TW445296B - Process for the inactivation of viruses with the aid of acridine or acridine derivatives - Google Patents

Description

445 296 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（1 ) 詳細説明 本發明係有關使用淀或淀衍生物，較佳為與苯並 烷銨氯化物組合，以去活化被膜病毒或未被膜病毒之方法 。根據本發明之方法較佳為於其生物活性實質上被保留之 蛋白質存在下進行之。 多年來已知未經處理的人類血漿或血清含有人類病原 病毒，例如Η I V、HBV或HCV，彼等，若傳送給敏 感的接受者，會引起嚴重的疾病，例如A I D S或肝炎。 為了防止這種潛在的病毒傳送，從人類血漿或血清製取治 療劑時，一方面，只用預先選定的起始物質，其就任何人 可判斷之範圍為不含病毒；另一方面，於製備過程中，進 行病毒一去活化/排除步驟。以嚴厲的措施建立所用病毒 —去活化/排除法之效力，並不斷地予以檢驗。 除了物理性之病毒去活化法外，製備所述治療劑之化 學性病毒去活化法也為一般已知。特別時常被討論之化學 法為S D (溶劑/清潔劑）法，其適於將被膜病毒（亦即 被含有脂質之膜圍繞之病毒）去活化，惟具有決定性的缺 點為對所有已知之未被膜病毒完全失效。此外，也沒有其 他已知之化學方法適於將未被膜病毒去活化，且同時保留 治療劑或人類血聚或血清的蛋白質成分之生物活性。 雖然化學性病毒去活β化法僅屬物理方法之增補性能， 以及雖然可能被血液或血液產物傳送之大部分病毒帶有脂 質被膜，為了安全之故，對於也可確實地將未被膜病毒去 活化的有效可用之化學去活化法實有特別的需求。在最近 —3— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -'5 經濟部t央標隼局員工消費合作社印裝 445 2 96 A7 B7 __ 五、發明説明（2 ) H A V與小D N A病毒（例如小D N A病毒B 1 9 )被 討論為係可能被血液流體或血液產物傳送之病毒時，此等 需求愈為強烈。（Vox Sanguinis 6 7，Supplement 1 ，1 9 9 4 : Proceedings of a Symposium held at the New York Blood Center ) 0 本發明也基於發展出工業上可利用的化學性病毒去活 化法之目的，其係將被膜和未被膜病毒（例如小D N A病 毒）去活化，而保留存在蛋白質（例如治療上有用的蛋白 質）之生物活性。 根據本發明，將吖啶或吖啶衍生物加到含有蛋白質之 待處理液體中，可達成上述目的。更今人驚奇地發現吖啶 或p丫喊衍生物將被膜和未被膜病毒去活化。p丫途衍生物為 ，例如，伊他淀（ethacridine )、9 —胺基τ*丫淀（=胺 淀）、3，6 — τ»丫 喊二胺（proflavine )、κ丫索素（acrisorcin )、p丫淀贊氯（Acrizane chloride )[二苯v丫淀丹氯 (phenacridane chloride )]、吖喊橘、喳吖因、吖西得 (acricide )、<淀酮、”丫喊—9 —獲酸、η丫安聶（acranil )(1—[(6—氯一2—f氧一9—吖啶基）胺基]一 3-(二乙胺基）一2_丙醇二鹽酸鹽）、3，二胺基一 5 —苯基啡畔錯氯（苯基番紅花紅，Safranin B Extra )、 啡呤畊、啡，塞畊和特別是七啶黃素（3，6 —二胺基一 10 —甲基吖錠氯與3，6 —吖啶二胺）及其鹽，例如氯化鹽 、硫酸鹽、溴化鹽。 令人驚奇地，更發現吖啶或吖啶衍生物與苯並烷銨氣 __4_ 本紙張尺度適用中國围家標準（CNS ) A4規格（2ΐ〇χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本萸) 訂 浓 445296 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ A7 B7 化物的組合，在病毒去活化過程中扮演增效 组合物比各早-物質的病毒去活化程度更高。，、印 根據本發明之病毒去活化法可以 血清、血·漿、血液產物、II、、 ' 液、 n〜 座物尿囊瑕或牛奶施行之。病毒丰< 化作用係於ρΗ3至1〇哎5$q彳# .,, 去'舌 漿溶液中）及m " 列 血清或血 及中）幻C至"。c，較佳為2 〇r 佳為從2 〇τ至4 〇。〇，或2 =更 :並延續Η分鐘至10小時，較佳為2^：^：^ 毒去活化作用中，使用濃麼A 7 Λ ± / 两 沈用，晨度為1 . 〇克/升一0.00001多 /升或1 , 0克/升一0.004克/升，較佳為〇 _ 1克〆 升一0,001克/升之吖啶或吖啶衍生物，及濃度為〇 ,工 克/升一0.004克/升，較佳為〇 〇5克〆升—〇 〇1克 之苯並燒按氯化物。 如果需要將吖啶化合物和苯並烷銨氯化物從蛋白質溶 液中去除，則可利用簡單、已知之方法，例如於活性碳上 之吸附法或透析法。 根據本發明的病毒去活化法之另一優點為對欲處理物 質蛋白質成为之廣泛保遵·各種生物活性，例如抗體活性 與凝塊活性，未減少或僅減少至可容忍的程度。 根據本發明的病毒去活化法因此可用於消毒下列物質 * —含蛋白質溶液（稀釋或濃縮液） 一血液或血液產物；涵蓋液體和細胞成分 一 J&L清、血漿 5— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） :裝. -so 445296 A7 ____ B7 五、發明説明（ 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 一尿囊液 一器官抽取液 —牛奶 一緩衝液 —發斷劑抗原 —疫苗、疫苗抗原 根據本發明的病毒去活化法進一步地、.、、 的病毒污染（例如，區域、設備、流出液、有型式 、、、☆*_ 成廢棄物和表面 )<涓毒。被病毒污染的器官移植物（例 ^ 、燜如角膜、腦膜、 肝、心臟、肺或腎）之消毒也可行。 茲以下面實例對本發明作更進一步之說明。 於報據本發明方法中通常使用之法 病毒：於組織培養液中以已知方法複製；將病毒收取液離 心，作為進一步研究之起始物質用。 於微量培養皿中測定感染力價一八重複之0 _ i毫 升/〜稀釋階段一利用雙滴定法。 貯存伊他吖啶乳酸鹽（EL )強度3 %之蒸餾水溶液 液：Entozon® ( E ) 吖啶強度3 %之蒸餾水溶液 吖啶黃素（A ) 強度1 %之蒸餾水溶液 苯並烷銨氯（BACi ) 1 0 %之蒸餾水溶液 般實驗方法： 將9份缓衝液或培養基或蛋白質溶液與1份病毒混合 _6— 本纸張尺度適用中國國家標率（CMS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-·* Γ 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 4 5 2 9 6 A7 B7 五、發明説明（5 ) 。然後加入各個實例所示之貯存液用量，持續攪拌，接著 進行病毒滴定。歷經各個實例提及的時間和溫度後，除去 試樣，再次進行滴定以測定與過程相關之病毒去活化作用

研究病毒之種類 縮寫 P I 3 V B P V P P V I B R V B V D V C P V B A V - 1 R e 〇 -3 流行性感冒A 流行性感冒B 名稱 牛副流行性感冒3病毒 " 牛小DNA病毒 : 豬小D N A病毒 j 感染性牛鼻氣管炎病毒/ 牛病毒性腹瀉病毒 I 犬小D N A病毒 .\ I 牛腺病毒1型 \ 呼吸道與腸道病毒3型 流行性辱冒A病毒一山東 流行性感冒B病毒一巴拿馬 本文所用之其他縮寫/名稱

ΕΜΕ培養基 Berlate® P

Haemate ⑧ P 伊格爾氏最低營養要求培養基 凝塊if子VIII : C濃縮液，經滅菌（ Behringwerke AG ， Marburg ， Germany ) 得自凝塊因子VIII和Von — Wi 1 lebr and -7— 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 445 2 9 6 A7 B7 五、發明説明（6) 因子之濃縮液，經滅菌（Behringwerke AG ， Marburg ， Germany)

Beriplex®P 經滅菌之凝血酶原複合濃縮液（

Behringwerke AG，Marburg，Germany )

Veniramun® 供靜脈内用途之人體多價免疫球蛋白製 劑（7 S )( Behringwerke AG ， Marburg ， Germany)

Entozon⑧ 含下列成分之製劑·· 1克粒劑中含有0.059克二甲氧基-6 -硝基一9 —[( 3 —二乙胺基一 2 —幾基 )丙胺基]吖啶二鹽酸鹽和0.295克伊他 11 丫峻乳酸鹽（ASID Veterir^r Vertriebs GmbH ) Q A E纖維素 二乙基一2 —羥丙胺乙基纖維素（純化 蛋白質用之離子交換劑） F C S 牛胎兒血清 實例1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 利用BACI之PI3V去活化作用 將PI3病毒.和BAdl與ΕΜΕ培養基混合，於3 7 °C之水浴中予以保溫。經所示時間後，測試試樣之病毒去 活化作用。結果示於表1。 —8—— 本紙張尺度適用令國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） #45 2 9 6 A7 87 五、發明説明（7)

^__L 37 °C時BACI對PI3病毒之去活化作用 時間（小時） 加入BACI (毫克/毫升） 病毒力價實驗値 (i〇gl〇/毫升） 病毒去活化作用 毫升） 0 對照組 7.4 • 0.1 ^1-5 Ϊ=5.5 0-0.031V 0.005 si *5 a5.9 0*025 6,0 X.4 0 0125 6,9 0.5 0 對照组 S.Q 1 0.05 si. 5 si. 5 . 3 ϊ=5 + 3 0-025 si, 5 £=5 + 3 0-0125 5.5 1.3 1 )與加入BACI後，將反應批次充分混合的時間相同 如表1結果所顯示，Pig病毒非常迅速地被高劑量 BACI ( 0.1毫克/毫升，〇.〇5毫克/毫升）去活化，亦即 ，將含病毒試樣充分與B A C I混合，取試樣滴定之以測 定PI3病毒的感染性，經過這些時間後，已無法測定出感 染病毒了。從另兩個BAC I測定濃度（0.025毫升/毫 升和0.0125毫克/毫升）可清楚地看出濃度與時間之關 連性。 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 ----------7=--装-- \ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本萸) 實例2 ： 利用BACI或Entozon之病毒去活化作用 將表2所示之病毒品系以BACi或Entozon處理並於 4 5 °C保溫。於開始測試1或2小時後，對取出之試樣進 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ^45296 A7 B7五、發明説明（8) 行病毒滴定。 i__2_ 4 5°C時BACI或Entozon對病毒之去活化作用 病毒 時間 加入物質 病毒力價實驗値 病毒去活化作用 (毫克/毫升） (l〇gl〇/毫升） U〇gi〇/毫升） 1小時 對照組 〇 4.7 0 BACI 0.05 5.2 0 " 0.01 5.2 0 2小時 對照组.0 i.e 0 BACI 0.0S 4.6 0 0.01 4.6 0 BPV 1小時 對照·组 0 4.7 0 Entozon 0.030 si.5 0.015 sl.5 e3 ·2 2小時 對照组 0 4.5 0 Sntozaa 0.030 _ 0.015 λΧ.5 .1 a3.1 1小時 對照组0 5.6 0 Entoxon 0.030 _ 0.015 3.3 3.7 2.3 1.9 PPV 2小時 對照组 0 5.6 0 Eatozoa 0.030 0.015 2.2 2.7 3,4 2.9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 如表2所示，在選定的測試條件下，BPV不會被BACI 去活化。使用Entozon，則可有去活化作用，BPV之去活 化作用實際上比PPV更為迅速。 實例3 1 利用BACI和〃丫喊黃素之病毒去活化作用 將表3所示之病毒品系懸浮液以B A C I或吖啶黃素 處理並於3 7 °C保溫2小時。然後取試樣滴定測定病毒之 — 10— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 445296 A7 B7 五、發明説明（9 ) 去活化作用。 表 3 病毒 加入物質 病毒力價貫驗値 病毒去活化作用 (毫克/毫升） (i〇gl〇/毫升） (logl〇/毫升） IBRV 對照組 〇 5.X 0 BACX 0,01 si.5 S3.6 。丫1ίέ 黃素 0.001 1,8 3,3 ΡΧ,ν 對照組 〇 5 + $ 0 BACI 0.01 si‘5 a4.1 吖啶黃素 0.001 3.2 2.4 BVDV 對照组 〇 6,2 ΰ BACI 0.01 2,3 3.9 "丫淀黃素 .,;0,001 2.S 3.7 BPV 對照组 0 5.4 0 BACI 0.01 5.9 0 。丫 黃素 0.0,01 si.5 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如表3所示，被膜病毒品系一 IBRV、PI3V、BVDV — 均可被BACI和吖啶黃素去活化，以BACI之去活化作用稍 大些。裸露病毒BPV可被吖啶黃素去活化，惟不被單獨存 在之BACI去活化。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 以吖啶黃素和BACI檢測在ΕΜΕ培養基中之病毒去活 化作用後，再測定這些物質是否也可於含蛋白質之溶液中 將病毒去活化’將下列各蛋白質溶液以所不病毒品系處理

Beriplex® PPV

馬血清 BVDV、BPV ——11—— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 445296 A7 B7

BVDV 、 BPV 、 BAV-1 、 Reo 3 、 IBRV PPV ^ Reo 3 BVDV 、 PPV 、 CPV CPV

流行性感冒A、流行性感冒B 這些實驗所得結果示於下面表中。 實例4 於蛋白質溶液中吖啶化合物與苯並院銨氣化物之病毒去活 化作用 如表4結果所顯示，在蛋白質溶液中使用吖啶化合物 及/或苯並烷銨氯化物得以簡單的方法將各種病毒完全去 活化。然而，由此處明顯地看出，單獨使用苯並淀按氯化 物只可將有被膜的病毒去活化，使用吖啶化合物則可同時 將有被膜和沒有被膜的病毒品系去活化。此二物質之去活 化作用均屬增效性，亦即吖啶黃素+苯並烷銨氯化物組合 較兩個各別物質的病毒去活化作用高些。 表4的結果也顯示，蛋白質溶液中之病毒去活化作用 決定於： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（10) Beriate® Haemate® Venimmun® FCS 卵尿囊液 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1待去活化之病毒品系 2 ·蛋白質溶液的组成‘性質 3 _去活化劑的濃度 4 ·去活化作用的時間 5 .去活化作用的溫度。 12- 本紙張尺度適用中國國家擦隼（CMS ) A4規格（210X297公釐） .^45 2 96 A7 __—__B7 五、發明説明（u) 病毒去活化作用也與pH相關—其結果未示出。pH低 於5 . 5時，病毒去活化作用的進行比較高1111時慢些。 表5 — 7包含利用吖啶黃素及/或苯並烷銨氯化物將 病毒去活化後’蛋白.質溶液的生物活性結果。生物活性之 測定，於Venininmn®中係利用病毒去活化前後之抗體含量 ，於Haemate®、Beriate®和Beriplex®中則測定凝塊促 進活性一為國際單位。 I. . 裝 訂 ,~~ 東.. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本Ϊ ) 經濟部中夬標準局員工消費合作杜印製 ——13—— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 445296 A7 B7 五、發明説明（12) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 蜂掩键 奪，鼓妫Φ.咖: 唤 力價減少値 Cl〇gl〇/毫升） r- U3 * « Ο ΓΟ η μ in en m O W AJ ιλ in * · Ο ro <-〇 Λ1 A1 in m O r〇 n fil A1 m <n o m m At fii t> <〇 O <r> Af 荜屯 ^ a in tf) LD Η Η VI VI o in lti ΙΛ ι-t iH VI VI 中 in trj in rH VI VI o in in in H H VI \Λ ?-4 IT) IT| ΙΟ Η H VI VI mom ^£> cs «-f VI ^ fN Η to ui ιτ» OHO m in in ^ o o ιλ in m o o co in ui ^ _ Γ-卜 in寸寸 tn卜内 uj m兮 去活化時間 (小時） O rH CN 〇 rH fN O T-f CN O H CN Ο ι-ί ίΝ O iH <N 去活化溫度 (°C) in in 却 濃度 (¾克/毫升） rH 〇 〇 o rH 〇 〇 o H o o o f-I o o o ΓΟ o m o 去活化劑 <?丫遗黃素 p 丫峻黃素 _^___1 。丫淀黃素 。丫症黃素 伊他吖建乳酸鹽 伊他〇 丫攻乳酸鹽 蛋白質溶液和病毒 4 + > 〇4 (Q Pi cq H 馬血清 BPV 馬血清 BVDV + φ 4J ns •H u ① Beriate + BVDV •h φ Jj nJ nl -r< Μ O Φ Φ rt d; Beriate +. 14- 本紙張尺度適用t國國家梯準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 445296 五、發明説明（1¾ 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 民跫与彻♦ ♦蝶W龚孕喊塌驾^蚪铼#^^切亡-&-趔链1¥¥噙 壤、, ^ Μ' -R ^ CN CO * · ο Μ ίη η Μ T}4守 ο 〇ί cs Λ1 Λ1 ΙΟ Ο Φΐ Ο ο cs m f〇 Tt* Ο Ο H 守 VO Μ •R唞 B+| T—Η to η σ\ lo ΙΛ «η Η Η VI o m lti r-I t-4 VI VI ID CO ¢^1 ^ ^ m m ^ Lfl CTi ΙΟ ^ Η O •R W 芻 ra； ζ〇 竑·2 "w* ιο ιη γ<> ιη ιη ι〇 m ο σ» σι ^ ro σ\ co co a\ k〇 \〇 \〇 ^ c〇 <n 〇 U> L〇 U> ID , 沏3 Ο ιΗ CN ΟΊ Ο H CS ο H O »H <N m H2 ^ f； #1 、， ιΗ Ο Ο Ο *H 〇 o o rH 〇 o o rH o o o ¥ •Ψ 本’ V V ，呀 vS- > Pi {U + Φ x> <S 6 φ ιύ W + P： 0 1 Ή β > Φ Οι > 0* + a 函 Ή C > Φ Ck > υ + fi |> G 0 o > > to — 15— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） )296 4 經濟部中央標準扃員工消費合作社印製4 A7 B7 五、發明説明（i4) 寸 脅 龚 雄 袭 -4&I 缺 咖

力價減少値 (1〇句〇/毫升） 卜cn Ο Ο tH H f*l σ H ro 〇寸 Ο Γ〇 't* o r·' co * · « Ο ϊ—1 r~t <n Ai ο σ ο ο Π i~f τΗ Ο Η η ro Λ1 Μ *5 « 4 >, η ^ 、_' 寸寸〇 * _ * 卜 νχ> irj 寸Ο \〇 卜v〇 η 守H tn * · · 卜寸CN 〇〇 •'O C\ l〇 ^ m <N iH vt CO go c〇 \〇 co lo Ln tn η* tn Η Η VI VI π # 裒》; 宋° '•W- 寸 rH σ\ 卜 r- u> Η σν 卜卜ID 寸Η <Λ 卜卜必 03 l〇 k〇 〇□ ca αα μ> sa CQ C0 'ϊ* ^ ^ 去活化時間 (小時） ◦ r~f CN Ο Η (Μ 〇 H C4 〇 Γ-C Ο τ-4 ΟΪ cn Ο τ-4 CS r^i 去活化溫度 CC) r- rn 濃度 (毫克/毫升） rH 〇 o o (Ν ο ο rH O CN Ο Ο Ο ο rH Ο Ο ο i—1 ο ο ο γΗ Ο rH Ο ο ο ο 去活化劑 5丫淀黃素 BACI. 1 - 1 5 丫竞黃素 S- BACI 1_ 。丫啶黃素 BACI f 丫喊黃素 + BACI 蛋白質溶液和病毒 CO 1 域 is 暧士1 ，福 e=Q , 啦 i.呢 冴細 CQ ,Ψί 十·暖 2 Efir s ^ §r 心— Beriplex + PPV Beriplex + PPV Seriate 十 PPV 16- 本纸张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^45296 A7 B7 五、發明説明（15) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

力價減少値 (1呢1〇/毫升） Ό Η内 • · · 〇 ro <η Μ A1 fN ο ο ο o CO rH r〇 o f-ϊ n cn Λ1 AJ 卜U) m ο h cn m 〇 r〇 Γ4 * · · O M f〇 ^ *5 # 封Ξ •w* 〇〇 ο ir> m 守 ΓΊ Η Η VI VI GO l£> \〇 夺寸寸呀 ¢0 CO ΙΟ ΙΛ 守 rH ιΗ H VI VI \D ΟΊ 〇 寸 y〇 rr cf) 〇〇 co in co -qi Γ0 對照組力價 U〇gl〇/毫升） CO to Vo C0 CO TO \〇 c〇 寸寸兮 00 VD W CO w m U) Ό Ό \〇 ά a 00 〇 Vo 73 β 卜 G ά 去活化時間· (小時） ο iH <Ν fO O f-l <N Γ0 Ο H CN ο Η cs n 〇 H CS CO 去活化溫度 J CC) f； tn 濃度 (毫克/毫升） 0.001 1 rH o o I 0.001 1 0.01 0.001 0.001 去活化劑 吖啶黃素 BACI 。丫虔黃素 +~BACI 。丫淀黃素 。丫症黃素 蛋白質逸液和病毒 Beriplex + PPV Beriplex + PPV Beriplex + PPV FCS + CPV FCS + CPV (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 445296 A7 B7 五、發明説明（4 £__5_ 於蛋白質溶液中利用吖啶化合物與苯並烷銨氯化物將病毒 去活化前後生物活性（抗體力價）之測定 蛋白質溶液 名稱 霞理溫度和時間 抗1型脊髓灰質炎病毒之相互： ： 中和力價1 1 不含去活化劑 含去活化劑 H1 646 646 低™冷凝 H2 37°C 741 562 人類血漿 H3 741 646 (血漿個體） H4 2 小時 64S 741 H5 376 562 i VI 2234 851 Venimmun® V2 37°C 1950 1698 (終產物）丨 * ] V3 1698 1698 不同批次 V4 2小時 1698 1698 V5 1479 1479 H1 427 977 低〜冷凝 H2 45°C 1288 977 人類血漿 H3 1288 977 (血漿個體） H4 2 小時 977 1122 H5 977 1288' VI 1950 2234 Venimmun® V2 45°C 2570 2234 (終產物） V3 2234 1479 不同批次 V4 2 小時 2234 1950 V5 2234 1479 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ---------Ά衣------訂 (請先閲I背面之注意事項再填寫本頁) —18—— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公嫠） 445 2 9 5 A7 ___ B7_ 五、發明説明（17) 1力價係根據Spearman — Karber使用八重複/稀釋階程 由log 2稀釋系列計算之 2吖啶黃素0.001毫克/毫升+MCI 0.02毫克/毫升 蛋白質溶液 名稱 處理溫度和時間 抗一？丨3病毒之 抗體力ΐ 不含I.2 相互HAH 賈1 含1.2 抗一Reo3病 HA 抗體力 不含ί.2 毒之相互 Η 價1 含1-2 H1 80 80 320 320 低-冷凝 H2 00 80 320 320 人類血漿 H3 45*C 30 βο 320 320 Ξ4 2小時 60 so 320 320 (血槳個體） H5 80 30 320 320 VI 320 320 320 320 Venimmun⑧ V2 320 320 320 320 (終產物） V3 4S*C 320 320 320 320 V4 2小時 320 320 320 320 不同批次 VS 320 320 320 320 P1 54 0 640 馬血清 P2 640 €40 P1 ' 45eG η. d. η.. d. 640 640 (血清個體） P4 2小時 S40 640 _ PS 640 640 ^__6_ 於蛋白質溶液中利用吖啶黃素與苯並烷銨氣化物將病毒去 活化前後生物活性（抗體力價）之測定 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1力價測定依10g2稀釋系列 2 I .二去活化劑：p丫淀黃素0.001毫克/毫升+ B AC 10.0 2 毫克/毫升 — 19— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐} 、丨 445 2 9 6 A7 ---—------ B7五、發明説明（18) A_7_ 於蛋白質溶液中利用吖啶黃素（Δ )與苯並烷銨氯化物（ BACL )將病毒去活化前後生物活性（凝塊力價）之測定 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -------- 蛋白質溶液 處理溫度和時間 去活化劑 去活化劑濃度 ---""-1 活性 (毫克/毫升） (IU/亳升） I 經 A1 ( ΟΗ ) 3 A 0.01 +QAE處理之 蛋白質溶液 3 小時 A 0.03 4·2 A 0.001 4.4 45°C BAG I 0.1 6.9 BAC工 0.05 6.1 A + BACI 0.001 + 4.1 0.05 對照組 0 5*3 Haemate® A 0-002 因子VIII A 0.001 16.8 3 小時 BACI 0.02 20.7 37°C A + BAC工 0.001 + !7.6 0.02 對照組 0 24 . χ A 0.002 Beriplex® 因子II A 0,001 〇 . 02 5〇. 〇 3 小時 BAC工 61.3 37°C A + BAC工 〇.001 + 47.9 〇 - 02 — 龄照組 0 1 - 1 68.5 —20— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、{1Τ· 4 4 5 2 9 6 A7 ____B7 五、發明説明（19) 表5和6結果顯示，在利吖啶化合物與笨並烷銨氯化 物將病毒去活化的過程中，於Venimmun®中中和抗體（1 型脊髓灰質炎病毒）和血球凝集作用抑制（HAii )抗體（ PI3V—和Reo 3病毒）的含量在超過試驗變方（通常為土 1 1 og2階程）之範圍内不受影響。超越”γ唉化合物/苯並 烷錄氯化物去活化作用可容忍之範園後，凝塊製劑（ Beriate®、Haemate®、Beriplex®)的活性降低（表7 )。 -V_ -------裝 7-- f' (諸先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I17' 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 —21— 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4规格（210Χ；297公釐）

Claims (1)

1. <45 29s

   年月Ε!修正的.9. Β補充 圍 專利申請案第84112528號 ROC Patent Appln. No.84112528 修正之申請專利範圍中文本-附件(一） Amended Claims in Chinese - Rncl (很-國码年⑷n〇j- (Submitted on September^ , 2000) 經濟部智慧財產局員工消費合阼Fi印挺 1·一種將生％流體中之病毒於活體外去活化的方法，其特徵 係在於未另加光照射之情形下，使用濃度為0力01'g/1至 l.Og/Ι之吖啶（Acridine)或吖啶衍生物，以及笨並烷銨 氣化构（benzalkonium chloride)。 2. 根據申請專利範圍第1項之方法’其係於蛋白質存在下予 以進行，且仍保留這些蛋白質之生物活性。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中係於2〇_6〇。〇之溫 度下進行培育。 4. 根據申請專利範圍第3項之方法，其中溫度為25_37(>c。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中係於pH5-9下進行 培育。 6. 根據申請專利範圍第丄項之方法，其中所用苯並烷銨氯化 物的濃度為0.004至0·1克/升。 7·根據申請專利範圍第6項之方法，其中所用苯並烷銨氣化 物的濃度為0.001至0.05克/升。 8.根據申請專利範圍第1項之方法，其中培育時間為〇·5小 時-100小時。 9·根據申請專利範圍第8項之方法，其中培育時間為2_5小 時。 10. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中病毒為小DNA病 毒或其他未被膜病毒》 11. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中病毒為被膜病 毒。 -__-Ύ> · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） AV84496-claim-CH(9AVBEGH) --------------------訂---------線丨i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 申請曰期 • ~ - 案 號 類 Ή. (1.^y〇i

   A4 C4 年月β & —抑.9. |g補充 445296 (以上各棚由本局填柱） 翁銎專利説明書 中 文 I , 加入p丫唉或p丫。定衍生物以去活化症舂之方法 _ 發明 Λ '一、Λ £,Μ· 新型石w 英 文 Process for the inactivation of viruses with the aid of .acridine or acridine derivatives 姓 名 貝哈迪 Dieter Bernhardt _、發明 —、創作人 國 籍 德國籍 ---—- 住、居所 德國可貝市蔻貝斯路18號 Goldbergstrafie 18,35091 Colbe Germany 姓 名 (名稱） 德商阿凡提斯貝林有限公司 Aventis Behring GmbH 國 籍 德國籍 三、申請人 住、居所 (事務所） 德國郵政信箱1230瑪珀格城35002號 P.O. Box 1230, D-35002 Marbarg, Germany ----- 代表人 姓 名 .文特（Dr. Winter) 羅伯（Dr. Lauppe) 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇XW7公釐） 裝 <45 29s

   年月Ε!修正的.9. Β補充 圍 專利申請案第84112528號 ROC Patent Appln. No.84112528 修正之申請專利範圍中文本-附件(一） Amended Claims in Chinese - Rncl (很-國码年⑷n〇j- (Submitted on September^ , 2000) 經濟部智慧財產局員工消費合阼Fi印挺 1·一種將生％流體中之病毒於活體外去活化的方法，其特徵 係在於未另加光照射之情形下，使用濃度為0力01'g/1至 l.Og/Ι之吖啶（Acridine)或吖啶衍生物，以及笨並烷銨 氣化构（benzalkonium chloride)。 2. 根據申請專利範圍第1項之方法’其係於蛋白質存在下予 以進行，且仍保留這些蛋白質之生物活性。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中係於2〇_6〇。〇之溫 度下進行培育。 4. 根據申請專利範圍第3項之方法，其中溫度為25_37(>c。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中係於pH5-9下進行 培育。 6. 根據申請專利範圍第丄項之方法，其中所用苯並烷銨氯化 物的濃度為0.004至0·1克/升。 7·根據申請專利範圍第6項之方法，其中所用苯並烷銨氣化 物的濃度為0.001至0.05克/升。 8.根據申請專利範圍第1項之方法，其中培育時間為〇·5小 時-100小時。 9·根據申請專利範圍第8項之方法，其中培育時間為2_5小 時。 10. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中病毒為小DNA病 毒或其他未被膜病毒》 11. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中病毒為被膜病 毒。 -__-Ύ> · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） AV84496-claim-CH(9AVBEGH) --------------------訂---------線丨i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)