TW202400237A - 製造含保存劑之疫苗調配物的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種製造包含保存劑之結合型疫苗的方法。本發明尤其關於一種製造結合型疫苗之方法，其中該保存劑具疏水性及黏性(諸如2-苯氧基乙醇(2-PE))。

Description

製造含保存劑之疫苗調配物的方法
本發明係關於一種製造包含保存劑之結合型疫苗的方法。本發明尤其關於一種製造結合型疫苗之方法，其中該保存劑具疏水性及黏性(諸如2-苯氧基乙醇(2-PE))。
作為治療劑之細菌細胞表面多醣，尤其莢膜多醣已變得愈來愈重要。通常，細胞表面多醣係與活體內誘導免疫反應相關。
儘管多醣自身具有免疫原性，但已使用多醣與蛋白載體之結合(醣結合物)來改良免疫原性，尤其在嬰兒及老年人中。醣結合型疫苗通常藉由將免疫原性較差的糖抗原與蛋白載體之共價連接來獲得，且在預防許多致命傳染病中起重要作用。在結合型疫苗之製備中，使所選細菌菌株生長以供應製造疫苗所需之多醣。細胞通常在醱酵罐中生長，且在醱酵結束時被誘導裂解。隨後收集裂解物培養液以供下游純化及回收細菌細胞周圍之莢膜多醣。在與載體蛋白結合之後，多醣被包括於最終疫苗產物中且賦予疫苗目標人群對細菌之免疫性。
由肺炎鏈球菌( Streptococcus pneumoniae)引起之肺炎球菌疾病為全球更重要之細菌病原體中之一者。肺炎球菌疾病為一組複雜疾病且包括侵襲性感染(諸如菌血症/敗血症、腦膜炎、肺炎及中耳炎)，對兒童及成人均造成影響。Prevnar 13 (亦稱為「Prevenar 13」且在本文中稱為「Prev(e)nar 13」)為來自十三種肺炎球菌血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F)之多醣調配物，其個別地結合至CRM 197(來自白喉桿菌( Corynebacterim diphtheriae)之突變株的交叉反應物質(Cross Reactive Material))。參見例如WO2006/110381；WO2008/079653；WO2008/079732；WO2008/143709及WO 2011/151760。
可藉由僅製造且使用單劑量疫苗調配物來減少或避免將保存劑添加至疫苗中之需求。然而，使用單劑量不含保存劑之調配物提高了疫苗接種之總成本且危及免疫接種計劃之有效性，尤其在開發中國家。另外，自多劑量小瓶完全移除保存劑並不被視為較佳選擇，尤其在冷藏有限且健康照護標準較不理想之國家(Drain 等人, Bull World Health Organ 81(10):  726 - 731 (2003)。因此，儘管多劑量小瓶似乎最適合於製造較便宜之疫苗，但需要調配含至少一種保存劑之多劑量疫苗以保護個體免受在多次使用期間或在一或多種非無菌事件之後無意引入疫苗中之微生物影響。
WO 2011/151760揭示一種多價免疫原性組合物，其包含複數種來自肺炎鏈球菌血清型之莢膜多醣及2-苯氧基乙醇(2-PE)。
本發明人已發現，調配含保存劑(諸如2-PE)之結合型疫苗造成顯著挑戰，尤其大規模調配時。在先前技術中，已在疫苗調配之最後一個階段添加2-PE (至藥品中，參見例如WO 00/62801、WO 00/56360或Khandke L.等人 Vaccine 29 (2011) 7144- 7153)。然而，在最後一個階段添加2-PE需要無菌過濾濃度相對較高之2-PE。已發現，在此類高濃度下無菌過濾2-PE對過濾器潤濕及使用前過濾器完整性造成挑戰。
因此，需要用於調配包含保存劑(諸如2-PE)之多價結合型疫苗的改良方法。特定言之，需要耗時較少且步驟數減少之方法。
在一態樣中，本發明提供一種製造包含保存劑之結合型疫苗之方法，該方法包含以下步驟： (a)    將保存劑自本體溶液添加至包含一或多種結合物之溶液中，其中該保存劑在未經無菌過濾之情況下添加；及 (b)    隨後將包含該保存劑及該一或多種結合物之混合物進行無菌過濾。
在一態樣中，該方法進一步包含步驟(c)隨後添加佐劑。 在一態樣中，保存劑在本體溶液之濃度下具疏水性及黏性。
較佳地，本體溶液為純2-PE。
用於將保存劑添加至複合疫苗調配物中之方法係在調配方法之最後一個階段添加保存劑。添加保存劑作為該方法之最後一個階段使保存劑與疫苗之其他組分(諸如抗原)相互作用之潛在影響的風險降至最低且使該方法具有靈活性。
保存劑定義為添加至疫苗中用於殺滅或防止微生物(尤其細菌及真菌)生長之化合物。將其添加至疫苗調配物中以在疫苗被意外污染的情況下防止微生物生長，如重複刺穿多劑量小瓶時可能發生的情況。
本發明人已發現，添加保存劑，尤其疏水性及黏性保存劑作為方法之最後步驟之一可能為挑戰性的，尤其在大規模情況下。已發現，由於一些保存劑(諸如2-PE)之疏水性及高黏度，經由無菌過濾器在所需濃度下過濾該保存劑為挑戰性的，若在調配方法最後添加保存劑，則需要此步驟。已發現，將需要超高壓才能用所需濃度下之保存劑完全且連續地潤濕無菌過濾器(亦即具有約0.2 µm之標稱孔徑的過濾器)，此可能損害膜之微生物滯留特性。若不使用此類高壓，用所需濃度下之保存劑潤濕過濾器可能變得不完全且不連續，此意謂潤濕步驟可能失敗且需要特殊測試以確保潤濕為適當的且可能浪費材料。因此，此測試可能既耗時的且造成浪費。
因此，需要用於調配包含保存劑(諸如2-PE)之多價結合型疫苗的改良方法。特定言之，該方法應為耗時較少的(且需要步驟數減少之製備)。
已意外地發現，在該方法中較早添加保存劑具有優勢。在此類方法中，由於較早添加保存劑(在最終稀釋之前)，因此保存劑以比在最終藥品中更高之濃度存在。已意外地發現，在該方法中較早添加保存劑，特定言之在需要無菌過濾之前添加為可能的，且使得與高濃度疏水性及黏性保存劑之無菌過濾相關的問題得以避免，因為下游僅需要對稀釋溶液進行無菌過濾。該方法允許在未經無菌過濾之情況下添加保存劑。疏水性及黏性保存劑之無菌過濾已被發現一直成問題(尤其對於2-PE)。
因此，本發明係關於一種製造包含保存劑之結合型疫苗的方法，該方法包含以下步驟： (a)       將保存劑自本體溶液添加至包含一或多種結合物之溶液中，其中該保存劑在未經無菌過濾之情況下添加；及 (b)       隨後將包含該保存劑及該一或多種結合物之混合物進行無菌過濾。
在一實施例中，在無菌過濾步驟(b)之後再添加佐劑。因此，在一實施例中，本發明係關於一種製造包含保存劑之結合型疫苗的方法，該方法包含以下步驟： (a)       將保存劑自本體溶液添加至包含一或多種結合物之溶液中，其中該保存劑在未經無菌過濾之情況下添加； (b)       隨後將包含該保存劑及該一或多種結合物之混合物進行無菌過濾，及； (c)       隨後向該混合物中添加佐劑。
較佳地，本發明中所使用之保存劑在本體溶液濃度下具疏水性及黏性。在一實施例中，本體溶液濃度下之保存劑的黏度在25℃下為至少10厘司。在另一實施例中，該黏度在25℃下為至少15厘司。在一較佳實施例中，該黏度在25℃下為至少20厘司。
在一實施例中，在25℃下，本發明中所用之保存劑的黏度在約10至約50厘司之間。較佳地，在25℃下，本發明中所用之保存劑的黏度在約15至約25厘司之間。
在一實施例中，該保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)、苯酚、間甲苯酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯或硫柳汞。在一較佳實施例中，保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)或硫柳汞。
在一實施例中，保存劑未經稀釋即被添加。因此，在一實施例中，保存劑未經稀釋即被添加(亦即，本體溶液為未經稀釋之保存劑)。在一實施例中，本體溶液因此為未經稀釋之純保存劑(其中「純」係指醫藥級)。
在一最佳實施例中，本發明所用之保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)。2-PE為無色油性液體且可以純形式(在醫藥級下未經稀釋)添加。因此，在一實施例中，2-PE未經稀釋即被添加(亦即，本體溶液為純2-PE)。在一實施例中，本體溶液因此為純2-PE。
在一實施例中，本體溶液為純2-PE，且在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約10倍與約200倍之間。在另一實施例中，本體溶液為純2-PE，且在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約10倍與約100倍之間。在另一實施例中，本體溶液為純2-PE，且在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約50倍、約60倍、約70倍或約80倍。在一較佳實施例中，本體溶液為純2-PE，且在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約73倍與74倍之間。
在一實施例中，在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度在約1 mg/ml與約25 mg/ml之間。較佳地，在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度在約10 mg/ml與約20 mg/ml之間。甚至更佳地，在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度在約15 mg/ml與約17 mg/ml之間。
在一特定實施例中，在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度為約15 mg/ml。
在一特定實施例中，在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度為約17 mg/ml。
在一實施例中，以約0.5 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液至約5.0 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液之間的添加速率添加2-PE。在一較佳實施例中，2-PE未經稀釋即被添加。
在一實施例中，以約1 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液至約4.0 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液之間的添加速率添加2-PE。在一較佳實施例中，2-PE未經稀釋(純2-PE)即被添加。
在一實施例中，使用泵，較佳蠕動泵添加純2-PE。在一實施例中，用使用熱塑性彈性體管之蠕動泵添加純2-PE。較佳地，用使用熱塑性彈性體管之蠕動泵添加純2-PE。
在一實施例中，疫苗中2-PE之最終濃度在約5 mg/ml至約15 mg/ml之間。較佳地，疫苗中2-PE之最終濃度在約7 mg/ml至約12 mg/ml之間。
在一實施例中，疫苗中2-PE之最終濃度為約10 mg/ml。
在一較佳實施例中，疫苗中2-PE之最終濃度為約9 mg/ml。
在一實施例中，在步驟(a)後溶液之體積在約10 L與約2,000 L之間。在另一實施例中，在步驟(a)後溶液之體積在約100 L與約1,000 L之間。在另一實施例中，在步驟(a)後溶液之體積在約100 L與約500 L之間。在另一實施例中，在步驟(a)後溶液之體積在約150 L與約200 L之間。在一較佳實施例中，在步驟(a)後溶液之體積為約180 L。
較佳地，在連續混合下添加保存劑。在一較佳實施例中，在添加保存劑與開始混合之間不存在延遲。
在一實施例中，在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約50 rpm至約500 rpm之間。較佳地，在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約100 rpm至約400 rpm之間。更佳地，在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約150 rpm至約300 rpm之間。
最佳地，在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約150 rpm至約200 rpm之間。
在一實施例中，在連續混合下添加保存劑，其中角速度為約150 rpm。
在一實施例中，在連續混合下添加保存劑，其中角速度為約200 rpm。
在一實施例中，在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約15分鐘至約5小時之間。較佳地，在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約30分鐘至約3小時之間。甚至更佳地，在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約1小時至約3小時之間。
在一實施例中，在添加保存劑之後，將溶液混合約2小時。
在一實施例中，在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液以約50 rpm與約500 rpm之間的角速度混合。較佳地，在約100 rpm與約400 rpm之間。更佳地，在約150 rpm與約300 rpm之間。
包含一或多種步驟(a)之結合物的溶液 添加有保存劑之溶液包含一或多種結合物且可包含其他組分。
出於本發明之目的，術語『結合物』或『醣結合物』表示連接至載體蛋白之細菌莢膜醣。在一個實施例中，莢膜醣與載體蛋白直接連接。在第二實施例中，莢膜醣經由間隔子/連接子與蛋白連接。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為單價組合物。在此類實施例中，溶液僅包含一種結合物。在此類實施例中，該結合物可為結合型流感嗜血桿菌( Haemophilus influenzae) b型莢膜醣(Hib)。在另一實施例中，該結合物為結合型腦膜炎雙球菌( N . meningitidis)血清群C莢膜醣(MenC)。在又一實施例中，該結合物為結合型腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜醣(MenY)。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為二價、三價、四價、五價或六價組合物。
在一實施例中，該三價組合物包含三種結合型無乳鏈球菌( Streptococcus agalactiae)莢膜醣。無乳鏈球菌亦稱為『B族鏈球菌』，或簡稱為『GBS』。在一實施例中，該等三種結合物由結合型GBS血清型Ia、Ib及III莢膜醣組成。在一較佳實施例中，該莢膜醣與CRM 197結合。
在一實施例中，該六價組合物包含六種結合型無乳鏈球菌莢膜醣。在一實施例中，該等六種結合物由結合型GBS血清型Ia、Ib、II、III、IV及V莢膜醣組成。在一較佳實施例中，該等莢膜醣與CRM 197結合。
在一實施例中，該四價組合物包含四種結合型腦膜炎雙球菌莢膜醣。在一實施例中，該等四種結合物由以下組成：結合型腦膜炎雙球菌血清群A莢膜醣(MenA)、結合型腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜醣(MenW135)、結合型腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜醣(MenY)及結合型腦膜炎雙球菌血清群C莢膜醣(MenC)。
較佳地，添加有保存劑之溶液為包含七種或更多種結合物之多價組合物。較佳地，溶液為7至25價組合物(亦即其含有7至25種結合物)。甚至更佳地，多價溶液為13至25價組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為15價組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為16價組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為20價組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價組合物。
較佳地，添加有保存劑之溶液為多價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為包含來自7至25種肺炎鏈球菌之不同血清型的醣結合物(7至25種肺炎球菌結合物)之肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為包含來自肺炎鏈球菌之15種、16種、17種、18種、19種、20種、21種、22種、23種、24種或25種不同血清型之結合物的肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為包含來自肺炎鏈球菌之20種不同血清型之結合物的肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為22價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21、22、23、24或25價肺炎球菌結合物組合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為10價肺炎球菌結合物組合物，其中該等10種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為13價肺炎球菌結合物組合物，其中該等13種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為22價肺炎球菌結合物組合物，其中該等22種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23A、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23B、23F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F、24F及33F。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F、33F及35B。
在一較佳實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
醣結合物之組分為與醣結合之載體蛋白。術語「蛋白載體」或「載體蛋白」或「載體」可在本文中互換使用。載體蛋白應適於標準結合程序。在一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為白喉類毒素(DT)、破傷風類毒素(TT)、TT之片段C、CRM 197解毒肺炎球菌溶血素、PhtA、PhtB、PhtD、PhtE、PhtDE融合物、PhtBE融合物、OMPC、Por、流感嗜血桿菌蛋白D (PD)或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。在一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為白喉類毒素(DT)。在另一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為破傷風類毒素(TT)。在另一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為流感嗜血桿菌蛋白D (PD；參見例如EP0594610 B)。
在一較佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為TT、CRM 197或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。在甚至更佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為CRM 197或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。
在一極佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為CRM 197。在上文組合物中之任一者的一實施例中，所有莢膜多醣均個別地與CRM 197結合。
在一實施例中，來自上文組合物中之任一者的肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之莢膜多醣個別地與PD結合，來自肺炎鏈球菌血清型18C之莢膜多醣與TT結合且來自肺炎鏈球菌血清型19F之莢膜多醣與DT結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，至少一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，至少兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，至少三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文組合物中之任一者的一實施例中，四種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型15B、22F，且其他兩種血清型係選自由血清型1、3及5組成之群，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、3、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型3、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中選自血清型1、3及5之兩種醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及3之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型3及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物均與CRM 197結合。
在一最佳實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物均與CRM 197結合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含本文所揭示之醣結合物與醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑之組合中的任一者。
除結合物以外，添加有保存劑之溶液可包含以下中之一或多者：緩衝劑、鹽、二價陽離子、非離子清潔劑、低溫保護劑(諸如糖)及抗氧化劑(諸如自由基清除劑或螯合劑)或其任何多種組合。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含緩衝劑。在一實施例中，該緩衝劑具有約3.5至約7.5之pKa。在一些實施例中，緩衝劑為磷酸鹽、丁二酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。在一些實施例中，緩衝劑為丁二酸鹽。在一較佳實施例中，緩衝劑為組胺酸。
在某些實施例中，緩衝劑為濃度為10 mM至30 mM之組胺酸。在某些實施例中，緩衝劑為濃度為15 mM至25 mM之組胺酸。在一個特定實施例中，組胺酸緩衝劑之濃度為約22 mM。
在某些實施例中，緩衝劑為濃度為1 mM至10 mM之丁二酸鹽。在一個特定實施例中，丁二酸鹽緩衝劑之濃度為約5.5 mM。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含鹽。在一些實施例中，鹽為氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。在一個特定實施例中，鹽為氯化鈉。在一個特定實施例中，添加有保存劑之溶液包含約150 mM氯化鈉。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含界面活性劑。在一實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯20 (TWEENTM20)、聚山梨醇酯40 (TWEENTM40)、聚山梨醇酯60 (TWEEN™60)、聚山梨醇酯65 (TWEEN™65)、聚山梨醇酯80 (TWEEN™80)、聚山梨醇酯85 (TWEEN™85)、TRITON™ N-101、TRITON™ X-100、辛苯聚醇40、壬苯聚醇-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸酯、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG-15、Solutol H 15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(CREMOPHOR® EL)、大豆卵磷脂及泊洛沙姆(poloxamer)。
在一較佳實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。較佳地，溶液中之聚山梨醇酯20的濃度為在0.01%至1%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯20。更佳地，溶液中之聚山梨醇酯20的濃度為在0.1%至0.5%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯20。
在其他實施例中，溶液中之聚山梨醇酯20的濃度為約0.1%、約0.2%、約0.3%、約0.4%、約0.5%或約0.6%聚山梨醇酯20(w/w)。在一最佳實施例中，溶液中之聚山梨醇酯20的濃度為約0.33%聚山梨醇酯20 (w/w)。
在一較佳實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。較佳地，溶液中之聚山梨醇酯80的濃度為在0.001%至1%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯80。更佳地，溶液中之聚山梨醇酯80的濃度為在0.01%至0.5%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯80。
在其他實施例中，溶液中之聚山梨醇酯80的濃度為約0.01%、約0.02%、約0.03%、約0.04%、約0.05%或約0.06%聚山梨醇酯80 (w/w)。在一最佳實施例中，溶液中之聚山梨醇酯80的濃度為約0.033%聚山梨醇酯80 (w/w)。
在某些實施例中，添加有保存劑之溶液具有5.5至7.5之間的pH，更佳5.6至7.0之間的pH，甚至更佳5.8至6.0之間的pH。在一較佳實施例中，添加有保存劑之溶液的pH約為5.8。
特定醣結合物之濃度可基於彼結合物之多醣的量來計算。可藉由醣醛酸分析來測定醣濃度。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含約2 µg/ml至約20 µg/ml之間的針對來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、18C、19A、19F、22F、23A、23B、23F、24F、33F及/或35B之醣結合物的多醣。較佳地，約5 µg/ml至約10 µg/ml之間。
在一個實施例中，添加有保存劑之溶液包含約7.5 µg /ml的針對來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、18C、19A、19F、22F、23A、23B、23F、24F、33F及/或35B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含約4 µg/ml至約40 µg/ml之間的針對來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。較佳地，約10 µg/ml至約20 µg/ml之間。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液包含約15 µg/ml的針對來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約5 µg/ml至約10 µg/ml之間的莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約10 µg/ml至約20 µg/ml之間的莢膜多醣血清型6B、約0.01%至約0.05% (w/w)之間的聚山梨醇酯80、約150 mM氯化鈉及約1 mM至約10 mM之間的丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)。
在一實施例中，添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約5 µg/ml至約10 µg/ml之間的莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約10 µg/ml至約20 µg/ml之間的莢膜多醣血清型6B、約150 mM氯化鈉、約0.1%至約0.5% (w/w)之間的聚山梨醇酯20以及約15 mM至約25 mM之間的L-組胺酸緩衝劑(pH 5.8)。
在一較佳實施例中，添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約7.5 µg/ml之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約7.5 µg/ml之莢膜多醣血清型6B、約0.033% (w/w)聚山梨醇酯80、約150 mM氯化鈉以及約5.5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)。
無菌過濾 在步驟(a)之後，無菌過濾包含保存劑及結合物之混合物。
在一實施例中，過濾器具有約0.05至0.2 µm或約0.1至0.2 µm之間的標稱滯留範圍。較佳地，約0.15至0.2 µm。
在一實施例中，過濾器具有約0.1、約0.15或約0.2 µm之標稱滯留範圍。
在一較佳實施例中，過濾器具有約0.2 µm之標稱滯留範圍。
在一較佳實施例中，過濾器包含預濾器。在一些實施例中，預濾器具有約0.1 µm與約1 µm之間的標稱滯留範圍。在一較佳實施例中，預濾器具有約0.5 µm之標稱滯留範圍。在另一較佳實施例中，預濾器具有約0.5 μm之標稱滯留範圍且過濾器具有約0.2 μm之標稱滯留範圍。
在一實施例中，過濾器具有約25至1000 L/m2、50至1000 L/m2、75至1000 L/m2、100至1000 L/m2、150至1000 L/m2、200至1000 L/m2、250至1000 L/m2、300至1000 L/m2、350至1000 L/m2、400至1000 L/m2、500至1000 L/m2或750至1000 L/m2之過濾器容量。
在一實施例中，過濾器具有200至1000 L/m2、250至1000 L/m2或300至1000 L/m2之過濾器容量。
在一較佳實施例中，過濾器具有約300至1000 L/m2之過濾器容量。
在一實施例中，過濾器包含聚碸。在一個實施例中，過濾器包含聚苯碸。在一較佳實施例中，過濾器包含聚醚碸(PES)。在一實施例中，過濾器為盤式過濾器。在一較佳實施例中，過濾器為膠囊過濾器。在另一較佳實施例中，過濾器為包含PES之膠囊過濾器。
本發明之結合型疫苗 藉由本發明方法獲得之結合型疫苗包含一或多種結合物及保存劑。較佳地，該保存劑為2-PE。
出於本發明之目的，術語『結合物』表示連接至載體蛋白之莢膜醣。在一個實施例中，莢膜醣與載體蛋白直接連接。在第二實施例中，莢膜醣經由間隔子/連接子與蛋白連接。
在一實施例中，本發明之結合型疫苗為單價結合型疫苗。在此類實施例中，結合型疫苗僅包含一種結合物。在此類實施例中，該結合物可為結合型流感嗜血桿菌b型莢膜醣(Hib)。在另一實施例中，該結合物為結合型腦膜炎雙球菌血清群C莢膜醣(MenC)。在又一實施例中，該結合物為結合型腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜醣(MenY)。
在另一實施例中，本發明之結合型疫苗為二價、三價、四價、五價或六價結合型疫苗。
在一實施例中，該三價結合型疫苗包含三種結合型無乳鏈球菌莢膜醣。無乳鏈球菌亦稱為『B族鏈球菌』，或簡稱為『GBS』。在一實施例中，該等三種結合物由結合型GBS血清型Ia、Ib及III莢膜醣組成。在一較佳實施例中，該莢膜醣與CRM 197結合。
在一實施例中，該六價結合型疫苗包含六種結合型無乳鏈球菌莢膜醣。在一實施例中，該等六種結合物由結合型GBS血清型Ia、Ib、II、III、IV及V莢膜醣組成。在一較佳實施例中，該等莢膜醣與CRM 197結合。
在一實施例中，該四價結合型疫苗包含四種結合型腦膜炎雙球菌莢膜醣。在一實施例中，該等四種結合物由以下組成：結合型腦膜炎雙球菌血清群A莢膜醣(MenA)、結合型腦膜炎雙球菌血清群W135莢膜醣(MenW135)、結合型腦膜炎雙球菌血清群Y莢膜醣(MenY)及結合型腦膜炎雙球菌血清群C莢膜醣(MenC)。
在一較佳實施例中，本發明之結合型疫苗為包含七種或更多種結合物之多價結合型疫苗。較佳地，本發明之多價結合型疫苗為7至25價結合型疫苗(亦即其含有7至25種結合物)。甚至更佳地，本發明之多價結合型疫苗為13至25價結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為15價結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為16價結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為20價結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為21價結合型疫苗。
較佳地，本發明之多價結合型疫苗為肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為包含7至25種來自肺炎鏈球菌之不同血清型的醣結合物(7至25種肺炎球菌結合物)的肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為包含來自肺炎鏈球菌之15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25種不同血清型之醣結合物的肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之多價結合型疫苗為包含來自20種肺炎鏈球菌之不同血清型的醣結合物之肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20價肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為15價肺炎球菌結合型疫苗。
在一較佳實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為20價肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21、22、23、24或25價肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為22價肺炎球菌結合型疫苗。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為10價肺炎球菌結合物，其中該等10種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為13價肺炎球菌結合物，其中該等13種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為15價肺炎球菌結合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為20價肺炎球菌結合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為22價肺炎球菌結合物，其中該等22種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23A、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23B、23F及33F。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F 24F及33F。
在一個實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F、33F及35B。
醣結合物之組分為與醣結合之載體蛋白。術語「蛋白載體」或「載體蛋白」或「載體」可在本文中互換使用。載體蛋白應適於標準結合程序。
在一個實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白係選自由以下組成之群：白喉類毒素(DT)、破傷風類毒素(TT)、TT之片段C、CRM 197(白喉毒素之無毒性但抗原相同變體)、其他DT突變體(諸如CRM176、CRM228、CRM45 (Uchida等人 (1973) J. Biol. Chem. 218: 3838-3844)、CRM9、CRM102、CRM103或CRM107；肺炎球菌溶血素(ply)(Kuo等人(1995) Infect lmmun 63:2706-2713)，包括以某種方式解毒之ply，例如dPLY-GMBS (WO 2004/ 081515、WO 2006/032499)或dPLY-甲醛；PhtX，包括PhtA、PhtB、PhtD、PhtE (PhtA、PhtB、PhtD或PhtE之序列揭示於WO 00/37105及WO 00/39299中)以及Pht蛋白之融合物，例如PhtDE融合物、PhtBE融合物、Pht A-E (WO 01/98334、WO 03/054007、WO 2009/000826)；腦膜炎球菌外膜蛋白(OMPC)，其通常提取自腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)血清群B (EP0372501)；PorB (來自腦膜炎雙球菌)；流感嗜血桿菌蛋白D (PD；參見例如EP0594610 B)或其免疫功能等效物；合成肽(EP0378881、EP0427347)；熱休克蛋白(WO 93/17712、WO 94/ 03208)；百日咳蛋白(WO 98/58668、EP0471177)、細胞介素、淋巴介質、生長因子或激素(WO 91/01146)；包含多個來自各種源自病原體之抗原的人類CD4+T細胞抗原決定基的人造蛋白 (Falugi 等人(2001) Eur J Immunol 31:3816-3824)，諸如N19蛋白(Baraldoi 等人(2004) Infect lmmun 72:4884-4887)；肺炎球菌表面蛋白PspA (WO 02/091998)；鐵攝取蛋白(WO 01/72337)、難養芽胞梭菌之毒素A或B (WO 00/61761)；運鐵蛋白結合蛋白；肺炎球菌黏附蛋白(PsaA)；重組銅綠假單胞菌外毒素A (特別是其無毒突變體(諸如在麩胺酸553具有取代之外毒素A)(Douglas等人(1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971))。其他蛋白，諸如卵白蛋白、匙孔螺血氰蛋白(keyhole limpet hemocyanin；KLH)、牛血清白蛋白(BSA)，或結核菌素之純化蛋白衍生物(PPD)亦可用作載體蛋白。其他適合的載體蛋白包括不活化之細菌毒素，諸如霍亂類毒素(例如WO 2004/083251中所描述)；大腸桿菌LT；大腸桿菌ST；及來自銅綠假單胞菌之外毒素A。另一適合的載體蛋白為來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。
在一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為白喉類毒素(DT)。在另一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為破傷風類毒素(TT)。
在另一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為流感嗜血桿菌蛋白D (PD；參見例如EP0594610 B)。
在一較佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為TT、CRM 197或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。
在一較佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為CRM197或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。
在一極佳實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為CRM 197。CRM197蛋白為一種無毒性形式之白喉毒素，但在免疫學上與白喉毒素無法區分。CRM 197係由受無毒噬菌體β197tox感染之白喉棒狀桿菌(Corynebacterium diphtheriae)產生，該無毒噬菌體β197tox由產毒棒狀桿菌噬菌體β之亞硝基胍突變誘發產生(Uchida等人(1971) Nature New Biology 233:8-11)。CRM197蛋白具有與白喉毒素相同的分子量，但因結構基因中之單個鹼基變化(鳥嘌呤變為腺嘌呤)而與白喉毒素不同。此單個鹼基變化引起成熟蛋白中之胺基酸取代(麩胺酸取代甘胺酸)，且消除白喉毒素之毒性特性。CRM197蛋白為醣之安全且有效的T細胞依賴性載體。關於CRM197及其產生之其他細節可例如見於美國專利第5,614,382號中。
在一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為CRM197之A鏈(參見CN103495161)。在一實施例中，本發明之醣結合物的載體蛋白為經由藉由重組大腸桿菌表現而獲得之CRM197之A鏈(參見CN103495161)。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，莢膜多醣全部個別地與CRM 197結合。
在一實施例中，來自上文疫苗中之任一者的肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之莢膜多醣個別地與PD結合。
在一實施例中，來自上文疫苗中之任一者的肺炎鏈球菌血清型18C之莢膜多醣與TT結合。
在一實施例中，來自上文疫苗中之任一者的肺炎鏈球菌血清型19F之莢膜多醣與DT結合。
在一實施例中，來自上文疫苗中之任一者的肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14及/或23F之莢膜多醣個別地與PD結合，來自肺炎鏈球菌血清型18C之莢膜多醣與TT結合且來自肺炎鏈球菌血清型19F之莢膜多醣與DT結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，至少一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，至少兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，至少三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在上文疫苗中之任一者的一實施例中，四種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型15B、22F，且其他兩種血清型係選自由血清型1、3及5組成之群，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、3、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型3、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中選自血清型1、3及5之兩種醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及3之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型3及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為15價肺炎球菌結合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物均與CRM 197結合。
在一較佳實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為20價肺炎球菌結合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物均與CRM 197結合。
本發明之疫苗可包括少量游離載體。當給定載體蛋白以游離及結合形式存在於本發明疫苗中時，未結合形式較佳不超過整個組合物中載體蛋白之總量的5%，且更佳以小於2重量%存在。
在一些實施例中，本發明之疫苗可包含至少一種佐劑。在一些實施例中，本發明之疫苗可包含一種佐劑。術語「佐劑」係指增強針對抗原之免疫反應的化合物或混合物。抗原可主要用作遞送系統，主要用作免疫調節劑，或具有兩者之強力特徵。
適合的佐劑包括適用於哺乳動物(包括人類)之彼等佐劑。已知可在人類中使用之適合的遞送系統型佐劑之實例包括(但不限於)明礬(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)、磷酸鈣、脂質體、水包油乳液(諸如MF59) (4.3% w/v角鯊烯，0.5% w/v 聚山梨醇酯80 (Tween 80)，0.5% w/v脫水山梨糖醇三油酸酯(Span 85))、油包水乳液(諸如Montanide)及聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯) (PLG)微米粒子或奈米粒子。
在一實施例中，本發明之疫苗包含鋁鹽(明礬)(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)作為佐劑。在一較佳實施例中，本文所揭示之疫苗包含磷酸鋁或氫氧化鋁作為佐劑。在一甚至較佳實施例中，本發明之疫苗包含磷酸鋁作為佐劑。
在一些實施例中，本發明之疫苗包含磷酸鋁作為佐劑且最終磷酸鹽濃度在約0.1 mg/mL與約1 mg/ml之間。在一些實施例中，本發明之疫苗包含磷酸鋁作為佐劑且最終磷酸鹽濃度在約0.1 mg/mL與約0.5 mg/ml之間。在一較佳實施例中，本發明之疫苗包含磷酸鋁作為佐劑且最終磷酸鹽濃度為約0.25 mg/ml。
在一實施例中，在添加保存劑之後，將佐劑添加至疫苗中。在一較佳實施例中，在添加2-PE保存劑之後，將佐劑添加至疫苗中。在另一較佳實施例中，在添加2-PE保存劑之後，將磷酸鋁佐劑添加至疫苗中。
增強本發明疫苗之有效性的其他例示性佐劑包括但不限於：(1)水包油乳液調配物(具有或不具有其他特定免疫刺激劑，諸如胞壁醯基肽(參見下文)或細菌細胞壁組分)，諸如(例如) (a) SAF，其含有10%角鯊烯、0.4% Tween 80、5%普洛尼克嵌段聚合物(pluronic blocked polymer) L121及微流化成次微米級乳液或渦旋產生較大粒度乳液的thr-MDP，以及(b) RIBI™佐劑系統(RAS)，(Ribi Immunochem, Hamilton, MT)，其含有2%角鯊烯、0.2% Tween 80及一或多種細菌細胞壁組分，諸如單磷醯基脂質A (MPL)、海藻醣二黴菌酸酯(TDM)及細胞壁骨架(CWS)，較佳MPL + CWS (DETOX™)；(2)皂素佐劑，諸如QS21、STIMULON™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA)、ABISCO® (Isconova, Sweden)或ISCOMATRIX® (Commonwealth Serum Laboratories, Australia)，或由其產生之粒子，諸如免疫刺激複合物(ISCOM)，該等ISCOM可不含額外清潔劑(例如WO 00/07621)；(3)弗氏完全佐劑(Complete Freund's Adjuvant) (CFA)及弗氏不完全佐劑(Incomplete Freund's Adjuvant) (IFA)；(4)細胞介素，諸如介白素(例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12 (例如WO 99/44636))、干擾素(例如γ干擾素)、巨噬細胞群落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)等；(5)單磷醯基脂質A (MPL)或3-O-去醯化MPL (3dMPL) (參見例如GB-2220221、EP0689454)，視情況在與肺炎球菌醣一起使用時實質上不存在明礬(參見例如WO 00/56358)；(6) 3dMPL與例如QS21及/或水包油乳液之組合(參見例如EP0835318、EP0735898、EP0761231)；(7)聚氧化乙烯醚或聚氧化乙烯酯(參見例如WO 99/52549)；(8)與辛苯聚醇組合之聚氧化乙烯脫水山梨糖醇酯界面活性劑(例如WO 01/21207)或與至少一種額外非離子界面活性劑(諸如辛苯聚醇)組合之聚氧化乙烯烷基醚或酯界面活性劑(例如WO 01/21152)；(9)皂素及免疫刺激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷酸) (例如WO 00/62800)；(10)免疫刺激劑及金屬鹽之粒子(參見例如WO 00/23105)；(11)皂素及水包油乳液(例如WO 99/11241)；(12)皂素(例如QS21) + 3dMPL + IM2 (視情況+固醇) (例如WO 98/57659)；(13)充當免疫刺激劑以增強組合物之功效的其他物質。胞壁醯基肽包括N-乙醯基-胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸(thr-MDP)、N-25乙醯基-去甲胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸(nor-MDP)、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺基-L-丙胺酸-2-(1'-2'-二棕櫚醯基-sn-甘油基-3-羥基磷醯基氧基)-乙胺MTP-PE)等。
在本發明之一實施例中，本發明之疫苗包含CpG寡核苷酸作為佐劑。依本文中所用，CpG寡核苷酸係指免疫刺激性CpG寡去氧核苷酸(CpG ODN)，且因此除非另外指示，否則此等術語可互換使用。免疫刺激性CpG寡去氧核苷酸含有一或多個免疫刺激性CPG模體，其為未甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸，視情況在某些較佳的鹼基背景內。CpG免疫刺激性模體之甲基化狀態通常係指二核苷酸中之胞嘧啶殘基。含有至少一個未甲基化CpG二核苷酸之免疫刺激性寡核苷酸為含有藉由磷酸酯鍵與3'鳥嘌呤連接之5'未甲基化胞嘧啶且經由與鐸樣受體9 (TLR-9)結合而活化免疫系統的寡核苷酸。在另一實施例中，免疫刺激性寡核苷酸可含有一或多個甲基化CpG二核苷酸，其將經由TLR9活化免疫系統但不如CpG模體之未甲基化一樣強烈。CpG免疫刺激性寡核苷酸可包含一或多個回文序列，其亦可涵蓋CpG二核苷酸。CpG寡核苷酸已在多個發佈專利、公開專利申請案及其他公開案中描述，包括美國專利第6,194,388號、第6,207,646號、第6,214,806號、第6,218,371號、第6,239,116號；及第6,339,068號。
在本發明之一實施例中，本發明之疫苗包含WO 2010/125480之第3頁、第22行至第12頁、第36行所描述之CpG寡核苷酸中之任一者。
已鑑別出不同類別之CpG免疫刺激性寡核苷酸。此等被稱為A、B、C及P類，且更詳細地描述於WO 2010/125480之第3頁第22行至第12頁第36行。本發明之方法涵蓋此等不同類別之CpG免疫刺激性寡核苷酸之用途。
在一實施例中，本發明之疫苗包含本文所揭示之醣結合物與醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑之組合中的任一者。
除結合物及保存劑以外，本發明之疫苗可包含以下中之一或多者：緩衝劑、鹽、二價陽離子、非離子清潔劑、低溫保護劑(諸如糖)及抗氧化劑(諸如自由基清除劑或螯合劑)或其任何多種組合。
在一實施例中，本發明之疫苗包含緩衝劑。在一實施例中，該緩衝劑具有約3.5至約7.5之pKa。在一些實施例中，緩衝劑為磷酸鹽、丁二酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。在一些實施例中，緩衝劑為丁二酸鹽。在一些實施例中，緩衝劑為組胺酸。在某些實施例中，緩衝劑為最終濃度為1 mM至10 mM之丁二酸鹽。在一個特定實施例中，丁二酸鹽緩衝劑之最終濃度為約5 mM。
在一實施例中，本發明之疫苗包含鹽。在一些實施例中，鹽係選自由以下組成之群：氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。在一個特定實施例中，鹽為氯化鈉。在一個特定實施例中，本發明之免疫原組合物包含150 mM之氯化鈉。
在一實施例中，本發明之疫苗包含界面活性劑。在一實施例中，界面活性劑係選自由以下組成之群：聚山梨醇酯20 (TWEENTM20)、聚山梨醇酯40 (TWEENTM40)、聚山梨醇酯60 (TWEEN™60)、聚山梨醇酯65 (TWEEN™65)、聚山梨醇酯80 (TWEEN™80)、聚山梨醇酯85 (TWEEN™85)、TRITON™ N-101、TRITON™ X-100、辛苯聚醇40、壬苯聚醇-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸酯、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG-15、Solutol H 15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(CREMOPHOR® EL)、大豆卵磷脂及泊洛沙姆。
在一個較佳實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.0001%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯80。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.001%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯80。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為至少0.01%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯80。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯80 (w/w)。在一較佳實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度在0.01%與0.03%之間。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.02%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.01%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.03%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.04%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為0.05%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯80之最終濃度為1%聚山梨醇酯80 (w/w)。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為至少0.01%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯20。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為至少0.1%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯20。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為至少0.1%至0.5%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯20。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%聚山梨醇酯20 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.2%聚山梨醇酯20 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.1%聚山梨醇酯20 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.3%聚山梨醇酯20 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.4%聚山梨醇酯80 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.5%聚山梨醇酯20 (w/w)。在一較佳實施例中，調配物中聚山梨醇酯20之最終濃度為0.2%聚山梨醇酯20 (w/w)。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯40。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯40之最終濃度為至少0.0001%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯40。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯40之最終濃度為至少0.001%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯40。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯40之最終濃度為至少0.01%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯40。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯40之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯40 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯40之最終濃度為1%聚山梨醇酯40 (w/w)。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯60。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯60之最終濃度為至少0.0001%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯60。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯60之最終濃度為至少0.001%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯60。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯60之最終濃度為至少0.01%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯60。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯60之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯60 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯60之最終濃度為1%聚山梨醇酯60 (w/w)。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯65。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯65之最終濃度為至少0.0001%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯65。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯65之最終濃度為至少0.001%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯65。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯65之最終濃度為至少0.01%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯65。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯65之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯65 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯65之最終濃度為1%聚山梨醇酯65 (w/w)。
在一個特定實施例中，界面活性劑為聚山梨醇酯85。在某一該實施例中，調配物中聚山梨醇酯85之最終濃度為至少0.0001%至10%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯85。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯85之最終濃度為至少0.001%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯85。在一些該等實施例中，調配物中聚山梨醇酯85之最終濃度為至少0.01%至1%重量/重量(w/w)之聚山梨醇酯85。在其他實施例中，調配物中聚山梨醇酯85之最終濃度為0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%或0.1%聚山梨醇酯85 (w/w)。在另一實施例中，調配物中聚山梨醇酯85之最終濃度為1%聚山梨醇酯85 (w/w)。
在某些實施例中，本發明之疫苗具有5.5至7.5之最終pH，更佳5.6至7.0之最終pH，甚至更佳5.3至6.3之最終pH。在一較佳實施例中，本發明之疫苗具有5.8至6.0之最終pH。在另一較佳實施例中，本發明之疫苗具有5.8之最終pH。
在一些實施例中，本發明之疫苗具有約50 µg/ml與約150 µg/ml之間的最終蛋白濃度。在一較佳實施例中，本發明之疫苗具有約60 µg/ml與約130 µg/ml之間的最終蛋白濃度。在另一較佳實施例中，本發明之疫苗具有約90 µg/ml與約99 µg/ml之間的最終蛋白濃度。在又一較佳實施例中，本發明之疫苗具有約99 µg/ml之最終蛋白濃度。
在一些實施例中，本發明之疫苗具有約3,000與約6,000之間的最終D10粒度分佈。在另一實施例中，本發明之疫苗具有約4,000與約5,000之間的最終D10粒度分佈。在一較佳實施例中，本發明之疫苗具有約4,300與約4,700之間的最終D10粒度分佈。在一些實施例中，本發明之疫苗具有約6,000與約8,000之間的最終D50粒度分佈。在另一實施例中，本發明之疫苗具有約7,000與約8,000之間的最終D50粒度分佈。在一較佳實施例中，本發明之疫苗具有約7,500與約7,900之間的最終D50粒度分佈。在一些實施例中，本發明之疫苗具有約10,000與約16,000之間的最終D90粒度分佈。在另一實施例中，本發明之疫苗具有約12,000與約15,000之間的最終D90粒度分佈。在一較佳實施例中，本發明疫苗具有約12,300與約14,900之間的最終D90粒度分佈。
用於注射之本發明疫苗的典型劑量具有0.1 mL至2 mL之體積。在一實施例中，用於注射之本發明疫苗具有0.2 mL至1 mL之體積，甚至更佳約0.5 mL之體積。最佳地，用於注射之本發明疫苗具有0.5 mL之體積。
各劑量中之醣結合物之量被選定為在典型疫苗接種者中誘導免疫保護性反應而無明顯不良副作用之量。此種量將視採用何種特定免疫原及其呈現方式而變化。
疫苗中之特定醣結合物之量可基於彼結合物之總多醣(結合及未結合)來計算。舉例而言，在100 µg多醣劑量中，具有20%游離多醣之醣結合物將具有約80 µg之結合多醣及約20 µg之未結合多醣。醣結合物之量可視肺炎球菌血清型而變化。可藉由醣醛酸分析來測定醣濃度。
疫苗中不同多醣組分之「免疫原性量」可相異。一般而言，各劑量將包含0.1 µg至100 µg之針對給定血清型之多醣。在一實施例中，各劑量將包含0.1 µg至100 µg之針對給定血清型之多醣。在一較佳實施例中，各劑量將包含0.5 µg至20 µg。在一較佳實施例中，各劑量將包含1.0 µg至10 µg。在一甚至較佳實施例中，各劑量將包含2.0 µg至5.0 µg之針對給定血清型之多醣。考慮以上範圍中之任一者內之任何全數整數作為本發明之一實施例。
在一實施例中，各劑量將包含約1.1 μg、約1.2 μg、約1.3 μg、約1.4 μg、約1.5 μg、約1.6 μg、約1.7 μg、約1.8 μg、約1.9 μg、約2.0 μg、約2.1 μg、約2.2μg、約2.3 μg、約2.4 μg、約2.5 μg、約2.6 μg、約2.7 μg、約2.8 μg、約2.9 μg或約3.0 μg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.2 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及/或33F之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約4.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約4.4 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約1.5 µg至約3.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約3.0 µg至約6.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg至約2.5 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.0 µg至約4.8 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.2 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.4 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約1.5 µg至約3.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約3 µg至約6 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg至約2.5 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.0 µg至約4.8 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約1.5 µg至約3.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9N、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約3 µg至約6 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg至約2.5 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9N、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.0 µg至約4.8 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
在一實施例中，各劑量將包含約2.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、7F、9N、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之各醣結合物的多醣，以及約4.0 µg之來自肺炎鏈球菌血清型6B之醣結合物的多醣。
一般而言，各劑量將包含10 µg至150 µg之總量的載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含10 µg至150 µg之總量的載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含25 µg至75 µg之總量的載體蛋白。在一較佳實施例中，各劑量將包含40 µg至60 µg之總量的載體蛋白。在一實施例中，該載體蛋白為CRM 197。
在一實施例中，各劑量將包含約30 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約31 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約32 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約33 µg之載體蛋白。在一較佳實施例中，各劑量將包含約34 µg之載體蛋白。
在一較佳實施例中，疫苗為13價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約34 µg之載體蛋白。在一實施例中，該載體蛋白為CRM 197。
在另一較佳實施例中，疫苗為15價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約30 µg之載體蛋白。在一實施例中，該載體蛋白為CRM 197。
在一實施例中，各劑量將包含約40 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約41 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約42 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約43 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約44 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約45 µg之載體蛋白。
在一較佳實施例中，疫苗為16價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約42 µg之載體蛋白。在一實施例中，該載體蛋白為CRM 197。
在一實施例中，各劑量將包含約48 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約49 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約50 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約51 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約52 µg之載體蛋白。在一實施例中，各劑量將包含約53 µg之載體蛋白。
在一較佳實施例中，疫苗為20價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約50 µg之載體蛋白。在一實施例中，該載體蛋白為CRM 197。
在一較佳實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為20價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.2 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者，以及約4.4 μg之莢膜多醣血清型6B、約50 μg之CRM 197、2-PE、0.125 mg作為磷酸鋁佐劑之元素鋁、100 μg 聚山梨醇酯80、氯化鈉及丁二酸鹽緩衝劑。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為15價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.0 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者，以及約4.0 μg之莢膜多醣血清型6B、約30 μg之CRM 197、2-PE、0.125 mg作為磷酸鋁佐劑之元素鋁、氯化鈉及L-組胺酸緩衝劑。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為15價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.0 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者，以及約4.0 μg之莢膜多醣血清型6B、約30 μg之CRM 197、2-PE、0.125 mg作為磷酸鋁佐劑之元素鋁、聚山梨醇酯20、氯化鈉及L-組胺酸緩衝劑。
在一些實施例中，疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約1 μg至約30 μg之TT及約20 μg至約85 μg之CRM 197。
在一些實施例中，疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗且各劑量包含約2 μg至約25 μg之TT及約40 μg至約75 μg之CRM 197。
在一些實施例中，疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、5、6A、7F、8、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、22F、23F及33F中之各者以及約4 μg至約5 μg之莢膜多醣血清型3、4、6B、9V、19A及19F。
在一些實施例中，疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4至約5 μg之莢膜多醣血清型3及6B。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4至約5 μg之莢膜多醣血清型6B。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.2 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4.4 μg之莢膜多醣血清型6B。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、5、6A、7F、8、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、22F、23F及33F中之各者以及約4至約5 μg之莢膜多醣血清型3、4、6B、9V、19A及19F中之各者。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.2 μg之莢膜多醣血清型1、5、6A、7F、8、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、22F、23F及33F中之各者以及約4.4 μg之莢膜多醣血清型3、4、6B、9V、19A及19F中之各者。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4至約5 μg之莢膜多醣血清型6B、約2 μg至約25 μg之TT及約40 μg至約75 μg之CRM 197。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2 μg至約2.5 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4至約5 μg之莢膜多醣血清型6B、約2 μg至約25 μg之TT、約40 μg至約75 μg之CRM 197、2-PE、0.125至0.250 mg元素鋁佐劑、氯化鈉及丁二酸鹽緩衝劑。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.2 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4.4 μg之莢膜多醣血清型6B、約2 μg至約25 μg之TT、約40 μg至約75 μg之CRM 197、2-PE、0.125至0.250 mg元素鋁佐劑、氯化鈉及丁二酸鹽緩衝劑。
在一實施例中，本發明之肺炎球菌結合型疫苗為21價肺炎球菌結合型疫苗，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合，且各劑量包含約2.2 μg之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約4.4 μg之莢膜多醣血清型6B、約2 μg至約25 μg之TT、約40 μg至約75 μg之CRM 197、2-PE、0.125至0.250 mg元素鋁佐劑、聚山梨醇酯80、氯化鈉及丁二酸鹽緩衝劑。
在一較佳實施例中，本發明疫苗之劑量為0.5 mL劑量。
依本文所用，術語「約」意謂在統計學上有意義之值範圍內，諸如2-PE、多醣、載體蛋白之規定量、緩衝劑之濃度、體積或pH。此類範圍可在給定值或範圍之一數量級內，通常在20%內，更通常在10%內，且甚至更通常在5%內或在1%內。有時，此類範圍可能在用於量測及/或測定給定值或範圍之標準方法的典型實驗誤差內。術語「約」所涵蓋之容許偏差將取決於所研究之特定系統，且可由一般熟習此項技術者容易地理解。每當在本申請案中敍述一個範圍時，亦考慮該範圍內之每個數目作為本發明之一實施例。
本發明人意欲在各情況下使本文中之術語「包含(comprising/comprise/comprises)」視情況可分別替換為術語「基本上由…組成(consisting essentially of/consist essentially of/consists essentially of)」及「由…組成(consisting of/consist of/consists of)」。
「免疫原性量」、「免疫有效量」、「治療有效量」、「預防有效量」或「劑量」中之各者在本文中可互換使用，通常係指藉由熟習此項技術者已知之標準分析所量測，足以誘發免疫反應，亦即細胞(T細胞)或體液(B細胞或抗體)反應或兩種反應的抗原或免疫原組合物之量。
考慮本文件之範圍中之任一者內之任何全數整數作為本發明之一實施例。
在本專利說明書內引用之所有參考文獻或專利申請案均以引用之方式併入本文中。
在隨附實例中說明本發明。除非另外詳細描述，否則使用熟習此項技術者所熟知且常用的標準技術進行以下實例。實例為說明性的，而非限制本發明。
實例 實例 1 2 - 苯氧基乙醇 ( 2 - PE ) 之溶解度此研究之目標為評估2-苯氧基乙醇(2-PE)之溶解時間及溶解度。在丁二酸鹽緩衝鹽水(SBS) (5 mM丁二酸鹽，150 mM NaCl，pH 5.8)中在以下濃度下評估2-PE溶解及濃度；11 g/L，16.5 g/L及20 g/L。
將適量2-PE稱量於400 mL燒杯中且添加適量丁二酸鹽緩衝鹽水。攪拌速度為300 rpm且溶液溫度為約20℃。基於目視觀測記錄完全溶解時間。藉由RP-HPLC來量測2-PE濃度。
溶解時間結果顯示於表1中且2-PE濃度結果顯示於表2中。20 mg/mL 2PE於丁二酸緩衝鹽水中之本體溶解時間(15分鐘)長於11 mg/mL (7分鐘)及16.5 mg/mL (9分鐘)樣品。在完成前兩個溶解測試(11 mg/mL及16.5 mg/mL)之後注意到少數小粒子，但在初始混合速度(300 rpm)下未追蹤到完全溶解。基於此等觀測結果，監測20 mg/mL樣品之完全溶解時間。對於20 mg/mL樣品，(所有小粒子之)完全溶解時間為35分鐘。 表 1 . 溶解時間
樣品 2 - PE 本體 溶解時間 * 2 - PE 完全溶解時間
11 mg/mL 2-PE ( SBS中) 7分鐘 沒有記錄
16.5 mg/mL 2-PE ( SBS中) 9分鐘 在9分鐘之後，攪拌速度顯著增加
20 mg/mL 2-PE ( SBS中) 15分鐘 35分鐘
*除至多約5個小粒子以外，所有2-PE均溶解 表 2 . 2 - PE 濃度
樣品 目標 2 - PE 濃度 (mg/mL) 所量測之 2 - PE 濃度 (mg/mL) 百分率 差值 *
11 mg/mL 2-PE ( SBS中) 11.0 10.5 -4.5%
16.5 mg/mL 2-PE ( SBS中) 16.5 15.6 -5.5%
20 mg/mL 2-PE ( SBS中) 20.0 19.1 -4.5%
*計算：% = (量測值-目標值)/目標值×100
2-PE濃度資料表明在20℃下2-PE在19.1 mg/mL或更高下可溶於丁二酸鹽緩衝鹽水(pH 5.8)中。
所量測之2-PE濃度結果均比目標濃度低約5%。由於百分率差值在所有濃度下均一致，所以對於20 mg/mL樣品低於目標值5%之量測結果未預期顯示達到2-PE在丁二酸鹽緩衝鹽水中之溶解限度(在20℃下)。
實例 2 當暴露於包含 2 - 苯氧基乙醇之多價結合物池 (Conjugate Pool) 時對聚醚碸 ( PES ) 膜 ( 0 . 5 μ m / 0 . 2 μ m ) 過濾器之過濾器完整性的影響此研究之目標為評定當暴露於20價結合物池調配物至少48小時之時，對PES膜(0.5 μm/0.2 μm)過濾器之過濾器完整性的影響。已對過濾器膜及過濾器裝置兩者進行測試。相容性測試亦適用於相同過濾器系列中之其他過濾器尺寸。
用17 mg/mL 2-苯氧基乙醇(最終濃度)來調配20價結合物池(肺炎鏈球菌多醣血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之結合物，其各自以約7.5 µg/ml之濃度與CRM 197結合(但對於6B，以約15 µg/ml)；5.5 mM丁二酸鹽緩衝劑pH 5.8；0.033% (w/w) PS80；約150 mM NaCl；參見WO2015110941)。結合物之濃度係基於醣含量(蒽酮醣濃度)。
結合物池中17 mg/mL之2-PE相當於用緩衝劑最終稀釋且添加磷酸鋁(AlPO4)後最終藥品中的10 mg/mL之2-PE。
對於各過濾器，藉由經1 L去離子(DI)水過濾來徹底潤濕兩個膠囊過濾器。兩個過濾器隨後在環境溫度(22±4℃)下經歷使用前過濾器完整性測試(FIT)。在兩個過濾器通過使用前FIT之後，將含有17 mg/mL 2-PE之結合物池材料填充至各過濾器裝置中。結合物池材料在各過濾器裝置中在22±4℃下經歷靜態保持(static hold)達最少48小時。48小時後，自過濾器裝置排出結合物池材料，隨後將材料用2 L之去離子水沖洗。兩個過濾器裝置隨後在22±4℃下經歷使用後FIT。
通過FIT之驗收標準為膠囊過濾器之額定起泡點，其由製造商提供[≥4000 mbar (≥58 psi)水汽]。
結果提供於表3中。 表 3 . 膠囊過濾器之過濾 器完整性測試結果
過濾器 製造商額定起泡點 a 使用前起泡點 使用後起泡點 b
1 ≥58 psi水汽 ＞80 psi ＞80 psi
2 ≥58 psi水汽 ＞80 psi ＞80 psi
a.在23℃下之起泡點 b.在暴露於PCV20 MDV結合物池48小時後進行之使用後測試
此研究結果顯示，當暴露於結合物池調配物中至少48小時之時，未對聚醚碸(PES)膜(0.5 μm/0.2 μm)過濾器之過濾器完整性產生影響。兩個過濾器皆通過使用前及使用後完整性測試。
相容性測試亦適用於相同過濾器系列中之其他過濾器尺寸。
實例 3 多價結合物池中 2 - 苯氧基乙醇之添加及混合速率此研究之目標為測定在結合物池中溶解2-PE而不顯著增加中間物溶液之濁度所需的添加速率及混合速度。
顯示具有17 mg/mL及20 mg/mL 2PE之20價結合物池的調配物(參見實例2)之濁度顯著增加。對於兩種調配物，將2-PE添加至結合物池而不在添加期間及之後控制2-PE添加或結合物池混合之速率。假設此等兩個因素在所觀測到之濁度增加中起作用。
進行研究以理解是否需要控制2-PE向結合物池中之添加。
研究評估了2-PE添加速率及混合速度在2-PE溶解於結合物池中的潛在作用。
在不添加2-PE情況下調配1.97 L之20價結合物池(參見實例2)，目標最終體積為2 L且目標最終2-PE濃度為15 mg/mL。將本體結合物池分成197 mL等分試樣，以在不同添加及混合速率下將2-PE添加至個別等分試樣。
所評估之等分試樣列於表4中： 表 4 . 結合物池等分試樣
等分試樣 添加速率 總添加時間 添加之縮放速率 混合參數
 20價結合物池 0 0 0 N/A
即時添加2-PE且延遲混合 N/A 約3秒 N/A  30分鐘延遲，在200 RPM下連續混合2小時
即時添加2-PE且即時混合 N/A    約3秒    N/A    在200 RPM下連續混合2小時
以3 mL/分鐘添加2-PE且即時混合 3 mL/分鐘 0.9分鐘 15.1 mL/分鐘/L 在200 RPM下連續混合2小時
以1 mL/分鐘添加2-PE且即時混合 1 mL/分鐘 2.71分鐘 5 mL/分鐘/L 在200 RPM下連續混合2小時
以0.1 mL/分鐘添加2-PE且即時混合 0.1 mL/分鐘 27.1分鐘    0.5 mL/分鐘/L 在200 RPM下連續混合2小時
對於各等分試樣，將197 mL之結合物池添加至250 mL玻璃燒杯中。將各燒杯置放於混合盤上且附加磁性攪拌。使用5 mL具有21 G 1''不鏽鋼針頭之一次性注射器手動將2.71 mL之2-PE的即時添加等分試樣(添加3 g之2-PE，2-PE密度為1.107 g/ml)立即(亦即一次性把所有)添加至結合物池中。對於添加速率受控之等分試樣，使用相同注射器及針頭將2-PE (相同量)添加至混合結合物池中，但使用自動化注射泵控制分配2-PE之速率。將注射泵程式化以在上文指定速率下自注射器添加2-PE。對於所有等分試樣，將混合盤設定在200 RPM下持續2小時。即時添加且延遲混合使得在2-PE添加完成後延遲混合30分鐘。
在2-PE溶解之後使用藉由評估等分結合物池之目視外觀的定性方法。拍攝視訊以捕獲將2-PE添加至等分結合池的過程。在添加2-PE後混合2小時之後拍攝所有等分試樣圖像，且在外觀盒中比較彼此外觀。
儘管以1 mL/分鐘添加並即時混合以及以0.1 mL/分鐘添加並即時混合似乎消除所觀測到之濁度，但當接近光源置放時，在此等等分試樣中觀測到相比於對照結合物池(無2-PE)濁度略微增加。
此研究之結果顯示在添加2-PE之後，結合物池中之濁度視添加速率及混合時間而定。即時添加且延遲混合之等分試樣的目視外觀比即時添加且即時混合之等分試樣明顯更混濁，表明將2-PE添加至結合物池同時混合對濁度形成具有直接影響。
添加速率受控之等分試樣的濁度明顯比即時添加之等分試樣低。此外，2-PE之較慢添加速率與2-PE溶解完成之後結合物池中之濁度降低相關。
實例 4 對添加 2 - 苯氧基乙醇 ( 2 - PE ) 以調配多價結合型疫苗的評估此研究之目標為評估在調配用明礬作為佐劑之20價結合型疫苗的方法中添加2-PE。
已將2-PE添加至：1-最終經調配之本體疫苗或2-及3-在最終調配之前以兩種不同速率添加至結合物池。
主要評估之方法步驟為添加2-PE、過濾及添加佐劑(AlPO 4)。
1 ： 將 2 - PE 添加至最終調配之本體疫苗中將20價結合物池(參見實例2)以200 rpm混合且維持至少5分鐘。
獲取預過濾樣品(135 ml)。使用約76.3之產物體積:過濾器表面積比率(L/m2)過濾(0.5/0.2 µm聚醚碸(PES)過濾器)結合物池樣品。使用蠕動泵啟動過濾。在過濾總體積之大約一半之後，藉由停止蠕動泵暫停過濾操作。在重新開始過濾操作之前將產物保持在過濾器中至少30分鐘，以評估製造期間之過濾暫停。
獲取過濾後樣品。
添加丁二酸鹽緩衝鹽水及AlPO 4(最終濃度5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)、150 mM氯化鈉及0.25 mg/mL呈磷酸鋁(AlPO4)形式之鋁)，且將最終藥品混合至少120分鐘。
使用注射泵添加2-PE且記錄2-PE添加之總時間—2-PE添加參數參見表5。
在2-PE添加後混合120分鐘之後，停止混合。
2 : 在最終調配之前以 5 . 0 mL / 分鐘 / L 之速率將 2 - PE 添加至結合物池中 ( 以 5 . 5 g / 分鐘 / L 添加 2 - PE )將4L之20價結合物池(參見實例2)添加至5L玻璃容器中。已啟動在200 rpm下混合且維持至少5分鐘。
已使用注射泵以20 mL/分鐘添加2-PE——2-PE添加參數參見表5。
在2-PE添加完成之後，自容器頂部/底部獲取樣品。
記錄藉由目視觀測所測定之2-PE溶解時間——參見表7。
在混合120分鐘之後，停止混合。
獲取預過濾樣品(135 ml)且拍攝相片。
使用約76.3之產物體積:過濾器表面積比率(L/m2)過濾(0.5/0.2 µm聚醚碸(PES)過濾器)結合物池樣品。使用蠕動泵啟動過濾。在過濾總體積之大致一半之後，藉由停止蠕動泵暫停過濾操作。在重新開始過濾操作之前將產物保持在過濾器中至少30分鐘，且測定過濾器保持時間。
獲取過濾後樣品。
添加丁二酸鹽緩衝鹽水及AlPO 4(最終濃度5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)、150 mM氯化鈉及0.25 mg/mL呈磷酸鋁(AlPO4)形式之鋁)，且將最終藥品混合至少120分鐘。
3 ： 在最終調配之前向結合物池中快速添加 2 - PE已將400mL之20價結合物池(參見實例2)添加至500 mL玻璃容器中。已啟動在200 rpm下混合且維持至少5分鐘。
已使用注射器添加(儘可能快速地添加)2-PE且記錄2-PE添加之總時間及量——2-PE添加參數參見表5。
在混合120分鐘之後，停止混合。
獲取預過濾樣品(135 ml)且拍攝相片。 使用約76.3之產物體積:過濾器表面積比率(L/m2)過濾(0.5/0.2 µm聚醚碸(PES)過濾器)結合物池樣品。使用蠕動泵啟動過濾。在過濾總體積之大致一半之後，藉由停止蠕動泵暫停過濾操作。在重新開始過濾操作之前將產物保持在過濾器中至少30分鐘，且測定過濾器保持時間。
獲取過濾後樣品。
添加丁二酸鹽緩衝鹽水及AlPO 4(最終濃度5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)、150 mM氯化鈉及0.25 mg/mL呈磷酸鋁(AlPO4)形式之鋁)，且將最終藥品(DP)混合至少120分鐘。 表 5 . 2 - PE 添加參數
參數 2 - PE 添加至最終本體中 以 5 . 0 mL / 分鐘 / L 之速率添加 2 - PE 快速添加 2 - PE
添加之2-PE(g) 1.35  60 g 6 g
2-PE添加時間 2.7分鐘 2.7分鐘 0.13分鐘
2-PE密度 1.107 g/mL 1.107 g/mL 1.107 g/mL
在添加2-PE後之結合物池體積 N/A 4 L 0.4 L
在添加2-PE後之本體DP體積 0.15 L N/A N/A
2-PE添加速率 3.0 mL/分鐘/L 5.0 mL/分鐘/L 104.2 mL/分鐘/L
混合速度攪拌 (rpm) 200 200 200
結果： 此研究藉由調配批料評估2-PE添加之選擇，包括將2-PE添加至結合物池中、將2-PE快速添加至結合物池中及將2-PE添加至最終藥品中。對於將2-PE添加至結合物池中，資料顯示2-PE均勻擴散至本體材料中。在三種預過濾樣品中之任一者中未觀測到顯著濁度。評定藥品之各種品質屬性，且藥品符合所有驗收標準。此等結果證明(在添加AlPO 4之前且在無菌過濾之前)將2-PE添加至結合物池中之可行性。
本發明之態樣 以下條項描述本發明之其他實施例： C1.       一種用於製造包含保存劑之結合型疫苗的方法，該方法包含以下步驟： (a)         將保存劑自本體溶液添加至包含一或多種結合物之溶液中，其中該保存劑在未經無菌過濾之情況下添加；及 (b)         隨後將包含該保存劑及該一或多種結合物之混合物進行無菌過濾。 C2.       如C1之方法，其進一步包含步驟：(c)隨後添加佐劑。 C3.       如C2之方法，其中該佐劑為磷酸鋁。 C4.       如C3之方法，其中該疫苗中磷酸鋁之最終濃度在約0.1 mg/mL與約0.5 mg/ml之間。 C5.       如C4之方法，其中疫苗中磷酸鋁之最終濃度為約0.25 mg/ml。 C6.       如C1至C5中任一項之方法，其中該保存劑在本體溶液之濃度下具疏水性及黏性。 C7.       如C1至C6中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下為至少10厘司。 C8.       如C1至C6中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下為至少15厘司。 C9.       如C1至C6中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下為至少20厘司。 C10.     如C1至C6中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下係在約10至約50厘司之間。 C11.     如C1至C6中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下係在約15至約25厘司之間。 C12.     如C1至C11中任一項之方法，其中該保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)、苯酚、間甲苯酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯或硫柳汞。 C13.     如C1至C11中任一項之方法，其中該保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)或硫柳汞。 C14.     如C1至C13中任一項之方法，其中該保存劑未經稀釋即添加。 C15.     如C1至C14中任一項之方法，其中保存劑之本體溶液為未經稀釋之純保存劑。 C16.     如C1至C15中任一項之方法，其中該保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)。 C17.     如C1至C16中任一項之方法，其中該本體溶液為純2-苯氧基乙醇(2-PE)。 C18.     如C17之方法，其中在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約10倍與約200倍之間。 C19.     如C17之方法，其中在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約50倍、約60倍、約70倍或約80倍。 C20.     如C17之方法，其中在步驟(a)後溶液中2-PE被稀釋約73倍與約74倍之間。 C21.     如C16至C20中任一項之方法，其中在步驟(a)後溶液中2-PE之濃度在約1 mg/ml與約25 mg/ml之間。 C22.     如C16至C20中任一項之方法，其中在步驟(a)後溶液中之2-PE之濃度在約10 mg/ml與約20 mg/ml之間。 C23.     如C16至C20中任一項之方法，其中在步驟(a)後溶液中之2-PE之濃度在約15 mg/ml與約17 mg/ml之間。 C24.     如C16至C20中任一項之方法，其中在步驟(a)後溶液中之2-PE之濃度為約15 mg/ml。 C25.     如C16至C20中任一項之方法，其中在步驟(a)後溶液中之2-PE之濃度為約17 mg/ml。 C26.     如C16至C25中任一項之方法，其中以約0.5 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液至約5.0 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液之間的添加速率添加2-PE。 C27.     如C16至C25中任一項之方法，其中以約1 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液至約4.0 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物之溶液之間的添加速率添加2-PE。 C28.     如C17至C27中任一項之方法，其中使用泵添加純2-PE。 C29.     如C17至C27中任一項之方法，其中使用蠕動泵添加純2-PE。 C30.     如C17至C27中任一項之方法，其中用使用聚矽氧或聚胺基甲酸酯管之蠕動泵添加純2-PE。 C31.     如C17至C27中任一項之方法，其中用使用熱塑性彈性體管之蠕動泵添加純2-PE。 C32.     如C16至C31中任一項之方法，其中該疫苗中2-PE之最終濃度在約5 mg/ml至約15 mg/ml之間。 C33.     如C16至C31中任一項之方法，其中該疫苗中2-PE之最終濃度在約7 mg/ml至約12 mg/ml之間。 C34.     如C16至C31中任一項之方法，其中該疫苗中2-PE之最終濃度為約10 mg/ml。 C35.     如C16至C31中任一項之方法，其中該疫苗中2-PE之最終濃度為約9 mg/ml。 C36.     如C1至C35中任一項之方法，其中步驟(a)後之溶液體積在約100 L與約500 L之間。 C37.     如C1至C35中任一項之方法，其中步驟(a)後之溶液體積為約180 L。 C38.     如C1至C37中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑。 C39.     如C38之方法，其中在添加保存劑與開始混合之間不存在延遲。 C40.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約50 rpm至約500 rpm之間。 C41.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約100 rpm至約400 rpm之間。 C42.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約150 rpm至約300 rpm之間。 C43.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度在約150 rpm至約200 rpm之間。 C44.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度為約150 rpm。 C45.     如C1至C39中任一項之方法，其中在連續混合下添加保存劑，其中角速度為約200 rpm。 C46.     如C1至C45中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約15分鐘至約5小時之間。 C47.     如C1至C45中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約30分鐘至約3小時之間。 C48.     如C1至C45中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約1小時至約3小時之間。 C49.     如C1至C45中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約2小時。 C50.     如C1至C49中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液以約50 rpm與約500 rpm之間的角速度混合。 C51.     如C1至C49中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液以約100 rpm與約400 rpm之間的角速度混合。 C52.     如C1至C49中任一項之方法，其中在添加保存劑之後且在無菌過濾之前，將溶液以約150 rpm與約300 rpm之間的角速度混合。 C53.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為單價組合物。 C54.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為二價、三價、四價、五價或六價組合物。 C55.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為包含七種或更多種結合物之多價組合物。 C56.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為7至25價組合物。 C57.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為13至25價組合物。 C58.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為15價組合物。 C59.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為16價組合物。 C60.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價組合物。 C61.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價組合物。 C62.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為多價肺炎球菌結合物組合物。 C63.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為包含7至25種來自肺炎鏈球菌之不同血清型的醣結合物之肺炎球菌結合物組合物。 C64.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為包含來自15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25種不同血清型之肺炎鏈球菌之結合物的肺炎球菌結合物組合物。 C65.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為包含來自20種不同血清型之肺炎鏈球菌之結合物的肺炎球菌結合物組合物。 C66.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20價肺炎球菌結合物組合物。 C67.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物。 C68.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物。 C69.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物。 C70.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為22價肺炎球菌結合物組合物。 C71.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21、22、23、24或25價肺炎球菌結合物組合物。 C72.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型4、6B、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。 C73.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。 C74.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F之醣結合物。 C75.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F之醣結合物。 C76.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。 C77.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。 C78.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。 C79.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F之醣結合物。 C80.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為10價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等10種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F及23F。 C81.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為13價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等13種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F及23F。 C82.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C83.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C84.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C85.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C86.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為22價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等22種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C87.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C88.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23A、23F及33F。 C89.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23B、23F及33F。 C90.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F、24F及33F。 C91.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F、33F及35B。 C92.     如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。 C93.     如C63至C92中任一項之方法，其中醣結合物之載體蛋白為TT、CRM 197或來自鏈球菌之C5a肽酶(SCP)。 C94.     如C63至C92中任一項之方法，其中醣結合物之載體蛋白為CRM 197。 C95.     如C63至C92中任一項之方法，其中至少一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C96.     如C63至C92中任一項之方法，其中一種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C97.     如C63至C92中任一項之方法，其中至少兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C98.     如C63至C92中任一項之方法，其中兩種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C99.     如C63至C92中任一項之方法，其中至少三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C100.  如C63至C92中任一項之方法，其中三種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C101.  如C63至C92中任一項之方法，其中四種莢膜多醣與TT結合且其他莢膜多醣全部與CRM 197結合。 C102.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型15B、22F，且其他兩種血清型係選自由血清型1、3及5組成之群，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C103.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C104.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型1、3、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C105.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中四種莢膜多醣與TT結合，其中與TT結合之四種莢膜多醣為血清型3、5、15B及22F，且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C106.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中選自血清型1、3及5之兩種醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C107.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及3之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C108.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型1及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C109.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為21價肺炎球菌結合物組合物，其中該等21種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中來自血清型3及5之醣結合物與TT結合且其他醣結合物全部與CRM 197結合。 C110.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物與CRM 197結合。 C111.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中所有醣結合物與CRM 197結合。 C112.  如C1至C111中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。 C113.  如C1至C111中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含以下中之一或多者：緩衝劑、鹽、二價陽離子、非離子清潔劑、低溫保護劑(諸如糖)及抗氧化劑(諸如自由基清除劑或螯合劑)或其任何多種組合。 C114.  如C1至C111中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含緩衝劑。 C115.  如C114之方法，其中該緩衝劑具有約3.5至約7.5之pKa。 C116.  如C114之方法，其中該緩衝劑為磷酸鹽、丁二酸鹽、組胺酸或檸檬酸鹽。 C117.  如C114之方法，其中該緩衝劑為丁二酸鹽。 C118.  如C114之方法，其中該緩衝劑為組胺酸。 C119.  如C114之方法，其中該緩衝劑為濃度為10 mM至30 mM之組胺酸。 C120.  如C114之方法，其中該緩衝劑為濃度為15 mM至25 mM之組胺酸。 C121.  如C114之方法，其中該緩衝劑為濃度為約22 mM之組胺酸。 C122.  如C114之方法，其中該緩衝劑為濃度為1 mM至10 mM之丁二酸鹽。 C123.  如C114之方法，其中該緩衝劑為濃度為約5.5 mM之丁二酸鹽。 C124.  如C1至C123中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含鹽。 C125.  如C124之方法，其中該鹽為氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉及其組合。 C126.  如C124之方法，其中該鹽為氯化鈉。 C127.  如C1至C123中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含約150 mM氯化鈉。 C128.  如C1至C127中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液包含界面活性劑。 C129.  如C128之方法，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、TRITON™ N-101、TRITON™ X-100、辛苯聚醇40、壬苯聚醇-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸酯、聚氧化乙烯-660羥基硬脂酸酯(PEG-15、Solutol H 15)、聚氧化乙烯-35-蓖麻油酸酯(CREMOPHOR® EL)、大豆卵磷脂及泊洛沙姆。 C130.  如C129之方法，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。 C131.  如C129之方法，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯20。 C132.  如C131之方法，其中溶液中聚山梨醇酯20之濃度為在0.01%至1%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯20。 C133.  如C131之方法，溶液中聚山梨醇酯20之濃度為在0.1%至0.5%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯20。 C134.  如C131之方法，其中溶液中聚山梨醇酯20之濃度為約0.1%、約0.2%、約0.3%、約0.4%、約0.5%或約0.6%聚山梨醇酯20 (w/w)。 C135.  如C131之方法，其中溶液中聚山梨醇酯20之濃度為約0.33%聚山梨醇酯20 (w/w)。 C136.  如C129之方法，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯80。 C137.  如C136之方法，其中溶液中聚山梨醇酯80之濃度為在0.001%至1%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯80。 C138.  如C136之方法，溶液中聚山梨醇酯80之濃度為在0.01%至0.5%重量/重量(w/w)之間的聚山梨醇酯80。 C139.  如C136之方法，其中溶液中聚山梨醇酯80之濃度為約0.01%、約0.02%、約0.03%、約0.04%、約0.05%或約0.06%聚山梨醇酯80 (w/w)。 C140.  如C136之方法，其中溶液中聚山梨醇酯80之濃度為約0.033%聚山梨醇酯80 (w/w)。 C141.  如C136之方法，其中疫苗中聚山梨醇酯80之最終濃度在約0.01%與約0.03%之間。 C142.  如C136之方法，其中疫苗中聚山梨醇酯80之最終濃度為約0.02%。 C143.  如技術方案C1至C142中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液具有5.5與7.5之間的pH。 C144.  如C1至C142中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液具有5.6與7.0之間的pH。 C145.  如C1至C142中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液具有5.8與6.0之間的pH。 C146.  如C1至C142中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液具有約5.8之pH。 C147.  如C1至C142中任一項之方法，其中該疫苗中之最終pH在約5.3與約6.3之間。 C148.  如C1至C142中任一項之方法，其中該疫苗中之最終pH為約5.8。 C149.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約5 µg/ml至約10 µg/ml之間的莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約10 µg/ml至約20 µg/ml之間的莢膜多醣血清型6B、約0.01%至約0.05% (w/w)之間的聚山梨醇酯80、約150 mM氯化鈉及約1 mM至約10 mM之間的丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)。 C150.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為15價肺炎球菌結合物組合物，其中該等15種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約5 µg/ml至約10 µg/ml之間的莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約10 µg/ml至約20 µg/ml之間的莢膜多醣血清型6B、約150 mM氯化鈉、約0.1%至約0.5% (w/w)之間的聚山梨醇酯20以及約15 mM至約25 mM之間的L-組胺酸緩衝劑(pH 5.8)。 C151.  如C1至C52中任一項之方法，其中添加有保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約7.5 µg/ml之莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F中之各者以及約7.5 µg/ml之莢膜多醣血清型6B、約0.033% (w/w)聚山梨醇酯80、約150 mM氯化鈉以及約5.5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)。 C152.  如C1至C151中任一項之方法，其中該疫苗中之最終蛋白濃度在約60 µg/ml與約130 µg/ml之間。 C153.  如C1至C151中任一項之方法，其中該疫苗中之最終蛋白濃度在約90 µg/ml與約99 µg/ml之間。 C154.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D10粒度分佈在約4,000與約5,000之間。 C155.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D10粒度分佈在約4,300與約4,700之間。 C156.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D50粒度分佈在約7,000與約8,000之間。 C157.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D50粒度分佈在約7,500與約7,900之間。 C158.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D90粒度分佈在約12,000與約15,000之間。 C159.  如C1至C153中任一項之方法，其中該疫苗之最終D90粒度分佈在約12,300與約14,900之間。 C160.  如C1至C159中任一項之方法，其中在步驟(a)之後，將包含保存劑及結合物之混合物無菌過濾。 C161.  如C160之方法，其中過濾器具有約0.05至0.2 µm之間的標稱滯留範圍。 C162.  如C160之方法，其中過濾器具有約0.1至0.2 µm之間的標稱滯留範圍。 C163.  如C160之方法，其中過濾器具有約0.15至0.2 µm之間的標稱滯留範圍。 C164.  如C160之方法，其中過濾器具有約0.1、約0.15或約0.2 µm之標稱滯留範圍。 C165.  如C160之方法，其中過濾器具有約0.2 µm之標稱滯留範圍。 C166.  如C160至C165中任一項之方法，其中過濾器包含預濾器。 C167.  如C166之方法，其中預濾器具有約0.1 µm與1 µm之間的標稱滯留範圍。 C168.  如C166之方法，其中預濾器具有約0.5 µm之標稱滯留範圍。 C169.  如C166之方法，其中預濾器具有約0.5 μm之標稱滯留範圍且過濾器具有約0.2 μm之標稱滯留範圍。 C170.  如C160至C169中任一項之方法，其中過濾器具有約25至1000 L/m2、50至1000 L/m2、75至1000 L/m2、100至1000 L/m2、150至1000 L/m2、200至1000 L/m2、250至1000 L/m2、300至1000 L/m2、350至1000 L/m2、400至1000 L/m2、500至1000 L/m2或750至1000 L/m2之過濾器容量。 C171.  如C160至C169中任一項之方法，其中過濾器具有200至1000 L/m2、250至1000 L/m2或300至1000 L/m2之過濾器容量。 C172.  如C160至C169中任一項之方法，其中過濾器具有約300至1000 L/m2之過濾器容量。 C173.  如C160至C172中任一項之方法，其中過濾器包含聚碸。 C174.  如C160至C172中任一項之方法，其中過濾器包含聚醚碸(PES)。 C175.  如C160至C174中任一項之方法，其中過濾器為膠囊過濾器。 C176.  如C1至C175中任一項之方法，其中藉由該方法獲得之該結合型疫苗包含一或多種結合物及保存劑。

Claims (23)

  1. 一種用於製造包含保存劑之結合型疫苗的方法，該方法包含以下步驟： (a)    將保存劑自本體溶液(bulk solution)添加至包含一或多種結合物、緩衝劑、鹽及界面活性劑之溶液中；及 (b)    隨後無菌過濾包含該保存劑、結合物、緩衝劑、鹽及界面活性劑之混合物， 其中該保存劑在添加至該溶液之前未經無菌過濾，及 其中該保存劑在該本體溶液之濃度下具疏水性及黏性。
  2. 如請求項1之方法，其進一步包含步驟(c)隨後添加佐劑。
  3. 如請求項2之方法，其中該佐劑為磷酸鋁。
  4. 如請求項3之方法，其中該疫苗中磷酸鋁之最終濃度為約0.25 mg/ml。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中在該本體溶液之濃度下該保存劑之黏度在25℃下在約15與約25厘司(centistoke)之間。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該保存劑為2-苯氧基乙醇(2-PE)、苯酚、間甲苯酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯，或硫柳汞(thiomersal)。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該本體溶液為純2-苯氧基乙醇(2-PE)。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該保存劑為2-PE且在步驟(a)後該溶液中之2-PE濃度在約15 mg/ml與約17 mg/ml之間。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該疫苗中2-PE之最終濃度為約9 mg/ml或約10 mg/ml。
  10. 如請求項1至9中任一項之方法，其中該緩衝劑包含丁二酸鹽，該鹽包含氯化鈉，且該界面活性劑包含聚山梨醇酯80。
  11. 如請求項10之方法，其中： (a)    丁二酸鹽之濃度在約1 mM與約10 mM之間； (b)    氯化鈉之濃度在約100 mM與約200 mM之間；及 (c)    聚山梨醇酯80之濃度在約0.01%與約0.05%之間。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中添加該保存劑之溶液具有在約5.8與約6.0之間的pH。
  13. 如請求項1至12中任一項之方法，其中添加該保存劑的添加速率以約0.5 ml/分鐘/公升與約5.0 ml/分鐘/公升包含一或多種結合物、緩衝劑、鹽及界面活性劑之溶液之間。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中使用蠕動泵添加該保存劑。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中在連續混合下添加該保存劑且在添加該保存劑與開始混合之間無延遲，且其中： (a)    混合之角速度在約150 rpm與約200 rpm之間；或 (b)    在保存劑添加之後且在無菌過濾之前，將溶液混合約30分鐘與約3小時之間。
  16. 如請求項1至15中任一項之方法，其中步驟(b)之過濾包含使用具有約0.1 µm、約0.15 µm或約0.2 µm之標稱滯留範圍的過濾器。
  17. 如請求項16之方法，其中該過濾器包含具有約0.5 µm之標稱滯留範圍的預濾器。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，其中步驟(b)之過濾包含使用具有200至1000 L/m 2、250至1000 L/m 2或300至1000 L/m 2之過濾器容量的過濾器。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中步驟(b)之過濾包含使用包含聚醚碸(PES)之過濾器。
  20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中添加該保存劑之溶液為包含7至25種來自不同血清型肺炎鏈球菌之醣結合物之肺炎球菌結合物組合物。
  21. 如請求項1至19中任一項之方法，其中添加該保存劑之溶液為20價肺炎球菌醣結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F。
  22. 如請求項20或21之方法，其中所有該等醣結合物均與CRM 197結合。
  23. 如請求項1至19中任一項之方法，其中添加該保存劑之溶液為20價肺炎球菌結合物組合物，其中該等20種醣結合物係來自肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F，其中該等醣結合物全部與CRM 197結合，該組合物包含約7.5 µg/ml之各莢膜多醣血清型1、3、4、5、6A、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、23F及33F及約7.5 µg/ml之該莢膜多醣血清型6B、約0.033% (w/w)聚山梨醇酯80、約150 mM氯化鈉以及約5.5 mM丁二酸鹽緩衝劑(pH 5.8)。
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