TW202406558A - Ｓｔａｔ３靶向寡核苷酸和ｐｄ－ｌ１抑制劑的組合 - Google Patents

Ｓｔａｔ３靶向寡核苷酸和ｐｄ－ｌ１抑制劑的組合 Download PDF

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Abstract

本文所揭示之標的針對使用siRNA組成物及方法來調節基因表現，該siRNA組成物及方法針對影響支持癌生長及轉移之關鍵細胞群以影響患者之潛在腫瘤的有益治療、緩解或去除。

Description

ＳＴＡＴ３靶向寡核苷酸和ＰＤ－Ｌ１抑制劑的組合
本發明係關於STAT3靶向寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合。 相關申請案之交叉參考
本申請案主張在2022年3月15日申請之美國臨時專利申請案序號63,320,163之權益。將其完整內容併入本文以供參考。 序列表參考
將電子序列表(DICN_021_001TW_SeqList_ ST26.xml；大小：4,153,073位元組；及創建日期：2023年3月9日)的內容以其全文併入本文以供參考。
化學療法為目前全世界主要的癌症療法，其取決於腫瘤類型及階段而時常與手術、或手術和放射治療組合(Abbas等人之An Overview of Cancer Treatment Modalities/IntechOpen, 2018)。自從發現幾個促成致癌的重要突變(例如表皮細胞改變(Yamaoka等人之INT. J. MOL. SCI. (2017) 18(11): 2420))以來，該等突變及其代表的蛋白質已被廣泛地用作為開發更具選擇性的藥物及藥物組合以治療癌症患者的標靶。儘管該等藥物有效，但在患者中時常察看到多重抗藥性(MDR)，這往往導致腫瘤復發、限制的治療選擇及對患者而言的低生活品質。另外，癌症研究時常集中在腫瘤細胞，儘管腫瘤微環境及其中的「正常」或非癌細胞的效應已證明在腫瘤進展、發展及MDR中扮演關鍵角色(Klemm等人之TRENDS CELL BIOL (2015) 25(4): 198-213)。需要靶向促成腫瘤生長之不同面向的TME之新穎治療。
本揭示部分基於STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合對不同的腫瘤微環境之腫瘤提供抗腫瘤協同功效的發現。特定言之，如本文所證明，與脂質共軛之STAT3寡核苷酸在和抗PD-L1抗體組合遞送時減少在免疫抑制及發炎型腫瘤模式中的活體內腫瘤體積。再者，如本文所示，STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合誘導抗腫瘤記憶反應，因為當小鼠再受到癌細胞挑戰時，沒有確立的腫瘤。另外，STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的功效係取決於存在的CD8+T細胞。
因此，在一些態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予RNAi寡核苷酸，該RNAi寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股形成雙股螺旋區域(duplex region)，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療個體的癌症。
在其他態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療個體的癌症。
在又其他態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症。
在進一步的態樣中，本揭示提供套組，其包含RNAi寡核苷酸、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受PD-L1抑制劑之有其需要的個體投予寡核苷酸之用法說明，其中寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中互補區域為至少15個連續核苷酸長度。
在其他態樣中，本揭示提供套組，其包含PD-L1抑制劑、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受RNAi寡核苷酸之有其需要的個體投予抗體之用法說明，該寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中互補區域為至少15個連續核苷酸長度。
在一些或任一前述或相關態樣中，個體患有與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症。在一些態樣中，與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症為癌症。在一些態樣中，癌症係選自惡性腫瘤、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌(HCC)、大腸直腸癌、胰臟癌和神經膠母細胞瘤。在一些態樣中，癌症包含免疫抑制腫瘤微環境。在一些態樣中，免疫抑制腫瘤微環境具有低水平的CD8+T細胞浸潤及高水平的MDSC。在其他態樣中，癌症包含發炎型腫瘤微環境。在一些態樣中，發炎型腫瘤微環境包含浸潤性T細胞。在一些態樣中，發炎型腫瘤微環境包含高水平的CD8+T細胞浸潤及高水平的MDSC。在一些態樣中，癌症包含對免疫檢查點治療具有抗性的腫瘤。在一些態樣中，癌症包含對免疫檢查點治療具有部分抗性的腫瘤。在一些態樣中，癌症包含對免疫檢查點治療具有敏感性的腫瘤。
在一些或任一前述或相關態樣中，本文所述之方法治療自發性腫瘤轉移。
在一些或任一前述或相關態樣中，本文所述之方法減少免疫抑制基因及增強免疫活化基因。在一些態樣中，免疫抑制基因包含檢查點抑制劑、經STAT3調介之基因、抑制性細胞激素、抑制性化學激素及血管生成和基質重塑相關基因。在一些態樣中，免疫活化基因包含與T細胞遷移、T細胞活化、T細胞記憶及/或T細胞毒性相關之基因。
在一些或任一前述或相關態樣中，PD-L1抑制劑為抗體。在一些態樣中，抗體為抗PD-L1抗體。在一些態樣中，抗PDL1抗體係選自FAZ053、阿特珠單抗(atezolizumab)、艾維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、恩伐利單抗(envafolimab)和BMS-936559。在一些態樣中，抗體為抗PD-1抗體。在一些態樣中，抗PD-1抗體係選自尼沃魯單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)和西米普利單抗(cemiplimab)。
在一些態樣中，PD-L1抑制劑為小分子抑制劑。在一些態樣中，PD-L1抑制劑為肽。在一些態樣中，PD-L1抑制劑為核酸分子。在一些態樣中，核酸分子係選自反義寡核苷酸、siRNA或miRNA。
在一些或任一前述或相關態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：89至280中任一者。在一些態樣中，互補區域係與STAT3 mRNA靶序列完全互補。在一些態樣中，互補區域包含不超過4個與STAT3 mRNA靶序列之失配。
在一些或任一前述或相關態樣中，反義股為19至27個核苷酸長度。在一些態樣中，反義股為21至27個核苷酸長度，視需要地其中反義股為22個核苷酸長度。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股為19至40個核苷酸長度，視需要地其中有義股為36個核苷酸長度。
在一些或任一前述或相關態樣中，雙股螺旋區域為至少19個核苷酸長度。在一些態樣中，雙股螺旋區域為至少20個核苷酸長度，視需要地其中雙股螺旋區域為21個核苷酸長度。
在一些或任一前述或相關態樣中，與STAT3的互補區域為至少19個連續核苷酸長度。在一些態樣中，與STAT3的互補區域為至少21個連續核苷酸長度。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含在其3’端如以下列出之主幹-環圈(stem-loop)：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成介於S1與S2之間的3至5個核苷酸長度之環圈。在一些態樣中，L為四鹼基環圈(tetraloop)，視需要地其中L為4個核苷酸長度。在一些態樣中，L包含如GAAA所列出之序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，反義股包含一或多個核苷酸長度之3’突出序列，視需要地其中3’突出序列為2個核苷酸長度，視需要地其中3’突出序列為GG。
在一些或任一前述或相關態樣中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。在一些態樣中，經修飾之核苷酸包含2’-修飾。在一些態樣中，2’-修飾為選自2’-胺乙基、2’-氟、2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸之修飾。在一些態樣中，有義股之核苷酸的約10至15%、10%、11%、12%、13%、14%、或15%包含2’-氟修飾。在一些態樣中，反義股之核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、或35%包含2’-氟修飾。在一些態樣中，寡核苷酸之核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、或35%包含2’-氟修飾。在一些態樣中，有義股包含自5’至3’之具有位置1至36的36個核苷酸，其中位置8至11包含2’-氟修飾。在一些態樣中，反義股包含自3’至5’之具有位置1至22的22個核苷酸，且其中位置2、3、4、5、7、10和14 包含2’-氟修飾。在一些態樣中，其餘核苷酸包含2’-O-甲基修飾。在一些態樣中，寡核苷酸之所有的核苷酸皆經修飾。
在一些或任一前述或相關態樣中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些態樣中，至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
在一些或任一前述或相關態樣中，反義股之5’-核苷酸的糖之4’-碳包含磷酸酯類似物。在一些態樣中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯。
在一些或任一前述或相關態樣中，寡核苷酸之至少一個核苷酸係與一或多個靶向配體共軛。在一些態樣中，核苷酸係與一個以上的靶向配體共軛，其中靶向配體為相同或不同的。在一些態樣中，一或多個靶向配體係選自碳水化合物、胺糖、膽固醇、多肽或脂質。在一些態樣中，一或多個靶向配體為飽和或不飽和脂肪酸部分。在一些態樣中，靶向配體為飽和脂肪酸部分，其大小範圍為C10至C24長度。在一些態樣中，靶向配體為C16飽和脂肪酸部分。在一些態樣中，靶向配體為C18飽和脂肪酸部分。在一些態樣中，靶向配體為C22飽和脂肪酸部分。在一些態樣中，靶向配體包含N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。在一些態樣中，GalNAc部分為單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。在一些態樣中，主幹-環圈之L的至多4個核苷酸分別與單價GalNAc部分共軛。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含如以SEQ ID NO：857至946所列出之序列。在一些態樣中，反義股包含如以SEQ ID NO：947至1036所列出之序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：861和951； (b) 分別為SEQ ID NO：857和947； (c) 分別為SEQ ID NO：858和948； (d) 分別為SEQ ID NO：859和949； (e) 分別為SEQ ID NO：860和950； (f) 分別為SEQ ID NO：862和952； (g) 分別為SEQ ID NO：863和953； (h) 分別為SEQ ID NO：864和954； (i) 分別為SEQ ID NO：865和955； (j) 分別為SEQ ID NO：866和956； (k) 分別為SEQ ID NO：867和957； (l) 分別為SEQ ID NO：868和958； (m) 分別為SEQ ID NO：869和959； (n) 分別為SEQ ID NO：870和960； (o) 分別為SEQ ID NO：871和961； (p) 分別為SEQ ID NO：872和962； (q) 分別為SEQ ID NO：873和963； (r) 分別為SEQ ID NO：874和964； (s) 分別為SEQ ID NO：875和965； (t) 分別為SEQ ID NO：876和966； (u) 分別為SEQ ID NO：877和967； (v) 分別為SEQ ID NO：878和968； (w) 分別為SEQ ID NO：879和969； (x) 分別為SEQ ID NO：880和970； (y) 分別為SEQ ID NO：881和971； (z) 分別為SEQ ID NO：882和972； (aa) 分別為SEQ ID NO：883和973； (bb) 分別為SEQ ID NO：884和974； (cc) 分別為SEQ ID NO：885和975； (dd) 分別為SEQ ID NO：886和976； (ee) 分別為SEQ ID NO：887和977； (ff) 分別為SEQ ID NO：888和978； (gg) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (hh) 分別為SEQ ID NO：896和986；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含SEQ ID NO：862之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：952之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：875之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：965之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：876之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：966之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：920之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：1010之核苷酸序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含SEQ ID NO：11、39、67和71中任一者之核苷酸序列。在一些態樣中，反義股包含SEQ ID NO：12、40、68和72中任一者之核苷酸序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：11和12； (b) 分別為SEQ ID NO：39和40； (c) 分別為SEQ ID NO：67和68；及 (d) 分別為SEQ ID NO：71和72。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含選自SEQ ID NO：1042、1055、1056和1100之核苷酸序列。在一些態樣中，反義股包含選自SEQ ID NO：1132、1145、1146和1190之核苷酸序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1041和1131； (b) 分別為SEQ ID NO：1037和1127； (c) 分別為SEQ ID NO：1038和1128； (d) 分別為SEQ ID NO：1039和1129； (e) 分別為SEQ ID NO：1040和1130； (f) 分別為SEQ ID NO：1042和1132； (g) 分別為SEQ ID NO：1043和1133； (h) 分別為SEQ ID NO：1044和1134； (i) 分別為SEQ ID NO：1045和1135； (j) 分別為SEQ ID NO：1046和1136； (k) 分別為SEQ ID NO：1047和1137； (l) 分別為SEQ ID NO：1048和1138； (m) 分別為SEQ ID NO：1049和1139； (n) 分別為SEQ ID NO：1050和1140； (o) 分別為SEQ ID NO：1051和1141； (p) 分別為SEQ ID NO：1052和1142； (q) 分別為SEQ ID NO：1053和1143； (r) 分別為SEQ ID NO：1054和1144； (s) 分別為SEQ ID NO：1055和1145； (t) 分別為SEQ ID NO：1056和1146； (u) 分別為SEQ ID NO：1057和1147； (v) 分別為SEQ ID NO：1058和1148； (w) 分別為SEQ ID NO：1059和1149； (x) 分別為SEQ ID NO：1060和1150； (y) 分別為SEQ ID NO：1061和1151； (z) 分別為SEQ ID NO：1062和1152； (aa) 分別為SEQ ID NO：1063和1153； (bb) 分別為SEQ ID NO：1064和1154； (cc) 分別為SEQ ID NO：1065和1155； (dd) 分別為SEQ ID NO：1066和1156； (ee) 分別為SEQ ID NO：1067和1157； (ff) 分別為SEQ ID NO：1068和1158； (gg) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (hh) 分別為SEQ ID NO：1076和1166；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1042之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：1132之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1055之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：1145之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1056之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：1146之核苷酸序列。在一些態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1100之核苷酸序列及反義股包含SEQ ID NO：1190之核苷酸序列。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1081和1171； (b) 分別為SEQ ID NO：1090和1180； (c) 分別為SEQ ID NO：1079和1169； (d) 分別為SEQ ID NO：1076和1166； (e) 分別為SEQ ID NO：1072和1162； (f) 分別為SEQ ID NO：1070和1160；及 (g) 分別為SEQ ID NO：1069和1159。
在一些或任一前述或相關態樣中，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (b) 分別為SEQ ID NO：1117和1207；及 (c) 分別為SEQ ID NO：1119和1209。
在一些或任一前述或相關態樣中，有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1095和1185； (b) 分別為SEQ ID NO：1104和1194； (c) 分別為SEQ ID NO：1093和1183；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
在一些態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受抗PD-L1抗體之個體的癌症之方法，該方法包含投予RNAi寡核苷酸，該RNAi寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：84所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：83所列出之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在其他態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予抗PD-L1抗體，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：84所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：83所列出之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在又其他態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受抗PD-L1抗體，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：84所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：83所列出之核苷酸序列，由此治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症。
在進一步的態樣中，本揭示提供套組，其包含RNAi寡核苷酸、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受抗PD-L1抗體之有其需要的個體投予寡核苷酸之用法說明，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：84所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：83所列出之核苷酸序列。
在其他態樣中，本揭示提供套組，其包含抗PD-L1抗體、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受RNAi寡核苷酸之有其需要的個體投予抗體之用法說明，該寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：84所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：83所列出之核苷酸序列。
在一些態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受抗PD-L1抗體之個體的癌症之方法，該方法包含投予RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：70所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：69所列出之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在其他態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予抗PD-L1抗體，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：70所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：69所列出之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在又其他態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，該方法包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受抗PD-L1抗體，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：70所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：69所列出之核苷酸序列，由此治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症。
在進一步的態樣中，本揭示提供套組，其包含RNAi寡核苷酸、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受抗PD-L1抗體之有其需要的個體投予寡核苷酸之用法說明，其中寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：70所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：69所列出之核苷酸序列。
在其他態樣中，本揭示提供套組，其包含抗PD-L1抗體、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單，該藥品仿單包含對已接受或正接受RNAi寡核苷酸之有其需要的個體投予抗體之用法說明，該寡核苷酸包含反義股，其包含以SEQ ID NO：70所列出之核苷酸序列，其中反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，及有義股，其包含以SEQ ID NO：69所列出之核苷酸序列。
詳細說明
本揭示現將參考附圖於下文更完整地說明，其中顯示本揭示之例證性實施態樣。然而，本揭示可以許多不同的形式體現且不應被解釋為限於本文所提出之實施態樣；反而提供該等實施態樣使得本揭示為周密的且完整的，且將本揭示之範圍完整地傳達給那些熟習本技術領域者。 定義
整個文本中所討論的發表僅出於其揭示在本申請案的申請日期之前才提供。本文中沒有任何內容應被解釋為承認本發明人無權憑藉在先發明而先於此等揭示內容。
如本文所使用之術語「及/或」包括相關的列出項目中之一或多者的任一者及所有組合。再者，單數形式及冠詞「一(an)」、「一(an)」及「該(the)」亦意欲包括複數形式，除非另有其他明確的陳述。應進一步理解術語：包括(include)、包含(comprise)、包括(including)及/或包含(comprising)在用於本說明書時具體說明所陳述之特徵、整數、步驟、操作、元件及/或組分的存在，但不排除一或多個其他特徵、整數、步驟、操作、元件、組分及/或其群組的存在或添加。再者，應理解當提及及/或顯示元件(包括組分或子系統)與另一個元件連接或結合時，其可與其他元件直接連接或結合或可能有居間元件的存在。
除非另有其他定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬技術之普通技能者共同理解的相同意義。儘管類似或等同於那些本文所述者之方法及材料可用於實施所揭示之方法或組成物，但是本文說明示例性方法及材料。
說明本文有用的分子生物學技術，包括載體、啟動子和許多其他相關標的之使用的一般文本包括Berger和Kimmel之Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, volume 152, (Academic Press, Inc., San Diego, Calif.) (「Berger」)；Sambrook等人之Molecular Cloning--A Laboratory Manual, 2d ed., Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1989 (「Sambrook」)；及Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel等人編輯之 Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley and Sons, Inc., (補充至1999年)(「Ausubel」)。足以指導技術人員通過試管內擴增方法(包括聚合酶連鎖反應(PCR)、連接酶連鎖反應(LCR)、Q.beta複製酶擴增和其他經RNA聚合酶調介之技術(例如NASBA))用於例如生產本揭示之同源性核酸之方案的實例係見於Berger、Sambrook和Ausubel，以及Mullis等人之(1987)美國專利第4,683,202號；Innis等人編輯之(1990)；PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press Inc. San Diego, Calif.)(「Innis」)；Arnheim和Levinson (Oct. 1, 1990) Cand EN 36-47；J. NIH Res. (1991) 3:81-94；Kwoh等人之(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 1173；Guatelliet等人之(1990) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 87: 1874；Lomell等人之(1989) J. Clin. Chem 35: 1826；Landegren等人之(1988) Science 241: 1077-80；Van Brunt之(1990) Biotechnology 8: 291-94；Wu和Wallace之(1989) Gene 4:560；Barringer等人之(1990) Gene 89:117；及Sooknanan和Malek之(1995) Biotechnology 13: 563-564中。用於試管內選殖擴增之核酸之改進方法說明於Wallace等人之美國專利第5,426,039號。以PCR擴增大核酸之改進方法總結於Cheng等人之(1994) Nature 369: 684-85及及其中所引用之參考文獻，其中產生至多40 kb之PCR擴增子。
如本說明書及隨附之申請專利範圍中所使用之單數形式「一(an)」、「一(an)」及「該(the)」包含複數之指示物，除非上下文另有明確的規定。因此，例如提及之「一醫藥載劑(a pharmaceutical carrier)」包括二或更多種此等載劑及類似者之混合物。
範圍可在本文以自「約」一個值及/或至「約」另一個值表示。當以此範圍表示時，另一實施態樣包括自一個值及/或至其他值。同樣地，當值使用先行詞「約」的近似值表示時，應理解該值構成另一實施態樣。應進一步理解每一範圍的端點在關於其他端點或獨立於其他端點兩方面皆有意義。亦應理解有很多在本文所揭示之值，且除了該值本身以外，各值在本文亦以「約」該值揭示。例如，若揭示值「10」，則亦揭示「約10」。亦應理解當揭示值時，亦揭示「小於或等於」該值、「大於或等於該值」及在值之間的可能範圍，如熟習本技術領域者適當地理解。例如，若揭示值「10」，則亦揭示「小於或等於10」以及「大於或等於10」。亦應理解在整個申請案中，數據係以幾種不同的格式提供，且此數據代表端點和起點、及數據點之任何組合的範圍。例如，若揭示特定的數據點「10」及特定的數據點「15」，則應理解亦視為揭示大於、大於或等於、小於、小於或等於、及等於10和15、以及在10與15之間。亦應理解亦揭示在兩個特定單元之間的各單元。例如，若揭示10和15，則亦揭示11、12、13和14。
在本說明書及隨後的專利申請範圍中，參考很多術語，其經定義而具有以下涵義：
術語「癌」或「腫瘤」包括但不限於實體腫瘤和血源性腫瘤。該等術語包括皮膚、組織、器官、骨骼、軟骨、血液和血管的疾病。該等術語另外包含原發性和轉移性癌症。
術語「PD-1」係指在T細胞上發現之蛋白質，其有助於保持免疫反應受到控制。當PD-1與另一種稱為PD-L1之蛋白質結合時，其有助於阻止T細胞殺死其他細胞，包括癌細胞。一些稱為免疫檢查點抑制劑的抗癌藥物用於阻斷PD-1。當防止此蛋白質在T細胞上起作用時，該等藥物可起作用以殺死癌細胞。
術語「STAT3」係指轉錄訊息轉導及活化子蛋白3 (STAT3)，其為人類中以STAT3基因編碼之轉錄因子(STAT3人類(Hs) NM_001369512.1基因庫RefSeq #，或NM_139276.3)。STAT3調介各種反應細胞刺激之基因表現，且因此在許多細胞過程(諸如細胞生長和凋亡)以及癌生長和進展中扮演關鍵角色。
如本文所使用之術語「冷腫瘤」或「非發炎型腫瘤」係指腫瘤或腫瘤微環境，其中有極少至沒有抗腫瘤免疫細胞(諸如腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL))的存在，及/或含有與免疫抑制相關聯的細胞亞群，包括調節性T細胞(Treg)、源於骨髓之抑制細胞(MDSC)和M2巨噬細胞。特定言之，在一些實施態樣中，實體腫瘤係以很少或甚至沒有抗腫瘤免疫細胞浸潤為特徵，使得此等細胞可能存在，但仍停留在周圍間質中，因此無法選殖腫瘤微環境以提供其抗腫瘤功能。
如本文所使用之「互補」係指介於兩個核苷酸(例如在兩個相對核酸上或在單一核酸股的相對區域上)之間的結構關係，其允許兩個核苷酸彼此形成鹼基對。例如，與相對核酸之嘧啶核苷酸互補的一個核酸之嘌呤核苷酸可藉由彼此形成氫鍵而一起鹼基配對。在一些實施態樣中，互補的核苷酸可以瓦生克立克(Watson-Crick)方式或以容許形成穩定的雙股螺旋的任何其他方式鹼基配對。在一些實施態樣中，兩個核酸可具有彼此互補以形成互補區域之多個核苷酸區域，如本文所述。
如本文所使用之「物種交叉反應性寡核苷酸」係指能夠抑制一種以上的物種之標靶mRNA表現之寡核苷酸。例如，在一些實施態樣中，物種交叉反應性寡核苷酸能夠抑制人類和非人類靈長類動物之標靶mRNA表現。物種實例包括但不限於人類、非人類靈長類動物、小鼠和大鼠。在一些實施態樣中，物種交叉反應性寡核苷酸能夠靶向及抑制至少二種、至少三種或至少四種物種之mRNA。
如本文所使用之「去氧核糖核苷酸」係指當與核糖核苷酸相比時在其戊糖的2’位置上具有代替羥基的氫之核苷酸。經修飾之去氧核醣核苷酸為除了在2’位置以外具有一或多個原子修飾或取代之去氧核醣核苷酸，包括在糖、磷酸酯基團或鹼基中或糖、磷酸酯基團或鹼基之修飾或取代。
如本文所使用之「雙股RNA」或「dsRNA」係指實質上呈雙股螺旋形式之RNA寡核苷酸。在一些實施態樣中，dsRNA寡核苷酸的雙股螺旋區域之互補鹼基配對係在介於共價的單獨核酸股之核苷酸之反向平行序列之間形成。在一些實施態樣中，dsRNA的雙股螺旋區域之互補鹼基配對係在介於共價鍵聯的核酸股之核苷酸之反向平行序列之間形成。在一些實施態樣中，dsRNA的雙股螺旋區域之互補鹼基配對係自單一核酸股形成，該單一核酸股經折疊(例如經由髮夾)以提供一起鹼基配對之核苷酸的互補反向平行序列。在一些實施態樣中，dsRNA包含彼此完全成雙股螺旋之兩個共價的單獨核酸股。然而，在一些實施態樣中，dsRNA包含部分成雙股螺旋之兩個共價的單獨核酸股(例如在一或兩端具有突出物)。在一些實施態樣中，dsRNA包含部分互補的核苷酸之反向平行序列，且因此可具有一或多個可包括內部失配或端失配之失配。
如本文提及核酸(例如寡核苷酸)所使用之「雙股螺旋」係指通過核苷酸的兩個反平行序列之互補鹼基配對所形成之結構
如本文所使用之「賦形劑」係指可包括在組成物中以例如提供或促成所欲稠度或穩定效應的非治療劑。
如本文所使用之術語「熱腫瘤」或「發炎型腫瘤」係指腫瘤或腫瘤微環境，其中有大量抗腫瘤免疫細胞的存在，尤其為TIL，且因此通常為免疫刺激性。
如本文所使用之「環圈」係指以核酸的兩個彼此充分互補的反向平行區域側接之核酸(例如寡核苷酸)的未配對區域，使得成為未配對區域之側接的兩個反向平行區域在適當的雜交條件下(例如在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中)雜交以形成雙股螺旋(稱為「主幹」)。環圈可指包含四個核苷酸作為四鹼基環圈(四L)的環圈。環圈可指包含三個核苷酸作為三鹼基環圈(三L)的環圈。
如本文所使用之「經修飾之核苷酸間鍵聯」係指當與包含磷酸二酯鍵的參考核苷酸間鍵聯相比時具有一或多個化學修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸為非天然生成之鍵聯。經修飾之核苷酸間鍵聯通常賦予其中有經修飾之核苷酸間鍵聯存在的核酸之一或多個所欲性質。例如，經修飾之核苷酸可改進熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物可利用性、生物活性、降低的免疫原性等。
如本文所使用之「經修飾之核苷酸」係指當與選自：腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤去氧核糖核苷酸、鳥嘌呤去氧核糖核苷酸、胞嘧啶去氧核糖核苷酸和胸苷去氧核糖核苷酸之對應的參考核苷酸相比時，具有一或多種化學修飾之核苷酸。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸為非天然生成之核苷酸。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸具有一或多個在其糖、核鹼基及/或磷酸酯基團中的化學修飾。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸具有一或多個與對應的參考核苷酸共軛之化學部分。經修飾之核苷酸通常賦予其中有經修飾之核苷酸存在的核酸一或多個所欲性質。例如，經修飾之核苷酸可改進熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物可利用性、生物活性、降低的免疫原性等。
如本文所使用之「切口型四鹼基環圈結構」係指以單獨的有義(過客)股及反義(引導)股為特徵的RNAi寡核苷酸結構，其中有義股具有與反義股的互補區域，且其中股中至少一者(通常為有義股)具有經配置之四鹼基環圈以穩定在至少一個股內所形成之相鄰的主幹區域。
如本文所使用之「寡核苷酸」係指短核酸(例如少於約100個核苷酸長度)。寡核苷酸可為單股(ss)或雙股(ds)。寡核苷酸可具有或可不具有雙股螺旋區域。寡核苷酸可包含去氧核糖核苷酸、核糖核苷或兩者之組合。在一些實施態樣中，包含核糖核苷酸之雙股寡核苷酸稱為「dsRNA」。作為一組非限制性實例的寡核苷酸可為但不限於小干擾RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、切丁酶受質干擾RNA (dsiRNA)、反義寡核苷酸、短siRNA或ss siRNA。在一些實施態樣中，雙股RNA (dsRNA)為RNAi寡核苷酸。
術語「RNAi寡核苷酸共軛體」及「寡核苷酸-配體共軛體」可互換使用且係指包含與一或多個靶向配體共軛之一或多個核苷酸之寡核苷酸。
如本文所使用之「突出物」係指係指自延伸超出互補股之末端的一個股或區域生成之末端非鹼基配對核苷酸，該一個股或區域係與互補股形成雙股螺旋。在一些實施態樣中，突出物包含自dsRNA的5’末端或3’末端之雙股螺旋區域延伸的一或多個未配對之核苷酸。在特定的實施態樣中，突出物為dsRNA之反義股或有義股上的3’或5’突出物。
如本文所使用之「磷酸酯類似物」係指模擬磷酸酯基團的靜電及/或空間性質之化學部分。在一些實施態樣中，磷酸酯類似物係代替經常易感受酶去除的5’-磷酸酯而位於寡核苷酸之5’末端核苷酸上。在一些實施態樣中，5’磷酸酯類似物含有抗磷酸酶鍵聯。磷酸酯類似物的實例包括但不限於5’膦酸酯，諸如5’亞甲基膦酸酯(5’-MP)和5’-(E)-乙烯基膦酸酯(5’-VP)。在一些實施態樣中，寡核苷酸具有在5’末端核苷酸之糖的 4’-碳位置上之磷酸酯類似物(稱為「4’-磷酸酯類似物」)。4’-磷酸酯類似物的實例為氧甲基膦酸酯(其中氧甲基之氧原子係結合至糖部分(例如在其4’-碳上))或其類似物。參見例如美國臨時專利申請案第62/383,207號(在2016年9月2日申請)及第62/393,401號(在2016年9月12日申請)中。已開發出寡核苷酸之5’端的其他修飾(參見例如國際專利申請案第WO 2011/133871號；美國專利案第8,927,513號；及Prakash等人之(2015) Nucleic Acids Res. 43:2993-3011)。
如本文所使用之基因(例如STAT3)「表現降低」係指當與適當的參考物(例如參考細胞、細胞群、樣品或個體)相比時，降低RNA轉錄本(例如STAT3 mRNA)或以基因編碼之蛋白質的量或水平，及/或降低細胞、細胞群、樣品或個體中之基因活性的量或水平。例如，當與未以dsRNA處理之細胞相比時，令細胞與本文之寡核苷酸(例如包含具有與包含STAT3 mRNA之核苷酸序列互補的核苷酸序列之反義股的寡核苷酸)接觸的作用可導致STAT3 mRNA、蛋白質及/或活性的量或水平降低(例如藉由RNAi途徑降解STAT3 mRNA)。同樣地且如本文所使用之「降低表現」係指導致基因(例如STAT3)表現降低的作用。如本文所使用之「STAT3表現降低」係指當與適當的參考物(例如參考細胞、細胞群、樣品或個體)相比時，降低細胞、細胞群、樣品或個體中的STAT3 mRNA、STAT3蛋白質及/或STAT3活性的量或水平。
如本文所使用之「互補區域」係指與核苷酸之反向平行序列充分互補的核酸(例如dsRNA)之核苷酸序列，以允許在適當的雜交條件下(例如在磷酸鹽緩衝液中、在細胞中等)在介於兩個核苷酸序列之間雜交。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含具有與mRNA靶序列的互補區域之靶向序列。
如本文所使用之「核糖核苷酸」係指具有核糖作為其戊糖之核苷酸，在其2’位置含有羥基。經修飾之核醣核苷酸為除了在2’位置以外具有一或多個原子修飾或取代之核醣核苷酸，包括在核糖、磷酸酯基團或鹼基中或核糖、磷酸酯基團或鹼基之修飾或取代。
如本文所使用之「RNAi寡核苷酸」係指(a)具有有義(過客)股及反義(引導)股之dsRNA，其中反義股或反義股之部分係藉由 Argonaute2 (Ago2)核酸內切酶而用於切割標靶mRNA，或(b)具有單一反義股之ss寡核苷酸，其中該反義股(或該反義股之部分)係藉由Ago2核酸內切酶而用於切割標靶mRNA。
如本文所使用之「股」係指通過核苷酸間鍵聯(例如磷酸二酯鍵聯或硫代磷酸酯鍵聯)而鍵聯在一起的核苷酸之單一連續序列。在一些實施態樣中，股具有兩個游離端(例如5’端和3’端)。
如本文所使用之「個體」意指任何哺乳動物，包括小鼠、兔、非人類靈長類動物(NHP)和人類。在一個實施態樣中，個體為人類或NHP。而且，「個人」或「患者」可與「個體」互換使用。
如本文所使用之「合成」係指經人工合成(例如使用機器(例如固態核酸合成器))或除此之外不源自正常產生分子的天然來源(例如細胞或生物體)之核酸或其他分子。
如本文所使用之「靶向配體」係指選擇性地結合至關注的組織或細胞之同源分子(例如受體)及/或出於靶向其他物質至關注的組織或細胞之目的而與另一物質可共軛的分子或「部分」(例如碳水化合物、胺糖、膽固醇、多肽或脂質)。例如，在一些實施態樣中，靶向配體可出於靶向寡核苷酸至關注的特定組織或細胞之目的而與寡核苷酸共軛。在一些實施態樣中，靶向配體選擇性地結合至細胞表面受體。因此，在一些實施態樣中，當靶向配體與寡核苷酸共軛時，靶向配體係通過選擇性地結合至表現在細胞表面上的受體及以包含寡核苷酸、靶向配體和受體的複合細胞之核內體內化而促成寡核苷酸遞送至特定細胞中。在一些實施態樣中，靶向配體係經由鍵聯子與寡核苷酸共軛，該鍵聯子係在細胞內化後或期間切割，使得寡核苷酸在細胞中自靶向配體釋放。
如本文所使用之「環圈」、「三鹼基環圈」或「四鹼基環圈」係指增加由核苷酸之側接序列雜交所形成之相鄰的雙股螺旋的穩定性之環圈。穩定性的增加係以相鄰的主幹雙股螺旋增加的熔融溫度(T m)檢測，其比來自由隨機選擇的核苷酸序列所組成之一組長度可相比的環圈之相鄰的主幹雙股螺旋所預期之平均T m高。例如，環圈(例如四鹼基環圈或三鹼基環圈)可於10 mM NaHPO 4中賦予包含至少2個鹼基對(bp)長度的雙股螺旋之髮夾至少約50℃、至少約55℃、至少約56℃、至少約58℃、至少約60℃、至少約65℃、或至少約75℃之T m。在一些實施態樣中，環圈(例如四鹼基環圈)可藉由堆疊相互作用而使相鄰的主幹雙股螺旋之bp穩定。另外，在四鹼基環圈的核苷酸之中的相互作用包括但不限於非瓦生克立克鹼基配對、堆疊相互作用、氫鍵結和接觸相互作用(Cheong等人之(1990) Nature 346:680-82；Heus和Pardi之(1991) Science 253:191-94)。在一些實施態樣中，環圈包含3至6個核苷酸或由該等所組成，且通常為4至5個核苷酸。在特定的實施態樣中，環圈包含3、4、5或6個核苷酸或由該等所組成，其可經或可不經修飾(例如其可與或可不與靶向部分共軛)。在一些實施態樣中，四鹼基環圈包含3至6個核苷酸或由該等所組成，且通常為4至5個核苷酸。在特定的實施態樣中，四鹼基環圈包含3、4、5或6個核苷酸或由該等所組成，其可經或可不經修飾(例如其可與或可不與靶向部分共軛)。在一個實施態樣中，由4個核苷酸所組成的環圈為四鹼基環圈。任何核苷酸可用於環圈(例如四鹼基環圈)中且可使用此等核苷酸之標準的IUPAC-IUB符號，如Cornish-Bowden ((1985) Nucleic Acids Res. 13:3021-3030)中所述。例如，可使用字母「N」意指任何鹼基可於該位置，可使用字母「R」顯示A (腺嘌呤)或G (鳥嘌呤)可於該位置，及可使用「B」顯示C (胞嘧啶)、G (鳥嘌呤)或T (胸腺嘧啶)可於該位置。四鹼基環圈的實例包括四鹼基環圈之UNCG家族(例如UUCG)、四鹼基環圈之GNRA家族(例如GAAA)和CUUG四鹼基環圈(Woese等人之(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8467-71；Antao等人之(1991) Nucleic Acids Res .19:5901-05)。DNA四鹼基環圈的實例包括四鹼基環圈之d(GNNA)家族(例如d(GTTA))、四鹼基環圈之d(GNRA)家族、四鹼基環圈之d(GNAB)家族、四鹼基環圈之d(CNNG)家族和四鹼基環圈之d(TNCG)家族(例如d(TTCG))。參見例如Nakano等人之(2002) Biochem. 41:4281-92；Shinji等人之(2000) Nippon Kagakkai Koen Yokoshu 78:731)。在一些實施態樣中，四鹼基環圈包含在切口型四鹼基環圈結構內。
如本文所使用之「治療(treat或treating)」係指出於改進有關現有病症(例如疾病、疾患)的個體之健康及/或安康或預防或減少病症發生的可能性之目的而對有其需要的個體提供護理之作為，例如對個體投予治療劑(例如本文之寡核苷酸)。在一些實施態樣中，治療涉及降低由個體所經歷之病症(例如疾病、疾患)的至少一種徵兆、症狀或促成因素之頻率或嚴重性。
如本文所使用之術語「腫瘤微環境」關於任何給出之腫瘤存在的細胞環境，包括腫瘤間質、周圍血管、免疫細胞、纖維母細胞、其他細胞、傳訊分子和ECM。應理解腫瘤微環境錨定及/或包圍與其相互作用的腫瘤細胞。 使用方法 STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合
在一些實施態樣中，本揭示提供用於或可適合用於治療已接受或正接受PD-L1抑制劑的個體(例如患有與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症的人類)之STAT3寡核苷酸。
在一些實施態樣中，本文所述之方法包含選出患有或易患有與STAT3表現及/或PD-L1表現相關聯的疾病、疾患或病症的個體。在一些情況中，該方法可包括選出具有與STAT3表現及/或PD-L1表現相關聯的疾病(諸如癌症或其他慢性淋巴球增生病變)之標誌物的個人。
同樣地及如本文所詳述，該方法亦可包括以下步驟：諸如測量或獲得STAT3表現及/或PD-L1表現之標記物的基線值，且接著比較此獲得的值與一或多個其他基線值或在投予寡核苷酸後所獲得的值以評鑑治療有效性。
在一些實施態樣中，本揭示提供以本文之STAT3寡核苷酸治療患有、疑似患有疾病、疾患或病症或處於發展出該等疾病、疾患或病症之風險的個體之方法，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，本揭示提供以本文所述之PD-L1抑制劑治療患有、疑似患有疾病、疾患或病症或處於發展出該等疾病、疾患或病症之風險的個體之方法，其中個體已接受或正接受本文所述之STAT3寡核苷酸。
在一些態樣中，本揭示提供使用本文之STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合治療或減弱與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症的發作或進展之方法。在其他態樣中，本揭示提供使用本文之STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合在患有與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症的個體中達成一或多種治療效益之方法。在本文之方法的一些實施態樣中，個體係藉由投予治療有效量的本文之STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑的組合來治療。在本文之方法的一些實施態樣中，個體係藉由對已接受或正接受PD-L1抑制劑的個體投予治療有效量的本文之STAT3寡核苷酸來治療。在本文之方法的一些實施態樣中，個體係藉由對已接受或正接受本文之STAT3寡核苷酸的個體投予治療有效量的PD-L1抑制劑來治療。在一些實施態樣中，個體係經治療性治療。在一些實施態樣中，個體係經預防性治療。
在本文之方法的一些實施態樣中，將一或多種本文之STAT3寡核苷酸或包含一或多種STAT3寡核苷酸之醫藥組成物投予已接受或正接受PD-L1抑制劑之患有STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症的個體，使得個體中的STAT3表現降低，由此治療個體。在一些實施態樣中，在個體中的STAT3 mRNA的量或水平降低。在一些實施態樣中，在個體中的STAT3及/或蛋白質的量或水平降低。在本文之方法的一些實施態樣中，將一或多種本文之STAT3寡核苷酸或包含一或多種STAT3寡核苷酸之醫藥組成物投予已接受或正接受PD-L1抑制劑之患有與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症的個體，使得個體中的STAT3表現及PD-L1傳訊降低，由此治療個體。在一些實施態樣中，在個體中的STAT3 mRNA的量或水平及PD-L1傳訊降低。在一些實施態樣中，在個體中的STAT3及/或蛋白質的量或水平降低及在個體中的PD-L1傳訊降低。
在一些實施態樣中，將治療有效量的STAT3寡核苷酸及/或PD-L1抑制劑投予個體。治療可接受的量可為可治療性治療疾病或疾患的量。適合於任何一位個體的劑量將取決於特定的因素而定，包括個體的身型、體表面積、年齡、欲投予之特定組成物、在組成物中的活性成分、投予時間和途徑、一般健康及同時投予之其他藥物。
在一些實施態樣中，個體係經以下方式被投予本文之組成物中任一者：經腸(例如經口、藉由胃飼管、藉由十二指腸飼管、經由胃造口術或經直腸)、非經腸(例如皮下注射、靜脈內注射或輸注、動脈內注射或輸注、骨內輸注、肌內注射、腦內注射、腦室內注射、鞘內)、經局部(例如皮上、吸入、經由眼藥水或通過黏膜)或藉由直接注射至靶器官(例如個體之肝臟)。本文之寡核苷酸通常經靜脈內或皮下投予。
作為一組非限制性實例的本文之寡核苷酸通常可以每季投予(每三個月一次)、每兩月投予(每兩個月一次)、每月投予或每週投予。例如，寡核苷酸可以每週或以兩週或三週之間隔投予。另一選擇地，寡核苷酸可以每天投予。在一些實施態樣中，個體被投予寡核苷酸的一或多個負載劑量，隨後投予寡核苷的一或多個維持劑量。
在一些實施態樣中，本文之PD-L1抑制劑(例如抗PD-L1抗體)係以每季投予(每三個月一次)、每兩月投予(每兩個月一次)、每月投予或每週投予。例如，抑制劑係以每週或以兩週或三週之間隔投予。另一選擇地，抑制劑係每天投予。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸係和PD-L1抑制劑組合投予。在一些實施態樣中，寡核苷酸和抑制劑係同時、依序(以任何順序)或間歇地組合投予。例如，寡核苷酸和抑制劑可同時共同投予。另一選擇地，可投予寡核苷酸及隨後以此後的任何時間量(例如一小時、一天、一週或一個月)投予抑制劑，或反之亦然。
在一些實施態樣中，欲治療的個體為人類或非人類靈長類動物或其他哺乳動物個體。其他示例性個體包括家養動物，諸如狗和貓；家畜，諸如馬、牛、豬、綿羊、山羊和雞；及動物，諸如小鼠、大鼠、天竺鼠及倉鼠。在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：9之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：10之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：65之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：66之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示提供治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含SEQ ID NO：69之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO：70之核苷酸序列，且其中脂質部分係與有義股之核苷酸共軛，由此治療個體的癌症。
在一些實施態樣中，本揭示之方法增加免疫活化基因的表現。在一些實施態樣中，投予本文所述之RNAi寡核苷酸和PD-L1抑制劑增加免疫活化基因的表現。在一些實施態樣中，本文所述之方法增加CD8B1、IL2Rα、TNFRSF9、CCL19、CCL27a、CD40Ig、CXCR5、CD44、STAT4、GZMB、PFR1、FASL和HMGB1中之一或多者的表現。
在一些實施態樣中，本揭示之方法降低免疫抑制基因的表現。在一些實施態樣中，投予本文所述之RNAi寡核苷酸和PD-L1抑制劑降低免疫抑制基因的表現。在一些實施態樣中，本文所述之方法降低CD274、LAG3、TIGIT、PDSD1IG2、CD163、PIK3R5、FOXP3、TGFBR2、IDO1、CD200R1、CCL22、CCL8、CCR9、IL10、IL33、CXCL3、CSF2RD、TNFRSF18、MMP9、LOX12、FGF18和FAP中之一或多者的表現。 癌症
在一些實施態樣中，STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑標靶係用於治療癌症或腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤為原發性腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤為轉移性腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤為難治性腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤為I期、II期、III期或IV期腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤為實體腫瘤。實體腫瘤係指其中癌症形成腫塊的狀況。
在一些實施態樣中，癌症為甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌、頭與頸癌、肝癌、大腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、卵巢癌、肺癌、惡性腫瘤、胚細胞瘤、神經管胚細胞瘤、視網膜胚細胞瘤、肉瘤、脂肪肉瘤、滑膜細胞肉瘤、神經內分泌腫瘤、類癌瘤、胃泌素瘤、胰島細胞癌、間皮瘤、神經鞘瘤、聽神經瘤、腦膜瘤、腺癌、淋巴惡性腫瘤、鱗狀細胞癌、上皮鱗狀細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃臟癌或胃癌、胃腸道癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、膀胱癌、肝腫瘤、轉移性乳癌、大腸癌、直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌或腎臟癌、前列腺癌、女陰癌、肝臟癌、肛門癌、陰莖癌、默克爾細胞癌、睪丸癌、食道癌或膽道腫瘤。在一些實施態樣中，癌症難以抗PD1、抗PDL1及/或抗CTLA4療法治療。在一些實施方案中，癌症為胰臟癌或肺癌。在一些實施態樣中，癌症包含具有免疫抑制腫瘤微環境的腫瘤。在一些實施態樣中，癌症對免疫檢查點療法具有抗性。在一些實施態樣中，癌症對免疫檢查點療法具有部分抗性。在一些實施態樣中，癌症對免疫檢查點療法具有敏感性。
在一些實施態樣中，STAT3寡核苷酸和PD-L1抑制劑縮減腫瘤體積。腫瘤體積係使用熟習本技術領域者已知的方法測量。例如，經提取之腫瘤係使用卡尺以手動測量。其他方法包括成像方法，諸如超音波和MRI。在一些實施態樣中，與未治療之腫瘤相比，寡核苷酸共軛體縮減至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%之腫瘤體積。 STAT3之寡核苷酸抑制劑
在一些態樣中，本揭示尤其提供降低或抑制STAT3表現之寡核苷酸。在一些實施態樣中，在本文抑制STAT3表現之寡核苷酸係靶向STAT3 mRNA。人類STAT3 mRNA之序列(NM_001369512.1)係如以SEQ ID NO：85或NM_139276.3 (SEQ ID NO：1217)所列出。STAT3為習知的癌症療法之已知的標靶。
MDSC之致耐受活性係以致癌性轉錄因子、轉錄訊息轉導及活化子蛋白3 (STAT3)控制(Su等人之Int J. Mol Sci (2018) 19(6):1803)。亦已知STAT3高度表現在跨一系列癌症類型及試管內和活體內臨床前模式中(Huynh等人之NAT. REV. CANCER (2019) 19: 82-96)。STAT3之抑制係通過下游標靶基因的調節而導致腫瘤細胞之選擇性凋亡及腫瘤生長抑制(Wang等人之International Journal of Biological Sciences, 15(3): 668-79 (2019))。由於STAT3促成免疫抑制腫瘤微環境的完整紀錄，使其在免疫腫瘤學中特別受關注。STAT3係藉由通過增加的IFNγ分泌來調升由T細胞表現之抑制性受體及經由其配體(PD-1/PD-L1)的表現而促成免疫抑制腫瘤微環境(Bu等人之Journal of Dental Research, 96(9): 1027-34 (2017))。長期已知抑制抗原呈現細胞(APC)中的STAT3傳訊導致促發抗原特異性CD4+T細胞對其他致耐受性刺激的反應(Cheng等人之Immunity, 19: 425-36 (2003))。另外，在MDSC上的磷酸化之STAT3係藉由通過轉錄控制來調節抑制性組分(諸如精胺酸胺基酸)而直接促成抑制性腫瘤微環境的調節(Vasques-Dunndel等人之J. Clin. Invest., 15(3): 668-79 (2013))。多年以來，已探索幾種方法以治療性地靶向STAT3。儘管直接靶向蛋白質有吸引力，但是真正的標靶為蛋白質-蛋白質相互作用，由於歷史數據顯示多種類別的化合物無法有效地抑制其活性而被舉作為「不可成藥的」標靶的實例(Lau等人之CANCERS (2019) 11(11): 1681；Zou等人之MOL CANCER (2020) 19: 145)。另外，STAT3在跨越幾種組織的廣泛表現已導致對嚴重的中靶毒性的擔憂(Wong等人之Expert Opinion on Investigational Drugs, 26 (8):883-87 (2017), (Kortylewski等人之CANCER IMMUNOL IMMUNOTHER (2017) 66(8): 979-88)。
在一些實施態樣中，STAT3表現的降低可藉由評估與STAT3表現相關聯的細胞或細胞群的一或多種性質或特徵之適當的檢定法或技術(例如使用STAT3表現生物標誌物)或藉由評估直接表示STAT3表現之分子(例如STAT3 mRNA或STAT3蛋白質)的檢定法或技術來測定。在一些實施態樣中，以本文之寡核苷酸降低STAT3表現的程度係藉由比較與寡核苷酸接觸之細胞或細胞群與適當的對照物(例如未與寡核苷酸接觸或與對照寡核苷酸接觸之適當的細胞或細胞群)中的STAT3表現來評估。在一些實施態樣中，在遞送RNAi分子後，mRNA表現至蛋白質之適當的對照水平可為預測定水平或值，使得不需要每次都測量對照水平。預測定的水平或值可採用各種形式。在一些實施態樣中，預測定的水平或值可為單一截止值，諸如中位數或平均值。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸的投予導致細胞或細胞族群中的STAT3表現降低。在一些實施態樣中，當與適當的mRNA對照水平相比時，降低的STAT3或STAT3表現為約1%或更低、約5%或更低、約10%或更低、約15%或更低、約20%或更低、約25%或更低、約30%或更低、約35%或更低、約40%或更低、約45%或更低、約50%或更低、約55%或更低、約60%或更低、約70%或更低、約80%或更低、或約90%或更低。適當的對照水平可為在未與本文之寡核苷酸接觸的細胞或細胞群中的mRNA表現及/或蛋白質轉譯的水平。在一些實施態樣中，根據本文之方法遞送寡核苷酸至細胞之效應係在任何有限的時間段後評鑑。例如，mRNA含量可在寡核苷酸引入細胞後至少約8小時、約12小時、約18小時、約24小時；或至少約1、2、3、4、5、6、7或甚至長達14天於細胞中分析。
在一些實施態樣中，寡核苷酸係以經工程化而在細胞中表現寡核苷酸或包含寡核苷酸的股(例如其有義股和反義股)的轉殖基因形式遞送。在一些實施態樣中，寡核苷酸係使用經工程化以表現任何本文所揭示之寡核苷酸的轉殖基因遞送。轉殖基因可使用病毒載體(例如腺病毒、反轉錄病毒、牛痘病毒、痘病毒、腺相關病毒或單純皰疹病毒)或非病毒載體(例如質體或合成mRNA)來遞送。在一些實施態樣中，轉殖基因可直接注射到個體。 STAT3靶序列
在一些實施態樣中，寡核苷酸係靶向包含STAT3 mRNA之靶序列。在一些實施態樣中，寡核苷酸或其部分、片段或股(例如dsRNA之反義股或引導股)結合或黏著至包含STAT3 mRNA之靶序列，由此抑制STAT3表現。在一些實施態樣中，寡核苷酸係出於抑制活體內STAT3表現的目的而靶向STAT3靶序列。在一些實施態樣中，以靶向STAT3靶序列之寡核苷酸抑制STAT3表現的量或程度係與寡核苷酸的效力互相關聯。在一些實施態樣中，以靶向STAT3靶序列之寡核苷酸抑制STAT3表現的量或程度係與以寡核苷酸治療之患有與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之個體或患者中的治療效益的量或程度互相關聯。
通過編碼STAT3的mRNA之核苷酸序列，包括多種不同物種(例如人類、石蟹獼猴、小鼠和大鼠；參見例如實施例6)之mRNA的檢查及作為試管內和活體內測試的結果(參見例如實施例7和實施例8)，頃發現STAT3 mRNA之特定的核苷酸序列比其他核苷酸序列更適合基於寡核苷酸之抑制且因此用作為本文之寡核苷酸之靶序列。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸(例如dsRNA)之有義股包含STAT3靶序列。在一些實施態樣中，本文所述之dsRNA之有義股的一部分或區域包含STAT3靶序列。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：85之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：1217之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：89至280中任一者之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含以SEQ ID NO：108所列出之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含以SEQ ID NO：140所列出之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含以SEQ ID NO：141所列出之序列或由其所組成。在一些實施態樣中，STAT3 mRNA靶序列包含以SEQ ID NO：147所列出之序列或由其所組成。 STAT3靶向序列
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸係出於靶向細胞中的mRNA及降低或抑制其表現為目的而具有與STAT3 mRNA的互補區域(例如在STAT3 mRNA之靶序列內)。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含具有以互補的(瓦生克立克)鹼基配對結合或黏著至STAT3靶序列的互補區域之STAT3靶向序列(例如dsRNA之反義股或引導股)。靶向序列或互補區域通常係出於抑制STAT3 mRNA表現為目的而具有適合的長度及鹼基含量，能夠使寡核苷酸(或其股)結合或黏著至STAT3 mRNA。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為至少約12、至少約13、至少約14、至少約15、至少約16、至少約17、至少約18、至少約19、至少約20、至少約21、至少約22、至少約23、至少約24、至少約25、至少約26、至少約27、至少約28、至少約29、或至少約30個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為約12至約30 (例如12至30、12至22、15至25、17至21、18至27、19至27、或15至30)個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為約12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為18個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為19個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為20個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為21個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為22個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為23個核苷酸。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域的長度為24個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為18個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為19個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為20個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為21個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為22個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為23個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之序列互補的靶序列或互補區域，且靶向序列或互補區域的長度為24個核苷酸。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含與STAT3靶序列完全互補的靶向序列或互補區域(例如雙股寡核苷酸之反義股或引導股)。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域係與STAT3靶序列部分互補。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與STAT3序列或STAT3完全互補的靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與STAT3序列或STAT3完全部分互補的靶向序列或互補區域。
在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之序列完全互補的靶序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：108、140、141和147所列出之序列完全互補的靶序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之序列部分互補的靶序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：108、140、141和147所列出之序列部分互補的靶序列或互補區域。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含與包含STAT3 mRNA之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為約12至約30個核苷酸(例如12至30、12至28、12至26、12至24、12至20、12至18、12至16、14至22、16至20、18至20或18至19個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與包含STAT3 mRNA之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與包含STAT3 mRNA之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為19個核苷酸。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，視需要地其中核苷酸的連續序列的長度為19個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：108、140、141和147中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為19個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：473至664中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為20個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：492、524、525和531中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中核苷酸的連續序列的長度為20個核苷酸。
在一些實施態樣中，與STAT3或STAT3靶序列的連續核苷酸互補的寡核苷酸之靶向序列或互補區域係跨越反義股的整個長度。在一些實施態樣中，與STAT3或STAT3靶序列的連續核苷酸互補的寡核苷酸之互補區域係跨越反義股的整個長度的一部分。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含與跨越STAT3靶序列或STAT3之核苷酸1至20的連續伸長之核苷酸至少部分(例如完全)互補的互補區域(例如在dsRNA之反義股上)。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)之靶向序列或互補區域係與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補且跨越反義股的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之靶向序列或互補區域係與SEQ ID NO：89至280之核苷酸的連續序列互補且跨反義股的整個長度的一部分。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含與跨越如以SEQ ID NO：473至664中任一者所列出之序列的核苷酸1至19或1至20的連續伸長之核苷酸至少部分(例如完全)互補的互補區域(例如在dsRNA之反義股上)。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含與對應的STAT3靶序列具有一或多個bp失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有多達約1、多達約2、多達約3、多達約4、多達約5個等失配，其先決條件是維持靶向序列或互補區域在適當的雜交條件下結合或黏著至STAT3 mRNA的能力及/或寡核苷酸抑制STAT3表現的能力。另一選擇地，靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有不超過1、不超過2、不超過3、不超過4、或不超過5個失配，其先決條件是維持靶向序列或互補區域在適當的雜交條件下結合或黏著至STAT3 mRNA的能力及/或寡核苷酸抑制STAT3表現的能力。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有1個失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有2個失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有3個失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有4個失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有5個失配之靶向序列或互補區域。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與對應的靶序列具有超過1個失配(例如2、3、4、5或更多個失配)之靶向序列或互補區域，其中失配中至少2個(例如所有)係連續定位(例如2、3、4、5或更多個失配在一排中)，或其中失配係散置在整個靶向序列或互補區域中。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有多達約1、多達約2、多達約3、多達約4、多達約5個等失配。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有不超過1、不超過2、不超過3、不超過4、或不超過5個失配。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：108、140、141和147中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有多達約1、多達約2、多達約3、多達約4、多達約5個等失配。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：108、140、141和147中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，其中靶向序列或互補區域可與對應的STAT3靶序列具有不超過1、不超過2、不超過3、不超過4、或不超過5個失配。 寡核苷酸類型
各種寡核苷酸類型及/或結構可於本文之方法中用於靶向靶序列，包括但不限於RNAi寡核苷酸、反義寡核苷酸、miRNA等。本文或別處所述之寡核苷酸類型中任一者經考慮用作為併入本文之靶向序列的框架。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸係藉由與切丁酶參與之RNA干擾(RNAi)路徑上游或下游銜接來抑制靶序列的表現。例如，已開發出各股具有約19至25個核苷酸大小與至少一個1至5個核苷酸的3’突出物之RNAi寡核苷酸(參見例如美國專利案第8,372,968號)。亦已開發更長的寡核苷酸，其經切丁酶處理以產生活性RNAi產物(參見例如美國專利案第8,883,996號)。進一步的操作產生延伸之dsRNA，其中至少一個股的至少一端延伸至雙股螺旋靶向區域外，其包括其中該等股中之一者包括熱力學穩定的四鹼基環圈結構之結構(參見例如美國專利案第8,513,207號和第8,927,705號，以及國際專利申請公開案第WO 2010/033225號)。此等結構可包括ss延伸物(在分子的一側或兩側)以及ds延伸物。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸係與切丁酶參與(例如切丁酶切割)之RNAi路徑下游銜接。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸為切丁酶受質。在一些實施態樣中，在內源性切丁酶處理後，產生能夠降低標靶mRNA表現之19至23個核苷酸長度的雙股核酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸在有義股的3’端具有突出物(例如具有1、2或3個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，寡核苷酸(例如siRNA)包含21個核苷酸引導股(其為標靶RNA之反義股)及互補的過客股，其中使兩個股黏著以形成19個bp雙股螺旋及2個在任一或兩個3’端之核苷酸突出物。較長的寡核苷酸設計亦可行，其包括具有23個核苷酸之引導股及21個核苷酸之過客股之寡核苷酸，其中在分子右側(過客股之3’端/引導股之5’端)有鈍端及在分子左側(過客股之5’端/引導股之3’端)有兩個核苷酸3’-引導股突出物。在此等分子中，有21個bp雙股螺旋區域。參見例如美國專利案第9,012,138號、第9,012,621號和第9,193,753號。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，兩者的長度範圍為約17至26 (例如17至26、20至25、或21至23)個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，兩者的長度範圍為約17至36 (例如17至36、20至25或21至23)個核苷酸。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸包含19至30個核苷酸長度之反義股及19至50核苷酸長度之有義股，其中反義股及有義股為單獨的股，該等形成在反義股的3’末端具有1至4個核苷酸之突出物的不對稱雙股螺旋區域。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，兩者的長度範圍為約19至22個核苷酸。在一些實施態樣中，有義股及反義股具有相等的長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股及反義股，使得在有義股或反義股，或有義股及反義股兩者上有3’突出物。在一些實施態樣中，關於具有長度範圍皆為約21至23個核苷酸的有義股及反義股之寡核苷酸，在有義股、反義股或有義股及反義股兩者上之3’突出物的長度為1或2個核苷酸。在一些實施態樣中，寡核苷酸具有22個核苷酸之引導股及20個核苷酸之過客股，其中在分子右側(過客股之3’端/引導股之5’端)有鈍端及在分子左側(過客股之5’端/引導股之3’端)有兩個核苷酸3’-引導股突出物。在此等分子中，有20個bp雙股螺旋區域。
以本文之組成物及方法使用之其他寡核苷酸設計包括：16-mer siRNA (參見例如Nucleic Acids in Chemistry and Biology. Blackburn (ed.), Royal Society of Chemistry, 2006)、shRNA (例如具有19個bp或更短的主幹；參見例如Moore等人之(2010) Methods Mol. Biol. 629:141-58)、鈍端siRNA (例如長度為19個bp；參見例如Kraynack and Baker (2006) RNA 12:163-76)、不對稱siRNA (aiRNA；參見例如Sun等人之(2008) Nat. Biotechnol. 26:1379-82)、更短的不對稱雙股螺旋siRNA (參見例如Chang等人之(2009) Mol. Ther. 17:725-32)、叉體siRNA (參見例如Hohjoh (2004) FEBS Lett. 557:193-98)、ss siRNA (Elsner (2012) Nat. Biotechnol. 30:1063)、啞鈴狀圓形(dumbbell-shaped circular) siRNA (參見例如Abe等人之(2007) J. Am. Chem. Soc. 129:15108-09)及內部分段之小型干擾RNA (siRNA；參見例如Bramsen等人之(2007) Nucleic Acids Res. 35:5886-97)。可在一些實施態樣中用於降低或抑制STAT3表現之寡核苷酸結構的其他非限制性實例為微小RNA (miRNA)、短髮夾 RNA (shRNA)和短siRNA (參見例如Hamilton等人之(2002) EMBO J. 21:4671-79；亦參見美國專利申請公開案第2009/0099115號)。
又在一些實施態樣中，用於降低或抑制本文之靶序列表現的寡核苷酸為ss。此等結構可包括但不限於ss RNAi分子。最近的努力已證明ss RNAi分子之活性(參見例如Matsui等人之(2016) Mol. Ther. 24:946-55)。然而，在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸為反義寡核苷酸(ASO)。反義寡核苷酸為具有核鹼基序列之ss寡核苷酸，當以5’至3’方向書寫時，該序列包含特定核酸之靶向分段的反向互補，且經適當地修飾(例如作為間隙體(gapmer))以誘導細胞中的其標靶RNA經RNaseH調介之切割或(例如作為混合聚體(mixmer))以抑制細胞中的標靶mRNA轉譯。本文使用之ASO可以本技術中已知的任何適合的方式修飾，包括例如美國專利案第9,567,587號中所示(包括例如長度、核鹼基(嘧啶、嘌呤)之糖部分和核鹼基之雜環部分的變化)。再者，幾十年來已使用ASO降低特定的靶基因表現(參見例如Bennett等人之(2017) Annu. Rev. Pharmacol. 57:81-105)。
在一些實施態樣中，反義寡核苷酸與標靶mRNA共享互補區域。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為15至50個核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為15至25個核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為22個核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為至少15個核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為至少19個核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸的長度為至少20個連續核苷酸。在一些實施態樣中，反義寡核苷酸與靶序列相差1、2或3個核苷酸。 雙股寡核苷酸
在一些實施態樣中，本揭示提供用於靶向及抑制靶序列表現(例如經由RNAi路徑)之雙股dsRNA，其包含有義股(在本文亦稱為過客股)及反義股(在本文亦稱為引導股)。在一些實施態樣中，有義股及反義股為單獨的股且未經共價鍵聯。在一些實施態樣中，有義股及反義股係經共價鍵聯。在一些實施態樣中，有義股及反義股形成雙股螺旋區域，其中有義股及反義股或其部分係以互補方式(例如藉由瓦生克立克鹼基配對)彼此結合。
在一些實施態樣中，有義股具有第一區(R1)及第二區(R2)，其中R2包含第一次區(S1)、環圈(L)(諸如四鹼基環圈(四L)或三鹼基環圈(三L))及第二次區(S2)，其中L、四L或三L係位於S1與S2之間，且其中S1及S2形成第二雙股螺旋(D2)。D2可具有各種長度。在一些實施態樣中，D2的長度為約1至6個bp。在一些實施態樣中，D2的長度為2至6、3至6、4至6、5至6、1至5、2至5、3至5、或4至5個bp。在一些實施態樣中，D2的長度為1、2、3、4、5、或6個bp。在一些實施態樣中，D2長度為6個bp。
在一些實施態樣中，有義股之R1及反義股形成第一雙股螺旋(D1)。在一些實施態樣中，D1的長度為至少約15 (例如至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20或至少21)個核苷酸。在一些實施態樣中，D1的長度範圍為約12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、15至22、18至22、18至25、18至27、18至30、或21至30個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，D1的長度為至少12個核苷酸(例如至少12、15、20、25、或至少30核苷酸長度)。在一些實施態樣中，D1的長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30個核苷酸。在一些實施態樣中，D1的長度為20個核苷酸長度。在一些實施態樣中，包含有義股及反義股之D1不跨越有義股及/或反義股的整個長度。在一些實施態樣中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股或反義股或兩者的整個長度。在特定的實施態樣中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股及反義股兩者的整個長度。
應理解在一些實施態樣中，在序列表中所呈示之序列可在說明寡核苷酸或其他核酸之結構時提及。在此等實施態樣中，當與指定序列相比時，實際的寡核苷酸或其他核酸可具有一或多個替代的核苷酸(例如DNA核苷酸之RNA對應體或RNA核苷酸之DNA對應體)、及/或一或多個經修飾之核苷酸、及/或一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯、及/或一或多個其他修飾，同時保留與指定序列基本上相同或相似的互補性質。
在一些實施態樣中，本文之雙股RNA (dsRNA)包含25-核苷酸有義股及27-核苷酸反義股，當以切丁酶起作用時，其得到併入成熟RISC中之反義股。在一些實施態樣中，dsRNA之有義股比27個核苷酸更長(例如28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40個核苷酸)。在一些實施態樣中，dsRNA之有義股比27個核苷酸更長(例如28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50個核苷酸)。在一些實施態樣中，dsRNA之有義股比25個核苷酸更長(例如26、27、28、29、或30個核苷酸)。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有一個5’端，當與其他5’端相比時，該5’端在熱力學上較不穩定。在一些實施態樣中，提供不對稱寡核苷酸，其包括在有義股的3’端之鈍端及在反義股的3’端之3’-突出物。在一些實施態樣中，在反義股上之3’-突出物的長度為約1至8個核苷酸(例如1、2、3、4、5、6、7、或8個核苷酸長度)。RNAi之寡核苷酸通常在反義(引導)股之3’端上具有兩個核苷酸突出物。然而，其他突出物為可能的。在一些實施態樣中，突出物為3’-突出物，其包含介於1與6個核苷酸之間的長度，視需要為1至5、1至4、1至3、1至2、2至6、2至5、2至4、2至3、3至6、3至5、3至4、4至6、4至5、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5、或6個核苷酸。然而，在一些實施態樣中，突出物為5’-突出物，其包含介於1與6個核苷酸之間的長度，視需要為1至5、1至4、1至3、1至2、2至6、2至5、2至4、2至3、3至6、3至5、3至4、4至6、4至5、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5、或6個核苷酸。
在一些實施態樣中，在反義股的3’端上之兩個末端核苷酸係經修飾。在一些實施態樣中，在反義股的3’端上之兩個末端核苷酸係與標靶mRNA互補。在一些實施態樣中，在反義股的3’端上之兩個末端核苷酸不與標靶mRNA互補。在一些實施態樣中，在本文之寡核苷酸之反義股的3’端上之兩個末端核苷酸包含未配對之GG。在一些實施態樣中，在本文之寡核苷酸之反義股的3’端上之兩個(2)末端核苷酸不與標靶mRNA互補。在一些實施態樣中，在切口型四鹼基環圈結構中之寡核苷酸的各3’端上之兩個末端核苷酸為GG。在一些實施態樣中，在本文之寡核苷酸的各3’端上之兩個(2)末端GG核苷酸中之一或兩者不與標靶mRNA互補。在寡核苷酸的各3’端上之兩個末端GG核苷酸中之一或兩者通常不與標靶互補。
在一些實施態樣中，在介於有義股與反義股之間有一或多個(例如1、2、3、4、或5個)失配。若在介於有義股與反義股之間有超過一個失配，則彼等可連續定位(例如2、3或更多個在一排中)或散置於整個互補區域內。在一些實施態樣中，有義股的3’端含有一或多個失配。在一個實施態樣中，兩個失配係在有義股的3’端併入。在一些實施態樣中，在寡核苷酸之有義股的3’端之鹼基失配或分段去穩定化改進在RNAi中的合成雙股螺旋之效力，有可能通過以切丁酶促成處理。 a. 反義股
在一些實施態樣中，dsRNA包含長達約40個核苷酸長度之反義股(例如長達40、長達35、長達30、長達27、長達25、長達21、長達19、長達17、或長達12個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含長達約50個核苷酸長度之反義股(例如長達50、長達40、長達35、長達30、長達27、長達25、長達21、長達19、長達17、或長達12個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，寡核苷酸可具有至少約12個核苷酸長度之反義股(例如至少12、至少15、至少19、至少21、至少22、至少25、至少27、至少30、至少35、或至少38個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，寡核苷酸可具有約12至約40 (例如12至40、12至36、12至32、12至28、15至40、15至36、15至32、15至28、17至22、17至25、19至27、19至30、20至40、22至40、25至40、或32至40)個核苷酸長度範圍之反義股。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股。在一些實施態樣中，寡核苷酸可具有12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40個核苷酸長度之反義股。
在一些實施態樣中，寡核苷酸之反義股可稱為「引導股」。例如，若反義股可與經RNA誘導之靜默複合物(RISC)銜接且結合至 Argonaute蛋白(諸如Ago2)或與一或多個相似因子銜接或結合，且指引標靶基因靜默，則反義股可稱為引導股。在一些實施態樣中，與引導股互補的有義股可稱為「過客股」。
在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：281至472中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：281至472中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：665至856中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：665至856中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：947至1036中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：947至1036中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：10、38、66和70中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：10、38、66和70中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：281至472中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：281至472中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：952、965、966和1010中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：952、965、966和1010中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：991、1000、989、986、982、980和979中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：991、1000、989、986、982、980和979中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：1030、1027和1029中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：1030、1027和1029中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：1005、1014、1003和1010中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：1005、1014、1003和1010中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。
b. 有義股
在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含如以SEQ ID NO：89至280中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：89至280中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含如以SEQ ID NO：473至664中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：473至664中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸包含如以SEQ ID NO：857至946中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：857至946中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸包含如以SEQ ID NO：9、37、65和69中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：9、37、65和69中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸包含如以SEQ ID NO：862、875、876和920中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：862、875、876和920中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3 mRNA及抑制STAT3表現的本文所揭示之寡核苷酸包含如以SEQ ID NO：901、910、899、896、892、890和889中任一者所列出之有義股序列。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有有義股，其包含如以SEQ ID NO：901、910、899、896、892、890和889中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：940、937和939中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：940、937和939中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。在一些實施態樣中，用於靶向STAT3的本文所揭示之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：915、924、913和920中任一者所列出之序列或由該序列所組成。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含反義股，其包含如以SEQ ID NO：915、924、913和920中任一者所列出之序列的至少約12 (例如至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、或至少23)個連續核苷酸。
在一些實施態樣中，寡核苷酸包含長達約40個核苷酸長度(例如長達40、長達36、長達30、長達27、長達25、長達21、長達19、長達17、或長達12個核苷酸長度)之有義股(或過客股)。在一些實施態樣中，寡核苷酸 可具有至少約12個核苷酸長度(例如至少12、至少15、至少19、至少21、至少25、至少27、至少30、至少36、或至少38個核苷酸長度)之有義股。在一些實施態樣中，寡核苷酸可具有約12至約40 (例如12至40、12至36、12至32、12至28、15至40、15至36、15至32、15至28、17至21、17至25、19至27、19至30、20至40、22至40、25至40、或32至40)個核苷酸長度範圍之義股。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含15至50個核苷酸長度之有義股。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含18至36個核苷酸長度之有義股。在一些實施態樣中，寡核苷酸可具有12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40個核苷酸長度之有義股。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50個核苷酸長度之有義股。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含36個核苷酸長度之有義股。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含有義股，其包含在有義股的3’端之主幹-環圈結構。在一些實施態樣中，主幹-環圈係藉由股內鹼基配對來形成。在一些實施態樣中，有義股包含在其5’端之主幹-環圈結構。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含2個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含3個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含4個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含5核苷酸長度。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含6個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含7個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含8個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含9核苷酸長度。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含10個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含11個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含12個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含13個核苷酸長度之雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈之主幹包含14個核苷酸長度之雙股螺旋。
在一些實施態樣中，主幹-環圈提供免於降解(例如酶降解)的寡核苷酸保護、促成或改進靶向及/或遞送至靶細胞、組織或器官(例如肝臟)、或兩者。例如，在一些實施態樣中，主幹-環圈之環圈係由包含一或多個修飾之核苷酸所組成，該修飾促成、改進或增加靶向標靶、標靶基因表現之抑制、及/或遞送、攝取及/或滲透至靶細胞、組織或器官(例如肝臟)、或其組合中。在一些實施態樣中，主幹-環圈本身或主幹-環圈之修飾不影響或不實質地影響寡核苷酸之固有的基因表現抑制活性，但是促成、改進或增加寡核苷酸對靶細胞、組織或器官的穩定性(例如提供免於降解的保護)、及/或遞送、攝取及/或滲透。在特定的實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股，其包含(例如在其3’端)如以下列出之主幹-環圈：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成在介於S1與S2之間長達約10個核苷酸長度(例如3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸長度)的鍵聯之核苷酸的單股環圈。在一些實施態樣中，環圈(L)為3個核苷酸長度(在本文稱為「三鹼基環圈」)。在一些實施態樣中，環圈(L)為4個核苷酸長度(在本文稱為「四鹼基環圈」)。在一些實施態樣中，環圈(L)為5個核苷酸長度。在一些實施態樣中，環圈(L)為6個核苷酸長度。在一些實施態樣中，環圈(L)為7個核苷酸長度。在一些實施態樣中，環圈(L)為8個核苷酸長度。在一些實施態樣中，環圈(L)為9個核苷酸長度。在一些實施態樣中，環圈(L)為10個核苷酸長度。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，且寡核苷酸包含有義股，其包含(例如在其3’端)如以下列出之主幹-環圈：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成在介於S1與S2之間長達約10個核苷酸長度(例如3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸長度)的單股環圈。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO：89至280中任一者之核苷酸的連續序列互補的靶向序列或互補區域，且寡核苷酸包含有義股，其包含(例如在其3’端)以如下列出之主幹-環圈：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成在介於S1與S2之間的4個核苷酸長度的單股環圈。
在一些實施態樣中，四鹼基環圈包含序列5’-GAAA-3’。在一些實施態樣中，主幹-環圈包含序列5’-GCAGCCGAAAGGCUGC-3’(SEQ ID NO：86)。
在一些實施態樣中，有義股包含在其3’端之主幹-環圈結構。在一些實施態樣中，有義股包含在其5’端之主幹-環圈結構。在一些實施態樣中，主幹為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14個bp長度的雙股螺旋。在一些實施態樣中，主幹-環圈提供免於降解(例如酶降解)的分子保護及促成遞送至靶細胞之靶向特徵。例如，在一些實施態樣中，環圈提供經添加之核苷酸，於其上可進行修飾而不實質地影響寡核苷酸之基因表現抑制活性。在特定的實施態樣中，本文之寡核苷酸中的有義股包含(例如在其3’端)如以下列出之主幹-環圈：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成在介於S1與S2之間長達約10個核苷酸長度(例如3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸長度)的環圈。圖1A描述此等寡核苷酸的非限制性實例。
在一些實施態樣中，具有如本文所述之S1-L-S2結構的主幹-環圈之環圈(L)為三鹼基環圈。在一些實施態樣中，三鹼基環圈包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、經修飾之核苷酸、配體(例如遞送配體)、及其組合。
在一些實施態樣中，主幹-環圈之環圈為四鹼基環圈(例如在切口型四鹼基環圈結構內)。四鹼基環圈可含有核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、經修飾之核苷酸、及其組合。四鹼基環圈通常具有4至5個核苷酸。 雙股螺旋長度
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為至少12 (例如至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、或至少21)個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為12、13、14、15、16、17、18、19、29、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為12個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為13個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為14個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為15個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為16個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為17個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為18個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為19個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為20個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為21個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為22個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為23個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為24個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為25個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為26個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為27個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為28個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為29個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度為30個核苷酸。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋不跨越有義股及/或反義股的整個長度。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股或反義股的整個長度。在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：861和951； (b) 分別為SEQ ID NO：857和947； (c) 分別為SEQ ID NO：858和948； (d) 分別為SEQ ID NO：859和949； (e) 分別為SEQ ID NO：860和950； (f) 分別為SEQ ID NO：862和952； (g) 分別為SEQ ID NO：863和953； (h) 分別為SEQ ID NO：864和954； (i) 分別為SEQ ID NO：865和955； (j) 分別為SEQ ID NO：866和956； (k) 分別為SEQ ID NO：867和957； (l) 分別為SEQ ID NO：868和958； (m) 分別為SEQ ID NO：869和959； (n) 分別為SEQ ID NO：870和960； (o) 分別為SEQ ID NO：871和961； (p) 分別為SEQ ID NO：872和962； (q) 分別為SEQ ID NO：873和963； (r) 分別為SEQ ID NO：874和964； (s) 分別為SEQ ID NO：875和965； (t) 分別為SEQ ID NO：876和966； (u) 分別為SEQ ID NO：877和967； (v) 分別為SEQ ID NO：878和968； (w) 分別為SEQ ID NO：879和969； (x) 分別為SEQ ID NO：880和970； (y) 分別為SEQ ID NO：881和971； (z) 分別為SEQ ID NO：882和972； (aa) 分別為SEQ ID NO：883和973； (bb) 分別為SEQ ID NO：884和974； (cc) 分別為SEQ ID NO：885和975； (dd) 分別為SEQ ID NO：886和976； (ee) 分別為SEQ ID NO：887和977； (ff) 分別為SEQ ID NO：888和978； (gg) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (hh) 分別為SEQ ID NO：896和986；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：857和947； (b) 分別為SEQ ID NO：858和948； (c) 分別為SEQ ID NO：859和949； (d) 分別為SEQ ID NO：860和950； (e) 分別為SEQ ID NO：862和952； (f) 分別為SEQ ID NO：867和957； (g) 分別為SEQ ID NO：875和965；及 (h) 分別為SEQ ID NO：876和966， 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70。 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。
在一些實施態樣中，在有義股與反義股之間的雙股螺旋跨越有義股及反義股兩者的整個長度。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中在有義股與反義股之間所形成的雙股螺旋的長度範圍為12至30個核苷酸(例如12至30、12至27、12至22、15至25、18至30、18至22、18至25、18至27、18至30、19至30、或21至30個核苷酸長度)。 寡核苷酸末端
在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含有義股及反義股，其中任一股或兩股的末端包含鈍端。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等股為單獨的股，該等形成在反義股的3’末端具有突出物的不對稱雙股螺旋區域。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中任一股或兩股的末端包含突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，包含突出物的一或多個核苷酸為未配對之核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股的3’末端及反義股的5’末端包含鈍端。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股的5’末端及反義股的3’末端包含鈍端。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中任一股或兩股的3’末端包含3’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含3’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中反義股包含3’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股兩者包含3’突出物，其包含一或多個核苷酸。
在一些實施態樣中，3’突出物的長度為約一(1)至二十(20)個核苷酸(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或約20個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為約一(1)至十九(19)、一(1)至十八(18)、一(1)至十七(17)、一(1)至十六(16)、一(1)至十五(15)、一(1)至十四(14)、一(1)至十三(13)、一(1)至十二(12)、一(1)至十一(11)、一(1)至十(10)、一(1)至九(9)、一(1)至八(8)、一(1)至七(7)、一(1)至六(6)、一(1)至五(5)、一(1)至四(4)、一(1)至三(3)、或約一(1)至兩(2)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為(1)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為兩(2)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為三(3)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為四(4)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為五(5)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為六(6)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為七(7)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為八(8)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為九(9)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十(10)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十一(11)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十二(12)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十三(13)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十四(14)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十五(15)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十六(16)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十七(17)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十八(18)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為十九(19)個核苷酸。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為二十(20)個核苷酸。
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中任一股或兩股的5’末端包含5’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股包含5’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中反義股包含5’突出物，其包含一或多個核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，其中有義股及反義股兩者包含5’突出物，其包含一或多個核苷酸。
在一些實施態樣中，5’突出物的長度為約一(1)至二十(20)個核苷酸(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或約20個核苷酸長度)。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為約一(1)至十九(19)、一(1)至十八(18)、一(1)至十七(17)、一(1)至十六(16)、一(1)至十五(15)、一(1)至十四(14)、一(1)至十三(13)、一(1)至十二(12)、一(1)至十一(11)、一(1)至十(10)、一(1)至九(9)、一(1)至八(8)、一(1)至七(7)、一(1)至六(6)、一(1)至五(5)、一(1)至四(4)、一(1)至三(3)、或約一(1)至兩(2)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為一(1)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為兩(2)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為三(3)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為四(4)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為五(5)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為六(6)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為七(7)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為八(8)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為九(9)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十(10)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十一(11)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十二(12)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十三(13)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十四(14)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十五(15)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十六(16)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十七(17)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十八(18)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為十九(19)個核苷酸。在一些實施態樣中，5’突出物的長度為二十(20)個核苷酸。
在一些實施態樣中，包含有義股及/或反義股的3’末端或5’末端之一或多個(例如2、3、4、5、或更多個)核苷酸經修飾。例如，在一些實施態樣中，反義股的3’末端之一或兩個末端核苷酸經修飾。在一些實施態樣中，反義股的3’末端之最後一個核苷酸經修飾，使得其包含2’修飾或其包含2’-O-甲氧基乙基。在一些實施態樣中，在反義股的3’末端之最後一或兩個末端核苷酸係與標靶互補。在一些實施態樣中，在反義股的3’末端之最後一或兩個核苷酸不與標靶互補。
在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含有義股及反義股，其中有義股的3’末端包含本文所述之主幹-環圈及反義股的3’末端包含本文所述之3’突出物。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含有義股及反義股，該等形成本文所述之切口型四鹼基環圈結構，其中有義股的3’末端包含主幹-環圈，其中環圈為本文所述之四鹼基環圈，且其中反義股的3’末端包含本文所述之3’突出物。在一些實施態樣中，3’突出物的長度為兩(2)個核苷酸。在一些實施態樣中，包含3’突出物之兩(2)個核苷酸皆包含鳥嘌呤(G)核鹼基。包含反義股的3’突出物之核苷酸中之一或兩者通常與標靶mRNA不互補。 寡核苷酸修飾 a. 糖修飾
在一些實施態樣中，經修飾之糖(在本文亦稱為糖類似物)包括經修飾之去氧核糖或核糖部分，其中例如一或多個修飾出現在糖的2’、3’、4’、及/或5’碳位置上。在一些實施態樣中，經修飾之糖亦可包括非天然替代的碳結構，諸如存在於鎖核酸(「LNA」；參見例如Koshkin等人之(1998) Tetrahedon 54:3607-3630)、未鎖核酸(「UNA」；參見例如Snead等人之(2013) Mol. Ther-Nucl. Acids 2:e103)及橋連核酸(「BNA」；參見例如Imanishi and Obika (2002) Chem Commun. (Camb) 21:1653-1659)中。
在一些實施態樣中，在糖中之核苷酸修飾包含2’-修飾。在一些實施態樣中，2’-修飾可為2’-O-炔丙基、2’-O-丙胺、2’-胺基、2’-乙基、2’-氟(2’-F)、2’-胺乙基(EA)、2’-O-甲基(2’-OMe)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基] (2’-O-NMA)或2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸(2’-FANA)。在一些實施態樣中，修飾為2’-F、2’-OMe或2’-MOE。在一些實施態樣中，在糖中之修飾包含糖環之修飾，其可包含糖環的一或多個碳之修飾。例如，核苷酸的糖之修飾可包含將糖之2’-氧鍵聯至糖之1’-碳或4’-碳，或將2’-氧經由伸乙基或亞甲基橋鍵聯至1’-碳或4’-碳。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸具有缺乏2’-碳至3’-碳鍵之非環糖。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸具有硫醇基團，例如在糖之4’位置。
在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1、至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45、至少50、至少55、至少60、或更多個)。在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1、至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、或更多個)。在一些實施態樣中，寡核苷酸之反義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1、至少5、至少10、至少15、至少20、或更多個)。
在一些實施態樣中，寡核苷酸之有義股的所有核苷酸經修飾。在一些實施態樣中，寡核苷酸之反義股的所有核苷酸經修飾。在一些實施態樣中，寡核苷酸的所有核苷酸(亦即有義股及反義股兩者)經修飾。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸包含2’-修飾(例如2’-F或2’-OMe、2’-MOE和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸)。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸包含2’-修飾(例如2’-F或2’-OMe)。
在一些實施態樣中，本揭示提供具有不同的修飾式樣之寡核苷酸。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含具有如實施例和序列表中所列出之修飾式樣的有義股及具有如實施例和序列表中所列出之修飾式樣的反義股。
在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含具有經2’-F修飾之核苷酸的反義股。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含具有經2’-F及2’-OMe修飾之核苷酸的反義股。在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸包含具有經2’-F修飾之核苷酸的有義股。在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸包含具有經2’-F及2’-OMe修飾之核苷酸的有義股。
在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸包含有義股，該有義股的約10至15%、10%、11%、12%、13%、14%、或15%之核苷酸包含2’-氟修飾。在一些實施態樣中，有義股的約11%之核苷酸包含2-氟修飾。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸包含反義股，該反義股的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、或35%之核苷酸包含2’-氟修飾。在一些實施態樣中，反義股的約32%之核苷酸包含2’-氟修飾。在一些實施態樣中，寡核苷酸具有核苷酸，該核苷酸的約15-25%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、或25%包含2’-氟修飾。在一些實施態樣中，dsRNAi寡核苷酸的約19%之核苷酸包含2’-氟修飾。
在一些實施態樣中，經修飾之寡核苷酸包含具有以圖1A或實施例7所列出之修飾式樣的有義股序列及具有以圖1A或實施例7所列出之修飾式樣的反義股。在一些實施態樣中，該等寡核苷酸之有義股的位置8、9、10、或11中之一或多者經2’-F基團修飾。在其他的實施態樣中，該等寡核苷酸之有義股的位置1至7和12至20上的核苷酸之各者的糖部分經2’-OMe修飾。
在一些實施態樣中，反義股具有3個在2’-位置上的糖部分經2’-F修飾之核苷酸。在一些實施態樣中，在反義股的位置2、5和14上的糖部分及視需要地至多3個在反義股的位置1、3、7和10上的核苷酸經2’-F修飾。在一些實施態樣中，在反義股的位置2、5和14上的糖部分及視需要地至多3個在反義股的位置3、4、7和10上的核苷酸經2’-F修飾。在其他的實施態樣中，在反義股的位置2、5和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在其他的實施態樣中，在反義股的位置1、2、5和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在其他的實施態樣中，在反義股的位置2、4、5和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在又其他的實施態樣中，在反義股的位置1、2、3、5、7和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在其他的實施態樣中，在反義股的位置2、3、4、5、7和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在又另一實施態樣中，在反義股的位置1、2、3、5、10和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在其他的實施態樣中，在反義股的位置2、3、4、5、10和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在另一實施態樣中，在反義股的位置2、3、5、7、10和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。在又另一實施態樣中，在反義股的位置2、3、4、5、7、10和14之每一位置上的糖部分經2’-F修飾。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、或位置22上的糖部分經2’-F修飾之反義股。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、或位置22上的糖部分經2’-OMe修飾之反義股。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、或位置22上的糖部分經選自由下列所組成之群組的修飾物修飾之反義股：2’-O-炔丙基、2’-O-丙胺、2’-胺基、2’-乙基、2’-胺乙基(EA)、2’-O-甲基(2’-OMe)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基](2’-O-NMA)和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸(2’-FANA)。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置8至11上的糖部分經2’-F修飾之有義股。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置3、8、9、10、12、13和17上的糖部分經2’-F修飾之有義股。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1至7和12至17、或12至20上的糖部分經2’OMe修飾之有義股。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1至7、12至27和31至36上的糖部分經2’OMe修飾之有義股。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在有義股的位置1至7和12至17、或12至20上之每一核苷酸的糖部分經選自由下列所組成之群組的修飾物修飾之有義股：2’-O-炔丙基、2’-O-丙胺、2’-胺基、2’-乙基、2’-胺乙基(EA)、2’-O-甲基(2’-OMe)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基](2’-O-NMA)和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸(2’-FANA)。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1至2、4至7、11、14至16和18至20上的糖部分經2’OMe修飾之有義股。在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在有義股的位置1至2、4至7、11、14至16和18至20上之每一核苷酸的糖部分經選自由下列所組成之群組的修飾物修飾之有義股：2’-O-炔丙基、2’-O-丙胺、2’-胺基、2’-乙基、2’-胺乙基(EA)、2’-O-甲基(2’-OMe)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基] (2’-O-NMA)和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸(2’-FANA)。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35、或位置36上的糖部分經2’-F修飾之有義股。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35、或位置36上的糖部分經2’-OMe修飾之有義股。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含具有在位置1、位置2、位置3、位置4、位置5、位置6、位置7、位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15、位置16、位置17、位置18、位置19、位置20、位置21、位置22、位置23、位置24、位置25、位置26、位置27、位置28、位置29、位置30、位置31、位置32、位置33、位置34、位置35、或位置36上的糖部分經選自由下列所組成之群組的修飾物修飾之有義股：2’-O-炔丙基、2’-O-丙胺、2’-胺基、2’-乙基、2’-胺乙基(EA)、2’-O-甲基(2’-OMe)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基] (2’-O-NMA)和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸(2’-FANA)。 b. 5’末端磷酸酯
在一些實施態樣中，寡核苷酸之5’末端磷酸酯基團增強與Ago2之相互作用。然而，包含5’-磷酸酯基團之寡核苷酸可易感受經由磷酸酶或其他酶之降解，該降解可限制其活體內生物可利用性。在一些實施態樣中，寡核苷酸包括抵抗此降解之5’磷酸酯的類似物。在一些實施態樣中，磷酸酯類似物可為氧甲基膦酸酯, 乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯。在特定的實施態樣中，寡核苷酸股之1’端附接至模擬天然5’-磷酸酯基團之靜電及空間性質的化學部分(「磷酸酯模擬物」)。
在一些實施態樣中，寡核苷酸具有在糖的4’-碳位置上之磷酸酯類似物(稱為「4’-磷酸酯類似物」)。參見例如國際專利申請公開案第WO 2018/045317號。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含在5’末端核苷酸上的4’-磷酸酯類似物。在一些實施態樣中，磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯(其中氧甲基之氧原子結合至糖部分(例如在其4’-碳上))或其類似物。在其他的實施態樣中，4’-磷酸酯類似物為硫甲基膦酸酯或胺基甲基膦酸酯(其中硫甲基之硫原子或胺基甲基之氮原子結合至糖部分的4’-碳)或其類似物。在特定的實施態樣中，4’-磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯。在一些實施態樣中，氧甲基膦酸酯係以式-O-CH 2-PO(OH) 2或-O-CH 2-PO(OR) 2表示，其中R獨立地選自H、CH 3、烷基、CH 2CH 2CN、CH 2OCOC(CH 3) 3、CH 2OCH 2CH 2Si(CH 3) 3或保護基。在特定的實施態樣中，烷基為CH 2CH 3。更典型地，R獨立地選自H、CH 3或CH 2CH 3。
在一些實施態樣中，本文所提供之寡核苷酸包含反義股，其包含在5’末端核苷酸上的4’-磷酸酯類似物，其中5’末端核苷酸包含以下結構(Chem 1)： 4’-O-單甲基膦酸酯-2’-O-甲基尿苷硫代磷酸酯[Me膦酸酯-4O-mUs]。 Chem 1 c. 經修飾之核苷酸間鍵聯
在一些實施態樣中，寡核苷酸可包含經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施態樣中，磷酸酯修飾或取代可得到包含至少約1個(例如至少1、至少2、至少3、或至少5個)經修飾之核苷酸間鍵聯的寡核苷酸。在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸中任一者包含約1至約10個(例如1至10、2至8、4至6、3至10、5至10、1至5、1至3、或1至2個)經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸中任一者包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個經修飾之核苷酸間鍵聯。
經修飾之核苷酸間鍵聯可為二硫代磷酸酯鍵聯、4’-O-亞甲基膦酸酯鍵聯、硫代磷酸酯鍵聯、磷酸三酯鍵聯、硫羰烷基(thionoalkyl)膦酸酯鍵聯、硫代烷基磷酸三酯鍵聯、亞磷醯胺酸酯鍵聯、膦酸酯鍵聯或硼烷磷酸酯(boranophosphate)鍵聯。在一些實施態樣中，如本文所揭示之寡核苷酸中任一者之至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施態樣中，如本文所揭示之寡核苷酸中任一者之至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為4’-O-亞甲基膦酸酯鍵聯。
在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸具有在有義股的位置1與2、反義股的位置1與2、反義股的位置2與3、反義股的位置3與4、反義股的位置20與21、及反義股的位置21與22中之一或多者之間的硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸具有在有義股的位置1與2、反義股的位置1與2、反義股的位置2與3、反義股的位置20與21、及反義股的位置21與22各者之間的硫代磷酸酯鍵聯。 d. 鹼基修飾
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸具有一或多個經修飾之核鹼基。在一些實施態樣中，經修飾之核鹼基(在本文亦稱為鹼基類似物)係在核苷酸糖部分之1’位置上鍵聯。在特定的實施態樣中，經修飾之核鹼基為含氮鹼基。在特定的實施態樣中，經修飾之核鹼基不含有氮原子。參見例如美國專利申請公開案第2008/0274462號。在一些實施態樣中，經修飾之核苷酸包含普適性鹼基。然而，在特定的實施態樣中，經修飾之核苷酸不含有核鹼基(無鹼基)。
在一些實施態樣中，普適性鹼基為位於經修飾之核苷酸中的核苷酸糖部分之1’位置上或核苷酸糖部分取代中的等效位置上之雜環部分，當存在於雙股螺旋中時，其可與超過一種類型的鹼基相反定位而不實質地改變雙股螺旋之結構。在一些實施態樣中，與標靶核酸完全互補的參考用單股核酸(例如寡核苷酸)相比，含有普適性鹼基之單股核酸係與標靶核酸形成雙股螺旋，該雙股螺旋具有比以互補的核酸所形成之雙股螺旋更低的T m。然而，在一些實施態樣中，當與其中普適性鹼基已經鹼基置換以產生單一失配之參考用單股核酸相比時，含有普適性鹼基之單股核酸係與標靶核酸形成雙股螺旋，該雙股螺旋具有比以包含失配鹼基的核酸所形成之雙股螺旋更高的T m。
普適性結合核苷酸的非限制性實例包括但不限於肌苷、1-β-D-呋喃核糖基-5-硝基吲哚及/或1-β-D-呋喃核糖基-3-硝基吡咯(參見美國專利申請公開案第2007/ 0254362號；Van Aerschot等人之(1995) Nucleic Acids Res .23:4363-4370；Loakes等人之(1995) Nucleic Acids Res .23:2361-66；及Loakes and Brown (1994) Nucleic Acids Res .22:4039-43)。 e. 可逆式修飾
儘管可進行特定的修飾以保護寡核苷酸在到達靶細胞前免於活體內環境的影響，但是一旦寡核苷酸到達靶細胞的細胞溶質時，該等修飾可降低寡核苷酸的效力或活性。可進行可逆式修飾，使得分子在細胞外部保留所欲性質，接著一旦進入細胞的細胞溶質環境時，將其去除。可逆式修飾可例如藉由細胞內的酶作用或藉由細胞內部的化學條件(例如通過以細胞內的穀胱甘肽還原)來去除。
在一些實施態樣中，經可逆地修飾之核苷酸包含穀胱甘肽敏感部分。核酸分子通常已經環狀二硫部分化學修飾，以掩蔽由核苷酸間二磷酸酯鍵聯產生的負電荷及改進細胞攝取和核酸酶抗性。參見美國專利申請公開案第2011/0294869號、國際專利申請公開案第WO 2014/ 088920號和第WO 2015/188197號、及Meade等人之(2014) Nat. Biotechnol .32:1256-63。設計此核苷酸間二磷酸酯鍵聯的可逆式修飾，以細胞溶質的還原環境(例如穀胱甘肽)進行細胞內切割。較早的實例包括中和磷酸三酯修飾物，據報導該等修飾物在細胞內是可切割的(參見Dellinger等人之(2003) J. Am. Chem. Soc .125:940-50)。
在一些實施態樣中，在寡核苷酸暴露於核酸酶及其他惡劣的環境條件(例如pH)的情況下，此可逆式修飾容許在活體內投予(例如通過細胞的血液及/或溶酶體/核內體隔室中轉移)期間提供保護。當釋放至與細胞外空間相比而穀胱甘肽水平更高的細胞之細胞溶質中時，該修飾經逆轉且結果為經切割之寡核苷酸。當與使用不可逆式化學修飾的選擇相比時，使用可逆式穀胱甘肽敏感部分有可能引入空間更大的化學基團至關注的寡核苷酸中。這是因為該等較大的化學基團係在細胞溶質中去除，且因此不應干擾細胞之細胞溶質內部的寡核苷酸之生物活性。因此，該等較大的化學基團可經工程化以賦予核苷酸或寡核苷酸各種優勢，諸如核酸酶抗性、親脂性、電荷、熱穩定性、特異性和降低的免疫原性。在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分之結構可經工程化以修飾其釋放動力學。
在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分係附接至核苷酸的糖。在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分係附接至經修飾之核苷酸的糖之2’-碳。在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分係位於糖之5’-碳上，特別當經修飾之核苷酸為寡核苷酸之5’-末端核苷酸時。在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分係位於糖之3’-碳上，特別當經修飾之核苷酸為寡核苷酸之3’-末端核苷酸時。在一些實施態樣中，穀胱甘肽敏感部分包含磺醯基。參見例如在2016年8月23日以 Compositions Comprising Reversibly Modified Oligonucleotides and Uses Thereof為標題申請之美國臨時專利申請案第62/378,635號。 靶向配體
在一些實施態樣中，希望本揭示之STAT3靶向寡核苷酸靶向一或多種細胞或一或多種器官。此種策略可助於避免在其他器官中的非所欲效應或避免對不會自寡核苷酸獲益的細胞、組織或器官過度的寡核苷酸損失。寡核苷酸靶向一或多種細胞或一或多種器官可通過各種方法達成。寡核苷酸與組織或細胞特異性抗體、小分子或靶向配體之共軛可促成寡核苷酸遞送至一或多種靶細胞或組織中且修飾寡核苷酸於其中的積累(Chernolovskaya等人之(2019) Front Pharmacol. 10:444)。例如，寡核苷酸與飽和脂肪酸(例如C22)之共軛可促成對細胞或組織(如脂肪組織或免疫細胞)之遞送，此等細胞或組織比習知的寡核苷酸配體更輕易地攝取此等配體。因此，在一些實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸經修飾以促成對組織、細胞或器官之靶向及/或遞送(例如促成寡核苷酸遞送至肝臟)。在特定的實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸經修飾以促成寡核苷酸遞送至免疫系統之細胞中。在特定的實施態樣中，本文所揭示之寡核苷酸經修飾以促成寡核苷酸遞送至源於骨髓之抑制性細胞中。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含至少一個與一或多種靶向配體共軛之核苷酸(例如1、2、3、4、5、6、或更多個核苷酸)。
在一些實施態樣中，靶向配體包含碳水化合物、胺糖、膽固醇、肽、多肽、蛋白質或蛋白質的一部分(例如抗體或抗體片段)、或脂質。在一些實施態樣中，靶向配體為適配體。例如，靶向配體可為用於靶向腫瘤脈管系統或神經膠瘤細胞之RGD肽、靶向腫瘤脈管系統或基質瘤之CREKA肽、轉鐵蛋白、乳鐵蛋白、或靶向在CNS脈管系統上表現的運鐵蛋白受體之適配體、或靶向神經膠瘤細胞上的EGFR之抗EGFR 抗體。在特定的實施態樣中，靶向配體為一或多個GalNAc部分。
在一些實施態樣中，寡核苷酸之1或多個(例如1、2、3、4、5、或6個)核苷酸各自與單獨的靶向配體共軛。在一些實施態樣中，寡核苷酸之2至4個核苷酸各自與單獨的靶向配體共軛。在一些實施態樣中，靶向配體係與有義股或反義股中任一端之2至4個核苷酸共軛(例如靶向配體係與有義股或反義股的5’或3’端上之2至4個核苷酸突出物或延伸物共軛)，使得靶向配體類似於牙刷的刷毛及寡核苷酸類似於牙刷。例如，寡核苷酸可包含在有義股的5’或3’端之主幹-環圈且主幹之環圈的1、2、3、或4個核苷酸可個別地與靶向配體共軛。在一些實施態樣中，以本揭示所提供之寡核苷酸(例如dsRNA)包含在有義股的3’端之主幹-環圈，其中主幹-環圈之環圈包含三鹼基環圈或四鹼基環圈，且其中包含三鹼基環圈或四鹼基環圈之3或4個核苷酸個別地與靶向配體共軛。在一些實施態樣中，以本揭示所提供之寡核苷酸(例如RNAi寡核苷酸)包含在有義股的3’末端之主幹-環圈，其中主幹-環圈之環圈包含四鹼基環圈，且其中四鹼基環圈之3個核苷酸個別地與靶向配體共軛。
GalNAc為ASGPR的高親和性配體，其主要表現在肝細胞的竇狀表面上且具有結合、內化及隨後清除含有末端半乳糖或GalNAc殘基之循環糖蛋白(去唾液酸糖蛋白)的主要角色。GalNAc部分與本揭示之寡核苷酸之共軛(間接或直接)可用於靶向該等寡核苷酸至細胞上表現的ASGPR。在一些實施態樣中，本揭示之寡核苷酸係與至少一或多個GalNAc部分共軛，其中GalNAc部分靶向寡核苷酸至人類肝細胞(liver cell)(例如人類肝細胞(hepatocyte))上表現的ASGPR。在一些實施態樣中，GalNAc部分靶向寡核苷酸至肝臟。
在一些實施態樣中，本揭示之寡核苷酸係與單價GalNAc直接或間接共軛。在一些實施態樣中，寡核苷酸係與一個以上的單價GalNAc直接或間接共軛(亦即與2、3或4個單價GalNAc部分共軛，且通常與3或4個單價GalNAc部分共軛)。在一些實施態樣中，寡核苷酸係與一或多個二價GalNAc、三價GalNAc或四價GalNAc部分共軛。
在一些實施態樣中，寡核苷酸的1或多個(例如1、2、3、4、5、或6個)核苷酸各自與GalNAc部分共軛。在一些實施態樣中，四鹼基環圈的2至4個核苷酸各自與單獨的GalNAc共軛。在一些實施態樣中，三鹼基環圈的1至3個核苷酸各自與單獨的GalNAc共軛。在一些實施態樣中，靶向配體係與有義股或反義股的任一端之2至4個核苷酸共軛(例如配體係與有義股或反義股的5’或3’端上之2至4個核苷酸突出物或延伸物共軛)，使得GalNAc部分類似於牙刷的刷毛及寡核苷酸類似於牙刷。在一些實施態樣中，GalNAc部分係與有義股的核苷酸共軛。例如，4個GalNAc部分可與有義股的四鹼基環圈中之核苷酸共軛，其中各GalNAc部分係與1個核苷酸共軛。
在一些實施態樣中，四鹼基環圈為腺嘌呤和鳥嘌呤核苷酸的任何組合。
在一些實施態樣中，四鹼基環圈(四L)具有經由本文所述之任何鍵聯子附接至四鹼基環圈的任何一或多個鳥嘌呤核苷酸之單價GalNAc部分，如下文以Chem 2 (X=雜原子)所描述： Chem 2
在一些實施態樣中，四鹼基環圈(四L)具有經由本文所述之任何鍵聯子附接至四鹼基環圈的任何一或多個腺嘌呤核苷酸之單價GalNAc，如下文以Chem 3 (X=雜原子)所描述： Chem 3
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含附接至鳥嘌呤核苷酸之單價GalNAc，稱為[ademG-GalNAc]或2’-胺基二乙氧基甲醇-鳥嘌呤-GalNAc，如下文以Chem 4所描述： Chem 4
在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸包含附接至腺嘌呤核苷酸之單價GalNAc，稱為[ademA-GalNAc]或2’-胺基二乙氧基甲醇-腺嘌呤-GalNAc，如下文以Chem 5所描述： Chem 5
此共軛的實例係以下文包含自5’至3’核苷酸序列GAAA之環圈顯示(Chem 6)(L=鍵聯子，X=雜原子)，顯示主幹附接點。此環圈可存在於例如圖1A中所示之有義股的位置27至30。在化學式中，使用 說明與寡核苷酸股的附接點(Chem 6)。 Chem 6
可使用適當的方法或化學法(例如點擊化學法)鍵聯靶向配位體與核苷酸。在一些實施態樣中，靶向配體係使用點擊鍵聯子與核苷酸共軛。在一些實施態樣中，靶向配體係使用縮醛系(acetal-based)鍵聯子與本文所述之寡核苷酸中任一者的核苷酸共軛。縮醛系鍵聯子揭示於例如國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施態樣中，鍵聯子為不穩定的鍵聯子。然而，在其他的實施態樣中，鍵聯子為穩定的。實例係以下文包含自5’至3’核苷酸GAAA之環圈顯示，其中GalNAc部分係使用縮醛鍵聯子附接至環圈之核苷酸(Chem 7和Chem 8)。此環圈可存在於例如圖1中所示之有義股中任一者的位置27至30。在化學式中， 為與寡核苷酸股的附接點(Chem 7和Chem 8)。 Chem 6，或 Chem 7。
如上述，可使用各種方法或化學合成技術(例如點擊化學法)鍵聯靶向配位體與核苷酸。在一些實施態樣中，靶向配體係使用點擊鍵聯子與核苷酸共軛。在一些實施態樣中，靶向配體係使用縮醛系鍵聯子與本文所述之寡核苷酸中任一者的核苷酸共軛。縮醛系鍵聯子揭示於例如國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施態樣中，鍵聯子為不穩定的鍵聯子。然而，在其他的實施態樣中，鍵聯子為穩定的鍵聯子。
在一些實施態樣中，雙股螺旋延伸物(例如長達3、4、5、或6個bp長度)提供在介於靶向配體(例如GalNAc部分)與dsRNA之間。在一些實施態樣中，本文之寡核苷酸不具有與其共軛之GalNAc。 經共軛之STAT3靶向寡核苷酸之結構
在一些實施態樣中，本文所述之STAT3靶向寡核苷酸包含具有與STAT3 mRNA靶序列的互補區域及一或多個靶向配體之核苷酸序列，其中核苷酸序列包含一或多個以式I-a表示之與一或多個靶向配體共軛之核苷(核酸)： ； 或其醫藥上可接受的鹽， 其中： B為核鹼基或氫； R 1和R 2獨立為氫、鹵素、R A、-CN、-S(O)R、-S(O) 2R、-Si(OR) 2R、-Si(OR)R 2或-SiR 3；或 在同一碳上的R 1和R 2與彼等的中間原子一起形成具有0至3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之3至7員飽和或部分不飽和環； 各R A獨立為視需要地經取代之選自下列的基團：C 1-6脂族、苯基、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至7員飽和或部分不飽和雜環、及具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之5至6員雜芳基環； 各R獨立為氫、適合的保護基或視需要地經取代之選自下列的基團：C 1-6脂族、苯基、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至7員飽和或部分不飽和雜環、及具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之5至6員雜芳基環，或 在同一原子上的兩個R基團與彼等的中間原子一起形成具有0至3個獨立地選自氮、氧、矽和硫的雜原子之4至7員飽和、部分不飽和或雜芳基環； 各靶向配體係選自脂質共軛體部分(LC)、碳水化合物、胺糖或GalNAc；且其中各LC獨立為包含飽和或不飽和、直鏈或支鏈C 1-50烴鏈之脂質共軛體部分，其中烴鏈的0至10個亞甲基單元獨立地經-Cy-、-O-、-C(O)NR-、-NR-、-S-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O) 2-、-P(O)OR-、 -P(S)OR-置換； 各-Cy-獨立為視需要地經取代之選自下列的二價環：伸苯基(phenylenyl)、8至10員雙環伸芳基(arylenyl)、4至7員飽和或部分不飽和伸碳環基(carbocyclylenyl)、4至11員飽和或部分不飽和螺伸碳環基、8至10員雙環飽和或部分不飽和伸碳環基、具有1至3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至7員飽和或部分不飽和雜伸環基(heterocyclylenyl)、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至11員飽和或部分不飽和螺雜伸環基、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之8至10員雙環飽和或部分不飽和雜伸環基、具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之5至6員雜伸芳基、或具有1至5個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子之8至10員雙環雜伸芳基； n為1至10； L為共價鍵或二價飽和或不飽和、直鏈或支鏈C 1- 50烴鏈，其中烴鏈的0至10個亞甲基單元獨立地經-Cy-、-O-、 -C(O)NR-、-NR-、-S-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、     -S(O) 2-、-P(O)OR-、-P(S)OR-、-V 1CR 2W 1-或 置換； m為1至50； X 1、V 1和W 1獨立為-C(R) 2-、-OR、-O-、-S-、-Se-或    -NR-； Y為氫、適合的羥基保護基、 或 ； R 3為氫、適合的保護基、適合的藥物或視需要地經取代之選自下列的基團：C 1-6脂族、苯基、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至7員飽和或部分不飽和雜環、及具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之5至6員雜芳基環； X 2為O、S或NR； X 3為-O-、-S-、-BH 2-或共價鍵； Y 1為附接至至核苷、核苷酸或寡核苷酸之2’或3’末端的鍵聯基團； Y 2為氫、適合的保護基、亞磷醯胺酸酯類似物、附接至核苷、核苷酸或寡核苷酸之5’末端的核苷酸間鍵聯基團、或附接至撐體的鍵聯基團；且 Z為-O-、-S-、-NR-或-CR 2-。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含一或多個以式II-a表示之與靶向配體共軛之核酸： 或其醫藥上可接受的鹽。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含一或多個以式II-b或II-c表示之與靶向配體共軛之核酸： 或其醫藥上可接受的鹽，其中： L 1為共價鍵、單價或二價飽和或不飽和、直鏈或支鏈C 1- 50烴鏈，其中烴鏈的0至10個亞甲基單元獨立地經-Cy-、-O-、-C(O)NR-、-NR-、-S-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O) 2-、-P(O)OR-、-P(S)OR-或 置換； R 4為氫、R A或適合的胺保護基；及 R 5為金剛烷基或飽和或不飽和、直鏈或支鏈C 1-50烴鏈，其中烴鏈的0至10個亞甲基單元獨立地經-O-、-C(O)NR-、-NR-、-S-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O) 2-、     -P(O)OR-或-P(S)OR置換。
在一些實施態樣中，R 5係選自 。
在一些實施態樣中，R 5係選自：
在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。在一些實施態樣中，R 5為 。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含一或多個以式II-Ib或II-Ic表示之與靶向配體共軛之核酸： 或其醫藥上可接受的鹽；其中 B為核鹼基或氫； m為1至50； X 1為-O-或-S-； Y為氫、 或 ； R 3為氫或適合的保護基； X 2為O或S； X 3為-O-、-S-或共價鍵； Y 1為附接至核苷、核苷酸或寡核苷酸之2’或3’末端的鍵聯基團； Y 2為氫、亞磷醯胺酸酯類似物、附接至核苷、核苷酸或寡核苷酸之5’末端的核苷酸間鍵聯基團、或附接至撐體的鍵聯基團； R 5為金剛烷基或飽和或不飽和、直鏈或支鏈C 1-50烴鏈，其中烴鏈的0至10個亞甲基單元獨立地經-O-、-C(O)NR-、-NR-、-S-、-C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-、-S(O) 2-、     -P(O)OR-或-P(S)OR-置換；及 R為氫、適合的保護基或視需要地經取代之選自下列的基團：C 1-6脂族、苯基、具有1至2個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之4至7員飽和或部分不飽和雜環、及具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子之5至6員雜芳基環。
在一些實施態樣中，R 5係選自 。
在一些實施態樣中，R 5為 。
在一些實施態樣中，R 5為 。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸之核苷酸序列包含1至10個靶向配體。在一些實施態樣中，核苷酸序列包含1、2或3個靶向配體。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸為雙股分子。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸為RNAi分子。在一些實施態樣中，STAT3靶向雙股寡核苷酸包含主幹-環圈。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中的核苷酸中任一者共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中自5’至3’之第一核苷酸共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中自5’至3’之第二核苷酸共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中自5’至3’之第三核苷酸共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中自5’至3’之第四核苷酸共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中的核苷酸中之一、二、三或四者共軛。在一些實施態樣中，配體係與主幹-環圈中的核苷酸中之三者共軛。
在一些實施態樣中，STAT3靶向雙股寡核苷酸包含主幹-環圈，其中一或多個脂質係與主幹-環圈的一或多個核苷酸共軛。在一些實施態樣中，STAT3靶向雙股寡核苷酸包含主幹-環圈，其中一或多個C16脂質係與主幹-環圈的一或多個核苷酸共軛。在一些實施態樣中，STAT3靶向雙股寡核苷酸包含主幹-環圈，其中一或多個C18脂質係與主幹-環圈的一或多個核苷酸共軛。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含36個核苷酸之有義股，該核苷酸的位置係自5’至3’以1至36編號。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置27共軛之脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置28共軛之脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置29共軛之脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置30共軛之脂質。在一些實施態樣中，36個核苷酸有義股形成具有在位置27至30的環圈之主幹-環圈。在一些實施態樣中，脂質係與環圈的一個以上的位置共軛(例如36個核苷酸有義股的位置27和28)。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置27共軛之C16脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置28共軛之C16脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置29共軛之C16脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置30共軛之C16脂質。在一些實施態樣中，36個核苷酸有義股形成具有在位置27至30的環圈之主幹-環圈。在一些實施態樣中，C16脂質係與環圈的一個以上的位置共軛(例如36個核苷酸有義股的位置27和28)。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置27共軛之C18脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置28共軛之C18脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置29共軛之C18脂質。在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含與36個核苷酸有義股的位置30共軛之C18脂質。在一些實施態樣中，36個核苷酸有義股形成具有在位置27至30的環圈之主幹-環圈。在一些實施態樣中，C18脂質係與環圈的一個以上的位置共軛(例如36個核苷酸有義股的位置27和28)。
在一些實施態樣中，STAT3靶向寡核苷酸包含15至30個核苷酸之反義股及15至40個核苷酸之有義股，其中有義股及反義股形成雙股螺旋區域，其中反義股包含與表現在與腫瘤微環境相關聯的免疫細胞中之STAT3 mRNA靶序列的互補區域，其中有義股包含在其3ʹ端之主幹-環圈，該主幹-環圈包含：包含4個核苷之四鹼基環圈，其中4個核苷中之一或多者係以式II-Ib表示： ， 其中B係選自腺嘌呤和鳥嘌呤核鹼基，且其中R 5為烴鏈。在一些實施態樣中，m為1，X1為O，Y2為附接至核苷的5’末端之核苷酸間鍵聯基團， Y係以 表示，Y1為附接至核苷酸的2’或3’末端之鍵聯基團，X2為O，X3為O，且R3為H。
在一些實施態樣中，烴鏈為C8-C30烴鏈。在一些實施態樣中，烴鏈為C16烴鏈。在一些實施態樣中，C16烴鏈係以 表示。在一些實施態樣中，烴鏈為C18烴鏈。在一些實施態樣中，C18烴鏈係以 表示。
在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股，其包含選自SEQ ID NO：89至280之序列，其中有義股包含C18脂質。在一些實施態樣中，四鹼基環圈的4個核苷係自5’至3’以1至4編號，且位置1係以式II-Ib表示。在一些實施態樣中，位置2係以式II-Ib表示。在一些實施態樣中，位置3係以式II-Ib表示。在一些實施態樣中，位置4係以式II-Ib表示。在一些實施態樣中，有義股為36個核苷酸，其位置係自5’至3’以1至36編號，其中主幹-環圈包含在位置21至36的核苷酸，且其中在位置27至30的一或多個核苷係以式II-Ib表示。在一些實施態樣中，反義股為22個核苷酸。 示例性STAT3靶向寡核苷酸
在一些實施態樣中，靶向STAT3之寡核苷酸包含如表1、2、3、8、9、10、11和12中所列出之有義股及反義股，其中寡核苷酸包含具有約2至6個鹼基對的雙股主幹及3至4個核苷酸的環圈之主幹-環圈結構，且其中有義股及反義股包含以圖1A或實施例7中所列出之修飾式樣。在一些實施態樣中，靶向STAT3之寡核苷酸包含如表1、2、3、8、9、10、11和12中所列出之有義股及反義股，其中寡核苷酸包含具有約2至6個鹼基對的雙股主幹及3至4個核苷酸的環圈之主幹-環圈結構，其中有義股及反義股包含以圖1A中所列出之修飾式樣，且其中反義股係在5’末端核苷酸的4’碳上經氧甲基膦酸酯修飾。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含主幹-環圈，其包含SEQ ID NO：86之核苷酸序列。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含6個鹼基對的雙股主幹及4個核苷酸的主幹環圈，其包含一、二、三、或四個經GalNAc共軛之核苷酸。在一些實施態樣中，經GalNAc共軛之核苷酸為與腺嘌呤核苷酸共軛之單價GalNAc，其稱為[ademA-GalNAc]或2’-胺基二乙氧基甲醇-腺嘌呤-GalNAc，如下文所描述：
在一些實施態樣中，主幹-環圈包含6個鹼基對的雙股主幹及包含核苷酸序列GAAA的環圈，其中各腺嘌呤核苷酸為ademA-GalNAc。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70， 其中有義股及反義股係基於以下樣式修飾 有義股： [mXs][mX][mX][mX][mX][mX][mX][fX][fX][fX][fX][mX] [mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX][mX][ademX-C#][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX] 雜交至 反義股：[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fX][fX][fX][mX] [fX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][mX] [mX][mXs][mXs][mX] (圖例提供於表7中)。在一些實施態樣中，C#為C16或C18。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中有義股及反義股係基於以下樣式修飾 有義股： [mXs][mX][mX][mX][mX][mX][mX][fX][fX][fX][fX][mX] [mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX][mX][ademX-C#][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX] 雜交至 反義股：[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fX][fX][fX][mX] [fX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][mX] [mX][mXs][mXs][mX] (圖例提供於表7中)。在一些實施態樣中，C#為C16或C18。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中有義股及反義股係基於以下樣式修飾 有義股： [mXs][mX][mX][mX][mX][mX][mX][fX][fX][fX][fX][mX] [mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX][mX][ademX-C#][mX][mX][mX][mX][mX] [mX][mX][mX] 雜交至 反義股：[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fXs][fX][fX][mX] [fX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][mX] [mX][mXs][mXs][mX] (圖例提供於表7中)。在一些實施態樣中，C#為C16或C18。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：11和12； (b) 分別為SEQ ID NO：39和40； (c) 分別為SEQ ID NO：67和68；及 (d) 分別為SEQ ID NO：71和72。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含以SEQ ID NO：81所列出之序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含以SEQ ID NO：82所列出之序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含以SEQ ID NO：83所列出之序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含以SEQ ID NO：84所列出之序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等具有分別以SEQ ID NO：87和68所列出之核苷酸序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等具有分別以SEQ ID NO：88和71所列出之核苷酸序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：89至280之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：857至946之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：857至888之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：889至912之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：913至934之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：935至946之有義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：947至1036之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：947至978之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：979至1002之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1003至1024之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1025至1036之反義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：857至946之有義股序列及選自SEQ ID NO：947至1036之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：857至888之有義股序列及選自SEQ ID NO：947至978之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：889至912之有義股序列及選自SEQ ID NO：979至1002之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：913至934之有義股序列及選自SEQ ID NO：1003至1024之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：935至946之有義股序列及選自SEQ ID NO：1025至1036之反義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1037至1126之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1037至1068之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1069至1092之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1093至1114之有義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1115至1126之有義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1127至1216之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1127至1158之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1159至1182之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1183至1204之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1205至1216之反義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1037至1126之有義股序列及選自SEQ ID NO：1127至1216之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1037至1068之有義股序列及選自SEQ ID NO：1127至1182之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1069至1092之有義股序列及選自SEQ ID NO：1159至1182之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1093至1114之有義股序列及選自SEQ ID NO：1183至1204之反義股序列。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自SEQ ID NO：1115至1126之有義股序列及選自SEQ ID NO：1205至1216之反義股序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：857和947； (b) 分別為SEQ ID NO：858和948； (c) 分別為SEQ ID NO：859和949； (d) 分別為SEQ ID NO：860和950； (e) 分別為SEQ ID NO：862和952； (f) 分別為SEQ ID NO：867和957； (g) 分別為SEQ ID NO：875和965；及 (h) 分別為SEQ ID NO：876和966。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：862之序列且反義股包含SEQ ID NO：952之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：875之序列且反義股包含SEQ ID NO：965之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：876之序列且反義股包含SEQ ID NO：966之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：920之序列且反義股包含SEQ ID NO：1010之序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1037和1127； (b) 分別為SEQ ID NO：1038和1128； (c) 分別為SEQ ID NO：1039和1129； (d) 分別為SEQ ID NO：1040和1130； (e) 分別為SEQ ID NO：1042和1132； (f) 分別為SEQ ID NO：1047和1137； (g) 分別為SEQ ID NO：1055和1145；及 (h) 分別為SEQ ID NO：1056和1146。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1081和1171； (b) 分別為SEQ ID NO：1090和1180； (c) 分別為SEQ ID NO：1079和1169； (d) 分別為SEQ ID NO：1076和1166； (e) 分別為SEQ ID NO：1072和1162； (f) 分別為SEQ ID NO：1070和1160；及 (g) 分別為SEQ ID NO：1069和1159。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (b) 分別為SEQ ID NO：1117和1207；及 (c) 分別為SEQ ID NO：1119和1209。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1095和1185； (b) 分別為SEQ ID NO：1104和1194； (c) 分別為SEQ ID NO：1093和1183；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1042和1132； (b) 分別為SEQ ID NO：1055和1145； (c) 分別為SEQ ID NO：1056和1146；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1042之序列且反義股包含SEQ ID NO：1132之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1055之序列且反義股包含SEQ ID NO：1145之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1056之序列且反義股包含SEQ ID NO：1146之序列。
在一些實施態樣中，有義股包含SEQ ID NO：1100之序列且反義股包含SEQ ID NO：1190之序列。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含有義股及反義股，該等包含選自下列的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1042和4； (b) 分別為SEQ ID NO：1055和5； (c) 分別為SEQ ID NO：1056和6；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和7。
在一些實施態樣中，本文所述之用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含最小脫靶效應。例如，在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸降低STAT3表現及不降低STAT1表現或STAT1表現降得比STAT3表現少。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含以SEQ ID NO：862所列出之核苷酸序列，及反義股，該反義股包含以SEQ ID NO：952所列出之核苷酸序列，其中寡核苷酸降低STAT3表現及不降低STAT1表現或STAT1表現降得比STAT3表現少。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含以SEQ ID NO：1042所列出之核苷酸序列，及反義股，該反義股包含以SEQ ID NO：1132所列出之核苷酸序列，其中寡核苷酸降低STAT3表現及不降低STAT1表現或STAT1表現降得比STAT3表現少。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含以SEQ ID NO：875所列出之核苷酸序列，及反義股，該反義股包含以SEQ ID NO：965所列出之核苷酸序列，其中寡核苷酸降低STAT3表現及不降低STAT1表現或STAT1表現降得比STAT3表現少。在一些實施態樣中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含以SEQ ID NO：1055所列出之核苷酸序列，及反義股，該反義股包含以SEQ ID NO：1145所列出之核苷酸序列，其中寡核苷酸降低STAT3表現及不降低STAT1表現或STAT1表現降得比STAT3表現少。
在一些實施態樣中，本文所述之用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸能夠降低至少二種不同物種的STAT3 mRNA表現。在一些實施態樣中，本文所述之寡核苷酸能夠降低至少二種不同物種的STAT3 mRNA表現，但不與非STAT3 mRNA (例如STAT1)交叉反應。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸在至少二種不同物種之間具有交叉反應性。在一些實施態樣中，用於降低STAT3表現之寡核苷酸係與人類、非人類靈長類動物和小鼠STAT3 mRNA交叉反應。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸係與人類和小鼠STAT3 mRNA交叉反應。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸係與人類和非人類靈長類動物STAT3 mRNA交叉反應。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少50%至至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、或至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和非人類靈長類動物中的至少50%至至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和非人類靈長類動物中的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、或至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和非人類靈長類動物中的至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和小鼠中的至少50%至至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和小鼠中的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、或至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸降低人類和小鼠中的至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類和非人類靈長類動物中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：857和947； (b) 分別為SEQ ID NO：858和948； (c) 分別為SEQ ID NO：859和949； (d) 分別為SEQ ID NO：860和950； (e) 分別為SEQ ID NO：862和952； (f) 分別為SEQ ID NO：867和957； (g) 分別為SEQ ID NO：875和965；及 (h) 分別為SEQ ID NO：876和966， 其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸降低至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：857和947； (b) 分別為SEQ ID NO：858和948； (c) 分別為SEQ ID NO：859和949； (d) 分別為SEQ ID NO：860和950； (e) 分別為SEQ ID NO：862和952； (f) 分別為SEQ ID NO：867和957； (g) 分別為SEQ ID NO：875和965；及 (h) 分別為SEQ ID NO：876和966， 其中寡核苷酸係與脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：857和947； (b) 分別為SEQ ID NO：858和948； (c) 分別為SEQ ID NO：859和949； (d) 分別為SEQ ID NO：860和950； (e) 分別為SEQ ID NO：862和952； (f) 分別為SEQ ID NO：867和957； (g) 分別為SEQ ID NO：875和965；及 (h) 分別為SEQ ID NO：876和966， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：862和952； (b) 分別為SEQ ID NO：875和965； (c) 分別為SEQ ID NO：876和966；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸降低人類和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸寡核苷酸降低人類和非人類靈長類動物中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類和非人類靈長類動物中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低的人類、非人類靈長類動物和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低的人類和小鼠中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類和非人類靈長類動物中的STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類和非人類靈長類動物中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類、非人類靈長類動物和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類和小鼠中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含選自下列的有義股及反義股： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010， 其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：862之有義股序列及SEQ ID NO：952之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類和非人類靈長類動物中的至少75%之STAT3 mRNA (亦即寡核苷酸為物種交叉反應性寡核苷酸)。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：875之有義股序列及SEQ ID NO：965之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：876之有義股序列及SEQ ID NO：966之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。
在一些實施態樣中，用於降低STAT3 mRNA表現之寡核苷酸包含SEQ ID NO：920之有義股序列及SEQ ID NO：1010之反義股序列，其中寡核苷酸係與有義股上的C18脂質共軛及降低人類中的至少75%之STAT3 mRNA。 調配物
已開發出各種調配物以促成寡核苷酸的使用。例如，寡核苷酸可使用調配物遞送至個體或細胞環境，該調配物使降解減至最低、促成遞送及/或攝取或對調配物中的寡核苷酸提供另一有益的性質。在一些實施態樣中，寡核苷酸係於緩衝溶液中調配，諸如經磷酸鹽緩衝之鹽水溶液、脂質體、微胞結構和蛋白殼。
寡核苷酸與陽離子脂質之調配物可用於促成寡核苷酸轉染至細胞中。例如，可使用陽離子脂質(諸如lipofectin)、陽離子甘油衍生物及聚陽離子分子(例如聚離胺酸)。適合的脂質包括寡非他命(Oligofectamine)、脂染胺(Lipofectamine)(Life Technologies)、NC388 (Ribozyme Pharmaceuticals, Inc., Boulder, Colo.)或FuGene 6 (Roche)，全部可根據製造商的用法說明使用。
因此，在一些實施態樣中，調配物包含脂質奈米粒子。在一些實施態樣中，賦形劑包含脂質體、脂質、脂質複合物、微球、微粒、奈米球或奈米粒子，或可以其他方式調配以投予有其需要的個體之細胞、組織、器官或身體(參見例如Remington：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY，第22版，Pharmaceutical Press, 2013)。
在一些實施態樣中，本文之調配物包含賦形劑。在一些實施態樣中，賦形劑賦予組成物改進的穩定性、改進的吸收、改進的溶解度及/或治療性增強的活性成分。在一些實施態樣中，賦形劑為緩衝劑(例如檸檬酸鈉、磷酸鈉、tris鹼或氫氧化鈉)或媒劑(例如緩衝溶液、石蠟脂、二甲亞碸或礦物油)。在一些實施態樣中，將寡核苷酸凍乾以延長其儲存壽命且接著在使用(例如投予個體)前製成溶液。因此，在包含本文所述之寡核苷酸中任一者之組成物中的賦形劑可為凍乾保護劑(例如甘露醇、乳糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯啶酮)或陷縮溫度修飾劑(例如葡聚糖、Ficoll™或明膠)。
在一些實施態樣中，醫藥組成物經調配而與其意欲投予途徑相容。投予途徑的實例包括非經腸(例如靜脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下)、經口(例如吸入)、經皮(例如局部)、經黏膜及直腸投予。
適合於注射使用之醫藥組成物包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或分散液及用於即時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。適合於靜脈內投予之載劑包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL™(BASF，Parsippany, N.J.)或經磷酸鹽緩衝之鹽水(PBS)。載劑可為溶劑或含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇及類似者)及其適合的混合物之分散介質。在許多例子中，較佳的是包括等滲劑，例如糖、多元醇(諸如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉於組成物中。無菌可注射溶液之製備可藉由將所需量的寡核苷酸依需要與上文列舉的成分中之一者或組合併入選定的溶劑中，隨後經無菌過濾。
在一些實施態樣中，組成物可含有至少約0.1%或更多的治療劑，儘管活性成分的百分比可介於總組成物重量或體積的約1%至約80%或更多之間。諸如溶解度、生物可利用性、生物半生期、投予途徑、產品儲存壽命以及其他藥理學考量的因素係由熟習製備此等醫藥調配物之技術領域者予以考慮，且就此而論，可能需要各種劑量及治療方案。
儘管幾個實施態樣係針對本文之寡核苷酸中任一者的肝臟靶向遞送，但亦考慮靶向其他組織。 程序性死亡配體1 (PD-L1)抑制劑
在一些實施態樣中，本揭示提供與本文所述之寡核苷酸組合使用之PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為小分子、肽、蛋白質、抗體或核酸分子，諸如siRNA、miRNA或反義RNA。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑抑制PD-L1及PD-1之締合。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑對PD-L1具有特異性。
在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑對PD-1具有特異性。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為抗PD-1抗體。在一些實施態樣中，抗體為全長抗體。在一些實施態樣中，抗體為抗體片段。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為小分子。
在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為阿特珠單抗。阿特珠單抗(MPDL3280A)為對抗PD-L1之完全人源化、工程化IgG1單株抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為艾維魯單抗。艾維魯單抗(MSB0010718C)為對抗PD-L1之完全人源化、工程化IgG1單株抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為恩伐利單抗。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為德瓦魯單抗。德瓦魯單抗(MEDI4736)為對抗PD-L1之人類單株抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為TSR-042。TSR-042係指針對PD-1/PD-L1路徑之工程化嵌合抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為KD-033。KD-033係指雙功能性抗PD-L1/IL-15融合蛋白，其中抗PD-L1抗體係以尾部連接之IL-15受體的壽司結構域(sushi domain)結合至細胞激素IL-15。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為STI-1014。STI-1014係指抗PD-L1抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為KY-1003。KY-1003為對抗PD-L1之單株抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為YW243.55.S70。抗體YW243.55.S70為美國專利第9,920,123號中所述之抗PDL1，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為MDX-1106。亦稱為MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558之MDX-1106為美國專利第8,008,449號中所述之抗PD1抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為Merck 3745。亦稱為MK-3475或SCH-900475之Merck 3745為美國專利第8,168,757號中所述之抗PD1抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為CT-011。亦稱為hBAT或hBAT-1之CT-011為美國專利第8,747,847號中所述之抗PD1抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為AMP-224。亦稱為B7-DClg之AMP-224為美國專利公開案第2011/0223188號和美國專利公開案第2013/0017199號中所述之可溶性PDL2-Fc融合受體，將該專利內容以其全文併入本文中。
在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為本技術中已知的任何抗PD-L1抗體，包括但不限於Akinleye & Rasool “Immune checkpoint inhibitors of PD-L1 as cancer therapeutics” J. of Hematology & Oncology.12(92): 2019中所揭示之抗PD-L1抗體。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為BMS-936559。BMS-936559 (MDX-1105)為對抗PD-L1之完全人類IgG4單株抗體且說明於美國專利第7,943,743號，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為CK-301。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為CS-1001。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為SHR-1316。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為BG-A333。在一些實施態樣中，抗PD-L1抗體為國際專利公開案第WO 2021/231741號中所揭示之抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。
在一些實施態樣中，抗PD-1抗體為尼沃魯單抗。尼沃魯單抗(BMS-936558)為美國專利第8,008,449號中所述之IgG4單株抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-1抗體為帕博利珠單抗。帕博利珠單抗為美國專利第8,354,509號中所述之IgG4單株抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，抗PD-1抗體為西米普利單抗。西米普利單抗(REGN2810)為美國專利第9,987,500號中所述之IgG4單株抗體，將該專利內容以其全文併入本文中。
在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約30 nM至約100 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約30 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約40 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約50 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約60 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約70 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約80 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約90 nM之親和性結合至PD-L1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-L1抗體係以約100 nM之親和性結合至PD-L1。
在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約30 nM至約100 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約30 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約40 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約50 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約60 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約70 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約80 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約90 nM之親和性結合至PD-1。在一些實施態樣中，本文所述之抗PD-1抗體係以約100 nM之親和性結合至PD-1。
在一些實施態樣中，抗體係使用展示技術產生。用於產生抗體多肽之展示技術包括展示技術中任一者(例如展示庫篩選技術)。在一些實施態樣中，合成抗體係藉由使用展示技術(例如噬菌體展示技術)篩選標靶抗原來設計、選擇或最適化。噬菌體展示庫可能包含數百萬至數十億個噬菌體載體，各載體在其病毒套膜(viral coat)上表現獨特的抗體片段。此等展示庫可提供用於選擇對一或多種關注抗原具有不同的親和性水平之潛在的數百種抗體片段之豐富多樣的資源(McCafferty等人之1990. Nature.348: 552-4；Edwards, B.M.等人之2003. JMB.334: 103-18；Schofield, D.等人之2007. Genome Biol.8, R254；及Pershad, K.等人之2010. Protein Engineering Design and Selection.23:279-88；將每一該等內容以其全文併入本文以供參考)。在此等展示庫中存在的抗體片段時常包含scFv抗體片段，其包含以柔性鍵聯子接合之V H和V L抗體結構域之融合蛋白。在一些例子中，scFv可能含有相同的序列，只有編碼CDR之可變環圈的獨特序列除外。在一些例子中，scFv表現為與病毒套膜蛋白(例如病毒球套膜蛋白的N-末端)鍵聯之融合蛋白。V L鏈可單獨表現，與V H鏈組裝於周質中，然後複合物併入病毒套膜中。經沉澱之展示庫成員可自結合之噬菌體定序以獲得編碼所欲scFv之cDNA。來自此等序列之抗體可變結構域或CDR可直接併入抗體序列中用於重組抗體生產，或通過試管內親和性成熟而突變及用於進一步最適化。
在一些實施態樣中，欲在病毒基因組中編碼之多肽序列係使用酵母表面展示技術生產。在一些實施態樣中，重組抗體係藉由作為融合體之關注的抗體片段展示在酵母表面上來成長，其中蛋白質係與溶液中的蛋白質及小分子相互作用。對所欲受體具有親和性之scFv可使用磁分離及流動式細胞測量術自酵母表面單離。可進行幾次酵母表面展示及單離之循環，通過定向演化獲得具有所欲性質之scFv。
用於測定抗體對其抗原的親和性之方法為本技術中已知。用於測定結合親和性之示例性方法係使用表面電漿子共振。表面電漿子共振為容許藉由檢測在生物感測器矩陣內的蛋白質濃度變化來分析即時的雙特異性相互作用之光學現象，該檢測係使用例如BIAcore系統(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)。關於進一步的說明，參考Jonsson, U.等人之(1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26；Jonsson, U., i (1991) Biotechniques 11 :620-627；Johnsson, B.等人之(1995) J. Mol.Recognit. 8: 125-131；及Johnsson, B.等人之(1991) Anal. Biochem. 198:268-277。
在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為siRNA分子。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為ALN-PDL。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為美國專利第10,889,813號、美國專利第10,745,704號、美國專利公開案第2021/0277403號、美國專利公開案第2006/0276422A1號、美國專利第2021/0277403號、國際專利公開案第WO2019/000149或國際專利公開案第WO2019/000149中所述之PD-L1抑制劑，將該等專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為Barati, M.等人之A review of PD-1/PD-L1 siRNA delivery systems in immune T cells and cancer cells, International Immunopharmacology,2022, vol. 111中所述之siRNA分子。在一些實施態樣中，用於抑制PD-L1之siRNA分子為使用那些熟習本技術領域者已知的方法產生之siRNA分子。
在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為反義寡核苷酸。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為美國專利第10,745,480號、美國專利第10,982,215號、美國專利公開案第2021/0269797A1號或美國專利公開案第US20220220485A1號中所述之反義寡核苷酸，將該等專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，用於抑制PD-L1之反義寡核苷酸為使用那些熟習本技術領域者已知的方法產生之反義寡核苷酸。
在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為小分子。在一些實施態樣中，小分子為CA-170。CA-170為PD-L1及VISTA之小分子拮抗劑。在一些實施態樣中，小分子為CA-327。CA-327係指PD-L1及TIM3之小分子拮抗劑。在一些實施態樣中，小分子為BMS-1001。在一些實施態樣中，小分子為BMS-1166。在一些實施態樣中，小分子為BMS-8。在一些實施態樣中，小分子為BMS-37。在一些實施態樣中，小分子為BMS-202。在一些實施態樣中，小分子為BMS-200。在一些實施態樣中，小分子為Incyte-001。在一些實施態樣中，小分子為Incyte-011。在一些實施態樣中，小分子為INCB086550。在一些實施態樣中，小分子為LH1306。在一些實施態樣中，小分子為LH1307。在一些實施態樣中，小分子為ARB-272572。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為Sasikumar, P.等人之Small Molecule Agents Targeting PD-1 Checkpoint Pathway for Cancer Immunotherapy: Mechanisms of Action and Other Considerations for Their Advanced Development, Front. Immunol.2022, 13:752065中所述之小分子。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為美國專利第11,130,740號、美國專利第10,590,105號、國際專利公開案第WO2019/076343號、美國專利第11,555,029號或美國專利公開案第2018/0305315號中所述之小分子，將該等專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，小分子為Wu, Q.等人之Small molecule inhibitors targeting the PD-1/PD-L1 signaling pathway, Acta Pharmacologica Sinica.2021, 42: 1-9中所述之小分子。在一些實施態樣中，小分子為Wang, Y.等人之A Small Molecule Antagonist of PD-1/PD-L1 Interactions Acts as an Immune Checkpoint Inhibitor for NSCLC and Melanoma Immunotherapy, Front. Immuno.2021. Vol. 12中所述之小分子。在一些實施態樣中，小分子抑制劑為本文所述之小分子的立體異構物、互變異構物、醫藥上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。在一些實施態樣中，用於抑制PD-L1之小分子為使用那些熟習本技術領域者已知的方法產生之小分子。
在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為肽。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為美國專利第9,422,339號或美國專利第9,850,283號中所述之肽抑制劑，將該等專利內容以其全文併入本文中。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為Yin, H.等人之Rational Design of Potent Peptide Inhibitors of the PD-1:PD-L1 Interaction for Cancer Immunotherapy, J. Am. Chem. Soc.2021, 143: 44, 18536-18547中所述之肽抑制劑。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑為Lin, X.等人之Progress in PD-1/PD-L1 pathway inhibitors: From biomacromolecules to small molecules, Euro. J. Med. Chem.2020, vol. 186中所述之肽抑制劑。在一些實施態樣中，用於抑制PD-L1之抑制劑肽為使用那些熟習本技術領域者已知的方法產生之肽。
熟習本技術領域者已知如何在適當的檢定法中測試化合物以確定其是否為PD1及/或PDL1抑制劑。抑制劑結合至PD1及/或PDL1及/或PDL2可在例如本技術中熟知的ELISA型檢定法中測量。測量PD1及/或PDL1及/或PDL2抑制的生物效應之生物檢定法為熟習本技術領域者所熟知。 套組
在一些實施態樣中，本揭示提供包含本文之STAT3寡核苷酸及對已接受或正接受PD-L1抑制劑的個體投予STAT3寡核苷酸的用法說明之套組。在一些實施態樣中，套組包含在適合的容器中的本文之寡核苷酸、一或多種對照物及各種緩衝液、試劑、酶和本技術中熟知的其他標準成分。在一些實施態樣中，容器包含至少一個小瓶、孔、試管、燒瓶、瓶子、注射器或其他容器裝置，將寡核苷酸放入其中，且在一些情況下經適當地等分。在一些實施態樣中，在提供額外組分的情況下，套組含有此組分放入其中的額外容器。套組亦可包括嚴格限制用於商業銷售的含有寡核苷酸及任何其他試劑之裝置。此等容器可包括注射或吹模成型塑膠容器，使所欲小瓶容納於其中。容器及/或套組可包括具有用法說明及/或警語之標籤。
在一些實施態樣中，套組包含本文之STAT3寡核苷酸及醫藥上可接受的載劑、或包含寡核苷酸之醫藥組成物及用法說明，其係用於治療有其需要的個體之與STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症或延遲其進展，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，套組包含本文之STAT3寡核苷酸及醫藥上可接受的載劑、或包含寡核苷酸之醫藥組成物及用法說明，其係用於治療有其需要的個體之癌症或延遲其進展，其中個體已接受或正接受PD-L1抑制劑。
在一些實施態樣中，套組包含PD-L1抑制劑及醫藥上可接受的載劑、或包含寡核苷酸之醫藥組成物及用法說明，其係用於治療有其需要的個體之疾病、疾患或病症或延遲其進展，其中個體已接受或正接受本文所述之STAT3寡核苷酸。在一些實施態樣中，套組包含PD-L1抑制劑及醫藥上可接受的載劑、或包含寡核苷酸之醫藥組成物及用法說明，其係用於治療有其需要的個體之癌症或延遲其進展，其中個體已接受或正接受本文所述之STAT3寡核苷酸。 [實施例]
儘管本揭示已參考下列實施例中所列出之具體的實施態樣予以說明，但是那些熟習本技術領域者應理解可進行各種變化且可取代等效物而不背離本揭示之真實精神及範圍。再者，下列實施例係以例證方式供給，且不意欲以任何方式限制本揭示之範圍。另外，可進行修飾以適應本揭示之情況、材料、物質組成、製程、製程步驟或步驟等、目的、精神及範圍。意欲使所有的此等修飾在本揭示之範圍內。利用本技術熟知的標準技術或下文具體說明的技術。 縮寫 Ac：乙醯基 AcOH：乙酸 ACN：乙腈 Ad：金剛烷基 AIBN：2,2’-偶氮雙異丁腈 Anhyd：無水 Aq：水性 B 2Pin 2：雙(頻哪醇基)二硼-4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-雙(1,3,2-二氧硼雜環戊烷) BINAP：2,2’-雙(二苯膦基)-1,1’-聯萘 BH 3：硼烷 Bn：苯甲基 Boc：三級丁氧基羰基 Boc 2O：二碳酸二-三級丁酯 BPO：過氧化苯甲醯 BuOH：正丁醇 CDI：羰基二咪唑 COD：環辛二烯 d：天 DABCO：1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷 DAST：三氟化二乙胺基硫 dba：二亞苯甲基丙酮 DBU：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯 DCE：1,2-二氯乙烷 DCM：二氯甲烷 DEA：二乙胺 DHP：二氫吡喃 DIBAL-H：二異丁基氫化鋁 DIPA：二異丙胺 DIPEA或DIEA：N,N-二異丙基乙胺 DMA：N,N-二甲基乙醯胺 DME：1,2-二甲氧基乙烷 DMAP：4-二甲基胺基吡啶 DMF：N,N-二甲基甲醯胺 DMP：戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane) DMSO：二甲亞碸 DMTr：4,4’-二甲氧基三苯甲基 DPPA：疊氮磷酸二苯酯 dppf：1,1’-雙(二苯膦基)二茂鐵 EDC或EDCI：1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽 ee：鏡像異構物超越 ESI：電噴霧游離 EA：乙酸乙酯 EtOAc：乙酸乙酯 EtOH：乙醇 FA：甲酸 h或hrs：小時 HATU：N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸鹽 HCl：氫氯酸 HPLC：高效能液相層析術 HOAc：乙酸 IBX：2-碘醯基苯甲酸 IPA：異丙醇 KHMDS：六甲基二矽氮化鉀 K 2CO 3：碳酸鉀 LAH：氫化鋁鋰 LDA：二異丙基胺化鋰 L-DBTA：二苯甲醯基-L-酒石酸 m-CPBA：間氯過苯甲酸 M：莫耳濃度 MeCN：乙腈 MeOH：甲醇 Me 2S：二甲硫醚 MeONa：甲醇鈉 MeI：碘甲烷 min：分鐘 mL：毫升 mM：毫莫耳濃度 mmol：毫莫耳 MPa：百萬帕斯卡 MOMCl：甲基氯甲醚 MsCl：甲磺醯氯 MTBE：甲基三級丁基醚 nBuLi：正丁基鋰 NaNO 2：亞硝酸鈉 NaOH：氫氧化鈉 Na 2SO 4：硫酸鈉 NBS：N-溴琥珀醯亞胺 NCS：N-氯琥珀醯亞胺 NFSI：N-氟苯磺醯亞胺 NMO：N-甲基嗎啉N-氧化物 NMP：N-甲基吡咯啶 NMR：核磁共振 ℃：攝氏度 Pd/C：鈀/碳 Pd(OAc) 2：乙酸鈀 PBS：經磷酸鹽緩衝之鹽水 PE：石油醚 POCl 3：磷醯氯 PPh 3：三苯膦 PyBOP：六氟磷酸(苯并三唑-1-氧基)三吡咯啶基鏻 Rel：相對 R.T.或rt：室溫 s或sec：秒 sat：飽和 SEMCl：氯甲基-2-三甲基矽基乙醚 SFC：超臨界流體層析術 SOCl 2：二氯化硫 tBuOK：三級丁醇鉀 TBAB：溴化四丁基銨 TBAF：氟化四丁基銨 TBAI：碘化四丁基銨 TEA：三乙胺 Tf：三氟甲磺酸鹽 TfAA、TFMSA或Tf 2O：三氟甲磺酸酐 TFA：三氟乙酸 TIBSCl：2,4,6-三異丙基苯磺醯氯 TIPS：三異丙基矽基 THF：四氫呋喃 THP：四氫吡喃 TLC：薄層層析術 TMEDA：四甲基乙二胺 pTSA：對甲苯磺酸 UPLC：超高效能液相層析術 wt：重量 Xantphos：4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃 實施例1：雙股RNAi寡核苷酸之製備 通用合成方法
下列實施例意欲例證本揭示且不應解釋為對其的限制。溫度係以攝氏度(C)給出。若沒有另外提及，則所有的蒸發皆在減壓下執行，較佳地介於約15 mm Hg與100 mm Hg (= 20至133毫巴)之間。最終產物、中間物及起始材料的結構係以標準的分析方法確認，例如微量分析和光譜特徵，例如MS、IR、NMR。所使用之縮寫為那些本技術中習知的縮寫。
用於合成本揭示之核酸或其類似物的所有起始材料、建構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑及催化劑係於市場上取得或可以本技術之普通技能者已知的有機合成方法生產(Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21 (Houben-Weyl 4th Ed. 1952))。再者，本揭示之核酸或其類似物可以本技術之普通技能者已知的有機合成方法生產，如下列實施例中所示。
所有的反應皆在氮氣或氬氣下進行，除非另有其他陳述。
質子NMR ( 1H NMR)係在氘化溶劑中進行。在本文所揭示之特定核酸或其類似物中，一或多個 1H位移係與殘留的蛋白溶劑(proteo solvent)信號重疊；該等信號未於下文提供之實驗中報告。
如下列實施例中所描述，在特定的示例性實施態樣中，核酸或其類似物係根據以下的通用程序製備。應意識到儘管通用方法描述本揭示之特定核酸或其類似物的合成，但是以下的通用方法及本技術之普通技能者已知的其他方法可應用於如本文所述之所有核酸或其類似物及該等核酸或其類似物中之各者的子類別和種類。 實施例1a：2-(2-((((6aR,8R,9R,9aR)-8-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛(disilocin)-9-基)氧基)甲氧基)乙氧基)乙烷-1-甲酸銨(1-6)的合成
將20 mL之DMF中的化合物1-1 (25.00 g，67.38 mmol)之溶液在10℃下以吡啶(11 mL，134.67 mmol)及四異丙基二矽氧烷二氯化物(22.63 mL，70.75 mmol)處理。將所得混合物在25℃下攪拌3 h且以20%之檸檬酸(50 mL)淬滅。將水層以EtOAc (3X50 mL)萃取且將合併的有機層在真空中濃縮。將粗製殘留物自MTBE與正庚烷之混合物(1：15，320 mL)再結晶以供給成為白色油性固體的化合物1-2 (37.20 g，90%)。
將20 mL之DMSO中的化合物1-2 (37.00 g，60.33 mmol)之溶液以AcOH (20 mL，317.20 mmol)及Ac 2O (15 mL，156.68 mmol)處理。將混合物在25℃下攪拌15 h。將反應以EtOAc (100 mL)稀釋且以sat. K 2CO 3(50 mL)淬滅。將水層以EtOAc (3X50 mL)萃取。將合併的有機層濃縮且以ACN (30 mL)再結晶以供給成為白色固體的化合物1-3 (15.65 g，38.4%)。
將120 mL之DCM中的化合物1-3 (20.00 g，29.72 mmol)之溶液在25℃下以Fmoc-胺基-乙氧基乙醇(11.67 g，35.66 mmol)處理。將混合物攪拌以供給透明溶液且接著以4Å分子篩(20.0 g)、 N-碘琥珀醯亞胺(8.02 g，35.66 mmol)及TfOH (5.25 mL，59.44 mmol)處理。將混合物在30℃下攪拌，直到HPLC分析表明消耗＞95%之化合物1-3。將反應以TEA (6 mL)淬滅且過濾。將過濾物以EtOAc稀釋，以sat. NaHCO 3(2X100 mL)、sat. Na 2SO 3(2X100 mL)及水(2X100 mL)清洗且在真空中濃縮，以供給成為黃色固體的粗製化合物1-4 (26.34 g，93.9%)，將其直接用於下一步驟而無需進一步純化。
將DCM/水之混合物(10：7，170 mL)中的化合物1-4 (26.34 g，27.62 mmol)之溶液在5℃下以DBU (7.00 mL，45.08 mmol)處理。將混合物在5至25℃下攪拌1 h。接著將有機層分離，以水(100 mL)清洗且以DCM (130 mL)稀釋。將溶液以反丁烯二酸(7.05 g，60.76 mmol)及4Å分子篩(26.34 g)分四部分處理。將混合物攪拌1 h，濃縮且自MTBE與DCM之混合物(5：1)再結晶以供給成為白色固體的化合物1-6 (14.74 g，62.9%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 8.73 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15-8.02 (m, 2H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H),  6.52 (s, 2H), 6.15(s, 1H), 5.08-4.90 (m, 3H), 4.83-4.78 (m, 1H), 4.15-3.90 (m, 3H), 3.79-3.65 (m, 2H), 2.98-2.85 (m, 6H), 1.20-0.95 (m, 28H)。 實施例1b：二異丙基亞磷醯胺酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((2-(2-[脂質]-醯胺基乙氧基)乙氧基)甲氧基)四氫呋喃-3-基(2-氰乙基)酯(2-4a至2-4e)的合成
將150 mL之2-甲基四氫呋喃中的化合物1-6 (50.00 g，59.01 mmol)之溶液以冰冷水性K 2HPO 4(6%，100 mL)及鹽水(20%，2X100 mL)清洗。將有機層分離且在0℃下以己酸(10.33 mL，82.61 mmol)、HATU (33.66 g，88.52 mmol)及DMAP (10.81 g，147.52 mmol)處理。將所得混合物溫熱至25℃且攪拌1 h。將溶液以水(2X100 mL)、鹽水(100 mL)清洗且在真空中濃縮以供給粗製殘留物。以矽膠上的快速層析術(1：1之己烷/丙酮)給出成為白色固體的化合物2-1a (34.95 g，71.5%)。
將80 mL之THF中的化合物2-1a (34.95 g，42.19 mmol)與TEA (9.28 mL，126.58 mmol)之混合物在10℃下以三乙胺三氟化氫(20.61 mL，126.58 mmol)逐滴處理。將混合物溫熱至25℃且攪拌2 h。將反應濃縮，溶解在DCM (100 mL)中且以sat. NaHCO 3(5X20 mL)及鹽水(50 mL)清洗。將有機層在真空中濃縮以供給粗製化合物2-2a (24.72 g，99%)，將其直接用於下一步驟而無需進一步純化。
將50 mL之DCM中的化合物2-2a (24.72 g，42.18 mmol)之溶液以 N-甲基嗎啉(18.54 mL，168.67 mmol)及DMTr-Cl (15.69 g，46.38 mmol)處理。將混合物在25℃下攪拌2 h且以sat. NaHCO 3(50 mL)淬滅。將有機層分離，以水清洗，濃縮以供給漿狀粗製物。以矽膠上的快速層析術(1：1之己烷/丙酮)給出成為白色固體的化合物2-3a (30.05 g，33.8 mmol，79.9%)。
將50 mL之DCM中的化合物2-3a (25.00 g，28.17 mmol)之溶液在氮氛圍下以 N-甲基嗎啉(3.10 mL，28.17 mmol)及四唑(0.67 mL，14.09 mmol)處理。將雙(二異丙基胺基)氯膦(9.02 g，33.80 mmol)逐滴添加至溶液中且將所得混合物在25℃下攪拌4 h。將反應以水(15 mL)淬滅且將水層以DCM (3X50 mL)萃取。將合併的有機層以sat. NaHCO 3(50 mL)清洗，濃縮以供給粗製固體，將其自DCM/MTBE/正己烷之混合物(1：4：40)再結晶以供給成為白色固體的化合物2-4a (25.52 g，83.4%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 11.25 (s, 1H), 8.65-8.60 (m, 2 H), 8.09-8.02 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 7H), 6.85-6.79 (m, 4H), 6.23-6.20 (m, 1H), 5.23-5.14 (m, 1H), 4. 80-4.69 (m, 3H), 4.33-4.23 (m, 2H), 3.90-3.78 (m, 1H), 3.75 (s, 6H), 3.74-3.52 (m, 3H), 3.50-3.20 (m, 6H), 3.14-3.09 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.82-2.80 (m, 1H), 2.65-2.60 (m, 1H), 2.05-1.96 (m, 2H), 1.50-1.39 (m, 2H), 1.31-1.10 (m, 14H), 1.08-1.05 (m, 2 H), 0.85-0.79 (m, 3H)； 31P NMR (162 MHz, d 6 -DMSO) 149.43, 149.18。
化合物2-4b、2-4c、2-4d和2-4e係使用與上述化合物2-4a類似的程序製備。獲得成為白色固體的化合物2-4b (25.50 g，85.4%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 11.23 (s, 1H), 8.65-8.60 (m, 2 H), 8.05-8.02 (m, 2H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 7H), 6.89-6.80 (m, 4H), 6.21-6.15 (m, 1H), 5.23-5.17 (m, 1H), 4. 80-4.69 (m, 3H), 4.40-4.21 (m, 2H), 3.91-3.80 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.74-3.52 (m, 3H), 3.50-3.20 (m, 6H), 3.14-3.09 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.83-2.79 (m, 1H), 2.68-2.62 (m, 1H), 2.05-1.97 (m, 2H), 1.50-1.38 (m, 2H), 1.31-1.10 (m, 18H), 1.08-1.05 (m, 2H), 0.85-0.78 (m, 3H)； 31P NMR (162 MHz, d 6 -DMSO) 149.43, 149.19。
獲得成為灰白色固體的化合物2-4c (36.60 g，66.3%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 11.22 (s, 1H), 8.64-8.59 (m, 2H), 8.05-8.00 (m, 2H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 7H), 6.89-6.80 (m, 4H), 6.21-6.15 (m, 1H), 5.25-5.17 (m, 1H), 4.80-4.69 (m, 3H), 4.40-4.21 (m, 2H), 3.91-3.80 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.74-3.50 (m, 3H), 3.50-3.20 (m, 6H), 3.14-3.09 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.83-2.79 (m, 1H), 2.68-2.62 (m, 1H), 2.05-1.99 (m, 2H), 1.50-1.38 (m, 2H), 1.33-1.12 (m, 38H), 1.08-1.05 (m, 2 H), 0.86-0.80 (m, 3H)； 31P NMR (162 MHz, d 6 -DMSO) 149.42, 149.17。
獲得成為灰白色固體的化合物2-4d (26.60 g，72.9%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 11.22 (s, 1H), 8.64-8.59 (m, 2H), 8.05-8.00 (m, 2H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.38-7.33 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 7H), 6.89-6.80 (m, 4H), 6.21-6.15 (m, 1H), 5.22-5.17 (m, 1H), 4.80-4.69 (m, 3H), 4.40-4.21 (m, 2H), 3.91-3.80 (m, 1H), 3.74 (s, 6H), 3.74-3.52 (m, 3H), 3.50-3.20 (m, 6H), 3.14-3.09 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.83-2.79 (m, 1H), 2.68-2.62 (m, 1H), 2.05-1.99 (m, 2H), 1.50-1.38 (m, 2H), 1.35-1.08 (m, 38H), 1.08-1.05 (m, 2 H), 0.85-0.79 (m, 3H)； 31P NMR (162 MHz, d 6 -DMSO) 149.47, 149.22。
獲得成為白色固體的化合物2-4e (38.10 g，54.0%)： 1H NMR (400 MHz, d 6 -DMSO) 11.21 (s, 1H), 8.64-8.59 (m, 2H), 8.05-8.00 (m, 2H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 7H), 6.89-6.80 (m, 4H), 6.21-6.15 (m, 1H), 5.23-5.17 (m, 1H), 4.80-4.69 (m, 3H), 4.40-4.21 (m, 2H), 3.91-3.80 (m, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.74-3.52 (m, 3H), 3.47-3.22 (m, 6H), 3.14-3.09 (m, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.83-2.79 (m, 1H), 2.68-2.62 (m, 1H), 2.05-1.99 (m, 2H), 1.50-1.38 (m, 2H), 1.35-1.06 (m, 46H), 1.08-1.06 (m, 2 H), 0.85-0.77 (m, 3H); 31P NMR (162 MHz, d 6 -DMSO) 149.41, 149.15。 實施例2. GalXC RNAi寡核苷酸-脂質共軛體的合成 流程1. 具有與四鹼基環圈共軛之單脂質(直鏈和支鏈)之GalXC RNAi寡核苷酸-脂質共軛體的合成。合成後共軛係通過醯胺偶合反應來實現。 R 1COOH基團表示脂肪酸C8:0、C10:0、C11:0、C12:0、C14:0、C16:0、C17:0、C18:0、C18:1、C18:2、C22:5、C22:0、C24:0、C26:0、C22:6、C24:1、二醯基C16:0或二醯基C18:1
合成有義股1及反義股1係以固相合成法製備。 經共軛之有義股1a-1i的合成
經共軛之有義股1a係通過合成後共軛方法合成。在離心管1中，將DMA (0.75 mL)中的辛酸(0.58 mg，4 umol)之溶液在rt下以HATU (1.52 mg，4 umol)處理。在離心管2中，將H 2O (0.25 mL)中的寡有義股1 (10.00 mg，0.8 umol)之溶液以DIPEA (1.39 uL，8 umol)處理。將離心管1中的溶液添加至離心管2中且使用Thermomixer在rt下混合。在以LC-MS分析表明反應完成後，將反應混合物以5 mL之水稀釋且以反相XBridge C18管柱使用ACN中的100 mM TEAA及H 2O之5至95%梯度純化。將產物流份使用Genevac在減壓下濃縮。將合併的殘留溶劑使用Amicon® Ultra-15 Centrifugal (3K)對水(1 X)、鹽水(1 X)及水(3 X)透析。將Amicon薄膜以水(3 X 2 mL)清洗且接著將合併的溶劑凍乾以供給非晶形白色固體的經共軛之有義股1a (6.43 mg，64%之產率)。
經共軛之有義股1b-1i係使用與合成經共軛之有義股1a所述之類似程序製備且以42%至69%之產率獲得。 雙股螺旋1a-1j之黏著
將經共軛之有義股1a (10 mg，以重量測量)溶解在0.5 mL之去離子水中以製備20 mg/mL之溶液。將反義股1 (10 mg，以OD測量)溶解在0.5 mL之去離子水中以製備20 mg/mL之溶液，使用其滴定經共軛之有義股且量化雙股螺旋量。基於經共軛之有義股及反義股兩者之莫耳量的計算，將一定比例的所需反義股1添加至經共軛之有義股1a溶液中。將所得混合物在95℃下攪拌5 min且容許冷卻至rt。黏著進度係以離子交換HPLC監測。基於黏著進度，進一步添加若干比例的反義股1以完成純度＞95%之黏著。將溶液凍乾以供給雙股螺旋1a (C8)且其量係基於黏著所消耗的反義股之莫耳量計算。
雙股螺旋1b-1i係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-2描述在環圈上具有單脂質之切口型四鹼基環圈GalXC共軛體的合成。合成後共軛係通過經Cu催化之炔-疊氮化物環加成反應來實現。 流程1-2
有義股1B及反義股1B係以固相合成法製備。 經共軛之有義股1j的合成
在離心管1中，將DMA/H 2O的3：1之混合物(0.5 mL)中的寡聚物(10.00 mg，0.8 umol)之溶液以脂質鍵聯子疊氮化物(11.26 mg，4 umol)處理。在離心管2中，將CuBr二甲硫醚(1.64 mg，8 umol)溶解在ACN (0.5 mL)中。將兩個溶液以起泡的N 2通過10 min而脫氣。接著將CuBrSMe 2之ACN溶液添加至離心管1中且將所得混合物在40℃下攪拌。在以LC-MS分析表明反應完成後，將反應混合物以0.5 M EDTA (2 mL)稀釋且使用Amicon® Ultra-15 Centrifugal (3K)對水(2 X)透析。將反應粗製物以反相XBridge C18管柱使用ACN中的100 mM TEAA (摻入30%之IPA)及H 2O之5至95%梯度純化。將產物流份使用Genevac在減壓下濃縮。將合併的殘留溶劑使用Amicon® Ultra-15 Centrifugal (3K)對水(1 X)、鹽水(1 X)及水(3 X)透析。將Amicon薄膜以水(3 X 2 mL)清洗且將合併的溶劑凍乾以供給非晶形白色固體的經共軛之有義股1j (6.90 mg，57%之產率)。
雙股螺旋1j (PEG2K-二醯基C18)係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-3描述在環圈上具有二脂質之切口型四鹼基環圈GalXC共軛體的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-3 有義股2及反義股2係以固相合成法製備
經共軛之有義股2a和2b係使用與合成經共軛之有義股1a所述之類似程序，但是以10 eq之脂質、10 eq之HATU及20 eq之DIPEA製備。
雙股螺旋2a (2XC11)和2b (2XC22)係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-4描述與單脂質共軛之完全硫代磷酸化主幹-環圈之GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-4 有義股3及反義股3係以固相合成法製備
經共軛之有義股3a係使用與合成經共軛之有義股1a所述之類似程序製備且以65%之產率獲得。
雙股螺旋3a (PS-C22)係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-5描述與單脂質共軛之短有義股之GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-5 有義股4及反義股4係以固相合成法製備
經共軛之有義股4a係使用與合成經共軛之有義股1a所述之類似程序製備且以74%之產率獲得。
雙股螺旋4a (SS-C22)係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-6描述在環圈上與三金剛烷部分共軛之切口型四鹼基環圈GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-6 有義股5及反義股5係以固相合成法製備。
經共軛之有義股5a和5b係使用與合成經共軛之有義股1a所述之類似程序製備且以42%至73%之產率獲得。
雙股螺旋5a (3X金剛烷)和雙股螺旋5b (3X乙醯基金剛烷)係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。
以下流程1-7描述在環圈上與脂質共軛之切口型四鹼基環圈GalXC之固相合成法的實例。 流程1-7 經共軛之有義股6的合成
經共軛之有義股6係使用市售的寡合成器以固相合成法製備。寡核苷酸係使用經2’-修飾之核苷亞磷醯胺酸酯(諸如2’-F或2’-OMe)及經2'-二乙氧基甲醇鍵聯之脂肪酸醯胺核苷亞磷醯胺酸酯合成。寡核苷酸合成係使用標準的寡核苷酸合成方案以3’至5’方向在撐體上進行。在該等努力下，將5-乙硫基-1H-四唑(ETT)用作為偶合反應之活化劑。將碘溶液用於亞磷酸三酯氧化反應。將3-(二甲基胺基亞甲基)胺基-3H-1,2,4-二噻唑-3-硫酮(DDTT)用於形成硫代磷酸酯鍵聯。將合成之寡核苷酸以濃縮水性銨處理10 h。將氨自懸浮液去除且將撐體殘留物以過濾去除。將粗製寡核苷酸以TEAA處理、分析且以強陰離子交換高效能液相層析術(SAX-HPLC)純化。將流份合併且使用Amicon® Ultra-15 Centrifugal (3K)對水(3 X)、鹽水(1 X)及水(3 X)透析。接著將殘留溶劑凍乾以供給所欲經共軛之有義股6。
雙股螺旋6係使用與雙股螺旋1a (C8)之黏著所述之相同程序製備。 流程8. 在環圈上與一個金剛烷單元共軛之切口型四鹼基環圈GalXC的合成，其係經由合成後共軛方法。 N = 0：金剛烷羧酸；n = 1：金剛烷乙酸 流程1-8 經共軛之有義股7a和7b的合成
經共軛之有義股7a和有義股7b係使用與合成經共軛之有義股5相同的方法或實質上類似的方法獲得。 雙股螺旋7a和7b的合成實施例
雙股螺旋7a和雙股螺旋7b係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
流程9. 在環圈上與兩個金剛烷單元共軛之切口型四鹼基環圈GalXC的合成，其係經由合成後共軛方法。 流程1-9 經共軛之有義股8a和8b的合成
經共軛之有義股8a和有義股8b係使用與合成經共軛之有義股5相同的方法或實質上類似的方法獲得。 雙股螺旋8a和8b的合成實施例
雙股螺旋8a和雙股螺旋8b係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
以下流程1-10描述與單脂質共軛之短有義股及短主幹環圈之GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-10 有義股9a的合成
經共軛之有義股9a係使用與合成經共軛之有義股5相同的方法或實質上類似的方法獲得。 雙股螺旋9a的合成實施例
雙股螺旋9a係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
以下流程1-11描述在5’端與單脂質共軛之GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-11 經共軛之有義股10a的合成
經共軛之有義股10a係使用與合成經共軛之有義股5相同的方法或實質上類似的方法獲得。 雙股螺旋10a的合成實施例
雙股螺旋10a係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
以下流程1-12a和1-12b描述在3’端或5’端與單脂質共軛之具有鈍端之GalXC的合成，其係使用合成後共軛方法。 流程1-12a 流程1-12b 經共軛之有義股11a和12a的合成
經共軛之有義股11a和12a係使用與合成經共軛之有義股5相同的方法或實質上類似的方法獲得。 雙股螺旋11a和12a的合成實施例
雙股螺旋11a和12a係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
共軛體雙股螺旋8D和雙股螺旋9D係使用與合成雙股螺旋5相同的方法或實質上類似的方法獲得。
稍後，將醯基鏈與靶向STAT3基因之核酸抑制劑分子共軛，該STAT3基因表現在關注的組織中。將具有2’-胺鍵聯子[ademA]之過客股用於後固相共軛。不同類型的脂質係使用相同的化學法共軛以產生一系列共軛體(圖1A和1B)。執行SAR研究以識別可能用於遞送酬載至關注的組織之脂質共軛體，以調介標靶減弱。 實施例3：在MDSC細胞群及腫瘤引流淋巴結中的組織特異性標靶
STAT3係涉及免疫抑制，在文獻中有大量報導的實例。通過RNAi機制靶向STAT3轉錄可能潛在地克服在開發藥理學STAT3抑制劑中的挑戰。出於該等原因，選擇STAT3作為概念驗證標靶以證明在關注的組織(諸如源於骨髓之抑制性細胞(MDSC))中的組織特異性活性。將STAT3序列以具有所述之修飾樣式之GalXC格式設計，且用於肝臟組織中的標靶減弱之篩選係在正常的CD-1小鼠中執行。將18種STAT3-GalXC共軛體(表1)以3 mg/kg經皮下給藥一次。
在注射後五天，收集肝臟且以qPCR進行mRNA分析。作為篩選的結果，選擇四種在肝臟中顯示＞85%之標靶減弱之序列(GalXC-STAT3-838、GalXC-STAT3-1402、GalXC-STAT3-4110和GalXC-STAT3-4123)用於進一步評估(圖2A)。在該等序列之中，三種經識別為小鼠特異性及一種經識別為人類-小鼠交叉反應性。將該4種序列在CD-1小鼠中以3種不同的劑量(0.3、1和3 mg/kg)進一步篩選以評鑑劑量反應。在劑量反應篩選後，GalXC-STAT3-4110和4123經識別為最有效力的序列，各具有0.3 mg/kg之ED 50，且因此選擇該等分子用於進一步研究(圖2B)。對GalXC-STAT3-4110或4123兩者執行C18脂質共軛，用於概念驗證研究(表2)。
為了評估GalXC-STAT3-C18共軛體的性能，將Pan02腫瘤植入裸小鼠中，且在達到足夠的腫瘤體積後，將小鼠如前述進行隨機分組。小鼠經皮下接受25 mg/kg、50 mg/kg之單一劑量的GalXC-STAT3-C18 4110和4123、或PBS。在注射後3天，收集大塊腫瘤且單離MDSC亞群。將MDSC全體地以細胞表面或mRNA標誌物CD11b (巨噬細胞譜系之骨髓細胞的標誌物)及Gr-1 (骨髓譜系分化抗原的標誌物)之共同表現特徵化，且表示為CD11b +Gr-1 +細胞。Gr-1另外包含2種組分Ly6G和Ly6C。MDSC係由兩種亞群所組成：以CD11b +Ly6G +Ly6C lo進一步特徵化之顆粒細胞MDSC (G-MDSC)及以CD11b +Ly6G -Ly6C hi特徵化之單細胞MDSC (M-MDSC)。為了單離CD11b陽性細胞，使用溫和的MACS解離器製成腫瘤的單細胞懸浮液。接著將單細胞懸浮液中的CD11b陽性細胞以MACS微珠經磁性標記，且藉由通過MACS管柱進行富集及隨後溶析在管柱中作為陽性選擇流份的經保留之標記細胞(CD11b MicroBeads UltraPure，小鼠套組Cat# 130-126-725)。關於腫瘤細胞分離，將細胞懸浮液中的非靶細胞以微珠雞尾酒經磁性標記且通過MACS管柱。在此過程期間，將不需要的標記細胞保留在管柱中及未經標記之靶細胞(腫瘤細胞)作為純流份收集在流通液中(腫瘤細胞單離套組，人類Cat # 130-108-339)。
在細胞單離後，將mRNA以qPCR分析(圖3A和3B)。在G-MDSC及M-MDSC中的Stat3 mRNA含量以GalXC-STAT3-C18-4123降低~40%。在兩種MDSC亞群中的Stat3 mRNA含量以GalXC-STAT3-C18-4110僅降低20%。
為了理解GalXC-STAT3-C18共軛體的劑量水平如何扮演運輸該等分子至不同組織及細胞亞群的角色，以相同的腫瘤模式執行如前述之追蹤研究。將攜有Pan02腫瘤之小鼠以50 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或PBS之單一皮下劑量治療，且在3天後測量Stat3 mRNA含量。與在25 mg/kg之劑量下觀察到的減弱相比，在G-MDSC中的Stat3減弱沒有顯著地改變，然而在此相同的劑量水平下觀察到在M-MDSC亞群中之Stat3靜默有顯著的改進。在如前述所執行的平行研究中，在第7天評鑑在大塊腫瘤及TdLN中的Stat3減弱(圖4A和4B)。以兩種GalXC-STAT3-C18序列在大塊腫瘤中觀察到劑量依賴性Stat3 mRNA減弱。在TdLN中，Stat3 mRNA含量以兩種劑量的GalXC-STAT3-C18-4123降低~60至65%，以GalXC-STAT3-C18-4110降低~25至30%，示意在該等劑量水平下的飽和效應。基於該等數據，選擇GalXC-STAT3-C18-4123用於免疫活性小鼠中進一步的功效評估。 實施例4：STAT3抑制作用降低在MDSC中的PD-L1含量及調介急遽的腫瘤效應
磷酸化STAT3之轉錄簽名(transcriptional signature)已與腫瘤中的PD-L1表現呈正相關性(Song等人之Journal of Cell Physiology (2020)；Zerdes等人之Cancers (2019)；Song等人之Blood (2018))。為了推斷與以MDSC表現之STAT3的此相關性，評鑑以PBS或GalXC-STAT3共軛體處理的經單離之MDSC群的Pdl1 mRNA。在以25或50 mg/kg之GalXC-STAT3處理的兩種G-MDSC及M-MDSC群中的Pdl1 mRNA含量降低~80% (圖5A)。在以GalXC-STAT3共軛體，尤其以GalXC-STAT3-C18-4123處理後，在TdLN中的Pdl1含量亦戲劇性地降低(圖5B)。該等數據示意在STAT3減弱後，PD-L1之下游免疫調節的潛力。
在分開的研究中，將攜有Pan02 (鼠類胰臟同基因模式)腫瘤之C57BL/6小鼠(每組的n=4)以GalXC-STAT3-C18共軛體經皮下治療，該治療係遵照其中所有的動物接受25 mg/kg x 2個劑量或12.5 mg/kg x 4個劑量給藥的50 mg/kg之總劑量的分次給藥模式。使用25 mg/kg之分次劑量治療之腫瘤顯示急遽的腫瘤消退，即使在第一個劑量後便如此(圖6B)。在25 mg/kg之第二個劑量後，來自4隻小鼠中的3隻之腫瘤消退至太小而無法收集至進一步處理的尺寸。亦在接受12.5 mg/kg之分次劑量的小鼠中觀察到以GalXC-STAT3治療之抗腫瘤效應(圖6A)。該等數據示意經STAT3調介之PD-L1調節對攜有Pan02腫瘤之免疫活性小鼠中的腫瘤生長導致急遽及戲劇性的效應。 實施例5：雙股RNAi寡核苷酸之製備 寡核苷酸合成及純化
在前述實施例中所述之雙股RNAi (dsRNA)寡核苷酸係使用本文所述之方法經化學合成。除了使用已知的亞磷醯胺酸酯合成(參見例如Hughes和Ellington之(2017) Cold Spring Harb Perspect Biol. 9(1):a023812；Beaucage S.L.、Caruthers M.H.之Studies on Nucleotide Chemistry V: Deoxynucleoside Phosphoramidites—A New Class of Key Intermediates for Deoxypolynucleotide Synthesis. Tetrahedron Lett. 1981;22:1859-1862. doi: 10.1016/S0040-4039(01)90461-7)以外，dsRNAi寡核苷酸通常亦使用如用於19至23mer siRNA所述之固相寡核苷酸合成方法合成(參見例如Scaringe等人之(1990) Nucleic Acids Res.18:5433-5441及Usman等人之(1987) J. Am. Chem. Soc. 109:7845-7845；亦參見美國專利案號5,804,683；5,831,071；5,998,203；6,008,400；6,111,086；6,117,657；6,353,098；6,362,323；6,437,117和6,469,158)。具有19mer核心序列的dsRNAi寡核苷酸經格式化成具有25mer正義股及27mer反義股之構築體，以容許以RNAi機器處理。19mer核心序列係與STAT3 mRNA中的一區域互補。
個別RNA股係根據標準方法合成及經HPLC純化(Integrated DNA Technologies；Coralville, IA)。例如，RNA寡核苷酸係使用固相亞磷醯胺酸酯化學法合成、去保護及在NAP-5管柱(Amersham Pharmacia Biotech；Piscataway, NJ)上使用標準技術脫鹽(Damha & Olgivie之(1993) Methods Mol. Biol. 20:81-114；Wincott等人之(1995) Nucleic Acids Res. 23:2677-2684)。寡聚物係使用離子交換高效能液相層析術(IE-HPLC)在Amersham Source 15Q管柱(1.0 cm×25 cm；Amersham Pharmacia Biotech)上使用15 min步進式線性梯度純化。梯度係自90：10之緩衝液A：B變化至52：48之緩衝液A：B，其中緩衝液A為100 mM Tris pH 8.5及緩衝液B為100 mM Tris pH 8.5、1M NaCl。在260 nm下監測樣品且收集對應於全長寡核苷酸種類之峰、匯集、在NAP-5管柱上脫鹽且凍乾。
各寡聚物的純度係以毛細管電泳(CE)在Beckman PACE 5000 (Beckman Coulter, Inc.；Fullerton, CA)上測定。CE毛細管具有100 μm內徑且含有ssDNA 100R凝膠(Beckman-Coulter)。通常將約0.6 nmol之寡核苷酸注射至毛細管中，在444 V/cm之電場中電泳且在260 nm下以UV吸光度檢測。變性Tris-硼酸鹽-7 M-脲電泳緩衝液係自Beckman-Coulter購得。獲得寡核糖核苷酸，其以CE評鑑為至少90%之純度，用於下述實驗中。化合物同一性係藉由基質輔助之雷射脫附游離飛行時間(MALDI-TOF)質譜法在Voyager DE™生物光譜工作站(Applied Biosystems；Foster City, CA)上遵照製造商的建議方案驗證。獲得所有寡聚物之相對分子質量，通常在預期分子質量之0.2%內。 雙股螺旋之製備
將單股RNA寡聚物再懸浮(例如以100 μM濃度)於100 mM乙酸鉀、30 mM HEPES，pH 7.5所組成之雙股螺旋緩衝液中。將互補的有義股及反義股以等莫耳量混合以產出例如50 μM雙股螺旋之最終溶液。將樣品針對5’在RNA緩衝液(IDT)中加熱至100℃且容許在使用前冷卻至室溫。將dsRNA寡核苷酸儲存在-20℃下。將單股RNA寡聚物凍乾儲存或在無核酸酶之水中儲存於-80℃下。 實施例6：產生STAT3靶向雙股RNAi寡核苷酸 識別STAT3 mRNA靶序列
轉錄訊息轉導及活化子蛋白3 (STAT3)為涉及幾種發展及疾病功能之轉錄因子。為了產生STAT3表現之RNAi寡核苷酸抑制劑，使用基於電腦的演算法以計算方式識別適合於檢定以RNAi路徑抑制STAT3表現之STAT3 mRNA靶序列。演算法提供RNAi寡核苷酸引導(反義)股序列，各具有與人類STAT3 mRNA (例如以SEQ ID NO：1217；表4)之適合的STAT3靶序列的互補區域。以演算法識別的一些引導股序列亦與猴子STAT3 mRNA (SEQ ID NO：1218，表4)及/或小鼠STAT3 mRNA之對應的STAT3靶序列互補。預期包含與具有核苷酸序列相似性的同源性STAT3 mRNA靶序列的互補區域之STAT3 RNAi寡核苷酸具有靶向同源性STAT3 mRNA的能力。
RNAi寡核苷酸(經格式化成DsiRNA寡核苷酸)係如實施例5所述方式產生，用於試管內評估。生產各DsiRNA，各者具有相同的修飾式樣及各者具有獨特的引導股，其具有與以SEQ ID NO：89至280識別之STAT3靶序列的互補區域。用於有義及反義DsiRNA之修飾包括下列者( X-任何核苷酸；經 m-2’-O-甲基修飾之核苷酸； r-經核糖基修飾之核苷酸)： 有義股： rXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXrXrXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXXX反義股： mXmXmXmXrXrXrXrXrXrXmXrXmXrXrXrXrXrXrXrXrXrXmXrXmXmXmX
在表5中的經修飾之DsiRNA之各者降低STAT3 mRNA的能力係使用基於試管內細胞之檢定法測量。簡言之，將表現內源性人類STAT3基因之人類肝細胞(Huh7)在多孔細胞培養板的單獨孔中以1 nM之表5中所列出的DsiRNA之各者轉染。在以經修飾之DsiRNA轉染後，將細胞維持24小時，且接著將來自經轉染之細胞剩餘的STAT3 mRNA量使用基於TAQMAN®之qPCR檢定法測定。使用兩種qPCR檢定法，3’檢定法及5’檢定法(正向1-SEQ ID NO：1219、反向1- SEQ ID NO：1220、探針1- SEQ ID NO：1221；正向2- SEQ ID NO：1、反向2- SEQ ID NO：2、探針2- SEQ ID NO：3)，以測定STAT3 mRNA含量，如使用與6-羧基螢光素(FAM)共軛之PCR探針所測量。檢定各引子對剩餘的RNA %，如表5及圖7中所示。當與仿轉染細胞相比時，導致經DsiRNA轉染之細胞中剩餘的STAT3 mRNA少於或等於10%之DsiRNA被認為是DsiRNA「命中(hit)」。評估表5中所列出的DsiRNA抑制STAT3表現的能力之基於Huh7細胞之檢定法識別出幾種候選DsiRNA。
總的來說，該等結果顯示經設計以靶向人類STAT3 mRNA之DsiRNA抑制細胞中的STAT3表現，如藉由經DsiRNA轉染之細胞中相對於對照細胞中減少的STAT3 mRNA量所測定。這些結果證明包含DsiRNA之核苷酸序列有用於產生RNAi寡核苷酸以抑制STAT3表現。再者，該等結果證明多種STAT3 mRNA靶序列適合於經RNAi調介之STAT3表現抑制。
在最初的試管內篩選後，選擇48個構築體用於給藥研究。將Huh7細胞以0.05 nM、0.3 nM或1 nM之寡核苷酸處理24小時。單離及測量mRNA以測定有效力的劑量(圖8A)。在測試的寡核苷酸之中，選擇34個序列用於進一步的活體內測試(表6及圖8B)。 實施例7：活體內STAT3之RNAi寡核苷酸抑制作用
在實施例6中的試管內篩選檢定法驗證STAT3靶向DsiRNA以減弱標靶mRNA的能力。為了確認RNAi寡核苷酸於活體內減弱STAT3的能力，使用HDI小鼠模式。使用實施例6中識別之DsiRNA亞群產生對應的雙股RNAi寡核苷酸，其包含具有36-mer過客股及22-mer引導股的經切口型四鹼基環圈GalNAc共軛之結構(在本文稱為「經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸」或「GalNAc-STAT3寡核苷酸」)(表8和表9)。再者，包含過客股及引導股之核苷酸序列具有經修飾之核苷酸及硫代磷酸酯鍵聯的不同式樣。包含四鹼基環圈之核苷酸中之三者分別與GalNAc部分(CAS#14131-60-3)共軛。所使用之修飾式樣係如下例證： 式樣1 有義股：5’ mX- S-mX-mX-mX-mX-mX-mX-fX-fX-fX-fX  [-mX-] 16-[ademX-GalNAc]-[ademX-GalNAc]-[ademX-GalNAc]-mX-mX-mX-mX-mX-mX 3’。 雜交至： 反義股：5’ [Me膦酸酯-4O-mX]- S-fX- S-fX-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-mX-mX-mX- S-mX- S-mX 3’。 或如下表示： 有義股：[mXs][mX][mX][mX][mX][mX][mX][fX][fX][fX] [fX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mX][mX][mX][mX][mX][mX] 雜交至： 反義股：[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fX][fX][fX][mX][fX] [mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][mX][mX][mXs][mXs][mX] 式樣2 有義股：5’ mX-S-mX-mX-mX-mX-mX-mX-fX-fX-fX-fX  [-mX-] 16-[ademX-GalNAc]-[ademX-GalNAc]-[ademX-GalNAc]-mX-mX-mX-mX-mX-mX 3’。 雜交至： 反義股：5’ [Me膦酸酯-4O-mX]-S-fX-S-fX-S-fX-fX-mX-fX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-fX-mX-mX-mX-mX-mX-mX- S-mX- S-mX 3’。 或如下表示： 有義股：[mXs][mX][mX][mX][mX][mX][mX][fX][fX][fX] [fX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][mX][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mX][mX][mX][mX][mX][mX] 雜交至： 反義股：[Me膦酸酯-4O-mXs][fXs][fXs][fX][fX][mX][fX] [mX][mX][fX][mX][mX][mX][fX][mX][mX][mX][mX][mX][mXs][mXs][mX]
在表8和表9中的寡核苷酸係在經工程化而在小鼠肝臟的肝細胞中瞬時表現人類STAT3 mRNA的小鼠中評估。簡言之，將6至8週齡雌性CD-1小鼠(n=4至5)經皮下投予在PBS中調配的1 mg/kg之劑量的指示之經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。對照組小鼠(n=3至4)僅投予PBS。在三天(72小時)後，將小鼠以在普及的細胞巨大病毒(CMV)啟動子序列的控制下編碼全長人類STAT3基因的DNA質體(25 μg)經流體動力學注射(HDI)。在引入DNA質體後一天，收集來自HDI小鼠的肝臟樣品。將源自該等HDI小鼠之總RNA進行qRT-PCR分析以測定STAT3 mRNA含量，如實施例6中所述。測量人類mRNA的mRNA含量。將該等值使用包括在DNA質體上的NeoR基因針對轉染效率標準化。將包含不同的修飾式樣之基準對照物(STAT3-1388)用於兩種檢定法中(有義股SEQ ID NO：1100；反義股SEQ ID NO：1190)。
在圖9A和9B中的結果證明經設計以靶向人類STAT3 mRNA的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸抑制HDI小鼠中的人類STAT3 mRNA表現，如藉由來自以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理之HDI小鼠相對於僅以PBS處理之對照HDI小鼠的肝臟樣品中減少的人類STAT3 mRNA表現量來測定。
將圖9A和9B中測試的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸亞群在給藥研究中進一步驗證。特定言之，給藥研究係使用九種經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸(STAT3-715、STAT3-716、STAT3-717、STAT3-720、STAT3-721、STAT3-1145、STAT3-1286、STAT3-1286和STAT3-1287)進行。將小鼠如上述經流體動力學注射且以0.1 mg/kg、0.3 mg/kg或1 mg/kg之寡核苷酸處理。在一天後收集肝臟，且測量STAT3表現以測定有效力的劑量(圖10)。所有經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸皆能夠以1 mg/kg之劑量降低STAT3表現，且STAT3-1286能夠以0.3 mg/kg之劑量降低表現。總體而言，HDI研究識別出幾種用於抑制肝臟中的STAT3表現之潛在的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。 實施例8：活體內STAT3之物種特異性RNAi寡核苷酸抑制作用
為了確認RNAi寡核苷酸於活體內減弱STAT3的能力，產生幾種跨物種及物種特異性經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。特定言之，評估三重共同序列(靶向人類、非人靈長類動物和小鼠；Hs/Mf/Mm)、人類/小鼠(Hs/Mm)及人類(Hs)特異性寡核苷酸。 Hs/Mf/Mm及Hs/Mm共同序列
將在肝臟中表現內源性小鼠STAT3的小鼠經皮下注射3 mg/kg之劑量的表10中所列出的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。在五天後收集肝臟且測量STAT3表現。總體而言，該研究識別出幾種用於抑制肝臟中的STAT3表現之潛在的經GalNAc共軛之Hs/Mf/Mm STAT3寡核苷酸(圖11)。
將表11中所列出的經GalNAc共軛之人類/小鼠STAT3寡核苷酸在內源性表現小鼠STAT3的小鼠中測試。如上述，將小鼠經皮下注射3 mg/kg之劑量的寡核苷酸。在五天後收集肝臟且測量STAT3表現。總體而言，該研究識別出幾種用於抑制肝臟中的STAT3表現之潛在的經GalNAc共軛之Hs/Mm STAT3寡核苷酸(圖12)。
將圖11和12中測試的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸亞群在給藥研究中進一步驗證。特定言之，給藥研究係使用十種經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸(STAT3-2626、STAT3-2627、STAT3-2408、STAT3-2412、STAT3-2139、STAT3-4909、STAT3- 461、STAT3-678、STAT3-2148和STAT3-2144)進行。將內源性表現小鼠STAT3的小鼠經皮下注射0.3 mg/kg、1 mg/kg或3 mg/kg之寡核苷酸。在五天後收集肝臟，且測量小鼠STAT3表現以測定有效力的劑量(圖13A和13B)。總體而言，內源性小鼠STAT3表現研究識別出幾種用於抑制肝臟中的STAT3表現之潛在的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。 Hs特異性
使用實施例7中所述之HDI模式評估人類特異性經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。特定言之，將6至8週齡雌性CD-1小鼠(n=4至5)經皮下投予在PBS中調配的1 mg/kg之劑量的指示之經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸(表12)。對照組小鼠(n=3至4)僅投予PBS。在三天(72小時)後，將小鼠以在普及的細胞巨大病毒(CMV)啟動子序列的控制下編碼全長人類STAT3基因的DNA質體(25 μg)經流體動力學注射(HDI)。在引入DNA質體後一天，收集來自HDI小鼠的肝臟樣品。將源自該等HDI小鼠之總RNA進行qRT-PCR分析以測定STAT3 mRNA含量。
在圖14中的結果證明經設計以靶向人類STAT3 mRNA的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸抑制HDI小鼠中的人類STAT3 mRNA表現，如藉由來自以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理之HDI小鼠相對於僅以PBS處理之對照HDI小鼠的肝臟樣品中減少的人類STAT3 mRNA表現量來測定。
將圖14中測試的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸亞群在給藥研究中進一步驗證。特定言之，給藥研究係使用五種經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸(STAT3-426、STAT3-432、STAT3-1068、STAT3-1388和STAT3-2404)進行。將小鼠如上述經流體動力學注射且以0.3 mg/kg、1 mg/kg或3 mg/kg之寡核苷酸處理。在一天後收集肝臟，且測量人類STAT3表現以測定有效力的劑量(圖15)。1 mg/kg之劑量能夠降低約75%之STAT3 mRNA，由此識別出幾種用於抑制肝臟中的STAT3表現之潛在的經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸。將來自圖23之最好的2種序列及來自圖28之最好的序列在最終的HDI篩選中測試(圖16)。 實施例9：藉由經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸之特異性STAT3抑制作用
測量經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸抑制STAT3而不是家族成員(例如STAT1)之特異性。特定言之，將表現內源性STAT1之Huh7細胞以0.05 nM、0.3 nM或1 nM之經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸(STAT3-721、STAT3-1286和STAT3-1388)處理24小時，使用脂染胺作為轉染劑。與仿對照物(PBS；沒有脂染胺或siRNA)及UTR(未經轉染；以脂染胺處理，但是沒有siRNA)相比(表13及圖17)，測量剩餘的mRNA百分比(%)。STAT3-721和1286未調降人類STAT1，但是STAT3-1388調降人類STAT1 (表13)。寡核苷酸未調降STAT1表現，證明對STAT3有特異性，而對STAT1之脫靶效應有限。 實施例10：和檢查點抑制組合之STAT3抑制顯著地改進抗腫瘤功效
為了評估作為單一劑或和檢查點抑制劑組合之GalXC-STAT3-C18共軛體的性能，將抗PD-L1 mAb之Pan02腫瘤(2x10 6個細胞)植入6至8週齡C57BL/6小鼠中，且達到300至400 mm 3體積後，將小鼠進行隨機分組。小鼠經皮下接受作為單一劑或和10 mg/kg (i.p.)之抗PD-L1 mAb (抗小鼠PD-L1 mAb (B7-H1)，選植株10F.9G2)組合的25 mg/kg之單一劑量的GalXC-STAT3-C18-4123。小鼠先以間隔三天投予兩次劑量及兩週後以間隔三天再投予兩次劑量[(q3dx2)x2]。對照組係以作為單一劑或和抗PD-L1 mAb組合之GalXC-安慰劑治療，如以GalXC-STAT3-C18-4123化合物所述。在最後的劑量後兩週，重複相同的劑量方案。在整個研究期間以一週測量兩次腫瘤尺寸。
如圖18A所示，接受GalXC-安慰劑或GalXC-安慰劑+mAb治療的腫瘤繼續生長至相同的程度。然而，接受GalXC-STAT3之組在第一輪治療後證明抗腫瘤功效，但是儘管接受第二劑量，腫瘤還繼續生長。與單一劑治療相比，接受GalXC-STAT3和mAb的組合之組證明更顯著的腫瘤消退。這證明和檢查點抑制劑的組合療法可達成改進的抗腫瘤功效。
為了評鑑較大的腫瘤是否仍可能對組合治療有反應，將最初接受安慰劑治療的腫瘤(腫瘤平均約1000 mm 3)在第59天及第62天以GalXC-STAT3 (25 mg/kg)和mAb (10 mg/kg)的組合治療。在第一個給藥週期後一週內觀察到較大的腫瘤快速消退至約400 mm 3之初始尺寸(圖18B)，示意組合療法即使在大尺寸腫瘤中仍具有效應。 實施例11：在GalXC-STAT3和PD-L1 mAb的組合治療與腫瘤免疫表型之間的相關性
為確定組合功效樣式是否與腫瘤免疫表型一致，選擇具有不同表型的腫瘤類型植入小鼠中。選擇之腫瘤類型包括Pan02 (圖18A，檢查點抗性腫瘤)、4T1(三重陰性乳癌，檢查點抗性腫瘤)、MC-38(大腸惡性腫瘤，部分檢查點敏感性腫瘤)和Hepa1-6(肝細胞惡性腫瘤，檢查點敏感性腫瘤)。使Pan02(5e6細胞+基質膠(matrigel)，圖18A)、MC-38(5e6細胞)和Hepa1-6腫瘤(2e6細胞)在C57BL/6小鼠(7至8週齡)中生長，及4T1腫瘤(7至8週齡)在Balb/c小鼠中生長。當各腫瘤達到足夠的腫瘤體積時，將腫瘤分選及進行治療，如實施例5中所述。將4T1腫瘤以經皮下的GalXC-STAT3-C18-4123和抗PD-L1 mAb的組合、或單一劑GalXC-安慰劑、GalXC-STAT3-C18-4123、或GalXC-安慰劑和mAb的組合之各劑量以間隔三天(q3dx3)治療三次，如圖19A中所示。在整個研究期間以一週測量兩次腫瘤體積。將MC-38及Hepa1-6腫瘤以經皮下的GalXC-STAT3-C18-4123和抗PD-L1 mAb的組合、或單一劑GalXC-安慰劑、GalXC-STAT3-C18-4123、或GalXC-安慰劑和mAb的組合治療(2次劑量間隔3天，歷經2週)，如圖19B和19C所示。
組合治療證明在抗藥腫瘤類型中的協同功效，其中預期腫瘤在TME中具有非常少或沒有CD8+T細胞浸潤及更多的MDSC群(CD8 低MDSC 高)(圖18A和19A)。與單獨的檢查點治療相比，組合治療在部分敏感性腫瘤中顯示改進的功效，其中腫瘤具有略高的CD8+T細胞浸潤水平及適度的MDSC水平(CD8 適度MDSC 適度 / 高)(圖19B)。關注的是組合治療導致敏感性腫瘤完全消退(CD8 高MDSC 高)(圖19C)。當以GalXC-STAT3-C18-4123+抗PD-L1 mAb的組合治療時，具有較高水平的CD8+T細胞浸潤及MDSC之腫瘤完全根除。 實施例12：經治療調介之腫瘤消退及產生腫瘤特異性記憶
為了評估證明完全消退的組合治療是否亦導致在治療之小鼠中產生記憶T細胞，將圖19C中完全消退的腫瘤在第51天在小鼠的另一側腹上再挑戰Hep1-6細胞(2e6細胞)。如圖20中所示，即使在再挑戰後，所有小鼠皆維持無腫瘤狀態且在彼等的飼養及維持期間存活下來(~2個月)。該等數據證明組合治療之強大的治療性抗腫瘤功效，導致長期免疫記憶。 實施例13：經CD8+T細胞調介之組合功效亦具有穿孔素依賴性
為了評估以組合治療調介之功效是否經CD8+T細胞調介，在攜有4T1腫瘤之免疫功能不全裸鼠中重複圖19A中所述之功效研究。如圖19A中所示，在攜有免疫活性小鼠的腫瘤中以GalXC-STAT3-C18-4123加上抗PD-L1 mAb的組合治療有協同功效，但是在攜有4T1腫瘤的裸小鼠中未觀察到功效(圖21)，示意CD8+T細胞在調介抗腫瘤功效中有關鍵的角色。為了確認功效係由細胞毒性CD8+T細胞調介，將來自圖19A的研究之最終時間點的腫瘤樣品進行穿孔素染色。在接受組合治療的腫瘤中明顯更多的穿孔素陽性細胞群(如圖22中所示)顯示涉及調介功效之T細胞在本質上具有細胞毒性。 實施例14：組合治療對高轉移性腫瘤模式中的自發性腫瘤轉移之效應
為了評估組合治療是否降低自發性轉移性腫瘤模式中的轉移，將來自圖19A和21的研究之最終時間點的小鼠犧牲且拍攝肺部照片。如圖23中所示，來自單一劑或安慰劑治療的Balb/c小鼠之肺顯示腫瘤轉移遍及整個器官，而以組合治療(GalXC-STAT3-C18-4123+抗PD-L1 mAb)投予之小鼠顯示在全部五隻小鼠之肺中沒有可見的轉移，示意治療不僅降低局部腫瘤生長，如圖中所示，且亦降低肺的自發性轉移。在裸小鼠中重複相同的實驗，亦如圖23中所示。所有的肺(包括那些來自接受組合治療的小鼠之肺)皆有腫瘤轉移，進一步證實CD8+T細胞在抗腫瘤功效中的角色。 實施例15：在腫瘤中經治療調介之免疫調節
為了理解GalXC-STAT3-C18-4123和抗PD-L1 mAb之組合治療如何改變腫瘤中的免疫概況，將CT26腫瘤植入Balb/c小鼠中。該等腫瘤對檢查點抑制劑具有部分敏感性且具有與MC38 (CD8 適度MDSC 適度 / 高)類似的概況。當腫瘤達到足夠的尺寸時，將腫瘤以GalXC-安慰劑、GalXC-STAT3-C18-4123、GalXC-安慰劑+抗PD-L1 mAb、或GalXC-STAT3-C18-4123+抗PD-L1 mAb (q3d x 2，25 mg/kg或10 mg/kg)處理。在最後的劑量後七天，收集腫瘤，進行均質化且執行nanostring分析(自石蠟包埋之樣品提取mRNA，且經由ncounter RMouse Pancancer IO 360 TMPanel (Nanostring Technologies，Seattle, WA)分析mRNA表現)。
與單一劑或GalXC-安慰劑、抗PD-L1 mAb治療相比，分析顯示在組合治療後減少在本質上具有抑制性之基因(檢查點、經STAT3調介之基因、抑制性細胞激素/化學激素、血管生成&基質重塑相關基因)及增加有利於T細胞活化之基因(涉及T細胞遷移、活化、記憶及細胞毒性之基因)，示意組合治療正自抑制性TME改變至對T細胞浸潤有利的TME (圖24)。 序列表
[圖1A]提供與寡核苷酸分子共軛以產生寡核苷酸-配體共軛體之具有以GalNAc (上圖)或脂質(例如C18烴鏈)(下圖)的化學修飾之RNAi寡核苷酸分子的結構。
[圖1B]提供適合與RNAi寡核苷酸分子共軛之脂質尾部的結構。
[圖2A和2B]為顯示以靶向不同的Stat3 mRNA區域之GalXC-STAT3-共軛體(GalNAc共軛體)處理之小鼠肝臟中剩餘的小鼠Stat3 mRNA含量的圖。小鼠被投予單一劑量(3 mg/kg)(圖2A)或不同劑量(0.3、1.0或3.0 mg/kg)以測定劑量反應性(圖2B)。箭頭表示選擇用於進一步研究的構築體。
[圖3A和3B]為顯示在以GalXC-STAT3-C18共軛體處理後3天，在源自植入小鼠中的Pan02異種移植物之G-MDSC及M-MDSC中的小鼠Stat3 mRNA表現的圖。將腫瘤以25 mg/kg (圖3A)和50 mg/kg (圖3B)給藥。
[圖4A和4B]為顯示在以25和50 mg/kg劑量之GalXC-STAT3-C18共軛體處理Pan02異種移植小鼠後，在大塊腫瘤(TME)(圖4A)和腫瘤引流淋巴結(TdLN)(圖4B)中的小鼠Stat3 mRNA表現的圖。
[圖5A]提供顯示在25或50 mg/kg劑量之共軛寡核苷酸後3天，GalXC-STAT3-C18-4123對Pan02異種移植小鼠之TME和TdLN中的G/M-MDSC之Stat3和Pdl1 mRNA含量之效應的圖。
[圖5B]提供顯示在25 mg/kg劑量的共軛寡核苷酸後7天，GalXC-STAT3-C18-4123對Pan02異種移植小鼠之TdLN中的Stat3和Pdl1 mRNA含量之效應的圖。
[圖6A和6B]為顯示在攜有Pan02鼠類胰臟腫瘤之免疫活性小鼠中以50 mg/kg總劑量之GalXC-STAT3-C18-4123的皮下處理隨時間對腫瘤體積之活體內效應的圖。將小鼠以四個12.5 mg/kg (圖6A)或兩個25 mg/kg (圖6B)劑量之共軛寡核苷酸處理。
[圖7]提供描述在以靶向STAT3基因之各種區域的1 nM之DsiRNA處理24小時後，在內源性表現人類STAT3之Huh7細胞中剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)的圖。設計及篩選192個 DsiRNA。使用兩個引子對。在樣品之間的表現使用HPRT及SFRS9持家基因標準化(正向1- SEQ ID NO：1219，反向1- SEQ ID NO：1220；探針1- SEQ ID NO：1221；正向2- SEQ ID NO：1222，反向2- SEQ ID NO：1223；探針2- SEQ ID NO：1224)。
圖8A和8B提供描述在以靶向STAT3基因之各種區域的0.05 nM、0.3 nM或1 nM之DsiRNA處理24小時後，在內源性表現人類STAT3之Huh7細胞中剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)的圖。48個經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸於圖8A中檢定且選擇該等寡核苷酸中之34個用於進一步的活體內測試(圖8B)。
圖9A和9B提供描述在經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，在內源性表現人類STAT3之小鼠肝臟中(流體動力學注射(hydrodynamic injection)模式)剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)的圖。將小鼠以PBS中調配之1 mg/kg的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後三天，將小鼠以編碼人類STAT3之DNA質體經流體動力學注射(HDI)。人類STAT3 mRNA含量係自注射後 18小時收集之肝臟測定。箭頭表示選擇用於劑量反應分析之寡核苷酸。Hs/Mf =人類/猴子共同序列；Hs/Mm=人類/小鼠共同序列；Hs/Mf/Mm=人類/猴子/小鼠三重共同序列。
圖10提供描述經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸的劑量反應的圖。在以兩個不同劑量(0.3 mg/kg或1 mg/kg)的經人類GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，測量在內源性表現STAT3之小鼠肝臟中(HDI模式)剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)。人類STAT3 mRNA含量係自以編碼人類STAT3之質體注射後18小時收集之肝臟測定。箭頭表示選擇用於劑量反應分析之寡核苷酸。Hs/Mf=人類/猴子共同序列；Hs/Mm=人類/小鼠共同序列。
圖11提供描述在以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，在內源性表現小鼠STAT3之小鼠肝臟中剩餘的標準化(相對Ppib)之相對小鼠STAT3 mRNA的圖。將小鼠以PBS中調配之3 mg/kg的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後五天，收集肝臟且測定小鼠STAT3 mRNA含量。箭頭表示頂部寡核苷酸且選擇用於劑量反應研究之寡核苷酸。
圖12提供描述在以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，在內源性表現小鼠STAT3之小鼠肝臟中剩餘的標準化(相對Ppib)之相對小鼠STAT3 mRNA的圖。將小鼠以PBS中調配之3 mg/kg的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後五天，收集肝臟且測定小鼠STAT3 mRNA含量。箭頭表示選擇用於劑量反應研究之寡核苷酸。
圖13A和13B提供描述經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸的劑量反應的圖。在以三種劑量(0.3 mg/kg、1 mg/kg和3 mg/kg)的經人類GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，測量在內源性表現STAT3之小鼠肝臟中剩餘的小鼠STAT3 mRNA百分比(%)。小鼠STAT3 mRNA含量係自5天後收集之肝臟測定。TC=三重共同序列(小鼠/人類/猴子)；Hs/Mm=人類/小鼠。
圖14提供描述在以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，在內源性表現人類STAT3之小鼠肝臟中(流體動力學注射模式)剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)的圖。將小鼠以PBS中調配之1 mg/kg的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後三天，將小鼠以編碼人類STAT3之DNA質體經流體動力學注射(HDI)。人類STAT3 mRNA含量係自注射後18小時收集之肝臟測定。箭頭表示選擇用於劑量反應研究之寡核苷酸。
圖15提供描述經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸的劑量反應的圖。在以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，測量在內源性表現人類STAT3之小鼠肝臟中(流體動力學注射模式)剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)。將小鼠以PBS中調配之三種劑量(0.3 mg/kg、1 mg/kg和3 mg/kg)的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後三天，將小鼠以編碼人類STAT3之DNA質體經流體動力學注射(HDI)。人類STAT3 mRNA含量係自注射後18小時收集之肝臟測定。TC=三重共同序列(小鼠/人類/猴子)；Hs/Mm=人類/小鼠；Hs=人類。
圖16提供描述經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸的劑量反應的圖。在以經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理後，測量在內源性表現人類STAT3之小鼠肝臟中(流體動力學注射模式)剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)。將小鼠以PBS中調配之兩種劑量(0.3 mg/kg和1mg/kg)的指示之GalNAc-STAT3寡核苷酸經皮下給藥。在給藥後三天，將小鼠以編碼人類STAT3之DNA質體經流體動力學注射(HDI)。人類STAT3 mRNA含量係自注射後18小時收集之肝臟測定。
圖17提供描述在經GalNAc共軛之STAT3寡核苷酸處理之內源性表現人類STAT3及STAT1之Huh7細胞中剩餘的人類STAT3 mRNA百分比(%)的圖。將細胞以三種劑量(0.05 nM、0.3 nM和1 nM)之寡核苷酸處理24小時。
圖18A提供描述在投予單獨或和抗PD-L1 mAb組合之GalXC-STAT3-C18寡核苷酸後之腫瘤體積的圖。將攜有Pan02鼠類胰臟腫瘤之免疫活性小鼠經皮下(s.c.)以25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123與經腹膜內(i.p.)處理的10 mg/kg之抗PD-L1 mAb給藥。對照物包括GalXC-安慰劑(具有與GalXC-STAT3寡核苷酸相同的化學及脂質共軛之HBV siRNA)、和10 mg/kg之抗PD-L1 mAb組合的25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或25 mg/kg之GalXC-安慰劑。小鼠先以間隔三天投予兩次劑量及兩週後以間隔三天再投予兩次劑量[(q3dx2)x2]。箭頭表示投予劑量的天數。
圖18B提供描述在投予GalXC-STAT3-C18寡核苷酸和抗PD-L1 mAb的組合後之腫瘤體積的圖。將來自圖18A的經安慰劑處理之小鼠在第59天經皮下(s.c.)以25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123與經腹膜內(i.p.)處理的10 mg/kg之抗PD-L1 mAb投予。
圖19A至19C提供描述在具有不同的免疫表現型之腫瘤中以單獨或和抗PD-L1 mAb組合之GalXC-STAT3-C18寡核苷酸、或以單獨或和抗PD-L1 mAb組合之GalXC-安慰劑投予後之腫瘤體積的圖。將4T1 (三重陰性乳癌，檢查點抗性)(圖19A)、MC-38 (結腸惡性腫瘤，部分檢查點敏感性)(圖19B)或Hepa1-6 (肝細胞惡性腫瘤，檢查點敏感性)(圖19C)細胞植入小鼠中。將攜有腫瘤之小鼠經s.c.以25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123與經i.p.處理的10 mg/kg之抗PD-L1 mAb給藥。對照物包括GalXC-安慰劑、和10 mg/kg之抗PD-L1 mAb組合之25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或25 mg/kg之GalXC-安慰劑。將攜有MC-38及Hepa1-6腫瘤之小鼠以間隔三天投予兩次25 mg/kg劑量及下一週重複相同的方案。將攜有4T1腫瘤之小鼠以每間隔三天投予三次劑量(q3d x 3)。箭頭(5/5 CR)=所有經治療之小鼠皆為完全反應者。
圖20提供描述在完全根除的腫瘤中再挑戰Hepa1-6之效應的圖。在所有5隻小鼠中的腫瘤以圖19C中的GalXC-STAT3-C18 (25 mg/kg，s.c.)及抗PD-L1 mAb (10 mg/kg，i.p.)處理而完全消退後，小鼠在第51天在小鼠的另一側腹上以Hepa1-6細胞(2e6個細胞/小鼠)再挑戰且監測腫瘤體積(圖20)。箭頭(5/5 CR)=所有經治療之小鼠即使在再挑戰後仍沒有腫瘤。
圖21提供描述在沒有功能性CD8+T細胞的免疫功能不全小鼠中以單獨或和抗PD-L1 mAb組合投予GalXC-STAT3-C18寡核苷酸後之腫瘤體積的圖。將攜有4T1腫瘤的小鼠經s.c.以GalXC-STAT3-C18-4123 (25 mg/kg，三次，各劑量間隔三天(q3dx3))及經i.p.以抗PD-L1 mAb (10 mg/kg，q3dx3)給藥。對照物包括GalXC-安慰劑、和10 mg/kg之抗PD-L1 mAb組合之25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或25 mg/kg之GalXC-安慰劑。
圖22提供顯示來自圖19A中檢定之小鼠的腫瘤外觀(連同死亡細胞)的影像及在研究結束時在腫瘤中的陽性細胞毒性CD8+T細胞之穿孔素染色。
圖23提供顯示在投予單獨或和抗PD-L1 mAb組合之GalXC-STAT3-C18-4123寡核苷酸後(如圖19A和21中的處理)之肺腫瘤轉移的影像。將攜有4T1腫瘤的小鼠(免疫活性或免疫功能不全)經s.c.以GalXC-STAT3-C18-4123 (50 mg/kg，q3dx3)及經i.p.以抗PD-L1 mAb (10 mg/kg，q3dx3)給藥。對照物包括GalXC-安慰劑、和10 mg/kg之抗PD-L1 mAb組合之50 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或50 mg/kg之GalXC-安慰劑。
圖24提供顯示與包括GalXC-安慰劑、和10 mg/kg之抗PD-L1 mAb組合之25 mg/kg之GalXC-STAT3-C18-4123或25 mg/kg之GalXC-安慰劑的對照物相比，在GalXC-STAT3-C18-4123 (s.c.，25 mg/kg，q3dx3)和抗PD-L1 mAb (i.p.，10 mg/kg，q3dx3)的組合治療後，涉及在CT26腫瘤中觀察到的免疫調節之標靶調節的熱圖。
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Claims (161)

  1. 一種治療已接受或正接受PD-L1抑制劑之個體的癌症之方法，該方法包含投予RNAi寡核苷酸，該RNAi寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中該反義股及有義股形成雙股螺旋區域(duplex region)，其中該反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療該個體的癌症。
  2. 一種治療已接受或正接受RNAi寡核苷酸之個體的癌症之方法，該方法包含投予PD-L1抑制劑，其中該寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中該反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中該反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療該個體的癌症。
  3. 一種治療與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症之方法，其包含對有其需要的個體投予RNAi寡核苷酸，其中該個體已接受或正接受PD-L1抑制劑，其中該寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中該反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中該反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域為至少15個連續核苷酸長度，由此治療該個體的癌症。
  4. 如請求項3之方法，其中該與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症為癌症。
  5. 如請求項1至2及4中任一項之方法，其中該癌症係選自惡性腫瘤、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、及白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌(HCC)、大腸直腸癌、胰臟癌和神經膠母細胞瘤。
  6. 如請求項1至2及4至5中任一項之方法，其中該癌症包含免疫抑制性腫瘤微環境。
  7. 如請求項1至2及4至5中任一項之方法，其中該癌症包含發炎型腫瘤微環境。
  8. 如請求項7之方法，其中該發炎型腫瘤微環境包含浸潤性T細胞。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該PD-L1抑制劑為抗體。
  10. 如請求項9之方法，其中該抗體為抗PD-L1抗體。
  11. 如請求項10之方法，其中該抗PDL1抗體係選自FAZ053、阿特珠單抗(atezolizumab)、艾維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、恩伐利單抗(envafolimab)和BMS-936559。
  12. 如請求項9之方法，其中該抗體為抗PD-1抗體。
  13. 如請求項12之方法，其中該抗PD-1抗體係選自尼沃魯單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)和西米普利單抗(cemiplimab)。
  14. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該PD-L1抑制劑為小分子抑制劑。
  15. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該PD-L1抑制劑為肽。
  16. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該PD-L1抑制劑為核酸分子。
  17. 如請求項16之方法，其中該核酸分子係選自反義寡核苷酸、siRNA或miRNA。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，其中該STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：89至280中任一者。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該互補區域係與該STAT3 mRNA靶序列完全互補。
  20. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該互補區域包含不超過4個與該STAT3 mRNA靶序列之失配。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該反義股為19至27個核苷酸長度。
  22. 如請求項1至21中任一項之方法，其中該反義股為21至27個核苷酸長度，視需要地其中該反義股為22個核苷酸長度。
  23. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該有義股為19至40個核苷酸長度，視需要地其中該有義股為36個核苷酸長度。
  24. 如請求項1至23中任一項之方法，其中該雙股螺旋區域為至少19個核苷酸長度。
  25. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該雙股螺旋區域為至少20個核苷酸長度，視需要地其中該雙股螺旋區域為21個核苷酸長度。
  26. 如請求項1至25中任一項之方法，其中該與STAT3的互補區域為至少19個連續核苷酸長度。
  27. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該與STAT3的互補區域為至少21個連續核苷酸長度。
  28. 如請求項1至27中任一項之方法，其中該有義股包含在其3’端如以下列出之主幹-環圈(stem-loop)：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成介於S1與S2之間的3至5個核苷酸長度之環圈。
  29. 如請求項28之方法，其中L為四鹼基環圈(tetraloop)，視需要地其中L為4個核苷酸長度。
  30. 如請求項28或29之方法，其中L包含如GAAA所列出之序列。
  31. 如請求項1至30中任一項之方法，其中該反義股包含一或多個核苷酸長度之3’突出序列，視需要地其中該3’突出序列為2個核苷酸長度，視需要地其中該3’突出序列為GG。
  32. 如請求項1至31中任一項之方法，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。
  33. 如請求項32之方法，其中該經修飾之核苷酸包含2’-修飾。
  34. 如請求項33之方法，其中該2’-修飾為選自2’-胺乙基、2’-氟、2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸之修飾。
  35. 如請求項33至34中任一項之方法，其中該有義股之該核苷酸的約10至15%、10%、11%、12%、13%、14%或15%包含2’-氟修飾。
  36. 如請求項33至35中任一項之方法，其中該反義股之該核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%包含2’-氟修飾。
  37. 如請求項33至36中任一項之方法，其中該寡核苷酸之該核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%包含2’-氟修飾。
  38. 如請求項33至37中任一項之方法，其中該有義股包含自5’至3’之具有位置1至36的36個核苷酸，其中位置8至11包含2’-氟修飾。
  39. 如請求項33至38中任一項之方法，其中該反義股包含自3’至5’之具有位置1至22的22個核苷酸，且其中位置2、3、4、5、7、10和14包含2’-氟修飾。
  40. 如請求項33至39中任一項之方法，其中該其餘核苷酸包含2’-O-甲基修飾。
  41. 如請求項33至40中任一項之方法，其中該寡核苷酸之所有的該核苷酸皆經修飾。
  42. 如請求項1至41中任一項之方法，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。
  43. 如請求項42之方法，其中該至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
  44. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該反義股之該5’-核苷酸的糖之4’-碳包含磷酸酯類似物。
  45. 如請求項44之方法，其中該磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯。
  46. 如請求項44之方法，其中該磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯。
  47. 如請求項1至46中任一項之方法，其中該寡核苷酸之至少一個核苷酸係與一或多個靶向配體共軛。
  48. 如請求項47之方法，其中該核苷酸係與一個以上的靶向配體共軛，其中該靶向配體為相同或不同的。
  49. 如請求項47或48之方法，其中該一或多個靶向配體係選自碳水化合物、胺糖、膽固醇、多肽或脂質。
  50. 如請求項47或48之方法，其中該一或多個靶向配體為飽和或不飽和脂肪酸部分。
  51. 如請求項47或48之方法，其中該靶向配體為飽和脂肪酸部分，其大小範圍為C10至C24長度。
  52. 如請求項51之方法，其中該靶向配體為C16飽和脂肪酸部分。
  53. 如請求項51之方法，其中該靶向配體為C18飽和脂肪酸部分。
  54. 如請求項51之方法，其中該靶向配體為C22飽和脂肪酸部分。
  55. 如請求項47或48之方法，其中該靶向配體包含N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。
  56. 如請求項55之方法，其中該GalNAc部分為單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。
  57. 如請求項28至48中任一項之方法，其中該主幹-環圈之L的至多4個核苷酸分別與單價GalNAc部分共軛。
  58. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含如以SEQ ID NO：857至946所列出之序列。
  59. 如請求項1至58中任一項之方法，其中該反義股包含如以SEQ ID NO：947至1036所列出之序列。
  60. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70。
  61. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：861和951； (b) 分別為SEQ ID NO：857和947； (c) 分別為SEQ ID NO：858和948； (d) 分別為SEQ ID NO：859和949； (e) 分別為SEQ ID NO：860和950； (f) 分別為SEQ ID NO：862和952； (g) 分別為SEQ ID NO：863和953； (h) 分別為SEQ ID NO：864和954； (i) 分別為SEQ ID NO：865和955； (j) 分別為SEQ ID NO：866和956； (k) 分別為SEQ ID NO：867和957； (l) 分別為SEQ ID NO：868和958； (m) 分別為SEQ ID NO：869和959； (n) 分別為SEQ ID NO：870和960； (o) 分別為SEQ ID NO：871和961； (p) 分別為SEQ ID NO：872和962； (q) 分別為SEQ ID NO：873和963； (r) 分別為SEQ ID NO：874和964； (s) 分別為SEQ ID NO：875和965； (t) 分別為SEQ ID NO：876和966； (u) 分別為SEQ ID NO：877和967； (v) 分別為SEQ ID NO：878和968； (w) 分別為SEQ ID NO：879和969； (x) 分別為SEQ ID NO：880和970； (y) 分別為SEQ ID NO：881和971； (z) 分別為SEQ ID NO：882和972； (aa) 分別為SEQ ID NO：883和973； (bb) 分別為SEQ ID NO：884和974； (cc) 分別為SEQ ID NO：885和975； (dd) 分別為SEQ ID NO：886和976； (ee) 分別為SEQ ID NO：887和977； (ff) 分別為SEQ ID NO：888和978； (gg) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (hh) 分別為SEQ ID NO：896和986；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
  62. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：862之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：952之核苷酸序列。
  63. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：875之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：965之核苷酸序列。
  64. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：876之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：966之核苷酸序列。
  65. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：920之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1010之核苷酸序列。
  66. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979。
  67. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029。
  68. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
  69. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：11、39、67和71中任一者之核苷酸序列。
  70. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該反義股包含SEQ ID NO：12、40、68和72中任一者之核苷酸序列。
  71. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：11和12； (b) 分別為SEQ ID NO：39和40； (c) 分別為SEQ ID NO：67和68；及 (d) 分別為SEQ ID NO：71和72。
  72. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含選自SEQ ID NO：1042、1055、1056和1100之核苷酸序列。
  73. 如請求項1至57及72中任一項之方法，其中該反義股包含選自SEQ ID NO：1132、1145、1146和1190之核苷酸序列。
  74. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1041和1131； (b) 分別為SEQ ID NO：1037和1127； (c) 分別為SEQ ID NO：1038和1128； (d) 分別為SEQ ID NO：1039和1129； (e) 分別為SEQ ID NO：1040和1130； (f) 分別為SEQ ID NO：1042和1132； (g) 分別為SEQ ID NO：1043和1133； (h) 分別為SEQ ID NO：1044和1134； (i) 分別為SEQ ID NO：1045和1135； (j) 分別為SEQ ID NO：1046和1136； (k) 分別為SEQ ID NO：1047和1137； (l) 分別為SEQ ID NO：1048和1138； (m) 分別為SEQ ID NO：1049和1139； (n) 分別為SEQ ID NO：1050和1140； (o) 分別為SEQ ID NO：1051和1141； (p) 分別為SEQ ID NO：1052和1142； (q) 分別為SEQ ID NO：1053和1143； (r) 分別為SEQ ID NO：1054和1144； (s) 分別為SEQ ID NO：1055和1145； (t) 分別為SEQ ID NO：1056和1146； (u) 分別為SEQ ID NO：1057和1147； (v) 分別為SEQ ID NO：1058和1148； (w) 分別為SEQ ID NO：1059和1149； (x) 分別為SEQ ID NO：1060和1150； (y) 分別為SEQ ID NO：1061和1151； (z) 分別為SEQ ID NO：1062和1152； (aa) 分別為SEQ ID NO：1063和1153； (bb) 分別為SEQ ID NO：1064和1154； (cc) 分別為SEQ ID NO：1065和1155； (dd) 分別為SEQ ID NO：1066和1156； (ee) 分別為SEQ ID NO：1067和1157； (ff) 分別為SEQ ID NO：1068和1158； (gg) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (hh) 分別為SEQ ID NO：1076和1166；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
  75. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：1042之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1132之核苷酸序列。
  76. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：1055之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1145之核苷酸序列。
  77. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：1056之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1146之核苷酸序列。
  78. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股包含SEQ ID NO：1100之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1190之核苷酸序列。
  79. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1081和1171； (b) 分別為SEQ ID NO：1090和1180； (c) 分別為SEQ ID NO：1079和1169； (d) 分別為SEQ ID NO：1076和1166； (e) 分別為SEQ ID NO：1072和1162； (f) 分別為SEQ ID NO：1070和1160；及 (g) 分別為SEQ ID NO：1069和1159。
  80. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (b) 分別為SEQ ID NO：1117和1207；及 (c) 分別為SEQ ID NO：1119和1209。
  81. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1095和1185； (b) 分別為SEQ ID NO：1104和1194； (c) 分別為SEQ ID NO：1093和1183；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
  82. 一種包含RNAi寡核苷酸、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單之套組，該藥品仿單包含對已接受或正接受PD-L1抑制劑之有其需要的個體投予該寡核苷酸之用法說明，其中該寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中該反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中該反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域為至少15個連續核苷酸長度。
  83. 一種包含PD-L1抑制劑、視需要的醫藥上可接受的載劑及藥品仿單之套組，該藥品仿單包含對已接受或正接受RNAi寡核苷酸之有其需要的個體投予抗體之用法說明，該寡核苷酸包含15至30個核苷酸長度之反義股及15至40個核苷酸長度之有義股，其中該反義股及有義股形成雙股螺旋區域，其中該反義股包含與STAT3 mRNA靶序列的互補區域，且其中該互補區域為至少15個連續核苷酸長度。
  84. 如請求項82或83之套組，其中該個體患有與活化之STAT3表現相關聯的疾病、疾患或病症。
  85. 如請求項82至84中任一項之套組，其中該個體患有癌症。
  86. 如請求項85之套組，其中該癌症係選自惡性腫瘤、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、及白血病、前列腺癌、乳癌、肝細胞癌(HCC)、大腸直腸癌、胰臟癌和神經膠母細胞瘤。
  87. 如請求項82至86中任一項之套組，其中該癌症包含免疫抑制性腫瘤微環境。
  88. 如請求項82至86中任一項之套組，其中該癌症包含發炎型腫瘤微環境。
  89. 如請求項88之套組，其中該發炎型腫瘤微環境包含浸潤性T細胞。
  90. 如請求項82至89中任一項之套組，其中該PD-L1抑制劑為抗體。
  91. 如請求項90之套組，其中該抗體為抗PD-L1抗體。
  92. 如請求項91之套組，其中該抗PDL1抗體係選自FAZ053、阿特珠單抗、艾維魯單抗、德瓦魯單抗、恩伐利單抗和BMS-936559。
  93. 如請求項90之套組，其中該抗體為抗PD-1抗體。
  94. 如請求項93之套組，其中該抗PD-1抗體係選自尼沃魯單抗、帕博利珠單抗和西米普利單抗。
  95. 如請求項82至89中任一項之套組，其中該PD-L1抑制劑為小分子抑制劑。
  96. 如請求項82至89中任一項之套組，其中該PD-L1抑制劑為肽。
  97. 如請求項82至89中任一項之套組，其中該PD-L1抑制劑為核酸分子。
  98. 如請求項82至89中任一項之套組，其中該核酸分子係選自反義寡核苷酸、siRNA或miRNA。
  99. 如請求項82至94中任一項之套組，其中該STAT3 mRNA靶序列包含SEQ ID NO：89-280中任一者。
  100. 如請求項82至99中任一項之套組，其中該互補區域係與該STAT3 mRNA靶序列完全互補。
  101. 如請求項82至99中任一項之套組，其中該互補區域包含不超過4個與該STAT3 mRNA靶序列之失配。
  102. 如請求項82至101中任一項之套組，其中該反義股為19至27個核苷酸長度。
  103. 如請求項82至102中任一項之套組，其中該反義股為21至27個核苷酸長度，視需要地其中該反義股為22個核苷酸長度。
  104. 如請求項82至103中任一項之套組，其中該有義股為19至40個核苷酸長度，視需要地其中該有義股為36個核苷酸長度。
  105. 如請求項82至104中任一項之套組，其中該雙股螺旋區域為至少19個核苷酸長度。
  106. 如請求項82至105中任一項之套組，其中該雙股螺旋區域為至少20個核苷酸長度，視需要地其中該雙股螺旋區域為21個核苷酸長度。
  107. 如請求項82至106中任一項之套組，其中該與STAT3的互補區域為至少19個連續核苷酸長度。
  108. 如請求項82至107中任一項之套組，其中該與STAT3的互補區域為至少21個連續核苷酸長度。
  109. 如請求項82至108中任一項之套組，其中該有義股包含在其3’端如以下列出之主幹-環圈：S1-L-S2，其中S1係與S2互補，且其中L形成介於S1與S2之間的3至5個核苷酸長度之環圈。
  110. 如請求項109之套組，其中L為四鹼基環圈，視需要地其中L為4個核苷酸長度。
  111. 如請求項109或110之套組，其中L包含如GAAA所列出之序列。
  112. 如請求項82至111中任一項之套組，其中該反義股包含一或多個核苷酸長度之3’突出序列，視需要地其中該3’突出序列為2個核苷酸長度，視需要地其中該3’突出序列為GG。
  113. 如請求項82至112中任一項之套組，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。
  114. 如請求項113之套組，其中該經修飾之核苷酸包含2’-修飾。
  115. 如請求項114之套組，其中該2’-修飾為選自2’-胺乙基、2’-氟、2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基和2’-去氧-2’-氟-β-d-阿拉伯核酸之修飾。
  116. 如請求項114至115中任一項之套組，其中該有義股之該核苷酸的約10至15%、10%、11%、12%、13%、14%或15%包含2’-氟修飾。
  117. 如請求項114至116中任一項之套組，其中該反義股之該核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%包含2’-氟修飾。
  118. 如請求項114至117中任一項之套組，其中該寡核苷酸之該核苷酸的約25至35%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%或35%包含2’-氟修飾。
  119. 如請求項114至118中任一項之套組，其中該有義股包含自5’至3’之具有位置1至36的36個核苷酸，其中位置8至11包含2’-氟修飾。
  120. 如請求項114至119中任一項之套組，其中該反義股包含自3’至5’之具有位置1至22的22個核苷酸，且其中位置2、3、4、5、7、10和14包含2’-氟修飾。
  121. 如請求項114至120中任一項之套組，其中該其餘核苷酸包含2’-O-甲基修飾。
  122. 如請求項114至121中任一項之套組，其中該寡核苷酸之所有的該核苷酸皆經修飾。
  123. 如請求項82至122中任一項之套組，其中該寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。
  124. 如請求項123之套組，其中該至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
  125. 如請求項82至124中任一項之套組，其中該反義股之該5’-核苷酸的糖之4’-碳包含磷酸酯類似物。
  126. 如請求項125之套組，其中該磷酸酯類似物為氧甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯。
  127. 如請求項82至126中任一項之套組，其中該寡核苷酸之至少一個核苷酸係與一或多個靶向配體共軛。
  128. 如請求項127之套組，其中該核苷酸係與一個以上的靶向配體共軛，其中該靶向配體為相同或不同的。
  129. 如請求項127或128之套組，其中該一或多個靶向配體係選自碳水化合物、胺糖、膽固醇、多肽或脂質。
  130. 如請求項127或128之套組，其中該一或多個靶向配體為飽和或不飽和脂肪酸部分。
  131. 如請求項127或128之套組，其中該靶向配體為飽和脂肪酸部分，其大小範圍為C10至C24長度。
  132. 如請求項131之套組，其中該靶向配體為C16飽和脂肪酸部分。
  133. 如請求項131之套組，其中該靶向配體為C18飽和脂肪酸部分。
  134. 如請求項131之套組，其中該靶向配體為C22飽和脂肪酸部分。
  135. 如請求項127或128之套組，其中該靶向配體包含N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。
  136. 如請求項135之套組，其中該GalNAc部分為單價GalNAc部分、二價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。
  137. 如請求項109至129中任一項之套組，其中該主幹-環圈之L的至多4個核苷酸分別與單價GalNAc部分共軛。
  138. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含如以SEQ ID NO：857至946所列出之序列。
  139. 如請求項82至138中任一項之套組，其中該反義股包含如以SEQ ID NO：947至1036所列出之序列。
  140. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：9和10； (b) 分別為SEQ ID NO：37和38； (c) 分別為SEQ ID NO：65和66；及 (d) 分別為SEQ ID NO：69和70。
  141. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：861和951； (b) 分別為SEQ ID NO：857和947； (c) 分別為SEQ ID NO：858和948； (d) 分別為SEQ ID NO：859和949； (e) 分別為SEQ ID NO：860和950； (f) 分別為SEQ ID NO：862和952； (g) 分別為SEQ ID NO：863和953； (h) 分別為SEQ ID NO：864和954； (i) 分別為SEQ ID NO：865和955； (j) 分別為SEQ ID NO：866和956； (k) 分別為SEQ ID NO：867和957； (l) 分別為SEQ ID NO：868和958； (m) 分別為SEQ ID NO：869和959； (n) 分別為SEQ ID NO：870和960； (o) 分別為SEQ ID NO：871和961； (p) 分別為SEQ ID NO：872和962； (q) 分別為SEQ ID NO：873和963； (r) 分別為SEQ ID NO：874和964； (s) 分別為SEQ ID NO：875和965； (t) 分別為SEQ ID NO：876和966； (u) 分別為SEQ ID NO：877和967； (v) 分別為SEQ ID NO：878和968； (w) 分別為SEQ ID NO：879和969； (x) 分別為SEQ ID NO：880和970； (y) 分別為SEQ ID NO：881和971； (z) 分別為SEQ ID NO：882和972； (aa) 分別為SEQ ID NO：883和973； (bb) 分別為SEQ ID NO：884和974； (cc) 分別為SEQ ID NO：885和975； (dd) 分別為SEQ ID NO：886和976； (ee) 分別為SEQ ID NO：887和977； (ff) 分別為SEQ ID NO：888和978； (gg) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (hh) 分別為SEQ ID NO：896和986；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
  142. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：862之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：952之核苷酸序列。
  143. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：875之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：965之核苷酸序列。
  144. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：876之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：966之核苷酸序列。
  145. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：920之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1010之核苷酸序列。
  146. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：901和991； (b) 分別為SEQ ID NO：910和1000； (c) 分別為SEQ ID NO：899和989； (d) 分別為SEQ ID NO：896和986； (e) 分別為SEQ ID NO：892和982； (f) 分別為SEQ ID NO：890和980；及 (g) 分別為SEQ ID NO：889和979。
  147. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股和反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：940和1030； (b) 分別為SEQ ID NO：937和1027；及 (c) 分別為SEQ ID NO：939和1029。
  148. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股和反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：915和1005； (b) 分別為SEQ ID NO：924和1014； (c) 分別為SEQ ID NO：913和1003；及 (d) 分別為SEQ ID NO：920和1010。
  149. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：11、39、67和71中任一者之核苷酸序列。
  150. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該反義股包含SEQ ID NO：12、40、68和72中任一者之核苷酸序列。
  151. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：11和12； (b) 分別為SEQ ID NO：39和40； (c) 分別為SEQ ID NO：67和68；及 (d) 分別為SEQ ID NO：71和72。
  152. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含選自SEQ ID NO：1042、1055、1056和1100之核苷酸序列。
  153. 如請求項82至137及152中任一項之套組，其中該反義股包含選自SEQ ID NO：1132、1145、1146和1190之核苷酸序列。
  154. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1041和1131； (b) 分別為SEQ ID NO：1037和1127； (c) 分別為SEQ ID NO：1038和1128； (d) 分別為SEQ ID NO：1039和1129； (e) 分別為SEQ ID NO：1040和1130； (f) 分別為SEQ ID NO：1042和1132； (g) 分別為SEQ ID NO：1043和1133； (h) 分別為SEQ ID NO：1044和1134； (i) 分別為SEQ ID NO：1045和1135； (j) 分別為SEQ ID NO：1046和1136； (k) 分別為SEQ ID NO：1047和1137； (l) 分別為SEQ ID NO：1048和1138； (m) 分別為SEQ ID NO：1049和1139； (n) 分別為SEQ ID NO：1050和1140； (o) 分別為SEQ ID NO：1051和1141； (p) 分別為SEQ ID NO：1052和1142； (q) 分別為SEQ ID NO：1053和1143； (r) 分別為SEQ ID NO：1054和1144； (s) 分別為SEQ ID NO：1055和1145； (t) 分別為SEQ ID NO：1056和1146； (u) 分別為SEQ ID NO：1057和1147； (v) 分別為SEQ ID NO：1058和1148； (w) 分別為SEQ ID NO：1059和1149； (x) 分別為SEQ ID NO：1060和1150； (y) 分別為SEQ ID NO：1061和1151； (z) 分別為SEQ ID NO：1062和1152； (aa) 分別為SEQ ID NO：1063和1153； (bb) 分別為SEQ ID NO：1064和1154； (cc) 分別為SEQ ID NO：1065和1155； (dd) 分別為SEQ ID NO：1066和1156； (ee) 分別為SEQ ID NO：1067和1157； (ff) 分別為SEQ ID NO：1068和1158； (gg) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (hh) 分別為SEQ ID NO：1076和1166；及 (ii) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
  155. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：1042之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1132之核苷酸序列。
  156. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：1055之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1145之核苷酸序列。
  157. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：1056之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1146之核苷酸序列。
  158. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股包含SEQ ID NO：1100之核苷酸序列且該反義股包含SEQ ID NO：1190之核苷酸序列。
  159. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1081和1171； (b) 分別為SEQ ID NO：1090和1180； (c) 分別為SEQ ID NO：1079和1169； (d) 分別為SEQ ID NO：1076和1166； (e) 分別為SEQ ID NO：1072和1162； (f) 分別為SEQ ID NO：1070和1160；及 (g) 分別為SEQ ID NO：1069和1159。
  160. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1120和1210； (b) 分別為SEQ ID NO：1117和1207；及 (c) 分別為SEQ ID NO：1119和1209。
  161. 如請求項82至137中任一項之套組，其中該有義股及反義股包含選自由下列所組成之群組的核苷酸序列： (a) 分別為SEQ ID NO：1095和1185； (b) 分別為SEQ ID NO：1104和1194； (c) 分別為SEQ ID NO：1093和1183；及 (d) 分別為SEQ ID NO：1100和1190。
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