TW491852B - An aglucone isoflavone enriched vegetable protein extract and isolate and process for producing - Google Patents

Description

A7 五、發明說明（l ) jj明領Μ 本發明有關s有葡糖芬非糖部異黄酮的萃取物與離析 物產品，其係精由自植物蛋白質材料萃取出溶解物質並在 或更夕之/5 芬處理條件下，將主要的葡糖芬非糖部異 黄酉同轉換成葡糖脊非糖部異黄酉同。其爲1993彳1〇月η日 提出之美國專利申請編號〇 /135，196的部份延績申請。 發明背蓁 、 ，、黃嗣存在於夕種且科植物（legumin〇us pi⑽中，其 中包含黄丑之類的植物蛋白質材料。這些化合物包含黄豆 苷、6”-0Ac 黄豆荅（daidzin)、6，，_〇Mal 黄豆苷（ — Μη)、 黄豆苷原（daidzein)、染料木苷（genistin)、6，，_〇Ac染料木 苷、6-OMal染料木苷、杂料木因（genistein)、大豆蛋白 (glycitin)、6”_0Ac-大豆蛋白、6，，-〇Mal 大豆蛋白（glycitin)、 大豆蛋白原（glycitein)、生物卡因（bi〇ehanin)A、7-羥-4，·甲 氧異黄酮（formononetin)、及柯默斯醇（coumestrol)。這些化 合物典型地與本有苦味的黄豆聯想在一起，並在化學產品 中（如離析物及濃縮物），焦點爲將葡糖苷糖部異黄酮自這些 材料去除。例如，在利用鹼性水溶液媒介來萃取大豆片以 生產大豆蛋白離析物之習用方法中，許多異黄酮在萃取物 中係溶性的，可藉去除上清液而被去除。留在酸沈澱蛋白 貝離析物中的殘餘異黄酮通常以清洗亦黄顚1之方法來除 去。 最近吾人已獲知植物蛋白質（如大豆）内所含的異黄 酮’能夠抑制人體癌細胞之生長，例如下列文獻所述之胸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐』 (請先蘭讀背面之注意事項再填寫本頁) -I I n I I ϋ ί > -1 n n i 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 YHW-D:\Mavis\PU>039-0001 -2 2001 /1 /5 491852 Α7 Β7 五、發明說明（2) 部癌細胞以及衰竭癌細胞（prostrate cancer cell) : 1991年8 月 3 1 曰彼得生（Peterson)及伯淫（Barnes)發表於 Biochemical and Biophysical Research, Communications 卷 179，第 1 號，第 661-667 頁之 “ Genistein Inhibition of the Growth of Human Breast Cancer cells，Independence from Estrogen Receptors and the Multi-Drug Resistance enew ； 彼得生及伯注於1993年在The Prostate第22卷，第335-345 頁所發表之 “ Genistein and Biochanin A Inhibit the Growth of Human Prostate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Autophosphorylation” ; 伯；圼等人於 1990 年在 Mutagens and Carcinagens in the Diet，第 23 9-23 5 頁發表的 “ Soybeans Inhibit Mammary Tumors in Models of Breast Cancer” 。 上述的異黄酮，數種以附著有葡萄糖分子之糖苷或葡 糖苷糖部之形式存在。數種葡糖苷糖部（6，，-OAc染料木脊） 含有附著在葡萄糖分子第六位置上的乙酸酯族。雖然皆是 異黄酮（包含在醫學上最有研究價値之糖苷），最受注意的爲 不附著葡萄糖分子的葡糖苷非糖部異黄酮，此異黄酮的水 溶性不及葡糖苷糖部異黄酮及異黄酮糖苷。此異黄酮可分 爲成黄丘誓原（daidzein)、染料木因（genistein)及大豆蛋白 原（glycitein)。這些葡糖荅非糖部有下列之通式： r2 r3 〇 本紙張尺度適用中國國家標準（cnsA規格咖x 297公爱》-^--— 5 YHW-D:\Mavis\PU-039-〇〇〇i ·2 2001/1/5 (請先Κ讀背面之注意事項再填寫本頁) -0--------訂------ 線· 491852 痤齊印皆tt》讨菱苟員11肖費AW口乍'i沪提 A7 ____ _—— B7 , 五、發明說明（3) 黄豆荅原（daidzein) : R^OH、R2 = H、R3 = H 及 R4 = 〇H ; 染料木因（genistein) : r^oh、r2=h、RfH 及 r4 = 〇h ; 大豆蛋白原（glycitein) : RfOH、r2 = H、R3 = h 及 r4=〇h 其中Ri、R2、R3及r4可選自H，〇H，〇CH3所組成之群。 因此本發明係揭示一種葡糖苷非糖部及一種富有這類材料 的植物蛋白質離析物。 熟知本項技術者已知轉換葡糖苷糖部異黄酮成葡糖苷 非糖邵異黄酮之方法，例如歐巴塔等人之曰本專利申請第 25 8669號。這類加工僅可轉換部份的葡糖苷糖部異黄酮， 因此在大量的商業操作上不適用。此外，第669號中所述 揭示從虫白貝去除兴黄嗣之方法，但未描述如何製備富有 葡糖芬非糖部異黄酮的蛋白質抽出物或離析物。因此，對 於將大部份或一定程度以上的異黄酮轉換成葡糖苷非糖部 異黄酮的加工而言，存有需求；亦有一需求對於以生產富 有葡糖苷非糖部的蛋白質萃取物或離析物。 因此，本發明目的係提供富有葡糖苷非糖部異黄酮之 蛋白質萃取物及離析物，以及其製造方法。這些，以及其 它之目的，可以具體從下文對本發明之詳細描述獲得。 發明概沭 本發明提供富有葡糖苷非糖部異黄酮的植物性蛋白質 提出及離析物，以及其生產法。生產這萃取物之方法包括、: 以pH値高過植物蛋白質材料之等電點的萃取物萃取含葡 糖苷糖部異黄酮組成之植物蛋白質，並以足夠將大部份之 萃取物的葡糖苷糖部異黄酮轉換成富有葡糖苷非糖部異 黄酉同的時間、溫度、pH値環境下，利用„或更多之f糖 本紙張尺度適用f國國家標準（〇^从4規格（21〇\ 297公釐2 """" ---- 6 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5 Γ讀先K讀背面之注意事項再填寫本頁)

491852 A7 五、發明說明

苷酶使葡糖㈣部異黄酮發生反應。本發明亦提供生產這 類萃取物之方法，其中在萃取物中添加額外的心糖芬酶以 生成富有葡糖苷非糖部異黄酮之萃取物。本發明進一步提 供：獲得富有異黄酮之蛋白質離析物之方法，其係調整前 述萃取物之Ρ Η値大於蛋白質材料之等電點，以沈澱蛋白質 =生，富2葡糖*糖部異黄酮之蛋白f離析物。將所生成 富有葡糖芬非糖部異黄酮之離析物可被分離及乾燥，以形 成乾的離析物。此外，本發明提供將具較高回收率，以自 植物a白貝材料中生成葡糖苷非糖部異黄酮之方法。 較佳翥施例詳舳拔被 雖然本發明大豆產品之相關内容來描述，但是本發明 方法-般亦能應用於含有異黄酮之植物蛋白質來源來生產 蛋白質提出物及離析物’爲黄豆材料之植物蛋白質爲一 例。同時，根據研究，本方法特别適合從大豆材料生產富 有葡糖*非糖部異黄_之提出物及離析物，“黄豆材料” 在本文中係指黄豆或任何黄豆衍生物。 依照較佳的離析或抽出物實施例，起始材料爲已利用 溶劑萃取掉油脂之黄豆片。黄豆片以pH値高過此蛋白質材 料之等電點的水溶液萃取劑來萃取，適當阳爲6 〇 ι〇 ι〇, 最佳爲6.7-9.7。如果想提高水溶液萃取劑之pH値，可以 使用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化約之類的鹼性反試劑。 吾人所欲得到的異黄酮化合物可溶解於水溶液萃取劑中。 爲了在水溶液萃取中有最大之回收率，故需控制使其在黄 且片與卒取物之重量比於—定値，以儘可能地溶解此蛋白質 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297^^· YH W-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -AW---------訂·-------線.

五、發明說明（5) 材料内本有的異黄酮。 蛋白質及異黄酮之萃取可由多種方式來進行，其中包 含以8 : 1-16 : 1之萃取劑水溶液對黄豆片的重量比來逆流 萃取黄豆片，其中最初之萃取物被用來萃取黄豆片，並產 生蛋白質及異黄酮之水溶液萃取物。此外，亦可使用二個 步驟之萃取法，其中萃取劑對大豆片之重量比在初始步驟 約爲10 : 1，然後在萃取劑對大豆片之重量比約爲6 : 1或 更低下，用新鮮之萃取劑第二次萃取大豆片，因此，二步 驟中萃取劑對大豆片之結合重量比不會超過約1 6 : 1之萃 取劑對大豆片的總重量比。

除去不溶物後，含有溶解性異黄酮的蛋白質水溶液萃 取物由一或更多乃-糖苷酶來反應以將大部份的（最好爲全 部的）附著有葡萄糖分子之葡糖苷糖部形式的異黄酮轉換 成葡糖非糖部異黄酮。乃-糖苷酶的最佳反應pH値範圍取 決於所用万-糖苷酶之種類，但典型地約在之間。反應 則’將萃取物之pH値調整至酶反應之最佳活性範圍内。pH 値藉食用酸（如乙酸）、硫酸、磷酸、氰氣酸、或其它合適反 應酸來調整。 石-糖苷酶可能天然地存於黄豆材料中，或由微生物 生長所分泌，即本文中所指的“殘留”酶，也可能係添加 至蛋白質萃取物的。添加的酶在本文中係指“補充，，酶。 一般而j，如果黄豆材料或萃取物内殘留酶之濃度不足以 將大部份（較佳地係實質地全部的）葡糖苷糖部形式之異 黄酮轉換成非糖部的形式，則需添加補充酶。足以完成異 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐 YHW-D:\Mavis\PU-039-000l -2 2001/1/5 (請先閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線- 經齊部智慧財產局員X-消費合泎杜印製 491852 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（6) 黄酮之轉換的酶數量係取決於多種因子，其包含酶之種 類、酶之濃度分布、系統之pH値、酶之活性。一旦具有 足夠之S每濃度（無論是殘留S每、補充酶、或此二者），則萃 取物中的〉谷角f性異黄g同魚和乃-糖芬酶一段時間、溫度、 pH値反應下，以使至少大部份（且較佳地實質地全部的） 含於萃取物之葡糖苷糖部轉換成非糖部形式。 較佳的補充-糖苷酶包含Bi〇pectinaSe i〇〇L及 300L(商名）、Bi〇pectinase 0K 7〇L(商名）、Lactase ρ 及 Lactozyme(商名）。Lactase F購自維吉尼亞州特洛依市郵 政信箱1〇〇〇號之亞馬諾國際酶公司（Aman〇 international

Enzyme Co.)，其最佳pH値範圍約4_6 ; Lactozyme係購 自丹麥巴格斯維德市（BagSvaerd)，瓦工業公司（n〇v〇

Industries)的酶支部，其最佳ρΗ値範園約7。Biopectinase 10 0L、Biopectinase 3 00L·、Bi〇pectinase ok 7 0L· 係購自佛 維里達州撒拉索它（Sarassta)市的克斯特國際公司。以足 以使至少主要且較佳地實質地全部的葡糖苷非糖部異黄 酮轉換成非糖部的量來添加補充酶。例如，當必須添加補 充酶時’酶之添加量约蛋白質沈澱物乾重之〇.5_5 %。 其它合適的酶爲酯酶。這些酶一般被認爲非常適合本 又所述I較佳實施例，因它們將異黄酮接合物上的乙酸酯 及丙一 酯除去，而將乙酸酯及丙二酸酯接合物轉換成葡 糖苷非糖部異黄酮。在最佳之實施例中，乃_糖苷酶及酯 酶均被使用。 較佳的貫施例係單步驟流程，並在短時間内，很簡單而 本紙張尺度賴㈣國冢標準（CNS)A4規格（21G X 297公釐） 9 YHW-D:\Mavis\PU-〇39-0〇〇i -2 2001/1/5 (請先闓讀背面之注意事項再填寫本頁) -—-----—訂---------* 線. 491852 A7 B7 五、發明說明（7) 經濟的取得非常高程度異黄酮（由糖部變成非糖部）轉變程 度。在本文中“單步驟”反應流程係指反應期間維持一定 的反應參數。這些反應參數包含pH及溫度。 非常高程度的轉換爲至少主要的（且較佳地係實質地 全部的）糖部形式異黄酮被轉換成非糖部形式。“主要的” 係指葡糖苷糖部異黄酮轉換成葡糖苷糖部異黄酮的範園至 少爲50%。“實質地全部的”係指葡糖苷糖部異黄酮轉換 成葡糖苷糖部異黄酮之範圍約至少8 0 %，且最佳地至少約 90%。 雖然不希望被任何理論所限，一般咸信在本文中所述 流程之令人驚Ϊ牙地向度的轉換係起因於單步驟反麻期間反 應參數之結合。反應系統之pH値被維持係較佳的，其値大 約4-8，且最佳的爲在酶與異黄酮接合物反應前，維持於酶 取活跟的値。反應系統之溫度在反應期間被維持於* 〇 ο。至 601之間係較佳的，且最佳地係60。〇。就一般而言，所需 以藉由本文所述之單步驟流程來轉換實質地全部的葡糖替 糖部異黄酮成葡糖苷非糖部的時間約2_24小時。 與一或更多召-糖苷酶反應之後，以酸來降至黄豆蛋白 質的等電點，通常約4·5_5·0且較佳地爲4·4_4·6。pH値被 調整至等電點’使S含較不溶性的葡糖:y：糖部異黄酮之蛋 白質沈澱成硬塊狀後，塊狀或沈澱的蛋白質與乳清分離（藉 離心來完成）以形成s有葡糖替糖部異黄酮之蛋白質離析 物。 較佳的施行例中，即使非糖苷異黄酮較其它異黄酮不易 ^紙張尺度通用中關家標準（CNS)A4規格（21G X挪公釐& YHW-D:\Mavjs\PU-039-0001 -2 2001/1/5 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) .·--------訂—— 491852 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（8) 溶於水中，仍應盡量避免或減少水洗蛋白質沈澱物以減少 自沈殿物中去除葡糖苷糖部異黄酮的量。故可避免以水洗 此酸性蛋白質沈澱物，或限制以水對蛋白質重量比爲2 : 1 至6 : 1的比例水洗沈澱物。在未經水洗的酸沈澱物中可以 有一定比例的葡糖苷糖部異黄酮，若施以多次的水洗流 程，則其量較低。適量的水洗可以使蛋白質分離物中具有 乾重1_5至3.5mg/gram的染料木黄酮，1.〇至3.0mg/gran] 的黄豆苷。 酉艾沈殿的蛋白質以離心或濃縮來除水，並以習用方法 乾燥。較佳的實施例不打算受除水法的限制，雖然以習用 足乾燥技術（如喷霧乾燥）來形成乾燥離析物之方法係較佳 的。本文所述之加工提供非糖荅異黄酮之量被增加的離析 物。 本發明亦提供從植物蛋白質材料（如大豆材料）回收非 常南比例之異黄酮的方法。本文所述流程所取得之回收程 度係典型地至少5 〇 %、較佳地6 5 %、最佳地8 0 % (係以起 始植物蛋白質材料内所有形式異黄酮之總重爲基準）。雖不 欲被某理論所侷限，但一般咸信本文所述之轉換反應所得 的同回收率係伴隨著多種加工操作。藉由在某加工條件下 轉換較具溶解性的糖部異黄酮接合物成較不具溶解性的葡 糖苷非糖邵形式，可自餵入材料中回收高比例的異黄酮產 物。 實驗 下列例子描述本發明具體而非限制的實施例

YHW-D:\Mavis\PU-039-〇〇〇-i 2001/1/5 (請先蘭讀背面之注意事項再填寫本頁) ·· n aiBi in 1 n I ί Γ , I mm aw aw mm 線· 491852 A7 ——— ---- …„ B7 limr 1 1 1 iwi^mun mu I nr—ητΙΜ,ιι 五、發明說明（9) 將5克的提出的、去脂的大豆片（粉）添加至5克的水中 來配製樣本，將pH値調至7-8。將〇 25克之Lactase F或 Lactozyme添加至每一個懸浮液中，使每樣本内酶之固體濃 度約5wt%。樣本在4〇及6(rc下培養。在酶被添加（t = 〇)， 且在標的溫度培養24小時後，先取出次樣本。培養24小 時後含Lactase F或Lactozyme的大豆片（粉）内的異黄顯j之 改變或分布百分比被示於表1。樣本在添加補充酶之前未殺 菌，微生物及污染物之生長並未抑制。 {請先讀背面之注意事項再填寫本頁) - n n n 1 !· B—^OJI ϋ I B— n 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001 /1 /5 491852 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（10 「Ο 呈吾S Of ri ΤΓ 04 o g ^ ξΓ > a £. ^ 11^- cv ^fi 11S Cf y <=> s go ^ g ^ ;<7 d -4^ is * 7 tn to -li. s ^ K> 各 5；. Q m ^ i -H 2 cr； i > d > n 一 — 1^. Os S〇 r»j uj- t〇 IV> *A Ul· «I M o cn 这i □ :z Ο O C3· Ο O C3 ς? o s Ο O -Q o Q tr! ^ | i οο οο οο .以 Ο 4^· c^n >0 00 'vj -J 上 \〇 U^i ί^ι ^k. 一 OQ 在 o cn ^ | m & ^fe. -Ξ ^ ro |VJ ^ C丨 ^ 1 rs 1 s: > > n to h〇 ο -^- t-O «Q Ο O ^ ^ W V-^i V^T Ό — -4 □ > ^ 3 5 crs w w cs ^ ro O VA 〇 —C5 .~1 o > 忒5 £] S 〇\ \J> s so 〇 Jb. 1^1 •^1 Urt vs C?N W ^ C3- 私 Cji 〇〇 -a 〇\ i f ►—1 _ l-*H ^ σ S Ο 〇 o o o 〇 〇\ O C3 O KJ bO o r'^H Q 5 q> 6 Ξ > i--- -ϊ^ to Ο Ό hi NJ CO — 〇 O ISJ 卜-3 /-s W J —i 〇Q ^ OO G\ ^ o 一 y ! ^ -〇 —- Ljn O -^J ：C3 O cn L ,1 > (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂i 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 13 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5 491852 A7 —_____ B7 ............ .....Hill---------------1 Ί ΓΓΙΤΈΙΙΙΙ-------- .., irr，|Μ||1 Iu 五、發明說明（】p 這些資料指出殘留酶及補充酶之結合所取得之轉換程度。 殘留酶的來源爲微生物滋長或内生的大豆酶。pH値爲8、 6(TC、24小時之培養下，大豆片（粉）内異黄酮接合物明顯 地轉換成葡糖苷糖部異黄酮。本文中所述之每一異黄酮的 濃度係基於各種異黄酮之總量。 另一組樣本係16%的脱脂大豆片水懸浮液。樣本之pH 値調至4.5及7，並在45 °c下培養24小時。次樣本在0及 24小時時取出。所有之樣本均分析異黄酮成份。表2顯示 出ρΗ4·5及7、45°C下，培養24小時之脱脂片的異黄酮分 布百分比之改變。 LI! i—Aw--------tr--------'綠 (請先閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 14 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5 491852 A7 B7 五、發明說明（ 經齊郎智慧时¾¾員二消費合阼达印製 II Ο· JJ, *^1 , 坤！^ F g p e 管 « > A s m : 〇 § #圉 2 〇rs ί > r" C i p ^ to-to j oo i i 念· 〇 ^ i « 1 〇 · i O ^ i ； z b」 g 1 ZjT^ "; ^ 1 1 1 京％ § ON i ：l 广； 〇v ； 0 ： > 1 l 1 CP= j 1 ! ζ—-J ^ § ; s ; 1 1 i -U j j 运: 2 ! 匕 σ ^ § - 〇> ，1 s 之 w p 容ο i ί : > 1 NJ ο ^ G £ (請先闓讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----- 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 15 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001-2 2001 /1 /5 經齊部智慧时轰咼員X消費合阼fi印製 A7 B7 五、發明說明（j 這些資料指出藉蛋白質殘留酶所得之轉換程度。異昔_於 阳値爲7、仰之溫度、24小時培養後，明顯地轉換成葡 糖芬糖邵異黄g同。 於其它系列之實驗中，試驗本發明從黄豆衍生之蛋白 質離析物内的染料木因及黄豆苷的回收百分比。回收率取 決於離析物内染料木黄酮（或黄豆芬）的數量，其値（％)是以 黄且起始材料内各型染料木黄酮或黄豆替總量爲基準。以 1000克水萃取1〇〇g之黄豆粉，水之pH以氫氧化鋼調整至 9.7(32 C下）。这樣子提供10 : i的水對黄豆粉重量比。從 提取物中分離粉末，再以600g、PH=9 7，於32艺下的萃取 物水溶液再萃取。第二萃取步驟提供6: i的水對粉末重量 比。以離心來分離粉末，將第一及第二萃取物混合，將 値調整爲4 · 5以形成大豆乳清與酸沈澱塊淤漿。淤漿被加 熱至50 C並添加沈澱快乾重量的2%的Lactase F酶。淤漿 允許在501：下反應16小時，以確保葡糖苷非糖部異黄酮完 全轉換成非糖邵形式。藉由離心從乳清中分離酸沈澱塊， 以形成富有葡糖苷糖部異黄酮的離析物。避免更進一步地 以水清洗沈澱塊。離析物中之染料木黄酮回收率爲起始大 豆材料（脱脂大豆粉）内各種染料木苷及染料木黄銅的86 %。相似地，黄豆苷回收率爲7 5 %。 下文係定量大豆產品中異黄酮之方法的描述。異黄酮 攸大豆產品中’以0 · 7 5克樣本（喷霧乾燥或細緻研磨的粉 末），及50ml的80/20甲醇/水溶劑之混合物來萃出。在室溫 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（^"297公f ) 16 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001-2 2001/1 /5 (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁)

491852 A7 B7 五、發明說明（ 下’以軌道震盪機搖晃混合物2小時。2小時之後，以

Wl^man 42號濾紙過遽到未溶物質。以4m]水、甲醇 稀釋5ml之濾液。 利用含Beckman Cl8反相管柱的HpLC(高性能液相色 層分析儀）來分離所萃取之異黄酮。異黄嗣被注入管柱内， 先用自88%甲醇、1〇%水、2%冰醋酸至98%甲醇和2% 冰醋酸梯度淘析。在0.4ml/min之流速下，所有之異黄酉同： 染料木每、6-0-乙醯染料木芬、丙二酿染料木普、染料木 苷因黄酮、黄豆苷、6_〇_乙醯黄豆苷、6本丙二醯黄豆苷、 =豆Μ、A豆蛋白及其衍生物及大豆蛋白《，均被完全 解析。波锋彳貞測是利用262 mm @ uv。波峰再藉質譜儀來 鑑别。 丨利用紐澤西州薩摩維爾市之印多分化學X司 (IndofineChemical Company)所售的純標準品（染料木苷染 料木黄酮及黄豆苷）之積分面積與濃度比（反應因子），以定 量未知樣本。就無標準品的共輛形式而言，反應因子被假 設爲親本分子的反應因子，但以分子量差校正。大豆球蛋 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 白之反應因子被假設爲已校正分子量差的杂料木黄酮反應 因子。 本方法提供各種異黄酮的數量。爲了方便起見，總染 料木因、總黄豆芬原、總大豆蛋白原均被計算，並代表這 些化合物之總合重（假設所有之共軛形式均轉換成每各自 非共軛的形式）。這些總量亦能夠以酸水解來轉換此接合物 形式的方法直接测量。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5 17 491852 A7 —祕_~^_ Β7 ' I I Τ > ! ，——Tr, M , 「了聊…祕,細 _ 丨丨_. __ _ __ ____ 五、發明說明（15) 應瞭解前述僅是本發明較佳之實施例，並且不離開後 文申請專利範圍所述之精神及較廣泛範圍下可以形成多之 改變及替換，其中該範圍係依照專利法原則（包含均等論） 來解釋的。 (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 訂---- 線，擎 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 eamem n _il n 1 n f 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 18 YHW-D:\Mavis\PU-039-0001 -2 2001/1/5

Claims (1)

1. 491852 年月Θ修正 JL3e，補充 _ . A8 B8 、 A C8 /,V l 六、申請專利範圍 w ------------------------------- 1、一種生產葡糖苷非^ 質萃取物之方法，包括 a) ^ 5高於該含有葡糖荅糖部異黄酮的植物蛋 ^貝之寺電$的萃取劑水溶液來萃取，以產生含 有蛋白貝及葡糖苷糖部異黄S同組成之萃取物水溶 液； 換，葡非爲40 轉下該苷値馬 J时d糖Η度 黄ΡΗ反葡Ρ溫 異、來富 、系 、部度SI豐W Γ 糖溫酷量實時 内、及含又 物間酶產W4, 取時ί甘生Μ 2 萃的糖而|'至 該酮葡因，2 的黄/?，^爲 要異種酮1間 主部一黄萃時 少糖少異的應 至非至部酮反 將苷的糖黄該。 以糖量非異，0°c 足葡足《甘部106 在成以糖糖4-至、/ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) l·. 2、 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中萃取實施的 PH 値爲 6.7-9.7。 3、 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中pH値在步 驟（a ) 4至8 。 如°4* — 111111 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4、 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中pH値爲4.5。 5、 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該時間爲 24小時。 6、 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該溫度爲 60〇C 〇 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該時間爲 24小時，溫度爲60°C，PH値爲4·5。 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中該植物蛋白 質材料的萃取包括雙重萃取。 7 本紙張^度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） \\丁丨的\〇\咖3〇-\^(1\專利\申請專利範園\PU039-0001-claim-20〇2〇4i! d〇( 六、申請專利範 圍 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9、卞申請專利範圍第1項所述之方珐，其中該萃取劑 該植物蛋白質材料之重量比爲8:1至1 6:1。 1 〇、如申請專利範園第1項所述之方法，更進一步包括： (c) 將該葡糖苷非糖部異黄酮萃取物之pH値調整至靜 植物蛋白質材料的等電點以沈澱該蛋白質材料；μ (d) 分離該沈澱的蛋白質材料以生產含量豐富葡糖 非糖部異黄酮之蛋白質離析物。 11、 如申請專利範圍第10項所述之方珐，其中避免 析物之清洗。 0 12、 如，請專利範圍第1〇項所述之方法，其中用重量低 $該沈殿的蛋白質材料之6倍的水來清洗該離析 物0 1 3、如^請專利範圍第12項所述之方法，其中用重量低 ^该沈殿的蛋白質材料之4倍的水來清洗該離析 物0 14、 ^種利用申請專利範圍第1項所述之方法所產生之 ^有含量豐富葡糖苷非糖部異黄酮之蛋白皙離析 物。 ， 15、 Ϊ t請專利範圍第1項所述之方法，其中該植物蛋 白貝材料包括大互材料。16、 ί申y專利範圍第1項所述之方珐，其中實質地全 =的葡糖苷糖部異黄酮被轉換成葡糖苷非ϋ部異黄 θ|°] 〇 I---------------------訂 -------- rtt先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 17 種從植物蛋白質材料回收至少5 %的異黄酉同 之

   \\Tina\c\Hsia〇-WenV^_】\申請專利範圍 \pu〇39-00〇1-claim-20020411.doc 491852 六 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 水白組 劑蛋酮 取性黄 萃物異 的植部 點之糖 電成苷 等組糖 之酮葡 異、來苷 部度酶糖 糖溫酯葡 荅、和有 糖間酶富 葡時苷產 該的糖生 内酮葡而 物黄>δ因 取異種， 萃部一鋼 ·， 該糖少黄物 的非至異出 要芬的部提 主糖量糖的 少葡足苺酮 至成以糖黄 將換b葡異 以轉iT該部 足酮t應糖 在黄PH反非 b /V A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 方法，包括： (a)以pH値高於該植物蛋白質 溶液來萃取葡糖菩糖部異黄 質材料，以產生由蛋白質^ 成之萃取物水溶液； (c) 調整該萃取物之pH値至該植物蛋白皙 以沈澱該蛋白質材料； 〃、j守电m (d) 分離該沈澱的蛋白質材料以回收含有至 該植物蛋白質材料内葡糖苷異黄酮的離析物/ ^ 18、 如申請專利範園第17項所述之方法，並中 於召糖及酯峄所組成之群。 /、甲以係揭 19、 如申請專利範圍第18項所述之方法，並中 該植物蛋白質材料内的異黄酮被回收於該離和 2〇、如申請專利範圍第19項所述之方法，並 孩植物蛋白質材料内的異黄酮被回收於該離本 21、 ；ίΪΚί;ίί:。所述之方法，其中該植㈣ 22、 ，申_請專利範園第1項所述之方法，其歹 系忒細與该葡糖苺糖部異黄酮反應前最活躍的。L 本紙張尺度巾國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公愛)—— -------- c .丨丨——----丨--------訂-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) \vrina\cMHSia<>Wen\娜巾請專利娜pu咖侧⑽