TW202403044A - 經修飾之寡核苷酸 - Google Patents

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大衛 羅茲馬
歐莫瑞 戈特斯曼
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Abstract

本發明揭示包含經修飾之寡核苷酸的組合物。在一些實施例中，該寡核苷酸包括疏水性部分。在一些實施例中，該寡核苷酸包括膦酸乙烯酯。在一些實施例中，該寡核苷酸包括經修飾之寡核苷酸糖，諸如2'修飾之核糖分子。在一些實施例中，該寡核苷酸包括經修飾之核苷間鍵聯，諸如硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，該寡核苷酸包括siRNA。在一些實施例中，該siRNA包含在任一末端上具有懸垂物之雙螺旋區。

Description

經修飾之寡核苷酸
此項技術中需要用於降低基因表現之經改良寡核苷酸。
在一些實施例中，本文描述包含寡核苷酸之組合物，該寡核苷酸靶向mRNA且當以有效量投與時降低目標mRNA或蛋白質含量。在一些實施例中，本文描述包含小干擾RNA (siRNA)之組合物，該小干擾RNA (siRNA)包含有義股、反義股及連接至有義股或反義股之末端的脂質部分；其中該脂質部分包含苯基或環己基連接子，其中該連接子連接至脂質且連接至有義股或反義股之末端。該脂質部分可連接至有義股或反義股之5'或3'端。在一些實施例中，脂質及有義股或反義股之末端在1,4、1,3或1,2取代模式(例如，對位、間位或鄰位苯基組態)中連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，脂質及有義股或反義股之末端在1,4 (對苯基)組態中連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，該脂質部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，R不為辛烷。在一些實施例中，R為含有4-7個或9-18個碳之烷基。在一些實施例中，該脂質部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該脂質部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，n為0-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該脂質部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該脂質部分包含以下結構中之任一者： ； ；或 ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接，n為0-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該脂質部分包含表1中所描繪之脂質部分。在一些實施例中，該脂質部分連接至有義股或反義股之5'端。在一些實施例中，該脂質部分連接至有義股之5'端。在一些實施例中，該脂質部分經由磷酸酯連接至有義股或反義股之5'端。在一些實施例中，該脂質部分連接至有義股之末端。在一些實施例中，該反義股包含膦酸乙烯酯。在一些實施例中，該反義股包含5'膦酸乙烯酯。在一些實施例中，該有義股或該反義股在有義股或反義股之5'或3'端處包含一個或兩個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，該反義股包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，反義股之5'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯，或反義股之5'端的第一核苷酸、第二核苷酸與第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯。在一些實施例中，反義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，反義股之3'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯，或反義股之3'端的第一核苷酸、第二核苷酸與第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯。在一些實施例中，有義股包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，有義股之5'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯，或有義股之5'端的第一核苷酸、第二核苷酸與第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯。在一些實施例中，有義股不包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，在一些實施例中，有義股之5'端處的最後3個核苷酸之間不存在硫代磷酸酯。在一些實施例中，有義股包含5'磷酸酯鍵。在一些實施例中，有義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，有義股之3'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯，或有義股之3'端的第一核苷酸、第二核苷酸與第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯。在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基；所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；或所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基；限制條件為在前述任一者中，該有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，有義股包括2'去氧核苷。在一些實施例中，有義股不包括2'去氧核苷。在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基；所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；或所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股或反義股而言為真，限制條件為有義股或反義股可包括去氧核苷：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，該有義股可包括去氧核苷。在一些實施例中，有義股不包括去氧核苷。在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。該有義股可包括位置9處之2-去氧基修飾。
在一些實施例中，本文描述組合物，其包含：小干擾RNA (siRNA)，其包含有義股及反義股；其中該反義股包含含有膦酸乙烯酯以及2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中該有義股包含含有疏水性部分之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中以下中之任一者對於有義股而言為真，限制條件為該有義股可包括2'去氧核苷：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基；且其中以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。在一些實施例中，有義股包括2'去氧核苷。在一些實施例中，有義股不包括2'去氧核苷。在一些實施例中，本文描述組合物，其包含：小干擾RNA (siRNA)，其包含有義股及反義股；其中該反義股包含含有膦酸乙烯酯及2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端以及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中該有義股包含含有疏水性部分之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；且其中以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；其全部限制條件為該有義股可包括去氧核苷。在一些實施例中，有義股不包括去氧核苷。在一些實施例中，本文描述組合物，其包含：小干擾RNA (siRNA)，其包含有義股及反義股；其中該反義股包含含有膦酸乙烯酯及2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端以及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中該有義股包含含有疏水性部分之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；且其中以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之5'端包含兩個經由磷酸酯鍵且不由硫代磷酸酯鍵聯連接之核苷酸。在一些實施例中，有義股之5'端包含兩個經由磷酸酯鍵且不由硫代磷酸酯鍵聯連接之核苷，且有義股之3'端包含兩個經由硫代磷酸酯鍵聯連接之核苷。在一些實施例中，有義股之5'端進一步包含1或2個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，該疏水性部分包含藉由苯基或環己基連接子連接至有義股之5'端的脂質。在一些實施例中，脂質及有義股之5'端在1,4、1,3或1,2取代模式(例如，苯基組態之對位、間位或鄰位)中連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，脂質及有義股之5'端在1,4 (對苯基)組態中連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，該疏水性部分包含以下結構中之任一者： ； ；或 ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該疏水性部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，R不為辛烷。在一些實施例中，R為含有4-7個或9-18個碳之烷基。在一些實施例中，該疏水性部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該疏水性部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該疏水性部分包含以下結構： ；其中點線指示與有義股或反義股之末端的連接(例如，共價連接)，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，該疏水性部分包含表1中所描繪之脂質部分。該有義股可包括位置9處之2-去氧基修飾。
在一些實施例中，該有義股及該反義股形成雙螺旋體。在一些實施例中，該雙螺旋體包含至少10個鹼基對、至少11個鹼基對、至少12個鹼基對、至少13個鹼基對、至少14個鹼基對、至少15個鹼基對、至少16個鹼基對、至少17個鹼基對、至少18個鹼基對、至少19個鹼基對、至少20個鹼基對、至少21個鹼基對、至少22個鹼基對、至少23個鹼基對、至少24個鹼基對，或至少25個鹼基對。在一些實施例中，該雙螺旋體包含19個鹼基對。在一些實施例中，該雙螺旋體包含有義股懸垂物。在一些實施例中，該有義股懸垂物包含1-4個核苷酸。在一些實施例中，該有義股懸垂物包含2個核苷酸。在一些實施例中，該有義股懸垂物包含尿嘧啶。在一些實施例中，該雙螺旋體包含反義股懸垂物。在一些實施例中，該反義股懸垂物包含1-4個核苷酸。在一些實施例中，該反義股懸垂物包含2個核苷酸。在一些實施例中，該反義股懸垂物包含尿嘧啶。在一些實施例中，該有義股及該反義股形成包含1-3個核苷酸之有義股3'懸垂物及1-3個核苷酸之反義股3'懸垂物的雙螺旋體。在一些實施例中，該有義股及該反義股形成包含2個尿嘧啶核苷酸之有義股3'懸垂物及2個尿嘧啶核苷酸之反義股3'懸垂物的雙螺旋體。一些實施例包括醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，本文描述治療方法，其包含向有需要之個體投與有效量之組合物。在一些實施例中，本文描述減少細胞中RNA或蛋白質之量的方法，其包含向該細胞投與組合物。在一些實施例中，向細胞投與組合物包含向包含該細胞之個體投與組合物。
在一些實施例中，本文描述治療方法，其包含向有需要之個體投與有效量的本文所描述之組合物或siRNA。在一些實施例中，投與包含皮下、玻璃體內、鞘內或腦室內投與。在一些實施例中，該siRNA靶向編碼介導個體之疾病之蛋白質的mRNA。在一些實施例中，該mRNA在個體之組織中，該組織包含眼睛、肝臟、脂肪、腦或脊髓。
在一些實施例中，本文描述減少細胞中目標RNA或由RNA編碼之蛋白質之量的方法，其包含向該細胞投與本文所描述之組合物或siRNA，其中反義股包含與RNA互補且結合之序列。在一些實施例中，向細胞投與組合物包含向包含該細胞之個體投與組合物。在一些實施例中，投與包含皮下、玻璃體內、鞘內或腦室內投與。在一些實施例中，投與使目標RNA或由RNA編碼之蛋白質之量測相對於基線量測或對照減少至少10%。在一些實施例中，該細胞包含眼睛、肝臟、脂肪、腦或脊髓細胞。
交叉參考
本申請要求2022年3月28日申請之美國臨時申請案第63/324,487號及2022年12月2日申請之美國臨時申請案第63/429,756號的益處，該等申請案兩者以引用之方式併入本文中。 序列表
本申請案與電子格式之序列表一起申請。序列表作為2023年3月20日創建的標題為54462-739851_TW.xml之檔案提供，其大小為541千位元組。電子格式之序列表中之資訊以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，本文揭示經修飾之寡核苷酸。經修飾之寡核苷酸可為包括對核糖環之修飾及磷酸酯鍵的siRNA。修飾可尤其為最大化細胞遞送、穩定性及效率之模式。siRNA亦可包括膦酸乙烯酯及疏水性基團。此等修飾可有助於遞送至個體內之細胞或組織。經修飾之寡核苷酸可用於諸如治療方法或降低基因表現之方法中。
在一些實施例中，寡核苷酸包含由21個核苷酸單股組成之雙螺旋體，其中鹼基對中之19個之間具有鹼基配對。在一些實施例中，雙螺旋體包含各股之3'端處的單股2核苷酸懸垂物。一個股(反義股)與目標mRNA互補。反義股之各末端具有一至兩個硫代磷酸酯鍵聯。5'端具有視情況選用之磷酸酯模擬物，諸如膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸用於減弱目標mRNA或目標蛋白。在一些實施例中，有義股具有與目標mRNA相同的序列。在一些實施例中，3'端處存在1-2個硫代磷酸酯。在一些實施例中，5'端處存在1個或無硫代磷酸酯。在一些實施例中，5'端處存在經由磷酸二酯鍵連接的12至25個碳之疏水性結合物。 I. 組合物
在一些實施例中，本文揭示包含寡核苷酸之組合物。在一些實施例中，組合物包含靶向目標寡核苷酸之寡核苷酸。目標寡核苷酸可包括目標RNA。在一些實施例中，組合物由靶向目標RNA之寡核苷酸組成。目標RNA可包括目標mRNA。在一些實施例中，寡核苷酸降低個體中之目標mRNA表現。在一些實施例中，寡核苷酸降低個體中之目標蛋白表現。寡核苷酸可包括RNA雙螺旋體。寡核苷酸可包括小干擾RNA (siRNA)。寡核苷酸可包括反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide；ASO)。在一些實施例中，組合物用於治療有需要個體之病症的方法中。一些實施例係關於一種組合物，其包含用於治療病症之方法中的寡核苷酸。一些實施例係關於包含寡核苷酸之組合物在治療病症之方法中的用途。
目標可藉由多種方式來鑑別。在一些情況下，目標寡核苷酸包含表現量與病症(例如，脂肪組織相關或眼部相關之病症)之發病率相關的mRNA。在一些情況下，目標寡核苷酸包含由具有與病症相關之特定基因型之基因編碼的mRNA。大規模人類基因資料可改善醫藥發現及研發之成功率。全基因體關聯研究(Genome Wide Association Study；GWAS)可偵測群體樣本中之基因變異體與性狀之間的關聯。GWAS可實現對疾病之生物學之較佳理解，且提供可應用的治療。GWAS可利用基因分型及/或定序資料，且通常涉及評估在基因體上相對均勻分佈之數百萬基因變異體。最常見GWAS設計為病例對照研究，其涉及在病例對比對照中比較變異體頻率。若變異體在病例對比對照中具有顯著不同的頻率，則該變異體稱為與疾病相關。可用於GWAS中之關聯統計量為p值，作為統計顯著性之量度；勝算比(odds ratio；OR)，作為效應大小之量度；或β (beta)係數，作為效應大小之量度。研究人員通常假設相加性遺傳模型且計算對偶基因勝算比，其為對偶基因之各額外複本所賦予的疾病之風險增加(或降低) (相較於不攜帶該對偶基因之複本)。GWAS之設計及解釋中的額外概念為連鎖不平衡，其為對偶基因之非隨機關聯。連鎖不平衡之存在可混淆哪一變異體為「致因性的」。
變異體之功能註釋及/或濕式實驗室實驗用於鑑別經由GWAS鑑別之致因性基因變異體，且在許多情況下引起致病基因之鑑別。特定言之理解致因性基因變異體之功能效應(例如，蛋白質功能之損失、蛋白質功能之獲得、基因表現之增加或基因表現之降低)允許變異體用作用於目標基因之治療調節的代理，或進一步理解調節該目標之療法的潛在治療功效及安全性。
此類基因-疾病關聯之鑑別已提供對疾病生物學之見解且用於鑑別醫藥行業之新穎治療目標。為轉譯衍生自人類遺傳學之治療見解，患者之疾病生物學經外源地『程式化』為複製來自人類遺傳學之觀測。治療模態存在若干選項，其可使經由人類遺傳學鑑別之治療性目標轉譯為新穎藥物。此等包括諸如小分子及單株抗體之公認的治療模態、諸如寡核苷酸之成熟化模態及諸如基因療法及基因編輯之新興模態。治療模態之選擇視以下因素而定：諸如目標(例如，細胞內、細胞外或分泌)之位置、相關組織(例如，肺或眼睛)及相關適應症。可進行此類研究以藉由本文所描述之組合物或化合物鑑別用於siRNA抑制的特定病症相關之目標。在一些情況下，目標可與特定組織相關。
本文揭示包含靶向目標RNA之寡核苷酸的組合物。在揭示目標RNA之抑制或靶向之情況下，經考慮一些實施例可包括抑制或靶向目標蛋白或目標RNA。舉例而言，藉由使用本文中所描述之寡核苷酸抑制或靶向由目標基因編碼之RNA (例如，mRNA)，目標蛋白可由於目標蛋白之較少產生而由目標RNA之轉譯抑制或靶向；或目標蛋白可由與目標RNA結合或相互作用且減少目標RNA產生目標蛋白的寡核苷酸而經靶向或抑制。因此，靶向可指結合目標RNA且減少目標RNA或蛋白質含量。寡核苷酸可包括小干擾RNA (siRNA)或反義寡核苷酸(ASO)。本文亦提供藉由向有需要之個體提供靶向目標之寡核苷酸來治療目標病症之方法。
一些實施例包括包含寡核苷酸之組合物，該寡核苷酸靶向mRNA且當以有效量向個體投與時降低細胞、體液或組織中之目標mRNA或蛋白質含量。在一些實施例中，組合物包含靶向目標RNA且當以有效量向個體投與時降低細胞或組織中之目標mRNA含量的寡核苷酸。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，目標mRNA含量降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%或不超過約90%。在一些實施例中，目標mRNA含量降低2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由兩個前述百分比中之任一者限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含靶向目標mRNA且當以有效量向個體投與時降低細胞、體液或組織中之目標蛋白含量的寡核苷酸。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，目標蛋白含量降低不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%或不超過約90%。在一些實施例中，目標蛋白含量降低2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由兩個前述百分比中之任一者限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含靶向mRNA且當以有效量向個體投與時減少疾病表型的寡核苷酸。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多或約100%。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，疾病表型減少不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%或不超過約90%。在一些實施例中，疾病表型減少2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，或降低由兩個前述百分比中之任一者限定的範圍。
在一些實施例中，組合物包含靶向mRNA且當以有效量向個體投與時增強針對個體之疾病之保護性表型的寡核苷酸。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約2.5%或更多、約5%或更多、或約7.5%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約10%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多、或約100%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加約200%或更多、約300%或更多、約400%或更多、約500%或更多、約600%或更多、約700%或更多、約800%或更多、約900%或更多、或約1000%或更多。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約10%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，相較於投與前，保護性表型增加不超過約200%、不超過約300%、不超過約400%、不超過約500%、不超過約600%、不超過約700%、不超過約800%、不超過約900%或不超過約1000%。在一些實施例中，保護性表型增加2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、150%、200%、250%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%或1000%，或降低由兩個前述百分比中之任一者限定的範圍。 A.   siRNA
在一些實施例中，組合物包含靶向目標RNA (諸如mRNA)之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含小干擾RNA (siRNA)。在一些實施例中，組合物包含靶向目標mRNA之寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之小干擾RNA (siRNA)。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，組合物包含長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷或由兩個前述數目中之任一者定義之範圍的有義股。有義股之長度可為14-30個核苷。在一些實施例中，組合物包含長度為12-30個核苷之反義股。在一些實施例中，組合物包含長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷或由兩個前述數目中之任一者定義之範圍的反義股。反義股之長度可為14-30個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，各股之長度獨立地為約12-30個核苷，且有義股及反義股中之至少一者包含含有全長人類目標mRNA序列之約12-30個連續核苷的核苷序列。在一些實施例中，有義股及反義股中之至少一者包含含有目標RNA之至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多個連續核苷的核苷序列。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股及反義股形成雙股RNA雙螺旋體。在一些實施例中，雙股RNA雙螺旋體之第一鹼基對為AU鹼基對。
在一些實施例中，有義股進一步包含3'懸垂物。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者定義的核苷酸範圍。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，3'懸垂物包含2個核苷。在一些實施例中，有義股進一步包含5'懸垂物。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者定義的核苷酸範圍。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，5'懸垂物包含2個核苷。
在一些實施例中，反義股進一步包含3'懸垂物。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者定義的核苷酸範圍。在一些實施例中，3'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，3'懸垂物包含2個核苷。在一些實施例中，反義股進一步包含5'懸垂物。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷，或由前述數目中之任兩者定義的核苷酸範圍。在一些實施例中，5'懸垂物包含1、2或更多個核苷。在一些實施例中，5'懸垂物包含2個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與人類目標mRNA中之19聚體結合。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA中之12聚體、13聚體、14聚體、15聚體、16聚體、17聚體、18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體結合。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與非人類靈長類動物目標mRNA中之17聚體結合。在一些實施例中，siRNA與非人類靈長類動物目標mRNA中之12聚體、13聚體、14聚體、15聚體、16聚體、17聚體、18聚體、19聚體、20聚體、21聚體、22聚體、23聚體、24聚體或25聚體結合。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於20個人類脫靶，反義股中具有不超過2個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於10個人類脫靶，反義股中具有不超過2個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於30個人類脫靶，反義股中具有不超過2個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於40個人類脫靶，反義股中具有不超過2個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於50個人類脫靶，反義股中具有不超過2個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於10個人類脫靶，反義股中具有不超過3個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於20個人類脫靶，反義股中具有不超過3個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於30個人類脫靶，反義股中具有不超過3個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於40個人類脫靶，反義股中具有不超過3個錯配。在一些實施例中，siRNA與人類目標mRNA結合且小於或等於50個人類脫靶，反義股中具有不超過3個錯配。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，siRNA與不具有SNP之人類目標mRNA目標位點結合，其中次要對偶基因頻率(minor allele frequency；MAF)大於或等於1% (位置2-18)。在一些實施例中，MAF大於或等於約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%或約20%。 B.   ASO
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。在一些實施例中，ASO之長度為12-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為14-30個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷，或由兩個前述數目中之任一者定義的範圍。在一些實施例中，ASO之長度為15-25個核苷。在一些實施例中，ASO之長度為20個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含長度為約12-30個核苷且包含與全長人類目標mRNA序列之約12-30個連續核苷互補之核苷序列的ASO；其中(i)寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵的修飾，及/或(ii)組合物包含醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，ASO包含與目標mRNA之至少約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多個連續核苷互補之核苷序列。 C.   修飾
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中(i)寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵聯的修飾，及/或(ii)組合物包含醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，寡核苷酸包含含有經修飾之核苷及/或經修飾之核苷間鍵的修飾。在一些實施例中，寡核苷酸包含經修飾之核苷間鍵。在一些實施例中，經修飾之核苷間鍵包含膦酸烷基酯、硫代磷酸酯、膦酸甲酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代磷酸酯(alkylphosphonothioate)、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙醯亞胺酯或羧甲基酯，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷間鍵包含一或多個硫代磷酸酯鍵聯。硫代磷酸酯可在由硫置換的寡核苷酸之磷酸酯主鏈中包括非橋聯氧原子。經修飾之核苷間鍵可包括於siRNA或ASO中。經修飾之核苷間鍵之益處可包括降低之毒性或改善之藥物動力學。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷間鍵，其中寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個經修飾之核苷間鍵，或由前述數目中之任兩者定義的經修飾之核苷間鍵範圍。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過18個經修飾之核苷間鍵。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過20個經修飾之核苷間鍵。在一些實施例中，寡核苷酸包含2個或更多個經修飾之核苷間鍵、3個或更多個經修飾之核苷間鍵、4個或更多個經修飾之核苷間鍵、5個或更多個經修飾之核苷間鍵、6個或更多個經修飾之核苷間鍵、7個或更多個經修飾之核苷間鍵、8個或更多個經修飾之核苷間鍵、9個或更多個經修飾之核苷間鍵、10個或更多個經修飾之核苷間鍵、11個或更多個經修飾之核苷間鍵、12個或更多個經修飾之核苷間鍵、13個或更多個經修飾之核苷間鍵、14個或更多個經修飾之核苷間鍵、15個或更多個經修飾之核苷間鍵、16個或更多個經修飾之核苷間鍵、17個或更多個經修飾之核苷間鍵、18個或更多個經修飾之核苷間鍵、19個或更多個經修飾之核苷間鍵或20個或更多個經修飾之核苷間鍵。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含經修飾之核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含鎖核酸(locked nucleic acid；LNA)、己糖醇核酸(hexitol nucleic acid；HLA)、環己烯核酸(CeNA)、2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-氟基或2'-去氧基，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷包含LNA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2',4'約束之乙基核酸。在一些實施例中，經修飾之核苷包含HLA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含CeNA。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-甲氧基乙基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-烷基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-甲氧基乙基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含甲氧基乙基。舉例而言，有義股之位置4可包含甲氧基乙基核苷，諸如2'-甲氧基乙基胸腺嘧啶。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-甲基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-烯丙基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-氟基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-去氧基。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-甲基核苷、2'-去氧基氟基核苷、2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)核苷、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)核苷、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)核苷或2'-ara-F，或其組合。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-甲基核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-去氧基氟基核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-NMA核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-DMAEOE核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2'-ara-F。在一些實施例中，經修飾之核苷包含一或多個2'氟基修飾之核苷。在一些實施例中，經修飾之核苷包含2' O-烷基修飾之核苷。經修飾之核苷之益處可包括降低之毒性或改善之藥物動力學。
在一些實施例中，寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21個經修飾之核苷，或由前述數目中之任兩者定義的核苷範圍。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過19個經修飾之核苷。在一些實施例中，寡核苷酸包含不超過21個經修飾之核苷。在一些實施例中，寡核苷酸包含2個或更多個經修飾之核苷、3個或更多個經修飾之核苷、4個或更多個經修飾之核苷、5個或更多個經修飾之核苷、6個或更多個經修飾之核苷、7個或更多個經修飾之核苷、8個或更多個經修飾之核苷、9個或更多個經修飾之核苷、10個或更多個經修飾之核苷、11個或更多個經修飾之核苷、12個或更多個經修飾之核苷、13個或更多個經修飾之核苷、14個或更多個經修飾之核苷、15個或更多個經修飾之核苷、16個或更多個經修飾之核苷、17個或更多個經修飾之核苷、18個或更多個經修飾之核苷、19個或更多個經修飾之核苷、20個或更多個經修飾之核苷或21個或更多個經修飾之核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含連接在寡核苷酸之3'或5'端處的部分。部分之實例包括疏水性部分或糖部分，或其組合。在一些實施例中，寡核苷酸為具有有義股之siRNA，且部分連接至有義股之5'端。在一些實施例中，寡核苷酸為具有有義股之siRNA。且部分連接至有義股之3'端。在一些實施例中，寡核苷酸為具有反義股之siRNA，部分連接至反義股之5'端。在一些實施例中，寡核苷酸為具有反義股之siRNA，且部分連接至反義股之3'端。在一些實施例中，寡核苷酸為ASO，且部分連接至ASO之5'端。在一些實施例中，寡核苷酸為ASO，且部分連接至ASO之3'端。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含疏水性部分。包含疏水性部分之寡核苷酸可包括或稱作疏水性結合物。疏水性部分可適用於增強細胞攝取。疏水性部分可連接在寡核苷酸之3'或5'端處。疏水性部分可包括脂質，諸如脂肪酸。疏水性部分可包括烴。烴可為線性的。烴可為非線性的。疏水性部分可包括脂質部分或膽固醇部分，或其組合。在一些實施例中，疏水性部分包括環己烷基。在一些實施例中，疏水性部分包括脂質。在一些實施例中，疏水性部分以本文所描述之特定格式使用。在一些實施例中，疏水性部分連接在有義股之5'端處，而在5'端處無任何硫代磷酸酯基團或鍵。疏水性部分可包括酯化脂質。
疏水性部分可為或包括脂質部分。在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含連接在寡核苷酸之3'或5'端的脂質。在一些實施例中，脂質包含膽固醇、肉豆蔻基、軟脂基、硬脂基、石膽醯基(lithocholyl)、二十二烷基、二十二碳六烯基或α-生育酚，或其組合。在一些實施例中，脂質包含硬脂醇、三級丁基苯酚、正丁基苯酚、辛基苯基、十二烷基苯基、苯基正十二烷基、十八烷基苯甲醯胺、十六烷基苯甲醯胺或十八烷基環己基。在一些實施例中，脂質包含苯基對C12。脂質部分可經酯化。 在一些實施例中，寡核苷酸包含以下結構之任何態樣： 。在一些實施例中，R不為辛烷。在一些實施例中，R為含有4-7個或9-18個碳之烷基。在一些實施例中，寡核苷酸包含以下結構之任何態樣： 。在一些實施例中，寡核苷酸包含以下結構之任何態樣： 。在一些實施例中，寡核苷酸包含以下結構之任何態樣： 。包括於寡核苷酸中之態樣可包括整個結構，或可包括所展示結構中之任一者之脂質部分。在一些實施例中，n為1-3。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，R為烷基。在一些實施例中，烷基含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳。在一些實施例中，烷基含有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個碳，或由前述碳數目中之任兩者定義的範圍。在一些實施例中，烷基含有4-18個碳。在一些實施例中，R不為辛烷(C8)。在一些實施例中，R為C 4-7烷基。在一些實施例中，R為C 9-18烷基。在一些實施例中，R為C 4-7烷基及C 9-18烷基。在一些實施例中，烷基含有11個碳。在一些實施例中，烷基含有12個碳。在一些實施例中，烷基含有13個碳。在一些實施例中，烷基含有14個碳。在一些實施例中，烷基含有15個碳。在一些實施例中，烷基含有16個碳。在一些實施例中，烷基含有17個碳。在一些實施例中，烷基含有18個碳。在一些實施例中，R不為辛烷(C 8)。在一些實施例中，R包括分支鏈碳鏈。在一些實施例中，R包括非分支鏈碳鏈。在一些實施例中，脂質部分包含醇或醚。在一些實施例中，脂質部分具有至少一個不飽和度。在一些實施例中，脂質部分為ω脂肪酸，諸如ω-3、ω-5、ω-6、ω-7或ω-9脂肪酸。
在一些實施例中，脂質包括脂肪酸。在一些實施例中，脂質包含表1中所描繪之脂質。表1中之實例脂質部分經展示連接在寡核苷酸之5'端處，其中寡核苷酸之5'端磷酸酯經展示具有脂質部分。在一些實施例中，表1中之脂質部分可連接在與所展示不同的連接點處。舉例而言，表中的脂質部分中之任一者之連接點可在3'寡核苷酸末端處。在一些實施例中，脂質用於使寡核苷酸靶向非肝細胞或組織。 表 1 ：脂質部分實例
描述 名稱 連接至寡核苷酸之實例描繪
硬脂基 ETL3
三級丁基苯基 ETL7
正丁基苯基 ETL8
辛基苯基 ETL9
十二烷基苯基 ETL10
苯基正十二烷基 ETL12
十八烷基苯甲醯胺基 ETL13
十六烷基苯甲醯胺基 ETL15
十八烷基-環己基 ETL16
肉豆蔻醯胺基甲基苯基 ETL18
月桂醯胺基甲基苯基 ETL19
苯乙基-軟脂基 ETL20
在一些實施例中，脂質或脂質部分包括16至18個碳。在一些實施例中，脂質包括16個碳。在一些實施例中，脂質包括17個碳。在一些實施例中，脂質包括18個碳。在一些實施例中，脂質部分包括16個碳。在一些實施例中，脂質部分包括17個碳。在一些實施例中，脂質部分包括18個碳。在一些實施例中，脂質部分包括19個碳。在一些實施例中，脂質部分包括20個碳。
疏水性部分可包括包含碳環之連接子。碳環可為六員的。碳環之一些實例包括苯基或環己基。連接子可包括苯基。連接子可包括環己基。脂質可連接至碳環，其又可連接在寡核苷酸之磷酸酯(例如，5'或3'磷酸酯)處。在一些實施例中，脂質或烴以及有義股之末端以1,4、1,3或1,2取代模式(例如對位、間位或鄰位苯基組態)連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，脂質或烴以及有義股之末端以1,4取代模式(例如，對苯基組態)連接至苯基或環己基連接子。脂質可相對於寡核苷酸以鄰位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以對位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以間位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,4取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,3取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,2取向連接至碳環。
脂質部分可包含以下結構或由其組成： 。在一些實施例中，脂質部分包含以下結構或由其組成： 。在一些實施例中，脂質部分包含以下結構或由其組成： 。在一些實施例中，脂質部分包含以下結構或由其組成： 。在一些實施例中，點線指示共價連接。共價連接可在有義股或反義股之末端之間。舉例而言，連接可為至有義股之5'端。在一些實施例中，n為0-3。在一些實施例中，n為1-3。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為4。在一些實施例中，n為5。在一些實施例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，R包括分支鏈碳鏈。在一些實施例中，R包括非分支鏈碳鏈。在一些實施例中，R為烷基。在一些實施例中，烷基含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳。在一些實施例中，烷基含有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個碳，或由前述碳數目中之任兩者定義的範圍。在一些實施例中，烷基含有11個碳。在一些實施例中，烷基含有12個碳。在一些實施例中，烷基含有13個碳。在一些實施例中，烷基含有14個碳。在一些實施例中，烷基含有15個碳。在一些實施例中，烷基含有16個碳。在一些實施例中，烷基含有17個碳。在一些實施例中，烷基含有18個碳。在一些實施例中，R包含含有4-18個碳之烷基或由其組成。在一些實施例中，脂質部分不為苯基辛基。在一些實施例中，R不為辛烷。在一些實施例中，R為C 4-7烷基。在一些實施例中，R為C 9-18烷基。在一些實施例中，R為C 4-7烷基及C 9-18烷基。在一些實施例中，脂質部分不為苯基辛基。
在一些實施例中，5'疏水性部分包含以下結構中之任一者： 、 、 或 ，其中點線指示與有義股之5'端的共價連接，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。在一些實施例中，R不為辛烷。在一些實施例中，烷基含有4-7個或9-18個碳。在一些實施例中，烷基含有14個碳。在一些實施例中，烷基含有15個碳。在一些實施例中，烷基含有16個碳。在一些實施例中，烷基含有17個碳。在一些實施例中，烷基含有18個碳。在一些實施例中，5'疏水性部分包含表1中之疏水性部分。在一些實施例中，5'疏水性部分包含苯基對C12。在一些實施例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。在一些實施例中，n為0-3。在一些實施例中，n為1-3。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，疏水性部分包含醇或醚。在一些實施例中，R為不飽和烷基。在一些實施例中，不飽和烷基可為單不飽和的。在一些實施例中，不飽和烷基在ω-3位置、ω-4位置、ω-5位置、ω-6位置、ω-7位置、ω-8位置、ω-9位置或其組合處可為不飽和的。在一些實施例中，5'疏水性部分不為苯基辛基。
疏水性部分可包括包含碳環之連接子。碳環可為六員的。碳環之一些實例包括苯基或環己基。連接子可包括苯基。連接子可包括環己基。脂質可連接至碳環，其又可連接在寡核苷酸之磷酸酯(例如，5'或3'磷酸酯)處。在一些實施例中，脂質或烴以及有義股之末端在1,4、1,3或1,2取代模式(例如，對位、間位或鄰位苯基組態)中連接至苯基或環己基連接子。在一些實施例中，脂質或烴以及有義股之末端在中1,4取代模式(例如，對苯基組態)中連接至苯基或環己基連接子。脂質可相對於寡核苷酸以鄰位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以對位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以間位取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,4取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,3取向連接至碳環。脂質可相對於寡核苷酸以1,2取向連接至碳環。
脂質部分可連接在寡核苷酸之5'端處。5'端可具有一個將脂質部分連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯。5'端可具有兩個將脂質部分連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯。5'端可具有三個將脂質部分連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯。5'端可具有一個連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯，其中一個磷酸酯連接至脂質部分。5'端可具有兩個連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯，其中兩個磷酸酯中之一者連接至脂質部分。5'端可具有三個連接至寡核苷酸之糖之5'碳的磷酸酯，其中三個磷酸酯中之一者連接至脂質部分。糖可包括核糖。糖可包括去氧核苷。糖可經修飾，諸如2'修飾之糖(例如，2' O-甲基或2'氟基核糖)。5'端之磷酸酯可包括修飾，諸如硫代替氧。5'端之兩個磷酸酯可包括修飾，諸如硫代替氧。5'端之三個磷酸酯可包括修飾，諸如硫代替氧。在一些實施例中，寡核苷酸不為d(pT-G-G-G-G-G)。
在一些實施例中，寡核苷酸包括1個脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包括2個脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包括3個脂質部分。在一些實施例中，寡核苷酸包括4個脂質部分。
一些實施例係關於一種製備包含疏水性結合物之寡核苷酸的方法。用於製備疏水性結合物之策略可包括使用基於諸如苯酚或環己醇之6員環醇的胺基亞磷酸酯試劑。胺基亞磷酸酯可與核苷酸反應以將核苷酸連接至疏水性部分，且藉此產生疏水性結合物。可用於產生疏水性結合物的胺基亞磷酸酯試劑之一些實例提供如下： 、 或 。在一些實施例中，n為1-3。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，R為烷基。在一些實施例中，烷基含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳。在一些實施例中，烷基含有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個碳，或由前述碳數目中之任兩者定義的範圍。在一些實施例中，R包含含有4-18個碳之烷基或由其組成。胺基亞磷酸酯試劑中之任一者可與寡核苷酸之5'端反應以產生包含疏水性部分之寡核苷酸。在一些實施例中，胺基亞磷酸酯試劑與siRNA之有義股之5'端反應。有義股可接著與反義股雜交以形成雙螺旋體。雜交可藉由在給定溫度下在溶液中培育有義股及反義股來進行。溫度可逐漸降低。溫度可包含或包括包含用於有義股及反義股之退火溫度的溫度。溫度可低於或包括用於有義股及反義股之退火溫度的溫度。溫度可低於有義股及反義股之熔融溫度。
在一些實施例中，寡核苷酸包括帶負電基團。帶負電基團可輔助細胞或組織穿透。帶負電基團可連接在寡核苷酸之5'或3'端(例如，5'端)處。此可稱為端基。端基可為或包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸乙烯酯、膦酸甲酯、膦酸環丙酯或去氧基-C-丙二醯基。端基可包括額外5'磷酸酯，諸如額外5'磷酸酯。可使用端基之組合。
在一些實施例中，寡核苷酸包括磷酸酯模擬物。在一些實施例中，磷酸酯模擬物包含膦酸乙烯酯。在一些實施例中，膦酸乙烯酯包含反式-膦酸乙烯酯。在一些實施例中，膦酸乙烯酯包含順式-膦酸乙烯酯。下文展示包括膦酸乙烯酯的核苷酸之實例。 5'膦酸乙烯酯2' O甲基尿苷
在一些實施例中，膦酸乙烯酯增加寡核苷酸之穩定性。在一些實施例中，膦酸乙烯酯增加組織中寡核苷酸之積聚。在一些實施例中，膦酸乙烯酯保護寡核苷酸免受核酸外切酶或磷酸酶影響。在一些實施例中，膦酸乙烯酯改善寡核苷酸與siRNA處理機制之結合親和力。
在一些實施例中，寡核苷酸包括1個膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸包括2個膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸包括3個膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸包括4個膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股包含5'端處之膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股包含3'端處之膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股包含5'端處之膦酸乙烯酯。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股包含3'端處之膦酸乙烯酯。
寡核苷酸可包括嘌呤。嘌呤之實例包括腺嘌呤(A)或鳥嘌呤(G)，或其經修飾之型式。寡核苷酸可包括嘧啶。嘧啶之實例包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)，或其經修飾之型式。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，2'-O-甲基包括2' O-甲基。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。
在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，寡核苷酸之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且寡核苷酸之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，限制條件為在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘧啶；有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，限制條件為在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘧啶；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。
在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，限制條件為在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含2'氟基修飾之嘌呤；有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；位置5與11之間的1、2、3、4或5個嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，限制條件為在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘌呤；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，在一列中不存在三個2'氟基修飾之嘧啶。
在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤或2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸；有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸；有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤或2'氟基修飾之嘌呤；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。
在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶或2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，有義股之位置九包含未經修飾之去氧核糖核苷酸；有義股之位置5、7及8包含2'氟基修飾之核苷酸；有義股之位置10至21中之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之位置10至21中之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶或2'氟基修飾之嘧啶；反義股之奇數編號位置包含2'-O-甲基修飾之核苷酸；且反義股之偶數編號位置包含2'氟基修飾之核苷酸及未經修飾之去氧核糖核苷酸。
本文所描述之修飾可適用於遞送至細胞或組織，例如肝外遞送或靶向寡核苷酸組合物。本文所描述之修飾可適用於將寡核苷酸組合物靶向細胞或組織。 1. 經修飾之 siRNA
在一些實施例中，組合物包含抑制目標核酸之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股包含修飾模式1S：5'-NfsnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「」2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式2S：5'-NfsnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式3S：5'-NfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含修飾模式4S：5'-NfsnsNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式5S：5'- nnnnnnNfnNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式6S：5'- nnnnnnnNfNfNfNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式7S：5'- nnnnNfnnnNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式8S：5'- nnnnnnnNfNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式9S：5'- nnnnnnNfNfNfNfNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式10S：5'- nnnnNfnNfNfNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式11S：5'- nnnnnNfNfNfNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式12S：5'- nnnnnNfNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式13S：5'- nnnnNfNfNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式14S：5'- nnnnnnnnNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式15S：5'- nnnnnnNfNfNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式16S：5'- nnnnNfNfnnNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式17S：5'- nnnnNfnNfnNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式18S：5'- nnnnnNfnnNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式19S：5'- nnnnnNfNfnNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式20S：5'- nnnnnnNfnNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式21S：5'- nNfnNfnNfnNfNfnnnnnNfnNfNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式22S：5'- snnnnnNfNfNfNfnNfnnnnnnnnsnsn-3，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式23S：5'- snnnnnNfNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式24S：5'- snnnnNfNfNfNfNfnnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式25S：5'- snnnnnnnnNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式26S：5'- snnnnNfNfnnNfnNfnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式27S：5'-snNfnNfnNfnNfNfnnnnnNfnNfNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式28S：5'- NfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式29S：5'- nnNfnNfnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。在一些實施例中，有義股包含修飾模式30S：5'-nnnnnNfNfNfNfNfnnnnnnnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，「s」為硫代磷酸酯鍵聯，且N包含一或多個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標mRNA之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中反義股包含修飾模式1AS：5'-nsNfsnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式2AS：5'-nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式3AS：5'- nsnsnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式4AS：5'- nsNfsnnnNfnNfnnnnnNfnNfnnnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，反義股包含修飾模式5AS：5'-nsNfsnnnNfnNfnNfnNfnNfnNfnNfnsnsn-3'，其中「Nf」為2'氟基修飾之核苷，「n」為2' O-甲基修飾之核苷，且「s」為硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標核酸之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中有義股包含模式1S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式2S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式3S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式4S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式5S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式6S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式7S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式8S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式9S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式10S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式11S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式12S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式13S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式14S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式15S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式16S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式17S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式18S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式19S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式20S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式21S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式22S且反義股包含模式1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式23S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式24S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式25S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式26S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式27S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式28S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式29S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。在一些實施例中，有義股包含模式30S且反義股包含1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。
在一些實施例中，有義股包含模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30S且反義股包含模式1AS。在一些實施例中，有義股包含模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30S且反義股包含模式2AS。在一些實施例中，有義股包含模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30S且反義股包含圖案3AS。在一些實施例中，有義股包含模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30S且反義股包含圖案4AS。在一些實施例中，有義股包含模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30S且反義股包含圖案5AS。
在一些實施例中，有義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS或4AS。在一些實施例中，有義股或反義股包含修飾模式1AS、2AS、3AS、4AS或5S。在一些實施例中，反義股包含修飾模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S或29S。在一些實施例中，有義股或反義股包含修飾模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S或30AS。
在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。
在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。
在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，有義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且有義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。
在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。
在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，反義股之所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且反義股之所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，siRNA包含有義股、反義股及連接至有義股或反義股之末端的脂質部分；其中脂質部分包含苯基或環己烷基連接子，其中連接子連接至脂質且連接至有義股或反義股之末端。在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤。在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。在一些實施例中，siRNA包含有義股及反義股；其中反義股包含含有膦酸乙烯酯及2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中有義股包含含有疏水性部分之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端；其中以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；且其中以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物，或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤。
在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，該有義股可包括去氧核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基嘧啶修飾之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為去氧核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，有義股包括去氧核苷。去氧核苷可在有義股之核苷位置9處。在一些實施例中，有義股不包括去氧核苷。有義股之去氧核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，該有義股可包括去氧核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為去氧核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，反義股包括去氧核苷。去氧核苷可在反義股之核苷位置9處。在一些實施例中，反義股不包括去氧核苷。反義股之去氧核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，有義股可包括去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，有義股包括去氧核苷。去氧核苷可在有義股之核苷位置9處。在一些實施例中，有義股不包括去氧核苷。有義股之去氧核苷可以其他方式未經修飾。在一些實施例中，有義股包括2'-O-甲氧基乙基核苷。2'-O-甲氧基乙基核苷可在有義股之核苷位置4處。2'-O-甲氧基乙基核苷可包括2'-O-甲氧基乙基胸腺嘧啶核苷。在一些實施例中，有義股不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。有義股之2'-O-甲氧基乙基核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，有義股可包括去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於該反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，反義股包括去氧核苷。去氧核苷可在反義股之核苷位置9處。在一些實施例中，反義股不包括去氧核苷。反義股之去氧核苷可以其他方式未經修飾。在一些實施例中，反義股包括2'-O-甲氧基乙基核苷。2'-O-甲氧基乙基核苷可在有義股之核苷位置4處。2'-O-甲氧基乙基核苷可包括2'-O-甲氧基乙基胸腺嘧啶核苷。在一些實施例中，反義股不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。反義股之2'-O-甲氧基乙基核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，有義股可包括2'-O-甲氧基乙基核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於有義股中。在一些實施例中，有義股包括2'-O-甲氧基乙基核苷。2'-O-甲氧基乙基核苷可在有義股之核苷位置4處。2'-O-甲氧基乙基核苷可包括2'-O-甲氧基乙基胸腺嘧啶核苷。在一些實施例中，有義股不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。有義股之2'-O-甲氧基乙基核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；或所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為在前述任一者中，有義股可包括去氧核苷或2'-O-甲氧基乙基核苷。在一些實施例中，所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘧啶之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤包含2'-O-甲基修飾之嘌呤，且所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'氟基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基及2'-O-甲基修飾之嘌呤之混合物；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶包含2'-O-甲基修飾之嘧啶，且所有嘌呤包含2'氟基修飾之嘌呤；限制條件為2'-O-甲氧基乙基核苷可包括於反義股中。在一些實施例中，反義股包括2'-O-甲氧基乙基核苷。2'-O-甲氧基乙基核苷可在有義股之核苷位置4處。2'-O-甲氧基乙基核苷可包括2'-O-甲氧基乙基胸腺嘧啶核苷。在一些實施例中，反義股不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。反義股之2'-O-甲氧基乙基核苷可以其他方式未經修飾。
在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，限制條件為有義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，有義股包括2'去氧核苷。在一些實施例中，有義股不包括2'去氧核苷。一些實施例包括限制條件為有義股可包括2'-O-甲氧基乙基核苷(例如，在位置4處，自5'至3'計數)。一些實施例在有義股中包括2'-O-甲氧基乙基核苷。一些實施例在有義股中不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。
在一些實施例中，以下中之任一者對於有義股而言為真：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在有義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在有義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基。一些實施例包括限制條件為有義股可包括2'-O-甲氧基乙基核苷(例如，在位置4處，自5'至3'計數)。一些實施例在有義股中包括2'-O-甲氧基乙基核苷。一些實施例在有義股中不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。
在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷.在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，限制條件為反義股可包括2'去氧核苷。在一些實施例中，反義股包括2'去氧核苷。在一些實施例中，反義股不包括2'去氧核苷。一些實施例包括限制條件為反義股可包括2'-O-甲氧基乙基核苷(例如，在位置4處，自5'至3'計數)。一些實施例在反義股中包括2'-O-甲氧基乙基核苷。一些實施例在反義股中不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。
在一些實施例中，以下中之任一者對於反義股而言為真：所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在反義股中，所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾。在一些實施例中，在反義股中，所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基。一些實施例包括限制條件為反義股可包括2'-O-甲氧基乙基核苷(例如，在位置4處，自5'至3'計數)。一些實施例在反義股中包括2'-O-甲氧基乙基核苷。一些實施例在反義股中不包括2'-O-甲氧基乙基核苷。
在一些實施例中，反義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，反義股之3'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯，或反義股之3'端的第一核苷酸、第二核苷酸及第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，有義股之5'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯，或有義股之5'端的第一核苷酸、第二核苷酸及第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股不包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，在一些實施例中，有義股之5'端處的最後3個核苷酸之間不存在硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，有義股包含5'磷酸酯鍵。在一些實施例中，有義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。舉例而言，有義股之3'端的第一核苷酸與第二核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯，或有義股之3'端的第一核苷酸、第二核苷酸及第三核苷酸之間可存在硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，反義股包含含有2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端。5'端可包含由2個硫代磷酸酯鍵聯分開之3個核苷。在一些實施例中，反義股包含含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端。3'端可包含由2個硫代磷酸酯鍵聯分開之3個核苷。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標核酸之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中寡核苷酸包含疏水性部分。在一些實施例中，疏水性部分可連接在有義股之5'端處。在一些實施例中，疏水性部分可連接在有義股之3'端處。在一些實施例中，疏水性部分可連接在反義股之5'端處。在一些實施例中，疏水性部分可連接在反義股之3'端處。
在一些實施例中，組合物包含抑制目標核酸之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含含有有義股及反義股之siRNA，其中寡核苷酸包含一或多種膦酸乙烯酯。在一些實施例中，一或多種膦酸乙烯酯可連接在有義股之5'端處。在一些實施例中，一或多種膦酸乙烯酯可連接在有義股之3'端處。在一些實施例中，一或多種膦酸乙烯酯可連接在反義股之5'端處。在一些實施例中，一或多種膦酸乙烯酯可連接在反義股之3'端處。
在一些實施例中，有義股包含RNA或經修飾之RNA核苷酸或由其組成。在一些實施例中，有義股包含去氧核苷。去氧核苷可包括DNA核苷。在一些實施例中，去氧核苷包含2'去氧核苷或由其組成。去氧核苷可在有義股內之位置處(5'至3'，其中5'位置為1)。有義股內之位置可為或包括位置2、4、6、8、9、10、12、14、16或18，或該等位置之組合。有義股內之位置可為或包括位置2、4、6、8、10、12、14、16或18，或該等位置之組合。有義股內之位置可為或包括位置2、6、9、10、14或18，或該等位置之組合。有義股內之位置可為或包括位置2、6、10、14或18，或該等位置之組合。有義股內之位置可為或包括位置4、8、9、12或16，或該等位置之組合。有義股內之位置可為或包括位置4、8、12或16，或該等位置之組合。有義股內之位置可包括位置9。有義股內之位置可為位置9。有義股可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19個去氧核苷。在一些實施例中，有義股包括1個去氧核苷。有義股可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19個去氧核苷，或由前述數目個去氧核苷中之任兩者定義的去氧核苷範圍。有義股可包括所有偶數位置處之去氧基核苷。有義股可包括一些偶數位置處之去氧基核苷。有義股可包括每隔一個偶數位置處之去氧核苷。有義股可包括1個去氧核苷。有義股可包括至少1個去氧核苷。有義股可包括至少2個去氧核苷。有義股可包括至少3個去氧核苷。有義股可包括至少4個去氧核苷。有義股可包括至少5個去氧核苷。有義股可包括至少6個去氧核苷。有義股可包括至少7個去氧核苷。有義股可包括至少8個去氧核苷。有義股可包括至少9個去氧核苷。有義股可包括至少10個去氧核苷。有義股可包括不大於2個去氧核苷。有義股可包括不大於3個去氧核苷。有義股可包括不大於4個去氧核苷。有義股可包括不大於5個去氧核苷。有義股可包括不大於6個去氧核苷。有義股可包括不大於7個去氧核苷。有義股可包括不大於8個去氧核苷。有義股可包括不大於9個去氧核苷。有義股可包括不大於10個去氧核苷。
在一些實施例中，反義股包含RNA或經修飾之RNA核苷酸或由其組成。在一些實施例中，反義股包含去氧核苷。去氧核苷可包括DNA核苷。在一些實施例中，去氧核苷包含2'去氧核苷或由其組成。反義股可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19個去氧核苷，或由前述數目個去氧核苷中之任兩者定義的去氧核苷範圍。
在其中去氧核苷包括於有義股(例如，在自5'端計數的第9核苷酸處)中的一些實施例中，位置1-8處之核苷包括2'氟基及2'-O-甲基修飾之核苷之混合物。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘌呤包括2'氟基及2'-O-甲基修飾之核苷之混合物。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘧啶包括2'氟基及2'-O-甲基修飾之核苷之混合物。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之核苷均包括2'-O-甲基修飾之核苷。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘌呤均包括2'-O-甲基修飾之核苷。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘧啶均包括2'-O-甲基修飾之核苷。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘌呤包括2'氟基及2'-O-甲基修飾之核苷之混合物，且位置1-8處之嘧啶均包括2'-O-甲基修飾之核苷。在其中去氧核苷包括於有義股中的一些實施例中，位置1-8處之嘧啶包括2'氟基及2'-O-甲基修飾之核苷之混合物，且位置1-8處之嘌呤均包括2'-O-甲基修飾之核苷。
反義股可以交替模式開始，其中經偶數編號之核苷包括2'氟基修飾之核苷，且經奇數編號之核苷包括2'-O-甲基修飾之核苷。有義股可接著藉由用2'-O-甲基修飾置換一些2'氟基修飾而經最佳化。反義股可包括2'氟基修飾及2'-O-甲基修飾之混合物。 2. 經修飾之 ASO
在一些實施例中，組合物包含抑制目標核酸之表現的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含反義寡核苷酸(ASO)。在一些實施例中，ASO包含修飾模式1S、2S、3S、4S、1AS或2AS，或本文所描述之修飾之任何其他組合。在一些實施例中，ASO包含修飾模式1S、2S、3S、4S、5S、6S、7S、8S、9S、10S、11S、12S、13S、14S、15S、16S、17S、18S、19S、20S、21S、22S、23S、24S、25S、26S、27S、28S、29S、30S、1AS、2AS、3AS、4AS或5AS。 D.   調配物
在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。在一些實施例中，組合物為無菌的。在一些實施例中，組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含水。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含緩衝液。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含鹽水溶液。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含水、緩衝液或鹽水溶液。在一些實施例中，組合物包含脂質體。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑包含脂質體、脂質、奈米粒子、蛋白質、蛋白質-抗體複合物、肽、纖維素、奈米凝膠或其組合。
在一些實施例中，組合物經調配穿過血腦障壁。在一些實施例中，組合物經調配以用於中樞神經系統(CNS)遞送。在一些實施例中，組合物包括親油性化合物。親油性化合物可適用於穿過血腦障壁或用於CNS遞送。
在一些實施例中，組合物經調配以用於投與。投與可為全身性的。在一些實施例中，投與為靜脈內投與。在一些實施例中，投與係藉由注射進行。在一些實施例中，注射為皮下注射。在一些實施例中，注射為腹膜內注射。在一些實施例中，注射為肌肉內注射。在一些實施例中，注射為鞘內注射。投與可為向眼睛(例如，玻璃體內)投與。投與可為向類神經組織投與。投與可為向腦投與。投與可為腦室內投與。投與可為鞘內投與。投與可為脊髓或脊椎管投與。在一些實施例中，調配物允許諸如寡核苷酸之化合物遞送至眼睛細胞。在一些實施例中，調配物允許諸如寡核苷酸之化合物遞送至神經細胞。 E.   套組
在一些實施例中，本文描述套組。套組可包括寡核苷酸，諸如本文所描述之siRNA。寡核苷酸可結合於脂質部分。套組可包括本文所描述之脂質部分。寡核苷酸可包含核苷修飾或經修飾之核苷間鍵。寡核苷酸可包括本文所描述之任何修飾，諸如來自鹼基序列之修飾。套組可包括遞送試劑，諸如針。套組可包括使用說明書，諸如用於本文所描述之方法中的方法。 II. 方法及用途
在一些實施例中，本文揭示向個體投與本文所描述之組合物的方法。一些實施例係關於使用本文所描述之組合物，諸如向個體投與組合物。
一些實施例係關於一種治療有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在治療方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，投與治療個體之病症。在一些實施例中，組合物治療個體之病症。
在一些實施例中，治療包含預防、抑制或逆轉個體之病症。一些實施例係關於本文所描述之組合物在預防、抑制或逆轉病症之方法中的用途。一些實施例係關於一種預防、抑制或逆轉有需要之個體之病症的方法。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，投與預防、抑制或逆轉個體之病症。在一些實施例中，組合物預防、抑制或逆轉個體之病症。
一些實施例係關於一種預防有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在預防病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，投與預防個體之病症。在一些實施例中，組合物預防個體之病症。
一些實施例係關於一種抑制有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在抑制病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，投與抑制個體之病症。在一些實施例中，組合物抑制個體之病症。
一些實施例係關於一種逆轉有需要個體之病症的方法。一些實施例係關於本文所描述之組合物在逆轉病症之方法中的用途。一些實施例包括向患有病症之個體投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，投與逆轉個體之病症。在一些實施例中，組合物逆轉個體之病症。
在一些實施例中，投與為全身性的。在一些實施例中，投與為靜脈內投與。在一些實施例中，投與係藉由注射進行。在一些實施例中，注射為皮下注射。在一些實施例中，注射為腹膜內注射。在一些實施例中，注射為肌肉內注射。投與可為向眼睛(例如，玻璃體內)投與。投與可為向類神經組織投與。投與可為向腦投與。投與可為腦室內投與。在一些實施例中，注射為鞘內注射。投與可為鞘內投與。投與可為向脊髓或脊椎管投與。
在一些實施例中，本文揭示使siRNA靶向細胞或組織之方法。該方法可包括使siRNA (例如，siRNA之有義股)結合於本文所描述之脂質部分。該方法可包含將結合於脂質部分之siRNA遞送至組織或細胞。該方法可包含使組織或細胞與結合於脂質部分之siRNA接觸。
在一些實施例中，本文揭示減少細胞或組織中目標RNA或蛋白質之量的方法，其包含向細胞或組織投與或遞送本文所描述之組合物。組合物可包括具有反義股之siRNA，該反義股具有與RNA互補之序列。反義股可結合於RNA。
在一些實施例中，本文揭示製造siRNA組合物之方法。該方法可包括使siRNA結合於脂質部分。siRNA及脂質部分可包括本文所描述之任何siRNA或脂質部分。該方法可包括合成siRNA。該方法可包括合成脂質部分。 A.   病症
本文所描述之方法之一些實施例包括治療有需要個體之病症。在一些實施例中，病症為眼部病症。在一些實施例中，病症為脂肪組織相關之病症。在一些實施例中，病症為腎臟病症。在一些實施例中，病症為大腦病症。在一些實施例中，病症為血管病症。在一些實施例中，病症為肌肉病症。在一些實施例中，病症為肺部病症。 B.   個體
本文所描述之方法之一些實施例包括個體之治療。個體之非限制性實例包括脊椎動物、動物、哺乳動物、狗、貓、牛、嚙齒動物、小鼠、大鼠、靈長類動物、猴及人類。在一些實施例中，個體為脊椎動物。在一些實施例中，個體為動物。在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為狗。在一些實施例中，個體為貓。在一些實施例中，個體為牛。在一些實施例中，個體為小鼠。在一些實施例中，個體為大鼠。在一些實施例中，個體為靈長類動物。在一些實施例中，個體為猴。在一些實施例中，個體為動物、哺乳動物、狗、貓、牛、嚙齒動物、小鼠、大鼠、靈長類動物或猴。在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，個體為男性。在一些實施例中，個體為女性。在一些實施例中，個體為成人(例如，至少18歲)。 C.   基線量測
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得基線量測結果。舉例而言，在一些實施例中，基線量測結果係在治療個體之前獲自個體。
在一些實施例中，基線量測結果係直接獲自個體。在一些實施例中，基線量測結果係藉由觀測，例如藉由觀測個體或個體之組織獲得。在一些實施例中，基線量測結果係使用成像裝置非侵入性地獲得。
在一些實施例中，基線量測結果係在來自個體之樣本中獲得。在一些實施例中，基線量測結果係在一或多個組織學組織切片中獲得。在一些實施例中，基線量測結果係藉由對獲自個體之樣本執行檢定，諸如免疫檢定、比色檢定或螢光檢定來獲得。在一些實施例中，基線量測結果係藉由免疫檢定、比色檢定、螢光檢定或層析(例如，HPLC)檢定來獲得。在一些實施例中，基線量測結果係藉由PCR獲得。
在一些實施例中，基線量測為基線目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測結果包含基線目標蛋白含量。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為每樣本重量之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為每樣本體積之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白含量指示為樣本內每總蛋白質之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，基線目標蛋白量測為基線循環/組織目標蛋白量測。在一些實施例中，基線目標蛋白量測係藉由檢定，諸如免疫檢定、比色檢定或螢光檢定來獲得。
在一些實施例中，基線量測為基線目標mRNA量測。在一些實施例中，基線目標mRNA量測結果包含基線目標mRNA含量。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為每樣本重量之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為每樣本體積之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為樣本內每總mRNA之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，基線目標mRNA含量指示為樣本內每總核酸之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，相對於樣本內之另一mRNA含量，諸如管家基因之mRNA含量指示基線目標mRNA含量。在一些實施例中，基線目標mRNA量測為基線組織目標mRNA量測。在一些實施例中，基線目標mRNA量測係藉由檢定，諸如聚合酶鏈式反應(PCR)檢定來獲得。在一些實施例中，PCR包含定量PCR (qPCR)。在一些實施例中，PCR包含目標mRNA之反轉錄。
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得樣本。在一些實施例中，基線量測結果係在自個體獲得之樣本中獲得。在一些實施例中，樣本係在用本文所描述之組合物投與或治療個體之前自個體獲得。在一些實施例中，基線量測結果係在向個體投與組合物之前在自個體獲得之樣本中獲得。在一些實施例中，樣本係自禁食狀態下之個體獲得。在一些實施例中，樣本係自隔夜禁食時段之後的個體獲得。在一些實施例中，樣本係自進食狀態下之個體獲得。
在一些實施例中，樣本包含體液。在一些實施例中，樣本為體液樣本。在一些實施例中，樣本為血液、血漿或血清樣本。在一些實施例中，樣本包含血液。在一些實施例中，樣本為血液樣本。在一些實施例中，樣本為全血樣本。在一些實施例中，血液經分餾或離心。在一些實施例中，樣本包含血漿。在一些實施例中，樣本為血漿樣本。血液樣本可為血漿樣本。在一些實施例中，樣本包含血清。在一些實施例中，樣本為血清樣本。血液樣本可為血清樣本。在一些實施例中，體液包含腦脊髓液(CSF)。舉例而言，體液可藉由脊髓抽液獲得。在一些實施例中，體液包含脊髓液。在一些實施例中，體液包含大腦體液。
在一些實施例中，樣本包含組織。在一些實施例中，樣本為組織樣本。在一些實施例中，組織包含眼睛、腎臟、肌肉、脂肪組織、腦、肺或血管組織。舉例而言，基線目標mRNA量測或基線目標蛋白量測可在自患者獲得之腎臟、脂肪組織、腦、肺或血管樣本中獲得。在一些實施例中，組織包含腎臟組織。腎臟組織可包括腎髓質細胞或腎近端小管細胞。在一些實施例中，組織包含脂肪組織。在一些實施例中，脂肪組織包含白色脂肪組織。脂肪組織可包括脂肪細胞。在一些實施例中，組織包含肝臟組織。肝臟可包括肝細胞。在一些實施例中，組織為非肝臟組織。在一些實施例中，組織包含眼睛組織。在一些實施例中，眼睛組織包含視網膜組織。在一些實施例中，組織包含腦組織。腦組織可包括神經元或膠細胞。腦組織可包含小腦。腦組織可包含額葉皮質。腦組織可包含顳葉皮質。腦組織可包含來自腦之右半球的組織(例如，右額葉皮質或右顳葉皮質)。腦組織可包含來自腦之左半球的組織(例如，左額葉皮質或左顳葉皮質)。腦組織可包含海馬體組織。在一些實施例中，組織包含神經組織。在一些實施例中，組織包含神經。在一些實施例中，組織包含脊髓組織。在一些實施例中，組織包含脊髓或脊椎管之組織。在一些實施例中，組織包含肺組織。在一些實施例中，組織包含血管組織。血管組織可包括血管內皮細胞。
在一些實施例中，樣本包括細胞。在一些實施例中，樣本包含細胞。在一些實施例中，細胞包含眼睛細胞、腎細胞、肌肉細胞、脂肪組織細胞、腦細胞或血管系統細胞。在一些實施例中，細胞為腎細胞。在一些實施例中，腎細胞為腎髓質細胞。在一些實施例中，腎細胞為腎近端小管細胞。在一些實施例中，細胞為脂肪組織細胞。在一些實施例中，脂肪組織細胞為脂肪細胞。在一些實施例中，細胞為肝臟細胞。在一些實施例中，肝臟細胞為肝細胞。在一些實施例中，細胞為非肝臟細胞或不為肝細胞。在一些實施例中，細胞為眼睛細胞。在一些實施例中，眼睛細胞為視網膜細胞。在一些實施例中，眼睛細胞為視桿細胞。在一些實施例中，眼睛細胞為視錐細胞。在一些實施例中，細胞為腦細胞。在一些實施例中，腦細胞來自腦組織，諸如小腦、皮質、海馬體組織。在一些實施例中，腦細胞為神經元。在一些實施例中，腦細胞為膠細胞。在一些實施例中，細胞為脊髓細胞。在一些實施例中，細胞為脊髓細胞。在一些實施例中，細胞為肺細胞。在一些實施例中，細胞為血管系統細胞。在一些實施例中，血管系統細胞為內皮細胞。 D.   作用
在一些實施例中，相對於基線量測結果，組合物或組合物之投與影響量測結果，諸如目標蛋白量測結果或目標mRNA量測結果。
本文所描述之方法之一些實施例包括自個體獲得量測結果。舉例而言，量測結果可在治療個體之後自個體獲得。在一些實施例中，量測結果係在向個體投與組合物之後在自個體獲得的第二樣本(諸如本文所描述之體液或組織樣本)中獲得。在一些實施例中，量測結果為已經治療之病症的適應症。
在一些實施例中，量測結果係直接獲自個體。在一些實施例中，量測結果係使用成像裝置非侵入性地獲得。在一些實施例中，量測結果係在來自個體之第二樣本中獲得。在一些實施例中，量測結果係在一或多個組織學組織切片中獲得。在一些實施例中，量測結果係藉由對自個體獲得之第二樣本執行檢定來獲得。在一些實施例中，量測結果係藉由檢定，諸如本文所描述之檢定來獲得。在一些實施例中，檢定為免疫檢定、比色檢定、螢光檢定、層析(例如，HPLC)檢定或PCR檢定。在一些實施例中，量測結果係藉由檢定，諸如免疫檢定、比色檢定、螢光檢定或層析(例如，HPLC)檢定來獲得。在一些實施例中，量測結果係藉由PCR來獲得。在一些實施例中，量測結果係藉由組織學來獲得。在一些實施例中，量測結果係藉由觀測來獲得。在一些實施例中，諸如在第3樣本、第4樣本或第五樣本中進行額外量測。
在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1小時內、2小時內、3小時內、4小時內、5小時內、6小時內、12小時內、18小時內或24小時內獲得。在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1天內、2天內、3天內、4天內、5天內、6天內或7天內獲得。在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1週內、2週內、3週內、1個月內、2個月內、3個月內、6個月內、1年內、2年內、3年內、4年內或5年內獲得。在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1小時之後、2小時之後、3小時之後、4小時之後、5小時之後、6小時之後、12小時之後、18小時之後或24小時之後獲得。在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1天之後、2天之後、3天之後、4天之後、5天之後、6天之後或7天之後獲得。在一些實施例中，量測結果係在投與組合物之後的1週之後、2週之後、3週之後、1個月之後、2個月之後、3個月之後、6個月之後、1年之後、2年之後、3年之後、4年或5年之後獲得。
在一些實施例中，相對於基線量測結果，組合物減少量測結果。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測自個體獲得之第二樣本中的減少。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後直接量測個體中的減少。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果減少不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，量測結果減少2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%，或由兩個前述百分比中之任一者定義的範圍。
在一些實施例中，相對於基線量測結果，組合物增加量測結果。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測自個體獲得之第二樣本中的增加。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後直接量測個體中的增加。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加約100%或更多、增加約250%或更多、增加約500%或更多、增加約750%或更多或增加約1000%或更多。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，相對於基線量測結果，量測結果增加不超過約100%、增加不超過約250%、增加不超過約500%、增加不超過約750%或增加不超過約1000%。在一些實施例中，量測結果增加2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、250%、500%、750%或1000%，或由兩個前述百分比中之任一者定義的範圍。
在一些實施例中，量測為目標蛋白量測。在一些實施例中，目標蛋白量測包含目標蛋白含量。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為每樣本重量之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為每樣本體積之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白含量指示為樣本內每總蛋白質之目標蛋白之質量或百分比。在一些實施例中，目標蛋白量測為循環/組織目標蛋白量測。在一些實施例中，目標蛋白量測係藉由檢定，諸如免疫檢定、比色檢定或螢光檢定獲得。
在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物減少目標蛋白量測。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物減少循環目標蛋白含量。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，組合物減少組織目標蛋白含量。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測自個體獲得之第二樣本中減少的目標蛋白含量。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測結果減少約2.5%或更多、約5%或更多，或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測結果減少約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測減少約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多，或約100%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測減少不超過約2.5%、不超過約5%，或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測減少不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線目標蛋白量測，目標蛋白量測減少不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，目標蛋白量測減少2.5%、5%、7.5%、19%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%，或由任何兩個前述百分比定義的範圍。
在一些實施例中，量測為目標mRNA量測。在一些實施例中，目標mRNA量測包含目標mRNA含量。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為每樣本重量之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為每樣本體積之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為樣本內每總mRNA之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，目標mRNA含量指示為樣本內每總核酸之目標mRNA之量或百分比。在一些實施例中，相對於樣本內之另一mRNA含量，諸如管家基因之mRNA含量，指示目標mRNA含量。在一些實施例中，目標mRNA量測為循環/組織目標mRNA量測。在一些實施例中，目標mRNA量測係藉由檢定，諸如PCR檢定獲得。在一些實施例中，PCR包含qPCR。在一些實施例中，PCR包含目標mRNA之反轉錄。
在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，組合物減少目標mRNA量測結果。在一些實施例中，目標mRNA量測結果係在向個體投與組合物之後在自個體獲得之第二樣本中獲得。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA含量，組合物減少目標mRNA含量。在一些實施例中，在向個體投與組合物之後量測自個體獲得之第二樣本中的減少的目標mRNA含量。在一些實施例中，第二樣本為肝臟樣本。在一些實施例中，第二樣本為脂肪組織樣本。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少約2.5%或更多、約5%或更多或約7.5%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少約10%或更多。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少約20%或更多、約30%或更多、約40%或更多、約50%或更多、約60%或更多、約70%或更多、約80%或更多、約90%或更多或約100%。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少不超過約2.5%、不超過約5%或不超過約7.5%。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少不超過約10%。在一些實施例中，相對於基線目標mRNA量測結果，目標mRNA量測結果減少不超過約20%、不超過約30%、不超過約40%、不超過約50%、不超過約60%、不超過約70%、不超過約80%、不超過約90%或不超過約100%。在一些實施例中，目標mRNA量測結果減少2.5%、5%、7.5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%，或由兩個前述百分比中之任一者定義的範圍。 III. 定義
除非另有定義，否則本文所使用之所有技術術語、標記法及其他技術及科學術語意欲具有與一般熟習所主張標的物所屬技術者通常所理解相同的含義。在一些情況下，為了清楚及/或便於參考，本文定義具有通常所理解之含義的術語，且本文中包括此類定義不應必然解釋為表示與此項技術中一般理解之內容存在實質性差異。
在本申請案通篇中，各種實施例可以範圍格式呈現。應理解，範圍格式中之描述僅為方便及簡潔起見，且不應視為對本發明之範疇的不靈活限制。因此，範圍之描述應被視為已具體揭示所有可能子範圍以及該範圍內之個別數值。舉例而言，對諸如1至6之範圍的描述應視為已特定揭示諸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子範圍，以及在彼範圍內之個別數值，例如1、2、3、4、5及6。不論範圍之廣度如何，此均適用。
除非上下文另外明確規定，否則如說明書及申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個參考物。舉例而言，術語「一個樣本」包括複數個樣本，包括其混合物。
術語「測定」、「量測」、「評估」、「評定」、「檢定」及「分析」通常可在本文中互換使用以指量測之形式。該等術語包括測定要素是否存在(例如，偵測)。此等術語可包括定量、定性或定量及定性測定。評定可為相對或絕對的。「偵測…之存在」可視上下文而定，包括除測定某物是否存在之外，測定其存在之量。
術語「個體」及「患者」可在本文中互換使用。「個體」可為含有所表現遺傳物質之生物性實體。生物性實體可為植物、動物或微生物，包括例如細菌、病毒、真菌及原蟲。個體可為哺乳動物。哺乳動物可為人類。個體可經診斷或疑似處於疾病之高風險下。在一些情況下，個體未必經診斷或疑似處於疾病之高風險下。
如本文所使用，術語「約」某數字係指該數字加或減該數字之10%。術語「約」某範圍係指該範圍減去其最低值之10%及加上其最大值之10%。
如本文所使用，術語「治療(treatment/treating)」參考醫藥方案或用於在接受者中獲得有益或所要結果之其他干預方案來使用。有益或所需結果包括但不限於治療益處及/或預防益處。治療益處可指所治療之症狀或基礎病症的根除或減輕。另外，可藉由根除或減輕與基礎病症相關之生理學症狀中的一或多者以使得在個體中觀測到改善來達成治療益處，儘管彼個體可能仍罹患基礎病症。防治作用包括延緩、預防或消除疾病或病狀之出現；延緩或消除疾病或病狀之症狀的發作；減緩、阻止或逆轉疾病或病狀之進展；或其任何組合。對於預防益處，有出現特定疾病風險之個體或報導疾病之生理學症狀中之一或多者的個體可進行治療，即使可能尚未診斷出此疾病。
「治療(Treatment/treating)」可包括就疾病、病症或醫學病狀而言獲得有益或所需結果(包括但不限於治療益處及/或預防益處)的途徑。治療益處可包括例如根除或緩解所治療之基礎病症。另外，治療益處可包括例如根除或緩解與基礎病症相關之生理學症狀中的一或多者從而在個體中觀測到改善，儘管該個體可能仍罹患基礎病症。在某些實施例中，就預防益處而言，將組合物投與處於產生特定疾病之風險中的個體，或投與報導疾病之一或多種生理學症狀的個體，即使可能尚未診斷出此疾病。經由投與本文所描述之化合物治療不需要涉及醫療專業人士。
一些實施例係指核酸序列資訊。經考慮，在一些實施例中，胸腺嘧啶(T)可與尿嘧啶(U)互換，或反之亦然。舉例而言，序列表中之一些序列可敍述T，但在一些實施例中，此等可經U置換。在具有包括尿嘧啶之核酸序列的一些寡核苷酸中，尿嘧啶可經胸腺嘧啶置換。類似地，在具有包括胸腺嘧啶之核酸序列的一些寡核苷酸中，胸腺嘧啶可經尿嘧啶置換。在一些實施例中，諸如siRNA之寡核苷酸包含RNA或由其組成。在一些實施例中，寡核苷酸可包括DNA。舉例而言，寡核苷酸可包括2'去氧核糖核苷酸。ASO可包含DNA或由其組成。在序列表與本說明書中之揭示內容矛盾之任何程度上，本說明書優先進行。
一些態樣包括具有核苷酸修飾或經修飾之核苷間鍵的序列。一般而言且除非另外指定，否則Nf (例如，Af、Cf、Gf、Tf或Uf)係指2'氟基修飾之核苷，dN (例如，dA、dC、dG、dT或dU)係指2'去氧核苷，n (例如，a、c、g、t或u)係指2'  O-甲基修飾之核苷，且「s」係指硫代磷酸酯鍵聯。
嘧啶可包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)。嘧啶可包括C或U。嘧啶可包括C或T。對嘧啶之提及可包括包含嘧啶之核苷或核苷酸。嘌呤可包括鳥嘌呤(G)或腺嘌呤(A)。對嘌呤之提及可包括包含嘌呤之核苷或核苷酸。
本文中所使用之章節標題係僅出於組織目的且不應理解為限制所描述之標的物。
術語「C x-y」或「C x-C y」當與諸如烷基、烯基或炔基之化學部分結合使用時意謂包括鏈中含有x至y個碳的基團。舉例而言，術語「C 1-6烷基」係指含有1至6個碳之經取代或未經取代之飽和烴基，包括直鏈烷基及分支鏈烷基。
術語「C x-y烯基」及「C x-y炔基」係指經取代或未經取代之不飽和脂族基，其長度及可能之取代與上述烷基類似，但分別含有至少一個雙鍵或參鍵。
如本文所使用之術語「碳環」係指飽和、不飽和或芳族環，其中環之各原子為碳。碳環包括3員至10員單環、5員至12員雙環、5員至12員螺雙環及5員至12員橋聯環。雙環碳環之各環可選自飽和、不飽和及芳族環。在一例示性實施例中，芳族環(例如，苯基)可稠合至飽和或不飽和環，例如環己烷、環戊烷或環己烯。在價數准許之情況下，雙環碳環包括飽和雙環、不飽和雙環及芳族雙環之任何組合。雙環碳環進一步包括螺雙環，諸如螺戊烷。雙環碳環包括環大小之任何組合，諸如3-3螺環系統、4-4螺環系統、4-5稠環系統、5-5稠環系統、5-6稠環系統、6-6稠環系統、5-7稠環系統、6-7稠環系統、5-8稠環系統及6-8稠環系統。例示性碳環包括環戊基、環己基、環己烯基、金剛烷基(adamantyl)、苯基、茚烷基(indanyl)、萘基及雙環[1.1.1]戊基。
術語「芳基」係指芳族單環或芳族多環烴環系統。芳族單環或芳族多環烴環系統僅含有五至十八個碳原子的氫及碳，其中環系統中之環中之至少一者為芳族，亦即根據休克爾理論(Hückel theory)，其含有環狀、非定域(4n+2) π電子系統。衍生芳基之環系統包括但不限於諸如苯、茀、茚烷、茚、四氫萘(tetralin)及萘之基團。
術語「環烷基」係指其中環之各原子為碳的飽和環。環烷基可包括單環及多環，諸如3員至10員單環、5員至12員雙環、5員至12員螺雙環及5員至12員橋聯環。在某些實施例中，環烷基包含三至十個碳原子。在其他實施例中，環烷基包含五至七個碳原子。環烷基可藉由單鍵連接至分子之其餘部分。單環環烷基之實例包括例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。多環環烷基包括例如金剛烷基、螺戊烷、降冰片烷基(norbornyl) (亦即，雙環[2.2.1]庚烷基)、十氫萘基、7,7二甲基雙環[2.2.1]庚烷基、雙環[1.1.1]戊基及類似者。
術語「環烯基」係指其中環之各原子為碳且兩個環碳之間至少一個雙鍵的飽和環。環烯基可包括單環及多環，諸如3員至10員單環、6員至12員雙環及5員至12員橋聯環。在其他實施例中，環烯基包含五至七個碳原子。環烯基可藉由單鍵連接至分子之其餘部分。單環環烯基之實例包括例如環戊烯基、環己烯基、環庚烯基及環辛烯基。
術語「鹵基」或替代地「鹵素」或「鹵化物」意謂氟、氯、溴或碘。在一些實施例中，鹵基為氟、氯或溴。
術語「鹵烷基」係指如上文所定義之烷基，其經一或多個鹵基，例如三氟甲基、二氯甲基、溴甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氯甲基-2-氟乙基及類似者取代。在一些實施例中，鹵烷基之烷基部分視情況如本文所描述進一步經取代。
如本文所使用之術語「雜環」係指包含一或多個雜原子之飽和、不飽和或芳族環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環包括3員至10員單環、6員至12員雙環、5員至12員螺雙環及5員至12員橋聯環。在價數允許之情況下，雙環雜環包括飽和雙環、不飽和雙環及芳族雙環之任何組合。在一例示性實施例中，芳族環(例如，吡啶基)可稠合至飽和或不飽和環，例如環己烷、環戊烷、𠰌啉、哌啶或環己烯。雙環雜環包括環大小之任何組合，諸如4-5稠環系統、5-5稠環系統、5-6稠環系統、6-6稠環系統、5-7稠環系統、6-7稠環系統、5-8稠環系統及6-8稠環系統。雙環雜環進一步包括螺雙環，例如5員至12員螺雙環，諸如2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷。
術語「雜芳基」係指衍生自5員至18員芳族環基團之基團，其包含二至十七個碳原子及一至六個選自氮、氧及硫之雜原子。如本文所使用，雜芳基為單環、雙環、三環或四環系統，其中環系統中之環中之至少一者為芳族，亦即根據休克爾理論，其含有環狀、非定域(4n+2) π電子系統。雜芳基包括稠合或橋聯環系統。雜芳基中之雜原子視情況經氧化。一或多個氮原子(若存在)其視情況經四級銨化。雜芳基經由環之任何原子連接至分子之其餘部分。雜芳基之實例包括但不限於氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并二氧呃基、苯并呋喃基、苯并㗁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[ b][1,4]二㗁呯基、苯并[b][1,4]㗁𠯤基、1,4-苯并二㗁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并二氧呃基、苯并二氧雜環己烯基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(benzothienyl) (苯并噻吩基(benzothiophenyl))、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、㖕啉基、環戊并[d]嘧啶基、6,7-二氫-5H-環戊并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氫苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氫苯并[h]㖕啉基、6,7-二氫-5H-苯并[6,7]環庚[1,2-c]嗒𠯤基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]嗒𠯤基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛并[d]吡啶基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基(isoquinolyl)、吲基、異㗁唑基、5,8-亞甲基-5,6,7,8-四氫喹唑啉基、㖠啶基、1,6-㖠啶酮基、㗁二唑基、2-側氧基氮呯基、㗁唑基、氧基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氫苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1 H-吡咯基、啡𠯤基、啡噻𠯤基、啡㗁𠯤基、呔𠯤基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、喹唑啉基、喹㗁啉基、喹啉基、異喹啉基(isoquinolinyl)、四氫喹啉基、5,6,7,8-四氫喹唑啉基、5,6,7,8-四氫苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氫-5H-環庚[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氫吡啶并[4,5-c]嗒𠯤基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三𠯤基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基及噻吩基(thiophenyl) (亦即，噻吩基(thienyl))。
術語「雜環烷基」係指具有碳原子及至少一個雜原子之飽和環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環烷基可包括單環及多環，諸如3員至10員單環、6員至12員雙環、5員至12員螺雙環及5員至12員橋聯環。雜環烷基中之雜原子視情況經氧化。一或多個氮原子(若存在)其視情況經四級銨化。雜環烷基在價態允許下經由雜環烷基之任何原子(諸如雜環烷基之任何碳或氮原子)連接至分子之其餘部分。雜環烷基之實例包括但不限於二氧雜環戊烷基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啶基、異㗁唑啶基、𠰌啉基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、2-側氧基哌𠯤基、2-側氧基哌啶基、2-側氧基吡咯啶基、㗁唑啶基、哌啶基、哌𠯤基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、吡唑啶基、 啶基、噻唑啶基、四氫呋喃基、三噻烷基、四氫哌喃基、硫代𠰌啉基、噻𠰌啉基、1-側氧基-硫代𠰌啉基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷及1,1-二側氧基-硫代𠰌啉基。
術語「雜環烯基」係指具有碳原子及至少一個雜原子且兩個環碳之間存在至少一個雙鍵的不飽和環。雜環烯基不包括雜芳基環。例示性雜原子包括N、O、Si、P、B及S原子。雜環烯基可包括單環及多環，諸如3員至10員單環、6員至12員雙環及5員至12員橋聯環。在其他實施例中，雜環烯基包含五至七個環原子。雜環烯基可藉由單鍵連接至分子之其餘部分。單環環烯基之實例包括例如吡咯啉(二氫吡咯)、吡唑啉(二氫吡唑)、咪唑啉(二氫咪唑)、三唑啉(二氫三唑)、二氫呋喃、二氫噻吩、㗁唑啉(二氫㗁唑)、異㗁唑啉(二氫異㗁唑)、噻唑啉(二氫噻唑)、異噻唑啉(二氫異噻唑)、㗁二唑啉(二氫㗁二唑)、噻二唑啉(二氫噻二唑)、二氫吡啶、四氫吡啶、二氫嗒𠯤、四氫噠𠯤、二氫嘧啶、四氫嘧啶、二氫吡𠯤、四氫吡𠯤、哌喃、二氫哌喃、硫代哌喃、二氫噻喃、戴奧辛(dioxine)、二氫戴奧辛、㗁𠯤、二氫㗁𠯤、噻𠯤及二氫噻𠯤。
術語「經取代」係指在化合物之一或多個碳或可取代的雜原子(例如，NH或NH 2)上具有置換氫之取代基的部分。應理解，「取代」或「經取代」包括暗示限制條件：此類取代與經取代原子及取代基之准許價數一致，且取代產生穩定化合物，亦即，不自發進行諸如藉由重排、環化、消除等之轉化的化合物。在某些實施例中，經取代係指具有替換同一碳原子上之兩個氫原子之取代基的部分，諸如用側氧基、亞胺基或硫酮基取代單個碳上之兩個氫原子。如本文所使用，涵蓋術語「經取代(substituted)」以包括有機化合物之所有可容許之取代基。在一廣泛態樣中，准許的取代基包括有機化合物之非環狀及環狀、分支及未分支、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。對於合適有機化合物，容許的取代基可為一或多個及相同或不同。
在一些實施例中，取代基可包括本文所描述之任何取代基，例如：鹵素、羥基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、肼基(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)；及烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環烷基、環烷基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基及雜芳基烷基，其中之任一者可視情況經以下取代：烷基、烯基、炔基、鹵素、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、醯肼(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)；其中各R a獨立地選自：氫、烷基、環烷基、環烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜芳基或雜芳基烷基，其中各R a在價數允許時可視情況經以下取代：烷基、烯基、炔基、鹵素、鹵烷基、鹵烯基、鹵炔基、側氧基(=O)、硫酮基(=S)、氰基(-CN)、硝基(-NO 2)、亞胺基(=N-H)、肟基(=N-OH)、醯肼(=N-NH 2)、-R b-OR a、-R b-OC(O)-R a、-R b-OC(O)-OR a、-R b-OC(O)-N(R a) 2、-R b-N(R a) 2、-R b-C(O)R a、-R b-C(O)OR a、-R b-C(O)N(R a) 2、-R b-O-R c-C(O)N(R a) 2、-R b-N(R a)C(O)OR a、-R b-N(R a)C(O)R a、-R b-N(R a)S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tR a(其中t為1或2)、-R b-S(O) tOR a(其中t為1或2)及-R b-S(O) tN(R a) 2(其中t為1或2)；且其中各R b獨立地選自：直接鍵或直鏈或分支鏈伸烷基、伸烯基或伸炔基鏈，且各R c為直鏈或分支鏈伸烷基、伸烯基或伸炔基鏈。
與氧原子之雙鍵(諸如側氧基)在本文中表示為「=O」及「(O)」兩者。與氮原子之雙鍵表示為「=NR」及「(NR)」兩者。與硫原子之雙鍵表示為「=S」及「(S)」兩者。
如本文所使用之片語「非經腸投與(parenteral administration/administered parenterally)」意謂除經腸及局部投與以外的投與模式，通常為注射，且包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊柱內及胸骨內注射及輸注。
本文中所採用之片語「醫藥學上可接受」係指在合理醫療判斷之範疇內適合用於與人類及動物之組織接觸且無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比率相稱之彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。
如本文中所使用之片語「醫藥學上可接受之賦形劑」或「醫藥學上可接受之載劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。各載劑(carrier)在與調配物之其他成分相容且對患者無害的意義上必須為「可接受的(acceptable)」。可充當醫藥學上可接受之載劑的材料之一些實例包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原質水；(17)等張鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩衝溶液；及(21)醫藥調配物中採用之其他無毒相容性物質。
術語「鹽」或「醫藥學上可接受之鹽」係指衍生自此項技術中熟知的多種有機及無機相對離子之鹽。醫藥學上可接受之酸加成鹽可由無機酸及有機酸形成。可衍生鹽的無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸以及類似無機酸。可自其衍生鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似酸。醫藥學上可接受之鹼加成鹽可用無機鹼及有機鹼形成。可衍生鹽之無機鹼包括例如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁及其類似物。可衍生鹽之有機鹼包括例如一級胺、二級胺及三級胺、經取代之胺(包括天然存在的經取代之胺)、環胺、鹼性離子交換樹脂及其類似有機鹼，特定言之，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺及乙醇胺。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹼加成鹽係選自銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。 VI. 實例實例1：siRNA雙螺旋體之玻璃體內注射：
對於小鼠(4-7週齡ICR，Envigo)中之玻璃體內注射，使用具有玻璃微量注射器(10-μL體積；Hamilton Company)之33號針。使眼睛突出，且將針插入穿過赤道鞏膜並以大約45度之角度插入至玻璃體腔室中，注意避免接觸晶狀體之後部部分或視網膜。將1 μL磷酸鹽緩衝生理食鹽水媒劑中之5 μg siRNA雙螺旋體注射至玻璃體中。注射之siRNA雙螺旋體描繪表2中。 表 2 ： siRNA 雙螺旋體
實體編號 雙螺旋體 SEQ ID NO: SEQ ID NO:   
目標 有義股 反義股
ETD01206 mANGPTL7 1 [ETL3]CfsasAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 24 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01207 mANGPTL7 2 [ETL3]CfsaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 25 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01208 mANGPTL7 3 [ETL3]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 26 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01540 mPLIN1 4 [ETL3]CfsaAfcAfcUfcUfuUfcUfcGfaCfaAfsusu 27 usUfsgUfcGfaGfaAfaGfaGfuGfuUfgsusu
ETD01588 mANGPTL7 5 [ETL3]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 28 5VPusAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01589 mANGPTL7 6 [ETL3]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 29 usAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01624 mPLIN1 7 [ETL3]CfsaAfcAfcUfcUfuUfcUfcGfaCfaAfsusu 30 5VpusUfsgUfcGfaGfaAfaGfaGfuGfuUfgsusu
ETD01751 mPLIN1 8 [ETL3]CfaAfcAfcUfcUfuUfcUfcGfaCfaAfsusu 31 5VpusUfsgUfcGfaGfaAfaGfaGfuGfuUfgsusu
ETD01716 mANGPTL7 9 [ETL3]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuAfsusu 32 5VPusAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01736 mANGPTL7 10 [ETL13]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 33 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01778 mANGPTL7 11 [ETL13]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuAfsusu 34 5VPusAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01779 mANGPTL7 12 [ETL15]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuAfsusu 35 5VPusAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01786 mANGPTL7 13 [ETL13]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuAfsusu 36 usAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01787 mANGPTL7 14 [ETL16]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuAfsusu 37 5VPusAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01313 mANGPTL7 15 [ETL7]CfsasAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 38 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01503 mANGPTL7 16 [ETL8]CfsasAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 39 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01504 mANGPTL7 17 [ETL9]CfsasAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 40 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01505 mANGPTL7 18 [ETL10]CfsasAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 41 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
在注射後第14天將小鼠處死。收集來自各動物之兩隻眼睛且沿赤道剝離，且將前半球及後半球置放於RNAlater中。自均質化組織提取總RNA且使用第一股III cDNA合成套組反轉錄為cDNA。藉由即時TaqMan PCR使用經螢光標記之TaqMan探針/所選擇基因之引子組(ANGPTL7、MYOC、COL1A1、COL5A1、VCAN、FN1及PPIA)進行標準化cDNA定量。在20 μL等分試樣中使用在ABI Prism 7500快速即時PCR系統序列偵測系統上運行之TaqMan Universal PCR Master Mix No AmpErase UNG進行反應且藉由7500系統軟體分析。藉由式2−ΔΔCT計算經處理樣本與未經處理樣本之間的相對定量(RQ)值，其中CT為臨限值處之循環(自動量測)，ΔCT為經檢定基因之CT減去內源性對照(PPIA)之CT，且ΔΔCT為經處理樣本中之標準化經檢定基因之ΔCT減去未經處理者(校準劑)中之相同基因之ΔCT。
結果描繪於表3中。ETD1208比ETD1207更有效，ETD1207比EDT1206更有效。此顯示，有義股之5'端處的較少(或無)硫代磷酸酯比連接疏水性基團之末端處的2個硫代磷酸酯更有效。
ETD1588比ETD1589更具活性，此意謂一些序列在反義股上具有5'膦酸乙烯酯之情況下比在反義股上不具有5'膦酸乙烯酯之情況下展示更大活性。
ETD1716-ETD1787系列實現具有12-25個碳之不同疏水性基團。全部結合於有義股之5'端處的硫代磷酸酯。 表 3 ： mRNA 表現量
siRNA 相對於無處理對照動物之平均mRNA
ETD01206 0.26
ETD01207 0.20
ETD01208 0.14
ETD01588 0.43
ETD01589 0.89
     
ETD01716 0.44
ETD01736 0.09
ETD01778 0.34
ETD01779 0.40
ETD01786 0.29
ETD01787 0.23
實例2：使用mRNA及siRNA定量之玻璃體內注射
如上用1 μL中之20 μg siRNA進行玻璃體內注射。注射後14天，收集眼睛且如先前實例中所展示定量mRNA。使用莖環檢定根據公開之程序(Cheng A, Li M, Liang Y, Wang Y, Wong L, Chen C, Vlassov AV, Magdaleno S 2009. Stem-loop RT-PCR quantification of siRNAs in vitro and in vivo. Oligonucleotides 19: 203-208)定量siRNA。
結果描繪於表4中。疏水性基團之大小、基因表現減弱百分比與組織中觀測到之siRNA之含量之間存在相關性。一般而言，具有更多個碳之疏水性基團引起基因表現減弱百分比增加及組織中觀測到之siRNA更多。 表 4 ： mRNA 定量
相對於未經處理動物之KD% μg siRNA/mg 組織
雙螺旋體 前部 後部 前部 後部
1208 (硬脂基) 85 90 0.031 0.005
1313 (三級丁基) 70 80 0.006 0.005
1503 (正丁基) 50 0 0.012 0.024
1504 (辛基) 67 33 0.09 0.027
1505 (十二烷基) 70 50 0.059 0.073
實例3：小鼠中之脂肪組織中之PLIN1之siRNA介導之基因表現減弱
藉由皮下注射向第1組(n=4)中之4-7週齡ICR小鼠(Envigo Labs)給與100 uL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或給與含500 μg siRNA靶向小鼠PLIN1之100 μL PBS。在第14天，接著將小鼠處死且收集來自各者之腹部白色脂肪樣本並置放於RNAlater (ThermoFisher，目錄號AM7020)中。藉由在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中使用設定為5000 rpm持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)均質化肝臟組織來製備總肝臟RNA。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上根據製造商之建議純化來自裂解物之總RNA。藉由RT-qPCR使用用於小鼠PLIN1及小鼠管家基因PPIA (ThermoFisher，檢定號Mm02342430_g1)之TaqMan檢定評定肝臟PLIN1 mRNA之含量。將資料標準化為接受PBS之動物中的含量。
結果描繪於表5中。添加5'膦酸乙烯酯引起效能增加且使得能夠遞送至脂肪組織。 表 5 ： mRNA 表現量
siRNA 相對於無處理對照動物之平均mRNA
ETD01540 1.7
ETD01624 0.67
ETD01751 0.53
實例4：遞送至中樞神經系統注射
具有如所描述之修飾及疏水性結合物的siRNA根據公開之程序(Alterman, J.F., Godinho, B.M.D.C., Hassler, M.R.等人 A divalent siRNA chemical scaffold for potent and sustained modulation of gene expression throughout the central nervous system. Nat Biotechnol 37, 884-894 (2019). https://doi.org/10.1038/s41587-019-0205-0, Njoo, C., Heinl, C., Kuner, R. In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice. J. Vis. Exp. (85), e51229, 數位物件識別碼:10.3791/51229 (2014))腦室內或鞘內注射。注射後14天，將小鼠處死，收集腦半球，冷凍，之後均質化且測試目標mRNA及蛋白質表現。 實例5：siRNA之要點描述
實例siRNA描述如下： ●21聚體：  a. 19個鹼基對  b. 2 nt懸垂物  ●反義股:  a. 5'端處之膦酸乙烯酯(VP)  b. 各末端處之2個硫代磷酸酯鍵聯(PS)  ●有義股：  a. 5'端處之疏水性基團(C16-C18)  b. 5'端處之視情況選用之0-2個PS  c. 3'端處之2個PS  ●2'氟基及2'甲基之修飾模式。  實例6：修飾模體1
實例siRNA包括以下修飾之組合： ●有義股之位置9(自5'至3')為2' F。  ●若位置9為嘧啶，則有義股中之所有嘌呤為2'OMe，且位置5與位置11之間的1-5個嘧啶為2' F，限制條件為一列中從未存在三個2'F修飾。  ●若位置9為嘌呤，則有義股中之所有嘧啶為2'OMe，且位置5與位置11之間的1-5個嘌呤為2' F，限制條件為一列中從未存在三個2'F修飾。  ●反義股奇數編號位置為2'OMe，且偶數編號位置為2' F及2'去氧基之混合物。  實例7：修飾模體2
實例siRNA包括以下修飾之組合： ●有義股之位置9(自5'至3')為2'去氧基。  ●有義股位置5、7及8為2' F。  ●位置10-21中之所有嘧啶為2' OMe，且嘌呤為2' OMe及2' F之混合物。替代地，位置10-21中之所有嘌呤為2' OMe，且位置10-21中之所有嘧啶為2' OMe及2' F之混合物。  ●反義股奇數編號位置為2'OMe，且偶數編號位置為2' F及2'去氧基之混合物。  實例8：合成ETL胺基亞磷酸酯
實例8A：合成ETL20胺基亞磷酸酯
合成 N-(4-羥基苯乙基)棕櫚醯胺( 5)：
稱出12.82公克之 1(棕櫚酸)且溶解於450 mL之CH 2Cl 2中。將16.3 mL二異丙基乙胺(DIEA)添加至 1之溶液中。隨後，逐滴添加12.88 mL之 2(2,2,2-三氟乙酸全氟苯酯，「PFP」)，且在添加完成之後將反應物攪拌10分鐘。經由加料漏斗向PFP活化酸之溶液中添加8.26公克之 4(4-(2-胺基乙基)苯酚)，且用50 mL CH 2Cl 2沖洗加料漏斗。將反應物置放於氬氣下且攪拌隔夜。在攪拌隔夜之後， 5形成沈澱物。經由過濾收集沈澱物且用75 mL MTBE洗滌，預先冷卻至-20℃。將白色至灰白色固體在高真空下乾燥隔夜。產物未經進一步純化即用於下一步驟中。
合成ETL20胺基亞磷酸酯( 6)：將100 mL無水乙酸乙酯添加至 N-(4-羥基苯乙基)棕櫚醯胺 5(5.2公克)，隨後添加250 mg 3-埃分子篩。將混合物攪拌1小時。在50℃下加熱混合物以獲得澄清溶液。添加7.3 mL之DIEA，且將混合物置放於冰浴中，且溶液變得混濁。將3-((氯(二異丙胺基)膦醯基)氧基)丙腈(3.5 mL)緩慢添加至混濁溶液中。在添加完成之後，自冰浴移出反應混合物，且在室溫下在Ar下攪拌隔夜。反應混合物接著用乙酸乙酯(200 mL)稀釋，用飽和NaHCO 3溶液(2×50 mL)，隨後鹽水(50 mL)洗滌。將溶液經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。所獲得之殘餘物藉由矽膠管柱層析來純化且用含有2%三乙胺之5-30%乙酸乙酯/己烷溶離。
使用與羥基苯甲胺及月桂基(C 12)或肉豆蔻(C 14)酸產生ETL20胺基亞磷酸酯之程序合成ETL18 (C 14)及ETL19 (C 12)胺基亞磷酸酯。 實例9：siRNA雙螺旋體之玻璃體內注射：
對於小鼠(4-7週齡ICR，Envigo)中之玻璃體內注射，使用具有玻璃微量注射器(10-μL體積；Hamilton Company)之33號針。使眼睛突出，且將針插入穿過赤道鞏膜並以大約45度之角度插入至玻璃體腔室中，注意避免接觸晶狀體之後部部分或視網膜。將1 μL磷酸鹽緩衝生理食鹽水媒劑中之2.5或1 μg siRNA雙螺旋體注射至玻璃體中。注射之siRNA雙螺旋體描述於表6中。 表 6： siRNA 雙螺旋體
實體編號 雙螺旋體 SEQ ID NO: SEQ ID NO:   
目標 有義股 反義股
ETD01928 mANGPTL7 19 [ELT20]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 42 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01929 mANGPTL7 20 [ELT18]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 43 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
ETD01930 mANGPTL7 21 [ELT19]CfaAfcCfaGfAfUfuGfaCfaUfcAfuGfsusu 44 csAfsuGfaUfgUfcAfaucUfgGfuUfgsusu
在注射後第14天將小鼠處死。收集來自各動物之兩隻眼睛且沿赤道剝離，且將前半球及後半球置放於RNAlater中。自均質化組織提取總RNA且使用第一股III cDNA合成套組反轉錄為cDNA。藉由即時TaqMan PCR使用經螢光標記之TaqMan探針/所選擇基因之引子組(ANGPTL7、MYOC、COL1A1、COL5A1、VCAN、FN1及PPIA)進行標準化cDNA定量。在20 μL等分試樣中使用在ABI Prism 7500快速即時PCR系統序列偵測系統上運行之TaqMan Universal PCR Master Mix No AmpErase UNG進行反應且藉由7500系統軟體分析。藉由式2−ΔΔCT計算經處理樣本與未經處理樣本之間的相對定量(RQ)值，其中CT為臨限值處之循環(自動量測)，ΔCT為經檢定基因之CT減去內源性對照(PPIA)之CT，且ΔΔCT為經處理樣本中之標準化經檢定基因之ΔCT減去未經處理者(校準劑)中之相同基因之ΔCT。
除其他之外，ETD1928-1930系列展示具有12-16個碳之不同疏水性基團連接至酪胺之有用性。疏水性基團在有義股之5'端處無硫代磷酸酯之情況下結合。 表 7 ： mRNA 表現量
siRNA 相對於無處理對照動物之平均mRNA
2.5 μg 劑量
ETD01928 0.20
ETD01929 0.09
ETD01930 0.05
1 μg 劑量
ETD01928 0.71
ETD01929 0.81
ETD01930 0.76
實例10：腦室內注射
用藉由1.0 L/min之氧氣化之1.2%異氟醚在吸氣室中將小鼠誘導至麻醉狀態，且接著轉移並固定至立體定位訊框，同時經由遮罩保持藉由0.8%異氟醚麻醉。暴露顱骨，且使用用於小鼠之標準U訊框立體定位儀器(Harvard Apparatus 75-1808)及具有麻醉遮罩之立體定位麻醉配接器(Harvard Apparatus 75-1856)在針置放之後在以下座標處自前囟以500 nl min − 1進行單次腦室內注射(5 µl，人造腦脊髓液作為媒劑)：−0.2 mm前部-後部，0.8 mm中外側及−2.5 mm背腹側。 表 8： siRNA 雙螺旋體
實體編號 目標 SEQ ID NO 有義股 SEQ ID NO 反義股
ETD01917 MTRES1 22 [ETL3]cuAfcAfaAfgGfuGfaAfcucAfgAfsusu 45 usCfsugaGfuUfcaccuUfuGfuagsusu
ETD02209 MTRES1 23 [ELT20]cuAfcAfaAfgGfuGfaAfcucAfgAfsusu 46 usCfsugaGfuUfcaccuUfuGfuagsusu
其中ETL3為使用胺基亞磷酸硬脂酯偶合至有義股之5'的硬脂基(Glen Research，10-1979 -90)。
在注射後第14天將小鼠處死。收集來自各動物之大腦且切成右半球及左半球。
自均質化組織提取總RNA且使用第一股III cDNA合成套組反轉錄為cDNA。藉由即時TaqMan PCR使用經螢光標記之TaqMan探針/所選擇基因之引子組(MTRES1、MYOC、COL1A1、COL5A1、VCAN、FN1及PPIA)進行標準化cDNA定量。在20 μL等分試樣中使用在ABI Prism 7500快速即時PCR系統序列偵測系統上運行之TaqMan Universal PCR Master Mix No AmpErase UNG進行反應且藉由7500系統軟體分析。藉由式2−ΔΔCT計算經處理樣本與未經處理樣本之間的相對定量(RQ)值，其中CT為臨限值處之循環(自動量測)，ΔCT為經檢定基因之CT減去內源性對照(PPIA)之CT，且ΔΔCT為經處理樣本中之標準化經檢定基因之ΔCT減去未經處理者(校準劑)中之相同基因之ΔCT。 表 9 ： mRNA 表現量
siRNA 相對於無處理對照動物之平均mRNA
25 μg劑量
ETD01917 0.90
ETD02209 0.44
10 μg劑量
ETD01917 0.45
ETD02209 0.22
實例11：大鼠鞘內注射
雄性史泊格多利大鼠(Sprague Dawley rat) (n=2)用於siRNA之鞘內(IT)注射。雙螺旋體ETD02273以30 mg ml − 1調配於人造腦脊髓液(aCSF)中，且藉由腰椎穿刺在L3-L5椎骨空間之間的脊柱之背側區域中以30-µl IT注射劑液形式投與至大鼠。雙螺旋體ETD02210以9 mg ml − 1調配於人造腦脊髓液(aCSF)中，且藉由腰椎穿刺在L3-L5椎骨空間之間的脊柱之背側區域中以100-µl IT注射液形式投與至大鼠。
在用異氟醚麻醉大鼠之後，將大鼠置放於溫加熱墊上。將IT注射部位刮毛且消毒。進行切口以暴露脊柱。用30號胰島素注射器投與siRNA。經由針轂中之CSF回流及輕打尾來確認針之適當置放。一旦完成siRNA投與，使活塞上之平緩恆定壓力維持30秒。縫合切口且用組織膠固定。將大鼠以胸骨側臥置放於加熱墊上直至回收。
在注射後第14天將大鼠處死。收集來自各大鼠之肝臟、右及左(R/L)額葉皮質、R/L顳葉皮質、海馬體、小腦及脊髓之樣本且置放於RNAlater (ThermoFisher，目錄號AM7020)中直至處理。
藉由在均質化緩衝液(Maxwell RSC simplyRNA組織套組)中使用設定為5000 rpm持續兩個10秒循環之Percellys 24組織均質器(Bertin Instruments)均質化肝臟組織來製備總肝臟RNA。在Maxwell RSC 48平台(Promega Corporation)上根據製造商之建議純化來自裂解物之總RNA。使用Quanta qScript cDNA SuperMix (VWR，目錄號95048-500)根據製造商說明書進行cDNA之製備。
藉由RT-qPCR一式三份地在QuantStudio™ 6 Pro即時PCR系統上使用用於大鼠MTRES1 (ThermoFisher，檢定號Rn01441122_m1)及大鼠管家基因PPIA (ThermoFisher，檢定號Rn03302269_gH)之TaqMan檢定及PerfeCTa® qPCR FastMix®、低ROX™ (VWR，目錄號101419-222)評定肝臟MTRES1 mRNA之相對含量。
將資料標準化為未接受治療之動物中的平均MTRES1 mRNA含量。結果展示於下表10及表11中。 表 10 ： mRNA 表現量
治療 / 表現位置 小腦 額葉皮質右側 額葉皮質左側 海馬體 肝臟 脊髓 顳葉皮質右側 顳葉皮質左側
無治療 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
ETD02210 9 mg/ml 0.64 0.92 0.67 0.73 0.21 0.5 0.91 1.06
ETD02273 30 mg/ml 0.36 0.85 0.95 0.96 0.2 0.35 1.08 1.3
表 11： siRNA 雙螺旋體
實體編號 目標 SEQ ID NO: 有義股 SEQ ID NO: 反義股
ETD02210 MTRES1 47 [ETL20]ucuacAfAfAfGf Gfugaacucaasusu 49 5VPusUfsgAfgUfuCfaCfc UfuUfgUfaGfasusu
ETD02273 MTRES1 48 [ETL20]ucuacAfAfAfGf Gfugaacucaasusu 50 5VPusUfsgagUfuCfaCfc UfuUfgUfaGfasusu
儘管本文已展示及描述本發明之較佳實施例，但熟習此項技術者將明白，此類實施例僅藉助於實例提供。熟習此項技術者可在不背離本發明之情況下想到許多變化形式、改變及取代。應理解，本文所描述之本發明實施例之各種替代方案可用於實踐本發明。希望以下申請專利範圍限定本發明之範疇，且藉此涵蓋此申請專利範圍及其等效物之範疇內的方法及組合物。
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Claims (58)

  1. 一種組合物，其包含： 小干擾RNA (siRNA)，其包含有義股、反義股及連接至該有義股或該反義股之末端的脂質部分； 其中該脂質部分包含苯基或環己烷基連接子，其中該連接子連接至脂質且連接至該有義股或該反義股之末端。
  2. 如請求項1之組合物，其中該脂質及該有義股或該反義股之末端以1,4、1,3或1,2取代模式連接至該苯基或環己烷基連接子。
  3. 如請求項1之組合物，其中該脂質及該有義股或該反義股之末端以1,4取代模式連接至該苯基或環己烷基連接子。
  4. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，限制條件為R不為辛烷。
  5. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。
  6. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，n為0-3，且R為含有4-18個碳之烷基。
  7. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接。
  8. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分包含表1中所描繪之脂質部分。
  9. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分連接至該有義股或該反義股之5'端。
  10. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分經由磷酸酯連接至該有義股或該反義股之5'端。
  11. 如請求項1之組合物，其中該脂質部分連接至該有義股之末端。
  12. 如請求項1之組合物，其中該反義股包含5'膦酸乙烯酯。
  13. 如請求項1之組合物，其中該反義股包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。
  14. 如請求項1之組合物，其中該反義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。
  15. 如請求項1之組合物，其中該有義股包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。
  16. 如請求項1之組合物，其中該有義股不包含一個或兩個5'硫代磷酸酯鍵聯。
  17. 如請求項1之組合物，其中該有義股包含5'磷酸酯鍵聯。
  18. 如請求項1之組合物，其中該有義股包含一個或兩個3'硫代磷酸酯鍵聯。
  19. 如請求項1之組合物，其中以下中之任一者對於該有義股而言為真： 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基； 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；或 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基； 限制條件為在前述任一者中，該有義股可包括2'去氧核苷。
  20. 如請求項19之組合物，其中該有義股包括該2'去氧核苷。
  21. 如請求項19之組合物，其中該有義股不包括該2'去氧核苷。
  22. 如請求項1之組合物，其中以下中之任一者對於該反義股而言為真： 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基； 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾； 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾；或 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。
  23. 一種組合物，其包含： 小干擾RNA (siRNA)，其包含有義股及反義股； 其中該反義股包含含有膦酸乙烯酯及2個硫代磷酸酯鍵聯之5'端以及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端； 其中該有義股包含含有疏水性部分之5'端及含有2個硫代磷酸酯鍵聯之3'端； 其中以下中之任一者對於該有義股而言為真，限制條件為該有義股可包括2'去氧核苷： 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基， 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基；及 其中以下中之任一者對於該反義股而言為真： 所有嘌呤核苷包含2'氟基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘌呤核苷包含2'-O-甲基，且所有嘧啶核苷包含2'氟基， 所有嘧啶核苷包含2'氟基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾， 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷經2'氟基及2'-O-甲基之混合物修飾，或 所有嘧啶核苷包含2'-O-甲基，且所有嘌呤核苷包含2'氟基。
  24. 如請求項23之組合物，其中該有義股包括該2'去氧核苷。
  25. 如請求項23之組合物，其中該有義股不包括該2'去氧核苷。
  26. 如請求項23之組合物，其中該有義股之5'端包含兩個經由磷酸酯鍵聯且不由硫代磷酸酯鍵聯連接之核苷酸。
  27. 如請求項23之組合物，其中該有義股之5'端進一步包含1或2個硫代磷酸酯鍵聯。
  28. 如請求項23之組合物，其中該疏水性部分包含藉由苯基或環己烷基連接子連接至該有義股之5'端的脂質。
  29. 如請求項28之組合物，其中該脂質及該有義股之5'端以1,4、1,3或1,2取代模式連接至該苯基或環己烷基連接子。
  30. 如請求項28之組合物，其中該脂質及該有義股之5'端以1,4取代模式連接至該苯基或環己烷基連接子。
  31. 如請求項28之組合物，其中該疏水性部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或反義股之末端的共價連接，且R為含有4-18個碳之烷基，限制條件為R不為辛烷。
  32. 如請求項28之組合物，其中該疏水性部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。
  33. 如請求項28之組合物，其中該疏水性部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，n為1-3，且R為含有4-18個碳之烷基。
  34. 如請求項28之組合物，其中該疏水性部分包含以下結構： ； 其中點線指示與該有義股或該反義股之末端的共價連接，且R為含有4-18個碳之烷基。
  35. 如請求項28之組合物，其中該疏水性部分包含表1中所描繪之脂質部分。
  36. 如請求項1或23之組合物，其中該有義股及該反義股形成雙螺旋體。
  37. 如請求項36之組合物，其中該雙螺旋體包含至少10個鹼基對、至少11個鹼基對、至少12個鹼基對、至少13個鹼基對、至少14個鹼基對、至少15個鹼基對、至少16個鹼基對、至少17個鹼基對、至少18個鹼基對、至少19個鹼基對、至少20個鹼基對、至少21個鹼基對、至少22個鹼基對、至少23個鹼基對、至少24個鹼基對，或至少25個鹼基對。
  38. 如請求項36之組合物，其中該雙螺旋體包含19個鹼基對。
  39. 如請求項36之組合物，其中該雙螺旋體包含有義股懸垂物。
  40. 如請求項39之組合物，其中該有義股懸垂物包含1-4個核苷酸。
  41. 如請求項39之組合物，其中該有義股懸垂物包含2個核苷酸。
  42. 如請求項39之組合物，其中該有義股懸垂物包含尿嘧啶。
  43. 如請求項39之組合物，其中該雙螺旋體包含反義股懸垂物。
  44. 如請求項43之組合物，其中該反義股懸垂物包含1-4個核苷酸。
  45. 如請求項43之組合物，其中該反義股懸垂物包含2個核苷酸。
  46. 如請求項43之組合物，其中該反義股懸垂物包含尿嘧啶。
  47. 如請求項23之組合物，其中該反義股之5'端包含由該2個硫代磷酸酯鍵聯分開之3個核苷。
  48. 如請求項23之組合物，其中該反義股之3'端包含由該2個硫代磷酸酯鍵聯分開之3個核苷。
  49. 如請求項1或23之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
  50. 一種如請求項1至49中任一項之組合物之用途，其用於製造用於治療有需要之個體的藥劑。
  51. 如請求項50之用途，其中該藥劑係皮下、玻璃體內、鞘內或腦室內投與。
  52. 如請求項50之用途，其中該siRNA靶向編碼介導該個體疾病之蛋白質的mRNA。
  53. 如請求項51之用途，其中該mRNA在該個體之組織中，該組織包含眼睛、肝臟、脂肪、腦或脊髓。
  54. 一種如請求項1至49中任一項之組合物之用途，其用於製造用於減少細胞中目標RNA或由該RNA編碼之蛋白質之量的藥劑，其中該反義股包含與該RNA互補且結合之序列。
  55. 如請求項54之用途，其中向包含該細胞之個體投與該藥劑。
  56. 如請求項55之用途，其中該藥劑係皮下、玻璃體內、鞘內或腦室內投與。
  57. 如請求項54之用途，其中該藥劑使該目標RNA或由該RNA編碼之蛋白質之量測相對於基線量測或對照減少至少10%。
  58. 如請求項54之用途，其中該細胞包含眼睛、肝臟、脂肪、腦或脊髓細胞。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE922292A1 (en) * 1991-07-15 1993-01-27 Jolla Pharma Modified phosphorous intermediates for providing functional¹groups on the 5' end of oligonucleotides
US9657294B2 (en) * 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
EP3165606A1 (en) * 2009-05-01 2017-05-10 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
US20220402947A1 (en) * 2018-02-17 2022-12-22 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Trialkyne Linking Agents and Methods of Use
CA3160329A1 (en) * 2019-11-06 2021-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Extrahepatic delivery
KR20230061389A (ko) * 2020-08-04 2023-05-08 다이서나 파마수이티컬, 인크. 올리고뉴클레오티드의 전신 전달

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