TW520290B

TW520290B - A liquid composition of immunoglobulin for intravenous administration and a method for the preparation thereof

Info

Publication number: TW520290B
Application number: TW087104074A
Authority: TW
Inventors: Ronald Vance Mcintosh; Anne Gillian Welch
Original assignee: Common Services Agency
Priority date: 1997-03-20
Filing date: 1998-03-19
Publication date: 2003-02-11
Also published as: WO1998042376A1; GB9705810D0; DE69821741D1; ES2215294T3; JP2001521544A; ATE259656T1; DE69821741T2; EP0967995B1; CA2283965A1; EP0967995A1; AU6414498A; WO1998042376A9; US6485932B1

Description

520290 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明關於一種作爲靜脈內施用之液體組成物，其包括免疫球蛋白之水性溶液。該免疫球蛋白一般爲衍生自人類血漿之免疫球蛋白G ( I gG)。作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白在臨床上已經被使用數年。該產物可以冷凍乾燥配方或在一些例子中爲靜脈內可注射液體配方獲得。該乾燥配方，以包含例如5克免疫球蛋白之小瓶存在，在使用前需要被再組成爲可注射溶液且數個臨床指標建議劑量達每天每公斤體重1克 ◊如此大量的劑量需要許多小瓶被再組成爲可注射配方，其爲不方便且費時◊因此値得考慮的優點是具有能提供一種準備使用之可注射配方。然而，此種液體配方需要在長時間儲存時穗定。經满部中次標準局负工消费合作社印狀 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 習慣上，免疫球蛋白G爲使用乙醇分離法而自血漿中分離◊這些方法包括仍然在美國主要使用之最初 Coim-Ondey法及在歐洲主要使用之該方法之不同的其它已建立之改良法（乙醇分離法之總論可參考Kistler P.及 Friedli H·戶斤著之 Ethanol Precipitation，於 Methods of Plasma Protein Fractionation 中，J.M· Curling，編輯， Academic Press，inc·，紐約，1 980)。乙醇的缺點，即其有將蛋白質變性之潛勢，其可藉由使用低作用溫度而被彌補且因此這些方法一般被稱爲“冷乙醇分離法 (cold ethanol fractionation) ”。冷乙醇分離法全視五種變數而定，即乙醇濃度，p Η値，離子強度，溫度及蛋白質濃度以達到蛋白質之選擇性分離而成爲不同的沉澱 __ 3 ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）經消部中央標準局員Η消费合作社印繁 520290 A7 __B7_ 五、發明説明（少）物，該沉澱物在習慣上即爲已知之部份（Fraction)。部份I I爲主要的免疫球蛋白，其在人類血漿的冷乙醇分離中產生沉澱。自部份II製成作爲肌內施用之免疫球蛋白的製備物配方已經有一段時間。然而，這些製備物之靜脈內輸液已被發現於受血者中會導致劇烈的不良反應，類似過敏反應（即心血管虛脫及支氣管痙攣）（可參考 Immunoglobulins ： Characteristics and uses of intravenous preparations，Alving Β·Μ·及 Finlayson J.S·，編輯，US Dept, of Health and Human Science Publication No. ( F D A) — 80 — 9005，1979)〇目前已知這些劇烈的不良反應爲主要地經由免疫球蛋白G分子凝集物的存在及具有微量血管活性血漿酵素，如前激肽釋放酶活化劑（P K A)及激肽釋放酶之部份I I的污染所導致。凝集的免疫球蛋白可以結合及活化血漿蛋白質之補體基團（如此稱爲“抗補體活性（anti-complementae activity) ”）且補體系統之活化造成過敏毒素之補體肽類C5a及C3a的產生◊其亦已知施用生理有效量之前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶會導致劇烈的高血壓及心血管虛脫。因而在製備作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白配方上，須注意前述之問題◊一些方法已經被採用來解決這個問題。這些方法包括，變更部份I I之方法以防止凝集形成；進一步純化來自部份II之免疫球蛋白而能去除凝 _4____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經滴部中央標準局員工消费合作社印來 520290 A7 B7 五、發明説明（>) 集物及其他污染血漿蛋白質，以及以非常低等級之蛋白質分解酵素，如胃蛋白酶處理來自部份I I之免疫球蛋白以分離任何凝集物及殘留之前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶。（作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白的生產之總論可參考 Methods for the Production of IVIG Preparations and Analysis of IVIG Preparations Available，由 Lundblad J.L.及 Schroeder D.D.戶斤著，於 Clinical applications of intravenous immunoglobulin therapy，P.L. Yap，編著， Churchill Livingstone Inc·，紐約，1992) ° 在此方法中胃蛋白酶之使用已被發現在相當低的P H値，例如，p Η値4.0爲最適合。由上所述，在此技藝中已熟知如此低ρ Η値處理爲一種有效的病毒滅活方法（可參考 Reid，K.G·等人，Vox Sang· 5 5 p75 — 80，19 8 8 ° Potential contribution of mild pepsin treatment at pH 4 to the viral safety of human immunoglobulin products) ° 事實上，作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白製備物需要符合特定標準，如那些由歐洲藥典委員會（European Pharmacopoeia Commission)所建議’該委員會陳述尤其是分子大小之分佈，抗補體活性，前激肽釋放酶活化劑及包括已顯示出可滅活已知感染劑之一個步驟或數個步驟的製備方法之指導方針（可參考歐洲藥典第三版’在 1996年六月出版，於199 7年一月一日取代第二版，專題論文號碼 1997:0918, Human Normal Immunoglobulin for Intravenous Administration) 0 ____j___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）丨丨—— ——!衊—丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11

經滴部中央標準局員工消费合作社印粼 520290 A7 _B7 五、發明説明（ψ ) 〜目前在市場上大部份之作爲靜脈內輸液之人球蛋白_物爲冷凍乾燥製備物之形式以能提供在'運送及儲存之穩定性。這些製備物在使用前必須要再組成，如較早所描述，其爲不方便且費時。此外，作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白液體組成物亦可利用。美國專利案號4，499，073 ( Cutter

Laboratories Inc·)描述一種人類免疫球蛋白之靜脈內注射溶液之生產，該溶液需要在P Η値3.5至5·〇之範圍內。此外，該離子強度必須被降至低等級，特別是在 0 ·0 0 1以下。在此範圍內之Ρ Η値及低離子強度之維持被陳述爲針對儲存液體的能力上是必要的。作爲長時期之配方，其爲當滿足判斷標準，例如分子大小之分佈及抗補體活性時。人類免疫球蛋白之穩定液體配方之生產的另外之建議被包含於 W 095/22990 中（The Green Cross

Corporation ) ’其需要在pH値5·5之fe圍及小於lm m h 〇之導電性。在美國專利案號4 ’ 4 9 9 ’ 0 7 3所陳述之建議爲關於使用最初由E·】· Cohn等人（L Am· Chem· Soc· 6 8:459 — 475，1946)&LJ.Oncley#A( J. Am. Chem. Soc. 71^41-550^1949) 所描述之方法處理產生之部份1 1或部份1 1 1濾液（上淸液I I I ). ^然而’這些條件並沒有顯現出可適合 _____6-- 本紙張尺度適用中國國家標攀（CNS ) Λ4規格（210X 297公潑） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

520290 經濟部中央標準局员Η消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（< ) 作爲衍生自其他冷乙醇分離流程之穩定免疫球蛋白G溶液之生產。當由本案發明人根據該冷乙醇分離流程而應用至製備之免疫球蛋白時，在此文獻中之特定p Η値條件及低離子強度並沒有造成穩定產物之形成。既然不同的改良冷乙醇分離法被廣泛地使用，特別是在歐洲，其因此需要一種除了那些前人技藝所教示之適合者外之衍生自起始物質的穩定免疫球蛋白G溶液。其目前已經很驚訝地發現適合靜脈內注射之免疫球蛋白溶液可被獲得，其係經由使用完全不同於那些前人技藝所教示之ρ Η値及離子強度條件，與另外包括以一種酵素，例如，胃蛋白酶處理該免疫球蛋白製備物。因此，本發明提供一種作爲靜脈內施用之液體組成物’其包括一種於醫藥可接受水性載體中之免疫球蛋白溶液，該溶液具有在pH値5.0至5.8範圍內之pH 値及在0 ·0 2至0·2 5範圍內之離子強度，且該免疫球蛋白已受到胃蛋白酶處理◊ 該離子強度可在0.04 — 0.2 0之範圍內。離子強度（I )被定義爲在溶液中之離子濃度（C )乘以其價數（Ζ )之平方所獲得項數的總和之一半，即I =1/2 Σ C · Ζ 2 ◊例如，6 0 mM氯化鈉之離子強度將如以下所計算：1/2〔（〇·〇6Χΐ2) + (0·06Χ12) 〕=0 · 0 6 〇根據本發明所製備免疫球蛋白溶液已被測定出具有導電率値近似4.mmh 〇至2 Ommh 〇以上。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-口

520290 經滴部中央標準局员二消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（t ) 就與組成物之其他成分相容及對患者無害的方面來說，該水性載體必須是“醫藥上可接受”。本發明之液體組成物具有不需被冷凍乾燥的優點。因此，該液體組成物不必在使用前被再組成。免疫球蛋白之化學修飾並不需要且部份II之大規模額外的純化亦不需要。其已被有利地發現根據本發明之液體組成物之配方可造成在儲存時穩之組成物。在儲存時穩定其意思爲該免疫球蛋白幾乎不會凝集及降解且在4 °C至2 5 °C之溫度範圍內儲存一段長期的時間，能保持可接受等級之抗補體活性，前激肽釋放酶活化劑（P KA)活性及激肽釋放酶活性。一段長期的時間其意思爲在2 5 °C時十二週，較佳爲二十六週且最佳爲五十二週；亦爲在4°C時六個月，較佳爲十二個月且最佳爲二十四個月。該組成物幾乎不會凝集其意思爲在該製備物中之免疫球蛋白含量僅增加2.5%至3%，且該製備物具有大於存在於製備物中之免疫球蛋白G ( I g G )二聚物之分子大小。該組成物幾乎不會降解其意思爲僅有5 %至 7 %之製備物具有小於存在於製備物中之免疫球蛋白G 單體之分子大小。此外，若超過5 0 %以上之初抗體機能（例如，抗德國麻疹病毒活性）殘留，則該組成物被認爲已顯示可接受等級之降解。一可接受等級之抗補體 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) r

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X29?公釐） 520290 A7 B7 五、發明説明（7 ) 活性爲其該補體之消耗不大於5 0% (每毫克免疫球蛋白1CH5〇:定義可參考附帶於此之試驗步驟B) ◊可接受等級之前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶爲其個別在含3 0克/升之免疫球蛋白溶液中不犬於每毫升之3 5 i u及小於〇 .0 5 i u。分子大小之分佈，抗補體活性，前激肽釋放酶活化劑/激肽釋放酶活性及抗德國麻疹活性之試驗被描述於以下之試驗步驟A至D。一種液體組成物，其顯示前述之穩定特徵將具有符合適合作爲靜脈內輸液之免疫球蛋白配方之特定標準（例如，那些參考先前於歐洲藥典之標準）之可能性。依照前述關於可接受等級之凝集，抗補體活性，前激肽釋放酶活化劑/激肽釋放酶含量及抗體機能之需要，該液體組成物之P Η値較佳爲在5.2 5 — 5.7 5之範圍內且離子強度在0·0 4 — 0.1 8之範圍內，更佳爲0.0 3 — 0.1 8之範圍內。經滴部中央標準局员工消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 其目前已發現胃蛋白酶與此處定義之組成物配方一起處理，可排除任何使用進一步對部份I I純化或修飾之需要◊該液體配方可能包含殘留胃蛋白酶，但若需要，該殘留胃蛋白酶可被去除。此外，在低ρ Η値，例如，ρ Η値4以胃蛋白酶處理而作爲一病毒滅活步驟時爲特別有效。該組成物之免疫球蛋白較佳爲免疫球蛋白G，其可包括殘留量之其他免疫球蛋白，例如，免疫球蛋白A ( ___9_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）經滴部中央標準局負T,消费合作社印粼 520290 A7 ______B7 五、發明説明u) — Ϊ g A )及/或免疫球蛋白μ ( I g Μ)以總免疫球蛋白含量之重量計算，可達到5%。然而，適合作爲給定之特殊用途的組成物可依需要包括免疫球蛋白Α及/或免疫球蛋白Μ。液體組成物之免疫球蛋白可以藉由任何適合方法獲得。例如，該免疫球蛋白可根據先前描述之Cohn-Oncley 冷乙醇分離法或如圖1所描述之冷乙醇分離法之改良法所製備。該免疫球蛋白可自分離法獲得部份II沉澱物或上淸液（例如，上淸液I I I或I及I I I )。該部份I I沉澱物可於分解，去除殘留之乙醇雜質，以胃蛋白酶處理及形成適合作爲靜脈內施用之液體組成物配方之前，被冷凍及儲存。於再溶解之部份I I ( 或上淸液I及I I I )中之乙醇雜質可被去除，例如，經由其溶液抗低p Η値之合適的緩衝液之滲濾◊合適的緩衝液包括，例如，0 ·4 5 %氯化鈉，1 %蔗糖，及2 00 — 400毫升1 Μ氫氯酸/公斤蛋白質。選擇地，例如，該乙醇雜質可經由冷凍乾燥及再溶解該乾燥固體且使用合適的滴定劑，例如，氫氯酸調整至低ρ Η値而被去除。一般說來，其中該乙醇雜質已被去除之該免疫球蛋白溶液之ρ Η値爲在3 .9至4 ·5的範圍內且較佳爲在3·9至4·1的範圍內，且該殘留乙醇雜質小於1 0毫克/克蛋白質。該包括免疫球蛋白之溶液然後可被濃縮（例如，經由超濾法）至8. — 1 2 %W/W總蛋白質且加入一合適 _______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公麓1 ~~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

i 520290 經濟部中央標準局負.Τ消费合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（/ ) 之穩定劑如碳水化合物（例如，葡萄糖，麥芽糖或蔗糖 )，其濃度在每一份蛋白質一份穩定劑（w/w)至每一份蛋白質二份穩定劑（W/W)之間。例如，1 : 1 (W/W)葡萄糖對蛋白質，1·5 : 1或2 : 1麥芽糖對蛋白質及1.5 : 1或2 : 1蔗糖對蛋白質。其他穩定劑如胺基酸（例如，甘胺酸）亦可在此階段於濃度達1 0 0毫克/克蛋白質時被加入。然後以小量之胃蛋白酶進行培養以減少免疫球蛋白單體凝集之形成；減少抗補體活性及降低前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶活性之等級。被加入之胃蛋白酶較佳是在1 0 — 1 5 0微克/克總蛋白質之範圍內及更佳是在2 5 — 1 0 0微克/克總蛋白質之範圍內。該免疫球蛋白溶液然後被培養在2 0 °C至3 7 °C之合適溫度範圍內及較佳爲3 5 °C且於一小時至七十二小時之合適時間範圍內及較佳爲二十至二十四小時範圍內進行。在培養後，使用合適之滴定劑，例如，氫氧化鈉將該免疫球蛋白溶液之pH値調整至ΡΗ値5.0至5.8 間。p Η値較佳爲調整至p Η値5.2 5至5.7 5間。該溶液之蛋白質濃度然後可經由稀釋而被調整至2 — 1 〇%(W/W)及較佳爲4一6%(W/W)，其係使用適合濃度之鹽溶液以便使得溶液之離子強度在0·0 2 及0·2 5間。該離子強度較佳是調整在0.0 3及0·1 8間。若其他的穩定劑如胺基酸（例如，甘胺酸）在較早階段沒有被加入組成物中（參考前述），其在此階段 11 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-5-U

本紙張尺度適用中國國家標孪（CNS ) Α4規格（21〇Χ 297公釐） 520290 A7 B7__ 五、發明説明（β ) 於濃度達1 0 0毫克/克蛋白質時可被包括在配方中，該製成配方之免疫球蛋白溶液然後被過濾以去除任何潛在的細菌污染且無菌地被調配入醫藥可接受容器中〇因此提供一種作爲靜脈內施用之液體組成物，其在儲存時穩定且其包括於醫藥可接受水性載體中之製備自血漿的冷乙醇分離法之免疫球蛋白溶液且該免疫球蛋白在最終容器內不需要被冷凍乾燥。本發明之具體實施例將藉由實施例，係關於下列實施例部份，作進一步描述：實施例部份實施例1:獲得作爲起始物質之免疫球蛋白之方法經滴部中央標準局员τ,消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 免疫球蛋白（部份I I ) 一般經由冷乙醇分離法製備自人類血漿。一個作爲製備部份II之製造方法的實施例被略述於圖1中。在圖1中，部份II係使用 Vogelaar等人之方法的改良（¥〇13&1^2 7:1 9 3 -2 0 6，1 9 7 4 )分離自組合之部份I，I I及I I I沉澱物，該沉澱物係使用Hink等人之部份I I及I I I 沉澱條件（Vox Sang· 2 : 174 — 1 86，1957 )而被分離。該製備組合之部份I ， II及III沉澱物之技術亦已被 Kistler 及 Nitschmann (Vox Sang.7 : 4 14 — 424，1962)所描述。 ___12_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 520290 A7 ____ B7 _ 五、發明说明（ij ) 實施例2 ··作爲靜脈內輸液之液體免疫球蛋白組成物之製備如前述或根據其他任何適合方法所製備之免疫球蛋白（部份I I )被再溶解於4 °C無菌蒸餾水中（3 ·5升 /公斤糊劑）。該結果溶液然後在乙醇除去（乙醇<1 〇毫克/克）及Ρ Η値調整（pH値至4·0 土 0·1) 前經由過濾（Ο ·4 5微米孔徑大小過濾器）澄淸及經由抗至少4體積之0.4 5 %氯化鈉，1 %蔗糖及3 1 0 — 3 2 0毫升，1 Μ氫氯酸/公斤蛋白質之滲濾。該溶液最後經由超過濾濃縮至8及1 2 %總蛋白質之間。該蛋白質溶液然後與一穩定劑（每份蛋白質二份蔗糖W/W)及添加小量之胃蛋白酶（0·0 2 5-0·1 毫克胃蛋白酶/克蛋白質）被製成配方。該包含胃蛋白酶溶液被過濾（0.4 5微米孔徑大小過濾器）且在3 5 °C培養二^小時。經滴部中央標準局負工消费合作社印繁 (請先閱讀背面之注意事項异填寫本頁) 隨著培養，該溶液之Ρ Η値使用0·2 5 Μ氫氧化鈉被調整至ρ Η値5.0至5.8之間。該溶液之蛋白質濃度被調整至4及6 %之間且氯化鈉濃度至6 0 mM。最後製成配方之液體免疫球蛋白組成物被無菌過濾且無菌墟*調配入適合的容器中。實施例3 :與作爲附加穩定劑之胺基酸（甘胺酸）製成配方之作爲靜脈內輸液的液體免疫球蛋白組成物之製備 ______13_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）經濟部中央標準局貝Η消费合作社印製 520290 A7 __B7__ 五、發明説明（/少）一種適合作爲靜脈內施用之免疫球蛋白組成物係如實施例2所製備且除了在胃蛋白酶處理及培養前之具有蔗糖之溶液配方之外，還包含5 0毫克/克甘胺酸作爲穩定劑。實施例4:作爲靜脈內輸液之液體免疫球蛋白組成物之穩定度許多組不同組成物之液體免疫球蛋白（包括於實施例2及3所描述者）在不同的p Η値下被製備及被製成配方◊這些組成物依照在不同的溫度作不同長短時間之儲存而試驗其穩定度◊這些試驗係根據以下所描述之試驗步驟Α至D進行。穩定度之判斷標準如下列所定義：凝集：在該製備物中之免疫球蛋白含量僅增加2 ·5 %，且該製備物具有大於存在於製備物中之免疫球蛋白 G二聚物之分子大小。降解：僅有5 %之製備物之蛋白質含量具有小於存在於製備物中之免疫球蛋白G單體之分子大小。抗體機能：與組成物之製備時期之初等級相比較有超過5 0 %以上之抗體活性（例如，抗德國麻疹病毒）殘留。抗補體活性··該補體之消耗不大於5 0% (每毫克免疫球蛋白1 C.Hso :定義可參考附帶於此之試驗步驟 ___14__ —- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

520290 A7 B7 五、發明説明（Ο ) Β )。前激肽釋放酶活化劑活性：該於3 0克/升免疫球蛋白之溶液中的前激肽釋放酶活化劑活性僅爲3 5 i u /毫升。激肽釋放酶活性：該於3 0克/升溶液中之激肽釋放酶活性小於0.0 5 i u/毫升。此系列實驗之結果如表1 一8所示。該結果以組之數目表示，其對於所指定之判斷標準及在顯示之時間及溫度下穩定。在顯示之時間及溫度之所指定判斷標準中已被試驗之組的數目被括在括弧裏。例如，“1(4) ”對在3 四週之降解/抗體機能之記載表示四個試驗組中之一組依照在3 7°C儲存四週時，符合前述之對降解及抗體機能兩者之穩定度判斷標準之意思。經满部中决標準局員vi消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

此外在表1 一 8中，以陰影所顯示之欄位爲關於根據本發明製備之液體組成物之數據，即具有P Η値5 ·0 至5.8，離子強度0.0 2至0 ·2 5之組成物且其已受到胃蛋白酶處理。關於並非根據本發明所製備之免疫球蛋白組成物的數據且其經由比較被顯示’爲沒有陰影之欄位。這些結果之結論如下：實驗I(表1): 5%W/V免疫球蛋白（以0.1毫克/克之胃蛋白酶處理）；1 0 %蔗糖；6 0 mM氯化鈉； pH 値 4.0 5 - 6.0 2 15 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 520290 經满部中决標準局员工消费合作社印來 A7 _______B7_ 五、發明説明（+) 當一種產物在p Η値5.2 5至5.5以液體形式根據本發明被製成配方時，該產物在4°C穩定超過二十六週且通過在2 5 °C及3 7 °C之實驗加速穩定度試驗。實驗I I (表2 ): 5%W/V免疫球蛋白（其沒有被胃蛋白酶處理） ;1 0 %蔗糖；6 0 mM 氯化鈉；p Η値 4.2 5 - 5 · 2 5 在缺乏胃蛋白酶時，液體配方爲ρ Η値5.2 5或在提高溫度儲存時較少凝集。此外，其從先前之作業可得知及確認ρ Η値5.2 5之配方在此實驗中該胃蛋白酶對降低前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶是必須的。實驗I I I (表3 ): 5%W/V免疫球蛋白（其沒有被胃蛋白酶處理） ;1 0 %W/V蔗糖；3 — 9 mM氯化鈉；ρ Η値4 ·5 0-5.0 當免疫球蛋白組成物在低ρ Η値及低離子強度，沒有經過胃蛋白酶處理而被製成配方時，該產物具有高度前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶等級，其儲存在2 5 它及4 °C時並沒有降低。該組成物在3 7 °C儲存時凝集〇這些配方條件在那些描述於美國專利案號4，49 9，0 7 3 (Cutter Laboratories Inc·)之中對長期儲存一液體配方之能力是必要的。此實驗之結果證明記載於美國專利案號4，4 9 9，0 7 3之條件當其根據本案 _16__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I衣· 訂

520290 A7 B7 五、發明説明（ί < ) 申請人所使用之冷乙醇分離法流程而被應用至製備之免疫球蛋白時，並不會造成穩定產物之形成。實驗I V (表4 ): 5%W/V免疫球蛋白（以0.1毫克/克之胃蛋白酶處理）；1 0 %W/V蔗糖；4 一 9 mM氯化鈉；p Η 値 4 · 4 一 5 · 2 當免疫球蛋白組成物在較低之離子強度（在胃蛋白酶存在下）被製成配方時，即使在4°C，該產物仍易於破碎^ 實驗V (表5 ): 5%W/V免疫球蛋白（以〇.〇 2 5毫克/克或0 • 0 5毫克/克之胃蛋白酶處理）；10%W/V蔗糖； 6 0 mM氯化鈉；pH 値 5.25 — 5.75 當胃蛋白酶濃度降至0.0 2 5毫克/克蛋白質時，該產物不會降解且前激肽釋放酶活化劑及激肽釋放酶之等級正好在限制內◊所有組亦顯示在提高溫度儲存時不會凝集。經满部中央標準局員Η消贽合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實驗V I (表6 ): 5%W/V免疫球蛋白（以0.1毫克/克之胃蛋白酶處理）；10%W/V蔗糖；100及180mM氯化鈉；P Η値 4.0 5 - 5.5 當免疫球蛋白組成物（其已被0.1毫克/克蛋白質之胃蛋白酶處理）之離子強度自大約6 0mm ο 1氯化鈉增加至1 8 O.mm ο 1氯化鈉時，該產物在提高溫度 _17 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐）經满部中央標準局員Η消贽合作社印製 520290 A7 B7__ 五、發明説明（|έ) 儲存時爲普遍地凝集。實驗V I I (表7 ) ·· 5%W/V免疫球蛋白（以0·0 2 5 — 0·1毫克 /克之胃蛋白酶處理）；10%W/V蔗糖；每克蛋白質5 0毫克甘胺酸；3 0 — 6 0 mM氯化鈉；p Η値5 · 5 該較佳之組成物亦可與作爲額外之穩定劑之胺基酸 (例如，甘胺酸）一起被製成配方。實驗V I I I (表8 ): 5%W/V免疫球蛋白（以〇·〇 2 5-0.1毫克 /克之胃蛋白酶處理）；7.5 — 10%W/V麥芽糖；每克蛋白質5 0毫克甘胺酸；6 0 mM氯化鈉；p Η値 5 ‘5 該較佳之組成物亦可與作爲穩定劑之麥芽糖一起被製成配方；麥芽糖之較佳濃度爲7.5 — 1 0%W/V。當產物根據本發明在p Η値5·0 — 5.8之範圍內，離子強度0·02-0·25及受到胃蛋白酶處理，在麥芽糖或蔗糖存在下被製成配方時，該產物在4°C穩定超過二十六週且通過在2 5 °C及3 7 °C之實驗加速穩定度試驗。在獲得自不同試驗組成物之數據的基礎下，於此先前所定義之組成物（即，在p Η値5.0 — 5.8之範圍內，離子強度0 ·0 2 — 0 ·2 5及受到胃蛋白酶處理而被製成配方）自可接受之凝集，降解，抗補體活性，前 ____18__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規袼（210X297公釐） " ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ,ιτ

520290 A7 B7 五、發明説明（〔y) 激肽釋放酶活化劑含量及激肽釋放酶含量之觀點而言，被測定爲穩定。試驗步驟 A·分子大小分佈免疫球蛋白產物之分子大小分佈可經由使用高性能液相層析法之分子排阻來測定。該產物係使用由相同物質所組成之具有防護管柱（guard column )( 7 · 8 X 4 0 mm )之尺寸 7.8x300mm 的 TSK G3000 SW-XL 凝膠過濾管柱在Pye Unicam modular system上被分析。樣本在移動相中被稀釋至5 — 1 0克/升（0.2M磷酸鉀緩衝溶液p Η値7.0 )且在注入2 0 A L前透過〇· 4 5 /zm膜過濾。蛋白質被以0.4毫升/分鐘洗提且經由測定在280nm之UV吸收。獲得之微量經由根據描述於歐洲藥典之判斷標準之手工三角測量來分析。經消部中央標枣局员工消费合作社印來 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 相當於凝集物（保留時間15 — 18分鐘），二聚物（18·5 — 19·5 分鐘），單體（2 1 ·0 - 2 2 ·0 分鐘）及片段（在單體峰之後及在鹽峰之前洗提之任何物質）之峰面積被鑑定及定量而以總洗提面積之百分比表示。抗補體活性經由免疫球蛋白製備物之自發性（抗原非依賴性）活化之補體的等級係藉由致敏綿羊紅血球細胞之溶解之 ______19__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）經满部中央標準局员工消费合作社印餐 520290 A7 B7 五、發明説明（) 抑制程度其根據Frommhagen及Findenberg之方法〇· Immunol 89: 3 3 6 — 343，1962)以固定量之補體來測定。簡言之，一組天竺鼠補體被與一系列之稀釋樣本在試驗下培養。在一段時間培養後（60分鐘37°C)，不被試驗樣本活化之補體的量被測量，其係經由添加等量之致敏綿羊紅血球至每一試管中及測量溶血的程度。於其中5 0%溶血發生之試驗樣本的稀釋液亦是已消耗 5 0 %存在補體之稀釋液。從此樣本的蛋白質濃度中，該抗補體活性可用對於消耗1 CH5〇單位（1 〇8綿羊紅血球細胞之5 0%溶解之所需補體）之所需蛋白質的毫克量而被計算。前激狀釋放酿活化劑活件及激肽釋放酿活袢於免疫球蛋白產物中之前激肽釋放酶活化劑活性的等級係根據Alving及其同事之方法（J· Lab Clin Med. 9 6··334 — 346，1980)測量。簡言之，該前激肽釋放酶活化劑活性之測量是經由二階段方法進行；第一階段包括經由被分析之物質將前激肽釋放酶轉化成激肽釋放酶。在第二階段中，所產生之激肽釋放酶經由其合成基質S2303 ( Kabi Diagnostics，瑞典）之水解速率以終點培養測定法（end point incubation assay)測童°該前激肽釋放酶活化劑活性與UK Reference 1製備物比較（血漿蛋白質部份其包 20 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 520290 A7 B7 五、發明説明（丨7 ) 含75國際單位前激肽釋放酶活化劑）。該經由於樣本中之前激肽釋放酶活化劑產生之激肽釋放酶活性其測量係經由自前激肽釋放酶存在時所測定之活性減去前激肽釋放酶缺乏時所測定之活性。該激肽釋放酶濃度以單位/毫升記錄，其中一單位爲在1微莫耳/分鐘之初速率，p Η値8.0及3 7 °C時，將能水解〇·2πιΜ S 2 3 0 2之激肽釋放酶的量。經滴部中央標丰局負Η消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

實際上，1 0微升試驗樣本與9 0微升前激肽釋放酶劑〔以 Lundblad 之方法製備（Develop· Biol· Stand· 4 4 :l〇7— 1 14，1979)〕在 pH 値 8.0 及 3 7°C時培養六十分鐘。然後加入5 00微升S2302 且再培養十分鐘，其係當反應經由添加1 0 0微升之1 〇 %醋酸而停止時。所有的樣本，標準組及控制組以二重覆測定且每一個樣本及控制組包括一激肽釋放酶空白組（添加測定緩衝液以取代前激肽釋放酶劑）。然後在 4 0 5 mM讀取每一溶液之吸收値，且建立根據標準之平均光學密度之標準曲線。該空白組之平均吸收値被減去來自試驗溶液的平均吸收値且自標準曲線計算前激肽釋放酶活化劑濃度。杭體機能（抗德國麻疹病盡活件）抗德國麻疹抗體經由以凝膠技術溶血而被定量。此爲一種補體間接測定法，其測量存在之抗德國麻疹抗體的功能完整，依賴該免疫球蛋白製備物之抗原結合及抗 __21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 520290 Α7 Β7 五、發明説明（>°) 原間接補體結合之二者性質◊ 簡言之，紅血球細胞經由以德國麻疹抗原包覆其表面而致ά，然後這些被懸浮於瓊脂糖中且倒入平板中。當該混合物已固化時，切成井且注滿被試驗之樣本及標準組。在4 °C過夜培養期間，該樣本擴散至瓊脂糖且任何特定抗體會與在紅血球的表面之抗原形成複合物。然後將凝膠以天竺鼠補體注滿且在3 7 °C培養。抗原-抗體複合物活化該補體，其造成紅血球細胞之溶解。此可經由圍繞在井周圍有淸楚的環狀面積而明白，溶血區域的面積與抗體濃度之1 ogi〇成比例^被試驗樣本之稀釋液與標準組（先前對照WΗ 0國際標準校正）之稀釋液比較而被測定且形成標準組之擴散區域面積對抗體濃度之圖表，計算在試驗中之樣本的抗德國麻疹抗體濃度經漓部中央標準局員Η消费合作社印褽

Ns C 準一標 22 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

公 520290 經漓部中央標準局爲工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（>f ) 表1 ··於pH値在4.0 5 — 6.0 2之範圍內，包括5%界/界免疫球蛋白（以0·1毫克/克之胃蛋白酶處理），10%蔗糖，6 0 mΜ氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度穩定度試驗通過之組數（試驗之組數） PH4.05 ρΗ4·5 pH5,0 ρΗ5·25 PH5.5 ptt5.8 pH6*02 4 週，37〇C 2(2) 1(1) 議H! my llllll 1⑵ 1(2) 26 週，25〇C 2(2) 1(1) 3(3> 8{S) 議議_ 1(2) 1(2) 26 週，4〇C 2(2) 1(1) 3(3) S(8) ___ 1(2) 2(2) 52 週，4°C ND* ND 2(2) 6(6) __議1 Hi) 1(1) 臓Z：腿麵疫 4 週，37〇C 2(2) 1(1) 4(4) 8(8) 讓__1 1(2) 1(2) 26 週，25〇C 2(2) 1(1) 3(3) m) __議1 1(2) 0(2) 26 週，4〇C 2(2) 1(1) 3(3) 7(8) _議議 2(2) 2(2) 52 週，4°C ND ND 2(2) em 10(10) 1(1) 1(1) pKA/mmm 酶 4 週，37〇C KD 1(1) 2(2) 謹議1丨 ϊ議議1; ND ND 12 週，25t： 2(2) 1(1) 3(3) 1議義_ Bill 1(1) 1(1) 26 週，4°C 2(2) 1(1) i議議il 顏賴議1 晒議議1 1(1) 1(1) 52 週，4〇C ND ND :議議:1 6{6) 1(1) 1(1) *ND :未測得本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

520290 A7 B7 五、發明説明（>^) 表2 :於pH値在4.2 5-5· 2 5之範圍內，包括5%W/W免疫球蛋白（沒有以胃蛋白酶處理），10%蔗糖，6 OmM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度穩定度試驗通過之組數（試驗之組數） ρΗ4·05 ρΗ4·5 ρΗ5·0 PH5.25 凝集/抗補體碰 4 週，37〇C 〇(D 0(1) 0(1) 0(1) 26 週，25t： 0(1) 0(1) 0(1) 1(1) 26 週，4〇C 1(1) 1(1) 1(1) 1(1) 52 週，4〇C 1(1). 1(1) 1(1) 0(1) 斷裂/杭德_疹 4 週，37〇C 1(1) 1(1) 1(1) 1(1) 26 週，25〇C 1(1) 1(1) 1(1) 1(1) 26 週，4〇C 1(1) 1(1) 1(1) 1(1) 26 週，4〇C 1(1) 1(1) 1(1) 1(1) PKA/MC釋放醣 4 週，37〇C 1(1) 1(1) 1(1) 0(1) 12 週，25〇C 1(1) 1(1) ND 0(1) 26 週，4〇C 0(1) 0(1) 1(1) 0(1) 52 週，4°C 1(1) 1(1) 1(1) ND* *ND :未測得 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T

經滴部中夾標率局員-T消费合作社印製 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 520290 經滴部中央標準局員,τ消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明) 表3:於pH値在4·50 —5· 25之範圍內，包括5%W/W免疫球蛋白（沒有以胃蛋白酶處理），10%蔗糖，3 — 9mM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度穩定度麵通過之組數（試驗之組數） PH4.50 ρΗ4·7 ΡΗ5.25 凝集/杭補體· 4 週，37〇C 0(3) 0(1) 0(1) 12 週，25〇C 0(3) KD 1(1) 26 週，4〇C 3(3) KD KD 52 週，4〇C 3(3) KD 1(1) 斷裂/杭德固麻疹 4 週，37〇C 3(3) 1(1) 1(1) 26 週，25〇C 3(3) 1(1) 1(1) 26 週，4〇C 3(3) 1(1) 1(1) 52 週，4〇C 3(3) KD KD P K A /纖釋放醯 4 週，37〇C 3(3) 1(1) 0(1) 12 週，25〇C 0(3) 0(1) 0(1) 26 週，4〇C 0(3) 0(1) 0(1) 52 週，4aC 0(3) 0(1) 0(1) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經滴部中央標準局貝Μ消费合作社印製 520290 A7 B7 五、發明説明（>ψ) 表4 :於ρ Η値在4.4 一 5.2之範圍內，包括5 %W/W免疫球蛋白（以0·1毫克/克之胃蛋白酶處理），10%蔗糖，4 一 9mM 氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度

穩定度麵通過之組數（試驗之組數） ρΗ4·4 ρΗ4·7 pH5.2 凝集/杭補體活件 4 週，37〇C 1(1) 1(1) 1(1) 26 週，25°C 1(1) 1(1) 1(1) 26 週，4°C 1(1) 1(1) 1(1) 52 週，4°C 1(1) 1(1) 1(1) 斷裂/杭德國麻疹 4 週，37〇C 0(1) 0(1) 0(1) 12 週，25〇C 0(1) 0(1) 0(1) 26 週， 0(1) 0(1) 0(1) 52 週， 0(1) 0(1) 0(1) p.KA,zmm 醯 4 週，37〇C ND* ND ND 12 週，25°C ND ND ND 26 週，4〇C ND ND ND 52 週，4°C ND ND ND *ND :未測得 _26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

520290 經滴部中Λ標準局負Η消费合作社印餐 A7 B7 五、發明説明（〆) 表5 :於p Η値在5·2 5 — 5·7 5之範圍內，包括5%W/W免疫球蛋白（以0·0 2 5毫克/克或0·0 5毫克/克之胃蛋白酶處理），10%蔗糖，6 OmM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度通過之組數（試驗之組數） ρΗ5·25 ΡΗ5.25 ΡΗ5.50 PH5.50 PH5.75 穩定度試驗毫克胃蛋白酶 /克 0·0 5毫克胄蛋白酶/ 克 CK025 毫克胄蛋白酶 /克 (K05毫克胄蛋白酶/ % 0』025毫克冑蛋白酶凝集/杭補體活忤 4 週，37〇C 3{3> 2(2) 3(3) 2(2) ΚΙ) 26 週，25t： .3(3) 2<2) 3(3) ' 2(2) 1(1) 26 週，4〇C 3(3) 2(2) ,3(3) 2(2) 1(1) 52 週，4°C 2(2) 2(2) 3(3) 2(2) ；HI) 斷裂/杭德國麻疹 4 週，37〇C 3(3) 2(2) 画義HIIIII 1(1) 12 週，25〇C • 3(3) 議議議議 3(3) 議議議圍1 KD . 26 週，4〇C 3(3) 丨丨議議1圍灰3) 2(2) 1(1) 52 週，4eC 2(2) 2<2) 3(3) ! •...•.••••.•••‘••..•.••••..••.••.••••••••I 2(2) ^ Id) P K A/澈 umm 4 週，37〇C .入：-- .1 3(3) 2<2) 1 ! 1(1) m 1(1) 12 週，25〇C 3(3) 2(2) 1(1) ND 1(1} 26 週，4°C 3(3) 2(2) 1(1) m 1(1) 52 週，4°C 2(2) 1(1) 1(1) m 1(1) *ND :未測得 22_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210>< 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

520290 A7 B7 五、發明説明（/) 表6 :於pH値在4·0 5 — 5·5之範圍內，包括5%W/W免疫球蛋白（以0.1毫克/克之胃蛋白酶處理），10%蔗糖，100及 18OmM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度通過之組數（纖之組數) 穩定度試驗 pH4.05-4.30 180πιΜ 氯化鈉 18(Μ 氯化鈉 pTi5；5 ISOeM •氣化鈉 ρΗ4·20 ΙΟΟπΜ 氯化鈉議_ 凝集/杭補

4 週，37〇C 26 週，25〇C 26 週，4t： 52 週，4〇C P K A/澈 mrm 1(2) 0(2) 1(2) 0(2) 1(2) 0(2) 1(2) 2(2) 1(2) 0(2) 〇<2) 2(2) 2(2) 2(2) 2(2) 2(2) )/ XJ %J \J \J )/ \ϊ/ 2 2 2 2 2 2 2 2 11 1 2 2 2 2 2 \»/ \1/ \»/ \1/ lx 1 1 1 /€\ /V /«\ /V ο ο ο ο \ly \1/ \1/ lx IX 1X /v /V /IV ο ο 1 Λ/ \/ \/ 揉；4 · 4 ίΑ. {. /\ /V 潑 3.. 2 . Co. 一 \/ V/ Λ/ 4 4 4 3 /V /IV /\ /\ 13 4 3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 週，37〇C 12 週，25〇C 26 週，4t： 52 週，4T： ND ND 1(1) 1(1) U1)HD 1(1) 1{1) •••ί^-ΧΓΓΊ·····? 112

:A 部中央標準消合作社印製 ND :未測得 28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x 297公釐） 520290 A7 B7 五、發明説明（>7) 表7 ··於pH値在5·5 0，包括5%W/W免疫球蛋白（以0.0 2 克/克一 0·1毫克/克之胃蛋白酶處理），10%蔗糖，5 0 毫克/克甘胺酸，3 0 — 6 0 mM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經滴部中央標準局貝JT-消贽合作社印狀

穩定度試驗通過之組數（試驗之組數） 04¾宽胄蚕甴鶴丨_1議議議議議議: 丨白酶/克 3 0-4〇mM氯 βιιιιιιιιιι 6〇fflM織鈉： 6 0崖鍵· 繼/杭補髂難 4 週，37〇C 6(6) 6<6) 26 週，25°C m) 議議11__議議議; m 26 週，4°C II議1_議1_義義議議議議1義讓1議議議圈 6<6) 52 週，4〇C 4(4) 議丨讓il丨1團______ NQ . 斷裂/抗德國麻疹 4 週，37〇C 議議11議__議議議 5(5) 6<6) 26 週，25°C ___1議議_1圍 3{3) ： 6(6) 26 週，4〇C 1_議1_議11義1議 3(3)： 6(6) 52 週，4〇C 4(4) .2(2) m PKLA/激肽釋放酶 4 週，37〇C 1(1) 2(2} 1(1) 26 週，25〇C 3(3) 3(3) 1(1) 26 週， 3(3) 3(3) K1) 52 週，4°C 2(2) m ND ND :未測得 ______29 本紙張尺i適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 520290 A7 B7 五、發明説明（W ) 表8 :於pH値在5·5，包括5%W/W免疫球蛋白（以0·0 2 5 毫克/克或0.1毫克/克之胃蛋白酶處理），10%麥芽糖，（與或不與5 0毫克甘胺酸/克蛋白質）或7·5%麥芽糖（與5 0毫克甘胺酸/克蛋白質），6OmM氯化鈉之液體免疫球蛋白的穩定度經濟部中央標準局貝,τ消费合作社印製通過之組數（試驗之組數）毫克胃蛋白酶/克蛋白質 0,0 2 5毫克胃蛋白酶 /克蛋自質穩定度試驗刪麥雜 7·观麥芽糖觸麥芽糠 7,5%麥芽糠 •5 0毫克甘無甘胺酸 _5 0毫克甘 5 0毫克甘 5 0毫克甘胺酸/克:蛋 _酸/克蛋胺酸/克蛋 :胺酸/克蛋丨__11111: :白質白質白質' . 凝集/杭補髒_ 4 週，37〇C 1議義義議II 2(2) 1(1) 1(1) 1{1> 12 週，25〇C 蒙 ΐΐ 丨 2{2) 1⑴ .1⑴. 1(1) 26 週，4〇C 斷裂/杭德 m 2(2) 1(1) 1(1) :i⑴ _疼 4 週，37〇C 1(1) 2(2) ______ 1(1) UD 12 週，25〇C ND 2<2) ______ 1⑴ Hi) 26 週，4〇C P K A/激 ND 2{2) ΪΙ:1Ι__11 1(1) 1(1) _放酿 4 週，37°C 1丨1晒圓_1 ND ND m m 12 週，25〇C 議讀l_議義義丨 ND m ND m 26 週，4t ND 1(1) m m ND :未測得 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）

Claims

520290 OQ8 8 99 ABCD 六、申請專利範圍 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 8、根據申請專利範圍第7項之液體組成物，其中該激肽釋放酶之等級小於每毫升之含3 0克/升之免疫球蛋白之組成物0 _0 5國際單位（i u )。 9、根據申請專利範圍第8項之組成物，其中該組成物在2 5 °C多於十二週時依然穩定。 1〇、根據申請專利範圍第9項之液體組成物，其中該組成物在4 °C多於六個月時依然穩定。 1 1、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該pH値在5.2 5 - 5_7 5之範圍內。 1 2、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該離子強度在0.0 3 — 0.1 8之範圍內。 1 3、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該離子強度在0.0 4 — 0.2 5之範圍內。 1 4、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該胃蛋白酶處理是在低P Η値下進行。 1 5、根據申請專利範圍第1 4項之液體組成物，其中該已被添加之胃蛋白酶在1 0 - 1 5 0微克/克總蛋白質之範圍內。 1 6、根據申請專利範圍第1 5項之液體組成物，其中該胃蛋白酶處理是在2 0 °C至3 7 °C之合適溫度範圍內及一小時至七十二小時之合適時間範圍內進行。 1 7、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其進一步包括免疫球蛋白A ( I gA)及/或免疫球蛋白 Μ ( I g Μ )。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 χ 297公釐） CJ988 25 ABCD 520290 六、申請專利範圍 1 8、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該免疫球蛋白溶液爲製備自血漿之冷乙醇分離法。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 1 9、根據申請專利範圍第1項之液體組成物，其中該免疫球蛋白溶液被濃縮至8 - 1 2 %W/W總蛋白質且加入濃度爲每一份蛋白質一份穩定劑（W/W)至每一份蛋白質二份穩定劑（W/W)之合適的穩定劑。 2 0、根據申請專利範圍第1 9項之液體組成物，其中該穩定劑爲碳水化合物。 2 1、根據申請專利範圍第1 9或2 0項之液體組成物，其進一步包括濃度達1 0 0毫克/克蛋白質之胺基酸。 2 2、一種製備作爲靜脈內施用之包括免疫球蛋白的液體組成物之方法，其包括步驟： a) 以冷乙醇分離血漿以獲得免疫球蛋白溶液； b) 自免疫球蛋白溶液中去除殘留乙醇； c )調整免疫球蛋白溶液之pH値在3.9至4.5 之間； d)加入濃度在1 0 - 1 5 0微克/克免疫球蛋白溶液之總蛋白質範圍內之胃蛋白酶且在2 0 °C至3 7 °C 培養該溶液一至七十二小時；且 e )調整溶液之p Η値在5 ·0至5 .8之間及離子強度在0.0 3及0.1 8之間。 2 3、根據申請專利範圍第2 2項之方法，其進一步包括在步驟c )後濃縮該免疫球蛋白溶液之免疫球蛋本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) 0588 55 ABCD 520290 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 白至8 — 1 2% (W/W)總蛋白質且加入濃度爲每一份蛋白質一份穩定劑（W/W)至每一份蛋白質二份穩定劑（W/W)之穩定劑。 2 4、根據申請專利範圍第2 3項之方法，其中該穩定劑爲碳水化合物。 2 5、根據申請專利範圍第2 2至2 4項任一項之方法，其中該離子強度是藉由添加生理可接受鹽類而被調整。 2 6、根據申請專利範圍第2 5項之方法，其中該鹽類爲氯化鈉。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐）