4 5 · 先，以得到2.24公 Z，J，4,5"·四虱化μ > 二务甲苯醯基心酒石酸鹽(96%產量， =呷·2·酮 酮二-對-㈣基心;石 解在45毫升之〗顧氫氧錢水溶液中莫耳)溶 25亳升）萃取。將合併的二氯甲燒層以35厂乳甲二3 X 鈉水溶液及接著以氯化鈉飽 笔广顧氳氧化 Μσςπ ^十主、 咫和水，合硬凊洗，並經無水

MgS〇4g。在真η除去_，以㈣π% 色油之標題化合物（87%產量，93 2%ee)。 ）成為…、 贵例5_ •酮之 合成作用 ~ 將1-胺基-3-:基-2,3,4,5_四氫化]H_3•苯并氮呼1酮 (6.0公克’ 31.5亳莫耳)在75亳升甲醇中緩慢加熱，以形成 溶液，並與在75毫升熱甲醇中的：冬甲苯醯基卜酒石酸 (12.2 a 1 3 1.5耄莫耳)之溶液合併。將溶液播種，並开)成 固體。加入另外100亳升甲醇，並允許混合物攪摔。在攪摔 約18小時之後，以過濾收集固體，並以少量的冷甲醇沖洗 ，以得到6·7公克固體。將固體與甲醇（2〇〇毫升）合併，並攪 摔。在18小時之後，將固體過濾，以得到（8)_卜胺基甲 基-2,3,4,5-四氫化-1Η-3-苯并氮呷_2_酮二-對-甲苯醯基丨· 酒石酸鹽（4.4公克）。以實例4所說明的步驟將鹼分離，以得 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 裝 訂 1235151 A7 B7 五、發明説明（40 ) 到標題化合物（96% ee)。 實例6 甚-3-甲基_2J，4,5-四氤化-1H苯并氤畔·2_酮夕 合成作用 將甲醇（4.38毫升）中的1-胺基-3 -甲基·2,3,4,5 -四氫化 -1H-3-苯并氮呼-2-酮（43 8公克，2.3莫耳）在22毫升溶器中的 氮氣下加熱（約40°C )，以提供溶液。將二-對-甲苯醯基-1_ 酒石酸（889.7公克，2·3莫耳）在另一個燒瓶中溶解在4.38公 升甲醇中，並加熱至約40 °C，然後加入1 -胺基-3-甲基 -2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼-2-酮。持續加熱，並加入 另外的6.13公升甲醇，然後將混合物回流約45分鐘，並接 著緩慢冷卻至室溫，以得到固體。在攪拌約1 8小時之後， 以過滤收集固體及以少量的母液沖洗，並在空氣乾燥之後 ，以約2公升醋酸乙酯得到561_6公克（S)-l-胺基-3_甲基 -2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼-2-酮二-對-甲苯醯基-1^酒 石酸鹽。將（S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮 呼-2-酮二-對-甲苯醯基-L-酒石酸鹽、二氯甲烷（6.57公升） 與1N^乳化鈉水洛液（6.57公升）合併及揽動。將層分離， 並以氫氧化鈉水溶液（3.28公升）萃取有機層兩次，以氯化納 飽和水溶液（2.46公升）萃取一次，然後經硫酸鎂乾燥，過滤 及在旋轉蒸發器上蒸發，以得到250公克標題化合物（57.4% ，94.1 % ee) 〇 實例7 (互VI-·胺-基-3-甲基-2,3·4·5-四氤化-1H-3-苯并I畔 -43- 本紙張尺度適财S ®家標準(CNS) A4祕(21G X 297公爱) " - 1235151 A7 B7 五、發明説明（41 ) 氯酸鹽之会成作用 將1-胺基-3·甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3-苯并氮呼-2·酮 (3 1.9公克，168毫莫耳）在約3 〇〇毫升醋酸異丙酯中成漿，並 加熱至45°C。在另一個燒瓶中，將（R)-( + D-扁桃酸（25.0 公克’ 164毫莫耳）在約130毫升異丙醇中加熱，直到形成溶 液為止，並加入以上所獲得的丨-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氳 化-1H-3-苯并氮呼-2-酮/醋酸異丙酯泥漿中，以得到溶液， 自該溶液快速形成沉澱物。將混合物在45°C下加熱約3小時 。將5-硝基水楊醛（2-羥基_5_硝苯醛）（1.40公克，8.38毫莫 耳’ 5莫耳％)加入溫溶液中，並將混合物在45〇c下攪拌。在 約14小時之後，將泥漿冷卻至室溫及攪拌2小時，然後以過 濾收集固體及以70毫升冷醋酸異丙酯沖洗，並在4〇°C的真 烘箱中乾燥，以獲得46.62公克（S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5- 四氫化-1H-3-苯并氮呼-2-酮（R)·扁桃酸鹽（82.9%產量，98.4% ee) 〇 將（S)-l-胺基-3 -甲基·2,3,4,5·四氫化-1H-3-苯并氮呼-2- _(R)-扁桃酸鹽（2.42公克，7.06毫莫耳98.4% ee)在約25毫 升醋酸乙酯中及在室溫下成漿。加入濃縮的水性氫氯酸 (1·1亳升，約11.2亳莫耳），並將混合物以劇烈攪拌加熱至 5〇°C經3.5小時。將泥漿冷卻至室溫及過濾，以甲基特丁醚 (約10亳升）沖洗，以得到1.48公克標題化合物（92.5 %產量， 97.9% ee) 〇 實例8 羥基-3-甲基丁炔基丙胺_某WS)-胺基 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

訂 1235151 A7 ______ B7_____ 五、發明説明（42 ) 甲基-2,3,4,5_jgg氳化-1H-3-茉并氮砰-2-酮之合成作用 將在THF中的N-特Boc_L-丙胺酸（1·0當量）、羥基苯并三 "坐水合物（約當量）及（S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化 -1H-3-苯并氮呼-2-酮（1·〇當量）在氮氣下裝入圓底燒瓶中。 將胡尼格氏（Hunig，s)鹼（ν，Ν-二異丙基乙胺，1.1當量）加入 完全攪拌的混合物中，接著加入EDC (1 · 1當量）。在室溫下 攪拌從4至17小時之後，在減壓下除去溶劑，將殘餘物溶解 在錯酸乙酿及水中，以碳酸氫鈉飽和水溶液、1Ν水性HC1 及氯化鈉飽和水溶液清洗，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，並 在減壓下除去溶劑，以提供丨·…·特B〇c-L>^胺酸基）胺基 -3_甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3 -苯并氮呼·2-酮：質譜學 (Μ+Η)+，362.3。 將無水HC1氣流通過在14-二噁烷中的•特 胺酸基）胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-1H-3·苯并氮呼-2·酮 之攪捽溶液（0.03-0.09 M)，在N2下的冰浴中驟冷至約1〇艺 經1 0-1 5分鐘。將溶液密封，接著移開冷卻浴，並允許溶液 以攪拌溫熱至室溫經2-8小時，以TLC監控原料的消耗。將 溶液濃縮，以得到1-(L·丙胺酸基）-(s)-胺基·3·甲基·2,3,4,5· 四氫化-1Η-3-苯并氮呼-2-酮，使用未進一步純化之該產物 〇 在THF中的1-(L-丙胺酸基HS)_胺基甲基_4,5,6,7_四 氫-3-甲基-2H-3-苯并氮呼-2-酮（1·〇當量）、羥基苯并三唑水 合物（約1.1當量）及（S)-2羥基-3·甲基丁酸（ι·〇當量）在氮氣 下。將胡尼格氏鹼（Ν，Ν-二異丙基乙胺，當量）加入完全 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（43 ) 揽拌的混合物中，接著加入EDC (1 · 1當量）。在室溫下揽掉 從4至17小時之後，在減壓下除去溶劑，將殘餘物溶解在醋 酸乙酯（或類似的溶劑）及水中，以碳酸氫鈉飽和水溶液、 1N H C1及鼠化鋼飽和水溶液清洗，經無水硫酸鋼乾燥，並 在減壓下除去溶劑，以提供標題化合物。 實例9 -3-甲基-丁炔某丙胺酸基）•脸莘 甲基-2丄4,5-四氫化-1Η·3_苯并氣.畔-2_酮之合成作用 將在丁册（3.76公升）中的]^-特6〇〇1^丙胺酸（249.5公克 ，1 ·32莫耳）、羥基苯并三唑水合物（232.2公克，1.52莫耳） 及（8)-1-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111-3_苯并氮呼-2-酮 (250.8公克，1.32莫耳）在氮氣下裝入圓底燒瓶中。將混合 物冷卻至低於5°C，然後加入胡尼格氏鹼（Ν，Ν-二異丙基乙 胺，188.4公克，1.45莫耳），接著加入EDC (283.7公克，1.45 莫耳）。在攪捽6小時之後，將反應混合物溫熱至室溫及攪 拌約14小時。在減壓下除去溶劑，將殘餘物溶解在醋酸乙 酯（3.76公升）及水（1.76公升）中，將層分離，將有機層以水 (1.76公升）萃取，將水層合併及以醋酸乙酯（176公升）萃取 。將有機層合併，以碳酸氫鈉飽和水溶液（1.7 6公升）萃取， 取無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在旋轉蒸發器上蒸發，以提 供463公克（97.2%) 1-(Ν-特Boc-L-丙胺酸基）胺基-3-甲基 -2,3,4,5-四氫化-111-3-苯并氮呼-2-酮。 以無水HC1通過利用液面下的分散管製備hci之醋酸乙 酯溶液，經由醋酸乙酯（1.76公升）冷卻至約〇。〇。將以上製 -46· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1235151 A7 __ B7 五、發明説明（44 ) 備的H C1之醋酸乙酿溶液加入在醋酸乙酉旨（3.7公升）中的 1-(Ν-特Boc-L-丙胺酸基）胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化 -1Η-3-苯并氮砰-2-酮（462公克，1.28莫耳）之劇烈攪拌的泥 漿中。加入另外的醋酸乙酯量（1公升），並允許反應混合物 溫熱至室溫及揽摔22小時。將反應混合物過滤，以得到固 體。將固體以乙腈（5公升）成漿，加熱至回流，並接著冷 卻至約60°C，然後過濾及乾燥，以得到389.8公克（94.7%) 〇 1-(1^丙胺酸基）-(8)-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111-3· 苯并氮呼-2-酮。將在丁1^(4.8公升）中的1_(1^丙胺酸基 )-(S)-胺基-3-甲基-2,3,4,5·四氫化-1Η·3 -苯并氮呼-2-酮 (369.5公克，1.18莫耳）、羥基苯并三唑水合物（2〇7.6公克， 1.36莫耳）、胡尼格氏鹼（Ν，Ν-二異丙基乙胺，352.2公克， 2.71莫耳）及（S)-2-羥基-3-甲基丁酸（140.6公克，1.18莫耳） 在氮氣下合併，並冷卻至低於5°C。加入EDC (253.7公克， 1.3莫耳），並允許反應混合物溫熱至室溫及攪拌。在約25 小時之後，將反應混合物以二氯甲烷（5.54公升）稀釋，以水 (2_22公升）萃取。將有機層以水（2·22公升）萃取，將水層合 併及以二氣甲烷（5.54公升）萃取。將有機層合併，以水（2.22 公升）及以碳酸氫鈉飽和水溶液（2.22公升）萃取兩次，經無 水硫酸鈉乾燥，過濾及在旋轉蒸發器上蒸發，以提供428 公克（100%)標題化合物。 實例10 羥基-3-甲基丁炔基VWL-丙胳s会葚芊 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1235151 A7 __B7 五、發明説明（45 ) r3.-甲基.-2,3,4,5-四氫化-1H_3-苯并f, p干-2-酮二水合物之合 成作用 將（N)-((S)-2_羥基-3-甲基丁炔基丙胺酸基>(s)_ 胺基-3 -甲基-2,3,4,5-四氫化-1H_3-苯并氮呼-2-酮固體溶解 在稍微溫熱（40°C )的丙酮（3 ·42公升）及水（〇 856公升）中。將 溶液分成〜2分升的份量，並分別加入水（7·丨9公升），同時將 霧狀溶液溫熱至5 0 °C。在加入完水之後，允許霧狀溶液冷 卻至室溫，以得到固體，將其在室溫下攪拌成泥漿經約j 4 小時’然後過濾及乾燥，以得到3 10.6公克（66.2%)標題化合物 〇 在使用本發明的藥品，則通常將其以藥學組合物投藥。 因此，在另一個具體實施例中，本發明係提供包含 (N)-((S)-2-羥基-3 -甲基丁炔基）-l_(L-丙胺酸基）-(s)-l-胺基 -3 -甲基-2,3,4,5-四氫化-1Η·3·苯并氮呷_2_酮二水合物及在 藥學上可接受之稀釋液之藥學組合物。使用這些組合物抑 制β-殿粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用，包括治療阿耳滋 海默氏病。因此，本發明係包含結晶物（NH(S)_2_羥基-3_ 甲基丁炔基）-l-(L-丙胺酸基）-(S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四 氫化-1Η - 3 -冬并氮π平-2 - g同二水合物供製造用於抑制β ·搬粉 狀蛋白肤釋放及/或其合成作用及尤其包括供治療阿耳滋 海默氏病之藥劑的用途。 可將結晶物（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基>1-(L-丙胺酸 基）-(S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5 -四氫化-1H-3 -苯并氮，_2_ 酉同二水合物以各種途徑投藥。可將本發明化合物以任何使 -48 - t紙張尺度適财_家鮮(CNS)__A4^(21()X 297公复) ----- 1235151

有效劑κ化合物具有生物利用性之形式或模式投藥，包 括口服及非經腸路徑。例如，可將本發明化合物以口服、 吸入、皮下、肌肉内、靜脈内、皮膚、、經鼻内、直腸、經 眼、局部、舌下、頰内及類似路徑投藥。 在製造本發明的組合物時，經常將活性成份與賦形劑混 合，以賦形劑稀釋或封在可以具有膠囊、藥囊、紙或其它 容器形式之載體内。可將本發明化合物單獨投藥，或以藥 學組合物形式投藥，即與在藥學上可接受之稀釋液以本發 明化學物的溶解度及化學特性、所選擇的投藥路徑及標準 的藥學實際應用所測定的比例及性質結合（馬克出版公司 (Mack Publishing Co· (1990))的第 18 版之 Remington，s Pharmaceutical Science)。 以藥學技藝熟知的方式製備本發明的藥學組合物。載體 或賦形劑可以是固體、半固體或液體物質，其可以具有作 為活性成份的媒劑或介質之作用。在本技藝熟知適合的載 體或賦形劑。藥學組合物可以適合於以口服、吸入、非經 腸或局部使用，並可以藥片、膠囊、氣溶膠、吸入劑、栓 劑、溶液、懸浮液或類似的形式投予病患。 就以口服治療法投藥的目的而言，可將化合物與賦形劑 合併，並使用藥片、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、 藥包、咀嚼膠及類似的形式。這些比例應該包括至少4%之 本發明化合物（活性成份），並可根據特殊的形式而改變， 可以依慣例介於2%至約90%之單元劑量之間。以在組合物 中存在的化合物量得以獲得適合的劑量。以熟悉本技藝的 -49- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1235151 A7 ---5!_ __η 五、發明説明（47 ) 人可以測定根據本發明較佳的組合物及製品。 藥片、藥丸、膠囊、錠劑及類似物也可以包括一或多個 以下的佐劑：結合劑，如微結晶纖維素、黃蓍膠或白明膠 ，賦形劑’如；殿粉或乳糖；崩散劑，如蕩酸 '普萊模膠 (Primogel)、玉米澱粉及類似物；潤滑劑，如硬脂酸鍰，碎 酮油或Sterotex ;滑劑，如膠態二氧化矽；並可以加入甜味 劑，如蔗糖或糖精，或香味劑，如薄荷、水楊酸甲酯或橘 子調味。當單元劑型是膠囊時，則其可以包括除了以上裂 式的物質之外的液態載體，如聚乙二醇或脂肪油。其它的 單元劑型以包括會改進劑型的物理形式之其它各種物質， 例如’以包覆。因此可將藥片或藥丸以糖、蟲膠或其它包 覆試劑包覆。糖漿可以包括除了本發明的化合物之外的蔗 糖作為甜味劑及特定的保存劑、染料及著色劑與香料。在 製備這些各種組合物所使用的物質應該具有藥學純度及使 用無毒性的量。 就非經腸投藥的目的而言，可將本發明的化合物併入溶 液或懸浮液中。這些製品典型係包括至少〇· i %之本發明化 合物’並可以在介於0.1%至約90%之其重量之間變化。以 在這些組合物中存在的化合物量得以獲得適合的劑量。溶 液或懸浮液也可以包括一或多個以下的佐劑：無菌稀釋液 ’如用於注射之水、氯化鈉飽和水液液、固定油、聚乙二 醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗細菌劑，如芊醇或 苯甲酸甲酿；抗氧化劑，如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螫合 劑、如乙撐二胺四醋酸；緩衝液，如醋酸鹽、檸檬酸鹽或 -50· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇Χ297公釐） 481235151 五、發明説明（ 外酉义鹽及供p周整強度之試劑，# t化鋼或右旋糖 。可將非 經腸，品封在安瓶、可棄式注射器或以玻璃或塑料製成的 夕对!1 I小瓶中。熟悉本技藝的人能夠測定較佳的組合物及 製品。 也可將本發明的化合物以局部投藥，並在以如此投藥時 ’則載體可以it合包含溶液、軟膏歧膠基底。該基底例 如可以包括一或多個以下的凡士林、羊毛脂、聚乙二醇蜂 蠟、礦物油、稀釋液（如水及醇）及乳化劑與安定劑。局部 調配物可以包括從約〇.!至約1〇重量/體積％(每單位體積計 之重量）之式I化合物或其藥學鹽。 另一個本發明較佳的調配物係使用皮膚輸送裝置（"貼片 )了以使用這些皮膚貼片提供連續式或非連續式擴散受 拴制量的本發明化合物。在本技藝熟知用於輸送藥學試劑 之皮膚貼片的構造及用途。參考在1991年6月u日頒佈之美 國專利申請案第5,023,252號，將其併入本文以供參考。可 將這些貼片構造成連續式脈動或依需要輸送藥學試劑。 為了更詳細例證本發明的操作，將在以下說明典型的藥 學組合物。實例只作例證而已，並不是企圖以任何方 制本發明的範圍。 裝 訂 調配實例1 製備包括以下成份的硬質白明膠膠囊： 成份 活性成份 量（亳克/膠囊） 30.0 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1235151 A7 B7 五、發明説明（49 ) 澱粉 305.0 硬脂酸鎂 5.0 將以上成份混合， 並以340毫克填入硬質白明膠膠囊中。 調配實例2 利用以下成份製備藥片處方： 成份 量（毫克/膠囊） 活性成份 25.0 被結晶纖維素 200.0 膠態二氧化碎 10.0 硬脂酸 5.0 將組份摻合及壓縮 ，以形成每一個重達240毫克之藥片。 調配實例3 製備包括以下組份之乾藥粉吸入劑： 成份 重量％ 活性成份 5 乳糖 95 將活性成份與乳糖混合，並將混合物加入乾藥粉吸入裝 置中。 調配實例4 如下製備每一個包括30毫克活性成份之藥片·· -52- 訂 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)

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五、發明説明（ 成份 活性成份 澱粉 微結晶纖維素 聚乙晞環p比咬酮 (在無菌水中成為1〇%溶液） 膠態羧甲基鈉澱粉 硬脂酸鎂 滑石粉 總計 量（毫克/膠囊） 30.0毫克 45.0毫克 35.0毫克 4.0毫克 4.5毫克 0.5毫克 1 ·〇毫克 120毫克 將活性成份、澱粉及纖維素通過第20號美國篩網，並徹 底混合。將聚乙缔環吡啶酮溶液與所得粉末混合，接著通 過16號美國篩網。將因此產生的顆粒在5〇至6〇〇c下乾燥， 並通過16號美國篩網。接著將事先通過第30號美國篩網之 膠態羧甲基鈉澱粉、硬脂酸鎂及滑石粉加入顆粒中，在混 合之後，將其在片片機上壓縮，以產生每一個重達150毫克 之藥片。 調配實例5 如下製成每一個包括40毫克藥劑之膠囊： 成份 活性成份 量（毫克/膠囊） 40.0毫克 裝 訂 線 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（51 ) 搬粉 109.0毫克 硬脂酸鎂 1.0毫克 總計 150.0毫克 將活性成份、澱粉及硬脂酸鎂摻合 ，通過第20號美國篩 網，並以150亳克填入硬質白明膠膠囊中。 調配實例6 如下製成每一個包括2 5毫克活性成份之栓劑： 成份 量 活性成份 25毫克 飽和脂肪酸甘油酯 至2,000毫克 將活性成份通過第60號美國篩網，並懸浮在利用必要的 最低熱量事先熔融的飽和脂肪酸甘油酯中。接著將混合物 倒入名義上2·0公克容量之栓劑模型中，並允許其冷卻。 調配實例7 如下製備每一個以5.0毫升劑量包括50毫克劑量之懸浮 液： 成份 量 活性成份 50.0亳克 漢生膠 羧甲基鈉纖維素（11%) 4.0毫克 微結晶纖維素（89%) 5〇.〇亳克 -54- 1235151 A7 B7 五、發明説明（52 ) 蔗糖 h75公克 苯甲酸鈉 1G·0毫克 香科及著色劑 q.v. 純水 至5 ·〇亳升 將活性成份、蔗糖、漢生膠摻合 ’通過第10號美國篩網 ，並接著與事先在水中製成的微結晶纖維素及幾甲基鈉纖 維素溶液。將苯甲酸鋼、香料及著色劑以部份的水稀釋， 並以攪拌加入。接著加入充份的水 ，以產生必要的體積。 調配實例8 如下製成每一個包括15亳克藥劑之膠囊： 成份 量（毫克/膠囊） 活性成份 15.0毫克 澱粉 407.0亳克 硬脂酸鎂 3.0毫克 總計 425.0毫克 將活性成份、澱粉及硬脂酸鎂摻合，通過第20號美國篩 網，並以560毫克填入硬質白明膠膠囊中。 調配實例9 如下製備靜脈用調配物： 成份 量 活性成份 1.0毫克 -55- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x297公釐) 53 1235151 五、發明説明（ 玉米油 1毫升 依據活性成份在玉米油中的溶解度而定，可在該調配物 中使用多達約5·〇毫克之活性成份(如果必要)。 調配實例1 〇 如下製備局部用調配物： 成份 活性成份 乳化蠟 液態石蠟 白色軟石蠟 量 1-10公克 30公克 20公克 至100公克 將白色軟石機加熱，直到溶融為止。併入液態石鐵及 礼化躐及仏拌’直到溶解為止。加人活性成份及持續授 拌，直到分散為止。接著將混合物冷卻，直到固化為止。 在其中-個本發明方法的觀點t，本發明係專注於一種 抑制P-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用之方法，其包本 以有效劑量之（NH(S).W基_3_甲基丁酿基…丙㈣ 基HSW-胺基-3-甲基_2,3,4,5.四氫化_1H_3_苯并氮吁_2_ 酮二水合物投予需要其之病患。 中，本發明係提供-種治療阿耳、、兹 成、/ Ί實施例 口僚阿耳滋海默氏病之方法，其向 含以有效劑量之（NH⑻_2.録_3_甲基丁酿基）_iϋ胺 酸基HS)小胺基-3-甲基_2,3,4,5_四氫化_1Η·3 -2-酮二水合物投予需要其之病患。 氣干 -56- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公茇） 1235151

熟悉本技藝的人也認知以治療目前為阿耳滋海默氏病所 苦之病患或以預防治療有發生該疾病風險的病患可以影響 阿耳滋海默氏病。因此企圖以，，治療（treatment)n及，，治療 (treating)”表示所有可以減緩、妨礙、遏止、控制或終止阿 耳滋海默氏病進展的方法，但是未必需要完全消除所有的 徵候。以至於本發明的方法包括預防有發生阿耳滋海默氏 病風險之病患的阿耳滋海默氏病的攻擊、抑制阿耳滋海默 氏病的進展及治療惡化的阿耳滋海默氏病。 如本文所使用的”病患”術語係指溫血動物，如哺乳類， 其受與增加β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用有關的 異常所苦，包括阿耳滋海默氏病。當然以天竺鼠、狗、描 、老鼠、鼷鼠、馬、牛、羊及人類係屬於在該術語的定義 範圍内的動物實例。可輕易診斷需要此種治療之病患。 如本文所使用的”有效劑量，，之式][化合物術語係指供抑 制β·澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合作作用之有效劑量，尤其 是治療阿耳滋海默氏病。 以參與的#斷師（如熟釋悉本技藝的人）、以使用熟知的 技術及以觀察在類似的環境下所獲得的結果可輕易測定出 有效劑量。在測定結晶物（Ν)·((8)-2-羥基_3-甲基丁醯基）_i_ (L-丙胺酸基）-(S)_卜胺基·3_甲基_2,3,4,5_四氫化-1]9[_3_苯 并氮呼-2-酮二水合物劑量的有效劑量時，參與的診斷師會 考慮許多因素，包括（但不限於此）(N)_((S>2_羥基_3_甲基丁 醯基）-l-(L-丙胺酸基）_(8>1•胺基甲基-2,3,4,5-四氫化 _1H _3_苯并氮呷-2-酮之效力及特徵、病患種類、其尺寸、 -57-

1235151 A7 B7 五、發明説明（55 ) 年齡及一般的健康狀況、疾病的涉入程度及嚴重性、各個 病患的反應、投藥模式、所投予之製品的生物利用率特徵 、所選擇的劑量攝取、其它並用的藥劑使用及其它相關的環 境。 預基結晶物（N)-((S)-2-羥基-3·甲基丁醯基丙胺酸 基）-(8)-1-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-11^-3-苯并氮呼-2- 酮二水合物的有效劑量會自以每公斤體重計每天約〇·丨毫克 (毫克/公斤/天）變化至約100毫克/公斤/天。熟悉本技藝的人 能夠測定較佳的量。 可在包括以下的各種生物系統中測試本發明的結晶物 (N)-((S )-2-經基-3-甲基丁醯基）-1-(L-丙胺酸基）-(s )-1-胺基 -3 -甲基·2,3,4,5-四氫化_1Η-3-苯并氮呼-2-酮二水合物。

實例A 供偵測β-澱粉狀蛋白生產之抑制劑的細胞篩選作用 檢定許多式I化合物抑制在具有Swedish突變之細胞株中 生產β -殿粉狀蛋白之能力。該篩選檢定係使用以包括雙突 變Lys651Met652至Asn651Leu652 (ΑΡΡ751編號）之澱粉狀蛋白先 質蛋白質751 (APP751)基因以國際專利申請公告案第94/ 105 698號及中希壯（Citron)等人所說明的方式穩定轉染之 細胞。常常將這種突變作用稱為Swedish突變，並將指名為 ”293 75 1 SWE”之細胞以每個井計2-4χ104個細胞覆蓋在加 上10%胎牛血清之Dulbecco’s動物基本介質（蒙大拿州St. Louis之Sigma公司）中的Dulbecco之Corning 96-井平盤中。 細胞具有重要性，以便於達到在線型檢定範圍内的β-澱粉 -58- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210Χ 297公釐) 裝 訂 線 1235151 A7 B7

狀蛋白ELISA結果（〜〇·2至2·5亳微克/亳升）。 在以ίο%二氧化碳平衡的培育器中以37t培育隔夜之後 ，取出介質，並將每一個井以包括介質之2〇〇亳升式〗化合 物（藥物）置換，經2小時的預處理時間，並將細胞如上方式 培百。在100%二甲基亞颯中製備藥物儲備液，使得在處理 時所使用的最終藥物濃度之二甲基亞砜之濃度不超過05〇/〇 ，且事實上經常等於0.1〇/〇。 在預處理時間結束時，再取出介質，並以如以上包括介 質之新鮮藥物置換，並將細胞再培育2小時。在處理之後， 將平盤在室溫下的Beckman GPR中以1200轉/分鐘離心5分 鐘，使來自調理介質之細胞碎屑成為小球形。將來自每一 個井的100微升調理介質或其適當的稀釋液轉移至以抗體 266(抗β-澱粉狀蛋白之胺基酸13-28)[p蘇伯特⑺⑶以⑴之

Nature (1992 年）3 59 : 325-327]預覆蓋的 ELIS A平盤中，如 國際專利申請公告案第94/105698號的說明，並在4°C下貯 存隔夜。在隔天進行利用經標記之抗體3D6(抗β-澱粉狀蛋 白之胺基酸 1-5)[Ρ·蘇伯特之Nature (1992年）359 : 325-327] 之ELISA檢定，以測量所產生的β_澱粉狀蛋白肽量。 以改良漢森（Hansen)等人的方法測量化合物的胞毒效應 。將25微升儲備溶液（5毫克/毫升）至1毫克/毫升最終濃度之 3-(4,5-二甲基嘧唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑鐳（MTT)(蒙 大拿州St. Louis之Sigma公司）。將細胞在37°C下培育1小時 ，並以加入等量的MTT溶胞緩衝液（在50%二甲基曱醯胺中 的20重量/體積％之十二燒基硫酸鈉，pH 4.7)終止細胞活性 -59- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1235151 A7 B7 五、發明説明（57 ) 。以在室溫下經隔夜搖動達到完全的萃取作用。在

Molecular Devices s UVmax微平盤讀取機中測量〇d562毫微米 及ODwmw之差異，作為細胞生存能力的指標。 將β-澱粉狀蛋白肽ELISA的結果帶入標準曲線中，並以 耄微克/毫升β-澱粉狀蛋白肽表示。為了使胞毒性規格化， 故將這些結果除以ΜΤΤ結果，並以無藥物控制的結果百分 比表示。所有的結果係至少6次重複檢定的平均值及標準偏 差。 實例Β 在活體内的β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用之壓制 作用本實例係例證如何測試本發明的化合物在活體内的 殿粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用之壓制作用。這些實驗 使用3至4個月大的PDAPP老鼠[蓋姆斯（Games)等人之 (1995年）Nature 3 73 : 523-527]。經常調配介於1至1〇亳克/ 毫升之化合物，其依據欲測測之化合物而定。因為化合物 低的溶解度因素，故可將其以各種媒劑調配，如玉米油（ 加州南舊金山之Safeway)、在玉米油中的1〇%乙醇、2-羥丙 基·β_環糊精（麻薩諸塞州Natick之Research Biochemicals International)及羧甲基纖維素（蒙大拿州st. Louis之Sigma 化學公司）。 將老鼠以26號針經靜脈内服藥，並在3小時之後，經由 C〇2麻醉使動物安樂死，並利用以〇·5克分子量EDTA，pH 8.0塗覆之1毫升25G 5/8英吋結核菌素注射器及針經心臟戮 孔取出血液。將血液放在包括EDTA之Dickinson真空容器 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1235151 A7 ____ B7 五、發明説明（58 ) 管中，並在5°C下以1500 xg旋轉15分鐘。接著取出老鼠的 腦，並將皮質和海馬解剖及放在冰上。 1.腦檢定 為了製備用於以酵素連接之免疫吸著檢定（ELISAs)之海 馬及皮質組織，將腦部位在1 〇分體積之冰冷的胍緩衝液 (5.0克分子量胍-HCM，50毫克分子量Tris-HCl，pH 8.0)中利 用Kontes電動杵（賓州Pittsburgh之Fisher)均質化。將均漿在 室溫下在旋轉的平台上搖擺3至4小時，並在β-澱粉狀蛋白 的定量作用之前，先貯存在-20°C下。 將腦均漿以冰冷的酪蛋白緩衝液[0.25%酪蛋白、以磷酸 鹽緩衝之氯化鈉飽和水溶液（PBS)、0.05%疊氮鈉、20微克/ 毫升抑肽酶、5毫克分子量EDTA，pH 8.0、10微克/毫升亮 肽酶]以1 : 10稀釋，藉以使胍的最終濃度降低至〇·5克分子 量，然後在4°C下以16,000 xg離心20分鐘。如果必要，將樣 品以加入具有加入〇·5克分子量胍氫氯酸鹽之酪蛋白緩衝 液進一步稀釋，以獲得最適宜的ELISA測量範圍。製備β-澱粉狀蛋白標準品（1-40或1-42胺基酸），使得最終組合物等 於在0.1 %胎牛血清白蛋白（BSA)存在下的0.5克分子量胍。 同時定量β·澱粉狀蛋白（aa 1 -40)及β-殿粉狀蛋白（aa 1-42)之總β-澱粉狀蛋白三明治ELISA係由β-澱粉狀蛋白的 兩個單株抗體（mAb)所組成的。補獲抗體266 [Ρ·蘇伯特之 Nature (1992) 359: 325-327]係對β-澱粉狀蛋白之胺基酸 13-28而言特殊的抗體。將抗體3D6[強森-烏德 (Johnson-Wood)等人之 PNAS USA (1997) 94 : 1 550-1 555] -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1235151 A7 B7 五、發明説明（59 (其係對β-澱粉狀蛋白之胺基酸1-5而言特殊的抗體）生物素 化，並具有作為檢定中的指示抗體的作用。3D6生物素作 用步驟係利用製造商（伊利諾州Rockf〇rd<pierce)a nhs_ 生物素標記之免疫球蛋白模型，除了使用1 〇〇毫克分子量碳 酸氫鈉pH 8.5緩衝液之外。3D6抗體未認可經分泌之澱粉狀 蛋白先負蛋白質（APP)或完整長度的App，但是其僅偵測具 有胺端基之天冬胺酸之β_澱粉狀蛋白物種。該檢定具有〜5〇 pg/毫升（11 ρΜ)之敏感度下限，並顯示對在高達丨亳微克/ 耄升濃度之内源鼠科β-澱粉狀蛋白肽沒有任何反應性。 疋量β-澱粉狀蛋白（aa 1-42)之三明治ELISA之構造係利 用 mAb 21F12[強森 _烏德等人之 PNAS USA (1997) 94: 1 550-1 555](以其認可β_澱粉狀蛋白之胺基酸33_42)作為捕 獲抗fa。生物素化3D6也是該檢定中的指示抗體，其具有 〜125 pg/毫升（28 pM)之敏感度下限。 將266及21F12捕獲mAb在室溫下以10微克/毫升經隔夜 塗覆在96井免疫檢定平盤中（麻薩諸塞州Cambidge之 Costar)。接著將平盤在室溫下以至少1小時吸入在pBs緩衝 液中的0.25%人類血清白蛋白及以其封鎖，並在41下以乾 藏貯存，直到使用為止。在使用之前，將平盤以清洗緩衝 液（以Tris_緩衝之氯化鈉飽和水溶液，〇 〇5% Tweeil 20)脫水 將樣品及標準品加入平盤中，並在4艽下培育隔夜。將平 盤在檢定的每一個步驟之間以清洗緩衝液清洗3次。將在酪 蛋白培育緩衝液（0.25%酪蛋白，PBS，0.05% Tween 20，pH 7·4)中稀釋成0.5微克/亳升之生物素化3D6在井中以室溫培 一 —_ -62- 本紙張尺度適用中國國家鮮(CNS) A4規格(㈣X 297公產) 裝 訂 線 1235151 A7 _____B7_ 五、發明説明（60 ) 育1小時。將在酪蛋白培育緩衝液中以1 : 4000稀釋之 Avidin-HRP(加州Brulingame之Vector)在室溫下以1小時加 入井中。加入量色基質，Slow TMB-ELISA(麻薩諸塞州 Cambidge之Pierce)，並允許其反應15分鐘，然後以加入2 當量H2S〇4終止酵素反應。利用Molecular Devices Vmax (加州Menol Park之Molecular Devices)測量在450毫微米及 650毫微米下的吸收差異，以定量反應產物。 2. 血液檢定 將EDTA血漿在樣本稀釋液（0.2公克/公升磷酸鈉·η2〇(單 鹼性）、2.16公克/公升磷酸鈉，7112〇(二鹼性）、〇.5公克/公升 硫柳汞、8.5公克/公升氯化鈉、〇·5亳升Triton Χ-405、6.0 公克/公升無球蛋白之胎牛血清白蛋白及水）。利用以上腦 部檢定所說明的總β-澱粉狀蛋白檢定作用（266捕獲/3D6指 示）檢定在樣本稀釋液中的樣品及標準品，除了使用樣本稀 釋液代替所說明的酪蛋白稀釋液之外。 那些熟悉本技藝的人可自以上的說明想到各種組合物及 方法的修改及變化。希望將所有在所附的申請專利範圍内 的這些修改作用涵蓋在本文中。 -63 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公袭：)

Claims (1)

1. 基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）-(s)-l-胺基-3-甲基-2,3,5,5_妈 氧化-1H-3-苯并氮呼_2_酮二水合物，其以包含在8.36、 U.43及15.34 (2Θ±0·2。）之峰的X_射線粉末繞射圖案進， 步特徵化。 6·根據申請專利範圍第i項之結晶物（N)_((S)_2·羥基-3-甲 基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）-(s)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四 氫化-1H_3-苯并氮呼·2_酮二水合物，其以包含在8.36、 ^.43、15.34、19.22、20.50 或 20.63 (2Θ 土 0.2。）之峰的 X-射線粉末繞射圖案進一步特徵化。 •根據申請專利範圍第2項之結晶物（N)_(⑻-2-羥基-3-甲 基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）-(s)-l_胺基-3-甲基_2,3,4,5·四 氣化-1H-3-苯并氮呼_2_酮二水合物，其以具有75·6、35·3 、21.4或16.6之化學位移（pmm)的固態i3c核磁共振進一步 特徵化。 8·根據中請專利範圍第2項之結晶物（N)_((s)-2-羥基-3-甲 基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基）-(s)-l-胺基_3_甲基-2,3,4,5-四 氣化-1H-3-苯并氮吁酮二水合物，其以具有75.6、35.3 、21.4或16.6之化學位移（pmm)的固態i3c核磁共振進—步 特徵化。 9· 一種用於抑制β_澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用之 醫藥組合物，其包含（Ν)_((8)_2_羥基_3·甲基丁醯基） • ^(L-丙胺酸基HS)小胺基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化 -1Η-3-苯并氮呷-2-酮二水合物： -2-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公楚) 1235151

   學上可接受之稀釋液。 二水合物及在藥 瓜根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其係用於治療阿 耳滋海默氏病。 H·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其係用於治療阿 耳滋海默氏病，其包含根據申請專利範圍第2、3、4、5 、6及7項中任一項之（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基 )]_(L-丙胺酸基）-(S)-l-胺基·3-甲基-2,3,4,5-四氫化 苯并氮呼-2-酮二水合物。 12·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其係用於預防阿 耳滋海默氏病。 Ϊ3·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其係用於預防阿 耳滋海默氏病，其包含根據申請專利範圍第2、3、4、5 、6及7項中任一項之（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基 )4-(1-丙胺酸基）-(S)_l-胺基-3-甲基-2,3,4,5·四氫化 -1Η-3-苯并氮呼_2_酮二水合物。 H.根據申請專利範園第9項之醫藥組合物，其係用於抑制阿 耳滋海默氏病進展。 15·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其係用於抑制阿 耳滋海默氏病進展，其包含根據申請專利範園第2、3、4 -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐)

   、5、6及7項中任一項之羥基璆蒸丁醯基 )e：U(L-丙胺酸基HS)-1-胺基-3_甲基_2,3,4,5_四氫化 •1H-3-苯并氮呼_2_酮二水合物。 種用毛氣備以包含在 8.36、12.43、15.34、19.22、2〇·5〇 ^ 20.63 (2θ±〇·2。）之峰的χ_射線粉末繞射圖案進一步特 徵化之根據申請專利範圍第！項之結晶物（nM(s)_2-羥 基-3·甲基丁醯基）-1-(1^丙胺酸基卜胺基-3_甲基 ^3,4,5_四氫化_1Η_3·苯并氮吁心同二水合物之方法， 其包含自水性溶劑結晶（NH(s)m小甲基丁祕基 )+α·丙胺酸基HS)小胺基_3_甲基'3,4,5_四氣化 •1H-3-苯并氮吁·2_酮 ΟΗ

   CH0

   Π·根據中請專利範圍第16項之方法，其中水性溶劑包含丙 酮及水。 18. —種用於製備式I之内醯胺的方决， v O R2

   -4 - χ2 Q

   Η 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） Α8 Β8 C8 D8 1235151 請專利範ί 其中 Ri是燒基、稀基、玦基、環烷基、環烯基、經取代之 嫁基、經取代之烯基、經取代之炔基、經取代之環斤其 、經取代之環婦基、芳基、雜芳基及雜環系； R2是烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之缔其、块 基、經取代之炔基、環烷基、芳基、雜芳基及雜環系· R3是烷基， I是氫、羥基或氟基， X2是氫、羥基或氟基，或 义和乂〗一起形成氧基；及 V是從1至3個獨立選自由氫、羥基、醯基、驢氧基、 嫁基、經取代之燒基、燒氧基、經取代之燒氧基、缔其 、經取代之婦基、炔基、經取代之炔基、胺基、胺醋基 、烷芳基、芳基、芳氧基、羧基、羧烷基、氰基、函基 、硝基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基及 三鹵甲基所構成的群組之基團； 其中，烷基包含1至10個碳原子， 其中’烯基包含2至10個碳原子， 其中’炔基包含2至10個碳原子， 其中，芳基係具有單環或多縮合環之具有6至丨4個碳原 子之不飽和芳族碳環系基， 其中，雜芳基係具有1至1 5個碳原子及在至少一個環内 鼻有1至4個選自氧、氮及硫之雜原子之芳族碳環系基， 其中，雜環系係具有單環或多縮合環之具有1至〗5個碳 -5- 本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS) A4規格(21〇X297公嫠) 1235151 ABCD 六、申請專利範圍 原子及在環内具有1至4個選自氮 價飽和或不飽和基； 該方法包含： (al)式（4)之内醯胺 硫及氧之雜原 子之單 v

   (其中R3及V係如式I化合物之說明）的解析作用其係藉 由結晶成選自由二-對-甲苯基_L•酒石酸、（R)•㈠-樟 腦％酸及（DH-)扁桃酸所構成的群組之酸的其酸加成鹽 ，以得到式（10)化合物 狐 v

   (10) (b)以式（10)化合物與適當的式PgNH-CHR2-C(0)-A之 經胺基保護之胺基酸（其中I係如式]；化合物之定義及A 是活化基，及P g是胺保護基）偶合，以得到式（1 1 )化合物

   6- 本紙張尺度適用中國國家標A4規格(210X297公釐）

   1235151 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍 (e)以式（11)化合物之去保護作用得到式（12)化合物；及 v

   (d)以式（12)化合物與適當的式RiCXiX^C^COAi化合 物（其中R!、X^X2係如式I化合物之說明及Ai是活化基） 偶合；或 (a2)以式（1〇)化合物與式 R^cxarC^CONH-CHR^- C(0)A化合物（其中Ri、R2、又1及乂2係如式丨化合物之定義 及A是活化基）偶合。 19·根據申請專利範圍第18項之方法，其中v是氫及尺3是 CVC6烷基。 20. 根據申請專利範圍第1 8項之方法，其中酸加成鹽係選自 由二-對-甲苯基-L-酒石酸、（R)-㈠-10-樟腦磺酸及 (DH-)-扁桃酸所構成的群組之酸的加成鹽。 21. 根據申請專利範圍第20項之方法，其中酸是二-對-甲笨 基-L -酒石酸。 22. 根據申請專利範圍第20項之方法，其中酸是（D)-(-)_扁桃 酸。 23. 根據申請專利範圍第20項之方法，其中酸是 樟腦磺酸。 24. 根據申請專利範圍第16、17、18、19及20項中任一巧之 方法，其中係在醛的存在下完成該方法。 -7- 本紙張尺度適财®國家料(CNS) A4規格(21GX 297公笼)' — ---^

   裝 線

   1235151 ABCD -------— 六、申請專利範園 25.根據申請專利範圍第24項之方法，其中醛是水楊醛。 26·根據申請專利範圍第25項之方法，其中水楊醛係選自由 水楊趁、5-硝基水楊醛及3,5_二氯基水揚醛所構成的群組。 27·根據申請專利範圍第丨8項之方法，其中式j之内醯胺係 (N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L_丙胺酸基）-(s)-l-胺 基·3-甲基·2,3,4,5·四氫化·1Η·3_苯并氮呼酮：

   結晶成選自由二對-甲苯基-L-酒石酸、（R)-(-)-l〇 -棒腦 續酸及（D)-(-)-扁桃酸所構成的群組之酸的酸加成鹽；將 (S)-l-胺基-3-甲基- 2,3,4,5-四氫化— 1H-3-苯并氮口平-2-酉同： 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1235151 8 8 8-A BCD 六、申請專利範園

   偶合成以胺基保護之L_丙胺酸殘餘物，以得到經胺基保 護之1_(L-丙胺酸基）_(s)_胺基_3_甲基_2,3,4,5_四氫化 -111-3_苯并氮呼-2-酮；以去保護得到1>e(L_丙胺酸基）_(s)_ 胺基-3-甲基-2,3,4,5_四氫化-1H-3·苯并氮呷_2_酮；並與 (S)-2-#呈基-3-甲基丁酸偶合。 28·根據申請專利範圍第丨8項之方法，其中式j之内醯胺係 (N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基胺酸基）-(8)-1_胺 基-3-甲基-2,3,4,5-四氫化-111_3_苯并氮吁_2-酮：

   -9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

   1235151

   、申請專利範圍

   結晶成選自由二 磺酸及（D) + ) 對、甲+基_L_酒石酸、（R)-(-)-i〇-棒腦 rQ. . π, ^ 扁桃酸所構成的群組之酸的酸加成鹽；將 0)-1·胺基-3-甲基9 Q ^ 土 ·Α3,4,5-四氳化-1H-3-苯并氮呼·2·酮：

   物 29. —種用於製備相當純的式之内醯胺的方法， ν

   其中 R3是虎基；及 酼基、龜氧基 V是從1至3個獨立選自由氫、羥基 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1235151 A8 B8 C8

   、申請專利範園 ^基、輊取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、烯基 、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、胺基、胺醯基 k芳基、芳基、芳氧基、叛基、羧烷基、氰基、鹵基 、硝基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基及 二_甲基所構成的群組之基團； 該方法包含： 以式（4)化合物之結晶作用

   得到成為選自由二-對_甲苯基_L-酒石酸、（r)-(_)_10- 棒腦績酸及（D)-㈠扁桃酸所構成的群組之酸的其酸加成 鹽的式（10)化合物。 30·根據申請專利範圍第29項之方法，其中v是氫及r3是低 碳燒基。 3L根據申請專利範圍第29項之方法，其中酸加成鹽係選自 由 對"甲冬基-L-酒石酸、（R)_(-) -1 〇-樟腦續酸及 扁桃酸所構成的群組之酸的加成鹽。 32.根據申請專利範圍第31項之方法，其中酸是二·對-甲苯 基酒石艘。 33·根據申請專利範圍第31項之方法，其中酸是（D)_(_)_扁桃 34·根據申請專利範圍第3 1項之方法，其中酸是（r)-(_)_i〇-本紙張尺度適用巾®國家鮮(CNS) A4規格(210 X 297公酱) A B c D 1235151 六、申請專利範園 樟腦磺酸。 35·根據申請專利範圍第28、29、30或31項之方法，其中係 在酸的存在下完成該方法。 36·根據申請專利範圍第3 5項之方法，其中醛是水楊醛。 37·根據申請專利範圍第3 6項之方法’其中水楊酸係選自由 水楊酸、5 -硝基水楊酸及3，5 -二氯基水楊酸所構成的群組。 38· —種用於製備式I之内醯胺的方法，

   式I 其中 R1是燒基、婦基、決基、環燒基、環婦基、經取代之 烷基、經取代之烯基、經取代之炔基、經取代之環烷基 、經取代之環晞基、芳基、雜芳基及雜環系’ R2是烷基、經取代之烷基、缔基、經取代之晞基、块 基、經取代之炔基、環烷基、芳基、雜芳基及雜環系； R3是燒基； Xi是氫、羥基或氟基、 是氫、羥基或氟基；或 X】和X2 —起形成乳基，及 V是從1至3個獨立選自由氫、羥基、醯基、醯氧基、 烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之嫁氧基、烯基 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) A8 B8 C8 D8 1235151 六、申請專利範園 、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、胺基、胺醯基 、烷芳基、芳基、芳氧基、羧基、羧烷基、氰基、鹵基 、硝基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基及 三鹵甲基所構成的群組之基團； 其中，燒基包含1至1 〇個碳原子， 其中，烯基包含2至10個碳原子， 其中，炔基包含2至10個碳原子， 其中，芳基係具有單環或多縮合環之具有6至14個碳原 子之不飽和芳族碳環系基， 其中’雜芳基係具有1至1 5個碳原子及在至少一個環内 具有1至4個選自氧、氮及硫之雜原子之芳族碳環系基， 其中，雜環系係具有單環或多縮合環之具有1至15個碳 原子及在環内具有1至4個選自氮、硫及氧之雜原子之單 價飽和或不飽和基； 該方法包含： a)以式（5)之苯基醋酸衍生物

   (5) (其中V係如式I化合物之定義及八2係選自由-QH、 或-Βι:所構成的群組之活化基）與式（6)之縮醛 -13-

   r5o r5o N-R3 (6) (其中R；3係如式I所預期的及r5是C! - C4乾基）偶合，以得 到式（7)化合物， v

   b)將式（7)化合物在選自由硫酸及三氟甲烷磺酸所構成 的群組之酸中環化，以得到式化合物，

   〇 r3 (8) (c)將式（8)化合物在肪成形反應中反應，以得到式（9) 化合物， v

   d)將式（9)化合物還原，以得到式（4)化合物 •14- 本紙張尺度適財國g家標準(CNS) M規格(2lQX 297公复) 1235151 8 8 8 8 A B c D 申請專利範圍

   (e)以式（4)化合物之解析作用，其係藉由分餾作用得到 成為選自由一-對_甲苯基酒石酸、樟腦續 酸及（D)-(-)-扁桃酸所構成的群組之酸加成鹽之式（1〇)化 合物；

   (10) (0與適當的式PgNH-CHR2_C(0)-A之經胺基保護之胺 基酸（其中R2係如式I化合物之定義及A是活化基，及Pg 疋胺保護基）偶合，以得到式（11)化合物

   (g)以式（11)化合物之去保護作用得到式（12)化合物；及 -15- 本紙張尺度適用巾國Η家鮮(CNS) A4規格(21GX 297公贊）

   1235151 A8 B8 C8

   (h)以式（12)化合物與適當的式化合 物（其中Ri、Χ〗&Χ2係如式I化合物之說明及、是活化基 ;或 i)以式（10)化合物與式 R^CXiXrC^CONH-CHRrCHCO-A 化合物（其中R〗、R2、χ1&χ2係如式]；化合物之定義及A 是活化基）偶合。 39. —種用於製備式（4)之内醯胺的方法 v

   其中 R3是烷基，及 V是從1至3個獨立選自由氫、羥基、醯基、醯氧基、 烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、締基 、經取代之婦基、決基、經取代之炔基、胺基、胺醯基 、烷芳基、芳基、芳氧基、羧基、羧烷基、氰基、鹵基 、硝基、雜芳基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基及 三鹵甲基所構成的群組之基團； -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 8 8 8 8 A B c D 1235151 申請專利範園 該方法包含： a)以式（5)之苯基醋酸衍生物 v

   (其中V係如式I化合物之定義及A2係選自由-OH、-C1 *_Βι·所構成的群組之活化基）與式（6)之縮醛 r5o r5o (6) π (其中r3係如式i所預期的及烷基）偶合，以得 到式（7)化合物，

   b)將式（7)化合物在選自由硫酸及三氟甲烷磺酸所構成 的群組之酸中環化，以得到式（8)化合物， -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 8 8 8 8 A BCD 1235151 六、申請專利範圍 V

   (8) (C)將式（8)化合物在肪成形反應中反應，以得到式（9) 化合物，

   d)將式（9)化合物還原。 40·根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 作藥品。 41.根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 於治療阿耳滋海默氏病。 42·根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 於預防阿耳滋海默氏病。 43·根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 於抑制β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用。 44. 根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 於抑制阿耳滋海默氏病進展。 45. 根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 8 8 8 8 A BCD 1235151 六、申請專利範圍 於製造用於抑制β-澱粉狀蛋白肽釋放及/或其合成作用 (包括治療阿耳滋海默氏病）之藥劑。 46.根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其係用 於製造用於預防阿耳滋海默氏病及/或抑制阿耳滋海默 氏病進展之藥劑。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ." 1 ..............一·一*<*9 气 公告:本丨 ' 1 一 舊-毒—.—_ ； - Λ _ f月率C 申請曰期 案 號 類 別 Ή 以上各欄由本局填註） Ac 5 IX 5 32 月 94換替 書 明 說文 中 $ 1專利説 書明

   内醯胺化合物 LACTAM COMPOUND 姓 名 國. 籍 1.嗓瑪斯米契爾康寧 THOMAS MITCHELL KOENIG 3.大衛米契爾 DAVID MITCHELL 5.琳安布♦莉 LYNNE ANN BUCCILLI 斯艾伯翰艾金斯 JAMES ABRAHAM AIKINS 1.-6.均美國 7.迦納 2 4 6 t^rNG躁安吸 sfLL« ¾黛ΤΑ端AR Is史s!g ΙΑΦΙ 明作 發創 所 居 住 號绩16 4928道 6487大 東號號 7!木那號勒8430 86邊塔66斯1992 11湖山58凱路路 路市帀略市斯f 木利利願利尼法 野旅善暴西 北那那市i市 市安安鎮安市頓 彼第第朵 此印印馬印綠潘 州州州州州州州 Cur rvnyn*> 3Λ 37 3-a 3/ 3/ 安安安安安安安 ί-s-i-I-m 印印印印印印印 ilalaililil^lf ，£ly /g^,glty 声ult^ Milty 声 ut^ »3^ »3^ 12.3.4.5.6.7. 裝· .訂· 稱 姓u 名 廠仍 藥Ah 大γ tLL 禮u 國I 美EL Co Y 國 •mjs 請 中 :、ί 所w 居i 住(ψ 人名 表 代姓 ，國 ，國 【中 用 【適 f度 尺 一張 ’紙 f本 β, 0 安 第 印 國 美 f m 君τ 史s • G G R lTE 司公來禮 市 利 普 β— 安 第 公 97 2 X 10 2 ¥( 一規 Α4 S) Ν (C 一, f榡 !家 申請專利範園 •—種（N)-((S)-2-羥基-3-甲基丁醯基）-l-(L-丙胺酸基 0H 胺基-3_甲基_2,3,4,5-四氫化-111-3_苯并氮呼_2-酮二水合物：

   ° 0 ch3二水合物。

   裝 2·根據申請專利範圍第1項之結晶物（Ν)_((8)_2^基小甲 基丁龜基）_1-(L-丙胺酸基HS)-1-胺基-3_甲基_2,3,4,5_四 氫化-1H-3-苯并氮呼_2_酮二水合物，其以包含在8.36、 12_43、15.34、19.22、20.50 或 20.63 (2θ±0·2ο)之峰的 X， 射線粉末繞射圖案進一步特徵化。 3·根據申請專利範圍第1項之結晶物（州_((8)_2_羥基小甲 線

   基丁酸基）-l-(L -丙胺酸基）-(S)-l-胺基-3-甲基-2,3,4,5-四 虱化-1H-3-苯并氮呼—2-酮二水合物，其以包含在36及 15·34 (2Θ±0·2°)之峰的X-射線粉末繞射圖案進一步特徵 化。 4·根據申請專利範圍第1項之結晶物（N)_((S)_2_羥基_3-甲 基丁醯基）-l-(L·丙胺酸基）-(S)-l-胺基·3 -甲基-2,3,4,5-四 氫化-1Η-3-苯并氮呼-2-酮二水合物，其以包含在8·36及 12·43 (2Θ±0·2°)之峰的X-射線粉末繞射圖案進一步特徵 化° 5·根據申請專利範圍第1項之結晶物（N)_((S)-2-羥基_3_甲 本紙張尺度適用巾闕家鮮(CNS) A4規格(210X 297公爱)~ --------