TW202400787A - 改良siRNA生物可利用性之GalNAc組合物 - Google Patents

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Abstract

本文提供包含可與寡核苷酸結合之GalNAc部分的組合物。該寡核苷酸可為小干擾RNA或反義寡核苷酸。本文亦提供治療方法，其包括向個體投與該組合物。

Description

改良siRNA生物可利用性之GalNAc組合物
心血管病症、代謝疾病及肝相關病症很豐富，且可影響許多人。需要經改良治療劑用於治療此等病症。
本文揭示一種由式(I)或(II)表示之化合物： ； 或其鹽，其中 J為寡核苷酸； 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1為選自以下之連接子： -O-、-S-、-N(R 7)-、-C(O)-、-C(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)-、-N(R 7)C(O)N(R 7)-、-OC(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2-、-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。 在一些實施例中，各w獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各w為1。在一些實施例中，各v獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各v為1。在一些實施例中，n選自1至10之任何值。在一些實施例中，n選自1至5之任何值。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，m選自1至10之任何值。在一些實施例中，m選自1至5之任何值。在一些實施例中，m選自1及2。在一些實施例中，z為3且Y為C。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基。在一些實施例中，Q選自環己基。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 3選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 3選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 3選自-OR 7-及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 4選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 4選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 4選自-OR 7-及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。在一些實施例中，R 5選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，或3至10員雜環。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。在一些實施例中，w為1；v為1；n為2；m為1或2；z為3且Y為C；Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基；R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-；R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基；R 3為-OH或-OC(O)CH 3；R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及R 5為-NH(O)CH 3。在一些實施例中，化合物包含： 。 在一些實施例中，寡核苷酸(J)連接在寡核苷酸之5'端或3'端。在一些實施例中，寡核苷酸包含DNA。在一些實施例中，寡核苷酸包含RNA。在一些實施例中，寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，該一或多個經修飾之核苷間鍵聯包含烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代磷酸酯(alkylphosphonothioate)、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙醯胺酸酯或羧甲基酯，或其組合。在一些實施例中，寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷。在一些實施例中，該一或多個經修飾之核苷包含鎖核酸(locked nucleic acid；LNA)、己糖醇核酸(HLA)、環己烯核酸(CeNA)、2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-O-烯丙基、2'-氟或2'-去氧基，或其組合。在一些實施例中，該一或多個經修飾之核苷包含2',4'經約束之乙基核苷、2'-O-甲基核苷、2'-去氧基氟核苷、2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)核苷、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)核苷、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)核苷、2'-ara-F、2'氟基或2'-O-烷基，或其組合。在一些實施例中，寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或更多個經修飾之核苷。在一些實施例中，寡核苷酸包含連接在寡核苷酸之3'或5'端之脂質。在一些實施例中，脂質包含膽固醇、肉豆蔻醯基、軟脂醯基、硬脂醯基、石膽醯基(lithocholoyl)、二十二烷醯基、二十二碳六烯醯基(docosahexaenoyl)、肉豆蔻基、軟脂基、硬脂基或α-生育酚，或其組合。在一些實施例中，寡核苷酸包含連接在寡核苷酸之3'或5'端之精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸(RGD)肽。在一些實施例中，RGD肽包含環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys)、環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)、環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-疊氮基)、胺基苯甲酸衍生之RGD或其組合。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有有義股及反義股之小干擾RNA (siRNA)。在一些實施例中，有義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，反義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，有義股及反義股形成雙股RNA雙螺旋體。在一些實施例中，雙股RNA雙螺旋體之第一鹼基對為AU鹼基對。在一些實施例中，有義股或反義股包含3'懸垂物。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S至6S或1S#2至6S#2中之任一者。在一些實施例中，反義股包含修飾模式1AS至9AS中之任一者。在一些實施例中，寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。在一些實施例中，ASO之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，ASO包含修飾模式ASO1。在一些實施例中，化合物與去唾液酸糖蛋白受體結合。在一些實施例中，該化合物靶向肝細胞。
本文揭示一種醫藥組合物，其包含本文所描述之化合物中之任一者的化合物，及醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。在一些實施例中，醫藥組合物為無菌的。在一些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含水、緩衝液或鹽水溶液。在一些實施例中，寡核苷酸靶向目標mRNA，且當以有效量向個體投與時，使目標mRNA或目標蛋白降低至少10%。
本文揭示一種降低有需要之個體中之目標mRNA或目標蛋白之方法，其包含投與有效量之本文所描述之化合物中之任一者之醫藥組合物。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA或目標蛋白量測，該有效量降低個體中目標mRNA或目標蛋白之量測。在一些實施例中，該有效量治療個體之病症。在一些實施例中，相對於基線症狀或參數量測，該有效量降低個體中與病症相關之症狀或參數的量測。在一些實施例中，個體中與病症相關之症狀或參數之量測降低至少10天。在一些實施例中，個體中與病症相關之症狀或參數之量測降低至少100天。在一些實施例中，病症包含代謝疾病。在一些實施例中，病症包含肝病。
本文揭示一種由式(A)或(B)表示之化合物： ； 或其鹽，其中 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7、-S(O) 2R 7、-OS(O) 2R 7、-OP(O)(OR 7) 2、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7),-OP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(N(R 7) 2) 2及-SP(N(R 7) 2) 2； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。 在一些實施例中，各w獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各w為1。在一些實施例中，各v獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各v為1。在一些實施例中，n選自1至10之任何值。在一些實施例中，n選自1至5之任何值。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，m選自1至10之任何值。在一些實施例中，m選自1至5之任何值。在一些實施例中，m選自1及2。在一些實施例中，z為3且Y為C。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基。在一些實施例中，Q選自環己基。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-OP(OR 7)N(R 7) 2及-OP((NR 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7) 2及-OP(OR 7)N(R 7) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OCH 2CH 3)OH及-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2) 2。在一些實施例中，R 1為-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2) 2。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 3選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 3選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 3選自-OR 7-及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 4選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，R 4選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，R 4選自-OR 7-及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。在一些實施例中，R 5選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，或3至10員雜環。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。在一些實施例中，w為1；v為1；n為2；m為1或2；z為3且Y為C；Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基；R 1選自-OP(O)(OR 7) 2及-OP(OR 7)N(R 7) 2；R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基；R 3為-OH或-OC(O)CH 3；R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及R 5為-NH(O)CH 3。在一些實施例中，化合物包含： 。
交叉參考
本申請案主張2022年3月16日申請之美國臨時申請案第63/320,431號、2022年6月22日申請之美國臨時申請案第63/354,359號及2022年12月6日申請之美國臨時申請案第63/430,542號之權益，該等申請案以引用之方式併入本文中。 序列表以引用之方式併入
本申請案與電子格式之序列表一起申請。序列表以在2023年3月13日創建，名為54462-735601_PCT.xml之檔案提供，其大小為922,453位元組。電子格式之序列表中之資訊以全文引用之方式併入。
N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)為半乳糖之胺糖衍生物。GalNAc及含GalNAc部分可結合凝集素，諸如去唾液酸糖蛋白受體。此等受體可包括於肝細胞上。因此，GalNAc可使寡核苷酸靶向肝細胞或靶向肝臟。
本文提供GalNAc部分。此等GalNAc部分可與寡核苷酸(諸如小干擾RNA (siRNA)或反義寡核苷酸(ASO))結合。與GalNAc部分結合之寡核苷酸可投與至個體，靶向肝臟或肝細胞，或用於治療個體之肝臟相關病症。 I. 組合物
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含寡核苷酸及N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸。寡核苷酸可抑制目標基因或寡核苷酸。寡核苷酸可結合目標寡核苷酸。在一些實施例中，組合物用於本文所描述之方法中。
在一些實施例中，本文提供化合物，其包含寡核苷酸及GalNAc部分。在一些實施例中，化合物包含寡核苷酸。寡核苷酸可與目標寡核苷酸結合。在一些實施例中，化合物用於本文所描述之方法中。在一些實施例中，本文所描述之組合物中包括該化合物。
本文所描述之化合物或組合物之寡核苷酸可包含小干擾RNA (siRNA)或反義寡核苷酸(ASO)。
一些實施例包括一種組合物，其包含GalNAc部分，及當以有效量向個體投與時降低個體之細胞、流體或組織中之目標mRNA或蛋白質含量的寡核苷酸。一些實施例包括一種組合物，其包含GalNAc部分，及當以有效量向個體投與時降低肝臟組織中或肝細胞中之目標mRNA或蛋白質含量的寡核苷酸。在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分，及當以有效量向個體投與時降低細胞或組織中之目標(例如mRNA)之含量的寡核苷酸。在一些實施例中，細胞為肝細胞。在一些實施例中，組織為肝臟組織。一些實施例包括一種組合物，其包含GalNAc部分，及當以有效量向個體投與時降低肝臟組織中之目標mRNA含量的寡核苷酸。一些實施例包括一種組合物，其包含GalNAc部分，及當以有效量向個體投與時降低肝細胞中之目標mRNA含量的寡核苷酸。
在一些實施例中，相對於另一細胞類型，目標寡核苷酸含量之降低對肝細胞具有特異性。在一些實施例中，相對於另一細胞類型，目標RNA含量之降低對肝細胞具有特異性。在一些實施例中，相對於另一細胞類型，目標mRNA含量之降低對肝細胞具有特異性。在一些實施例中，相對於另一細胞類型，目標蛋白含量之降低對肝細胞具有特異性。在一些實施例中，相對於另一組織類型，目標寡核苷酸含量之降低對肝臟組織具有特異性。在一些實施例中，相對於另一組織類型，目標RNA含量之降低對肝臟具有特異性。在一些實施例中，相對於另一組織類型，目標mRNA含量之降低對肝臟具有特異性。在一些實施例中，相對於另一組織類型，目標蛋白含量之降低對肝臟具有特異性。
在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分及與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，當以有效量向個體投與時該組合物降低細胞或組織中之目標寡核苷酸含量。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，目標寡核苷酸含量降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，目標寡核苷酸含量降低2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分及與目標mRNA結合之寡核苷酸，當向以有效量個體投與時該組合物降低細胞或組織中之目標mRNA含量。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，目標mRNA含量降低2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分及與編碼目標蛋白之寡核苷酸結合的寡核苷酸，當以有效量向個體投與該組合物時，其降低細胞或組織中之目標蛋白含量。在一些實施例中，細胞為肝細胞。在一些實施例中，組織為肝臟組織。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，目標蛋白含量降低2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分及與目標寡核苷酸(例如mRNA)結合之寡核苷酸，且當以有效量向個體投與時，減少不良表型(例如與目標寡核苷酸相關之病症之症狀)。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，不良表型減少不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，不良表型減少2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含GalNAc部分及與目標寡核苷酸(例如mRNA)結合之寡核苷酸，且當以有效量向個體投與時，增加保護性表型(例如能夠預防病症)。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約200%或更多、約300%或更多、約400%或更多、約500%或更多、約600%或更多、約700%或更多、約800%或更多、約900%或更多、或約1000%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約200%、不超過約300%、不超過約400%、不超過約500%、不超過約600%、不超過約700%、不超過約800%、不超過約900%或不超過約1000%。在一些實施例中，保護性表型增加2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、150%、200%、250%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%或1000%，或增加由任何兩個前述百分比限定的範圍。  A.  GalNAc部分及化合物
在一些實施例中，本文提供組合物，其包含GalNAc部分。在一些實施例中，本文提供組合物，其包含GalNAc部分及寡核苷酸。在一些實施例中，藉由式(I)或式(II)之化合物描述包含GalNAc部分及寡核苷酸之組合物。在一些實施例中，式(I)或式(II)之寡核苷酸為J。在一些實施例中，式(I)或式(II)之GalNAc部分為與J結合之分子部分。寡核苷酸可包含小干擾RNA (siRNA)或反義寡核苷酸(ASO)。
在一些實施例中，本文提供一種由式(I)或(II)表示之化合物： ； 或其鹽，其中 J為寡核苷酸； 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1為選自以下之連接子： -O-、-S-、-N(R 7)-、-C(O)-、-C(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)-、-N(R 7)C(O)N(R 7)-、-OC(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2-、-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。
在一些實施例中，各w獨立地選自1至20之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至15之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至4之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至3之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至2之任何值。在一些實施例中，各w獨立地為1。在一些實施例中，w為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，各v獨立地選自1至20之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至15之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至4之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至3之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至2之任何值。在一些實施例中，各v獨立地為1。在一些實施例中，v為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，n選自1至20之任何值。在一些實施例中，n選自1至15之任何值。在一些實施例中，n選自1至10之任何值。在一些實施例中，n選自1至9之任何值。在一些實施例中，n選自1至8之任何值。在一些實施例中，n選自1至7之任何值。在一些實施例中，n選自1至6之任何值。在一些實施例中，n選自1至5之任何值。在一些實施例中，n選自1至4之任何值。在一些實施例中，n選自2至4之任何值。在一些實施例中，n選自1至3之任何值。在一些實施例中，n為2或3。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n選自1至2之任何值。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，m選自1至20之任何值。在一些實施例中，m選自1至15之任何值。在一些實施例中，m選自1至10之任何值。在一些實施例中，m選自1至9之任何值。在一些實施例中，m選自1至8之任何值。在一些實施例中，m選自1至7之任何值。在一些實施例中，m選自3至7之任何值。在一些實施例中，m選自1至6之任何值。在一些實施例中，m選自2至6之任何值。在一些實施例中，m選自3至6之任何值。在一些實施例中，m選自4至6之任何值。在一些實施例中，m為6。在一些實施例中，m選自1至5之任何值。在一些實施例中，m選自3至5之任何值。在一些實施例中，m為5。在一些實施例中，m為4或5。在一些實施例中，m選自1至4之任何值。在一些實施例中，m為4。在一些實施例中，m為3或4。在一些實施例中，m選自2至4之任何值。在一些實施例中，m選自1至3之任何值。在一些實施例中，m為3。在一些實施例中，m選自1至2之任何值。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，m為1。在一些實施例中，m為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，z選自1至3之任何值。在一些實施例中，z為3且Y為C。在一些實施例中，z為2且Y為CR 6。在一些實施例中，z為1且Y為C(R 6) 2。
在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基、環己基、環戊二烯及環戊基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基。在一些實施例中，Q為苯基。在一些實施例中，Q為環己基。
在一些實施例中，R 1為選自以下之連接子：-O-、-S-、-N(R 7)-、-C(O)-、-C(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)-、-N(R 7)C(O)N(R 7)-、-OC(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2-、-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-。在一些實施例中，R 1為選自以下之連接子：-O-、-S-、-N(R 7)-、-C(O)-、-C(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)-、-N(R 7)C(O)N(R 7)-、-OC(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2-、-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-及-OP(OR 7)O-。在一些實施例中，R 1為選自以下之連接子：-OP(O)(OH)O-、-SP(O)(OH)O-、-OP(S)(OH)O-、-OP(O)(SH)O-、-OP(O)(OH)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(O)(O -)S-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-。在一些實施例中，R 1選自-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(O)(O -)S-。在一些實施例中，R 1選自-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-及-OP(O)(OR 7)S-。在一些實施例中，R 1選自-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-及-OP(O)(OR 7)S-。在一些實施例中，R 1選自-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(S)(O -)O-及-OP(O)(S -)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(S)(OR 7)O-及-OP(O)(SR 7)O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2O-。在一些實施例中，R 1為-OP(O)(OH)O-、-OP(O)(OCH 2CH 3)O-、-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2)-或-OPN(CH(CH 3) 2) 2O-。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OH)O-及OP(O)(O -)O-。在一些實施例中，R 1包含-O-或-S-。在一些實施例中，R 1包含-O-。在一些實施例中，R 1包含-S-。在一些實施例中，R 1為選自以下之連接子：-O-或-S-。在一些實施例中，R 1為-O-。在一些實施例中，R 1為-S-。
在一些實施例中，各R 2獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自-CH 2OH及-CH 2OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 3獨立地選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 3獨立地選自-OH及-OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 4獨立地選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 4獨立地選自-OH及-OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 5獨立地選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。在一些實施例中，各R 5獨立地選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。在一些實施例中，各R 5獨立地選自-N(H)C(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN、-OH、-SH及-NH 2。
在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環、3至10員雜環。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。在一些實施例中，R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。在一些實施例中，各R 7獨立地選自氫。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的C 1-3烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。
在一些實施例中，w為1；v為1；n為2；m為1或2；z為3且Y為C；Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基；R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-；R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基；R 3為-OH或-OC(O)CH 3；R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及R 5為-NH(O)CH 3。
在一些實施例中，w為1；v為1；n為2；m為1或2；z為3且Y為C；Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基；R 1選自-OP(O)(OH)O-、-OP(S)(OH)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OH)O-；R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基；R 3為-OH或-OC(O)CH 3；R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及R 5為-NH(O)CH 3。在一些實施例中，w為1；v為1；n為2；m為1或2；z為3且Y為C；Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基；R 1選自-OP(O)(OH)O-、-OP(S)(OH)O-及-OP(OH)O-；R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基；R 3為-OH或-OC(O)CH 3；R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及R 5為-NH(O)CH 3。
在一些實施例中，式(I)化合物選自： 。
在一些實施例中，式(II)化合物選自： 。
在一些實施例中，式(I)、(II)或(III)之化合物與凝集素結合。在一些實施例中，化合物與去唾液酸糖蛋白受體結合。在一些實施例中，化合物與肝臟細胞受體結合。在一些實施例中，化合物與肝細胞受體結合。在一些實施例中，化合物靶向肝臟細胞。
在一些實施例中，本文提供之本文所描述之組合物包含GalNAc化合物。在一些實施例中，GalNAc化合物描述式(A)或式(B)之化合物： ； 或其鹽，其中 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7、-S(O) 2R 7、-OS(O) 2R 7、-OP(O)(OR 7) 2、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7),-OP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(N(R 7) 2) 2及-SP(N(R 7) 2) 2； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。
在一些實施例中，各w獨立地選自1至20之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至15之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至4之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至3之任何值。在一些實施例中，各w獨立地選自1至2之任何值。在一些實施例中，W為1。在一些實施例中，w為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，各v獨立地選自1至20之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至15之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至10之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至5之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至4之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至3之任何值。在一些實施例中，各v獨立地選自1至2之任何值。在一些實施例中，各v獨立地為1。在一些實施例中，v為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，n選自1至20之任何值。在一些實施例中，n選自1至15之任何值。在一些實施例中，n選自1至10之任何值。在一些實施例中，n選自1至9之任何值。在一些實施例中，n選自1至8之任何值。在一些實施例中，n選自1至7之任何值。在一些實施例中，n選自1至6之任何值。在一些實施例中，n選自1至5之任何值。在一些實施例中，n選自1至4之任何值。在一些實施例中，n選自2至4之任何值。在一些實施例中，n選自1至3之任何值。在一些實施例中，n為2或3。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n選自1至2之任何值。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，m選自1至20之任何值。在一些實施例中，m選自1至15之任何值。在一些實施例中，m選自1至10之任何值。在一些實施例中，m選自1至9之任何值。在一些實施例中，m選自1至8之任何值。在一些實施例中，m選自1至7之任何值。在一些實施例中，m選自3至7之任何值。在一些實施例中，m選自1至6之任何值。在一些實施例中，m選自2至6之任何值。在一些實施例中，m選自3至6之任何值。在一些實施例中，m選自4至6之任何值。在一些實施例中，m為6。在一些實施例中，m選自1至5之任何值。在一些實施例中，m選自3至5之任何值。在一些實施例中，m為5。在一些實施例中，m為4或5。在一些實施例中，m選自1至4之任何值。在一些實施例中，m為4。在一些實施例中，m為3或4。在一些實施例中，m選自2至4之任何值。在一些實施例中，m選自1至3之任何值。在一些實施例中，m為3。在一些實施例中，m選自1至2之任何值。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，m為1。在一些實施例中，m為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些實施例中，z選自1至3之任何值。在一些實施例中，z為3且Y為C。在一些實施例中，z為2且Y為CR 6。在一些實施例中，z為1且Y為C(R 6) 2。
在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基、環己基、環戊二烯及環戊基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。在一些實施例中，Q選自苯基及環己基。在一些實施例中，Q為苯基。在一些實施例中，Q為環己基。
在一些實施例中，R 1選自-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7、-S(O) 2R 7、-OS(O) 2R 7、-OP(O)(OR 7) 2、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7)、-OP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(N(R 7) 2) 2及-SP(N(R 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-OR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-OP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、OP(OR 7)N(R 7) 2及-OP(N(R 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-SR 7、-S(O)R 7、-S(O) 2R 7、-OS(O) 2R 7、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7)、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2及-SP(N(R 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7) 2、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7)、-OP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(N(R 7) 2) 2及-SP(N(R 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-OP(OR 7)N(R 7) 2及-OP((NR 7) 2) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OR 7) 2及-OP(OR 7)N(R 7) 2。在一些實施例中，R 1選自-OP(O)(OCH 2CH 3)OH及-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2) 2。在一些實施例中，R 1為-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2) 2。
在一些實施例中，各R 2獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 2獨立地選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，各R 2獨立地選自-CH 2OH及-CH 2OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 3獨立地選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 3獨立地選自-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 3獨立地選自-OH及-OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 4獨立地選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 4獨立地選自-OR 7及-OC(O)R 7。在一些實施例中，R 4獨立地選自-OH及-OC(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 5獨立地選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。在一些實施例中，各R 5獨立地選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。在一些實施例中，各R 5獨立地選自-N(H)C(O)CH 3。
在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7及-N(R 7) 2。在一些實施例中，各R 6獨立地選自氫、鹵素、-CN、-OH、-SH及-NH 2。
在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。在一些實施例中，各R 7獨立地選自：氫；及視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環、3至10員雜環。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。在一些實施例中，各R 7獨立地選自氫。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。在一些實施例中，各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。
在一些實施例中，式(A)化合物選自： 。
在一些實施例中，本文提供一種由式(B)表示之化合物： 。
在一些實施例中，將磷酸酯去質子化以形成式(I)、(II)、(A)或(B)之鹽。在一些實施例中，陽離子為金屬離子，諸如金屬陽離子。金屬陽離子之非限制性實例包括Na +、K +、Mg 2+及Ca 2+。在一些實施例中，金屬陽離子包含Na +。在一些實施例中，金屬陽離子包含K +。在一些實施例中，金屬陽離子包含Mg 2+。在一些實施例中，金屬陽離子包含Ca 2+。在一些實施例中，陽離子為有機或無機小分子。在其中化合物為式(I)或(II)之去質子化形式之一些實施例中，陽離子為寡核苷酸中存在之帶正電核酸。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯，或一或多個硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯，或一或多個硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯或硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。此化合物中與寡核苷酸(J)連接之結構為GalNAc部分之實例。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯或硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯，或一或多個硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯，或一或多個硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個額外磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯或硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。此化合物中與寡核苷酸(J)連接之結構可稱為「ETL17」，且為GalNAc部分之實例。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯或硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之硫代磷酸酯。
一些實施例包括以下各者，其中J為寡核苷酸： 。此化合物中與寡核苷酸(J)連接之結構為GalNAc部分之實例。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯或硫代磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之磷酸酯。J可包括與寡核苷酸連接之一或多個硫代磷酸酯。J可包括一個與寡核苷酸連接之硫代磷酸酯。在任何實施例中，J可包括額外連接子。 1. 類似物
具有碳-碳雙鍵或碳-氮雙鍵之化學實體可以 Z或 E形式(或順式或反式形式)存在。此外，一些化學實體可以各種互變異構形式存在。除非另外規定，否則本文所描述之化合物亦意欲包括所有 Z、 E及互變異構形式。
「互變異構物」係指其中質子有可能自分子之一個原子移位至同一分子之另一原子的分子或部分。在某些實施例中，本文中所展現之化合物以互變異構物形式存在。在其中可能發生互變異構化之情形中，將存在互變異構物之化學平衡。互變異構物之確切比率視若干因素而定，包括物理狀態、溫度、溶劑及pH。互變異構平衡之一些實例包括： 。
在一些實施例中，本文揭示之化合物及部分以不同的富集同位素形式使用，例如富集 2H、 3H、 11C、 13C及/或 14C之含量。在一個特定實施例中，化合物在至少一個位置經氘化。可藉由美國專利第5,846,514號及第6,334,997號中描述之程序，來製備此類氘化形式。如美國專利第5,846,514號及第6,334,997號中所描述，氘化可改良代謝穩定性及/或功效，因此增加藥物作用之持續時間。
除非另外陳述，否則本文所描述之化合物及部分意欲包括區別僅在於存在一或多個經同位素富集原子的化合物及部分。舉例而言，具有本發明結構，但其中氫經氘或氚置換或碳經 13C或 14C富集碳置換的化合物屬於本發明之範疇內。
本發明之化合物及部分視情況在構成此類化合物之一或多個原子處含有非天然比例之原子同位素。舉例而言，化合物可用同位素，諸如氘( 2H)、氚( 3H)、碘-125 ( 125I)或碳-14 ( 14C)標記。經 2H、 11C、 13C、 14C、 15C、 12N、 13N、 15N、 16N、 16O、 17O、 14F、 15F、 16F、 17F、 18F、 33S、 34S、 35S、 36S、 35Cl、 37Cl、 79Br、 81Br及 125I同位素取代均涵蓋在內。本發明之化合物及部分之所有同位素變體無論是否具放射性均涵蓋在本發明之範疇內。
在某些實施例中，本文所揭示之化合物及部分中之一些或全部 1H原子經 2H原子置換。合成含氘化合物之方法為此項技術中已知的，且包括(僅作為非限制性實例)以下合成方法。
使用諸如描述於以下中之各種方法來合成氘取代的化合物：Dean, Dennis C.編. Recent Advances in the Synthesis and Applications of Radiolabeled Compounds for Drug Discovery and Development. [In: Curr., Pharm. Des., 2000; 6(10)] 2000, 第110頁；George W.; Varma, Rajender S. The Synthesis of Radiolabeled Compounds via Organometallic Intermediates, Tetrahedron, 1989, 45(21), 6601-21；及Evans, E. Anthony. Synthesis of radiolabeled compounds, J. Radioanal. Chem., 1981, 64(1-2), 9-32。
氘化起始材料可輕易地獲得，且進行本文所描述之合成方法以提供含氘化合物之合成。大量含氘試劑及建構嵌段可購自化學供應商，諸如Aldrich Chemical Co.。
本發明中包括本文所描述之化合物之鹽，尤其醫藥學上可接受之鹽。具有足夠酸性、足夠鹼性或兩種官能基的本發明之化合物可以與多種無機鹼以及無機酸及有機酸中之任一種反應形成鹽。或者，本身帶電荷之化合物，諸如具有四級氮者，能夠與適當相對離子形成鹽，該相對離子例如鹵離子，諸如溴離子、氯離子或氟離子，特別地溴離子。
在一些情況下，本文所描述之化合物可以非鏡像異構物、鏡像異構物或其他立體異構形式存在。本文所呈現之化合物包括所有非鏡像異構、鏡像異構及差向異構形式以及其適當混合物。立體異構物之分離可藉由層析或藉由形成非鏡像異構物及藉由再結晶或層析分離或其任何組合來執行。(Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, 「Enantiomers, Racemates and Resolutions」, John Wiley And Sons, Inc., 1981，該揭示以引用的方式併入本文中)。立體異構物亦可藉由立體選擇性合成獲得。
本文所描述之方法及組合物包括使用非晶形式以及結晶形式(亦稱為多形體)。本文所描述之化合物可呈醫藥學上可接受之鹽形式。在一些實施例中，具有相同類型活性之此等化合物之活性代謝物亦包括在本發明之範疇內。另外，本文所描述之化合物可以非溶劑化或與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似者)一起溶劑化形式存在。本文中所呈現之化合物之溶劑化形式亦視為揭示於本文中。 B.  寡核苷酸
在一些實施例中，本文提供包含寡核苷酸之組合物或化合物。該寡核苷酸可與GalNAc部分結合。該寡核苷酸可直接連接至與GalNAc部分連接之連接子。該寡核苷酸可用於本文所描述之方法中。
在一些實施例中，該寡核苷酸與目標寡核苷酸結合。目標寡核苷酸之實例包括目標RNA或目標DNA。在一些實施例中，該寡核苷酸與目標DNA結合。在一些實施例中，該寡核苷酸與目標DNA結合，且抑制目標DNA表現RNA (例如mRNA)。在一些實施例中，該寡核苷酸與目標RNA結合。目標RNA可包括目標mRNA。在一些實施例中，該寡核苷酸與目標mRNA結合。在一些實施例中，該寡核苷酸抑制目標mRNA，諸如減少目標mRNA之量、引起目標mRNA降解、或減少或防止目標mRNA轉譯。在一些實施例中，該寡核苷酸減少目標mRNA產生之目標蛋白之量，例如藉由抑制目標mRNA。該寡核苷酸可包括小干擾RNA (siRNA)。該寡核苷酸可包括反義寡核苷酸(ASO)。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合且抑制由目標寡核苷酸編碼之目標蛋白表現的寡核苷酸。在一些實施例中，組合物包含與目標RNA結合且抑制由目標RNA編碼之目標蛋白表現的寡核苷酸。在一些實施例中，組合物包含與目標mRNA結合且抑制由目標mRNA編碼之目標蛋白表現的寡核苷酸。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合且抑制由目標寡核苷酸編碼之第二寡核苷酸表現的寡核苷酸。在一些實施例中，組合物包含與目標DNA結合且抑制由目標DNA編碼之目標RNA表現的寡核苷酸。在一些實施例中，組合物包含與目標DNA結合且抑制由目標DNA編碼之目標mRNA表現的寡核苷酸。
目標寡核苷酸可藉由多種方式鑑別。在一些情況下，目標寡核苷酸包含表現量與病症(例如肝病)發生相關之mRNA。在一些情況下，目標寡核苷酸包含由具有與病症相關之特定基因型之基因編碼的mRNA。大規模人類遺傳資料可改善醫藥發現及研發之成功率。全基因體關聯研究(Genome Wide Association Study；GWAS)可偵測群體樣本中之基因變異體與性狀之間的相關性。GWAS可實現對疾病之生物學之較佳理解，且提供可應用的治療。GWAS可利用基因分型及/或定序資料，且通常涉及評估在基因體上相對均勻分佈之數百萬基因變異體。最常見GWAS設計為病例對照研究，其涉及在病例對比對照中比較變異體頻率。若變異體在病例對比對照中具有顯著不同的頻率，則該變異體稱為與疾病相關。可用於GWAS中之相關性統計量為p值，作為統計顯著性之量測；勝算比(odds ratio；OR)，作為效應大小之量測；或β (beta)係數，作為效應大小之量測。研究人員通常假設相加性遺傳模型且計算等位基因勝算比，其為等位基因之各額外複本所賦予的疾病之風險增加(或降低) (相較於不攜帶該等位基因之複本)。GWAS之設計及解釋中的額外概念為連鎖不平衡，其為等位基因之非隨機關聯。連鎖不平衡之存在可混淆哪一變異體為「致因性的」。
變異體之功能註解及/或濕式實驗室實驗可鑑別出經由GWAS鑑別之致因性遺傳變異體，且在許多情況下可引起致病基因之鑑別。特別地，理解致因性遺傳變異體之功能效應(例如，蛋白質功能損失、蛋白質功能獲得、基因表現增加或基因表現降低)可允許變異體用作用於目標基因之治療調節的代理，或進一步理解調節該目標之療法的潛在治療功效及安全性。
此類基因-疾病關聯之鑑別已提供對疾病生物學之見解且可用於鑑別醫藥行業之新穎治療目標。為了轉換衍生自人類遺傳學之治療見解，患者之疾病生物學可經外源地『程式化』為複製來自人類遺傳學之觀測。治療模態存在若干潛在選項，其可使經由人類遺傳學鑑別之治療性目標轉換為新穎藥品。此等可包括諸如小分子及單株抗體之公認的治療模態、諸如寡核苷酸之成熟化模態、及諸如基因療法及基因編輯之新興模態。治療模態之選擇可視若干因素而定，包括目標之位置(例如細胞內、細胞外或分泌性)、相關組織(例如肝臟)及相關適應症。可進行此類研究以藉由本文所描述之組合物或化合物鑑別用於siRNA或ASO抑制的特定肝病相關之目標。
一些實施例包括使用本文揭示之方法製備寡核苷酸或siRNA之方法。舉例而言，可使用包括合成步驟之本文中之實例的任何態樣。一些實施例包括製備GalNAc部分或製備具有GalNAc部分之寡核苷酸。 1.  siRNA
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸(例如mRNA)結合之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含小干擾RNA (siRNA)。在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸(例如mRNA)結合之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA。在一些實施例中，有義股包含RNA。在一些實施例中，反義股包含RNA。
在一些實施例中，有義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，有義股之長度為14-30個核苷。在一些實施例中，有義股之長度為至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，有義股之長度為至少12個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少14個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少16個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少18個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少20個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少22個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少24個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少26個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少28個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為至少30個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，有義股之長度為不超過12個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過14個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過16個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過18個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過20個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過22個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過24個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過26個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過28個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為不超過30個核苷酸。
在一些實施例中，反義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，反義股之長度為14-30個核苷。在一些實施例中，反義股之長度為至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，反義股之長度為至少12個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少14個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少16個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少18個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少20個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少22個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少24個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少26個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少28個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為至少30個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，反義股之長度為不超過12個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過14個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過16個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過18個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過20個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過22個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過24個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過26個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過28個核苷酸。在一些實施例中，反義股之長度為不超過30個核苷酸。在一些實施例中，反義股與有義股具有相同長度。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標寡核苷酸(例如mRNA)之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，組合物包含長度為如下之有義股：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷，或由任何兩個前述數目限定的範圍。在一些實施例中，組合物包含長度為12-30個核苷之反義股。在一些實施例中，組合物包含長度為如下之反義股：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷，或由任何兩個前述數目限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標寡核苷酸(例如mRNA)之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股的siRNA，各股之長度獨立地為約14-30個核苷，且有義股及反義股中之至少一者包含含有全長人類目標mRNA序列之約12-30個連續核苷的核苷序列。在一些實施例中，有義股及反義股中之至少一者包含含有全長人類目標mRNA序列中之一者之至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多個連續核苷的核苷序列。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股的siRNA，其中有義股及反義股形成雙股RNA雙螺旋體。在一些實施例中，雙股RNA雙螺旋體之第一鹼基對為AU鹼基對。
在一些實施例中，有義股進一步包含3'懸垂物。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者限定的核苷酸範圍。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，3'懸垂物包含2個核苷。在一些實施例中，有義股進一步包含5'懸垂物。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者限定的核苷酸範圍。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，5'懸垂物包含2個核苷。
在一些實施例中，反義股進一步包含3'懸垂物。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者限定的核苷酸範圍。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，3'懸垂物包含2個核苷。在一些實施例中，反義股進一步包含5'懸垂物。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者限定的核苷酸範圍。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，5'懸垂物包含2個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與編碼目標蛋白之人類目標mRNA中之19聚體結合。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA中之12聚體、13聚體、14聚體、15聚體、16聚體、17聚體、18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體結合。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與編碼目標蛋白之非人類靈長類動物目標mRNA中的17聚體結合。在一些實施例中，siRNA與非人類靈長類動物目標mRNA中之12聚體、13聚體、14聚體、15聚體、16聚體、17聚體、18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體結合。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與編碼目標蛋白之人類目標mRNA中的19聚體結合。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA中之12聚體、13聚體、14聚體、15聚體、16聚體、17聚體、及18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體結合。 2.  ASO
在一些實施例中，組合物包含抑制目標寡核苷酸(例如mRNA)之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。在一些實施例中，ASO之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為14-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷，或由任何兩個前述數目限定的範圍。在一些實施例中，ASO之長度為15-25個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為20個核苷。在一些實施例中，ASO包含DNA。
在一些實施例中，ASO之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為14-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為至少12個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少14個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少16個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少18個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少20個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少22個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少24個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少26個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少28個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為至少30個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為不超過12個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過14個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過16個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過18個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過20個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過22個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過24個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過26個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過28個核苷酸。在一些實施例中，ASO之長度為不超過30個核苷酸。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含長度為約12-30個核苷且包含與編碼目標蛋白之全長人類pre-mRNA目標序列之約12-30個連續核苷互補之核苷序列的ASO；其中(i)該寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵聯的修飾，及/或(ii)該組合物包含醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標蛋白之表現之寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含長度為約12-30個核苷且包含與編碼目標蛋白之全長人類目標mRNA序列之約12-30個連續核苷互補之核苷序列的ASO；其中(i)該寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵聯的修飾，及/或(ii)該組合物包含醫藥學上可接受之載劑。 3. 寡核苷酸修飾模式
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵聯的修飾，及/或(ii)組合物包含醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵聯的修飾。在一些實施例中，寡核苷酸包含經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷間鍵聯包含烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙醯胺酸酯或羧甲基酯，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷間鍵聯包含一或多個硫代磷酸酯鍵聯。經修飾之核苷間鍵聯之益處可包括降低之毒性或改良之藥物動力學。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷間鍵聯，其中寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個經修飾之核苷間鍵聯，或由前述數目中之任兩者定義的經修飾之核苷間鍵聯範圍。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過18個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過20個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸包含2個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、3個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、4個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、5個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、6個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、7個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、8個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、9個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、10個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、11個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、12個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、13個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、14個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、15個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、16個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、17個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、18個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、19個或更多個經修飾之核苷間鍵聯、或20個或更多個經修飾之核苷間鍵聯。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含鎖核酸(LNA)、己糖醇核酸(HLA)、環己烯核酸(CeNA)、2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-氟或2'-去氧基，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷包含LNA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2',4'經約束之乙基核酸。在一些實施例中，經修飾之核苷包含HLA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含CeNA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-甲氧基乙基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-烷基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-烯丙基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-氟基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-去氧基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-甲基核苷、2'-去氧基氟核苷、2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)核苷、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)核苷、2'-O-胺丙基(2'-O-AP)核苷或2'-ara-F，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-甲基核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-去氧基氟核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-NMA核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-DMAEOE核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-胺丙基(2'-O-AP)核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-ara-F。在一些實施例中，經修飾之核苷包含一或多個2'氟基修飾之核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-烷基修飾之核苷。經修飾之核苷之益處可包括降低之毒性或改良之藥物動力學。
在一些實施例中，寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21個經修飾之核苷，或由前述數目中之任兩者限定的核苷範圍。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過19個經修飾之核苷。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過21個經修飾之核苷。在一些實施例中，寡核苷酸包含2個或更多個經修飾之核苷、3個或更多個經修飾之核苷、4個或更多個經修飾之核苷、5個或更多個經修飾之核苷、6個或更多個經修飾之核苷、7個或更多個經修飾之核苷、8個或更多個經修飾之核苷、9個或更多個經修飾之核苷、10個或更多個經修飾之核苷、11個或更多個經修飾之核苷、12個或更多個經修飾之核苷、13個或更多個經修飾之核苷、14個或更多個經修飾之核苷、15個或更多個經修飾之核苷、16個或更多個經修飾之核苷、17個或更多個經修飾之核苷、18個或更多個經修飾之核苷、19個或更多個經修飾之核苷、20個或更多個經修飾之核苷、或21個或更多個經修飾之核苷。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含連接在寡核苷酸之3'或5'端的脂質。在一些實施例中，脂質包含膽固醇、肉豆蔻醯基、軟脂醯基、硬脂醯基、石膽醯基、二十二烷醯基、二十二碳六烯醯基、肉豆蔻基、軟脂基、硬脂基或α-生育酚，或其組合。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含糖部分。糖部分可包括N-乙醯基半乳糖部分(例如N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分)、N-乙醯基葡萄糖部分(例如N-乙醯葡萄糖胺(GlcNAc)部分)、岩藻糖部分或甘露糖部分。糖部分可包括1、2、3或更多個糖分子。糖部分可連接在寡核苷酸之3'或5'端。糖部分可包括N-乙醯基半乳糖部分。糖部分可包括N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。糖部分可包括N-乙醯基葡萄糖部分。糖部分可包括N-乙醯葡萄糖胺(GlcNAc)部分。糖部分可包括岩藻糖部分。糖部分可包括甘露糖部分。N-乙醯基葡萄糖、GlcNAc、岩藻糖或甘露糖可適用於靶向巨噬細胞，此係由於其可靶向或結合甘露糖受體，諸如CD206。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分。GalNAc可適用於肝細胞靶向。在一些實施例中，組合物包含GalNAc。在一些實施例中，組合物包含GalNAc衍生物。GalNAc部分可包括1、2、3或更多個GalNAc分子。GalNAc部分可包括二價或三價分支鏈連接子。寡核苷酸可經由二價或三價分支鏈連接子與1、2或3個GalNAc連接。GalNAc部分可連接在寡核苷酸之3'或5'端。
寡核苷酸可包括嘌呤。嘌呤之實例包括腺嘌呤(A)或鳥嘌呤(G)，或其經修飾之型式。寡核苷酸可包括嘧啶。嘧啶之實例包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)，或其經修飾之型式。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，2'-O-甲基包括2' O-甲基。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。 4.  siRNA 修飾模式
在一些實施例中，有義股包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29個經修飾之核苷間鍵聯，或由前述整數中之任兩者限定的經修飾之核苷間鍵聯範圍。在一些實施例中，有義股包含1-11個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，有義股包含2-6個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，有義股包含5個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，有義股包含4個經修飾之核苷間鍵聯。
在一些實施例中，反義股包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29個經修飾之核苷間鍵聯，或由前述整數中之任兩者限定的經修飾之核苷間鍵聯範圍。在一些實施例中，反義股包含1-11個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，反義股包含2-6個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，反義股包含5個經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，反義股包含4個經修飾之核苷間鍵聯。
在一些實施例中，有義股包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個經修飾之核苷，或由前述整數中之任兩者限定的經修飾之核苷範圍。在一些實施例中，有義股包含12-19個經修飾之核苷。在一些實施例中，有義股包含12-21個經修飾之核苷。在一些實施例中，有義股包含19個經修飾之核苷。在一些實施例中，有義股包含21個經修飾之核苷。
在一些實施例中，反義股包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個經修飾之核苷，或由前述整數中之任兩者限定的經修飾之核苷範圍。在一些實施例中，反義股包含12-19個經修飾之核苷。在一些實施例中，反義股包含12-21個經修飾之核苷。在一些實施例中，反義股包含19個經修飾之核苷。在一些實施例中，反義股包含21個經修飾之核苷。
在一些實施例中，有義股或反義股進一步包含至少2個與有義股或反義股之3'端連接之額外核苷。在一些實施例中，有義股或反義股包含2個與有義股或反義股之3'端連接之額外核苷。作為有義股之一部分，額外核苷可能與目標mRNA互補或可能不與其互補。反義股之額外核苷可包括尿嘧啶。反義股之2個額外核苷可均包括尿嘧啶。
在一些實施例中，有義股或反義股進一步包含至少2個與有義股或反義股之3'端連接之額外核苷。在一些實施例中，有義股或反義股包含2個與有義股或反義股之3'端連接之額外核苷。有義股之額外核苷可包括尿嘧啶。有義股之2個額外核苷可均包括尿嘧啶。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股包含修飾模式。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S：5'-NfsnsNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S#2：5'-NfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S：5'-nsnsnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S#2：5'-nnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S：5'-nsnsnnNfnNfnNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2：5'-nnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式4S：5'-NfsnsNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsnN-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式4S#2：5'-NfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsnN-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式5S：5'-nsnsnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsnN-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式5S#2：5'-nnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnnsnsnN-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S：5'-NfsnsNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2：5'-NfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S、2S、3S、4S、5S或6S中之任一者。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S#2、2S#2、3S#2、4S#2、5S#2或6S#2中之任一者。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S、3S、4S或6S中之任一者。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S#2、3S#2、4S#2或6S#2中之任一者。修飾模式1S-6S中之任一者可包括與3'端連接之GalNAc配體。修飾模式1S-6S中之任一者可包括與5'端連接之GalNAc配體。修飾模式1S-6S#2中之任一者可包括與3'端連接之GalNAc配體。修飾模式1S-6S#2中之任一者可包括與5'端連接之GalNAc配體。
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中反義股包含修飾模式。在一些實施例中，反義股包含修飾模式1AS：5'-nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式2AS：5'-nsNfsnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式3AS：5'-nsNfsnnnNfnnnnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式4AS：5'-nsNfsnNfnNfnnnnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式5AS：5'-nsNfsnnnNfnNfnnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式6AS：5'-nsNfsnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式7AS：5'-nsNfsnNfnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式8AS：5'-nsNfsnnnnnnnnnnnNfnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式9AS：5'-nsNfsnnnNfnnnnnnnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。修飾模式1AS-9AS中之任一者可包括與3'端連接之GalNAc配體。修飾模式1AS-9AS中之任一者可包括與5'端連接之GalNAc配體。
修飾模式中之任一者中之修飾可視情況選用。舉例而言，修飾模式1S-6S、1S#2-6S#2或1AS-9AS中之任一者中之1、2、3或更多個硫代磷酸酯鍵聯可經未經修飾之鍵聯或經不同的經修飾之鍵聯置換。在一些情況下，修飾模式1S-6S或1AS-9AS中之任一者中之1、2、3或更多個經修飾之核苷可經未經修飾之核苷或經不同的經修飾之核苷置換。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股包含修飾模式1S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式4S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式5S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式4S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式5S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。在一些實施例中，有義股或反義股包含修飾模式ASO1。
可使用有義及反義修飾模式之任何組合。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S，且反義股包含修飾模式2AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S，且反義股包含修飾模式3AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式4AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式5AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式6AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式7AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S，且反義股包含修飾模式8AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式4AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式5AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式6AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式7AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S，且反義股包含修飾模式8AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式1S#2，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S#2，且反義股包含修飾模式2AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S#2，且反義股包含修飾模式3AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式4AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式5AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式6AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式7AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S#2，且反義股包含修飾模式8AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式1AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式4AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式5AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式6AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式7AS。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S#2，且反義股包含修飾模式8AS。
在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。
在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。
在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。
在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。
在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些情況下，寡核苷酸包含特定修飾模式。在一些實施例中，自寡核苷酸之一股之5'端計數之位置9可具有2'F修飾。在一些實施例中，當寡核苷酸之一股之位置9為嘧啶時，則寡核苷酸之一股中之所有嘌呤均具有2'OMe修飾。在一些實施例中，當位置9為有義股之位置5與11之間的唯一嘧啶時，則位置9為寡核苷酸之一股中具有2'F修飾的唯一位置。在一些實施例中，當位置9及寡核苷酸之一股之位置5與11之間的唯一一個其他鹼基為嘧啶時，則此等嘧啶兩者為寡核苷酸之股中具有2'F修飾的僅有的兩個位置。在一些實施例中，當位置9及寡核苷酸之一股之位置5與11之間的僅有的兩個其他鹼基為嘧啶，且彼等兩個其他嘧啶處於相鄰位置以使得將不存在三個連續的2'F修飾時，則可進行2'F修飾之任何組合,得到總共三個2'F修飾。在一些實施例中，當寡核苷酸之一股之位置5與11之間存在超過2個嘧啶時，則允許具有2'F修飾之嘧啶的所有組合總共具有三至五個2'F修飾，其限制條件為寡核苷酸之股不具有三個連續的2'F修飾。在一些情況下，siRNA中之任一者之寡核苷酸之一股包含符合寡核苷酸之任何或所有此等股規則的修飾模式。
在一些實施例中，當寡核苷酸之一股之位置9為嘌呤時，則寡核苷酸之一股中之所有嘌呤均具有2'OMe修飾。在一些實施例中，當位置9為有義股之位置5與11之間的唯一嘌呤時，則位置9為寡核苷酸之一股中具有2'F修飾的唯一位置。在一些實施例中，當位置9及寡核苷酸之一股之位置5與11之間的唯一一個其他鹼基為嘌呤時，則此等嘌呤兩者為寡核苷酸之一股中具有2'F修飾的僅有的兩個位置。在一些實施例中，當位置9及寡核苷酸之一股之位置5與11之間的僅有的兩個其他鹼基為嘌呤，且彼等兩個其他嘌呤處於相鄰位置以使得將不存在三個連續的2'F修飾時，則可進行2'F修飾之任何組合，得到總共三個2'F修飾。在一些實施例中，當寡核苷酸之一股之位置5與11之間存在超過2個嘌呤時，則允許具有2'F修飾之嘌呤之所有組合總共具有三至五個2'F修飾，其限制條件為寡核苷酸之一股不具有三個連續的2'F修飾。在一些情況下，siRNA中之任一者之寡核苷酸之一股包含符合寡核苷酸之任何或所有此等股規則的修飾模式。
在一些情況下，寡核苷酸之一股之位置9可為2'去氧基。在此等情況下，2'F及2'OMe修飾可存在於寡核苷酸之一股之其他位置處。在一些情況下，siRNA中之任一者之寡核苷酸之一股包含符合寡核苷酸之此等股規則的修飾模式。
在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，其限制條件為不存在三個連續的2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基經修飾之核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘧啶；有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，其限制條件為不存在三個連續的2'氟基修飾之嘧啶；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。
在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，其限制條件為不存在三個連續的2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基經修飾之核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘌呤；有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，其限制條件為不存在三個連續的2'氟基修飾之嘌呤；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，不存在三個連續的2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，不存在三個連續的2'氟基修飾之嘧啶。
在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤或2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基經修飾之核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸；有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸；有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤或2'氟基修飾之嘌呤；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。
在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶或2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基經修飾之核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸；有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸；有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶或2'氟基修飾之嘧啶；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。 5.  ASO 修飾模式
在一些實施例中，組合物包含與目標寡核苷酸結合之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。在一些實施例中，ASO包含修飾模式ASO1：5'-nsnsnsnsnsdNsdNsdNsdNsdNsdNsdNsdNsdNsdNsnsnsnsnsn-3'，其中「dN」為任何去氧核苷酸，「n」為2'O-甲基或2'O-甲氧基乙基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，ASO包含修飾模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、1AS、2AS、3AS、4AS、5AS、6AS、7AS、8AS或9AS。
在一些實施例中，ASO與GalNAc部分結合。GalNAc部分可與ASO在5'端或3'端結合。在一些實施例中，GalNAc部分與ASO之5'端結合。在一些實施例中，GalNAc部分與ASO之3'端結合。  C.  調配物
在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。在一些實施例中，組合物為無菌的。在一些實施例中，組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。調配物可包括化合物(諸如GalNAc部分)及本文所描述之與GalNAc部分結合之寡核苷酸。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含水。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含緩衝液。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含鹽水溶液。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含水、緩衝液或鹽水溶液。在一些實施例中，組合物包含脂質體。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含脂質體、脂質、奈米粒子、蛋白質、蛋白質-抗體複合物、肽、纖維素、奈米凝膠或其組合。 II. 方法及用途
在一些實施例中，本文揭示向個體投與本文所描述之組合物之方法。一些實施例係關於使用本文所描述之組合物，諸如向個體投與組合物。
一些實施例係關於一種治療有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在治療方法中之用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，該投與治療個體之病症。在一些實施例中，該組合物治療個體之病症。
在一些實施例中，治療包含預防、抑制或逆轉個體之病症。一些實施例係關於本文所描述之組合物在預防、抑制或逆轉病症之方法中的用途。一些實施例係關於一種預防、抑制或逆轉有需要之個體之病症的方法。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，該投與預防、抑制或逆轉個體之病症。在一些實施例中，該組合物預防、抑制或逆轉個體之病症。
一些實施例係關於一種預防有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在預防病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，該投與預防個體之病症。在一些實施例中，該組合物預防個體之病症。
一些實施例係關於一種抑制有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在抑制病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，該投與抑制個體之病症。在一些實施例中，該組合物抑制個體之病症。
一些實施例係關於一種逆轉有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在逆轉病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，該投與逆轉個體之病症。在一些實施例中，該組合物逆轉個體之病症。  A.  病症
本文所描述之方法之一些實施例包括治療有需要個體之病症。在一些實施例中，病症為肝病。肝病之非限制性實例包括肝炎、肝癌、肝纖維化、膽汁鬱積、膽囊疾病、膽道樹疾病、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肝感染或遺傳性肝病。在一些實施例中，肝病包含肝炎。在一些實施例中，肝病包含肝癌。在一些實施例中，肝病包含肝纖維化。在一些實施例中，肝病包含膽汁鬱積。在一些實施例中，肝病包含膽囊疾病。在一些實施例中，肝病包含膽道樹疾病。在一些實施例中，肝病包含酒精性肝病。在一些實施例中，肝病包含非酒精性脂肪性肝炎。
在一些實施例中，肝病包含肝感染。在一些實施例中，肝感染包含A型肝炎。在一些實施例中，肝感染包含B型肝炎。在一些實施例中，肝感染包含C型肝炎。
在一些實施例中，肝病包含遺傳性肝病。在一些實施例中，遺傳性肝病包含血色素沉著症。在一些實施例中，遺傳性肝病包含威爾遜氏病(Wilson disease)。  B.  個體
本文所描述之方法之一些實施例包括個體之治療。個體之非限制性實例包括脊椎動物、動物、哺乳動物、狗、貓、牛、嚙齒動物、小鼠、大鼠、靈長類動物、猴及人類。在一些實施例中，個體為脊椎動物。在一些實施例中，個體為動物。在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為狗。在一些實施例中，個體為貓。在一些實施例中，個體為牛。在一些實施例中，個體為小鼠。在一些實施例中，個體為大鼠。在一些實施例中，個體為靈長類動物。在一些實施例中，個體為猴。在一些實施例中，個體為動物、哺乳動物、狗、貓、牛、嚙齒動物、小鼠、大鼠、靈長類動物或猴。在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，個體為雄性。在一些實施例中，個體為雌性。
在一些實施例中，個體之身體質量指數(body mass index；BMI)為25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更高，或由前述整數中之任兩者限定的範圍。在一些實施例中，個體超重。在一些實施例中，個體之BMI為25或更高。在一些實施例中，個體之BMI為25-29。在一些實施例中，個體為肥胖的。在一些實施例中，個體之BMI為30或更高。在一些實施例中，個體之BMI為30-39。在一些實施例中，個體之BMI為40-50。在一些實施例中，個體之BMI為25-50。
在一些實施例中，個體≥ 90歲。在一些實施例中，個體≥ 85歲。在一些實施例中，個體≥ 80歲。在一些實施例中，個體≥ 70歲。在一些實施例中，個體≥ 60歲。在一些實施例中，個體≥ 50歲。在一些實施例中，個體≥ 40歲。在一些實施例中，個體≥ 30歲。在一些實施例中，個體≥ 20歲。在一些實施例中，個體≥ 10歲。在一些實施例中，個體≥ 1歲。在一些實施例中，個體≥ 0歲。
在一些實施例中，個體≤ 100歲。在一些實施例中，個體≤ 90歲。在一些實施例中，個體≤ 85歲。在一些實施例中，個體≤ 80歲。在一些實施例中，個體≤ 70歲。在一些實施例中，個體≤ 60歲。在一些實施例中，個體≤ 50歲。在一些實施例中，個體≤ 40歲。在一些實施例中，個體≤ 30歲。在一些實施例中，個體≤ 20歲。在一些實施例中，個體≤ 10歲。在一些實施例中，個體≤ 1歲。
在一些實施例中，個體介於0至100歲之間。在一些實施例中，個體介於20至90歲之間。在一些實施例中，個體介於30至80歲之間。在一些實施例中，個體介於40至75歲之間。在一些實施例中，個體介於50至70歲之間。在一些實施例中，個體介於40至85歲之間。  C.  基線量測
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得基線量測。舉例而言，在一些實施例中，基線量測係在治療個體之前自個體獲得。基線量測之非限制性實例包括基線症狀(例如肝病症狀)量測、基線保護性表型量測、基線目標寡核苷酸(例如mRNA)量測或基線目標蛋白量測。
在一些實施例中，基線量測係直接自個體獲得。在一些實施例中，基線量測係藉由觀測，例如藉由觀測個體或個體之組織獲得。在一些實施例中，基線量測係使用成像裝置非侵入性地獲得。在一些實施例中，基線量測係在來自個體之樣本中獲得。在一些實施例中，基線量測係在一或多個組織學組織切片中獲得。在一些實施例中，基線量測係藉由對獲自個體之樣本進行分析，諸如免疫分析、比色分析或螢光分析來獲得。在一些實施例中，基線量測係藉由免疫分析、比色分析或螢光分析來獲得。在一些實施例中，基線量測係藉由PCR獲得。
在一些實施例中，基線量測為基線症狀量測。症狀可為與目標寡核苷酸相關之病症之症狀。病症可為肝病。
在一些實施例中，基線量測為基線保護性表型量測。保護性表型可保護個體免於患上與目標寡核苷酸相關之病症。保護性表型可與病症之發生率呈負相關。
在一些實施例中，基線量測為基線目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測包含基線目標蛋白含量。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為每樣本重量之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為每樣本體積之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為樣本內每總蛋白質之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白量測為基線肝臟或肝細胞目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測為基線循環目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測係藉由分析，諸如免疫分析、比色分析或螢光分析來獲得。
在一些實施例中，基線量測為基線目標mRNA量測。在一些實施例中，基線目標mRNA量測包含基線目標mRNA含量。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為每樣本重量之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為每樣本體積之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為樣本內每總mRNA之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為樣本內每總核酸之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量相對於樣本內之另一mRNA含量，諸如管家基因之mRNA含量指示。在一些實施例中，基線目標mRNA量測為基線肝臟或肝細胞目標mRNA量測。在一些實施例中，基線目標mRNA量測係藉由分析，諸如聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction；PCR)分析來獲得。在一些實施例中，PCR包含定量PCR (qPCR)。在一些實施例中，PCR包含目標mRNA之反轉錄。
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得樣本。在一些實施例中，基線量測係在獲自個體之樣本中獲得。在一些實施例中，樣本係在用本文所描述之組合物投與或治療個體之前自個體獲得。在一些實施例中，基線量測係在向個體投與組合物之前在獲自個體之樣本中獲得。在一些實施例中，樣本係自禁食狀態下之個體獲得。在一些實施例中，樣本係自過夜禁食時段之後的個體獲得。在一些實施例中，樣本係自進食狀態下之個體獲得。
在一些實施例中，樣本包含流體。在一些實施例中，樣本為流體樣本。在一些實施例中，樣本為血液、血漿或血清樣本。在一些實施例中，樣本包含血液。在一些實施例中，樣本為血液樣本。在一些實施例中，樣本為全血樣本。在一些實施例中，血液經分離或離心。在一些實施例中，樣本包含血漿。在一些實施例中，樣本為血漿樣本。在一些實施例中，樣本包含血清。在一些實施例中，樣本為血清樣本。
在一些實施例中，樣本包含組織。在一些實施例中，樣本為組織樣本。在一些實施例中，樣本包含肝臟組織。在一些實施例中，樣本為肝臟樣本。在一些實施例中，樣本包含肝細胞。在一些實施例中，樣本由肝細胞組成。舉例而言，基線目標mRNA量測或基線目標蛋白量測可在來自患者之肝臟或肝細胞樣本中獲得。在一些實施例中，樣本包含脂肪組織。在一些實施例中，樣本為脂肪樣本。脂肪樣本可包含白色脂肪組織或由其組成。脂肪樣本可包含棕色脂肪組織或由其組成。在一些實施例中，樣本包含腎組織。在一些實施例中，樣本為腎樣本。在一些實施例中，樣本包含心臟組織，諸如心室或心房組織。在一些實施例中，樣本為心臟樣本。在一些實施例中，樣本包含腸組織，諸如小腸組織。在一些實施例中，樣本為小腸樣本。在一些實施例中，樣本包含淋巴結組織，諸如腸系膜淋巴結組織。在一些實施例中，樣本為腸系膜淋巴結樣本。在一些實施例中，樣本包含肌肉組織。在一些實施例中，樣本為肌肉樣本。在一些實施例中，組織樣本包含肝臟、脂肪、腎或心臟組織。在一些實施例中，組織樣本包含棕色脂肪組織、白色脂肪組織、腎組織、腸組織、腸系膜淋巴結或肌肉組織。  D.  效果
在一些實施例中，組合物或投與組合物影響量測，諸如相對於基線量測，症狀(例如肝病症狀)量測、保護性表型量測、目標寡核苷酸(例如mRNA)量測或目標蛋白量測(例如肝臟組織目標蛋白含量)。
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得量測。舉例而言，量測可在治療個體之後自個體獲得。在一些實施例中，量測係在向個體投與組合物之後在獲自個體的第二樣本(諸如本文所描述之流體或組織樣本)中獲得。在一些實施例中，量測為已經治療病症的指示。
在一些實施例中，量測係直接自個體獲得。在一些實施例中，量測係使用成像裝置非侵入性地獲得。在一些實施例中，量測係在來自個體之第二樣本中獲得。在一些實施例中，量測係在一或多個組織學組織切片中獲得。在一些實施例中，量測係藉由對獲自個體之第二樣本執行分析來獲得。在一些實施例中，量測係藉由分析，諸如本文所描述之分析來獲得。在一些實施例中，分析為免疫分析、比色分析、螢光分析或PCR分析。在一些實施例中，量測係藉由分析，諸如免疫分析、比色分析或螢光分析來獲得。在一些實施例中，量測係藉由PCR獲得。在一些實施例中，量測係藉由組織學獲得。在一些實施例中，量測係藉由觀測來獲得。在一些實施例中，諸如在第3樣本、第4樣本或第五樣本中進行額外量測。
在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1小時內、2小時內、3小時內、4小時內、5小時內、6小時內、12小時內、18小時內或24小時內獲得。在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1天內、2天內、3天內、4天內、5天內、6天內或7天內獲得。在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1週內、2週內、3週內、1個月內、2個月內、3個月內、6個月內、1年內、2年內、3年內、4年內或5年內獲得。在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1小時之後、2小時之後、3小時之後、4小時之後、5小時之後、6小時之後、12小時之後、18小時之後或24小時之後獲得。在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1天之後、2天之後、3天之後、4天之後、5天之後、6天之後或7天之後獲得。在一些實施例中，量測係在投與組合物之後的1週之後、2週之後、3週之後、1個月之後、2個月之後、3個月之後、6個月之後、1年之後、2年之後、3年之後、4年或5年之後獲得。
在一些實施例中，相對於基線量測，與個體之病症相關之症狀或參數之量測降低或受影響持續延長時段。在一些實施例中，量測在投與後降低或受影響持續至少約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約8天、約9天、約10天、約11天、約12天、約13天、約14天、約15天、約16天、約17天、約18天、約19天、約20天、約21天、約22天、約23天、約24天、約25天、約26天、約27天、約28天、約29天、約30天、約35天、約40天、約45天、約50天、約55天、約60天、約65天、約70天、約75天、約80天、約85天、約90天、約95天、約100天、約105天、約110天、約115天或約120天，或在投與後包含由前述天數中之任兩者限定之範圍的時間範圍。在一些實施例中，量測在投與後降低或受影響持續至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少26天、至少27天、至少28天、至少29天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少80天、至少85天、至少90天、至少95天、至少100天、至少105天、至少110天、至少115天或至少120天。在一些實施例中，量測在投與後降低或受影響持續不超過1天、不超過2天、不超過3天、不超過4天、不超過5天、不超過6天、不超過7天、不超過8天、不超過9天、不超過10天、不超過11天、不超過12天、不超過13天、不超過14天、不超過15天、不超過16天、不超過17天、不超過18天、不超過19天、不超過20天、不超過21天、不超過22天、不超過23天、不超過24天、不超過25天、不超過26天、不超過27天、不超過28天、不超過29天、不超過30天、不超過35天、不超過40天、不超過45天、不超過50天、不超過55天、不超過60天、不超過65天、不超過70天、不超過75天、不超過80天、不超過85天、不超過90天、不超過95天、不超過100天、不超過105天、不超過110天、不超過115天或不超過120天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約5天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約10天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約15天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約20天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約25天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約30天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約40天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約50天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約60天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約70天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約80天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約90天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約100天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約110天。在一些實施例中，量測降低或受影響持續至少約120天。與病症相關之症狀或參數之量測之實例可包括目標mRNA量測、目標蛋白量測、生物標記量測或生理量測。量測可在組織(例如肝臟)中或在生物流體(例如血液、血清或血漿)中。
在一些實施例中，相對於基線症狀量測，組合物使症狀量測減少。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測獲自個體之第二樣本中的減少。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後直接量測個體中的減少。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線症狀量測，症狀量測降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，症狀量測降低2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%，或由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，組合物增加保護性表型量測。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測獲自個體之第二樣本中的增加。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後直接量測個體中的增加。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加約100%或更多、增加約250%或更多、增加約500%或更多、增加約750%或更多、或增加約1000%或更多。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，相對於基線保護性表型量測，保護性表型量測增加不超過約100%、增加不超過約250%、增加不超過約500%、增加不超過約750%、或增加不超過約1000%。在一些實施例中，保護性表型量測增加2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、250%、500%、750%或1000%，或由任何兩個前述百分比限定的範圍。
在一些實施例中，量測為目標蛋白量測。在一些實施例中，目標蛋白量測包含目標蛋白含量。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為每樣本重量之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為每樣本體積之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為樣本內每總蛋白質之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白量測為細胞(例如肝細胞)目標蛋白量測。在一些實施例中，目標蛋白量測為組織(例如肝臟組織)目標蛋白量測。在一些實施例中，目標蛋白量測為循環目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測係藉由分析，諸如免疫分析、比色分析或螢光分析來獲得。
在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測結果，組合物使目標蛋白量測減少。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物使組織目標蛋白含量(諸如但不限於肝臟組織目標蛋白含量)減少。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物使細胞目標蛋白含量(諸如但不限於肝細胞目標蛋白含量)減少。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物使循環目標蛋白含量減少。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測獲自個體之第二樣本中的減少的目標蛋白含量。
在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%、或約100%。在一些實施例中，目標蛋白量測降低2.5%、5%、7.5%、19%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或100%，或由兩個前述百分比中之任一者限定的範圍。目標蛋白量測可降低延長時段。在一些實施例中，目標蛋白量測降低7天、14天、28天、42天、56天、70天、77天、84天、91天、98天、105天或其間的範圍。在一些實施例中，目標蛋白量測降低約7天、約14天、約28天、約42天、約56天、約70天、約77天、約84天、約91天、約98天、約105天或其間的範圍。
在一些實施例中，量測為目標mRNA量測。在一些實施例中，目標mRNA量測包含目標mRNA含量。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為每樣本重量之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為每樣本體積之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為樣本內每總mRNA之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為樣本內每總核酸之目標mRNA之質量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量相對於樣本內之另一mRNA含量，諸如管家基因之mRNA含量指示。在一些實施例中，目標mRNA量測係藉由分析，諸如PCR分析來獲得。在一些實施例中，PCR包含qPCR。在一些實施例中，PCR包含目標mRNA之反轉錄。
在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測，組合物使目標mRNA量測減少。在一些實施例中，目標mRNA量測係在向個體投與組合物之後在獲自個體之第二樣本中獲得。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA含量，組合物使目標mRNA含量減少。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測獲自個體之第二樣本中的減少的目標mRNA含量。在一些實施例中，第二樣本為第二肝臟樣本。在一些實施例中，第二樣本為第二肝細胞樣本。
在一些實施例中，相對於基線量測，目標mRNA量測降低約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測，目標mRNA量測降低約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測，目標mRNA量測降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測，目標mRNA量測降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標mRNA量測降低不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測，目標mRNA量測降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%、或約100%。在一些實施例中，目標mRNA量測降低2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%，或由任何兩個前述百分比限定的範圍。目標mRNA量測可降低延長時段。在一些實施例中，目標mRNA量測降低7天、14天、28天、42天、56天、70天、77天、84天、91天、98天、105天或其間的範圍。在一些實施例中，目標mRNA量測降低約7天、約14天、約28天、約42天、約56天、約70天、約77天、約84天、約91天、約98天、約105天或其間的範圍。一些實施例包括降低除mRNA量測外之RNA量測。 III. 定義
除非另有定義，否則本文所用之所有技術術語、標記法及其他技術及科學術語意欲具有與一般熟習所主張主題所屬技術者通常所理解相同的含義。在一些情況下，出於清楚起見及/或方便參考，在本文中定義具有通常所理解含義之術語，且本文中包括此類定義不應必然解釋為表示與此項技術中通常所理解存在實質性差異。
在本申請案通篇中，各種實施例可以範圍形式呈現。應理解，範圍形式中之描述僅為了方便及簡潔起見，且不應解釋為對本發明範疇的固定限制。因此，範圍之描述應視為已具體揭示所有可能子範圍以及該範圍內之個別數值。舉例而言，對諸如1至6之範圍的描述應視為已具體揭示諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子範圍，以及在彼範圍內之個別數值，例如1、2、3、4、5及6。不論範圍之寬度如何，此均適用。
如在本說明書及申請專利範圍中所使用，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包括複數個參考物。舉例而言，術語「一個樣本」包括複數個樣本，包括其混合物。
一些實例係關於序列。在序列表與本說明書中之揭示內容矛盾之任何程度上，本說明書優先進行。
術語「測定」、「量測」、「評估」、「評定」、「分析(assaying)」及「分析(analyzing)」通常在本文中可互換地用於指量測之形式。該等術語包括測定要素是否存在(例如偵測)。此等術語可包括定量、定性或定量及定性測定。評定可為相對或絕對的。「偵測…之存在」可視上下文而定，包括除測定某物是否存在之外，測定其存在之量。
術語「個體」及「患者」可在本文中互換使用。「個體」可為含有所表現遺傳物質之生物性實體。生物性實體可為植物、動物或微生物，包括例如細菌、病毒、真菌及原生動物。個體可為哺乳動物。哺乳動物可為人類。個體可經診斷或疑似處於疾病之高風險下。在一些情況下，個體未必經診斷或疑似處於疾病之高風險下。
如本文所用，術語「約」某數字係指該數字加或減該數字之10%。術語「約」某範圍係指該範圍減去其最低值之10%及加其最大值之10%。
如本文中所用，術語「治療(treatment/treating)」參考醫藥方案或用於在接受者中獲得有益或所要結果之其他干預方案來使用。有益或所需結果包括但不限於治療益處及/或預防益處。治療益處可指所治療之症狀或潛在病症的根除或減輕。另外，可藉由根除或減輕與潛在病症相關之生理學症狀中的一或多者以使得在個體中觀測到改善來達成治療益處，儘管該個體可能仍罹患潛在病症。預防作用包括延遲、預防或消除疾病或病狀之出現；延遲或消除疾病或病狀之症狀的發作；減緩、阻止或逆轉疾病或病狀之進展；或其任何組合。對於預防益處，處於罹患特定疾病之風險下的個體或報導疾病之生理學症狀中之一或多者的個體可經受治療，即使可能尚未診斷出此疾病。
「治療(Treatment/treating)」可包括就疾病、病症或醫學病狀而言獲得有益或所需結果(包括但不限於治療益處及/或預防益處)的途徑。治療益處可包括例如根除或減輕所治療之潛在病症。另外，治療益處可包括例如根除或減輕與潛在病症相關之生理學症狀中的一或多者以使得在個體中觀測到改善，儘管該個體可能仍罹患潛在病症。在某些實施例中，就預防益處而言，將組合物投與至處於罹患特定疾病之風險下的個體，或投與至報導疾病之生理學症狀中之一或多者的個體，即使可能尚未診斷出此疾病。經由投與本文所描述之化合物治療未必需要涉及醫療專業人士。
本文所用之章節標題僅出於組織目的且不應解釋為限制所描述之主題。
術語「C x-y」或「C x-C y」當與諸如烷基、烯基或炔基之化學部分結合使用時意謂包括鏈中含有x至y個碳的基團。舉例而言，術語「C 1-6烷基」係指含有1至6個碳之經取代或未經取代之飽和烴基，包括直鏈烷基及分支鏈烷基。當化學部分經第二化學部分取代時，術語「C x-y」或「C x-C y」並不意謂限制可與化學部分連接之碳原子數。舉例而言，術語「C 1-6烷基」或「C 1至C 6烷基」係指含有1、2、3、4、5或6個碳原子之飽和的經取代或未經取代之烴基，包括直鏈烷基(例如直鏈烷基)及分支鏈烷基，然而C 1-6烷基之任何取代基中可存在許多碳原子。舉例而言，若C 1-6烷基視情況經包含兩個碳原子之第二化學部分取代，則應理解，C 1-6烷基可包括1至8個之間的碳原子。
術語「C x-y烯基」及「C x-y炔基」係指經取代或未經取代之不飽和脂族基，其長度及可能之取代與上文所描述之烷基類似，但分別含有至少一個雙鍵或參鍵。
「胺基」係指-NH 2部分。
「氰基」係指-CN部分。
「硝基」係指-NO 2部分。
「氧雜」係指-O-部分。
「側氧基」係指=O部分。
「硫酮基」係指=S部分。
「亞胺基」係指=N-H部分。
「肟基(Oximo)」係指=N-OH部分。
「肼基」係指=N-NH 2部分。
「烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成之完全飽和的直鏈或分支鏈烴部分。在某些實施例中，「烷基」包含一至十五個碳原子(例如C 1-C 15烷基)。在某些實施例中，烷基包含一至十三個碳原子(例如C 1-C 13烷基)。在某些實施例中，烷基包含一至八個碳原子(例如C 1-C 8烷基)。在某些實施例中，烷基包含一至六個碳原子(例如C 1-C 6烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至五個碳原子(例如C 1-C 5烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至四個碳原子(例如C 1-C 4烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至三個碳原子(例如C 1-C 3烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至二個碳原子(例如C 1-C 2烷基)。在其他實施例中，烷基包含一個碳原子(例如C 1烷基，例如甲基)。在其他實施例中，烷基包含五至十五個碳原子(例如C 5-C 15烷基)。在其他實施例中，烷基包含五至八個碳原子(例如C 5-C 8烷基)。在其他實施例中，烷基包含二至五個碳原子(例如C 2-C 5烷基)。在其他實施例中，烷基包含三至五個碳原子(例如C 3-C 5烷基)。在其他實施例中，烷基選自甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、1-甲基乙基(2-丙基、異丙基)、1-丁基(正丁基)、1-甲基丙基(二級丁基)、2-甲基丙基(異丁基)、1,1-二甲基乙基(三級丁基)及1-戊基(正戊基)。烷基藉由單鍵與分子之其餘部分連接。
「胺基烷基」係指經由氮原子鍵結之形式-N(H)(烷基)或N(烷基)(烷基)的部分，其中當該部分為N(烷基)(烷基)時，鍵結至氮之兩個烷基可為相同烷基或不同烷基。
「烷氧基」係指具有式-O-烷基，經由氧原子鍵結的部分，其中烷基為如上文所定義之烷基鏈。
「烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成，含有至少一個碳-碳雙鍵之直鏈或分支鏈烴部分。在某些實施例中，烯基包含二至十二個碳原子。在某些實施例中，烯基包含二至八個碳原子。在其他實施例中，烯基包含二至四個碳原子。烯基藉由單鍵連接於分子之其餘部分，例如乙烯基(ethenyl)(亦即乙烯基(vinyl))、丙-1-烯基(亦即烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基及其類似基團。
「炔基」係指僅由碳原子及氫原子組成，含有至少一個碳-碳三鍵，具有二至十二個碳原子且視情況進一步包含至少一個碳-碳雙鍵之直鏈或分支鏈烴部分。在某些實施例中，炔基包含二至八個碳原子。在其他實施例中，炔基包含二至六個碳原子。在其他實施例中，炔基包含二至四個碳原子。炔基藉由單鍵連接於分子之其餘部分，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基及其類似基團。
「伸烷基」或「伸烷基鏈」係指線性(例如直鏈)或分支鏈的二價烴部分。「伸烷基」或「伸烷基鏈」可將分子之一部分與第二部分連接。「伸烷基」或「伸烷基鏈」僅僅由碳原子及氫原子組成(可指定伸烷基經一或多個包含除氫以外之原子(諸如N、O及S)的取代基取代)。「伸烷基」或「伸烷基鏈」可能不含不飽和性(不管伸烷基與分子之其餘部分之連接點)。在某些實施例中，「伸烷基」或「伸烷基鏈」包含一至十二個碳原子，例如亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸正丁基及其類似者。伸烷基鏈可經由單鍵與分子之部分連接且經由單鍵與第二部分連接。伸烷基鏈與分子之其餘部分及與第二部分之連接點可經由伸烷基鏈中之一個碳或經由伸烷基內之任何兩個碳。在某些實施例中，伸烷基包含一至八個碳原子(例如C 1-C 8伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至五個碳原子(例如C 1-C 5伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至四個碳原子(例如C 1-C 4伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至三個碳原子(例如C 1-C 3伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至二個碳原子(例如C 1-C 2伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一個碳原子(例如C 1亞烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含五至八個碳原子(例如C 5-C 8伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含二至五個碳原子(例如C 2-C 5伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含三至五個碳原子(例如C 3-C 5伸烷基)。
「伸烯基」或「伸烯基鏈」係指線性(例如直鏈)或分支鏈的二價烴部分。「伸烯基」或「伸烯基鏈」可將分子之一部分與第二部分連接。「伸烯基」或「伸烯基鏈」僅僅由碳原子及氫原子組成(可指定伸烯基經一或多個包含除氫以外之原子(諸如N、O及S)的取代基取代)。「伸烯基」或「伸烯基鏈」包含至少一個碳-碳雙鍵。在某些實施例中，「伸烯基」或「伸烯基鏈」包含二至十二個碳原子。伸烯基鏈可經由單鍵與分子之部分連接且經由單鍵與第二部分連接。伸烯基鏈與分子之其餘部分及與第二部分之連接點可經由伸烯基鏈中之一個碳或經由伸烯基鏈內之任何兩個碳。在某些實施例中，伸烯基包含二至八個碳原子(例如C 2-C 8伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含二至五個碳原子(例如C 2-C 5伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含二至四個碳原子(例如C 2-C 4伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含二至三個碳原子(例如C 2-C 3伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含五至八個碳原子(例如C 5-C 8伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含二至五個碳原子(例如C 2-C 5伸烯基)。在其他實施例中，伸烯基包含三至五個碳原子(例如C 3-C 5伸烯基)。
「伸炔基」或「伸炔基鏈」係指線性(例如直鏈)或分支鏈的二價烴部分。「伸炔基」或「伸炔基鏈」可將分子之一部分與第二部分連接。「伸炔基」或「伸炔基鏈」僅僅由碳及氫組成(可指定伸炔基經一或多個包含除氫以外之原子(諸如N、O及S)的取代基取代)。「伸炔基」或「伸炔基鏈」包含至少一個碳-碳三鍵。在某些實施例中，「伸炔基」或「伸炔基鏈」包含二至十二個碳原子。伸炔基鏈可經由單鍵與分子之部分連接且經由單鍵與第二部分連接。伸炔基鏈與分子之其餘部分及與第二部分之連接點可經由伸炔基鏈中之一個碳或經由伸炔基鏈內之任何兩個碳。在某些實施例中，伸炔基包含二至八個碳原子(例如C 2-C 8伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含二至五個碳原子(例如C 2-C 5伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含二至四個碳原子(例如C 2-C 4伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含二至三個碳原子(例如C 2-C 3伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含兩個碳原子(例如C 2伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含五至八個碳原子(例如C 5-C 8伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含三至五個碳原子(例如C 3-C 5伸炔基)。
如本文所用，術語「碳環」係指飽和、不飽和環或芳族環，其中環之各原子為碳原子。碳環包括3至10員單環、5至12員雙環、5至12員螺雙環及5至12員橋聯環。雙環碳環之各環可選自飽和、不飽和環及芳族環。在一例示性實施例中，芳族環(例如苯基)可與飽和或不飽和環，例如環己烷、環戊烷或環己烯稠合。在價數准許之情況下，雙環碳環包括飽和雙環、不飽和雙環及芳族雙環之任何組合。雙環碳環進一步包括螺雙環，諸如螺戊烷。雙環碳環包括環大小之任何組合，諸如3-3螺環系統、4-4螺環系統、4-5稠環系統、5-5稠環系統、5-6稠環系統、6-6稠環系統、5-7稠環系統、6-7稠環系統、5-8稠環系統及6-8稠環系統。例示性碳環包括環戊基、環己基、環己烯基、金剛烷基、苯基、二氫茚基、萘基及雙環[1.1.1]戊基。「碳環」可包括「芳基」及「環烷基」。
術語「芳基」係指芳族單環或芳族多環烴環系統。芳族單環或多環烴環系統僅含有氫及碳，以及五至十八個碳原子，其中環系統中之至少一個環為芳族，亦即根據Hückel理論，其含有環狀、非定域(4n+2) π電子系統。衍生芳基之環系統包括但不限於諸如苯、茀、茚烷、茚、四氫萘及萘之基團。在一些實施例中，芳基取代基帶正電或帶負電。在一些實施例中，芳基取代基為中性的。在一些實施例中，芳基取代基為兩性離子；或者或另外，在一些實施例中，芳基取代基不帶電。在一些實施例中，芳基取代基不攜帶電荷。在一些實施例中，芳基取代基不攜帶淨電荷。在一些實施例中，芳基取代基不攜帶淨電荷且不為兩性離子。
術語「環烷基」係指其中環之各原子為碳的飽和環。環烷基可包括單環及多環，諸如3至10員單環、5至12員雙環、5至12員螺雙環及5至12員橋聯環。在某些實施例中，環烷基包含三至十個碳原子。在其他實施例中，環烷基包含五至七個碳原子。環烷基可藉由單鍵與分子之其餘部分連接。單環環烷基之實例包括例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。多環環烷基包括例如金剛烷基、螺戊烷、降莰基(亦即雙環[2.2.1]庚基)、十氫萘基、7,7二甲基雙環[2.2.1]庚基、雙環[1.1.1]戊基及其類似者。
術語「環烯基」係指其中環之各原子為碳且兩個環碳之間存在至少一個雙鍵的飽和環。環烯基可包括單環及多環，諸如3至10員單環、6至12員雙環及5至12員橋聯環。在其他實施例中，環烯基包含五至七個碳原子。環烯基可藉由單鍵與分子之其餘部分連接。單環環烯基之實例包括例如環戊烯基、環己烯基、環庚烯基及環辛烯基。
術語「鹵基」或者「鹵素」或「鹵離子(halide)」意謂氟、氯、溴或碘。在一些實施例中，鹵基為氟、氯或溴。
術語「鹵烷基」係指如上文所定義之烷基，其經一或多個鹵基取代，例如三氟甲基、二氯甲基、溴甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氯甲基-2-氟乙基及其類似者。在一些實施例中，鹵烷基之烷基部分視情況如本文所描述進一步經取代。
如本文所用，術語「雜環」係指包含一或多個雜原子之飽和、不飽和環或芳族環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環包括3至10員單環、6至12員雙環、5至12員螺雙環及5至12員橋聯環。在價數准許之情況下，雙環雜環包括飽和雙環、不飽和雙環及芳族雙環之任何組合。在一例示性實施例中，芳族環(例如吡啶基)可與飽和或不飽和環，例如環己烷、環戊烷、𠰌啉、哌啶或環己烯稠合。雙環雜環包括環大小之任何組合，諸如4-5稠環系統、5-5稠環系統、5-6稠環系統、6-6稠環系統、5-7稠環系統、6-7稠環系統、5-8稠環系統及6-8稠環系統。雙環雜環進一步包括螺雙環，例如5至12員螺雙環，諸如2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷。「雜環」可包括「雜芳基」及「雜環烷基」。
術語「雜芳基」係指衍生自5至18員芳環基團之基團，其包含二至十七個碳原子及一至六個選自氮、氧及硫之雜原子。如本文所用，雜芳基為單環、雙環、三環或四環系統，其中環系統中之至少一個環為芳族，亦即根據Hückel理論，其含有環狀、非定域(4n+2) π電子系統。雜芳基包括稠合或橋聯環系統。雜芳基中之雜原子視情況經氧化。一或多個氮原子(若存在)視情況經四級銨化。雜芳基經由環之任何原子與分子之其餘部分連接。雜芳基之實例包括但不限於氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并二氧雜環戊烯基、苯并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[ b][1,4]二㗁呯基、苯并[b][1,4]㗁 𠯤基、1,4-苯并二㗁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并二氧雜環戊烯基、苯并二氧雜環己烯基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(benzothienyl/benzothiophenyl)、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、㖕啉基、環戊并[d]嘧啶基、6,7-二氫-5H-環戊并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氫苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氫苯并[h]㖕啉基、6,7-二氫-5H-苯并[6,7]環庚[1,2-c]嗒𠯤基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嗒𠯤基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]吡啶基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基、吲基、異㗁唑基、5,8-甲橋-5,6,7,8-二氫喹唑啉基、㖠啶基、1,6-㖠啶酮基、㗁二唑基、2-側氧基氮呯基、㗁唑基、環氧乙基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氫苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1 H-吡咯基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁𠯤基、呔𠯤基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡咯基、喹唑啉基、喹㗁啉基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、5,6,7,8-二氫喹唑啉基、5,6,7,8-四氫苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氫-5H-環庚[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氫吡啶并[4,5-c]嗒𠯤基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三𠯤基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基及噻吩基(thiophenyl) (亦即噻吩基(thienyl))。
一或多個氮原子(若存在)可視情況經四級銨化。在一些實施例中，雜環取代基帶正電或帶負電。在一些實施例中，雜環取代基為中性的。在一些實施例中，雜環取代基為兩性離子；或者或另外，在一些實施例中，雜環取代基不帶電。在一些實施例中，雜環取代基不攜帶電荷。在一些實施例中，雜環取代基不攜帶淨電荷。在一些實施例中，雜環取代基不攜帶淨電荷且不為兩性離子。
術語「雜環烷基」係指具有碳原子及至少一個雜原子之飽和環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環烷基可包括單環及多環，諸如3至10員單環、6至12員雙環、5至12員螺雙環及5至12員橋聯環。雜環烷基中之雜原子視情況經氧化。一或多個氮原子(若存在)視情況經四級銨化。雜環烷基在價態准許下經由雜環烷基之任何原子(諸如雜環烷基之任何碳或氮原子)與分子之其餘部分連接。雜環烷基之實例包括但不限於二氧雜環戊烷基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啶基、異㗁唑啶基、𠰌啉基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、2-側氧基哌𠯤基、2-側氧基哌啶基、2-側氧基吡咯啶基、㗁唑啶基、哌啶基、哌𠯤基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、吡唑啶基、啶基、噻唑啶基、四氫呋喃基、三噻烷基、四氫哌喃基、硫代𠰌啉基、噻𠰌啉基、1-側氧基-硫代𠰌啉基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及1,1-二側氧基-硫代𠰌啉基。在一些實施例中，雜環烷基包含一個雜原子。在一些實施例中，雜環烷基包含一個選自N、O及S之雜原子。在一些實施例中，雜環烷基包含多個雜原子。在一些實施例中，雜環烷基包含多個選自N、O及S之雜原子。
術語「雜環烯基」係指具有碳原子及至少一個雜原子且兩個環碳之間存在至少一個雙鍵的不飽和環。雜環烯基不包括雜芳基環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環烯基可包括單環及多環，諸如3至10員單環、6至12員雙環及5至12員橋聯環。在其他實施例中，雜環烯基包含五至七個環原子。雜環烯基可藉由單鍵與分子之其餘部分連接。單環環烯基之實例包括例如吡咯啉(二氫吡咯)、吡唑啉(二氫吡唑)、咪唑啉(二氫咪唑)、三唑啉(二氫三唑)、二氫呋喃、二氫噻吩、㗁唑啉(二氫㗁唑)、異㗁唑啉(二氫異㗁唑)、噻唑啉(二氫噻唑)、異噻唑啉(二氫異噻唑)、㗁二唑啉(二氫㗁二唑)、噻二唑啉(二氫噻二唑)、二氫吡啶、四氫吡啶、二氫嗒𠯤、四氫嗒𠯤、二氫嘧啶、四氫嘧啶、二氫吡𠯤、四氫吡𠯤、哌喃、二氫哌喃、硫代哌喃、二氫噻喃、戴奧辛(dioxine)、二氫戴奧辛、㗁𠯤、二氫㗁𠯤、噻𠯤及二氫噻𠯤。
術語「經取代」係指在化合物之一或多個碳或可取代的雜原子(例如，NH或NH 2)上具有置換氫之取代基的部分。應理解，「取代」或「經取代」包括暗示限制條件：此類取代與經取代原子及取代基之准許價數一致，且取代產生穩定化合物，亦即不自發地進行諸如藉由重排、環化、消除等進行之轉化的化合物。在某些實施例中，經取代係指具有置換同一碳原子上之兩個氫原子之取代基的部分，諸如用側氧基、亞胺基或硫酮基取代單個碳上之兩個氫原子。如本文所用，術語「經取代」預期包括有機化合物之所有可容許取代基。在一廣泛態樣中，可容許取代基包括有機化合物之非環狀及環狀、分支鏈及非分支鏈、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。對於適當有機化合物，可容許取代基可為一或多個且相同或不同。
在一些實施例中，取代基可包括任何本文所描述之取代基，例如：鹵素、羥基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、肼基(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)；及烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環烷基、環烷基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基及雜芳烷基，其中之任一者可視情況經烷基、烯基、炔基、鹵素、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、肼(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)取代；其中各R a獨立地選自氫、烷基、環烷基、環烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳烷基，其中在價數准許下，各R a可視情況經烷基、烯基、炔基、鹵素、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、肼(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)取代；且其中各R b獨立地選自直接鍵，或直鏈或分支鏈伸烷基、伸烯基或伸炔基鏈，且各R c為直鏈或分支鏈伸烷基、伸烯基或伸炔基鏈。
與氧原子之雙鍵(諸如側氧基)在本文中表示為「=O」及「(O)」兩者。與氮原子之雙鍵表示為「=NR」及「(NR)」兩者。與硫原子之雙鍵表示為「=S」及「(S)」兩者。
如本文所用，片語「非經腸投與(parenteral administration/administered parenterally)」意謂除經腸及局部投與之外的投與模式，通常藉由注射，且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊椎內及胸骨內注射及輸注。
片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指彼等化合物、材料、組合物及/或劑型在合理醫學判斷之範疇內，適用於接觸人類及動物之組織而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比相稱。
如本文所用，片語「醫藥學上可接受之賦形劑」或「醫藥學上可接受之載劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。各載劑在與調配物之其他成分相容且對患者無害的意義上必須為「可接受」的。可充當醫藥學上可接受之載劑之材料之一些實例包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原水；(17)等張鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩衝液；及(21)醫藥調配物中採用之其他無毒相容性物質。
術語「鹽」或「醫藥學上可接受之鹽」係指衍生自此項技術中熟知的多種有機及無機相對離子之鹽。醫藥學上可接受之酸加成鹽可由無機酸及有機酸形成。可衍生鹽的無機酸包含例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似者。可衍生鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似者。醫藥學上可接受之鹼加成鹽可由無機鹼及有機鹼形成。可衍生鹽之無機鹼包括例如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁及其類似者。可衍生鹽之有機鹼包括例如一級胺、二級胺及三級胺、經取代之胺(包括天然存在的經取代之胺)、環胺、鹼性離子交換樹脂及其類似者，特定言之，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺及乙醇胺。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹼加成鹽選自銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。 VI. 實例實例1：目標寡核苷酸中與病症風險增加或降低相關之變體之鑑別
大致30,000,000個輸入變體欲在~375,000名來自Biobank組之個體中分析與肝病(諸如非酒精性脂肪性肝炎)之相關性。
各種目標基因之特定等位基因變體與肝病之間觀測到保護性或不適應相關性。該等相關性將表明，在一些情況下，由目標基因中之任一者編碼之目標蛋白之治療性抑制或調節可為一種治療肝病中之任一者的有效遺傳學方法。  實例2：為了鑑別下調目標mRNA之表現之治療性siRNA之序列的生物資訊選擇
篩選集待基於生物資訊學分析定義。治療性siRNA設計成結合人類目標mRNA，及至少一種毒理學相關物種(諸如非人類靈長類動物(NHP)物種(例如恆河猴或石蟹獼猴))之目標mRNA序列。設計篩選集之驅動器預計為siRNA針對相關物種之總轉錄本的特異性以及物種之間的交叉反應性。測定人類、恆河猴、石蟹獼猴、小鼠及大鼠中針對有義(S)及反義(AS)股之預計特異性。此等指定為「特異性評分」，其考慮藉由siRNA股之完全或部分互補(位置2-18內至多4個錯配)對任何其他轉錄本之非預期下調的可能性，以及錯配的數目及位置。因此，鑑別各siRNA之反義股及有義股之脫靶。另外，潛在脫靶之數目用作特異性評分中之額外特異性因素。如所鑑別，具有高特異性及較低的預計脫靶數之siRNA提供增加之靶向特異性的益處。
除選擇對目標mRNA具有高序列特異性之siRNA序列以外，分析種子區域內之siRNA序列與已知miRNA之種子區域的相似性。siRNA可經由與mRNA分子之3'-UTR內之互補序列鹼基配對以miRNA樣方式作用。互補性通常涵蓋在miRNA之位置2-7 (種子區域)之5'-鹼基。為了規避siRNA經由功能性miRNA結合位點起作用，避開含有天然miRNA種子區域之siRNA股。來自人類、小鼠、大鼠、恆河猴、狗、兔及豬之miRNA中鑑別出之種子區域被稱為「保守」的。將「特異性評分」與miRNA種子分析組合產生「特異性類別」。此分為類別1-4，其中1具有最高特異性且4具有最低特異性。對siRNA之各股指定特異性類別。
評定人類、石蟹獼猴、恆河猴、小鼠及大鼠之物種交叉反應性。該分析係基於使用19個鹼基及17個鹼基之典型siRNA設計(不考慮位置1及19)用於交叉反應性。包括完全匹配以及單一錯配分析。
亦進行用於鑑別具有已知SNP之siRNA靶向區之人類單核苷酸多型性(Single Nucleotide Polymorphism；SNP)資料庫之分析(NCBI-DB-SNP)，以鑑別在個體中可為非功能性之含有SNP的siRNA。在此分析中獲得關於SNP在目標序列內位置的資訊以及在病例資料中之次要等位基因頻率(minor allele frequency；MAF)。
以上方法可用於鑑別下調目標mRNA表現之治療性siRNA。生物資訊學方法亦可用於鑑別結合且下調目標mRNA表現之ASO。  實例3：化學修飾之siRNA
可合成結合目標mRNA之具有化學修飾之siRNA，其中有義股具有諸如修飾模式1S之修飾，且反義股具有諸如修飾模式1AS之修飾。另外，腺苷可置於有義股中之位置19，且尿苷可置於反義股中之位置1。
亦可合成結合目標mRNA之具有化學修飾之siRNA，其中有義股具有修飾模式2S且反義股具有修飾模式3AS。另外，腺苷可置於有義股中之位置19，且尿苷可置於反義股中之位置1。
亦可合成結合目標mRNA之具有化學修飾之siRNA，其中有義股具有修飾模式2S且反義股具有修飾模式9AS。另外，腺苷可置於有義股中之位置19，且尿苷可置於反義股中之位置1。
亦可合成結合目標mRNA之具有化學修飾之siRNA，其中有義股具有修飾模式3S且反義股具有修飾模式3AS。另外，腺苷可置於有義股中之位置19，且尿苷可置於反義股中之位置1。
亦可合成結合目標mRNA之具有化學修飾之siRNA，其中有義股具有以下中之任一者：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶的混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶的混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤的混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤的混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；且進一步其中反義股具有以下中之任一者：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶的混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶的混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤的混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤的混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。  實例4：篩選siRNA在培養細胞中之活性
將分析衍生自前述實例中之序列之化學修飾之siRNA在培養細胞中的目標mRNA基因敲減活性。將表現目標mRNA之細胞株以10,000個細胞/孔之細胞密度接種於96孔組織培養盤中之補充有10%胎牛血清的DMEM中，且在水套加濕培育箱中在37℃下在由空氣加5%二氧化碳構成之氛圍中培育過夜。每孔使用0.3 µL脂染胺RNAiMax (Fisher)，將siRNA分別轉染至重複兩個孔中之細胞中，最終濃度為10 nM。緘默子選擇陰性對照#1 (ThermoFisher，目錄號4390843)及陽性對照siRNA以10 nM最終濃度轉染，作為對照。在37℃下培育48小時之後，自各孔收穫總RNA，且根據製造商說明書使用TaqMan® Fast Advanced Cells-to-CT™套組(ThermoFisher，目錄號A35374)製備cDNA。在Applied Biosystems 7500快速即時PCR機器上，使用針對人類目標mRNA之TaqMan基因表現分析，藉由即時qPCR量測各孔中目標mRNA之含量，重複三次。使用TaqMan基因表現分析(ThermoFisher)來量測PPIA mRNA之含量，且其用於使用△-△Ct法測定各孔中之相對目標mRNA含量。將資料標準化為未處理細胞中之相對目標mRNA含量。
使用如上文所描述之轉染程序，在第二篩選中測試在10 nM下顯示最大程度之目標mRNA基因敲減之siRNA在1 nM濃度下的活性。可使用ASO進行類似實驗。因此，可鑑別最有效地下調目標mRNA之表現之siRNA及ASO。  實例5：寡核苷酸之肝細胞靶向之GalNAc配體
在不將本發明限於此等個別方法之情況下，存在至少兩種將多價N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)配體與寡核苷酸連接之一般方法：固相或溶液相結合。GalNAc配體可連接至固相樹脂用於3'結合，或使用GalNAc胺基亞磷酸酯試劑連接在5'端。對於寡核苷酸序列中之其他核苷，GalNAc胺基亞磷酸酯可在固相上偶聯在序列中之任何位置處。用於與5'端寡核苷酸進行GalNAc結合之胺基亞磷酸酯試劑之非限制性實例顯示於 表 1中。 表 1. GalNAc 結合試劑
結合類型 結構
      固相5' 連接   胺基亞磷酸酯
實例 6 ： 合成 GalNAc 配體 用於製備 NAcegal- 連接子 -TMSOTf 之流程 用於製備化合物 2A 之通用程序
在0℃下，向化合物1A (500 g，4.76 mol，476 mL)於2-甲基-THF (2.00 L)中之溶液中逐滴添加含CbzCl (406 g，2.38 mol，338 mL)之2-甲基-THF (750 mL)。在N 2氛圍下在25℃下攪拌混合物2小時。TLC (DCM:MeOH = 20:1，PMA)指示CbzCl完全耗盡，且形成一個新的色點(R f= 0.43)。向反應混合物中添加HCl/EtOAc (1 N，180 mL)且攪拌30 min，藉由經由矽藻土過濾移除白色固體，且真空濃縮濾液，得到呈淡黃色油狀之化合物2A (540 g，2.26 mol，47.5%產率)且其未經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR: δ 7.28 - 7.41 (m, 5 H), 5.55 (br s, 1 H), 5.01 - 5.22 (m, 2 H), 3.63 - 3.80 (m, 2 H), 3.46 - 3.59 (m, 4 H), 3.29 - 3.44 (m, 2 H), 2.83 - 3.02 (m, 1 H)。 用於製備化合物 4A 之 通用程序
在0℃下，在N 2氛圍下，向化合物3A (1.00 kg，4.64 mol，HCl)於吡啶(5.00 L)中之溶液中逐滴添加乙酸乙醯酯(4.73 kg，46.4 mol，4.34 L)。在N 2氛圍下在25℃攪拌混合物16小時。TLC (DCM:MeOH = 20:1，PMA)指示化合物3A完全耗盡，且形成兩個新的色點(R f= 0.35)。將反應混合物添加至冷水(30.0 L)中且在0℃下攪拌0.5小時，形成白色固體，過濾且乾燥，得到呈白色固體狀之化合物4A (1.55 kg，3.98 mol，85.8%產率)且其未經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR: δ 7.90 (d, J =9.29 Hz, 1 H), 5.64 (d, J =8.78 Hz, 1 H), 5.26 (d, J =3.01 Hz, 1 H), 5.06 (dd, J =11.29, 3.26 Hz, 1 H), 4.22 (t, J =6.15 Hz, 1 H), 3.95 - 4.16 (m, 3 H), 2.12 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H)。 用於製備化合物 5A 之 通用程序
向化合物4A (300 g，771 mmol)於DCE (1.50 L)中之溶液中添加TMSOTf (257 g，1.16 mol，209 mL)，且在60℃下攪拌2小時，且接著在25℃下攪拌1小時。將化合物2A (203 g，848 mmol)溶解於DCE (1.50 L)中，且添加4 Å粉末分子篩(150 g)，在N 2氛圍下攪拌30 min。接著，在0℃下將化合物4A於DCE中之溶液逐滴添加至混合物中。在N 2氛圍下在25℃攪拌混合物16小時。TLC (DCM:MeOH = 25:1，PMA)指示化合物4A完全耗盡，且形成新的色點(R f= 0.24)。將反應混合物過濾，且用飽和NaHCO 3(2.00 L)、水(2.00 L)及飽和鹽水(2.00 L)洗滌。有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物用2-Me-THE/庚烷(5/3，v/v，1.80 L)濕磨2小時，過濾且乾燥，得到呈白色固體狀之化合物5A (225 g，389 mmol，50.3%產率，98.4%純度)。 1H NMR: δ 7.81 (d, J =9.29 Hz, 1 H), 7.20 - 7.42 (m, 6 H), 5.21 (d, J =3.26 Hz, 1 H), 4.92 - 5.05 (m, 3 H), 4.55 (d, J =8.28 Hz, 1 H), 3.98 - 4.07 (m, 3 H), 3.82 - 3.93 (m, 1 H),3.71 - 3.81 (m, 1 H), 3.55 - 3.62 (m, 1 H), 3.43 - 3.53 (m, 2 H), 3.37 - 3.43 (m, 2 H), 3.14 (q, J =5.77 Hz, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.77 (s, 3 H)。 用於製備 NAcegal- 連接子 - 甲苯磺酸鹽之通用程序
在N 2氛圍下，向化合物5A (200 g，352 mmol)於THF (1.0 L)中之溶液中添加無水Pd/C (15.0 g，10%純度)及TsOH (60.6 g，352 mmol)。懸浮液經真空脫氣且用H 2吹掃若干次。在H 2(45 psi)氛圍下在25℃下攪拌混合物3小時。TLC (DCM:MeOH = 10:1，PMA)指示化合物5A完全耗盡，且形成一個新的色點(R f= 0.04)。將反應混合物過濾且減壓濃縮(≤ 40℃)，得到殘餘物。用無水DCM (500 mL，用4 Å分子篩乾燥過夜(在300℃下乾燥12小時))稀釋且濃縮，得到殘餘物，且運行Karl Fisher (KF)以檢查水含量。用無水DCM (500 mL)稀釋及濃縮重複此3次，得到呈泡沫式白色固體狀之NAcegal-連接子-TMSOTf (205 g，95.8%產率，TsOH鹽)。 1H NMR: δ 7.91 (d, J =9.03 Hz, 1 H), 7.53 - 7.86 (m, 2 H), 7.49 (d, J =8.03 Hz, 2 H), 7.13 (d, J =8.03 Hz, 2 H), 5.22 (d, J =3.26 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J =11.29, 3.26 Hz, 1 H), 4.57 (d, J =8.53 Hz, 1 H), 3.99 - 4.05 (m, 3 H), 3.87 - 3.94 (m, 1 H), 3.79 - 3.85 (m, 1 H), 3.51 - 3.62 (m, 5 H), 2.96 (br t, J =5.14 Hz, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 2.10 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H)。 用於製備 TRIS-PEG2-CBZ 之流程 用於製備化合物 5B 之 通用程序
向化合物4B (400 g，1.67 mol，1.00 eq)及NaOH (10 M，16.7 mL，0.10 eq)於THF (2.00 L)中之溶液中添加化合物4B_2 (1.07 kg，8.36 mol，1.20 L, 5.00 eq)，在30℃下攪拌混合物2小時。LCMS顯示給出所需MS。將五批溶液合併為一批，接著混合物用水(6.00 L)稀釋，用乙酸乙酯(3.00 L×3)萃取，經合併之有機層用鹽水(3.00 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析(SiO 2，石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1，R f=0.5)純化，得到呈淺黃色油狀之化合物5B (2.36 kg，6.43 mol，76.9%產率)。HNMR: δ 7.31-7.36 (m, 5 H), 5.38 (s, 1 H), 5.11-5.16 (m, 2 H), 3.75 (t, J=6.4 Hz), 3.54-3.62 (m, 6 H), 3.39 (d, J=5.2 Hz), 2.61 (t, J=6.0 Hz)。 用於製備 3- 側氧基 -1- 苯基 -2,7,10- 三氧雜 -4- 氮雜十三烷 -13- 酸 ( 下文 化合物 2B) 之通用程序
向化合物5B (741 g，2.02 mol，1.00 eq)於DCM (2.80 L)中之溶液中添加TFA (1.43 kg，12.5 mol，928 mL，6.22 eq)，在25℃下攪拌混合物3小時。LCMS顯示給出所需MS。混合物用DCM (5.00 L)稀釋，用水(3.00 L×3)、鹽水(2.00 L)洗滌，經合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈淺黃色油狀之化合物2B (1800g，粗物質)。HNMR: δ 9.46 (s, 5 H), 7.27-7.34 (m, 5 H), 6.50-6.65 (m, 1 H), 5.71 (s, 1 H), 5.10-5.15 (m, 2 H), 3.68-3.70 (m, 14 H), 3.58-3.61 (m, 6 H), 3.39 (s, 2 H), 2.55 (s, 6 H), 2.44 (s, 2 H)。 用於製備化合物 3B 之 通用程序
在0℃下，向化合物2B (375 g，999 mmol，83.0%純度，1.00 eq)於DCM (1.80 L)中之溶液中添加HATU (570 g，1.50 mol，1.50 eq)及DIEA (258 g，2.00 mol，348 mL，2.00 eq)，在0℃下攪拌混合物30 min，接著添加化合物1B (606 g，1.20 mol，1.20 eq)，在25℃下攪拌混合物1小時。LCMS顯示給出所需MS。將混合物合併為一批，接著混合物用DCM (5.00 L)稀釋，用1 N HCl水溶液(2.00 L×2)洗滌，接著有機層用飽和Na 2CO 3水溶液(2.00 L×2)及鹽水(2.00 L)洗滌，有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈黃色油狀之化合物3B (3.88 kg，粗物質)。 用於製備 TRIS-PEG2-CBZ 之通用程序。
在25℃下攪拌化合物3B (775 g，487 mmol，50.3%純度，1.00 eq)於HCl/二㗁烷(4 M，2.91 L，23.8 eq)中之溶液2小時。LCMS顯示給出所需MS。真空濃縮混合物，得到殘餘物。接著經合併之殘餘物用DCM (5.00 L)稀釋，用2.5 M NaOH水溶液調整至pH=8，且分離。水相再次用DCM (3.00 L)萃取，接著水溶液用1 N HCl水溶液調整至pH=3，接著用DCM (5.00 L×2)萃取，經合併之有機層用鹽水(3.00 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析(SiO 2，DCM:MeOH=0:1-12:1，0.1% HOAc，R f=0.4)純化。殘餘物用DCM (5.00 L)稀釋，用2.5 M NaOH水溶液調整至pH=8，分離，水溶液再次用DCM (3.00 L)萃取，接著水溶液用6 N HCl水溶液調整至pH=3，用DCM:MeOH=10:1 (5.00 L×2)萃取，經合併之有機層用鹽水(2.00 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮，得到殘餘物。接著，殘餘物用MeCN (5.00 L)稀釋，真空濃縮，重複此程序兩次以移除水，得到呈淺黃色油狀之TRIS-PEG2-CBZ (1.25 kg，1.91 mol，78.1%產率，95.8%純度)。 1HNMR: 400 MHz, MeOD, δ 7.30-7.35 (5 H), 5.07 (s, 2 H), 3.65-3.70 (m, 16 H), 3.59 (s, 4 H), 3.45 (t, J=5.6 Hz), 2.51 (t, J=6.0 Hz), 2.43 (t, 6.4 Hz)。  用於製備TriNGal-TRIS-Peg2-Phosph 8c之流程 用於製備化合物 3C 之 通用程序
在0℃下，向化合物1C (155 g，245 mmol，1.00 eq)於ACN (1500 mL)中之溶液中添加TBTU (260 g，811 mmol，3.30 eq)、DIEA (209 g，1.62 mol，282 mL，6.60 eq)及化合物2C (492 g，811 mmol，3.30 eq，TsOH)，在15℃下攪拌混合物16小時。LCMS顯示給出所需MS。真空濃縮混合物，得到殘餘物，接著混合物用DCM (2000 mL)稀釋，用1 N HCl水溶液(700 mL×2)、接著飽和NaHCO 3水溶液(700 mL×2)洗滌，且真空濃縮。粗物質藉由管柱層析純化，得到呈黃色固體狀之化合物3C (304 g，155 mmol，63.1%產率，96.0%純度)。 用於製備化合物 4C 之 通用程序
向兩批化合物3C (55.0 g，29.2 mmol，1.00 eq)於MeOH (1600 mL)中之溶液中添加Pd/C (6.60 g，19.1 mmol，10.0 %純度)及TFA (3.34 g，29.2 mmol，2.17 mL，1.00 eq)，混合物經真空脫氣且用H 2吹掃。在15℃下在H 2(15 psi)下攪拌混合物2小時。LCMS顯示給出所需MS。過濾混合物，且真空濃縮濾液，得到呈白色固體狀之化合物4C (106 g，54.8 mmol，93.7%產率，96.2%純度，TFA)。 用於製備化合物 5C 之 通用程序 兩個批次平行。在0℃下，向EDCI (28.8 g，150 mmol，1.00 eq)於DCM (125 mL)中之溶液中逐滴添加化合物 4a(25.0 g，150 mmol，1.00 eq)，接著在0℃下將混合物添加至含化合物 4(25.0 g，150 mmol，1.00 eq)之DCM (125 mL)中，接著在25℃下攪拌混合物1小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯= 3:1，R f= 0.45)顯示，反應物耗盡且形成一個新的色點。反應混合物用DCM (100 mL)稀釋，接著用NaHCO 3水溶液(250 mL×1)及鹽水(250 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析(SiO 2，石油醚:乙酸乙酯= 100:1至3:1)、TLC (SiO 2，石油醚:乙酸乙酯= 3:1)純化，R f= 0.45，接著減壓濃縮，得到殘餘物。獲得呈無色油狀之化合物 5C(57.0 g，176 mmol，58.4%產率，96.9%純度)且確認。 1 HNMR:EW33072-2-P1A, 400 MHz, DMSO δ9.21 (s, 1 H), 7.07-7.09 (m, 2 H), 6.67-6.70 (m, 2 H), 3.02-3.04 (m, 2 H), 2.86-2.90 (m, 2 H) 用於製備化合物 6 之 通用程序 在0℃下，向化合物 3(79.0 g，41.0 mmol，96.4%純度，1.00 eq，TFA)及化合物 6C(14.2 g，43.8 mmol，96.9%純度，1.07 eq)於DCM (800 mL)中之混合物中逐滴添加TEA (16.6 g，164 mmol，22.8 mL，4.00 eq)，在15℃下攪拌混合物16小時。LCMS (EW33072-12-P1B，Rt = 0.844 min)顯示偵測到所需質量。反應混合物用DCM (400 mL)稀釋且用NaHCO 3水溶液(400 mL×1)及鹽水(400 mL×1)洗滌，接著混合物用DCM (2.00 L)稀釋且用0.7 M Na 2CO 3(1000 mL×3)及鹽水(800 mL×3)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物未經純化即直接用於下一步驟中。獲得呈白色固體狀之化合物 6(80.0 g，粗物質)且經由 1 HNMR確認：EW33072-12-P1A, 400 MHz, MeOD δ7.02 - 7.04 (m, 2 H), 6.68 - 6.70 (m, 2 H), 5.34 - 5.35 (s, 3 H), 5.07 - 5.08 (d, J= 4.00 Hz, 3 H), 4.62 - 4.64 (d, J= 8.00 Hz, 3 H), 3.71 - 4.16 (m, 16 H), 3.31 - 3.70 (m, 44 H), 2.80 - 2.83 (m, 2 H), 2.68 (m, 2 H), 2.46 - 2.47 (m, 10 H), 2.14 (s, 9 H), 2.03 (s, 9 H), 1.94 - 1.95 (d, J= 4.00 Hz, 18 H)。 用於製備 TriGNal-TRIS-Peg2-Phosph 8c 之通用程序 平行合成兩個批次。向化合物 6C(40.0 g，21.1 mmol，1.00 eq)於DCM (600 mL)中之溶液中逐滴添加含四氮唑二異丙銨(3.62 g，21.1 mmol，1.00 eq)及化合物 7c(6.37 g，21.1 mmol，6.71 mL，1.00 eq)之DCM (8.00 mL)，在30℃攪拌混合物1小時，接著逐滴添加含化合物 7c(3.18 g，10.6 mmol，3.35 mL，0.50 eq)之DCM (8.00 mL)，在30℃攪拌混合物30 min，接著逐滴添加含化合物 7c(3.18 g，10.6 mmol，3.35 mL，0.50 eq)之DCM (8.00 mL)，在30℃攪拌混合物1.5小時。LCMS (EW33072-17-P1C1，Rt = 0.921 min)顯示偵測到所需MS+1。LCMS (EW33072-17-P1C2，Rt = 0.919 min)顯示偵測到所需MS+1。將兩個批次合併用於處理。混合物用DCM (1.20 L)稀釋，用飽和NaHCO 3水溶液(1.60 L×2)、含3% DMF之H 2O (1.60 L×2)、H 2O (1.60 L×3)、鹽水(1.60 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由管柱層析(SiO 2，DCM:MeOH:TEA = 100:3:2)、TLC (SiO 2，DCM:MeOH = 10:1，R f= 0.45)純化，接著減壓濃縮，得到殘餘物。獲得呈白色固體狀之 化合物 8C(76.0 g，34.8 mmol，82.5%產率，96.0%純度)，且經由 1 HNMR確認 ：EW33072-19-P1C, 400 MHz, MeOD δ7.13-7.15 (d, J= 8.50 Hz, 2 H), 6.95-6.97 (dd, J=8.38, 1.13 Hz, 2 H), 5.34 (d, J=2.88 Hz, 3 H), .09 (dd, J=11.26, 3.38 Hz, 3 H), 4.64 (d, J=8.50 Hz, 3 H), 3.99 - 4.20 (m, 12 H), 3.88 - 3.98 (m, 5 H), 3.66 - 3.83 (m, 20 H), 3.51 - 3.65 (m, 17 H), 3.33 - 3.50 (m, 9 H), 2.87 (t, J=7.63 Hz, 2 H), 2.76 (t, J=5.94 Hz, 2 H), 2.42 - 2.50 (m, 10 H), 2.14 (s, 9 H), 2.03 (s, 9 H), 1.94 - 1.95 (d, J=6.13 Hz, 18 H), 1.24-1.26 (d, J=6.75 Hz, 6 H), 1.18-1.20 (d, J=6.75 Hz, 6 H) 實例7：使用結合GalNAc之siRNA及ASO之活體外肝細胞靶向
在此實驗中，相較於其中肝細胞株用未與GalNAc部分結合之抗GFP siRNA或ASO處理之對照實驗，表現去唾液酸糖蛋白受體及GFP之肝細胞株將用與GalNAc部分結合之抗GFP siRNA或ASO處理。量測GFP mRNA及蛋白質表現，且將用結合GalNAc之siRNA或ASO處理之細胞中GFP mRNA或蛋白質表現的量標準化並與用未結合GalNAc之siRNA或ASO處理之細胞中GFP mRNA或蛋白質表現的量比較。此可允許測定GalNAc部分之肝細胞靶向能力。多個GalNAc部分可與siRNA或ASO結合且進行比較，以查看哪一GalNAc部分引起最佳肝細胞靶向。此等實驗中待測試之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分。
可在用結合或未結合GalNAc部分之siRNA或ASO處理之原代肝細胞中進行類似實驗，且可在原代肝細胞中評定除GFP外之目標mRNA或目標蛋白。  實例8：使用結合GalNAc之siRNA及ASO之活體內肝細胞靶向
在此實驗中，靶向目標mRNA之siRNA或ASO將與GalNAc部分結合且向小鼠投與(n = 5隻/組)，且與其中向小鼠投與無GalNAc結合之siRNA或ASO的對照實驗比較。在2天後處死小鼠，且將肝臟冷凍，稍後均質化，且測試目標mRNA及蛋白質表現。將用結合GalNAc之siRNA或ASO處理之小鼠之肝臟中目標mRNA或蛋白質表現的量標準化，且與用未結合GalNAc之siRNA或ASO處理之小鼠之肝臟中GFP mRNA或蛋白質表現的量比較。此可允許測定GalNAc部分之肝臟靶向能力。多個GalNAc部分可與siRNA或ASO結合且進行比較，以查看哪一GalNAc部分引起最佳肝臟靶向。此實驗中包括之GalNAc部分可為展現最大程度之肝細胞靶向之彼等者。此等實驗中待測試之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分。  實例9：使用結合GalNAc之siRNA及ASO之肝病小鼠模型中目標mRNA之抑制
在此實驗中，肝病(在此情況下，脂肪肝病)鼠類模型將用於評估目標mRNA對siRNA或ASO抑制之影響。目標mRNA可編碼其中過度表現或過度活化在肝病中起病理性作用之任何目標蛋白。在鼠類模型中，脂肪肝病藉由如下來誘導：對小鼠餵食含有21.1重量%脂肪、41重量%蔗糖及1.25重量%膽固醇之西式飲食(Western Diet；WD) (Teklad飲食，TD. 120528)，以及高糖溶液(23.1 g/L d-果糖(Sigma-Aldrich，G8270)及18.9 g/L d-葡萄糖(Sigma-Aldrich，F0127))12週。將4週齡C57Bl/6J小鼠餵食西式飲食代替常規食物12週。此實驗中使用之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分。
簡言之，將小鼠分為五個組：組1：用非靶向對照siRNA處理之脂肪肝病組；組2：用非靶向對照ASO處理之脂肪肝病組；組3：用靶向目標mRNA之siRNA處理之脂肪肝病組；組4：用靶向目標mRNA之ASO處理之脂肪肝病組；組5：正常飲食之對照小鼠。各組含有八隻小鼠(4隻雄性，4隻雌性)。組1-4之siRNA及ASO各自包括與siRNA或ASO連接之GalNAc部分。
在西式飲食之第12週，在第一次處理前，自各群組收集血液樣本。
藉由200 µL皮下注射10 µM濃度之再懸浮於PBS中之裸siRNA或ASO來達成siRNA或ASO之投與。在研究第0天，將對組1小鼠皮下注射非靶向對照siRNA，將對組2小鼠皮下注射非靶向對照ASO，將對組3小鼠皮下注射靶向小鼠中之目標mRNA的siRNA1，將對組4小鼠皮下注射靶向小鼠中之目標mRNA的ASO1，及將對組5小鼠皮下注射媒劑。在第14天開始後每隔一週，將對各組之動物如同第0天給藥，總共5次注射。
將進行每週一次抽血且分離血清及血漿。使用VITROS 5,1 FS (Ortho Clinical Diagnostics)來量測血清ALT、AST、總膽固醇及三酸甘油酯含量。用超敏小鼠胰島素ELISA套組(Crystal Chem，90080)，根據製造商說明書量測非禁食血漿胰島素。用One Touch Ultra (Life Scan)分析非禁食血糖。計算HOMA IR及QUICKI。
在12週西式飲食及siRNA/ASO處理結束時，藉由腹膜內注射0.3 ml戊巴比妥鈉(Nembutal) (5 mg/ml)之後進行頸椎脫位術處死小鼠。經由心臟穿刺收集終末抽取的血清，且量測最終血清ALT、AST、總膽固醇及三酸甘油酯含量，以及非禁食血漿胰島素及葡萄糖。移出肝臟且分為三個部分；一個部分置放於RNAlater中用於mRNA分離，一個部分迅速冷凍以用於蛋白質分離，一個部分在福馬林中固定且接著石蠟包埋。
使用PureLink套組，根據製造商方案(ThermoFisher目錄號12183020)，自置於RNAlater溶液中之組織分離mRNA。根據製造商之方案進行反轉錄酶反應。將樣本儲存在-80℃下，直至使用TaqMan基因表現分析(Applied Biosystems FAM-探針，使用BioRad iCycler)進行即時qPCR，重複三次。相較於來自給藥非特異性對照siRNA及ASO之小鼠之肝臟組織中之目標mRNA含量，來自給藥siRNA及ASO之小鼠之肝臟組織中之目標mRNA表現的降低。相較於來自接受非特異性對照siRNA或ASO之小鼠之肝臟組織中之SDF-1的量，來自接受siRNA及ASO之小鼠之肝臟組織中之SDF-1的量存在預期降低。此等結果顯示，siRNA及ASO誘發肝臟組織中目標mRNA及目標蛋白之基因敲減，以及目標mRNA及目標蛋白表現之降低與SDF-1產生之降低相關。
福馬林固定、石蠟包埋之肝臟部分用蘇木精及伊紅(H&E)染色用於評定肝臟組織學，用天狼星紅(Sirius Red) (Sigma，365548-5G)/固綠(Fast Green) (Sigma，F258)染色用於評定纖維化，及用過碘酸-希夫(periodic acid-Schiff；PAS)染色用於評定肝醣累積。由專業病理學家根據NASH CRN評分系統13評估NAFLD活動性評分(NAFLD Activity Score；NAS)及纖維化階段。盲態進行組織評分，其中病理學家不瞭解接受之處理。此等結果顯示，siRNA及ASO誘發肝臟組織中目標mRNA及目標蛋白之基因敲減，以及目標mRNA及目標蛋白之表現之降低與NAS及NASH CRN之降低相關。  實例10：肝病小鼠模型之抑制
在此實驗中，肝病(在此情況下，高三酸甘油酯血症)鼠類模型將用於評估肝臟中表現之目標蛋白之siRNA或ASO抑制相較於抗小鼠目標蛋白抗體的影響。小鼠品系C57Bl/6 Apoetm1Unc小鼠將維持攝入高脂西式飲食(Research Diets，D12492；按卡路里計，60%脂肪)。目標蛋白可為其中過度表現或過度活化在肝病中起病理性作用之任何目標蛋白。此實驗中使用之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分。
此研究中將使用四組小鼠(n=16隻/組)。動物在研究期間將維持攝入高脂飲食。在第一次注射前第-4天，將移出食物以用於過夜禁食。在第一次注射前第-3天，將所有動物麻醉，且經由頜下靜脈收集300 µL血液於血清分離管中以評定基線三酸甘油酯、血清葡萄糖、胰島素敏感性、總膽固醇含量、HDL膽固醇含量、肝功能以及目標蛋白之血清含量。在研究第0天，將對組1小鼠腹膜內注射600 µL標準生理鹽水，將對組2小鼠腹膜內注射600 µg呈600 µL之抗小鼠目標蛋白抗體，將對組3小鼠皮下注射150 µg於200 µL標準生理鹽水中之靶向編碼小鼠中之目標蛋白之mRNA的GalNAc-siRNA，及將對組4小鼠皮下注射150 µg於200 µL標準生理鹽水中之靶向編碼目標蛋白之mRNA的GalNAc-ASO。在第3天下午，將移出所有組之食物用於過夜禁食。在第4天，將所有組之動物麻醉，且經由頜下靜脈收集150 µL血液於血清分離管中以評定血清三酸甘油酯、葡萄糖、總膽固醇、HDL膽固醇以及目標蛋白之含量。所有組之動物接著將進行口服葡萄糖耐受性測試及胰島素耐受性測試以評估胰島素敏感性。在收集血液及進行胰島素敏感性測試後，將再次如正常一樣供應食物。在第7天開始後，每週一次對組2之動物如同第0天給藥，總共15次注射。在第14天開始後，每隔一週對組3及組4之動物如同第0天給藥，總共8次注射。在第10天開始，每隔一週將對所有組之小鼠禁食(過夜)及抽血(150 µL至血清分離管中)，以評定血清三酸甘油酯、葡萄糖、總膽固醇、HDL膽固醇以及目標蛋白之含量，且進行胰島素敏感性測試。在最後一次注射後之第三天，將移出所有組之食物用於過夜禁食。在最後一次注射後第四天，將所有組之動物麻醉，安樂死且經由心臟穿刺抽血以收集500 µL血液至血清分離管中，以評定三酸甘油酯、血清葡萄糖、胰島素敏感性、總膽固醇含量、HDL膽固醇含量、肝功能以及目標蛋白之血清含量。將自所有動物收集來自肝臟、小腸及腸系膜淋巴結之組織，且浸沒於10%中性緩衝福馬林中用於組織病理學分析。亦將自所有動物收集肝臟樣本且置於RNAlater中。將藉由RT-qPCR，使用針對小鼠目標蛋白及小鼠管家基因PPIA之TaqMan分析來評定目標mRNA的含量。
相較於組1 (鹽水)之小鼠，預期用抗體處理之動物(組2)、用GalNAc-siRNA處理之小鼠(組3)及用GalNAc-ASO處理之小鼠(組4)具有降低的三酸甘油酯、總血清膽固醇、血清葡萄糖以及降低的血清目標蛋白含量，及增加的HDL膽固醇及胰島素敏感性。亦預期組2及組3中之動物在肝臟樣本中具有降低的目標mRNA。  實例11：使用GalNAc-siRNA及GalNAc-ASO之非人類靈長類動物中目標mRNA之抑制
在此實驗中，高三酸甘油酯血症NHP模型用於評估肝臟中表現之目標mRNA之siRNA或ASO抑制的影響。目標蛋白可為其中過度表現或過度活化在肝病中起病理性作用之任何目標蛋白。將使用三組石蟹獼猴(n=5隻/組)，其在起始研究前置於高脂肪飲食(西式靈長類動物飲食，5S2T)。或者，將使用三組恆河猴(n=5隻/組)，其在起始研究前置於高果糖飲食。對動物每兩週給與7次皮下注射鹽水(組1)、GalNAc-siRNA (組2)或GalNAc-ASO (組3)。經修飾之GalNAc-siRNA序列可包括本文所描述之任何修飾模式。此實驗中使用之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分。將在基線時及在研究之第4、8及14週時收集用於脂質及血糖量測之血液樣本，且分析脂質含量、血清葡萄糖、胰島素敏感性及目標蛋白。在最後一次血液收集2週後，對各群組之所有動物進行屍體解剖。將自所有動物收集來自肝臟、小腸及腸系膜淋巴結之組織，且浸沒於10%中性緩衝福馬林中用於組織病理學分析。亦將自所有動物收集肝臟樣本且置於RNAlater中。將藉由RT-qPCR，使用針對石蟹獼猴或恆河猴目標蛋白以及石蟹獼猴或恆河猴管家基因PPIA之TaqMan分析來評定目標mRNA之含量。
預期相較於組1 (鹽水)之動物，用GalNAc-siRNA處理之動物(組2)及用GalNAc-ASO處理之動物(組3)將顯示降低的三酸甘油酯、總血清膽固醇及血清葡萄糖，以及降低的血清目標蛋白含量，及增加的HDL膽固醇及胰島素敏感性。亦預期，組1及組3中之動物將顯示在肝樣本中降低的目標mRNA。  實例12：使用GalNAc-siRNA及GalNAc-ASO之臨床試驗中目標mRNA之抑制
在此研究中，患有高三酸甘油酯血症之人類個體用於評估肝臟中表現之目標mRNA之siRNA或ASO抑制的影響。目標蛋白可為其中過度表現或過度活化在肝病中起病理性作用之任何目標蛋白。該研究中包括之選擇標準為年齡40-90，BMI ≥ 30，且血清三酸甘油酯≥ 250 mg/dL。研究中將包括三組個體(n=15名/組)。對個體每週給與5次皮下注射鹽水(組1)、GalNAc-siRNA (組2)或GalNAc-ASO (組3)。此等實驗中使用之GalNAc部分可包括本文所描述之GalNAc部分。
在培養細胞中或在實驗中顯示高活性之來自選擇集合之siRNA或ASO序列在其他實例中描述。將株基線時及在研究之第3、6及12週時收集用於脂質及血糖量測之血液樣本，且分析脂質含量、血清葡萄糖、胰島素敏感性、目標蛋白以及肝臟及腎功能。
預期相較於組1 (鹽水)之個體，用GalNAc-siRNA處理之個體(組2)及用GalNAc-ASO處理之個體(組3)將顯示降低的三酸甘油酯、總血清膽固醇及血清葡萄糖，以及降低的血清目標蛋白含量，及增加的HDL膽固醇及胰島素敏感性。 實例 13 ：寡核苷酸合成
根據胺基亞磷酸酯技術，在寡核苷酸合成中使用之固相上合成RNAi劑(例如siRNA)。使用K&A寡核苷酸合成器。在由受控孔玻璃(controlled pore glass，CPG；500 Å或600 Å，獲自AM Chemicals, Oceanside, CA, USA)製成之固體載體上進行合成。所有2'-OMe及2'-F胺基亞磷酸酯均係購自Hongene Biotech (Union City, CA, USA)。將所有胺基亞磷酸酯溶解於無水乙腈(100 mM)中，且添加分子篩(3 Å)。使用5-苯甲硫基-1H-四唑(BTT，250 mM於乙腈中)或5-乙基硫基-1H-四唑(ETT，250 mM於乙腈中)作為活化劑溶液。偶聯時間為9-18 min (EmpGalNAc)、6 min (2′OMe及2′F)。為了引入硫代磷酸酯鍵聯，使用3-苯基1,2,4-二噻唑啉-5-酮(POS，獲自PolyOrg, Inc., Leominster, Mass., USA)於無水乙腈中之100 mM溶液。
在固相合成之後，乾燥固體載體在30℃下用含40 wt%甲胺之水與28%氫氧化銨溶液(Aldrich)之1:1體積溶液處理兩小時。使溶液蒸發，且固體殘餘物復原於水中且藉由陰離子交換HPLC，使用TKSgel SuperQ-5PW 13u管柱純化。緩衝液A為20 mM Tris、5 mM EDTA，pH 9.0且含有20%乙腈，且緩衝液B與緩衝液A相同，但其中添加有1 M氯化鈉。記錄在260 nm下之UV跡線。將適當溶離份合併，接著使用Sephadex G-25介質去鹽。
將等莫耳量之有義股及反義股組合以製備雙螺旋體。在0.1×PBS (磷酸鹽緩衝鹽水，1×，Gibco)中製備雙螺旋體溶液。使雙螺旋體溶液在95℃下黏著5 min，且緩慢冷卻至室溫。藉由在UV-Vis光譜儀上量測在260 nm下於0.1×PBS中之溶液吸光度來測定雙螺旋體濃度。對於一些實驗，換算因數係利用實驗測定的消光係數計算。  實例14：使用結合GalNAc之siRNA及ASO之活體內肝細胞靶向
在此實驗中，靶向目標mRNA之siRNA或ASO將與GalNAc部分結合且向小鼠投與(n = 5隻/組)，且與其中向小鼠投與無GalNAc結合之siRNA或ASO的對照實驗比較。在2天後處死小鼠，且將肝臟冷凍，稍後均質化，且測試目標mRNA及蛋白質表現。將用結合GalNAc之siRNA或ASO處理之小鼠之肝臟中目標mRNA或蛋白質表現的量標準化，且與用未結合GalNAc之siRNA或ASO處理之小鼠之肝臟中GFP mRNA或蛋白質表現的量比較。此可允許測定GalNAc部分之肝臟靶向能力。多個GalNAc部分可與siRNA或ASO結合且進行比較，以查看哪一GalNAc部分引起最佳肝臟靶向。GalNAc部分可為在實例6中展現最大程度之肝細胞靶向之彼等者。此等實驗中測試之GalNAc部分可為本文所描述之GalNAc部分，諸如化合物1或化合物2。  實例15：結合GalNAc之siRNA對小鼠中PLIN1之基因敲減
實例GalNAc部分ETL17與靶向實例目標mRNA之siRNA結合。序列顯示於 表 2中。在該表中，Nf (例如Af、Cf、Gf、Tf或Uf)為2'氟基修飾之核苷，n (例如a、c、g、t或u)為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。測試siRNA在小鼠中之活性。
藉由眶後途徑，在第-14天對六至八週齡雌性小鼠(C57BL/6)注射10 μL重組腺相關病毒8 (AAV8)載體(1.7 × 10E 13個基因體複本/mL)。重組AAV8在封裝於AAV8殼體中之AAV2主鏈中含有在人類甲狀腺素結合球蛋白啟動子控制下的人類PLIN1序列(NM_002666.5) (AAV8-TBG-h-PLIN1)。在第0天，對感染小鼠(n=4)給與皮下注射單次100 μg劑量之結合GalNAc之siRNA或作為媒劑對照之PBS。
在皮下注射後第10天將小鼠安樂死，且自各小鼠收集肝臟樣本並置於RNAlater (ThermoFisher目錄號AM7020)中直至處理。藉由在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中，使用設定為5000 rpm持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)均質化肝臟組織來製備總肝臟RNA。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上，根據製造商之建議純化來自溶解物之總RNA。使用Quanta qScript cDNA SuperMix (VWR，目錄號95048-500)，根據製造商說明書進行cDNA之製備。在QuantStudio™ 6 Pro 即時PCR系統上，使用針對人類PLIN1 (ThermoFisher，分析號Hs01106925_m1)及小鼠管家基因PPIA (ThermoFisher，分析號Mm02342430_g1)之TaqMan分析及PerfeCTa® qPCR FastMix®, Low ROX™ (VWR，目錄號101419-222)，藉由RT-qPCR評定肝臟PLIN1 mRNA之相對含量，重複三次。將資料標準化為接受PBS之動物中之平均PLIN1 mRNA含量。結果顯示於 表 3中。在第10天，相對於接受PBS之小鼠，所有測試之siRNA均引起平均肝臟PLIN1 mRNA之減少。此等資料指示，與GalNAc部分(諸如ETL17)結合之siRNA適用於基因敲減肝臟中之目標mRNA。  表2.實例siRNA序列
siRNA 名稱 SEQ ID NO 具有GalNAc 部分之有義股序列(5´-3´) SEQ ID NO 反義股序列(5´-3´)
ETD01899 1 [ETL17]scaguuuuuAfaGfggacaccasusu 8 usGfsgUfgUfcCfcUfuAfaAfaAfcUfgsusu
ETD01900 2 [ETL17]suuuuuAfAfGfGfgAfcaccagaasusu 9 usUfscUfgGfuGfuCfcCfuUfaAfaAfasusu
ETD01901 3 [ETL17]suuuugaCfaCfaUfucuuagcasusu 10 usGfscUfaAfgAfaUfgUfgUfcAfaAfasusu
ETD01902 4 [ETL17]suugaCfaCfaUfuCfuuagcacasusu 11 usGfsuGfcUfaAfgAfaUfgUfgUfcAfasusu
ETD01903 5 [ETL17]sacauucuuAfGfcacugaacasusu 12 usGfsuUfcAfgUfgCfuAfaGfaAfuGfususu
ETD01904 6 [ETL17]sugcaUfagUfCfaCfucuuuugasusu 13 usCfsaAfaAfgAfgUfgAfcUfaUfgCfasusu
ETD01905 7 [ETL17]saacuaCfUfgCfaUfaauauggasusu 14 usCfscAfuAfuUfaUfgCfaGfuAfgUfususu
表3.小鼠之肝臟中之相對人類PLIN1 mRNA含量
群組 n 處理 劑量( μg) 平均PLIN1 mRNA ( 標準化為組1 ， 第10 天)
1 4 PBS 0 1.00
2 4 ETD01899 100 0.79
3 4 ETD01900 100 0.30
4 4 ETD01901 100 0.37
5 4 ETD01902 100 0.24
6 4 ETD01903 100 0.83
7 4 ETD01904 100 0.58
實例16：結合GalNAc之siRNA對小鼠中MST1之基因敲減
ETL17與靶向另一實例目標mRNA之siRNA結合。將siRNA與GalNAc配體ETL17連接，隨後與有義股之5'端之硫代磷酸酯鍵聯連接。siRNA描述於 表 6中。在該表中，Nf (例如Af、Cf、Gf、Tf或Uf)為2'氟基修飾之核苷，dN (例如dA、dC、dG、dT或dU)為2'去氧基修飾之核苷，n (例如a、c、g、t或u)為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。
藉由眶後途徑，對六至八週齡雌性小鼠(C57BL/6)注射5 μL重組腺相關病毒8 (AAV8)載體(2.7 × 10E13個基因體複本/mL)。重組AAV8在封裝於AAV8殼體中之AAV2主鏈中含有在人類甲狀腺素結合球蛋白啟動子控制下之開讀框及人類MST1序列之大部分3'UTR (NM_020998.4) (AAV8-TBG-h-MST1)。在感染後第13天，收集血清，且使用R&D之人類MSP/MST1 DuoSet ELISA (目錄號DY352)來量測各小鼠中人類MSP之含量。按照關於緩衝液及溶液之所有試劑製備之製造商說明書。所有測試樣本使用1:50之血清樣本稀釋液。套組中所包括之重組MSP用於產生10,000 pg/mL至0 pg/mL之標準曲線。使用PerkinElmer Envision多模式盤讀取器，讀取培養盤在450 nm下之光密度。藉由內插法，使用最小平方擬合(Prism版本9，Software MacKiev)，根據標準曲線計算各小鼠血清樣本中MSP之濃度。
將小鼠分配至各組(n=3)中，以使得各組具有類似的MSP血清含量，且接著給與皮下注射單次60 μg劑量之結合GalNAc之siRNA或作為媒劑對照的PBS。在注射之後第0、4及12天，收集血清以藉由ELISA，使用上文所描述之方法評定血清MSP濃度。在各時間點之MSP血清濃度係相對於各個別小鼠之第0天樣本中MSP之含量得出。結果顯示於 表 4中。此等資料指示，與GalNAc部分(諸如ETL17)結合之siRNA適用於基因敲減肝臟中之額外目標mRNA分泌的蛋白質。
在第12天將小鼠處死，且自各小鼠收集肝臟樣本並置於RNAlater (ThermoFisher目錄號AM7020)中直至處理。藉由在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中，使用設定為5000 rpm持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)均質化肝臟組織來製備總肝臟RNA。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上，根據製造商之建議純化來自溶解物之總RNA。使用Quanta qScript cDNA SuperMix (VWR，目錄號95048-500)，根據製造商說明書進行cDNA之製備。在QuantStudio™ 6 Pro 即時PCR系統上，使用針對人類MST1 (ThermoFisher，分析號Hs00360684_m1)及小鼠管家基因PPIA (ThermoFisher，分析號Mm02342430_g1)之TaqMan分析，以及PerfeCTa® qPCR FastMix®, Low ROX™ (VWR，目錄號101419-222)，藉由RT-qPCR評定肝臟MST1 mRNA的相對含量，重複三次。將資料標準化為接受PBS之動物中的含量。結果顯示於 表 5中。此等資料指示，與GalNAc部分(諸如ETL17)結合之siRNA適用於基因敲減肝臟中之額外目標mRNA。 表4. AAV8-TBG-h-MST1小鼠中之相對平均血清人類MSP含量
群組 n 處理 劑量( μg) 平均血清人類MSP ( 相對於第0 天)
            第0天 第4天 第12天
1 3 PBS    1.00 1.12 1.54
2 3 ETD01867 60 1.00 0.35 0.24
3 3 ETD01963 60 1.00 0.46 0.42
4 3 ETD01964 60 1.00 0.35 0.15
5 3 ETD01965 60 1.00 0.32 0.26
6 3 ETD01966 60 1.00 0.30 0.16
7 3 ETD01868 60 1.00 0.67 ND
8 3 ETD01967 60 1.00 0.41 0.27
9 3 ETD01968 60 1.00 0.53 0.30
10 3 ETD01969 60 1.00 0.68 0.45
11 3 ETD01970 60 1.00 0.51 0.59
12 3 ETD01971 60 1.00 0.60 0.42
13 3 ETD01972 60 1.00 0.24 0.17
ND，未測定 表5. AAV8-TBG-h-MST1小鼠之肝臟中之相對人類MST1 mRNA含量
群組 n 處理 劑量( μg) 平均人類MST1 mRNA ( 相對於組1 ， 第12 天)
1 3 PBS    1.00
2 3 ETD01867 60 0.40
3 3 ETD01963 60 0.76
4 3 ETD01964 60 0.60
5 3 ETD01965 60 0.25
6 3 ETD01966 60 0.33
7 3 ETD01868 60 0.28
8 3 ETD01967 60 0.07
9 3 ETD01968 60 0.32
10 3 ETD01969 60 0.15
11 3 ETD01970 60 0.24
12 3 ETD01971 60 0.31
13 3 ETD01972 60 0.08
表6.篩選在AAV8-TBG-h-MST1小鼠中之活性之siRNA
siRNA 名稱 SEQ ID NO 具有GalNAc 部分之有義股序列(5´-3´) SEQ ID NO 反義股序列 (5´-3´)
ETD01867 43 [ETL17]sucuuGfucAfGfacauaaagcasusu 54 usGfscUfuUfaUfgUfcUfgAfcAfaGfasusu
ETD01963 44 [ETL17]sucuuGfucAfGfacauaaagcasusu 55 usGfscuuUfaUfgUfcUfgAfcAfaGfasusu
ETD01964 45 [ETL17]sucuuGfucAfGfacauaaagcasusu 56 usGfscuuUfaugUfcUfgAfcAfaGfasusu
ETD01965 46 [ETL17]sucuuGfucAfGfacauaaagcasusu 57 usGfscUfuUfaUfgucUfgAfcAfaGfasusu
ETD01966 47 [ETL17]sucuuGfucAfGfacauaaagcasusu 58 usGfscUfuuAfugUfcUfgAfcAfaGfasusu
ETD01967 48 [ETL17]suuguCfadGaCfaUfaaagccaasusu 59 usUfsgGfcUfuUfaUfgUfcUfgAfcAfasusu
ETD01968 49 [ETL17]suugucagaCfdAUfaaagccaasusu 60 usUfsgGfcUfuUfaUfgUfcUfgAfcAfasusu
ETD01969 50 [ETL17]suuguCfagaCfaUfaaagccaasusu 61 usUfsggcUfuUfaUfgUfcUfgAfcAfasusu
ETD01970 51 [ETL17]suuguCfagaCfaUfaaagccaasusu 62 usUfsgGfcUfuUfaugUfcUfgAfcAfasusu
ETD01971 52 [ETL17]suuguCfagaCfaUfaaagccaasusu 63 usUfsggcUfuUfaugUfcUfgAfcAfasusu
ETD01972 53 [ETL17]suuguCfagaCfaUfaaagccaasusu 64 usUfsggCfuuuaUfgUfcUfgAfcAfasusu
實例17：結合GalNAc之siRNA對小鼠中額外目標mRNA之基因敲減
研究中使用三組(n=4隻/組)8週齡雄性ICR小鼠(Invigo)。在研究第0天，對組1小鼠皮下注射100 μL無菌PBS，對組2小鼠皮下注射60 μg於100 μL無菌PBS中之siRNA 1811，且對組3小鼠皮下注射200 μg於100 μL無菌PBS中之siRNA 1818。在研究第14天，將所有組之動物麻醉且接著安樂死。自所有動物收集肝臟樣本且置於RNAlater™穩定溶液(Thermo Fisher，目錄號AM7020)中。在設定為5000 rpm，持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)中，使用軟組織均質化套組CK14 (Bertin Instruments，目錄號P000933-LYSK0-A)在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中處理肝臟樣本。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上，根據製造商之建議純化來自肝臟溶解物之總RNA。在QuantStudio 6 Pro儀(Applied Biosystems)上，使用針對小鼠基因A及小鼠管家基因PPIA之TaqMan分析，藉由RT-qPCR評定各肝臟樣本中基因A mRNA之相對含量，且接著使用△-△Ct法標準化為對照小鼠(組1)之平均值。
在此實例中，將額外GalNAc部分(ETL1)與ETL17比較。肝臟mRNA分析之結果顯示於 表 7中。相較於注射PBS之小鼠(組1)，用靶向ETL1之siRNA (ETD01811，組2)處理之動物之肝臟基因A mRNA含量具有78%相對基因敲減，而用靶向ETL17之siRNA (siRNA 1818，組3)處理之動物具有83%基因敲減。因此，具有本文所描述之GalNAc部分之化合物在基因敲減目標(諸如目標mRNA)方面可優於另一GalNAc部分或至少與其一樣有效。  表7：用靶向基因A之siRNA處理之小鼠中第14天的基因A mRNA肝含量
群組編號 處理 平均值
1 PBS 1.00
2 siRNA 1811 (具有對照GalNAc ETL1) 0.22
3 siRNA 1818 (具有ETL17) 0.17
ETL1顯示於下，其中J指示與寡核苷酸之連接： 。 實例18.測試 MST1siRNA ETD01821、ETD01822、ETD01823及ETD01826在非人類靈長類動物中之活性
此研究使用四組(n=3隻/組)3-6 kg雄性石蟹獼猴(Zhaoqing Chuangyao Biotechnology Co., Ltd及Guangzhou Xianngguan Biotechnology Co., Ltd)。
在研究第0天，對組1石蟹獼猴皮下注射單次5 mg/kg劑量(0.2 mL劑量體積/kg體重)之以25 mg/mL之siRNA濃度調配於PBS中的ETD01821，對組2石蟹獼猴注射單次5 mg/kg劑量(0.2 mL劑量體積/kg體重)之以25 mg/mL之siRNA濃度調配於PBS中的ETD01822，對組3石蟹獼猴注射單次5 mg/kg劑量(0.2 mL劑量體積/kg體重)之以25 mg/mL之siRNA濃度調配於PBS中的ETD01823，對組4石蟹獼猴注射單次5 mg/kg劑量(0.2 mL劑量體積/kg體重)之以25 mg/mL之siRNA濃度調配於PBS中的ETD01826，siRNA序列顯示於 表 8中，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。藉由臨床症狀所量測，該注射一般具有良好耐受性。
在研究持續時間期間，所有石蟹獼猴均不具有異常臨床症狀，除了第101號動物，其在給藥後第65天發現死亡。屍體解剖揭露重度胃穿孔可能為死亡原因。此可在石蟹獼猴中自發地進行。
在研究第-8、-1、7、14、21天及第28天，記錄體重。結果顯示於 表 9中。資料指示，組1至4中之動物之體重不會具有有意義的變化。
在研究第-8、-2、7、14天及第28天，將血液收集至不具有抗凝劑之管中且收集血清。分析臨床化學參數，包含ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、GLU、GGT、TP、TG、CHOL、HDL、LDL、BUN及CREA。當相較於治療前研究第-8天及研究第-2天時，用ETD01821、ETD01822、ETD01823或ETD01926處理之動物在研究第7天開始直至研究第28天，在ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、GLU、GGT、TP、TG、CHOL、HDL、LDL、BUN及CREA方面未顯示有意義的變化。臨床化學之結果指示，所有siRNA一般均具有良好耐受性。結果顯示於 表 10-14中。
在研究第-8、-2、7、14天及第28天，將約1 mL之全血收集至具有EDTA-K2作為抗凝劑之管中。分析血液學參數，包括WBC、NEUT、LYMP、MONO、EOS、BASO、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、PLT、MPV、PCT及PDW。當相較於治療前研究第-8天及研究第-2天時，用ETD01821、ETD01822、ETD01823或ETD01926處理之動物在研究第7天開始直至研究第28天，在此等血液參數方面未顯示有意義的變化。血液學分析之結果指示，所有siRNA一般均具有良好耐受性。結果顯示於 表 15-19中。
在研究第-8、-2、7、14、28、42、56、70、77、84、91、98天及第105天，將血液收集至不具有抗凝劑之管中且收集血清用於測定血清巨噬細胞刺激蛋白(macrophage stimulating protein；MSP)含量。在稍後時間點，即在第42、56、70、77、84、91、98天及第105天，獲取額外血清樣本。使用定製AlphaLISA分析(PerkinElmer)評估猴血清樣本中之個別巨噬細胞刺激蛋白(MSP)濃度。簡言之，將5 μL以1:50稀釋於1× AlphaLISA HiBlock中之血清樣本置於96孔盤之孔中，隨後添加5 μL 4×抗MSP受體珠粒溶液。在室溫下培育30分鐘之後，添加5 μL 4×生物素化抗MSP抗體溶液，且在室溫下培育培養盤60分鐘。接下來，添加5 μL 4×鏈球菌親生物素蛋白供體珠粒溶液，且在室溫下另外培育培養盤30分鐘。在Envision 2105多模式讀盤器(PerkinElmer)上分析培養盤。使用重組人類MSP (R&D Systems)生成標準曲線。在各時間點各個體之MSP血清濃度係相對於彼個體在第-2天及第-8天之MSP血清濃度平均值得出。群組平均值之結果顯示於 表 20中，且個別值顯示於 表 21中。在用測試品處理後，在第7天開始，所有動物中之MSP血清含量均降低，且至少直至第28天仍降低。用ETD01821處理之猴之血清MSP含量相對於給藥前含量具有最大降低，顯示相較於給藥前含量，直至第105天降低的平均血清MSP含量。
在研究第-8天及第28天，用舒泰(Zoletil) (1.5-5.0 mg/kg，i.m.)及甲苯噻𠯤(xylazine) (0.5-2.0 mg/kg，i.m.)將動物麻醉，且收集3-4 mg肝臟活檢體。接著將活檢體置於10 v/v RNAlater中20秒且儲存在4℃下24小時，接著移除RNAlater™ 穩定溶液(Thermo Fisher，目錄號AM7020)，且將肝臟組織儲存於冷凍器中直至將其運送至Empirico。在肝臟活檢體收集之後，在第-2天或第28天，所有動物不存在異常臨床觀測。在設定為5000 rpm，持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)中，使用軟組織均質化套組CK14 (Bertin Instruments，目錄號P000933-LYSK0-A)在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中處理肝臟樣本。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上，根據製造商之建議純化來自肝臟溶解物之總RNA。使用Quanta qScript cDNA SuperMix (VWR，目錄號95048-500)，根據製造商說明書進行cDNA之製備。在PerfeCTa qPCR FastMix反應混合物(VWR)中使用針對長尾獼猴MST1 (ThermoFisher，分析號Mf01117426_g1)及長尾獼猴管家基因GAPDH (ThermoFisher，分析號Mf04392546_g1)之TaqMan分析，藉由RT-qPCR在雙工(biplexed)反應中評定肝臟MST1 mRNA之相對含量，重複三次。在QuantStudio™ 6 Pro 即時PCR系統上評定樣本。使用△-△Ct法計算MST1 mRNA之相對量。相對於第-8天之群組平均相對MST1 mRNA含量顯示於 表 22中。與藉由AlphaLISA所量測之血清MSP含量降低一致，相較於給藥前第-8天含量，用5 mg/kg測試品ETD01821、ETD01822、ETD01823或ETD01826處理引起在第28天MST1 mRNA之肝臟含量降低。  表8.實例siRNA序列
siRNA 名稱 有義股SEQ ID NO: 具有GalNAc 部分之有義股序列(5´-3´) 反義股SEQ ID NO: 反義股序列(5´-3´)
ETD01821 15 [ETL17]sgguccuGfGfAfAfGfgaauuauasusu 19 usAfsuAfaUfuCfcUfuCfcAfgGfaCfcsusu
ETD01822 16 [ETL17]sAfaCfuUfcUfudGuCfagaCfaUfaasusu 20 usUfsaUfgUfcUfgAfcAfaGfaAfgUfususu
ETD01823 17 [ETL17]scuucUfUfgUfCfagacauaaaasusu 21 usUfsuUfaUfgUfcUfgAfcAfaGfaAfgsusu
ETD01826 18 [ETL17]scaaccAfGfGfAfGfuguaacauasusu 22 usAfsuGfuUfaCfaCfuCfcUfgGfuUfgsusu
表9.體重(kg)
處理組 動物編號 性別 給藥前及給藥後天數
-8 -1 0 7 14 21 28
G1: ETD01821 101 雄性 5.6 5.5 5.6 5.7 5.7 5.8 5.6
102 雄性 6.0 6.0 6.0 5.9 6.1 6.2 6.1
103 雄性 4.5 4.6 4.5 4.6 4.6 4.7 4.5
G2: ETD01822 201 雄性 6.5 6.5 6.5 6.6 6.5 6.5 6.5
202 雄性 4.3 4.3 4.4 4.4 4.5 4.6 4.4
203 雄性 5.5 5.5 5.6 5.6 5.6 5.4 5.6
G3: ETD01823 301 雄性 4.7 4.5 4.6 4.7 4.8 4.7 4.9
302 雄性 4.6 4.6 4.6 4.6 4.6 4.7 4.5
303 雄性 3.8 3.8 3.7 3.8 3.7 3.6 3.7
G4: ETD01826 401 雄性 3.7 3.6 3.7 3.8 3.7 3.8 3.7
402 雄性 5.9 5.9 6.0 5.9 6.0 6.1 6.0
403 雄性 4.5 4.6 4.6 4.6 4.5 4.5 4.6
表10.給藥前(第-8天)之個別及平均臨床化學參數結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) ALT (U/L) 27.5 15.2 27.0 23.2 6.96 15.0 29.0 31.4 25.1 8.86
AST (U/L) 29.9 22.8 29.6 27.4 4.02 20.6 42.3 29.2 30.7 10.9
ALP (U/L) 530 228↓ 667 475 224 209↓ 473 675 453 234
TBIL (μmol/L) 1.54 1.37 1.28 1.40 0.13 1.04 1.68 2.06 1.59 0.52
DBIL (μmol/L) 0.11 0.53 0.46 0.37 0.23 0.17 0.38 0.36 0.30 0.12
GLU (mmol/L) 3.92 3.38 3.03 3.44 0.45 2.88 2.92 3.54 3.11 0.37
GGT (U/L) 102 76.2 91.4 89.8 12.8 71.0 69.4 64.2 68.2 3.57
TP (g/L) 73.4 68.2 70.2 70.6 2.60 64.4 69.1 67.8 67.1 2.40
TG (mmol/L) 0.96 0.37 0.78 0.70 0.30 0.31 0.22 0.55 0.36 0.17
BUN (mmol/L) 14.3 10.9 13.6 13.0 1.78 17.4 10.7 15.3 14.5 3.44
CREA (μmol/L) 75.2 64.9 71.5 70.5 5.22 76.9 67.2 76.7 73.6 5.54
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) ALT (U/L) 41.2 35.4 26.5 34.4 7.40 19.6 32.4 12.0 21.3 10.31
AST (U/L) 33.4 32.5 29.2 31.7 2.21 28.2 28.0 28.7 28.3 0.36
ALP (U/L) 735 837 585 719 127 775 346 492 538 218
TBIL (μmol/L) 2.03 2.71 1.47 2.07 0.62 1.80 3.67 1.49 2.32 1.18
DBIL (μmol/L) 0.49 1.00 0.29 0.59 0.37 0.89 2.40 0.70 1.33 0.93
GLU (mmol/L) 4.13 3.17 3.82 3.71 0.49 2.93 4.14 3.49 3.52 0.61
GGT (U/L) 119 100 91.1 104 14.2 84.1 69.5 47.2 66.9 18.6
TP (g/L) 64.5 60.5 67.3 64.1 3.41 62.5 61.2 50.3 58.0 6.68
TG (mmol/L) 0.31 0.19 0.70 0.40 0.27 0.45 0.22 0.53 0.40 0.16
BUN (mmol/L) 13.4 11.5 17.2 14.0 2.93 11.5 11.9 17.9 13.7 3.59
CREA (μmol/L) 61.0 59.3 79.4 66.6 11.1 64.3 90.2 85.5 80.0 13.8
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表11.給藥前(第-2天)之個別及平均臨床化學參數結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) ALT (U/L) 34.4 23.3 45.4 34.4 11.1 21.0 31.5 33.4 28.6 6.68
AST (U/L) 20.9 20.3 44.7 28.6 13.9 20.1 30.0 34.0 28.0 7.16
ALP (U/L) 477 251↓ 634 454 192 279↓ 489 630 466 177
TBIL (μmol/L) 1.83 1.48 1.07 1.46 0.38 1.52 2.07 2.69 2.09 0.59
DBIL (μmol/L) 0.26 0.05 0.02 0.11 0.13 0.01 0.38 0.58 0.32 0.29
GLU (mmol/L) 3.31 3.56 3.41 3.43 0.13 4.40 3.15 3.45 3.67 0.65
GGT (U/L) 104 79.4 97.2 93.6 12.7 98.2 70.2 68.7 79.0 16.6
TP (g/L) 79.9 74.9 77.0 77.3 2.53 79.3 76.6 77.2 77.7 1.43
TG (mmol/L) 0.73 0.47 1.48 0.89 0.52 0.47 0.24 0.47 0.39 0.13
BUN (mmol/L) 13.8 11.9 13.9 13.2 1.12 14.1 11.1 15.4 13.5 2.22
CREA (μmol/L) 85.4 70.8 66.1 74.1 10.1 86.5 63.3 81.4 77.1 12.2
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) ALT (U/L) 32.6 42.6 38.3 37.8 5.02 24.5 42.5 11.9 26.3 15.4
AST (U/L) 28.7 30.9 33.0 30.9 2.15 25.7 31.7 24.1 27.2 4.01
ALP (U/L) 679 821 580 693 121 762 478 427 556 180
TBIL (μmol/L) 2.89 2.74 2.33 2.65 0.29 2.15 1.89 0.74 1.59 0.75
DBIL (μmol/L) 0.72 0.39 0.69 0.60 0.18 0.51 0.21 ---- 0.36 0.21
GLU (mmol/L) 3.50 3.76 3.85 3.70 0.18 3.98 6.44 4.04 4.82 1.40
GGT (U/L) 116 100 96.9 104 10.0 86.4 86.3 50.6 74.4 20.6
TP (g/L) 70.8 65.4 71.5 69.2 3.31 67.9 75.8 52.7 65.5 11.7
TG (mmol/L) 0.32 0.24 0.39 0.32 0.08 0.48 0.32 1.08 0.63 0.40
BUN (mmol/L) 12.7 10.3 17.5 13.5 3.66 12.6 11.9 16.0 13.5 2.16
CREA (μmol/L) 60.1 57.7 74.6 64.1 9.14 63.0 106 69.8 79.5 22.9
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。「----」意謂一些樣本之DBIL由於低濃度而無法偵測到。 表12.給藥後第7天之個別及平均臨床化學參數結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) ALT (U/L) 32.5 22.7 38.2 31.1 7.84 19.9 36.2 28.7 28.3 8.16
AST (U/L) 22.3 20.0 32.1 24.8 6.43 16.4 34.2 25.4 25.3 8.90
ALP (U/L) 453 276↓ 749 493 239 272↓ 535 628 479 185
TBIL (μmol/L) 1.56 1.50 1.92 1.66 0.23 1.66 2.22 2.11 2.00 0.30
DBIL (μmol/L) 0.09 ---- 0.30 0.20 0.15 0.58 ---- 0.97 0.78 0.28
GLU (mmol/L) 3.69 3.91 3.83 3.81 0.11 4.49 4.53 4.32 4.45 0.11
GGT (U/L) 104 78.4 103 95.1 14.4 90.8 71.2 64.5 75.5 13.7
TP (g/L) 82.8 78.8 82.8 81.4 2.30 76.1 80.8 76.5 77.8 2.58
TG (mmol/L) 0.64 0.59 0.81 0.68 0.12 0.30 0.34 0.65 0.43 0.19
BUN (mmol/L) 14.1 10.5 13.9 12.8 2.02 11.8 11.2 14.2 12.4 1.58
CREA (μmol/L) 82.1 68.0 62.8 71.0 9.99 85.0 67.7 76.9 76.5 8.66
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) ALT (U/L) 29.9 41.6 30.7 34.1 6.54 23.0 49.4 15.1 29.2 18.0
AST (U/L) 28.0 29.6 26.2 27.9 1.70 24.5 28.2 21.4 24.7 3.40
ALP (U/L) 806 776 570 718 129 659 510 433 534 115
TBIL (μmol/L) 2.70 1.91 1.79 2.13 0.49 2.15 2.29 1.61 2.02 0.36
DBIL (μmol/L) 0.39 0.81 0.61 0.60 0.21 0.30 0.31 0.60 0.40 0.17
GLU (mmol/L) 3.93 4.27 3.86 4.02 0.22 3.64 4.60 4.41 4.22 0.51
GGT (U/L) 129 96.2 87.0 103.9 21.8 82.0 94.0 55.9 77.3 19.5
TP (g/L) 75.2 66.4 73.4 71.7 4.67 71.4 83.0 58.6 71.0 12.2
TG (mmol/L) 0.36 0.37 0.47 0.40 0.06 0.47 0.27 0.46 0.40 0.11
BUN (mmol/L) 11.7 10.2 18.7 13.6 4.52 13.7 13.6 14.0 13.8 0.19
CREA (μmol/L) 65.8 55.4 70.7 64.0 7.81 60.9 101 75.6 79.0 20.0
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。「----」意謂一些樣本之DBIL由於低濃度而無法偵測到。 表13.給藥後第14天之個別及平均臨床化學參數結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) ALT (U/L) 37.0 25.4 66.9 43.1 21.4 20.0 30.4 29.1 26.5 5.67
AST (U/L) 26.0 20.5 178 74.9 89.6 18.2 26.1 25.5 23.3 4.40
ALP (U/L) 557 275↓ 781 538 254 298↓ 509 630 479 168
TBIL (μmol/L) 1.60 1.74 1.82 1.72 0.11 1.73 1.88 2.18 1.93 0.23
DBIL (μmol/L) ---- 0.28 ---- 0.28 0.00 ---- 0.40 0.73 0.57 0.23
GLU (mmol/L) 3.32 3.50 5.43 4.08 1.17 4.57 3.52 4.01 4.03 0.53
GGT (U/L) 118 76.7 101 98.6 20.8 102 66.3 63.3 77.1 21.4
TP (g/L) 88.7 76.8 83.9 83.1 5.97 80.2 79.4 75.2 78.3 2.69
TG (mmol/L) 1.09 0.53 0.60 0.74 0.31 0.32 0.24 0.65 0.40 0.22
BUN (mmol/L) 14.0 10.1 16.5 13.5 3.25 15.9 11.7 13.3 13.6 2.13
CREA (μmol/L) 98.9 67.8 69.1 78.6 17.6 95.2 69.8 78.7 81.2 12.9
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) ALT (U/L) 34.6 47.0 23.1 34.9 12.0 22.1 16.0 46.3 28.1 16.0
AST (U/L) 26.3 30.7 25.0 27.3 2.99 29.1 29.6 27.9 28.9 0.87
ALP (U/L) 782 864 569 738 153 679 467 469 538 122
TBIL (μmol/L) 1.92 2.66 1.63 2.07 0.53 1.43 0.88 1.78 1.36 0.45
DBIL (μmol/L) 0.37 0.65 0.46 0.49 0.14 0.27 ---- 0.22 0.25 0.04
GLU (mmol/L) 3.59 3.70 4.04 3.78 0.23 3.29 4.64 4.18 4.04 0.69
GGT (U/L) 128 101 96.4 108 17.1 75.1 54.3 83.7 71.0 15.1
TP (g/L) 71.2 67.8 71.7 70.2 2.13 65.1 53.6 73.5 64.1 9.99
TG (mmol/L) 0.38 0.30 0.59 0.42 0.15 0.56 0.78 0.26↓ 0.53 0.26
BUN (mmol/L) 12.3 10.3 15.9 12.8 2.82 13.1 18.1 13.7 15.0 2.78
CREA (μmol/L) 66.1 61.7 74.8 67.5 6.67 65.1 92.2 100 85.8 18.3
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。「----」意謂一些樣本之DBIL由於低濃度而無法偵測到。 表14.給藥後第28天之個別及平均臨床化學參數結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) ALT (U/L) 34.8 22.1 45.3 34.1 11.6 33.5 45.4 48.8 42.6 8.03
AST (U/L) 30.1 30.4 35.0 31.8 2.75 25.8 42.4 51.9 40.0 13.2
ALP (U/L) 364 216↓ 503 361 144 226↓ 467 634 442 205
TBIL (μmol/L) 1.17 1.33 1.15 1.22 0.10 1.72 1.08 1.09 1.30 0.37
DBIL (μmol/L) 0.10 0.33 0.28 0.24 0.12 0.29 ---- ---- 0.29 0.00
GLU (mmol/L) 3.06 2.97 3.04 3.02 0.05 4.56 3.79 4.61 4.32 0.46
GGT (U/L) 87.8 66.5 79.8 78.0 10.7 86.6 63.9 62.3 70.9 13.6
TP (g/L) 72.3 72.4 71.7 72.1 0.36 82.4 74.7 72.4 76.5 5.23
TG (mmol/L) 0.79 0.43 0.62 0.61 0.18 0.41 0.13 0.40 0.31 0.16
BUN (mmol/L) 18.2 14.1 15.9 16.1 2.05 16.1 11.4 15.5 14.3 2.54
CREA (μmol/L) 75.0 63.0 65.9 68.0 6.26 89.3 60.3 76.9 75.5 14.6
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) ALT (U/L) 23.9 34.3 28.4 28.9 5.22 22.8 40.5 24.4 29.2 9.79
AST (U/L) 24.5 43.1 27.1 31.6 10.1 31.5 30.3 34.6 32.1 2.22
ALP (U/L) 193 447 563 401 189 570 344 382 432 121
TBIL (μmol/L) 1.53 1.69 1.30 1.51 0.20 1.37 0.96 0.58 0.97 0.40
DBIL (μmol/L) 0.45 0.37 0.56 0.46 0.10 ---- 0.05 ---- 0.05 0.00
GLU (mmol/L) 3.83 3.21 3.30 3.45 0.34 2.97 5.57 4.58 4.37 1.31
GGT (U/L) 77.2 65.3 59.2 67.2 9.13 73.5 75.9 53.8 67.7 12.1
TP (g/L) 73.5 73.7 68.1 71.7 3.17 65.0 62.4 58.1 61.8 3.48
TG (mmol/L) 0.28 0.17 0.42 0.29 0.13 0.54 0.15 0.36 0.35 0.20
BUN (mmol/L) 16.0 11.2 14.9 14.0 2.53 14.8 16.9 16.2 16.0 1.05
CREA (μmol/L) 86.3 55.1 74.3 71.9 15.7 62.4 96.8 62.2 73.8 19.9
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。「----」意謂一些樣本之DBIL由於低濃度而無法偵測到。 表15.給藥前(第-8天)之個別及平均血液學結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) WBC (×10 9/L) 10.4 7.99 8.57 8.99 1.26 6.69 10.4 17.4 11.5 5.43
abs_neuts (×10 9/L) 3.14 2.59 1.33 2.35 0.93 2.52 2.97 3.13 2.87 0.32
abs_lymphs (×10 9/L) 6.55 4.82 6.61 5.99 1.02 3.76 6.77 13.48 8.00 4.98
abs_monos (×10 9/L) 0.65 0.48 0.46 0.53 0.10 0.31 0.59 0.66 0.52 0.19
abs_eos (×10 9/L) 0.07 0.10 0.17 0.11 0.05 0.10 0.04 0.10 0.08 0.03
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
%NEUT (%) 30.1 32.4 15.6 26.0 9.11 37.6 28.6 18.0 28.1 9.81
%LYM (%) 63.0 60.4 77.0 66.8 8.93 56.2 65.3 77.6 66.4 10.7
%MONO (%) 6.20 6.00 5.40 5.87 0.42 4.70 5.70 3.80 4.73 0.95
%EOS (%) 0.70 1.20 2.00 1.30 0.66 1.50 0.40 0.60 0.83 0.59
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.43 5.48 5.35 5.42 0.07 5.01 5.33 5.29 5.21 0.17
HGB (g/L) 135 134 124 131 6.08 126 128 131 128 2.52
HCT (%) 45.2 43.5 40.4 43.0 2.43 41.0 42.1 42.5 41.9 0.78
MCV (fL) 83.3 79.5 75.6 79.5 3.85 82.0 79.1 80.4 80.5 1.45
MCH (pg) 24.8 24.4 23.2 24.1 0.83 25.2 24.1 24.9 24.7 0.57
MCHC (g/L) 298 307 307 304 5.20 308 304 309 307 2.65
RDW-SD (fL) 37.1 43.6 38.8 39.8 3.37 41.2 36.7 36.9 38.3 2.54
RDW-CV (%) 12.2 15.1 14.1 13.8 1.47 13.7 12.7 12.6 13.0 0.61
PLT (×10 9/L) 380 371 247↓ 333 74.3 361 301 285 316 40.1
MPV (fL) 13.1 12.5 9.60 11.7 1.87 11.6 14.2 12.4 12.7 1.33
PCT (%) 0.50 0.46 0.24↓ 0.40 0.14 0.42 0.43 0.36 0.40 0.04
PDW (fL) 15.5 15.0 15.4 15.3 0.26 14.9 15.6 15.3 15.3 0.35
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) WBC (×10 9/L) 13.9 9.37 8.40 10.6 2.93 9.50 5.65↓ 15.8 10.3 5.13
abs_neuts (×10 9/L) 1.19 2.31 1.82 1.77 0.56 3.72 1.04↓ 6.22 3.66 2.59
abs_lymphs (×10 9/L) 11.3 6.45 6.09 7.96 2.93 5.09 4.13 8.76 5.99 2.44
abs_monos (×10 9/L) 1.28 0.53 0.29 0.70 0.52 0.55 0.38 0.57 0.50 0.10
abs_eos (×10 9/L) 0.09 0.08 0.20 0.12 0.07 0.14 0.10 0.26 0.17 0.08
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.01 0.00 0.01
%NEUT (%) 8.6 24.7 21.6 18.3 8.54 39.2 18.5 39.3 32.3 12.0
%LYM (%) 81.5 68.9 72.6 74.3 6.48 53.5 72.9 55.4 60.6 10.7
%MONO (%) 9.20 5.60 3.40 6.07 2.93 5.80 6.80 3.60 5.40 1.64
%EOS (%) 0.70 0.80 2.40 1.30 0.95 1.50 1.80 1.70 1.67 0.15
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.36 5.61 5.07 5.35 0.27 5.29 5.09 5.39 5.26 0.15
HGB (g/L) 130 137 114 127 11.8 129 122 133 128 5.57
HCT (%) 43.6 43.3 37.3 41.4 3.55 42.2 40.3 43.3 41.9 1.52
MCV (fL) 81.3 77.3 73.6 77.4 3.85 79.6 79.2 80.3 79.7 0.56
MCH (pg) 24.2 24.5 22.6 23.8 1.02 24.3 24.1 24.6 24.3 0.25
MCHC (g/L) 298 316 307 307 9.00 305 304 306 305 1.00
RDW-SD (fL) 41.1 38.9 36.5 38.8 2.30 36.9 40.2 40.3 39.1 1.93
RDW-CV (%) 13.8 13.8 13.6 13.7 0.12 12.7 14.0 13.8 13.5 0.70
PLT (×10 9/L) 372 307 229↓ 303 71.6 339 201↓ 398 313 101
MPV (fL) 11.1 11.9 14.4 12.5 1.72 13.1 14.2 10.3 12.5 2.01
PCT (%) 0.41 0.37 0.33 0.37 0.04 0.44 0.29↓ 0.41 0.38 0.08
PDW (fL) 15.5 15.3 15.8 15.5 0.25 15.5 15.6 15.3 15.5 0.15
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表16.給藥前(第-2天)之個別及平均血液學結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) WBC (×10 9/L) 8.98 14.8 15.4 13.1 3.55 7.48 13.5 19.3 13.4 5.90
abs_neuts (×10 9/L) 3.44 6.07 5.05 4.85 1.33 3.20 4.94 4.64 4.26 0.93
abs_lymphs (×10 9/L) 4.69 7.74 9.41 7.28 2.39 3.80 7.46 13.62 8.29 4.96
abs_monos (×10 9/L) 0.76 0.76 0.75 0.76 0.01 0.41 0.99 0.96 0.79 0.33
abs_eos (×10 9/L) 0.09 0.20 0.22 0.17 0.07 0.07 0.08 0.05 0.07 0.02
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
%NEUT (%) 38.3 41.1 32.7 37.4 4.28 42.8 36.7 24.1 34.5 9.54
%LYM (%) 52.3 52.4 61.1 55.3 5.05 50.9 55.3 70.6 58.9 10.3
%MONO (%) 8.40 5.20 4.80 6.13 1.97 5.40 7.40 5.00 5.93 1.29
%EOS (%) 1.00 1.30 1.40 1.23 0.21 0.90 0.60 0.30 0.60 0.30
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.63 5.70 5.95 5.76 0.17 5.68 5.75 5.54 5.66 0.11
HGB (g/L) 142 144 140 142 2.00 145 143 141 143 2.00
HCT (%) 47.1 46.1 45.4 46.2 0.85 47.2 45.9 44.9 46.0 1.15
MCV (fL) 83.7 80.8 76.3 80.3 3.73 83.1 79.8 81.1 81.3 1.66
MCH (pg) 25.2 25.2 23.5 24.6 0.98 25.5 24.8 25.4 25.2 0.38
MCHC (g/L) 301 312 308 307 5.57 307 311 313 310 3.06
RDW-SD (fL) 36.7 43.3 38.8 39.6 3.37 41.1 37.1 36.9 38.4 2.37
RDW-CV (%) 12.1 14.7 13.9 13.6 1.33 13.6 12.7 12.6 13.0 0.55
PLT (×10 9/L) 468 258 292 339 113 346 354 343 348 5.7
MPV (fL) 11.0 13.5 11.0 11.8 1.44 12.0 13.1 11.5 12.2 0.82
PCT (%) 0.51 0.35 0.32 0.39 0.10 0.42 0.47 0.40 0.43 0.04
PDW (fL) 15.1 15.6 15.4 15.4 0.25 15.6 15.7 15.4 15.6 0.15
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) WBC (×10 9/L) 10.9 12.0 12.1 11.7 0.70 11.4 9.31 19.0 13.2 5.13
abs_neuts (×10 9/L) 1.34 2.94 3.64 2.64 1.18 3.68 1.59 7.33 4.20 2.91
abs_lymphs (×10 9/L) 8.59 8.05 7.86 8.17 0.38 6.76 6.87 10.76 8.13 2.28
abs_monos (×10 9/L) 0.86 0.87 0.38 0.70 0.28 0.66 0.70 0.51 0.62 0.10
abs_eos (×10 9/L) 0.06 0.12 0.25 0.14 0.10 0.27 0.14 0.44 0.28 0.15
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.01 0.00 0.00 0.01
%NEUT (%) 12.3 24.6 30.0 22.3 9.07 32.4 17.1 38.5 29.3 11.0
%LYM (%) 79.2 67.2 64.8 70.4 7.71 59.4 73.8 56.5 63.2 9.27
%MONO (%) 7.90 7.20 3.20 6.10 2.54 5.80 7.50 2.70 5.33 2.43
%EOS (%) 0.60 1.00 2.00 1.20 0.72 2.40 1.50 2.30 2.07 0.49
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.10 0.00 0.03 0.06
RBC (×10 12/L) 5.41 5.86 5.34 5.54 0.28 5.69 5.76 5.19 5.55 0.31
HGB (g/L) 132 144 122 133 11.0 140 141 126 136 8.39
HCT (%) 44.1 45.4 39.6 43.0 3.04 45.5 46.0 41.6 44.4 2.41
MCV (fL) 81.5 77.5 74.2 77.7 3.66 80.0 79.9 80.1 80.0 0.10
MCH (pg) 24.5 24.5 22.9 24.0 0.92 24.6 24.5 24.2 24.4 0.21
MCHC (g/L) 300 317 309 309 8.50 308 306 302 305 3.06
RDW-SD (fL) 41.5 39.1 37.7 39.4 1.92 36.7 40.2 38.9 38.6 1.77
RDW-CV (%) 14.0 13.9 13.9 13.9 0.06 12.6 13.9 13.4 13.3 0.66
PLT (×10 9/L) 379 349 237↓ 322 74.8 445 302 393 380 72.4
MPV (fL) 11.4 11.6 15.4 12.8 2.25 11.9 15.5 11.0 12.8 2.38
PCT (%) 0.43 0.41 0.37 0.40 0.03 0.53 0.47 0.43 0.48 0.05
PDW (fL) 16.0 15.1 15.9 15.7 0.49 15.7 15.5 15.9 15.7 0.20
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表17.給藥後第7天之個別及平均血液學結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) WBC (×10 9/L) 8.52 13.8 11.5 11.3 2.67 8.62 12.3 17.4 12.8 4.43
abs_neuts (×10 9/L) 2.00 4.12 2.54 2.89 1.10 4.27 3.44 3.85 3.85 0.42
abs_lymphs (×10 9/L) 5.75 8.63 8.17 7.52 1.55 3.88 8.07 12.64 8.20 4.38
abs_monos (×10 9/L) 0.64 0.70 0.61 0.65 0.05 0.43 0.68 0.87 0.66 0.22
abs_eos (×10 9/L) 0.13 0.39 0.21 0.24 0.13 0.04 0.06 0.08 0.06 0.02
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.01 0.00 0.00 0.01
%NEUT (%) 23.4 29.7 22.1 25.1 4.06 49.5 28.1 22.1 33.2 14.4
%LYM (%) 67.6 62.4 70.8 66.9 4.24 45.1 65.8 72.4 61.1 14.2
%MONO (%) 7.50 5.10 5.30 5.97 1.33 5.00 5.50 5.00 5.17 0.29
%EOS (%) 1.50 2.80 1.80 2.03 0.68 0.40 0.50 0.50 0.47 0.06
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.10 0.00 0.03 0.06
RBC (×10 12/L) 5.49 5.70 6.24 5.81 0.39 5.75 6.04 5.54 5.78 0.25
HGB (g/L) 141 146 146 144 2.89 146 149 140 145 4.58
HCT (%) 46.2 46.5 47.7 46.8 0.79 47.2 49.0 45.0 47.1 2.00
MCV (fL) 84.0 81.5 76.4 80.6 3.87 82.2 81.1 81.3 81.5 0.59
MCH (pg) 25.6 25.7 23.5 24.9 1.24 25.4 24.6 25.3 25.1 0.44
MCHC (g/L) 305 315 307 309 5.29 309 303 311 308 4.16
RDW-SD (fL) 37.8 44.4 39.3 40.5 3.46 40.4 38.4 38.3 39.0 1.18
RDW-CV (%) 12.3 15.0 14.1 13.8 1.37 13.5 13.1 13.0 13.2 0.26
PLT (×10 9/L) 527 390 253↓ 390 137 371 283 341 332 44.7
MPV (fL) 12.6 13.7 11.8 12.7 0.95 12.1 15.3 11.7 13.0 1.97
PCT (%) 0.67 0.54 0.30 0.50 0.19 0.45 0.43 0.40 0.43 0.02
PDW (fL) 15.4 15.3 15.8 15.5 0.26 15.3 15.4 15.4 15.4 0.06
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) WBC (×10 9/L) 9.86 14.2 9.42 11.2 2.63 10.8 8.50 16.7 12.0 4.22
abs_neuts (×10 9/L) 1.06 3.85 2.05 2.32 1.41 4.77 1.67 5.55 4.00 2.05
abs_lymphs (×10 9/L) 7.99 9.18 6.90 8.02 1.14 5.25 6.17 10.3 7.23 2.68
abs_monos (×10 9/L) 0.73 1.04 0.29 0.69 0.38 0.61 0.52 0.51 0.55 0.06
abs_eos (×10 9/L) 0.08 0.11 0.18 0.12 0.05 0.21 0.14 0.35 0.23 0.11
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
%NEUT (%) 10.8 27.1 21.7 19.9 8.30 44.0 19.6 33.3 32.3 12.2
%LYM (%) 81.0 64.8 73.3 73.0 8.10 48.4 72.7 61.6 60.9 12.2
%MONO (%) 7.40 7.30 3.10 5.93 2.45 5.60 6.10 3.00 4.90 1.66
%EOS (%) 0.80 0.80 1.90 1.17 0.64 2.00 1.60 2.10 1.90 0.26
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.74 5.42 5.58 5.58 0.16 5.59 6.15 5.62 5.79 0.32
HGB (g/L) 143 133 130 135 6.81 141 151 136 143 7.64
HCT (%) 46.9 42.1 41.0 43.3 3.14 45.0 49.2 45.0 46.4 2.42
MCV (fL) 81.8 77.7 73.5 77.7 4.15 80.6 80.1 80.0 80.2 0.32
MCH (pg) 24.9 24.5 23.3 24.2 0.83 25.3 24.6 24.2 24.7 0.56
MCHC (g/L) 304 315 317 312 7.00 314 307 303 308 5.57
RDW-SD (fL) 42.9 39.3 36.4 39.5 3.26 37.9 41.3 39.3 39.5 1.71
RDW-CV (%) 14.4 13.9 13.6 14.0 0.40 12.9 14.2 13.5 13.5 0.65
PLT (×10 9/L) 441 317 256↓ 338 94.3 478 258↓ 369 368 110
MPV (fL) 10.7 12.5 15.0 12.7 2.16 12.2 15.6 11.5 13.1 2.19
PCT (%) 0.47 0.40 0.39 0.42 0.05 0.59 0.40 0.42 0.47 0.10
PDW (fL) 15.6 15.3 15.9 15.6 0.30 15.3 15.3 15.8 15.5 0.29
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表18.給藥後第14天之個別及平均血液學結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) WBC (×10 9/L) 9.93 10.4 20.7 13.7 6.08 12.0 12.1 17.9 14.0 3.39
abs_neuts (×10 9/L) 1.82 3.09 13.5↑ 6.13 6.40 7.15 2.75 3.78 4.56 2.30
abs_lymphs (×10 9/L) 7.15 6.21 5.59 6.32 0.79 4.26 8.44 12.97 8.56 4.36
abs_monos (×10 9/L) 0.81 0.73 1.53 1.02 0.44 0.55 0.86 1.06 0.82 0.26
abs_eos (×10 9/L) 0.14 0.35 0.07 0.19 0.15 0.04 0.05 0.11 0.07 0.04
abs_basos (×10 9/L) 0.01 0.00 0.00 0.00 0.01 0.01 0.00 0.00 0.00 0.01
%NEUT (%) 18.3 29.8 65.2↑ 37.8 24.4 59.6 22.7 21.1 34.5 21.8
%LYM (%) 72.1 59.7 27.1 53.0 23.2 35.5 69.8 72.4 59.2 20.6
%MONO (%) 8.10 7.10 7.40 7.53 0.51 4.60 7.10 5.90 5.87 1.25
%EOS (%) 1.40 3.40 0.30 1.70 1.57 0.30 0.40 0.60 0.43 0.15
%BASO (%) 0.10 0.00 0.00 0.03 0.06 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.99 5.33 6.52 5.95 0.60 5.84 6.02 5.39 5.75 0.32
HGB (g/L) 152 140 157 150 8.74 151 151 138 147 7.51
HCT (%) 50.1 44.1 49.3 47.8 3.26 49.3 48.5 44.3 47.4 2.69
MCV (fL) 83.7 82.7 75.7 80.7 4.36 84.5 80.6 82.2 82.4 1.96
MCH (pg) 25.4 26.3 24.1 25.3 1.11 25.9 25.0 25.7 25.5 0.47
MCHC (g/L) 304 318 318 313 8.08 307 311 312 310 2.65
RDW-SD (fL) 37.0 44.1 38.1 39.7 3.82 41.5 37.8 39.1 39.5 1.88
RDW-CV (%) 12.2 14.6 13.9 13.6 1.23 13.5 12.9 13.2 13.2 0.30
PLT (×10 9/L) 570 311 192↓ 358 193 279 240 322 280 41.0
MPV (fL) 12.3 13.8 11.80 12.6 1.04 12.8 15.0 11.80 13.2 1.64
PCT (%) 0.70 0.43 0.23↓ 0.45 0.24 0.36 0.36 0.38 0.37 0.01
PDW (fL) 14.9 15.5 15.9 15.4 0.50 15.8 15.7 15.6 15.7 0.10
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) WBC (×10 9/L) 9.24 12.1 10.0 10.4 1.45 10.3 7.73 16.9 11.7 4.74
abs_neuts (×10 9/L) 0.54↓ 2.62 3.13 2.10 1.37 4.47 1.34 5.81 3.87 2.29
abs_lymphs (×10 9/L) 7.95 8.52 6.34 7.60 1.13 5.08 5.65 10.25 6.99 2.83
abs_monos (×10 9/L) 0.67 0.85 0.30 0.61 0.28 0.59 0.57 0.46 0.54 0.07
abs_eos (×10 9/L) 0.08 0.07 0.26 0.14 0.11 0.19 0.17 0.39 0.25 0.12
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.01 0.00 0.01
%NEUT (%) 5.90↓ 21.7 31.3 19.6 12.8 43.3 17.4 34.4 31.7 13.2
%LYM (%) 86.0 70.6 63.1 73.2 11.7 49.2 73.0 60.6 60.9 11.9
%MONO (%) 7.30 7.10 3.00 5.80 2.43 5.70 7.40 2.70 5.27 2.38
%EOS (%) 0.80 0.60 2.60 1.33 1.10 1.80 2.20 2.30 2.10 0.26
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.59 5.58 5.52 5.56 0.04 5.25 5.59 5.68 5.51 0.23
HGB (g/L) 141 138 128 136 6.81 131 139 141 137 5.29
HCT (%) 45.7 43.9 40.7 43.4 2.53 42.4 45.1 45.5 44.3 1.69
MCV (fL) 81.7 78.8 73.8 78.1 4.00 80.8 80.7 80.1 80.5 0.38
MCH (pg) 25.2 24.8 23.1 24.4 1.12 24.9 25.0 24.8 24.9 0.10
MCHC (g/L) 308 314 313 312 3.21 309 309 310 309 0.58
RDW-SD (fL) 42.6 40.6 36.6 39.9 3.06 37.1 41.6 38.4 39.0 2.32
RDW-CV (%) 14.2 14.3 13.6 14.0 0.38 12.6 14.2 13.2 13.3 0.81
PLT (×10 9/L) 376 278 218↓ 291 79.8 380 250↓ 460 363 106
MPV (fL) 10.2 12.6 16.1 13.0 2.97 11.9 15.1 10.2 12.4 2.49
PCT (%) 0.38 0.35 0.35 0.36 0.02 0.45 0.38 0.47 0.43 0.05
PDW (fL) 15.5 15.5 15.7 15.6 0.12 15.7 15.5 15.5 15.6 0.12
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表19.給藥後第28天之個別及平均血液學結果
處理組 G1: ETD01821 G2: ETD01822
動物編號 101 102 103 平均值 SD 201 202 203 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID SC1702037 SC1509029 175151C SC1508015 SC1704115 SC1703011
參數(單位) WBC (×10 9/L) 5.30↓ 8.44 9.93 7.89 2.36 12.4 12.6 11.7 12.2 0.47
abs_neuts (×10 9/L) 1.75 3.52 4.22 3.16 1.27 8.91 7.55 4.53 7.00 2.24
abs_lymphs (×10 9/L) 3.20 4.41 5.27 4.29 1.04 2.78 4.40 6.49 4.56 1.86
abs_monos (×10 9/L) 0.32 0.39 0.28 0.33 0.06 0.67 0.62 0.66 0.65 0.03
abs_eos (×10 9/L) 0.03 0.12 0.16 0.10 0.07 0.02 0.02 0.01 0.02 0.01
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
%NEUT (%) 33.1 41.7 42.5 39.1 5.21 72.0 59.9 38.8 56.9 16.8
%LYM (%) 60.3 52.3 53.1 55.2 4.41 22.5 34.9 55.4 37.6 16.6
%MONO (%) 6.00 4.60 2.80 4.47 1.60 5.40 5.00 5.70 5.37 0.35
%EOS (%) 0.60 1.40 1.60 1.20 0.53 0.10 0.20 0.10 0.13 0.06
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
RBC (×10 12/L) 5.15 5.19 5.09 5.14 0.05 5.90 5.61 5.46 5.66 0.22
HGB (g/L) 131 136 121 129 7.64 154 140 142 145 7.57
HCT (%) 42.6 43.6 38.5 41.6 2.70 49.6 44.8 44.7 46.4 2.80
MCV (fL) 82.8 84.0 75.7 80.8 4.49 84.1 79.8 82.0 82.0 2.15
MCH (pg) 25.4 26.2 23.7 25.1 1.28 26.1 25.0 26.1 25.7 0.64
MCHC (g/L) 307 312 313 311 3.21 311 313 318 314 3.61
RDW-SD (fL) 36.4 41.3 37.2 38.3 2.63 41.0 37.4 39.7 39.4 1.82
RDW-CV (%) 12.1 13.5 13.5 13.0 0.81 13.4 12.9 13.3 13.2 0.26
PLT (×10 9/L) 480 368 329 392 78.4 399 355 346 367 28.4
MPV (fL) 11.2 14.2 10.4 11.9 2.00 11.6 14.0 11.5 12.4 1.42
PCT (%) 0.54 0.53 0.34 0.47 0.11 0.46 0.50 0.40 0.45 0.05
PDW (fL) 14.9 15.3 15.2 15.1 0.21 15.5 15.6 15.4 15.5 0.10
處理組 G3: ETD01823 G4: ETD01826
動物編號 301 302 303 平均值 SD 401 402 403 平均值 SD
性別 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性 雄性
動物ID 177695C SC1704077 176313C SC1708089 SC1604087 SC1703023
參數(單位) WBC (×10 9/L) 6.49↓ 12.5 14.2 11.1 4.05 6.51↓ 7.22 12.7 8.79 3.36
abs_neuts (×10 9/L) 3.84 4.42 4.13 4.13 0.29 3.62 4.15 6.51 4.76 1.54
abs_lymphs (×10 9/L) 2.27↓ 7.35 9.37 6.33 3.66 2.53↓ 2.62↓ 5.64 3.60 1.77
abs_monos (×10 9/L) 0.36 0.65 0.69 0.57 0.18 0.30 0.37 0.34 0.34 0.04
abs_eos (×10 9/L) 0.02 0.05 0.03 0.03 0.02 0.06 0.08 0.15 0.10 0.05
abs_basos (×10 9/L) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.01 0.00 0.01
%NEUT (%) 59.2 35.5 29.0 41.2 15.9 55.6 57.5 51.5 54.9 3.07
%LYM (%) 35.0 58.9 65.9 53.3 16.2 38.9 36.2 44.5 39.9 4.23
%MONO (%) 5.50 5.20 4.90 5.20 0.30 4.60 5.10 2.70 4.13 1.27
%EOS (%) 0.30 0.40 0.20 0.30 0.10 0.90 1.20 1.20 1.10 0.17
%BASO (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.10 0.03 0.06
RBC (×10 12/L) 5.02 5.78 4.91 5.24 0.47 5.12 5.05 5.07 5.08 0.04
HGB (g/L) 132 143 126 134 8.62 128 126 124 126 2.00
HCT (%) 42.1 45.2 40.4 42.6 2.43 41.1 40.5 40.6 40.7 0.32
MCV (fL) 83.8 78.2 82.4 81.5 2.91 80.3 80.2 80.0 80.2 0.15
MCH (pg) 26.3 24.8 25.6 25.6 0.75 25.1 25.0 24.5 24.9 0.32
MCHC (g/L) 314 316 311 314 2.52 312 312 306 310 3.46
RDW-SD (fL) 40.5 39.1 39.9 39.8 0.70 36.0 41.3 39.5 38.9 2.70
RDW-CV (%) 13.3 13.8 13.4 13.5 0.26 12.2 14.1 13.6 13.3 0.98
PLT (×10 9/L) 355 384 307 349 38.9 402 162↓ 399 321 137.7
MPV (fL) 12.4 11.8 11.9 12.0 0.32 11.8 15.3 9.40 12.2 2.97
PCT (%) 0.44 0.45 0.37 0.42 0.05 0.48 0.25 0.38 0.37 0.11
PDW (fL) 15.4 15.1 15.2 15.2 0.15 15.5 15.8 15.5 15.6 0.17
注意：緊鄰值之↓意謂結果略微低於其他動物之值。 表20.石蟹獼猴中之相對平均血清MSP含量
群組 n 處理 劑量(mg/kg) 天
-8 -2 7 14 28 42 56 70 77 84 91 98 105
平均血清MSP 含量( 相對於給藥前含量平均值( 第-2 天及第-8 天))
1 3 ETD01821 5 1.09 0.91 0.22 0.06 0.04 0.07 0.15 0.18 0.18 0.31 0.42 0.45 0.46
2 3 ETD01822 5 0.99 1.01 0.71 0.32 0.42 0.37 0.76 1.24 1.16 1.48 1.34 1.34 1.57
3 3 ETD01823 5 1.01 0.99 0.44 0.08 0.34 0.10 0.20 0.45 0.39 0.52 0.59 0.91 1.03
4 3 ETD01826 5 0.78 1.22 0.37 0.20 0.30 0.58 0.88 1.01 1.63 1.32 1.86 1.98 1.95
表21.石蟹獼猴中之相對個別血清MSP含量
群組 n 處理 劑量(mg/kg) 動物編號 天
-8 -2 7 14 28 42 56 70 77 84 91 98 105
平均血清MSP 含量( 相對於給藥前含量平均值( 第-2 天及第-8 天))
1 3 ETD01821 5 101M 0.99 1.01 0.28 0.08 0.07 0.11 0.23                  
102M 1.12 0.88 0.18 0.07 0.04 0.01 0.16 0.26 0.21 0.31 0.47 0.51 0.39
103M 1.16 0.84 0.19 0.02 0.01 0.08 0.07 0.09 0.15 0.31 0.37 0.38 0.52
2 3 ETD01822 5 201M 0.99 1.01 0.64 0.43 0.75 0.59 0.90 1.26 0.95 1.56 1.69 1.75 1.49
202M 0.99 1.01 0.75 0.30 0.23 0.29 0.86 1.39 1.58 0.96 1.23 1.14 1.82
203M 1.00 1.00 0.74 0.24 0.28 0.23 0.53 1.07 0.96 1.92 1.10 1.13 1.39
3 3 ETD01823 5 301M 0.76 1.24 0.24 0.05 0.50 0.06 0.15 0.19 0.18 0.36 0.30 0.41 0.56
302M 1.18 0.82 0.46 0.09 0.31 0.15 0.26 0.71 0.57 0.84 0.83 1.44 1.40
303M 1.09 0.91 0.61 0.11 0.22 0.10 0.20 0.45 0.42 0.37 0.65 0.89 1.14
4 3 ETD01826 5 401M 0.95 1.05 0.26 0.16 0.25 0.43 0.91 0.91 1.32 1.51 1.51 2.25 2.16
402M 0.91 1.09 0.35 0.07 0.15 0.15 0.41 0.77 1.55 0.89 1.23 1.81 1.54
403M 0.49 1.51 0.51 0.36 0.49 1.16 1.31 1.35 2.02 1.56 2.84 1.87 2.15
表22.石蟹獼猴之肝臟中之相對MST1 mRNA含量
群組 n 處理 劑量(mg/kg) 平均 MST1mRNA ( 相對於第-8 天)
第-8 天 第28 天
1 3 ETD01821 5 1.00 0.33
2 3 ETD01822 5 1.00 0.33
3 3 ETD01823 5 1.00 0.27
4 3 ETD01826 5 1.00 0.57
實例 19 ： 篩選在小鼠中靶向人類及小鼠 MTRES1 之 siRNA
以下實例證實，當組合靶向額外目標(MTRES1)之寡核苷酸時，本文所描述之GalNAc部分在活體內之效用。測試設計成與人類、小鼠及石蟹獼猴 MTRES1mRNA具有交叉反應性之若干siRNA在小鼠中之活性。將siRNA與GalNAc配體ETL1或ETL17連接。siRNA序列顯示於 表 23中，其中Nf為2'氟基修飾之核苷，n為2' O-甲基修飾之核苷，「d」為去氧核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。
對六至八週齡雌性小鼠(品系ICR，n=3)在第0天給與皮下注射單次200 μg劑量之結合GalNAc之siRNA或作為媒劑對照的PBS。
在注射後第10天將小鼠安樂死，且自各小鼠收集肝臟樣本並置於RNAlater (ThermoFisher目錄號AM7020)中直至處理。藉由在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中，使用設定為5000 rpm持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)均質化肝臟組織來製備總肝臟RNA。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上，根據製造商之建議純化來自溶解物之總RNA。使用Quanta qScript cDNA SuperMix (VWR，目錄號95048-500)，根據製造商說明書進行cDNA之製備。在QuantStudio™ 6 Pro 即時PCR系統上，使用針對小鼠 MTRES1(ThermoFisher，分析號Mm01229834_m1)及小鼠管家基因PPIA (ThermoFisher，分析號Mm02342430_g1)之TaqMan分析，以及PerfeCTa® qPCR FastMix®, Low ROX™ (VWR，目錄號101419-222)，藉由RT-qPCR評定肝臟 MTRES1mRNA之相對含量，重複三次。將資料標準化為接受PBS之動物中之平均 MTRES1mRNA含量。結果顯示於 表 24中。相對於接受PBS之小鼠，注射ETD01597、ETD01955及ETD01958之小鼠之平均肝臟 MTRES1mRNA在第10天具有實質上更低含量。  表23.實例siRNA序列
siRNA 名稱 SEQ ID NO: 具有GalNAc 部分之有義股序列(5´-3´) SEQ ID NO: 反義股序列(5´-3´)
ETD01597 23 [ETL1]sguaucuccAfgAfauguuauasusu 33 usAfsuAfaCfaUfuCfuGfgAfgAfuAfcsusu
ETD01954 24 [ETL17]sacuuccuGfGfAfAfucgauacasusu 34 usGfsuAfsuCfgAfuUfcCfaGfgAfaGfususu
ETD01955 25 [ETL17]scuuccuGfGfAfAfucgauacuasusu 35 usAfsgUfaUfcGfaUfuCfcAfgGfaAfgsusu
ETD01956 26 [ETL17]scuggAfAfucGfAfuacuuguaasusu 36 usUfsaCfaAfgUfaUfcGfaUfuCfcAfgsusu
ETD01957 27 [ETL17]sggaaUfCfgaUfaCfuuguauuasusu 37 usAfsaUfaCfaAfgUfaUfcGfaUfuCfcsusu
ETD01958 28 [ETL17]sgaugCfUfuUfCfuacaaagguasusu 38 usAfscCfuUfuGfuAfgAfaAfgCfaUfcsusu
ETD01959 29 [ETL17]sagaaAfAfgcAfGfaacggugaasusu 39 usUfscAfcCfgUfuCfuGfcUfuUfuCfususu
ETD01960 30 [ETL17]saagcagAfAfdCGfgugaaaguasusu 40 usAfscUfuUfcAfcCfgUfuCfuGfcUfususu
ETD01961 31 [ETL17]sagugGfGfaGfAfuAfcauuggaasusu 41 usUfscCfaAfuGfuAfuCfuCfcCfaCfususu
ETD01962 32 [ETL17]sugggAfGfauAfcAfuuggaucasusu 42 usGfsaUfcCfaAfuGfuAfuCfuCfcCfasusu
表24.小鼠之肝臟中之相對MTRES1 mRNA含量
群組 n 處理 劑量( μg) 平均 MTRES1mRNA ( 標準化為組1 ， 第10 天)
1 3 PBS    1.00
2 3 ETD01597 200 0.13
3 3 ETD01954 200 1.03
4 3 ETD01955 200 0.16
5 3 ETD01956 200 0.62
6 3 ETD01957 200 0.31
7 3 ETD01958 200 0.18
8 3 ETD01959 200 0.53
9 3 ETD01960 200 0.69
10 3 ETD01961 200 0.33
11 3 ETD01962 200 0.79
雖然本文已顯示及描述本發明之較佳實施例，但熟習此項技術者將明白，此類實施例僅藉助於實例提供。熟習此項技術者可在不脫離本發明之情況下想到許多變化形式、改變及取代。應理解，本文所描述之本發明之實施例的各種替代方案可用於實踐本發明。預期以下申請專利範圍界定本發明之範疇，且藉此涵蓋在此等申請專利範圍及其等效物之範疇內之方法及結構。
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Claims (120)

  1. 一種由式(I)或(II)表示之化合物： ； 或其鹽，其中 J為寡核苷酸； 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1為選自以下之連接子： -O-、-S-、-N(R 7)-、-C(O)-、-C(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)- 、-N(R 7)C(O)N(R 7)-、-OC(O)N(R 7)-、-N(R 7)C(O)O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S(O)-、-S(O) 2-、-OS(O) 2-、-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7-； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環，及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。
  2. 如請求項1之化合物或鹽，其中各w獨立地選自1至10之任何值。
  3. 如請求項1之化合物或鹽，其中各w獨立地選自1至5之任何值。
  4. 如請求項1之化合物或鹽，其中各w為1。
  5. 如請求項1之化合物或鹽，其中各v獨立地選自1至10之任何值。
  6. 如請求項1之化合物或鹽，其中各v獨立地選自1至5之任何值。
  7. 如請求項1之化合物或鹽，其中各v為1。
  8. 如請求項1之化合物或鹽，其中n選自1至10之任何值。
  9. 如請求項1之化合物或鹽，其中n選自1至5之任何值。
  10. 如請求項1之化合物或鹽，其中n為2。
  11. 如請求項1之化合物或鹽，其中m選自1至10之任何值。
  12. 如請求項1之化合物或鹽，其中m選自1至5之任何值。
  13. 如請求項1之化合物或鹽，其中m選自1及2。
  14. 如請求項1之化合物或鹽，其中z為3且Y為C。
  15. 如請求項1之化合物或鹽，其中Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  16. 如請求項1之化合物或鹽，其中Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。
  17. 如請求項1之化合物或鹽，其中Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。
  18. 如請求項1之化合物或鹽，其中Q選自苯基。
  19. 如請求項1之化合物或鹽，其中Q選自環己基。
  20. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-、-OP(O)(OR 7)NR 7-、-OP(O)(N(R 7) 2)NR 7-、-OP(OR 7)O-、-OP(N(R 7) 2)O-、-OP(OR 7)N(R 7)-及-OPN(R 7) 2NR 7。
  21. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-SP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(SR 7)O-、-OP(O)(OR 7)S-、-OP(O)(O -)O-、-SP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-、-OP(O)(O -)S-及-OP(OR 7)O-。
  22. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S)(O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-。
  23. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7)O-及-OP(OR 7)O-。
  24. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。
  25. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。
  26. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。
  27. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 3選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  28. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 3選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。
  29. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 3選自-OR 7-及-OC(O)R 7。
  30. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 4選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  31. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 4選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。
  32. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 4選自-OR 7-及-OC(O)R 7。
  33. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。
  34. 如請求項1之化合物或鹽，其中R 5選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。
  35. 如請求項1之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自： 氫；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，或3至10員雜環。
  36. 如請求項1至30中任一項之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。
  37. 如請求項1至34中任一項之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。
  38. 如請求項1之化合物或鹽，其中 w為1； v為1； n為2； m為1或2； z為3且Y為C； Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基； R 1選自-OP(O)(OR 7)O-、-OP(S)(OR 7)O-、-OP(O)(O -)O-、-OP(S) (O -)O-、-OP(O)(S -)O-及-OP(OR 7)O-； R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基； R 3為-OH或-OC(O)CH 3； R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及 R 5為-NH(O)CH 3。
  39. 如請求項1之化合物，其中該化合物包含： 。
  40. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸(J)係連接在該寡核苷酸之5'端或3'端。
  41. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含DNA。
  42. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含RNA。
  43. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。
  44. 如請求項43之化合物，其中該一或多個經修飾之核苷間鍵聯包含烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代磷酸酯(alkylphosphonothioate)、胺基磷酸酯(phosphoramidate)、胺基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙醯胺酸酯(acetamidate)，或羧甲基酯，或其組合。
  45. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個經修飾之核苷間鍵聯。
  46. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷。
  47. 如請求項46之化合物，其中該一或多個經修飾之核苷包含鎖核酸(locked nucleic acid；LNA)、己糖醇核酸(HLA)、環己烯核酸(CeNA)、2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-O-烯丙基、2'-氟，或2'-去氧基，或其組合。
  48. 如請求項46之化合物，其中該一或多個經修飾之核苷包含2',4'經約束之乙基核苷、2'-O-甲基核苷、2'-去氧基氟核苷、2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)核苷、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)核苷、2'-O-胺丙基(2'-O-AP)核苷、2'-ara-F、2'氟基，或2'-O-烷基，或其組合。
  49. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或更多個經修飾之核苷。
  50. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含連接在該寡核苷酸之3'或5'端的脂質。
  51. 如請求項50之化合物，其中該脂質包含膽固醇、肉豆蔻醯基、軟脂醯基、硬脂醯基、石膽醯基(lithocholoyl)、二十二烷醯基、二十二碳六烯醯基(docosahexaenoyl)、肉豆蔻基、軟脂基、硬脂基，或α-生育酚，或其組合。
  52. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含連接在該寡核苷酸之3'或5'端的精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸(RGD)肽。
  53. 如請求項52之化合物，其中該RGD肽包含環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys)、環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)、環(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-疊氮基)、胺基苯甲酸衍生之RGD，或其組合。
  54. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含含有有義股及反義股之小干擾RNA (small interfering RNA；siRNA)。
  55. 如請求項54之化合物，其中該有義股之長度為12-30個核苷。
  56. 如請求項54之化合物，其中該反義股之長度為12-30個核苷。
  57. 如請求項54之化合物，其中該有義股及該反義股形成雙股RNA雙螺旋體。
  58. 如請求項57之化合物，其中該雙股RNA雙螺旋體之第一鹼基對為AU鹼基對。
  59. 如請求項54之化合物，其中該有義股或該反義股包含3'懸垂物。
  60. 如請求項59之化合物，其中該3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。
  61. 如請求項1之化合物，其中該寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。
  62. 如請求項61之化合物，其中該ASO之長度為12-30個核苷。
  63. 如請求項1之化合物，其中該化合物與去唾液酸糖蛋白受體結合。
  64. 如請求項1之化合物，其中該化合物靶向肝細胞。
  65. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之化合物，及醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
  66. 如請求項65之醫藥組合物，其中該醫藥組合物為無菌的。
  67. 如請求項65之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑。
  68. 如請求項67之醫藥組合物，其中該醫藥學上可接受之載劑包含水、緩衝液或鹽水溶液。
  69. 如請求項65之醫藥組合物，其中該寡核苷酸靶向目標mRNA，且當以有效量向個體投與時，使該目標mRNA或目標蛋白降低至少10%。
  70. 一種降低有需要之個體中之目標mRNA或目標蛋白之方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項65之醫藥組合物。
  71. 如請求項70之方法，其中相對於基線目標mRNA或目標蛋白量測，該有效量降低該個體中之該目標mRNA或目標蛋白的量測。
  72. 如請求項70之方法，其中該有效量治療該個體之病症。
  73. 如請求項72之方法，其中相對於基線症狀或參數量測，該有效量降低該個體中與該病症相關之症狀或參數的量測。
  74. 如請求項72之方法，其中該個體中與該病症相關之症狀或參數的量測降低至少10天。
  75. 如請求項72之方法，其中該病症包含代謝疾病。
  76. 如請求項72之方法，其中該病症包含肝病。
  77. 一種由式(A)或(B)表示之化合物： ； 或其鹽，其中 各w獨立地選自1至20之任何值； 各v獨立地選自1至20之任何值； n選自1至20之任何值； m選自1至20之任何值； z選自1至3之任何值，其中 若z為3，則Y為C， 若z為2，則Y為CR 6，或 若z為1，則Y為C(R 6) 2； Q選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 3-10碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7 、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7及C 1-6烷基，其中該C 1-6烷基視情況經一或多個獨立地選自鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2之取代基取代； R 1選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7、-S(O)R 7、-S(O) 2R 7、-OS(O) 2R 7、-OP(O)(OR 7) 2、-OP(S)(OR 7) 2、-SP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(SR 7)(OR 7)、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(S)(OR 7)N(R 7) 2、-SP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(SR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(S)(N(R 7) 2) 2、-SP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-SP(OR 7) 2、-OP(OR 7)(SR 7),-OP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(SR 7)N(R 7) 2、-SP(OR 7)N(R 7) 2、-OP(N(R 7) 2) 2及-SP(N(R 7) 2) 2； 各R 2獨立地選自： 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； R 3及R 4各自獨立地選自： -OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 5獨立地選自： -OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)R 7、-C(O)OR 7及-C(O)N(R 7) 2； 各R 6獨立地選自： 氫； 鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7； 各R 7獨立地選自： 氫； C 1-6烷基、C 2-6烯基及C 2-6炔基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，及3至10員雜環；及 C 3-10碳環及3至10員雜環，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-10碳環、3至10員雜環，及C 1-6鹵烷基。
  78. 如請求項77之化合物或鹽，其中各w獨立地選自1至10之任何值。
  79. 如請求項77之化合物或鹽，其中各w獨立地選自1至5之任何值。
  80. 如請求項77之化合物或鹽，其中各w為1。
  81. 如請求項77之化合物或鹽，其中各v獨立地選自1至10之任何值。
  82. 如請求項77之化合物或鹽，其中各v獨立地選自1至5之任何值。
  83. 如請求項77之化合物或鹽，其中各v為1。
  84. 如請求項77之化合物或鹽，其中n選自1至10之任何值。
  85. 如請求項77之化合物或鹽，其中n選自1至5之任何值。
  86. 如請求項77之化合物或鹽，其中n為2。
  87. 如請求項77之化合物或鹽，其中m選自1至10之任何值。
  88. 如請求項77之化合物或鹽，其中m選自1至5之任何值。
  89. 如請求項77之化合物或鹽，其中m選自1及2。
  90. 如請求項77之化合物或鹽，其中z為3且Y為C。
  91. 如請求項77之化合物或鹽，其中Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-NO 2、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-C(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)OR 7、-C(O)OR 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  92. 如請求項77之化合物或鹽，其中Q選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 5-6碳環：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。
  93. 如請求項77之化合物或鹽，其中Q選自苯基及環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2及-NH 2。
  94. 如請求項77之化合物或鹽，其中Q選自苯基。
  95. 如請求項77之化合物或鹽，其中Q選自環己基。
  96. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7) 2、-OP(O)(OR 7)N(R 7) 2、-OP(O)(N(R 7) 2) 2、-OP(OR 7) 2、-OP(OR 7)N(R 7) 2及-OP((NR 7) 2) 2。
  97. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OR 7) 2及-OP(OR 7)N(R 7) 2。
  98. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 1選自-OP(O)(OCH 2CH 3)OH及-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH(CH 3) 2) 2。
  99. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 1為-OP(OCH 2CH 2CN)N(CH (CH 3) 2) 2。
  100. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：鹵素、-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7及-S(O)R 7。
  101. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7、-OC(O)R 7、-SR 7及-N(R 7) 2。
  102. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 2選自經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-3烷基：-OR 7及-OC(O)R 7。
  103. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 3選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  104. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 3選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。
  105. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 3選自-OR 7-及-OC(O)R 7。
  106. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 4選自鹵素、-OR 7、-SR 7、-N(R 7) 2、-C(O)R 7、-OC(O)R 7及-S(O)R 7。
  107. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 4選自-OR 7、-SR 7、-OC(O)R 7及-N(R 7) 2。
  108. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 4選自-OR 7-及-OC(O)R 7。
  109. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 5選自-OC(O)R 7、-OC(O)N(R 7) 2、-N(R 7)C(O)R 7、-N(R 7)C(O)N(R 7) 2及-N(R 7)C(O)OR 7。
  110. 如請求項77之化合物或鹽，其中R 5選自-OC(O)R 7及-N(R 7)C(O)R 7。
  111. 如請求項77之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自： 氫；及 視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2、-NH(C 1-6烷基)、C 3-10碳環，或3至10員雜環。
  112. 如請求項77之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2、=O、=S、-O-C 1-6烷基、-S-C 1-6烷基、-N(C 1-6烷基) 2及-NH(C 1-6烷基)。
  113. 如請求項77之化合物或鹽，其中各R 7獨立地選自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代之C 1-6烷基：鹵素、-CN、-OH及-SH。
  114. 如請求項113之化合物或鹽，其中 w為1； v為1； n為2； m為1或2； z為3且Y為C； Q為苯基或環己基，各自視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、-CN、-OH、-SH、-NO 2、-NH 2及C 1-3烷基； R 1選自-OP(O)(OR 7) 2及-OP(OR 7)N(R 7) 2； R 2為經-OH或-OC(O)CH 3取代之C 1烷基； R 3為-OH或-OC(O)CH 3； R 4為-OH或-OC(O)CH 3；及 R 5為-NH(O)CH 3。
  115. 如請求項77之化合物，其中該化合物包含： 。
  116. 一種化合物，其包含： ， 其中J包含寡核苷酸，或包含與該寡核苷酸之連接。
  117. 如請求項116之化合物，其中J進一步包含一或多個將該結構與該寡核苷酸連接之磷酸酯基。
  118. 如請求項116之化合物，其中J進一步包含一或多個將該結構與該寡核苷酸連接之硫代磷酸酯基。
  119. 如請求項116之化合物，其中該寡核苷酸包含5'端，且J包含與該寡核苷酸之5'端的連接。
  120. 如請求項116之化合物，其中該寡核苷酸包含siRNA。
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