TWI234457B - Camptothecin-taxoid conjugates as antimitotic and antitumor agents - Google Patents

Description

1234457 玖、發明說明： [聯邦資助磬明1 本發明因國家健康研究所補助號HL5 1 8 1 8之政府資助而製 成。政府對本發明擁有一些權利。 明所屬之技術領媸1 本發明有關喜樹驗及其類似物與類紫杉盼基之共輛物， 含彼等之醫藥調配物及其作為抗有絲分裂及抗腫瘤劑之方 法，特別治療癌症如乳癌、卵巢癌及前列腺癌。 [先前技術1 如示於圖1之紫杉酚（丨）與亦示於圖1之喜樹鹼（2)皆為目前 於臨床用途之植物衍生抗腫瘤劑（M.C. Wani等人，短葉紅 豆杉，1971，93, 2325-2327及Μ·Ε· Wall等人，丨/所.（^嫌· 1966，88，3888-3890)。紫杉酚於1992由FDA核准以治 療進展性卵巢癌及於1994以治療乳癌。 紫杉酚抗腫瘤作用之機制為抗有絲分裂，特定促進不可 逆組合細管素成微小管（P_B· Schiff等人，泠#、，1979，277, 665-667)。喜樹鹼亦擁有顯著抗腫瘤活性，其歸因於抑制 DNA拓樸異構酶I(Dna拓樸Ι)(Υ·Η· Hsiang等人，召心/. CT^m·，1985，260，14873-14878 及 J.C· Wang， 1987，909，1_9)。兩種化合物經接受連續結 構修飾，主要在發展更有用之化學治療劑。然而，雖然紫 杉驗和喜樹驗皆擁有有效之抗腫瘤活性，但最近報告指出 此些藥物之治療常造成多種不想要副作用以及多藥抗性。 因此’發展具更少副作用且對不同類腫瘤具改進活性之新 85240 1234457 穎抗癌劑仍是必要的。 先m吾等報導合成與評估兩種4，-0_去甲基表鬼臼素-喜樹 驗共輛物（如不於圖1之3和4)作為哺乳類DNA拓樸異構酶I和 II之抑制劑（K.F. Bastow等人，价⑽〇㈣·， 1997, 5, 1481-1488)。抑制細胞生長之最有效共軛物類似於拓樸工和 II抑制成份。此些共軛物較表鬼臼素於一些癌細胞株包括 ΗΟΡ_62白血病、SW-620結腸癌、MCF/ADR亞德利亞黴素 抗性之乳癌及Α-498腎癌中更具細胞毒性。一種共軛物於裸 鼠中對抗人ΚΒ(鼻咽）及DU_145(前列腺）腫瘤細胞生長較伊 洛波拇或（2)更有效。目前，一些報告描述紫杉酚與多洛紅 菌素或苯丁酸氮芥間之共軛物（A.K. Kar等人，扔⑽rg. Md. C/zem. Zei·，2000，10, 261-264及M.D. Wittman等人，Aowg. Med· Zei·，2001，11，811_814)。然而，DNA拓樸異構 酶抑制劑-紫杉酚雜交物未曾探討。 [發明内衮1 根據本發明之具體實施例，本發明有關根據式I之化合 物··

Cf-L-T (I) 其中： C’為式II之喜樹鹼基··

85240 !234457

Ri選自由Η、烷基、醛、羰基、烷氧基、烷基芳基、羥 基燒基、卣燒基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷基胺基烷 基、每胺基燒基、芳基、芳氧基、C-烯糖、硝基、：氰基及 〇 _聽菩基組成之群； R2、R3、R4*R5各獨立選自由Η、胺基、羥基、烷基、 k氧基、燒硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基）胺基、環 胺基燒基、胺基烷氧基、芳基、芳氧基、c_晞糖、氰基、 甲二氧基、甲醯基、硝基、鹵基、疊氮基、醯胺基、肼 基、經胺基·氮原子鍵結至A環之20個標準胺基酸之任一 個、SRs、NRSR8或〇-醣苷基組成之群；或心和:^一起形成5 或6員芳族或二氧六圜環；及其中r2*r3、尺3和化4或1^和尺5 在一起； , 其限制條件係h、R2、r3、及4和r5之一為與L之共價 鍵； R6為Η、鹵基、烷基、烷氧基、烷基芳基、輕基烷基或 鹵烷基； R7為虎基、燒基芳基、經基燒基或芳基；

Rs獨立選自由Η、燒基、燒基芳基、經基坑基、胺基坑 基、醯基或芳基組成之群； L為連結部份； Τ為式之III類紫杉酚基： (III)

85240 -10- 1234457 其中

Ru選自由Η、烷基、烷氧基、胺基烷基和醯基組成之 群；

Ri2和Ri3各獨立選自由Η、烷基、芳基、垸氧基、燒基 芳基、羥基烷基、画烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二燒 基胺基fe基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和由基組 成之群；或 其醫藥上可接受鹽。 根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種包括根 據上式I之化合物於醫藥上可接受載劑之醫藥調配物。 根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種治療癌 症之方法，包括投藥予需要此之個體，治療有效量之根據 上式I化合物。可治療之癌症實例包括，但不限於小細胞肺 癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、 乳癌、卵巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及前列腺癌。 根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種謗導細 胞分化之方法’該方法包括將癌細胞與分化有效量之根據 上式I化合物接觸（體内或體外）。 根據本發明之其他具體實施例，本發明有關一種抑制細 胞有絲分裂之方法，該方法包括將細胞與有絲分裂抑制量 之根據上式I化合物接觸（體内或體外）。 [曼JL之詳細說明1 本發明現將以參閱隨附圖更全然說明於後，其圖進一步 85240 -11 - 1234457 說明在此所述之本發明。然而， 个知力以不同形式且晋渔仆 及不應作為限制在此說明之具體實施例。反而，此I且^ 實施例經提供以使本說明書將更徹底與完全，及將全 達本發明範疇予熟諳技藝者。 h 用於本發明說明書之名詞係僅為菩 4耆描述特殊具體實施例 之目的及不意在限制本發明。如用 如用於本發明說明書與隨付 之申請專利範圍，單數形式之「a ,、「an t「 」 an」和「the」亦意 在包括複數形式’除非文内另清楚指明。 除非另有定義，在此所用之全部技術和科學名詞常有著 熟諳本發明技藝者所知之相同意義。在此提及之全部出版 物、專利申請案、專利與其他參考文獻以其本體以引用之 方式併入本文中。 少元基」或「低故坑基」一詞如在此所用，指C1至。4、 C6或C8燒基，其可為線性或分支及飽和或不飽和的。 「環燒基」在此特定化及典型為C3、C4或C5至C6或C8環 烷基。 「少市基」或「低碳晞基」如在此所用，同樣指C1至C4缔 基，及烷氧基或低碳烷氧基如在此所用，同樣指c丨至C4^ 氧基。 「燒氧基」如在此所用，指線性或分支、飽和或不飽和 的氧-烴鏈，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁 氧基及第三丁氧基。 「芳基」一詞如在此所用，指C3至C 10環狀芳族基，如笨 基、萘基及類似物，及包括經取代之苯基如甲苯基。 85240 -12- 1234457 「鹵基」如在此所用，指任何鹵素基，如氯、氟、溴或 琪。 「羥基燒基」一詞如在此所用，指C丨至C4線性或分支之 經基取代燒基，即-CH2OH、-(CH2)2OH等。 「胺基燒基」一詞如在此所用，指(::丨至C4線性或分支之 胺基取代抗基’其中「胺基」一詞指NR，R"基，其中R，和R，， 獨立選自Η或如上定義之低碳烷基，即_NH2、-Nhch3、 _n(ch3)2 等。 「氧燒基」一詞如在此所用，指(：1至€4氧取代烷基，即 -OCH3及「氧芳基」一詞如在此所用，指(^3至cl〇氧取代環 狀芳族基。 「治療」或「處理」如在此所用，指賦予患病之病人益 處之任何類型治療，包括改進病患之病況（例如一或多種症 狀）、延遲疾病之進展，預防或延遲疾病之開始等。 「醫樂上可接雙」如在此所用，指化合物或組合物適合 投予病患以達成在此所述之治療，鑒於疾病之嚴重性與治 療之必要性下而無極有害之副作用。 本發明主要有關人個體之治療，但亦可為著獸醫目的， 用以治療其他動物個體（即哺乳類、鳥類）。哺乳類為較佳 的，而人類為特別佳的。 通常’本發明之活性化合物具有根據式I之結構： C’_L_T 其中c’為喜樹鹼基， 基及L為共價連結基。 (I) 包括喜樹鹼及其類似物，T為類紫杉酉分 3活性化合物如在此所用’包括其醫奋ξ 85240 -13- 1234457 上可接受鹽。本發明包括個別右旋或左旋純製備物以及其 混合物（消旋或鏡像異構強化混合物）。可用與上式I聯結之 不同基經詳細討論於下。 A·喜樹鹼 任何喜樹鹼或喜樹鹼類似物可用以實施本發明。喜樹鹼 為已知的及可以已知技術一致地產生。通見默克索引，專 論1783(12版，1996)。

可用以實施本發明之喜樹鹼類似物實例包括，但不限於 該等述於下者··予Wall等人之美國專利號4,894,456 ;予 Miyasaka等人之美國專利號4,399,282 ;予Miyasaka等人之 美國專利號4,399,276 ;予Vishnuvajjala等人之美國專利號 4,943,579;歐洲專利申請案號0,321 122 A2;予Miyasaka等 人之美國專利號4，·473,692 ;歐洲專利申請案號0 325 247 Α2 ; Takeda化學工業申請之歐洲專利申請案號0 556 585 八2;予冒&11等人之美國專利號4,981，968;予\\^11等人之美 國專利號5,049,668 ;予Comins等人之美國專利號 5，162,532 ;予Wall等人之美國專利號5，180,722 ;予Comins 等人之美國專利號5,2〇〇,524 ;予Comins等人之美國專利號 5,459,269 ;予Fang等人之美國專利號5，162,532 ;及予 Angelucci等人之美國專利號6,328,953(在此所引之全部專利 參考說明書以其本體以引用之方式併入本文中）。如此化合 物常為式II : 85240 -14- 1234457 其中：

Ri選自由Η、燒基、酸、 基乾基、1¾烷基、胺基烷基 基、環胺基烷基、芳基、芳 醣甞基組成之群； 羰基、烷氧基 '烷基芳基、羥 、二烷基胺基、二烷基胺基烷 氧基、C-晞糖、硝基、氰基及 、、—R2、R3、R4*R5各獨立選自由H、胺基、羥基、烷基、 虼氧基、烷硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基）胺基、環 胺基烷基、胺基烷氧基、芳基、芳氧基、C-烯糖、氰基、 甲-氧基、甲醯基、硝鹵基、疊氮基、醯胺基、肼 基、經胺基_氮原子鍵結至A環之2〇個標準胺基酸之任一 個、SR8、NRsR8或〇-醣甞基組成之群；或心和心一起形成^ 或6員芳族或二氧六圜環；及其中以2和&、化和1或&和& 在一起； 其限制條件係Ri、R2、h、I和尺5之一為與L之共價 鍵； ~ R6為Η、鹵基、烷基、烷氧基、烷基芳基、羥基烷基或 鹵烷基； R7為、)克基、烷基芳基、幾基烷基或芳基； R8獨立選自由Η、烷基、烷基芳基、羥基烷基、胺基烷 基、醯基或芳基組成之群。 Β.類紫杉酚基 任何類紫杉紛基可用以實施本發明。類紫杉酚基為已知 85240 -15- 1234457 的及可以已知技術-致地產生。.通見默克㈣，專論 ^83(12版，1996)。 較佳之紫杉烷為該等增強微小管形成所必需之技藝中已 知構成份者’例如紫杉酴和多西紫杉酴（d。⑽―）。紫杉驗 和夕西糸杉酚炙結構於技藝中已知。可用以實施本發明之 類紫杉酚基實例包括，但不限於該等述於下者：予幻―⑽ 等之美國專利號5,614,645 ;予chattopadhyay等人之美國 專利號6,028,206 ;予Kingston等人之美國專利號 5’411，984，予Magnus等人之美國專利號5,5〇8,447(在此所引 之全邵專利參考說明書以其本體以引用之方式併入本文 中）。可用以實施本陳述之類紫杉酚基為式m所代表： 其中

(III)

Rii選自由Η、烷基、烷氡基、胺基烷基和醯基組成之 群；

Ri2和Ru各獨立選自由Η、烷基、芳基、烷氧基、烷基 方基、藉基烷基、1¾烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷 基胺基燒基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和画基組 成之群、； 或莫醫藥上可接受鹽。 C.連結部份 85240 -16- 1234457 可用以形成兩種官能部份之共價共輛物之連結部扮在技 藝中已知。採用之特定連結部份將依賴用以製作共價共軛 物之特殊合成方法而定，如熟諳技藝者所知者。合適之連 結基將允許喜樹鹼（C，）和類紫杉酚（T)基連結，以提供在代 身上去足之共輛物（即立體阻礙將不那麼強以防止c，和丁基 連結之共軛物）。 通常，連結部份可包括脂族、芳族或混合之脂族和芳族 基（例如烷基、芳基、烷基芳基等）及含有一或多個胺基酸或 =原予如N、〇、s等。例如，連、结部#可為式之化 物’其中有或秩Lb及La和Lb各獨立選自由下組成之群： 0 B C，_,

0 C-(CB，2)a^

85240 -17- 1234457

0

‘〇丫 (0¾¾. 0 、N/(CH2)b ο 及 ：

YV 其中 Η 〇 f 瞒0至6，a為〇至3&b為〇至3 ;及R25選自由 烯基和伸芳基組成之群。 ①土、 連結部份亦可包括在類紫杉酚基位置7上及式以喜 K上之連結部份： (iv) 其中 X為拉電子基；及 R21選自由伸烷基和芳基伸烷基組成之群； A選自由胺基和亞胺基組成之群。 連結部份亦可包括具有式V之連結部份： 〇 ^ - (V)

, I C -R21--c ——.γ 其中 選自由伸烷基和芳基伸烷基組成之群 R22選自由Η和烷基組成之群。 D ·特定化合物 85240 -18- 1234457 本發明範疇内之特定化合物包括，但不限於

85240 -19- {19) · 1234457

E.化合物合成 本發明化合物之合成可採用特殊連結化學決定。以下一 般合成之變異法將易明顯於熟諳技藝者及視為在本發明範 疇内。通常，式I共軛物可由喜樹鹼化合物與類紫杉酚化合 物於苯中迴流來製備。 作為特定之實例，上共軛物16至20可由7-甲醯基喜樹鹼 與類紫杉酚溶於無水苯中來製備。溶液然後在4埃分子篩上 85240 -20- 1234457 迴流過夜。混合液經過濾及在真空中蒸發，得到粗紫杉酚_ 喜樹驗共軛物。產物由Sephadex LH-20管柱層析法純化， 以 CHCl3-MeOH(l : 1)為離析液。 F·醫藥上可接受鹽 「活性劑」一詞如在此所用，包括該化合物之醫藥上可 接艾鹽。食樂上可接雙鹽為保有母化合物想要生物活性且 不賦予不想要毒性作用之鹽。如此鹽之實例為⑷與無機 酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸和類似物形成 之fei加成鹽，及與有機酸，例如乙酸、草酸、酒石酸、琥 珀酸、馬來酸、延胡索酸、葡萄糖酸、檸檬酸、蘋果酸、 抗壞血酸、苯甲酸、單寧酸、棕櫚酸、褐藻酸、聚麩胺 酸、萘磺酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、蓁二磺酸、聚半乳糖 醛酸和類似物形成之鹽；及（b)自元素陰離子如氯、溴和碘 形成之鹽。 用以製備本發明組合物之活性劑或許可為活性劑之醫藥 可接受游離鹼形式。因為化合物之游離鹼較鹽不可溶，游 離鹼組合物經採用以提供活性劑更持續釋出至標的區域。 存在於標的區域，但未進入溶液之活性劑不易誘導生理反 應，但供作逐漸進入溶液之生物有效藥物庫。 G·醫藥調配物 本發明式I之喜樹鹼與類紫杉酚化合物可作為醫藥活性劑 及可以大體積形式採用。更特定地，然而，此些化合物經 調配為供投藥之醫藥調配物。可採用任何合適醫藥調配物 作為投予本發明化合物之載體。 85240 -21 - 1234457 式i化合物可經調配供投藥以治療多種病況。在製造本發 明之醫藥調配物中，式I化合物及其醫藥上可接受鹽或其酸 衍生物（以下稱「活性化合物」）典型與特別是可接受之載劑 混合。當然’載劑必須在相容於調配物中任何其他組份之 概念下為可接受及必須無害於病患。載劑可為固體或液 體’或兩者及較佳與化合物調配作為單位劑量調配物，例 如鍵劑，其可含有自0.5%至95%之活性化合物重。一或多 種活性化合物各可併入本發明之組合物中，其基本上可由 混合成份組成之配藥學之任何熟知技術製備，視情況包括 一或多種附屬組份。 本發明調配物包括該等適合口服、直腸、局部、頰内（例 如舌下）、腸外（例如皮下、肌肉内、皮内或靜脈内）及經皮 投藥，但在任何給定例中最適合途徑將依賴要治療病況之 本質與嚴重性及要使用特殊活性化合物之本質而定。 週合口服投藥之調配物可存在於分離單位，如膠囊、藥 囊、菱劑或錠劑，各含有預定量之活性化合物；如粉劑或 粒劑；如溶液或於水性或非水性液體之懸浮液或如油在水 中或水在油中之乳化液。如此調配液可由任何合適製藥學 万法製備，其包括將活性化合物與合適載劑（其可含有一戈 多種如上註之附屬組份）聯結在一起之步驟。 通常，本發明之調配物製備由均勻與緊密混合活性化合 物與液體或細分固體載劑或兩者，及然後必要時將生成之 此口物定型。例如，錠劑可由將含有活性化合物，視情況 具有一或多種附屬組份之粉末或粒物壓製或打模來製備。 85240 -22- 1234457 壓製錠劑製備可由將自由流動形式之化合物，如粉末戋浐 物，視情況混合著結合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或^面 活性/分散劑，在合適機器中壓製。打模錠劑製備可由將惰 性液體結合劑潤濕之粉末化合物在合適機器中打模。 週合頰内（舌下）投藥之調配物包括在常為蔗糖和阿拉伯膠 或黃耆膠之香味基質中含有活性化合物之菱劑，在惰性基 質如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含有化合物之錠劑。 週合腸外投藥之本發明調配物方便包括活性化合物之益 菌水性製備物，其製備物較佳等張於想要受體之血液。此 些製備物可藉皮下、靜脈内、肌肉内或皮内注射而投藥。 如此製備物可方便由化合物與水或甘油緩衝液混合及調整 生成之么液為操囷及等張於血液而製備。 適合直腸投藥之調配物較佳以單位栓劑呈現。此些可由 活性化合物與一或多種傳統固體載劑，例如可可脂混合及 然後將生成之混合物成型而製備。 適合局部施至皮膚之調配物較佳取用軟膏、乳液、洗滌 水、糊劑、膠劑、噴劑、霧劑或油之形式。可使用之載劑 包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類、經皮增強劑及其 兩或多種組合物。 適合經皮投藥之調配物可以經調適與受者表皮緊密接觸 一段長時間之分離貼片呈現。適合經皮投藥之調配物亦可 由離子透入法（見例如#襄研宏3(6): 318 (1986))傳送及典型 取用活性化合物之視情況緩衝水溶液形式。合適之調配物 包括棒檬版或雙/二緩衝液（pH 6)或乙醇/水及含有自ο·。}至 85240 -23- 1234457 0.2 Μ活性組份。 Η.使用方法 除式I化合物外，本發明亦提供有用之治療方法。例如， 本發明提供一種謗導抗腫瘤活性之方法。更特定地，本發 明提供一種抑制DNA拓樸異構酶I之方法。該方法包括將拓 樸異構酶I與抑制有效量之式I化合物在體内或體外接觸。拓 樸異構酶I之抑制為抑制腫瘤或癌細胞生長之有用方式。 本發明亦提供一種誘導細胞分化之方法。該方法包括將 癌細胞與分化有效量之式Ϊ化合物接觸◊可分化之癌細胞包 括自小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃 癌、結腸癌、乳癌、卵巢癌、中框神經系統癌、肝癌及前 列腺癌之細胞。 本發明亦提供一種在罹患癌症之個體中治療癌症之方 法。孫方法包括投予個體，有效癌症治療量之式〗化合物。 孩万法有用以治療多種癌細胞，其包括但不限於小細胞肺 癌：睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、 乳癌、卵巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及前列腺癌。 可使用本發明方法治療之個體典型為人個體，但本發明 万法可因獸醫目的而用於其他個體，特別地哺乳類個體， 。括4不限於馬、乳牛、狗、兔、禽類、、乡帛羊及類似物。 ^上註，本發明提供一種醫藥調配物，包括於任何合適投 藥途徑之醫藥上接受載劑中之式I化合物或其醫藥上可接受 鹽，其投藥途徑包括但不限於口服、直腸、局部、頻内、 腸外、肌肉内、皮内、靜脈内及經皮投藥。 85240 -24 - 1234457 任何特定化合物之治療有效劑量多 ^ 將自化合物至仆人 物，病患至病患而變化，及將依賴 而定。作為一般提案，自約(M至約5〇毫 ^ 迗途徑 士、 、 · 見/公斤之劑量脾1 4療效力，而更高劑量可能採用口服和/或噴霧投藥。較 向值之毒性考量會限制靜脈劑量至較 权 太/ \ 、 瓜值，如多至約10毫 克/么斤，全部重量基於活性基質重外 貝重彳异，包括採用鹽之例 子。典型地，自約0.5毫克/公斤至約5毫 ,χ, ^ ^ 克Α斤义劑量將採 用供靜脈或肌肉内投藥。自㈣毫克/公斤㈣5()毫克/ 之劑量將採用供口服投藥。 Α 實施方式 本發明更詳述於下非限制性實施例。 實施例 Α·材料與方法 士紫杉酚（1)獲自Yung Shin醫藥工業公司，台灣。甲醯基 喜樹驗（5)(示於圖υ自（2)製備如Bast〇w等人（i997_q 胸· CW 5:剛報導地進行。全部試劑和溶劑為試藥級 及在使用前由標準方法純化。lH NMR光譜獲自—⑽雙子 j-300分光計，使用TMS作為内標。化學位移㈧值）及耦合 吊數〇/值）分別給定為ppm*Hz。光學旋轉以jasc〇 WOO數孚型旋光計測定。管柱層析法在矽膠6〇(默克 1目）上進行，及薄層層析法（TLC)使用預塗布矽膠之鋁板 (Aldrich公司）進行。元素分析由大西洋微生物實驗室公司 進仃，N0rcross，喬治亞州。沁Cbz_胺基酸自合適胺基酸製 備’使用如述於Berger等人（1954)J义所c.心c. 76: 85240 -25- 1234457 5552之標準方法，使用氯甲酸苯甲酯代替矿以心沒-丙胺酸 (Sigma)。2’-0-Cbz-紫杉酚如述於 Guy 等人（ΐ996)67ζ· 5ζ·ο/. 3: 1021地合成。 7_〇-醯化2’-(9-Cbz_紫杉酚之一般程序。含2，_〇-Cbz-紫杉 酉分和二甲基胺基）吡啶（1 .〇當量）之無水二氯甲烷（5毫 升）落液在氮氣下以合適#-Cbz-胺基酸（5·〇當量）和二環己基 碳化二亞胺（DCC，5.0當量）在室溫下處理過夜。混合液以 二氯甲烷（5毫升）稀釋及過濾以除去尿素沉澱。溶劑在真空 中蒸發及生成之殘留物由矽膠管柱層析法純化，使用正己 烷-EtOAc溶劑系統（2: : ”，得到想要之2，_〇_Cbz_7_ Ο·醯基紫杉酚為單一產物。 2 -0-Cbz-7-(7V_cbz- /3 _丙胺醯基）_紫杉酚（6)。產量 ^’/。（以”：毫克广^^^紫杉酚開始广白色粉末， [« ]d-44.7°(c 0.76，CHC13) ； NMR(CDC13) ： 5 1.16 (3H, s)5 1.22 (3H, s)5 1.81 (3H5 s)5 2.00 (3H? s)5 2.06 (3H? s)? 2.46 (3H，s)，3·46 (2H，m)，3.96 (ih，d，《/= 7.0 Hz)，4·20 (1H，d， J - 8.5 Hz), 4.33 (1H5 d5 J = 8.5 Hz)? 4.95 (1H9 d5 J = 8.5

Hz)，5·11 (2H，m)5 5.17 (2H，m)，5·46 (1H，d，《7 = 2.5 Hz)， 5.64 (1H，dd，7.2, 9.8 Hz)，5.70 (1H，d，7.0 Hz)，5·77 (1H? t? 5.1 Hz)? 5.98 (1H5 d5 J = 9.0 Hz)? 6.26 (1H5 t, J = 9·3 Hz)，6.29 (1H，s)，6.94 (1H，d，/ = 9.0 Hz)，7.30-7.42 (帶，17H)，7.44-7.54 (3H，m)，7·62 (1H，m)，7·74 (2H，d，J = 8.5 Hz)5 8.13 (2H, d? / = 8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 1193 [m+i]+。全部數據與前報導文獻值一致。 85240 -26- 1234457 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz-4-胺基 丁醯基）-紫杉酚（7)。產量 97.2%(以69.1毫克2’-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]d-31.5°(c 0·46，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : 5 1.16 (3H，s)，1·21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，1.99 (3H，s)，2·09 (3H，s)， 2·45 (3H，s)，3.19-3.40 (2H，m)，3·94 (1H，d，《7 = 6.9 Hz)， 4.20 (1H，d，8.5 Hz)，4.33 (1H，d，8.5 Hz)，4·95 (1H， d, J = 8.5 Hz)5 5.08 (2H? s)5 5.17 (2H? m)? 5.45 (1H? d, J = 2.4 Hz)，5·57 (1H，dd，6.9，10·2 Hz)，5·71 (1H，d，/= 6.9 Hz)，5·73 (1H，t，J = 5.1 Hz)，5.98 (1H，dd，= 2.4, 9.0 Hz)， 6.24 (1H，s)，6.26 (1H，t，J = 9.3 Hz)，6·92 (1H，d，J = 9.0 Hz)，7.27-7.46 (帶，16H)，7.48-7.54 (3H，m)，7.62 (1H，m)， 7.73 (2H? d, J = 8.5 Hz), 8.13 (2H, d5 J = 8.5 Hz) ； ESI-MS m/z 1230 [M+Na]+。 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz_6-胺基己醯基）-紫杉酚（8)。產量 94.7%(以78·3毫克2f-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]D —44.0o(c 1.04，CHC13) ; !H NMR(CDC13) : (5 1.16 (3H, s)，1.21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，2.00 (3H，s)，2·13 (3H, s)， 2.45 (3H，s)，3.19 (2H，dd，6.3，12.9 Hz)，3·96 (1H，d，J =6.6 Hz)，4.19 (1H，d，8.5 Hz)，4.32 (1H，d，/= 8.5 Hz)， 4.96 (1H，d，J = 8·7 Hz)，5.08 (2H，s)，5.16 (2H，m)，5.45 (1H，d，= 2.4 Hz)，5.60 (1H，dd，= 7.2，10.5 Hz)，5.71 (1H，d，/= 6.9 Hz)，5.98 (1H，dd，3·0, 9·5 Hz)，6·26 (1H， t, J = 9.0 Hz)5 6.28 (1H, s), 6.95 (1H5 d, J = 9.3 Hz), 7.26-7.43 (帶，16H)，7.46-7.53 (3H，m)，7.61 (1H，m)，7·73 (2H， 85240 -27- 1234457 ά, J = 8.5 Ηζ)5 8.13 (2Η? d? J = 8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 1236 [M+l]+。 2’-0-Cbz-7-(7V-Cbz-4-甲基胺基苄醯基）-紫杉酚（9)。產量 89.1%(以70.4毫克2’-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]D -28.2°(c 0.99 ^ CHC13) ； lU NMR(CDC13) ： 5 1.19 (3H，s)，1.21 (3H，s)，1·95 (3H，s)，1_97 (3H，s)，2·04 (3H，s)， 2·48 (3H，s)，4.05 (1H，d，/ = 6.9 Hz)，4.24 (1H，d，J = 8.5 Hz)，4.37 (1H，d，J = 8.5 Hz)，4·42 (1H，d，/ = 6·0 Hz)，5.01 (1H，d，J = 8.4 Hz)，5.10-5.22 (6H，m)，5·48 (1H，d，J = 2.7 Hz)5 5.74-5.81 (2H, m)? 5.99 (1H? dd5 J = 2.7? 9.2 Hz), 6.27 (1H, t, J = 9.0 Hz), 6.41 (1H5 s), 6.97 (1H? ά, J = 9.3 Hz)? 7.29-7.42 (帶，19H)，7.46-7.54 (3H，m)，7.62 (1H，m)，7.74 (2H? d5 J = 8.5 Hz)? 7.89 (2H5 d5 J = 8.4 Hz)? 8.15 (2H, d? J =8.5 Hz) ; ESI-MS m/z 1277 [M+Na]+。 2’-0-Cbz_7-(7V-Cbz-4-(4-胺基苯基）-丁醯基）-紫杉酚（10)。 產量83.8%(以66·8毫克2f-0-Cbz-紫杉酚開始）；白色粉末， [a ]d-46.5°(c 0.40 ^ CHC13) ； lH NMR(CDC13) (5 1.17 (3H，s)，1·21 (3H，s)，1·81 (3H，s)，2.01 (3H，s)，2·13 (3H，s)， 2·45 (3H，s)，3.96 (1H，d，J = 6·9 Hz)，4·19 (1H，d，J = 8.5 Hz)? 4.33 (1H? d, J = 8.5 Hz)? 4.96 (1H? d, J = 8.1 Hz), 5.12-5.21 (4H? m)? 5.46 (1H5 d, J = 2.7 Hz)5 5.60 (1H? dd? J = 7.2? 10.5 Hz), 5.70 (1H5 d, J = 7.2 Hz), 5.98 (1H5 dd? J= 2.7, 9.2 Hz)，6·26 (1H，t，9.0 Hz)，6.29 (1H，s)，6.66 (1H，s)，6·94 (1H，d，9·3 Hz)，7·12 (2H，d，/= 8·7 Hz)，7.26-7.42 (帶， 85240 -28- 1234457 BH)，7.46-7.53 (3H，m)，7·61 (1H，m)，7.73 (2H，d，《7 = 8·5 Hz)，8·13 (2H，d，J = 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 1306 [M+Na]+。 除去芊氧基羰基（Cbz)保護基之一般程序。含類紫杉酚（6-1〇 ’如示於圖2)之甲醇溶液在氮氣下以50重量％之5%鈀/活 性碳（Degussa E101 NO/W型）處理及置於氫氣下（40 psi)。混 合液在帕爾裝置中振盪7小時，然後内容物經過濾除去觸媒 及在真空中蒸發至乾涸，得到想要之去保護化合物丨丨-丨5(如 示於圖2)。

7·〇_β-丙胺醯基紫杉酚（11)。產量81.2%(以47.2毫克（6)開 始）；白色膜，[α ]〇 -39.1。〇 0.34 ^ MeOH) ； lU NMR(CD3〇D) ： δ 1·10 (3Η，S)，1·16 (3Η，s)，1·78 (3Η，s)， 1·88 (3Η，s)，2.16 (3Η，s)，2.37 (3Η，s)，3.12-3.22 (2Η，m)， 3.90 (1H, d, J = 7.0 Hz), 4.20 (2H? dd, J = 7.0, 14.0 Hz), 4.73 (1H，d，/ = 6.0 Hz)，5.00 (1H，m)，5·64 (3H，m)，6·15 (1H，br t，= 6.2 Hz)，6.23 (1H，s)，7.28-7.68 (帶，11H)， 7.85 (2H，d，/ = 8.5 Hz)，8.10 (2H，d，= 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 925 [M+l]+。全部數據與前報導文獻值一致。 7-0-(4-胺基丁醯基）-紫杉酚（12)。產量92.7%(以59.1毫克 7 開始）；白色膜，[a ]D -29.7。〇 0.37，MeOH) ; 4 NMR(CD3OD): 5 1.11 (3H, s)，1.16 (3H，s)，1·78 (3H，s)， 1·87 (3H，s)，2·16 (3H，s)，2.37 (3H，s)，3_01 (2H，t，7.5 Hz)，3·90 (1H，d，J = 6.9 Hz)，4.20 (2H，br t，J = 8.7 Hz)， 4·75 (1H，d，J = 5.4 Hz)，5.00 (1H，d，J = 9.3 Hz)，5.59-5.66 (3H，m)，6.15 (1H，br t，/= 6.2 Hz)，6.21 (1H，s)，7.26-7.69 85240 -29- 1234457 (帶，11H)，7.85 (2H，d，《/ = 8·5 Ηζ)，8·10 (2H，d，J = 8·5 Hz) ; ESI，MS m/z 939 [M+l]+ 〇 7_〇-(6-胺基己醯基）-紫杉酚（13)。產量81.1%(以67.1毫克 8 開始）；白色膜，[a ]D -26.0°(c 0.53，MeOH) ; NMR(CD3OD): δ 1.11 (3H，s)5 1·16 (3H，s)，1·77 (3H，s)， 1·88 (3H，s)，2.14 (3H，s)，2·37 (3H，s)，2·92 (2H，m)，3.90 (1H，d，J = 6.9 Hz)，4.20 (2H，m)，4·75 (1H，d，J = 5.4 Hz)， 4.99 (1H，d，J = 9.0 Hz)，5.58 (1H，dd，《7 = 7.8，10.5 Hz)， 5.60-5.70 (2H，m)，6.15 (1H，br t，《7 = 6.2 Hz)，6.24 (1H，s)， 7.26-7.72 (帶，11H)，7·85 (2H，d，8.5 Hz)，8.10 (2H，d，J =8.5 Hz) ； FAB-MS m/z 968 [M+l]+ ° 7-0-(4-甲基胺基苄醯基）-紫杉酚（14)。產量96.7%(以58.1 毫克 9 開始）；白色膜，[a ]D —12.9。〇 0.38，MeOH) ; 4 NMR(CD3OD): δ 1·13 (3H，s)，1·15 (3H，S)，1·91 (9H，s)， 2·40 (3Η，s)，3·90 (1Η，d，J = 6·9 Ηζ)，4·18_4·30 (4Η，m)， 4.76 (1Η，d，/ = 5.7 Ηζ)，5.05 (1Η，m)，5.65 (1Η，d，J = 5.1 Hz)，5·70 (1H，d，/ = 7.2 Hz)，5.76 (1H，dd，J = 7.2，10.5 Hz)，6.16 (1H，br t，6·2 Hz)，6·35 (1H，s)，7.28-7.71 (帶， 13H)，7·85 (2H，d，/ = 8.5 Hz)，7.94 (2H，d，J = 8·5 Hz)， 8.12 (2H，d，8.5 Hz) ; ESI-MS m/z 1009 [M+Na]+。 7_〇-(4-(4-胺基苯基）-丁醯基）-紫杉酚（15)。產量81.3%(以 67.1 毫克 10開始）；白色膜，[α ]D 一45.3。卜 〇·ΐ5，MeOH); 巾 NMR(CD3〇D) ·· 5 1·11 (3H，s)，1·14 (3H，s)，1.77 (3H， s)，1.89 (3Η，s)，2·09 (3Η，s)，2·36 (3Η，s)，2.46 (2Η，t，J = 85240 -30- 1234457 5·7 Ηζ)，3·89 (1H，d，6·9 Hz)，4.19 (2H，brs)，4.75 (1H， d, J = 5.4 Hz), 4.97 (1H? d, J = 9.6 Hz), 5.56 (1H5 dd, J = 7.8，10·5 Hz)，5·63·5·66 (2H，m)，6.15 (1H，br t，/= 6.2 Hz)， 6_26 (1H，s)，6.67 (2H, d，J = 8.4 Hz)，6.93 (2H，d，J = 8.4

Hz)，7.28 (1H，m)，7.38-7.68 (帶，10H)，7.84 (2H，d，8·5 Hz)，8.10 (2H，d，/= 8.5 Hz) ; FAB-MS m/z 1038 [M+Na]+。 合成紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇)之一般程序。含類紫杉 酚（11-1 5)和7-甲醯基喜樹鹼（12當量）之無水苯（1〇毫升）溶液 在4埃为子師上迴流過夜。混合液經過濾、及在真空中蒸發， 得到粗紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇，如示於圖2)。產物由

Sephadex LH_20管柱層析法純化，以 CHCl3-MeOH(l : 1)為 離析液。共輛物16-20之元素分析數據經示於下表1。 共軛物16 :產量85_4°/。[以14.2毫克（0.015毫莫耳開 始];淡黃色不定形固體，[a ]D 一33.9。〇 0.18，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : δ 1·〇2 (3H，t，7.5 Ηζ)，1·18 (3H，s)，ι·25 (3H，s)，1·80 (3H，s)5 1.85 (3H，s)，2·19 (3H，s)，2·37 (3H，s)， 3·92 (1H，d，/ =6.6 Hz)，4.14和 4.29 (各 1H，d，J = 8.4 Hz)， 4.80 (1H，bi*s)，4.90 (1H，d，J = 9.3 Hz)，5·21 (1H，d，j = 16.5 Hz)，5.40 (2H，s)，5.58-5.70 (3H, m)，5.80 (1H，dd，/ = 8.9, 2.1 Hz)，6.19 (1H，t，9.0 Hz)，6.24 (lH，s)，7·27_7·86 (16H，m)，8.09 (2H，d，/= 7.2 Hz)，8·27 (1H，d，/= 8·4 Hz)， 8·45 (1H，d，J = 8.4 Hz)，9·32 (1H，s) ; FAB_MS m/z(相對強 度）1284 [M+l]+ (35)，1224 (15)，940 (51)，449 (77), 289 (98)，240 (100)。（C71H72N4018)理論值·· C，67.18; H，5.72。 85240 -31 - 1234457 實驗值·· C，67.12; H，5.69。 共軛物17 :產量60.7% [以27.0毫克（0.029毫莫耳）12開 始];淡黃色不定形固體，[a ]D -17.2。〇 0.47，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : (5 1·04 (3H，t，7·5 Hz)，1.16 (3H，s)，1.20 (3H，s)，1.81 (3H，s)，1.83 (3H，s)，2.04 (3H，s)，2·38 (3H，s)， 3.81-3.93 (4H，m)，4.18和 4.31 (各 1H，d，J = 8.4 Hz)，4.81 (1H，dd，6.2, 2.7 Hz)，4·93 (1H，d，/= 8.7 Hz)，5.30 (1H， d, J = 16.5 Hz)5 5.50 (2H5 s)5 5.58 ( 1H, dd, J = 10.2, 6.9 Hz)，5.67 (1H，d，《/= 6.9 Hz)，5.74 (1H，d，16.5 Hz)，5.80 (1H，dd，/=8.9, 2.4 Hz)，6.17 (1H，d，《/= 9.0 Hz)，6.23 (1H， s)，7.14 (1H，d，9.3 Hz)，7.30-7.87 (15H，m)，8·10 (2H，d， J = 7.2 Hz), 8.28 (1H5 d, J = 8.4 Hz)? 8.50 (1H5 d, J = 8.4 Hz)， 9.32 (1H， s) ； ESI-MS m/z 1320 [M+Na]+ 。 (C72H74N4018)理論值：C，67.38; H，5·81。實驗值：C， 67.30; H，5.79 ° 共輛物18 :產量69.3% [以27.8毫克（0.029毫莫耳）13開 始];淡黃色不定形固體，[a ]D -41.3。〇 0.15，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) ·· 5 1.03 (3H? t, J = 7.5 Hz)? 1.15 (3H? s)? 1.25 (3H，s)，1.57 (3H，s)，1·76 (3H，s)，2.10 (3H，s)，2·28 (3H，s)， 3·80(lH，d，JΓ=6·6Hz)，4·13和4.27(各lH，d，t/=8·4Hz)， 4.79 (1H5 d, J = 2.7 Hz)? 4.85 (1H5 d, J = 8.1 Hz)5 5.31 (1H? d? J = 16.5 Hz), 5.46 (1H? dd? J = 10.2, 7.2 Hz)? 5.55 (2H? s)，5.61 (1H，d，J = 6.9 Hz)，5.74 (2H，m)，6.07 (1H，t，J = 9·0 Hz)，6·12 (1H，s)，7·18 (1H，d，《7 = 9.3 Hz)，7.32-7.88 85240 -32- 1234457 (15H，m)，8·08 (2H，d，7.2 Ηζ)，8·30 (1H，d，</= 8.4 Hz)， 8·52 (1H，d，/ = 8·4 Hz)，9·3〇 (1H，s) ; ESI-MS m/z 1348 [M+Na]+。（C74H78N4018)理論值·· c，67.77; H，5.99。實驗 值：C，67.69; H，5.98 〇 共輛物19 :產量64.3% [以28.2毫克（〇_〇29毫莫耳）14開 始];淡黃色不定形固體，[a ]D -8.0。〇 〇·4〇，CHC13) ; "Η NMR(CDC13) : 5 1.02 (3Η，t，/= 7·5 Ηζ)，1·19 (3Η，s)，1·25 (3Η，s)，1·95 (3Η，s)，2.17 (3Η，s)，2·40 (3Η，s)，2.63 (3Η，s)， 4·00 (1Η，d，/ = 6.3 Ηζ)，4.23和 4.33 (各 1Η，d，/ = 8.1 Ηζ)， 4.82 (1Η，d，2.7 Ηζ)，4.98 (1Η，d，《/二 8.7 Ηζ)，5·14 (2Η， brs)，5·28 (1H，d，《/= 16.2 Hz)，5.52 (2H，s)，5.67-5.76 (2H， m)，5.81 (1H，dd，J = 8.7, 2-1 Hz)，6.19 (1H，t，/ = 9.0 Hz)， 6.37 (1H，s)，7.21-7.96 (20H，m)，8·12 (2H，d，/ = 7·2 Hz)， 8.27 (1H，d，J = 8.4 Hz)，8.42 (1H，d，= 8.4 Hz)，9·39 (1H， s) ; ESI-MS m/z 1396 [M+Na]+。（C76H74N4018)理論值：C， 68.56; H，5.60。實驗值：C，68.40; H，5.56。 共軛物20 :產量55.1% [以23·3毫克（〇·023毫莫耳）15開 始];淡黃色不定形固體，[a ]D -11·5°0 〇·27，CHC13) ; 4 NMR(CDC13) : (5 1·〇6 (3H，t，7.5 Hz)，1.18 (3H，s)，1.25 (3H，s)，1.84 (3H，s)，1·85 (3H，s)，2·17 (3H，s)，2·39 (3H，s), 3·94(lH，d，¾/=6·6Hz)，4.20和4·33(各lH，d，t/=8·4Hz)， 4·81 (1H，brs)，4.96 (1H，d，J 二 9.3 Hz)，5.33 (1H，d，J 二 16.5 Hz)，5.58 (1H，m)，5.70 (1H，d，/= 5.7 Hz)，5.73 (2H， s)，5.81 (1H，d，J = 5.7 Hz)，6.19 (1H，t，/ = 9.0 Hz)，6.26 85240 -33- 1234457 (1H，s)，7·08 (1H，d，/ = 9·3 Hz)，7.27-7.80 (18H，m)，7·88 (1H，t，/ = 7·2 Hz)，8.12 (2H，d，J = 7·2 Hz)，8.33 (1H，d，/ = 8_4 Ηζ)，.8·56 (1H，d，J = 8.4 Hz)，9.55 (1H，s) ; ESI-MS m/z 1368 [M+Na]+。（C78H78N4018)理論值：68.91; H，5.78。 實驗值：C, 68_86; H，5.77。 表1.共輛物16-20之元素分析數據 化合物 理論值 實驗信 分子式 C Η C Η 16 C71H72N4O18 67.18 5.72 67.12 5.69 17 C72H74N4O18 67.38 5.81 67.30 5.79 18 C74H78N4O 1 8 67.77 5.99 67.69 5.98 19 C76H74N4O18 68.56 5.60 68.40 5.56 20 C78H78N4O18 68.91 5.78 68.86 5.77 人腫瘤細胞複製分析。化合物經測試作為細胞生長抑制 劑’對抗有限組之固體腫瘤株，包括KB (類表皮瘤，CL 17) 和喜樹鹼抗性之亞株稱為KB-CPT ; HCT-8(迴盲腸腺瘤， CCL 244) ; MCF-7(乳腺瘤，HTB 22) ; PC-3(前列腺瘤， CRL 1435); 1A9(卵巢瘤）及紫杉酚抗性之亞株稱為具突變 β-微管素之PTX10。藥物抗性之細胞株為γ· c. Cheng博士 (耶魯大學’新天堂，康乃狄克州）及p· Giannakakou博士 (NIH，Bethesda，馬里蘭州）之慷慨禮物。細胞株經調適生 長於RPMI_1640培養基，補充以25 mM希皮士、2% NaHC03，10%體積比胎牛血清及1〇〇微克/毫升卡那黴素。 培養物維持在5% C02氣壓與37 °C下。Rubinstein等人 85240 -34- 1234457

(1990)J. A/W/. c㈣cer/似ί· 82: 1113所述之磺酸基若丹明B 极滴盤分析法經用以評估作為細胞複製抑制劑之化合物。 ^〇5()值，相對於控制組在3天連續暴露後，抑制細胞株複製 50%之化合物濃度，使用Prizm(圖墊軟體，聖地牙哥，加 州）自數據碉適之劑量反應圖内插。 DNA拓樸異構酶I活性分析。化合物經測試作為酵素催化 質體DNA鬆弛之抑制劑。反應含有〇·5微克pBR322 DNA和 0·5單位人DNA拓樸異構酶i(T〇p〇Gen，哥儉比亞，俄亥俄 州）’ 50 μΜ之化合物及先前Krishnan等人（2000)技靡桌勒謗 妒15:255所述之緩衝劑成份。在37它下15分鐘後，反應由 加入蛋白酶Κ(0·1毫克/毫升）和1%重量體積比sds中止。在 50 C下1小時後，DNA在1%重量體積比瓊脂糖膠上解析， 其膠於標準ΤΒΕ緩衝液中含有〇·5毫克/毫升溴化乙錠，及在 UV光下使用拍立得667膠捲照相。 Β.結果與討論 此研先之目的在於探討是否對藥物抗性細胞展現多抗腫 瘤活性4改進活性之抗腫瘤劑可經紫杉酚（丨）和喜樹鹼（2)衍 生物間之共輛製備，及其抗腫瘤作用如何被共輛所影響。 吾等在此報導合成與評估紫杉酚_喜樹鹼共輛物作為細胞毒 性劑及DNA拓樸I抑制劑。 連結位置之選擇基於紫杉烷核中C-7酯基之已知容忍性 (Nicolaou等人（1994)hg^· CTz㈣· /价/n 心《/· 1〇6: 15， Guy等人（1996)C7z㈣· 5/0/· 3: 1021)及最近7-取代喜樹鹼類 似物之SAR研究（Wang等人（1994)出⑽α从以^謂.2·· 85240 -35- 1234457 1397, Wang 等人（1990)J· CTzem· 33: 2660)。然而，紫 杉驗支鏈之C-2’羥基常為最具反應性及選擇性c_7醯基化僅 可在C-2’經保護時達成。Nic〇iaou等人（丨的叫叹謂以㈣. /W/· 以g/· 106: 15之程序經用於製備C-7胺基官能化紫 杉紛（11-15)。因此，2，-羧基苄基（Cbz)-紫杉酚以N-Cbz-胺 基酸在DCC和DMAP存在下在CH2C12中處理，以高產量得到 6-10。其後由氫化反應還原除去cbz基，得到C-7胺基官能 化紫杉酚（11-15)。五種紫杉酚-喜樹鹼共軛物（16_2〇)由11-15與7·甲基吾树驗（5)在冬中共輛而獲得，如示於圖式1。 化合物1.6-20在矽膠上不安定（母化合物經再生），但可由 Sephadex LH-20管柱層析法純化。全部共軛物（16-2〇)在其 4 NMR光譜中顯示5 9.30-.55之特性亞胺質子訊號。 五種共軛物（16-20)經測試細胞毒性對抗一組人腫瘤細胞 株（HTCL) ’包括紫杉驗抗性和喜樹驗抗性衍生物，如述於

Rubinstein 等人（1990)J· 82: 1113。此結果 示於表2，而紫杉酚（1)和喜樹鹼（2)之值經給定供比較。 化合物 細胞株/ED50 KB KB-CPT 紫杉紛 -12.1 -12.2 喜樹驗 -10.8 -7.5 16 <-11.0 -11.1 (67) PTX10

ED 丨50 10.2 -9.4 -9.3 -7.1 -7.1 -8.9 (76) 85240 -36- 1234457 17 -10.4 -9.7 -10.2 -10.5 -10.0 -7 Λ -7.1 -9.0 18 -9.3 -8.1 -10.0 -10.5 -10.6 - 7.5 -7.5 -9.0 19 -8.5 -8.9 -8.1 -8.4 -8.1 -6.0 -7.5 -7.6 20 -10.8 -8.1 -8.3 -7.1 -7.4 >-4.0 >-5.0 >-7.1 (48) (45) 3在腫瘤細胞株複製之影響使用標準方法測定，如述於 Krishnan等人（2000)犮邊桌勿設# 15:255。細胞株/ED5〇4 log1GM(複製數變異不超過5%)。若在最高試驗濃度下抑制 <50%或在最低下>50%，所見之百分率抑制見於括弧值。b 平均值取自HTCL數據及不包括藥物抗性變異物之值。 共軛物對抗MCF-7(乳癌）和HCT-8(結腸腺瘤）細胞之活性 側析圖經分別示於圖3，A圖與B圖。全部共軛物相較於2(喜 樹驗）下為腫瘤細胞複製之有效抑制劑，且具改進之活性， 及亦顯示較2對抗喜樹鹼抗性KB-CPT細胞之更佳活性。顯 著地’如示於圖3 ’ 16-18較1(紫杉驗）和2更有效對抗HCT-8 細胞複製。紫杉酚和喜樹鹼部份間連結基之結構活性相關 性（SAR)考量顯示其中紫杉酚和喜樹鹼由脂族胺基酸連結之 16-1 8較其中紫杉酚和喜樹鹼由芳族胺基酸連結之19和20更 具細胞毒性活性。 共輛物16-20亦以如述於Krishnan等人（2000)疣痛襄教謗 夺15:255之方式測試為人DNA拓樸I活性之體内抑制劑（圖 4)。全部共軛物在此分析中皆較2顯著更不有效。化合物 16、18和19在5(^下僅顯示邊際活性，而17和2〇無活性。 無共軛物抑制DNA鬆弛。 85240 -37- 1234457 基於對抗藥物抗性細胞株複製之活性，吾人可結論出共 輛物簡單作為「弱紫杉;^」，但活性譜，特別對抗 和HCT_8(圖3)，與此結論不一致。後者結果指出與2比 較下，16-1 8之細胞毒性側析圖不明顯。此外，因為&dna 拓樸I抑制分析之結果顯示不像2，共軛物在體内不抑制 DNA拓樸I，所以可能經共軛達成一種新穎之作用機制。 幻面τ»兄明本發明，及不思在將其限制。本發明由以下申 請專利範圍定義，而申請專利範圍之相當物包括在内。 [M_式簡單說明1 圖1說明與本發明有關之不同先質化合物之結構； 圖2說明製備本發明化合物之合成途徑之具體實施例； 圖3說明對抗MCF-7(A圖）及HCT-8細胞複製（B圖）之化合 物活性側析圖；及 圖4說明展現本發明化合物作為人DNA拓樸異構酶I抑制 劑之含溴化乙錠瓊脂糖膠。 85240 38-

Claims (1)

1234嫌&5i 12170號專利申請案 一—— 中文申請專利範圍替換本(93年8月）j、t、、‘本年月曰 拾、申請專利範圍： 一〜迦心9 i 一種根據式I之化合物： ⑴ C’-L-T 其中： C’為式II之喜樹驗基：

Rl選自由Η、烷基、醛、羰基、烷氧基、烷基芳 基、羥基烷基、函烷基、胺基烷基、二烷基胺基、二烷 基胺基烷基、環胺基烷基、芳基、芳氧基、c_烯糖、硝 基、氰基及0-醣苷基組成之群； R2、R3、R4和R5各獨立選自由H、胺基、羥基、烷 基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、胺基烷基、二（烷基） 胺基、環胺基烷基、月安基烷氧基、芳基、芳氧基、。烯 糖、氰基、甲二氧基、甲醯基、硝基、由基、聶 、 酸胺基、月井基、、經胺基-氮原子鍵結至A環之2〇:標^胺 基酸之任一個、SR8、NR8R8或〜醣菩基組成之群，·或仏 和心一起形成5或6員芳族或二氧六圜環，·及其中&和 R3、R3和R4或R4和R5在一起； 其限制條件係R!、R2、R3 R4和R5之一為與[之共 85240-930809.doc 1234457 R6為Η、_基、烷基、烷氧基、烷基芳基、羥基烷 基或卣烷基； L為烷基、烷基芳基、羥基烷基或芳基； Rs獨互選自由η、烷基、烷基芳基、羥基烷基、胺 基燒基、醯基或芳基組成之群； L為連結部份； Τ為式III之類紫杉紛基：

其中 Ru選自由Η、烷基、烷氧基、胺基烷基和醯基組成 之群； &2和Ru獨立選自由Η、烷基、芳基、燒氧基、烷 基芳基、每基燒基、！|燒基、胺基燒基、二燒基胺基、 一烷基胺基烷基、環胺基烷基、芳氧基、硝基、氰基和 鹵基組成之群； 其中在所有基團中烷基部份代表（^至匕烷基，芳基部份 代表C6SClG芳基，且環烷基部份代表c3至c8環烷基；或 其醫藥上可接受鹽。 2. 如申凊專利範圍第1項之化合物，其中Ri為甲醯基。 3. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中116為鹵素。 85240-930809.doc -2- 1234457 4·如申請專利範圍第1項之化合物，其中Ru為醯基及R12和 各獨立為苯基。 5·如申請專利範圍第1項之化合物，其中Rn為Η及R12為第 —丁氧基和Rl3為苯基。 6 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中L為該紫杉酚基位 置7上及式iv該喜樹驗基I上之連結部份： -X-R2i-A- (iv) 其中

X為拉電子基；及 R2i選自由Ci-C6伸燒基和C6_C1()芳基（^-€!6伸燒基組 成之群； A選自由胺基和亞胺基組成之群。 7·如申請專利範圍第丨項之化合物，其中該連結部份包括 酯與亞胺連結。 8·如申請專利範圍第i項之化合物’其中該連結部份包括 式V :

-(V) ’ 〇 · • . ; . C^—R^C N—一 R之厂_，一 〇 〜〜了 其中 R21選自由CVC6伸垸基和 成之群； R22選自由15和垸基組成之君羊 9 _如申請專利範圍第1項之化合物， 其中該連結部份包括 85240-930809.doc 1234457 脂族胺基酸。 1 0 ·如申請專利範圍第1項之化合物，其中該連結部份包括 芳族胺基酸。 11.如申請專利範圍第1項之化合物，其中L為式-La-Lb-之連 結部份，其中有或無Lb及La和Lb各獨立選自由下組成 群： ,0 - ； -(CHjjn- · -. (CH2)a-*-C-

85240-930809.doc -4 1234457 其中： η為0至6，a為0至3及b為0至3 ;及R25選自由CVC6伸 烷基、c2-c4晞基和C6-C1G伸芳基組成之群。 12.如申請專利範圍第1項具下結構之化合物

85240-930809.doc 1234457

1 3 •—種具有抗細胞分裂與抗腫瘤活性之醫藥調配物，其包 括如申請專利範圍第1項之化合物於醫藥上可接受载 劑。 •如申請專利範園第13項之醫藥調配物，其中該載劑為水 性載劑。 • 種用於治療癌症之醫藥組合物，其包括治療有效量之 如申請專利範圍第1項之化合物。 16.如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症選自 由小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤、白血病、食道癌、胃 癌、結腸癌、乳癌、印巢癌、中樞神經系統癌、肝癌及 前列腺癌組成之群。 17·如申請專利範園第15項之醫藥組合物，丨中該癌症為乳 85240-930809.doc 1234457 癌。 18·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症為卵 果癌。 19·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症為前 列腺癌。 20·如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對喜 樹鹼具抗性。 •如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對紫 杉酚具抗性。 22. 如申請專利範圍第15項之醫藥組合物，其中該癌症對喜 樹驗和紫杉酚皆具抗性。 23. 一種用於謗導細胞分化之醫藥組合物，其包括分化有效 量之如申請專利範圍第1項之化合物。 24· —種用於抑制細胞有絲分裂之醫藥組合物，其包括有絲 分裂抑制量之如申請專利範圍第1項之化合物。 25. -種於體外謗導細胞分化之方法’該方法包括將癌細胞 與分化有效量之如申請專利範園第丨項之化合物於體外 接觸。 26. —種於體外抑制細胞有絲分裂之方法，該方法包括將細 胞與有絲分裂抑制量之如申請專利範圍第丨項之化合物 在體外接觸。 85240-930809.doc