TW202345886A - 消除肥胖劑和消除肥胖用組合物 - Google Patents
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Abstract
提供一種含有牡丹防風地下部的提取物的消除肥胖劑以及含有上述消除肥胖劑的消除肥胖用組合物。
Description
本發明係關於消除肥胖劑和消除肥胖用組合物。
近年來,由於飽食、運動不足等生活習慣而體脂肪增加,肥胖增多。這樣的肥胖的增加不僅人類,而且在寵物、家禽中也能觀察到。肥胖成為高脂血症、動脈硬化等生活習慣病的原因,因此不僅在美容方面成為問題,而且在健康方面也成為大的問題。
這裡,已知環狀AMP(cAMP)參與生物體內的脂肪分解。cAMP將生物體內存在的脂肪酶活化,藉由被活化的脂肪酶而脂肪被分解為脂肪酸和甘油。然而,如果cAMP-膦醯基二酯酶被活化,則cAMP的分解被誘導,阻礙脂肪酶的活化。因此,認為藉由阻礙cAMP-膦醯基二酯酶的活性,從而細胞內的cAMP增加,能夠促進脂肪的分解。
迄今為止,嘗試了由天然物提取具有環狀AMP膦醯基二酯酶阻礙作用的物質,例如,報告了藤茶提取物(例如,參照專利文獻1)、楓屬植物的提取物(參照專利文獻2)等。
然而,對於具有消除肥胖作用,並且安全性高,因此,作為飲品食品、化妝品、研究用試劑等的成分能夠被廣泛使用的新的原材料的要求依然強烈,現狀是要求其迅速的開發。
先實施技術文獻
專利文獻
專利文獻1:日本特開2003-012532號公報
專利文獻2:日本特開2003-113068號公報
<發明欲解決之問題>
本發明解決上述以往的各個問題,其課題在於達成以下的目的。即,本發明的目的在於,提供具有優異的消除肥胖作用,並且安全性高的消除肥胖劑和消除肥胖用組合物。
<用於解決問題的方法>
為了解決上述課題,本發明人等反復深入研究,結果認識到,牡丹防風地下部的提取物具有優異的消除肥胖作用,並且安全性高,對於消除肥胖是有用的。
本發明基於本發明人等的上述認識,作為用於解決上述課題的方法,如下。即,
<1>一種消除肥胖劑,其特徵在於,含有牡丹防風地下部的提取物。
<2>根據上述<1>所述的消除肥胖劑,上述牡丹防風地下部的提取物為利用水與親水性溶劑的混合溶劑得到的提取物。
<3>根據上述<1>或<2>所述的消除肥胖劑,在牡丹防風地下部的提取物中,作為萜內酯類,含有Hyuganin D、安定香豆素III、順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯、反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯、異嘧啶、和蝶呤素。
<4>根據上述<1>~<3>中任一項所述的消除肥胖劑,其具有選自由環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用、前脂肪細胞的分化誘導促進作用、脂肪蓄積抑制作用和脂肪細胞的細胞死亡誘導作用所組成的組中的1種以上的作用。
<5>一種消除肥胖用組合物,其特徵在於,含有上述<1>~<4>中任一項所述的消除肥胖劑。
<發明之功效>
根據本發明的消除肥胖劑和消除肥胖用組合物,能夠解決以往的上述各個問題,達成上述目的,能夠提供具有優異的消除肥胖作用,並且安全性高的消除肥胖劑和消除肥胖用組合物。
(消除肥胖劑)
本發明的消除肥胖劑含有牡丹防風地下部的提取物作為有效成分,進一步根據需要含有其它成分。
在本說明書中,「肥胖」為體脂肪過剩地蓄積的狀態。此外,在本說明書中,「消除肥胖」為減少過剩地蓄積的體脂肪,接近正常的狀態。此外,藉由防止體脂肪的增加或蓄積,從而減少體脂肪,接近正常的狀態也包含於「消除肥胖」。另外,體脂肪的量可以不恢復至正常的狀態,至少從過剩地蓄積的狀態減少體脂肪的量即可。
關於上述牡丹防風地下部的提取物所具有的發揮消除肥胖作用的物質的詳細情況還不清楚,上述牡丹防風地下部的提取物具有優異的消除肥胖作用,作為消除肥胖劑是有用的以往完全是未知的,這是本發明人等的新的認識。
<牡丹防風地下部的提取物>
上述牡丹防風(濱海前胡)(學名:Peucedanum japonicum Thunb.)為傘形科前胡屬的植物,為沿海岸生長的多年生草本,分布於關東以西、四國、九州、沖繩、朝鮮、中國大陸、菲律賓等,能夠由這些地域容易地獲得。
上述牡丹防風地下部的提取物可以使用由作為提取原料使用的提取部位調製的提取物,可以使用市售品。
作為上述牡丹防風的提取部位,如果為地下部,則沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,根、根莖等。它們可以單獨使用1種,可以並用2種以上。
作為上述牡丹防風的提取原料的形狀、結構、大小,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
作為上述牡丹防風的提取部位的調製方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,使提取部位乾燥之後,直接或使用粗碎機進行粉碎的方法等。能夠將上述乾燥的產物直接供給或將粉碎的產物供於溶劑提取。上述乾燥可以在太陽下進行,也可以使用通常使用的乾燥機來進行。
上述牡丹防風地下部的提取物能夠藉由植物的提取所一般使用的方法而容易地獲得。作為上述牡丹防風地下部的提取物的方式,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,提取液自身、提取液的稀釋液、提取液的濃縮液、它們的乾燥物、粗精製物、精製物等。
作為上述提取的方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,在室溫或回流加熱下,使用任意的提取裝置進行提取的方法等,更具體而言,可舉出在充滿提取溶劑的處理槽中投入作為提取原料的上述牡丹防風的上述提取部位,根據需要一邊適當攪拌,一邊例如,靜置30分鐘~4小時,溶出可溶性成分之後,過濾,除去提取殘渣,從而獲得提取液的方法等。上述提取液可以進一步將提取溶劑蒸餾除去,進行乾燥。
此外,可以藉由己烷等非極性溶劑,實施脫脂等前處理之後作為提取原料而使用。藉由進行脫脂等前處理,從而能夠效率良好地進行利用極性溶劑的提取處理。
作為上述牡丹防風的提取時的條件(提取時間和提取溫度)、提取溶劑和提取溶劑的使用量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
作為上述提取溶劑,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,水、親水性溶劑、或水與親水性溶劑的混合溶劑等。這些之中,出於提取物的消除肥胖作用更優異的方面考慮,優選為水與親水性溶劑的混合溶劑。
作為上述水,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,除了純水、水道水、井水、礦泉水、礦水、溫泉水、泉水、淡水等以外,對於它們實施了各種處理的產物也包含在內。作為對於水實施的處理,例如,包括精製、加熱、殺菌、過濾、離子交換、滲透壓的調整、緩沖化等。另外,作為上述提取溶劑可以使用的水也包括精製水、熱水、離子交換水、生理鹽水、磷酸緩沖液、磷酸緩沖生理鹽水等。上述水可以單獨使用1種,可以並用2種以上。
作為上述親水性溶劑,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等碳數1~5的低級醇;丙酮、甲基乙基酮等低級脂肪族酮;1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等碳數2~5的多元醇等。它們可以單獨使用1種,可以並用2種以上。
作為上述混合溶劑中上述親水性溶劑相對於上述水的使用量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,在使用低級醇的情況下,相對於水10容量份,優選添加1容量份~90容量份,在使用低級脂肪族酮的情況下,相對於水10容量份,優選添加1容量份~40容量份,在使用多元醇的情況下,相對於水10容量份,優選添加1容量份~90容量份。
作為上述提取溶劑的溫度,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選在室溫~溶劑的沸點以下的溫度使用。
獲得的上述牡丹防風地下部的提取物為了獲得上述牡丹防風地下部的提取物的稀釋物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物等,可以按照常規方法實施稀釋、濃縮、乾燥、精製等處理。
作為上述牡丹防風地下部的提取物的精製方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,活性炭處理、吸附樹脂處理、離子交換樹脂處理等精製方法。藉由上述精製方法進行精製,從而能夠提高有效成分的濃度,或除去廢物。
獲得的上述牡丹防風地下部的提取物也能夠直接作為上述消除肥胖劑使用,從容易利用方面考慮,優選為上述濃縮液、上述乾燥物。在獲得上述乾燥物時,為了改善吸濕性,可以添加糊精、環糊精等載體。
上述牡丹防風地下部的提取物出於消除肥胖作用更優異方面考慮,優選為作為萜內酯類,含有Hyuganin D(hyuganinD)、安定香豆素III (peucedanocoumarin III)、順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯(cis-3’-acetyl-4’-tigloylkhellactone)、反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯(trans-3’-acetyl-4’-senecioylkhellactone)、異嘧啶(isosamidin)、和蝶呤素(pteryxin)的方式。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述萜內酯類的合計含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選為1質量%~5質量%,更優選為2.5質量%~5質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述Hyuganin D的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出0.04質量%~0.5質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述安定香豆素III的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出0.1質量%~1.0質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出0.01質量%~0.5質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選為0.05質量%~2.5質量%,更優選為0.3質量%~2.0質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述異嘧啶的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選為0.01質量%~0.5質量%,更優選為0.05質量%~0.4質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述蝶呤素的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出0.5質量%~5質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述萜內酯類的含量的測定方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出後述的試驗例1-1所記載的方法等。
上述牡丹防風地下部的提取物可以包含綠原酸、蘆丁。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述綠原酸的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選為1.0質量%以下,更優選為0.05質量%~0.8質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述蘆丁的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,優選為0.1質量%以下,更優選為0.001質量%~0.05質量%。
作為上述牡丹防風地下部的提取物中上述綠原酸和上述蘆丁的含量的測定方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出後述的試驗例1-2所記載的方法等。
作為上述牡丹防風地下部的提取物在上述消除肥胖劑中的含量,沒有特別限制,能夠根據上述牡丹防風地下部的提取物的生理活性等進行適當調整。上述消除肥胖劑可以僅由上述牡丹防風地下部的提取物形成。
<其它成分>
作為上述其它成分,沒有特別限制,能夠根據上述消除肥胖劑的利用形態適當選擇,例如,可舉出賦形劑、防濕劑、防腐劑、增強劑、增稠劑、乳化劑、抗氧化劑、甜味料、酸味料、調味料、著色料、香料、美白劑、保濕劑、油性成分、紫外線吸收劑、界面活性劑、增稠劑、醇類、粉末成分、著色劑、水性成分、水、皮膚營養劑等。它們可以單獨使用1種,可以並用2種以上。
作為上述其它成分在上述消除肥胖劑中的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
<用途>
作為上述消除肥胖劑的用途,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,可舉出例如,醫藥品、藥用化妝品、飲品食品、化妝品等。
上述消除肥胖劑由於具有優異的消除肥胖作用,安全性高,因此例如,能夠適合用於作為消除肥胖用組合物的有效成分。
本發明的消除肥胖劑相對於人,是適合適用的,只要發揮其作用效果,相對於人以外的動物(例如,小鼠、大鼠、倉鼠、狗、貓、牛、豬、猴等),也能夠適用。
作為上述消除肥胖劑的用法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出經口、非經口、外用等用法。
作為上述消除肥胖劑的劑型,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出片劑、粉劑、膠囊劑、顆粒劑、浸膏劑、糖漿劑等經口投予劑;注射劑、點滴劑、栓劑等非經口投予劑;化妝水、乳液、面霜、軟膏、美容液、化妝水、面膜、膠、唇膏、口紅、粉底、入浴用製劑、香皂、沐浴露、收斂劑、生髮劑、護髮素、護髮膏、染髮劑、潤髮油、香波、染髮劑、護髮素等外用劑等。
作為上述各劑型的消除肥胖劑的製造方法,沒有特別限制,能夠適當選擇公知的方法。
作為上述消除肥胖劑的使用量、使用期間等的使用方法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
此外,本發明的消除肥胖劑也能夠作為用於消除肥胖作用的作用機理相關的研究的試劑來使用。
上述牡丹防風地下部的提取物所具有的消除肥胖作用例如,藉由選自由環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用、前脂肪細胞的分化誘導促進作用、脂肪蓄積抑制作用和脂肪細胞的細胞死亡誘導作用所組成的組中的1種以上的作用來發揮。因此,上述消除肥胖劑優選具有選自由環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用、前脂肪細胞的分化誘導促進作用、脂肪蓄積抑制作用和脂肪細胞的細胞死亡誘導作用所組成的組中的1種以上的作用。另外,上述牡丹防風地下部的提取物所具有的消除肥胖作用並不限定於選自由環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用、前脂肪細胞的分化誘導促進作用、脂肪蓄積抑制作用和脂肪細胞的細胞死亡誘導作用所組成的組中的1種以上的作用。
此外,本發明還關於含有上述牡丹防風地下部的提取物的、環狀AMP-膦醯基二酯酶活性抑制劑、前脂肪細胞的分化誘導促進劑、脂肪蓄積抑制劑、或脂肪細胞的細胞死亡誘導劑。
(消除肥胖用組合物)
本發明的消除肥胖用組合物含有本發明的消除肥胖劑,進一步根據需要含有其它成分。
<消除肥胖劑>
上述消除肥胖劑為上述本發明的消除肥胖劑。
作為上述消除肥胖用組合物中上述消除肥胖劑的含量,沒有特別限制,能夠根據上述消除肥胖用組合物的形態、上述牡丹防風提取物的生理活性等來適當調整,換算成上述牡丹防風提取物的量,優選為0.0001質量%~20質量%,更優選為0.0001質量%~10質量%。上述消除肥胖用組合物可以僅僅由上述消除肥胖劑形成。
<其它成分>
作為上述消除肥胖用組合物中的其它成分,沒有特別限制,能夠根據上述消除肥胖用組合物的利用形態適當選擇,例如,可舉出與上述消除肥胖劑的項目所記載的其它成分同樣的成分等。它們可以單獨使用1種,可以並用2種以上。
作為上述其它成分在上述消除肥胖用組合物中的含量,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
<方式>
作為上述消除肥胖用組合物的方式,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出醫藥品、藥用化妝品、飲品食品、化妝品等。
本發明的消除肥胖用組合物能夠日常使用,根據作為有效成分的牡丹防風地下部的提取物的作用,能夠極其有效地發揮以消除肥胖作用為代表的各種生理活性作用。
本發明的消除肥胖用組合物相對於人,適合應用,只要發揮各自的作用效果,也能夠相對於人以外的動物(例如,小鼠、大鼠、倉鼠、狗、貓、牛、豬、猴等)應用。
作為上述本發明的消除肥胖用組合物的用法,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出經口、非經口、外用等的用法。
作為上述經口用的組合物,例如,可舉出上述經口投予劑、飲品食品。這裡,飲品食品是指對於人的健康帶來危害的擔憂少,通常的社會生活中,藉由經口或消化道投予而攝取的物質,並不限制於行政區劃上的食品、醫藥品、藥用化妝品等區劃。因此,上述飲品食品是指大幅包含構成經口地攝取的一般食品、健康食品(功能性飲品食品)、保健功能食品(特定保健用食品、營養功能食品、功能性顯示食品)、藥用化妝品、醫藥品等飲品食品。
作為上述經口用的組合物的種類,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇,例如,可舉出茶飲料、清涼飲料、碳酸飲料、營養飲料、果實飲料、乳酸飲料、酒精飲料、咖啡飲料、加入有咖啡的清涼飲料等飲料(包含這些飲料的濃縮原液和調整用粉末);冰淇淋、冰凍果子露、刨冰等冷凍甜點;蕎麥麵、烏龍麵、粉絲、餃子皮、燒賣皮、中華麵、方便麵等麵類;糖、糖果、口香糖、巧克力、塊甜點、袋裝點心、餅乾、果凍、果醬、奶油、烘焙糕點、麵包等點心類;蟹、鮭魚、蛤蜊、金槍魚、沙丁魚、蝦、鰹魚、鯖魚、鯨魚、牡蠣、秋刀魚、魷魚、紅蛤、扇貝、鮑魚、海膽、鮭魚子、小鮑魚等水產物;魚膏、火腿、香腸等水產、畜產加工食品;加工乳、發酵乳等乳製品;沙拉油、天婦羅油、人造奶油、蛋黃醬、起酥油、鮮奶油、調味汁等油脂和油脂加工食品;調味料、醬等調味料;咖喱、燉肉、親子蓋飯、粥、稀飯、中華蓋飯、豬排蓋飯、天婦羅蓋飯、鰻魚蓋飯、林飯(hash rice)、關東煮、麻婆豆腐、牛肉蓋飯、肉醬、雞蛋湯、煎蛋飯、餃子、燒賣、漢堡、肉丸等蒸煮袋食品;沙拉、醬菜等家常菜;各種形態的健康、美容、營養輔助食品;片劑、顆粒劑、膠囊劑、飲料劑、含劑、漱口藥等醫藥品、藥用化妝品;口中清涼劑、口臭防止劑等口腔內使用的口腔清涼劑、牙膏等。
作為上述經口用以外的組合物,例如,可舉出上述非經口投予劑、外用劑。例如,能夠軟膏、面霜、乳液、化妝水、面膜、粉底等作為皮膚化妝品,生髮劑、護髮膏、染髮劑、香波、潤髮油、染髮劑等作為頭髮化妝品使用。
作為上述消除肥胖用組合物的製造方法,沒有特別限制,能夠根據上述消除肥胖用組合物的利用形態等適當選擇。
作為上述消除肥胖用組合物的使用量,使用期間等,沒有特別限制,能夠根據目的適當選擇。
如上述那樣,本發明的消除肥胖劑和消除肥胖用組合物具有優異的消除肥胖作用。
因此,本發明還關於一種消除肥胖方法,其特徵在於,對於個體投予上述消除肥胖劑和消除肥胖用組合物的至少任一者。
[實施例]
以下,說明本發明的製造例、試驗例、配合例,但是本發明並不受這些製造例、試驗例、配合例的任何限定。
如下述那樣製造後述的試驗例1~4所使用的被驗試樣。
(製造例1:牡丹防風地下部30%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地下部的利用30容量%乙醇得到的提取物。
在牡丹防風的地下部10g中添加30容量%乙醇200mL,使用回流冷卻器,在80℃進行1小時提取之後,利用濾紙進行過濾,獲得了提取液。
將獲得的提取液在減壓下進行濃縮,乾燥,獲得牡丹防風的地下部的30容量%乙醇提取物(粉末) 2.28g。
(製造例2:牡丹防風地下部50%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地下部的利用50容量%乙醇得到的提取物。
製造例1中,將30容量%乙醇替換為50容量%乙醇,除此以外,與製造例1同樣地操作,獲得牡丹防風的地下部的50容量%乙醇提取物(粉末)2.23g。
(製造例3:牡丹防風地下部80%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地下部的利用80容量%乙醇得到的提取物。
製造例1中,將30容量%乙醇替換為80容量%乙醇,除此以外,與製造例1同樣地操作,獲得牡丹防風的地下部的80容量%乙醇提取物(粉末) 1.90g。
(比較製造例1:牡丹防風地上部30%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地上部的利用30容量%乙醇得到的提取物。
製造例1中,將牡丹防風的地下部10g替換為牡丹防風的地上部30g,將30容量%乙醇200mL替換為30容量%乙醇600mL,除此以外,與製造例1同樣地操作,獲得牡丹防風的地上部的30容量%乙醇提取物(粉末)10.48g。
(比較製造例2:牡丹防風地上部50%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地上部的利用50容量%乙醇得到的提取物。
比較製造例1中,將30容量%乙醇替換為50容量%乙醇,除此以外,與比較製造例1同樣地操作,獲得牡丹防風的地上部的50容量%乙醇提取物(粉末) 10.28g。
(比較製造例3:牡丹防風地上部80%乙醇提取物)
如以下那樣操作以製造牡丹防風的地上部的利用80容量%乙醇得到的提取物。
比較製造例1中,將30容量%乙醇替換為80容量%乙醇,除此以外,與比較製造例1同樣地操作,獲得牡丹防風的地上部的80容量%乙醇提取物(粉末)9.27g。
(試驗例1-1:萜內酯類含量的測定)
關於由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物,如以下那樣操作以測定萜內酯類含量。
<分析試樣的調製>
在10mL的計量燒瓶中精密量取各試樣10mg,利用50%乙腈(ACN)定容至10mL。將該液體利用0.45μm親水性聚四氟乙烯(PTFE)膜濾器進行過濾得到的產物設為試樣溶液。
標準品使用(+)-蝶呤素(ChemFaces,Lot.CFS201901,純度98%以上),作為純度100%定量萜內酯類(Hyuganin D、安定香豆素III、順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯、反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯、安定香豆素II、異嘧啶、蝶呤素)。稱取量為約2mg。
<HPLC分析條件>
・ 柱 : Wakosil II 5C18AR,4.6mm×250mm(富士膠片和光純藥株式會社製)
・ 流動相 : 0.1%TFA(A):ACN(B)0-45min(41%B)
・ 流速 : 1.0mL/分鐘
・ 烘箱溫度 : 40℃
・ 進樣量 : 20μL
・ 檢測 : 320nm
下述表1-1顯示由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物中的萜內酯類含量(蝶呤素換算值)。
[表1-1]
(試驗例1-2:綠原酸含量和蘆丁含量的測定)
關於由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物,如以下那樣操作以測定綠原酸含量和蘆丁含量。
<分析試樣的調製>
將各試樣10mg精密地量取至10mL的計量燒瓶,利用20%甲醇定容至10mL。將該液體利用0.45μm親水性聚四氟乙烯(PTFE)膜濾器進行過濾得到的產物設為試樣溶液。
作為標準品,使用綠原酸(MP生物medical)和蘆丁(富士膠片和光純藥株式會社),作為純度100%定量試樣溶液中的綠原酸和蘆丁。稱取量為約5mg。
<HPLC分析條件>
・ 柱 : Wakosil II 5C18AR,4.6mm×250mm(富士膠片和光純藥株式會社製)
・ 流動相 : 0.1%TFA(A):ACN(B)
0-25min(7-30%B),
25.01-30min(90%B)
30.01-40min(7%B)
・ 流速 : 1.0mL/分鐘
・ 烘箱溫度 : 30℃
・ 進樣量 : 5μL,10μL,20μL
・ 檢測 : 330nm(綠原酸),350nm(蘆丁)
下述的表1-2中顯示由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物中的綠原酸含量和蘆丁含量。
[表1-2]
(試驗例2:環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用試驗)
使用由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物作為被驗試樣,藉由下述試驗方法,試驗環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用。
在含有5mmol/L的氯化鎂的50mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH7.5)0.2mL中,添加2.5mg/mL 牛血清白蛋白溶液0.1mL,0.1mg/mL 環狀AMP-膦醯基二酯酶溶液0.1mL和被驗試樣溶液(試樣濃度參照下述表2)0.05mL,在37℃靜置5分鐘,進行予備反應。在其中,添加0.5mg/mL 環狀AMP(cAMP)溶液0.05mL,以37℃反應60分鐘。然後,在沸水浴上煮沸3分鐘,停止反應,將其離心(2,260×g,10分鐘,4℃),將上清液中的作為反應基質的環狀AMP以下述條件進行高速液相色譜(HPLC)分析。此外,作為對照,僅僅添加試樣無添加的溶劑,進行同樣的操作。
<HPLC條件>
・ 泵 : DP-8020(東曹株式會社)
・ 紫外可見檢測器 : UV-8020(東曹株式會社)
・ integrator : Chromatocoder 21(東曹株式會社)
・ 柱溫箱 : CO-8020(東曹株式會社)
・ 在線脫氣機 : SD-8022(東曹株式會社)
・ 柱 : Wakosil C18-ODS 5μm(富士膠片和光純藥株式會社)
・ 流動相 : 1mmol/L TBAP in 25mmol/L KH
2PO
4:CH
3CN=90:10
・ 流速 : 1.0mL/min
・ 檢測 : 260nm
・ Atten : 128
接下來,求出環狀AMP標準品的峰面積(A)、被驗試樣無添加時的環狀AMP標準品與環狀AMP-膦醯基二酯酶的反應溶液的上清液峰面積(B1)和被驗試樣添加時的環狀AMP標準品與環狀-AMP膦醯基二酯酶的反應溶液的上清液峰面積(B2)。由所得的結果,由下述式算出被驗試樣無添加時的環狀AMP標準品的分解率(C)和被驗試樣添加時的環狀AMP標準品的分解率(D)。
被驗試樣無添加時的環狀AMP標準品的分解率(C)(%)=(1-B1/A)×100
被驗試樣添加時的環狀AMP標準品的分解率(D)(%)=(1-B2/A)×100
然後,基於由上述式算出的各分解率(C、D),藉由下述式算出環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙率(%)。表2中顯示結果。
環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙率(%)=(1-D/C)×100
[表2]
由表2的結果確認了牡丹防風地下部的提取物具有優異的環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用。
(試驗例3:使用了人內臟來源的脂肪細胞的分化誘導促進作用試驗)
使用由上述製造例1~6製造的各牡丹防風提取物作為被驗試樣,藉由下述的試驗方法,試驗分化誘導促進作用。
將人內臟來源的前脂肪細胞利用75cm
2燒瓶,在增殖培養基(PGM Bullet Kit(Takara生物株式會社))中,在37℃,5%CO
2下進行前培養,藉由胰蛋白酶處理採集細胞。
使用PGM Bullet Kit,在膠原塗層96孔板(IWAKI)上每1個孔各播種2.5×10
3細胞/200μL,在37℃,5%CO
2下培養直至鋪滿。培養後丟棄培養液,更換為分化誘導培養基,同時添加預定濃度的被驗試樣添加培養基,在37℃,5%CO
2下進行7天培養。丟棄培養上清液,利用PGM Bullet Kit進一步持續8天培養。
培養結束後,丟棄培養液,將細胞內甘油三酯(TG)使用AdipoRed
TMAssay Reagent(LONZA,USA)來測定。然後,藉由M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent(PIERCE Biotechnology,Inc.)提取蛋白質,使用BCA Protein Assay Reagent Kit(PIERCE Biotechnology,Inc.)進行蛋白定量。
表3中顯示結果。另外,表3中的各數值(%)表示將被驗試樣無添加的分化後的細胞中的量以100%表示的相對值。
[表3]
表3所示那樣,確認了在添加牡丹防風地下部的提取物的情況下,單位蛋白質量的TG量進一步增加,牡丹防風地下部的提取物具有優異的人內臟來源的前脂肪細胞的分化誘導促進作用。
(試驗例4:使用了人內臟來源的脂肪細胞的脂肪蓄積抑制作用和細胞死亡誘導作用試驗)
使用由上述製造例1~3和比較製造例1~3製造的各牡丹防風提取物作為被驗試樣,藉由下述試驗方法,試驗脂肪蓄積抑制作用和細胞死亡誘導作用。
將人內臟來源的前脂肪細胞利用75cm
2燒瓶,在增殖培養基(PGM Bullet Kit(Takara生物株式會社))中,在37℃,5%CO
2下進行前培養,藉由胰蛋白酶處理採集細胞。
使用PGM Bullet Kit,在膠原塗層96孔板(IWAKI)上每1個孔各播種2.5×10
3細胞/200μL,在37℃,5%CO
2下培養直至鋪滿。培養後丟棄培養液,更換為分化誘導培養基,在37℃,5%CO
2下進行7天培養。丟棄培養上清液,向PGM Bullet Kit交換的同時,添加預定濃度的被驗試樣添加培養基,進一步持續8天培養。
培養結束後,丟棄培養液,將細胞內甘油三酯(TG)使用AdipoRed
TMAssay Reagent(LONZA,USA)進行測定。然後,藉由M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent(PIERCE Biotechnology,Inc.)提取蛋白質,使用BCA Protein Assay Reagent Kit(PIERCE Biotechnology,Inc.),進行蛋白定量。
表4中顯示結果。另外,表4中的各數值(%)表示將被驗試樣無添加的分化後的細胞中的量以100%表示的相對值。
[表4]
表4所示那樣,確認了在添加牡丹防風地下部的提取物的情況下,單位蛋白質量的TG量進一步降低,牡丹防風地下部的提取物具有優異的脂肪蓄積抑制作用。此外,確認了在添加牡丹防風地下部的提取物的情況下,蛋白質量也降低,牡丹防風地下部的提取物具有優異的細胞死亡誘導作用。
(製造例4:牡丹防風地下部50%乙醇提取物)
與上述製造例2同樣地操作,獲得牡丹防風的地下部的50容量%乙醇提取物(粉末) 1.70g。
關於由製造例4獲得的提取物,與上述試驗例1-1同樣地操作,測定萜內酯類含量。結果如下所述。
<萜內酯類含量>
・ Hyuganin D ・・・ 0.13質量%
・ 安定香豆素III ・・・ 0.33質量%
・ 順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯 ・・・ 0.30質量%
・ 反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯 ・・・ 0.28質量%
・ 安定香豆素II ・・・ 0.015質量%
・ 異嘧啶 ・・・ 0.049質量%
・ 蝶呤素 ・・・ 1.16質量%
・ 合計 ・・・ 2.26質量%
關於由製造例4獲得的提取物,與上述試驗例1-2同樣地操作,測定綠原酸含量和蘆丁含量。結果如下所述。
・ 綠原酸 ・・・ 0.80質量%
・ 蘆丁 ・・・ 0.015質量%
此外,關於由製造例4獲得的提取物,與試驗例2~4同樣地操作,試驗各種作用,結果確認了都與製造例2的提取物同樣的作用。
(配合例1)
藉由常規方法,製造具有以下組成的片劑。
・ 製造例1的牡丹防風提取物 5.0mg
・ 白雲石 83.4mg
(含有鈣20%,鎂10%)
・ 酪蛋白膦醯基肽 16.7mg
・ 維生素C 33.4mg
・ 麥芽糖醇 136.8mg
・ 膠原 12.7mg
・ 蔗糖脂肪酸酯 12.0mg
(配合例2)
藉由常規方法,製造具有以下組成的經口液狀製劑。
<1安瓿(1支100mL)中的組成>
・ 製造例2的牡丹防風提取物 0.3質量%
・ 山梨糖醇 12.0質量%
・ 苯甲酸鈉 0.1質量%
・ 香料 1.0質量%
・ 硫酸鈣 0.5質量%
・ 精製水 剩餘部分
(配合例3)
藉由常規方法,製造具有以下組成的顆粒。
・ 製造例3的牡丹防風提取物 150.0質量份
・ 鈣 680.0質量份
・ 鐵 6.8質量份
・ 甜菜低聚糖 1000.0質量份
・ 甜菜菊提取物 10.0質量份
(配合例4)
藉由常規方法,製造具有以下組成的軟膠囊。
・ 製造例1的牡丹防風提取物 30質量份
・ 橄欖油 200質量份
・ 甘油脂肪酸酯 24質量份
・ 蜂蠟 24質量份
(配合例5)
藉由常規方法,製造具有以下組成的巧克力。
・ 製造例2的牡丹防風提取物 0.15質量份
・ 巧克力 45.0質量份
・ 蔗糖 15.0質量份
・ 可可脂 20.0質量份
・ 全脂奶粉 25.0質量份
(配合例6)
藉由常規方法,製造具有以下組成的清涼飲料水。
・ 製造例3的牡丹防風提取物 0.3質量%
・ 蜂王漿 1.0質量%
・ 水溶性膠原 10.0質量%
・ 薏仁提取物 1.0質量%
・ 高麗胡蘿蔔提取物 1.0質量%
・ 寡糖 5.0質量%
・ 蔗糖 10.0質量%
・ 西梅果汁 2.0質量%
・ 石榴果汁 5.0質量%
・ 葡萄柚果汁 10.0質量%
・ 葡萄柚香料 0.7質量%
・ 水 剩餘部分
・ 合計 100.0質量%
本申請主張基於於2022年3月15日申請的日本專利申請2022-040345號的優先權,將日本專利申請2022-040345號的全部內容援用至本申請。
(無)
Claims (5)
- 一種消除肥胖劑,其特徵在於,含有牡丹防風地下部的提取物。
- 如請求項1的消除肥胖劑, 該牡丹防風地下部的提取物為利用水與親水性溶劑的混合溶劑得到的提取物。
- 如請求項1或2的消除肥胖劑, 在牡丹防風地下部的提取物中,作為萜內酯類,含有Hyuganin D、安定香豆素III (peucedanocoumarin III)、順式-3’-乙醯-4’-替格醯內酯(cis-3’-acetyl-4’-tigloylkhellactone)、反式-3’-乙醯-4’-千里光油萜內酯(trans-3’-acetyl-4’-senecioylkhellactone)、異嘧啶(isosamidin)和蝶呤素(pteryxin)。
- 如請求項1或2的消除肥胖劑, 其具有選自由環狀AMP-膦醯基二酯酶活性阻礙作用、前脂肪細胞的分化誘導促進作用、脂肪蓄積抑制作用和脂肪細胞的細胞死亡誘導作用所組成的組中的1種以上的作用。
- 一種消除肥胖用組合物,其特徵在於,含有如請求項1至4中任一項的消除肥胖劑。
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---|---|---|---|
JP2022-040345 | 2022-03-15 | ||
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JP6273440B2 (ja) * | 2014-06-24 | 2018-02-07 | ビーエイチエヌ株式会社 | Glp−1産生促進剤、dppiv阻害剤及びグルコース吸収阻害剤 |
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2023
- 2023-02-21 WO PCT/JP2023/006293 patent/WO2023176334A1/ja unknown
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