TW202409086A - FcRn-結合多肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供結合FcRn之含VHH多肽。亦提供該等含VHH多肽之用途。

Description

FcRn-結合多肽及其用途
本發明係關於FcRn-結合多肽，包括FcRn-結合多肽及白蛋白-結合多肽，及使用該等多肽例如治療免疫疾病或病症之方法。
血漿蛋白係藉由兩種主要機制自循環中清除：分子之腎過濾量低於60 kDa及內皮細胞之微胞飲作用。低於腎臨限值之蛋白迅速地自循環清除，使得半衰期為1天或更短，而大於腎臨限值之蛋白主要藉由微胞飲作用清除，其半衰期為約3至5天。白蛋白及免疫球蛋白G(IgG)為血漿半衰期較長的蛋白，約為15至30天，此係因為其較大尺寸(分別為66及150 kDa)且其能夠藉由pH依賴性結合新生兒Fc受體(FcRn)而自內皮微胞飲作用回收。
較長血漿半衰期適用於治療劑以準確地且精確地控制血漿藥物濃度，最佳化功效同時限制毒性，且降低所需藥物之頻率及量。
因此，需要具有經改良之血漿半衰期的FcRn-結合多肽。
實施例1.      一種多肽，其包含至少一個結合FcRn之VHH域，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 80-81之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 83-84之CDR2序列及SEQ ID NO: 85之CDR3序列。 實施例2.      如實施例1之多肽，其中結合FcRn之各VHH域獨立地包含選自SEQ ID NO: 80-81之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 83-84之CDR2序列及SEQ ID NO: 85之CDR3序列。 實施例3.      如實施例1或實施例2之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 80、83及85；SEQ ID NO: 81、83及85；及SEQ ID NO: 81、84及85。 實施例4.      如實施例3之多肽，其中結合FcRn之各VHH域獨立地包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 80、83及85；SEQ ID NO: 81、83及85；及SEQ ID NO: 81、84及85。 實施例5.      如實施例1至4中任一者之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域經人源化。 實施例6.      如實施例5之多肽，其中結合FcRn之各VHH域經人源化。 實施例7.      如實施例1至6中任一例之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 86-93之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。 實施例8.      如實施例7之多肽，其中結合FcRn之各VHH域包含與選自SEQ ID NO: 86-93之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。 實施例9.      如實施例1至7中任一例之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 86-93之序列。 實施例10.   如實施例1至9中任一例之多肽，其中結合FcRn之各VHH域包含選自SEQ ID NO: 86-93之序列。 實施例11.   如實施例1至10中任一例之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類FcRn。 實施例12.   如實施例1至11中任一例之多肽，其中結合FcRn之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類FcRn。 實施例13.   如實施例1至12中任一例之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域在pH 6及pH 7.4下結合人類FcRn。 實施例14.   如實施例1至13中任一例之多肽，其中結合FcRn之各VHH域在pH 6及pH 7.4下結合人類FcRn。 實施例15.   如實施例1至14中任一例之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域阻斷人類IgG與人類FcRn之結合。 實施例16.   如實施例1至15中任一例之多肽，其中結合FcRn之各VHH域阻斷人類IgG與人類FcRn之結合。 實施例17.   如實施例1至16中任一例之多肽，其中該多肽包含至少一個結合白蛋白之VHH域。 實施例18.   如實施例17之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 5-8之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 9-21之CDR2序列及SEQ ID NO: 22之CDR3序列。 實施例19.   如實施例17之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域獨立地包含選自SEQ ID NO: 5-8之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 9-21之CDR2序列及SEQ ID NO: 22之CDR3序列。 實施例20.   如實施例17或實施例18之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 5、9及22；SEQ ID NO: 5、10及22；SEQ ID NO: 5、11及22；SEQ ID NO: 5、12及22；SEQ ID NO: 5、13及22；SEQ ID NO: 5、14及22；SEQ ID NO: 5、15及22；SEQ ID NO: 6、15及22；SEQ ID NO: 7、15及22；SEQ ID NO: 8、15及22；SEQ ID NO: 6、16及22；SEQ ID NO: 6、17及22；SEQ ID NO: 6、18及22；SEQ ID NO: 6、19及22；SEQ ID NO: 6、20及22；及SEQ ID NO: 6、21及22。 實施例21.   如實施例17或實施例18之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域獨立地包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 5、9及22；SEQ ID NO: 5、10及22；SEQ ID NO: 5、11及22；SEQ ID NO: 5、12及22；SEQ ID NO: 5、13及22；SEQ ID NO: 5、14及22；SEQ ID NO: 5、15及22；SEQ ID NO: 6、15及22；SEQ ID NO: 7、15及22；SEQ ID NO: 8、15及22；SEQ ID NO: 6、16及22；SEQ ID NO: 6、17及22；SEQ ID NO: 6、18及22；SEQ ID NO: 6、19及22；SEQ ID NO: 6、20及22；及SEQ ID NO: 6、21及22。 實施例22.   如實施例17至21中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域經人源化。 實施例23.   如實施例22之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域經人源化。 實施例24.   如實施例17至23中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。 實施例25.   如實施例17至23中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域包含與選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。 實施例26.   如實施例17至23中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列。 實施例27.   如實施例17至23中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列。 實施例28.   如實施例17至26中任一例之多肽，其中該多肽包含與選自SEQ ID NO: 69-77之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的序列。 實施例29.   如實施例17至26中任一例之多肽，其中該多肽包含選自SEQ ID NO: 69-77之序列。 實施例30.   如實施例17至29中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域與人類白蛋白及至少一種選自石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白之白蛋白結合。 實施例31.   如實施例17至29中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域與人類白蛋白及至少一種選自石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白之白蛋白結合。 實施例32.   如實施例17至29中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域結合人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。 實施例33.   如實施例17至29中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域結合人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。 實施例34.   如實施例17至33中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類白蛋白。 實施例35.   如實施例17至34中任一例之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合各人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。 實施例36.   如實施例17至35中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類白蛋白。 實施例37.   如實施例17至36中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合各人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。 實施例38.   如實施例17至37中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域不結合白蛋白域3。 實施例39.   如實施例17至38中任一例之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域不干擾白蛋白與FcRn之結合。 實施例40.   如前述實施例中任一例之多肽，其中該多肽包含至少兩個、至少三個或至少四個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之VHH域。 實施例41.   如實施例40之多肽，其中該多肽包含兩個、三個或四個結合FcRn之VHH域及一個結合白蛋白之VHH域。 實施例42.   如實施例1至41中任一例之多肽，其中該多肽包含至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域。 實施例43.   如實施例42之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域為VHH。 實施例44.   如實施例43之多肽，其中結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的各結合域為VHH。 實施例45.   如實施例42或實施例43之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域包含重鏈可變區及輕鏈可變區。 實施例46.   如實施例45之多肽，其中結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的各結合域包含重鏈可變區及輕鏈可變區。 實施例47.   如實施例42至46中任一例之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域為治療性抗體之結合域。 實施例48.   如實施例47之多肽，其中結合除白蛋白以外之蛋白的各結合域為治療性抗體之結合域。 實施例49.   如實施例47或實施例48之多肽，其中治療性抗體適用於治療選自以下之疾病或病症：自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。 實施例50.   如實施例1至41中任一例之多肽，其中該多肽包含治療性蛋白之胺基酸序列。 實施例51.   如實施例50之多肽，其中治療性蛋白適用於治療選自以下之疾病或病症：自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。 實施例52.   如前述實施例中任一例之多肽，其中該多肽之半衰期長於缺乏結合白蛋白之VHH域的相同多肽之半衰期。 實施例53.   一種醫藥組合物，其包含如實施例1至52中任一例之多肽及醫藥學上可接受之載劑。 實施例54.   一種經分離之核酸，其編碼如實施例1至52中任一例之多肽。 實施例55.   一種載體，其包含如實施例54之核酸。 實施例56.   一種宿主細胞，其包含如實施例54之核酸或如實施例55之載體。 實施例57.   一種宿主細胞，其表現如實施例1至52中任一例之多肽。 實施例58.   一種產生如實施例1至52中任一例之多肽的方法，其包含如實施例56或實施例57之宿主細胞在適合於表現該多肽之條件下培育。 實施例59.   如實施例58之方法，其進一步包含分離該抗體或多肽。 實施例60.   一種方法，其包含向個體投與如實施例1至52中任一例之多肽或如實施例53之醫藥組合物。 實施例61.   一種治療疾病或病症之方法，其包含向患有該疾病或病症之個體投與醫藥學上有效量之如實施例1至52中任一例之多肽或如實施例53之醫藥組合物。 實施例62.   如實施例61之方法，其中該疾病或病症係選自自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。 實施例63.   如實施例61或實施例62之方法，其中該疾病或病症為自體抗體介導之疾病或病症。 實施例64.   如實施例61至63中任一例之方法，其中該疾病或病症為尋常天疱瘡、狼瘡性腎炎、重症肌無力、格林-巴利症候群(Guillain-Barré syndrome)、抗體介導之排斥、抗磷脂抗體症候群、慢性發炎性脫髓鞘性多發神經病變、免疫複合體介導之血管炎、腎小球炎、離子通道病變、視神經脊髓炎、自體免疫性腦炎、自體免疫性格雷氏病(autoimmune Grave's disease)、特發性血小板減少性紫癜、自體免疫性溶血性貧血、免疫嗜中性白血球減少症、擴張型心肌病或血清病。 實施例65.   如實施例60至64中任一例之方法，其中皮下投與該多肽。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2022年6月11日申請之美國臨時申請案第63/351,363號及2023年1月9日申請之美國臨時申請案第63/437,776號之優先權；該等申請案中之各者出於任何目的以全文引用之方式併入本文中。
本文所提供之實施例係關於FcRn-結合多肽，包括FcRn-結合多肽及白蛋白-結合多肽，及其用途。 定義及各種實施例
本文所使用之章節標題僅出於組織目的而不應被視為限制所描述之標的物。
本文所引用之所有參考文獻(包括專利申請案、專利公開案及Genbank登錄號)均以引用方式併入本文中，如同各個別參考文獻特定地且單獨地被指出以全文引用的方式併入本文中一般。
本文所描述或所參考之技術及程序一般為熟習此項技術者充分理解且通常使用習知方法而採用，諸如以下中所描述之廣泛利用之方法：Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual第3版(2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel等人編, (2003))；METHODS IN ENZYMOLOGY系列(Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson、B. D. Hames及G. R. Taylor編(1995))、Harlow及Lane編(1988) ANTIBODIES、A LABORATORY MANUAL及ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney編(1987))；Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R. I. Freshney)編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather及P. E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle、J. B. Griffiths及D. G. Newell編, 1993-8) J. Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir及C. C. Blackwell編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller及M. P. Calos編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan等人編, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C. A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty.編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd及C. Dean編, Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti及J. D. Capra編, Harwood Academic Publishers, 1995)；及Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita等人編, J.B. Lippincott Company, 1993)；以及其更新版。
除非另外定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語將具有一般熟習此項技術者通常理解之含義。此外，除非上下文另有需要或另外明確地指出，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。關於各種來源或參考文獻之間在定義方面之任何衝突，將以本文所提供之定義為準。
一般而言，免疫球蛋白重鏈中之殘基編號係依Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(1991)中之EU索引之編號。「依Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。
應瞭解，本文所描述之本發明實施例包括「由實施例組成」及/或「基本上由實施例組成」。除非另外指示，否則依本文所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。術語「或」在本文中之使用不意謂暗示替代方案係互相排斥的。
在本申請案中，除非明確地敍述或依熟習此項技術者所理解，否則「或」之使用意謂「及/或」。在多個附屬項之上下文中，「或」之使用係重新提及超過一個前述獨立項或附屬項。
片語「參考樣品」、「參考細胞」或「參考組織」表示可用作與具有至少一種未知特徵之樣品進行比較的具有至少一種已知特徵之樣品。在一些實施例中，參考樣品可用作陽性或陰性指示物。參考樣品可用於確定例如在健康組織中存在之蛋白質及/或mRNA之含量，與在具有未知特徵之樣品中存在之蛋白質及/或mRNA之含量形成對比。在一些實施例中，參考樣品來自相同個體，但相比測試樣品其來自個體之不同部位。在一些實施例中，參考樣品來自癌症周圍或附近之組織區域。在一些實施例中，參考樣品不係來自被測試之個體，而係來自已知患有或未患有所論述之病症之個體的樣品。在一些實施例中，參考樣品係來自相同個體，但來自個體罹患癌症前之時間點。在一些實施例中，參考樣品係來自相同或不同個體之良性癌樣品。在使用陰性參考樣品進行比較時，陰性參考樣品中所論述的分子之表現量或量將指示出假定本發明中無分子及/或具有低含量之分子時，熟習此項技術者將瞭解之含量。在使用陽性參考樣品進行比較時，陽性參考樣品中所論述的分子之表現量或量將指示出假定本發明中存在一定含量之分子時，熟習此項技術者將瞭解之含量。
依本文在受益於治療劑投與或對治療劑投與有反應之情形下所用之術語「益處」、「臨床益處」、「反應」及「治療反應」可藉由評定各種評估指標來量測，例如在一定程度上抑制疾病進展，包括減緩及完全遏止；減少疾病發作及/或症狀之數目；減小病變大小；抑制(亦即，減少、減緩或完全停止)疾病細胞浸潤至鄰近周邊器官及/或組織；抑制(亦即，減少、減緩或完全停止)疾病擴散；在一定程度上減輕與病症相關之一或多種症狀；增加在治療後呈現無病(例如無進展存活期)之時長；增加總存活期；提高反應率；及/或減小在治療後給定時間點之死亡率。「無反應」或「無法反應」之個體或癌症為無法滿足關於「反應」之上述限制條件之個體或癌症。
術語「核酸分子」、「核酸」及「聚核苷酸」可互換使用，且係指核苷酸聚合物。此類核苷酸聚合物可含有天然及/或非天然核苷酸且包括但不限於DNA、RNA及PNA。「核酸序列」係指包含於核酸分子或聚核苷酸中之核苷酸線性序列。
術語「多肽」與「蛋白」可互換使用以指胺基酸殘基之聚合物，且不限於最小長度。此類胺基酸殘基之聚合物可含有天然或非天然胺基酸殘基且包括但不限於胺基酸殘基構成之肽、寡肽、二聚體、三聚體及多聚體。全長蛋白與其片段皆涵蓋於該定義中。術語亦包括多肽之表現後修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化及類似修飾。此外，出於本發明之目的，「多肽」係指蛋白，其包括對天然序列之修飾，諸如缺失、添加及取代(實際上通常係保守的)，只要該蛋白維持所需活性即可。此等修飾可為有意的，如經由定點突變誘發進行；或可為偶然的，諸如經由產生蛋白之宿主的突變或由於PCR擴增所引起的錯誤引起。
依本文所用之「白蛋白」係指由在細胞中加工白蛋白前驅體產生之任何天然成熟之白蛋白。除非另外規定，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如，人類及石蟹獼猴或恆河猴)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠))之白蛋白。該術語亦包括白蛋白之天然存在之變異體，諸如剪接變異體或對偶基因變異體。非限制性例示性人類白蛋白胺基酸序列以例如UniProt登錄號P02768.2示出。參見SEQ ID NO. 1。非限制性例示性鼠類、石蟹獼猴及大鼠白蛋白胺基酸序列示於SEQ ID NO: 2-4中。
依本文所用之「FcRn」係指由細胞中加工FcRn前驅體產生之任何天然成熟Fc受體。除非另外規定，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如，人類及石蟹獼猴或恆河猴)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠))之FcRn。該術語亦包括天然存在之FcRn變異體，諸如剪接變異體或對偶基因變異體。非限制性例示性人類FcRn胺基酸序列以例如UniProt登錄號P55899展示。參見SEQ ID NO. 92。非限制性例示性鼠類、石蟹獼猴及大鼠FcRn胺基酸序列示於SEQ ID NO: 93-95中。
術語「特異性結合」抗原或抗原決定基係此項技術中被充分瞭解之術語，且用於測定此類特異性結合之方法亦為此項技術中所熟知。若分子與特定細胞或物質之反應或結合比其與替代性細胞或物質更頻繁、更快速，持續時間更長及/或親和力更大，則稱其呈現「特異性結合」或「較佳結合」。若單域抗體(sdAb)或含VHH多肽與目標之結合比其與其他物質之結合的親和力更大、親合力更大、更容易及/或持續時間更長，則稱其「特異性結合」或「優先結合」目標。舉例而言，特異性或優先結合FcRn抗原決定基之sdAb或含VHH多肽為與其結合其他FcRn抗原決定基或非FcRn抗原決定基相比以更大之親和性、親合力、更容易及/或更長持續時間結合此抗原決定基之sdAb或含VHH多肽。藉由閱讀此定義，亦應理解，例如特異性或優先結合第一目標之sdAb或含VHH多肽可能或可能不特異性或優先結合第二目標。因此，「特異性結合」或「優先結合」未必需要(儘管其可包括)獨佔式結合。提及結合一般但未必意謂優先結合。「特異性」係指結合蛋白選擇性結合抗原之能力。
依本文所用，關於靶蛋白活性之術語「抑制」係指蛋白活性降低。在一些實施例中，「抑制」係指與不存在調節劑之情況下的蛋白相比活性降低。
依本文所用，術語「抗原決定基」係指抗原結合分子(例如sdAb或含VHH多肽)在目標分子(例如抗原，諸如蛋白質、核酸、碳水化合物或脂質)上結合之位。抗原決定基常常包括一組表面具有化學活性之分子，諸如胺基酸、多肽或糖側鏈，且具有特定三維結構特徵以及荷質比特徵。抗原決定基可由目標分子之相鄰及/或並接非相鄰殘基(例如，胺基酸、核苷酸、糖、脂質部分)形成。由相鄰殘基(例如胺基酸、核苷酸、糖、脂質部分)形成之抗原決定基通常在暴露於變性溶劑時得以保留，而藉由三級摺疊形成之抗原決定基通常在用變性溶劑處理時丟失。抗原決定基可包括但不限於至少3個、至少5個或8至10個殘基(例如，胺基酸或核苷酸)。在一些實施例中，抗原決定基之長度小於20個殘基(例如胺基酸或核苷酸)、小於15個殘基或小於12個殘基。若兩個抗體對一抗原展現競爭性結合，則其可結合該抗原內之同一個抗原決定基。在一些實施例中，可根據相對於抗原結合分子上之CDR殘基的某一最小距離鑑別抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基可根據以上距離鑑別，且進一步受限於抗原結合分子之殘基與抗原殘基之間的鍵(例如氫鍵)所涉及之彼等殘基。抗原決定基亦可藉由各種掃描來鑑別，例如丙胺酸或精胺酸掃描可指示可與抗原結合分子相互作用之一或多個殘基。除非明確表示，否則作為抗原決定基之一組殘基不排除其他殘基作為特定抗原結合分子之抗原決定基的部分。實際上，該組抗原決定基之存在表示最小的抗原決定基系列(或物種組)。因此，在一些實施例中，鑑別為抗原決定基之殘基集合表示該抗原之最小相關抗原決定基，而非抗原上之抗原決定基的排他性殘基清單。
術語「抗體」以最廣泛意義使用且涵蓋包含抗體樣抗原結合域之各種多肽，包括但不限於習知抗體(通常包含至少一個重鏈及至少一個輕鏈)、單域抗體(sdAb，其包含至少一個VHH域及視情況選用之Fc區)、含VHH多肽(包含至少一個VHH域之多肽)及前述中之任一者之片段，只要其展現所需抗原結合活性即可。在一些實施例中，抗體包含二聚域。此類二聚域包括但不限於重鏈恆定域(包含CH1、鉸鏈、CH2及CH3，其中CH1通常與輕鏈恆定域CL配對，而鉸鏈介導二聚)及Fc區(包含鉸鏈、CH2及CH3，其中鉸鏈介導二聚)。
術語抗體亦包括但不限於嵌合抗體、人源化抗體及諸如駱駝(包括駱馬)、鯊魚、小鼠、人類、石蟹獼猴等各種物種之抗體。
依本文所用之術語「抗原結合域」係指抗體足以結合抗原之一部分。在一些實施例中，習知抗體之抗原結合域包含三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。因此，在一些實施例中，抗原結合域包含：重鏈可變區，其包含CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3及維持結合於抗原所需的FR1及/或FR4之任何部分；及輕鏈可變區，其包含CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3及維持結合於抗原所需的FR1及/或FR4之任何部分。在一些實施例中，sdAb或含VHH多肽之抗原結合域包含VHH域之三個CDR。因此，在一些實施例中，sdAb或含VHH多肽之抗原結合域包含VHH域，該VHH域包含CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3及維持與抗原結合所需的FR1及/或FR4之任何部分。
依本文所用之術語「VHH」或「VHH域」或「VHH抗原結合域」係指諸如駱駝抗體或鯊魚抗體之單域抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，VHH包含三個CDR及四個構架區，表示為FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。在一些實施例中，VHH可於N端或C端處截短以使其僅包含部分FR1及/或FR4，或缺少彼等構架區中之一或兩者，只要VHH實質上維持抗原結合及特異性即可。
術語「單域抗體」及「sdAb」在本文中可互換使用以指代包含至少一個諸如VHH域之無輕鏈單體域及視情況選用之Fc區的抗體。在一些實施例中，sdAb為兩種多肽之二聚體，其中各多肽包含至少一個VHH域及Fc區。依本文所用，術語「單域抗體」及「sdAb」涵蓋包含多個VHH域之多肽，諸如具有結構VHH 1-VHH 2、VHH 1-VHH 2-Fc、VHH 1-VHH 2-VHH 3或VHH 1-VHH 2-VHH 3-Fc之多肽，其中VHH 1、VHH 2及VHH 3可相同或不同。
術語「含VHH多肽」係指包含至少一個VHH域之多肽。在一些實施例中，VHH多肽包含兩個、三個或四個或更多個VHH域，其中各VHH域可相同或不同。在一些實施例中，含VHH多肽包含Fc區。在一些此類實施例中，含VHH多肽可稱作sdAb。此外，在一些此類實施例中，VHH多肽可形成二聚體。含VHH多肽，亦為sdAb之非限制性結構包括VHH 1-Fc、VHH 1-VHH 2-Fc及VHH 1-VHH 2-VHH 3-Fc，其中VHH 1、VHH 2及VHH 3可相同或不同。在該等結構之一些實施例中，一個VHH可藉由連接子連接至另一VHH，或一個VHH可藉由連接子連接至Fc。在一些此類實施例中，連接子包含1至20個胺基酸，較佳為1至20個主要包含甘胺酸且視情況包含絲胺酸之胺基酸。在一些實施例中，當含VHH多肽包含Fc時，其形成二聚體。因此，若結構VHH 1-VHH 2-Fc形成二聚體，則認為其為四價的(亦即，二聚體具有四個VHH域)。類似地，若結構VHH 1-VHH 2-VHH 3-Fc形成二聚體，則認為其為六價的(亦即，二聚體具有六個VHH域)。
術語「單株抗體」係指實質上同質之抗體群的抗體(包括sdAb或含VHH多肽)，即，包含此群體之個別抗體除可能存在少量天然產生之突變以外均相同。單株抗體為高度特異性的，其針對單一抗原位。此外，與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原上之單個決定子。因此，單株抗體之樣品可結合抗原上之相同抗原決定基。修飾語「單株」指示抗體之特徵為由實質上均質之抗體群獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，單株抗體可藉由Kohler及Milstein, 1975, Nature 256:495首次描述之融合瘤方法產生，或可藉由諸如美國專利第4,816,567號中所描述之重組DNA方法產生。舉例而言，單株抗體亦可自使用McCafferty等人，1990, Nature 348:552-554中所描述之技術生成的噬菌體庫中分離。
術語「CDR」表示互補決定區，依熟習此項技術者藉由至少一種鑑別方式所定義。在一些實施例中，CDR可根據Chothia編號方案、Kabat編號方案、Kabat與Chothia之組合、AbM定義及/或contact定義中之任一者來定義。VHH包含三個CDR，稱為CDR1、CDR2及CDR3。
依本文所用之術語「重鏈恆定區」係指包含至少三個重鏈恆定域C H1、鉸鏈、C H2及C H3之區域。當然，除非另外指示，否則此等域中之非功能改變性缺失及修改係涵蓋於術語「重鏈恆定區」之範疇內。非限制性例示性重鏈恆定區包括γ、δ及α。非限制性例示性重鏈恆定區亦包括ε及μ。各重鏈恆定區對應於一種抗體同型。舉例而言，包含γ恆定區之抗體為IgG抗體，包含δ恆定區之抗體為IgD抗體，且包含α恆定區之抗體為IgA抗體。此外，包含μ恆定區之抗體為IgM抗體，且包含ε恆定區之抗體為IgE抗體。特定同型可進一步細分為子類。舉例而言，IgG抗體包括但不限於IgG1 (包含γ 1恆定區)、IgG2 (包含γ 2恆定區)、IgG3 (包含γ 3恆定區)及IgG4 (包含γ 4恆定區)抗體；IgA抗體包括但不限於IgA1 (包含α 1恆定區)及IgA2 (包含α 2恆定區)抗體；且IgM抗體包括但不限於IgM1及IgM2。
依本文所用，「Fc區」係指包含CH2及CH3之重鏈恆定區之部分。在一些實施例中，Fc區包含鉸鏈、CH2及CH3。在各種實施例中，當Fc區包含鉸鏈時，鉸鏈介導兩個含Fc之多肽之間的二聚。Fc區可為本文所論述之任何抗體重鏈恆定區同型。在一些實施例中，Fc區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
依本文所論述，依本文所用之「受體人類構架」為包含源自人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。源自人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之受體人類構架可包含與其相同之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列改變。在一些實施例中，在諸如VHH之單一抗原結合域中之所有人類構架中，胺基酸改變之數目少於10，或少於9，或少於8，或少於7，或少於6，或少於5，或少於4，或少於3。
「親和力」係指分子(例如抗體，諸如sdAb，或含VHH多肽)之單一結合位與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和的強度。分子X對其搭配物Y之親和力或表觀親和力一般可分別由解離常數(K D)或K D- 表觀來表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(諸如ELISA K D、KinExA、流式細胞測量術及/或表面電漿子共振裝置)，包括本文所描述之彼等方法來量測。該等方法包括但不限於涉及BIAcore®、Octet®或流式細胞測量術之方法。
依本文所用之術語「K D」係指抗原結合分子/抗原相互作用之平衡解離常數。當本文使用術語「K D」時，其包括K D及K D- 表觀。
在一些實施例中，抗原結合分子之K D係使用表現抗原之細胞株且在各抗體濃度下量測之平均螢光與非線性單點結合方程式擬合(Prism Software graphpad)而藉由流式細胞測量術來量測。在一些此類實施例中，K D為K D- 表觀。
術語「生物活性」係指分子之任一或多種生物特性(無論係在活體內發現為天然存在的，或藉由重組方式提供或實現的)。生物特性包括但不限於結合配位體、誘導或增加細胞增殖，及誘導或增加細胞介素表現。
「促效劑」或「活化」抗體為增加及/或活化目標抗原之生物活性的抗體。在一些實施例中，促效劑抗體結合抗原且使其生物活性增加至少約20%、40%、60%、80%、85%或更多。
「拮抗劑」、「阻斷」或「中和」抗體為抑制、降低及/或不活化目標抗原之生物活性的抗體。在一些實施例中，中和抗體結合抗原且使其生物活性降低至少約20%、40%、60%、80%、85%、90%、95%、99%或更多。
「親和力成熟」sdAb或含VHH多肽係指相較於不具有一或多個改變之親本sdAb或含VHH多肽在一或多個CDR中具有此類改變之sdAb或含VHH多肽，此類改變改良sdAb或含VHH多肽對抗原之親和力。
依本文所用之「人源化VHH」係指其中一或多個構架區已實質上經人類構架區置換之VHH。在一些情況下，人類免疫球蛋白之某些構架區(FR)殘基經對應非人類殘基置換。此外，人源化VHH可包含既不存在於原始VHH亦不存在於人類構架序列中的殘基，但包括該等殘基以進一步改進及最佳化sdAb或含VHH多肽效能。在一些實施例中，人源化sdAb或含VHH多肽包含人類Fc區。依將瞭解，人源化序列可藉由其一級序列鑑別且不一定表示產生抗體之過程。
「效應子陽性Fc區」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括Fc受體結合；Clq結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；以及B細胞活化等。該等效應功能一般需要Fc區與結合域(例如抗體可變域)組合且可使用各種分析來評定。
「原生序列Fc區」包含與自然界中存在之Fc區之胺基酸序列一致的胺基酸序列。原生序列人類Fc區包括原生序列人類IgG1 Fc區(非A及A異型)；原生序列人類IgG2 Fc區；原生序列人類IgG3 Fc區；及原生序列人類IgG4 Fc區，以及其天然存在之變異體。
「變異型Fc區」包含與原生序列Fc區之胺基酸序列相差至少一個胺基酸修飾的胺基酸序列。在一些實施例中，「變異型Fc區」包含與原生序列Fc區之胺基酸序列相差至少一個胺基酸修飾，但保留原生序列Fc區之至少一種效應功能的胺基酸序列。在一些實施例中，變異型Fc區相較於原生序列Fc區或相較於親本多肽之Fc區具有至少一個胺基酸取代，例如在原生序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中約一個至約十個胺基酸取代，且較佳約一個至約五個胺基酸取代。在一些實施例中，本文中的變異型Fc區與原生序列Fc區及/或親本多肽之Fc區具有至少約80%序列一致性，與其具有至少約90%序列一致性，與其具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性。
「Fc受體」或「FcR」描述結合抗體之Fc區之受體。在一些實施例中，FcγR為原生人類FcR。在一些實施例中，FcR為結合IgG抗體之FcR (γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括彼等受體之對偶基因變異體及交替剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA (「活化受體」)及FcγRIIB (「抑制受體」)，兩者具有主要在其細胞質域方面不同的類似胺基酸序列。活化受體FcγRIIA在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，抑制受體FcγRIIB在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制模體(ITIM)。(參見例如Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997))。FcR綜述於例如Ravetch及Kinet, Annu . Rev . Immunol9:457-92 (1991)；Capel等人, Immunomethods4:25-34 (1994)；及de Haas等人, J . Lab . Clin . Med .126:330-41 (1995)中。本文中之術語「FcR」涵蓋包括將來待鑑別之FcR的其他FcR。舉例而言，術語「Fc受體」或「FcR」亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人, J . Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人, J . Immunol. 24:249 (1994))且調控免疫球蛋白之穩態。量測與FcRn之結合之方法為已知的(參見例如Ghetie及Ward, Immunol . Today18(12):592-598 (1997)；Ghetie等人, Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997)；Hinton等人, J . Biol . Chem .279(8):6213-6216 (2004)；WO 2004/92219 (Hinton等人))。
依本文所用之術語「實質上類似」或「實質上相同」表示兩個或更多個數值之間之相似度足夠高，以使得在藉由該值量測生物特徵之情況下，熟習此項技術者將認為該等兩個或更多個值之間的差異具有極小或不具有生物及/或統計顯著性。在一些實施例中，兩個或更多個實質上類似之值相差不超過約以下中之任一者：5%、10%、15%、20%、25%或50%。
多肽「變異體」意謂在比對序列且必要時引入空位以達到最大序列一致性百分比之後，且不考慮任何保守取代為序列一致性之一部分，與原生序列多肽具有至少約80%胺基酸序列一致性的生物活性多肽。該等變異體包括例如在多肽之N端或C端添加或缺失一或多個胺基酸殘基之多肽。在一些實施例中，變異體將具有至少約80%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，變異體將具有至少約90%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，變異體將與原生序列多肽具有至少約95%胺基酸序列一致性。
依本文所用，關於肽、多肽或抗體序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」及「同源性」定義為在比對序列且必要時引入空位以達到最大序列一致性百分比之後，且不考慮任何保守取代為序列一致性之部分，候選序列中與特定肽或多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。用於確定胺基酸序列一致性百分比目的之比對可由此項技術範圍內之各種方式來達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定適用於量測比對之參數，包括在所比較之序列全長內達成最大比對所需之任何演算法。
胺基酸取代可包括但不限於將多肽中之一個胺基酸置換為另一個胺基酸。非限制性例示性取代展示於表1中。胺基酸取代可引入所關注之抗體中且根據所需活性(例如保持/改良之抗原結合、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)篩選產物。 表1
初始殘基 例示性取代
Ala (A) Val；Leu；Ile
Arg (R) Lys；Gln；Asn
Asn (N) Gln；His；Asp, Lys；Arg
Asp (D) Glu；Asn
Cys (C) Ser；Ala
Gln (Q) Asn；Glu
Glu (E) Asp；Gln
Gly (G) Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe
Lys (K) Arg；Gln；Asn
Met (M) Leu；Phe；Ile
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr
Pro (P) Ala
Ser (S) Thr
Thr (T) Val；Ser
Trp (W) Tyr；Phe
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸
胺基酸可根據共有側鏈特性來進行分組： (1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg； (5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro； (6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將引起此等類別中之一者的成員換成另一類別。
術語「載體」用於描述可經工程改造為含有可在宿主細胞中繁殖之一或多個經選殖之聚核苷酸的聚核苷酸。載體可包括以下元件中之一或多者：複製起點、一或多個調控所關注多肽之表現的調控序列(諸如啟動子及/或強化子)及/或一或多個可選擇標記基因(諸如抗生素抗性基因及可用於比色分析中之基因，例如β-半乳糖苷酶)。術語「表現載體」係指用於表現宿主細胞中之所關注多肽之載體。
「宿主細胞」係指可為或已為載體或經分離聚核苷酸之接受者的細胞。宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。例示性真核細胞包括哺乳動物細胞，諸如靈長類動物或非靈長類動物細胞；真菌細胞，諸如酵母；植物細胞；以及昆蟲細胞。非限制性例示性哺乳動物細胞包括但不限於NSO細胞、PER.C6 ®細胞(Crucell)以及293及CHO細胞，及其衍生物，諸如293-6E、CHO-DG44、CHO-K1、CHO-S及CHO-DS細胞。宿主細胞包括單一宿主細胞之後代，且後代可能由於自然、偶然或故意突變而不一定與原始母細胞完全一致(在形態或基因體DNA互補方面)。宿主細胞包括在活體內經本文所提供之聚核苷酸轉染之細胞。
本文所用之術語「經分離」係指已與自然界中通常發現或產生之至少一些組分分離之分子。舉例而言，當多肽與產生多肽之細胞的至少一些組分分離時，稱該多肽「經分離」。若多肽在表現後由細胞分泌，則以物理方式將含有該多肽之上清液與產生其之細胞分離視為「分離」多肽。類似地，當聚核苷酸不為自然界中通常發現之較大聚核苷酸(諸如在DNA聚核苷酸之情況下為基因體DNA或粒線體DNA)之部分，或與產生其之細胞之至少一些組分分離(例如在RNA聚核苷酸之情況下)時，該聚核苷酸稱作「經分離」。因此，宿主細胞內部之載體中所含的DNA聚核苷酸可稱為「經分離」。
術語「個體(individual)」與「個體(subject)」在本文中可互換使用，係指動物，例如哺乳動物。在一些實施例中，提供治療哺乳動物之方法，該等哺乳動物包括(但不限於)人類、嚙齒動物、猿猴、貓科動物、犬科動物、馬科動物、牛科動物、豬科動物、綿羊、山羊、哺乳類實驗室動物、哺乳類農畜、哺乳類運動動物及哺乳類寵物。在一些實例中，「個體(individual)」或「個體(subject)」係指需要治療疾病或病症之個體。在一些實施例中，接受治療之個體可為患者，指示該個體已鑑別為患有與該治療有關聯之病症，或有極大風險感染該病症的事實。
本文所用之「疾病」或「病症」係指需要及/或期望治療之病狀。
術語「自體免疫病症」係指通常與非過敏性超敏反應(II型、III型及/或IV型超敏反應)相關之疾病或病症，通常由個體自身對一或多種內源性外源性來源之免疫原性物質的體液及/或細胞介導免疫反應引起。
術語「發炎性病症」係指與發炎相關之病症，包括(但不限於)慢性或急性發炎性疾病，且明確地包括發炎性自體免疫疾病及發炎性過敏性病狀。
術語「感染」及「傳染性疾病或病症」係指由外源性傳染物(諸如，但不限於，細菌、病毒、真菌、原蟲及寄生蟲)引起之疾病或病症。
術語「癌症」及「腫瘤」涵蓋實體癌症及血液/淋巴癌，且亦涵蓋惡性、癌前及良性生長，諸如發育異常。例示性癌症包括但不限於：基底細胞癌、膽道癌；膀胱癌；骨癌；大腦及中樞神經系統癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨膜癌；大腸及直腸癌；結締組織癌；消化系統癌；子宮內膜癌；食道癌；眼球癌；頭頸癌；胃癌(包括胃腸癌)；神經膠母細胞瘤；肝癌瘤；肝癌；上皮內腫瘤；腎臟癌或腎癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺之鱗狀癌瘤)；黑色素瘤；骨髓瘤；神經母細胞瘤；口腔癌(唇、舌、口及咽)；卵巢癌；胰臟癌；前列腺癌；視網膜母細胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌；呼吸系統癌；唾液腺癌瘤；肉瘤；皮膚癌；鱗狀細胞癌；胃癌；睪丸癌；甲狀腺癌；子宮或子宮內膜癌；泌尿系統癌；外陰癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏及非霍奇金氏淋巴瘤以及B細胞淋巴瘤(包括低級/濾泡型非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴球性(SL) NHL；中級/濾泡NHL；中級瀰漫性NHL；高級免疫母細胞NHL；高級淋巴母細胞NHL；高級小非裂解細胞NHL；腫塊性病變NHL；套細胞淋巴瘤；AIDS相關淋巴瘤；及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)；慢性淋巴球性白血病(CLL)；急性淋巴母細胞白血病(ALL)；毛細胞白血病；慢性骨髓母細胞白血病；以及其他癌瘤及肉瘤；及移植後淋巴增生病症(PTLD)，以及異常血管增殖伴母斑(細胞)病、水腫(諸如伴有腦瘤之水腫)及梅格斯氏症候群(Meigs' syndrome)。
在一些實施例中，「增加」或「減少」分別係指統計學上顯著之增加或減少。依將對熟習此項技術者顯而易見，「調節」亦可包括相較於相同條件但不存在測試劑之情形，對目標或抗原之配位體、結合搭配物、搭配物中之一或多者結合為均多聚體或雜多聚體形式或受質之親和力、親合力、特異性及/或選擇性實現改變(可為增加或減少)；對目標或抗原對該目標或抗原所存在之介質或環境中之一或多種條件(諸如pH、離子強度、輔因子之存在等)的敏感度實現改變(可為增加或減少)；及/或細胞增殖或細胞介素產生。視所涉及之目標而定，此可藉由任何合適方式及/或使用本身已知或本文所描述之任何合適分析來確定。
依本文所用，「治療」為用於獲得有利的或所期望的臨床結果之途徑。依本文所用之「治療」涵蓋對於包括人類在內之哺乳動物之疾病進行之任何投與或施用治療方案。出於本發明之目的，有益或所期望之臨床結果包括但不限於以下之任一或多者：減輕一或多種症狀、減弱疾病程度、預防或延遲疾病擴散(例如轉移，例如轉移至肺或淋巴結)、預防或延遲疾病復發、延遲或減緩疾病進展、改善疾病狀態、抑制疾病或疾病進展、抑制或減緩疾病或其進展、阻滯其發展及緩解(無論部分或完全)。「治療」亦涵蓋增殖性疾病之病理後果減輕。本文所提供之方法涵蓋該等治療態樣中之任一或多者。根據以上所述，術語治療不需要病症之所有態樣百分之百移除。
「緩解」意謂相較於未投與治療劑，一或多種症狀得以減輕或改善。「改善」亦包括縮短或減少症狀之持續時間。
術語「抗癌劑」在本文中以其最廣含義使用以指用於治療一或多種癌症之藥劑。例示性種類之此等藥劑包括但不限於化學治療劑、抗癌生物製劑(諸如細胞介素、受體細胞外域-Fc融合體及抗體)、放射線療法、CAR-T療法、治療性寡核苷酸(諸如反義寡核苷酸及siRNA)及溶瘤病毒。
術語「生物樣品」意謂一定量的來自活物或先前為活物之物質。該等物質包括但不限於血液(例如全血)、血漿、血清、尿液、羊水、滑液、內皮細胞、白細胞、單核球、其他細胞、器官、組織、骨髓、淋巴結及脾臟。
術語「對照」或「參考」係指已知不含分析物之組合物(「陰性對照」)或已知含有分析物之組合物(「陽性對照」)。陽性對照可包含已知濃度之分析物。
術語「抑制(inhibition)」或「抑制(inhibit)」係指任何表型特徵減少或停止，或彼特徵之發生率、程度或可能性降低或停止。「降低」或「抑制」係使活性、功能及/或量相較於參考物減小、降低或停滯。在一些實施例中，「降低」或「抑制」意謂使得整體減少10%或更多之能力。在一些實施例中，「降低」或「抑制」意謂使得整體減少50%或更多之能力。在一些實施例中，「降低」或「抑制」意謂使得整體減少75%、85%、90%、95%或更多之能力。在一些實施例中，相對於一段時間內之對照而言，在同一段時間內抑制或減少上文所提及之量。
依本文所用，「延遲疾病發展」意謂延緩、阻礙、減緩、扼止、穩定、抑止及/或推遲疾病(諸如癌症)之發展。此延遲可具有不同時間長度，視所治療之疾病及/或個體之病史而定。依對熟習此項技術者而言顯而易見，充分或顯著延遲可實際上涵蓋預防，使得該個體不罹患該疾病。舉例而言，可延遲晚期癌症，諸如癌轉移發展。
依本文所用，「預防」包括在個體疾病出現或復發方面提供預防作用，該個體可能易患該疾病但尚未診斷患有該疾病。除非另有規定，否則術語「降低」、「抑制」或「預防」不表示或不要求一直而僅在所量測之時間段內完全預防。
物質/分子(促效劑或拮抗劑)之「治療有效量」可根據以下因素改變：諸如個體之疾病病況、年齡、性別及體重、及物質/分子(促效劑或拮抗劑)在個體體內引發所需反應之能力。治療有效量亦係治療之有利作用超過該物質/分子(促效劑或拮抗劑)之任何有毒或有害作用的量。治療有效量可經一或多次投與來遞送。「治療有效量」係指在必需劑量下且在必需時間內有效實現所需治療及/或預防結果的量。
術語「醫藥調配物」及「醫藥組合物」可互換使用且係指所呈形式允許活性成分之生物活性有效，且不含對調配物將投與之個體具有不可接受毒性之額外組分的製劑。該等調配物可為無菌的。
「醫藥學上可接受之載劑」係指此項技術中習知之無毒固體、半固體或液體填補劑、稀釋劑、囊封材料、調配助劑或載劑，其與治療劑一起使用，一起構成向個體投與之「醫藥組合物」。醫藥學上可接受之載劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒且與調配物之其他成分相容。醫藥學上可接受之載劑適於所用之調配物。
與一或多種其他治療劑「組合」投與包括同時(並行)及以任何次序依序投與。
術語「並行」在本文中用以指投與兩種或更多種治療劑，其中至少部分投與在時間上重疊，或其中一種治療劑之投與落在相對於投與另一種治療劑之相對較短之時間段內，或其中兩種藥劑之治療作用重疊至少一段時間。
術語「依序」在本文中用以指代兩種或更多種治療劑之投與在時間上不重疊，或其中該等藥劑之治療作用不重疊。
依本文所用，「連同(in conjunction with)」係指除一種治療模式(treatment modality)以外亦投與另一種治療形式。因此，「連同」係指在向個體投與一種治療模式之前、期間或之後投與另一種治療模式。
依本文所用，術語「藥品說明書」用以指通常包括於治療性產品之商業包裝中的說明書，其含有關於與使用此類治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
「製品」為包含至少一種試劑，例如用於治療疾病或病症(例如，癌症)之藥物之任何製品(例如，封裝或容器)或套組，或用於特異性偵測本文所描述之生物標記之探針。在一些實施例中，製品或套組係以用於執行本文所描述之方法之單元形式推銷、分銷或出售。
術語「標記」及「可偵測標記」意謂附著至例如抗體或抗原以使得特異性結合對之成員之間的反應(例如結合)可偵測之部分。特異性結合對之經標記成員稱為「經可偵測地標記」。因此，術語「經標記之結合蛋白」係指併入標記以便鑑別結合蛋白之蛋白。在一些實施例中，標記為可產生可藉由目視或儀器方式偵測的信號之可偵測標記物，例如併入經放射性標記之胺基酸或連接至可藉由經標記之抗生物素蛋白(例如含有可藉由光學或比色方法偵測之螢光標記物或酶促活性的鏈黴抗生物素蛋白)偵測之生物素基部分的多肽。多肽標記之實例包括但不限於以下：放射同位素或放射核種(例如 3H、 14C、 35S、 90Y、 99Tc、 111In、 125I、 131I、 177Lu、 166Ho或 153Sm)；色素原、螢光標記(例如FITC、羅丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體)、酶標記(例如辣根過氧化酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)；化學發光標記物；生物素基；由二級報告子識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈對序列、二級抗體結合位、金屬結合域、抗原決定基標籤)；以及磁性劑，諸如釓螯合劑。常用於免疫分析之標記之代表性實例包括產生光之部分，例如吖錠化合物，及產生螢光之部分，例如螢光素。就此而言，該部分自身可能並非經可偵測地標記，但可在與又一部分反應之後變為可偵測的。 例示性 FcRn- 結合多肽
本文提供包括結合FcRn之VHH域的單域抗體(sdAb)。在一些實施例中，結合FcRn之VHH域以0.01 nM與5 nM之間、或0.01 nM與2 nM之間、或0.01 nM與1 nM之間，0.01 nM與0.5 nM之間，0.05 nM與5 nM之間、或0.05 nM與2 nM之間、或0.05 nM與1 nM之間或0.05 nM與0.5 nM之間的親和力(K D)結合。
在各種實施例中，提供包含至少一個結合FcRn之VHH域的多肽。在一些實施例中，提供包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個或八個結合FcRn之VHH域的多肽。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合FcRn之VHH域。此類多肽可包含一或多個結合一或多種除FcRn以外之靶蛋白的額外VHH域。
在各種實施例中，包含一或多個結合FcRn之VHH域的多肽亦包含治療性抗原結合域及/或治療性多肽。此類治療性抗原結合域包括但不限於包含重鏈可變區及輕鏈可變區之傳統抗體抗原結合域，以及單域抗體抗原結合域，諸如VHH域。非限制性例示性治療性多肽包括例如受體細胞外域、酶及配位體。在各種實施例中，包含至少一個結合FcRn之VHH域的多肽在與至少一個結合白蛋白之VHH域融合時具有比未與至少一個結合白蛋白之VHH域融合之相同多肽更長的活體內半衰期。在一些實施例中，半衰期比不具有結合白蛋白之VHH域的多肽之半衰期長至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍。
在一些實施例中，包含至少一個結合FcRn之VHH域的多肽包含Fc區。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合FcRn及Fc區之VHH域。在一些實施例中，Fc區介導多肽在生理條件下二聚。
在各種實施例中，結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 80-81之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 83-84之CDR2序列及SEQ ID NO: 85之CDR3序列。在各種實施例中，結合FcRn之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 80、83及85；SEQ ID NO: 81、83及85；及SEQ ID NO: 81、84及85。
在一些實施例中，結合FcRn之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 86-93之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的胺基酸序列。在一些實施例中，結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 86-93之胺基酸序列。
在一些實施例中，提供結合FcRn之VHH域，其與包含選自SEQ ID NO: 86-93之胺基酸序列的VHH域競爭結合FcRn。 例示性白蛋白 - 結合多肽
本文提供包括結合白蛋白之VHH域的多肽。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域不干擾白蛋白與FcRn之結合。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域不結合白蛋白之域3。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域以0.01 nM與5 nM之間，或0.01 nM與2 nM之間，或0.01 nM與1 nM之間，0.01 nM與0.5 nM之間，0.05 nM與5 nM之間，或0.05 nM與2 nM之間，或0.05 nM與1 nM之間或0.05 nM與0.5 nM之間的親和力(K D)結合。
在各種實施例中，提供包含至少一個結合白蛋白之VHH域的多肽。在一些實施例中，提供包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個或八個結合白蛋白之VHH域的多肽。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合白蛋白之VHH域。此類多肽可包含一或多個結合除白蛋白外之一或多種靶蛋白的額外VHH域。
在各種實施例中，包含一或多個結合白蛋白之VHH域的多肽亦包含治療性抗原結合域及/或治療性多肽。此類治療性抗原結合域包括但不限於包含重鏈可變區及輕鏈可變區之傳統抗體抗原結合域，以及單域抗體抗原結合域，諸如VHH域。非限制性例示性治療性多肽包括例如受體細胞外域、酶及配位體。在各種實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域的多肽具有比不具有至少一個結合白蛋白之VHH域的相同多肽更長的活體內半衰期。在一些實施例中，半衰期比不具有結合白蛋白之VHH域的多肽之半衰期長至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍。
在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域的多肽包含Fc區。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合白蛋白及Fc區之VHH域。在一些實施例中，Fc區介導多肽在生理條件下二聚。
在各種實施例中，結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 5-8之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 9-21之CDR2序列及SEQ ID NO: 22之CDR3序列。在各種實施例中，結合白蛋白之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 5、9及22；SEQ ID NO: 5、10及22；SEQ ID NO: 5、11及22；SEQ ID NO: 5、12及22；SEQ ID NO: 5、13及22；SEQ ID NO: 5、14及22；SEQ ID NO: 5、15及22；SEQ ID NO: 6、15及22；SEQ ID NO: 7、15及22；SEQ ID NO: 8、15及22；SEQ ID NO: 6、16及22；SEQ ID NO: 6、17及22；SEQ ID NO: 6、18及22；SEQ ID NO: 6、19及22；SEQ ID NO: 6、20及22；及SEQ ID NO: 6、21及22。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域包含SEQ ID NO: 6、21及22之CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的胺基酸序列。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之胺基酸序列。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域包含與SEQ ID NO: 99至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的胺基酸序列。在一些實施例中，結合白蛋白之VHH域包含胺基酸序列SEQ ID NO: 99。
在一些實施例中，提供結合白蛋白之VHH域，其與包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之胺基酸序列的VHH域競爭結合白蛋白。 例示性FcRn-結合多肽及白蛋白-結合多肽
在一些實施例中，提供包含至少一個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之VHH域的多肽。在各種實施例中，結合FcRn之VHH域及/或結合白蛋白之VHH域為本文所提供之VHH域。
在一些實施例中，提供一種多肽，其包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個或八個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之VHH域。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之VHH域。包含至少一個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之FcRn的非限制性例示性多肽展示於圖5中。
在各種實施例中，本文所提供之多肽可包含一或多個結合一或多種除白蛋白或FcRn以外之靶抗原的額外抗原結合域。在各種實施例中，包含一或多個結合白蛋白之VHH域及一或多個結合FcRn之VHH域的多肽亦包含治療性抗原結合域及/或治療性多肽。此類治療性抗原結合域包括但不限於包含重鏈可變區及輕鏈可變區之傳統抗體抗原結合域，以及單域抗體抗原結合域，諸如VHH域。非限制性例示性治療性多肽包括例如受體細胞外域、酶及配位體。結合FcRn之VHH域及/或結合白蛋白之VHH域可在抗原結合域或治療性多肽之N端處或在C端處連接至抗原結合域或治療性多肽(例如，VHH-VHH-抗原結合域或抗原結合域-VHH-VHH)，或其可各自位於不同端(例如，VHH-抗原結合域-VHH)。
在多肽之一些實施例中，多肽之相鄰部分，諸如第一VHH及第二VHH或VHH與抗原結合域，可藉由連接子彼此連接。在一些此類實施例中，連接子包含1至20個、1至12個或1至8個胺基酸，較佳主要由甘胺酸及視情況選用之絲胺酸構成。此類連接子之非限制性實例為GSGGGS (SEQ ID NO: 101)。在多肽之一些實施例中，C端VHH可藉由一或多個額外胺基酸殘基延長。在某些實施例中，此類殘基為甘胺酸殘基。在一些實施例中，C端VHH藉由兩個或更多個甘胺酸殘基延長。
在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽不包含Fc區。在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽包含Fc區。在一些實施例中，本文所提供之多肽包含一個、兩個、三個或四個結合白蛋白之VHH域，一個、兩個、三個或四個結合FcRn及Fc區之VHH域。在一些實施例中，Fc區介導多肽在生理條件下二聚。
在各種實施例中，包含至少一個結合白蛋白及FcRn之VHH域的多肽具有比不具有至少一個結合白蛋白之VHH域的相同多肽更長的活體內半衰期。在一些實施例中，半衰期比不具有結合白蛋白之VHH域的多肽之半衰期長至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍。
在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽包含與選自SEQ ID NO: 69-77之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的序列。在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽包含選自SEQ ID NO: 69-77之序列。
在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽包含與選自SEQ ID NO: 69-74及77之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的序列。在一些實施例中，包含至少一個結合白蛋白之VHH域及一個結合FcRn之VHH域的多肽包含選自SEQ ID NO: 69-74及77之序列。 人源化 VHH 域
在一些實施例中，VHH域經人源化。人源化抗體(諸如sdAb或含VHH多肽)適用作治療性分子，因為人源化抗體減少或消除對非人類抗體之人類免疫反應，該人類免疫反應可能引起對抗體治療劑之免疫反應且減小治療劑之有效性。一般而言，人源化VHH包含來源於非人類抗體之CDR(或其部分)及來源於人類抗體序列之FR(或其部分)。在一些實施例中，人源化VHH中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如CDR殘基所來源之VHH)之對應殘基取代，從而例如恢復或改良抗體特異性或親和力。
人源化抗體及其製得方法綜述於例如Almagro及Fransson, (2008) Front . Biosci .13: 1619-1633中，且進一步描述於例如以下各者中：Riechmann等人, (1988) Nature332:323-329；Queen等人, (1989) Proc . Natl Acad . Sci . USA86: 10029-10033；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人, (2005) Methods36:25-34；Padlan, (1991) Mol . Immunol. 28:489-498 (描述「表面再塑(resurfacing」)；Dall'Acqua等人, (2005) Methods36:43-60 (描述「FR改組」)；及Osbourn等人, (2005) Methods 36:61-68及Klimka等人, (2000) Br . J . Cancer, 83:252-260 (描述FR改組之「導向選擇」方法)。
可用於人源化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合(best-fit)」法選擇之構架區(參見例如Sims等人(1993) J . Immunol. 151 :2296)；來源於具有重鏈可變區之特定子組之人類抗體的共有序列之構架區(參見例如Carter等人(1992) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285；及Presta等人(1993) J . Immunol, 151:2623)；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson, (2008) Front . Biosci. 13:1619-1633)；及來源於篩選FR庫之構架區(參見例如Baca等人, (1997) J . Biol . Chem. 272: 10678-10684及Rosok等人, (1996) J . Biol . Chem. 271 :22611-22618)。通常，VHH之FR區經人類FR區置換以產生人源化VHH。在一些實施例中，人類FR之某些FR殘基經置換以便改良人源化VHH之一或多個特性。具有此等經置換殘基之VHH域在本文中仍稱為「人源化」。 Fc 域
在各種實施例中，包括於多肽中之Fc區為人類Fc區，或來源於人類Fc區。
在一些實施例中，包括於多肽中之Fc區來源於人類Fc區且包含針對異二聚設計之突變，本文中稱為「杵」及「臼」。在一些實施例中，「杵」Fc區包含突變T366W。在一些實施例中，「臼」Fc區包含突變T366S、L368A及Y407V。在一些實施例中，用於異二聚之Fc區包含額外突變，諸如位於形成不對稱二硫鍵之異二聚體Fc對之第一成員上之突變S354C及位於異二聚體Fc對之第二成員上之對應突變Y349C。在一些實施例中，異二聚體Fc對之一個成員包含修飾H435R或H435K以阻止蛋白質A結合，同時維持FcRn結合。在一些實施例中，異二聚體Fc對之一個成員包含修飾H435R或H435K，而異二聚體Fc對之第二成員在H435處不經修飾。在各種實施例中，臼Fc區包含修飾H435R或H435K (在一些情況下，當修飾為H435R時，稱為「臼-R」)，而杵Fc區不包含修飾。在一些情況下，相對於可能存在之均二聚體臼Fc區，臼-R突變改良異二聚體之純化。
可用於多肽中之非限制性例示性Fc區包括包含SEQ ID NO: 47-68之胺基酸序列的Fc區。 多肽表現及產生
提供核酸分子，其包含編碼本文所提供之多肽的聚核苷酸。在一些實施例中，核酸分子亦可編碼引導多肽之分泌的前導序列，該前導序列通常裂解使得其不存在於所分泌之多肽中。前導序列可為原生重鏈(或VHH)前導序列，或可為另一種異源前導序列。
核酸分子可使用此項技術中習知之重組DNA技術來構築。在一些實施例中，核酸分子為適於在所選宿主細胞中表現的表現載體。
提供包含編碼本文所提供之多肽之核酸的載體。該等載體包括但不限於DNA載體、噬菌體載體、病毒載體、逆轉錄病毒載體等。在一些實施例中，選擇經最佳化以在諸如CHO或CHO衍生之細胞之所需細胞型或NSO細胞中表現多肽的載體。例示性此類載體描述於例如Running Deer等人, Biotechnol . Prog. 20:880-889 (2004)中。
在一些實施例中，本發明提供之多肽可表現於原核細胞中，諸如細菌細胞中；或真核細胞中，諸如真菌細胞(諸如酵母)、植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞中。此類表現可例如根據此項技術中已知的程序進行。可用於表現多肽的例示性真核細胞包括但不限於COS細胞，包括COS 7細胞；293細胞，包括293-6E細胞；CHO細胞，包括CHO-S、DG44. Lec13 CHO細胞，及FUT8 CHO細胞；PER.C6 ®細胞(Crucell)；及NSO細胞。在一些實施例中，多肽可在酵母中表現。參見例如美國公開案第US 2006/0270045 A1號。在一些實施例中，特定之真核宿主細胞係基於其對多肽進行所需轉譯後修飾的能力來選擇。舉例而言，在一些實施例中，CHO細胞產生多肽，該等多肽之唾液酸化水平高於293細胞中所產生之相同多肽。
將一或多種核酸(諸如載體)引入至所需宿主細胞中可藉由任何方法完成，包括但不限於磷酸鈣轉染、DEAE-聚葡萄糖介導之轉染、陽離子脂質介導之轉染、電穿孔、轉導、感染等。非限制性例示性方法描述於例如Sambrook等人, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第3版Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)中。核酸可根據任何適合方法短暫或穩定轉染於所需宿主細胞中。
亦提供包含本文所描述之核酸或載體中之任一者的宿主細胞。在一些實施例中，提供一種表現本文所描述之多肽的宿主細胞。宿主細胞中表現之多肽可藉由任何適合方法經純化。此類方法包括但不限於使用親和基質或疏水性相互作用層析。適合之親和配位體包括ROR1 ECD及結合Fc區之劑。舉例而言，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或抗體親和管柱可用於結合Fc區及純化包含Fc區之多肽。疏水相互作用層析，例如丁基或苯基管柱，亦可適用於純化一些多肽，諸如抗體。離子交換層析(例如，陰離子交換層析及/或陽離子交換層析)亦可適用於純化一些多肽，諸如抗體。混合模式層析(例如逆相/陰離子交換、逆相/陽離子交換、親水相互作用/陰離子交換、親水相互作用/陽離子交換等)亦適合於純化一些多肽，諸如抗體。此項技術中已知多種用於純化多肽之方法。
在一些實施例中，多肽產生於無細胞系統中。非限制性例示性無細胞系統描述於例如Sitaraman等人, Methods Mol . Biol .498: 229-44 (2009)；Spirin, Trends Biotechnol .22: 538-45 (2004)；Endo等人, Biotechnol . Adv. 21: 695-713 (2003)中。
在一些實施例中，提供藉由上文所描述之方法製備的多肽。在一些實施例中，在宿主細胞中製備多肽。在一些實施例中，在無細胞系統中製備多肽。在一些實施例中，將多肽純化。在一些實施例中，提供包含多肽之細胞培養基。
在一些實施例中，提供包含藉由上文所描述方法製備之抗體的組合物。在一些實施例中，組合物包含在宿主細胞中製備的本文所提供之多肽。在一些實施例中，組合物包含在無細胞系統中製備之多肽。在一些實施例中，組合物包含經純化之多肽。 使用FcRn-結合多肽治療疾病之例示性方法
在一些實施例中，提供治療個體之疾病的方法，其包含投與本文所提供之包含FcRn-結合域之治療性多肽。此類疾病包括將受益於用包含FcRn-結合域之治療性多肽治療的任何疾病。可用本文所提供之包含FcRn-結合域之治療性多肽治療的非限制性例示性疾病包括傳染性疾病、免疫疾病或病症(例如，自體免疫疾病或病症)、發炎性疾病或病症及癌症。在一些實施例中，疾病或病症為自體抗體介導之疾病或病症。在一些實施例中，該疾病或病症為尋常天疱瘡、狼瘡性腎炎、重症肌無力、格林-巴利症候群、抗體介導之排斥、抗磷脂抗體症候群、慢性發炎性脫髓鞘性多發神經病變、免疫複合體介導之血管炎、腎小球炎、離子通道病變、視神經脊髓炎、自體免疫性腦炎、自體免疫性格雷氏病、特發性血小板減少性紫癜、自體免疫性溶血性貧血、免疫嗜中性白血球減少症、擴張型心肌病或血清病。該方法包含向個體投與本文所提供之有效量的包含FcRn-結合域之治療性多肽。在一些實施例中，治療方法促進個體之自體抗體清除。在一些實施例中，治療方法在個體中阻斷免疫反應(例如阻斷免疫反應之基於免疫複合體之活化)。該等治療方法可係針對人類或動物。在一些實施例中，提供治療人類之方法。
可按需要向個體投與本文所提供之包含FcRn-結合域的治療性多肽。可由熟習此項技術者，諸如主治醫師，基於考慮所治療病狀、所治療個體之年齡、所治療病狀之嚴重程度、所治療個體之一般健康狀況及其類似因素來決定投與頻率。在一些實施例中，向個體投與有效劑量之治療性多肽一或多次。在一些實施例中，每天、每半週、每週、每兩週、每月一次等向個體投與有效劑量的包含FcRn-結合域之治療性多肽。向個體投與有效劑量的包含FcRn-結合域之治療性多肽至少一次。在一些實施例中，有效劑量之治療性多肽可投與多次，包括在至少一個月、至少六個月或至少一年之時程內投與多次。
在一些實施例中，以能有效治療疾病之量投與醫藥組合物。治療有效量通常取決於所治療個體之體重、其生理或健康狀況、所治療病狀之延伸性或所治療個體之年齡。
在一些實施例中，治療性多肽可在活體內藉由各種途徑投與，該等途徑包括但不限於靜脈內、動脈內、非經腸、腹膜內或皮下。適當調配物及投與途徑可根據預期應用來選擇。 醫藥組合物
在一些實施例中，包含多肽之組合物提供於具有廣泛多種醫藥學上可接受之載劑的調配物中(參見例如Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 第20版(2003)；Ansel等人, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第7版, Lippencott Williams and Wilkins (2004)；Kibbe等人, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第3版, Pharmaceutical Press (2000))。各種醫藥學上可接受之載劑，包括媒劑、佐劑及稀釋劑係可用的。此外，各種醫藥學上可接受之輔助物質，諸如pH調節劑及緩衝液、張力調節劑、穩定劑、濕潤劑及類似物，亦係可用的。非限制性例示性載劑包括鹽水、緩衝鹽水、右旋糖、水、丙三醇、乙醇及其組合。 非限制性例示性診斷及治療方法
在一些實施例中，本文所描述之方法適用於評估來自個體(例如患有自體免疫疾病之患者或癌症患者)之個體及/或試樣。在一些實施例中，評估為診斷、預後及/或對治療之反應中之一或多者。
在一些實施例中，本文所描述之方法包含評估蛋白質之存在、不存在或含量。在一些實施例中，本文所描述之方法包含評估核酸之存在、不存在或表現量。本文所描述之組合物可用於此等量測。在一些實施例中，評估可指導治療(包括用本文所描述之多肽進行治療)。 套組
亦提供包括依本文所描述之多肽中的任一者及適合之包裝的製品及套組。在一些實施例中，本發明包括一種套組，其具有(i)本文所提供之多肽及(ii)使用該套組以向個體投與多肽之說明書。
適用於本文所描述之組合物的包裝為此項技術中已知，且包括例如小瓶(例如密封小瓶)、容器、安瓿、瓶子、罐、可撓性包裝(例如密封聚酯薄膜(Mylar)或塑膠袋)及其類似物。此等製品可進一步經滅菌及/或密封。亦提供包含本文所描述之組合物之單位劑型。該等單位劑型可按單個或多個單位劑量儲存於適合之包裝中且亦可經進一步滅菌及密封。本發明套組中供應之說明書為通常在標籤或藥品說明書(例如，套組中包括之紙片)上之書面說明書，但機器可讀說明書(例如，磁或光學儲存盤上載有的說明書)亦為可接受的。與使用抗體相關之說明書一般包括關於用於預期治療或工業用途之劑量、給藥時程及投與途徑之資訊。套組可進一步包含關於選擇適合之個體或治療的描述。
容器可為單位劑量、散裝(例如，多劑量包裝)或次單位劑量。舉例而言，亦可提供含有足夠劑量之本文所揭示分子以對個體提供延長期之有效治療的套組，該延長期諸如約1週、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月或更多個月中之任一者。套組亦可包括多個單位劑量之分子及使用說明書且以對於在藥房(例如醫院藥房及配藥房)中儲存及使用而言足夠之量進行包裝。在一些實施例中，套組包括乾燥(例如凍乾)組合物，其可經復原、再懸浮或復水以形成一般穩定之抗體水性懸浮液。 實例
下文所論述之實例僅意欲例示本發明，且不應視為以任何方式限制本發明。該等實例並非意欲表示下文實驗為所進行之所有實驗或唯一實驗。已儘力確保關於所用數字(例如量、溫度等)之準確度。但應考慮一定實驗誤差及偏差。除非另外指明，否則份為重量份，分子量為平均分子量，溫度以攝氏度計，且壓力為大氣壓或接近大氣壓。 實例 1 ： 抗白蛋白單域抗體 ( sdAb ) 之開發
經由對駱馬及/或羊駝免疫接種重組型人類血清白蛋白(SEQ ID NO: 1)，產生靶向人類白蛋白之單域抗體。
產生特定抗白蛋白抗體效價之後，自經免疫接種之動物的500 mL血液中分離出駱馬/羊駝周邊血液單核細胞(PBMC)，且使用Qiagen RNeasy Maxi套組分離總mRNA，且隨後使用Thermo Superscript IV逆轉錄酶及寡聚dT引發(oligo-dT priming)轉化為第一股cDNA。使VHH序列經由PCR使用cDNA作為模板特異性擴增且選殖至酵母表面顯示載體中作為VHH-Fc-AGA2融合蛋白。Fc為人類IgG1 Fc，或在一些情況下，為具有減弱之效應功能的變異型IgG1 Fc。
使用人類白蛋白之重組形式，經由磁珠分離，隨後進行螢光活化細胞分選(FACS)來使顯示VHH-Fc-AGA2融合蛋白之酵母庫富集。使經分選之酵母析出，且挑選經分離之菌落置於96孔盤中，且進行VHH-Fc-AGA2融合蛋白之酵母細胞表面表現之誘導。將生物素化重組人類白蛋白或不相關之生物素化蛋白(白蛋白陰性)直接施用於經誘導之酵母，洗滌，用螢光團標記之鏈黴抗生物素蛋白處理，且藉由96孔流式細胞測量術進行分析。
編碼結合生物素化重組人類白蛋白及不結合不相關生物素化蛋白之VHH的核酸序列用人類Fc xELL編碼區同框選殖至哺乳動物表現載體中，且藉由在HEK293 Freestyle細胞(293F細胞)或CHO細胞中使用聚乙烯亞胺瞬時轉染來表現。在3至7天之後收集上清液，藉由蛋白A層析純化所分泌之重組蛋白，且由在280 nm之吸光率及消光係數計算濃度。
選擇抗白蛋白sdAb 4A01進行人源化。 實例 2 ： 抗白蛋白 sdAb 4A01 之人源化及物種交叉反應性
sdAb 4A01之各種人源化形式係基於人類重鏈構架VH3-23*04製成。使某些胺基酸回復突變成供體胺基酸，且測試某些突變，例如CDR2中之突變。圖1A展示人類重鏈受體序列與4A01之人源化形式的比對。
藉由ELISA按以下測定單體抗白蛋白sdAb 4A01 (「lm4A01」)及其人源化形式與人類血清白蛋白、石蟹獼猴血清白蛋白、鼠類血清白蛋白及大鼠血清白蛋白之結合。在4℃下用白蛋白以2 µg/ml，50 µl/孔塗鋪Medisorp盤過夜(人類、鼠類及大鼠白蛋白-Sigma，石蟹獼猴白蛋白-Abcam)。將1倍魚膠(封閉劑，Bethyl Laboratories)添加至經白蛋白塗鋪之孔中，隨後在RT下培育1小時。添加sdAb融合蛋白之滴定(以100 nM開始，跨1:3或降至1:4)且在室溫(RT)下培育1小時。用0.1% D-PBST將盤洗3次，且隨後添加抗人類Fc HRP抗體(在0.1% D-PBST中1:2000，Jackson)且在RT下培育30分鐘。用0.1% DPBST將盤洗3次，且隨後添加TMB受質。在盤讀取器(Molecular Devices)上讀取650 nm處之吸光率且使用單位點-總結合等式(模型：Y=Bmax*X/(Kd+X) + NS*X + 背景，GraphPad Prism)來標繪資料。
4A01及4A01之人源化形式與人類白蛋白之結合展示於圖1B至圖1C中。所有sdAb均以0.10至0.43 nM之間的K D結合人類白蛋白。4A01及4A01之人源化形式與石蟹獼猴白蛋白之結合展示於圖1D至圖1E中。所有sdAb均以0.11至0.34 nM之間的K D結合石蟹獼猴白蛋白。4A01及4A01之人源化形式與鼠類白蛋白之結合展示於圖1F至圖1G中。所有sdAb均以0.11與約0.25 nM之間的K D結合鼠類白蛋白。4A01及4A01之人源化形式與大鼠白蛋白之結合展示於圖1H至圖1I中。所有sdAb均以0.14與約0.33 nM之間的K D結合大鼠白蛋白。
圖2A至圖2D展示4A01及人源化hz4A01v51與人類(2A)、石蟹獼猴(2B)、鼠類(2C)及大鼠(2D)白蛋白之結合。4A01及所有所測試之人源化變異體均以小於1 nM之親和力結合所有四種白蛋白物種。人源化hz4A01v51以小於0.3 nM之親和力結合所有四種白蛋白物種，且達成大於90%之最大結合。
hz4A01v51之構架區經進一步修飾，包括藉由使某些殘基回復突變為供體胺基酸及/或引入替代性帶電殘基。經修飾之單體抗白蛋白抗體(包含hz4A01v51.9、hz4A01v51.11、hz4A01v51.12或hz4A01v51.13 VHH域)在pH 6及pH 7.4下呈現類似結合曲線且全部均呈現優於尤其在pH 6下針對hz4A01v51所觀測到之結合的經改良之結合(資料未展示)。 實例 3 ： 抗白蛋白 sdAb 4A01 不結合白蛋白域 3
白蛋白主要經由域3結合β-2微球蛋白FcRn複合物，且咸信彼結合參與改良與抗白蛋白抗體融合或與白蛋白自身融合之蛋白的半衰期。為了測定抗白蛋白sdAb 4A01是否與白蛋白域3結合，按以下藉由生物膜干涉測量術來分析4A01-NNT-hFc之結合。
將白蛋白域3 (加小鼠Fc標籤)固定於抗小鼠IgG Fc捕捉生物感測器上。所有緩衝液/蛋白調配物均在MBST5 (50 nM MES pH5、150 mM NaCl、0.025% Tween))中。僅使用緩衝液建立基線。將加小鼠Fc標籤之人類白蛋白域III (10 µg/ml)裝載於抗小鼠IgG Fc捕捉生物感測器(ForteBio)上。隨後裝載抗白蛋白sdAb 4A01 (4A01-NNT-hFc)及1C04 (類似型式)且使其與所捕捉之生物素域3結合，隨後與MBST5解離。已知sdAb 1C04結合白蛋白域3，且用作陽性對照。參見圖3A。
依圖3B所示，1C04，而非4A01，結合固定化白蛋白域3。
隨後按以下測試抗白蛋白sdAb 4A01 (4A01-NNT-hFc)、hz4A01v51及1C04對白蛋白-FcRn結合之干擾。藉由使用固定於鏈黴抗生物素蛋白生物感測器上之生物素化重組FcRn-B2M的生物膜干涉測量術來評定結合。隨後使固定化FcRn-B2M與重組人類白蛋白複合。所有緩衝液/蛋白調配物均在MBST5 (50 mM MES pH5、150 mM NaCl、0.025% Tween)中。僅使用緩衝液建立基線。將生物素化FcRn-B2M (10 µg/ml，Acro Biosystems)裝載至鏈黴抗生物素蛋白生物感測器(ForteBio)上，且另一基線確定。隨後添加50 µM重組人類白蛋白(Sigma)且使其與固定化FcRn-B2M結合。隨後裝載抗白蛋白sdAb 4A01及4A01v51以及sdAb 1C04且使其與所捕捉之生物素域3結合，隨後與MBST5解離。參見圖4A。
依圖3B所示，4A01及hx4A01v51兩者均結合與FcRn-B2M結合之白蛋白，但1C04未結合。 實例 4 ： FcRn 單域抗體 ( sdAb ) 之開發
經由用包含人類B2m (SEQ ID NO: 79)及人類FcRn之細胞外域(SEQ ID NO: 78)的多肽進行駱馬免疫接種來產生靶向人類FcRn之單域抗體，該多肽與可撓性連接子接合且與聚組胺酸標籤融合以用於純化。產生特定抗FcRn抗體效價之後，自經免疫接種之動物的500 mL血液中分離出駱馬周邊血液單核細胞(PBMC)，且使用Qiagen RNeasy Maxi套組分離總mRNA，且隨後使用Thermo Superscript IV逆轉錄酶及寡聚dT引發轉化為第一股cDNA。使VHH序列經由PCR使用cDNA作為模板特異性擴增且選殖至酵母表面顯示載體中作為VHH-Fc-AGA2融合蛋白。
使用FcRn ECD之重組形式，經由磁珠分離，隨後進行螢光活化細胞分選(FACS)來使顯示VHH-Fc-AGA2融合蛋白之酵母庫富集。使經分選之酵母析出，且挑選經分離之菌落置於96孔盤中且使其在培養基中生長，使表面顯示之VHH-Fc表現轉變成分泌至培養基中。將來自96孔酵母菌分泌培養物之上清液施加至經FcRn瞬時轉染之293F細胞(FcRn陽性)或未經轉染之293F細胞(FcRn陰性)，洗滌，用螢光團標記之抗人類IgG1 Fc二級抗體處理，且藉由96孔流式細胞測量術來分析。
結合FcRn之一個VHH域(純系B10a)實質上依實例2中所描述人源化。使用人源化B10a VHH域(hzB10a.v1-v2.5)產生靶向人類FcRn及白蛋白之雙特異性多肽，其具有圖5(i) (cx11383、cx11558、cx12003、cx12006、cx12007、cx12008及cx12032)或圖5(ii) (cx11385及cx11642)中所示之結構。 實例 5 ：抗 FcRn VHH 多肽與人類 FcRn 之結合
藉由流式細胞測量術使用基於CHO之過度表現系統或經分離之人類周邊血液單核球(PBMC)來測試在中性(7.4)或胞內體(6) pH抗FcRn VHH多肽與人類FcRn之結合。CHO細胞經瞬時轉染以過度表現與跨膜域及細胞內檸檬素(citrine)及β-2微球蛋白(SEQ ID NO: 79)融合之人類FcRn細胞外域(ECD) (SEQ ID NO: 78)。
將CHO細胞以50,000個細胞/孔塗鋪於96孔盤中且再懸浮於PBS，pH 7.4或含有20 mM His、150 mM NaCl，pH 6之緩衝液中。於上文所描述之緩衝液(pH 7.4或pH 6)中製備測試品之連續稀釋液的2倍最終濃度且添加至細胞懸浮液中。將盤在4℃培育60分鐘。在培育之後，將細胞在各別緩衝液中洗且隨後在4℃用偵測VHH多肽之螢光標記(AF647)抗體培育30分鐘。在使用iQue Screener (Sartorius)進行最後洗之後，量測經轉染細胞上偵測抗體與FcRn之結合(檸檬素陽性)。
將經分離之人類PBMC以120,000個細胞/孔塗鋪於96孔盤中且用PBS，pH 7.4洗。將細胞用Zombie Aqua染色以排除死細胞且用針對表面譜系標記物之特異性螢光標記抗體(CD14、CD16、CD3、CD56、CD19及HLA-DR)染色以允許閘控不同PBMC亞群。在表面標記物染色之後，使用Foxp3/轉錄因子固定/滲透套組(eBioscience™)根據製造商建議之方案將細胞固定及滲透。隨後將細胞再懸浮於上文所描述之緩衝液中以產生pH 7.4或pH 6條件且如對於CHO細胞所描述進行測試品染色。在最後洗之後，在Novocyte-Quanteon流式細胞儀(Agilent)上量測PBMC亞群(單核球、B細胞或T細胞)上與FcRn之結合。
亦藉由ELISA測試一些抗FcRn VHH多肽在中性(7.4) pH與人類FcRn之結合。用含人類FcRn/B2m異二聚體蛋白之PBS塗鋪96孔ELISA盤在4℃過夜，用PBST洗且隨後用含3% BSA之PBST在室溫阻斷1小時。在PBST (pH 7.4)中製備測試品之連續稀釋液且添加至盤中。將盤在室溫培育1小時。在培育之後，將細胞用PBST洗且隨後在室溫與偵測多肽之辣根過氧化酶(HRP)結合抗體一起培育1小時。將盤用PBS-T洗，隨後添加TMB受質且使其顯色。用等體積之停止溶液(1M H2SO4)停止TMB受質。用96孔盤讀取器(Emax，Molecular Devices)量測在450 nm之吸光率。所有資料使用GraphPad Prism分析軟體繪圖及分析。
依圖6A至圖B及圖6D至圖E所示，所有測試之FcRn-靶向多肽均以低至次奈莫耳表觀親和力結合CHO細胞上過度表現之人類FcRn。結合與pH無關且在pH 7.4及pH 6下相當。依圖6C所示，具有二價FcRn結合域之多肽(依圖5(ii)所示)以比其單價對應體更高之親和力結合FcRn(依圖5(i)所示)。藉由對FcRn具特異性之VHH單元(作為對白蛋白具有單價特異性之依圖5(i)所示的型式化多肽)介導結合，且非哺乳動物靶向VHH單元不以可觀親和力結合人類FcRn。圖6F及圖6G顯示與FcRn之非pH依賴性結合保留在初代人類細胞上。依圖5(i)所示型式化之靶向FcRn及白蛋白之多肽(cx11558)，在pH 7.4及pH 6下以低奈莫耳親和力結合表現FcRn-表現人類單核球，但不結合FcRn陰性B細胞或T細胞。 實例 6 ：多肽與人類白蛋白之結合
藉由ELISA測試人源化含VHH多肽與人類白蛋白在中性(7.4)或晚期胞內體(5.5) pH之結合。在4℃下在PBS中用白蛋白將96孔ELISA盤塗鋪過夜，用PBS-T洗且隨後在PBS-T中用5%奶粉在室溫阻斷1小時。在PBS pH 7.4或含有20 mM His、150 mM NaCl，pH 5.5之緩衝液中製備測試品之連續稀釋液且添加至各盤中。將各盤在室溫下培育1小時。培育之後，將細胞在各別緩衝液中洗且隨後在室溫下用偵測VHH多肽之HRP結合抗體培育30分鐘。將各盤在各別緩衝液中洗且添加TMB受質且使其顯色。用等體積之停止溶液(1M H 2SO 4)停止TMB受質。用96孔盤讀取器量測在450 nm之吸光率。資料使用GraphPad Prism分析軟體繪圖及分析。結果顯示於圖7A至圖7D中。
依圖7A至圖7D所示，所有測試之雙特異性抗FcRn/抗白蛋白多肽均以低至亞奈莫耳表觀親和力結合人類白蛋白。結合與pH無關且在pH 7.4及pH 5.5下相當。藉由對白蛋白具特異性之VHH單元(作為對白蛋白具有單價特異性之依圖5(i)所示的型式化多肽)介導結合，且非哺乳動物靶向VHH單元不以可觀親和力結合人類白蛋白。 實例 7 ： 藉由含 VHH 多肽阻斷 IgG 結合人類 FcRn
藉由流式細胞測量術來量測藉由靶向人類FcRn之含人源化VHH多肽對人類IgG結合表現於HEK 293細胞之人類FcRn的阻斷。HEK 293細胞經瞬時轉染以過度表現與跨膜域及細胞內檸檬素及β-2微球蛋白(SEQ ID NO: 79)融合之人類FcRn細胞外域(ECD) (SEQ ID NO: 78)。將50,000個經瞬時轉染之HEK 293細胞塗鋪於96孔盤中且再懸浮於20 mM His、150 mM NaCl，pH 6中。於上文所描述之緩衝液中製備測試品之連續稀釋液的2倍最終濃度且添加至將其細胞懸浮液中。將盤在4℃下培育60分鐘。培育之後，以1 µM之最終濃度添加生物素化人類IgG且再培育60分鐘。隨後將細胞在上文所描述之緩衝液中洗且隨後在4℃下與螢光標記之(AF647)鏈黴抗生物素蛋白一起培育30分鐘以偵測IgG與FcRn之結合。在使用iQue Screener (Sartorius)進行最後洗之後，量測鏈黴抗生物素蛋白與表現FcRn之細胞的結合(檸檬素陽性)。資料使用GraphPad Prism分析軟體繪圖及分析。結果顯示於圖8中。
依圖8所示，增加多肽測試品之濃度會減少人類IgG與HEK 293細胞上表現之FcRn的結合，依藉由用於偵測結合生物素化人類IgG的AF647-結合鏈黴抗生物素蛋白試劑之平均螢光強度(MFI)的降低所量測。抑制活性(IC50)在依圖5(i)所描述型式化之構築體(cx11383)與依圖5(ii)所描述型式化之構築體(cx11385)中為類似的且屬於兩種測試品之低毫莫耳濃度範圍內。 實例 8 ： 靶向人類 FcRn 及白蛋白之多肽的活體內藥物動力學曲線及 IgG 清除
在C57BL/6背景下在常規BALB/c小鼠及表現人類FcRn及人類白蛋白之轉殖基因動物中測試靶向人類FcRn及白蛋白之人源化多肽的藥物動力學(PK)曲線。所用靶向FcRn之VHH序列均與小鼠FcRn無交叉反應，但靶向白蛋白之VHH序列結合小鼠白蛋白(資料未示出)。因此，在注入人類IgG之後，僅在人類FcRn/白蛋白轉殖基因小鼠系統中分析活體內清除IgG之能力。
為了評定BALB/c小鼠中之血清暴露量，向動物靜脈內注入30 mg/kg或0.3 mg/kg單次劑量之多肽測試品。在測試品注入之後30分鐘、6小時、24小時、96小時及168小時抽取血清樣品。首先向人類FcRn/白蛋白轉殖基因小鼠注入500 mg/kg人類IgG，且隨後24 h後注入20 mg/kg單次劑量之多肽測試品。在測試品投與之後30分鐘、24小時、96小時及168小時抽取血清樣品。藉由ELISA測定小鼠血清中測試品濃度及人類IgG含量。對於測試品PK ELISA，藉由在4℃下培育4 µg/mL蛋白於PBS中之溶液12小時使人類FcRn/B2M異二聚蛋白(His-標籤、Acro Biosystem)固定於96孔ELISA盤上。次日，用3% BSA TBS-T緩衝液將盤阻斷2小時，隨後在此等盤上培育血清樣品2小時。使用能夠結合多肽之辣根過氧化酶(HRP)結合二級偵測抗體來偵測血清樣品中之測試品與固定於ELISA盤上之FcRn的結合。在盤上培育二級抗體1小時且使用TMB受質溶液觀測結合，隨後添加停止溶液(1＜ H2SO4)且在Emax分光光度計(Molecular Devices)上量測450 nm處之吸光率。
亦藉由ELISA測定小鼠血清中之人類IgG含量。使對人類IgG具有特異性之多株山羊捕捉抗體在4℃下在PBS中以1 µg/mL塗鋪於96孔ELISA盤上12小時。次日，用1% BSA緩衝液將盤阻斷2小時，隨後在此等盤上培育血清樣品2小時。除捕捉抗體以外，亦使用能夠結合IgG之第二山羊抗人類IgG辣根過氧化酶(HRP)結合偵測抗體來偵測血清中人類IgG之結合。依上文所描述在盤上培育二級抗體1小時且觀測結合。使用來自具有與各分析並行分析之已知濃度之蛋白的標準曲線，將針對各ELISA量測之吸光率值轉化成SoftMax Pro中之測試品濃度。使用4-參數邏輯回歸(4-parameter logistic regression)來擬合標準曲線。使用GraphPad Prism分析軟體輸出及圖示資料。
依圖9A及圖9B所示，依圖5(i) (cx11558)及圖5(ii) (cx11642)所描述型式化之靶向FcRn及白蛋白之多價多特異性多肽在30分鐘時之血清cMax含量及總體血清暴露量顯著高於無白蛋白結合之多肽(cx11915)。雙特異性型式兩者在所測試之劑量水平下顯示類似PK曲線。圖9C展示依圖5(i) (cx11383)及圖5(ii) (cx11385)所描述型式化之兩個類似構築體之PK曲線且突出其與基於公開可用之資訊產生的尼卡利單抗(抗FcRn抗體)序列類似物相比之血清暴露量。全部三種測試品均以類似於cMax血清濃度開始。然而，與習知抗體尼卡利單抗相比，對於多價多特異性單多肽而言，暴露時間顯著較長。在兩種多肽之間，依圖5(i)所描述型式化之構築體(cx11383)具有較長血清半衰期。擴大之血清暴露量亦轉換為在人類FcRn/白蛋白轉殖基因小鼠系統中對預注入之人類IgG的較佳清除。與尼卡利單抗序列類似物相比，複合物cx11383及cx1138 5二者均誘導加速之人類IgG清除且使研究終點(168小時)剩餘血清IgG含量較低。參見圖9D。 實例 9 ：在 石蟹獼猴中由靶向人類 FcRn 及白蛋白之多肽介導的活體內 IgG 清除 ( depletion)
在石蟹獼猴之若干研究中評估靶向人類FcRn及白蛋白之人源化多肽的藥效學(PD)及藥物動力學(PK)曲線。在一項研究中，4至5歲之未經治療的雄性石蟹獼猴被分為5個治療組，每組含有2隻猴。組1及2分別用100 mg/kg及20 mg/kg cx11558 (單價)治療，組3及4分別用100 mg/kg及20 mg/kg cx11642 (對於FcRn結合為二價)治療，且組5用20 mg/kg 依加替莫德(NDC 73475-3041-5，批號AHUC01A，重組工程改造IgG Fc片段)治療。全部治療均經由I.V.使用60 min輸注以10 mL/kg投與。在輸注結束時及在給藥後24、48、72、96、120、144、168、192、216、240、264、288、312、336、384、432、480、552、600、648、696、744、792及840小時，自大約2 mL來自所有動物及所有組的全血中收集血清樣品。
經由來自Molecular Innovations (IMNCYIGGKT)之石蟹獼猴IgG ELISA套組按照製造商之方案來分析石蟹獼猴IgG濃度。簡言之，將石蟹獼猴IgG標準物稀釋液一式兩份地添加至預塗鋪之ELISA盤中，且將在2×10^6至3×10^6之最終稀釋度下製備之血清樣品一式三份地添加至該盤中且將盤培育30分鐘。隨後將盤洗滌且與生物素化抗石蟹獼猴IgG初級抗體一起培育30分鐘，洗滌且與辣根過氧化物結合鏈黴抗生物素蛋白抗體一起培育30分鐘。隨後將盤洗滌且向所有孔中添加TMB受質溶液持續2至10分鐘，經由向所有孔中添加1N H 2SO 4使反應淬滅。使用盤分光光度計量測在450 nM之吸光率，自所有標準物及樣品中減除背景，相對於所有標準物中IgG之量標繪A 450，且使用prism軟體中之四參數邏輯(4PL)曲線擬合來分析標準曲線。使用標準曲線來測定所有樣品中IgG之量且此值乘以用於各血清樣品之稀釋因數。隨時間推移，cx11558及依加替莫德治療組之IgG濃度(作為相對於基線之變化百分率)標繪於圖10A中。
藉由來自全血樣品的流式細胞測量術來檢查單核球上cx11558及cx11642之FcRn佔有率。將全血用RBS裂解緩衝液處理，離心。將細胞集結粒洗滌，再懸浮於PBS中，且分成3個獨立孔供染色。所有細胞均用ZombieAqua (Biolegend)染色，與cyno IgG (稀釋至0.2mg/mL)一起在FACS緩衝液中培育10分鐘，且添加以下抗體組：CD14-BV421；CD16-BV605；CD8-BV785；CD20-PE/Cy7；NKG2A-PE；CD3-PE-Dazzle 594；HLA-DR-APC-Cy7 (來源於Biolegend或BD)且在FACS緩衝液中在4℃下再培育30分鐘。在洗滌之後，細胞在4℃下用eBioscience固定/滲透(fix/perm)處理30分鐘，用低溫滲透緩衝液洗兩次，且隨後與飽和濃度之B10a.v2.4 VHH-Avl-Hi (室內試劑，以偵測游離FcRn)、飽和濃度之未標記測試品(cx11558或cx11642；以偵測總FcRn)或緩衝液(以偵測所佔有FcRn)一起在4℃下培育30分鐘。隨後將細胞洗滌，且在4℃下與鏈黴抗生物素蛋白AF647 (以偵測B10av2.4VHH-Avi-His)或抗d-AF647 (室內試劑，以偵測cx11558及cx11642)一起培育30分鐘。在洗滌之後，使細胞再懸浮於FACS緩衝液中且使用Novocyte Quanteon流式細胞儀來分析。cx11558及cx11642之FcRn佔有率顯示於圖10B中。
藉由ELISA來測定隨時間推移cx11558、cx11642及依加替莫德之血清含量。使生物素化人類塗鋪於Pierce™鏈黴抗生物素蛋白塗鋪高容量盤(Pierce™Streptavidin Coated High Capacity Plate)之預封閉孔中，且將標準物、對照及血清樣品稀釋且一式兩份地添加至盤中。在90至120分鐘培育之後，將盤洗滌且與抗id-HRP結合物(用於偵測cx11558或cx11642之室內試劑)或小鼠抗人類IgG Fc HRP結合物(用於偵測依加替莫德)一起培育60分鐘。隨後將盤洗滌且向所有孔中添加TMB受質持續2至10分鐘，經由向所有孔中添加1N H2 SO 4使反應淬滅，且在450 nM下量測吸光率，將背景(650 nM)在SpectraMax M5e盤讀取器上自所有標準物及樣品減除且以OD 450 - 650報告。標繪標準物之吸光率及濃度且使用Softmax Pro v.5.4.1或更高版本中之4PL回歸進行曲線擬合。隨後根據標準曲線回歸對樣品濃度進行插值，且以ng/mL質量單位報告。隨時間推移之血清濃度標繪於圖10C中。
依圖10A所示，與依加替莫德相比，以任一劑量投與之cx11558誘導石蟹獼猴IgG的加速清除，且在至少第27天內引起較低之剩餘血清IgG含量。以任一劑量投與之Cx11642亦誘導石蟹獼猴IgG加速清除至低於依加替莫德所觀測到之含量，然而，相比於100 mg/kg匹配劑量下之cx11558所觀測到的，血清IgG含量似乎更快地恢復至正常含量(資料未示出)。依圖10B所示，以20 mg/kg及100 mg/kg投與之cx11558在單核球上維持完全FcRn佔有率分別持續約9天及約18天，而cx11642維持完全FcRn佔有率持續約一半時長。依圖10C所示，以20 mg/kg及100 mg/kg劑量投與之cx11558的血清濃度保持在大於10 μg/mL (其與約100%受體佔有率關聯)分別持續約9天及約18天，而20 mg/kg及100 mg/kg之cx11642的血清濃度分別在第6天及第8天降至低於10 μg/mL，且依加替莫德之血清濃度在第6天降至低於10 μg/mL。
在另一研究中，對藉由靜脈內輸注(I.V.)或皮下注入(S.C.)投與的靶向人類FcRn及白蛋白之人源化多肽的PD及PK曲線進行評估。對於此研究，未經治療之雄性石蟹獼猴被分為3個治療組，每組含有2隻猴。第1組及第2組分別藉由I.V.投與20 mg/kg及100 mg/kg單次劑量之cx12007 (以10 mL/kg輸注70分鐘)來治療，第3組藉由S.C.投與100 mg/kg單次劑量之cx12007 (1 mL/kg)來治療。在給藥前、在輸注結束時及在給藥後24、48、72、96、120、144、168、192、216、240、264、288、312、336、384、432、504、552、600、648、696、744、792及840小時，自所有動物及所有組之全血中收集血清樣品。經由來自Meso Scale Discovery (K15203D)之NHP同型分析套組(NHP Isotyping Kit)按照製造商之方案來分析石蟹獼猴IgG濃度。簡言之，將以2×10^5之最終稀釋度製備的校準標準物及血清樣品一式兩份地添加至MSD盤中，且將盤培育2小時。隨後將盤洗滌且在偵測抗體溶液中培育2小時。在再洗滌之後，添加讀取緩衝液且立即在MSD成像器上讀取盤。使用具有校準值之1/Y 2加權函數的4參數邏輯曲線擬合模型來分析標準曲線。使用標準曲線來測定所有樣品中IgG之量且此值乘以用於各血清樣品之稀釋因數。隨時間推移治療組中之各者的IgG濃度(作為相對於基線之變化百分率)標繪於圖11A中。除了使用飽和濃度之未標記cx12007 (以偵測總FcRn)以外，藉由流式細胞測量術基本上依上文所描述來檢查單核球上之FcRn佔有率。cx12007之FcRn佔有率顯示於圖11B中。基本上依上文所描述藉由ELISA來測定cx12007之血清濃度且在圖11C中隨時間推移標繪。
依圖11A所示，所有治療組均顯示相當之血清IgG清除谷值，其中最大清除為約77%，且達到最大清除之時間相當。達至40%清除之最快時間為約4天，其中20 mg/kg及100 mg/kg劑量分別至少在第21天及第36天內維持較低剩餘血清IgG含量。依圖11B所示，以20 mg/kg及100 mg/kg劑量投與之cx12007維持單核球上之完全FcRn佔有率分別持續10天及19天。依圖11C所示，以20 mg/kg及100 mg/kg劑量投與之cx12007的血清濃度保持在大於10 μg/mL分別持續10天及19天。對於I.V.及S.C.投與途徑兩者，100 mg/kg劑量之曲線類似。
在另一研究中，對以不同劑量向石蟹獼猴皮下(S.C.)投與之人源化多肽cx12007的PK及PD曲線進行評估。對於此研究，未經治療之雄性石蟹獼猴被分為3個治療組，每組含有3隻猴。第1組、第2組及第3組分別藉由以1 mL/kg S.C.投與20 mg/kg、40 mg/kg及70 mg/kg單次劑量之cx12007來治療。在給藥前、輸注結束時及給藥後24、36、48、72、144、216、288、360、432、504、576、648、720及792小時，自所有動物及所有組之全血中收集血清樣品。依上文所描述經由來自Meso Scale Discovery (K15203D)之NHP同型分析套組來分析石蟹獼猴IgG濃度。隨時間推移治療組中之各者的IgG濃度(作為相對於基線之變化百分率)標繪於圖12A中。基本上依上文所描述藉由ELISA來測定cx12007之血清濃度且在圖12A中隨時間推移標繪。
依圖12A所示，所有治療組均顯示相當之血清IgG清除谷值，其中最大消耗約＞70%，且達到最大消耗之時間相當。在整個研究中，以所有劑量水平S.C.投與之cx12007均維持較低之剩餘血清IgG含量，其中IgG含量在20 mg/kg組中增加較快。依圖12B所示，以20 mg/kg、40 mg/kg及70 mg/kg之劑量S.C.投與的cx12007之血清濃度保持在大於10 μg/mL，分別持續約9天、至少12天及至少15天。
在此等研究中，靶向人類FcRn及白蛋白之人源化多肽的投與具有良好耐受性，未觀測到嚴重或重大不良事件。總之，此等資料表明靶向人類FcRn及白蛋白之多肽具有良好耐受性，具有較長血清半衰期，介導較快IgG清除且在比依加替莫德更長之時間段內維持較低血清IgG含量。此等資料亦表明此類分子在皮下投與時呈現相同活性。
在不偏離本發明之精神或基本特徵之情況下，本發明可以其他特定形式體現。前述實施例因此在所有態樣中均欲視為說明性而非限制本發明。本發明之範疇因此由所附申請專利範圍而非由前述描述來指示，且具有申請專利範圍等效性之含義及範圍內的所有變化因此均意欲包括於本文中。 某些序列之表格
SEQ ID NO 說明書 序列
1 人血清白蛋白(HSA)；UniProtKB/ Swiss-Prot：P02768.2；成熟形式：胺基酸25-609 MKWVTFISLL FLFSSAYSRG VFRRDAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF EDHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH PYFYAPELLF FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GERAFKAWAV ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK ECCEKPLLEK SHCIAEVEND EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR RHPDYSVVLL LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM PCAEDYLSVV LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET YVPKEFNAET FTFHADICTL SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV AASQAALGL
2 鼠類血清白蛋白(MSA)；UniProtKB/ Swiss-Prot：P07724.3；成熟形式：胺基酸25-608 MKWVTFLLLL FVSGSAFSRG VFRREAHKSE IAHRYNDLGE QHFKGLVLIA FSQYLQKCSY DEHAKLVQEV TDFAKTCVAD ESAANCDKSL HTLFGDKLCA IPNLRENYGE LADCCTKQEP ERNECFLQHK DDNPSLPPFE RPEAEAMCTS FKENPTTFMG HYLHEVARRH PYFYAPELLY YAEQYNEILT QCCAEADKES CLTPKLDGVK EKALVSSVRQ RMKCSSMQKF GERAFKAWAV ARLSQTFPNA DFAEITKLAT DLTKVNKECC HGDLLECADD RAELAKYMCE NQATISSKLQ TCCDKPLLKK AHCLSEVEHD TMPADLPAIA ADFVEDQEVC KNYAEAKDVF LGTFLYEYSR RHPDYSVSLL LRLAKKYEAT LEKCCAEANP PACYGTVLAE FQPLVEEPKN LVKTNCDLYE KLGEYGFQNA ILVRYTQKAP QVSTPTLVEA ARNLGRVGTK CCTLPEDQRL PCVEDYLSAI LNRVCLLHEK TPVSEHVTKC CSGSLVERRP CFSALTVDET YVPKEFKAET FTFHSDICTL PEKEKQIKKQ TALAELVKHK PKATAEQLKT VMDDFAQFLD TCCKAADKDT CFSTEGPNLV TRCKDALA
3 石蟹獼猴血清白蛋白(CSA)；成熟形式：胺基酸25-608 MKWVTFISLL FLFSSAYSRG VFRRDTHKSE VAHRFKDLGE EHFKGLVLVA FSQYLQQCPF EEHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP ERNECFLQHK DDNPNLPPLV RPEVDVMCTA FHDNEATFLK KYLYEVARRH PYFYAPELLF FAARYKAAFA ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GDRAFKAWAV ARLSQKFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYMCE NQDSISSKLK ECCDKPLLEK SHCLAEVEND EMPADLPSLA ADYVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR RHPDYSVMLL LRLAKAYEAT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FQPLVEEPQN LVKQNCELFE QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGAK CCKLPEAKRM PCAEDYLSVV LNRLCVLHEK TPVSEKVTKC CTESLVNRRP CFSALELDEA YVPKAFNAET FTFHADMCTL SEKEKQVKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKG VMDNFAAFVE KCCKADDKEA CFAEEGPKFV AASQAALA
4 大鼠血清白蛋白(RSA)；UniProtKB/ Swiss-Prot：P02770.2；成熟形式：胺基酸25-608 MKWVTFLLLL FISGSAFSRG VFRREAHKSE IAHRFKDLGE QHFKGLVLIA FSQYLQKCPY EEHIKLVQEV TDFAKTCVAD ENAENCDKSI HTLFGDKLCA IPKLRDNYGE LADCCAKQEP ERNECFLQHK DDNPNLPPFQ RPEAEAMCTS FQENPTSFLG HYLHEVARRH PYFYAPELLY YAEKYNEVLT QCCTESDKAA CLTPKLDAVK EKALVAAVRQ RMKCSSMQRF GERAFKAWAV ARMSQRFPNA EFAEITKLAT DVTKINKECC HGDLLECADD RAELAKYMCE NQATISSKLQ ACCDKPVLQK SQCLAEIEHD NIPADLPSIA ADFVEDKEVC KNYAEAKDVF LGTFLYEYSR RHPDYSVSLL LRLAKKYEAT LEKCCAEGDP PACYGTVLAE FQPLVEEPKN LVKTNCELYE KLGEYGFQNA VLVRYTQKAP QVSTPTLVEA ARNLGRVGTK CCTLPEAQRL PCVEDYLSAI LNRLCVLHEK TPVSEKVTKC CSGSLVERRP CFSALTVDET YVPKEFKAET FTFHSDICTL PDKEKQIKKQ TALAELVKHK PKATEDQLKT VMGDFAQFVD KCCKAADKDN CFATEGPNLV ARSKEALA
5 4A01, Hz4A01v1, Hz4A01v3, Hz4A01v4, Hz4A01v5, Hz4A01v6, Hz4A01v8, Hz4A01v9, Hz4A01v3-5, Hz4A01v3-7, Hz4A01v3-8 CDR1 GFAFSTSGMV
6 Hz4A01v3-1, Hz4A01v3-7.1k-RITA, Hz4A01v3-7.1k-RITI, Hz4A01v3-7.1k-RITL, Hz4A01v3-7.1k-RITS, Hz4A01v3-7.1k-RITT, Hz4A01v3-7.1k-RITV, Hz4A01v51, Hz4A01v51.9, Hz4A01v51.11, Hz4A01v51.12, Hz4A01v51.13  CDR1 GFTFSTSGMV
7 Hz4A01v3-3 CDR1 GFAFSTSGMA
8 Hz4A01v3-4 CDR1 GFAFSTSGMS
9 4A01, Hz4A01v1 CDR2 TISDDSRIIR
10 Hz4A01v4 CDR2 TISDESRIIR
11 Hz4A01v5 CDR2 TISDEGRIIR
12 Hz4A01v6 CDR2 TISDSGRIIR
13 Hz4A01v8 CDR2 TISDNARIIR
14 Hz4A01v9 CDR2 TISDDTRIIR
15 Hz4A01v3 Hz4A01v3-1, Hz4A01v3-3, Hz4A01v3-4, Hz4A01v3-5, Hz4A01v3-7, Hz4A01v3-8, CDR2 TISDDARIIR
16 Hz4A01v3-7.1k-RITA CDR2 TISDDARITA
17 Hz4A01v3-7.1k-RITI CDR2 TISDDARITI
18 Hz4A01v3-7.1k-RITL CDR2 TISDDARITL
19 Hz4A01v3-7.1k-RITS CDR2 TISDDARITS
20 Hz4A01v3-7.1k-RITT CDR2 TISDDARITT
21 Hz4A01v3-7.1k-RITV, Hz4A01v51, Hz4A01v51.9, Hz4A01v51.11, Hz4A01v51.12, Hz4A01v51.13  CDR2 TISDDARITV
22 4A01, Hz4A01v1, Hz4A01v3, Hz4A01v4,  Hz4A01v5, Hz4A01v6, Hz4A01v8, Hz4A01v9, Hz4A01v3-1, Hz4A01v3-3, Hz4A01v3-4, Hz4A01v3-5, Hz4A01v3-7, Hz4A01v3-8, Hz4A01v3-7.1k-RITA, Hz4A01v3-7.1k-RITI, Hz4A01v3-7.1k-RITL, Hz4A01v3-7.1k-RITS, Hz4A01v3-7.1k-RITT, Hz4A01v3-7.1k-RITV, Hz4A01v51, Hz4A01v51.9, Hz4A01v51.11, Hz4A01v51.12, Hz4A01v51.13   CDR3 YRAGSRIGSYEDYY
23 4A01 VHH QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQATGKGLEWVSTISDDSRIIRYADSVNGRFTISRDNAENTLYLLMNSLKPEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTQVTVSS
24 Hz4A01v1 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDSRIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
25 Hz4A01v3 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
26 Hz4A01v4 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDESRIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
27 Hz4A01v5 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDEGRIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
28 Hz4A01v6 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDSGRIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
29 Hz4A01v8 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDNARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
30 Hz4A01v9 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDTRIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
31 Hz4A01v3-1 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
32 Hz4A01v3-3 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMAWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
33 Hz4A01v3-4 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMSWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
34 Hz4A01v3-5 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWYRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
35 Hz4A01v3-7 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
36 Hz4A01v3-8 EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFAFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARIIRYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYWGQGTLVTVKP
37 Hz4A01v3-7.1k-RITA EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITAYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
38 Hz4A01v3-7.1k-RITI EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITIYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
39 Hz4A01v3-7.1k-RITL EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITLYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
40 Hz4A01v3-7.1k-RITS EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITSYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
41 Hz4A01v3-7.1k-RITT EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITTYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
42 Hz4A01v3-7.1k-RITV EVQLVESGGGEVQPGKSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
43 Hz4A01v51 VHH EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKP
97 Hz4A01v51.9 VHH QVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEP
98 Hz4A01v51.11 VHH QVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEP
99 Hz4A01v51.12 VHH EVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEP
100 Hz4A01v51.13 VHH EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVRP
102 cx5009 (hz4A01v51-NNT-hFc) EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGGGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVNLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLNSTLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSGGGGSGGGGS
103 cx11956 (hz4A01v51-xELL) EVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
47 人類IgG1 Fc區 DKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
48 人類IgG1  Fc xELL DKTHTCPPCP APGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK
49 Fc區M252Y及M428V (YV)S354C T366W杵 DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LYISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPCRDELTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVVHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
50 Fc區M252Y、M428V、H435R (YVR)T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LYISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVCT LPPSRDELTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVVHE ALHNRYTQKS LSLSPGK
51 Fc區xELL H435R DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNRYTQK SLSLSPGK
52 Fc區xELL M252Y及M428V (YV) DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLYISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVVH EALHNHYTQK SLSLSPGK
53 Fc區xELL M252Y及M428L (YL) DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLYISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVLH EALHNHYTQK SLSLSPGK
54 Fc區xELL M252Y、M428L、H435R (YLR) DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLYISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVLH EALHNRYTQK SLSLSPGK
55 Fc區xELL M252Y、M428V、H435R (YVR) DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLYISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVVH EALHNRYTQK SLSLSPGK
56 Fc區xELL S354C T366W杵 DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPCRDELT KNQVSLWCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
57 Fc區xELL H435R S354C T366W杵 DKTHTC PPCPAPGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPCRDELT KNQVSLWCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNRYTQK SLSLSPGK
58 Fc區xELL M252Y及M428V (YV) S354C T366W杵 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVVHEALHNHYTQKSLSLSPGK
59 Fc區xELL M252Y及M428L (YL) S354C T366W杵 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSPGK
60 Fc區xELL M252Y、M428L、H435R (YLR) S354C T366W杵 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNRYTQKSLSLSPGK
61 Fc區xELL M252Y、M428V、H435R (YVR) S354C T366W杵 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVVHEALHNRYTQKSLSLSPGK
62 Fc區xELL T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
63 Fc區xELL H435R、T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRYTQKSLSLSPGK
64 Fc區xELL M252Y及M428V (YV) T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVVHEALHNHYTQKSLSLSPGK
65 Fc區xELL M252Y及M428L (YL) T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSPGK
66 Fc區xELL M252Y、M428L、H435R (YLR) T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNRYTQKSLSLSPGK
67 Fc區xELL M252Y、M428V、H435R (YVR) T366S、L368A、Y407V臼 DKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLYISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVVHEALHNRYTQKSLSLSPGK
68 Fc區S364N、Y407N及K409T (NNT) GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVNLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLNSTLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
69 cx11383 (B10a.v1 VHH x hz4A01v51 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCTASGSIANVDMMAWHRQAPGKQREPIAVINDGGSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGG
70 cx11558 (B10a.v2.1 VHH x hz4A01v51 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGG
71 cx12003 (B10a.v2.2 VHH x hz4A01v51.9 VHH) QVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEPGSGGGSQVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEPGG
72 cx12006 (B10a.v2.3 VHH x hz4A01v51.11 VHH QVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEPGSGGGSQVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEPGG
73 cx12007 (B10a.v2.4 VHH x hz4A01v51.12 VHH EVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEPGSGGGSEVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVEPGG
74 cx12008 (B10a.v2.5 VHH x hz4A01v51.13 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVRPGSGGGSEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVRPGG
75 cx11385 (B10a.v1 VHH x B10a.v1 VHH x hz4A01v51 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCTASGSIANVDMMAWHRQAPGKQREPIAVINDGGSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCTASGSIANVDMMAWHRQAPGKQREPIAVINDGGSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGG
76 cx11642 (B10a.v2.1 VHH x B10a.v2.1 VHH x hz4A01v51 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPGSGGGSEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGG
77 cx12032 (B10a.v2.1 VHH x hz4A01v51 VHH) EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKPEVQLVESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMVWVRQAPGKGLEWVSTISDDARITVYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRAGSRIGSYEDYYRGQGTLVTVKPGG
78 FcRn ECD AESHLSLLYHLTAVSSPAPGTPAFWVSGWLGPQQYLSYNSLRGEAEPCGAWVWENQVSWYWEKETTDLRIKEKLFLEAFKALGGKGPYTLQGLLGCELGPDNTSVPTAKFALNGEEFMNFDLKQGTWGGDWPEALAISQRWQQQDKAANKELTFLLFSCPHRLREHLERGRGNLEWKEPPSMRLKARPSSPGFSVLTCSAFSFYPPELQLRFLRNGLAAGTGQGDFGPNSDGSFHASSSLTVKSGDEHHYCCIVQHAGLAQPLRVELESPAKSS
79 β2微球蛋白 MSRSVALAVLALLSLSGLEAIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM
80 FcRn B10a.v1 CDR1 GSIANVDMMA
81 FcRn B10a.v2 CDR1 GSIANVDLMA
83 FcRn B10a.v1 CDR2 VINDGGSTS
84 FcRn B10a.v2 CDR2 VINDAGSTY
85 FcRn B10a.v1, B10a.v2 CDR3 ATWRGGERYAD
86 FcRn B10a.v1 VHH EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCTASGSIANVDMMAWHRQAPGKQREPIAVINDGGSTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKP
87 FcRn B10a.v2.1 VHH EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVKP
88 FcRn B10a.v2.2 VHH QVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEP
89 FcRn B10a.v2.3 VHH QVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEP
90 FcRn B10a.v2.4 VHH EVQLLESGGGKVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVEP
91 FcRn B10a.v2.5 VHH EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSIANVDLMAWHRQAPGKQREPIAVINDAGSTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNTATWRGGERYADWGQGTLVTVRP
92 UniProtKB - P55899 (FCGRN_HUMAN) (人類) MGVPRPQPWA LGLLLFLLPG SLGAESHLSL LYHLTAVSSP APGTPAFWVS GWLGPQQYLS YNSLRGEAEP CGAWVWENQV SWYWEKETTD LRIKEKLFLE AFKALGGKGP YTLQGLLGCE LGPDNTSVPT AKFALNGEEF MNFDLKQGTW GGDWPEALAI SQRWQQQDKA ANKELTFLLF SCPHRLREHL ERGRGNLEWK EPPSMRLKAR PSSPGFSVLT CSAFSFYPPE LQLRFLRNGL AAGTGQGDFG PNSDGSFHAS SSLTVKSGDE HHYCCIVQHA GLAQPLRVEL ESPAKSSVLV VGIVIGVLLL TAAAVGGALL WRRMRSGLPA PWISLRGDDT GVLLPTPGEA QDADLKDVNV IPATA
93 UniProtKB - Q61559 (FCGRN_MOUSE) (小鼠) MGMPLPWALS LLLVLLPQTW GSETRPPLMY HLTAVSNPST GLPSFWATGW LGPQQYLTYN SLRQEADPCG AWMWENQVSW YWEKETTDLK SKEQLFLEAL KTLEKILNGT YTLQGLLGCE LASDNSSVPT AVFALNGEEF MKFNPRIGNW TGEWPETEIV ANLWMKQPDA ARKESEFLLN SCPERLLGHL ERGRRNLEWK EPPSMRLKAR PGNSGSSVLT CAAFSFYPPE LKFRFLRNGL ASGSGNCSTG PNGDGSFHAW SLLEVKRGDE HHYQCQVEHE GLAQPLTVDL DSSARSSVPV VGIVLGLLLV VVAIAGGVLL WGRMRSGLPA PWLSLSGDDS GDLLPGGNLP PEAEPQGANA FPATS
94 UniProtKB - Q8SPV9 (FCGRN_MACFA) (石蟹獼猴) MRVPRPQPWA LGLLLFLLPG SLGAESHLSL LYHLTAVSSP APGTPAFWVS GWLGPQQYLS YDSLRGQAEP CGAWVWENQV SWYWEKETTD LRIKEKLFLE AFKALGGKGP YTLQGLLGCE LSPDNTSVPT AKFALNGEEF MNFDLKQGTW GGDWPEALAI SQRWQQQDKA ANKELTFLLF SCPHRLREHL ERGRGNLEWK EPPSMRLKAR PGNPGFSVLT CSAFSFYPPE LQLRFLRNGM AAGTGQGDFG PNSDGSFHAS SSLTVKSGDE HHYCCIVQHA GLAQPLRVEL ETPAKSSVLV VGIVIGVLLL TAAAVGGALL WRRMRSGLPA PWISLRGDDT GSLLPTPGEA QDADSKDINV IPATA
95 UniProtKB - A0A8I6AFJ8 (A0A8I6AFJ8_RAT) (大鼠) MGMSQPGVLL SLLLVLLPQT WGAEPRLPLM YHLAAVSDLS WLGAQQYLTY NNLRQEADPC GAWIWENQVS WYWEKETTDL KSKEQLFLEA IRTLENQING TFTLQGLLGC ELAPDNSSLP TAVFALNGEE FMRFNPRTGN WSGEWPETDI VGNLWMKQPE AARKESEFLL TSCPERLLGH LERGRQNLEW KEPPSMRLKA RPGNSGSSVL TCAAFSFYPT GPNGDGSFHA WSLLEVKRGD EHHYQCQVEH EGLAQPLTVD LDSPARSSVP VVGIILGLLL VVVAIAGGVL LWNRMRSGLP APWLSLSGDD SGDLLPGGNL PPEAEPQGVN AFPATS
96 UniProtKB - F5H6I0 (F5H6I0_HUMAN) 人類B2m MSRSVALAVL ALLSLSGLEA IQRTPKIQVY SRHPADIEVD LLKNGERIEK VEHSDLSFSK DWSFYLLYYT EFTPTEKDEY ACRVNHVTLS QPKIVKWDRD M
101 連接子 GSGGGS
104 VH3-23*04 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
圖1A至圖1I. 圖1A展示某些4A01人源化變異體(SEQ ID NO: 24-43)之比對。圖1B至圖1C展示某些4A01人源化變異體之人類白蛋白(HSA)結合ELISA。圖1D至圖1E展示某些4A01人源化變異體之石蟹獼猴白蛋白(CSA)結合ELISA。圖1F至圖1G展示某些4A01人源化變異體之鼠類白蛋白(MSA)結合ELISA。圖1H至圖1I展示某些4A01人源化變異體之大鼠白蛋白(RSA)結合ELISA。
圖2A至圖2D展示人源化hz4A01v51之人類白蛋白(HSA；圖2A)、石蟹獼猴白蛋白(CSA；圖2B)、鼠類白蛋白(MSA；圖2C)及大鼠白蛋白(RSA；圖2D)結合ELISA。
圖3A至圖3B.  圖3A為展示用於評定與白蛋白域3之結合的生物膜干涉測量術之實驗設計的示意圖。圖3B展示生物膜干涉測量術跡線，其顯示4A01-NNT-hFc (SEQ ID NO: 23及68)不結合白蛋白域3，而1C04結合白蛋白域3。
圖4A至圖4B.  圖4A為展示用於評定B2M-FcRn結合白蛋白之生物膜干涉測量術之實驗設計的示意圖。圖4B為生物膜干涉測量術跡線，其顯示4A01-NNT-hFc (SEQ ID NO: 23及68)及人源化hz4A01v51-NNT-hFc (SEQ ID NO: 102)不與白蛋白競爭結合B2m-FcRn，而1C04則競爭。
圖5展示在結合及功能分析中測試之某些例示性型式。型式(i)及型式(iii)為靶向FcRn(黑色)及白蛋白(灰色)之二價雙特異性多肽。型式(ii)為由兩個靶向FcRn之單元及一個靶向白蛋白之單元組成的三價雙特異性多肽。在型式(i)及型式(ii)中結合單元經由甘胺酸-絲胺酸連接子連接，且在型式(iii)中結合單元直接連接。
圖6A至圖6G展示靶向FcRn及白蛋白之多價多特異性多肽與經FcRn轉染之CHO細胞及人類周邊血液細胞(PBMC)中之細胞亞群的結合。圖6A及圖6B展示在pH 7.4下與經瞬時轉染之CHO細胞的結合，圖6C展示利用ELISA的在pH 7.4下與FcRn之結合，圖6D及6E展示在pH 6下與經瞬時轉染之CHO細胞的結合。圖6F及圖6G分別展示在pH 7.4及pH 6下與人類PBMC之結合。對於圖6A、圖6D、圖6F及圖6G，多肽依圖5(i)中所描述型式化，對於圖6B及圖6E，多肽依圖5(i)中所描述型式化，除了cx12032，其依圖5(iii)中所描述型式化。對於圖6C，cx11383依圖5(i)中所描述型式化，且cx11385依圖5(ii)中所描述型式化。
圖7A至圖7D展示利用ELISA的靶向FcRn及白蛋白之多價多特異性多肽與FcRn與人類白蛋白之結合。圖7A及圖7B展示在pH 7.4下之結合，而圖7C及圖7D展示在pH 5.5下之結合。圖7中之構築體依圖5(i)中所描述型式化，除了cx12032，其依圖5((iii)中所描述型式化。
圖8展示靶向FcRn及白蛋白之多價多特異性多肽在pH 6下阻止IgG與經FcRn轉染之293細胞結合的劑量依賴性能力。多肽依圖5(i)中所描述(cx11383)及圖5(ii)中所描述(cx11385)型式化。
圖9A至圖9D展示與尼卡利單抗(Nipocalimab)之內部產生的序列類似物相比，靶向FcRn及白蛋白之多價多特異性多肽的藥物動力學(PK)曲線及活體內清除IgG之能力。圖9A、圖9B及圖9C展示BALB/c小鼠之血清PK曲線(圖9A及圖9B)或人類FcRn/白蛋白轉殖基因C57BL/6小鼠之血清PK曲線(圖9C)。圖9D展示在給與FcRn阻斷測試品之後，轉殖基因小鼠品系中所投與之人類IgG的血清含量。多肽依圖5(i)中所描述(cx11558及cx11383)及圖5(ii)中所描述(cx11642及cx11385)型式化。
圖10A至圖10C展示在石蟹獼猴中給與100 mg/kg及20 mg/kg之FcRn阻斷測試品cx11558或cx11642或20mg/kg之重組工程改造IgG Fc片段依加替莫德(efgartigimod)後的活體內研究結果。圖10A展示石蟹獼猴IgG之血清含量，標繪為相對於基線之變化% (由點線指示)。圖10B展示受體佔有率。圖10C展示cx11558、cx11642及依加替莫德之血清含量(藉由點線指示各測試品之定量下限)。
圖11A至圖11C展示在石蟹獼猴中給與100 mg/kg或20 mg/kg I.V.或100 mg/kg S.C.之靶向FcRn及白蛋白的多特異性多肽cx12007後的活體內研究結果。圖11A展示石蟹獼猴IgG之血清含量，標繪為相對於基線之變化% (由點線指示)。圖11B展示受體佔有率。圖11C展示cx12007之血清含量(藉由點線指示定量下限)。
圖12A至圖12B展示在石蟹獼猴中給與20 mg/kg、40 mg/kg或70 mg/kg S.C.之靶向FcRn及白蛋白的多特異性多肽cx12007後的活體內研究結果。圖12A展示石蟹獼猴IgG之血清含量，標繪為相對於基線之變化% (由點線指示)。圖12B展示cx12007之血清含量(藉由點線指示定量下限)。
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Claims (65)

  1. 一種多肽，其包含至少一個結合FcRn之VHH域，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 80-81之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 83-84之CDR2序列及SEQ ID NO: 85之CDR3序列。
  2. 如請求項1之多肽，其中結合FcRn之各VHH域獨立地包含選自SEQ ID NO: 80-81之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 83-84之CDR2序列及SEQ ID NO: 85之CDR3序列。
  3. 如請求項1或2之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 80、83及85；SEQ ID NO: 81、83及85；及SEQ ID NO: 81、84及85。
  4. 如請求項3之多肽，其中結合FcRn之各VHH域獨立地包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 80、83及85；SEQ ID NO: 81、83及85；及SEQ ID NO: 81、84及85。
  5. 如請求項1至4中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域經人源化。
  6. 如請求項5之多肽，其中結合FcRn之各VHH域經人源化。
  7. 如請求項1至6中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 86-93之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。
  8. 如請求項7之多肽，其中結合FcRn之各VHH域包含與選自SEQ ID NO: 86-93之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。
  9. 如請求項1至7中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域包含選自SEQ ID NO: 86-93之序列。
  10. 如請求項1至9中任一項之多肽，其中結合FcRn之各VHH域包含選自SEQ ID NO: 86-93之序列。
  11. 如請求項1至10中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類FcRn。
  12. 如請求項1至11中任一項之多肽，其中結合FcRn之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類FcRn。
  13. 如請求項1至12中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域在pH 6及pH 7.4結合人類FcRn。
  14. 如請求項1至13中任一項之多肽，其中結合FcRn之各VHH域在pH 6及pH 7.4結合人類FcRn。
  15. 如請求項1至14中任一項之多肽，其中至少一個結合FcRn之VHH域阻斷人類IgG與人類FcRn之結合。
  16. 如請求項1至15中任一項之多肽，其中結合FcRn之各VHH域阻斷人類IgG與人類FcRn之結合。
  17. 如請求項1至16中任一項之多肽，其中該多肽包含至少一個結合白蛋白之VHH域。
  18. 如請求項17之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 5-8之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 9-21之CDR2序列及SEQ ID NO: 22之CDR3序列。
  19. 如請求項17之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域獨立地包含選自SEQ ID NO: 5-8之CDR1序列、選自SEQ ID NO: 9-21之CDR2序列及SEQ ID NO: 22之CDR3序列。
  20. 如請求項17或18之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 5、9及22；SEQ ID NO: 5、10及22；SEQ ID NO: 5、11及22；SEQ ID NO: 5、12及22；SEQ ID NO: 5、13及22；SEQ ID NO: 5、14及22；SEQ ID NO: 5、15及22；SEQ ID NO: 6、15及22；SEQ ID NO: 7、15及22；SEQ ID NO: 8、15及22；SEQ ID NO: 6、16及22；SEQ ID NO: 6、17及22；SEQ ID NO: 6、18及22；SEQ ID NO: 6、19及22；SEQ ID NO: 6、20及22；及SEQ ID NO: 6、21及22。
  21. 如請求項17或18之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域獨立地包含選自以下之CDR1、CDR2及CDR3序列：SEQ ID NO: 5、9及22；SEQ ID NO: 5、10及22；SEQ ID NO: 5、11及22；SEQ ID NO: 5、12及22；SEQ ID NO: 5、13及22；SEQ ID NO: 5、14及22；SEQ ID NO: 5、15及22；SEQ ID NO: 6、15及22；SEQ ID NO: 7、15及22；SEQ ID NO: 8、15及22；SEQ ID NO: 6、16及22；SEQ ID NO: 6、17及22；SEQ ID NO: 6、18及22；SEQ ID NO: 6、19及22；SEQ ID NO: 6、20及22；及SEQ ID NO: 6、21及22。
  22. 如請求項17至21中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域經人源化。
  23. 如請求項22之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域經人源化。
  24. 如請求項17至23中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含與選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。
  25. 如請求項17至23中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域包含與選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%一致的序列。
  26. 如請求項17至23中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列。
  27. 如請求項17至23中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域包含選自SEQ ID NO: 23-43及97-100之序列。
  28. 如請求項17至27中任一項之多肽，其中該多肽包含與選自SEQ ID NO: 69-77之序列至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的序列。
  29. 如請求項17至27中任一項之多肽，其中該多肽包含選自SEQ ID NO: 69-77之序列。
  30. 如請求項17至29中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域結合人類白蛋白及至少一種選自石蟹獼猴(cynomolgus)、小鼠及大鼠白蛋白之白蛋白。
  31. 如請求項17至29中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域結合人類白蛋白及至少一種選自石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白之白蛋白。
  32. 如請求項17至29中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域結合人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。
  33. 如請求項17至29中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域結合人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。
  34. 如請求項17至33中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類白蛋白。
  35. 如請求項17至34中任一項之多肽，其中至少一個結合白蛋白之VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合各人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。
  36. 如請求項17至35中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合人類白蛋白。
  37. 如請求項17至36中任一項之多肽，其中結合白蛋白之各VHH域以小於5 nM、小於2 nM、小於1 nM或小於0.5 nM之親和力結合各人類、石蟹獼猴、小鼠及大鼠白蛋白。
  38. 如請求項17至37中任一項之多肽，其中該結合白蛋白之各VHH域不結合白蛋白域3。
  39. 如請求項17至38中任一項之多肽，其中該結合白蛋白之各VHH域不干擾白蛋白與FcRn之結合。
  40. 如前述請求項中任一項之多肽，其中該多肽包含至少兩個、至少三個或至少四個結合FcRn之VHH域及至少一個結合白蛋白之VHH域。
  41. 如請求項40之多肽，其中該多肽包含兩個、三個或四個結合FcRn之VHH域及一個結合白蛋白之VHH域。
  42. 如請求項1至41中任一項之多肽，其中該多肽包含至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域。
  43. 如請求項42之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域為VHH。
  44. 如請求項43之多肽，其中結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的各結合域為VHH。
  45. 如請求項42或43之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域包含重鏈可變區及輕鏈可變區。
  46. 如請求項45之多肽，其中結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的各結合域包含重鏈可變區及輕鏈可變區。
  47. 如請求項42至46中任一項之多肽，其中至少一個結合除白蛋白或FcRn以外之蛋白的結合域為治療性抗體之結合域。
  48. 如請求項47之多肽，其中結合除白蛋白以外之蛋白的各結合域為治療性抗體之結合域。
  49. 如請求項47或48之多肽，其中該治療性抗體適用於治療選自以下之疾病或病症：自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。
  50. 如請求項1至41中任一項之多肽，其中該多肽包含治療性蛋白之胺基酸序列。
  51. 如請求項50之多肽，其中該治療性蛋白適用於治療選自以下之疾病或病症：自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。
  52. 如前述請求項中任一項之多肽，其中該多肽之半衰期長於缺乏結合白蛋白之VHH域的相同多肽之半衰期。
  53. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至52中任一項之多肽及醫藥學上可接受之載劑。
  54. 一種經分離之核酸，其編碼如請求項1至52中任一項之多肽。
  55. 一種載體，其包含如請求項54之核酸。
  56. 一種宿主細胞，其包含如請求項54之核酸或如請求項55之載體。
  57. 一種宿主細胞，其表現如請求項1至52中任一項之多肽。
  58. 一種產生如請求項1至52中任一項之多肽的方法，其包含如請求項56或57之宿主細胞在適合表現該多肽之條件下培育。
  59. 如請求項58之方法，其進一步包含分離該抗體或多肽。
  60. 一種方法，其包含向個體投與如請求項1至52中任一項之多肽或如請求項53之醫藥組合物。
  61. 一種治療疾病或病症之方法，其包含向患有該疾病或病症之個體投與醫藥學上有效量之如請求項1至52中任一項之多肽或如請求項53之醫藥組合物。
  62. 如請求項61之方法，其中該疾病或病症係選自自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症、感染及癌症。
  63. 如請求項61或62之方法，其中該疾病或病症為自體抗體介導之疾病或病症。
  64. 如請求項61至63中任一項之方法，其中該疾病或病症為尋常天疱瘡、狼瘡性腎炎、重症肌無力、格林-巴利症候群(Guillain-Barré syndrome)、抗體介導之排斥、抗磷脂抗體症候群、慢性發炎性脫髓鞘性多發神經病變、免疫複合體介導之血管炎、腎小球炎、離子通道病變、視神經脊髓炎、自體免疫性腦炎、自體免疫性格雷氏病(autoimmune Grave's disease)、特發性血小板減少性紫癜、自體免疫性溶血性貧血、免疫嗜中性白血球減少症、擴張型心肌病，或血清病。
  65. 如請求項60至64中任一項之方法，其中皮下投與該多肽。
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