TWI224286B - Transformation method of digital images - Google Patents
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Description
1224286 五、發明說明（1) 發明背景 本發明係有關於組織學之領域。 就目前的作法，製備光學及電子穿 二2機組織樣本及其他材料時，樣本通‘經：鏡 化干處理，這些處理會產生一個塊狀 連串的 狀物中。之後，將此塊狀物切片取得樣本樣^包埋在此塊 質)：薄切片，並將薄切片置於坡埋: 後，包埋物質可能以化學方法移去，，並且組寺物上。而 不同種類的有色染料或螢光染料或免化：：將染以 (_·. hybrfd；zat 5 ^ 在傳統的組織病理學上，應用在臨床 n處理。 上之最常見的亮野（brightfield) 織切片 ?-m〇Xylin)及曙紅（eosin)⑽"的=木= 从使核酸及其他所謂嗜鹼性物質在組織切片中匕方 ，白質及其他嗜酸性或嗜曙紅性組織成分呈粉==二 =法：世界通用，為一種檢查所有組織成分的二性= 法。在某些情況下，會再用特殊染料加以處理，=二 染料與特定的組織元素具親和性，例 ^寺殊 導方法，故可使這些特定組織元素在染色 清楚呈現。 』、、且纖切片中更 =(祕c )染色方法已介紹過，# 以浸泡法Γ。而後，從穿透二 法適用的塊狀物上，切下切片，或者以塊狀面（bi face)或表面顯像（surface imaging)顯微鏡法使塊
第4頁 IJ24286 五、發明說明（2) 狀物本身的切面呈現影像。在表面顯像顯微鏡法中，包括 已實施於美國專利第4,960,330號的方法，一樣本由結合 或非結合性螢光染料整體染色後，繼而被浸透及包埋在一 種質之中，通常是塑膠聚合物，此樣本經不透明化或其 他處理’不使塊狀物中超過幾微米深之處的組織顯出影 像’這形成一個薄的虛切面（virtual section )，與傳 統上用玻片裱製的組織切片極為相似。 、塊狀面顯微鏡法優於標準亮野顯微鏡法之處，在於塊 狀2顯微鏡法，可產生高品質的生物組織及其他物質之顯 微〜而不需製造組織玻片。免除此需求使組織病理學 之手’全自動’得以降低製造附加切片所增加之成本，因 而可從一個樣本中搜得更大量的資料。 在塊狀面顯微鏡法中’從塊狀面上補捉到未經變更的 數位虛切面是暗野影像，其來自於螢光染色樣本所發射出 的顏色。此樣本與黑色背景產生對比，而黑色背景為滲透 =f埋樣本的不透明聚合物。相對的，在大多數外科病理 ^驗室’及其他與醫學相關之以顯微鏡法為依據的診斷設 f上’其所使用傳統的穿透式光學顯微鏡法，是產生亮野 影像’因為組織與其他物質的薄切片以標準非螢光染料染 ^ ’而後用白光或近白光源照明，導致背景比組織的影像 党’並非較暗。 為了使塊狀面顯微鏡法產生的影像更有利於臨床診斷 、他目的’較佳是轉換從塊狀面補捉到的原始暗野影 像’並將之顯示成較熟悉的亮野顯微鏡法所產生的影像。
1224286 五 、發明説明（3) 發明楙述 ，般而言’本發明包括-種用螢光染料將樣 方法；一種產生螢光染色樣本的暗野影像之方法丨木色的 種將〆種或多種暗野染料染色所產生的樣本，’二= 種戒多種亮野染料染色所產生的樣本影像，以用 腦螢幕上檢驗之方法。此方法包括應用數位查閱夺]从 電腦化方法，使暗野數據轉換成亮野形式，二及2 =二3 轉換過的資訊顯示出的方法。較佳地，顯像工具e 一將忒 面的顯微鏡，以及轉換影像的工具是數位電腦。 鬼狀 因此’本發明的一種形態係以一種影像 色，此方法包括：⑷以-螢光染料將樣本染色总 光染料染色的樣本產生一第一影像· （b)、、里螢 染料染色的樣本所生丄f其相似於以非營光 在較佳具體實施例中，蔣筮 ^ ^ 像包括將-查閱表應用-影像轉換成為第二影 施例中，變更勺= 〜像上面。在較佳的具體實 的顏色範圍，以楔 ：：t成調“-影像或第二影像 樣本可用—種：非螢先染料染色的樣本之顏色範圍。 生物樣本。 或—種以上的染料染色，較佳的樣本是 to ^ m ^ ^ ^ ^ : (b)妹第f第—螢光染料將樣本染色； 、-第-染料染色的樣本產生第一影像，經第二 1 第6頁 五、發明說明（4) 染料染色的樣本產生第二影像；以及 “）使用數位處理器將第一影像及第二影像 第三影像，八相似於以蘇木素及曙紅染色的樣 、成 影像。 4所生成的 本發明亦以一種影γ复座士、、上$ 裡〜像生成法為特徵，此方 U )用一螢光染料將樣本染色； 匕括·· (b) ‘此染料染色的樣本產生第一 染色的樣本產生第二影像；以及 ％此染料 (C )使用數位處理器將第一影像及第二影 第二影像，其相似於以蘇木素及曙紅象轉換成 影像。 像本所生成的 ，發明也以一種影像生成法為特徵， U)用多種螢光染料將樣本染色； 女包括： 及⑷經其中一種染料染色的樣本產生第—影像；以 用数位處理器將第 其 相似於非螢光染料染色的樣本所生成之：像弟 在另一形態中，本發明亦以一 此方法包括： 種如像生成法為特徵， (a)用多種螢光染料將樣本染色； (b )產生第一影像，其相似於— 樣本所生成之影像；以及 # *先木料染色的 (c )用數位處理器將第一影像轉換办 相似於非螢光毕料汰 —衫像，复 忠木杆染色的樣本所生成之影像。 > 具
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較佳地，本發明的第一及第二影像，是由使用含塊狀 面顯U鏡的裝置而產生。使用在本發明的染料可以包括變 色染料（matachromatic dye)(例如，吖啶橙（acridine °range) ) 〇 結合性染料” （con jugated dye )係指能與組織元素 有特定性的分子結合的染料。典型結合性染料，包括，但 並不限於螢光接合抗體（fluorescently — c〇Upled ant ibodies )及螢光性DNA探針。 ”非結合性染料’’ （unconjugated dye)是指本來就具 螢光性之染料。 ’〃 ’’浸透n (infiltration)是指用一種或一系列的液體 處理組織，此類液體穿透整個組織達分子層面，而後轉換 成固體以使樣本變硬。 、 ’’包埋” （embedding或embedment )是指將浸透的組織 置於一個模型中，並以一種物質（通常與滲透組織所用之 物質相同）包圍之，而後此種物質硬化而形成一個包裏住 的塊狀物。因此，包埋物質之作用為提供穩固支持並^ 切片方法順利。 π切片’’ （sectioning )是指由塊狀物切得薄片，之 後，或許將薄片裱製在玻面或其他支持物上。 ”染色” （staining )是指用有色或螢光物質處理材 料’此有色或瑩光物質在分子層次上可與材料結合。 ”勞光” （fluorescence)或”暗野” （darkfield)汰 色，是藉由非結合性染料（即受適當波長之光刺激時可1
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=螢光之染料），ι结合性染料（即連結於樣本且直 例—包‘接Γ在螢光原上之分子）4理。結合性染料的實施 不限於：（1)連結於抗原的初級抗體及包 =先原連接於初級抗體之次級抗體；以&⑴）具有營 呈僮且與之共價鍵結之分子，螢光染色形成有黑色背景的 ^ *標準”或”亮野"染色通常藉由非營光染料處理並 2有明⑨或白色背景的影像。應、了解的是，相同的染料 可用於螢光及標準顯微鏡法。 、， 變色π染料構成一套組織化學的染料，豆中有呼多染 ，是螢光性的。如同大多數的螢光原，這些化合物吸收特 疋波長的光並且再放出波長較長之光。變色染料的光譜性 I強烈受到染料和標的分子的親近度所影響，因此其放射 出的波長會產生變化，故與某些類型的物質結合時，這些 染料會改變顏色，在某些情況下，變色染料可能僅在染料 與標的物結合時才發射出光，否則是無法看見的。一種典 型的變色染料是吖啶橙，其他的變色染料為熟悉於此技藝 者所知，且包括，但並不限於列在Conn，s Bi〇1〇gical
Stains，Williams & Wilkens 9th ED， 1 997 中的染料（此 處納入為參考文獻）’並可從MolecularProbes公司 (Eugene, OR )獲得。Molecular Probes公司之大多數的 染料是公告的美國專利之標的，這些染料在此處納入為參 考文獻。Molecular Probes的變色染料有助於標示蛋白 質，這些染料分為以下三類：苯並噁二唑 (benzoxadiazole )衍生物、萘(napthalene )衍生物及
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比
Pyrene )衍生物。 藉由這個方法，生物組織及其他 可猎塊狀面顯微鏡法有效地產生 頁 身料或許 熟悉的亮野影像形式。 ”、、員不成最有用及最 -裏ΐ :特色與優點可由下列較佳實施例之敘过、斑申 #專利乾圍中而變得更為明顯。 敘述與申 附件之簡單說明 一二件Ϊ本發明方法之計劃說日月，包括應用查閱表於第 〜以生第一影像，進而產生變更過的顏色。、 發明詳述 我們已經發現一個用一種或多種暗野染料使樣本（例 如組織樣本顯像，以及將樣本原像轉換成為第二影像的 方法，第二影像是相似於一種或多種亮野染料染色的樣本 所生成的影像。將第一影像轉換成為第二影像的方法涉及 應用查閱表於第一影像中。 查閱表 將第一影像轉換成所想要的第二影像，一般是使用稱 作查閱表的轉換值。查閱表是由一張描述一對/轉換的色 值關係所組成，並且通常是根據使用者電腦内顯像系統所 設的標準。轉換數位影像的方法包括一般的方法，例如， 將數學公式應用於每個資料元素的轉移功能。實例包括，
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影像顏色轉化之轉換，此轉換可能是從每個次 一個常數值。 1固貝料元素減去 此外，在影像中的每個資料元素，可根 的計算結果來作改變，此計算結果是基於影像模 :白 特點之分析。例如，在一個影像中合計某一二1，其他 _ ^域中每個齡 據元素的值，並且這個總計值用來決定此區所顯示的♦ | 色。涉及此種高階計算的方法來模擬顏色，在明$ 作•’估算染料n ( computed stains )。 冉
一般而言，查閱表，例如RGB (紅色、綠色及藍色） 查閱表’是應用在暗野影像拥每個波段，（例如紅波段、 綠波段等）。在將暗野影像轉換成為亮野影像的過程中， 為了確定亮野影像的對應值，每個原暗野樣本值（例如每 個映像點（P i xe 1 ))作成參數值附註於查閱表。將每個波 段所獲得的顏色結合起來就產生RGB亮野影像。色彩定位 (color mapping)法說明於，例如：J.C. Russ (1995) 影像處理操作手冊，' 第二版，CRC press，Ann Arbor， MI， 此處納入為參考文獻。
間轉換（Additive colorspace conversion) 在一實例中，RGB色表是由每一個可能的暗野值細目 製成。例如，若來源（也就是，暗野影像）的範圍從〇到 225 (其中〇為黑色，255為白色），則可製成具256個細目 的表’在表中的每個細目可填入一個由下所述方法所得之 色彩。 Η =標的色的色彩
第11頁 1224286 五、發明說明（9) S =標的色的飽和度 B =標的色的亮度*I/max-sample-value(例如，8位元 = 255) 其中，I是目前計算出的查閱表值之參數，範圍從〇到 最大樣本值（max-sample-value)(例如，25 5 )，所得 之HSB值被轉換成RGB色彩空間，並且插入在查閱表中位置 I部分。 產生的結果是，每一個查閱表細目，是標的亮野影像 色彩的亮度範圍，在表中的色彩是從黑色開始排起，黑色 為未經變更的標的像色彩，進而提昇色彩亮度一直到最後 一個細目。 例如’若標的色彩是原紅色，而後查閱表應從黑色開 始’從暗紅逐漸增加至亮紅，一直到最後一個細目。則最 後一個細目應為原紅。 對每一組波段來源而言，將由查閱表獲得的多個rgb 色彩相加（例如，紅對紅，綠對綠，藍對藍），可取得一 個RGB色彩。色彩值是限定的所以不會超過最大樣本值 (例如，8位兀對255 )。而後，一個加亮值可加在每個 RGB值上，這個值由移去原始暗野影像之暗度而得，且將 之轉換如下：
，大樣本值一（波段來源1，波段來源2…）之最大值。 敢大樣本值減去最大來源樣本值可得一個暗度，此暗 度加在新的RGB值的每一個成分上可加亮色彩。產生的結 1224286 五、發明說明（ίο) 減色—空間轉換法（Subtractive c〇 1 or space conversion) 在第二種轉換暗野影像成為相似的亮野影像的方法 中，RGB色彩查閱表值可由上述之法製得，除了在表中的 每個細目填入一個由下述方法所得之色彩之外： H=標的色的色度 S二標的色的飽和度*I/max-sample-value(例如，8位元 = 255 ) B=標的色的亮度
所產生的HSB色彩，可轉換成RGB色彩空間，並插於查 閱表位置I之部分。 所產生的結果是，每一個查閱表細目，是標的亮野影 像色彩的飽和度範圍。在表中的色彩是從白色開始排起， 白色為未經變更的標的像色彩，進而提昇色彩飽和度一直 到最後一個細目。 例如，若標的色彩是原紅色，查閱表應由白色開始， 從淡紅色（粉紅色）開始增加成飽和度高的紅色直到最後 一個細目，原紅色。
因此，用前述的方法，每個波段來源可轉換成一個 RGB色彩。這些色彩以下述之法混合。 RGB色彩可轉換成CMY色彩（藍綠色、洋紅色及黃色
)。CMY 是減色空間（subtractive color space )，CMY 色彩可加成（例如，每一個波段來源的藍綠色值相加得到 一個藍綠色，，每一個波段來源的洋紅色值相加得到一個
第13頁 1224286 五、發明說明（11) 洋紅色值等）如此處所述’所想要的是這些色值以 的最大值為限（也就是，最大樣本值），合計之後 之CMY色彩再轉換成RGB色彩空間。 口 在轉換用ργ啶橙染色的暗野影像成為用h&e毕^ 野之情況下’色彩由黑色至標的色（在加色空間情 或由白色至標的色（在滅色空間之情況下）之增二 的。熟悉此技藝者將得知其他的查閱表，包括非線 甚至不連續的查閱表在本發明中都是有效的。^ 用暗野染料染f 可允許 ，所得 L的亮 況下） 是線性 性的或 使染 腦化生成 光染料（ 不同的組 可產生一 換用一種 上亮野染料 影像的方法 相似於*一 在一 染色，其 染料與組 不同，用 菌體的存 準方法） 真菌體的 。單一的 色。在此 染料染色 野染料染 包含真菌 與真菌體 較高的親 色的樣本 亮野影像 不同的顏 或混合染 ，是用混 即一種變色染料）染 織結構結合 種以上的顏 或多種暗野 種或多種亮 實施例中， 中一種染料 織的成分有 這些染料染 在。轉換成 ’原始影像 亮野影像。 料（例如，H&E )的 合的螢光原染料或身 色。混合的螢光染米 螢光染料應用在一伯 所敘述的影像轉換沒 的樣本所生成的影谓 色的樣本所生成的景 體的樣本以混合的蜜 有較南的親和力，而 和力。真菌體與組鐵 所產生的暗野影像可 k (使用如同在此敛 色特徵被轉換成組織 良本電 一的螢 分別與 樣本時 ，可轉 ’使其 像。 光染料 另一種 的顏色 顯出真 述的標 中含有 1224286
(grayScau、二it '者分配T同的灰色範圍強度值 原始暗野影像中:有Υ:1:)給予不同的亮野色彩於 1*〜像中，3有真囷體且已染上單一、單色的 :樣本所產生的暗野影像’經轉換後產生多色的亮野： :。：如’若真菌體比組織和單色的染料有較強之親;： C::同的強度可用來產生一組亮染的樣本（即真菌體 、，且暗杂的樣本（即組織）之亮野色彩。其他不同 的性貝，例如大小，也可用電腦化來分配亮野色彩。 在一單一 中編碼多檨牵斜 一個樣本可用多種染料染色，而只有一種或一小組的 染料可被顯像。另一時間，其他的染料可用不同的濾鏡或 激發方法而顯像。因此，一個樣本含有的染料可多於所顯 像出的染料。 π 同k ’顯像出的染料可用濾鏡來互相區別，顯像可限 制發射光到達偵察器的波長。或者，每一個染料用光譜分 析或其他較高階的分析法來區別。這種使組織顯像的方法 4 明於下列文獻中：Levenson，R.M· and farkas，D.L· (1997) Proc. SPIE, 2983:123-135; Levenson, R.M. and Young, D.A. (1991) In: M.J. Dunn (Editor), Proc. International Meeting on Two-Dimensional Electrophoresis. Dept, of Cardiothoracic Surgery, National Heart and Lung Inst. (UK), London, UK; and Levenson, R.M., Brinckmann， U.G.， Androphy，
第15頁 1224286 五、發明說明（13) E·， Schiller, J·， Turek， L·， Chin， M·， Broker, T. R. , Chow, L.T. and Young, D. A. ( 1 987) In: B.M. Steinberg, J.L. Brandsma and L.B. Taichman (Editors), Cancer cells V· Papillomaviruses. Cold Spring Harbor Press, N,ew York， pp· 137-144。以上所 有文獻資料在此納入為參考文獻。 下列的實施例用以說明本發明。這些實施例並非以任 何的方式限定本發明。 實施例 實施例I ·· H&E單一染料法 變色染料吖啶橙是一種螢光染料，在將組織及其他物 質染色時，組織元素與吖啶橙結合，其所產生的螢光色與 組織元素的化學組成有關。例如，以吖啶橙染色時，核酸 散放出黃色，而細胞質中的蛋白質以同法染色時，同步地 放出綠色。因此用吖啶橙染組織及其他物質所產生的組 凡素之顏色的區別，與用H&E染法所產生的顏色區別相、、 似。除了產生不同的特定顏色之外，螢光染料吖啶橙 暗野影像而非亮野影像。 生 黑 像 像 是 一個用來產生顯示數據的特定運算法則敘述如下： 輸入的影像被照像機數位化以產生映像點，映里 色或僅具有紅色及綠色值，輸出的映像點代表Mb a 1GB影像會出現如同以蘇木素及曙紅染色的亮野ς 1224286 五、發明說明（14) "一~
Sr，Sg=紅色及綠色的來源映像點值。
Dr，Dg，Db=紅色、綠色及藍色的目標映像點值。
Pmax=映像點的最大值（例如8位元=28 = 256，1〇位元 =210 = 1 0 24 等）。
Hr，Hg，Hb=蘇木素亮野色彩的RGb參數 Er，EG，Eb=曙紅亮野色彩的RGB參數
Dr- Pmax-max(Sr，Sg) + (Sr/Pmax)*Hr+(Sg/Pmax)*Er Dg= Pmaxiax(Sr，Sg) + (Sr/Pmax)/Hr+(Sg/Pmax)*Eg Db二 Pmax-max(Sr，Sg) + (Sr/Pmax)/Hr+(Sg/Pmax)*Eb
因此，本發明藉著將顏色查閱表及其他顏色轉換法應 用在染有吖啶橙的組織所產生的影像上，讓染有吖啶撥的 組織影像可以轉換’使其相似於經染色的組織所產生 的影像。 熟悉H&E染色法者會覺察到由於染液的生成與儲藏之 變異，組織的色彩及飽和度是可變的，因此一種以上的查 閱表可用來轉換經吖啶橙染色的樣本所產生的暗野影像， 以使模仿經H&E染色所產生的亮野影像。 實施例II : H&E多種染料法
螢光染料混合物或許可代替d丫咬燈及用來轉換η丫唆撥 暗野影像成為相似的Η&Ε標準亮野影像的查閱表及其他方 法。此類螢光染料混合物在組織中使嗜鹼性及嗜酸性的物 質呈現不同的顏色，prop i d i um i od i de (染核酸）及曙紅 Y (染蛋白質）的結合是一個可用的賦形。在一實施例
第17頁 1224286 五、發明說明（15) ---- 中，活體組織檢查的癌化組織以propidium iodide處理， propidium 1〇dide是一種黃色的榮光染料，其可與核酸鈇 合，在腫瘤細胞核酸含量的流體細胞計量研究上，此 也常用來做DNA定量，此癌化組織亦用曙紅γ處理以二 内的組織成分呈綠&，根據此發明，從這個組織樣本： 到的是暗野影像，經轉換可成為亮野影像，在亮野影= 背景呈白t，組織的非核内部分呈粉紅色，核呈藍色 者，定量測量每個核的營光強度以求得核内DNA含量的近 似值’這個量藉由顏色查閱表或其他方法使之與每個 凴野影像顏色有關，因此根據核内所含的DNA總量，每 ，會呈現不同的顏色，故造成一種”估算染料π ，其與 量相關。 ‘ 實施例III :從單色染料產生多色影像之方法。 在本發明的第三實施例中，單色染料的影像可轉換 色影像’乡色影像與經由-種多色染料染色或多種單 料染色的樣本所產生的影像相似。一實施例是藍-白染料 Flu〇rescence Brightener 28在含真菌體組織樣本上的應 用。FlU0rescence Brightener 28可堅固地連結於直 體’並使真菌體在暗野影像中呈現比i ^ & ^ ^ ^ „ a. G，、他構造更明顯的顏 ^例如被感染的生物之細胞。因此，一影 個灰影的映像點（黑色的映像點值為〇， β 為2 55 )，代表真菌體的映像點有彳艮高的映像點值像點值 在一個實施例中，真菌體的映像點值大於χ，而每一
第18頁 1224286
五、發明說明（16) 個非真菌體構造的映像點值+ > ^ 換染得比較亮的真菌體（即峨；X °製造顏色查閱法是轉 野色，如深紫灰色；其他部分^點值大於X )成第一個亮 介於X到0之間）則轉換成第二、組」織構造（即映像點值在 的，黑色的背景（所有的映i 3亮野色，如灰綠色。同樣 形成亮野。此種色彩組合造成點，為0 )變成白色，因而 胺-銀染色非常相像，此染色、、去的&像與Grocott六亞曱四 室來染組織切片中的真菌體。/ 一般用在外科病理學實驗 甚他具體實施例 本發明已參考較佳的具體每 、，， 述，而為熟悉於此技藝者所知二：?,二2詳：顯示及敘 =圍所定義的發明精神與範嘴外，可對 ：『 的改變，熟悉於此技藝者僅使用例行的實驗法： 見或可以發現到許多與本發明特別的具體實施例同類& 例子。這些同類型的具體實施例包括在申請專利範圍之
Claims (1)
1224286 案號 89109127 修正本 93. 年 3· η • 2修正 六、申請專利範圍 ^------ 1. 一種影像生成法，包括： a) 以一種螢光染料將一樣本染色； b) 經螢光染料染色的樣本生成一第一影像；以及 c) 使用數位處理器將該第一影像轉換成為一第二影 像，其相似於以非螢光染料將該樣本染色所生成的影像。 2. 如申請專利範圍第1項所述之影像生成法，其中該 第一影像是使用塊狀面顯微鏡（b 1 〇 c k - f a c e m i c r 〇 s c 〇 p e )而產生。 3 .如申請專利範圍第1項所述之影像生成法，其中將 該第一影像轉換成為該第二影像，包括將查閱表應用在該 第一影像上。 4. 如申請專利範圍第1項所述之影像生成法，其中該 樣本至少以二種以上的螢光染料染色。 5. 如申請專利範圍第1項所述之影像生成法，其中該 樣本是一生物樣本。 6. —種影像生成法，包括： a) 以一第一或第二發光染料將一樣本染色； ·/-义 t b) 經該第一染料染色的該樣本生成一第一影像，經 該第二染料染色的樣本產生一第二影像；以及 c) 使用數位處理器將該第一影像及該第二影像轉換 成為一第三影像，其相似於以蘇木素及曙紅將該樣本染色 所生成的影像。 7. 如申請專利範圍第6項所述之影像生成法，其中該 第一及第二影像是使用塊狀面顯微鏡而產生。
1084-3191-pfl.ptc 第20頁 1224286 案號 89109127 年 月 曰 修正 六、申請專利範圍
8. —種影像生成法，包括： a) 以一種螢光染料將一樣本染色； b) 該染料染色的該樣本生成一第一影像及一第二影 像；以及 c) 使用數位處理器將該第一影像及該第二影像轉換 成為一第三影像，其相似於以蘇木素及曙紅將該樣本染色 所生成的影像。 9. 如申請專利範圍第8項所述之影像生成法，其中該 第一及第二影像是使用塊狀面顯微鏡而產生。 1 0.如申請專利範圍第8項所述之影像生成法，其中該 染料包括一變色染料。 1 1.如申請專利範圍第1 0項所述之影像生成法，其中 該變色染料包括吖啶橙。 1 2. —種影像生成法，包括： a) 以該多種螢光染料將一樣本染色； b) 在該樣本中，該染料的其中一種，生成一第一影 像；以及 c) 使用數位處理器將該第一影像轉換成為一第二影 像，其相似於以一種非螢光染料染該樣本所生成的影像。 1 3.如申請專利第1 2項所述之影像生成法，其中該第 一影像是使用塊狀面顯微鏡而產生。 1 4. 一種影像生成法，包括： a)以具有重疊激發及發射光譜的該多種螢光染料將 該樣本染色；
1084-3191-pfl.ptc 第21頁 1224286 _案號89109127_年 月 日__ 六、申請專利範圍 b ) 生成一第一影像，其相似於以一組該多種螢光染 料染色的该樣本，以及 c) 使用數位處理器將該第一影像轉換成為一第二影 像，其相似於以至少一種非螢光染料將該樣本染色所生成 的影像。 1 5.如申請專利第1 4項所述之影像生成法，其中該第 一影像是使用塊狀面顯微鏡而產生。
1084-3191-pf1.ptc 第22頁
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