TWI234457B

TWI234457B - Camptothecin-taxoid conjugates as antimitotic and antitumor agents

Info

Publication number: TWI234457B
Application number: TW092112170A
Authority: TW
Inventors: Kuo-Hsiung Lee; Hironari Ohtsu; Yuka I Nakanish; Kenneth F Bastow; Fang-Yu Lee
Original assignee: Univ North Carolina
Priority date: 2002-05-02
Filing date: 2003-05-02
Publication date: 2005-06-21
Also published as: CN1649873A; AU2003230285A1; JP2005535587A; US6593334B1; TW200400820A; WO2003093274A1; EP1499617A1

Description

1234457 玖、發明說明： [聯邦資助磬明1 本發明因國家健康研究所補助號HL5 1 8 1 8之政府資助而製成。政府對本發明擁有一些權利。明所屬之技術領媸1 本發明有關喜樹驗及其類似物與類紫杉盼基之共輛物，含彼等之醫藥調配物及其作為抗有絲分裂及抗腫瘤劑之方法，特別治療癌症如乳癌、卵巢癌及前列腺癌。 [先前技術1 如示於圖1之紫杉酚（丨）與亦示於圖1之喜樹鹼（2)皆為目前於臨床用途之植物衍生抗腫瘤劑（M.C. Wani等人，短葉紅豆杉，1971，93, 2325-2327及Μ·Ε· Wall等人，丨/所.（^嫌· 1966，88，3888-3890)。紫杉酚於1992由FDA核准以治療進展性卵巢癌及於1994以治療乳癌。紫杉酚抗腫瘤作用之機制為抗有絲分裂，特定促進不可逆組合細管素成微小管（P_B· Schiff等人，泠#、，1979，277, 665-667)。喜樹鹼亦擁有顯著抗腫瘤活性，其歸因於抑制 DNA拓樸異構酶I(Dna拓樸Ι)(Υ·Η· Hsiang等人，召心/. CT^m·，1985，260，14873-14878 及 J.C· Wang， 1987，909，1_9)。兩種化合物經接受連續結構修飾，主要在發展更有用之化學治療劑。然而，雖然紫杉驗和喜樹驗皆擁有有效之抗腫瘤活性，但最近報告指出此些藥物之治療常造成多種不想要副作用以及多藥抗性。因此’發展具更少副作用且對不同類腫瘤具改進活性之新 85240 1234457 穎抗癌劑仍是必要的。先m吾等報導合成與評估兩種4，-0_去甲基表鬼臼素-喜樹驗共輛物（如不於圖1之3和4)作為哺乳類DNA拓樸異構酶I和 II之抑制劑（K.F. Bastow等人，价⑽〇㈣·， 1997, 5, 1481-1488)。抑制細胞生長之最有效共軛物類似於拓樸工和 II抑制成份。此些共軛物較表鬼臼素於一些癌細胞株包括 ΗΟΡ_62白血病、SW-620結腸癌、MCF/ADR亞德利亞黴素抗性之乳癌及Α-498腎癌中更具細胞毒性。一種共軛物於裸鼠中對抗人ΚΒ(鼻咽）及DU_145(前列腺）腫瘤細胞生長較伊洛波拇或（2)更有效。目前，一些報告描述紫杉酚與多洛紅菌素或苯丁酸氮芥間之共軛物（A.K. Kar等人，扔⑽rg. Md. C/zem. Zei·，2000，10, 261-264及M.D. Wittman等人，Aowg. Med· Zei·，2001，11，811_814)。然而，DNA拓樸異構酶抑制劑-紫杉酚雜交物未曾探討。 [發明内衮1 根據本發明之具體實施例，本發明有關根據式I之化合物··

Cf-L-T (I) 其中： C’為式II之喜樹鹼基··

85240 !234457

Ri選自由Η、烷基、醛、羰基、烷氧基、烷基芳基、羥基燒基、卣燒基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷基胺基烷基、每胺基燒基、芳基、芳氧基、C-烯糖、硝基、：氰基及〇 _聽菩基組成之群； R2、R3、R4*R5各獨立選自由Η、胺基、羥基、烷基、 k氧基、燒硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基）胺基、環胺基燒基、胺基烷氧基、芳基、芳氧基、c_晞糖、氰基、甲二氧基、甲醯基、硝基、鹵基、疊氮基、醯胺基、肼基、經胺基·氮原子鍵結至A環之20個標準胺基酸之任一個、SRs、NRSR8或〇-醣苷基組成之群；或心和:^一起形成5 或6員芳族或二氧六圜環；及其中r2*r3、尺3和化4或1^和尺5 在一起； , 其限制條件係h、R2、r3、及4和r5之一為與L之共價鍵； R6為Η、鹵基、烷基、烷氧基、烷基芳基、輕基烷基或鹵烷基； R7為虎基、燒基芳基、經基燒基或芳基；

Rs獨立選自由Η、燒基、燒基芳基、經基坑基、胺基坑基、醯基或芳基組成之群； L為連結部份； Τ為式之III類紫杉酚基： (III)

85240 -10- 1234457 其中

Ru選自由Η、烷基、烷氧基、胺基烷基和醯基組成之群；

Ri2和Ri3各獨立選自由Η、烷基、芳基、垸氧基、燒基芳基、羥基烷基、画烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二燒基胺基fe基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和由基組成之群；或其醫藥上可接受鹽。根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種包括根據上式I之化合物於醫藥上可接受載劑之醫藥調配物。根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種治療癌症之方法，包括投藥予需要此之個體，治療有效量之根據上式I化合物。可治療之癌症實例包括，但不限於小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及前列腺癌。根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種謗導細胞分化之方法’該方法包括將癌細胞與分化有效量之根據上式I化合物接觸（體内或體外）。根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種抑制細胞有絲分裂之方法，該方法包括將細胞與有絲分裂抑制量之根據上式I化合物接觸（體内或體外）。 [曼JL之詳細說明1 本發明現將以參閱隨附圖更全然說明於後，其圖進一步 85240 -11 - 1234457 說明在此所述之本發明。然而，个知力以不同形式且晋渔仆及不應作為限制在此說明之具體實施例。反而，此I且^ 實施例經提供以使本說明書將更徹底與完全，及將全達本發明範疇予熟諳技藝者。 h 用於本發明說明書之名詞係僅為菩 4耆描述特殊具體實施例之目的及不意在限制本發明。如用如用於本發明說明書與隨付之申請專利範圍，單數形式之「a ,、「an t「」 an」和「the」亦意在包括複數形式’除非文内另清楚指明。除非另有定義，在此所用之全部技術和科學名詞常有著熟諳本發明技藝者所知之相同意義。在此提及之全部出版物、專利申請案、專利與其他參考文獻以其本體以引用之方式併入本文中。少元基」或「低故坑基」一詞如在此所用，指C1至。4、 C6或C8燒基，其可為線性或分支及飽和或不飽和的。「環燒基」在此特定化及典型為C3、C4或C5至C6或C8環烷基。「少市基」或「低碳晞基」如在此所用，同樣指C1至C4缔基，及烷氧基或低碳烷氧基如在此所用，同樣指c丨至C4^ 氧基。「燒氧基」如在此所用，指線性或分支、飽和或不飽和的氧-烴鏈，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基及第三丁氧基。「芳基」一詞如在此所用，指C3至C 10環狀芳族基，如笨基、萘基及類似物，及包括經取代之苯基如甲苯基。 85240 -12- 1234457 「鹵基」如在此所用，指任何鹵素基，如氯、氟、溴或琪。「羥基燒基」一詞如在此所用，指C丨至C4線性或分支之經基取代燒基，即-CH2OH、-(CH2)2OH等。「胺基燒基」一詞如在此所用，指(::丨至C4線性或分支之胺基取代抗基’其中「胺基」一詞指NR，R"基，其中R，和R，，獨立選自Η或如上定義之低碳烷基，即_NH2、-Nhch3、 _n(ch3)2 等。「氧燒基」一詞如在此所用，指(：1至€4氧取代烷基，即 -OCH3及「氧芳基」一詞如在此所用，指(^3至cl〇氧取代環狀芳族基。「治療」或「處理」如在此所用，指賦予患病之病人益處之任何類型治療，包括改進病患之病況（例如一或多種症狀）、延遲疾病之進展，預防或延遲疾病之開始等。「醫樂上可接雙」如在此所用，指化合物或組合物適合投予病患以達成在此所述之治療，鑒於疾病之嚴重性與治療之必要性下而無極有害之副作用。本發明主要有關人個體之治療，但亦可為著獸醫目的，用以治療其他動物個體（即哺乳類、鳥類）。哺乳類為較佳的，而人類為特別佳的。通常’本發明之活性化合物具有根據式I之結構： C’_L_T 其中c’為喜樹鹼基，基及L為共價連結基。 (I) 包括喜樹鹼及其類似物，T為類紫杉酉分 3活性化合物如在此所用’包括其醫奋ξ 85240 -13- 1234457 上可接受鹽。本發明包括個別右旋或左旋純製備物以及其混合物（消旋或鏡像異構強化混合物）。可用與上式I聯結之不同基經詳細討論於下。 A·喜樹鹼任何喜樹鹼或喜樹鹼類似物可用以實施本發明。喜樹鹼為已知的及可以已知技術一致地產生。通見默克索引，專論1783(12版，1996)。

可用以實施本發明之喜樹鹼類似物實例包括，但不限於該等述於下者··予Wall等人之美國專利號4,894,456 ;予 Miyasaka等人之美國專利號4,399,282 ;予Miyasaka等人之美國專利號4,399,276 ;予Vishnuvajjala等人之美國專利號 4,943,579;歐洲專利申請案號0,321 122 A2;予Miyasaka等人之美國專利號4，·473,692 ;歐洲專利申請案號0 325 247 Α2 ; Takeda化學工業申請之歐洲專利申請案號0 556 585 八2;予冒&11等人之美國專利號4,981，968;予\\^11等人之美國專利號5,049,668 ;予Comins等人之美國專利號 5，162,532 ;予Wall等人之美國專利號5，180,722 ;予Comins 等人之美國專利號5,2〇〇,524 ;予Comins等人之美國專利號 5,459,269 ;予Fang等人之美國專利號5，162,532 ;及予 Angelucci等人之美國專利號6,328,953(在此所引之全部專利參考說明書以其本體以引用之方式併入本文中）。如此化合物常為式II : 85240 -14- 1234457 其中：

Ri選自由Η、燒基、酸、基乾基、1¾烷基、胺基烷基基、環胺基烷基、芳基、芳醣甞基組成之群；羰基、烷氧基 '烷基芳基、羥、二烷基胺基、二烷基胺基烷氧基、C-晞糖、硝基、氰基及、、—R2、R3、R4*R5各獨立選自由H、胺基、羥基、烷基、虼氧基、烷硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基）胺基、環胺基烷基、胺基烷氧基、芳基、芳氧基、C-烯糖、氰基、甲-氧基、甲醯基、硝鹵基、疊氮基、醯胺基、肼基、經胺基_氮原子鍵結至A環之2〇個標準胺基酸之任一個、SR8、NRsR8或〇-醣甞基組成之群；或心和心一起形成^ 或6員芳族或二氧六圜環；及其中以2和&、化和1或&和& 在一起；其限制條件係Ri、R2、h、I和尺5之一為與L之共價鍵； ~ R6為Η、鹵基、烷基、烷氧基、烷基芳基、羥基烷基或鹵烷基； R7為、)克基、烷基芳基、幾基烷基或芳基； R8獨立選自由Η、烷基、烷基芳基、羥基烷基、胺基烷基、醯基或芳基組成之群。 Β.類紫杉酚基任何類紫杉紛基可用以實施本發明。類紫杉酚基為已知 85240 -15- 1234457 的及可以已知技術-致地產生。.通見默克㈣，專論 ^83(12版，1996)。較佳之紫杉烷為該等增強微小管形成所必需之技藝中已知構成份者’例如紫杉酴和多西紫杉酴（d。⑽―）。紫杉驗和夕西糸杉酚炙結構於技藝中已知。可用以實施本發明之類紫杉酚基實例包括，但不限於該等述於下者：予幻―⑽ 等之美國專利號5,614,645 ;予chattopadhyay等人之美國專利號6,028,206 ;予Kingston等人之美國專利號 5’411，984，予Magnus等人之美國專利號5,5〇8,447(在此所引之全邵專利參考說明書以其本體以引用之方式併入本文中）。可用以實施本陳述之類紫杉酚基為式m所代表：其中

(III)

Rii選自由Η、烷基、烷氡基、胺基烷基和醯基組成之群；

Ri2和Ru各獨立選自由Η、烷基、芳基、烷氧基、烷基方基、藉基烷基、1¾烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷基胺基燒基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和画基組成之群、；或莫醫藥上可接受鹽。 C.連結部份 85240 -16- 1234457 可用以形成兩種官能部份之共價共輛物之連結部扮在技藝中已知。採用之特定連結部份將依賴用以製作共價共軛物之特殊合成方法而定，如熟諳技藝者所知者。合適之連結基將允許喜樹鹼（C，）和類紫杉酚（T)基連結，以提供在代身上去足之共輛物（即立體阻礙將不那麼強以防止c，和丁基連結之共軛物）。通常，連結部份可包括脂族、芳族或混合之脂族和芳族基（例如烷基、芳基、烷基芳基等）及含有一或多個胺基酸或 =原予如N、〇、s等。例如，連、结部#可為式之化物’其中有或秩Lb及La和Lb各獨立選自由下組成之群： 0 B C，_,

0 C-(CB，2)a^

85240 -17- 1234457

0

‘〇丫 (0¾¾. 0 、N/(CH2)b ο 及：

YV 其中 Η 〇 f 瞒0至6，a為〇至3&b為〇至3 ;及R25選自由烯基和伸芳基組成之群。 ①土、連結部份亦可包括在類紫杉酚基位置7上及式以喜 K上之連結部份： (iv) 其中 X為拉電子基；及 R21選自由伸烷基和芳基伸烷基組成之群； A選自由胺基和亞胺基組成之群。連結部份亦可包括具有式V之連結部份：〇 ^ - (V)

, I C -R21--c ——.γ 其中選自由伸烷基和芳基伸烷基組成之群 R22選自由Η和烷基組成之群。 D ·特定化合物 85240 -18- 1234457 本發明範疇内之特定化合物包括，但不限於

85240 -19- {19) · 1234457

E.化合物合成本發明化合物之合成可採用特殊連結化學決定。以下一般合成之變異法將易明顯於熟諳技藝者及視為在本發明範疇内。通常，式I共軛物可由喜樹鹼化合物與類紫杉酚化合物於苯中迴流來製備。作為特定之實例，上共軛物16至20可由7-甲醯基喜樹鹼與類紫杉酚溶於無水苯中來製備。溶液然後在4埃分子篩上 85240 -20- 1234457 迴流過夜。混合液經過濾及在真空中蒸發，得到粗紫杉酚_ 喜樹驗共軛物。產物由Sephadex LH-20管柱層析法純化，以 CHCl3-MeOH(l : 1)為離析液。 F·醫藥上可接受鹽「活性劑」一詞如在此所用，包括該化合物之醫藥上可接艾鹽。食樂上可接雙鹽為保有母化合物想要生物活性且不賦予不想要毒性作用之鹽。如此鹽之實例為⑷與無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸和類似物形成之fei加成鹽，及與有機酸，例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、馬來酸、延胡索酸、葡萄糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、單寧酸、棕櫚酸、褐藻酸、聚麩胺酸、萘磺酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、蓁二磺酸、聚半乳糖醛酸和類似物形成之鹽；及（b)自元素陰離子如氯、溴和碘形成之鹽。用以製備本發明組合物之活性劑或許可為活性劑之醫藥可接受游離鹼形式。因為化合物之游離鹼較鹽不可溶，游離鹼組合物經採用以提供活性劑更持續釋出至標的區域。存在於標的區域，但未進入溶液之活性劑不易誘導生理反應，但供作逐漸進入溶液之生物有效藥物庫。 G·醫藥調配物本發明式I之喜樹鹼與類紫杉酚化合物可作為醫藥活性劑及可以大體積形式採用。更特定地，然而，此些化合物經調配為供投藥之醫藥調配物。可採用任何合適醫藥調配物作為投予本發明化合物之載體。 85240 -21 - 1234457 式i化合物可經調配供投藥以治療多種病況。在製造本發明之醫藥調配物中，式I化合物及其醫藥上可接受鹽或其酸衍生物（以下稱「活性化合物」）典型與特別是可接受之載劑混合。當然’載劑必須在相容於調配物中任何其他組份之概念下為可接受及必須無害於病患。載劑可為固體或液體’或兩者及較佳與化合物調配作為單位劑量調配物，例如鍵劑，其可含有自0.5%至95%之活性化合物重。一或多種活性化合物各可併入本發明之組合物中，其基本上可由混合成份組成之配藥學之任何熟知技術製備，視情況包括一或多種附屬組份。本發明調配物包括該等適合口服、直腸、局部、頰内（例如舌下）、腸外（例如皮下、肌肉内、皮内或靜脈内）及經皮投藥，但在任何給定例中最適合途徑將依賴要治療病況之本質與嚴重性及要使用特殊活性化合物之本質而定。週合口服投藥之調配物可存在於分離單位，如膠囊、藥囊、菱劑或錠劑，各含有預定量之活性化合物；如粉劑或粒劑；如溶液或於水性或非水性液體之懸浮液或如油在水中或水在油中之乳化液。如此調配液可由任何合適製藥學万法製備，其包括將活性化合物與合適載劑（其可含有一戈多種如上註之附屬組份）聯結在一起之步驟。通常，本發明之調配物製備由均勻與緊密混合活性化合物與液體或細分固體載劑或兩者，及然後必要時將生成之此口物定型。例如，錠劑可由將含有活性化合物，視情況具有一或多種附屬組份之粉末或粒物壓製或打模來製備。 85240 -22- 1234457 壓製錠劑製備可由將自由流動形式之化合物，如粉末戋浐物，視情況混合著結合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或^面活性/分散劑，在合適機器中壓製。打模錠劑製備可由將惰性液體結合劑潤濕之粉末化合物在合適機器中打模。週合頰内（舌下）投藥之調配物包括在常為蔗糖和阿拉伯膠或黃耆膠之香味基質中含有活性化合物之菱劑，在惰性基質如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含有化合物之錠劑。週合腸外投藥之本發明調配物方便包括活性化合物之益菌水性製備物，其製備物較佳等張於想要受體之血液。此些製備物可藉皮下、靜脈内、肌肉内或皮内注射而投藥。如此製備物可方便由化合物與水或甘油緩衝液混合及調整生成之么液為操囷及等張於血液而製備。適合直腸投藥之調配物較佳以單位栓劑呈現。此些可由活性化合物與一或多種傳統固體載劑，例如可可脂混合及然後將生成之混合物成型而製備。適合局部施至皮膚之調配物較佳取用軟膏、乳液、洗滌水、糊劑、膠劑、噴劑、霧劑或油之形式。可使用之載劑包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類、經皮增強劑及其兩或多種組合物。適合經皮投藥之調配物可以經調適與受者表皮緊密接觸一段長時間之分離貼片呈現。適合經皮投藥之調配物亦可由離子透入法（見例如#襄研宏3(6): 318 (1986))傳送及典型取用活性化合物之視情況緩衝水溶液形式。合適之調配物包括棒檬版或雙/二緩衝液（pH 6)或乙醇/水及含有自ο·。}至 85240 -23- 1234457 0.2 Μ活性組份。 Η.使用方法除式I化合物外，本發明亦提供有用之治療方法。例如，本發明提供一種謗導抗腫瘤活性之方法。更特定地，本發明提供一種抑制DNA拓樸異構酶I之方法。該方法包括將拓樸異構酶I與抑制有效量之式I化合物在體内或體外接觸。拓樸異構酶I之抑制為抑制腫瘤或癌細胞生長之有用方式。本發明亦提供一種誘導細胞分化之方法。該方法包括將癌細胞與分化有效量之式Ϊ化合物接觸◊可分化之癌細胞包括自小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巢癌、中框神經系統癌、肝癌及前列腺癌之細胞。本發明亦提供一種在罹患癌症之個體中治療癌症之方法。孫方法包括投予個體，有效癌症治療量之式〗化合物。孩万法有用以治療多種癌細胞，其包括但不限於小細胞肺癌：睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、卵巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及前列腺癌。可使用本發明方法治療之個體典型為人個體，但本發明万法可因獸醫目的而用於其他個體，特別地哺乳類個體，。括4不限於馬、乳牛、狗、兔、禽類、、乡帛羊及類似物。 ^上註，本發明提供一種醫藥調配物，包括於任何合適投藥途徑之醫藥上接受載劑中之式I化合物或其醫藥上可接受鹽，其投藥途徑包括但不限於口服、直腸、局部、頻内、腸外、肌肉内、皮内、靜脈内及經皮投藥。 85240 -24 - 1234457 任何特定化合物之治療有效劑量多 ^ 將自化合物至仆人物，病患至病患而變化，及將依賴而定。作為一般提案，自約(M至約5〇毫 ^ 迗途徑士、、 · 見/公斤之劑量脾1 4療效力，而更高劑量可能採用口服和/或噴霧投藥。較向值之毒性考量會限制靜脈劑量至較权太/ \ 、瓜值，如多至約10毫克/么斤，全部重量基於活性基質重外貝重彳异，包括採用鹽之例子。典型地，自約0.5毫克/公斤至約5毫 ,χ, ^ ^ 克Α斤义劑量將採用供靜脈或肌肉内投藥。自㈣毫克/公斤㈣5()毫克/ 之劑量將採用供口服投藥。 Α 實施方式本發明更詳述於下非限制性實施例。實施例 Α·材料與方法士紫杉酚（1)獲自Yung Shin醫藥工業公司，台灣。甲醯基喜樹驗（5)(示於圖υ自（2)製備如Bast〇w等人（i997_q 胸· CW 5:剛報導地進行。全部試劑和溶劑為試藥級及在使用前由標準方法純化。lH NMR光譜獲自—⑽雙子 j-300分光計，使用TMS作為内標。化學位移㈧值）及耦合吊數〇/值）分別給定為ppm*Hz。光學旋轉以jasc〇 WOO數孚型旋光計測定。管柱層析法在矽膠6〇(默克 1目）上進行，及薄層層析法（TLC)使用預塗布矽膠之鋁板 (Aldrich公司）進行。元素分析由大西洋微生物實驗室公司進仃，N0rcross，喬治亞州。沁Cbz_胺基酸自合適胺基酸製備’使用如述於Berger等人（1954)J义所c.心c. 76: 85240 -25- 1234457 5552之標準方法，使用氯甲酸苯甲酯代替矿以心沒-丙胺酸 (Sigma)。2’-0-Cbz-紫杉酚如述於 Guy 等人（ΐ996)67ζ· 5ζ·ο/. 3: 1021地合成。 7_〇-醯化2’-(9-Cbz_紫杉酚之一般程序。含2，_〇-Cbz-紫杉酉分和二甲基胺基）吡啶（1 .〇當量）之無水二氯甲烷（5毫升）落液在氮氣下以合適#-Cbz-胺基酸（5·〇當量）和二環己基碳化二亞胺（DCC，5.0當量）在室溫下處理過夜。混合液以二氯甲烷（5毫升）稀釋及過濾以除去尿素沉澱。溶劑在真空中蒸發及生成之殘留物由矽膠管柱層析法純化，使用正己烷-EtOAc溶劑系統（2: : ”，得到想要之2，_〇_Cbz_7_ Ο·醯基紫杉酚為單一產物。 2 -0-Cbz-7-(7V_cbz- /3 _丙胺醯基）_紫杉酚（6)。產量 ^’/。（以”：毫克广^^^紫杉酚開始广白色粉末， [« ]d-44.7°(c 0.76，CHC13) ； NMR(CDC13) ： 5 1.16 (3H, s)5 1.22 (3H, s)5 1.81 (3H5 s)5 2.00 (3H? s)5 2.06 (3H? s)? 2.46 (3H，s)，3·46 (2H，m)，3.96 (ih，d，《/= 7.0 Hz)，4·20 (1H，d， J - 8.5 Hz), 4.33 (1H5 d5 J = 8.5 Hz)? 4.95 (1H9 d5 J = 8.5

Hz)，5·11 (2H，m)5 5.17 (2H，m)，5·46 (1H，d，《7 = 2.5 Hz)， 5.64 (1H，dd，7.2, 9.8 Hz)，5.70 (1H，d，7.0 Hz)，5·77 (1H? t? 5.1 Hz)? 5.98 (1H5 d5 J = 9.0 Hz)? 6.26 (1H5 t, J = 9·3 Hz)，6.29 (1H，s)，6.94 (1H，d，/ = 9.0 Hz)，7.30-7.42 (帶，17H)，7.44-7.54 (3H，m)，7·62 (1H，m)，7·74 (2H，d，J = 8.5 Hz)5 8.13 (2H, d? / = 8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 1193 [m+i]+。全部數據與前報導文獻值一致。 85240 -26- 1234457 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz-4-胺基丁醯基）-紫杉酚（7)。產量 97.2%(以69.1毫克2’-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]d-31.5°(c 0·46，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : 5 1.16 (3H，s)，1·21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，1.99 (3H，s)，2·09 (3H，s)， 2·45 (3H，s)，3.19-3.40 (2H，m)，3·94 (1H，d，《7 = 6.9 Hz)， 4.20 (1H，d，8.5 Hz)，4.33 (1H，d，8.5 Hz)，4·95 (1H， d, J = 8.5 Hz)5 5.08 (2H? s)5 5.17 (2H? m)? 5.45 (1H? d, J = 2.4 Hz)，5·57 (1H，dd，6.9，10·2 Hz)，5·71 (1H，d，/= 6.9 Hz)，5·73 (1H，t，J = 5.1 Hz)，5.98 (1H，dd，= 2.4, 9.0 Hz)， 6.24 (1H，s)，6.26 (1H，t，J = 9.3 Hz)，6·92 (1H，d，J = 9.0 Hz)，7.27-7.46 (帶，16H)，7.48-7.54 (3H，m)，7.62 (1H，m)， 7.73 (2H? d, J = 8.5 Hz), 8.13 (2H, d5 J = 8.5 Hz) ； ESI-MS m/z 1230 [M+Na]+。 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz_6-胺基己醯基）-紫杉酚（8)。產量 94.7%(以78·3毫克2f-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]D —44.0o(c 1.04，CHC13) ; !H NMR(CDC13) : (5 1.16 (3H, s)，1.21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，2.00 (3H，s)，2·13 (3H, s)， 2.45 (3H，s)，3.19 (2H，dd，6.3，12.9 Hz)，3·96 (1H，d，J =6.6 Hz)，4.19 (1H，d，8.5 Hz)，4.32 (1H，d，/= 8.5 Hz)， 4.96 (1H，d，J = 8·7 Hz)，5.08 (2H，s)，5.16 (2H，m)，5.45 (1H，d，= 2.4 Hz)，5.60 (1H，dd，= 7.2，10.5 Hz)，5.71 (1H，d，/= 6.9 Hz)，5.98 (1H，dd，3·0, 9·5 Hz)，6·26 (1H， t, J = 9.0 Hz)5 6.28 (1H, s), 6.95 (1H5 d, J = 9.3 Hz), 7.26-7.43 (帶，16H)，7.46-7.53 (3H，m)，7.61 (1H，m)，7·73 (2H， 85240 -27- 1234457 ά, J = 8.5 Ηζ)5 8.13 (2Η? d? J = 8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 1236 [M+l]+。 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz-4-甲基胺基苄醯基）-紫杉酚（9)。產量 89.1%(以70.4毫克2’-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]D -28.2°(c 0.99 ^ CHC13) ； lU NMR(CDC13) ： 5 1.19 (3H，s)，1.21 (3H，s)，1·95 (3H，s)，1_97 (3H，s)，2·04 (3H，s)， 2·48 (3H，s)，4.05 (1H，d，/ = 6.9 Hz)，4.24 (1H，d，J = 8.5 Hz)，4.37 (1H，d，J = 8.5 Hz)，4·42 (1H，d，/ = 6·0 Hz)，5.01 (1H，d，J = 8.4 Hz)，5.10-5.22 (6H，m)，5·48 (1H，d，J = 2.7 Hz)5 5.74-5.81 (2H, m)? 5.99 (1H? dd5 J = 2.7? 9.2 Hz), 6.27 (1H, t, J = 9.0 Hz), 6.41 (1H5 s), 6.97 (1H? ά, J = 9.3 Hz)? 7.29-7.42 (帶，19H)，7.46-7.54 (3H，m)，7.62 (1H，m)，7.74 (2H? d5 J = 8.5 Hz)? 7.89 (2H5 d5 J = 8.4 Hz)? 8.15 (2H, d? J =8.5 Hz) ; ESI-MS m/z 1277 [M+Na]+。 2’-0-Cbz_7-(7V-Cbz-4-(4-胺基苯基）-丁醯基）-紫杉酚（10)。產量83.8%(以66·8毫克2f-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]d-46.5°(c 0.40 ^ CHC13) ； lH NMR(CDC13) (5 1.17 (3H，s)，1·21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，2.01 (3H，s)，2·13 (3H，s)， 2·45 (3H，s)，3.96 (1H，d，J = 6·9 Hz)，4·19 (1H，d，J = 8.5 Hz)? 4.33 (1H? d, J = 8.5 Hz)? 4.96 (1H? d, J = 8.1 Hz), 5.12-5.21 (4H? m)? 5.46 (1H5 d, J = 2.7 Hz)5 5.60 (1H? dd? J = 7.2? 10.5 Hz), 5.70 (1H5 d, J = 7.2 Hz), 5.98 (1H5 dd? J= 2.7, 9.2 Hz)，6·26 (1H，t，9.0 Hz)，6.29 (1H，s)，6.66 (1H，s)，6·94 (1H，d，9·3 Hz)，7·12 (2H，d，/= 8·7 Hz)，7.26-7.42 (帶， 85240 -28- 1234457 BH)，7.46-7.53 (3H，m)，7·61 (1H，m)，7.73 (2H，d，《7 = 8·5 Hz)，8·13 (2H，d，J = 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 1306 [M+Na]+。除去芊氧基羰基（Cbz)保護基之一般程序。含類紫杉酚（6-1〇 ’如示於圖2)之甲醇溶液在氮氣下以50重量％之5%鈀/活性碳（Degussa E101 NO/W型）處理及置於氫氣下（40 psi)。混合液在帕爾裝置中振盪7小時，然後内容物經過濾除去觸媒及在真空中蒸發至乾涸，得到想要之去保護化合物丨丨-丨5(如示於圖2)。

7·〇_β-丙胺醯基紫杉酚（11)。產量81.2%(以47.2毫克（6)開始）；白色膜，[α ]〇 -39.1。〇 0.34 ^ MeOH) ； lU NMR(CD3〇D) ： δ 1·10 (3Η，S)，1·16 (3Η，s)，1·78 (3Η，s)， 1·88 (3Η，s)，2.16 (3Η，s)，2.37 (3Η，s)，3.12-3.22 (2Η，m)， 3.90 (1H, d, J = 7.0 Hz), 4.20 (2H? dd, J = 7.0, 14.0 Hz), 4.73 (1H，d，/ = 6.0 Hz)，5.00 (1H，m)，5·64 (3H，m)，6·15 (1H，br t，= 6.2 Hz)，6.23 (1H，s)，7.28-7.68 (帶，11H)， 7.85 (2H，d，/ = 8.5 Hz)，8.10 (2H，d，= 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 925 [M+l]+。全部數據與前報導文獻值一致。 7-0-(4-胺基丁醯基）-紫杉酚（12)。產量92.7%(以59.1毫克 7 開始）；白色膜，[a ]D -29.7。〇 0.37，MeOH) ; 4 NMR(CD3OD): 5 1.11 (3H, s)，1.16 (3H，s)，1·78 (3H，s)， 1·87 (3H，s)，2·16 (3H，s)，2.37 (3H，s)，3_01 (2H，t，7.5 Hz)，3·90 (1H，d，J = 6.9 Hz)，4.20 (2H，br t，J = 8.7 Hz)， 4·75 (1H，d，J = 5.4 Hz)，5.00 (1H，d，J = 9.3 Hz)，5.59-5.66 (3H，m)，6.15 (1H，br t，/= 6.2 Hz)，6.21 (1H，s)，7.26-7.69 85240 -29- 1234457 (帶，11H)，7.85 (2H，d，《/ = 8·5 Ηζ)，8·10 (2H，d，J = 8·5 Hz) ; ESI，MS m/z 939 [M+l]+ 〇 7_〇-(6-胺基己醯基）-紫杉酚（13)。產量81.1%(以67.1毫克 8 開始）；白色膜，[a ]D -26.0°(c 0.53，MeOH) ; NMR(CD3OD): δ 1.11 (3H，s)5 1·16 (3H，s)，1·77 (3H，s)， 1·88 (3H，s)，2.14 (3H，s)，2·37 (3H，s)，2·92 (2H，m)，3.90 (1H，d，J = 6.9 Hz)，4.20 (2H，m)，4·75 (1H，d，J = 5.4 Hz)， 4.99 (1H，d，J = 9.0 Hz)，5.58 (1H，dd，《7 = 7.8，10.5 Hz)， 5.60-5.70 (2H，m)，6.15 (1H，br t，《7 = 6.2 Hz)，6.24 (1H，s)， 7.26-7.72 (帶，11H)，7·85 (2H，d，8.5 Hz)，8.10 (2H，d，J =8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 968 [M+l]+ ° 7-0-(4-甲基胺基苄醯基）-紫杉酚（14)。產量96.7%(以58.1 毫克 9 開始）；白色膜，[a ]D —12.9。〇 0.38，MeOH) ; 4 NMR(CD3OD): δ 1·13 (3H，s)，1·15 (3H，S)，1·91 (9H，s)， 2·40 (3Η，s)，3·90 (1Η，d，J = 6·9 Ηζ)，4·18_4·30 (4Η，m)， 4.76 (1Η，d，/ = 5.7 Ηζ)，5.05 (1Η，m)，5.65 (1Η，d，J = 5.1 Hz)，5·70 (1H，d，/ = 7.2 Hz)，5.76 (1H，dd，J = 7.2，10.5 Hz)，6.16 (1H，br t，6·2 Hz)，6·35 (1H，s)，7.28-7.71 (帶， 13H)，7·85 (2H，d，/ = 8.5 Hz)，7.94 (2H，d，J = 8·5 Hz)， 8.12 (2H，d，8.5 Hz) ; ESI-MS m/z 1009 [M+Na]+。 7_〇-(4-(4-胺基苯基）-丁醯基）-紫杉酚（15)。產量81.3%(以 67.1 毫克 10開始）；白色膜，[α ]D 一45.3。卜〇·ΐ5，MeOH); 巾 NMR(CD3〇D) ·· 5 1·11 (3H，s)，1·14 (3H，s)，1.77 (3H， s)，1.89 (3Η，s)，2·09 (3Η，s)，2·36 (3Η，s)，2.46 (2Η，t，J = 85240 -30- 1234457 5·7 Ηζ)，3·89 (1H，d，6·9 Hz)，4.19 (2H，brs)，4.75 (1H， d, J = 5.4 Hz), 4.97 (1H? d, J = 9.6 Hz), 5.56 (1H5 dd, J = 7.8，10·5 Hz)，5·63·5·66 (2H，m)，6.15 (1H，br t，/= 6.2 Hz)， 6_26 (1H，s)，6.67 (2H, d，J = 8.4 Hz)，6.93 (2H，d，J = 8.4

Hz)，7.28 (1H，m)，7.38-7.68 (帶，10H)，7.84 (2H，d，8·5 Hz)，8.10 (2H，d，/= 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 1038 [M+Na]+。合成紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇)之一般程序。含類紫杉酚（11-1 5)和7-甲醯基喜樹鹼（12當量）之無水苯（1〇毫升）溶液在4埃为子師上迴流過夜。混合液經過濾、及在真空中蒸發，得到粗紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇，如示於圖2)。產物由

Sephadex LH_20管柱層析法純化，以 CHCl3-MeOH(l : 1)為離析液。共輛物16-20之元素分析數據經示於下表1。共軛物16 :產量85_4°/。[以14.2毫克（0.015毫莫耳開始];淡黃色不定形固體，[a ]D 一33.9。〇 0.18，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : δ 1·〇2 (3H，t，7.5 Ηζ)，1·18 (3H，s)，ι·25 (3H，s)，1·80 (3H，s)5 1.85 (3H，s)，2·19 (3H，s)，2·37 (3H，s)， 3·92 (1H，d，/ =6.6 Hz)，4.14和 4.29 (各 1H，d，J = 8.4 Hz)， 4.80 (1H，bi*s)，4.90 (1H，d，J = 9.3 Hz)，5·21 (1H，d，j = 16.5 Hz)，5.40 (2H，s)，5.58-5.70 (3H, m)，5.80 (1H，dd，/ = 8.9, 2.1 Hz)，6.19 (1H，t，9.0 Hz)，6.24 (lH，s)，7·27_7·86 (16H，m)，8.09 (2H，d，/= 7.2 Hz)，8·27 (1H，d，/= 8·4 Hz)， 8·45 (1H，d，J = 8.4 Hz)，9·32 (1H，s) ; FAB_MS m/z(相對強度）1284 [M+l]+ (35)，1224 (15)，940 (51)，449 (77), 289 (98)，240 (100)。（C71H72N4018)理論值·· C，67.18; H，5.72。 85240 -31 - 1234457 實驗值·· C，67.12; H，5.69。共軛物17 :產量60.7% [以27.0毫克（0.029毫莫耳）12開始];淡黃色不定形固體，[a ]D -17.2。〇 0.47，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : (5 1·04 (3H，t，7·5 Hz)，1.16 (3H，s)，1.20 (3H，s)，1.81 (3H，s)，1.83 (3H，s)，2.04 (3H，s)，2·38 (3H，s)， 3.81-3.93 (4H，m)，4.18和 4.31 (各 1H，d，J = 8.4 Hz)，4.81 (1H，dd，6.2, 2.7 Hz)，4·93 (1H，d，/= 8.7 Hz)，5.30 (1H， d, J = 16.5 Hz)5 5.50 (2H5 s)5 5.58 ( 1H, dd, J = 10.2, 6.9 Hz)，5.67 (1H，d，《/= 6.9 Hz)，5.74 (1H，d，16.5 Hz)，5.80 (1H，dd，/=8.9, 2.4 Hz)，6.17 (1H，d，《/= 9.0 Hz)，6.23 (1H， s)，7.14 (1H，d，9.3 Hz)，7.30-7.87 (15H，m)，8·10 (2H，d， J = 7.2 Hz), 8.28 (1H5 d, J = 8.4 Hz)? 8.50 (1H5 d, J = 8.4 Hz)， 9.32 (1H， s) ； ESI-MS m/z 1320 [M+Na]+ 。 (C72H74N4018)理論值：C，67.38; H，5·81。實驗值：C， 67.30; H，5.79 ° 共輛物18 :產量69.3% [以27.8毫克（0.029毫莫耳）13開始];淡黃色不定形固體，[a ]D -41.3。〇 0.15，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) ·· 5 1.03 (3H? t, J = 7.5 Hz)? 1.15 (3H? s)? 1.25 (3H，s)，1.57 (3H，s)，1·76 (3H，s)，2.10 (3H，s)，2·28 (3H，s)， 3·80(lH，d，JΓ=6·6Hz)，4·13和4.27(各lH，d，t/=8·4Hz)， 4.79 (1H5 d, J = 2.7 Hz)? 4.85 (1H5 d, J = 8.1 Hz)5 5.31 (1H? d? J = 16.5 Hz), 5.46 (1H? dd? J = 10.2, 7.2 Hz)? 5.55 (2H? s)，5.61 (1H，d，J = 6.9 Hz)，5.74 (2H，m)，6.07 (1H，t，J = 9·0 Hz)，6·12 (1H，s)，7·18 (1H，d，《7 = 9.3 Hz)，7.32-7.88 85240 -32- 1234457 (15H，m)，8·08 (2H，d，7.2 Ηζ)，8·30 (1H，d，</= 8.4 Hz)， 8·52 (1H，d，/ = 8·4 Hz)，9·3〇 (1H，s) ; ESI-MS m/z 1348 [M+Na]+。（C74H78N4018)理論值·· c，67.77; H，5.99。實驗值：C，67.69; H，5.98 〇共輛物19 :產量64.3% [以28.2毫克（〇_〇29毫莫耳）14開始];淡黃色不定形固體，[a ]D -8.0。〇〇·4〇，CHC13) ; "Η NMR(CDC13) : 5 1.02 (3Η，t，/= 7·5 Ηζ)，1·19 (3Η，s)，1·25 (3Η，s)，1·95 (3Η，s)，2.17 (3Η，s)，2·40 (3Η，s)，2.63 (3Η，s)， 4·00 (1Η，d，/ = 6.3 Ηζ)，4.23和 4.33 (各 1Η，d，/ = 8.1 Ηζ)， 4.82 (1Η，d，2.7 Ηζ)，4.98 (1Η，d，《/二 8.7 Ηζ)，5·14 (2Η， brs)，5·28 (1H，d，《/= 16.2 Hz)，5.52 (2H，s)，5.67-5.76 (2H， m)，5.81 (1H，dd，J = 8.7, 2-1 Hz)，6.19 (1H，t，/ = 9.0 Hz)， 6.37 (1H，s)，7.21-7.96 (20H，m)，8·12 (2H，d，/ = 7·2 Hz)， 8.27 (1H，d，J = 8.4 Hz)，8.42 (1H，d，= 8.4 Hz)，9·39 (1H， s) ; ESI-MS m/z 1396 [M+Na]+。（C76H74N4018)理論值：C， 68.56; H，5.60。實驗值：C，68.40; H，5.56。共軛物20 :產量55.1% [以23·3毫克（〇·023毫莫耳）15開始];淡黃色不定形固體，[a ]D -11·5°0 〇·27，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : (5 1·〇6 (3H，t，7.5 Hz)，1.18 (3H，s)，1.25 (3H，s)，1.84 (3H，s)，1·85 (3H，s)，2·17 (3H，s)，2·39 (3H，s), 3·94(lH，d，¾/=6·6Hz)，4.20和4·33(各lH，d，t/=8·4Hz)， 4·81 (1H，brs)，4.96 (1H，d，J 二 9.3 Hz)，5.33 (1H，d，J 二 16.5 Hz)，5.58 (1H，m)，5.70 (1H，d，/= 5.7 Hz)，5.73 (2H， s)，5.81 (1H，d，J = 5.7 Hz)，6.19 (1H，t，/ = 9.0 Hz)，6.26 85240 -33- 1234457 (1H，s)，7·08 (1H，d，/ = 9·3 Hz)，7.27-7.80 (18H，m)，7·88 (1H，t，/ = 7·2 Hz)，8.12 (2H，d，J = 7·2 Hz)，8.33 (1H，d，/ = 8_4 Ηζ)，.8·56 (1H，d，J = 8.4 Hz)，9.55 (1H，s) ; ESI-MS m/z 1368 [M+Na]+。（C78H78N4018)理論值：68.91; H，5.78。實驗值：C, 68_86; H，5.77。表1.共輛物16-20之元素分析數據化合物理論值實驗信分子式 C Η C Η 16 C71H72N4O18 67.18 5.72 67.12 5.69 17 C72H74N4O18 67.38 5.81 67.30 5.79 18 C74H78N4O 1 8 67.77 5.99 67.69 5.98 19 C76H74N4O18 68.56 5.60 68.40 5.56 20 C78H78N4O18 68.91 5.78 68.86 5.77 人腫瘤細胞複製分析。化合物經測試作為細胞生長抑制劑’對抗有限組之固體腫瘤株，包括KB (類表皮瘤，CL 17) 和喜樹鹼抗性之亞株稱為KB-CPT ; HCT-8(迴盲腸腺瘤， CCL 244) ; MCF-7(乳腺瘤，HTB 22) ; PC-3(前列腺瘤， CRL 1435); 1A9(卵巢瘤）及紫杉酚抗性之亞株稱為具突變 β-微管素之PTX10。藥物抗性之細胞株為γ· c. Cheng博士 (耶魯大學’新天堂，康乃狄克州）及p· Giannakakou博士 (NIH，Bethesda，馬里蘭州）之慷慨禮物。細胞株經調適生長於RPMI_1640培養基，補充以25 mM希皮士、2% NaHC03，10%體積比胎牛血清及1〇〇微克/毫升卡那黴素。培養物維持在5% C02氣壓與37 °C下。Rubinstein等人 85240 -34- 1234457

(1990)J. A/W/. c㈣cer/似ί· 82: 1113所述之磺酸基若丹明B 极滴盤分析法經用以評估作為細胞複製抑制劑之化合物。 ^〇5()值，相對於控制組在3天連續暴露後，抑制細胞株複製 50%之化合物濃度，使用Prizm(圖墊軟體，聖地牙哥，加州）自數據碉適之劑量反應圖内插。 DNA拓樸異構酶I活性分析。化合物經測試作為酵素催化質體DNA鬆弛之抑制劑。反應含有〇·5微克pBR322 DNA和 0·5單位人DNA拓樸異構酶i(T〇p〇Gen，哥儉比亞，俄亥俄州）’ 50 μΜ之化合物及先前Krishnan等人（2000)技靡桌勒謗妒15:255所述之緩衝劑成份。在37它下15分鐘後，反應由加入蛋白酶Κ(0·1毫克/毫升）和1%重量體積比sds中止。在 50 C下1小時後，DNA在1%重量體積比瓊脂糖膠上解析，其膠於標準ΤΒΕ緩衝液中含有〇·5毫克/毫升溴化乙錠，及在 UV光下使用拍立得667膠捲照相。 Β.結果與討論此研先之目的在於探討是否對藥物抗性細胞展現多抗腫瘤活性4改進活性之抗腫瘤劑可經紫杉酚（丨）和喜樹鹼（2)衍生物間之共輛製備，及其抗腫瘤作用如何被共輛所影響。吾等在此報導合成與評估紫杉酚_喜樹鹼共輛物作為細胞毒性劑及DNA拓樸I抑制劑。連結位置之選擇基於紫杉烷核中C-7酯基之已知容忍性 (Nicolaou等人（1994)hg^· CTz㈣· /价/n 心《/· 1〇6: 15， Guy等人（1996)C7z㈣· 5/0/· 3: 1021)及最近7-取代喜樹鹼類似物之SAR研究（Wang等人（1994)出⑽α从以^謂.2·· 85240 -35- 1234457 1397, Wang 等人（1990)J· CTzem· 33: 2660)。然而，紫杉驗支鏈之C-2’羥基常為最具反應性及選擇性c_7醯基化僅可在C-2’經保護時達成。Nic〇iaou等人（丨的叫叹謂以㈣. /W/· 以g/· 106: 15之程序經用於製備C-7胺基官能化紫杉紛（11-15)。因此，2，-羧基苄基（Cbz)-紫杉酚以N-Cbz-胺基酸在DCC和DMAP存在下在CH2C12中處理，以高產量得到 6-10。其後由氫化反應還原除去cbz基，得到C-7胺基官能化紫杉酚（11-15)。五種紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇)由11-15與7·甲基吾树驗（5)在冬中共輛而獲得，如示於圖式1。化合物1.6-20在矽膠上不安定（母化合物經再生），但可由 Sephadex LH-20管柱層析法純化。全部共軛物（16-2〇)在其 4 NMR光譜中顯示5 9.30-.55之特性亞胺質子訊號。五種共軛物（16-20)經測試細胞毒性對抗一組人腫瘤細胞株（HTCL) ’包括紫杉驗抗性和喜樹驗抗性衍生物，如述於

Rubinstein 等人（1990)J· 82: 1113。此結果示於表2，而紫杉酚（1)和喜樹鹼（2)之值經給定供比較。化合物細胞株/ED50 KB KB-CPT 紫杉紛 -12.1 -12.2 喜樹驗 -10.8 -7.5 16 <-11.0 -11.1 (67) PTX10

ED 丨50 10.2 -9.4 -9.3 -7.1 -7.1 -8.9 (76) 85240 -36- 1234457 17 -10.4 -9.7 -10.2 -10.5 -10.0 -7 Λ -7.1 -9.0 18 -9.3 -8.1 -10.0 -10.5 -10.6 - 7.5 -7.5 -9.0 19 -8.5 -8.9 -8.1 -8.4 -8.1 -6.0 -7.5 -7.6 20 -10.8 -8.1 -8.3 -7.1 -7.4 >-4.0 >-5.0 >-7.1 (48) (45) 3在腫瘤細胞株複製之影響使用標準方法測定，如述於 Krishnan等人（2000)犮邊桌勿設# 15:255。細胞株/ED5〇4 log1GM(複製數變異不超過5%)。若在最高試驗濃度下抑制 <50%或在最低下>50%，所見之百分率抑制見於括弧值。b 平均值取自HTCL數據及不包括藥物抗性變異物之值。共軛物對抗MCF-7(乳癌）和HCT-8(結腸腺瘤）細胞之活性側析圖經分別示於圖3，A圖與B圖。全部共軛物相較於2(喜樹驗）下為腫瘤細胞複製之有效抑制劑，且具改進之活性，及亦顯示較2對抗喜樹鹼抗性KB-CPT細胞之更佳活性。顯著地’如示於圖3 ’ 16-18較1(紫杉驗）和2更有效對抗HCT-8 細胞複製。紫杉酚和喜樹鹼部份間連結基之結構活性相關性（SAR)考量顯示其中紫杉酚和喜樹鹼由脂族胺基酸連結之 16-1 8較其中紫杉酚和喜樹鹼由芳族胺基酸連結之19和20更具細胞毒性活性。共輛物16-20亦以如述於Krishnan等人（2000)疣痛襄教謗夺15:255之方式測試為人DNA拓樸I活性之體内抑制劑（圖 4)。全部共軛物在此分析中皆較2顯著更不有效。化合物 16、18和19在5(^下僅顯示邊際活性，而17和2〇無活性。無共軛物抑制DNA鬆弛。 85240 -37- 1234457 基於對抗藥物抗性細胞株複製之活性，吾人可結論出共輛物簡單作為「弱紫杉;^」，但活性譜，特別對抗和HCT_8(圖3)，與此結論不一致。後者結果指出與2比較下，16-1 8之細胞毒性側析圖不明顯。此外，因為&dna 拓樸I抑制分析之結果顯示不像2，共軛物在體内不抑制 DNA拓樸I，所以可能經共軛達成一種新穎之作用機制。幻面τ»兄明本發明，及不思在將其限制。本發明由以下申請專利範圍定義，而申請專利範圍之相當物包括在内。 [M_式簡單說明1 圖1說明與本發明有關之不同先質化合物之結構；圖2說明製備本發明化合物之合成途徑之具體實施例；圖3說明對抗MCF-7(A圖）及HCT-8細胞複製（B圖）之化合物活性側析圖；及圖4說明展現本發明化合物作為人DNA拓樸異構酶I抑制劑之含溴化乙錠瓊脂糖膠。 85240 38-

Claims

1234嫌&5i 12170號專利申請案一—— 中文申請專利範圍替換本(93年8月）j、t、、‘本年月曰拾、申請專利範圍：一〜迦心9 i 一種根據式I之化合物： ⑴ C’-L-T 其中： C’為式II之喜樹驗基：

Rl選自由Η、烷基、醛、羰基、烷氧基、烷基芳基、羥基烷基、函烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷基胺基烷基、環胺基烷基、芳基、芳氧基、c_烯糖、硝基、氰基及0-醣苷基組成之群； R2、R3、R4和R5各獨立選自由H、胺基、羥基、烷基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基）胺基、環胺基烷基、月安基烷氧基、芳基、芳氧基、。烯糖、氰基、甲二氧基、甲醯基、硝基、由基、聶、酸胺基、月井基、、經胺基-氮原子鍵結至A環之2〇:標^胺基酸之任一個、SR8、NR8R8或〜醣菩基組成之群，·或仏和心一起形成5或6員芳族或二氧六圜環，·及其中&和 R3、R3和R4或R4和R5在一起；其限制條件係R!、R2、R3 R4和R5之一為與[之共 85240-930809.doc 1234457 R6為Η、_基、烷基、烷氧基、烷基芳基、羥基烷基或卣烷基； L為烷基、烷基芳基、羥基烷基或芳基； Rs獨互選自由η、烷基、烷基芳基、羥基烷基、胺基燒基、醯基或芳基組成之群； L為連結部份； Τ為式III之類紫杉紛基：

其中 Ru選自由Η、烷基、烷氧基、胺基烷基和醯基組成之群； &2和Ru獨立選自由Η、烷基、芳基、燒氧基、烷基芳基、每基燒基、！|燒基、胺基燒基、二燒基胺基、一烷基胺基烷基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和鹵基組成之群；其中在所有基團中烷基部份代表（^至匕烷基，芳基部份代表C6SClG芳基，且環烷基部份代表c3至c8環烷基；或其醫藥上可接受鹽。 2. 如申凊專利範圍第1項之化合物，其中Ri為甲醯基。 3. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中116為鹵素。 85240-930809.doc -2- 1234457 4·如申請專利範圍第1項之化合物，其中Ru為醯基及R12和各獨立為苯基。 5·如申請專利範圍第1項之化合物，其中Rn為Η及R12為第 —丁氧基和Rl3為苯基。 6 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中L為該紫杉酚基位置7上及式iv該喜樹驗基I上之連結部份： -X-R2i-A- (iv) 其中

X為拉電子基；及 R2i選自由Ci-C6伸燒基和C6_C1()芳基（^-€!6伸燒基組成之群； A選自由胺基和亞胺基組成之群。 7·如申請專利範圍第丨項之化合物，其中該連結部份包括酯與亞胺連結。 8·如申請專利範圍第i項之化合物’其中該連結部份包括式V :

-(V) ’ 〇 · • . ; . C^—R^C N—一 R之厂_，一〇〜〜了其中 R21選自由CVC6伸垸基和成之群； R22選自由15和垸基組成之君羊 9 _如申請專利範圍第1項之化合物，其中該連結部份包括 85240-930809.doc 1234457 脂族胺基酸。 1 0 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中該連結部份包括芳族胺基酸。 11.如申請專利範圍第1項之化合物，其中L為式-La-Lb-之連結部份，其中有或無Lb及La和Lb各獨立選自由下組成群： ,0 - ； -(CHjjn- · -. (CH2)a-*-C-

85240-930809.doc -4 1234457 其中： η為0至6，a為0至3及b為0至3 ;及R25選自由CVC6伸烷基、c2-c4晞基和C6-C1G伸芳基組成之群。 12.如申請專利範圍第1項具下結構之化合物

85240-930809.doc 1234457

1 3 •—種具有抗細胞分裂與抗腫瘤活性之醫藥調配物，其包括如申請專利範圍第1項之化合物於醫藥上可接受载劑。 •如申請專利範園第13項之醫藥調配物，其中該載劑為水性載劑。 • 種用於治療癌症之醫藥組合物，其包括治療有效量之如申請專利範圍第1項之化合物。 16.如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症選自由小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、印巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及前列腺癌組成之群。 17·如申請專利範園第15項之醫藥組合物，丨中該癌症為乳 85240-930809.doc 1234457 癌。 18·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症為卵果癌。 19·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症為前列腺癌。 20·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對喜樹鹼具抗性。 •如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對紫杉酚具抗性。 22. 如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對喜樹驗和紫杉酚皆具抗性。 23. 一種用於謗導細胞分化之醫藥組合物，其包括分化有效量之如申請專利範圍第1項之化合物。 24· —種用於抑制細胞有絲分裂之醫藥組合物，其包括有絲分裂抑制量之如申請專利範圍第1項之化合物。 25. -種於體外謗導細胞分化之方法’該方法包括將癌細胞與分化有效量之如申請專利範園第丨項之化合物於體外接觸。 26. —種於體外抑制細胞有絲分裂之方法，該方法包括將細胞與有絲分裂抑制量之如申請專利範圍第丨項之化合物在體外接觸。 85240-930809.doc