TW202419094A - 蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途 - Google Patents
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Abstract
一種蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，該促進生髮組成物含有該蘆丁成分，並以一有效量外用施予在一個體的脫毛部位皮膚上，能夠促進該個體的脫毛部位之毛囊細胞生長，其中該促進生髮組成物當中該蘆丁成分為天然植物的萃取物，在皮膚使用上無副作用產生，並可使得該個體的脫毛部位能明顯看出皮膚毛髮增生，藉以有效提供優異促進毛髮生長及預防脫髮的效果。
Description
本發明係一種天然蘆丁萃取物的用途；特別是指一種蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途。
在現今高壓社會環境中，繁忙的課業及事業逐漸影響各年齡層的身心健康，相對引發各式慢性疾病，再加上近代生活習慣、環境、基因、藥物以及賀爾蒙問題，脫髮/掉髮的皮膚疾病已經廣泛分布於各年齡層。
目前市面上推出多種預防及改善脫髮的生髮產品，莫過於外用落健minoxidil、口服柔沛finasteride，雖然前述生髮產品在臨床試驗上均具有優異地毛髮生長效果，但仍有接近半數的落健使用者無法取得良好的生髮效果，而柔沛的生髮效果則可能因為服用天數拉長反而降低效用。
除此之外，前述生髮產品在使用時均會產生相對的副作用，具體來說，落健的外用塗敷有可能導致皮膚紅腫熱痛、血壓過低等副作用；而服用柔沛將導致過敏反應及雄性使用者性功能障礙；如此一來，對於許多使用者而言，會因副作用的現象而降低該生髮產品的使用意願。
有鑑於此，本發明之目的在於提供一種蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，該蘆丁成分為天然植物的萃取物，在皮膚使用上無副作用產生，還能有效活化毛囊細胞生長。
緣以達成上述目的，本發明提供的蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，該促進生髮組成物含有該蘆丁成分，並以一有效量外用施予在一個體的脫毛部位皮膚上，能夠促進該個體的脫毛部位之毛囊細胞生長。
本發明之效果在於，該促進生髮組成物當中該蘆丁成分為天然植物的萃取物，在皮膚使用上無副作用產生，且經過一系列動物試驗顯示，該個體在持續外用施予7~14天時，可使得該個體的脫毛部位能明顯看出皮膚毛髮增生，提供優異促進毛髮生長及預防脫髮的效果。
本發明提供的蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，該促進生髮組成物含有該蘆丁成分（Rutin），並以一有效量外用施予在一個體的脫毛部位皮膚上，且在本實施例中，該蘆丁成分能夠活化該個體的脫毛部位當中皮膚組織的β-連環蛋白（β-catenin）之表現，藉以促進該個體的脫毛部位之毛囊細胞生長；更進一步說明，該蘆丁成分（Rutin）係為蕎麥植物之天然萃取物，該促進生髮組成物中含有一溶劑具有聚乙二醇-400及乙醇，該聚乙二醇-400與乙醇以7：3的體積比例進行調配，該蘆丁成分與該溶劑混合形成該促進生髮組成物，且該促進生髮組成物對該個體的脫毛部位持續外用施予7~14天時，該個體的脫毛部位受到該蘆丁成分的活化能明顯看出皮膚毛髮增生。
本文中所載「有效量」（effective amount）在此處係指一組成物當中有效成分的用量足以產生欲求的生理反應，該有效成分的有效量不必然能夠治癒疾病或病徵，但能夠延緩、阻礙或防止病徵的發生，或是可緩減病徵的發生；該有效成分的具體有效量取決於多種因素，例如欲試驗的特定狀況、個體的生理條件(如，個體重、年齡或性別)、接受試驗的個體類型及持續時間的本質，以及所用的具體配方。舉例來說，可將該有效成分的有效量表示成重量，譬如以克、毫克或微克來表示；或者將該有效成分的有效量表示成重量相對於體重的比例，例如為每公斤體重多少毫克（mg/kg）。或者是，可將該有效成分的有效量表示成濃度，例如莫耳濃度、重量濃度、體積濃度、重量莫耳濃度、莫耳分率、重量分率及混合比值，且習知技藝人士可依據動物模式的試驗劑量來換算成人體等效劑量（human equivalent dose,HED）。
在本實施例中，該蘆丁成分使用所述有效量是以莫耳濃度或重量百分比作為表示，其中當該蘆丁成分的有效量以莫耳濃度表示時，該蘆丁成分使用所述有效量係介於10至60mM，在一較佳實施例中，該蘆丁成分使用所述有效量係介於12.5至50mM，在另一較佳實施例中，該蘆丁成分使用所述有效量係介於25至50mM；另外，當該蘆丁成分的有效量以重量百分比表示時，該蘆丁成分使用所述有效量係介於0.5~4wt%，在一較佳實施例中，該蘆丁成分使用所述有效量係介於0.76~3.05wt%，在另一較佳實施例中，該蘆丁成分使用所述有效量係介於1.53~3.05wt%。
特別說明地，本實施例中該蘆丁成分使用所述有效量經篩選具有優異促進毛髮生長及預防脫髮的效果，其中該蘆丁成分使用所述有效量低於10mM，或者低於0.5wt%時，該蘆丁成分因有效量過少而使毛髮生長效果不佳；當該蘆丁成分使用所述有效量高於60mM，或者高於4wt%時，則因該蘆丁成分無法完全溶解於該溶劑，可能會導致後續在外用施予過程無法均勻塗佈在該個體的脫毛部位，致使影響毛髮生長效益。
本文中所載「個體」（subject），係指包含人類等可接受本實施該促進生髮組成物的動物，除非另有所指，否則「個體」一詞意指包含任何在接受本實施該促進生髮組成物的動物後，可產生治療效益的哺乳動物，例如人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、猴子、豬、山羊、牛、馬、狗、貓、鳥及家禽。在本實施例是以小鼠作為「個體」試驗。
為充分瞭解本發明之目的、特徵及功效，本實施例茲提供該促進生髮組成物的動物實驗模型、於形態學觀察毛髮變化、於毛髮長度分析，以及於組織學觀察毛囊變化，藉以說明本實施該促進生髮組成物當中蘆丁成分確實提供促進毛髮生長的效果。下述具體實施例可進一步證明本發明可實際應用範圍，且任何所屬技術領域中具有通常知識者在參照本發明之後，當可對其參數或設定作適當的更動，惟其仍應屬於本發明之範疇內。
建立毛髮增生動物實驗模型：
本實施例所選用的「個體」係使用由國家動物實驗中心購買週齡7~8週之C57BL/6小鼠進行試驗，各該個體係先於環境中適應一週後再進行後續各項試驗，其中該個體的脫髮部位係在背部，有利於後續觀察。
本試驗之組別分別包含控制組及實驗組1~3：
控制組：係使用前述溶劑具有該聚乙二醇-400及該乙醇，試驗過程係將該溶劑外用塗敷在該個體的脫髮部位持續14天。
實驗組1：係使用該促進生髮組成物外用塗敷在該個體的脫髮部位持續14天，其中該促進生髮組成物當中該蘆丁成分使用的有效量以莫耳濃度計係為12.5mM；若該蘆丁成分使用的有效量以重量百分比計係為0.76wt%。
實驗組2：係使用該促進生髮組成物外用塗敷在該個體的脫髮部位持續14天，其中該促進生髮組成物當中該蘆丁成分使用的有效量以莫耳濃度計係為25mM；若該蘆丁成分使用的有效量以重量百分比計係為1.53wt%。
實驗組3：係使用該促進生髮組成物外用塗敷在該個體的脫髮部位持續14天，其中該促進生髮組成物當中該蘆丁成分使用的有效量以莫耳濃度計係為50mM；若該蘆丁成分使用的有效量以重量百分比計係為3.05wt%。
觀察該個體（小鼠）毛髮生長：
由於週齡7~8週之 C57BL/6小鼠其毛髮週期大部分處於休止期，因而在本實驗係將該控制組及該實驗組1~3進行生髮實驗，將刺激該個體處於休止期的毛囊產生毛髮週期且重新進入生長期，其中實驗過程該控制組及該實驗組1~3分別在第1、7、14天的實驗期間使用相機進行背部皮膚影像紀錄的操作。
請參閱圖1觀察結果來看，該控制組及該實驗組1~3在第1天時能明顯看到各該個體背部上的脫毛部位；在第7天時，控制組當中該個體的脫毛部位維持脫毛的皮膚色澤，反觀該實驗組1~3當中各該個體的脫毛部位均開始長出細小的黑色毛髮，從圖1的照片來看，該實驗組2、3以及當中各該個體的脫毛部位可明顯觀察到毛髮生長的成果；在第14天時，該控制組及該實驗組1~3當中各該個體的脫毛部位均生長出黑色毛髮，且從圖1的照片來看，該實驗組1~3當中各該個體的毛髮生長狀況均明顯優於該控制組。
各組個體的脫毛部位皮膚灰度值分析：
為了進一步探討該控制組及該實驗組1~3當中各該個體的毛髮生長狀況，本試驗選用各組在第14天的各該個體，先對各組個體對應該脫毛部位進行影像擷取，再使用image J軟體分析各組個體的影像灰度值。
「灰度值」為黑白圖像中的顏色深度，範圍一般從0到255，黑色為0，白色為255，可藉由分析數值的高低來判斷各組個體的毛髮增生情形，其中當分析數值越低且趨近於0時，表示灰度值接近黑色，代表該個體的脫毛部位有明顯的毛髮增生現象；相反地，當分析數值越高時，表示灰度值接近白色，代表該個體的脫毛部位不具毛髮生長現象。
請參閱圖2及表1的檢測結果，該控制組的皮膚灰度值為119.4577±17.2175，該實驗組1的皮膚灰度值為113.235±38.6152，該實驗組2的皮膚灰度值為78.4813±14.016，該實驗組3的皮膚灰度值為50.8783±5.0039，從檢測結果得知，該實驗組1~3的皮膚灰度值相較於該控制組的皮膚灰度值有下降，表示該實驗組1~3均有效助於毛髮增生的現象，更由實驗組1~3的數據結果來看，該實驗組3的皮膚灰度值為最低，表示該實驗組3的毛髮增生效果最為優異，其次為該實驗組2，由此可判斷該實驗組2、3當中該促進生髮組成物所使用該蘆丁成分的有效量能對該個體的脫毛部位產生優異的毛髮增生效果。
表1.係為實驗組1~3及控制組分別在14天時所檢測的皮膚灰度值數據表
| 項目 | 控制組 | 實驗組1 | 實驗組2 | 實驗組3 |
| 皮膚灰度值 | 119.4577 | 113.235 | 78.4813 | 50.8783 |
| 標準誤差（SE） | 17.2175 | 38.6152 | 14.016 | 5.0039 |
上述各組皮膚灰度值及標準誤差(Standard Error, SE)的數據結果，係由各組個體進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該實驗組1~3與該控制組的數值比較，p＜0.05。
各組個體的毛髮生長之長度測量分析：
本試驗進一步探討各組個體的毛髮生長的長度，同樣選用各組在第14天的各該個體，試驗過程係對各組個體進行犧牲，從各組個體對應脫毛部位隨機取10根新生毛髮並進行長度量測。
請參閱圖3及表2的實驗結果，該控制組的新生毛髮平均長度為0.21±0.0306公分，該實驗組1的新生毛髮平均長度為±0.0569公分，該實驗組2的新生毛髮平均長度為0.5067±0.057公分，該實驗組3的新生毛髮平均長度為0.5467±0.0441公分，從檢測結果得知，該實驗組1~3的新生毛髮平均長度相較於該控制組均呈現增長，更由該實驗組1~3及的數據結果來看，該實驗組2、3的新生毛髮平均長度相較於該實驗組1更具有顯著性的增長，其中又以該實驗組3的新生毛髮平均長度為最長，由此可判斷該實驗組2、3當中該促進生髮組成物所使用該蘆丁成分的有效量能提供較佳的毛髮生長效率。
表2.係為實驗組1~3及控制組分別在14天時所檢測的新生毛髮平均長度統計表
| 項目 | 控制組 | 實驗組1 | 實驗組2 | 實驗組3 |
| 新生毛髮平均長度(cm) | 0.21 | 0.26 | 0.5067 | 0.5467 |
| 標準誤差（SE） | 0.0306 | 0.0569 | 0.057 | 0.0441 |
上述各組新生毛髮平均長度及標準誤差(Standard Error, SE)的數據結果，係由各組個體進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該實驗組1~3與該控制組的數值比較，p＜0.05。
各組個體的組織切片觀察與皮膚厚度分析：
前述實驗的各組個體犧牲後進行背部皮膚組織的固定 (fixation)、包埋、切片等處理步驟，且於脫蠟後以Hematoxylin & Eosin 染色，有利於評估觀察皮膚及毛囊組織；當皮膚中的毛囊產生生髮現象時，意味著這階段的毛囊處於毛髮生長期，所以在這階段能觀察到狹長型的毛囊形狀以及真皮層的增厚，作為辨別毛髮增生的辨別標準。
請參閱圖4的影像結果，該控制組的皮膚組織不具明顯的狹長的毛囊形狀，該實驗組1的皮膚組織可直接看出毛囊數目的增加，且在該實驗組2、3更能清楚觀察到相對狹長的毛囊形狀，藉以該實驗組1~3均具備促進毛囊增生的效果。
接著，本試驗檢測該控制組及該實驗組1~3的皮膚生長厚度，請參閱圖5及表3的皮膚厚度檢測結果，該控制組的皮膚厚度為742.4537±74.9902微米，而該實驗組1的皮膚厚度為868.3417±31.5609微米，該實驗組2的皮膚厚度為1015.638±29.4934微米，該實驗組3的皮膚厚度為1011.933±29.4934微米，從檢測結果得知，該實驗組1~3相較於該控制組確實能有效促進皮膚厚度增生的現象，其中以該實驗組2、3的皮膚厚度增長最為顯著。
表3.係為實驗組1~3及控制組在14天時所檢測的皮膚厚度數據表
| 項目 | 控制組 | 實驗組1 | 實驗組2 | 實驗組3 |
| 皮膚厚度(微米) | 742.4537 | 868.3417 | 1015.638 | 1011.933 |
| 標準誤差（SE） | 74.9902 | 31.5609 | 29.4934 | 30.2023 |
上述各組皮膚厚度及標準誤差(Standard Error, SE)的數據結果，係由各組個體進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該實驗組1~3與該控制組的數值比較，p＜0.05。
分析各組個體皮膚組織當中β-連環蛋白（β-catenin）表現：
將各組犧牲後個體進行背部皮膚組織的均質化、蛋白質裂解萃取、蛋白質電泳、SDS-Page展開蛋白及蛋白轉漬處理至PVDF膜等處理步驟，接著使用甲醇復水及使用脫脂奶粉進行蛋白阻攔後，以β-連環蛋白（β-catenin）一級抗體（Santa Cruz, sc-7963）與小鼠二級抗體進行轉染，並使用enhanced luminal reagent進行呈色，利用迷你型冷光成像分析系統及其軟體Evolution Capt 進行影像擷取與分析。當皮膚毛囊活化產生相關生髮現象時，β-連環蛋白（β-catenin）的活化能提高毛囊細胞的活性以調控生髮現象。
請參閱圖6及表4的試驗結果，該控制組的β-連環蛋白（β-catenin）表現量為100%，而該實驗組1的β-連環蛋白（β-catenin）相對於該控制組的表現量為246.595%±25.5353，該實驗組2的β-連環蛋白（β-catenin）相對於該控制組的表現量為263.251%±48.0316，該實驗組3的β-連環蛋白（β-catenin）相對於該控制組的表現量為293.0717%±22.5779，由數據結果可清楚得知，該實驗組1~3當中該促進生髮組成物之蘆丁成分有效量能讓該β-連環蛋白的表現量提升至少200%，在一較佳實施例中，該β-連環蛋白的表現量提升200%~350%，藉以該實驗組1~3相較於該控制組確實能顯著地活化β-連環蛋白（β-catenin）的表現，其中以該實驗組2、3的β-連環蛋白（β-catenin）表現量更為顯著，在本實施例中，該實驗組2、3當中該促進生髮組成物之蘆丁成分有效量能讓β-連環蛋白（β-catenin）表現量提升215%~315%，在一較佳實施例中，該實驗組2、3當中該促進生髮組成物之蘆丁成分有效量能讓β-連環蛋白（β-catenin）表現量提升260%~300%；藉此，該實驗組1~3當中蘆丁成分的有效量均能有效活化β-連環蛋白（β-catenin）的表現，在一較佳實施例中，該實驗組2、3當中β-連環蛋白（β-catenin）活化表現為較佳，其中又以該實驗組3當中β-連環蛋白（β-catenin）活化表現為最佳，且該蘆丁成分經一系列實驗證實能有助於增進毛髮生長的效果。
表4.係為實驗組1~3在14天時所檢測β-catenin 相對控制組的表現量數據表
| 項目 | 控制組 | 實驗組1 | 實驗組2 | 實驗組3 |
| β-連環蛋白相對表現量(%) | 100 | 246.595 | 263.251 | 293.0717 |
| 標準誤差（SE） | 0 | 25.5353 | 48.0316 | 22.5779 |
上述各組β-連環蛋白相對表現量及標準誤差(Standard Error, SE)的數據結果，係由各組個體進行三個獨立實驗(n=3)的檢測數值，其中「*」表示該實驗組1~3與該控制組的數值比較，p＜0.05。
歸納上述，該促進生髮組成物當中該蘆丁成分為天然植物的萃取物，在皮膚使用上無副作用產生，且經過一系列動物試驗顯示，該個體在持續外用施予該促進生髮組成物7~14天時，該蘆丁成分能夠顯著活化該個體的脫毛部位當中皮膚組織的β-連環蛋白（β-catenin）表現，使得該個體的脫毛部位能明顯看出皮膚毛髮增生，其中以該實驗組2、3當中該蘆丁成分使用所述有效量對應β-連環蛋白（β-catenin）活化表現為較佳，藉以有效提供優異促進毛髮生長及預防脫髮的效果。
以上所述僅為本發明較佳可行實施例而已，並非用以限制本發明，本發明之技術領域的通常知識者，於參酌以上教示後，當能對上述實施例的內容做適當的修改或根據不同的實驗方法，達成本發明所主張的技術功效。
另外，以上β-連環蛋白表現量提升的幅度可能因為實驗之個體差異而有所不同，因此，本發明之促進生髮組成物的效果並不以上述實驗所示出的提升量為限，舉凡應用本發明說明書及申請專利範圍所為之等效變化，理應包含在本發明之專利範圍內。
［本發明］
無
圖1係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在不同時間觀察之影像對照圖。
圖2係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在14天時所檢測的皮膚灰度值數據圖。
圖3係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在14天時所檢測的新生毛髮平均長度數據圖。
圖4係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在14天時所觀察的皮膚組織切片圖。
圖5係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在14天時所檢測的皮膚厚度數據圖。
圖6係為本發明一較佳實施例之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途當中各實驗組在14天時所檢測的β-catenin相對表現量數據圖。
Claims (9)
- 一種蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，該促進生髮組成物含有該蘆丁成分，並以一有效量外用施予在一個體的脫毛部位皮膚上，可促進該個體的脫毛部位之毛囊細胞生長。
- 如請求項1所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該促進生髮組成物對該個體的脫毛部位持續外用施予7~14天時，該個體的脫毛部位受到該蘆丁成分的活化能顯現出皮膚毛髮增生。
- 如請求項2所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分使用所述有效量以莫耳濃度計係介於10至60mM。
- 如請求項3所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分使用所述有效量以莫耳濃度計係介於12.5至50 mM。
- 如請求項4所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分使用所述有效量以莫耳濃度計係介於25至50 mM。
- 如請求項2所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該促進生髮組成物中含有一溶劑具有聚乙二醇-400及乙醇，該聚乙二醇-400與乙醇以7：3的體積比例進行調配，該蘆丁成分與該溶劑混合形成該促進生髮組成物，且該蘆丁成分使用所述有效量以重量百分比計係介於0.5~4wt%。
- 如請求項6所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分使用所述有效量以重量百分比計係介於0.76~3.05wt%。
- 如請求項7所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分使用所述有效量以重量百分比計係介於1.53~3.05wt%。
- 如請求項1-8任一項所述之蘆丁用於製備促進生髮組成物的用途，其中該蘆丁成分可活化該個體之脫毛部位當中皮膚組織的β-連環蛋白的表現。
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