TW202342034A - 心肺病症之治療 - Google Patents

心肺病症之治療 Download PDF

Info

Publication number
TW202342034A
TW202342034A TW111150447A TW111150447A TW202342034A TW 202342034 A TW202342034 A TW 202342034A TW 111150447 A TW111150447 A TW 111150447A TW 111150447 A TW111150447 A TW 111150447A TW 202342034 A TW202342034 A TW 202342034A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
ethyl
formula
chloro
methoxy
phenyl
Prior art date
Application number
TW111150447A
Other languages
English (en)
Inventor
佩爾斯特 伊瓦 貝克
漢娜 提內耳
邁克爾 哈恩
戴爾特 蘭恩
格里特 韋曼
約翰內斯 納格施邁茲
莉莎 迪茲
桑德斯 沙勒
大衛 榮格
伊爾蒂珂 特雷貝希
托比亞斯 蒙德里
安妮特 里希特
布利塔 歐力尼克
布吉特 凱爾
奔德 羅斯勒
彼得 費
漢寇 希爾莫
圭多 貝克
克萊門斯 伯特
海蓮娜 法柏
朱利安 艾格
馬克 佩瑞
大衛 沃爾德
塞西爾 維特雷
Original Assignee
德商拜耳廠股份有限公司
德商拜耳製藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 德商拜耳廠股份有限公司, 德商拜耳製藥股份有限公司 filed Critical 德商拜耳廠股份有限公司
Publication of TW202342034A publication Critical patent/TW202342034A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0075—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a dry powder inhaler [DPI], e.g. comprising micronized drug mixed with lactose carrier particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本發明關於式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)於心肺和肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))的吸入治療之用途，其特徵在於包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型係每天一次或兩次為期至少連續兩天(較佳至少連續2至7天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程)投予至有需要的患者，其中該吸入劑型較佳包含活性成分和醫藥上合適的賦形劑或載體之組合，同時較佳地將活性成分和醫藥上適合的賦形劑填充於硬膠囊中。

Description

心肺病症之治療
本發明關於式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)於心肺和肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))的吸入治療之用途，其特徵在於將包含下列的吸入劑型投予至有需要的患者：240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，每天一次或兩次，經連續至少兩天的期間，較佳至少連續二至七天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，其中該吸入劑型較佳包含活性成分和醫藥上合適的賦形劑或載體之組合，同時較佳地將活性成分和醫藥上適合的賦形劑填充於硬膠囊中。
再者本發明關於使用於心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)的吸入治療之藥劑，其包含式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)和視需要地醫藥上合適的賦形劑或載體，較佳地於乾粉調配物的形式，視需要地填充於空腔(例如硬膠囊)中，其經由吸入性投予至有需要的患者，每天一次或兩次，為期等於或超過兩天，較佳至少連續二至七天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，包含240至4000 µg，較佳地480至2000 µg的活性成分。
再者本發明關於式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I或式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II)之用途，其係用於製備使用於心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之治療中的吸入性藥劑，於吸入劑型的形式，較佳地呈乾粉調配物，包含活性成分和醫藥上合適的賦形劑或載體，較佳為活性成分和醫藥上合適的賦形劑，視需要地填充於硬膠囊中，其中 該藥劑係每天一次或兩次投予至有需要的患者為期等於或超過兩天，較佳至少連續二至七天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，及其中該藥劑包含240至4000 µg(較佳地480至4000 µg，較佳地480至2000 µg)的(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I或式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II)。
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸對應於式(I) (I)
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之新穎晶形，其為i.a.對應於式(I-M-I)、(I-M-II)之假多晶形單水合物I (I-M-I)或假多晶形單水合物II (I-M-II)， (I-M-I )、(I-M-II)
式(I )、(I-M-I)和(I-M-II)之化合物充當可溶性鳥苷酸環化酶之活化劑且可用作為使用於預防及/或治療肺、心肺和心血管疾病(諸如例如用於治療肺動脈高血壓(PAH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之藥劑，更具體地說，其關於一種治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如PH-COPD和PH-IIP) 之方法。
發明背景
肺高血壓(PH)是一種進行性肺部疾病，其未經治療會在診斷後幾年內導致死亡。肺高血壓係定義為平均肺動脈壓(mPAP)升高(休息時正常值 ＜ 20 mmHg)。肺高血壓的病理生理學特徵在於肺血管的血管收縮和重塑。在慢性PH中，主要是未肌肉化的(unmuscularized)肺血管出現新肌肉化(neomuscularization)，並且已經肌肉化的血管的血管肌之周長增加。此肺循環之閉塞的增加導致右心臟的壓力增加，其導致右心臟輸出減少且最終導致右心臟衰竭 [M. Humbert et al., J. Am. Coll. Cardiol.2004, 43, 13S-24S] [M. Humbert et al., J. Am. Coll. Cardiol.2004, 43, 13S-24S]。特發性(或原發性) 肺動脈高血壓(IPAH)是一種非常罕見的病症，而繼發性肺高血壓(non-PAH PH)非常常見，且認為後者是目前冠心病和全身性高血壓後的心血管病症的第三大最常見的疾病。自2008年以來，肺高血壓根據 Dana Point分類按照各個病因分為多個亞組[M. Humbert and V.V. McLaughlin, J. Am. Coll. Cardiol.2009, 54 (1), S1-S2; D. Montana and G. Simonneau, in: A.J. Peacock et al. (Eds.), Pulmonary Circulation. Diseases and their treatment, 3 rdedition, Hodder Arnold Publ., 2011, pp. 197-206; updated Nizza classification Gérald Simonneau, David Montani, David S. Celermajer, Christopher P. Denton, Michael A. Gatzoulis, Michael Krowka, Paul G. Williams, Rogerio Souza: Haemodynamic definitions and updated clinical classification of pulmonary hypertension, in: European Respiratory Journal, 2018; DOI: 10.1183/13993003.01913-2018]。
儘管PH的治療所有進展，但目前還沒有治愈這種嚴重疾病的可能性。市場上可獲得的標準療法(例如前列腺環素類似物、內皮素受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑)能夠改善患者的生活品質、運動耐量和預後。此等治療原則主要是全身投予(除吸入曲前列環素(Treprostinil)和吸入伊洛前列素(Iloprost)或NO之外)，且藉由調節血管血管張力(vessel tone)而主要以血液動力學地作用。由於副作用，這些藥物的適用性受到限制，其中一些副作用很嚴重，及/或投予形式複雜。藉由特定的單一療法可改善或穩定患者臨床狀況的時間是有限的(例如由於耐受性的發展)。最終治療升級且因此應用組合療法，其中必須同時給予多種藥劑。目前，此等標準療法僅批准用於治療肺動脈高血壓(PAH)和慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)。關於肺部疾病(第3組PH)諸如PH-COPD或PH-IIP的繼發性PH形式之情況下，在臨床研究中此等治療原則(例如西地那非(sildenafil)、波生坦(bosentan))已失敗，因為非選擇性血管舒張，彼等導致患者動脈氧含量之降低(去飽和)。此可能的原因為由於非選擇性血管擴張劑的全身性投予對異源性肺部病症的肺中通氣-灌注適應產生不利影響 [I. Blanco et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med.2010, 181, 270-278：D. Stolz et al., Eur. Respir. J.2008, 32, 619-628]。
新穎組合療法為一種治療肺高血壓最有前途的未來治療選擇之一。在此方面，發現治療PH之新穎藥理學機制特別令人感興趣[Ghofrani et al., Herz2005, 30, 296-302：E.B. Rosenzweig, Expert Opin. Emerging Drugs2006, 11, 609-619：T. Ito et al., Curr . Med. Chem.2007, 14, 719-733]。特別是，可與市場上已有的治療概念相結合的新穎治療方法可形成更有效治療的基礎，且因此對患者來說非常有利。此外，該種新作用原理的選擇性肺部適用性可提供不僅將其用於PAH的選項，而且尤其是可為患有PH之繼發性形式(第3組PH)的患者提供首選治療選項，因為他們經由吸入施用藉由針對性地施用到肺部的通氣區域而避免非選擇性全身性血管舒張。因為它們藉由吸入應用有針對性地應用到肺部的通風區域，從而避免了非選擇性的全身血管擴張。
與許多心肺疾病相關的氧化壓力導致一氧化氮/可溶性鳥苷酸環化酶傳訊路徑受損，從而將天然可溶性鳥苷酸環化酶轉變為無血紅素的脂溶性(apo-soluble)鳥苷酸環化酶。專門針對此sGC的NO不敏感形式提供概述其治療各種心肺疾病的前所未有之治療機會的潛力。sGC活化劑經由其獨特的作用模式藉由在氧化壓力條件下恢復關鍵的 cGMP傳訊，結合一種新穎的局部和肺選擇性應用，可成為一種用於肺高血壓患者之既提高功效又減少副作用的強力新治療選項。
在肺高血壓之動物模型中，已證明呈微粒形式之sGC活化劑BAY 58-2667(西那西瓜)的吸入投予導致肺動脈壓的劑量依賴性選擇性降低。以此模式，靜脈內投予 of 1H=1,2,4-㗁二唑并[4,3-a]喹㗁啉-1-酮(ODQ)之靜脈內給予，其氧化sGC的輔血紅素基團(prosthetic haem group)，降低吸入性NO(iNO)之血管擴張作用，而此以BAY 58-2267而增加。此等結果導致假設sGC活化劑之吸入投予可能代表一種用於罹患肺高血壓的患者之新穎有效的治療方法，特別是若這些患者對iNO及/或對PDE5抑制劑之反應由於缺乏NO或sGC氧化而減少[O.V. Evgenov et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med.2007, 176, 1138-1145]。然而，以此模式，西那西瓜就其本身而言沒有足夠的作用期間，且此外，較高的劑量導致不需要的全身性副作用。
Merck Sharp Dohme 正在開發一種以乾粉吸入施用之sGC刺激劑(MK5475：NCT04609943)。然而，如在PH和其他肺部疾病中，吸入性一氧化氮(iNO)和 sGCC刺激劑的反應性可能會因sGC的氧化而受損。靶向肺部的吸入性sGC激活劑可克服此限制。
在心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之領域中，由於潛在肺部疾病(第3組PH)的PH患者係以投予開發用於的相關肺部疾病(例如COPD)之藥物進行一線治療。特定PH藥物(例如IP促效劑、PDE5抑製劑、內皮素拮抗劑和sGC刺激劑)僅批准用於PAH和CTEPH，且由於觀察到此等全身性施用血管擴張劑的去飽和效應，僅以第3組PH的形式進行實驗使用。
口服施用經常是活性藥物的較佳投予路徑。關於心肺適應症，較佳為將藥物局部應用於靶器官肺部，以藉由增加局部藥物濃度來改良療效，並避免藥物因全身性可用率而引起的全身副作用。一般來說，不太頻繁的給藥方案是可取的，例如以改善患者對治療的堅持性(患者的順從性)，但必須確定24h的覆蓋範圍，以確保在給藥間隔期間血液動力學活性藥物的持續功效。許多肺部靶向吸入性藥物需要頻繁的施用方案(例如 Iloprost/Ventavis)，由於彼等的(例如)短半衰期及/或肺滯留時間，需要每天多次施用才能覆蓋24小時。特別地，由於對患者有利的便利性和順從性原因，每日一次施用是較佳的。然而，此目的有時難以實現，取決於藥物物質的特定行為和性質，尤其是其肺選擇性和肺滯留時間。
另一種全身性投予(注射)，甚至更多地與許多缺點(例如，需要臨床訪問的不便、不適、患者厭惡基於針頭的遞送方法、投予側的藥物反應)相關，因此更需要替代投予路徑。
藉由吸入肺部遞送為一種該替代投予路徑，其可提供優於口服和注射投予的幾個優點。這些優點尤其是藉由增加局部濃度和降低全身藥物副作用的可能性而具有更高的功效，而且還包括患者自我投予的便利性、易於藉由吸入遞送、淘汰針頭、等等。
對於吸入用醫藥製劑，在不需要佐劑的情況下，特別是在懸浮吸入用固體製劑的情況下，製劑可僅由活性成分組成。然而，出於實際原因，例如為了促進極低劑量之活性成分的藥物遞送，製劑經常是除活性成分外還含有一或多種藥理不活性且生理上可接受的賦形劑或載體的藥劑。各種適當製劑對應吸入藥物遞送技術的綜述可見於例如Paolo Colombo, Daniela Traini and Francesca Buttini的書籍"Inhalation Drug Delivery – Techniques and Products" (published by Wiley-Blackwell 2013)。在2019 年，Moon 等人發表關於口服吸入產物之遞送技術的最新評論(Moon et al , AAPS PharmSciTech 20: 117 pp 1-17)。 先前技藝
各種5-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及彼等在心血管和心肺病症(如例如PAH)的醫藥用途係揭示於專利申請案WO 14/012934-A1中。
然而，一些此等化合物(例如實施例2、37和39(參見實驗部分的比較例3、4和5)僅顯示在PAH動物模式中有限或中等的作用期間。再者，一些此等化合物(例如實施例37(參見實驗部分中之比較例3)不是肺選擇性的。
此外，WO 14/012934-A1中揭示的幾個實施例確實僅顯示有限的熱穩定性(在90℃下，7天)：例如實施例2 (比較例5，實驗部分)、24 (比較例6，實驗部分)、25(比較例7，實驗部分)、28 (比較例8，實驗部分)、29 (比較例9，實驗部分)和例如31(比較例10，實驗部分)。
另外，文件WO 14/012934-A1沒有揭示所述化合物是否適合用於每天一次或兩次的吸入治療方案，也沒有揭示任何具體劑量。
因此，需要提供一種新穎的使用於治療心肺病症之適當每日一次或兩次吸入劑量方案，用於基於具有有利性質(例如，足夠的作用期間、肺選擇性作用(與全身性作用相反，例如高肺選擇性，低至無VQ不匹配，其肺滯留時間)的活性成分。再者，藥物物質應顯示改善的通氣性，例如支氣管擴張作用及/或對氣道高反應性和發炎的抑制作用，並因此特別適合使用於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
再者，需要提供一種適用於上述吸入劑量方案的穩定活性成分。
在熱穩定性測試中發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸(比較例11)是穩定的。
另外式I之酸 (=比較例11)(根據WO2014/012934-A1之實施例23)令人驚訝地顯示更多有利的性質，例如在預測性PAH動物模式中具有極佳持久的功效以及肺內選擇性(C-2.1)。在單側支氣管阻塞模式中比較例11有效地降低的肺動脈壓(PAP)。與全身性投予相比，吸入後未檢測到對去飽和區域的負效應，為此投予路徑提供更好的風險效益比。結果，比較例11在吸入施用後顯示強肺和肺內選擇性。而且，我們的數據指示比較例11不僅改善循環，而且顯示支氣管擴張性質(C-3.1：C-3.2)，其可能有益於治療患有慢性肺部疾病的PH患者，甚至有可能治療氣喘患者(C-3.3)。因此，比較例11可能是一種適當的吸入藥物，其靶向肺部的通氣區域並僅在通氣區域引起血管舒張，藉此克服此種在當前PAH治療選項中經歷過大V/Q不匹配之限制。
在人類氣道平滑肌細胞(HASMC)中，鬆弛可由NO-可溶性鳥苷酸環化酶(sGC)-cGMP傳訊路徑驅動。特別是，大多數嚴重氣喘供體HASMC和肺樣品主要表現官能不良的氧化sGC。因此，尤其是sGC活化劑可能是這些患者的新目標選擇 (Arnab Ghosh, Cynthia J. Koziol-White, William F. Jester Jr., Serpil C. Erzurum, Kewal Asosingh, Reynold A. Panettieri Jr.see, Dennis J. Stuehr: An inherent dysfunction in soluble guanylyl cyclase is present in the airway of severe asthmatics and is associated with aberrant redox enzyme expression and compromised NO-cGMP signaling in Redox Biology 39 (2021) 101832; Maggie Lam,Jane E. Bourke, Ph.D., A New Pathway to Airway Relaxation: Targeting the “Other” Cyclase in Asthma American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology Volume 62 Number 1 | January 2020)。據報導，sGC調節劑在人體小氣道中誘發支氣管擴張(Cynthia J. Koziol-White, Arnab Ghosh, Peter Sandner, Serpil E. Erzurum, Dennis J. Stuehr, and Reynold A. Panettieri, Jr.: Soluble Guanylate Cyclase Agonists Induce Bronchodilation in Human Small Airways, Am J Respir Cell Mol Biol Vol 62, Iss 1, pp 43–48, Jan 2020)。因此，我們局部施用後比較例11的支氣管擴張性質與推出的sGC刺激劑里奧西瓜(Riociguat)(比較例2)和sGC活化劑西那西瓜(Cinaciguat)(比較例1)，目的是測試支氣管擴張性的作用期間(恢復因子作為期間的指標(C-3.1))。與媒液相比，所有sGC調節劑西那西瓜(比較例1)、里奧西瓜(比較例2)和比較例11都誘發舒張。經由西那西瓜(比較例1)和里奧西瓜(比較例2)之舒張在1h內達到穩定狀態。令人驚訝地，經由比較例11之舒張進一步增加。里奧西瓜(比較例2)誘發之舒張在1h內完全洗出(恢復因子0.34)，西那西瓜(比較例1)誘發之舒張的穩定略有減少趨勢(恢復因子 0.91)，類似於媒液(恢復因子 0.99)。相比之下，令人驚訝地由比較例11誘發之舒張進一步增強，恢復因子為1.41，表明具有關於比較例11之支氣管擴張性質的更長作用期間。
先前的研究已顯示口服投予PAH藥物(例如，波生坦、西地那非、里奧西瓜)劑量依賴性地降低缺氧PAP(即積極的治療效應)但增加去飽和區域(即不需要的去飽和效應)(Becker EM, Stasch JP, Bechem M, Keldenich J, Klipp A, Schaefer K, Ulbrich HF, Truebel H. Effects of different pulmonary vasodilators on arterial saturation in a model of pulmonary hypertension. PLoS One 2013;8:1-8)。sGC活化集中在吸入施用後的通氣區域(肺內選擇性)可選擇性和有效地減少肺部血管收縮而不影響V/Q不匹配。在單側支氣管阻塞模式中吸入性比較例11有效降低PAP。與全身性投予相比，吸入後未檢測到對去飽和區域的負效應，為此投予路徑提供更好的風險效益比。特別地，比較例11在吸入施用後顯示出強肺和肺內選擇性(C-2.3)。因此，比較例11可能是一種適當的吸入藥物，其靶向肺部的通氣區域並僅在通氣區域引起血管舒張，藉此克服此種在當前PAH治療選項中經歷過大V/Q不匹配之限制。而且，我們的數據指示比較例11不僅改善循環，而且還顯示長作用期間的支氣管擴張性質(C-3.1：C-3.2：C-4.1)，其可能有益於治療患有慢性肺部疾病的PH患者，甚至有可能治療氣喘患者(C-3.3)。
為了提供一種使用於治療心肺病症的新穎適當吸入劑量方案，需要包含比較例11(如WO 14/012934-A1的實施例23中所揭示)作為活性成分之吸入劑型。作為較佳選項，由於乾粉吸入劑型的適用性、便利性和患者的順從性及黏著性，而選擇乾粉吸入劑型。乾粉吸入劑型要求活性成分式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸需要以單一的限定結晶形式提供。
然而，如WO 14/012934-A1的實施例23中所揭示，(5S)-{[2-(4-羧基苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4 -基]甲氧基}-苯基)-乙基]氨基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-羧酸的式(I)只能以無定形形式獲得，其不適合使用於藉由乾粉吸入器施用之吸入劑型。
再者，在文獻WO 14/012934-A1中，沒有揭示使用於治療心肺病症的基於特定載體之吸入性藥劑，其包含(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸和乳糖載體之乾粉調配物。
因此，需要提供一種使用於治療心肺病症之新穎適當吸入劑量方案，其係基於穩定晶形的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，在人類中具有足夠的作用期 (諸如例如改善的血液動力學效應、降低的肺血管阻力(PVR)、肺內選擇性、支氣管擴張作用、cGMP和支氣管擴張作用比氣道阻力)適合於長期治療/使用。
對於吸入療法，通常可用三種藥品調配物選項且可根據所需劑量、患者群和相關性質、活性成分穩定性進行選擇。若活性成分的溶解性和穩定性允許，一種調配物的形式為經霧化之溶液。霧化藥物的缺點通常是遞送效率低(產生低部分的＜5µm吸入液滴)、每次治療的施用時間延長、缺乏用於按需治療的可攜式裝置選項(並且需要電源)。
第二種選項是壓力定量吸入器(pressurized metered dose inhaler, pMDI)，其具有加強的可攜性、不需要電源和遞送低劑量的機會(而高劑量通常不可行)。 缺點包括使用有機溶劑(推進劑)、需要特殊的製造技術，而且非常重要的是，需要協調呼吸操作與裝置的啟動。此經常通常會導致藥物遞送(和治療)不足且患者順從性低。
乾粉吸入器(DPI)具有重要的優點，諸如小型可攜式設計、可能遞送廣泛的劑量範圍內的藥物、不受藥物溶解性的影響以及呼吸操縱與裝置驅動(被動裝置)不協調。因此，對於許多施用和治療選項，DPI構成了被選擇的較佳技術。
乾粉吸入劑(DPI)通常用於治療肺部疾病，諸如氣喘和肺部感染且其由裝置中的粉末調配物組成，其可吸入下呼吸道。使吸入成為有吸引力的藥物遞送方式的關鍵特徵是：藉由將藥物直接靶向作用位置之裝置最佳化藥物遞送、減少全身副作用、快速起效、由於此藥物投予路徑的非侵入性而患者的接受度、堅持性和順從性提高。吸入用乾粉產物的遞送效率取決於藥物調配物、吸入器裝置和吸入技術。
一般目標是當使用用於肺部遞送的醫藥調配物時，遞送的藥物量相對於劑量單位的標稱含量盡可能高。相比之下，肺中非活性成分的沉積應最少化至可能且證明是合理的最低量。不同的一般調配物策略傾向可吸入調配物，其全部都遵循最佳化和增加＜ 5µm 的藥物顆粒之活性成分細顆粒沉積的策略，同時將暴露於非活性成分減至最少。
滿足此目標的最簡單方法為在沒有任何載體的情況下單獨提供微粉化形式的活性成分，但由於藥物的性質以及更重要的是目標人體劑量通常非常低，這種策略是有限的。 然而，對於 DPI調配物，此方法的實際重要性很低。
另一種策略是調配微粉化藥物顆粒或將藥物溶解成經設計之(engineered)顆粒，其中藥物與非活性成分一起調配並產生成形顆粒，其可為是經塗布之藥物微粒或多孔顆粒或具有或多或少均勻或在5µm或以下之窄粒徑分布的基質顆粒以增加遞送到肺深部和氣道的藥物量。彼等調配物的一個缺點為載體和藥物結合在一起且將一起遞送到作用部位。Healy等人發表基於非載體的乾粉吸入調配物之綜合概述。(Advance Drug Delivery reviews 75 (2014) pp 32-52)。
有許多調查變數對黏合劑藥物載體混合物的影響之已發表的研究，然而基本了解仍然有限。由於有許多同時發生的可能效應及可具有競爭或協同或拮抗的潛力，因此總體上仍然難以預測給定混合物的氣霧劑性能，尤其是因為活性成分化合物顆粒本身的比表面積和物理性質。
為了研究吸入用基於載體的混合物之調配物和分散體所涉及的機制，已經進行了多年的研究和開發。[de Boer et al. in: A critical view on lactose-based drug formulation and device studies for dry powder inhalation: Which are relevant and what interactions to expect? Advanced Drug Delivery Reviews 64 (2012) 257–274]。
然而，由於不同的因素和成分相互影響且高度取決於藥物物質性質，目前沒有對於新穎藥物物質之如何設計吸入用基於載體的混合物的現存或可推論的明確指引或準則。因此，藥品開發領域的技術人員在面臨開發新穎吸入用基於載體的混合物之任務時，必須遵循針對各新活性成分的從新設計和開發方法。
整體上最常見的策略是將活性成分與非活性載體化合物調配成乾粉摻合物，其中微粉化藥物顆粒黏著在非活性載體上，其在大多數情況下為乳糖或其他與糖相關的化合物，例如糖醇如甘露醇。藥物遞送的基本機制是微粉化藥物顆粒暫時黏著在非活性較大載體材料顆粒上及隨後活性微粉化藥物顆粒從載體上去黏聚或釋放，受用於施用調配物之乾粉吸入器內產生的氣流能量影響。大部分載體材料不打算被吸入，並且由於其大小，會沉積在上呼吸道，主要是口腔和喉嚨。在吸入期間，必須克服黏著力以從載體上釋放藥物顆粒，因此控製藥物在載體上的黏著力以允許大部分劑量的最佳釋放變得可用於藥物遞送至肺深部。
大多數DPI產物都為基於載體的調配物，其由細研磨的藥物顆粒混合通常為乳糖單水合物的粗載體顆粒組成。然而，也使用替代載體諸如葡萄糖、海藻糖、山梨糖醇和(冷凍乾燥的)甘露糖醇，因為乳糖在用作DPI的賦形劑時有一些缺點。例如，乳糖與具有一級胺基的藥物不相容並因此不太適合用於包含敏感藥物的下一代可吸入產品。
乳糖可以兩種基本異構物形式(即α-和β-乳糖)或非晶形獲得。α-乳糖以單水合物和無水形式存在，前者是熱力學最穩定的形式。α-乳糖單水合物係藉由從低於93.5℃的過飽和溶液中結晶製備。其結晶形狀可為棱柱體、金字塔體或戰斧體(tomahawk)且取決於沉澱和結晶方法。無水乳糖(通常含有70-80%無水β-乳糖和20-30%無水α-乳糖)最常是藉由滾筒乾燥93.5℃以上的乳糖溶液來製造。接下來，將兩種所得產物研磨以減小粒徑並篩分以選擇適當的粒徑分布。噴霧乾燥的乳糖係藉由將α-乳糖單水合物晶體在水中之懸浮液以乳糖溶液進行噴霧乾燥而獲得。高於93.5℃的溫度，無水β-乳糖形成，而低於此溫度，獲得到α-乳糖單水合物。 [11] G. Pilcer, N. Wauthoz, K. Amighi, Lactose characteristics and the generation of the aerosol, Adv Drug Del Reviews 64(2012) 233-256]
存在多種具有不同物理化學性質的乳糖，其可用於DPI 調配物。乳糖可藉由研磨、篩分、噴霧乾燥或造粒進行處理，從而產生不同的性質。乳糖賦形劑是市售的，因此有各種等級，彼等具有與例如(i.a.)粗糙度、形狀、粒徑、粒徑分佈、水含量、可壓縮性或表面積相關的不同物理化學特性。粉末的氣溶膠性能，例如粒度分佈、形狀和表面特性。粉末的氣霧劑性能在很大程度上取決於乳糖的特性，諸如粒徑分布和形狀和表面性質。 [11] G. Pilcer, N. Wauthoz, K. Amighi, Lactose characteristics and the generation of the aerosol, Adv Drug Del Reviews 64(2012) 233-256]
報導乳糖顆粒設計的(engineering)另外方法諸如種晶、結晶、塗布、成形、冷凝和沉澱，並且也導致材料具有與例如關於粒徑、粒徑分佈、細粒含量、形狀、表面粗糙度、流動性質、靜電荷、固態變化的不同物理化學性質。 [ [12] X. Kou, L. Wah Chan, H. Steckel, P.W.S. Heng, Physico-chemical aspects of lactose for inhalation, Adv. Drug Del. Reviews 64 (2012) 220-232]
在吸入用之基於載體的混合物中，必須調整混合物在儲存和處理期間的穩定性與在吸入期間的分散性之間的適當平衡。已經顯示，與這些方法相關的變數可以不同的方式相互影響且藉由改變一個變數，其他一些變數的影響可能會逆轉。這可解釋為什麼在關於單一變數的效應之文獻中會得出相反的結論。[De Boer, 2012]
人們一致認為一系列後續方法，包括起始材料的選擇或製造、混合方法、吸入器裝置中的分散和去黏聚，以及最後的氣霧劑特徵化，對於確定導致有益於體外沉積結果之適當調配物是必要的。
所需的載體性質取決於所要處理的藥物類型、混合物中的藥物濃度(% w/w)以及確定的藥物劑量和以(或計入)劑量系統計量的粉末量，以及打算使用的混合方法的類型。[De Boer, 2012]
藥物和載體之間的界面力已經連同產生可能直接影響藥物與載體相互作用的不同顆粒表面性質顆粒製備技術(諸如研磨、冷凝、噴霧乾燥、沉澱和結晶)進行了討論。[De Boer, 2012]
主要挑戰是找到控制乾粉吸入器(DPI)系統顆粒沉積颗粒的三種力之間的最佳平衡：混合物中的顆粒間力、在吸入期間由吸入裝置產生的分散力和氣霧劑顆粒在呼吸道中之沈積力。[De Boer, 2012]
DPI的設計控制裝置中的粉末去黏聚。所有市售的被動式DPI都具有三個共同的設計特徵：吸嘴、進氣口和粉末儲存/分配系統。也可能存在其他特徵，諸如網格和旋轉膠囊，以促進粉去黏聚。[De Boer, 2012]
另外的因素可能是旋轉膠囊的作用和裝置中氣流速率的影響。De Boer等人 描述對基於載體的調配物吸入吸入製劑之製備和分散方法有影響並另外相互作用的變數：藥物性質、載體表面性質、載體散裝性質、載體表面有效負載、混合方法、混合物性質、吸入方法、儲存 和調節，僅舉幾例。[de Boer et al. in: Dry powder inhalation: past, present and future. EXPERT OPINION ON DRUG DELIVERY, 2017 VOL. 14, NO. 4, 499–512]
因此，實際上，a) 吸入用混合物之醫藥調配物和(b)適當載體的選擇以及(c) 吸入裝置的選擇或設計仍然是一種經驗方法，需要開發及適應和設計某些參數以獲得具有足夠穩定性和氣霧劑性能的各個藥物物質的定制調配物。
後者的重要性質不能從先前技術參考文獻中預測。
DPI基於載體的粉末之製造通常包括各種步驟，諸如在合適的尺寸範圍內之藥物和載體顆粒之製造(藉由篩分、研磨、噴霧乾燥、等等)，在適當摻合條件與最佳化的參數下混合各種組分，如有必要，還可修飾顆粒的表面性質以增強氣霧劑性能。
需要最佳混合以獲得藥物均勻性，特別是對於含有微粒化藥物顆粒的低藥物劑量調配物。在內聚性粉末的情況下，諸如在吸入用乾粉調配物中遇到者，小藥物顆粒與粗乳糖顆粒的組合促進穩定有序混合的形成，其中藥物顆粒黏著於充當載體之較大顆粒上。然而，在添加某比例的細賦形劑之三元混合物的情況下，會遇到一些混合問題，例如黏聚(由於此等小顆粒的內聚性質而形成細粒及/或藥物簇)和分離(或反混合，其特徵為由於粒徑、形狀和密度的差異或顆粒的黏聚誘發之粗顆粒與細顆粒的分離)。事實上，藉由促進藥物顆粒黏著至具有能量低於載體的活性位置之位置來改良氣霧劑性能的細賦形劑減少黏著，並因此影響藥物的均勻性。對於最佳乾粉調配物，必須在黏著力足以保證藥物均勻性和混合物對於處理是穩定的但足夠弱以在吸入期間中從載體中快速釋放藥物顆粒之間取得平衡。結果，在期混合間發生的分離率(segregation rate)可能是預測氣霧劑分散性能的一個有趣因素。
最佳混合取決於容器填充的最佳化以保證粉末床之充分膨脹、混合器和粉末特性以及混合條件。混合器係以下列機制中之一或多者為基礎：1) 對流，其為相鄰顆粒組在摻合物中從一處另一處之移動，2) 剪切，其為成分之配置透過在粉末床內形成滑移面或剪切應變之改變，及3) 擴散，其為個別顆粒藉由彼等相對於彼此的隨機移動之再分佈。混合器可分為分離式混合器和非分離式混合器。混合器的選擇取決於粉末摻合物分離和形成形式黏聚物的傾向。對於包含促進顆粒分離的粉末摻合物之混合物，必須使用非分離混合器，而任何類型的混合器都可使用於不發生反混合的混合物。在由於較小組分的內聚性而黏聚的情況下，在混合期間需要額外的應力(剪切力)來破壞黏聚物。因此，高剪切混合器經常使用於製備內聚性藥物物質的預混物。需要最佳混合時間以獲得均勻摻合物。增加混合時間可改善非分離混合物的均勻性，但不一定會改善分離混合物的均勻性。使用其中摻合藥物與少量賦形劑之預摻合步驟可減少總混合時間。相比之下，多組分混合物的達成可增加混合時間以達到均勻性。 [[x] G. Pilcer, N. Wauthoz, K. Amighi, Lactose characteristics and the generation of the aerosol, Adv Drug Del Reviews 64(2012) 233-256].。
發明之詳細說明 式 (I) 之酸的固體形式
式(I)化合物之製備係揭示於WO 2014/012934 (參見實施例23)中，從前驅物乙基-5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)-苯基]乙基-}胺基)-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸酯(WO 2014/012934中之實施例92A)開始並概述於下述流程1中。
流程 1 ：如WO 2014/012934中所揭示的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的合成
然而，藉由此方法，式I化合物只以非晶形獲得(參見比較例11)。
式(I)化合物之另一前驅物(即乙基-5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基) 苯基] 乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉甲酸酯(化合物XII))的改良合成 (XII) 已揭示於 WO2021/233783中。然而，此參考文獻未揭示式(I)化合物本身的合成方法。
如流程2中所示的一種新穎未公開之方法，其特徵在於中間物的純化步驟係是經由鹽形成/萃取/澄清過濾進行，從而避免層析純化步驟。另外，根據本發明之方法提供高靈活性，因為式(I)之目標化合物可藉由三種路徑製造： A) 路徑1以式(XII)之酯開始(方法步驟[A]和[B] = 路徑1)， B) 路徑2以的疊進(telescope)方法的式(X)之中間物(WO2021/233783)開始 (方法步驟[C]、[A]和[B] = 路徑2)， C) 路徑3以式(XII-NSA)之固體NSA鹽酯開始(方法步驟[D]、[A]和[B] =路徑3)。
流程 2 ：製造式(I)化合物之新穎未公開方法，其包括方法路徑1、2和3
包含步驟[A]和[B]的核心方法(路徑1)係使用於所有三種替代路徑。根據本發明之此方法具有超越WO 2014/012934中揭示的先前技術方法的數種優點。可避免或至少更容易分離幾種若根據先前技術程序製造不可避免地包括在式I產物中的副產物。本發明人確定在步驟[B]中由式(I-diNa)之二鈉鹽形成式(I)的目標酸為主要問題。以相反的方式運行此步驟以控制反應混合物的pH(小心監測以保持在介於3.8 – 4.2之間的 pH範圍內)至關重要。因此，方法步驟[B]需要將式(I-DiNa)之二鈉鹽中間物反向添加等莫耳量的酸當量。藉由此反向添加，與先前技術方法相比，式(I)化合物之微溶單鈉鹽的形成顯著減少(參見比較例11)。然而，主要形成的低量單鈉鹽以及其他微溶雜質可藉由二鈉鹽溶液的澄清過濾來分離。另外，藉由反向添加避免其他副產物如鹽酸鹽。
或者，式(I)化合物可在不分離中間物下藉由偶合而從化合物(X)和(XI)開始，隨後二酯裂解和酸釋放來製備(例如在方法步驟[C]、[A]和[B]中所示，參見流程2 (路徑2)。
在替代路徑3)中，式(I)化合物可以通過製備，其特徵在於在第一步驟[D]中二丁酯必須從式(XII-NSA)之NSA鹽中釋放，接著經由兩個步驟將其進一步轉化為游離酸(二丁酯的鹼性皂化(步驟[A])及之後反向添加至酸以釋放式(I)之游離酸(步驟[B])。
為了開發包含固體形式的式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}-苯基)-乙基]氨基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-羧酸之藥用形式，特別是乾粉吸入形式，對於可再現地製造和分離一種確定晶形的式(I)化合物有很高的需求。
需要許多努力才能將式I化合物最終結晶成界定的固體形式。
令人驚訝地，式I化合物以假多晶型形式獲得，沒有發現無水晶形。
然而，在幾種已識別的假多晶形範圍外，必須以幾個階段識別出最合適和最穩定的形式。
發現二水合物在乾燥方法期間經歷非晶化(參見圖10a)。半水合物的晶格呈現無序(見圖5)，其可支持機械加工(如例如調配方法)中的相變及/或非晶化。因為非常長的攪拌程序，倍半水合物的結晶對於按比例增加來說是不可行的。
發現兩種單水合物都可克服不同假多晶形的這些不需要的性質。
藉由某些研究發現式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以特定多晶形存在，尤其是單水合物形式I (I-M-I)和單水合物形式II (I-M-II)： (I-M-I )、(I-M-II)。
然而，最終證明此等單水合物形式中只有一種在微粉化期間是穩定的，並因此為例如用於製造吸入性藥劑(尤其是作為基於乾粉的吸入性藥劑)最合適的形式。令人驚訝地，在微粉化期間，發現單水合物II取決於微粉化條件顯示部分非晶化(參見實施例8b，圖42)或除此之外也轉變至單水合物I (參見實施例8a，圖43)。再者，觀察到單水合物II 在儲存期間也顯示轉變至單水合物I(參見實施例7b，圖40和41)。因此，假多晶型物一水合物 I 適合併優於式 I 化合物的其他固體形式，特別適用於藥物組合物，尤其是乾粉吸入劑型。對於使用於醫藥領域而言，假多晶形單水合物I因此適合且優於式I化合物之其他固體形式，特別適合於醫藥組成物，尤其是用於乾粉吸入劑型。
假多晶形(尤其是水合物，較佳為呈形式I和II之單水合物)可藉由式(I)之酸的結晶製造(參見流程3)。
流程3：式(I)之酸之選擇性結晶以產生其單水合物形式
取決於所使用之溶劑，形成單水合物(I-M-I)或單水合物(I-M-II)。令人驚訝地從甲醇、丙酮和水或甲醇和水的混合物結晶選擇性地產生化合物(I-M-I) 而從丙酮水結晶選擇性地產生呈形式II(I-M-II)之單水合物。
再者，令人驚訝地發現：單水合物(I-M-I)確保防止不需要的轉化成另一形式之式(I)化合物及如上所述的性質之相關改變。因此單水合物I 形式為式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的最佳晶形。
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之單水合物I可以X射線粉末繞射法根據各自的繞射圖示性，該繞射圖係在25℃下和使用Cu-K α1 輻射(1.5406 Å) 記錄。根據本發明之單水合物I顯示至少3個，經常至少5個，特別是至少7個，更特别是至少10個，和尤其是所有反射，其在下列中以值引用：
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵可為顯示下列之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：至少下列反射：12.8和29.2或至少6.9、7.2和7.3或至少6.9、7.2、7.3、12.8和29.2或至少6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0和15.2，或至少下列反射：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8和25.1或至少下列反射：6.9、7.2、7.3 12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7和23.7 ，或至少下列反射：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7和11.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
在另一實施態樣中，式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵可為顯示下列之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)，其至少下列反射：12.8、16.0和25.8或至少6.9、7.2和7.3，或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0和25.8或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2和25.1或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2、25.1和23.7或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2、25.1、23.7、9.9、5.7和11.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
在另一實施態樣中，式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵可為顯示下列之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：至少下列反射：12.8、20.5和25.8或至少6.9、7.2和7.3或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2和25.1或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2、25.1和23.7或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2、25.1、23.7、9.9、5.7和11.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：5.7、6.9、7.2、7.3、9.9、10.4、10.6、11.1、11.5、12.0、12.3、12.4、12.8、13.7、14.1、14.3、15.2、15.6、16.0、16.9、17.2、17.5、17.7、18.0、18.4、18.8、19.2、19.9、20.2、20.5、20.7、21.3、21.9、22.2、22.5、23.0、23.4、23.7、24.1、25.1、25.8、26.0、26.4、28.9、29.2、29.4、30.6、31.1、32.2、35.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.1和8.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：8.5及/或30，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為下列X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)，其顯示至少下列反射：12.8和29.2或至少6.9、7.2和7.3或至少6.9、7.2、7.3、12.8和29.2或至少6.9、7.2、7.3 12.8、29.2、23.0和15.2、或至少下列反射：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8和25.1或至少下列反射：6.9、7.2、7.3 12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7和23.7 ，或至少下列反射：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7和11.5且同時不顯示至少下列反射：6.1和8.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、16.0和25.8或至少6.9、7.2和7.3，或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0和25.8或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2和25.1或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2、25.1和23.7或至少6.9、7.2、7.3、12.8、16.0、25.8、15.2、25.1、23.7、9.9、5.7和11.5且同時不顯示至少下列反射：6.1和8.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I的特徵另外可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、20.5和25.8或至少6.9、7.2和7.3或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2和25.1或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2、25.1和23.7或至少6.9、7.2、7.3、12.8、20.5、25.8、15.2、25.1、23.7、9.9、5.7和11.5且同時不顯示至少下列反射：6.1和8.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈多晶形單水合物I之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖6中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-I)之單水合物I 可以拉曼光譜法加以表徵，其呈現至少下列帶最大值於：3073、2950、2937、1685、1616、1527、1293、1278、1259 cm-1.
式(I)化合物之假多晶形單水合物I可以IR光譜法加以表徵，其呈現至少下列帶最大值於：2933、1595、1375、1327、1272、1242、1167、1110 cm-1。 實施態樣7 (式(I-M-I)之單水合物I)
本發明提供呈式(I-M-I)之晶形單水合物I的式(I)化合物 (I-M-I)， 其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：12.8和29.2。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，其特徵在於該化合物的x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2和7.3。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0和 15.2。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7和一或多個其他上述實施態樣的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，
其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7和23.7。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7和一或多個其他上述實施態樣的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，
其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2和7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7和11.5。
或者本發明提供呈式(I-M-I)之晶形單水合物的I式(I)化合物 (I-M-I)， 其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：12.8、16.0和25.8。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：12.8、16.0、25.8、6.9、7.2和7.3。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7的式(I-M-I)之單水合物I的晶形之式(I)化合物，其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2和7.3、12.8、29.2、23.0和15.2。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7和一或多個其他上述實施態樣的式(I-M-I)之晶形單水合物I的式(I)化合物，
其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2、7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8和25.1。
本發明進一步提供呈根據實施態樣7和一或多個其他上述實施態樣的式(I-M-I)之晶形單水合物I的式(I)化合物，
其特徵在於該化合物的 x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.9、7.2和7.3、12.8、29.2、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7和11.5。
本發明進一步提供呈式(I-M-I)之晶形單水合物I的式(I)化合物 (I-M-I)， 其特徵在於該化合物之IR光譜呈現於：2933、1595、1375、1327、1272、1242、1167、1110 cm-1之帶最大值。
本發明進一步提供呈式(I-M-I)之晶形單水合物I的式(I)化合物 (I-M-I)， 其特徵在於該化合物之拉曼光譜呈現於：3073、2950、2937、1685、1616、1527、1293、1278、1259 cm-1之帶最大值。
化合物式(I)之其他不同形式可以X射線粉末繞射、微差掃描熱量法(DSC)、IR-和拉曼-光譜法來區分。
除了單水合物I，已經確定其他假多晶形單水合物II、半水合物，1,25-水合物，倍半水合物以及二水合物(參見實施例6，圖2-29)，其進一步加以表徵如下。
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之假多晶形單水合物II、半水合物、1,25-水合物、倍半水合物以及二水合物可以X射線粉末繞射法根據在25℃下和使用Cu-Kα1 輻射(1.5406 Å)記錄之各自的繞射圖加以表徵。假多晶形單水合物II、半水合物、1,25-水合物、倍半水合物以及二水合物顯示至少3個，經常至少5個，特別是至少7個，更特别是至少10個，和尤其是所有在下列中以值引用之反射：
化合物式(I)之假多晶形單水合物II的明確特徵可為下列X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)，其顯示至少下列反射：6.1和8.5，且至少6.1、8.5、12.7、23.9和13.9，較佳至少下列反射：6.1、8.5、12.7、23.9、13.9、23.0和12.2，更佳至少下列反射：6.1、8.5、12.7、23.9、13.9、23.0、12.2、10.8和15.3，最佳至少下列反射：6.1、8.5、12.7、23.9、13.9、23.0、12.2、10.8、15.3、17.3、21.7和22，亦最佳較佳至少下列反射：6.1、8.5、12.7、23.9、13.9、23.0、12.2、10.8、15.3、17.3、21.7和22，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：5.7、6.1、7.1、8.5、9.9、10.2、10.8、11.4、11.6、11.8、12.0、12.2、12.7、13.0、13.9、14.2、15.2、15.3、15.7、16.4、17.3、17.7、17.9、18.3、18.5、18.8、19.2、19.8、20.2、20.8、21.1、21.7、22.0、22.4、22.8、23.1、23.4、23.9、24.2、24.4、25.1、25.5、25.7、26.2、26.4、26.8、27.2、27.5、28.9、30.0、30.1、30.6、32.2、32.4，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為下列X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)，其顯示至少下列反射：6.1和8.5，且至少6.1、8.5、12.8、23.0、和15.2，較佳至少下列反射：6.1、8.5、12.8、23.0、15.2、25.8和25.1，更佳至少下列反射：6.1、8.5、12.8、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7和23.7，最佳至少下列反射：6.1、8.5、12.8、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7和11.5，亦最佳較佳至少下列反射：12.8、23.0、15.2、25.8、25.1、17.7、23.7、9.9、5.7、6.1、8.5和11.5且同時不顯示至少下列反射：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈假多晶形單水合物II之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖7中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源) 。
式(I-M-II )化合物之假多晶形單水合物II可以拉曼光譜法加以表徵，其呈現至少下列譜帶最大值於：3073、2950、2936、1685、1615、1526、1294、1279、1259 cm-1。
式(I)化合物之假多晶形單水合物I可以拉曼光譜法加以表徵，其呈現至少下列譜帶最大值於：2934、1595、1375、1327、1272、1242、1167、1110 cm-1。 實施態樣8 (式(I-M-II)之單水合物II)
本發明進一步提供呈晶形式(I-M-II)之單水合物II的式(I)化合物 (I-M-II)， 其特徵在於該化合物的x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，以2θ值± 0.2°表示：6.1和8.1，較佳地6.1、8.1、12.7、23.9和13.9，較佳至少下列反射：6.1、8.1、12.7、23.9、13.9、23.1和12.2，更佳至少下列反射：6.1、8.1、12.7、23.9、13.9、23.1、12.2、10.8和15.3，最佳至少下列反射：6.1、8.1、12.7、23.9、13.9、23.1、12.2、10.8、15.3、17.3、21.7和22.0。
呈假多晶形單水合物II之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖7中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源) 。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，式(I-M-II)之單水合物II的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。 實施態樣9 (式(I)化合物之半水合物)
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的明確特徵可為顯示下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1、5.3、6.7、7.1、9.3、10.6、12.4、14.3、16.1、19.7、20.8、24.0、31.1，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的明確特徵可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1、5.3、6.7、7.1、9.3和31.1，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈假多晶形半水合物之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖5中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：8.5 及/或30.0，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。 實施態樣10 (式(I)化合物之1.25水合物)
式(I)化合物之假多晶形，1,25水合物的明確特徵可為顯示下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：5.9、6.1、7.9、10.5、11.9、12.2、12.5、13.2、13.6、13.7、14.4、15.2、15.3、15.4、15.7、15.9、16.5、16.9、17.2、17.4、17.6、17.8、18.3、18.6、18.7、19.0、19.5、19.6、19.8、20.5、20.7、21.0、21.4、22.0、23.2、23.8、24.0、24.4、24.6、25.0、25.2、25.6、26.1、26.8、27.4、27.6、28.4、28.8、30.2、30.7、31.1、31.6、32.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1,25水合物的明確特徵可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9、10.5、12.2、12.5、13.6、15.2、16.9、19.0、24.0、24.4、24.6、31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈假多晶形1.25水合物之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖8中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：8.5及/或30.0，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，1.25水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。 實施態樣11 (式(I)化合物之倍半水合物)
式(I)化合物之假多晶形倍半水合物的明確特徵可為顯示下列之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：至少下列反射：12.2、25.1和14.5，較佳至少12.2、25.1、14.5、18.7和26.4，較佳至少下列反射：12.2、25.1、14.5、18.7、26.4、18.3和23.4，更佳至少下列反射：最佳至少下列反射：12.2、25.1、14.5、18.7、26.4、18.3、23.4、21.5、8.6 和5.1、和7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的明確特徵也可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：5.1、7.6、8.6、12.2、14.5、18.3、18.7、21.5、23.4、24.7、25.1、26.4，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的明確特徵可為顯示下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：5.1、6.3、7.6、8.6、11.4、12.2、12.5、12.9、13.3、14.3、14.5、15.2、15.5、15.8、16.2、16.4、16. 7、17.3、17.5、17.7、18.3、18.7、19.4、20.5、20.7、20.8、21.4、21.5、21.8、22.4、22.9、23.4、24.0、24.7、25.1、26.1、26.4、27.0、27.4、28.5、32.2、36.5，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈假多晶形倍半水合物之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖9中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：8.5及/或30.0，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，倍半水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：14.8，各自以2θ值± 0.2°表示。 實施態樣12 (式(I)化合物之二水合物)
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的明確特徵可為顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：10.1、10.5、11.2、12.5、13.6、14.8、15.5、20.2、20.5、21.1、22.2、23.2、25.1、29.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的明確特徵可為顯示下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源) ：6.1、6.8、10.1、10.5、11.2、11.3、12.3、12.5、13.1、13.6、14.6、14.8、15.5、16.2、16.4、16.8、17.1、17.3、17.9、18.5、18.8、19.5、20.2、20.5、21.1、21.4、22.2、23.2、24.3、25.1、25.4、25.6、26.3、26.9、27.4、28.5、28.7、29.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
呈假多晶形二水合物之式(I)化合物的明確特徵也可為如圖10中所示之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：3.1和9.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：6.9、7.2和7.3，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：29.2，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：8.5及/或30.0，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.9及/或31.6，各自以2θ值± 0.2°表示。
式(I)化合物之假多晶形，二水合物的特徵另外可為不顯示至少下列反射之X射線粉末繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：7.6，各自以2θ值± 0.2°表示。 治療方法
根據本發明之式(I)化合物之晶形，較佳地單水合物I (I-M-I)或單水合物II (I-M-II)，更佳單水合物I (I-M-I)具有有效藥理性質且可用於預防和治療人類和動物的疾病。根據本發明之式(I)化合物的形式可開啟進一步的治療選擇並且因此可豐富藥局。
在本發明的情況下，術語"治療(treatment或treat)"包括抑制、延遲、遏止、改善、減弱、限制、降低、壓制、逆轉或治癒疾病、病況、病症、傷害或健康損害、或該等狀態與/或該等狀態之症狀的發展、過程或進展。術語"治療(therapy)"在此係理解為與"治療(treatment)"同義。
在本發明的情況下，術語"預防(prevention、prophylaxis或precaution)"係以同義詞使用且係指避免或減少得到、染上、罹患或患有疾病、病況、病症、傷害或健康損害，此等狀態及/或此等狀態之症狀的發展或進展之風險。
疾病、病況、病症、傷害或健康損害之治療或預防可部分或完全發生。
術語 “治療功效”在本發明的情況下係定義為藉由投予包含治療有效量的式(I)化合物(尤其是比較例11或鹽、溶劑合物或多晶形)或式(I)化合物之鹽的溶劑合物或晶形變體或式(I)化合物(尤其是其假多晶形，如例如(I-M-I)和(I-M-II))的代謝物)之醫藥乾粉調配物來降低患者之平均肺動脈壓且同時臨床上沒有相關的全身血壓改變。
術語“肺血管阻力(PVR)”在本發明的情況下係定義為參數1) 將肺高血壓的嚴重性加以表徵為主要肺血管中的壁張力，其係藉由測量肺動脈中的壓力之侵入性方法分析和2) 藉由實質上降低此與肺動脈中的壓力直接相關的參數來評估新藥的效果(參見D. Singh, R. Tal-Singer, I. Faiferman, S. Lasenby, A. Henderson, D. Wessels, A. Goosen, N. Dallow, R. Vessey & M. Goldman, Plethysmography and impulse oscillometry assessment of tiotropium and ipratropium bromide; a randomized, double-blind, placebo-controlled, cross-over study .in healthy subjects, Br. Journal Clin Pharmacol, 2006, 61, 398-404) 。
改善之6分鐘步行測試結果在本發明的情況下係定義為患者在6分鐘的時間窗內能夠行走之距離的改善，其對應於接受治療的重症患者之體能增加。
“NYHA分類”的轉變在本發明的情況下係定義為NYHA分類的級數從較高分級改善至較低分級，對應於具有更好的心臟功能之改善的心臟功能。
肺的生理功能係以肺功能測試(如肺活量測量法或身體體積描記器)在標準化條件下評估，以得到參數(如例如第一秒用力呼氣量(FEV1))之標準化和驗証的測量，可直接評估藥物效應(如支氣管擴張)，一種不同藥物在治療上使用於改善併發支氣管收縮的肺部疾病(如支氣管擴張)的肺功能之效應。
術語“改善的血液動力學效應”在本發明的情況下係定義為降低肺動脈壓、改善肺通氣區域的血液循環以及改善肺功能而沒有全身性副作用並從而導致個別患者的體能和一般情況的臨床相關改善之藥物的血管舒張效應。
術語“肺內選擇性”在本發明的情況下意指吸入之活性成分僅在肺的通氣區域而不是在非通氣區域展現其血管舒張的藥效學性質。這是為了防止通氣和灌注之間不匹配的惡化(藉由增加不通氣區域的灌注)，若活性成分也到達不通氣區域，則可能發生這惡化。肺內選擇性特別是通過吸入施用途徑得到保證，該施用途徑通過患者的主動吸入進行。
術語“支氣管擴張作用”在本發明的情況下係定義為參數(諸如例如卡巴膽鹼預收縮天竺鼠氣管的鬆弛(C-3.1)、肺阻力(RL)和動態順應性(Cdyn) (C-3.2和C-3.3)、人類比氣道阻力(C-4.2)、人類的FEV1或其他參數指示通氣改善的參數)之改善。
術語“長期治療/使用”在本發明的情況下係定義為患者每天一次或兩次吸入治為期至少連續兩天，較佳至少連續二至七天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，視需要地也與標準護理(SoC例如內皮素拮抗劑諸如波生坦(bosentan)、PDE5抑制劑例如西地那非(sildenafil)、IP促效劑例如伊洛美定(Ilomedin)或曲前列環素(treprostinil)、鈣通道阻斷劑、索替樂賽(sotatercept)和sGC刺激劑例如里奧西瓜(Riociguat))組合。
術語"每天一次"為熟習該項技術者所熟知的且意指一天一次的藥物投予且包括一種劑型的投予以及兩或更多種劑型在短時間內同時或連續投予。
術語"每天一次或兩次"為熟習該項技術者所熟知的且意指一天一次或一天兩次的藥物投予而每天給藥一次或每天兩次，而在一天中的各對相應時間點的藥物投予包括一個劑型的投予以及在短時間內同時或連續投予兩或更多種劑型。
術語“連續天數”意指一個接一個發生的天數，沒有介於中間的天數，並不意指連續的日子或循環的日子。
術語“吸入劑型”意指藥物物質(即活性成分，較佳地一種晶形，例如呈單水合物I或單水合物II或倍半水合物的形式，較佳地呈單水合物I或單水合物II的形式，更佳呈式(I-M-I)之單水合物I的形式)與醫藥上適合的吸入用載體組合之組合。藥物物質和醫藥上適合的吸入用載體之組合係呈乾粉的形式。較佳地乾粉係填充於空腔中，更佳地填充於膠囊。較佳地醫藥上適合的載體為吸入用乳糖。
術語“反射”或“峰”是同義詞且與X射線值和繞射圖具有相同的含義。晶形最常見以X射線粉末繞射 (XRPD)加以表徵。反射之XRPD圖案(峰，通常以2-θ度表示)通常被認為是特定晶形的指紋。
術語“ 呼吸器官”(或呼吸系統)為了本發明之目的係指氣道-包括鼻子、口腔和咽、喉、氣管、支氣管和肺-作為功能器官系統。
與心肺疾病相關的術語“局部投予”或“局部控制”為了本發明之目的意指 - 與意欲經由胃腸道吸收的劑型之口服口服投予相反，及與靜脈內投予相反，兩者都經由血流導致全身藥物分布 – 藉由吸入以可吸入劑型投予活性成分以主要覆蓋作為目標器官的肺，其需要較低的劑量並導致較低的一般藥物暴露。根據本發明使用的粉末形式的製劑或含粉末的懸浮液為吸入製劑。
術語“吸入”或“藉由吸入投予”在此方面係指引入呼吸器官(尤其是引入及/或經由氣道，較佳地引入及/或經由鼻腔或口腔，特佳經由口腔以達成活性成分沉積於作為作用部位的支氣管和肺。
術語“氣管內”或“氣管內投予”為了本發明之目的係指不是藉由吸入將化合物引入氣管，特別是用於作為投予模型之實驗動物諸如大鼠或小豬和狗的肺部疾病控制(例如經由PennCentury裝置之氣管內施用，適用於乾粉以及藥物溶液和懸浮液)。
根據本發明之化合物(如式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形，如例如(I-M-I)和(I-M-II))為可溶性鳥苷酸環化酶之有效活化劑。彼等導致血管舒張、抑制血小板凝集和降低血壓，以及增加冠狀動脈血流量和微循環。再者，彼等具有支氣管擴張作用。此等活性是經由可溶性鳥苷酸環化酶的直接血紅素非依賴性活化和細胞內cGMP水平的增加來介導。
此外，根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形，如例如(I-M-I)和(I-M-II))具有其他有利的藥理性質，特別是關於彼等的肺選擇性作用(與全身作用相比)，肺內投予後彼等的肺滯留時間及/或彼等的作用期間(C-2.1、C-2.2)和低至無VQ‑不匹配(肺內選擇性)(C-2.3)。再者，藥物物質吸入施用後，臨床前可顯示通氣改善，例如支氣管擴張作用(C-3.1和C-3.2)及對氣道高反應性和發炎的抑制作用(C-3.3)。
根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形，如例如(I-M-I)和(I-M-II))的良好治療功效和目標參與(target engagement)也可在臨床上顯示：吸入施用後，總比氣道阻力降低(C-4.1)，血漿cGMP濃度增加作為肺中藥物濃度的替代物(目標參與之指示)(C-4.1、C-4.2)及肺動脈壓和肺血管阻力的選擇性降低(C-4.4)。
再者，可顯示適合於吸入施用之藥物物質的藥物動力性質。藥物物質之口服、靜脈內和吸入性投予後的血漿濃度分析顯示吸入施用後活性成分的最長半衰期(C-4.3)。
最後人類吸入1000 µg後，噴出劑量已確定為720µg。此研究的結果證實沉積的肺劑量和半衰期對於吸入性乾粉投予來說是足夠的，藥物物質(如實施例4所示)在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。
總之，所有結果顯示式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)，尤其是式(I-M-I)之單水合物I)特別適合於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)且對於吸入乾粉投予來說是足夠的，實施例4在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。
根據本發明之化合物，式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))特別適合於治療及/或預防心血管、心肺和肺病症，較佳適合於心肺病症。
因此，根據本發明之化合物(尤其是(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))可使用於供治療及/或預防心血管和心肺病症諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)、以及肺病症諸如氣喘、慢性阻塞性肺病(COPD)或肺纖維化之藥劑。
在本發明的情況下，術語“sGC調節劑”包括兩種能夠調節sGC的不同化合物類別，即sGC刺激劑和sGC活化劑( Sandner P, Becker-Pelster EM, Stasch JP. Discovery and development of sGC stimulators for the treatment of pulmonary hypertension and rare diseases. Nitric Oxide 2018；77:88-95.；Hoenicka M, Becker EM, Apeler H, Sirichoke T, Schröder H, Gerzer R, Stasch JP. Purified soluble guanylyl cyclase expressed in a baculovirus/Sf9 system: stimulation by YC-1, nitric oxide, and carbon monoxide. J Mol Med (Berl) 1999；77:14-23；Evgenov OV, Kohane DS, Bloch KD, Stasch JP, Volpato GP, Bellas E, Evgenov NV, Buys ES, Gnoth MJ, Graveline AR, Liu R, Hess DR, Langer R, Zapol WM. Inhaled agonists of soluble guanylate cyclase induce selective pulmonary  vasodilation. Am J Respir Crit Care Med 2007；176:1138-1145)。兩類化合物直接結合於sGC作為別位調節劑。sGC刺激劑具有雙重作用模式，可直接刺激天然sGC而與NO無關，且也藉由穩定NO-sGC結合使sGC對低水平NO敏感。相比之下，sGC活化劑結合至未佔用的血色素結合域，從而模擬與NO結合的血色素，並活化病理改變之對NO無反應的apo-sGC。最近的證據顯示與許多心肺病症相關的氧化壓力會將細胞內天然sGC水平轉移向apo-sGC形式( Evgenov OV, Pacher P, Schmidt PM, Hasko g，Schmidt HH, Stasch JP. NO-independent stimulators and activators of soluble guanylate cyclase: discovery and therapeutic potential. Nat Rev Drug Discov 2006；5:755-768；Münzel T, Genth-Zotz S, Hink U. Targeting heme-oxidized soluble guanylate cyclase: solution for all cardiorenal problems in heart failure? Hypertension 2007；49:974-976)，提供活化劑在各種心血管病理生理條件(如PH)下sGC的基本原理(Wood KC, Durgin BG, Schmidt HM, Hahn SA, Baust JJ, Bachman T, Vitturi DA, Ghosh S, Ofori-Acquah SF, Mora AL, Gladwin MT, Straub AC. Smooth muscle cytochrome b5 reductase 3 deficiency accelerates pulmonary hypertension development in sickle cell mice. Blood Adv 2019；3:4104-4116.；Rahaman MM, Nguyen AT, Miller MP, Hahn SA, Sparacino-Watkins C, Jobbagy S, Carew NT, Cantu-Medellin N, Wood KC, Baty CJ, Schopfer FJ, Kelley EE, Gladwin MT, Martin E, Straub AC. Cytochrome b5 Reductase 3 Modulates Soluble Guanylate Cyclase Redox State and cGMP signaling. Circ Res 2017；121:137-148.；Durgin BG, Hahn SA, Schmidt HM, Miller MP, Hafeez N, Mathar I, Freitag D, Sandner P, Straub AC. Loss of smooth muscle CYB5R3 amplifies angiotensin II-induced hypertension by increasing sGC heme oxidation. JCI Insight 2019；4:e129183.；Sandner P, Zimmer DP, Milne GT, Follmann M, Hobbs A, Stasch JP. Soluble guanylate cyclase stimulators and activators. Handb Exp Pharmacol 2019；doi:10.1007/164_2018_197)。
在本發明的情況下，術語術語"肺高血壓"包括其原發性和繼發性亞型，如下述根據其各自病因由Dana Point/Nizza分類所定義 [參見D. Montana and G. Simonneau, in: A.J. Peacock et al. (Eds.), Pulmonary Circulation. Diseases and their treatment, 3 rdedition, Hodder Arnold Publ., 2011, pp. 197-206；M.M. Hoeper et al., J. Am. Coll. Cardiol.2009, 54 (1), S85-S96] updated Nizza classification Gérald Simonneau, David Montani, David S. Celermajer, Christopher P. Denton, Michael A. Gatzoulis, Michael Krowka, Paul G. Williams, Rogerio Souza: Haemodynamic definitions and updated clinical classification of pulmonary hypertension, in: European Respiratory Journal, 2018；DOI: 10.1183/13993003.01913-2018]。此等特別包括在第1組肺動脈高血壓(PAH)，其中包括特發性和家族性形式(分別為IPAH和FPAH)。再者，PAH也包括新生兒持續性肺高血壓和與膠原病相關的肺動脈高壓(APAH)、先天性全身肺分流病變、門脈高壓、HIV感染、某些藥物和藥劑(例如食慾抑製劑)的攝入、具有顯著靜脈/毛細血管成分的病症(諸如肺靜脈閉塞性疾病和肺毛細血管血管瘤病)、或其他疾病(例如甲狀腺疾病、糖原貯積病、戈謝病、遺傳性毛細血管擴張症、血紅素病變、骨髓增生性疾病和脾切除術)。第2組包含患有導致左心病症(諸如心室、心房或瓣膜病症)的PH患者。第3組包含與肺部疾病相關的肺高血壓之形式，例如慢性阻塞性肺病(COPD)、間質性肺部疾病(ILD)、肺纖維化(IPF)及/或低氧血症(例如睡眠呼吸中止症候群、肺泡換氣不足、慢性高海拔病、遺傳性畸形)。第4組包括患有慢性血栓及/或栓塞性病症的PH患者，例如在近端及/或遠端肺動脈之血栓栓塞性阻塞(CTEPH)或非血栓性栓塞(例如由於腫瘤病、寄生蟲、異物)的情況下。不太常見的肺高血壓(諸如在罹患類肉瘤病、組織細胞增生症X或淋巴管瘤病患者中)係總結於第5組中。
根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形，如例如(I-M-I)和(I-M-II))也適合於治療及/或預防肺病症諸如氣喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和肺纖維化。
在本發明的情況下，術語“氣喘”包括肺部氣道的異質性慢性炎性疾病。其特徵為多變且反復出現的症狀、其係因為通常由支氣管的過度反應(hyperreagibility)引起直至支氣管痙攣之可逆氣流阻塞。症狀包括喘息、咳嗽、胸悶和呼吸急促之發作。此等可每天發生幾次或每週發生幾次。因人而異，氣喘症狀可能會在夜間或運動時加重。氣喘被認為是由遺傳和環境因素共同引起的。環境因素包括接觸空氣污染和過敏原。其他潛在的誘因包括藥物諸如阿司匹林和β阻斷劑。診斷通常基於症狀模式、隨時間對治療的反應以及和肺活量測量法肺功能測試。氣喘根據症狀頻率、第一秒用力呼氣量(FEV1)和峰值呼氣流速進行分類。也可分類為異位性或非異位性，其中異位性係指發展1型過敏性反應的傾向。沒有已知的氣喘治愈方法，但可以很好地治療。症狀可藉由避免刺激物(trigger)(如過敏原和呼吸道刺激物)來預防，及藉由使用吸入皮質類固醇來抑制。若氣喘症狀仍未得到控制，除了吸入皮質類固醇外，可使用長效β促效劑(LABA)和其他物質(例如抗白三烯劑)。急性惡化症狀的治療通常使用吸入性短效β-2促效劑(諸如沙丁胺醇(salbutamol)和皮質類固醇。在嚴重的情況下，可能需要全身性皮質類固醇、硫酸鎂和住院治療。氣喘患者的一個子集會發展為一種疾病的嚴重形式，其病因包括氣道炎症以及尚不明確的內在驅動因素。為了解決這個問題，我們研究了人類氣道平滑肌細胞(HASMC)，其鬆弛驅動氣道支氣管擴張及其官能不良會導致嚴重氣喘患者的氣道阻塞和過敏。因為HASMC舒張可由NO-可溶性鳥苷酸環化酶(sGC)-cGMP傳訊路徑驅動，所以來自嚴重氣喘供體的HASMC可能在彼等的sGC或支持 sGC功能的氧化還原酶中具有固有缺陷。大多數嚴重氣喘供體 HASMC(12/17)和肺樣品主要表現官能不良的sGC，其對NO無反應且具有低異二聚體含量和高Hsp90結合。此sGC表型與支持氧化還原酶細胞色素b5還原酶、過氧化氫酶和硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin)-1的較低表現水平以及血色素加氧酶1和2的較高表現相關，此暗示嚴重氣喘患者由於固有的sGC官能不良而傾向於在彼等的氣道中缺陷NO-sGC-cGMP傳訊之假設，其轉而又與影響 sGC成熟和功能的細胞氧化還原酶的固有改變有關。因此，sGC活化劑可能是這些患者在這些病理生理條件下最佳化支氣管擴張的新目標選頊(參見例如下列參考文獻：Arnab Ghosh, Cynthia J. Koziol-White, William F. Jester Jr., Serpil C. Erzurum, Kewal Asosingh, Reynold A. Panettieri Jr.see, Dennis J. Stuehr: An inherent dysfunction in soluble guanylyl cyclase is present in the airway of severe asthmatics and is associated with aberrant redox enzyme expression and compromised NO-cGMP signaling in Redox Biology 39 (2021) 101832；Maggie Lam,Jane E. Bourke, Ph.D., A New Pathway to Airway Relaxation: Targeting the “Other” Cyclase in Asthma American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology Volume 62 Number 1 | January 2020；Cynthia J. Koziol-White, Arnab Ghosh, Peter Sandner, Serpil E. Erzurum, Dennis J. Stuehr, and Reynold A. Panettieri, Jr.: Soluble Guanylate Cyclase Agonists Induce Bronchodilation in Human Small Airways, Am J Respir Cell Mol Biol Vol 62, Iss 1, pp 43–48, Jan 2020)。
由於彼等的活性輪廓，根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))係特別適合於治療及/或預防心血管和心肺病症諸如肺高血壓之原發性和繼發性形式。
本發明此外提供根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))之用途，其係用於治療及/或預防病症(特別是心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)，諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
本發明此外提供根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸)以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))之用途，其係用於製備供治療及/或預防疾病(特別是心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)，諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))的藥劑。
本發明此外提供一種使用於治療及/或預防病症(特別是心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之藥劑，其包含至少一種根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)))。
本發明此外提供根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)))之用途，其使用於治療及/或預防病症(特別是心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH) 和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之方法。
本發明此外提供一種用於治療及/或預防病症(特別是心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH) 和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之方法，其包含將式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸(尤其是比較例11) 以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))以吸入劑型(例如於乾粉調配物的形式之乾粉吸入器)每天一次或兩次投予至有需要的患者為期等於或超過兩天，較佳至少連續二至七天，較佳為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，其中當吸入投予至有需要的患者時，該sGC活化劑具有為期超過24小時的持續功效。
本發明進一步關於式I之sGC活化劑(尤其是比較例11，式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)))的吸入劑型之用途，其用於製備供治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))的藥劑，每天投予一次或兩次為期等於或超過兩天，較佳至少連續二至七天，較佳為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程，其中當吸入投予至有需要的患者時，該sGC活化劑具有為期超過24小時的持續功效。
本發明進一步關於一種包含容器之經包裝醫藥組成物，該容器含有乾粉吸入器(=DPI)和包含式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))之醫藥調配物，該容器進一步含有使用該乾粉的說明，例如在深吸一口氣後，患者必須屏住呼吸約2秒，以便乾粉藥物從氣流中濃縮至更深的肺部區域表面，並沉積在靠近其所欲藥理作用之位置，以治療心肺病症，較佳地肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
在一較佳實施態樣中，本發明進一步關於一種包含容器之經包裝醫藥組成物，該容器含有乾粉吸入器(=DPI)和包含式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))之醫藥調配物，該經包裝醫藥組成物包含容器，其含有包含(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之乾粉，該容器進一步含有用於以每天一次或兩次的頻率投予該乾粉以治療心肺病症，較佳地肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)，此外還有肺部疾患的用法說明。
本發明進一步關於一種藥劑，其含有至少一種根據本發明之化合物，通常連同一或多種惰性無毒醫藥上合適的賦形劑，及其用於上述目的之用途。
根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸)以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)))可單獨使用或若有需要的話，可與其他活性化合物組合使用。本發明進一步關於含有至少一種根據本發明之化合物(尤其是式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)))和一或多種其他活性化合物之藥劑，特別是用於治療及/或預防上述疾病。作為適當組合活性化合物，我們例如和較佳地可提及： • 有機硝酸鹽和NO供體，例如：硝普鈉(sodium nitroprusside)、硝基甘油、單硝酸異山梨醇(isosorbide mononitrate)、二硝酸異山梨醇(isosorbide dinitrate)、嗎多明(molsidomine)或SIN-1，與吸入性NO； • 用於保留血管反應性(preserved vasoresponsiveness)的PAH患者之Ca-通道阻斷劑 • 抑制環鳥甘單磷酸(cGMP)及/或環腺苷酸單磷酸(cAMP)之降解的化合物，例如磷酸二酯酶(PDE) 1、2、3、4及/或5之抑制劑，特別是PDE 3抑制劑如安西芬特林(ensifentrin)、PDE4抑制劑諸如羅氟司特(roflumilast)或瑞華司特(revamilast)，及PDE 5抑制劑諸如昔多芬(西地那非(sildenafil))、伐地那非(vardenafil)、他達拉非(tadalafil)、烏地那非(udenafil)、達生他非(dasantafil)、阿伐那菲(avanafil)、米羅那非(mirodenafil)或羅地那非(lodenafil)； • 鳥苷酸環化酶刺之NO-獨立性但血紅素-依賴性激劑，特別是里奧西瓜(Riociguat)和WO 00/06568、WO 00/06569、WO 02/42301、WO 03/095451、WO 2011/147809、WO 2012/004258、WO 2012/028647、WO 2012/059549和WO2014/068099中所述之化合物； • 前列環素類似物及IP受體促效劑，例如且較佳為伊洛前列素(iloprost)、貝前列素(beraprost)、曲前列環素(treprostinil)、依前列醇(epoprostenol)或NS-304； • 內皮素受體拮抗劑，例如且較佳為波生坦(bosentan)、達盧生坦(darusentan)、安立生坦(ambrisentan)或西他生坦(sitaxsentan)； • 人類嗜中性球彈性蛋白酶(HNE)抑制劑，例如且較佳為西維來斯他(sivelestat)或DX-890(瑞托恩(Reltran))； • 抑制訊號轉導級聯之化合物，特別是選自酪胺酸激酶抑制劑之群組，例如且較佳為達沙替尼(dasatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、博舒替尼(bosutinib)、瑞戈非尼(regorafenib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、西地尼布(cediranib)、阿西替尼(axitinib)、特拉替尼(telatinib)、伊馬替尼(imatinib)、布立尼布(brivanib)、帕唑帕尼(pazopanib)、瓦他拉尼(vatalanib)、吉非替尼(gefitinib)、埃羅替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、來他替尼(lestaurtinib)、培利替尼(pelitinib)、司馬沙尼(semaxanib)、馬賽替尼(masitinib)、或坦度替尼(tandutinib)； • 充當配體陷阱(ligand trap)的化合物，其對TGF-β超家族的多種蛋白質具有高選擇性，包括活化素、GDF和其他據信具有阻斷TGF-β超家族傳訊路徑的能力者，從而促進骨形態發生蛋白受體II 型 (BMPR-II)傳訊，並有可能像索替樂賽(sotatercept)一樣恢復血管穩態； • Rho激酶抑制劑，例如且較佳為法舒地爾(fasudil)、Y-27632、SLx-2119、BF-66851、BF-66852、BF-66853、KI-23095或BA-1049； • 抗阻塞劑，如使用於例如治療慢性阻塞性肺病(COPD)或支氣管氣喘，例如且較佳為吸入性或全身性投予之β受體模擬物(例如沙丁胺醇(salbutamol)、沙美特羅(salmeterol))或吸入性投予之抗毒蕈鹼能物質(例如異丙托溴銨(ipratropium)、噻托溴銨(tiotropium)； • 抗發炎及/或免疫抑制劑，如使用於例如治療慢性阻塞性肺病(COPD)、支氣管性氣喘或肺纖維化，例如且較佳為全身或吸入性投予之皮質類固醇、氟替福莫(flutiform)、吡非尼酮(pirfenidone)、乙醯半胱胺酸、硫唑嘌呤(azathioprine)或BIBF-1120、尼達尼布(nintedanib)或曲前列環素(treprostinil)； • 使用於全身性及/或吸入治療肺部病症之活性化合物，例如用於囊狀纖維化(α-1-抗胰蛋白酶、胺曲南(aztreonam)、依伐卡托(ivacaftor)、鲁瑪卡托(lumacaftor)、阿他盧崙(ataluren)、阿米卡星(amikacin)、左氧氟沙星(levofloxacin))、慢性阻塞性肺病(COPD)(噻托溴銨(Tiotropium)、LABA/LAMA、LAS40464、PT003、SUN-101)、急性呼吸窘迫症候群(ARDS) 和急性肺損傷(ALI) (干擾素-β-1a、查瑪金素(traumakines)、PEG-腎上腺髓質素(adrenomedullin)、吸入sGC調節劑例如BAY1211163))、阻塞型睡眠呼吸中止症(VI-0521、TASK 通道阻斷劑和ADRA2C拮抗劑)、支氣管擴張症(甘露糖醇、環丙沙星(ciprofloxacin))、阻塞性細支氣管炎(環孢素、胺曲南(aztreonam))； • 抗血栓劑，例如且較佳選自下列群組之化合物：血小板凝聚抑制劑、抗凝血劑或前纖維蛋白分解的物質(profibrinolytic substances)。
抗血栓劑較佳係理解為選自下列群組之化合物：血小板凝聚抑制劑、抗凝血劑或前纖維蛋白分解的物質(profibrinolytic substances)。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與血小板凝集抑制劑(例如且較佳為阿斯匹靈、氯吡多(clopidogrel)、氯苄噻唑啶(ticlopidine)或雙嘧達莫(dipyridamol))組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與凝血酶抑制劑(例如且較佳為希美加曲(ximelagatran)、美拉加群(melagatran)、達比加群(dabigatran)比伐盧定(bivalirudin)或克立生(Clexane))組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與GPIIb/IIIa拮抗劑(例如且較佳為替羅非班(tirofiban)或阿昔單抗(abciximab))組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與Xa因子抑制劑(例如且較佳為利伐沙班(rivaroxaban)、阿哌沙班(apixaban)、菲得沙班(fidexaban)、雷扎沙班(razaxaban)、磺達肝素(fondaparinux)、抑達肝素(idraparinux)、DU-176b、PMD-3112、YM-150、KFA-1982、EMD-503982、MCM-17、MLN-1021、DX 9065a、DPC 906、JTV 803、SSR-126512或SSR-128428)組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與維生素K拮抗劑(例如且較佳為自香豆素)組合投予。
用於降低肺血壓的藥劑較佳係理解為來自鈣拮抗劑、PDE5抑製劑、sGC刺激劑和活化劑、前列環素類似物和IP受體促效劑以及內皮素受體拮抗劑的化合物。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與鈣拮抗劑(例如且較佳為硝苯地平(nifedipine)、氨氯地平(amlodipine)、維拉帕米(verapamil)或地爾硫卓(diltiazem))組合投予。
在本發明之一較佳實施態樣中，根據本發明之化合物係與內皮素受體拮抗劑(例如且較佳為波生坦(bosentan)、達盧生坦(darusentan)、安立生坦(ambrisentan)或西他生坦(sitaxsentan))組合投予。 技術目標
鑒於該術的背景和現狀，本發明的技術目標為提供使用於心肺病症之治療的適當吸入劑型/藥劑以及用於心肺病症之治療的適當吸入劑量方案，該心肺病症係諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
為了開發使用於心肺病症之治療的適當吸入性藥劑使以及用於心肺病症之治療的適當吸入劑量方案，該心肺病症係諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)，需要滿足有關藥物物質以及藥品的某些技術和醫學需求與要求。
首先，活性成分(藥物物質)需要具有適當的物理化學、藥物動力學和藥效學性質。例如藥物物質需要適合於吸入治療且需要具有治療心肺病症的足夠功效。再者，在預計的PH形式中活性成分應具有明確的功效，同時也是護理標準(standard of care)(SoC例如內皮素拮抗劑諸如波生坦(bosentan)、PDE5抑制劑例如西地那非(sildenafil)、IP促效劑例如伊洛美定(Ilomedin)、鈣通道阻斷劑例如和sGC刺激劑例如里奧西瓜(Riociguat))。另外，活性成分應具有其他有利性質，特別是關於其肺選擇性作用(與全身作用相比)，例如高肺選擇性、低至無VQ‑不匹配、肺內投予後其肺內滯留時間及/或其作用期間。藥物物質應適合於長期治療方案/使用。再者，藥物物質應顯示通氣改善，例如支氣管擴張作用及/或對氣道高反應性和發炎的抑制作用且因此特別適合於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
藥物物質式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其式(I-M-I)和(I-M-II)之假多晶形應具有持續的血管舒張和支氣管擴張功效為期超過12 小時，為期最多24 小時，其特徵為例如肺血流動力的改善，導致較低的肺血管阻力(PVR)、6分鐘步行測試中步行距離改善、NYHA(紐約健康協會)患者分類的轉變或肺功能改善例如較高的FEV1(人在用力呼吸的第一秒內可呼出的用力呼氣量)和較低的比氣道阻力(sRaw)、在吸入性投予時，指示健康肺部的支氣管擴張活性之參數。
再者，活性成分(藥物物質)需要以限定的穩定的晶形提供，以適合於乾粉醫藥調配物及以特定最佳吸入劑量方案給投予來治療心肺病症。
另外，最終藥品(調配物)需要具有適當性質，例如足夠的化學穩定性和足夠的氣霧劑性能，以便將藥物物質以足夠量而對患者具低至無副作用遞送至目標器官(例如肺)。需要足夠的物理化學穩定性來保持活性成分的化學組成並避免不可接受的降解或立體化學轉化。更為重要的是，需要保持物理形態，以免改變影響活性成分之藥物動力性質的生物製藥性質。穩定和適當的氣霧劑性能意指就平均遞送劑量和遞送劑量之均勻性的意義而言，可再現的藥物遞送以及最終劑型中所需大部分的可用標稱藥物劑量可再現地將藥物遞送至作用位置。實際上且藉由適當分析方法諸如空氣動力粒徑分布以級聯衝擊測試，大部分微粉化細活性成分顆粒應以(或者細顆粒質量)和細顆粒分率(相對於遞送劑量及/或標稱劑量之%)回收。
本發明人令人驚訝地發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸可藉由改良的化學方法以可靠的方式進行大規模製造。
另外，本發明人發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以穩定的晶形(如例如式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II，較佳為式(I-M-I)之單水合物I)存在。
再者，本發明人令人驚訝地發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的晶形可藉由一種新穎的選擇性結晶方法獲得，較佳地單水合物形式I (I-M-I) 可藉由從甲醇和水或甲醇、丙酮和水結晶而獲得。
因此，藥物物質式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸首次以適用於吸入劑型、藥物和吸入劑量方案(較佳 DPI)的形式提供。
令人驚訝地臨床前實驗揭示相較於西那西瓜(Cinaciguat)，sGC活化劑式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))(參見C-2.1)，顯示在離體血管中，隱動脈之穿透較慢，在離體細支氣管中，恢復因子延長，以及在Langendorff中，洗出得分心臟實驗增加(參見實驗部分C-1.1 (離體血管) C-3.1 (細支氣管)和C-1.2 (Langendorff))以及改善肺選擇性和延長作用期間(在 PAH 動物模式(豬和狗)中，在吸入施用後，延長選擇性肺動脈壓(= PAP)降低而無全身性血壓(=BP)降低效應)(參見實驗部分C-2.1 (豬)和C-2.2 (狗)。
再者，已研究作用期間的預測和人體劑量的預測。鑒於在小型豬模式中100 µg/kg 作為有效劑量，300-1370 µg 肺沉積劑量係假定為有效劑量，取決於對不同種間蛋白結合的考慮(參見C-2.1)。
最後已研究活性成分的不同假多晶形的藥理作用。在使用至少 4 小時之長作用期間的急性 PAH 模式中，所有包含比較例11的晶形(例如倍半水合物實施例6e)之乾粉調配物在吸入施用後選擇性地和劑量依賴性地降低PAP。對於增加的施用劑量，觀察到清晰的劑量反應曲線(參見C-2.1)。
此等研究結果支持式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形單水合物I (實施例4)或單水合物II (實施例2)對於每天一次或兩次吸入治療方案的適合性，該方案包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II))使用於治療心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
以小型豬模式測試根據本發明和比較例3、4和5的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(比較例11)以及其式(I-M-I)之多晶形單水合物I以評估 (C-2.1)中的肺選擇性以及作用期間。雖然所有3種化合物都顯示適當的肺部選擇性，但只有比較例11和比較例4顯示足夠的作用期間。比較例11 顯示經240 分鐘的整個觀察間隔具有最大效應之選擇性PAP效應，而比較例3 顯示其吸入施用後30 分鐘對 PAP的最大效應，其在 120 分鐘後再次完全消除。以清醒缺氧挑戰的狗模式評估比較例11和比較例4的作用期間(C-2.2)。在此模式中，與比較例4相比，比較例11 顯示持續長達 17 小時的一致長作用期間(PAP 降低)。因此與比較例3、4和5 (在WO 14/012934-A1中揭示為實施例2、37和39)相比，比較例11(對應於本發明)最適合於每日一次至兩次的治療方案。
為了評估肺內選擇性，以單側支氣管閉塞模式評估比較例11相對對全身性施用的血管擴張劑。在此模式中，與全身施用比較例11或護理標準相比，吸入施用後未偵測到對去飽和區的負效應。因此，在吸入施用後，比較例11與全身性施用的血管擴張劑相比顯示更好的風險效益比，並且可能是在全身性施用的血管擴張劑治療下處於通氣灌注不匹配的風險之PH患者的一種有效但也安全的治療(C-2.3)。再者，在藥物物質吸入施用後，通氣得到改善，例如臨床前可顯示支氣管擴張作用(C-3.1和C-3.2)以及對氣道高反應性和發炎的抑制作用(C-3.3)。
再者，我們發現sGC活化劑呈其式(I-M-I)之晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(實施例4)在首次臨床研究中(參見實驗部分C-4.1)增加作為sGC活化的第二信使分子之cGMP 水平作為肺中藥物濃度的替代物(目標參與之指示)以及在乾粉施用後在健康志願者中為期超過12 h，最多24 h的有益支氣管擴張性質(例如總比氣道阻力(sRaw)的降低，指示肺部支氣管擴張活性的參數)，支持臨床上長較肺滯留時間以及實施例4成功使用於治療心肺疾病的適合性。在健康志願者中觀察到高達 4000 µg的劑量對全身性血壓沒有臨床意義的影響。
而且，我們發現在劑量最多4000 µg(含)下，肺高血壓患者的肺動脈壓和肺血管阻力選擇性降低，對全身血壓沒有臨床相關影響。直到3h的測量期結束(＞3h的測量期在技術上是不可行的)，該效應一直持續而反應沒有降低。實施例4的肺滯留時間超過3h(乾粉施用後大概超過12hr之時段，最多24 hr)可從C 4-3中所述的研究中測量的長血漿半衰期得出結論(參見實驗部分C‑4.3)。
另外，藥物物質(實施例4)之口服、靜脈內和吸入性投予後的血漿濃度分析顯示吸入施用後活性成分的最長半衰期(C-4.3)。人類吸入1000 µg後，噴出(肺)劑量已確定為720µg。此研究的結果證實肺劑量和半衰期對於吸入乾粉投予來說是足夠的，實施例4在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。
總之，所有結果顯示式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)，尤其是式(I-M-I)之單水合物I)特別適合於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)且對於吸入乾粉投予來說是足夠的，使能夠每天一次治療實施例4在肺中的足夠24 h藥物覆蓋。
此等研究結果也支持實施例4對於每天一次或兩次吸入治療方案的適合性，該方案包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其式(I-M-I)之晶形單水合物I為期等於或超過兩天(較佳至少連續2至7天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程)使用於治療心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
令人驚訝地，現已發現在健康志願者中用藥7天後(第一次給藥後，隨後是48小時的無給藥期，之後每24小時6次給藥)，每天一次吸入投予式I之sGC 活化劑(尤其是實施例4，呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)具有為期超過12小時，最多24小時的延長持續效應，其當每天一次或兩次吸入性投予時經由支氣管擴張可能在患者中導致例如改善之血液動力學效應，如例如較低的肺血管阻力(PVR)、6分鐘步行測試中步行距離改善、NYHA患者分類的轉變或肺功能改善例如較高的FEV1。
另外，我們發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(比較例11) 具有有益的生理化學性質例如蛋白質結合和CACO通量(參見實驗部分C-5.1 (Caco滲透性)和C-5.2 (蛋白質結合))，其使比較例11成為用於以乾粉吸入至肺來局部治療心肺病症之適當化合物。而且，我們的數據指示比較例11(尤其是單水合物形式I)不僅顯示經由肺中之選擇性血管舒張有效降低PAP，且與西那西瓜相比，也顯示更持久的支氣管擴張性質，其可有益於有慢性肺病之PH患者(第3組PH)每天一次或兩次吸入治療，甚至有可能治療肺功能受限的患者(例如氣喘病患者)。
因此藥物物質，例如根據本發明的式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，以及其假多晶形(I-M-I)和(I-M-II)具有極佳的一級藥理性質： • (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸為有效和選擇性sGC活化劑及提供一種吸入後治療PH之新方法。 • (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸在不同疾病相關動物模式(凝血脂素和缺氧攻擊的大鼠、豬和狗)中吸入施用後選擇性降低升高的PAP且作用期間長，表明每天施用一次或兩次，較佳每天施用一次。 • 在作為VQ不匹配之取代物的單側通氣小型豬模式中，與全身性施用的血管擴張劑相比，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸吸入施用後降低PAP而對加氧作用沒有負面影響。 • 除PAH之護理標準(standard of care) (SoC) (例如波生坦(bosentan)、西地那非(sildenafil)、伊洛美定(Ilomedin)、和里奧西瓜(Riociguat))之外，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸在PAH‑小型豬模式中吸入施用後選擇性降低升高的PAP。 • (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的功效在氧化壓力的實驗條件(1H-[1,2,4]㗁二唑并[4,3-a]喹㗁啉-1-酮，一種可溶性鳥苷酸環化酶[ODQ]的高選擇性不可逆血色素位置抑制劑，L-Nω-硝基精胺酸甲酯[L-NAME] 治療)下增強。 • 關於通氣，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸顯示支氣管擴張作用(乙醯膽鹼[ACh]大鼠模式)和對氣道高反應性和發炎的抑制作用(慢性卵白蛋白氣喘小鼠模式)。 • 在三種不同類型(口服、靜脈內、吸入)的投予後(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(尤其是呈其單水合物I的形式(實施例4)之血漿濃度顯示吸入施用後最長的消除半衰期。 • 人類吸入1000 µg後，噴出(肺)劑量已測定為720 µg。 • 在人體中使用sGC活化劑呈其晶形式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(實施例4)的首次研究顯示sGC活化和長肺滯留時間結合支氣管擴張性質和選擇性降低肺動脈壓和肺血管阻力，在良好的局部和全身耐受性下達到最高測試劑量 4000 µg(包括)。
因此，根據本發明之藥物物質，例如式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，以及其假多晶形(I-M-I)和(I-M-II)在患者中具有極佳一級藥理學和藥效學性質，包括降低肺動脈壓(mPAP)和肺血管阻力(PVR)、如藉由例如FEV1測量的支氣管擴張、具有低至無全身性副作用(尤其是對全身血液動力學，諸如臨床相關的血壓或心率之改變)的肺選擇性及低至無增加的VQ不匹配以避免相關的去飽和，再者，肺內投予後之足夠的肺滯留時間及/或有足夠的作用期間。
令人驚訝地，已發現，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(尤其是呈單水合物I的形式)的局部投予(尤其是吸入投予)有可能成功控制心肺疾病心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)、和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))。肺中的活性成分濃度可長期保持在從醫學觀點來看之最佳治療所需的水平。除了在疾病位置之較高和持久的活性成分水平外，也可能同時達成活性成分之較低全身濃度，從而可以避免藥物的副作用，例如沒有臨床相關的全身性血壓下降。
令人驚訝地，藥物物質可以式(I-M-I)之單水合物I的單一晶形且化學穩定的形式提供。此形式在微粉化條件下也是穩定的。
令人驚訝地，根據本發明之醫藥乾粉調配物係透過極佳氣霧劑性能(例如高細顆粒劑量、細顆粒分率和量關於標稱劑量之遞送劑)和足夠的化學穩定性加以表徵。再者，根據本發明之醫藥乾粉調配物可藉由新穎方法(例如摻合物均勻性)以技術可靠的方式製造。
令人驚訝地，包含呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I)組合包含呈粗乳糖和細乳糖的混合物之乳糖單水合物的乳糖載體之醫藥乾粉調配物係適合於心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之吸入性治療。
鑑於先前技術，此等研究結果是不可預見的，因為式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的極佳一級藥理學和藥效學性質，尤其是與類似的5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(如例如比較例3、4和5)相比，其較長的作用期間是不為人所知。
而且，此等研究結果是不可預見的，因為假多晶形(尤其是結晶穩定的水合物)是不為人所知。
令人驚訝地，粉化和穩定性研究後，單水合物形式I (I-M-I) (實施例4)被鑑定為穩定假多晶形之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸微。
再者，令人驚訝的是，變形 I (I-M-I)可藉由從甲醇、丙酮水中選擇性結晶獲得。
再者，没有包含式(I)之酸也没有其任何晶形(如例如單水合物形式I (I-M-I)或單水合物形式II(i-M-II))的吸入性固體載體調配物是已知的。
因此，本發明之技術目標為提供一種用於治療心肺病症之新穎適當吸入劑量方案，其包含將式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳為呈乾粉施用的形式之式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I投予至有需要的患者，其中該活性成分在患者中具有極佳的一級藥理學和藥效學性質，包括降低肺動脈壓(mPAP)和肺血管阻力(PVR)、如藉由例如FEV1測量的支氣管擴張、具有低至無全身性副作用(尤其是對全身血液動力學，諸如臨床相關的血壓或心率之改變)的肺選擇性及低至無增加的VQ不匹配以避免相關的去飽和，再者，肺內投予後之足夠的肺滯留時間及/或有足夠的作用期間。
本發明人令人驚訝地發現，用於治療心肺病症之新穎適當吸入劑量方案包含將式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳於其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I或式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II 每天一次或兩次為期等於或超過兩天(較佳至少連續2至7天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程)以吸入劑型投予至有需要的患者，該吸入劑型包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈乾粉施用，較佳呈乾粉吸入器和(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之組合，呈包含活性成分和醫藥上合適的賦形劑或載體之乾粉調配物，同時較佳地將活性成分和醫藥上適合的賦形劑填充於硬膠囊中。
為了提供根據本發明之用於治療心肺病症之新穎適當吸入劑量方案，重要的是以限定的可吸入形式提供特定劑量的特定藥物物質，其中標稱劑量足以治療預期的心肺病症。
為了確定足夠的人體劑量，必需選擇對PAH最具預測性的動物模式和確定最小有效劑量，以及界定首次臨床研究中要評估的劑量範圍(最小有效劑量、有效劑量和 最大耐受劑量)。
因此活性成分應以包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)的吸入劑型每天一次或兩次為期等於或超過兩天(較佳至少連續2至7天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程)投予至有需要的患者。
最後本發明之用於治療心肺病症的新穎吸入劑量方案根據係適合使用於心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)、和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之治療。 人體劑量估計
根據本發明之調配物可以藉由過濾器收集管方法測定之遞送劑量(DD)和藉由級聯撞擊測定之細顆粒劑量(FPD)加以表徵。測定遞送劑量和細顆粒劑量的分析方法在藥典中一般描述為此等方法與可吸入劑型(例如乾粉吸入調配物)和構成品質控制的慣例(例如臨床使用的DPI產物之釋出)保持一致。
已經發現，具有不同標稱劑量的不同調配物導致不同的遞送劑量，更重要的是，導致加以表徵有效劑量的某細顆粒劑量，因為此被遞送進入肺深部至作用位置。理論上，輸送劑量和細顆粒劑量和分率與填充粉末劑量呈線性關係，但由於幾個相互作用的因素，此不能可靠地預測，實際上可能不同，而需要相關研究。需要遞送劑量盡可能接近標稱劑量。事實上，遞送劑量永遠不會100%匹配標稱劑量，因為在吸入膠囊的表面和使用之乾粉吸入器的氣霧劑路徑上總是會一定程度上留下殘留物。當然，此性質高度取決於活性成分的物理化學特性及其從粉末摻合物中的釋放行為。類似地，相對於填充標稱活性成分含量，希望細顆粒劑量和細顆粒分數盡可能高，以盡可能好地利用可用藥物量並減少活性成分的損失或減少遞送至除肺深部之外的其他隔室的部分比(例如藉由吞嚥經由較大的藥物顆粒之口腔效應)。
由於可吸入調配物的性質以及與例如口服固體調配物相反，並非所有標稱含量都會被遞送進入肺部。可定義幾個分率，其以特定體外分析方法加以表徵，並支持估計吸入期間遞送至患者的劑量分率(遞送劑量或噴出劑量)和預計會到達深氣道和肺泡之以下細顆粒(例如 5 µm或4.5 µm)的分率(細顆粒劑量)。關於概述，參見下表1。 表1：關於劑量的術語之定義
術語 縮寫 定義 同義詞或相等術語
標稱劑量 ND API填充於膠囊(臨床研究)或霧化器(藥理動物實驗)之總計劑量。 膠囊劑量，膠囊濃度，標記在膠囊上之藥物物質的量
噴出劑量 ED 在界定的實驗室測試條件下，實際離開裝置的劑量。 對應於遞送劑量
遞送劑量 DD 估計或計算的動物吸入的劑量(從鼻尖/嘴直到肺泡)或人類可利用的藥物物質量，ex-裝置，基於每劑量。 對應於噴出劑量
肺沉積劑量 LDD / LD 被認為到達各個動物或人類的肺部(氣管與支氣管和肺沉積)的劑量。 據認為FPD(體外測量)對應於人類肺沉積劑量
細顆粒劑量 FPD 從以體外級聯撞擊分析測定的空氣動力粒徑分布(ASPD)函數計算的參數。含有比4.5 - 5 µm空氣動力學直徑細的顆粒之吸入器的每次啟動或劑量遞送的活性醫藥成分(API)之質量(例如根據歐洲藥典)。 對於DPI，假設FPD基本等同於人體肺沉積劑量
細顆粒分率 FPF 根據與ED/DD或標稱劑量相關的FPD的細顆粒質量分率(%)
藥物動力學 / 藥效學 (PK/PD) 關係的評估
麻醉的凝血脂素A2激發PAH小型豬模式(參見實驗部分C-2.1)係視為預測人類最小有效劑量和有效劑量(MED，ED)的最相關和最敏感的模式。為了確定有效的LD，重複小型豬的實驗，不同之處在於在管的末端連接吸收過濾器以測定沉積的肺劑量。比較例11的霧化導致平均霧化效率為標稱施用劑量的5%，其導致LD為約0.15 µg/kg(3 µg/kg ND)、0.5 µg/kg(10 µg/kg ND)、1.5 µg/ kg(30 µg/kg ND)和 5 µg/kg(100 µg/kg ND)。假設最低有效ND為3 µg/kg(PAP降低5%)，則最低有效沉積LD係視為0.15 µg/kg (參見圖1)。
0.15、0.5、1.5和5 µg/kg之在小型豬中之所得肺沉積劑量乘以60 kg以達到人類肺部劑量。因此，反映60kg人類之PAP 降低的FPD計算為9、30、90 和 300 µg。
因此，經由小型豬的直接升級，基於60 公斤體重的人類之預測MED(5% PAP降低)計算為 9 µg LDD，不考慮呼吸道內的蛋白質結合。作為非結合濃度的替代物，其為肺中可能的活性濃度，我們考慮小型豬和人類血漿中非結合分率的各個差異。此考慮導致41 µg LDD之60 kg參與者的最小有效肺劑量(LD)，假設PAP之5%降低。因此，基於60公斤體重，預測的最小人類有效劑量在9 µg LDD至41 µg LDD範圍內(參見圖2)。 表 2 ：考慮和不考慮蛋白質結合的種間差異之有效肺劑量
在小型豬中之相對肺沉積劑量 [µg/kg] 在60 kg人類中之總肺沉積劑量 [µg]
不考慮蛋白質結合的種間差異 a 考慮蛋白質結合的種間差異d b
   
0.15 µg/kg (3 µg/kg標稱劑量) 9 41
0.50 µg/kg (10 µg/kg標稱劑量) 30 137
1.5 µg/kg (30 µg/kg標稱劑量) 90 410
5.0 µg/kg (100 µg/kg標稱劑量) 300 1370
a計算 (在小型豬中之相對肺沉積劑量x 60 kg)
b計算 (在小型豬中之相對肺沉積劑量x 60 kg x 4.55 (分率非結合小型豬 (血漿 fu 0.348%)/人類(血漿 fu 0.0764%)之比率)
基於表2中所列的小型豬中之相對肺沉積劑量，也對有效劑量(有效PAP降低 ＞ 5%最多至35%，最多4hrs的完整觀察期之更長的時間)進行此轉換。
因此，基於小型豬數據，預期人類的有效肺沉積劑量在9 μg至1370 μg的範圍內。
鑒於100 µg/kg 為小型豬模式中的最高有效劑量而無全身副作用(BP 降低)，與1370 µg之對應最大有效人類LDD，9-1370 µg肺沉積劑量被假定為有效劑量，取決於不同的種間蛋白結合(參見表2)。對於DPI產物，假設細顆粒物劑量(FPD)基本等同於人類肺沉積劑量。
為了解決對大範圍的肺沉積劑量的需求並將其轉化為要製造的乾粉吸入膠囊之細顆粒劑量(FPD目標)的技術規格，進行一些計算和概算。通常，若達成大於20%的標稱劑量的細顆粒分率，則認為基於粉末摻合物載體調配物的可吸入產物具有極佳性能。此外，高性能吸入產物需要關於遞送劑量的高FPF(%)且目標為 ≥30%。考慮到技術和實際原因(粉末摻合物中之活性濃度和摻合物的膠囊填充質量)，隨後使用FPD目標以確定成品乾粉吸入膠囊的界定標稱劑量。FPD和DD目標以及對應標稱劑量概述在以下兩個表3和4中。 表 3 ：標稱劑量目標和細顆粒劑量之目標和%分率(ds)
膠囊標稱劑量 [µg] 平均 FPF (FPD標稱的%) 平均 FPF (FPD DD的% ) 平均 FPD ＜4.5µm (目標 a) [µg] Min FPD ＜ 4.5µm (目標的65% b) [µg]
60 ≥ 20% ≥ 30% 12 8
75 ≥ 20% ≥ 30% 15 10
120 ≥ 20% ≥ 30% 24 16
480 ≥ 20% ≥ 30% 96 62
500 ≥ 20% ≥ 30% 100 65
1000 ≥ 20% ≥ 30% 200 130
2000 ≥ 20% ≥ 30% 400 260
3000 ≥ 20% ≥ 30% 600 390
6000 ≥ 20% ≥ 30% 1200 780
9000 ≥ 20% ≥ 30% 1800 1170
a) 從FPF標稱的%目標計算的目標值 b) 由於製造和分析測定的預期可變性，確定最低目標。
對於遞送劑量和標稱劑量之間的關係，沒有通用約束(例如藥典)要求，因為由於具有不同的性質之不同活性成分及其製造的醫藥調配物的性質非常不同，因此無法定義此關係。而是，遞送劑量的均勻性由藥典定義，以確保劑量間的一致性。目標遞送劑量是得自在標準化條件下使用界定的乾粉吸入裝置多次測定界定的劑型之經驗參數。預期平均遞送劑量應在目標DD的85-115% 範圍內。最小遞送劑量要求占平均遞送劑量範圍的 85%下限。目標遞送劑量百分比(從≥ 50%至≥ 65標稱的%)係定義為所有非線性的標稱劑量，且需要考慮相對較高含量的活性成分黏著在例如膠囊和設備表面，特別是具有較低的標稱填充劑量。 表 4 ：標稱劑量、DD 目標和相關最小遞送劑量
膠囊標稱劑量 [µg] 平均 DD (標稱的%) 平均 DD (目標 A) [µg] Min DD (目標的85% ) [µg]
60 ≥ 50% 30 26
75 ≥ 50% 38 32
120 ≥ 60% 72 61
480 ≥ 60% 288 245
500 ≥ 60% 300 255
1000 ≥ 65% 650 553
2000 ≥ 65% 1300 1105
3000 ≥ 65% 1950 1658
6000 ≥ 65% 3900 3315
9000 ≥ 65% 5850 4973
因此根據本發明之醫藥乾粉調配物為用於治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之適當藥劑。
鑒於該術的背景和現狀，本發明的技術目標為提供基於適當載體之乾粉調配物，其包含式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I組合乳糖載體以便獲得使用於治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之適當吸入性藥劑。
為了開發使用於治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)  慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之適當吸入性藥劑，需要滿足有關藥物物質以及藥品的某些技術和醫學需求與要求。
首先，活性成分(藥物物質)需要具有適當的物理化學、藥物動力學和藥效學性質。例如藥物物質需要適合於吸入治療且需要具有治療心肺病症的足夠功效。再者，在預計的PH形式中活性成分應具有明確的功效，同時也是護理標準(standard of care) (SoC例如內皮素拮抗劑諸如波生坦(bosentan)、PDE5抑制劑例如西地那非(sildenafil)、IP促效劑例如伊洛美定(Ilomedin)、鈣通道阻斷劑例如和sGC刺激劑例如里奧西瓜(Riociguat))。活性成分也應具有其他有利性質，特別是關於具有肺選擇性作用之高肺選擇性(與全身作用相比)，低至無VQ‑不匹配、肺內投予後其肺內滯留時間及/或其作用期間。因此，藥物物質應適合於長期治療方案/使用。再者，藥物物質應導致通氣改善，例如支氣管擴張作用及對氣道高反應性和發炎的抑制作用且因此特別適合於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
藥物物質式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸以及其式(I-M-I) 和(I-M-II)之多晶形應具有持續的血管舒張和支氣管擴張功效為期超過12 小時，為期最多24 小時，其特徵為例如血液動力學效應的改善，導致較低的肺血管阻力(PVR)、6分鐘步行測試中步行距離改善、NYHA(紐約健康協會)患者分類的轉變或肺功能改善例如較高的FEV1(人在用力呼吸的第一秒內可呼出的用力呼氣量)和較低的比氣道阻力(sRaw)、在吸入性投予時，指示健康肺部的支氣管擴張活性之參數。
再者，活性成分(藥物物質)需要以適合於治療心肺病症之乾粉醫藥調配物和對應吸入劑量方案的限定穩定的晶形提供。
另外，最終藥品(調配物)需要具有適當性質，例如足夠的化學穩定性和足夠的氣霧劑性能，以便將藥物物質以足夠量而對患者具低至無副作用遞送至目標器官(例如肺)。需要足夠的物理化學穩定性來保持活性成分的化學組成並避免不可接受的降解或立體化學轉化。更為重要的是，需要保持物理形態，以免改變影響活性成分之藥物動力性質的生物製藥性質。穩定和適當的氣霧劑性能意指就平均遞送劑量和遞送劑量之均勻性的意義而言，可再現的藥物遞送以及最終劑型中所需大部分的可用標稱藥物劑量可再現地將藥物遞送至作用位置。實際上且藉由適當分析方法諸如空氣動力粒徑分布以級聯衝擊測試，大部分微粉化細活性成分顆粒應以(或者細顆粒質量)和細顆粒分率(相對於遞送劑量及/或標稱劑量之%)回收。
本發明人令人驚訝地發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸可藉由改良的化學方法以可靠的方式進行大規模製造。
另外，本發明人發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以穩定的晶形(如例如式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II，較佳為式(I-M-I)之單水合物I)存在。
再者，本發明人令人驚訝地發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的晶形可藉由一種新穎的選擇性結晶方法獲得，較佳地單水合物形式I (I-M-I) 可藉由從甲醇、丙酮和水結晶而獲得。
因此，藥物物質式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸首次以適用於吸入劑型、藥物和吸入劑量方案(較佳 DPI)的形式提供。
令人驚訝地臨床前實驗揭示相較於西那西瓜(Cinaciguat)，sGC活化劑式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)顯示在離體血管中，隱動脈之穿透較慢，在離體細支氣管中，恢復因子延長，以及在Langendorff心臟實驗中，洗出得分增加(參見實驗部分C-1.1 (離體血管) C-3.1 (細支氣管)和C-1.2 (Langendorff))以及改善肺選擇性和延長作用期間(在PAH動物模式(豬和狗)中，在吸入施用後，延長選擇性肺動脈壓(= PAP)降低而無全身性血壓(=BP)降低效應)(參見實驗部分C-2.1 (豬)和C-2.2 (狗)。此等研究結果支持比較例11對於每天一次或兩次吸入治療方案的適合性，該方案包含240至4000 µg(較佳地480至2000µg)的(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸使用於治療心肺病症，諸如肺動脈高血壓(PAH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
以小型豬模式(C-2.1)測試根據本發明和比較例3、4和5的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)以評估肺選擇性以及作用期間(C-2.1)。雖然所有3種化合物都顯示適當的肺部選擇性，但只有比較例11和比較例4顯示足夠的作用期間。比較例11 顯示經240 分鐘的整個觀察間隔具有最大效應之選擇性PAP效應，而比較例3 顯示其吸入施用後30 分鐘對 PAP的最大效應，其在 120 分鐘後再次完全消除。以清醒缺氧挑戰的狗模式評估比較例11和比較例4的作用期間(C-2.2)。在此模式中，與比較例4相比，比較例11 顯示持續長達 17 小時的一致長作用期間(PAP 降低)。因此與比較例3、4和5 (在WO 14/012934-A1中揭示為實施例2、37和39)相比，比較例11(對應於本發明)最適合於每日一次至兩次的治療方案。
再者，我們發現sGC活化劑呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式(實施例4)之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)在首次臨床研究中(參見實驗部分C-4)增加cGMP 水平作為sGC活化的第二信使分子，作為肺中藥物濃度的替代物(目標參與之指示)以及在乾粉施用後在健康志願者中為期超過12小時，最多 24 小時的有益支氣管擴張性質(例如總比氣道阻力(sRaw)的降低，指示肺部支氣管擴張活性的參數)，支持臨床上長較肺滯留時間以及呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)成功使用於治療心肺疾病的適合性。在健康志願者中觀察到高達 4000 µg的劑量對全身性血壓沒有臨床意義的影響。
而且，我們發現在劑量最多4000 µg(含)下，肺高血壓患者的肺動脈壓和肺血管阻力選擇性降低，對全身血壓沒有臨床相關影響(參見實驗部分C-4.4)。直到3h的測量期結束(＞3h的測量期在技術上是不可行的)，該效應一直持續而反應沒有降低。實施例4的肺滯留時間超過測量的3h(乾粉施用後大概超過12hr之時段，最多24 hr)可從吸入施用後測量的長血漿半衰期得出結論(參見實驗部分C‑4.3)。
另外，藥物物質之口服、靜脈內和吸入性投予後的血漿濃度之分析顯示吸入施用後活性成分的最長半衰期(C-4.3)。人類吸入1000 µg後，噴出(肺)劑量已確定為720µg。此研究的結果證實肺劑量和半衰期對於吸入乾粉投予來說是足夠的，實施例4在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。
總之，所有結果顯示式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸以及其假多晶形(如例如(I-M-I)和(I-M-II)，尤其是式(I-M-I)之單水合物I)特別適合於治療肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)且對於吸入乾粉投予來說是足夠的，實施例4在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。
此等研究結果也支持呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)用於每天一次或兩次吸入治療方案的適合性，該治療方案包含240至4000 µg(較佳地480至2000 µg)為期等於或超過兩天(較佳至少連續2至7天，較佳地為期連續至少14天，特別是從開始治療之後經整個病程)的呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)使用於治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))。
另外，我們發現式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(=比較例11)具有有益的生理化學性質例如蛋白質結合和CACO通量(參見實驗部分C-5.1 (Caco滲透性)和C-5.2 (蛋白質結合))，其使比較例11成為用於以乾粉吸入至肺來局部治療心肺病症之適當化合物。而且，我們的數據指示比較例11(尤其是式(I-M-I)之單水合物形式I)不僅顯示經由肺中之選擇性血管舒張有效降低PAP，且與西那西瓜相比，也顯示更持久的支氣管擴張性質，其可有益於有慢性肺病之PH患者(第3組PH)每天一次或兩次吸入治療，甚至有可能治療肺功能受限的患者(例如氣喘病患者)。
因此根據本發明之藥物物質，例如式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，以及其假多晶形(I-M-I)和(I-M-II)具有極佳的一級藥理性質： • (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸為有效和選擇性sGC活化劑且提供一種吸入後治療PH之新方法。 • (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸吸入施用後選擇性降低升高的PAP在不同疾病相關動物模式(凝血脂素和缺氧攻擊的大鼠、豬和狗)中吸入施用後選擇性降低升高的PAP且作用期間長，表明每天施用一次或兩次，較佳每天施用一次。 • 在作為VQ不匹配之取代物的單側通氣小型豬模式中，與全身性施用的血管擴張劑相比，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸吸入施用後降低PAP而對加氧作用沒有負面影響。 • 除PAH之護理標準(standard of care)(SoC)(波生坦、西地那非、伊洛美定、和里奧西瓜)之外，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸在PAH‑小型豬模式中吸入施用後選擇性降低升高的PAP。 •  (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的功效在氧化壓力的實驗條件(1H-[1,2,4]㗁二唑并[4,3‑a]喹㗁啉-1-酮，一種可溶性鳥苷酸環化酶[ODQ]的高選擇性不可逆血色素位置抑制劑，L-Nω-硝基精胺酸甲酯[L-NAME] 治療)下增強。 • 關於通氣，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸顯示支氣管擴張作用(乙醯膽鹼[ACh]大鼠模式)和對氣道高反應性和發炎的抑制作用(慢性卵白蛋白氣喘小鼠模式)。 • 藥物物質之口服、靜脈內、吸入投予後，血漿濃度之分析顯示吸入施用後最長的消除半衰期。 • 人類吸入1000 µg後，噴出(肺)劑量已測定為720 µg。 • 在人體中使用sGC活化劑呈其晶形式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(實施例4)的首次研究顯示sGC活化和長肺滯留時間結合支氣管擴張性質和選擇性降低肺動脈壓和肺血管阻力，在良好的局部和全身耐受性下達到最高測試劑量4000 µg(包括)。
因此藥物物質根據本發明的式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，以及其假多晶形(I-M-I)和(I-M-II)在患者中具有極佳一級藥理學和藥效學性質，包括降低肺動脈壓(mPAP)和肺血管阻力(PVR)、如藉由例如FEV1測量的支氣管擴張、具有低至無全身性副作用(尤其是對全身血液動力學，諸如臨床相關的血壓或心率之改變)的肺選擇性及低至無增加的VQ不匹配以避免相關的去飽和，再者，肺內投予後之足夠的肺滯留時間及/或有足夠的作用期間。
令人驚訝地，已發現，式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(尤其是呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式)的局部投予(尤其是吸入投予)有可能成功控制心肺疾病心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)、和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))。肺中的活性成分濃度可長期保持在從醫學觀點來看之最佳治療所需的水平。除了在疾病位置之較高和持久的活性成分水平外，也可能同時達成活性成分之較低全身濃度，從而可以避免藥物的副作用，例如沒有臨床相關的全身性血壓下降。
令人驚訝地，藥物物質可以式(I-M-I)之單水合物I的單一晶形且化學穩定的形式提供。此形式在微粉化條件下也是穩定的。
令人驚訝地，根據本發明之醫藥乾粉調配物係透過極佳氣霧劑性能(例如高細顆粒劑量、細顆粒分率和量關於標稱劑量之遞送劑)和足夠的化學穩定性加以表徵。再者，根據本發明之醫藥乾粉調配物可藉由新穎方法(例如摻合物均勻性)以技術可靠的方式製造。
令人驚訝地，包含呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I)組合包含呈粗乳糖和細乳糖的混合物之乳糖單水合物的乳糖載體之醫藥乾粉調配物係適合於心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之吸入性治療。
鑑於先前技術，此等研究結果是不可預見的，因為式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的極佳一級藥理學和藥效學性質，尤其是與類似的5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(如例如比較例3、4和5)相比，其較長的作用期間是不為人所知。
而且，此等研究結果是不可預見的，因為假多晶形(尤其是結晶穩定的水合物)是不為人所知。
令人驚訝地，微粉化和穩定性研究後，單水合物形式I (I-M-I) (實施例4)被鑑定為穩定假多晶形之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。
再者，令人驚訝的是，變形I (I-M-I)可藉由從甲醇、丙酮水中選擇性結晶獲得。
再者，没有包含式(I)之酸也没有其任何晶形(如例如單水合物形式I (I-M-I)或單水合物形式II(I-M-II))的吸入性固體載體調配物是已知的。
因此，本發明之技術目標為提供新穎穩定的醫藥乾粉調配物，其包含呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I具有極佳氣霧劑性能(例如細顆粒劑量之高結果，細顆粒分率和遞送劑量相對於標稱劑量)和足夠的化學穩定性，這些屬性係藉由藉由摻合微粉化呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I)與由粗和細颗粒部分組成之乳糖載體而達成。
本發明人令人驚訝地發現，新穎穩定的醫藥乾粉調配物，其包含呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I)可藉由組合而活性成分與載體製造，其中該載體為乳糖載體，其包含呈粗乳糖和細乳糖的混合物之乳糖單水合物的乳糖載體之醫藥乾粉調配物。
為了獲得根據本發明之醫藥乾粉調配物，重要的是調整a)藥物物質和乳糖載體之間的特定比例和及b) 使用工程化和定制的乳糖載體，其包含呈乳糖粗粒和乳糖細粒的混合物之乳糖單水合物，c) 使用藥物物質和具有特定粒徑的乳糖粗粒和乳糖細粒，特別是具有下列規格： A) 具有X90 ≤ 6 µm之粒徑 及/或介於1.0和3.0 µm之間的X50的活性成分式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I B) 具有至少或≥ 115 µm或至少或 ≥ 120 µm或為至少或≥ 200 µm的X90之粒徑：及/或粗乳糖具有X50至少或≥ 50 µm或為至少或≥ 75 µm或為至少或≥ 125 µm，X50 ≥ 50 µm之粒徑的粗乳糖 C) 具有X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm之粒徑的細乳糖：及/或具有X50 ≤ 5 µm或＜ 10 µm之粒徑的細乳糖 及其中調配物/乾粉摻合物的粗乳糖含量係介於94.25%和75%之間，也介於98.25%和75%之間。
藥物物質與特定比例的乳糖載體組分(即粗乳糖和細乳糖)、所有具有特定粒徑之組分及此外調配物/乾粉摻合物的特定粗乳糖含量的特定組合導致技術效應，即基本的醫藥乾粉調配物極佳氣霧劑性能(例如高細顆粒劑量、細顆粒分率和遞送劑量關於標稱劑量)且在某段時間內具有足夠的化學穩定性。
藥物顆粒暫時與載體顆粒結合，但隨後需要在吸入氣溶膠流期間從載體顆粒中釋放且從而可到達肺部深處，而產生優異的氣霧劑性能。微粉化藥物顆粒在乳糖載體顆粒上的強結合可特別以化合物如 I-M-I發生，據觀察其對多種類型的表面(例如分析玻璃器皿和藥物生產設備的表面、硬膠囊的表面、乾粉的表面和粉末吸入裝置)具有很強的黏著性質。乳糖細顆粒可佔據乳糖載體顆粒上的活性位置，從而降低黏著劑混合物中強結合藥物顆粒之比例及增加在吸入條件(細顆粒劑量 / 細顆粒分率)下的釋放部分。根據本發明之基於載體的乾粉調配物之極佳氣霧劑性能係設計用於肺深部遞送之微粉化活性成分顆粒的最佳臨時結合的結果，其可藉由乾粉吸入裝置中的氣流能量克服從載體上分離和解聚藥物顆粒。
此結果，藉由最佳化和定制下列技術參數，達成微粉化活性成分顆粒的最佳臨時結合：
乳糖載體組分(即粗乳糖和細乳糖)的特定比率，
選擇所有組分的特定粒徑
及再者限定調配物/乾粉摻合物粗的乳糖含量
此等參數對於獲得具有極佳氣霧劑性能能的根據本發明之基於載體的乾粉調配物是至關重要的。
因此包含呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I的根據本發明之醫藥乾粉調配物為用於治療心肺病症(諸如肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP))之適當藥劑。 發明之詳細說明吸入用調配物 活性成分
根據本發明之乾粉吸入用的固體製劑含有一定量的活性成分(即式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)，特佳的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)，其在用於活性化合物的適當吸入級載體的基質中不超過約20%。通常活性成分的量係介於0.5%和20%之間，較佳地介於0.75%和10%之間。其中活性成分的量基於即用製劑通常按重量計為至少0.75%，或至少3%，或至少5%或至少10%。非常較佳的是具有3%、0%或20%含量的活性成分之粉末摻合物。
根據本發明之乾粉吸入用的固體製劑含適合於吸入施用的某粒徑之活性成分(即式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)，特佳的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)。
活性成分((5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)，特佳的根據本發明之呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸))的粒徑分布係如下表所定義。 表 5：活性成分(例如式(I-M-I)或(I-M-II)之化合物)的粒徑分布
粒徑上限 X90 max.6 µm
粒徑平均值 X50 1 – 3 µm
粒徑下限X10 max. 1 µm
對於吸入藥品，重要的是要保證具有限定粒徑＜ 5µm之藥物物質的均勻性，以確保遞送至深部肺室。此技術要求可藉由藥物物質顆粒的微粉化達成(參見實驗部分B，實施例8)。
達到此要求之活性成分的粒徑分布之適當規格係如表5中所指定來設定。
因此，為了確保活性適當遞送至目標位置，尤其是深氣道和肺泡，本發明人發現必須提供活性成分式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式或呈式(I-M-II)之單水合物II的形式，較佳地於X90 = max. 6 µm的粒徑及/或X50 1 – 3 µm及/或X10 max. 1 µm的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸)。 乳糖載體
根據本發明之用於乾粉吸入的固體製劑通常含有不超過約99.25%的量之用於活性化合物的適當載體。通常吸入級載體的量係介於99.25%和80%之間，較佳係介於99.25%和90%之間。其中載體的量通常為基於乾粉摻合物以重量計為至少99.25%，或至少97%，或至少95%或至少90%。
主要可用不同材料的吸入級載體。
本發明人發現藉由選擇乳糖作為載體材料達成根據本發明之吸入用調配物的極佳氣霧劑性能。
吸入用乳糖可以不同粒徑範圍和不同特性獲得。
可預期，由於細藥物顆粒與粗載體顆粒的活性位置的結合相對較強，具有粒徑分佈集中於與活性成分相比為較高的粒徑之粗乳糖載體單獨可導致不良氣霧劑性能(Paolo Colombo, Daniela Traini and Francesca Buttini "Inhalation Drug Delivery – Techniques and Products" (Wiley-Blackwell 2013出版)。先進氣霧劑性能的特徵為增加的細顆粒劑量和分率以及與標稱劑量相關的遞送劑量。一旦粉末被霧化，藥物與載體的黏著和隨後的分離之間的平衡是預期的，通常也被描述為粉末或藥物分散體。可預期氣霧劑性能行為將隨著添加細載體顆粒或藉由使用含有固有部分的乳糖細粒之乳糖材料而得到改良，儘管程度無法預測(de Boer et al 2012, Grasmejier et al 2015)。作為改良藥物分散和從載體釋放的一種表現，藉由級聯衝擊器的測量是選擇的既定方法和細顆粒劑量(或者細颗粒質量)以及 細顆粒分率(具有限定粒徑上限(例如5µm或4.5µm)之藥物質量相對於單一劑量單位的遞送劑量或標稱劑量的百分比分率)。 這些方法在現行藥典(例如歐洲藥典(Pharm Eur.)或美國藥典(USP))中也被確立為吸入用產品的強制性品質控制方法。
然而，添加細乳糖的可能效應且其幅度無法預測，因為在乾粉黏著劑混合物中可能存在疊加乳糖細粒效應的其他主要效應。非常重要的是，微粉化藥物本身的性質會對特定藥物分子之顆粒的二元或三元混合物之黏著和內聚性質(例如內聚：黏著平衡(CAB)或表面能)有影響，這甚至可以做出預測更加困難。
本發明人發現，根據本發明之吸入用調配物的極佳氣霧劑性能係藉由選擇細乳糖和粗乳糖作為具有特定粒徑的載體材料達成。
根據本發明之粗乳糖材料為具有低細顆粒含量之篩分或研磨的晶形a-乳糖單水合物(例如市售的Lactohale® 100或Lactohale® 206)。
具有類似粒徑分布的根據本發明粗乳糖也可選自其他品牌，例如Meggle Inhalac® 120或DFE Respitose® SV010。
為了選擇一級粗載體，選擇乳糖品質，具有粒徑X90比活性成分的X90大至少10倍，及低固有細粒含量，以使主要部分的載體之品質一致。
選擇細乳糖以改良氣霧劑性能。本發明人假設與活性成分相似的粒徑可能適合於控制活性成分顆粒與粗載體顆粒的暫時結合，儘管其他細乳糖粒徑規格也可能是合適的。因此，選擇具有X90 ＜ 10µm或X90 ＜ 30 µm 或 X50 ≤ 5 µm或1.0 – 3.0 µm之粒徑的細乳糖產物被認為足以組成乳糖載體。
根據本發明之細乳糖材料為具有X90 ≤  10 µm  (例如市售的Lactohale® 300)或X90 ＜ 30 µm或X50 ≤ 5 µm或1.0 – 3.0 µm (例如市售的Lactohale® 230)之低粒徑的研磨或微粉化的晶形乳糖單水合物。也可選擇具有相似性質和粒徑的細研磨或微粉化乳糖，例如Meggle Inhalac® 500。材料和粉末混合物的粒徑分布通常以雷射繞射光譜法、顯微技術或常規篩分分析和分級來測量[B.Y. Shekunov, P. Chattopadhyay, H.H.Y. Tong and A.H.L. Chow, Particle size analysis in pharmaceutics, Pharm. Res.2007, 24 (2), S203-S227] (也參見D.4)。
用於根據本發明之市售吸入用乳糖(例如Lactohale® 100、Lactohale® 300)的粒徑分布係總結於下表6中。 表 6：用於根據本發明之吸入用乳糖的粒徑分布(規格)
粗乳糖 細乳糖
商品名 Lactohale® 100 Lactohale® 300
粒徑上限 X90 200 - 250 µm ≤ 10 µm
粒徑平均值 X50 125 - 145 µm ≤ 5 µm
粒徑下限X10 45 - 65 µm 不限定
商品名 Lactohale® 200
粒徑上限 X90 120 - 160 µm
粒徑平均值 X50 50 - 100 µm
粒徑下限X10 5 - 15 µm
商品名 Lactohale ®206 Lactohale ®230
粒徑上限 X90 115 - 170 µm ＜ 30 µm
粒徑平均值 X50 75 - 95 µm ＜ 10 µm
粒徑下限X10 20 - 50 µm 1.0 – 3.0 µm
根據本發明之用於乾粉吸入的固體製劑含有粗乳糖(例如Lactohale® 100)和細乳糖(例如Lactohale® 300)的混合物。
本發明人發現，粗乳糖粒度可在某範圍內改變，而不會危及根據本發明之基於載體的乾粉調配物之氣溶膠性能或混合均勻性。
根據本發明，粗乳糖具有X90 = 200 - 250 µm或120 – 160 µm或115 – 170 µm，或115-250 µm的粒徑。再者，根據本發明，粗乳糖具有 X90 ≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑。再者，根據本發明，粗乳糖具有X90為至少或≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑。
根據本發明，粗乳糖具有X50 = 125 - 145 µm或50 – 100 µm或75 – 95 µm或50-145 µm的粒徑。再者，根據本發明，粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑。再者，根據本發明，粗乳糖具有X50為至少或≥ 50 µm或為至少或≥ 75 µm或為至少或≥ 125 µm 及/或X10 = 45 - 65 µm或5 – 15 µm或20 – 50 µm的粒徑。
根據本發明，該細乳糖具有X90 = ≤ 10 µm或＜ 30 µm，X50 ≤ 5 µm或1.0 – 3.0 µm的粒徑。藉由利用具有細顆粒之固有含量的Lactohale200®，乳糖載體中無需添加任何其他細乳糖顆粒。因此，本發明的基於載體的調配物可用 Lactohale 200或具有固有乳糖細粒含量的類似乳糖產物調配製。
根據本發明，Lactohale 100®和Lactohale 300®為較佳。
再者，本發明人發現根據本發明之吸入用調配物的極佳氣霧劑性能可藉由調整乾粉摻合物內之特定含量的細乳糖和特定含量的粗乳糖而達成。
本發明人確定乳糖載體的細乳糖含量為重要的關鍵參數。為了獲得以極佳氣霧劑性能為特徵的根據本發明之吸入用調配物，細乳糖的含量應在某一範圍內選擇。例如，粉末摻合物/乳糖載體中較高含量的細乳糖，例如發現20%或更多的含量對摻合物均勻性有負面影響(參見例如比較例20)。顯示根據本發明之粉末摻合物和調配物可具有改變含量的細乳糖，其介於1%和10%之間，也可介於5%和10%之間的範圍內，而細乳糖含量也可為吸入用乳糖的固有部分，即計算為 5-15µm的X10，如在Lactohale 2000®之例子中(參見實施態樣34)，而不會危及氣霧劑性能。
根據本發明在該粉末摻合物中細乳糖的含量係介於1%和10%之間，較佳地介於5%和10%之間，較佳地介於2.5%和7.5%之間，較佳地介於5%和7.5%之間，更佳5%。
本發明人確定粉末摻合物的粗乳糖含量也為重要的關鍵參數。為了獲得以極佳氣霧劑性能為特徵的根據本發明之吸入用調配物，粗乳糖的含量應在某一範圍內選擇。
根據本發明該粉末摻合物中粗乳糖的含量係介於98.25%和75%之間，較佳地介於94.25%和75%之間，較佳地介於92.00%和75%之間，更佳從90.00%至75%和尤佳從90%至85%。
當根據本發明之乾粉摻合物為三元混合物，所有三種組分都需要以限定的最大粒徑和某些特定比率的形式提供。
本發明人發現根據本發明之吸入用調配物的極佳氣霧劑性能係藉由選擇特定比率的細乳糖和粗乳糖和活性成分達成。
根據本發明，在該粉末摻合物中粗乳糖對細乳糖的比率係介於445：5和65：5，較佳地94.25：5和65：5，較佳地94.25：5和75：5、91.75：7.5和89.25：10之間，較佳地介於92：5和75：5之間，特佳的是92：5、85：5 以及75：5的比率。
根據本發明在該粉末摻合物中式(I)或(I-M-I)之活性成分對粗乳糖的比率係介於1：126和1：3.8之間，較佳地介於1：31和1：3.8之間。
根據本發明在該粉末摻合物中式(I)或(I-M-I)之活性成分對細乳糖的比率為從1：13和1：0.1，較佳地介於1：13和1：0.25之間，較佳地介於之間1：1.67和1：0.25。 其他賦形劑
根據本發明之製劑通常可包含其他藥理上可接受的賦形劑，尤其包括載體(例如吸入級乳糖、乳糖單水合物、甘露醇)、分散劑、潤濕劑、潤滑劑(例如硬脂酸鎂)、界面活性化合物(例如月桂基硫酸鈉)、二硬脂醯基卵磷脂)、離子化合物(例如氯化鈣、氯化鈉、氯化鉀)、合成和天然聚合物(例如角叉菜膠、羥丙基甲基纖維素、明膠)或pH調節劑(例如氫氧化鈉、氯化鈉、檸檬酸鹽、檸檬酸三鈉、著色劑(例如無機顏料，例如鐵或氧化鈦)。 空腔
根據本發明，包含呈其單水合物形式 I-M-I或 I-M-II之活性成分和乳糖的乾粉摻合物可經由乾粉吸入器(諸如單一單位劑量吸入器，其中各劑量在使用之前加載到裝置中)、多單位劑量吸入器(其中幾個單一單位劑量被個別地密封(預先計量)且可在每次啟動之前在劑量室中噴出)或儲液器多劑量吸入器(其中大量供應的藥物被預加載到裝置中且在每次啟動之前在劑量室中噴出(由裝置計量)投予。較佳地根據本發明之乾粉摻合物係經由包含乾粉摻合物的配備/裝有空腔(例如膠囊或泡罩)的吸入器之單一單位劑量吸入器投予。較佳地空腔為個別膠囊，較佳地明膠之硬膠囊或羥丙基甲基纖維素，最佳為羥丙基甲基纖維素膠囊。
包含根據實施例2或4的微粉化活性成分(例如式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II)的乾粉摻合物係填充於硬膠囊(羥丙基甲基纖維素 = Hypromellose = HPMC，例如於3號中)或來自硬明膠或其他適當材料之替代膠囊中。醫藥硬膠囊大小被標準化並通過所界定的測量來加以表徵，其中例如3號膠囊具有157 mm之長度和之直徑57 mm，而 2號膠囊具有176 mm之長度和62 mm 之直徑和 1 號膠囊具有194 mm之長度和68 mm 之直徑。
取決於填充重量和活性成分濃度，可達成不同標稱劑量。具有標稱劑量的根據實施例2或4的活性成分(例如式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II)的膠囊之示例性組成物給出於示例性實施態樣1-3中且顯示於下表7中。 表 7 ：具有確定標稱劑量的根據本發明之調配物的實施例(硬膠囊中的填充粉末)。
示例性實施態樣1 示例性實施態樣2 示例性實施態樣3
標稱劑量 120µg 480µg 1000µg
粉末摻合物中之活性成分的濃度(實施例4) 0.75% 3% 10%
填充重量 16 mg 16mg 10 mg
關於肺內投予，活性成分之量(標稱劑量)，(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I (參見實施例4)為每次吸入約10 µg至50000 µg，較佳地每次吸入約 100 µg至10000 µg，進一步較佳為每次吸入約100至6000 µg，進一步較佳為每次吸入約120至4000 µg，進一步較佳為每次吸入約 200至4000 µg，非常特佳為約240 µg至4000 µg，非常特佳為約240 µg至2000 µg，非常特佳為約240 µg至1000 µg、非常特佳為約240 µg至480 µg，非常特佳為約480 µg至4000 µg，非常特佳為約480 µg至2000 µg，非常特佳為約480 µg至1000 µg，非常特佳為約1000 µg至4000 µg，非常特佳為約1000 mg至2000 µg，非常特佳為約1000 µg，非常特佳為約2000 µg，非常特佳為約4000 µg。
根據本發明之空腔(較佳地基於HMPC的硬膠囊，3號)含有8-40 mg之填充質量的吸入用調配物，較佳10-30 mg之填充質量的吸入用調配物，更佳10-20 mg之填充質量的吸入用調配物，更佳16-20 mg之填充質量的吸入用調配物。
根據本發明，最佳的是下列組成物： 表 8 ：包含乾粉摻合物之最終膠囊調配物，基於百分比
標稱劑量 膠囊，例如HMPC 粉末填充質量 粉末摻合物中之API 含量 (%) 粗乳糖含量 (%) 細乳糖含量 (%) 比率 API：粗乳糖 比率 API：細乳糖
480µg 3號 16 mg 3 % 92 % 5 % 1：31 1：1.67
1000µg 3號 10 mg 10% 89 % 1 % 1：8.9 1：0.1
1000µg 3號 10 mg 10% 87.5% 2.5% 1 . 8.75 1：0.25
1000µg 3號 10 mg 10 % 85 % 5 % 1：8.5 1：0.5
2000µg 3號 20 mg 10 % 85 % 5 % 1：8.5 1：0.5
3000µg 3號 30 mg 10 % 85 % 5 % 1：8.5 1：0.5
4000µg 3號 40 mg 10 % 85 % 5 % 1：8.5 1：0.5
2000µg 3號 10 mg 20 % 75 % 5 % 1：3.8 1：0.25
3000µg 3號 15 mg 20 % 75 % 5 % 1：3.8 1：0.25
4000µg 3號 20 mg 20 % 75 % 5 % 1：3.8 1：0.25
根據本發明，粉末摻合物中具有3%式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物包含480 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分、92%粗乳糖和5%細乳糖且可以16 mg 粉末摻合物的對應質量填充於硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。
根據本發明，粉末摻合物中具有10%式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物包含1000 µg、2000 µg、3000 µg或4000 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分、85%粗乳糖和5%細乳糖且可填充於(以10 mg、20 mg、30 mg或40 mg粉末摻合物的對應質量)硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。
根據本發明，粉末摻合物中具有20%式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物包含2000 µg、3000 µg或4000 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分、75%粗乳糖和5%細乳糖且可填充於(以10 mg、15 mg或20 mg 粉末摻合物的對應質量)硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。 表 9 ：包含乾粉摻合物之最終膠囊調配物，基於質量的表徵化：
標稱劑量 膠囊 粉末填充質量 粉末摻合物中之API 含量(mg/g) 粗乳糖含量(mg) 細乳糖含量(mg) 比率 API：粗乳糖 比率 API：細乳糖
480µg 3號 16 mg 30 mg/g 14.72 mg 0.8 mg 1：31 1：1.67
1000µg 3號 10 mg 100 mg/g 8.9 mg 0.1 mg 1：8.9 1：0.1
1000µg 3號 10 mg 100 mg/g 8.75 mg 0.25 mg 1 . 8.75 1：0.25
1000µg 3號 10 mg 100 mg/g 8.5 mg 0.5 mg 1：8.5 1：0.5
2000µg 3號 20 mg 100 mg/g 17.0 mg 1.0 mg 1：8.5 1：0.5
3000µg 3號 30 mg 100 mg/g 25.5 mg 1.5 mg 1：8.5 1：0.5
4000µg 3號 40 mg 100 mg/g 34.0 mg 2.0 mg 1：8.5 1：0.5
2000µg 3號 10 mg 200 mg/g 7.5 mg 0.5 mg 1：3.8 1：0.25
3000µg 3號 15 mg 200 mg/g 11.25 mg 0.75 mg 1：3.8 1：0.25
4000µg 3號 20 mg 200 mg/g 15.0 mg 1.0 mg 1：3.8 1：0.25
根據本發明，具有30 mg/g式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物，該粉末摻合物中包含480 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分、14.72 mg粗乳糖和0.8 mg細乳糖且可以16 mg 粉末摻合物的質量填充於硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。
根據本發明具有100 mg/g式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物，該粉末摻合物中包含1000 µg、2000 µg、3000 µg或4000 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分、8.9 mg、8.75 mg、8.5 mg、17.0 mg、25.5 mg或34.0 mg粗乳糖和0.1 mg、0.25 mg、0.5 mg、1.0 mg、1.5 mg或2.0 mg細乳糖且可填充於(以10 mg、20 mg、30 mg或40 mg 粉末摻合物的對應質量)硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。
根據本發明，具有200 mg/g式(I)或(I-M-I)之活性成分的含量之粉末摻合物，該粉末摻合物中包含2000 µg、3000 µg或4000 µg式(I)或(I-M-I)之活性成分, 7.5 mg、11.25 mg或15.0 mg粗乳糖和0.5 mg、0.75 mg或1.0 mg細乳糖且可填充於(以的對應質量10 mg、15 mg或20 mg 粉末摻合物)硬膠囊(較佳地3號HMPC膠囊)中，且其接著可經由“單一單位劑量” 吸入器(例如更佳的Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置)投予。 製造方法
根據本發明之製劑通常可如粉末形式的可吸入自由流動藥物的製備中常見者，藉由將活性成分微粉化並視需要地摻合微粉化的活性成分與非活性載體化合物來製備。
根據本發明之化合物可轉化為所述的投予形式。此可本身已知的方式藉由與惰性無毒投予上適合的賦形劑混合來進行。
根據以下流程和說明製造乾粉調配物和成品(乾粉摻合物填充之硬膠囊)。
表 10 ： 成分 製造步驟
乳糖單水合物，粗 稱重 / 分層
乳糖單水合物，細 稱重 / 分層
混合/篩分以形成乳糖預摻合物
乳糖單水合物，預摻合物 稱重 / 分層
活性成分：單水合物I或II，實施例2或4，微粉化 稱重 / 分層
混合/篩分 (循環)
活性成分：單水合物I或II，實施例2或4，微粉化/乳糖摻合物
 膠囊s 膠囊填充
最終，填充於膠囊 (DP)
步驟1：
在混合開始前，將細乳糖部分稱重並分層放置於兩層粗乳糖之間。 步驟2：
在滾筒式混合器中以72rpm、67rpm或34rpm或32rpm或30rpm，較佳地32 rpm 進行乳糖預摻合物之混合2 次 (2循環) 經 20 min。將乳糖預摻合物在循環之間通過500µm篩子進行篩分。 步驟3：
活性成分：將微粉化單水合物I或II(實施例2或4)通過500µm篩子進行篩分並加至預摻合乳糖，在開始混合循環之前，將乳糖預混合物和活性成分交替分層，中間有 6 層的乳糖預摻合和 5 層的活性成分(單水合物I或II，實施例2或4)。 步驟4：
將這些成分在滾筒式混合器(例如玻璃或不銹鋼，較佳地不銹鋼)中循環混合，例如3-5個循環，較佳地3個循環。各循環在72rpm、67rpm、34rpm或32rpm較佳地 32rpm下進行20-30分鐘，較佳地30分鐘 (90min 總混合時間)，較佳地在32 rpm下進行30分鐘，在混合循環之間停止10分鐘。如有必要(例如看得見的黏聚物)，摻合物可能分別在摻合循環之間進行篩分。 步驟5：
將摻合物在不銹鋼容器中在室溫(15-25℃)和35-65％相對濕度下靜置某段時間，較佳地24-72小時，更佳48h。 步驟6：
使用膠囊填充機(例如MG2 Flexalab)將摻合物以所需填充重量填充於膠囊中。 吸入器裝置
在本發明的情況下sGC活化劑，利用乾粉吸入器裝置以乾粉或乾粉調配物施用sGC活化劑，例如實施例2或4。
在本發明的情況下較佳乾粉吸入器裝置係定義為基於膠囊之單一單位劑量吸入器，其為預先計量的吸入裝置(參見圖3a和3b)。在本發明的情況下，劑量係使用Plastiape (Berry) RS01低阻力裝置施加。此裝置(較高電力類型)係揭示和描述在關於治療其他患者群體，例如囊腫纖維化(CF)或非-CF支氣管擴張之出版物(ELKINS et al. Inspiratory Flows and Volumes in Subjects with Cystic Fibrosis Using a New Dry Powder Inhaler Device, The Open Respiratory Medicine Journal, 2014, 8, 1-7 and ELKINS et al. Inspiratory Flows and Volumes in Subjects with Non-CF Bronchiectasis Using a New Dry Powder Inhaler Device, The Open Respiratory Medicine Journal, 2014, 8, 8-13)中。
藉由將裝有乾粉調配物的單一膠囊插入裝置來操作吸入器。按下兩個鈕(按鈕)以刺破膠囊及使用者將嘴放在吹嘴周圍並用力深深地吸氣。吸入產生的能量將藥物製劑從膠囊中拉出，將粉末分散成氣霧，活性成分顆粒從乳糖載體顆粒中釋放並帶入呼吸道。取出並丟棄用過的膠囊。根據患者的治療要求和臨床裝置的對應標籤，可重複使用該設備。投予的膠囊數量決定了藥物的劑量。
其他預先計量的乾粉吸入裝置(諸如基於泡罩條的多單位劑量裝置)也可用於較佳的施用方法，且若氣霧劑路徑具有相似的設計或性質(例如在限定的流速下的裝置阻力和壓降)，則可導致可比較的結果。
在本發明的情況下，也揭示裝置，其包含含有實施例4之製劑或可具有將這些製劑摻入膠囊或泡罩中且其適合於藉由以固體形式將其吸入投予之容器，即能夠以固體形式吸入來投予含有活性成分(：例如單水合物I或II，實施例2或4)之製劑的氣霧器(粉末吸入器)。
在多劑量施用的情況下，目標血漿濃度(近似穩態)可以在 3 到 5 個半衰期後達到(Donald J. Birkett, in “Pharmacokinetics Made Easy”, McGraw-Hill Education: 2000; p 20)。在穩態下，在各劑量中間(interdose)間隔期間上升和下降的藥物濃度在各劑量中間(interdose)間隔內相同地重複(Goodman and Gillmans ”The Pharmacological Basis of Therapeutics“ 7th Edition, Macmillan Publishing Company, New York, 1985, p 28)
肺內投予時，每天一次或兩次，較佳每天兩次，特佳每天一次投予活性化合物(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫-喹啉-2-甲酸。
然而，在適當的情況下可能必需偏離所述量，特別是根據體重、投予路徑、對活性化合物的個體反應、製劑類型和投予發生的時間或間隔。因此，在某些情況下，使用少於上述最小量可能就足夠了，而在其他情況下，必須超過上述上限。在施用相對大量的情況下，建議在一天中以多個單次劑量分配此等量。
其他預先計量的乾粉吸入裝置(諸如基於泡罩條的多單位劑量裝置)也可用於較佳的施用方法，且若氣霧劑路徑具有相似的設計或性質(例如在限定的流速下的裝置阻力和壓降)， 本發明之具體實施態樣(劑量方案) 1. 使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其鹽或溶劑合物和水合物中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 2. 使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其係呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的形式之吸入劑型：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5 之峰，以2θ值± 0.2°表示，係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 3. 根據請求項1至2中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者，其中化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示。 4. 根據請求項1至3中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者，其中化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8、16.0和25.8(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8、16.0和25.8)之峰，以2θ值± 0.2°表示。 5. 根據請求項1至4中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其顯示至少下列反射之x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、20.5和25.8，較佳地6.9、7.2、7.3、12.8、20.5和25.8，以2θ值± 0.2°表示，的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 6. 根據請求項1至5中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其顯示至少下列反射之x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、5.7、6.9、7.2、7.3和9.9，以2θ值± 0.2°表示，的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 7. 根據請求項1至6中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其顯示至少下列反射之x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、5.7和16.0，較佳於12.8、5.7、6.9、7.2、7.3 和16.0，以2θ值± 0.2°表示，的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 8. 根據請求項1至7中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其顯示至少下列反射之x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、5.7和20.5，較佳於12.8、5.7、6.9、7.2、7.3和20.5，以2θ值± 0.2°表示，的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 9. 根據請求項1至8中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其顯示至少下列反射之x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)：12.8、5.7和29.2，較佳於12.8、5.7、6.9、7.2、7.3和29.2，以2θ值± 0.2°表示，的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 10. 根據請求項1至9中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該X射線粉末繞射圖進一步包含於 23.0、15.2、25.8和25.1之峰。 11. 根據請求項1至10中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈單水合物I的形式之化合物具有如圖6中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 12. 根據請求項1至11中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈單水合物II的形式之化合物具有如圖7中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 13. 根據請求項1至12中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈倍半水合物的形式之化合物具有如圖9中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 14. 根據請求項1至13中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈其(I-M-I)之晶形變體式單水合物的化合物在微粉化期間是穩定的。 15. 根據請求項1至14中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8之峰和缺少於27.2和27.5之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 16. 根據請求項1至15中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和5.7之峰和缺少於 8.5和6.1之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 17. 根據請求項1至16中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少二至七天。 18. 根據請求項1至17中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少14天，特別是從治療開始後的整個疾病過程。 19. 根據請求項1至18中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含呈乾粉的形式之活性成分。 20. 根據請求項1至19中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的形式之活性成分。 21. 根據請求項1至20中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型係經由乾粉吸入器投予。 22. 根據請求項1至21中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含活性成分組合醫藥上適合的載體。 23. 根據請求項1至22中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含作為載體之乳糖單水合物，其中較佳地載體包含粗和細乳糖的混合物。 24. 根據請求項1至23中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≥  50 µm或≥ 75 µm或≥ 125 µm的粒徑及該細乳糖具有 X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 25. 根據請求項1至24中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑及該細乳糖具有 X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 26. 根據請求項1至25中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑及該細乳糖具有 X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 27. 根據請求項1至26中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑及該細乳糖具有 X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 28. 根據請求項1至27中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I具有X90 ≤ 6 µm的粒徑。 29. 根據請求項1至28中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I具有介於1 – 3 µm之間的X50之粒徑。 30. 根據請求項1至29中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含480至4000 µg的呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 31. 根據請求項1至30中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含480至2000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 32. 根據請求項1至31中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含480至1000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 33. 根據請求項1至32中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含240 µg、480 µg、1000 µg、2000 µg或4000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 34. 根據請求項1至33中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之群組：肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。 35. 一種治療心肺病症之方法，其包含每天一次或兩次為期至少連續兩天投予包含240至4000 µg的呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6、或者於12.2、8.6和14.5 之峰，以2θ值± 0.2°表示。 36. 根據請求項35之治療心肺病症之方法，其特徵在於呈單水合物I的形式之化合物具有如圖6中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 37. 根據請求項35至36中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8之峰和缺少於27.2和27.5之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 38. 根據請求項35至37中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和5.7之峰和缺少於8.5和6.1之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 39. 根據請求項35至38中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於呈單水合物II的形式之化合物具有如圖7中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 40. 根據請求項35至39中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於呈倍半水合物的形式之化合物具有如圖9中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 41. 根據請求項中35至40任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少二至七天。 42.  根據請求項中35至41任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少14天的期間，特別是從開始治療之後經整個病程。 43. 根據請求項35至42中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含呈乾粉的形式之活性成分。 44. 根據請求項35至43中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的形式之活性成分。 45. 根據請求項35至44中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含活性成分組合醫藥上適合的載體。 46. 根據請求項35至45中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含作為載體之乳糖單水合物，其中較佳地該載體包含粗和細乳糖的混合物。 47. 根據請求項46之治療心肺病症之方法，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≥  50 µm或≥ 75 µm或≥ 125 µm的粒徑及該細乳糖具有 X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 48. 根據請求項46或47之治療心肺病症之方法，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑及該細乳糖具有 X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 49. 根據請求項46至48中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑及該細乳糖具有 X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 50. 根據請求項46至49中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑及該細乳糖具有X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 51. 根據請求項35至50中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有X90 ≤ 6 µm的粒徑。 52. 根據請求項35至51中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有介於1-3 µm之間的X50的粒徑。 53. 根據請求項35至52中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含480至4000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 54. 根據請求項35至53中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含480至2000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 55. 根據請求項35至54中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含480至1000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 56. 根據請求項35至55中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含240 µg、480 µg、1000 µg、2000 µg或4000 µg呈其晶形單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 57. 根據請求項35至56中任一項之治療心肺病症之方法，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之群組：肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP) 。 58. 一種使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於其包含一種吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示，其中該藥劑每天一次或兩次投予至有需要的患者為期至少連續兩天。 59. 根據請求項58之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於呈單水合物I的形式之化合物具有如圖6中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 60. 根據請求項58至59中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8之峰和缺少於27.2和27.5之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 61. 根據請求項58至60中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和5.7之峰和缺少於8.5和6.1之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 62. 根據請求項58至61中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於呈單水合物II的形式之化合物具有如圖7中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 63. 根據請求項58至62中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於呈倍半水合物的形式之化合物具有如圖9中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 64. 根據請求項58至63中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少二至七天。 65. 根據請求項58至64中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少14天的期間，特別是從開始治療之後經整個病程。 66. 根據請求項58至65中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含呈乾粉的形式之活性成分。 67. 根據請求項58至66中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的形式之活性成分。 68. 根據請求項58至67中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含活性成分組合醫藥上適合的載體。 69. 根據請求項58至68中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含作為載體之乳糖單水合物，其中較佳地該載體包含粗和細乳糖的混合物。 70. 根據請求項58至69中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≥  50 µm或≥ 75 µm或≥ 125 µm的粒徑及該細乳糖具有X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 71. 根據請求項58至70中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑及該細乳糖具有  X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 72. 根據請求項58至71中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑及該細乳糖具有  X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 73. 根據請求項58至72中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑及該細乳糖具有  X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 74. 根據請求項58至73中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有X90 ≤ 6 µm的粒徑。 75. 根據請求項58至74中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有介於1-3 µm之間的X50的粒徑。 76. 根據請求項58至75中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含480至4000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 77. 根據請求項58至76中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含480至2000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 78. 根據請求項58至77中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含480至1000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 79. 根據請求項58至78中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該吸入劑型包含240 µg、480 µg、1000 µg、2000 µg或4000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 80. 根據請求項58至79中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之群組：肺動脈高血壓(PAH)、慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP) 。 81. 一種使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於其含有乾粉吸入器和乾粉調配物，其包含240至4000 µg的呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示，其中該包裝含有以每天一次或兩次的頻率投予該乾粉調配物為期至少連續兩天的說明。 82. 根據請求項81之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之清單：肺動脈高血壓(PAH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。 83. 根據請求項81至82中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該包裝進一步含有藉由吸入使用該乾粉調配物以治療心肺病症的說明，其中吸入程序描述如下：將膠囊放入乾粉吸入器中，深吸一口氣後，患者應屏住呼吸約2秒鐘，以便乾粉藥物從氣流中濃縮至更深的肺部區域表面，並沉積在靠近其所欲藥理作用之位置。 84. 根據請求項81至83中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該乾粉吸入器為基於膠囊之單一單位劑量吸入器(參見圖3a)。 85. 根據請求項81至84中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於其含有包含240至4000 µg的呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的乾粉調配物：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示，但不是乾粉吸入器。 86.  根據請求項81至85中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該乾粉調配物包含(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈式(I-M-I)之單水合物I的形式或呈式(I-M-II)之單水合物形式II的形式組合作為載體之乳糖單水合物，其中該載體包含粗和細乳糖的混合物。 87. 根據請求項81至86中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於呈單水合物I的形式之化合物具有如圖6中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 88. 根據請求項81至87中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8之峰和缺少於27.2和27.5之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 89. 根據請求項81至88中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和5.7之峰和缺少於8.5和6.1之峰，於繞射角2θ值± 0.2°。 90. 根據請求項81至89中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於呈單水合物II的形式之化合物具有如圖7中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 91. 根據請求項81至90中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於呈倍半水合物的形式之化合物具有如圖9中顯示的X射線粉末繞射圖案(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)。 92. 根據請求項81至91中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少二至七天。 93. 根據請求項81至92中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於活性成分係投予為期連續至少14天的期間，特別是從開始治療之後經整個病程。 94. 根據請求項81至93中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含呈乾粉的形式之活性成分。 95. 根據請求項81至94中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的形式之活性成分。 96. 根據請求項81至95中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≥  50 µm或≥ 75 µm或≥ 125 µm的粒徑及該細乳糖具有  X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 97. 根據請求項81至96中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑及該細乳糖具有  X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 98. 根據請求項81至97中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑及該細乳糖具有  X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 99. 根據請求項81至98中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該粗乳糖具有X90 ≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑及該細乳糖具有  X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 100. 根據請求項81至99中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有X90 ≤ 6 µm的粒徑。 101. 根據請求項81至100中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於式(I-M-I)之單水合物I 具有介於1 – 3 µm之間的X50的粒徑。 102. 根據請求項81至101中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含480至4000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 103. 根據請求項81至102中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含480至2000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 104. 根據請求項81至103中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含480至1000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 105. 根據請求項81至103中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該吸入劑型包含240 µg、480 µg、1000 µg、2000 µg或4000 µg呈其晶形單水合物的I形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 本發明的其他具體實施態樣 ( 調配物 )1. 一種吸入用調配物，其特徵在於該調配物含有由下列組成之乾粉摻合物： a)     呈其鹽或溶劑合物或水合物中之一者的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 b)     重量濃度為99.25% (w/w)至80%(w/w)的乳糖載體， 其進一步特徵在於 c)     呈其鹽或溶劑合物或水合物中之一者的形式之活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸具有 X90 ≤ 6 µm的粒徑 及/或介於1和3 µm之間的X50 d)     該乳糖載體為吸入用乳糖單水合物 其進一步特徵在於 e)     該乳糖具有X90 ≥ 120 µm：及/或X50 ≥  50 µm的粒徑及/或X10 5 – 15 µm 。 2. 根據請求項1之吸入用調配物，其特徵在於該調配物含有呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，該晶形變體係：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示。 3. 根據請求項1至2中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該調配物含有由下列組成之乾粉摻合物 a)   呈式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II的形式(較佳為式(I-M-I)之單水合物I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸作為活性成分，其中式(I-M-I)之單水合物形式I的x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射，12.8和29.2，較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2，以2θ值± 0.2°表示，其重量濃度從0.75% (w/w)至20% (w/w)，組合 b)   重量濃度為99.25% (w/w)至80%(w/w)的乳糖載體， 其進一步特徵在於 c)     呈式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II的形式之活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸具有 X90 ≤ 6 µm 的粒徑及/或介於1和3 µm之間的X50 d)     該乳糖載體為由粗乳糖和細乳糖組成之吸入用乳糖單水合物 其進一步特徵在於 e)    該粗乳糖具有X50 ≥  50 µm或≥ 75 µm或≥ 125 µm的粒徑 f)    該細乳糖具有X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑 g)  其中該乾粉摻合物的粗乳糖含量介於98.25%和75%之間，較佳地介於94.25%和75%之間。 4. 根據請求項1至3中任一項之吸入用調配物，其特徵在於 e)    該粗乳糖具有X50 ≤ 145 µm或 ≤ 100 µm或≤ 95 µm的粒徑 f)    該細乳糖具有X50 ＜ 10 µm或≤ 5 µm的粒徑。 5. 根據請求項1至4中任一項之吸入用調配物，其特徵在於 e)    該粗乳糖具有X90 ≥115 µm或為至少或≥120 µm或為至少或≥ 200 µm的粒徑 f)    該細乳糖具有X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 6. 根據請求項1至5中任一項之吸入用調配物，其特徵在於 e)    該粗乳糖具有≤ 250 µm或 ≤ 170 µm或 ≤ 160 µm的粒徑及 f)    該細乳糖具有X90 ＜ 30 µm或≤ 10 µm的粒徑。 7. 根據請求項1至6中任一項之吸入用調配物，其特徵在於 製造調配物之方法 j)      在混合循環之間包括篩分或不行篩分，較佳不篩分且在混合循環之間有至少10分鐘的停止時間。 8. 根據請求項1至6中任一項之吸入用調配物，其特徵在於 在製造調配物之方法期間 k)   不使用玻璃容器，而是使用不銹鋼容器。 9.   根據請求項1至8中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於乾粉摻合物中細乳糖的含量係介於1%和最多15%，1%和10%，或5%和10%之間。 10.  根據請求項1至9中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於活性成分對粗乳糖的比率係介於1：126和1：3.8之間。 11.  根據請求項1至10中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於活性成分對粗乳糖的比率係介於1：31和1：3.8之間。 12.  根據請求項1至11中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於活性成分對粗乳糖之比率為1：31。 13. 根據請求項1至12中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於活性成分對粗乳糖之比率為1：8.5。 14. 根據請求項1至13中任一項之吸入用調配物， 其特徵在於活性成分對粗乳糖之比率為1：3.8。 15.   根據請求項1至14中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分對細乳糖之比率係介於1：13至1：0.1之間。 16.   根據請求項1至15中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分對細乳糖之比率係介於1：1.67和1：0.25之間。 17.   根據請求項1至16中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分對細乳糖之比率為1：1.67。 18.   根據請求項1至17中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分對細乳糖之比率為1：0.5。 19.   根據請求項1至18中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分對細乳糖之比率為1：0.25或為1：0.1。 20.   根據請求項1至19中任一項之吸入用調配物，其特徵在於粗乳糖對細乳糖之比率係介於445：5和65：5之間或介於94.25：5和65：5之間。 21.   根據請求項1至20中任一項之吸入用調配物，其特徵在於粗乳糖對細乳糖之比率為92：5。 22.   根據請求項1至21中任一項之吸入用調配物，其特徵在於粗乳糖對細乳糖之比率為85：5。 23.   根據請求項1至22中任一項之吸入用調配物，其特徵在於粗乳糖對細乳糖之比率為75：5。 24.   根據請求項1至23中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分為呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 25.   根據請求項1至24中任一項之吸入用調配物，其特徵在於式(I-M-I)之活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I具有 X50 = 1 – 3 µm的粒徑。 26.   根據請求項1至25中任一項之吸入用調配物，其特徵在於活性成分為呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 27.   根據請求項1至26中任一項之吸入用調配物，其特徵在於呈式(I-M-II)之單水合物II的形式之活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸具有 X50 = 1 – 3µm的粒徑。 28.   根據請求項1至27中任一項之吸入用調配物，其特徵在於式(I-M-I)之活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I具有  X10  = max 1 µm的粒徑。 29.   根據請求項1至28中任一項之吸入用調配物，其特徵在於細乳糖具有 X50  ≤ 10 µm或 X50 = ≤ 5 µm的粒徑。 30.   根據請求項1至29中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該細乳糖為Lactohale® 300或Lactohale®230。 31.   根據請求項1至30中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖呈篩分或磨碎的結晶乳糖的形式。 32.   根據請求項1至31中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖具有X90 = 200 - 250 µm或120 – 160 µm或115 – 170 µm的粒徑。 33.   根據請求項1至32中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖具有X50 = 125 - 145 µm或50 – 100 µm或75 – 95 µm的粒徑。 34.   根據請求項1至33中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖具有X10 = 45 - 65 µm或5 – 15 µm或20 – 50 µm的粒徑。 35.   根據請求項1至34中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該細乳糖具有X90 ≤ 10 µm或＜ 30 µm的粒徑。 36.   根據請求項1至35中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該細乳糖具有X50 ≤ 5 µm或＜ 10 µm的粒徑。 37.   根據請求項1至36中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖具有X10 = 1 – 3 µm的粒徑。 38.   根據請求項1至37中任一項之吸入用調配物，其特徵在於該粗乳糖為Lactohale® 100、Lactohale®200或Lactohale® 206。 39.   根據請求項1至38中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有60 µg – 6000 µg之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 40.   根據請求項1至39中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有240-4000 µg 之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 41.   根據請求項1至40中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有480-4000 µg 之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 42.   根據請求項1至41中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有480-2000 µg 之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 43.   根據請求項1至42中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有480-1000 µg 之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 44.   根據請求項1至43中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其含有240 µg、480 µg、1000 µg、2000 µg或4000 µg 之標稱劑量的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。 45.   根據請求項1至44中任一項之吸入用調配物，其特徵在於乾粉摻合物中粗乳糖含量為98.25%至 75%或較佳地介於94.25%和75%之間或更佳從90.00%至75%或更佳從90%至85% 和乾粉摻合物中細乳糖含量為從1.0.% 最多15%或較佳地 1% 最多10%，較佳地介於5%和10%之間，或更佳2.5%-7.5%，較佳地介於5%和7.5%之間或更佳3-7%或更佳4%-6%。 46.   根據請求項1至45中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其具有90-110%，較佳地 95-105% (m/m)之摻合物分析和NMT (=不超過)10%，較佳地 7.5%，更佳5%的RSD (= 相對標準偏差)(n=10)之摻合物均勻性。 47.   根據請求項1至46中任一項之吸入用調配物，其特徵在於其具有活性成分之≥20%的FPF (活性之標稱劑量的%，＜ 4.5 µm) 和≥30%的FPF (活性之DD的%＜ 4.5 µm)，其以級聯衝擊(Cascade Impaction)和劑量單位取樣設備(DUSA) 測量。 48.   一種填充於硬膠囊中之根據請求項1至47中任一項之吸入用調配物 ，其特徵在於取決於活性成分濃度和膠囊填充質量，其具有8-780 µg之最小細顆粒劑量。 49.   一種填充於硬膠囊中之根據請求項1至48中任一項之吸入用調配物 ，其特徵在於取決於活性成分濃度和膠囊填充質量，其具有26-3315 µg之最小遞送劑量。 50.   一種空腔，其包含根據請求項1至49中任一項之吸入用調配物，其可經由乾粉吸入器投予至有需要的患者。 51.   根據請求項50之空腔，其為膠囊或泡罩板條。 52.   根據請求項50之空腔，其為膠囊。 53.   根據請求項50至52中任一項之空腔，其特徵在於其含有8-40 mg之填充質量的乾粉摻合物。 54.   根據請求項50至52中任一項之空腔，其特徵在於其含有10-30 mg之填充質量的吸入用調配物。 55.   根據請求項50至52中任一項之空腔，其特徵在於其含有10-20 mg之填充質量的吸入用調配物。 56.   根據請求項50至52中任一項之空腔，其特徵在於其含有16-20 mg之填充質量的吸入用調配物。 57.   一種製造根據請求項1至49中任一項之吸入用調配物之方法， 其特徵在於 a)     在第一步驟1)中 在開始混合兩種乳糖成分之前，將細乳糖稱重並分層放置在兩層粗乳糖之間， b)     在第二步驟2)中 以72rpm、67rpm或34rpm或32rpm或30rpm在滾筒式混合器中將2種組分摻合2次(2個循環)經20分鐘，並在循環之間預摻合物通過500µm篩進行篩分， c)     在第三步驟3)中 在混合開始前將式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳為式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I通過 500 µm 篩進行預篩分並加至步驟 A和B 中所製造的乳糖預摻合物中，及分層，二者之間交替10層的乳糖預摻合物和9層的活性成分，二者之間交替6層的乳糖預摻合物和5層的活性成分(實施例4)、或二者交替4層的乳糖預摻合物和3層的活性成分(實施例4)、或二者交替2層的乳糖預摻合物和1層的活性成分(實施例4)，較佳地6/5層。 d)   在第四步驟4)中 將步驟3)中獲得之預分層摻合物在容器(玻璃或不銹鋼)中以 72rpm、67rpm、34rpm或 32rpm，較佳 32rpm 混合3-5個循環，較佳3個循環，經20-30分鐘，較佳30分鐘(90min 總混合時間)，在混合循環之間有 10分鐘的停止時間，其特徵在於， 在不銹鋼容器混合步驟4)中獲得之產物， 其中介於在各混合循環之間將摻合物進行篩分或較佳地在混合循環之間没有將摻合物進行篩分， e)     在第五步驟E中，在進行摻合物均勻性取樣和最終膠囊填充之前，將步驟4)中獲得之產物在不銹鋼容器中在室溫(15-25℃)和35-65％相對濕度下靜置某段時間，較佳地24-72小時，更佳48h。 f)    在第六步驟6)中，最後將步驟E中獲得之乾粉摻合物填充於膠囊中。 58.   根據請求項1至49中一或多項之吸入用調配物之用途，其用於製造使用治療心肺病症之藥劑，其特徵在於該藥劑包含吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其中式(I-M-I)之單水合物形式I的x-射線繞射圖(在25℃下及使用Cu-K α1作為輻射源)顯示至少下列反射 6.9、7.2、7.3、12.8和29.2，以2θ值± 0.2°表示，係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 59.   根據請求項1至49中一或多項之吸入用調配物之用途，其用於治療心肺病症，其特徵在於吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)的晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其中該化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 60.   根據請求項1至49中一或多項之吸入用調配物之用途，其用於治療心肺病症之方法，其特徵在於吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)的晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其中該化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示，係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者。 61.   一種使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於其包含吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈選自由下列組成之清單的其晶形變體中之一者的式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物II或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2，較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2 之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示，呈吸入劑型，和其中該吸入劑型包含呈乾粉的形式之活性成分。 62.   一種使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於其含有乾粉吸入器和包含下列的乾粉調配物：240至4000 µg的其呈選自由下列組成之清單的其結晶變體之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸：式(I-M-I)之單水合物I或式(I-M-II)之單水合物或倍半水合物，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2，較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2之峰，以2θ值± 0.2°表示，或其中式(I-M-II)化合物之X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.7、5.7、6.1、和7.1或於12.7、5.7、和8.5之峰，或其中呈其倍半水合物的形式之化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.2和7.6，或者於12.2、8.6和14.5之峰，以2θ值± 0.2°表示，其中該包裝含有以每天一次或兩次的頻率投予該乾粉調配物至少連續兩天的說明。
下列示例性實施態樣說明本發明。本發明不限於實施例中。
除非另有說明，在下列測試和實施例中的百分比數據均為重量百分比；份是重量份。液體/液體溶液的溶劑比、稀釋比和濃度數據在各情況下係基於體積。
實驗部分 縮寫和首字母縮略字：
abs. 絕對
acac 乙醯丙酮
BINAP (2,2'–雙(二苯膦基)–1,1'–聯萘)
cat. 催化
CI 化學電離(在MS中)
coe 環辛烯
d 天
TLC 薄層層析
DCM 二氯甲烷
DMA 二甲基乙醯胺（Dimethylacetamide）
DMF 二甲基甲醯胺（Dimethylformamide）
DMSO 二甲基亞碸
ee 鏡像異構物過量
EI 電子碰撞電離 (在MS中)
ent 鏡像異構/ 鏡像異構上純的
eq 當量
ESI 電灑游離 (在MS中)
EtOAc 乙酸乙酯
GC-MS 氣相層析-聯用質譜
重量% 重量百分比
h 小時
HPLC 高壓、高效液相層析
ID 內徑
iPrOAc iPrOH conc. 醋酸異丙酯 異丙醇 濃縮
LC-MS 液相層析-質譜聯用
LDA 二異丙胺化鋰
LiHMDS 雙(三甲矽)醯胺化鋰
min 分鐘(s)
MS 質譜
MTBE 2-甲氧基-2-甲基丙烷
NMR 磁共振光譜
NMP N-甲基-2-吡咯啶酮
Ph 苯基
pTsOH R f 對甲苯磺酸 滯留指數 (in TLC)
RP-HPLC 逆相高效液相層析
RRT 相對滯留時間
R t 滯留時間
RT 室溫
TESCl 氯三乙基矽烷
THF 四氫呋喃
v/v (溶液之)體積對體積比
T 內部 內部溫度
T 護套 護套溫度
CI 化學電離 (於MS)
D 天
DC 薄層層析
DMSO 二甲亞碸
o. th. 理論的(產量)
ee 鏡像異構物過量
EI 電子碰撞電離 (於MS)
Ent 鏡像異構/ 鏡像異構上純的
wt.-% 重量百分比
h 小時
HPLC 高壓液相層析
iPrOAc iPrOH conc. 醋酸異丙酯 異丙醇 濃縮
l 升
LC-MS 液相層析-質譜聯用
min 分鐘
MS 質譜
pTsOH Rf 對甲苯磺酸 滯留指數 (在DC中)
RP-HPLC 逆相高效液相層析
RRT 相對滯留時間
R t 滯留時間
RT 室溫
THF 四氫呋喃
v/v 體積對體積比(於溶液)
T內部 內部溫度
T護套 護套溫度
分析方法 DSC/TG
使用來自 Perkin-Elmer的差示掃描量熱儀(型號 DSC7、Pyris-1或 鑽石)記錄 DSC溫度記錄圖。使用非氣密鋁盤以 2020 Kmin -1的加熱速率進行測量。流動氣體是氮氣。沒有樣品製備。
使用來自 Perkin-Elmer的熱天平(型號 TGA7和Pyris 1)記錄 TGA 溫度記錄圖。使用開放式鉑盤以10 Kmin -1的加熱速率進行測量。流動氣體為氮氣。沒有樣品製備。 XRPD
使用 XRD 繞射計X`Pert PRO (PANalytical)和 STOE STADI-P (輻射Cu K α1，波長 1.5406 Å)在室溫下記錄X-射線繞射圖案。沒有樣品製備。所有X-射線反射係以2θ (θ) 值(峰最大值)與 ±0.2°之解析度引用。 拉曼
使用來自 Bruker的 FT-拉曼分光光度計(型號 RFS 100和MultiRam)在室溫下記錄拉曼光譜。解析度為2 cm -1。在玻璃瓶或鋁盤中進行測量。沒有樣品製備。 IR
IR-ATR-光譜在室溫下使用來自 Bruker的具有通用鑽石ATR裝置的 FT-IR-分光光度計Tensor 37記錄。解析度為4 cm -1。沒有樣品製備。 LC-MS 方法 方法 A
儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC System：管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 µm 50 x 1 mm：溶析液A：1 l Wasser + 0.25 ml 99%固有甲酸，溶析液B：1 l 乙腈 + 0.25 ml 99%固有甲酸：梯度：0.0 min 90% A  → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A 烘箱：50℃：流量：0.40 ml/min：UV-偵測：210 nm。 HPLC 方法 方法 B
具有恆溫管柱烘箱、UV偵測器和數據評估系統之高效液相層析儀，測量波長 206 nm，帶寬：6 nm，烘箱溫度30℃，管柱：chiralpak AD-H，長度：250 mm，內徑：4.6 mm，顆粒大小：5 μm，動相：A：N-庚烷，B：乙醇 + 0.1% 二乙胺，梯度程式：開始1 ml / min 70% 溶析液a，30% 溶析液B：12 min 1 ml / min 40% 溶析液a，60% 溶析液B。樣品溶劑：乙醇 + 0.1% 二乙胺，試液：大约1.0 mg / ml的物質，用樣品溶劑溶解，注入體積：5 μl RT：鏡像異構物1：5.8 min (RRT 1.00)，鏡像異構物2：7.2 min RRT1.25 方法 C
具有恆溫管柱烘箱、UV偵測器和數據評估系統之高效液相層析儀，測量波長 204 nm，帶寬：6 nm，烘箱溫度45℃，管柱：chiralpak AD-H，長度：250 mm，內徑：4.6 mm，顆粒大小：5 μm，動相：A：N-庚烷，B：乙醇 + 0.2% 三氟乙酸 + 0.1% 二乙胺，梯度程式：1.5 ml / min 60% 溶析液a，40% 溶析液b：樣品溶劑：乙醇，試液：大约1.0 mg / ml的物質，用樣品溶劑溶解，注入體積：10 μl RT：鏡像異構物1 2.9 min RRT 1,00 鏡像異構物2 3.7 min RRT 1.28 方法L
裝置類型MS：Waters Synapt G2S：裝置類型UPLC：Waters Acquity I-CLASS：管柱：Waters，HSST3，2.1 x 50 mm，C18 1.8 µm：溶析液A：1 l 水 + 0.01% 甲酸：溶析液B：1 l 乙腈 + 0.01% 甲酸：梯度：0.0 min 2% B → 2.0 min 2% B → 13.0 min 90% B → 15.0 min 90% B：烘箱：50℃：流速：1.20 ml / min：UV偵測：210 nm 方法M
具有恆溫管柱烘箱、UV偵測器和數據評估系統之高效液相層析儀，測量波長 226 nm，帶寬：40 nm。管柱：Zorbax Bonus-RP，長度：150 mm，內徑：3.0 mm，顆粒大小：3.5 µm，動相：A：水` + 0.1% TFA，B：ACN + 0.1% TFA / 甲醇 = 2 + 1，梯度程式：0.0 min 50% B → 12.0 min 70% B → 17.0 min 90% B → 25.0 min 90% B：流速：0.60 ml / min：樣品溶劑：異丙醇 + 0.1% 二乙胺，試液：溶解約35 mg的物質在25 ml ACN中並用水 + 0.1% TFA 填充至 50 ml。(0.7 mg / mL)：注入體積：3 µL 新方法M
具有恆溫管柱烘箱、UV偵測器和數據評估系統之高效液相層析儀，測量波長 226 nm，帶寬：40 nm。管柱：XBridge Phenyl 長度：50 mm，內徑：4.6 mm，顆粒大小：2.5μm：管柱 烘箱溫度：22℃
動相：A：緩衝液pH7 (0,66 g/L (NH 4) 2HPO 4和0,58 g/L NH 4H 2PO 4)：B：ACN
梯度程式：0.00 min = 95 % A，5% B：t 8,3-11 = 20% A，80% B
流速：1.2 mL/min.：UV-燈：210 nm 方法N
具有恆溫管柱烘箱、UV偵測器和數據評估系統之高效液相層析儀，測量波長 210 nm。管柱：XBridge BEH Phenyl 長度：50 mm，內徑：4,6 mm，顆粒大小：2,5 µm，動相：在1 l 微孔水（milipore water）中之A：0,66 g (NH 4) 2HPO 4和0,58 g (NH 4)H 2PO 4：B：ACN，梯度程式：0.00 min 95% B  → 8,3 min 80% B → 11,0 min 80%：流速：1,2 ml/min：樣品溶劑：ACN + 水，注入體積：3 µL。 A – 化學實施例 起始材料和中間物 實施例 1A
(5 S)-5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(鏡像異構物2)
根據WO 2014/012934中實施例92A所述之程序合成該化合物。 實施例2A
丁基-(5S)-5-({2-[4-(丁氧羰基)苯基]乙基}[2-(2-羥苯基)乙基]胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯
根據WO2021/233783實施例10之中所述之程序合成該化合物。   實施例 3A
丁基-(5S)-5-({2-[4-(丁氧羰基)苯基]乙基}[2-(2-{[3-氯-4‘-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯
根據 WO2021/233783實施例11中所述之程序合成該化合物。
另一起始材料 4-(溴甲基)-3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基] (式XI化合物)為市售。 實施例 4A
萘-1,5-二磺酸 - 丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基 ] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(1：1) 加成物
在3 L燒瓶中，將889.1 g (1.06 mol)的丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯- 4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(油)溶解在1850 mL的四氫呋喃中。在室溫下添加304.6 g (1.06 mol)的萘-1,5-二磺酸，將混合物攪拌直到其完全溶解。隨後用旋轉蒸發器在40℃下將溶液濃縮。在乾燥箱中在40℃下在氮氣流中以真空將殘留物(固體)乾燥至1126.3 g。
產量(.粗製產物)：1126.3g：理論產量的94.4%
鏡像異構物純度(HPLC方法B)：95.3% ee
純度(面積)：81.8% (方法N), R t16.11 (BP-二酯)) 實施例 4B-4E
以不同的酸形成丁基-(5S)-5-({2-[4-(丁氧羰基)苯基]乙基}[2-(2-{[3-氯-4‘-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯的穩定鹽之試驗 4B ： (+)- 二對甲苯醯基 -D- 酒石酸之添加
在50℃之溫度下將4 g (0.005 mol)的丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯- 4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(油)逐漸地溶解在總量75 mL的甲醇中。添加1.8 g (0.005 mol) (+)-二對甲苯醯基-D-酒石酸在2.5 ml甲醇中之溫溶液。最後將混合物攪拌整個週末。
將不同的溶劑加至較小部分的反應混合物中以引發結晶。嘗試以下溶劑但沒有任何效果：MTBE、MIBK、二氯甲烷、甲苯。添加環己烷、正己烷和甲基環己烷的混合物後形成兩層。
將幾滴反應混合物在錶玻璃上乾燥並將所得乾燥塊刮下及最後在環己烷、正己烷和甲基環己烷的混合物中攪拌。所得固體熔化。
用甲基環己烷分離固體。固體的 HPLC分析顯示為酒石酸。
將口加至另一部分反應混合物中後，固體分離。固體難以分離。
將反應混合物除去 溶劑。獲得3.1 g的淡黃色泡沫晶體。
將31 mL的甲基環己烷加至泡沫晶體並攪拌4小時。獲得2.8 g的淺黃色固體。
未偵測到定義的鹽。 4C ：三氟乙酸 (=TFA) 之添加
將0.21 g (0.2 mmol)的丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯- 4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(油)溶解在2 mL的乙腈中。添加0.1 mL的 TFA。形成橙色溶液。以真空蒸發溶劑以產生橙色油。
沒有觀察到鹽的形成。 4D ：甲磺酸之添加
將0.26 g (0.3 mmol)的丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯- 4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(油)溶解在1.5  mL的二氯甲烷中。添加20.1 µl的 甲磺酸。形成橙色溶液。在室溫下攪拌1 小時後没有结晶。
在40℃下以真空蒸發溶劑以產生黃色泡沫狀結晶。
篩分幾種溶劑以引發結晶或純化。
二氯甲烷，MIBK、MTBE、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二㗁烷、正丁醇，甲醇、乙醇、四氫呋喃、甲苯導致在室溫下溶液。
二異丙醚、水、二乙醚、環己烷導致黏性團塊。
在室溫下在正己烷中進一步攪拌再次導致黏性團塊。
無鹽可分離。 4E ：樟腦磺酸之添加
將0.29 g (0.34 mmol)的丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯- 4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(油)溶解在1.5 mL的二氯甲烷中。80.05 µg的 樟腦磺酸添加。形成橙色溶液。
在40℃下腑真空蒸發溶劑以產生黃色泡沫狀結晶。
篩分幾種溶劑以引發結晶或純化。
二氯甲烷，MIBK、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二㗁烷、正丁醇，甲醇、乙醇、四氫呋喃、甲苯在室溫下導致溶液。
MTBE添加導致油滴形成。
水、二異丙醚、二乙醚、環己烷和正庚烷都只提供黏性團塊。
無鹽可分離。 實施例 5A 和實施例 6A
5-{(三級 -丁氧羰基)[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(鏡像異構物1和2)
將15 g (21.42 mmol)的外消旋5-{(三級-丁氧羰基)[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)­聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(實施例22A)藉由超臨界流體(SFC)用手性相分離成鏡像異構物[管柱：Chiralpak OD-H，20 µm，400 mm x 50 mm：動相：二氧化碳/異丙醇 70：30 (v/v)：流速：400 ml/min：壓力：80巴：UV偵測：220 nm：溫度：37℃]： 實施例 5A ( 鏡像異構物 1) ：
產量：5830 mg
R t= 2.83 min：化學純度＞99.9%：＞99% ee [管柱：Chiralpak OD-H，5 µm，250 mm x 4.6 mm：動相：二氧化碳/異丙醇 70：30 (v/v)：流速：3 ml/min：UV偵測：210 nm]。 實施例 6A ( 鏡像異構物 2) ：
產量：6330 mg
R t= 5.30 min：化學純度＞99%：＞98% ee [管柱：Chiralpak OD-H，5 µm，250 mm x 4.6 mm：動相：二氧化碳/異丙醇 70：30 (v/v)：流速：3 ml/min：UV偵測：210 nm]。 實施例 7A
5-{[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯 二鹽酸鹽 (鏡像異構物1)
將3208 mL的氯化氫在二㗁烷中之4 N 溶液，用另外2240 mL的二㗁烷稀釋，加至455 g (641.56 mmol)的5-{(三級-丁氧羰基)[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)­聯苯-4-基]­甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(鏡像異構物1，實施例1A)，並將混合物在室溫下攪拌過夜。接著將反應溶液濃縮至乾並將殘餘物在高真空下過夜乾燥。此產生448.7 g (641.59 mmol，理論的約100%)的目標產物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.06 min：m/z = 609/611 (M+H) +。 實施例 8A
5-{[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲乙酸酯(鏡像異構物1)
將448.7 g (641.59 mmol)的5-{[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯二鹽酸鹽(鏡像異構物1，實施例3A) 溶解在6869 mL的THF中，添加268 mL的三乙胺並將混合物在室溫下攪拌1 h。接著將沉澱的氯化三乙銨晶體濾出和用THF洗滌。將獲得之濾液蒸發至乾。將殘餘物溶解在乙酸乙酯中，用10%濃度的氯化鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂乾燥，過濾和再次蒸發至乾。此產生391 g (620.59 mmol，理論的97%)之目標化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.08 min：m/z = 609/611 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6, δ/ppm)：1.27 (t, 3H), 1.57-1.72 (m, 2H), 1.76-1.87 (m, 1H), 1.87-1.95 (m, 1H), 1.95-2.07 (m, 1H), 2.65-2.88 (m, 6H), 3.75 (br. s, 1H), 4.28 (q, 2H), 5.19 (s, 2H), 6.92 (t, 1H), 7.08 (d, 1H), 7.16-7.26 (m, 2H), 7.65-7.77 (m, 3H), 7.84 (d, 3H), 7.89 (s, 1H), 7.95 (d, 2H)。 實施例 9A
5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(鏡像異構物1)
將378 g (620.59 mmol)的5-{[2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(鏡像異構物1，實施例4A)、360 g (1241.19 mmol)的4-(2-碘乙基)苯甲酸甲酯和98.66 g (930.89 mmol)的無水碳酸鈉在 8191 mL的乾燥乙腈中之懸浮液在110℃之浴溫下攪拌過夜。接著添加另外360 g (1241.19 mmol) g的4-(2-碘乙基)苯甲酸甲酯和128.65 g (930.89 mmol)的粉末碳酸鉀，並將混合物在回流下加熱另72 h。反應混合物冷卻後，濾出無機鹽並將獲得之濾液蒸發至乾。將所得殘餘物溶解在乙酸乙酯中，用10%濃度的氯化鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鎂乾燥，過濾並接著再次蒸發至乾。將所得殘餘物分兩份用矽膠進行層析純化(9 kg)(動相：石油醚/乙酸乙酯8：2à7：3)。此產生397 g (551.32 mmol，理論的89%)之目標化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.67 min：m/z = 771/773 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6, δ/ppm)：1.27 (t, 3H), 1.37-1.52 (m, 1H), 1.52-1.67 (m, 1H), 1.85-1.96 (m, 1H), 1.96-2.05 (m, 1H), 2.56-2.80 (m, 10H), 3.81 (s, 3H), 3.97-4.09 (m, 1H), 4.26 (q, 2H), 5.07 (m, 2H), 6.87 (t, 1H), 7.01-7.16 (m, 4H), 7.23 (t, 1H), 7.35-7.48 (m, 2H), 7.53 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.74 (d, 2H), 7.77-7.89 (m, 5H)。 比較例 比較例 1 ( 西那西瓜 (Cinaciguat))
4-[((4羧丁基)-{2-[(4-苯乙基苯甲基)氧基]苯乙基}胺基)甲基]苯甲酸
類似於實施例8A合成該化合物，WO 01/019780-A1。 比較例 2 里奧西瓜 (Riociguat)
甲基-4,6-二胺基-2-[1-(2-氟苯甲基)- 1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-5-嘧啶基(甲基)胺甲酸酯
類似於實施例8合成該化合物，WO 03/095451-A1。 比較例 3
(5)-{(4-羧丁基)[2-(2-{[4-(5-氯-1,3-苯并㗁唑-2-基)苯甲基]氧基}-5-氟苯基)乙基]­胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例37合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.10 min：m/z = 672/674 (M+H) +。 比較例 4
5-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[4-(5-氯-1,3-苯并㗁唑-2-基)苯甲基]氧基}-5-氟苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例39合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.28 min：m/z = 720/722 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.40-1.72 (m, 2H), 1.88-2.11 (m, 2H), 2.59-2.84 (m, 10H), 4.02-4.13 (m, 1H), 5.00-5.14 (m, 2H), 6.96 (d, 1H), 7.02 (d, 2H), 7.13 (d, 2H), 7.41-7.57 (m, 5H), 7.75 (d, 2H), 7.83 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 8.11 (d, 2H), 12.05-13.41 (br. s, 約2H)。
[α]D20 = +58.77°, c = 0.405, DMSO。 比較例 5
(+)-5-{(4-羧丁基)[2-(2-{[4-(5-甲基-1,3-苯并㗁唑-2-基)苯甲基]氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例2合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.03 min：m/z = 634 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.32-1.70 (m, 7H), 1.89-2.03 (m, 2H), 2.07-2.16 (m, 2H), 2.39-2.64 (m, 3H, 被 DMS訊號部分遮蔽), 2.46 (s, 3H), 2.65-2.87 (m, 4H), 3.95-4.03 (m, 1H), 5.08 (q, 2H), 6.87 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.18 (t, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.52 (d, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.67 (d, 2H), 7.85 (d, 1H), 8.16 (d, 2H), 11.30-12.97 (br. s, 2H)。
[α]D20 = +62.89°, c = 0.380，甲醇。 比較例 6
5-([2-(4-羧苯基)乙基]{2-[2-({4-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并㗁唑-2-基]苯甲基}氧基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例24合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.32 min：m/z = 736 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.41-1.55 (m, 1H), 1.55- 1.71 (m, 1H), 1.88-2.10 (m, 2H), 2.58-2.89 (m, 10H), 4.01-4.14 (m, 1H), 5.03-5.16 (m, 2H), 6.86 (t, 1H), 6.99-7.10 (m, 2H), 7.14 (d, 2H), 7.21 (t, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.49-7.60 (m, 3H), 7.72-7.86 (m, 3H), 8.03 (d, 1H), 8.14 (d, 2H), 8.24 (s, 1H), 12.01-13.42 (br. s, 約2H)。 比較例 7
5-[(4-羧丁基){2-[2-({4-[5-(三氟甲基)-1,3-苯并㗁唑-2-基]苯甲基}氧基)苯基]乙基}胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例25合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.07 min：m/z = 688 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.30-1.71 (m, 6H), 1.90-2.04 (m, 2H), 2.07-2.18 (m, 2H), 2.39-2.65 (m, 4H, 被 DMS訊號部分遮蔽), 2.65-2.91 (m, 4H), 3.87-4.07 (m, 1H), 5.10 (q, 2H), 6.87 (t, 1H), 7.00 (d, 1H), 7.10-7.23 (m, 2H), 7.56 (d, 2H), 7.66 (d, 1H), 7.85 (d, 2H), 8.04 (d, 1H), 8.16-8.30 (m, 3H), 11.10-13.31 (br. s, 約2H)。 比較例 8
5-[(4-羧丁基){2-[2-({4-[5-(三氟甲氧基)-1,3-苯并㗁唑-2-基]苯甲基}氧基)苯基]乙基}胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例28合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.09 min：m/z = 704 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.32-1.71 (m, 6H), 1.88-2.05 (m, 2H), 2.07-2.17 (m, 2H), 2.39-2.64 (m, 4H, 被 DMS訊號部分遮蔽), 2.64-2.88 (m, 4H), 3.93-4.05 (m, 1H), 5.10 (q, 2H), 6.87 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 7.09-7.23 (m, 2H), 7.46 (dd, 1H), 7.54 (d, 2H), 7.66 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.89-7.98 (m, 2H), 8.18 (d, 2H), 11.10-13.04 (br. s, 約2H)。 比較例 9
5-([2-(4-羧苯基)乙基]{2-[2-({4-[5-(三氟甲氧基)-1,3-苯并㗁唑-2-基]苯甲基}氧基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例29合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.34 min：m/z = 752 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.42-1.55 (m, 1H), 1.55-1.71 (m, 1H), 1.88-2.11 (m, 2H), 2.59-2.87 (m, 10H), 3.99-4.13 (m, 1H), 5.09 (q, 2H), 6.88 (t, 1H), 6.98-7.09 (m, 2H), 7.15 (d, 2H), 7.20 (t, 1H), 7.41-7.58 (m, 5H), 7.77 (d, 2H), 7.87-7.96 (m, 2H), 8.12 (d, 2H), 11.89-13.63 (br. s, 約2H)。 比較例 10
5-{(4-羧丁基)[2-(2-{[4-(5-氰基-1,3-苯并㗁唑-2-基)苯甲基]氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物2)
類似於WO 2014/012934-A1實施例31合成該化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 0.93 min：m/z = 645 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.31-1.77 (m, 6H), 1.90-2.05 (m, 2H), 2.05-2.18 (m, 2H), 2.39-2.64 (m, 4H, 被 DMS訊號部分遮蔽), 2.65-2.88 (m, 4H), 3.92-4.05 (m, 1H), 5.10 (q, 2H), 6.87 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 7.10-7.22 (m, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.67 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 8.19 (d, 2H), 8.44 (s, 1H), 11.38-12.79 (br. s, 約2H)。 比較例 11
(5S)-5-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸
將2450 mg (3.18 mmol)的(5S)-5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸乙酯(實施例1A，鏡像異構物2)溶解在25 mL的二㗁烷中，添加9.5 mL的1 N 氫氧化鈉水溶液並接著將混合物在室溫下攪拌過夜。反應已經完成後，用旋轉蒸發器移除二㗁烷並將殘留之混合物用約50 mL的水稀釋。接著使用乙酸將混合物酸化至pH 4-5。將沉澱的固體以抽吸濾出並用水(總共約50 mL的水)重複洗滌。接著將固體溶解在50 mL的水中並在室溫下攪拌過夜。再次抽吸過濾後，將固體再用水洗滌並接著在高真空下於40℃乾燥過夜。以此方式，獲得2300 mg (2.9 mmol，93%純度，含有未知量的單鈉鹽，具有相同的滯留時間)的標題化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.37 min：m/z = 729/731 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.38-1.71 (m, 2H), 1.84-2.08 (m, 2H), 2.59-2.84 (m, 10H), 3.97-4.11 (m, 1H), 4.99-5.16 (m, 2H), 6.87 (t, 1H), 7.05 (br. d, 2H), 7.12 (br. d, 2H), 7.23 (br. t, 1H), 7.38-7.48 (m, 2H), 7.54 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.71-7.91 (m, 7H), 11.90-13.60 (br. s, 約2H)。
XRPD：非晶相，參見圖33
經由VCD光譜法測定比較例11的絕對構型：
振動圓偏光二色性(VCD)為確定手性分子絕對構型的既定方法(參見United States Pharmacopeial Convention (USP) and The National Formulary (USP–NF), second suppl. USP-NF 34, chapters 782 and 1782, June 1, 2016 and Abs. config. by VCD, white paper BioTools, 2017)。
涉及測定的步驟如下：
1.使用DMSO測量實驗VCD光譜。在5.5 mg/0.15 ml的濃度下測量實施例1樣品。
2.使用全始計算(ab initio calculation，其使用Gaussian09TM (市售套裝軟體))計算鏡像異構物中之一的VCD。接著藉由反轉所有譜帶的符號或計算鏡像結構的VCD來獲得另一種鏡像異構物的VCD光譜。
3. 最後步驟為比較實驗光譜與兩個計算光譜，以測定在符號和訊號強度之間產生最佳相關性的鏡像異構物。可使用CompareVOA™軟體計算兩個該光譜之間重疊的可靠度。
VCD 分光計：ChirallR-2X w/ DualPEM
濃度：5.5 mg/0.15 mL的在DMSO中之實施例1
解析度：4 cm-1
PEM 設定：1400 cm-1
掃描次數/ 測量時間：20小時
樣品管：BaF 2
路徑長度：100 µm
計算詳細資料：
Gaussian版本：Gaussian 09
用於Boltzman和的總低能量構形異構物：92
用於DFT計算的方法和基組：B3LYP/6-31G(d)
計算之絕對組態：S
基於VCD光譜的一致性，比較例11之絕對組態指定為(S)-鏡像異構物。指定的可靠度為94%。 比較例 11 之熱穩定性的測定：
將0.3 mg的測試化合物(例如比較例11)溶解在0.1 ml二甲亞碸和0.4 ml乙腈中。接著添加1.0 ml 水。為了完全溶解，搖動HPLC小瓶並進行超音波處理。將此溶液立即以HPLC進行分析(在t0時作為參考)。將0.3 mg 測試化合物稱入另一個HPLC小瓶中。將小瓶蓋上蓋子並在加熱塊中於90°C下的儲存7天。
此時之後，打開小瓶的蓋子並將0.1 ml二甲亞碸和0.4 ml乙腈加至應激化合物中。接著添加1.0ml水。為了完全溶解，搖動HPLC小瓶並進行超音波處理。以HPLC分析樣品(1週後的樣品)。以百分比表示的峰面積用於定量。以百分比表示的峰面積用於定量。 表 11 ：
HPLC-方法
溶析液： A= 5ml HClO4/L 水      B= ACN 梯度： 時間 (min.) %B 流量 (mL/min.)
管柱： Nucleodur 100 C18ec 3µm  50*2mm 0,00 2,0 0,750
溫度： 30 ℃ 1,00 2,0 0,750
UV WL.： 210 nm 9,00 98,0 0,750
HPLC 流量： 0,750 mL/min. 13,00 98,0 0,750
13,50 2,0 0,750
15,00 2,0 0,750
發現比較例11在測試期間是穩定的。
此外，O 14/012934-A1 中揭示的幾個實施例僅顯示有限的熱穩定性 (在90℃下，7天)：例如實施例2 (比較例5，實驗部分)、24 (比較例6，實驗部分)、25 (比較例7，實驗部分)、28 (比較例8，實驗部分)、29 (比較例9，實驗部分) 和例如31 (比較例10，實驗部分)。 比較例 12
(5R)-5-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 (鏡像異構物1)
將291 g (377.29 mmol)的乙基 5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(鏡像異構物1，實施例5A)溶解在3000 mL的二㗁烷中，添加1132 mL的1 N氫氧化鈉水溶液並接著將混合物在室溫下攪拌過夜。反應已經完成後，用旋轉蒸發器移除二㗁烷並將殘餘混合物用約6000 mL的水稀釋。接著使用乙酸將混合物酸化至pH 4-5。以抽吸濾出沉澱的固體並用水(總共約3000 mL的水)重複洗滌。接著將固體在高真空下於室溫使用乾燥劑五氧化二磷。乾燥3 d 。接著將乾燥劑移並將固體在40℃下乾燥另外48 h。以此方式，獲得249 g (342.15 mmol，91%理論的)的標題化合物。
LC-MS (方法A)：R t= 1.33 min：m/z = 729/731 (M+H) +。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)：δ [ppm] = 1.37-1.66 (m, 2H), 1.84-2.05 (m, 2H), 2.56-2.81 (m, 10H), 3.98-4.08 (m, 1H), 5.01-5.14 (m, 2H), 6.87 (t, 1H), 7.05 (d, 2H), 7.12 (d, 2H), 7.23 (t, 1H), 7.39-7.47 (m, 2H), 7.54 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.71-7.90 (m, 7H), 11.60-13.85 (br. s, 約2H)。
作為比較例11，絕對組態被確定為(5S)，比較例12的對應絕對組態應為相反的，即(5R)。 比較例 13
(5R)-5-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單鈉(鏡像異構物1)
將60 g非晶形 (5R)-5-([2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]{2-[4-(甲氧羰基)苯基]乙基}胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(比較例12)和800g丙酮裝入容器中。將容器加熱至回流溫度。在回流溫度下形成的固體在冷卻至室溫後過濾。
產量：8 g的乾燥產物，13% o. th。
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：100% ee
(ICP)：鈉含量：3,1% 鈉 比較例 14
(5R)-5-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (鏡像異構物1)
將174.2 g 比較例12與2003.3 g丙酮在回流下攪拌。將混合物冷卻至20℃並濾出不溶固體(19.5 g乾燥後)。將273g 丙酮加至濾液，將其加熱至57℃並添加1101.4 g水和0.4 g單水合物II之R鏡像異構物(從類似於本程序的小規模預實驗製備)的晶種。添加另外1101.4 g水並將其在室溫下攪拌過夜。將產物濾出並在55℃下以真空(30毫巴)乾燥至143.8 g。
從21.0g根據相同程序製備的比較例12中獲得另外20.3g。
合併固體至164.1g，將161.0g的此等固體在與1993.0 g丙酮在回流下攪拌。在此溫度下，添加930.0 g水和0.8 g單水合物II之R鏡像異構物(從類似於本程序的小規模預實驗製備)的晶種，並將其冷卻至50℃。添加其他200.0g水和400.0g丙酮以改良可攪拌性。將其在50℃下攪拌1 h，添加1263.0 g 水，將其攪拌30min，在2h內冷卻至20℃和在室溫下攪拌過夜。將產物濾出和在55℃下以真空(30毫巴)乾燥至154.4 g。
將一部分固體(95.0 g)在40℃溶解在916.7g的丙酮中，冷卻至室溫並將溶液過濾澄清。添加170.1 g的水，30 min後添加單水合物II的R鏡像異構物(從類似於本程序的小規模預實驗製備)之晶種並將其攪拌過夜。將稀懸浮液加熱至50°C，將所得溶液冷卻至室溫，接種單水合物II之R鏡像異構物(從類似於本程序的小規模預實驗製備)的晶種並攪拌過夜。濾出固體，用76.0g丙酮和19.0g水(8：2)的混合物洗滌並吸乾至68.4g。
將濾液在40℃/250至15毫巴下濃縮並濾出沉澱的固體。在55℃下將28.2 g 固體溶解在157.2 g丙酮水混合物(9：1 w/w)中，冷卻至15℃。添加 10 g水後，用單水合物之R 鏡像異構物(從類似於本程序的小規模預實驗製備)之晶種接種，並在15℃下攪拌過夜。將懸浮液加熱至50℃，攪拌30分鐘並在4 h內冷卻至20℃。在1 h內再次加熱至50℃，在4.5小時內冷卻至15℃，並在15℃下攪拌過夜。將固體濾出，用28 g丙酮水(8：2 w/w)混合物洗滌並抽乾至20.6 g。
將固體合併至87.0 g之目標化合物。
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：99.8%ee
純度(方法M, area)：99.7%，Rf 9.33 min
XRPD：單水合物II 實施例 實施例 1
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (晶種) (I-M-II)
將2,0 g的式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(類似於比較例11製造)溶解在16.2 g 丙酮和1.8 g 水 (8：1混合物)中，添加更多1.8 g的水。將透明溶液攪拌過夜並在1.5 h後結晶開始。以抽吸濾出固體，用2 g的丙酮 / 水 (8：2)洗滌和在60℃下以真空用氮氣乾燥過夜：
產量：1.5 g的白色固體，理論的75%
XRPD：單水合物II，X射線粉末繞射圖係顯示於圖34中
反射(峰最大值)[° 2θ]
5.7
6.1
7.1
8.5
9.4
9.9
10.2
10.8
11.4
11.6
11.7
12.2
12.7
13.0
13.9
14.2
14.5
15.1
15.3
15.7
15.9
16.1
16.4
17.1
17.3
17.7
17.9
18.3
18.5
18.7
19.1
19.7
19.8
20.2
20.4
20.8
21.1
21.2
21.6
22.0
22.3
22.8
23.0
23.4
23.8
24.2
24.4
24.4
25.1
25.5
26.2
26.4
27.1
27.4
27.7
28.0
28.5
28.9
29.2
29.5
29.7
30.0
30.4
30.6
31.2
31.6
32.2
32.4
32.8
實施例 2
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，呈單水合物II (路徑3，從丙酮、甲醇和水結晶)
將1067 g的四氫呋喃放置在6 L玻璃攪拌設備和分批添加333 g (0.396 mol)的萘-1,5-二磺酸 - (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- ( 2 -{[3-氯-4 '-(三氟甲基)[聯苯基]-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸丁酯(1：1)加成物(實施例4A)並攪拌。在20℃至25℃下添加1335 mL的水並接著氨水(27%)直至達到7.8至8.2之pH(大约46 g)。添加1440 g的二異丙醚，分離出水相，將有機相再次用1335ml的水/1ml的27%氨水洗滌，並接著用1335 mL的水洗滌。將有機相通過覆蓋有200 g硫酸鈉(無水)的Seitz濾板過濾，將其用200 g 二異丙醚沖洗並將濾液在40℃下以真空濃縮以產生267 g蒸發殘餘物。
將蒸發後的殘餘物溶解在848g的二㗁烷中，添加1583g的1N 氫氧化鈉溶液並將混合物在60℃下攪拌5.5h。接著在20℃下添加1480 g乙酸乙酯並分離出產物水相(二鈉鹽溶液)，用1480 g的乙酸乙酯洗滌並在最高40℃下以真空蒸餾出殘餘的乙酸乙酯。將殘餘物用2500 g的水稀釋並將一部分二鈉鹽溶液(1178g)滴加至1095 g的四氫呋喃和137 g的10%鹽酸之混合物中，直至達到4.0之pH。
二鈉鹽溶液的消耗量與提交的鹽酸量有關並計算用於轉化其他部分量的鹽酸量。將第二份二鈉鹽溶液(1789 g)滴加至計算量的四氫呋喃(1789 g)和10% 濃度的鹽酸(208 g)中，直至達到4.0之pH。
將第三份二鈉鹽溶液(1510 g)滴加至計算量的四氫呋喃(1505 g)和10%濃度的鹽酸(175 g)中，直至達到4.0之pH。
將合併的有機相在最高40°C下以的真空濃縮，直到無溶劑的水在回流冷凝器上冷凝。以抽吸濾出沉澱的固體並用750 g的水洗滌。
使用相同的程序，根據上述程序將第二和第三部分各333 g的萘-1,5-二磺酸酸 丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2 - {[3-氯 -4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(1：1)加成物(實施例4A)進行轉換。
將合併的潮濕產物在60°C下在氮氣流中在真空下乾燥，以產生587 g(理論值的約91%)的式I之目標化合物。
結晶：
將固體(587 g)與3674 g的丙酮和470 g的水之混合物一起加熱至50℃。將所得溶液通過Seitz濾板過濾並加熱至40℃。將濾液與1.5 g的(5S)-5- {[2- (4-羧苯基) 乙基] [2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基} -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (實施例1)之晶種混合，在2 h內冷卻至20 ° C，攪拌0.5 h並在2 h內再次加熱至50℃。將混合物攪拌0.5 h，在3h內冷卻至20℃，攪拌0.5 h並在2 h過程中再次加熱至50°C。在3h內將其冷卻至20°C，攪拌0.5 h並以抽吸濾出固體。用800 g丙酮和90 g水的混合物洗滌潮濕的產物，並在25°C和氮氣流中在真空下乾燥至之恆重361 g之恆重。
收到的產物之品質及修改的製程中控制不符合要求。因此，再次再結晶。
將固體(361 g)與1949 g的丙酮和217 g的水之混合物一起加熱至50℃。將所得溶液通過Seitz濾板過濾並加熱至50℃。將其與1.5 g的(5S)-5- {[2- (4-羧苯基) 乙基] [2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基} -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (實施例1)之晶種混合，在3 h內冷卻至20℃，攪拌0.5 h並在3h內再次加熱至50℃。將混合物攪拌0.5 h，在3h內冷卻至20℃，攪拌0.5 h並在3 h過程中再次加熱至50°C並攪拌0.5 h。在3h內將其冷卻至20°C，攪拌0.5 h並以抽吸濾出固體。將潮濕的產物在25°C在氮氣流中在真空下乾燥至271 g之恆重。
過程中控制證實足夠的品質，但未獲得的產物所需的修改。因此，再次再結晶。
將固體(271 g)與1668 g的丙酮和75 g的水之混合物一起加熱至50℃。將所得溶液通過Seitz濾板過濾並加熱至50℃。將其冷卻至45℃，1.5 g的(5S)-5- {[2- (4-羧苯基) 乙基] [2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基} -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (實施例1)之晶種，在3 h內冷卻至20℃，攪拌0.5 h並在1 h內加熱至40℃。將懸浮液攪拌0.5 h，在3小時內冷卻至20℃並攪拌，並以抽吸濾出固體。將潮濕的產物在25°C在氮氣流中在真空下乾燥恆重。
製程中控制證實產物之品質及修改按照要求。
產量：117 g單水合物II：18%的理論產量。
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：99.6% ee
純度(面積)：99.8% (方法M, R t9.33 min)
XRPD：單水合物II，X射線粉末繞射圖係顯示於圖35中
微粉化後：
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：100.0% ee
純度(面積)：99.7% (方法M, R t9.35 min)
XRPD：具有部分非晶化之單水合物II，X射線粉末繞射圖係顯示於圖36中
微粉化前之單水合物II：參見圖35
反射(峰最大值)[° 2θ]
5.7
6.1
6.3
7.1
8.5
9.9
10.1
10.2
10.8
11.4
11.6
11.8
12.2
12.7
13.0
13.9
14.3
14.5
15.1
15.3
15.7
15.9
16.2
16.4
17.1
17.3
17.7
17.9
18.3
18.5
18.8
19.2
19.8
20.3
20.5
20.8
21.1
21.3
21.6
22.0
22.4
22.8
23.1
23.3
23.5
23.8
24.2
24.5
25.1
25.4
25.6
26.2
26.4
26.7
27.1
27.4
27.7
28.1
28.3
28.5
28.9
29.2
29.5
29.8
30.0
30.6
30.7
31.2
31.7
32.2
32.4
32.8
34.8
35.3
36.3
微粉化後之單水合物II(部分非晶化)，圖36
反射(峰最大值)[° 2θ]
5.7
6.1
7.1
8.5
9.9
10.1
10.8
11.5
11.6
12.2
12.7
13.0
13.9
14.2
15.2
15.3
15.7
16.4
17.2
17.3
17.7
18.0
18.3
18.5
18.8
19.1
19.8
20.2
20.8
21.1
21.3
21.6
22.1
22.4
23.1
23.4
23.5
23.9
24.3
24.5
25.2
25.4
25.6
26.3
27.1
27.5
28.9
29.5
30.6
32.4
實施例 3
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(晶種)
將2.0 g式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(製造類似於比較例11)溶解在8.1 g的甲醇和1.8 g的水中，添加8.1 g的丙酮和另外1.8 g的水。將其攪拌過夜。以抽吸濾出固體，用2 g的丙酮 / 水 (8：2)洗滌和在60℃下以真空用氮氣乾燥過夜。
產量：1.8 g的白色固體，理論的90%。
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：92.0% ee
純度(面積)：97.3% (方法M, R t8.94 min)
XRPD：單水合物I，參見圖37
反射(峰最大值)[° 2θ]
5.7
7.1
9.9
10.2
10.7
11.4
12.2
12.8
14.0
15.1
15.6
15.9
17.2
17.7
19.2
19.5
19.8
20.2
20.3
20.7
21.0
22.2
22.9
23.4
23.8
24.2
24.5
25.0
25.7
26.0
26.4
28.8
29.1
30.5
32.1
實施例 4
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基) 聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸呈單水合物I
從NSA鹽釋放二丁酯：
將800 g的四氫呋喃放置在6 L玻璃攪拌設備及分批添加250 g (0.30 mol)的萘-1,5-二磺酸 - 丁基- (5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [ 2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基) -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸酯(1：1) (實施例4A)並攪拌。在20℃至25℃下添加1 L的水並接著27%氨水，直至達到7.8至8.2之pH (大约27 g)。添加1080 g的二異丙醚。分離出有機相，將有機相再次用1 L的水/0.8 mL的27%氨水萃取，並接著1 L的水洗滌。將有機相通過覆蓋有150 g硫酸鈉(無水)的Seitz濾板過濾，將其用150 g二異丙醚沖洗並將濾液在40℃下以真空濃縮以產生192 g蒸發殘餘物。
二丁酯的基皂化：
將蒸發殘餘物溶解在610 g的四氫呋喃中，添加1139 g的1N 氫氧化鈉溶液並將混合物在60℃下攪拌24 h。接著在20℃下添加875 g的乙酸乙酯，分離出產物水相(二鈉鹽溶液)，並在最高40℃下以真空蒸餾出殘餘的乙酸乙酯。
式I之游離酸的形成：
將殘餘物用1875 g的水稀釋，通過Seitz濾板過濾並將一部分二鈉鹽溶液(835 g)滴加至821 g的四氫呋喃和103 g的10%鹽酸之混合物中，直至達到4.0之pH。添加174 g氯化鈉和420 g四氫呋喃並分離出有機產物相。
二鈉鹽溶液的消耗量與提交的鹽酸量有關並計算用於轉化其他部分量的鹽酸量。將第二份二鈉鹽溶液(2000 g)滴加至計算量的四氫呋喃(2116 g)和10% 濃度的鹽酸(246 g)中，直至達到4.0之pH。添加174g氯化鈉和420g四氫呋喃並分離出有機產物相。合併的水相中添加261g氯化鈉和1043g四氫呋喃並分離出有機產物相。將合併的有機相在最高40℃下以真空濃縮至800 ml之殘餘體積。
結晶：
在20℃下滴加184 g的四氫呋喃及646 g的甲醇和291 g的水之混合物並攪拌。將其與0.8 g的(5S) -5 - {[2- (4-羧苯基) 乙基] [2- (2 - {[3-氯-4 '- (三氟甲基) [聯苯基] -4-基] 甲氧基} 苯基) 乙基] 胺基} -5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I (實施例3)混合並攪拌12 h。將固體分離並用 112 g的甲醇和112 g的水的混合物洗滌。接著在20℃下以真空將固體乾燥至127 g。使用相同的程序製備128 g的第二部分。
將合併的固體與1020 g丙酮和1020 g 甲醇的混合物加熱至50℃，並冷卻至20℃。將所得溶液通過Seitz過濾板過濾，加熱至50℃並為期30分鐘滴加460 g水。將其接種1.5 g的f單水合物I (實施例3)之晶種，攪拌30 min，在至少30 min內冷卻至20℃並以抽吸濾出固體。將潮濕的產物與2550g水一起攪拌12小時，接著以抽吸濾出並用510 g的水洗滌兩次。將潮濕的產物在20°C在氮氣流中在真空下乾燥恆重。
產量：230 g單水合物I，(I-M-I)：71% o. Th.
純度(面積)：96.0% (方法M，R t8.94 min)
鏡像異構物純度(HPLC方法C)：99.3% ee
XRPD：單水合物形式I：參見圖38
反射(峰最大值)[° 2θ]
5.7
6.9
7.2
7.4
9.9
10.7
11.1
11.5
12.0
12.2
12.4
12.8
13.7
14.1
14.3
15.2
15.6
16.0
16.9
17.2
17.5
17.7
18.0
18.4
18.8
19.1
19.9
20.3
20.5
20.7
20.9
21.3
21.9
22.2
22.5
23.0
23.2
23.4
23.7
24.1
24.4
25.1
25.8
26.1
26.5
26.8
28.8
29.4
30.0
30.6
31.0
32.2
35.4
實施例 5
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基) 聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸呈單水合物I
在惰性化2L反應器中，將(5S) -5 - ({2- [4- (丁氧羰基) 苯基] 乙基} [2- (2-羥苯基) 乙基] 胺基)-5.6 7,8-四氫喹啉-2-甲酸丁酯(實施例2A，WO2021/233783)在 T護套 = 22℃下(50.8 g，1.0 eq.)溶解在乙腈(380 mL)中。在T護套 = 50℃和120毫巴下蒸餾溶液。接著再次添加乙腈(380 ml)並在相同條件下再次蒸餾混合物。將乙腈(660mL)加至溶液中並攪拌5 min。接著添加4-(溴甲基)-3-氯-4 '-(三氟甲基)[聯苯基]( 聯芳基苯甲基溴)(53.5 g，1.2 eq.)並將混合物再次攪拌5 min直到將其溶解。接著添加碳酸銫(83.1 g，2.0 eq.)並將混合物攪拌4小時。將碳酸銫 (20.8 g，0.5 eq.)再次加至懸浮液並將混合物攪拌1 h。產物懸浮液藉由過濾澄清，濾餅在釜上用乙腈(110mL)洗滌一次。丟棄掉濾餅。
將有機反應溶液在惰性化2L反應器中在90毫巴和T護套 = 45℃下濃縮直到，直到餾出物乾涸。當T內部 = 23℃時，添加THF(425 mL)。將溶液在150毫巴和T護套 = 45℃下濃縮直到直到餾出物乾涸。將THF (425 mL)和4% NaOH(680 mL)加至溶液中。將乳液加熱至T內部 = 60℃並再攪拌20小時。
將溶液冷卻至T內部 = 23℃及添加去離子水(800 ml)和乙酸乙酯(435 ml)並將混合物攪拌15 min。分離各相。丟棄有機相並用乙酸乙酯(435 mL)萃取水相。丟棄有機相並將水相在140-160 毫巴和T護套 = 45-40℃下蒸餾至T內部 = 36 0 。以過濾澄清產物溶液，將濾餅用去離子水(80mL)洗滌一次。丟棄掉殘餘物。
滴定產物溶液。為此，將25% HCl、去離子水和 THF放入惰性化4升反應器中。在T內部 = 20℃ ± 5℃下添加有機產物溶液直至pH 3.8 - 4.2。接著添加THF (360 mL)和氯化鈉(471 g)並將混合物攪拌30 min。分離各相並用THF(450mL)萃取水相。丟棄水相並使有機相結晶。為此，將其在200 毫巴和ΔT = 30℃下濃縮至集水槽質量。接著添加THF並在相同條件下將混合物再次蒸餾至理論產率的4倍。在T內部 =  22℃下，計量加入去離子水(49 mL)和甲醇(144 ml)的混合物，接種並攪拌15 min。進一步計量加入去離子水(113ml)和甲醇(335mL)的混合物並將混合物攪拌過夜。將懸浮液過濾並將產物在釜上用去離子水和甲醇(1:1)的混合物洗滌一次。接著將其在40-50℃和40 - 30 毫巴下乾燥。
產量：23.4 g，理論的67%
純度(面積)：99.3% (新方法M，R t6.28)
XRPD：單水合物I，參見圖39 實施例 6
調查式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的晶形 / 多晶形之研究 實施例 6a
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸半水合物
將2.9 g (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I (製備的材料類似於實施例3 / 4)懸浮在20 mL的丙酮中。將懸浮液在周圍條件下攪拌三天。過濾殘餘物並將所得固體在周圍條件下乾燥。
水含量：1.5 % 水
拉曼：參見表13，參見圖12
IR：參見表14，參見圖19
XRPD：參見表12，參見圖5 實施例 6b
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I
類似於實施例3製備目標化合物(單水合物I)。
水含量：3.9%水，乾燥前和2.4 % 水，乾燥後
拉曼：參見表13，參見圖13
IR：參見表14，參見圖20
XRPD：參見表12，參見圖6 實施例 6 c
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II
物類似於實施例1製備目標化合 (單水合物II)。
水含量：3.9%水，乾燥前和2.4 % 水，乾燥後
拉曼：參見表13，參見圖14
IR：參見表14，參見圖21
XRPD：參見表12，參見圖7 實施例 6d
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 1.25水合物
將3 g (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(製備的材料類似於實施例3 / 4) 懸浮在20 mL的異丙醇/水混合物(1：1)中。將懸浮液在60℃下攪拌八天。過濾殘餘物並將所得固體在周圍條件下乾燥。
水含量：2.9% 水
拉曼：參見表13，參見圖15
IR：參見表14，參見圖22
XRPD：參見表12，參見圖8 實施例 6e
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 倍半水合物
將3 g (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I (類似於實施例3 / 4製備的材料) 懸浮在15 mL的異丙醇/水混合物(1：1)中。將懸浮液在80℃下攪拌4週。添加額外10 mL的溶劑混合物以改良懸浮液的攪拌性質。過濾殘餘物並將所得固體在周圍條件下乾燥。
水含量：3.7% 水
拉曼：參見表13，參見圖16
IR：參見表14，參見圖23
XRPD：參見表12，參見圖9 實施例 6f
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸 二水合物
將3 g (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(製備的材料類似於實施例3 / 4) 懸浮在20 mL的甲醇中。將懸浮液在周圍條件下攪拌八天。過濾殘餘物並將所得固體在周圍條件下乾燥。
水含量：4.8% 水
拉曼：參見表13，參見圖17
IR：參見表14，參見圖24
XRPD：參見表12，參見圖10
乾燥後，二水合物形式變為非晶形。
XRPD：非晶形，參見圖10a 實施例 6g
(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸
類似於比較例11製備非晶形。
拉曼：參見表13，參見圖18
IR：參見表14，參見圖25
XRPD：參見表12，參見圖11 式 (I) 之 (5S)-{[2-(4- 羧苯基 ) 乙基 ][2-(2-{[3-氯-4'-( 三氟甲基 ) 聯苯 -4- 基 ] 甲氧基 }­ 苯基 ) 乙基 ] 胺基 }-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 甲酸的多晶形之物理示性 表 12 ：式(I)之化合物的假多晶形之XRPD (X射線粉末繞射)數據
根據在標題方法項下描述的一般程序記錄XRPD.
反射(峰最大值)[2θ]
半水合物 單水合物 I 單水合物 II 1,25- 水合物 倍半水合物 二水合物
3.1 5.7 5.7 5.9 5.1 6.1
5.3 6.9 6.1 6.1 6.3 6.8
6.7 7.2 7.1 7.9 7.6 10.1
7.1 7.3 8.5 10.5 8.6 10.5
9.3 9.9 9.9 11.9 11.4 11.2
10.6 10.4 10.2 12.2 12.2 11.3
12.4 10.6 10.8 12.5 12.5 12.3
14.3 11.1 11.4 13.2 12.9 12.5
16.1 11.5 11.6 13.6 13.3 13.1
19.7 12.0 11.8 13.7 14.3 13.6
20.8 12.3 12.0 14.4 14.5 14.6
24.0 12.4 12.2 15.2 15.2 14.8
31.1 12.8 12.7 15.3 15.5 15.5
13.7 13.0 15.4 15.8 16.2
14.1 13.9 15.7 16.2 16.4
14.3 14.2 15.9 16.4 16.8
15.2 15.2 16.5 16.7 17.1
15.6 15.3 16.9 17.3 17.3
16.0 15.7 17.2 17.5 17.9
16.9 16.4 17.4 17.7 18.5
17.2 17.3 17.6 18.3 18.8
17.5 17.7 17.8 18.7 19.5
17.7 17.9 18.3 19.4 20.2
18.0 18.3 18.6 20.5 20.5
18.4 18.5 18.7 20.7 21.1
18.8 18.8 19.0 20.8 21.4
19.2 19.2 19.5 21.4 22.2
19.9 19.8 19.6 21.5[1] 23.2
20.2 20.2 19.8 21.8 24.3
20.5 20.8 20.5 22.4 25.1
20.7 21.1 20.7 22.9 25.4
21.3 21.7 21.0 23.4 25.6
21.9 22.0 21.4 24.0 26.3
22.2 22.4 22.0 24.7 26.9
22.5 22.8 23.2 25.1 27.4
23.0 23.1 23.8 26.1 28.5
23.4 23.4 24.0 26.4 28.7
23.7 23.9 24.4 27.0 29.6
24.1 24.2 24.6 27.4
25.1 24.4 25.0 28.5
25.8 25.1 25.2 32.2
26.0 25.5 25.6 36.5
26.4 25.7 26.1
28.9 26.2 26.8
29.2 26.4 27.4
29.4 26.8 27.6
30.6 27.2 28.4
31.1 27.5 28.8
32.2 28.9 30.2
35.3 30.0 30.7
30.1 31.1
30.6 31.6
32.2 32.3
32.4
表 13 ：式(I)之化合物的假多晶形之拉曼數據
根據在標題方法項下描述的一般程序記錄拉曼光譜。
譜帶[峰最大值，cm -1]
半水合物 單水合物 I 單水合物 II 1,25- 水合物 倍半水合物 二水合物 非晶形
3069 3073 3073 3064 3081 3073 3069
2941 2950 3042 2954 3064 2971 3008
2917 2937 3003 2933 3019 2940 2938
2862 2906 2950 2907 2993 2897 2869
2825 2892 2936 2858 2979 2877 2732
1700 2852 2892 2828 2965 2864 1769
1689 1685 2854 1765 2924 1689 1708
1617 1616 1685 1694 2897 1617 1617
1528 1527 1615 1610 2873 1611 1610
1496 1451 1526 1528 2858 1573 1587
1487 1440 1458 1492 2805 1527 1527
1452 1420 1451 1459 2736 1497 1489
1423 1384 1441 1449 1690 1460 1450
1372 1374 1420 1439 1616 1454 1372
1349 1328 1384 1430 1530 1443 1326
1329 1293 1372 1381 1463 1433 1279
1294 1278 1328 1369 1453 1422 1263
1283 1259 1294 1327 1440 1384 1231
1269 1228 1279 1283 1421 1372 1205
1260 1191 1259 1258 1370 1332 1194
1229 1162 1228 1233 1330 1296 1162
1207 1153 1196 1197 1291 1282 1126
1196 1128 1162 1166 1274 1259 1072
1163 1116 1153 1128 1263 1228 1054
1131 1056 1128 1116 1231 1196 1037
1074 1042 1057 1053 1199 1169 1015
1054 1033 1043 1041 1183 1149 960
1042 1015 1016 1015 1169 1128 926
1014 997 998 999 1148 1115 883
1002 937 894 938 1131 1059 859
936 922 861 922 1115 1042 843
885 893 843 887 1096 1015 804
860 861 837 858 1071 1003 777
844 844 808 840 1060 937 766
819 808 777 817 1040 924 755
804 793 757 806 964 891 738
776 776 750 775 944 873 692
745 756 701 755 928 861 638
702 750 693 746 911 835 457
693 703 655 739 863 806 440
657 692 638 701 850 777 408
638 655 569 658 835 757 183
572 638 473 637 826 750 107
476 568 463 605 814 741
464 473 439 587 805 703
439 464 419 571 767 692
423 439 410 477 757 658
407 419 394 462 743 652
395 410 357 441 701 637
349 393 323 421 693 601
300 359 302 403 678 571
242 323 281 333 656 465
176 301 233 316 634 438
145 281 208 297 491 422
110 230 195 282 464 410
197 148 226 440 399
149 117 177 422 360
117 142 409 314
102 394 287
372 226
349 190
341 152
326 103
301
271
251
243
224
187
156
113
表 14 ：IR數據的假多晶形之式(I)之化合物
IR 光譜 根據在標題方法項下描述的一般程序記錄。
譜帶[峰最大值，cm -1]
半水合物 單水合物 I 單水合物 II 1,25- 水合物 倍半水合物 二水合物 非晶形
3032 3660 3659 3426 3516 3395 3405
2937 3416 3416 3044 3404 3197 3036
2864 3038 3039 2921 3073 3037 2941
2648 2933 2934 2854 2939 2938 2864
1761 2863 2892 2832 2922 2865 2644
1695 2809 2862 2650 2895 2646 1701
1640 2644 2809 1767 2876 1684 1685
1590 1761 2733 1692 2854 1597 1599
1558 1678 2647 1602 2815 1558 1559
1528 1595 1762 1511 2733 1539 1494
1495 1539 1679 1497 2650 1497 1453
1452 1498 1595 1448 1683 1453 1419
1418 1454 1539 1429 1668 1431 1371
1373 1419 1498 1376 1607 1419 1325
1325 1375 1454 1325 1594 1376 1272
1293 1327 1431 1275 1559 1327 1238
1241 1292 1419 1237 1533 1270 1166
1166 1272 1375 1178 1503 1241 1112
1112 1242 1327 1158 1450 1167 1072
1072 1167 1292 1128 1377 1106 1057
1059 1110 1272 1109 1330 1072 1036
1038 1072 1242 1066 1302 1037 1014
1014 1062 1167 1040 1242 1013 925
924 1039 1110 1014 1171 954 882
883 1014 1072 939 1152 924 845
844 956 1062 924 1136 886 821
818 938 1039 887 1105 844 805
750 923 1014 858 1073 819 751
703 887 938 840 1060 804 704
692 858 923 815 1036 750 692
656 845 888 805 1013 703 669
635 818 858 783 992 691 654
591 806 845 748 954 656 637
582 742 818 701 928 634 609
569 703 806 692 910 608 589
692 756 657 881 575 577
654 742 646 862 564 558
637 703 641 849 558
608 692 635 819
575 654 604 802
559 637 577 778
609 560 755
576 740
558 700
692
655
640
632
606
566
559
B –假多晶形 的性質 實施例 7
式(I)之[(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的假多晶形(例如式(I-M-II)之單水合物II )的性質 儲存穩定性
化合物之穩定性和均勻性是醫藥的關鍵要求且為獲得衛生當局批准的先決條件。其增加包含式(I)化合物的製劑和調配物的安全性和品質，因此降低對患者的風險。
呈單水合物II的形式之式(I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}­苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸係使用於在各種條件下儲存一、三個月和六個月的穩定性研究： 表 15 ：儲存穩定性研究之結果，單水合物II作為起始材料
實施例 容器 溫度 相對濕度 結果
7a 棕色玻璃按扣閉合 25℃ 60 % 單水合物II
7b 聚乙烯 25℃ 60 % 單水合物I
7c 聚乙烯 40℃ 75 % 單水合物I
7d 用濾紙盤封閉的棕色玻璃 40℃ 75 % 單水合物I
在大多數這些儲存條件下，單水合物II (起始材料，參見圖40)轉化為單水合物I  (參見例如圖41：實施例7b，XRPD)。
相比之下，式(I-M-I)之單水合物I在這些條件下是穩定的。
特別地，式(I)化合物之單水合物I確保防止如上所述之不要的轉化成另一種形式的式(I)化合物及相關的性質改變。 實施例 8
式(I)之[(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的假多晶形(例如式(I-M-II)之單水合物II )的性質
微粉化
對於吸入藥物產品，重要的是要保證均勻的藥物物質，具有界定的粒徑＜ 5µm，以確保遞送至深部肺室。此技術要求可藉由藥物物質顆粒的微粉化來提供。
達到此要求之活性成分的粒徑分布之適當規格係如表16a中所指定來設定。 表 16a：活性成分(例如式(I-M-I)或(I-M-II)之化合物)的粒徑分布
粒徑上限 X90 max. 6 µm
粒徑平均值 X50 1 – 3 µm
粒徑下限X10 max. 1 µm
為了研究式(I-M-II)之單水合物II用於藥品生產的可行性，測試幾種微粉化條件。在必要的微粉化步驟期間，通常不應發生非晶化，即使是部分非晶化或形式轉化。微粉化過程期間即使部分非晶化也可能導致活性成分及/或最終藥品中的活性成分在儲存期間再結晶的風險。
使用 50 mm 螺旋噴射磨機和加壓氮氣以下列參數(參見表16b)將對應批料(實施例8a-8d)微粉化。 表 16b ：不同微粉化條件，單水合物II作為起始材料
實施例 磨機類型 溫度 注射器壓力 研磨壓力 通過料量 PSD 觀測
8a VA 噴射磨機 25℃ 4.5巴 4.0巴 4.5 g/min X10：0.4 µm，X50：1.7 µm，X90：4.2 µm (乾燥測量 4巴) 轉變至單水合物I
8b PTFE塗布之噴射磨機 25℃ 4.5巴 4.0巴 4.5 g/min X10：0.7 µm，X50：1.9 µm，X90：5.0 µm (乾燥測量 4巴) 單水合物II之部分非晶化
8c VA 噴射磨機 - 65℃ 4.5巴 4.0巴 5.5 g/min X10：0.4 µm，X50：1.8 µm，X90：4.8 µm (乾燥測量 4巴) 單水合物II之部分非晶化
8d VA 噴射磨機(低應力條件) - 65℃ 4.5巴 3.0巴 10.6 g/min X10：0.5 µm，X50：2.3 µm，X90：9.6 µm (乾燥測量 4巴) 單水合物II之部分非晶化
首先，在標準條件下(在25℃的溫度下之VA 噴射磨機(50 毫米))的定向實驗期間發現：可將形式II主要微粉化以獲得所需的粒徑分布(參見表 16a和16b，實施例8a)。
在式(I-M-II)之單水合物II的微粉化期間，在幾種條件下發生部分非晶化，甚至在“低應力”下(參見上表 16b 和圖42，XRPD)。
XRPD：具有部分非晶化之單水合物II，實施例8b
另外發現在使用VA 噴射磨機(直徑50 mm)、25℃ 微粉化的情況下，除了部分無定形化之外，也發生從單水合物II轉化至單水合物I(參見表16b，實施例8a和圖43，XRPD)。
由於所有研究條件都顯示形式轉變至形式I或形式II之部分非晶化，因此進一步調查單水合物I以檢查單水合物I用於可靠藥物製造的可行性。
使用100 mm螺旋噴射磨機和加壓氮氣以下列參數(參見表16c)將對應批料微粉化。 表 16c ：大批量微粉化條件，單水合物I作為起始材料
實施例 磨機類型 溫度 注射器壓力 研磨壓力 [bar] 通過料量 PSD 觀測
8e PTFE 塗布之噴射磨機 25℃ 5巴 4.5巴 22.8 g/min X10：0.7 µm，X50：2.1 µm，X90：6.1 µm (乾燥測量 4巴) 單水合物I
8f PTFE 塗布之噴射磨機 - 65℃ 5巴 4.0巴 23至28 g/min X10：0.6 µm，X50：2.4 µm，X90：6.3 µm (乾燥測量 3巴, N=3) 單水合物I
8g VA (不銹鋼) 噴射磨機 25℃ 6巴 4,5巴 8,5 g/min X10：0,5 µm，X50：1.8 µm，X90：3.9 µm (乾燥測量 3巴) 單水合物I
上表中引用的所有測量值都是藉由雷射繞射使用壓縮空氣以乾燥分散體獲得。在含有界面活性劑的水性懸浮液中測量可會導致更小的粒徑(x90 最多1 µm及更小)。
相比之下，式(I-M-I)之單水合物I在微粉化條件下是穩定的(參見表16c，實施例8e)。
XRPD：單水合物形式I：參見圖44 C - 生物例
使用下列縮寫：
縮寫 說明
℃ 攝氏度
/D 除以劑量
µg 微克
ACh 乙醯膽鹼
AE 不良事件
AHR 氣道高反應性
API 活性醫藥成分
AUC 單一(第一次)劑量後從零到無窮大之濃度對時間曲線下面積
AUCτ 實際劑量間隔的AUC。如果適用，AUC的日期指定為AUC τ(第n天)
AUC (0‑t) 從時間 0至t小時之濃度時間曲線下面積
AUC (0‑t).md 多劑量後從時間 0至t小時之濃度對時間曲線下面積
AUC (0-t),u 非結合 AUC (0-t)
AUC(0‑t) τ ,md 多次投予後的AUC (0‑t)τ
AUC τ ,md 多次投予後的AUC
AUC (0‑tlast) AUC 從時間 0 至最後一個數據點 ＞LLOQ
AUC (0‑tlast)norm AUC 從零時間至最後一個數據點以上定量之下限除以每公斤體重的劑量
AUC norm AUC 除以每公斤體重的劑量 (mg)
BAL 支氣管肺泡灌洗
BALB/c 小鼠纖維母細胞
BDC 膽管插管
BP 血壓
bpm 每分鐘節拍
BPsys 收縮壓
BSEP 膽鹽輸出泵
Caco‑2 cell 人結腸腺癌細胞
CB 木炭塊
cGMP 環單磷酸鳥苷
CHO 中國倉鼠卵巢
CKD 慢性腎臟病
CL 清除率
CL/F 血管外投予後計算的藥物總清除率(例如，擬口服清除率)
C max 單次劑量投予後測量基質中的最大藥物濃度
C max,md 多次劑量後的C max
C max,norm C max除以每公斤體重的劑量(mg)
C max.u 非結合 C max
CNS 中樞神經系統
CI 信賴區間
Conc. 濃縮
CTEPH 慢性血栓栓塞性肺高血壓
C trough 劑量間隔結束時的濃度
CV 變異係數
CYP 細胞色素 P450
D 劑量
d 天
DD 遞送劑量
DDI 藥物-藥物交互作用
DEA/NO 二乙胺/一氧化氮
DMSO 二甲亞碸
DPI 吸入用乾粉
DSUR 研發安全性更新報告
EC 50 半最大有效濃度
ECG 心電圖
ESTP 歐洲毒物病理協會
EtOH 乙醇
F 生體可用率
f 雌性
FiM 首次用於人體
FPD 細顆粒劑量
f u 自由(非結合)藥物的分率
GCP 優良臨床操作規範
GGT γ麩胺醯基轉移酶
GLP 優良實驗室操作規範
h 小時
Hb 血紅素
HEK‑293 人胚腎293細胞
hERG 人延遲整流鉀離子通道基因
HF 無血紅素
HPMC 羥丙基甲基纖維素
HR 心率
i.e. 那就是 = 即
i.t. 氣管內(地)
i.v. / iv. / iv / IV 靜脈內(地)
IB 研究者手册
IC 50 半最大抑制濃度
ICH 人用藥品註冊技術要求國際協調會議
ID 標識符
IF 可吸入分率
IH 吸入
IIP 特發性間質性肺炎
incl. 包括
inf. 輸注
inhal 吸入
IP 前列腺環素受體
kg 公斤
K + 鉀離子
K i 抑制常數
LC‑MS/MS 高壓液相層析和串聯質譜
LD 肺劑量
LDD 肺沉積劑量
LDH 乳酸脫氫酶
LF 肺分率
LLOQ 定量下限
L‑MDR1 多重耐藥性基因
L‑NAME L‑Nω‑硝基精胺酸甲酯
LOEL 最低可見作用劑量(lowest-observable-effect level)
LS 最小平方
LSC 液體閃爍計數
m 雄性
m 3 立方米
MAD 最大投予劑量
MAP 平均動脈壓
mBP 平均血壓
MBq 兆貝克
MCh 平均血球血紅素
MCV 平均血球血紅素體積
MDCKII Madin Darby犬腎 II 型
MEC 莫耳消光係數
MED 最小有效劑量
MedDRA 監管活動醫學詞典(Medical Dictionary for Regulatory. Activities)
mg 毫克
min 分鐘
MMAD 質量中數氣動直徑
MNT 微核試驗
MoE 曝光倍數
mPAP 平均 肺動脈壓
MPPD 多路徑粒子劑量測定模式
MRT 平均滯留時間
MRT IV 靜脈內投予後平均滯留時間
MS/MS 串聯質譜
MTD 最大耐受劑量
myocard 心肌
N/n 數目
n.a. 不適用
n.c. 未計算
n.d. 未確定
NaCl 氯化鈉
NADPH 菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
ND 標稱劑量
NET 正腎上腺素 轉運子
NO 一氧化氮
NOAEL 未觀察到副作用水平
NOEL 沒未觀察到作用水平
NRU 中性紅攝取
OATP 有機陰離子轉運多肽
od / o.d. 每天一次
ODQ 1H-[1,2,4] 㗁二唑并[4,3-a]喹㗁啉-1-酮（1H [1,2,4]axadiazolo[4,3 a]quinoxalin 1 one）
OECD 經濟合作暨發展組織(Organisation for Economic Co-operation and Development)
OP 鴉片劑
Ova 卵清蛋白
P 肺部區域
PAH 肺動脈高血壓
PAP 肺動脈壓
P app 表觀滲透性
PD 藥效
PDE‑5 磷酸二酯酶 5
PE 苯基腎上腺素
PEG 聚乙二醇
PEG 400 聚乙二醇 400
PenH 暫停增強
P‑gp P‑醣蛋白
PH 肺高血壓
pH 酸鹼值( pondus Hydrogenii )測量水溶液酸性的數字計量
PH‑COPD 慢性阻塞性肺病的PH
PH‑IIP 與 IIP 相關的 PH
physiol. / Physiol. 生理
PK 藥物動力
PMN 多形核細胞
PO / po 藉由口腔 (口服)
PP 灌注壓力
PQ 在ECG中的PQ間隔
PRA 血漿腎素活性
PT 較佳術語
PVOD 肺靜脈閉塞病
PVR 肺血管阻力
QRS ECG中的QRS間期
QT ECG中的QT間期
QTc 關於HR校正的QT間期
QWBA 定量全身自動放射照像術
R AAUC 積累率(AUC(0‑t last) ss/ AUC(0‑t last) 第 1 天)
R AAUC(0‑t last) 重複給藥後累積率與從零時間至LLOQ以上最後數據點的AUC計算的累積率之差
R AC max 從多次給藥後的C max和單次給藥後的C max計算的累積率
Ref. 參考
R L 肺阻力
R LIN 從多次給藥後的AUC和單次給藥後的AUC計算之相同劑量重複投予後之藥物動力的線性因子
RLU 相對光單位
RMV 每分鐘呼吸量
RT 室溫
RV 右心室
RVPsys 全身性右心室血壓
SAE 嚴重不良事件
SAF 安全分析組
SaO 2 血紅素之動脈氧飽和度
SD / sd 標準偏差
SEM 平均值的標準誤差
sGC 可溶性鳥苷酸環化酶
SHR 自發性高血壓大鼠
SNAP S‑亞硝基‑N‑乙醯基‑DL‑青黴胺
SOC 系統器官類
SoC 護理標準
SOP 標準操作程序
sPAP 肺動脈收縮壓
SUSAR 反應疑似意外嚴重不良反應
t (int) /t int 採樣間隔期間的最後一個時間點
t 1/2/T 1/2 半衰期
t 1/2,md 首次劑量後拉著多次劑量劑量投予達到血漿中觀察到的最大藥物濃度的時間
TB 氣管支氣管區
TEAE 治療緊急不良事件
TK 毒物動力
t last LLOQ以上最後一個數據點的時間
t max 達到最大濃度的時間
t max.md 多次給藥後達到最大濃度的時間
UGT 尿苷-5'二磷酸葡萄醣醛酸轉移酶
URT 上呼吸道
v 每體積
v/v 體積 / 體積
Vol. 體積
VQ 通氣灌注
VQ‑M 通氣灌注不匹配
vs. 對
V SS 血管內投予後於穩態之分布體積
V z 血管內投予後在末期期間之分布體積
V Z/F 血管外投予後在末期期間的擬分布體積
w 每重量
w / w 重量 / 重量
w / wo 有 / 没有
w/v 重量 / 體積
WHO 世界衛生組織
wo 没有
WU 威斯達聯合利華(HsdCpb：WU)
生物研究
本文所述的實施例測試實驗用於說明本發明且本發明不限於所給出的實施例。
下列分析可用於說明根據本發明之化合物的商業用途。
在選定的生物分析中測試實施例一次或多次。當測試不止一次時，數據報告為平均值或中值，其中 ．平均值，也稱為算術平均值，表示所得值除以測試次數的總和，以及 ．中位數表示按升序或降序排列時值組的中間數。若數據組中值的數量是奇數，則中位數是中間值。如果數據組中值的數量是偶數，則中位數是中間兩個值的算術平均值。
合成實施例一次或多次。當多次合成時，來自生物測定的數據表示利用從測試一或多個合成批次獲得的數據組計算的平均值。
根據本發明之化合物的藥理作用可以下列試驗顯示： C - 1 體外和體內的血液動力學血管舒張作用 C-1.1 體外血管舒張作用
以靜脈注射戊硫代巴比妥鈉(約50mg/kg)麻醉和處死兔子並放血。將隱動脈移除並分成3 mm寬的環。在各情況下將該等環單獨地安裝在一對末端開口上且由0.3 mm厚的特殊金屬絲(Remanium®)製成的三角形鉤子。各環在初始張力下放置在5 ml具有Krebs-Henseleit溶液之器官浴中，該Krebs-Henseleit溶液係在37係下C用卡波金(carbogen)充氣並具有以下組成：NaCl 119 mM；KCl 4.8 mM；CaCl2 x 2 H2O 1 mM；MgSO4 x 7 H2O 1.4 mM；KH2PO4 1.2 mM；NaHCO3 25 mM；葡萄糖10 mM；牛血清白蛋白0.001%.。用Statham UC2細胞檢測收縮力，經由A/D 轉換器(DAS-1802 HC, Keithley Instruments, Munich)放大和數位化，並在圖表記錄器上平行記錄。藉由添加去氧腎上腺素誘發收縮。
在數次(通常為4次)對照循環後，在各進一步運行中以遞增劑量添加待研究物質，並將測試物質影響下達到的收縮水平與之前最後一次運行達到的收縮水平進行比較。由此計算出將前一對照中達到的收縮降低50%所需的濃度(IC50)。標準施用體積為5 µl。浴液中DMSO的比例相當於0.1%。 表 C1.1.1 ：對比較例11的%收縮的效應與比較例1(西那西瓜)以升高濃度對兔隱動脈的PE-誘發之收縮(培養時間 0.5 h vs. 2.5 h)的效應相比。數據以平均值 +/- SEM (數字)呈現
10 -12M/L 10 -11M/L 10 -10M/L 10 -9M/L 10 -8M/L 10 -7M/L 10 -6M/L 10 -5M/L
比較例1 (西那西瓜) 0.5h n.d. 97±1.2 (3) 101±1.7 (15) 85±4.2 (20) 54±5.2 (20) 28±4.2 (20) 19±6.1 (8) n.d.
比較例1 (西那西瓜)  2.5h n.d. n.d. 93±2.6 (7) 75±4.6 (7) 48±6.0 (4) 33±5.8 (8) n.d. n.d.
比較例11 0.5h n.d. 100±1.5 (4) 99±3.4 (4) 103±3.5 (4) 92±3.0 (22) 80±4.6 (22) 59±4.9 (22) 19±3.0 (18)
比較例11  2.5h 98±0 (1) 91±2.0 (2) 67±5.7 (12) 47±6.2 (13) 29±9.3 (10) n.d. n.d. n.d.
與比較例1(西那西瓜)相比，比較例11在培養30 min後抑制兔隱動脈環濃度依賴性去羥腎上腺素誘發之收縮，911 nM的IC50值(17 nM的西那西瓜 IC50值)(參見圖45a和45b)。在2.5 h的較長預培養期後，比較例11與西那西瓜(3 nM的IC50值)相比，甚至更有效 (0.8 nM的IC50值)。這些結果指示與西那西瓜相比，比較例11對隱動脈的穿透更慢。此將指示不需要的全身副作用最小化，如例如與需要盡可能有效的肺部的所要局部血管擴張作用相比，全身血壓降低。 C-1.2. 根據 Langendorff 的離體灌注 心臟
用Narcoren® (100 mg/kg) 麻醉體重為200-250 g的雄性Wistar大鼠(品系 HsdCpb:WU)。打開胸腔並接著將心臟暴露，切除心臟並藉由將插管放入主動脈而連接到Langendorff裝置。用Krebs-Henseleit 緩衝溶液(充入95% O2和5% CO2，pH 7.4，35°C；組成，mmol/l：NaCl 118；KCl 3；NaHCO3 22：KH2PO4 1.2：MgSO4 1.2：CaCl2 1.8：葡萄糖 10；丙酮酸鈉 2)。壓力轉換器 記錄灌注系統中的灌注壓力。使用連接至充水氣球之第二個壓力轉換器測量左心室壓力(LVP)，該氣球經由左心房插入左心室。藉由調整氣球的體積，最初將舒張末期壓力設定為8mm Hg。心臟自發地跳動來。來自壓力轉換器的訊號被放大，以個人電腦(Powerlab Chart software, ADInstruments)記錄。
在40分鐘的平衡時間後，將測試化合物加至灌注溶液中經20分鐘，其導致PP滴落，作為冠狀動脈擴張的標誌。接著在沒有測試物質的情況下將心臟再灌注120 min(洗出期)。效應的可逆性(洗出得分)計算為洗出60 min後PP 回收相對於測試化合物誘發之PP最大下降的百分比。以此方式獲得的洗出得分係用作測試物質在作用位置的滯留時間的測量。
在Langendorff-灌注大鼠心臟中，比較例11(300 nmol/l：n=6)、比較例1 (西那西瓜：100 nmol/l：n=6)、比較例2 (里奧西瓜：100 nmol/l：n=6)和比較例3 (100 nmol/l：n=6)誘發顯著減少灌注壓力(PP)(圖46)。在用比較例2(里奧西瓜)治療的心臟中，PP在洗出期期間迅速增加並達到施用化合物之前觀察到的水平。里奧西瓜(比較例2)之洗出得分為98%。相比之下，比較例1(西那西瓜)的洗出期被延遲，導致30%之洗出得分。比較例11和比較例3的效應甚至更不可逆。比較例11和比較例3之洗出得分分別為2.9%和25.4 %。
此等結果指示：相較於里奧西瓜，比較例11和比較例3在Langendorff心臟中顯示出延長的血管擴張活性並因此顯示出組織滯留。比較例3與具有洗出得分略低之西那西瓜相當，但比較例11顯示在洗出條件下甚至更長時間的組織滯留。 表 C1.2.1. ：不同化合物(300 nmol/l 比較例11、100 nmol/l 里奧西瓜(比較例2)、100 nmol/l 西那西瓜(比較例1)和100 nmol/l 比較例3對離體Langendorff-灌注大鼠心臟之冠狀動脈血流及彼等洗出的效應。數據以平均值 +/- SEM (平均值的標準誤差)呈現。
化合物 灌注壓力 (%) (於 20 min之時間點 ) 灌注壓力 (%) (於 90 min之時間點 ) 洗出得分 (%)60 min後
平均 SEM n 平均 SEM n
比較例11 69.0 3.62 6 71.9 2.09 6 2.9
西那西瓜(比較例1) 62.1 3.90 7 69.3 5.20 7 29.5
里奧西瓜(比較例2) 55.4 2.47 6 99.9 1.76 6 98.0
比較例3 63.3 3.18 6 72.5 3.62 6 25.4
C-2 以 PAH 動物模型之 sGC 活化劑的吸入投予
實驗係以麻醉的Göttingen小型豬、麻醉的大鼠和清醒的儀器遙測之狗中進行。誘發急性肺動脈高壓，例如藉由輸注凝血脂素 A2類似物、藉由急性缺氧治療或數週的缺氧治療及/或藉由投予野百合鹼來誘發。使用Nebutec® 或Aeroneb® Pro霧化器系統及/或藉由用於實驗性氣管內投予的粉末及/或溶液施用器(Liquid MicroSprayer®、Dry Powder Insufflator™、MicroSprayer®、Penn- Century Inc., Wyndmoor, PA, USA)或在固體霧化後插入通氣的吸氣臂。取決於分子結構及取決於實驗的技術可能性，化合物係以固體或溶液使用。血液動力學訊號藉由壓力轉換器/放大器(Combitransducer B. Braun, Melsungen, Germany或CardioMEMS Inc., Atlanta, GA, USA)和Ponemah®或CardioMems®作為數據採集軟體之裝置記錄和評估。長期實驗後(例如野百合鹼大鼠)，也可進行組織學評估。 C-2.1 麻醉的凝血脂素激發之小型豬的血液動力學 肺選擇性和作用期間
使用具有2-6 kg體重之雌雄兩性的健康Göttingen Minipigs® Ellegaard (Ellegaard, Denmark)。i.m.投予投予約25 mg/kgK他命和約10 mg/kg阿扎哌隆(azaperone)將動物注射鎮靜。以i.v.投予約2 mg/kg K他命和約0.3 mg/kg 咪達唑侖(midazolam)引發麻醉。以i.v.投予約7.5-0 mg/kg/h K他命和約1-4 mg/kg/h 咪達唑侖(midazolam)(輸注速率1-4 ml/kg/h) 維持麻醉和約150 µg/kg/h泮庫溴銨(pancuronium bromide)(例如Pancuronium-Actavis)。插管後，動物藉由呼吸機以恆定的呼吸量(10-12 ml/kg，35 次呼吸/min：Avea®, Viasys Healthcare, USA，或Engström Carestation, GE Healthcare, Freiburg, Germany)通氣，以使達到約5%的潮氣末CO2濃度。使用富含約 40%氧氣(含氧量正常)的室內空氣進行通氣。為了測量血流動力學參數諸如肺動脈壓(PAP)、血壓(BP)和心率(HR)，將導管插入頸動脈以測量血壓，並引入Swan-Ganz®導管以流動導向的方式經由頸靜脈進入肺動脈。藉由壓力轉換器(Combitransducer, B. Braun, Melsungen, Germany)/放大器和Ponemah®作為數據採集軟體之記錄和評估血液動力學訊號。
將儀器放入動物體內後，開始連續輸注凝血脂素A2類似物以增加肺動脈壓。約0.3-0.75 µg/kg/min的9,11-二去氧-9α,11α-環氧亞甲基前列腺素(epoxymethanoprostaglandine)F2α (U-44069; Sigma, 目錄號 D0400, 或Cayman Chemical Company, 目錄號 16440)溶解在生理鹽水中，輸注以達成平均肺動脈壓增加至超過25 mmHg的值。輸注開始後30分鐘，達到平台期，開始實驗。
測試物質以i.v. 輸注或藉由吸入投予。對於吸入用溶液的製備，採用下列程序：對於具有4 kg體重的動物，為了製備儲備溶液 (300 µg/kg)，稱取1.2 mg的測試化合物並溶解在3 ml總體積(1% DMSO、99% 0.2% 濃度的檸檬酸溶液、1 N氫氧化鈉水溶液以將pH 值調整至8)。接著使用預先用氫氧化鈉水溶液調整至pH 8的0.2%濃度的檸檬酸將溶液稀釋至所採用的濃度。在各測試中，使用Aeroneb® Pro霧化器系統在呼吸迴路的吸入臂中將每4 kg動物3 ml的測試化合物溶液霧化。從霧化開始，平均霧化時間約為7分鐘。 表 C2.1.1.：在小型豬中的凝血脂素類似物U46619誘發之PAH的情況下，媒液溶液、比較例11(30 µg/kg)、比較例1(西那西瓜；3和10 µg/kg)，比較例2(里奧西瓜；100 µg/kg)和比較例3 (30 µg/kg)吸入施用後的效應，以PAP對基線(霧化開始前5分鐘間隔)之改變%。
時間 [min] vs. 開始吸入 媒液 西那西瓜(比較例1) 3µg/kg 西那西瓜 10µg/kg 比較例11 30µg/kg 里奧西瓜(比較例2) 100µg/kg 比較例3 30µg/kg
-5 99 100 99 99 100 100 100 99 96 101 100 100 99 96
0 102 101 100 100 100 99 100 101 99 99 100 102 100 99
10 105 98 99 100 91 89 89 86 100 99 91 86 98 93
20 107 92 100 103 76 82 83 82 98 96 91 85 94 87
30 109 94 100 103 74 86 82 82 95 94 94 94 95 84
40 110 100 100 104 73 89 84 84 91 91 97 81
50 110 105 99 107 82 94 87 85 90 89 98 86
60 112 108 100 108 88 94 91 87 88 86 101 88
70 112 109 99 109 100 99 94 88 85 86 103 88
80 113 109 99 109 103 100 95 90 86 85 104 92
90 113 110 100 109 105 102 99 92 85 85 106 95
100 113 111 99 109 84 85 107 96
110 112 112 99 110 84 84 109 100
120 112 110 99 111 84 85 111 107
130 111 111 99 113 85 85 111 104
140 111 112 100 112 85 85 112 103
150 111 112 101 112 84 84 112 107
160 110 113 102 114 84 85 112 110
170 110 114 101 114 85 86 113 108
180 109 114 101 115 86 86 113 108
190 110 112 102 115 84 86 113 113
200 109 112 102 116 83 87 112 110
210 108 113 103 117 84 88 112 109
220 110 112 104 116 87 87 113 113
230 110 110 104 115 86 89 111 112
240 108 110 104 114 85 88 110 112
表 C2.1.2. ：在小型豬中的凝血脂素類似物U46619誘發之PAH的情況下，媒液溶液、比較例11(30 µg/kg)、比較例1(西那西瓜；3和10 µg/kg)、比較例2(里奧西瓜；100 µg/kg)和比較例3 (30 µg/kg)吸入施用後的效應，以PAP對基線(霧化開始前5分鐘間隔)之改變%。
時間 [min] vs. 開始吸入 媒液 西那西瓜(比較例1) 3µg/kg 西那西瓜(比較例1) 10µg/kg 比較例11 30µg/kg 里奧西瓜(比較例2) 100µg/kg 比較例3 30µg/kg
-5 100 100 100 99 100 100 100 100 99 99 99 101 99 99
0 98 99 102 100 99 99 100 101 99 100 99 99 100 99
10 101 100 100 100 101 100 100 100 99 102 95 92 103 99
20 102 101 102 102 99 98 96 100 97 101 94 90 103 97
30 106 98 104 100 98 98 94 100 97 101 94 90 104 98
40 104 97 102 99 97 98 95 98 97 100 105 95
50 104 95 103 99 97 98 94 96 96 102 106 95
60 106 93 102 99 97 99 95 94 96 101 108 94
70 108 93 102 99 97 100 93 94 95 103 108 93
80 106 92 102 100 95 98 94 92 94 101 110 96
90 109 94 100 99 95 99 93 89 94 102 110 94
100 109 92 99 99 92 103 111 93
110 110 92 96 98 94 102 111 93
120 110 92 97 98 92 101 112 95
130 110 91 96 99 95 102 112 92
140 111 92 97 100 95 101 113 93
150 111 90 96 99 92 100 113 93
160 113 89 93 100 91 100 112 92
170 114 91 96 98 91 101 110 92
180 113 86 95 98 91 101 112 93
190 115 88 94 96 91 101 111 93
200 114 89 93 94 90 101 110 93
210 113 86 93 93 91 101 109 93
220 114 87 93 89 92 99 109 96
230 113 88 92 85 91 102 109 94
240 113 85 92 79 92 99 109 94
在PAH小型豬模式中，評估不同化合物在吸入施用(霧化)後對PAP和BP的效應。西那西瓜(比較例1)和里奧西瓜(比較例2)誘發PAP急劇降低且起效早，最大效應在10至30 min之間，作用期間短，最長120 min。相比之下，比較例11顯示起效較慢，對PAP的最大效應在60 min左右且作用期間長更多，240 min或甚至更長的完整觀察間隔(參見圖47和48)。此外，關於全身性BP，與西那西瓜和里奧西瓜相比，比較例11除了對PAP的強且長的功效外，未顯示全身性血壓有任何降低。比較例3顯示關於血液動力學效應的良好肺選擇性，但關於PAP的作用期間更加短，僅為120分鐘。
在進一步的實驗中，比較例11係與比較例4和比較例5相比(參見圖49)。同樣，比較例僅顯示中等作用期間，而比較例11以及比較例4(全部以100 µg/kg的標稱劑量)顯示至少4 hrs的長作用期間且所有3種化合物[[白具有良好肺選擇性。因此比較例5由於作用期間太短而被取消選擇。BP的細微差異，尤其是在實驗結束時，三種化合物之間的差異可能受到長時間麻醉的影響。 表 C2.1.3. ：媒液溶液、比較例11、比較例4和比較例5(全部化合物均以100 µg/kg的標稱劑量)在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後對PAP和BP vs 基線(霧化開始前的5 min間隔)之%改變的效應。數據為各個別體動物的%改變。
媒液
時間 [min] BP %改變 vs. 基線 PAP %改變 vs. 基線
80 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
90 101.3 97.8 103.4 101.0 103.5 107.8 101.7 103.0
100 104.0 98.5 101.7 101.0 106.9 104.4 100.8 102.8
110 105.3 100.0 103.4 102.1 108.8 97.8 101.4 106.0
120 109.3 98.5 106.0 101.0 111.1 99.0 101.8 105.4
130 106.7 95.5 104.3 100.0 111.7 106.8 101.1 106.2
140 106.7 92.5 105.1 100.0 112.2 111.7 100.8 109.4
150 109.3 92.5 104.3 100.0 114.1 113.1 101.1 110.8
160 110.7 92.5 103.4 100.0 114.3 115.3 100.4 111.7
170 109.3 93.3 103.4 101.0 114.5 115.5 100.3 111.6
180 112.0 92.5 101.7 100.0 115.4 117.2 101.1 111.5
190 112.0 91.0 100.9 100.0 114.7 118.0 100.9 111.9
200 113.3 92.5 98.3 99.0 113.8 118.7 100.2 112.8
210 113.3 89.6 99.1 99.0 113.8 119.2 101.0 113.9
220 113.3 89.6 98.3 100.0 113.2 118.7 101.0 116.1
230 114.7 89.6 99.1 101.0 113.0 118.9 101.2 115.0
240 114.7 89.6 97.4 100.0 112.7 119.2 102.1 115.1
250 116.0 91.0 94.9 101.0 112.4 119.9 104.1 116.8
260 117.3 89.6 97.4 99.0 112.3 121.4 102.7 117.4
270 116.0 89.6 96.6 99.0 110.5 120.6 102.7 118.1
280 118.7 86.6 95.7 96.9 111.5 121.4 103.2 118.4
290 117.3 85.1 94.9 94.8 110.9 119.4 103.9 119.1
300 116.0 88.1 94.9 93.8 109.9 119.9 104.9 120.4
310 117.3 85.1 94.9 89.7 111.8 121.1 105.2 119.0
320 116.0 85.8 94.0 85.6 111.8 118.4 105.2 118.3
330 116.0 85.8 94.0 79.4 110.3 118.0 105.8 117.0
比較例5
時間 [min] BP %改變 vs. 基線 PAP %改變 vs. 基線
80 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
90 100.0 100.0 100.0 101.5 99.2 102.0
100 99.1 97.7 101.8 98.0 90.0 93.8
110 99.1 97.7 100.0 91.7 86.4 79.0
120 99.1 96.6 97.3 90.0 86.1 73.7
130 98.1 97.7 97.3 87.6 88.6 72.9
140 98.1 98.9 97.3 87.1 93.0 73.7
150 95.3 100.0 97.3 87.6 95.0 75.1
160 96.2 101.1 98.2 88.7 96.4 77.8
170 95.3 101.1 96.4 89.8 97.8 79.2
180 95.3 101.1 97.3 90.0 100.6 81.5
190 94.3 102.3 96.4 90.9 101.9 81.9
200 92.5 103.4 95.5 91.4 102.8 85.2
210 91.5 102.3 96.4 92.7 104.2 88.1
220 91.5 103.4 96.4 94.5 105.8 91.3
230 91.5 103.4 94.6 95.1 106.1 93.1
240 90.6 102.3 94.6 95.5 105.8 92.9
250 90.6 102.3 94.6 96.5 105.8 94.3
260 89.6 101.1 93.8 98.1 106.4 95.5
270 90.6 103.4 93.8 98.6 107.5 95.9
280 89.6 100.0 93.8 98.6 106.4 97.2
290 88.7 102.3 92.9 99.6 105.8 98.4
300 89.6 100.0 92.0 100.1 107.0 98.6
310 89.6 100.0 91.1 101.7 107.5 99.6
320 89.6 105.7 91.1 102.8 109.5 100.1
330 89.6 98.9 89.3 102.9 106.1 99.3
比較例11 比較例4
時間 [min] BP %改變 vs. 基線 PAP %改變 vs. 基線 BP %改變 vs. 基線 PAP %改變 vs. 基線
80 103.2 100.0 100.1 103.3 100.0 98.5 101.1 101.2 101.0 102.0 96.2 97.5
90 98.8 98.2 100.1 98.8 102.2 99.6 98.7 100.3 101.0 100.2 102.2 100.2
100 101.0 100.0 100.1 99.4 97.3 97.5 101.1 100.3 98.3 100.0 93.1 96.4
110 98.8 99.1 98.2 94.0 90.4 94.4 99.9 102.2 98.3 97.2 88.9 89.8
120 98.8 98.2 98.2 87.4 80.2 88.8 101.1 101.2 101.9 86.5 86.2 86.0
130 98.8 98.2 99.2 84.3 75.6 86.1 99.9 99.4 100.1 77.5 78.6 84.6
140 98.8 96.5 102.0 82.2 69.4 82.1 99.9 99.4 100.1 76.3 77.7 81.3
150 97.7 95.6 103.0 80.0 67.4 77.3 99.9 98.5 100.1 77.3 75.0 78.7
160 98.8 93.9 101.1 78.2 66.2 74.6 99.9 96.7 99.2 75.5 71.4 77.3
170 98.8 95.6 99.2 78.1 65.9 72.4 101.1 97.6 99.2 72.1 71.9 75.1
180 97.7 92.1 99.2 78.5 62.7 72.2 102.3 95.8 99.2 74.0 68.0 75.9
190 98.8 91.2 96.3 77.0 61.7 68.1 102.3 95.8 99.2 74.5 65.0 77.1
200 99.9 90.4 98.2 77.0 62.5 68.2 102.3 94.0 99.2 70.1 70.6 77.2
210 98.8 90.4 97.3 76.5 62.0 67.9 103.5 94.0 99.2 70.8 65.6 76.8
220 101.0 90.4 97.3 77.2 61.2 68.1 105.9 95.8 98.3 77.8 66.7 75.3
230 99.9 90.4 96.3 76.3 61.2 67.7 107.1 94.9 97.4 82.5 71.3 73.9
240 98.8 89.5 95.4 76.5 62.5 67.8 107.1 94.0 97.4 81.0 67.4 75.0
250 98.8 89.5 95.4 77.6 63.0 69.1 109.4 94.9 98.3 79.0 72.2 75.0
260 97.7 87.7 95.4 77.4 62.0 67.4 107.1 94.9 98.3 75.0 72.7 76.7
270 96.6 86.8 99.2 77.5 61.5 67.9 107.1 94.9 97.4 70.3 71.1 78.4
280 96.6 86.8 96.3 77.5 63.0 68.1 107.1 94.9 99.2 65.8 75.6 79.7
290 97.7 86.8 94.4 77.3 62.5 67.8 107.1 94.0 98.3 68.3 73.4 79.9
300 96.6 85.1 93.4 78.1 63.0 67.3 107.1 94.9 99.2 69.1 76.2 79.6
310 95.5 83.3 93.4 76.7 60.5 68.1 107.1 94.9 98.3 62.8 79.9 79.5
320 95.5 81.6 92.5 75.6 63.2 67.7 104.7 94.9 99.2 61.8 76.5 81.3
330 95.5 79.8 92.5 76.5 63.0 67.6 107.1 94.0 101.0 63.1 77.9 83.3
在人類中的作用期間之預測
關於人類研究的作用期間之預測，在PAH 小型豬模式中比較例11在吸入施用後與Ventavis®(= 伊洛前列素(Iloprost)，10µg/kg標稱劑量)進行比較，其用作為臨床參考。Ventavis®具有約40 min的最長作用期間。在整個240 min觀察間隔期間，所有劑量的比較例11都顯示劑量依賴性功效(見圖50)。因此，在此臨床前動物模式中，作用期間與Ventavis相比長6倍以上。在臨床研究中，Ventavis顯示約60 min的血液動力學(PVR)之作用期間(參見：Favorable Effects of Inhaled Treprostinil in Severe Pulmonary Hypertension Results From Randomized Controlled Pilot Studies Robert Voswinckel, MD,* Beate Enke, MD,* Frank Reichenberger, MD,* Markus Kohstall, MD,*Andree Kreckel, MD,* Stefanie Krick, MD,* Henning Gall, MD,* Tobias Gessler, MD, PHD,*Thomas Schmehl, PHD,* Hossein A. Ghofrani, MD,* Ralph Theo Schermuly, PHD,*Friedrich Grimminger, MD, PHD,* Lewis J. Rubin, MD,† Werner Seeger, MD,* Horst Olschewski, MD*‡Journal of the American College of Cardiology Vol. 48, No. 8, 2006)，其與我們觀察到的約40 min的作用期間有良好的相關性。
假設比較例11的作用期間在PAH小型豬模式和人類之間具有可比性，如Ventavis的類似顯示和描述，比較例11在人類中的作用期間應至少為6小時甚至更長。 表 C.2.1.4 ：在PAH小型豬模式中媒液溶液、比較例11(10、30和100 µg/kg標稱劑量)和Ventavis(10 µg/kg標稱劑量)在吸入施用後的效應。PAP vs 基線(霧化開始前的10 min間隔)中之%改變%。數據為平均值± SD。
PAP %改變 vs 預置值
時間 媒液 n=4 Ventavis® n=3 比較例11 10µg/kg n=3 比較例11 30µg/kg n=3 比較例11 100µg/kg n=3
平均 SD 平均 SD 平均 SD 平均 SD 平均 SD
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
10 -0.2 2.7 -30.3 9.0 0.6 0.5 0.3 0.6 -2.1 2.7
20 -0.4 6.3 -20.7 21.6 0.2 0.3 -2.0 1.0 -7.2 3.8
30 0.5 6.5 -6.9 13.5 -0.7 0.4 -4.6 0.8 -14.6 6.0
40 2.4 4.1 1.7 2.9 -1.5 2.2 -7.8 0.9 -18.1 6.9
50 4.3 4.0 4.9 0.9 -2.3 2.7 -9.8 0.6 -22.2 8.6
60 5.6 4.6 -3.5 3.3 -11.8 1.0 -25.1 7.9
70 6.2 5.2 -4.2 3.2 -14.1 0.7 -27.0 7.4
80 6.2 5.2 -3.7 4.2 -14.2 0.7 -27.9 7.3
90 7.0 5.3 -4.3 4.6 -14.4 0.2 -28.9 9.1
100 7.0 5.3 -5.3 4.9 -14.8 0.3 -31.1 8.8
110 7.0 5.7 -6.2 4.9 -15.3 0.3 -30.8 8.4
120 7.6 5.5 -6.7 5.4 -15.3 1.0 -31.3 8.4
130 7.9 5.9 -6.2 4.9 -15.5 1.9 -31.2 9.1
140 7.7 5.5 -7 5.0 -15.3 2.2 -31.6 8.7
150 7.9 5.1 -7.6 5.3 -16.3 1.7 -31.1 8.2
160 8.9 4.8 -7.6 6.1 -16.3 2.3 -30.1 8.5
170 9 5.8 -8.2 5.9 -14.9 2.1 -31.1 8.9
180 8.6 6.0 -8.0 4.4 -14.7 2.1 -31.1 9.2
190 9.2 6.0 -7.8 4.7 -15.1 2.1 -30.5 8.5
200 8.9 5.7 -7.3 3.6 -15.3 2.6 -30.9 8.6
210 9.4 6.0 -7.5 4.5 -13.8 2.3 -30.6 8.9
220 9.9 5.3 -7.2 3.7 -13.6 2.2 -31.6 9.2
230 9.1 4.7 -7.2 3.4 -12.8 2.4 -31.2 7.4
240 8.4 4.1 -7.6 2.7 -13.4 1.9 -31.0 8.0
人類劑量預測
為了產生人類劑量估計值，在PAH小型豬模式中重複比較例11的實驗，不同之處在於將吸收過濾器附接在管的末端以測定沉積的肺劑量。比較例11的霧化導致標稱施用劑量之3-6%的霧化效率。基於過濾器實驗的所有結果，沉積在過濾器上的氣霧劑分之算術平均值為5%，導致約0.15 μg/kg (3 μg/kg標稱劑量)、0.5 μg / kg (10 μg/kg標稱劑量)、1.5 μg/kg (30 μg/kg標稱劑量)和5 μg / kg (100 μg/kg標稱劑量)的相對肺沉積劑量。假設PAP減少5%的最小有效標稱劑量為3 μg/kg和平均霧化效率為5%，則基於PAH 小型豬模式，最小有效沉積的肺劑量被認為是0.15 μg/kg。因此，對於為60 kg體重的人類患者，最小有效肺沉積劑為9-41µg，取決於是否假定不同蛋白質結合的效應(參見表2.1.5)。鑒於100 µg/kg作為小型豬模式中的有效劑量，300-1370 µg 肺沉積劑量被假定為有效劑量，同樣取決於對不同種間蛋白質結合的考慮。 表 C2.1.5. ：考慮和不考慮蛋白質結合之種間差異的有效肺劑量
小型豬中之相對肺沉積劑量 [µg/kg] 人類中之總肺沉積劑量 [µg]
不考慮蛋白質結合的種間差異 a 考慮蛋白質結合的種間差異 b
   
0.15 µg/kg (3 µg/kg標稱劑量) 9 41
   
0.50 µg/kg (10 µg/kg標稱劑量) 30 137
   
1.5 µg/kg (30 µg/kg標稱劑量) 90 410
   
5.0 µg/kg (100 µg/kg標稱劑量) 300 1370
a計算(小型豬×型豬×g中肺部相對沉積劑量)
b計算(小型豬×型豬相對沉積劑量間中相對肺沉積劑量(小型豬之未結合分率的比例(血漿 fu 0.348%)/人類(血漿fu 0.0764%))
在氧化壓力條件下的效應
為了模擬假定存在於不同心血管病症中的氧化壓力或低NO濃度的條件，在有和没有以ODQ(sGC的抑制劑)或L-NAME(NOS抑制劑)預治療的情況下評估比較例11。在PAH條件下，比較例11(30 µg/kg ND)顯示選擇性降低 PAP而對BP沒有任何效應(參見圖51和52)。ODQ或L-NAME的預治療導致以比較例11之PAP的降低增強，而對全身性BP沒有效應。相比之下，在氧化壓力或低NO濃度的條件下Ventavis®的效應沒有增強。此外，同樣在此等病理生理條件下，比較例11的作用期間與Ventavis®相比要長得多。 表 C2.1.6 ：在PAH小型豬模式中Ventavis® (10 µg/kg標稱劑量)、媒液溶液和比較例11(30 µg/kg標稱劑量)和吸入施用後的效應。數據以各動物的絕對數字顯示。
没有預治療之動物 以L-NAME預治療之動物
時間 PAP BP PAP BP
50 37.2 36.0 37.3 105.0 106.0 110.0 36.5 37.8 40.3 103.0 130.0 115.0
60 37.5 36.8 38.6 103.0 106.0 110.0 40.7 38.7 40.2 104.0 127.0 115.0
70 26.1 28.2 29.6 107.0 109.0 116.0 31.7 27.4 28.7 105.0 133.0 125.0
80 34.7 36.7 37.4 102.0 110.0 113.0 41.2 33.5 29.7 106.0 131.0 123.0
90 38.9 38.9 41.2 99.0 109.0 111.0 42.2 37.9 32.1 102.0 124.0 121.0
100 37.9 39.2 41.9 98.0 106.0 108.0 41.5 39.6 38.9 101.0 124.0 117.0
110 38.4 39.5 42.2 95.0 105.0 106.0 41.5 41.0 41.0 101.0 125.0 114.0
120 39.4 39.9 42.1 95.0 106.0 107.0 41.5 40.7 43.4 101.0 126.0 114.0
130 39.3 39.3 42.1 94.0 105.0 107.0 41.0 40.3 40.7 100.0 128.0 116.0
140 39.0 39.9 42.4 92.0 106.0 106.0 41.2 41.3 41.7 102.0 129.0 116.0
150 40.2 39.3 43.3 92.0 107.0 107.0 42.1 41.2 41.1 102.0 128.0 114.0
160 40.6 39.2 43.3 92.0 109.0 108.0 41.0 41.0 39.8 102.0 130.0 119.0
170 39.7 38.0 42.6 90.0 108.0 108.0 39.5 36.2 34.6 103.0 135.0 123.0
180 38.5 37.1 41.5 90.0 108.0 108.0 38.9 29.1 30.8 104.0 139.0 127.0
190 37.0 35.9 40.3 90.0 107.0 108.0 38.0 25.9 28.4 104.0 137.0 127.0
200 36.5 35.2 39.0 89.0 109.0 109.0 36.8 24.6 28.1 104.0 135.0 129.0
210 35.6 34.2 38.5 89.0 108.0 109.0 36.5 23.9 26.6 105.0 133.0 127.0
220 34.7 33.9 36.8 88.0 110.0 108.0 36.6 23.8 25.5 107.0 131.0 127.0
230 34.8 33.4 37.1 87.0 108.0 108.0 35.5 23.6 25.6 108.0 127.0 129.0
240 34.5 33.6 37.0 87.0 109.0 108.0 35.0 24.0 25.0 106.0 128.0 128.0
250 34.3 33.5 36.7 86.0 110.0 109.0 34.5 23.5 24.8 106.0 126.0 130.0
260 34.1 33.3 36.5 87.0 109.0 110.0 34.6 24.2 24.7 107.0 126.0 130.0
270 34.0 33.6 36.2 86.0 108.0 110.0 34.1 24.0 24.3 104.0 126.0 129.0
280 34.5 33.5 35.6 88.0 109.0 109.0 33.4 23.7 24.4 103.0 125.0 129.0
290 34.7 33.6 35.5 88.0 108.0 110.0 34.4 23.4 24.2 104.0 126.0 128.0
300 34.1 33.2 35.4 86.0 107.0 111.0 34.2 24.1 24.0 105.0 125.0 127.0
310 34.0 33.6 35.1 85.0 107.0 109.0 33.3 23.6 24.3 103.0 125.0 128.0
320 34.5 34.0 35.8 85.0 108.0 109.0 33.8 23.1 24.0 104.0 125.0 126.0
330 34.8 34.0 35.9 85.0 108.0 109.0 34.1 22.8 23.9 105.0 126.0 125.0
340 34.3 34.1 35.8 85.0 108.0 109.0 33.7 23.4 24.1 104.0 126.0 125.0
350 33.8 34.4 35.7 84.0 108.0 109.0 33.7 23.7 23.8 103.0 126.0 123.0
360 34.3 34.9 36.6 85.0 108.0 112.0 34.0 25.3 23.9 103.0 124.0 122.0
370 35.2 34.5 36.3 86.0 106.0 113.0 34.0 22.3 24.0 105.0 122.0 122.0
380 35.1 35.2 36.6 85.0 109.0 113.0 34.8 24.0 24.0 101.0 124.0 122.0
390 34.7 34.8 36.7 86.0 106.0 112.0 35.0 25.9 25.2 106.0 125.0 124.0
以ODQ預治療之動物
時間 PAP BP
50 37.5 38.2 39.8 98.0 107.0 85.0
60 37.6 39.8 37.7 95.0 107.0 89.0
70 33.6 26.4 25.9 97.0 103.0 92.0
80 37.4 32.8 32.1 98.0 105.0 92.0
90 38.5 37.5 38.2 100.0 104.0 92.0
100 38.8 40.6 39.2 101.0 104.0 93.0
110 39.3 39.5 40.0 103.0 103.0 94.0
120 38.2 40.6 39.6 104.0 102.0 95.0
130 38.1 38.3 38.9 103.0 101.0 95.0
140 38.5 40.4 40.2 104.0 100.0 94.0
150 38.8 39.6 40.2 107.0 100.0 94.0
160 39.6 40.1 40.9 109.0 100.0 94.0
170 37.2 35.4 38.0 108.0 99.0 95.0
180 35.2 34.5 36.6 108.0 99.0 96.0
190 33.8 31.5 32.3 107.0 100.0 96.0
200 32.1 30.6 30.2 107.0 101.0 95.0
210 31.0 28.4 31.6 106.0 99.0 97.0
220 31.4 27.5 31.1 106.0 98.0 97.0
230 29.9 26.3 31.7 106.0 97.0 98.0
240 30.6 25.0 30.7 106.0 96.0 98.0
250 29.4 25.6 31.4 107.0 96.0 100.0
260 30.1 24.0 29.3 109.0 95.0 97.0
270 29.4 23.7 31.4 107.0 95.0 98.0
280 29.6 22.8 30.8 109.0 92.0 99.0
290 29.5 23.2 33.0 109.0 91.0 96.0
300 29.3 22.3 30.6 105.0 89.0 101.0
310 29.6 22.9 32.4 105.0 89.0 102.0
320 29.5 21.4 31.7 104.0 86.0 101.0
330 29.3 23.4 32.0 105.0 85.0 101.0
340 30.7 21.8 32.4 108.0 83.0 100.0
350 30.8 22.8 32.3 108.0 83.0 100.0
360 31.4 21.0 32.7 108.0 80.0 100.0
370 31.7 22.6 30.6 109.0 82.0 98.0
380 31.6 21.3 31.9 109.0 80.0 97.0
390 32.1 22.2 31.4 109.0 79.0 97.0
與 PAH 之護理標準 (SoC) 相比的效應
在PAH小型豬模式中比較吸入性比較例11之功效與全身性施用的波生坦、西地那非和里奧西瓜(參見圖53a)。波生坦導致血壓下降且對PAP的效應很小，而西地那非和里奧西瓜的輸注導致PAP和血壓均下降。吸入性比較例11導致類似(30 µg/kg)或甚至更大 (100 µg/kg)的效應，而對BP沒有效應或效應很小。
因此，與護理標準相比，比較例11的吸入施用提供明顯的益處，因為避免了全身性作用。與比較例11單獨治療相比，比較例11(30 µg/kg)當與波生坦、西地那非或里奧西瓜組合時，保持其有關PAP的功效，而對BP沒有額外效應(參見圖53b)。 表 C2.1.7.A ：在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下，與全身施用波生坦(1mg/kg)、西地那非(300 µg/kg/h)和里奧西瓜(3 µg)相比，比較例11(30和100 µg/kg標稱劑量)吸入施用後對PAP和BP之%降低的效應。數據為各個動物的%改變。
PAP降低% BP降低%
波生坦1mg/kg -3.7 3.9 -7.7 -16.0 -6.7 -15.0 -10.3 -12.7
西地那非 300 µg/kg/h -15.3 -34.3 -16.1 -10.6 -6.1 -14.5
里奧西瓜3µg/kg/h -9.1 -9.1 -16.8 -0.3 -8.8 -10.9
比較例11 30 µg/kg -19.9 -22.8 -21.7 -6.8 1.6 3.5
比較例11 100 µg/kg -33.1 -45.1 -38.2 -4.5 -9.9 -3.1
表 C2.1.7.B ：比較例11 (30 µg/kg標稱劑量)單獨吸入施用後或除全身性施用波生坦(1mg/kg)、西地那非(300 µg/kg/h)和里奧西瓜(3 µg/kg/h)之外對PAP和BP之%降低的效應。數據為各個動物的%改變。
PAP降低% BP降低%
比較例11 30 µg/kg以及波生坦1mg/kg -29.7 -27.1 -12.8 3.6
比較例11 30 µg/kg以及西地那非 300 µg/kg/h -33.6 -36.9 -42.8 -6.9 -6.4 1.2
比較例11 30 µg/kg以及里奧西瓜3µg/kg/h -29.7 -24.2 -26.3 3.1 -1.1 11.5
比較例11 30 µg/kg -19.9 -22.8 -21.7 -6.8 1.6 3.5
乾粉調配物的效應
在化合物溶液霧化後，在比較例11 之效應的表徵化後，在進一步的步驟中，以麻醉的PAH小型豬研究不同乾粉乳糖調配物之吸入施用後，比較例11之晶形(例如倍半水合物，例如實施例6e)對PAP和BP 之效應(表C2.1.8)。 表 C2.1.8 ：小型豬實驗中施用的比較例11之晶形(例如倍半水合物，例如實施例6e)的乾粉調配物
調配物 藥物負載 % (w/w) 每隻動物施用的乾粉/ 藥物劑量 施用的比較例11之晶形劑量
乳糖中之比較例11之晶形的乳糖調配物I 2 1.5 mg/ 30 µg 7.5 µg/kg
乳糖中之比較例11之晶形的乳糖調配物II 6 1.5 mg/ 90 µg 22.5 µg/kg
倍半水合物實施例6e，微粉化 100 1.5 mg/ 1500 µg 375 µg/kg
w/w：重量 / 重量
經由連接到氣泵的PennCentury®乾粉吹入器氣管內(i.t.)施用1.5 mg/4 kg 動物重量乳糖媒液(LH300/LH200 20/78或LH300/LH200 20/80)、乳糖調配物I (包含2 w-%的比較例11之晶形的LH300/LH200 20/78)、乳糖調配物II (包含6 w-%的比較例11之晶形或比較例11之微粉化晶形(例如倍半水合物，例如實施例6e的LH300/LH200 20/80)。在所有動物中，乳糖施用導致PAP的增加而對血壓沒有任何效應(參見圖54 - 57)。效應的開始在乳糖調配物I(2% w/w)、乳糖調配物II(6% w/w)或呈比較例11之微粉化晶形(例如倍半水合物，例如實施例6e)之i.t. 施用後，觀察到PAP降低而對BP沒有任何效應(參見圖 54-56)。如圖57中所示，在i.t. 施用後，使用乳糖調配物I (2% w/w)在大約190 min後、使用乳糖調配物II (6% w/w) 在大約170 min後和使用微粉化倍半水合物實施例6e在大約80 min後緩慢達到最大效應。對於所有劑量，對PAP的選擇性效應持續完整4h觀察間隔。以此動物模式在此等實驗條件下使用乳糖製劑II以及微粉化倍半水合物實施例6e達到可達到的最大效應。如乳糖製劑I已經有效，比較例11以及其假多晶形(例如倍半水合物和單水合物I或單水合物II，在以下測試中已顯示式I化合物之不同假多晶形的相似功效)的MED為 ＜7.5 µg/kg，其非常符合用液體溶液推導人類劑量預測(MED 3µg/kg)的實驗。由於技術限制，較低劑量不適用。 表 C2.1.9 ：不同乳糖媒液、乳糖調配物I (7.5 µg/kg)、乳糖調配物II (22.5 µg/kg)和微粉化倍半水合物，例如實施例6e (375 µg/kg)之後氣管內施用後的效應。數據以PAP和BP[mmHg]的絕對值顯示(n=3)
乳糖1.5mg/4kg (@0min) +乳糖調配物I 2%  1.5mg/4kg (@90min) 乳糖1.5mg/4kg (@0min) +乳糖調配物II 6% 1.5mg/4kg (@90min)
時間 PAP BP PAP BP
0 38.8 37.1 37.2 101 106 119 38.6 36.8 40.0 110 115 93
10 37.3 37.7 37.6 95 110 118 39.4 37.1 39.2 111 112 92
20 35.3 36.8 38.4 96 106 119 39.9 37.9 39.1 113 117 88
30 40.4 37.2 38.7 101 105 119 40.3 37.4 39.8 114 115 89
40 41.8 37.8 39.4 103 105 119 40.9 38.5 40.9 113 116 92
50 41.9 39.4 39.2 105 102 118 41.7 38.1 41.0 113 115 93
60 41.9 40.9 39.7 107 100 118 42.4 38.0 39.8 112 114 91
70 40.9 41.2 39.6 108 101 116 42.8 39.2 41.6 112 113 95
80 37.6 42.4 37.4 108 94 111 43.3 39.5 40.6 111 113 93
90 35.5 42.3 38.4 111 97 111 43.0 39.2 40.2 111 110 93
100 38.1 43.8 37.5 113 100 110 43.2 40.0 42.5 110 112 94
110 38.8 43.8 36.5 114 93 107 44.2 38.5 40.4 110 111 94
120 40.9 43.8 35.3 115 96 107 42.7 36.5 40.1 110 111 96
130 40.9 43.6 34.2 115 89 106 40.8 36.4 38.6 110 109 96
140 41.3 42.3 33.5 116 86 105 40.6 35.6 35.6 109 110 96
150 41.3 39.5 33.2 117 89 104 39.9 35.0 35.9 110 108 98
160 40.4 39.0 32.9 116 87 103 38.8 34.1 34.1 110 107 98
170 40.9 38.1 32.9 116 86 102 37.1 34.8 32.5 110 106 97
180 40.9 38.1 32.6 114 88 101 35.5 31.6 32.6 109 105 98
190 41.5 39.7 33.6 116 90 102 34.4 31.7 30.8 108 106 96
200 39.3 39.7 32.5 112 89 103 34.5 31.7 30.5 108 106 95
210 40.2 39.7 32.3 112 90 102 34.5 31.5 30.3 107 106 96
220 38.6 38.7 31.5 110 89 104 34.2 29.9 28.6 106 104 95
230 39.3 38.7 31.5 111 88 105 32.7 29.5 28.6 106 104 96
240 38.2 38.5 30.5 109 89 104 32.2 28.6 28.0 106 104 96
250 40.3 38.1 31.2 110 90 103 31.6 29.1 27.4 105 102 96
260 39.6 36.4 30.0 107 90 100 29.6 28.7 27.7 105 102 97
270 38.7 36.9 29.3 108 94 98 28.8 27.9 26.6 104 103 94
280 39.6 36.2 28.9 106 91 98 32.5 27.2 26.2 105 102 93
290 40.1 37.0 28.3 107 91 95 31.5 26.6 26.6 105 100 91
300 38.2 37.9 28.0 104 90 92 30.6 26.6 25.7 104 101 94
310 40.0 37.1 27.4 105 91 92 30.6 26.3 26.0 105 97 93
30.3 26.2 26.1 104 95 93
30.2 26.0 25.7 103 95 93
29.7 25.3 26.5 102 90 94
乳糖1.5mg/4kg (@30min) + 倍半水合物的晶形實施例6e 微粉化1.5mg/4kg (@90min)
時間 PAP BP
0
10
20 42.0 36.4 37.5 99 107 119
30 41.9 37.1 37.5 99 104 117
40 42.0 37.3 38.6 99 108 119
50 41.4 37.4 39.8 99 109 118
60 41.4 36.8 41.2 100 107 118
70 41.0 37.4 41.3 100 109 118
80 40.9 38.1 40.8 101 114 119
90 40.4 39.5 40.7 102 116 118
100 40.7 38.7 39.6 99 111 117
110 36.5 37.6 35.4 101 112 116
120 34.3 36.4 30.8 101 114 115
130 32.3 35.7 28.6 101 114 115
140 30.8 35.0 27.5 99 120 114
150 30.3 29.0 26.6 99 121 114
160 29.0 30.3 26.9 100 122 114
170 28.0 28.3 25.1 101 121 115
180 25.8 30.8 25.3 99 119 115
190 25.1 30.8 23.9 99 123 114
200 25.5 30.6 24.6 98 116 113
210 25.0 30.8 24.2 99 117 116
220 24.3 32.9 23.6 97 123 114
230 24.0 31.5 23.6 97 119 114
240 24.3 31.0 23.5 97 119 112
250 24.2 31.3 22.9 97 118 111
260 24.0 31.5 23.5 96 116 112
270 24.5 29.8 22.6 99 115 109
280 23.9 29.8 22.8 97 111 110
290 23.5 30.3 22.0 97 110 107
300 24.6 30.0 22.2 98 109 108
310 23.9 29.6 21.9 97 109 105
25.3 29.1 22.5 94 108 105
25.1 28.5 21.6 97 108 105
表 C2.1.10 ：不同乳糖媒液、乳糖調配物I (7.5 µg/kg)、乳糖調配物II (22.5 µg/kg)和微粉化倍半水合物實施例6e (375 µg/kg)之氣管內施用後的效應。各動物之數據以對PAP之%改變vs. 基線顯示，呈絕對值。
時間 乳糖調配物I 2% 乳糖LH300/LH200  20：78 m/m 乳糖調配物II 6% 乳糖LH300/LH200  20：80 m/m
80 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
90 97.6 100.8 99.8 96.0 101.5 101.0 100.7 101.9 105.7 102.0 100.7 97.9
100 89.7 103.8 94.3 90.9 99.3 103.2 102.8 98.0 100.6 103.3 102.9 97.6
110 84.7 103.6 96.8 103.9 100.2 104.0 99.3 93.0 99.7 104.3 101.5 99.4
120 90.9 107.1 94.6 107.7 101.9 105.7 95.1 92.7 96.0 105.8 104.6 102.0
130 92.6 107.1 92.0 107.9 106.3 105.4 94.6 90.6 88.5 108.0 103.6 102.3
140 97.5 107.1 88.8 108.0 110.1 106.7 92.8 89.1 89.4 109.8 103.3 99.5
150 97.5 106.7 86.0 90.2 86.9 84.7 110.8 106.4 103.8
160 98.6 103.5 84.3 86.3 88.6 80.7 112.1 107.4 101.3
170 98.4 96.6 83.7 82.6 80.5 81.1 111.2 106.6 100.4
180 96.4 95.5 82.9 80.1 80.8 76.7 111.9 108.6 106.1
190 97.6 93.3 82.9 80.4 80.9 76.0
200 97.6 93.3 82.1 80.2 80.1 75.4
210 98.8 97.1 84.6 79.6 76.1 71.0
220 93.7 97.3 81.9 76.1 75.2 71.2
230 95.8 97.3 81.3 74.9 72.9 69.6
240 92.1 94.6 79.4 73.5 74.1 68.2
250 93.7 94.6 79.3 68.9 73.1 68.9
260 91.0 94.1 76.8 66.9 71.1 66.1
270 96.1 93.1 78.5 75.6 69.4 65.1
280 94.5 89.2 75.5 73.4 67.8 66.1
290 92.3 90.2 73.7 71.2 67.9 64.0
300 94.3 88.6 72.8 71.2 67.1 64.7
310 95.7 90.5 71.3 70.6 66.7 65.0
320 91.0 92.8 71.3 70.2 66.3 63.9
330 95.4 90.8 69.1 69.2 64.5 66.0
時間 微粉化倍半水合物實施例6e 乳糖LH300/LH200  20：80 m/m
80 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0
90 98.9 103.6 99.8 99.7 101.8 100.1
100 99.5 101.4 97.3 100.0 102.3 103.2
110 89.3 98.7 86.8 98.6 102.5 106.3
120 84.0 95.6 75.7 98.6 101.0 110.1
130 78.9 93.7 70.2 97.7 102.6 110.1
140 75.2 91.8 67.5 97.4 104.6 108.8
150 74.0 76.0 65.4
160 71.0 79.5 65.9
170 68.5 74.3 61.5
180 63.2 80.8 62.0
190 61.5 80.8 58.6
200 62.3 80.3 60.2
210 61.0 80.7 59.4
220 59.5 86.3 57.8
230 58.6 82.6 57.8
240 59.3 81.5 57.6
250 59.3 82.2 56.1
260 58.8 82.7 57.6
270 59.9 78.3 55.4
280 58.4 78.3 55.9
290 57.4 79.6 53.9
300 60.1 78.7 54.5
310 58.4 77.6 53.7
320 61.8 76.3 55.1
330 61.3 74.8 53.0
總之，在此急性PAH之模式中包含比較例11之晶形(例如倍半水合物實施例6e)的乾粉調配物在吸入施用後選擇性地和劑量依賴性地降低PAP，具有至少4 h之長作用期間(參見圖57)。增加施用劑量，觀察到清晰的劑量反應曲線。與霧化液體調配物(開始吸入後約約90 min的最大效應)相比，使用乳糖調配物，乳糖製劑 I最大效應延遲至較晚的時間點(乳糖調配物I (2% w/w) ~190 min，乳糖調配物II (6% w/w)~ 170 min)。 乾粉的不同水合物之功效的評估
此外，為了評估比較例11的不同水合物的功效，在PAH小型豬中經由PennCentury®乾粉吹入器以1.5mg/4kg (=375 µg/kg)的劑量氣管內施用呈微粉化單水合物II (實施例2)、微粉化半水合物(類似於實施例6a)、以及微粉化倍半水合物(類似於實施例6e)之比較例11。在各實驗開始時施用純乳糖媒液作為參考。所有3種水合物顯示關於PAP降低和全身性BP降低之可比的功效(參見圖58和59)。在觀察間隔的最後一小時內，所有3種水合物對全身性血壓都有輕微效應。此輕微的全身性BP降低可能是經由以相對較高的標稱375 µg/kg i.t.劑量施用之藥物的全身性溢出(overspill)引起。在麻醉期間的過程中在麻醉動物中也可能反映BP的一些降低。 表 C2.1.11 ：比較例11在氣管內施用不同水合物：微粉化單水合物II (實施例2)、微粉化半水合物(實施例6a)和微粉化倍半水合物(實施例6e)後對BP和PAP的效應。數據以絕對值[mmHg]顯示，呈平均值 ± SEM (n=3)
單水合物II (實施例2) 半水合物(實施例6a)
時間 BP (平均) PAP(平均) BP (平均) PAP(平均)
-10 116 126 139 37.9 37.8 39.4 99 85 86 38.7 40.6 38.7
0 109 127 136 35.8 38.7 39.7 101 85 85 39.6 40.8 38.5
10 110 126 135 35.8 38.7 37.1 103 83 79 40.2 41.1 41.1
20 117 128 139 38.9 38.2 40.2 101 83 84 40.4 41.3 41.3
30 121 128 139 39.8 38.6 40.0 100 81 88 40.2 41.3 41.3
40 123 127 137 40.4 39.0 40.7 98 81 90 40.4 41.8 41.0
50 120 127 135 39.7 39.2 40.2 99 78 89 40.7 41.7 40.9
60 121 127 136 39.9 39.2 40.8 100 79 86 41.2 42.0 40.9
70 124 126 137 39.1 36.0 37.2 102 78 87 38.8 40.6 40.1
80 123 124 135 39.1 36.1 35.9 102 79 90 34.1 39.9 37.7
90 122 125 134 37.9 35.2 34.5 101 81 92 30.1 37.7 36.6
100 122 124 132 36.8 33.2 32.7 100 80 95 28.3 35.9 35.0
110 122 125 133 35.5 31.9 31.2 99 79 99 27.2 34.8 34.0
120 121 125 132 34.8 30.2 29.8 99 79 96 26.4 34.1 32.9
130 120 124 131 34.2 29.7 29.3 98 81 97 25.7 33.7 31.7
140 119 125 131 34.3 29.3 28.6 99 82 98 25.3 33.2 31.3
150 117 124 130 33.7 28.4 28.4 97 82 97 25.0 32.9 30.7
160 117 121 130 33.7 27.8 27.8 96 81 97 24.5 32.5 30.2
170 116 120 129 33.5 27.5 28.0 95 79 95 24.0 32.4 29.9
180 114 117 132 33.5 27.1 28.1 94 79 94 23.7 31.9 29.7
190 112 116 133 33.6 26.7 28.3 94 85 93 24.4 32.4 29.2
200 109 115 131 33.5 26.8 28.0 92 85 92 24.8 32.4 29.4
210 110 117 130 33.4 26.3 27.6 90 81 91 24.8 31.9 29.2
220 110 116 128 33.7 26.3 27.1 89 79 89 24.7 31.7 29.1
230 111 115 129 33.8 26.0 27.6 87 78 89 24.0 31.3 28.6
240 111 113 121 33.3 26.6 26.8 87 77 87 24.1 31.3 28.1
250 109 110 123 33.2 26.0 26.3 85 76 85 24.2 30.7 28.1
260 109 108 119 33.4 26.3 26.7 85 76 84 24.1 30.6 28.1
270 108 106 119 33.6 25.9 26.3 85 76 87 24.4 30.6 27.8
280 108 104 116 33.4 26.3 26.2 85 75 84 24.3 30.7 28.0
290 106 102 114 33.2 25.9 25.8 84 75 83 24.1 30.7 27.6
300 105 101 114 33.1 25.9 25.7 83 77 82 23.7 30.5 27.7
倍半水合物(實施例6e)
時間 BP (平均) PAP(平均)
-10 99 107 119 42.0 36.4 37.5
0 99 104 117 41.9 37.1 37.5
10 99 108 119 42.0 37.3 38.6
20 99 109 118 41.4 37.4 39.8
30 100 107 118 41.4 36.8 41.2
40 100 109 118 41.0 37.4 41.3
50 101 114 119 40.9 38.1 40.8
60 102 116 118 40.4 39.5 40.7
70 99 111 117 40.7 38.7 39.6
80 101 112 116 36.5 37.6 35.4
90 101 114 115 34.3 36.4 30.8
100 101 114 115 32.3 35.7 28.6
110 99 120 114 30.8 35.0 27.5
120 99 121 114 30.3 29.0 26.6
130 100 122 114 29.0 30.3 26.9
140 101 121 115 28.0 28.3 25.1
150 99 119 115 25.8 30.8 25.3
160 99 123 114 25.1 30.8 23.9
170 98 116 113 25.5 30.6 24.6
180 99 117 116 25.0 30.8 24.2
190 97 123 114 24.3 32.9 23.6
200 97 119 114 24.0 31.5 23.6
210 97 119 112 24.3 31.0 23.5
220 97 118 111 24.2 31.3 22.9
230 96 116 112 24.0 31.5 23.5
240 99 115 109 24.5 29.8 22.6
250 97 111 110 23.9 29.8 22.8
260 97 110 107 23.5 30.3 22.0
270 98 109 108 24.6 30.0 22.2
280 97 109 105 23.9 29.6 21.9
290 94 108 105 25.3 29.1 22.5
300 97 108 105 25.1 28.5 21.6
表 C2.1.12 ：比較例11在氣管內施用不同水合物：微粉化單水合物II (實施例2)、微粉化半水合物(實施例6a)和微粉化倍半水合物(實施例6e)後對BP和PAP的效應。數據以各動物的%改變 vs. 預置值顯示，呈絕對值
單水合物II (實施例2) 半水合物(實施例6a)
時間 PAP BP PAP BP
50 99.1 99.2 98.5 99.1 100.1 100.0 99.3 98.7 98.9 99.6 98.4 100.6
60 99.7 99.3 99.8 99.9 100.1 100.7 100.7 99.4 99.2 100.6 99.7 97.2
70 97.7 91.1 91.0 102.4 99.3 101.4 94.7 96.1 97.0 102.6 98.4 98.4
80 97.7 91.3 88.0 101.6 97.7 100.0 83.4 94.5 91.2 102.6 99.7 101.8
90 94.7 89.1 84.5 100.7 98.5 99.2 73.4 89.2 88.7 101.6 102.2 104.0
100 91.8 84.0 80.0 100.7 97.7 97.7 69.0 85.0 84.7 100.6 101.0 107.4
110 88.8 80.9 76.3 100.7 98.5 98.5 66.5 82.4 82.1 99.6 99.7 111.9
120 87.0 76.6 73.0 99.9 98.5 97.7 64.4 80.8 79.7 99.6 99.7 108.6
130 85.5 75.2 71.7 99.1 97.7 97.0 62.8 79.9 76.7 98.6 102.2 109.7
140 85.6 74.3 70.0 98.3 98.5 97.0 61.8 78.7 75.7 99.6 103.5 110.8
150 84.1 71.9 69.4 96.6 97.7 96.3 60.9 78.0 74.3 97.6 103.5 109.7
160 84.1 70.4 68.1 96.6 95.3 96.3 59.9 77.1 73.1 96.6 102.2 109.7
170 83.8 69.8 68.5 95.8 94.5 95.5 58.6 76.7 72.3 95.6 99.7 107.4
180 83.8 68.7 68.9 94.1 92.2 97.7 58.0 75.4 71.8 94.6 99.7 106.3
190 83.9 67.7 69.3 92.5 91.4 98.5 59.5 78.4 70.7 94.6 108.5 105.2
200 83.7 67.9 68.5 90.0 90.6 97.0 60.5 76.8 71.1 92.6 107.3 104.0
210 83.4 66.5 67.7 90.8 92.2 96.3 60.6 75.5 70.8 90.6 102.2 102.9
220 84.0 66.7 66.2 90.8 91.4 94.8 60.3 75.1 70.3 89.6 99.7 100.6
230 84.5 65.8 67.6 91.6 90.6 95.5 58.7 74.1 69.1 87.6 98.4 100.6
240 83.2 67.3 65.6 91.6 89.0 89.6 58.9 74.2 68.0 87.6 97.2 98.4
250 83.0 65.7 64.3 90.0 86.7 91.1 59.0 72.7 67.9 85.5 95.9 96.1
260 83.3 66.7 65.4 90.0 85.1 88.1 58.8 72.5 68.0 85.5 95.9 95.0
270 83.8 65.6 64.3 89.2 83.5 88.1 59.6 72.4 67.3 85.5 95.9 98.4
280 83.3 66.5 64.1 89.2 81.9 85.9 59.3 72.6 67.8 85.5 94.6 95.0
290 82.8 65.5 63.1 87.5 80.4 84.4 58.8 72.6 66.7 84.5 94.6 93.9
300 82.7 65.7 62.9 86.7 79.6 84.4 57.9 72.2 67.1 83.5 97.2 92.7
倍半水合物(實施例6e)
時間 PAP BP
50 98.3 96.2 101.2 101.4 98.5 100.3
60 97.2 99.6 101.1 102.5 100.3 99.4
70 97.8 97.5 98.5 99.4 96.0 98.6
80 87.8 94.9 87.9 101.4 96.8 97.7
90 82.5 92.0 76.6 101.4 98.5 96.9
100 77.6 90.1 71.1 101.4 98.5 96.9
110 74.0 88.3 68.4 99.4 103.7 96.1
120 72.8 73.1 66.2 99.4 104.6 96.1
130 69.8 76.4 66.8 100.4 105.5 96.1
140 67.3 71.4 62.2 101.4 104.6 96.9
150 62.1 77.7 62.8 99.4 102.9 96.9
160 60.4 77.7 59.3 99.4 106.3 96.1
170 61.3 77.3 61.0 98.4 100.3 95.2
180 60.0 77.6 60.1 99.4 101.1 97.7
190 58.5 83.0 58.5 97.4 106.3 96.1
200 57.6 79.4 58.5 97.4 102.9 96.1
210 58.3 78.3 58.3 97.4 102.9 94.4
220 58.3 79.0 56.8 97.4 102.0 93.5
230 57.8 79.6 58.3 96.4 100.3 94.4
240 58.9 75.3 56.1 99.4 99.4 91.8
250 57.4 75.3 56.6 97.4 96.0 92.7
260 56.4 76.5 54.6 97.4 95.1 90.2
270 59.1 75.7 55.2 98.4 94.2 91.0
280 57.4 74.6 54.4 97.4 94.2 88.5
290 60.8 73.3 55.8 94.4 93.4 85.9
300 60.3 72.0 53.7 101.4 90.8 84.3
C-2.2 清醒缺氧激發的 (challenged) 狗
我們評估在清醒條件下，在另一個物種中以及在用於PAP升高的更多生理刺激下之比較例11的肺選擇性和作用期間。將狗暴露於低氧環境經30分鐘以誘發低氧介導的PAP升高，並在缺氧前1、5、12、16和24小時藉由吸入施用比較例11 (100 µg/kg標稱劑量)。與媒液治療的動物相比，使用比較例11觀察到缺氧誘發之PAP升高的減弱經1-17小時，並在24小時後消散(參見圖60a、60b、61a-e、和62)。觀察到對HR没有效應(數據未顯示)。 表 C2.2.1 ：在清醒狗中比較例11 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對缺氧誘發之PAP升高的效應。數據係以絕對值 vs. 媒液治療的動物顯示(n=3)
吸入後時間 比較例11在缺氧期間的mPAP降低[mmHg]
1-2h -12.44 -11.44 -10.13
5-6h -16.13 -5.44 -8.75
12-13h -3.44 -4.81 -1.69
16-17h -2.25 -4.25 -3.00
24-25h -0.13 -1.94 -0.50
比較例11在此模式中的作用期間為16-17小時。100 µg/kg的標稱劑量與小型豬實驗中的有效相似，不幸地沉積的肺劑量的測定在技術上是不可能的。
缺氧狗模式也使用於比較在清醒條件下的不同候選藥物之作用期間。比較例 11和比較例4，其在PAH小型豬模式中顯示相似的肺選擇性和較長的作用期間，在100 µg/kg標稱劑量吸入施應用後在缺氧狗模式中進行面對面的直接比較。吸入後長達6小時，兩種化合物都顯示可比較的功效。吸入後12和16 hrs進行的實驗指出比較例11關於作用期間的優點，與比較例4相比，比較例11的 PAP降低更有效。在吸入後24hr測量到的實例 4的降低被認為是不一致的發現，因為與比較例11相比，其也不符合實驗的時程(參見圖61a-61e 和圖62)。 表 C2.2.2 ：在清醒狗中比較例11和比較例4 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對缺氧誘發之PAP升高的效應。數據係以各動物的絕對值顯示
1h
時間 [min] 媒液 比較例11 比較例4
0 10 16 12 9 13 9 11 15 12
2 10 14 11 11 13 7 9 13 11
4 11 13 11 10 13 8 9 15 10
6 11 13 10 12 13 8 9 14 11
8 12 14 18 10 12 9 10 14 11
10 12 14 14 10 12 10 9 14 11
12 19 20 18 10 14 9 12 15 9
14 24 24 17 10 15 10 12 17 8
16 24 27 22 10 15 11 12 17 7
18 25 26 21 10 15 12 11 16 8
20 28 33 22 10 17 11 12 16 9
22 26 34 20 11 15 11 13 16 9
24 25 31 20 12 17 10 12 19 9
26 27 33 21 12 18 10 12 18 9
28 27 33 20 13 19 8 13 18 8
30 27 31 22 12 18 10 13 18 10
32 28 29 22 14 19 10 13 21 9
34 25 30 22 13 19 10 13 20 8
36 24 30 23 12 19 11 14 22 9
38 24 29 22 15 19 12 13 21 11
40 21 30 22 13 20 11 15 23 12
42 15 22 15 11 14 10 13 17 13
44 12 17 10 11 15 10 11 18 12
46 13 16 13 10 15 10 12 19 11
48 12 19 9 10 16 10 11 18 11
50 12 16 9 11 17 10 12 15 12
5h
時間 [min] 媒液 比較例11 比較例4
0 18 13 18 10 14 15 12 16 15
2 18 12 16 9 15 15 11 15 12
4 17 11 15 7 15 14 10 14 13
6 17 12 16 8 15 13 10 14 13
8 16 10 14 8 13 13 10 13 16
10 19 11 14 7 13 10 10 14 12
12 23 23 19 12 17 15 13 14 10
14 20 18 22 11 17 15 10 14 15
16 23 20 23 11 17 16 12 14 14
18 26 24 23 12 16 13 13 16 15
20 26 24 23 12 17 15 9 15 14
22 28 26 23 12 17 14 12 14 15
24 29 25 24 11 18 14 13 17 14
26 31 26 24 11 18 14 12 16 16
28 29 28 25 12 18 12 12 16 15
30 30 25 22 11 18 15 13 16 16
32 28 26 23 11 19 11 11 19 16
34 28 24 23 9 16 14 14 16 14
36 30 21 24 9 19 16 11 17 15
38 29 21 23 9 19 14 12 20 16
40 28 21 26 9 17 13 13 18 16
42 21 16 16 9 14 11 9 16 12
44 18 12 14 9 13 11 8 16 11
46 18 12 11 9 13 12 8 14 11
48 17 11 12 9 12 10 9 15 12
50 17 13 12 8 13 11 8 18 10
12h
時間 [min] 媒液 比較例11 比較例4
0 8 17 6 6 15 9 6 15 9
2 9 14 7 5 16 10 4 14 7
4 7 13 7 7 15 7 4 15
6 8 11 6 6 15 5 13 7
8 8 13 6 5 15 7 5 16 8
10 11 13 7 4 15 7 5 14 6
12 17 16 11 20 17 10 18 16 11
14 18 19 11 19 17 10 22 16 11
16 19 19 12 19 17 10 23 20 14
18 20 24 16 22 21 14 22 18 14
20 24 25 15 21 20 15 25 19 15
22 23 26 15 24 23 19 26 19 16
24 23 25 18 20 22 13 26 20 16
26 24 28 17 19 22 13 23 22 16
28 26 32 17 18 21 15 25 22 17
30 23 28 20 21 23 16 25 23 17
32 27 30 17 21 22 15 24 23 17
34 24 29 19 19 20 18 20 23 16
36 30 27 19 18 21 17 24 25 18
38 24 32 18 18 23 14 20 24 19
40 22 29 17 17 21 16 19 24 17
42 8 21 8 9 15 10 12 16 10
44 8 18 7 7 15 9 8 15 7
46 8 16 6 6 15 11 6 15 7
48 5 17 7 7 15 11 6 15 7
50 9 17 8 6 15 10 6 13 7
16h
時間 [min] 媒液 比較例11 比較例4
0 8 17 8 8 13 9 5 16 10
2 7 16 7 7 13 7 5 16 7
4 6 14 8 7 14 6 6 16 8
6 7 15 7 7 13 7 6 15 6
8 6 15 8 8 13 5 7 15 7
10 10 16 7 8 13 5 7 15 7
12 18 20 14 20 16 8 19 24 11
14 20 20 11 19 21 13 19 22 14
16 20 24 15 18 21 13 25 23 16
18 21 30 17 15 20 12 23 25 16
20 23 26 19 23 18 15 24 22 16
22 22 22 13 23 23 12 23 26 13
24 23 30 18 21 27 14 23 26 14
26 27 28 15 23 24 12 21 32 15
28 22 31 21 21 25 15 22 29 17
30 24 32 20 21 23 14 26 31 18
32 24 31 19 18 26 16 24 29 16
34 21 34 20 18 28 15 23 32 21
36 22 32 22 17 25 18 20 29 19
38 20 28 20 18 27 17 25 29 12
40 19 29 13 17 28 17 25 30 22
42 13 21 9 9 19 13 12 21 8
44 7 19 9 7 18 9 9 17 7
46 7 20 8 7 18 6 9 16 8
48 7 19 8 6 16 9 6 16 8
50 7 18 9 7 15 8 6 15 6
24h
時間 [min] 媒液 比較例11 比較例4
0 10 16 12 10 15 15 10 16 15
2 10 14 11 9 14 12 12 16 17
4 11 13 11 8 14 10 10 15 16
6 11 13 10 8 16 11 10 13 14
8 12 14 18 8 14 9 9 14 12
10 12 14 14 9 11 10 10 15 14
12 19 20 18 20 20 15 18 22 14
14 24 24 17 23 22 19 18 19 15
16 24 27 22 27 24 22 20 23 17
18 25 26 21 27 26 20 23 25 17
20 28 33 22 29 29 23 23 24 21
22 26 34 20 27 30 22 22 26 17
24 25 31 20 26 28 22 24 25 18
26 27 33 21 24 29 17 23 25 19
28 27 33 20 26 29 20 22 27 18
30 27 31 22 24 30 21 23 33 19
32 28 29 22 25 28 20 26 28 20
34 25 30 22 25 34 22 23 27 19
36 24 30 23 25 28 22 24 31 22
38 24 29 22 24 28 24 22 26 21
40 21 30 22 23 27 21 24 28 21
42 15 22 15 15 21 12 19 24 15
44 12 17 10 11 22 14 13 22 12
46 13 16 13 11 21 12 13 21 10
48 12 19 9 9 20 9 13 17 10
50 12 16 9 9 17 9 10 18 14
表 C2.2.3 ：在清醒狗中比較例11和比較例4 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對缺氧誘發之PAP升高的效應。數據係以各動物在缺氧期間平均PAP降低的絕對值以及平均值±SEM顯示。
吸入後時間 比較例11在缺氧期間的mPAP降低[mmHg] n=3 比較例11 平均 +/- SEM 比較例4在缺氧期間的mPAP降低[mmHg] n=3 比較例4 平均 +/- SEM
1-2h -12.44 -11.44 -10.13 -11.33±0.67 -11.69 -10.19 -11.38 -11.08±0.46
5-6h -16.13 -5.44 -8.75 -10.10±3.16 -14.81 -6.69 -8.00 -9.83±2.52
12-13h -3.44 -4.81 -1.69 -3.31±0.90 -0.50 -4.63 -0.56 -1.90±1.36
16-17h -2.25 -4.25 -3.00 -3.17±0.58 0.81 -0.56 -1.06 -0.27±0.56
24-25h -0.13 -1.94 -0.50 -0.85±0.55 -2.56 -3.13 -2.25 -2.65±0.26
C-2.3 對動脈加氧作為 VQ- 不匹配的取代物 - 肺內選擇性 的影響
在媒液治療的麻醉小型豬(對照組動物)中，單側肺通氣重複10 min循環導致 PAP的可重複增加，伴隨著血紅素(SaO2)的動脈氧飽和度(SaO2)下降(參見圖63)。在整個實驗過程期間HR和全身性BP穩定(參見圖64)；只有比較例11(30 µg/kg和100 µg/kg)的i.v. 施用誘發預期的血壓下降。在實驗過程期間，媒液治療的對照動物證明在隨後的單側通氣循環中PAP水平的小增量增加的趨勢。在以吸入施用比較例11(100 µg/kg標稱劑量)治療的動物中，與媒液治療的對照組動物(介入循環[吸入] 圖63)相比，觀察到趨向於較小的去飽和區域以及含氧量正常的條件下 PAP下降，但也在支氣管閉塞循環。此等效應在比較例11吸入後90 min(第二個介入循環(吸入))更為明顯。吸入後90 min，比較例11顯示出最大效果。i.v. 施用後，與媒液治療的動物(介入循環[i.v.]相比，比較例11導致去飽和區域的增加以及PAP進一步降低。
氧PAP的改變(按所要效應減少)，另一方面比較不要的去飽和惡化。因此，在各個組內比較最大缺氧PAP的平均%改變和氧飽和度曲線[AUCSaO2]下面積的相關%改變(參見圖65)。作為各組中的參考循環，我們將第3循環使用於吸入施用，將第4循環使用於i.v。在單側通氣循環期間，缺氧誘發之平均肺動脈壓(mPAP)升高在吸入後(循環6)以及i.v. 施用後(循環7和8)被比較例11有效降低。由於同時施用，在循環5中沒有觀察到減少。關於去飽和效應，比較例11在吸入施用後並沒有增加去飽和區域，甚至顯示有去飽和區域減小的趨勢。相比之下，在後全身性施用，比較例11誘發去飽和區域的劑量依賴性增加，如全身性施用的血管擴張劑(例如波生坦、西地那非、里奧西瓜)所述 (參照 Becker EM, Stasch J-P, Bechem M, Keldenich J, Klipp A, et al. (2013) Effects of Different Pulmonary Vasodilators on Arterial Saturation in a Model of Pulmonary Hypertension. PLoS ONE 8(8): e73502. doi:10.1371/journal.pone.0073502)。 表 C2.3.1 ：基於代表性循環的效應，比較例11降低最大缺氧PAP(正治療效應)和AUCSaO2 (不要的去飽和效應)的能力(n = 4隻動物)；數據為平均值±SEM (n=4)
媒液吸入 吸入I 循環5 吸入II 循環6 媒液推注 iv推注30µg iv推注100µg
%減少δ PAP %增加 AUC SaO2 %減少 δ PAP %增加 AUC SaO2 %減少 δ PAP %增加 AUC SaO2 %減少 δ PAP %增加 AUC SaO2 %減少 δ PAP %增加 AUC SaO2 %減少 δ PAP %增加 AUC SaO2
0 0 1.8±3.2  -18.6±6.7  -19.6± 5.3  -39.4±10.3 0 0  -23.8± 5.0  48.1±43.7  -14.3±12.5 282.8±176.4
總之，在單側支氣管阻塞之模式中比較例11有效降低PAP升高。在此模型中，與全身性施用的比較例11相比，吸入施用後沒有檢測到對去飽和區域的負面影響。因此，在吸入施用後，與全身性施用的血管擴張劑相比，比實施例11顯示更好的風險效益比，且對於在全身性施用的血管擴張劑之治療下處於通氣灌注不匹配的風險之PH的患者可能是一種有效但也是安全的治療。 C-3. 體外和體內支氣管擴張作用 C-3.1 體外支氣管舒張
使用二氧化碳將雄性Dunkin Hartley天竺鼠安樂死。移出初級支氣管(primary bronchus)並放置於下列組成的冰冷Krebs-Henseleit緩衝液中：NaCl 112、KCl 5.9、CaCl2 2.0 MgCl2 1.2、NaH2PO4 1.2、NaHCO3 25、glucose 11.5。將支氣管切成由2個支氣管環組成的環，並轉移到含有在37°℃下用95% O2、5% CO2平衡之Krebs-Henseleit溶液的20 ml器官浴中。為了記錄等長張力(isometric tension)，將支氣管環安裝在兩個鉤子之間。一個鉤子連接至轉換器，另一個是可移動的且可精確調整於1.5 g的靜息張力(resting tension)。在60 min的平衡期間，每20 min用緩衝液洗滌組織。各實驗都以將製劑暴露於乙醯膽鹼(10 µmol/l)開始。接著使用0.1 µmol/l 卡巴可(carbachol)預收縮氣管環。30 min後，構建測試化合物的累積劑量反應曲線。 培養各濃度直至反應穩定。卡巴可誘發之穩定收縮定義為100%張力。舒張表示為百分比張力。對於洗出實驗，將測試化合物以一種濃度施用於浴經1 h及之後使用含有0.1 µmol/l 卡巴可的 Krebs-Henseleit緩衝液洗出。
恢復因子計算為化合物施用後1h的支氣管擴張和移除(洗出)測試化合物後1h的支氣管擴張的比率。與媒液對照組相比，西那西瓜(比較例1)、里奧西瓜(比較例 2)和比較例11誘發預先收縮的天竺鼠氣管環之舒張(見圖66)。經由西那西瓜(比較例1)和里奧西瓜 (比較例2)之舒張在1h培養時間內達到穩定狀態。經由比較例11之舒張進一步增加。里奧西瓜(比較例2)誘發之舒張是完全可逆的(恢復因子0.34)。西那西瓜(比較例1)誘發之舒張保持穩定，具有與媒液(恢復因子 0.99)相似的輕微降低(恢復因子0.91)。相比之下，比較例11誘發之舒張在洗出期期間進一步進展(恢復因子1.41)。
此等研究結果表明與里奧西瓜和西那西瓜相比，比較例11關於支氣管擴張性質之較長作用期間。 表 C3.1.1 ：不同化合物：比較例1 (西那西瓜) 1 nmol/l、比較例11 1 µmol/l、比較例2 (里奧西瓜) 1 µmol/l)對支氣管擴張的效應。數據顯示為平均值 +/- SEM。
化合物 舒張 (%) ( 於 70 min 之時間點 ) 舒張 (%) ( 於 130 min) 之時間點 60 min 後之恢復因子
平均 SEM n 平均 SEM N
媒液 88.3 4.72 13 88.4 4.04 13 0.99
比較例11 72.2 4.60 11 51.3 6.29 11 1.41
比較例2, 里奧西瓜 29.1 11.26 9 85,1 5,52 9 0.34
比較例1, 西那西瓜 60.4 4.68 12 66.2 4.10 12 0.91
C-3 .2 體內支氣管舒張
支氣管收縮模式(參見Hoymann HG. Lung function measurements in rodents in safety pharmacology studies. Front Pharmacol 2012;3:156)使用雄性Brown Norway大鼠(Charles River, Sulzfeld, Germany：10-12週年齡)隨機分為三個治療組(比較例11，1 µg/kg、10 µg/kg和100 µg/kg；n= 12–13)，1 個陽性對照組(噻托溴銨(tiotropium)1 µg/kg；n=12)和1媒液對照組(n=17)。在激發前60分鐘用吸入的測試化合物治療動物。比較例11、賦形劑或噻托溴銨使用微進料系統和用加壓空氣操作的分散噴嘴霧化。氣霧劑濃度藉由過濾器取樣和重量分析測定，並以光度計連續監測。從吸入劑量評估肺沉積劑量(Raabe OG, Al-Bayati MA, Teague SV, Rasolt A. Regional Deposition of Inhaled Monodisperse Coarse and Fine Aerosol Particles in Small Laboratory Animals. The Annals of Occupational Hygiene 1988;32:53-63)。如前所述進行用於激發試驗的乙醯膽鹼氣霧劑的產生(Bronchy III型和Fraunhofer ITEM分散噴嘴)(Hoymann H, Heinrich U. Measurement of lung function in rodents in vivo. In: Uhlig S, Taylor A, editors. Methods in Pulmonary Research: Birkhäuser Basel; 1998. p. 1–28;  Glaab T, Mitzner W, Braun A, Ernst H, Korolewitz R, Hohlfeld JM, Krug N, Hoymann HG. Repetitive measurements of pulmonary mechanics to inhaled cholinergic challenge in spontaneously breathing mice. J Appl Physiol 2004;97:1104-1111; Hoymann HG. New developments in lung function measurements in rodents. Exp Toxicol Pathol 2006;57 Suppl 2:5-11.)。治療後和額外的暫停以符合從治療結束到乙醯膽鹼激發開始的60分鐘-時間段，將動物麻醉(腹膜內80 mg/kgK他命和 4 mg/kg 甲苯噻嗪(xylazine))進行經口氣管插管並置於身體體積變化描記器。將氧氣調整至大約40%。呼吸達到穩定狀態後，將自主呼吸動物的肺功能記錄為≥2分鐘的基線值；在其他參數中，肺阻力 (= RL)和動態順應性 (= Cdyn) 用於評估支氣管收縮。使用HEM軟體4.2版(Notocord Systems, Croissy, France)進行數據記錄和處理。在吸入治療後 60±15 分鐘記錄基線值後，用乙醯膽鹼(5% 水溶液氣霧劑)激發動物。肺功能的評估在暴露期間和暴露後≥ 3 分鐘持續。
將測試化合物的支氣管擴張功效與媒液對照組和陽性對照噻托溴銨組進行比較；參數測試、ANOVA和參數 Dunnett測試用於評估組間的任何顯著差異。為了評估功效，計算乙醯膽鹼誘發之支氣管收縮反應的抑制。
在麻醉大鼠在基線和支氣管收縮(乙醯膽鹼-激發)後測量肺功能。為了定量對乙醯膽鹼的支氣管收縮反應，評估RL的增加和Cdyn的減少。長效膽鹼能M3受體阻斷劑噻托銨係用作陽性對照並抑制乙醯膽鹼誘發之支氣管痙攣，同時RL降低(參見圖67a和67b)。類似地，比較例11誘發在基線以及乙醯膽鹼之支氣管痙攣下之劑量依賴性顯著(1、10和100µg/kg)的支氣管擴張作用。 C- 3.3 慢性氣喘模式
進行該研究以調查在致敏小鼠中用比較例11的吸入治療是否對實驗性過敏原誘發之晚期氣道高反應性和發炎具有保護作用。雌性BALB/c小鼠用卵白蛋白(Ova)和氫氧化鋁佐劑致敏並加強(第 0、14和21天)，接受NaCl的陰性對照組除外。在第28天和第29天，用Ova氣霧劑激發動物。在第30天，對所有組的所有動物進行高反應性測試，接著進行支氣管肺泡灌洗(BAL)。治療組D(10µg)和E (100µg)在每次Ova激發前2小時用比較例11吸入治療。A組和B組，即陽性和陰性對照組，用媒液進行相應治療。Ova 致敏陽性對照組A應顯示完全過敏反應，及相比之下，假致敏陰性對照組B應顯示無過敏反應。作為參照組，C組的動物用皮質類固醇地塞米松(dexamethasone)吸入治療，但由於其不同的作用機制，在每次Ova激發前18h和1h(在第27、28和29天)。在第30天，在過敏晚期中Ova激發後24 h，在經口氣管插管的小鼠中測量肺功能，尤其是RL，並進行對氣道高反應性的測試(雙倍劑量步驟中的吸入乙醯甲膽鹼(methacholine)激發)。與陰性對照組相比，在陽性對照中發現晚期過敏期的顯著氣道高反應性和嗜酸性球增多，其證明動物模式的有效性。用地塞米松治療的動物顯示氣道高反應性的89%和70%抑制(最大有效劑量[ED100]、150%的最大有效劑量[ED150]；產生阻力的100%或150%增加之有效吸入MCh劑量(µg))和嗜酸性球流入(eosinophilic influx)的100%抑制。此等抑制效應顯示成功的治療干預。相比之下，比較例11在低劑量下沒有或只有邊際效應，但在100 µg/kg的高劑量下有一定的抑制效應，氣道高反應性的38%和32%抑制(參見圖68)。另外，在低劑量組和高劑量組中用比較例11的預處理產生比陽性對照組高的淋巴細胞計數，但19%和31%抑制的嗜酸性球流入 (參見圖69a-c)。總體而言，在使用過敏性氣喘之小鼠模式的預防性治療概念中，比較例11在100 µg/kg之肺沉積劑量下顯示對氣道高反應性和發炎的抑制效應。 C-4.1 健康男性個體中投予 sGC 活化劑經 7 天 - cGMP 和支氣管擴張
年齡在18至45歲且身體質量指數(BMI)高於/等於18.5且低於/等於29.9 kg/m2的健康白人男性個體在臨床藥理I期研究中接受為期7天的治療，每天一次吸入480 µg或1000 µg或2000 µg(2個1000 µg膠囊)(標稱劑量)的劑量之實施例2或安慰劑的乾粉調配物。個體藉由一次深吸氣從插入手持式吸入裝置的膠囊中吸入藥粉(見D-1項，例如表22和23)。該藥物的乾粉調配物分散至氣流中，及細顆粒被輸送到肺部深處，其中意欲使PH患者的血管舒張，從而實質降低PAH患者或其他PH亞型之中樞肺血管之血壓升高。在健康肺部的個體中無法顯示此效應。此外，吸入藥物會導致支氣管氣道擴張並因此改良具有病理性支氣管收縮的PH患者的肺部疾病狀態。此效應是經由身體體積描記器以健康個體比氣道阻力阻力的減少測量。深吸氣後，個體屏住呼吸2秒，以使乾粉藥物從氣流中濃縮至更深的肺部區域表面，沉積在靠近其所欲藥理作用之位置。藥物在一天內溶解並經由內襯液體(lining fluid)平衡肺。作為肺中藥物濃度的替代物，分析隨時間的血漿濃度，並顯示吸入後2.0至2.5 h的最大血藥濃度，其之後經由血流支持肺部的藥物平衡。首次吸入後，產生持續48h之可測量的血漿濃度，如所有劑量投予所見，在14天之每日一次吸入後，24 h內產生穩態藥物濃度且從而支持藥物在 od吸入後的24/7活性。
在健康個體中藉由分析血液樣品的cGMP(在7天治療的第一天和最後一天藥物吸入後之前sGC藥理活化的即時產物)與所有劑量的治療前一天的測量值相比來控制在健康男性中的藥物活性。
此參數相對於基線的改變之分析顯示cGMP的劑量依賴性增加，從第一次吸入後約2 h開始，在實施例2投予6 h (480和1000 µg劑量)和8 h (2000 µg劑量)具有一峰(參見圖70 - 74)。與全身性藥物濃度相比，此延長的活性是由以吸入乾粉的投予模式引起的，其將藥物沉積在肺的較深部分，導致每天吸入一次後歷經24 h的活性藥物濃度。在投予480、1000和2000 µg實施例2後，在第一槪況(profile)日觀察到的峰平均值± SD cGMP值為8.84±1.35、11.69±1.86和16.52±4.24 nmol/L。
重複給藥7天後，觀察到cGMP的平均峰值進一步增加，在個別劑量投予後為11.96±2.80、16.70±2.96和32.67±9.48 nmol/L。在第一次治療後第10天，平均cGMP濃度已恢復到接近給藥前觀察到的濃度。cGMP數據顯示每天一次吸入藥物實施例2會在sGC目標產生的所要劑量依賴性效應(參見圖74)。 表 C4.1.1 ：相對於基線之環鳥甘單磷酸改變(nmol/L)(SAF)
安慰劑 480 µg，實施例2 1000 µg，實施例2 2000 µg，實施例2
-0D 22H 00M 0.47 ± 0.90 1.17 ± 1.00 0.08 ± 1.41 0.66 ± 0.79
-0D 20H 00M -0.11 ± 1.13 0.52 ± 0.95 -0.24 ± 1.75 0.48 ± 0.71
-0D 18H 00M 0.71 ± 1.41 0.21 ± 1.74 -0.87 ± 1.44 0.17 ± 0.78
-0D 16H 00M -0.26 ± 1.89 0.41 ± 0.96 -0.43 ± 1.49 0.29 ± 1.17
-0D 12H 00M -0.11 ± 1.34 0.22 ± 1.17 -0.77 ± 1.72 0.28 ± 0.97
-0D 09H 00M -0.67 ± 1.25 0.20 ± 1.59 -0.84 ± 2.04 -0.18 ± 0.90
0D 00H 00M -0.77 ± 1.27 0.11 ± 1.10 -0.11 ± 1.62 0.68 ± 1.14
0D 02H 00M 0.42 ± 0.52 1.73 ± 0.82 3.26 ± 2.04 4.78 ± 1.35
0D 04H 00M -0.68 ± 2.23 3.04 ± 1.39 5.64 ± 2.54 9.18 ± 2.50
0D 06H 00M -0.40 ± 2.23 3.33 ± 1.39 6.78 ± 2.79 11.04 ± 3.21
0D 08H 00M 0.33 ± 2.56 2.94 ± 1.38 5.94 ± 2.65 11.69 ± 2.78
0D 12H 00M -0.24 ± 2.07 2.10 ± 1.18 4.86 ± 2.91 8.56 ± 2.19
0D 15H 00M -0.58 ± 2.14 1.53 ± 1.50 3.70 ± 2.59 7.54 ± 2.32
1D 00H 00M -0.18 ± 2.06 0.84 ± 0.89 1.26 ± 1.98 3.48 ± 0.90
2D 00H 00M -0.30 ± 2.26 0.74 ± 1.59 0.33 ± 1.99 1.57 ± 0.86
3D 00H 00M -0.14 ± 2.10 1.00 ± 1.92 2.31 ± 2.68 5.17 ± 1.51
4D 00H 00M 0.31 ± 1.99 1.46 ± 1.24 2.86 ± 2.63 9.33 ± 2.55
5D 00H 00M 0.27 ± 2.34 1.50 ± 0.98 3.59 ± 2.51 11.10 ± 3.49
6D 00H 00M 0.71 ± 2.21 1.92 ± 1.21 4.32 ± 2.82 11.71 ± 2.66
7D 00H 00M 0.21 ± 0.83 1.68 ± 0.85 4.74 ± 2.98 11.36 ± 3.37
7D 02H 00M 0.07 ± 0.81 4.22 ± 2.29 6.93 ± 2.99 17.33 ± 4.18
7D 04H 00M 0.20 ± 0.71 5.39 ± 2.34 10.84 ± 2.91 22.23 ± 4.75
7D 06H 00M 0.72 ± 1.06 6.44 ± 2.26 11.79 ± 3.70 27.39 ± 6.93
7D 08H 00M 1.26 ± 1.68 5.19 ± 1.64 11.00 ± 4.58 27.83 ± 7.77
7D 12H 00M 0.59 ± 1.00 3.71 ± 1.79 9.19 ± 5.26 23.33 ± 5.53
7D 15H 00M 0.02 ± 0.73 3.04 ± 2.09 8.00 ± 4.41 19.08 ± 4.95
8D 00H 00M 0.81 ± 0.54 1.69 ± 2.65 4.47 ± 3.81 11.17 ± 3.69
8D 12H 00M 0.66 ± 1.11 0.69 ± 1.53 2.30 ± 3.05 8.02 ± 2.45
9D 00H 00M 0.08 ± 0.73 0.13 ± 1.97 1.38 ± 2.59 5.64 ± 1.36
9D 12H 00M 0.70 ± 1.64 1.10 ± 1.01 1.02 ± 2.24 4.57 ± 2.15
10D 00H 00M 0.89 ± 1.47 -0.00 ± 0.64 1.42 ± 2.87 3.26 ± 1.07
表 C4.1.2 ：cGMP隨時間的平均值(N= 9 各用於安慰劑、480、1000和2000 µg，實施例2)：藥物吸入前(基線)(-1d02h – 0d00h)、第一吸入日後(0d00h - 2d00h)，在第3d00h- 7d00h天吸入後和7天吸入的最後一天後(7d00h- 10d00h)的谷測量。
安慰劑 480 µg，實施例2 1000 µg，實施例2 2000 µg，實施例2
-1D 02H 00M 5.83 ± 2.01 5.40 ± 1.41 5.02 ± 1.59 4.16 ± 1.70
-0D 22H 00M 6.30 ± 2.42 6.57 ± 1.22 5.10 ± 1.46 4.81 ± 2.22
-0D 20H 00M 5.72 ± 2.00 5.92 ± 0.83 4.78 ± 1.37 4.63 ± 1.86
-0D 18H 00M 6.54 ± 2.68 5.61 ± 0.71 4.16 ± 0.92 4.32 ± 1.33
-0D 16H 00M 5.58 ± 2.13 5.81 ± 1.09 4.59 ± 1.06 4.44 ± 2.15
-0D 12H 00M 5.72 ± 2.17 5.62 ± 1.26 4.26 ± 0.99 4.43 ± 2.24
-0D 09H 00M 5.17 ± 1.90 5.60 ± 1.08 4.18 ± 0.82 3.98 ± 1.91
0D 00H 00M 5.07 ± 1.90 5.51 ± 1.00 4.91 ± 1.27 4.83 ± 2.52
0D 02H 00M 5.49 ± 2.03 7.24 ± 1.25 8.17 ± 1.07 9.61 ± 3.65
0D 04H 00M 4.39 ± 1.20 8.56 ± 1.45 10.56 ± 1.47 14.01 ± 4.51
0D 06H 00M 4.67 ± 1.25 8.84 ± 1.35 11.69 ± 1.86 15.88 ± 5.09
0D 08H 00M 5.40 ± 1.70 8.46 ± 1.59 10.86 ± 1.66 16.52 ± 4.24
0D 12H 00M 4.82 ± 1.35 7.61 ± 1.01 9.77 ± 2.11 13.39 ± 4.01
0D 15H 00M 4.49 ± 0.90 7.04 ± 1.50 8.61 ± 1.63 12.38 ± 4.17
1D 00H 00M 4.89 ± 1.16 6.36 ± 1.10 6.17 ± 1.05 8.31 ± 2.88
2D 00H 00M 4.77 ± 0.74 6.26 ± 2.17 5.24 ± 1.28 6.40 ± 2.09
3D 00H 00M 4.92 ± 0.87 6.51 ± 2.62 7.22 ± 2.04 10.00 ± 3.51
4D 00H 00M 5.38 ± 1.06 6.97 ± 1.96 7.77 ± 1.87 14.17 ± 4.36
5D 00H 00M 5.33 ± 1.07 7.01 ± 1.72 8.50 ± 2.13 15.93 ± 5.52
6D 00H 00M 5.78 ± 1.42 7.43 ± 1.69 9.23 ± 2.12 16.54 ± 4.60
7D 00H 00M 5.28 ± 1.86 7.19 ± 1.47 9.66 ± 2.30 16.19 ± 5.02
7D 02H 00M 5.13 ± 1.97 9.73 ± 3.00 11.84 ± 2.18 22.17 ± 6.07
7D 04H 00M 5.27 ± 2.05 10.90 ± 3.12 15.76 ± 2.29 27.07 ± 7.01
7D 06H 00M 5.79 ± 2.16 11.96 ± 2.80 16.70 ± 2.96 32.22 ± 8.83
7D 08H 00M 6.32 ± 3.30 10.70 ± 2.27 15.91 ± 3.86 32.67 ± 9.48
7D 12H 00M 5.66 ± 2.17 9.22 ± 2.37 14.10 ± 4.55 28.17 ± 7.50
7D 15H 00M 5.09 ± 1.97 8.56 ± 2.80 12.91 ± 3.72 23.91 ± 6.59
8D 00H 00M 5.88 ± 2.07 7.20 ± 3.23 9.38 ± 3.11 16.00 ± 5.77
8D 12H 00M 5.72 ± 2.10 6.20 ± 2.00 7.21 ± 2.24 12.86 ± 3.96
9D 00H 00M 5.14 ± 1.60 5.64 ± 2.53 6.29 ± 1.86 10.48 ± 3.49
9D 12H 00M 5.77 ± 3.38 6.61 ± 1.80 5.93 ± 1.39 9.40 ± 3.10
10D 00H 00M 5.96 ± 2.26 5.51 ± 1.39 6.33 ± 2.30 8.09 ± 2.81
經由身體體積描記器之肺功能參數的測量顯示相較於基線，於實施例2第一次給藥6小時後測量，-0.142至-0.296 kPa/sec之總比氣道阻力 sRaw(用於健康肺中支氣管擴張活性之參數)的降低，且在所有劑量組中均觀察到(參見圖75)。 表 C4.1.3 ：總比氣道阻力(kPa/sec)隨時間的平均值(N = 9 各用於安慰劑、480、1000和2000 µg，實施例2)：篩選1/2，治療前一天(-1d00h – 0d00h)、第一吸入日(0d00h - 0d06h)、吸入後(2d02h- 6d04h)和7天吸入的最後一天 (7d00h-7d06h)後的測量。
安慰劑 480 µg，實施例2 1000 µg，實施例2 2000 µg，實施例2
篩選 0.829 ± 0.494 0.844 ± 0.327 0.867 ± 0.376 0.899 ± 0.150
篩選 2 0.934 ± 0.522 0.832 ± 0.280 1.009 ± 0.340 0.957 ± 0.140
-1D 00H 00M 0.896 ± 0.301 0.939 ± 0.344 0.996 ± 0.194 0.962 ± 0.266
-0D 22H 00M 0.916 ± 0.332 0.928 ± 0.392 0.903 ± 0.255 0.933 ± 0.165
-0D 18H 00M 0.942 ± 0.302 0.921 ± 0.305 0.901 ± 0.187 0.943 ± 0.245
0D 00H 00M 0.991 ± 0.341 1.078 ± 0.375 0.967 ± 0.233 0.947 ± 0.143
0D 02H 00M 0.948 ± 0.307 0.839 ± 0.182 0.859 ± 0.143 0.677 ± 0.139
0D 06H 00M 0.876 ± 0.268 0.800 ± 0.187 0.824 ± 0.180 0.651 ± 0.149
2D 02H 00M 0.913 ± 0.211 0.883 ± 0.310 0.797 ± 0.141 0.748 ± 0.155
4D 02H 00M 0.902 ± 0.197 0.807 ± 0.200 0.853 ± 0.172 0.709 ± 0.178
6D 04H 00M 0.872 ± 0.192 0.798 ± 0.193 0.787 ± 0.168 0.722 ± 0.168
7D 00H 00M 0.978 ± 0.261 0.823 ± 0.274 0.917 ± 0.227 0.844 ± 0.097
7D 02H 00M 0.872 ± 0.223 0.777 ± 0.282 0.764 ± 0.140 0.716 ± 0.089
7D 06H 00M 0.918 ± 0.212 0.803 ± 0.280 0.787 ± 0.188 0.730 ± 0.151
C-4.2在健康男性個體中sGC活化劑之吸入投予經14天以評估穩態藥物動力
年齡在18至45歲且身體質量指數(BMI)高於/等於18.5且低於/等於29.9 kg/m2的健康白人男性個體在臨床藥理I期研究中接受為期7天的治療，每天一次吸入1000 µg(標稱劑量)的劑量之安慰劑或實施例4的乾粉。個體藉由一次深吸氣從插入手持式吸入裝置的膠囊中將藥粉吸入至肺深部(見D-1項，例如表17和20)。該藥物的乾粉調配物分散至氣流中，及細顆粒被輸送到肺部深處，其中意欲使PH患者的血管舒張，從而實質降低PAH患者或其他PH亞型之中樞肺血管之血壓升高。個體之中央肺血管血壓升高的所要顯著降低無法在沒有肺功能之病理生理損傷下評估。作為肺中藥物濃度的替代物，已經分析隨時間的血漿濃度。在劑量投予14天以每天一次在24小時內產生穩態藥物濃度後的此分析顯示在吸入7至11天後達到最大藥物濃度。在健康個體中藉由分析血液樣品的cGMP來控制健康男性的藥物活性/目標參與。結果以平均值顯示於表C4.2.1中並在圖76和表C4.2.2中以對基線之改變顯示。7天治療后達到最大值且在持續治療期間未見進一步增加，顯示cGMP濃度最遲在治療11天後達到穩定狀態，作為持續目標參與的生物標誌物。 表 C4.2.1 ：安慰劑(N = 4)和1000 µg (N = 17)實施例4)在治療前一天(-1d00h – -0d09h)、第一吸入日(-0d02h - 1d00h；)、在2d00h- 2d12h、6d00h- 6d12h、10d00h- 10d12h吸入前和後(輪廓)、在第3d-5d、7d-9d、11d-12d天和14天吸入之最後一天前及後(12d22h- 20d00h)的谷之cGMP濃度隨時間(nmol/L)的平均值 +/-標準偏差。
平均 安慰劑(n=4) 1000µg, (n=17)實施例4
-1D 02H 00M 4775.0 +/- 1530.5 5264.7 +/- 2006.8
-0D 22H 00M 4800.0 +/- 469.0 5164.7 +/- 1680.0
-0D 20H 00M 4175.0 +/- 1345.1 4311.8 +/- 1956.4
-0D 18H 00M 4925.0 +/- 797.4 5011.8 +/- 1875.5
-0D 16H 00M 5250.0 +/- 914.7 5941.2 +/- 2641.7
-0D 12H 00M 7900.0 +/- 3763.9 5570.6 +/- 2087.4
-0D 09H 00M 6400.0 +/- 1180.4 5488.2 +/- 1654.9
-0D 02H 00M 3900.0 +/- 668.3 4329.4 +/- 1509.5
0D 02H 00M 6200.0 +/- 1930.5 9170.6 +/- 2348.3
0D 04H 00M 4625.0 +/- 1173.0 11623.5 +/- 2636.9
0D 06H 00M 4000.0 +/- 559.8 14276.5 +/- 3557.1
0D 08H 00M 4500.0 +/- 469.0 14888.2 +/- 3618.2
0D 12H 00M 4500.0 +/- 1409.5 11812.5 +/- 2708.5
0D 15H 00M 4750.0 +/- 1443.4 11064.7 +/- 2963.1
1D 00H 00M 4425.0 +/- 590.9 7305.9 +/- 1593.5
2D 00H 00M 4200.0 +/- 697.6 8876.5 +/- 2507.6
2D 03H 00M 5366.7 +/- 1150.4 17282.4 +/- 4749.9
2D 08H 00M 4700.0 +/- 1493.3 20770.6 +/- 6604.0
2D 12H 00M 4233.3 +/- 1436.4 16941.2 +/- 5408.8
3D 00H 00M 4033.3 +/- 1050.4 9488.2 +/- 2238.5
4D 00H 00M 3466.7 +/- 1429.5 10694.1 +/- 2193.0
5D 00H 00M 3166.7 +/- 1059.9 10252.9 +/- 2390.4
6D 00H 00M 4566.7 +/- 2285.5 9423.5 +/- 2613.1
6D 03H 00M 3800.0 +/- 608.3 17735.3 +/- 4290.1
6D 08H 00M 4266.7 +/- 1222.0 24452.9 +/- 7374.6
6D 12H 00M 4266.7 +/- 750.6 18194.1 +/- 4785.2
7D 00H 00M 3700.0 +/- 1058.3 10511.8 +/- 2026.4
8D 00H 00M 3733.3 +/- 1331.7 10529.4 +/- 1910.7
9D 00H 00M 3800.0 +/- 173.2 10911.8 +/- 2620.6
10D 00H 00M 3766.7 +/- 1011.6 10776.5 +/- 2286.0
10D 03H 00M 4200.0 +/- 1212.4 17058.8 +/- 4319.2
10D 08H 00M 4666.7 +/- 1703.9 21858.8 +/- 6188.5
10D 12H 00M 3800.0 +/- 655.7 17329.4 +/- 4529.3
11D 00H 00M 3966.7 +/- 1357.7 11270.6 +/- 2814.9
12D 00H 00M 4400.0 +/- 1389.2 12388.2 +/- 3016.4
12D 22H 00M 4466.7 +/- 1021.4 11276.5 +/- 3261.8
13D 02H 00M 3800.0 +/- 700.0 13447.1 +/- 2802.9
13D 04H 00M 3200.0 +/- 624.5 17276.5 +/- 4328.9
13D 06H 00M 3633.3 +/- 461.9 21370.6  +/- 5581.2
13D 08H 00M 3933.3 +/- 901.8 22047.1+/- 5535.0
13D 12H 00M 3700.0 +/- 964.4 17217.6 +/- 4806.0
13D 15H 00M 3433.3 +/- 896.3 16382.4 +/- 4045.9
14D 00H 00M 3300.0 +/- 1053.6 9735.3+/- 2740.0
15D 00H 00M 3433.3 +/- 960.9 6852.9 +/- 1222.3
15D 12H 00M 4533.3 +/- 1680.3 7370.6 +/- 1654.8
16D 00H 00M 3666.7 +/- 665.8 6329.4 +/- 1357.3
16D 12H 00M 4800.0 +/- 1500.0 6735.3 +/- 1394.6
17D 00H 00M 2866.7 +/- 577.4 4729.4 +/- 995.5
20D 00H 00M 4033.3 +/- 1893.0 5518.8 +/- 1505.2
FOLLOW-UP 4566.7 +/- 1078.6 5847.1  +/- 2013.4
表 C4.2.2 ：在治療前一天(-1d00h – -0d09h)、第一吸入日(-0d02h - 1d00h；)、吸入後在第2d00h-2d12h、6d00h-6d12h、10d00h-10d12h天(輪廓日)、在第3d-5d、7d-9d、11d-12d天和14天吸入之最後一天後(12d22h-20d00h)之cGMP相對於基線的改變(nmol/L)。
δ 基線 安慰劑(n=4) 1000µg, (n=17)實施例4
-1D 02H 00M 基線 基線
-0D 22H 00M 25.0  +/- 1408.0 -100.0 +/-1403.1
-0D 20H 00M -600.0 +/- 2219.6 -952.9 +/-1984.7
-0D 18H 00M 150.0  +/-2120.5 -252.9 +/-1345.9
-0D 16H 00M 475.0 +/-2091.8 676.5 +/-1844.1
-0D 12H 00M 3125.0 +/-2742.7 305.9 +/-1880.3
-0D 09H 00M 1625.0 +/-2118.8 223.5 +/-1396.2
-0D 02H 00M 基線 基線
0D 02H 00M 2300.0 +/-1529.7 4841.2 +/-2006.9
0D 04H 00M 725.0 +/-981.1 7294.1 +/-2972.3
0D 06H 00M 100.0 +/-516.4 9947.1 +/-3796.2
0D 08H 00M 600.0 +/-778.9 10558.8 +/-3607.1
0D 12H 00M 600.0 +/-1067.7 7531.3 +/-3057.2
0D 15H 00M 850.0 +/-1097.0 6735.3 +/-2917.4
1D 00H 00M 525.0 +/-1158.7 2976.5 +/-1785.2
2D 00H 00M 300.0 +/-1067.7 4547.1 +/-2374.4
2D 03H 00M 1600.0 +/-1058.3 12952.9 +/-4814.8
2D 08H 00M 933.3 +/-1059.9 16441.2 +/-6525.1
2D 12H 00M 466.7 +/-1527.5 12611.8 +/-5555.1
3D 00H 00M 266.7 +/-1594.8 5158.8 +/-2554.4
4D 00H 00M -300.0 +/-1833.0 6364.7 +/-2482.9
5D 00H 00M -600.0 +/-1646.2 5923.5 +/-2801.2
6D 00H 00M 800.0 +/-2330.2 5094.1 +/-2382.9
6D 03H 00M 33.3 +/-945.2 13405.9 +/-4568.6
6D 08H 00M 500.0 +/-1819.3 20123.5 +/-7302.6
6D 12H 00M 500.0 +/-1081.7 13864.7 +/-4528.5
7D 00H 00M -66.7 +/-1429.5 6182.4 +/-2095.9
8D 00H 00M -33.3 +/-1934.8 6200.0 +/-2018.7
9D 00H 00M 33.3 +/-776.7 6582.4 +/-2425.7
10D 00H 00M 0.0 +/-1311.5 6447.1 +/-2255.0
10D 03H 00M 433.3 +/-1450.3 12729.4 +/-4182.7
10D 08H 00M 900.0 +/-1907.9 17529.4 +/-6277.2
10D 12H 00M 33.3 +/-1184.6 13000.0 +/-4616.5
11D 00H 00M 200.0 +/-1915.7 6941.2 +/-2865.1
12D 00H 00M 633.3 +/-2064.8 8058.8 +/-2949.8
12D 22H 00M 700.0 +/-1200.0 6947.1 +/-3016.4
13D 02H 00M 33.3 +/-503.3 9117.6 +/-2994.0
13D 04H 00M -566.7 +/-251.7 12947.1 +/-4570.3
13D 06H 00M -133.3 +/-896.3 17041.2 +/-5998.9
13D 08H 00M 166.7 +/-1422.4 17717.6 +/-5772.9
13D 12H 00M -66.7 +/-1331.7 12888.2 +/-4847.5
13D 15H 00M -333.3 +/-1159.0 12052.9 +/-3938.8
14D 00H 00M -466.7 +/-1550.3 5405.9 +/-3158.2
15D 00H 00M -333.3 +/-1436.4 2523.5 +/-1666.0
15D 12H 00M 766.7 +/-1628.9 3041.2 +/-1792.7
16D 00H 00M -100.0 +/-1058.3 2000.0 +/-1581.1
16D 12H 00M 1033.3 +/-2003.3 2405.9 +/-1555.4
17D 00H 00M -900.0 +/-964.4 400.0 +/-1434.8
20D 00H 00M 266.7 +/-2542.3 1218.8 +/-1715.1
FOLLOW-UP 800.0 +/-1743.6 1517.6 +/-2343.9
C-4.3 健康男性個體之吸入、口服和靜脈投予單一劑量 GC 活化劑 - 肺沉積
年齡在18至45歲且身體質量指數(BMI)高於/等於18.5且低於/等於29.9 kg/m2的健康白人男性個體在臨床藥理I期研究中以1000 µg(標稱劑量)的單一吸入劑量、1000 µg(標稱劑量)的單一吸入劑量+ 木炭塊、1000 µg的單一口服劑量和100 µg的實施例4的單一輸注經2 h。由於靜脈內施用的生體可用率根據定義通常為100%和因此高於口服或靜脈內投予之情形，所以小心選擇靜脈內劑量低於口服和吸入劑量，以避免由高IV劑量所產生的較高血漿濃度和潛在的副作用，例如血壓降低或暈厥。因此，在此研究中選擇100 µg作為IV劑量。治療之間施用7天的洗出除期。個體吞服口服溶液(20 ml包含1000µg，參見D-2項，表50)。個體接受單次輸注溶液歷經2小時(參見D-2項表50)。個體以深吸一口氣從插入手持吸入裝置的膠囊吸入藥粉(參見D-1項，例如表17和20)。吸入此藥物的乾粉調配物後，一部分的標稱劑量留在膠囊和裝置中，在吸嘴處到身體的劑量稱為噴出劑量。發射劑量可計算/測定如下：標稱劑量 –(留在膠囊中 + 留在設備中)。吸入乾粉後，一部分噴出劑量進入胃腸道(GIT)且稱為口服部分之噴出劑量，另一部分通過呼吸道到達肺部的噴出劑量稱為肺劑量且表示肺沉積劑量。由於肺是作用的目標器官，所以必須定量肺沉積劑量。藉由測定達GIT的標稱劑量之部分及膠囊和裝置中的剩餘部分，可以間接估計肺沉積。為了研究和測定肺沉積，進行下列研究(也參見圖77)： 1- 1000 µg的乾粉之單一劑量的吸入施用。 2- 1000 µg的乾粉之單一劑量並組合口服投予木炭塊的吸入施用。木炭限制劑量的GIT部分之口服吸收(如實施例4)，因為實施例4完全吸附於木炭塊上。此意味著所測量的實施例4的濃度經由肺到達體循環。 3- 1000 µg實施例4之單一劑量的投予以測定口服吸收。 4- 實施例4之2 h 輸注的投予以研究消除。
在所有不同類型的投予後測量實施例4的血漿濃度，此外在吸入施用後後測量裝置和膠囊中的殘留物。血漿濃度的分析顯示實施例4在靜脈內投予後快速消除，消除半衰期為0.26 h。口服投予後的消除半衰期為4.43 h。在有/沒有木炭下吸入施用後的消除半衰期分別為16.1 h和15.1 h，見圖78。吸入後較長的終末半衰期可解釋為肺中之實施例4的肺貯庫，從其物質不斷地轉移到循環系統中。
實施例4之與木炭一起投予和沒有與木炭一起投予的乾粉調配物之絕對生體可用率為16.3%和18.8%。此意指到達肺之實施例4的乾粉為標稱劑量的16.3%被認為是肺劑量，及到達身體的乾粉之總部分為標稱劑量的18.8%。實施例4與木炭一起吸入施用後對沒有與木炭一起投予的相對生體可用率為86.9%。此指示口服部分的劑量大約為13%的標稱劑量。參見表C4.3.1和C4.3.2。噴出劑量計算為720 µg，因為膠囊中的殘留物為160 µg，裝置中的殘留物為120 µg，見圖79。
此研究的結果證實沉積的肺劑量和半衰期對於吸入性乾粉投予來說是足夠的，在肺中的足夠24 h藥物覆蓋使得能夠每天一次治療。 表 C4.3.1 ：1000 µg 吸入、1000 µg 吸入 + 木炭和100 µg 口服投予後的實施例4之隨時間的血漿濃度(µg/L)之幾何平均值和(幾何標準偏差SD，%)
1000 µg實施例4，吸入 + 木炭塊 1000 µg實施例4，吸入 1000 µg實施例，口服
N=16 N=16 N=16
劑量後之時間(h) 幾何平均 幾何SD 幾何平均 幾何SD 幾何平均 幾何SD
0 ＞0.0500 n.a. ＞0.0500 n.a. ＞0.0500 n.a.
0.25 0.0583 (1.78) 0.0628 (1.79) 0.777 (1.44)
0.5 0.261 (1.56) 0.316 (1.32) 3.64 (1.30)
0.75 0.491 (1.46) 0.622 (1.32) 5.28 (1.32)
1 0.662 (1.43) 0.869 (1.29) 5.68 (1.35)
1.5 0.900 (1.39) 1.16 (1.30) 4.69 (1.31)
2 0.969 (1.38) 1.20 (1.31) 3.32 (1.33)
2.5 1.02 (1.31) 1.18 (1.32) 2.26 (1.31)
3 0.933 (1.33) 1.07 (1.32) 1.60 (1.36)
4 0.812 (1.29) 0.927 (1.31) 1.01 (1.46)
6 0.508 (1.31) 0.583 (1.30) 0.424 (1.33)
8 0.373 (1.37) 0.415 (1.36) 0.233 (1.31)
12 0.220 (1.43) 0.250 (1.37) 0.126 (1.38)
15 0.157 (1.46) 0.181 (1.43) 0.0714 (1.60)
24 0.0931 (1.81) 0.106 (1.69) n.a. n.a.
28 0.0761 (1.69) 0.0793 (1.77) n.a. n.a.
32 0.0696 (1.63) 0.0698 (1.79) n.a. n.a.
36 0.054 (1.79) 0.058 (1.86) n.a. n.a.
表 C4.3.2 ：100 µg 靜脈內投予後的實施例4之隨時間的血漿濃度(µg/L)之幾何平均值和(幾何標準偏差SD，%)
100 µg實施例4，IV mg
N=15
劑量後之時間(h) 幾何平均 幾何SD
0 ＞0.0500 n.a.
0.25 1.76 (1.20)
0.5 2.52 (1.11)
0.75 2.68 (1.14)
1 2.99 (1.12)
1.5 3.15 (1.17)
2 3.07 (1.19)
2.083 2.57 (1.16)
2.25 1.42 (1.20)
2.5 0.559 (1.19)
2.75 0.264 (1.23)
3 0.132 (1.24)
C-4.4 PAH 或 CTEPH 患者之單一劑量的吸入投予以研究肺血管阻力 (PVR) 的降低
PAH或CTEPH患者在臨床1b期研究中以劑量遞增的口腔吸入240 µg(2顆120 µg的膠囊)、480 µg、1000 µg、2000(2 顆1000 µg 膠囊)或 4000 µg(4顆1000 µg的膠囊)之實施例4的乾粉之單一*劑量(插入手持式吸入裝置，以深吸氣吸入肺部深處)(見D-1項，例如表17和20)。(*單一劑量意指一個劑型/膠囊的投予以及兩或多種劑型/膠囊在短時間內同時或連續的投予)。納入的患者沒有使用針對PAH或CTEPH的標準護理(SoC)藥物治療(例如內皮素拮抗劑、前列腺素類、第5型磷酸二酯酶抑制劑或可溶性鳥苷酸環化酶刺激劑)之背景治療。此研究中的患者接受了侵入性右心導管插入作為醫學指示的常規診斷。該研究的主要目的為調查PVR之相對於基線的峰百分比降低。患者必需具有≥ 25 mmHg的基線肺動脈壓(mPAP)和≥ 400 dyn·sec·cm-5的PVR(5個伍氏單位(Wood units))，並且未顯示對初始 iNO吸入測試有血管反應才能納入每個方案分析中。在投予後的幾個時間點測量投予藥物的血漿濃度(藥物動力學)，並評估安全性和耐受性。
該研究分為A部分和B部分兩部分。在A部分中，將遞增上述單一劑量投予至沒有使用針對PAH或CTEPH的標準護理(SoC)藥物治療(例如內皮素拮抗劑、前列腺素類、第5型磷酸二酯酶抑制劑或可溶性鳥苷酸環化酶刺激劑) 之背景治療的患者。在B部分中，A部分完成後，在沒有SoC背景治療的其他患者(第1組)以及接受SoC單一療法(第2組)和接受SoC雙組合療法(第3組)的患者中以從A部分的選定劑量進行測試。
PVR是從右心導管插入程序期間直接測量的參數導出的參數。計算中包括的直接參數為：平均肺動脈壓[mmHg](mPAP)、肺毛細血管楔壓[mmHg] (PCWP)、和心輸出量[l/min] (CO)。PVR係根據下式計算：PVR [dyn*sec*cm-5] = 80*(mPAP - PCWP)/CO。
研究設計如圖 80 所示，完成A部分的總結係顯示於圖81中。
總共有38名患者接受實施例4的乾粉之劑量。各劑量組中總共有4名患者按計劃納入符合方案組(總共20名患者)。可清楚地觀察到PVR相對於基線的劑量依賴性平均改變在2000 µg和 4000 µg組中以大約-30%的持久平均改變達到峰值(關於PVR的詳細說明，請參見圖82和表 C4.4.1)。PVR的降低主要由肺動脈壓降低驅動(關於平均PAP的詳細說明參見圖83和表C4.4.2)。-20%的平均峰值改變水平 - 作為預定義的相關閾值水平 - 明顯超過在2000 µg和4000 µg組的峰值(對於240、480、1000、2000和4000 µg之平均峰值改變分別為：-21.0%、-16.1%、-25.9%、-38.1%、-36.3%)。在歷史比較中，單一投予後，PVR相對於基線之-30%的平均改變之幅度與吸入競爭藥物曲前列環素(Treprostinil) (Tyvaso®)於相同水平[Voswinckel et al, Journal of American College of Cardiology Vol. 48, No. 8, 2006 October 17, 2006：1672-81]。然而，實施例4施用後的效應有利地持續且沒有降低直到3h的測量期結束(＞3h的測量期對於研究中的右心導管患者在技術上是不可行的)。超過測量的3h之肺部滯留時間(乾粉施用後大概為期超過12hr，最多24 hrs)可從如另一項研究中測量的實施例4之長血漿半衰期得出結論(參見C-4-3)。全身性cGMP(環單磷酸鳥苷)的增加證實sGC活化的強目標參與。看到整體良好的耐受性，包括4000 µg的最高劑量。觀察到的全身性血壓、心率和氧飽和度的改變在任何劑量下都不代表安全問題。總的來說，沒有全身性血流動力學的相關改變之所觀察到的肺血流動力學參數(PVR和mPAP)的改變係完全符合選擇性肺血管擴張所要的效應。 表 C4.4.1 ：在PAH或CTEPH患者中實施例4於基線(0D00H00M)和吸入後(0D00H30M直到0D03H00M)的隨時間之肺血管阻力(PVR)的平均和SD (N=4，各用於240、480、1000、2000和4000 µg組，符合方案集)。相對於基線的改變係顯示於圖82中。
240 µg，N=4 480 µg，N=4 1000 µg，N=4 2000 µg，N=4 4000 µg，N=4
0D00H00M 788.338±416.914 1055.863±317.077 608.898±135.153 468.608±20.537 713.998±117.204
0D00H30M 749.012±398.928  1003.264±300.639 645.387±211.946 464.586±58.200  616.894±97.774 
0D01H00M 734.427±396.799 1007.504±290.883 558.324±169.860 421.730±81.602  542.417±97.103
0D01H30M 726.362±364.099 1031.647±252.210  542.130±187.227 340.782±82.566  573.812±123.865
0D02H00M 710.844±410.668 908.704±252.569 487.951±144.546 339.924±105.884 501.071±97.979 
0D02H30M 716.209±419.311 1038.344±263.837 537.812±204.640 338.404 ± 87.381 526.648±144.679 
0D03H00M 657.829±291.191 909.265±259.510 535.636±235.786 327.284 ± 25.882 493.103±130.480
表 C4.4.2 ：在PAH或CTEPH患者中實施例4於基線(0D00H00M)和吸入後(0D00H30M直到0D03H00M)的隨時間之平均肺動脈壓(mPAP)平均和SD (N=4，各用於240、480、1000、2000和4000 µg組，符合方案集)。相對於基線的改變係顯示於圖83中。
240 µg，N=4 480 µg，N=4 1000 µg，N=4 2000 µg，N=4 4000 µg，N=4
0D 00H 00M 42.8±11.1 55.0±8.6 34.3±4.9 33.5±3.4 46.0±8.1
0D 00H 30M 42.5±11.0 52.3±8.4 33.8±7.5 33.3±6.3 43.0±4.6
0D 01H 00M 44.3±10.4 53.8±9.1 31.8±7.4 30.8±5.6 41.3±4.6
0D 01H 30M 43.0±8.0 55.0±8.0 32.0±8.9 28.5±7.3 40.3±5.1
0D 02H 00M 39.5±7.9 52.5±7.9 32.3±9.0 27.0±6.1 40.0±5.3
0D 02H 30M 42.0±6.5 54.0±9.7 33.5±10.7 27.3±6.0 39.8±3.0
0D 03H 00M 39.0± 4.2 56.0±11.1 34.0±11.6 27.5±5.2 39.8±4.1
C-5. 其他表徵 C-5.1    Caco-2 滲透性試驗
測試化合物穿過Caco-2細胞單層的體外滲透是一種用於預測胃腸道的滲透性的公認分析系統(1)。如下所述測定本發明化合物在該Caco-2細胞中的滲透性：
將人caco-2 細胞接種在24孔插入板上，並使其生長14-16天。對於滲透性研究，將測試化合物溶解在DMSO中，並用運輸緩衝液[Hanks緩衝鹽溶液，Gibco/Invitrogen，進一步補充葡萄糖和 HEPES]稀釋至2 μM的最終測試濃度。為了測定頂端到底側面的滲透性(PappA-B)，將測試化合物溶液加至細胞單層的頂端側，並將運輸緩衝液加至單層的底側面側；為了測定底側面至頂端的滲透性(PappB-A)，將測試化合物溶液加至細胞單層的底側面，並將運輸緩衝液加至單層的頂端側。在實驗開始時從供體室取樣以確認質量平衡。在37℃培養2 h後，從兩個室中取出樣品。以LC-MS/MS分析樣品，並計算比滲透係數。測定各細胞單層的螢光黃滲透性以確保細胞單層的完整性，並確定各批次的阿替洛爾(Atenolol)(低滲透性標記物)和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)(活性排泄標記物)的滲透性作為定性對照組。 表 C5.1.1 ：滲透性試驗
Caco-2 (2 µM) Papp A-B (nm/s) (平均 +/- SD) Papp B-A (nm/s) (平均 +/- SD) Efflux比率
比較例11 (2.0 µM) 15.1 ±1.7 9.7 ± 0.6 0.64 ± 0.1
比較例2 (里奧西瓜) (2.4 µM) 35 ± 8.4 367 ± 75 11 ± 3.3
比較例1 (西那西瓜) (2.0 µM) 31 ± 3.9 631 ± 71 20 ± 3.5
所有實施例顯示在Caco-2細胞之中等滲透性。
與比較例2 (里奧西瓜)和比較例1(西那西瓜)相比，比較例11顯示最低的滲透率，為15.1 +/- 1.7 nm/s。另外，比較例11沒有顯示外排比(efflux ratio)。外排比指示轉運子參與例如腸道及/或肝臟。轉運子蛋白，例如滲透性糖蛋白 (=PgP)或乳癌抗藥性蛋白(=BCRP)可能會影響藥物的全身暴露。
比較例11在此顯示一個明顯的優勢，因為其顯示最低的滲透性並且似乎不存在轉運子參與，因此顯示其適用於具有可能非常低的全身暴露之局部吸入治療。 C-5.2 蛋白質結合 經由下述 Transil 分析來分析比較例 11 和比較例 1 的蛋白質結合
測試物質在Transil® (固定在二氧化矽珠上的卵磷脂脂質雙層)和血漿之間的分布是任何藥物化合物的典型特徵且取決於其與血漿蛋白的結合程度。藉由比較Transil®和緩衝液之間的分布與任何感興趣物種和血漿之間的分布，可在體外計算各個動物物種之血漿中的未結合分率。經由放射性分析測定各個血漿和緩衝液濃度。Schuhmacher等人發表對該方法及其驗證的詳細說明。(2)。 經由下述超過濾分析來分析比較例 2 的蛋白質結合。
對於此測定，使用30 kDa孔徑的濾膜來分離血漿和無蛋白質的超濾液。藉由離心施加過濾之驅動力。在蛋白質結合研究之前，藉由過濾以四種濃度溶解在緩衝液中的測試化合物來檢查測試化合物對超濾裝置的吸附(回收)和測試化合物通過濾膜的能力。測試化合物的足夠穩定性和幾乎完全回收(用於實驗之實際化合物量的≥90%)是使用超濾方法的先決條件。加至血漿中的有機溶劑量不得超過總培養體積的 2%。將血液樣品收集在肝素化管中，可合併(除人類和猴子以外的所有物種)或單獨(人類和猴子)收集，並在24 h內使用於在血液中的培養實驗。藉由離心肝素化血樣製備血漿。將血漿儲存在-15℃下直至使用。控制血漿穩定性、化合物回收、與膜和測試裝置的非特異性結合以及血細胞和血漿之間的分配。藉由液體閃爍計數測定與物質相關的放射性。使用此分析方法，不可能區分未改變的物質和放射性代謝物。有關放射分析方法和樣品後處理的詳細說明，參見 Goeller 等人(3)。Zhang等人在2012年發表一般超濾方法的說明(4)。 表 C5.2.1 ：化合物的蛋白質結合
非結合分率 (%) Wista大鼠 小獵犬 人類 (男性) 食蟹猴 小型豬 (雌性)
比較例11 0.224 0.108 0.0764 0.0485 0.348
比較例2 (里奧西瓜) 15.7 17.1 4.97 n.d. n.d.
比較例1 (西那西瓜) 0.351 1.12 0.392 0.0799 n.d.
n.d. 未確定
比較例11和比較例1(西那西瓜)顯示非常高的蛋白質結合，在所有研究的物種中游離分率低於1%。但是，實施例1顯示所有測試物種中最低的游離分率，其中給出比較結果。在大鼠血漿中，比較例11的非結合分率比比較例1低1.6倍，在人和猴子中血漿游離分率低2倍，及在狗中血漿游離分率低10倍。比較例 2 (里奧西瓜) 顯示介於15.7和4.97%之間的高很多之游離分率。
高蛋白質結合被視為高肺選擇性的指標，如Begg et al.(5)所述。比較例11因此顯示優於比較例1和2的有益性質。 參考文獻：1.    Artursson P and Karlsson J. Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells, High-throughput determination of the free fraction of drugs strongly bound to plasma proteins. Biochem. Biophys, 1991. 175 (3), 880-885. 2.    Schuhmacher J, Kohlsdorfer C, Buhner K, Brandenburger T, Kruk R. High-throughput determination of the free fraction of drugs strongly bound to plasma proteins. J Pharm Sci. 2004;93(4):816-30. 3.    Goeller G, Daehler HP, Winkelmann H: Determination of Radioactivity in Liquid and Solid Biological Samples from Pharmacokinetic Experiments. 1996, Bayer Pharma Report No. 25507. 4.    Zhang F, Xue J, Shao J, Jia. Compilation of 222 drugs’ plasma protein binding data and guidance for study designs. Drug Discovery Today 2012;9-10(17):475-485. 5.    Begg M, Edwards CD, Hamblin N, Pefani E, Wilson R, Gilbert J, Vitulli G, Mallett D, Morrell J, Hingle MI, Uddin S, Ehtesham F, Marotti M, Harrell A, Newman CF, Fernando D, Clark J, Cahn A, Hessel EM. Translation of Inhaled Drug Optimization Strategies intoClinical Pharmacokinetics and Pharmacodynamics Using GSK2292767A, a Novel Inhaled Phosphoinositide 3-Kinase d Inhibitor. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2019;369: 443-453. D – 醫藥組成物 D-1 吸入用乾粉製劑
以下列方式將根據本發明之化合物例如式(I-M-I)之單水合物I (實施例4)或式(I-M-II)之單水合物II (實施例2)調配和製造成醫藥乾粉製劑： 製造方法
根據以下說明描述製造乾粉調配物和成品(乾粉摻合物填充硬膠囊)。
步驟1：在開始混合之前，將細乳糖部分稱重並在兩層或粗乳糖之間分層。
步驟2：以32 rpm的速度將乳糖預摻合物之混合進行2 x 20分鐘。將乳糖預摻合物在循環之間通過500µg篩子進行篩分。
步驟3：將微粉化活性成分(例如式(I-M-I)之單水合物I，實施例4或式(I-M-II)之單水合物II，實施例2)通過500µm篩子進行篩分並加至預摻合乳糖。在開始混合循環之前，將乳糖預混合物和活性成分分層，二者之間交替10層的乳糖預摻合物和9層的活性成分，二者之間交替6層的乳糖預摻合物和5層的活性成分(例如式(I-M-I)之單水合物I，實施例4或式(I-M-II)之單水合物II，實施例2)、或二者交替2層的乳糖預摻合物和1層的活性成分(實施例4)，較佳地6/5層。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中循環混合。各循環在32rpm下進行30分鐘，在混合循環之間有10分鐘之停止時間。如有必要(例如看得見的黏聚物)，摻合物可能分別在摻合循環之間進行篩分。
步驟5：使摻合物在不銹鋼容器中在室溫(15-25℃)和35-65%相對濕度下靜置至少48小時。
步驟6：使用膠囊填充機(例如MG2 Flexalab)將摻合物以所需的填充重量填充於膠囊中。 吸入用乾粉摻合物： 表 17 ：示例性實施態樣1-3(包含實施例4)的組成物(乳糖含量/比率)
示例性實施態樣1 示例性實施態樣2 示例性實施態樣3
API濃度和批量 (0.75%活性，300g) (3%活性，300g) (10%活性，300g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分：單水合物I，實施例4* 2.25 0.75% 9.00 3% 30.00 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 282.75 94.25% 276.00 92% 255.00 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 15.00 5% 15.00 5% 15.00 5%
總計 300.00 300.00 300.00
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 99% (2.1%) 102% (2.2%) 102% (4.4%)
乳糖混合物中的LH 300細顆粒含量 ** 5.0% 5.2% 5.6%
比率 活性成分：LH 100 1：126 1：31 1：8.5
比率 活性成分：LH 300* 1：6.7 1：1.67 1：0.5
**出於實際原因，略為改變細乳糖(LH 300)對粗乳糖(LH 100)的比率，粉末摻合物中細乳糖的實際量保持不變且藉由減少LH100粗乳糖含量調整API (化合物1)的改變量。細乳糖(LH 300)的百分比含量在所有調配物中都是恆定的，活性成分對細乳糖部分和粗乳糖部分的比例在指定範圍內改變。
對於吸入性藥品，重要的是要保證均勻的藥物物質，其具有限定的粒徑＜ 5µm，以確保遞送至深部肺室。此技術要求可藉由藥物物質顆粒的微粉化來達成。
達到此要求之活性成分的粒徑分布之適當規格係設定如表16中規定。
根據本發明之活性成分式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4))的粒徑分布係如下表18中所定義。 表 18 ：實施例4的粒徑分布
粒徑上限 X90 max. 6 µm
粒徑平均值 X50 1 – 3 µm
粒徑下限X10 max. 1 µm
根據本發明吸入用乳糖係以不同粒徑範圍和不同的特性使用。
將根據本發明之粗乳糖材料(具有低細顆粒含量的晶形α-乳糖單水合物(例如市售的Lactohale® 100))進行篩分。
一種不同的中粗乳糖為磨碎Lactohale® 200，其已含有大量的乳糖細粒，該乳糖細粒基本上可為客戶定制所需的粒徑和細粒含量。
另一種不同的粗乳糖為Lactohale® 206，其為一種具有嚴格控制的粒度而沒有任何細顆粒之磨碎α-乳糖。
根據本發明之細乳糖材料為具有粒徑("乳糖細粒") X90 ≤ 10 µm的低粒徑之微粉化晶形α-乳糖單水合物("乳糖細粒")(例如市售的Lactohale® 300)。也可選擇具有相似性質和粒徑的根據本發明之微粉化乳糖例如Meggle Inhalac® 500。
一種不同的細乳糖材料為Lactohale 230®，其為一種具有X90 ＜ 30 µm低粒徑、經研磨、具有不規則形狀的顆粒之α-乳糖單水合物；
根據本發明之吸入用乳糖(例如Lactohale® 100、Lactohale® 300及其他)的粒徑分布係如下表19中所定義。 表 19 ：乳糖載體組分的粒徑分布
粗乳糖 細乳糖
Lactohale® 100 Lactohale® 300
粒徑上限 X90 200 - 250 µm ≤ 10 µm
粒徑平均值 X50 125 - 145 µm ≤ 5 µm
粒徑下限X10 45 - 65 µm 不限定
Lactohale® 200*
粒徑上限 X90 120 - 160 µm
粒徑平均值 X50 50 - 100 µm
粒徑下限X10 5 - 15 µm
Lactohale ®206** Lactohale ®230***
粒徑上限 X90 115 - 170 µm ＜ 30 µm
粒徑平均值 X50 75 - 95 µm ＜ 10 µm
粒徑下限X10 20 - 50 µm 1.0 – 3.0 µm
* 如使用於比較例20和示例性實施態樣34-35 ** 如使用於示例性實施態樣39-44 *** 如使用於示例性實施態樣36-38和42-44
如D.3所述，藉由測量摻合物分析和均勻性來評估摻合物的品質。
作為品質要求，根據本發明之摻合物應滿足下列標準：
90-110%的摻合物分析，較佳為95-105% (%含量的活性成分)
及RSD之摻合物均勻性(=相對標準偏差用於n=10個樣品)的NMT (=不超過) 10%，較佳為7.5%，更佳為5%。 膠囊中之乾粉摻合物 ( 成品吸入用調配物 ) ：
將包含微粉化活性成分(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸(較佳地 (5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I (實施例4)以及乳糖載體組分：細乳糖和粗乳糖的乾粉摻合物填充於硬膠囊(羥丙基甲基纖維素 = Hypromellose = HPMC，例如於3號中)或從硬明膠或其他適當材料製造的替代膠囊中。
取決於填充重量和活性成分濃度，可達成不同標稱劑量。具有不同標稱劑量的實施例4 (單水合物I)之用於膠囊的示例性組成物係顯示於下表中。評估終產物(在硬凝膠膠囊中的乾粉組成物)彼等的對應氣霧劑性能(參見表20)。 表 20 ：示例性實施態樣1 -3的氣霧劑性能
示例性實施態樣1 示例性實施態樣2 示例性實施態樣3
標稱劑量 120µg 480µg 1000µg
粉末摻合物中之實施例4活性成分的濃度 0.75% 3% 10%
填充重量 16 mg 16mg 10 mg
遞送劑量(DD) 71µg 316µg 705µg
DD (標稱的%) 59% 66% 71%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 32µg 128µg 258µg
FPF (標稱的%) 27% 27% 26%
FPF (DD的% ) 45% 41% 37%
氣霧劑性能包括參數如遞送劑量(DD、細顆粒劑量 (=FPD)和細顆粒分率(=FPF)。DD係根據方法D.1測量，細顆粒劑量 (=FPD)和細顆粒分率(=FPF)係根據方法D.2(空氣動力粒徑分布)測量。
作為品質要求，根據本發明之膠囊中的乾粉摻合物應滿足下列標準：
≥20%的FPF (＜ 4,5 µm活性之標稱劑量的%)及
≥30%%之活性成分的FPF(＜ 4,5 µm活性之DD的%)
如上表中所示，示例性實施態樣1-3證明極佳氣霧劑性能及摻合物之適當均勻性 和良好化學穩定性(參見穩定性數據)。 比較例和本 發明之其他示例性實施態樣
也用單水合物II(實施例2)之物理形式的式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II並使用部分不同的製造方法(參見下文)來製造乾粉混合物。
根據本發明之活性成分式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II，實施例2)的粒徑分布係如下表21中所定義。 表 21 ：實施例2的粒徑分布
粒徑上限 X90 max. 6 µm
粒徑平均值 X50 1 – 3 µm
粒徑下限X10 max. 1 µm
示例性實施態樣4-6係總結於下表22中。 表 22 ：包含實施例2的示例性實施態樣4-6之組成物(乳糖含量)
示例性實施態樣4 示例性實施態樣5 示例性實施態樣6
API濃度和批量  (0.75%活性，300g)  (3%活性，300g) (10%活性，300g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分：(實施例2)* 3.75 0.75% 9.00 3% 20.00 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 471.25 94.25% 276.00 92% 170.00 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 25.00 5% 15.00 5% 10.00 5%
總計 500.00 300.00 200.00
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 96% (1.5%) 98% (0.8%) 103% (4.4%)
LH 300細顆粒含量乳糖混合物** 5.0% 5.2% 5.6%
比率 活性成分：LH 100** 1：126 1：31 1：8.5
比率 活性成分：LH 300** 1：6.7 1：1.67 1：0.5
*以單水合物II使用 ** 細乳糖(LH 300)對粗乳糖(LH 100)的比率係解釋於根據本發明之示例性實施態樣1-3的部分中。
示例性實施態樣4-6之製造方法的不同之處在於步驟2、3和4
步驟2：乳糖預摻合物的混合以67 rpm(72rpm用於示例性實施態樣4的低濃度摻合物)進行 2 x 20 分鐘。在循環之間將預摻合物通過500µg篩子進行篩分。
步驟3：活性成分：將微粉化單水合物II(實施例2) 加至預摻合乳糖而没有篩分。在混合開始前循環，將乳糖預混合物和活性成分分層，二者之間交替4層的乳糖預摻合物和3層的活性成分(實施例2，單水合物II化合物1)。
步驟4：在第一個混合週期開始之前，將分層混合物通過 500 µm篩子進行篩分。將組分在滾筒式混合器中以3個循環混合。各循環在67 rpm (72rpm用於示例性實施態樣4的低濃度摻合物)下進行30分鐘，並在混合循環之間將預摻合物通過500µm篩子進行篩分。
獲得下列來自示例性實施態樣4-6的填充膠囊之結果。 表 23 ：示例性實施態樣4-6的氣霧劑性能
示例性實施態樣 4.1 + 4.2 低 / 高粉末填充 ) 示例性實施態樣 5 示例性實施態樣 6
標稱劑量 60µg 120µg 480µg 1000µg
粉末摻合物中之活性成分(實施例2)的濃度 0.75% 0.75% 3% 10%
填充重量 8 mg 16 mg 16mg 10 mg
遞送劑量(DD) 30µg 82µg 316µg 671 µg
DD (標稱的%) 50% 68% 66% 67 %
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 12µg 31µg 126µg 242 µg
FPF (標稱的%) 20% 26% 26% 24 %
FPF (DD的% ) 40% 38% 40% 36%
來自示例性實施態樣4-6之結果顯示使用式(I-M-II)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II形式(實施例2)調配根據本發明之乾粉摻合物可達成類似的有利氣霧劑性能。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)作為活性成分和使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
所得比較例7-9係總結於下表24中。 表 24 ：包含實施例4之比較例7-9的組成物(乳糖含量)
比較例7 比較例8 比較例9
API濃度 和批量 (0.75%活性，20g) (3%活性，20g) (10%活性，300g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分：實施例4* 0.15 0.75% 0.6 3% 30.00 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 18.85 94.25% 18.4 92% 255.00 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 1.0 5% 1.0 5% 15.00 5%
總計 20.0 20.0 300.00
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 97% (2.4%) 102% (5.7%) 96% (1.5%)
LH 300細顆粒含量乳糖混合物** 5.0% 5.2% 5.6%
比率 活性成分：LH 100** 1：126 1：30 1：8.5
比率 活性成分：LH 300** 1：6.7 1：1.67 1：0.5
*以單水合物I使用 **細乳糖(LH 300)對粗乳糖(LH 100)的比率係說明於根據本發明之示例性實施態樣的部分中。
比較例7-9之製造方法的不同之處在於步驟4。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中混合3個循環。各循環在32rpm下進行30分鐘。在循環之間將摻合物通過500µm篩子進行篩分。在混合循環之間没有實施停止時間。
比較例7-9之填充膠囊的氣溶膠性能之結果係總結於表25中。 表 25 ：示例性實施態樣7-9的氣霧劑性能
比較例7 比較例8 比較例9
標稱劑量 120µg 480µg 1000µg
粉末摻合物中之活性成分(實施例4)的濃度 0.75% 3% 10%
填充重量 16 mg 16 mg 10 mg
遞送劑量(DD) 64 µg* 264 µg* 585 µg
DD (標稱的%) 53% 55% 58 %
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 16 µg 62 µg 163 µg
FPF (標稱的%) 13% 13% 16 %
FPF (DD的% ) 25% 23% 28%
*由NGI中的回收總和測定
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)的氣霧劑性能之結果不符合品質要求。
摻合物中的小批量(20 g)之此等探索性批料與低藥物物質濃度一起(0.75%和3%)可能會導致製造設備表面上的活性成分細顆粒。此外，隨著粉末摻合物中活性濃度減少，由於活性成分的相對損失較高，粉末填充膠囊中的表面黏著對細顆粒劑量和分率具有不利影響。如用較大批量(300 g)以及較高藥物濃度(10%)製造的比較例9所觀察到的，改良氣霧劑性但仍低於目標。以相同API批料製備的比較例23(1-4)類似地觀察到此點。可能的解釋為所用批料的具體特性，例如導致黏聚或吸附損失的黏著或內聚性質。此可能是因為該批料具有相對較高的殘餘丙酮含量(大约10 倍)，其在其他API批料未觀察到。
再者，使用於製造比較實施態樣7-9的方法涉及與所有其他實施態樣(除了比較實施態樣23.1 – 4)所使用程序的偏差：混合循環之間的篩分和混合循環之間沒有停止時間。
使用此 API批料製造之產物的氣霧劑性能隨後可藉由方法改變來改良，以排除混合循環之間的篩分步驟(示例性實施態樣11)。
用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)但使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
示例性實施態樣10和11的組成物係總結於下表26中。 表 26 ：包含實施例4之示例性實施態樣10-11的組成物(乳糖含量)
示例性實施態樣10 示例性實施態樣11
API濃度 和批量 (10%活性，20g) (10%活性，20g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分實施例4* 2.0 10% 2.0 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 17.0 85% 17.0 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 1.0 5% 1.0 5%
總計 20.0 20.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 102% (2.8%) 100% (4.0%)
乳糖混合物中之LH 300細顆粒含量** 5.5% 5.5%
比率 活性成分：LH 100** 1：8.5 1：8.5
比率 活性成分：LH 300** 1：0.5 1：0.5
*以單水合物I使用 **細乳糖(LH 300)對粗乳糖(LH 100)的比率係解釋於根據本發明之示例性實施態樣的部分。
示例性實施態樣10-11的製造方法與示例性實施態樣1-3不同之處在於步驟3和4。
步驟3：將微粉化的式(I-M-I)之單水合物I(實施例4)通過500µm篩子進行篩分並加至預摻合乳糖。在混合開始前循環，將乳糖預摻合物和活性成分分層，二者之間交替6層的乳糖預摻合物和5層的活性成分(實施例4)。使用微粉化式(I-M-I)之單水合物I(實施例4)的5%過量(示例性實施態樣10)。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中循環混合。各循環在32rpm下進行30分鐘。在循環之間將摻合物通過500µm篩子進行篩分(示例性實施態樣10)。對於示例性實施態樣11，在混合循環之間没有給予停止時間(示例性實施態樣10和11)。
示例性實施態樣10-11之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表27中。 表 27 ：示例性實施態樣10-11之填充膠囊的氣霧劑性能
示例性實施態樣 10 示例性實施態樣 11
標稱劑量 1000µg 1000µg
粉末摻合物濃度 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD) 636 µg* 567* µg
DD (標稱的%) 64% 57%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 190 µg 290 µg
FPF (標稱的%) 19% 29 %
FPF (DD的% ) 30% 51%
*由NGI中的回收總和測定
與在混合循環之間使用篩分步驟之前述標準方法相比，省略篩分步驟的氣霧劑性能之結果明顯較佳(如比較例7-8中所示)。與涉及在混合循環之間進行摻合物篩分的方法相比，以標稱的%表示的FPD和DD的%激烈地增加。同樣，省略篩分步驟也不會損害摻合物均勻性。這是令人驚訝的，因為篩分本來預計會導致更好的摻合物均勻性。在混合30 mins後，不僅篩分摻合物(示例性實施態樣10)的BU處於較高水平(RSD = 8.7%篩分前和8.5%篩分後，分別)，但在最終摻合階段(90min加48h停止)時，BU (%RSD)在篩分和未篩分摻合物之間也在相同水平。
使用部分不同的製造方法以(5R)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (比較例14，微粉化活性成分)製造其他乾粉摻合物。
進行這項研究以調查乳糖細粒含量對摻合物勻性和氣霧劑性能的影響。
比較例12 (無細乳糖含量)和示例性實施態樣13-15的對應組成物係總結於下表28中。 表 28 ：包含比較例14之比較例12和示例性實施態樣13-15的組成物
比較例12 示例性實施態樣13 示例性實施態樣14 示例性實施態樣15
API 濃度和批量 (0.75%活性，50g) (0.75%活性，50g) (0.75%活性，50g) (0.75%活性，50g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分比較例14* 0.375 0.75% 0.375 0.75% 0.375 0.75% 0.375 0.75%
粗乳糖(Lactohale 100) 49.625 99.25% 47.125 94.25% 45.875 91.75% 44.625 89.25%
細乳糖 (Lactohale 300) 0% 2.5 5% 3.75 7.5% 5.0 10.0%
總計 50.0 50.0 50.0 50.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 96% (1.0%) 93% (5.8%) 89% (1.6%) 92% (8.2%)
60 min 92% (0.6%) 91% (4.6%) 93% (5.0%) 92% (4.1%)
90 min 92% (1.4%) 89% (5.6%) 96% (9.2%) 92% (1.7%)
120 min 95% (11.6%) 92% (1.6%) 93% (10.3%) 96% (10.0%)
乳糖混合物中的LH 300細顆粒含量 0.0% 5.0% 7.6% 10.1%
比率 活性成分：LH 100 1：132 1：126 1：122 1：119
比率 活性成分：LH 300 1：6.6 1：10 1：13
*以單水合物II使用
比較例12和示例性實施態樣13-15的製造方法與示例性實施態樣1-3不同之處在於步驟1-6全部。
步驟1：將細乳糖和粗乳糖部分稱入容器中，篩分並轉移至混合器的混合容器中。
步驟2：沒有進行乳糖預摻合物的混合。
步驟3：將微粉化的單水合物II之R鏡像異構物(比較例14)加至預先稱重和篩分乳糖中。在混合開始前，將乳糖預摻合物和活性成分分層，二者交替4層的乳糖預摻合物和3層的活性成分(單水合物II：比較例14之R鏡像異構物)。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中循環混合。各循環(總計4個循環)在72 rpm下進行30分鐘。在循環之間將摻合物通過500µm篩子進行篩分。在混合循環之間没有給予停止時間。
步驟5：沒有定義最終摻合物的停止期
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
比較例12和示例性實施態樣13-15之填充膠囊的氣霧劑性能係顯示於下表29中。 表 29 ：比較例12和示例性實施態樣13-15之填充膠囊的氣霧劑性能
比較例 12 示例性實施態樣 13 示例性實施態樣 14 示例性實施態樣 15
標稱劑量 75µg 75µg 75µg 75µg
粉末摻合物濃度 0.75% 0.75% 0.75% 0.75%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD) 41 µg* 38 µg* 38 µg* 39 µg*
DD (標稱的%) 55% 51 % 51 % 52%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 8 µg 19 µg 19 µg 20 µg
FPF (標稱的%) 11% 25% 25% 27%
FPF (DD的% ) 20% 50% 50% 51%
*由NGI中的回收總和測定
上述結果顯示，在組成物不含細乳糖(參見比較例12)的情況下，關於標稱和遞送劑量的細顆粒分率降低且不如示例性實施態樣13-15。對於與乳糖細粉含量(5%、7.5%或10%)無關製造的所有變體，FPD和FPF明顯較高。令人驚訝的是，不同量的乳糖細粒之結果幾乎相同。因此，顯示根據本發明之粉末摻合物和調配物可具有不同含量的細乳糖而不危害氣霧劑性能。摻合物均勻性結果主要顯示BU沒有隨著混合時間的增加而明顯增加。更確切地說，除了含有5%乳糖細粒的調配物外，在90 min以上觀察到均勻性的另一個降低。
使用部分不同的製造方法以(5R)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物II (比較例14)作為活性成分製造其他乾粉摻合物。
進行該研究以調查混合時間對較大規模摻合物之最終膠囊的均勻性和氣霧劑性能的影響。
比較例16和示例性實施態樣17-19的組成物係總結於下表30中。 表 30 ：對於包含比較例14的不同混合時間之比較例16和示例性實施態樣17-19的組成物及各個摻合物均勻性
比較例16 示例性實施態樣17 示例性實施態樣18 示例性實施態樣19
API濃度和批量 (0.75%活性，200g) (10%活性，50g) (0.75%活性，200g) (10%活性，200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(比較例14)* 1.5 0.75% 5.0 10% 1.5 0.75% 20.0 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 188.5 94.25% 42.5 85% 188.5 94.25% 170.0 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 10.0 5% 2.5 5% 10.0 5% 10.0 5%
總計 200.0 50.0 200.0 200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 84% (2.8%) 103% (6.7%) 93% (3.2%) 105% (7.2%)
60 min 81% (3.2%) 100% (9.8%) 95% (3.2%) 102% (9.4%)
90 min 91% (3.7%) 96% (5.4%) 93% (1.8%) 98% (0.6%)
120 min --- (---) 94% (4.4%) 96% (9.3%) 97% (1.5%)
乳糖混合物中的LH 300細顆粒含量 5.3% 5.9% 5.3% 5.9%
比率 活性成分：LH 100 1：126 1：8.5 1：126 1：8.5
比率 活性成分：LH 300 1：6.7 1：0.5 1：6.7 1：0.5
*以單水合物II使用
比較例16和示例性實施態樣17-19的製造方法與示例性實施態樣1-3不同之處在於步驟1-6全部。
步驟1：將細乳糖和粗乳糖部分稱入容器中，篩分並轉移至混合器的混合容器中。
步驟2：沒有進行乳糖預摻合物的混合
步驟3：將微粉化的比較例14加至預先稱重和篩分乳糖中。在混合開始前，將乳糖預摻合物和活性成分分層，二者交替4層的乳糖預摻合物和3層的活性成分(比較例14)。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中循環混合。各循環(總計4個循環)在72 rpm下進行30分鐘。玻璃容器係使用於比較例16和示例性實施例17。不銹鋼容器係使用於示例性實施例18和19。在循環之間將摻合物通過500µm篩子進行篩分。在混合循環之間没有給予停止時間。
步驟5：沒有定義最終摻合物的停止期
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
比較例16和示例性實施態樣17-19的氣霧劑性能填充膠囊係顯示於下表31中。 表 31 ：比較例16和示例性實施態樣17-19之填充膠囊的氣霧劑性能
比較例 16 示例性實施態樣 17 示例性實施態樣 18 示例性實施態樣 19
標稱劑量 ( 膠囊 ) 75µg 1000µg 75µg 1000µg
粉末摻合濃度 0.75% 10% 0.75% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
30 min 摻合時間後之結果
遞送劑量(DD) 23µg* 546µg* 34µg* 674µg*
DD (標稱的%) 31% 55% 45% 67%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 9µg 301µg 17µg 411µg
FPF (標稱的%) 12% 30% 23% 41%
FPF (DD的% ) 39% 55% 50% 61%
60 min 摻合時間後 之結果
遞送劑量(DD) 25µg* 526µg* 33µg* 581µg*
DD (標稱的%) 33% 53% 44% 58%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 9µg 189µg 17µg 311µg
FPF (標稱的%) 12% 19% 22% 31%
FPF (DD的% ) 38% 36% 51% 53%
90 min 摻合時間後 之結果
遞送劑量(DD) 29µg* 467µg* 32µg* ---
DD (標稱的%) 39% 47% 42% ---
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 12µg 210µg 16µg ---
FPF (標稱的%) 16% 21% 21% ---
FPF (DD的% ) 42% 45% 50% ---
120 min 摻合時間後 之結果
遞送劑量(DD) --- 551µg* 34µg* 534µg*
DD (標稱的%) --- 55% 45% 53%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) --- 261µg 16µg 284µg
FPF (標稱的%) --- 26% 22% 28%
FPF (DD的% ) --- 47% 48% 53%
*由NGI中的回收總和測定 ---在此時間點沒有測試。
從上表中的結果清楚地顯示摻合物的混合時間對摻合物品質有影響，即摻合物均勻性。通常摻合物均勻性以混合時間改良，在90 min後觀察到最較化。比較例16在整個混合中顯示不良分析值，並且大部分也未能達到 FPD/FPF%目標。在此情況下，似乎主要是混合容器(=玻璃)的性質導致均勻性不良並產生低氣霧劑性能(最終細 API含量留在混合容器中)。
然而，當混合時間延長時，有時會觀察到BU之降低(RSD%之增加)，這是一個意外的發現。同樣，氣霧劑性能(FPD、FPF)似乎基本不受混合時間的影響。在玻璃容器中摻合的乾粉與在不銹鋼容器中摻合的乾粉之間的結果有顯著不同。不銹鋼容器摻合的粉末(示例性實施態樣18-19)之結果優於從玻璃容器摻合的粉末(比較例16和示例性實施態樣17)獲得之結果，這是出乎意料的，因為兩種材料都被認為是物理和化學惰性。
也使用部分不同的製造方法以(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I和II (實施例2和4)作為活性成分製造其他乾粉摻合物。研究範圍是製造更大規模的粉末摻合物和不同乳糖細粒含量。所得比較例20和示例性實施態樣21和22係總結於下表32中。 表 32 ：比較例20和示例性實施態樣21和22的組成物
比較例20 示例性實施態樣21 示例性實施態樣22
API濃度和批量 (5%活性，850g) (5%活性，1050g)   (5%活性，8200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(用於比較例20之實施例2 /用於實施態樣 21 + 22之實施例4 )* 44.5 5% 52.5 5% 410.0 5%
粗乳糖(Lactohale 100) --- --- 945.0 90% 7380.0 90%
磨碎粗乳糖 (Lactohale 200) 635.5 75% --- --- --- ---
細乳糖 (Lactohale 300) 170.0 20% 52.5 5% 410.0 5%
總計 850.0 1050.0 8200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 69.3% (21.8%) 95.9% (3.2%) 106.6% (6.0%)
摻合物均勻性 再處理** 48.9% (10.1%) --- ---
乳糖混合物中之LH 300細顆粒含量細 21.1% 5.3% 5.3%%
比率 活性成分：LH 100/LH200 1：14 1：18 1：18
比率 活性成分：LH 300 1：3.8 1：1 1：1
*以單水合物II使用於比較例20和以單水合物I使用於示例性實施態樣21和22：** 製造步驟7A-7D之後，參照下文；
比較例20的製造方法與示例性實施態樣1-3的製造不同之處在於步驟1-5。
步驟1：將細乳糖和粗乳糖(LH200)部分稱入混合容器中。
步驟2：不進行乳糖預混物的摻合。將乳糖預摻合物在循環之間通過630µm篩子進行篩分。乳糖預混物在循環之間通過 630µm的篩子進行篩分。
步驟3：將微粉化活性成分(用於比較例20之實施例2 /用於實施態樣 21 + 22之實施例4) 通過630µm篩子進行篩分並加至預混乳糖而没有分層。
步驟4：將該等成分在滾筒式混合器中混合3個循環。各循環在32rpm下進行20分鐘。在循環之間將摻合物通過630µm篩子進行篩分。在混合循環之間没有實施停止時間。
步驟5：在取樣和填充之前，混合物不會靜置界定的時間。
步驟6：使用膠囊填充機將摻合物以所需的填充重量填充於膠囊中。
(另外的) 步驟7：由於均勻性結果較差，將比較例20的摻合物進行進一步處理。 • 7A：將摻合物通過630µm篩子進行篩分 • 7B：將摻合物分成兩部分且各部分以67 rpm的速度混合60min • 7C：兩個摻合部分都通過 630µm篩子過篩進行篩分 • 7D：將兩部分重新合併並在67rpm下再混合30min
使用如示例性實施態樣4-6所應用的方法製造示例性實施態樣21。
使用如示例性實施態樣1-3所應用的方法製造示例性實施態樣22。
比較例20和示例性實施態樣21-22之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表33中。 表 33 ：比較例20和示例性實施態樣21-22之填充膠囊的氣霧劑性能
比較例 20 示例性實施態樣 21 示例性實施態樣 22
標稱劑量 500µg 500µg 500µg
粉末摻合物濃度 5% 5% 5%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 385 µg 298 µg 308 µg
DD (標稱的%) 77% 60% 62%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 171 µg 101 µg 122 µg
FPF (標稱的%) 34% 20% 24%
FPF (DD的% ) 44% 34% 40%
*以DUSA測試，以此計算之FPF (DD的% )
來自示例性實施態樣21和22之結果顯示也可用既定方法製造規模高5倍和50倍的乾粉摻合物。摻合物均勻性以及氣霧劑性能能都在所需的目標/範圍內。比較例20未能產生均勻摻合物，這可能是由於高乳糖細粒含量和所產生之非常凝聚性的的混合物。低分析指示活性成分且黏在製造設備上。即使經過大量額外的摻合操作後達成乳糖摻合物中活性的可接受分佈，均勻性仍然很差，儘管填充摻合物之膠囊的氣霧劑性能顯示可接受的結果。
因此，顯示根據本發明之粉末摻合物和調配物可具有在5%和10%之間的範圍內之改變含量的細乳糖，而不會危及氣霧劑性能(參見示例性實施態樣13、14和15)。然而，細乳糖之20%的上限是關鍵。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I  (實施例4)作為活性成分和使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
該研究的範圍是製造具有更高的活性濃度的本發明之實施態樣及更高的摻合物填充於膠囊中以實現更高的標稱劑量及以更高的規模證明更高的劑量。
所得比較例23 (1-4)和示例性實施態樣24 - 26係總結於中下表34。 表 34 ：比較例23和示例性實施態樣24 – 26的組成物，包含實施例2作為活性成分
比較例23 示例性實施態樣24 示例性實施態樣25 示例性實施態樣26
API濃度和批量 (10%活性，20g) (20%活性，20g) (30%活性，20g) (20%活性，290g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(單水合物I，實施例4)* 2.0 10% 4.0 20% 6.0 30% 58.0 20%
粗乳糖(Lactohale 100) 17.0 85% 15.0 75% 13.0 65% 217.5 75%
細乳糖 (Lactohale 300) 1.0 5% 1.0 5% 1.0 5% 14.5 5%
總計 20.0 20.0 20.0 290.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 99% (6.8%) 92% (8.5%) 86% (24.5%) --- ---
60 min 94% (4.3%) 92% (3.2%) 101% (10.8%) --- ---
90 min 97% (3.6%) 95% (2.7%) 101% (12.9%) 94% (3.0%)
120 min 97% (4.9%) 93% (3.8%) 93% (6.8%) --- ---
乳糖混合物中的LH 300細顆粒含量 5.6% 6.3% 7.1% 6.3%
比率 活性成分：LH 100 1：8.5 1：3.8 1：2.2 1：3.8
比率 活性成分：LH 300 1：0.5 1：0.25 1：0.17 1：0.25
*以單水合物I使用
比較例23和示例性實施態樣24-26係以與使用於比較例7-9相似的方法和相同的API批料製造，但對於四個循環，使用略低的循環速率34 rpm而不是 32 rpm。在各循環後測試摻合物均勻性。在第4次摻合循環之後，將摻合物靜置72h，接著進行另一摻合循環，通過500µm篩子之篩分步驟和最終BU測試。以手填充用於氣霧劑性能測試之膠囊。
示例性實施態樣26係以與使用於比較例7-9相似的方法製造，但以34rpm 而不是 32rpm和以手填充膠囊。
具有不同填充重量以達到不同標稱劑量的比較例23和示例性實施態樣24-26之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表35中。 表 35 ：比較例23和示例性實施態樣24-26之填充膠囊的氣霧劑性能
比較例 23-1 比較例 23-2 比較例 23-3 比較例 23-4
標稱劑量 ( 膠囊 ) 1000µg 2000µg 3000µg 4000µg
粉末摻合物濃度 10% 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 20 mg 30 mg 40 mg
遞送劑量(DD) 671µg 1398µg 2238µg 2984µg
DD (標稱的%) 67% 70% 75% 75%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 168µg 293µg 475µg 604µg
FPF (標稱的%) 17% 15% 16% 15%
FPF (DD的% ) 25% 21% 21% 20%
示例性實施態樣 24-1 示例性實施態樣 24-2 示例性實施態樣 25-1 示例性實施態樣 25-2
標稱劑量 ( 膠囊 ) 2000µg 6000µg 3000µg 9000µg
粉末摻合物濃度 20% 20% 30% 30%
填充重量 10 mg 30 mg 10 mg 30 mg
遞送劑量(DD) 1336µg 4756µg 2229µg 7172µg
DD (標稱的%) 67% 79% 74% 80%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 411µg 1302µg 929µg 2805µg
FPF (標稱的%) 21% 22% 31% 31%
FPF (DD的% ) 31% 27% 42% 39%
示例性實施態樣 26
6000µg
粉末摻合物濃度 20%
填充重量 30 mg
遞送劑量(DD) 4924µg
DD (標稱的%) 82%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 1779µg
FPF (標稱的%) 30%
FPF (DD的% ) 36%
如示例性實施態樣24-26所證明，可以高於10%的更高藥物含量製造根據本發明之調配物。對於含有30%活性成分的摻合物，由於高細顆粒含量(來自高微粉化的API 部分)，以適當的摻合時間不可能摻合均勻混合物。儘管 BU RSD% 隨著時間改良直到120 min，但該值仍保持於相對較高的水平。令人驚訝地，氣霧劑性能沒有被危及，反而產生了更高的FPD/FPF，與較低濃度摻合物一樣。對於10%和20% 摻合物，在混合時間增加直到90 min時，證明良好的摻合物均勻性。在10%濃度的各種填充量下，出乎意料地沒有觀察到氣霧劑性能顯著改變，反而由於活性成分在膠囊壁上的相對表面黏著較低，預計會增加遞送劑量和FPF%。因此，可能在10%的 API濃度和更高的膠囊填充重量下，不會導致氣霧劑性能的顯著改變。比較例23的所有填充均未達到FPF%目標，其在以相同API批料和方法方法製造的比較例7-9中類似地觀察到。一個因素可能是僅20 g的小探索性批量，其中製造期間和設備表面上的損失對批料的API細顆粒含量的影響更大。藉由比較具有較高API濃度20%)且仍未顯著超過性能目標的示例性實施態樣24-1和-2，也可觀察到批量的影響。再者，具有小規模批料的示例性實施態樣26-1相同的組成和膠囊填充重量的放大批料的示例性實施態樣26-1呈現更好的氣霧劑性能性能，其顯示製造批量的影響。在示例性實施例7-9之結果的上下文中，不良氣霧劑性能進一步歸因於API 批料(與示例性實施例所使用者相同)的性質導致摻合物中不利的內聚或凝聚效應並在APSD分析期間導致細顆粒損失。此可能是因為該批料具有相對較高的殘餘丙酮含量(大约10 倍)，其在其他API批料未觀察到。
示例性實施態樣26的放大製造進一步顯示使用20%的活性摻合物可達成填充膠囊的摻合物均勻性和的氣霧劑性。
製造具有不同含量(例如2.5%和更少以及15%和更多)的精乳糖之本發明其他實施例。
使用部分不同的製造方法以(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I作為活性成分製造其他乾粉摻合物。
進行研究以調查在較高規模下，摻合方法開始前前初始層數的影響以及的摻合循環之間的篩分步驟的影響。
示例性實施態樣27-30的組成物係總結於下表36中。 表 36 ：示例性實施態樣27-30的組成物和不同混合時間的各個摻合物均勻性
示例性實施態樣27 示例性實施態樣28 示例性實施態樣29 示例性實施態樣30
API濃度和批量 (10%活性，200g) (10%活性，200g) (10%活性，200g) (10%活性，200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(ex.4) * 20.0 10% 20.0 10% 20.0 10% 20.0 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 170.0 85% 170.0 85% 170.0 85% 170.0 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 10.0 5% 10.0 5% 10.0 5% 10.0 5%
總計 200.0 200.0 200.0 200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 90 min 98% (1.5%) 100% (2.0%) 102% (2.4%) 97% (0.9%)
乳糖混合物中的 LH 300細顆粒含量 5.9% 5.9% 5.9% 5.9%
比率 活性成分：LH 100 1：8.5 1：8.5 1：8.5 1：8.5
比率 活性成分：LH 300 1：0.5 1：0.5 1：0.5 1：0.5
*以單水合物I使用，實施例4
示例性實施態樣27-30的製造方法與示例性實施態樣的不同之處在於步驟3、4和6中。
步驟3：在混合開始前將二者之間2個乳糖預摻合物層和1個活性成分層(示例性實施態樣27)及二者之間10個乳糖預摻合物層和9個活性成分層(示例性實施態樣28)稱入摻合容器。
步驟4：將摻合物在循環之間通過500µm篩子進行篩分(示例性實施態樣30)
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣27-30之填充膠囊的氣霧劑性能係顯示於下表37中 表 37 ：示例性實施態樣27-30之填充膠囊的氣霧劑性能
示例性實施態樣 27 示例性實施態樣 28 示例性實施態樣 29 示例性實施態樣 30
標稱劑量(膠囊) 75µg 1000µg 75µg 1000µg
粉末摻合物濃度 10% 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD) 556µg* 638µg* 598µg* 630µg*
DD (標稱的%) 56% 64% 60% 63%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 317µg 348µg 333µg 341µg
FPF (標稱的%) 32% 35% 33% 34%
FPF (DD的% ) 57% 55% 56% 54%
*由NGI中的回收總和測定 --- 在此時間點沒有測試。
從以臨床規模進行的此研究的結果顯示與初始初始預摻合物和API 層的數量無關以及與混合循環之間的篩分步驟無關，都能達成極佳摻合物均勻性和氣霧劑性能。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)作為活性成分和使用稍微不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
進行研究以調查高和低細乳糖含量對對既定摻合方法和所得氣霧劑性能的影響。
所得示例性實施態樣31-32和比較例33係總結於下表38中。 表 38 ：示例性實施態樣31-32和比較例33的組成物(乳糖含量)
示例性實施態樣31 示例性實施態樣32 比較例33
API濃度 和批量 (10%活性，50g) (10%活性，50g) (10%活性，50g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分：實施例4* 5.0 10% 5.0 10% 5.0 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 44.5 89% 43.75 87.5% 37.5 75%
細乳糖 (Lactohale 300) 0.5 1% 1.25 2.5% 7.5 15%
總計 50.0 50.0 50.00
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 107% (11.0%) 115% (9.7%) 88% (15.5%)
LH 300細顆粒含量 乳糖混合物中的** 1.1% 2.9% 20.0%
比率 活性成分：LH 100** 1：8.9 1：8.75 1：7.5
比率 活性成分：LH 300** 1：0.1 1：0.25 1：1.5
*以單水合物I使用 **細乳糖(LH 300)對粗乳糖(LH 100)的比率係解釋於根據本發明之示例性實施態樣的部分中。
示例性實施態樣31-32和比較例33之製造方法的不同之處在於步驟6。
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣31-32和比較例33之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表39中。 表 39 ：示例性實施態樣31-32和比較例33的氣霧劑性能
示例性實施態樣31 示例性實施態樣32 比較例33
標稱劑量 1000µg 1000µg 1000µg
活性成分的濃度，實施例4粉末摻合物中之 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 503 µg 484 µg 514 µg
DD (標稱的%) 50% 48% 51 %
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 310 µg 279 µg 314 µg
FPD (RSD %) 9.4% 8.4% 16.0%
FPF (標稱的%) 31% 28% 31 %
FPF (DD的% ) 62% 60% 65%
*由NGI中的回收總和測定
來自示例性實施態樣31-32和比較例33之填充膠囊的氣溶膠性能結果均達到目標。然而，以高乳糖細粒含量(15%)製造的比較例之混合均勻性較差，高於目標值15.5%。此實施例之細顆粒劑量的變化(RSD%)也很高。因此，具有＞15%之乳糖細粒含量的組成物被認為是不合適的，而低至1%的低乳糖細粒含量預計遞送具有適當製造和和氣霧劑性能性質的產物。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)作為活性成分和使用略為不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
進行研究以調查具有固有細顆粒(Lactohale 200)的粗磨乳醣類型，有或没另外的細乳糖(LH300)含量，對既定摻合方法和所得氣霧劑性能的影響。也進行研究以產生數據來與比較例20進行比較(參見表32)。
所得示例性實施態樣34-35係總結於下表40中。 表 40 ：示例性實施態樣34-35的組成(乳糖含量)
示例性實施態樣34 示例性實施態樣35
API濃度 和批量 (10%活性，50g) (10%活性，50g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分：實施例4* 5.0 10% 5.0 10%
粗乳糖(Lactohale 200) 45.0 90% 42.5 85%
細乳糖 (Lactohale 300) 0.0 0% 2.5 5%
總計 50.0 50.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 115% (6.7%) 112% (10.5%)
LH 300細顆粒含量乳糖混合物 0% 5.0%
比率 活性成分：LH 200** 1：9 1：8.5
比率 活性成分：LH 300** 1：0 1：0.5
*以單水合物I使用
示例性實施態樣34-35之製造方法的不同之處在於步驟6。
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣34-35之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表41中。 表 41 ：示例性實施態樣34-35的氣霧劑性能
示例性實施態樣34 示例性實施態樣35
標稱劑量 1000µg 1000µg
粉末摻合物中之活性成分(實施例4)的濃度 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 599 µg 645 µg
DD (標稱的%) 60% 65%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 197 µg 207 µg
FPD (RSD %) 8.0% 7.4%
FPF (標稱的%) 20% 21%
FPF (DD的% ) 32% 34%
*由NGI中的回收總和測定
來自示例性實施例34-35之填充膠囊的氣霧劑性能之結果滿足所有目標。兩種摻合物的摻合物均勻性是可接受的。氣霧劑性能僅略高於標稱FPF%和遞送劑量之%的目標限值。且與使用 LH100/LH300組成物的實施態樣相比，來自此等與示例性實施態樣31-32和比較例33相同的順序製造之實施態樣的結果顯著降低，顯示LH200 vs LH100粗乳糖的比較性能較差。添加5% LH300細粒不會導致更好的FPD/FPF結果。如比較例20所示，藉由將乳糖細粒增加至20%可能會提高性能，但因此會導致摻合方法和摻合物均勻性不足。使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)之乳糖摻合物在使用LH200粗乳糖(有和沒有高達5%之LH300)的既定方法中仍然顯示導致可接受的產物。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)作為活性成分和使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
該研究的範圍是製造本發明之其他實施態樣，其使用在2.5% - 7.5%範圍內改變之細乳糖含量，但使用具有粒徑略高/見表6)之不同細乳糖品質(Lactohale® 230)，而粗乳糖品質保持不變，並觀察方法和和氣霧劑性能。
所得示例性實施態樣36-38係總結於下表42中。 表 42 ：示例性實施態樣36 - 38的組成物
示例性實施態樣36 示例性實施態樣37 示例性實施態樣38
API 濃度和批量 (10%活性，200g) (10%活性，200g) (10%活性，200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(實施例4)* 20.0 10% 20.0 10% 20.0 10%
粗乳糖(Lactohale 100) 175.0 87.5% 170.0 85% 165.0 82.5%
細乳糖 (Lactohale 230) 5.0 2.5% 10.0 5% 15.0 7.5%
總計 200.0 200.0 200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 110% (9.6%) 100% (8.3%) 104% (5.6%)
60 min 111% (5.3%) 100% (3.7%) 109% (5.6%)
90 min 106% (6.7%) 103% (4.5%) 112% (9.3%)
120 min 103% (10.2%) --** -- 116% (11.7%)
LH 230細顆粒含量 乳糖混合物中的 2.8% 5.6% 8.3%
比率 活性成分：LH 100 1：8.75 1：8.5 1：8.25
比率 活性成分：LH 230 1：0.25 1：0.5 1：0.75
*以單水合物I使用 **數據不可得
示例性實施態樣34-35之製造方法的不同之處在於步驟6。
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣34-35之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表43中。摻合90分鐘(代表根據本發明之確立方法的摻合時間)後測量氣霧劑性能。 表 43 ：示例性實施態樣36-38的氣霧劑性能
示例性實施態樣36 示例性實施態樣37 示例性實施態樣38
標稱劑量 1000µg 1000µg 1000µg
實施例4粉末摻合物中之活性成分的濃度 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 490 µg 496 µg 642 µg
DD (標稱的%) 49% 50% 64%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 269 µg 259 µg 287 µg
FPF (標稱的%) 27% 26% 29%
FPF (DD的% ) 55% 52% 45%
*由NGI中的回收總和測定
來自示例性實施例36-38之填充膠囊的氣霧劑性能之結果滿足所有目標。兩種摻合物的摻合物均勻性是可接受的。所有摻合物的摻合物均勻性是可接受的，但是具有超出高細粒目標的趨勢(7.5%，示例性實施例38和更長的混合時間)。增加乳糖細粒(LH230)的含量顯示總遞送劑量增加，而FPD僅少量增加，並因此降低FPF(DD的%)。使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)之乳糖摻合物在使用LH200粗乳糖(與LH300微粉化乳糖粉相比具有不同的粒度分布)的既定方法中顯示導致可接受的產物和可製造性。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)作為活性成分和使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
該研究的範圍是製造本發明之其他實施態樣，其使用在2.5% - 7.5%根據本發明之細顆粒含量(LH300®)的範圍內之替代粗乳糖產物(Lactohale® 206，具有略小於Lactohale®100的粒徑，參見表6)，並觀察方法和氣霧劑性能。
所得示例性實施態樣39-41係總結於下表44中。 表 44 ：示例性實施態樣39 - 41的組成物
示例性實施態樣39 示例性實施態樣40 示例性實施態樣41
API 濃度和批量 (10%活性，200g) (10%活性，200g) (10%活性，200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(實施例4)* 20.0 10% 20.0 10% 20.0 10%
粗乳糖(Lactohale 206) 175.0 87.5% 170.0 85% 165.0 82.5%
細乳糖 (Lactohale 300) 5.0 2.5% 10.0 5% 15.0 7.5%
總計 200.0 200.0 200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 109% (9.2%) 117% (18.2%) 107% (14.7%)
60 min 107% (11.9%) 104% (17.2%) 98% (7.8%)
90 min 108% (15.5%) 104% (6.7%) 115% (19.4%)
120 min 101% (5.5%) 112% (11.7%) 118% (7.7%)
LH 300細顆粒含量 乳糖混合物中的 2.8% 5.6% 8.3%
比率 活性成分：LH 206 1：8.75 1：8.5 1：8.25
比率 活性成分：LH 300 1：0.25 1：0.5 1：0.75
*以單水合物I使用 **數據不可用
示例性實施態樣39-41之製造方法的不同之處在於步驟6。
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣39-41之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表45中。摻合90分鐘(代表根據本發明之確立方法的摻合時間)後測量氣霧劑性能。 表 45 ：示例性實施態樣39-41的氣霧劑性能
示例性實施態樣39 示例性實施態樣40 示例性實施態樣41
標稱劑量 1000µg 1000µg 1000µg
活性成分的濃度，實施例4粉末摻合物中之 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 606 µg 678 µg 596 µg
DD (標稱的%) 61% 68% 60%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 285 µg 304 µg 239 µg
FPF (標稱的%) 29% 30% 24%
FPF (DD的% ) 45% 45% 40%
*由NGI中的回收總和測定
來自示例性實施例39-41之填充膠囊的氣霧劑性能之結果滿足所有目標。摻合物均勻性對於摻合物是可接受的，然而並非所有時間點的所有摻合物都是可接受的。混合90 min後可見5%細粒為最佳，對應於根據本發明建立的方法。增加乳糖細粒(LH300)的含量並未顯示任何氣霧劑性能參數的所得傾向，而是在根據本發明之5%細粒下觀察到最佳性能。在既定方法中使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)之乳糖摻合物與LH300粗細乳糖和LH206粗乳糖(與LH100乳糖相比具有不同粒徑分布)顯示導致可接受的產物和可製造性。
使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物I(實施例4)作為活性成分和使用部分不同的製造方法製造其他乾粉摻合物。
該研究的範圍是製造本發明之其他實施態樣，其使用在2.5% - 7.5%細顆粒含量之範圍內之替代粗乳糖產物(LH206®)和替代細乳糖產物(LH230®)，並觀察方法和氣霧劑性能。
所得示例性實施態樣42-44係總結於下表46中。 表 46 ：示例性實施態樣42-44的組成物
示例性實施態樣42 示例性實施態樣43 示例性實施態樣44
API濃度和批量 (10%活性，200g) (10%活性，200g) (10%活性，200g)
量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%) 量 (g) 量 (%)
活性成分(實施例4)* 20.0 10% 20.0 10% 20.0 10%
粗乳糖(Lactohale 206) 175.0 87.5% 170.0 85% 165.0 82.5%
細乳糖 (Lactohale 230) 5.0 2.5% 10.0 5% 15.0 7.5%
總計 200.0 200.0 200.0
摻合物均勻性 分析 (RSD%) 30 min 104% (8.4%) 97% (5.6%) 110% (11.3%)
60 min 115% (12.9%) 111% (10.5%) 107% (9.4%)
90 min 109% (5.9%) 101% (9.1%) 112% (11.1%)
120 min 119% (10.5%) 113% (12.5%) 106% (6.5%)
LH 230細顆粒含量 乳糖混合物中的 2.8% 5.6% 8.3%
比率 活性成分：LH 206 1：8.75 1：8.5 1：8.25
比率 活性成分：LH 230 1：0.25 1：0.5 1：0.75
*以單水合物I使用 **數據不可用
示例性實施態樣42-44之製造方法的不同之處在於步驟6。
步驟6：將摻合物以所需的填充重量手動填充於膠囊中。
示例性實施態樣42-44之填充膠囊的氣霧劑性能之結果係總結於表47中。摻合90分鐘(代表根據本發明之確立方法的摻合時間，除了示例性實施例44，其中僅在摻合120分鐘後進行測量)後測量氣霧劑性能。 表 47 ：示例性實施態樣42-44的氣霧劑性能
示例性實施態樣42 示例性實施態樣43 示例性實施態樣44
標稱劑量 1000µg 1000µg 1000µg
實施例4粉末摻合物中之活性成分的濃度， 10% 10% 10%
填充重量 10 mg 10 mg 10 mg
遞送劑量(DD)* 569 µg 588 µg 599 µg
DD (標稱的%) 57% 59% 60%
細顆粒劑量 ＜4.5µm (FPD) 206 µg 206 µg 214 µg
FPF (標稱的%) 21% 21% 21%
FPF (DD的% ) 36% 35% 36%
*由NGI中的回收總和測定
來自示例性實施態樣42-44之填充膠囊的氣霧劑性能之結果滿足所有目標，然而都接近目標極限。摻合物均勻性對於摻合物是可接受的，然而並非所有時間點的所有摻合物都是可接受的。有時在混合90 min後，有時在120 min後觀察到最佳值。根據本發明之具有5%細乳糖的示例性實施態樣43在90 min後關於RSD%和摻合物分析是可接受的，而有時摻合物分析之結果大於110%的目標。增加乳糖細粒(LH300)的含量未顯示對任何氣霧劑性能參數有任何影響，對於所有實施態樣42-44是非常相似。使用式(I-M-I)之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸單水合物(實施例4)的乳糖摻合物在既定方法中與 LH230細乳糖(相較於LH300，具有不同粒徑分布)和LH206粗乳糖(相較於LH100乳糖，具有不同粒徑分布)係顯示導致可接受的產物和可製造性。
最後從上述實施例可得出結論：
乳糖載體的細乳糖含量可調整至剛好約1%或甚至更低，若例如使用具有固有細乳糖含量的粗乳糖(例如 lactohale 200®)。細乳糖的上限應調整至最多10或約最多15%，以免危及摻合物均勻性。通常，為了獲得呈現極佳氣霧劑性能之基於載體的調配物，某最小含量的細乳糖是必要的。 穩定性測試
分別用低濃度(120µg，根據本發明，示例性實施態樣1)和高濃度(1000µg 根據本發明，示例性實施態樣3)之各一個臨床批次的進行穩定性研究。對外觀、遞送劑量、空氣動力粒徑分布、分析和降解產物以及物理形態(僅限高濃度批次)進行穩定性測試。根據表34中概述的實驗程序(protocol)進行該研究。 表 48 ：穩定性實驗程序 - 包含實施例2的長期吸入用膠囊
儲存條件 儲存 [ 月 ]
0 1 3 6 9 12 18 24 36
25℃/60 % RH x x x x (x) x x x (x)
RH 相對濕度 x    測試站
(x) 視需要的測試站
在整個測試期，沒有觀察到任何測試參數有明顯改變的跡象。因此，根據本發明之粉末摻合物調配物對於所要用途和儲存期而言是足夠穩定的。穩定性數據列於下列表49中。 表 49 ：穩定性數據 –包含實施例2的長期吸入用膠囊
測試 驗收標準 儲存時間 [ 月 ] 實施態樣 1 (120µg) 實施態樣 2 (BN016/18) (1000µg)
調配物 初始 符合 符合
(硬膠囊，透明 & 無色 1 符合 符合
無標記) 3 符合 符合
6 符合 符合
12 符合 符合
18 符合 符合
24 符合 符合
膠囊內容物的外觀 初始 白色粉末 灰白色粉末
(白色至灰白色粉末) 1 白色粉末 白色粉末
3 白色粉末 白色粉末
6 白色粉末 白色粉末
12 白色粉末 白色粉末
18 白色粉末 白色粉末
24 白色粉末 白色粉末
遞送劑量均勻性 初始 71 625
平均遞送劑量 1 67 659
120µg：64 – 92 µg 3 75 691
1000µg：550 – 750 µg 6 70 625
12 66 644
18 63 646
24 68 660
等級1 (n=10) 初始 符合 符合
(10個中有9個必須介於75% 和125%之間 1 符合 符合
及(10個中有10個介於平均的 3 符合 符合
65%和135%之間) 6 符合 符合
12 符合 符合
18 符合 符合
24 符合 符合
等級2 (n=30) 初始 n.a. n.a.
(所有30個值中不超過3個   1 n.a. n.a.
超出75%至125%的極限，及 3 n.a. n.a.
沒有值 6 n.a. n.a.
超出平均值的 12 n.a. n.a.
65%至135%之極限) 18 n.a. n.a.
24 n.a. n.a.
氣動力粒徑 初始 3.2 3.1
分布 1 3.3 3.1
MMAD 3 3.4 3.2
(1.8 – 5.0µm) 6 3.3 3.1
12 3.5 3.1
18 3.5 3.3
24 3.5 3.1
FPD 初始 34 230
120µg：15 – 37 µg 1 24 235
1000µg 123 – 312µg 3 20 255
6 24 276
12 23 260
18 26 252
24 22 265
實施例 2 之降解產物 初始 ＜ 0.05 ＜ 0.05
BP 胺基酸 1   n.d.   n.d.
(max. 1.5 %) 3   n.d.   n.d.
6 ＜ 0.05 ＜ 0.05
12 ＜ 0.05 ＜ 0.05
18 ＜ 0.05 ＜ 0.05
24 ＜ 0.05 ＜ 0.05
BP-THQ-甲酸 初始 0.1 ＜ 0.05
(max. 1.5 %) 1 0.1   n.d.
3 0.1   n.d.
6 0.1   0.05
12 0.1   0.05
18 0.1   0.05
24 0.1   0.06
任何未指定的降解產物 初始 0.3 0.3
(max. 1.5 %) 1 0.3 0.3
3 0.3 0.3
6 0.3 0.3
12 0.3 0.3
18 0.3 0.3
24 0.3 0.3
所有降解產物的總和 初始 1.0 0.9
(max. 5.0 %) 1 0.8 0.8
3 0.8 0.7
6 0.8 0.8
12 1.0 0.9
18 1.2 1.0
24 1.1 1.1
實施例 2 的分析 初始 115 962
120µg：108 – 132 µg/膠囊 1 116 995
1000µg：900 – 1100 µg/膠囊 3 113 961
6 113 965
12 113 955
18 114 967
24 112 977
物理形式 初始 -- 單水合物
(單水合物) 1 -- --
3 -- --
6 -- --
12 -- 單水合物
18 -- --
24 -- 單水合物
n.d. = 未檢出，--未測試 D-2 用於臨床研究 ( 例如口服和靜脈內投予 ) 的工作 (service) 溶液
包含實施例4的工作(service)溶液：
用0.005%之濃度的活性成分(實施例4 (式(I-M-I)之單水合物I)) 以20 ml之總體積製造用於臨床研的工作溶液(參見實施例C-4.3)，最後裝入棕色玻璃瓶中。 表 50 ：包含實施例4之工作溶液的定量組成
組成 量 [mg] 填充量 a[mg]
藥物物質
活性成分，實施例4 (式(I-M-I)之單水合物I 1.0000 1.0450
賦形劑
羥丙基倍他環糊精 200.00 209.00
胺丁三醇 24.200 25.289
氯化鈉 152.00 158.84
氫氧化鈉1 N q.s. q.s.
鹽酸 10 % q.s. q.s.
注射用水 19773 20664
a   量包括0.9 ml溢出，確保可萃取體積為20.0 ml
b   根據現行版Ph. Eur. 由NaOH和純化水組成。
q.s. 適量
製造
步驟1：將約85%的所需注射用水量裝入容器中。
步驟2：將所稱量的羥丙基倍他環糊精轉移至容器中，攪拌溶液直至完全溶解。
步驟3：將所稱量的量胺丁三醇(trometamol)轉移至容器中，攪拌溶液直到完全溶解。
步驟4：用適當量的氫氧化鈉1 N將pH調整至12.0 (11.8 – 12.2) 。
步驟5：將所稱量的活性成分實施例4 (式(I-M-I)之單水合物I)轉移至容器中，攪拌溶液直到完全溶解。
步驟6：將所稱量的氯化鈉轉移至容器中，攪拌溶液直到完全溶解。
步驟7：用適當量的鹽酸10%將pH調整至7.8 (7.7 – 7.9)。
步驟8：計算最終重量的水量且添加所需量的注射用水並攪拌。
步驟9：將溶液經過預過濾(過濾器1)，負荷菌(bioburden)減少過濾器)和無菌過濾(過濾器2)，然後通過膜過濾器(孔徑0.2 µm)無菌裝入玻璃瓶中。
步驟10：將溶液裝入無菌去熱原的20 mL棕色玻璃注射瓶中。
步驟11：將小瓶加蓋並捲壓以完全封閉。 E – 分析方法 ( 遞送劑量、細顆粒劑量、摻合物分析 & 均勻性 )
以下詳細描述測定遞送劑量和細顆粒劑量的分析方法。
E-1 ： 遞送劑量 (DD) 該方法係根據Ph. Eur. Monograph Preparations for Inhalation – Powders for inhalation，以使用指定的樣品收集管(劑量單位取樣適配器 = DUSA)、數位流量計和真空泵之乾粉吸入器(參見說明，第89頁，圖3a和3b)和吸入膠囊(膠囊的製備參見C.)進行。取樣以90L/min的流量進行2.4 sec，對應於3.6L吸入體積。在20°C和40-55%RH下進行DD樣品製備。
使用具UV-偵測的高效高效液相層測量樣品(總結如下)
E-2 空氣動力粒徑分布 (APSD) ( 用於測定 FPD) 該方法係根據 Ph. Eur. 2.9.18 aerodynamic assessment of fine particles以使用設備 E (下一代衝擊器，NGI)、數位流量計和真空泵之乾粉吸入器(參見說明，第89頁，圖3a和3b)和吸入膠囊(膠囊的製備參見C.)進行。各NGI取樣杯以2mL的1%聚矽氧油在己烷中之溶液塗布。取樣以90L/min的流量進行2.4 sec，對應於3.6L吸入體積。在20°C和40-55%RH下進行DD樣品製備。對於120µg膠囊，5個個別膠囊如上所述連續發射到NGI 中，對於更高的劑量濃度(例如480µg、1000µg)，每次NGI分析一個膠囊就足夠了。
使用具有UV偵測的逆相高效液相層析測量樣品(總結如下)
RP-HPLC-UV方法 ( 用於 APSD 和 DD 測試和膠囊分析的樣品 ) 該分析方法係用於在遞送劑量均勻性(藉由DUSA取樣管)和氣動力粒徑測定(藉由下一代撞擊器)期間的樣品中之實施例2或4或比較例14的含量之分析。
設備 具有恆溫管管柱烘箱、UV-偵測器或二極體陣列偵測器和層析數據系統之高效液相層析儀
管柱 HPLC 管柱 Poroshell 120 EC-C8，2.7 µm，150 × 4.6 mm。
樣品稀釋劑 [Sol] 乙腈/水/磷酸 50/50/0.35(用於APSD & DD)
酸化水 磷酸/水 (7：1000 (v：v))
樣品製備 將所需數量的膠囊傾空至含有酸化水的容量瓶中。用乙醇沖洗膠囊並將包括膠囊殼的溶液轉移至容量瓶。所得溶液具有6µg/mL的濃度。 用於APSD之樣品係藉由NGI杯用乙腈萃取製備。 用於DD之樣品係藉由用樣品稀釋劑洗滌樣品管來製備。
HPLC條件
溶析液 A) 52：48 H 2O：具有0.3 %磷酸之MeCN。
B) 5：95 H 2O：具有0.3 %磷酸之MeCN。
溶析 梯度
時間 (min) %A %B
0.0 100 0
6.0 100 0
6.5 0 100
8.0 0 100
8.5 100 0
11.0 100 0
層析圖運行時間 11分鐘
流速 1.5 mL/分鐘
管柱烘箱的溫度 35 ºC (± 2 ºC)
偵測 於260 nm之分光光度計
注入體積 100 µL
E-3 摻合物分析/均勻性(HPLC) 具有UV-偵測之高效液相層析(HPLC)。
設備 1. 具有恆溫管管柱烘箱、UV-偵測器或二極體陣列偵測器和層析數據系統之高效液相層析儀。
2. HPLC 管柱 Poroshell 120 EC-C8，2.7 µm，150 × 4.6 mm。
3. 超音波浴。
試劑 1. 磷酸 (例如Merck).
2. 乙腈 (MeCN) (HPLC-級).
3. 去礦質水(例如Millipore).
樣品稀釋劑 [Sol] 乙腈/水/磷酸 50/50/0.35
酸化水 磷酸/水 (7：1000 (v：v))
試液 [TS] 製備試液10倍。所有測試溶液在周圍/光照條件下穩定7天。
7.5 µg/mg 摻合濃度(1.2 µg/mL樣品溶液) 目標膠囊濃度：60 µg 將約8.0 mg的7.5 µg/mg散裝摻合物精確稱入50 mL容量瓶中。溶解並用稀釋劑使至該容量以產生1.2 µg/mL實施例2或4或比較例14溶液。
7.5 µg/mg 摻合濃度(1.2 µg/mL樣品溶液) 目標膠囊濃度：120 µg 將約16.0 mg的7.5 µg/mg散裝摻合物精確稱入100 mL容量瓶中。溶解並用稀釋劑使至該容量以產生1.2 µg/mL實施例2或4或比較例14溶液。
30 µg/mg 摻合濃度 (4.8 µg/mg 儲備溶液，(1.44 µg/mL樣品溶液) 將約16.0 mg的30 µg/mg摻合物精確稱入100 mL容量瓶中。溶解並用稀釋劑使至該容量及用稀釋劑稀釋3.0mL至10mL以產生1.4µg/mL實施例2或4或比較例14溶液。
目標膠囊濃度：480 µg 100 µg/mg 摻合濃度(5 µg/mg 儲備溶液，1.5 µg/mL樣品溶液) 目標膠囊濃度：1000 µg 將約10.0 mg的散裝摻合物精確稱入200 mL容量瓶中。溶解並用稀釋劑使至該容量，及用稀釋劑稀釋6.0 mL至20 mL以產生1.5µg/mL實施例2或4或比較例14溶液。
標準儲備溶液 [SSS] (15 µg/mL) 稱取產生約15 µg/mL溶液所需之實施例2或4或比較例14參考標準的量並轉移到100 mL容量瓶中。超音波處理並用稀釋劑稀釋至該容量。將儲備溶液標記為 SSS 1和SSS 2。
可使用不同重量的標準物質和不同的稀釋步驟，若彼等導致相同的最終濃度。
標準溶液 [SS] (1.5 µg/mL) 使用稀釋劑將5.0 mL的各標準標準品稀釋至50 mL，並充分混合以產生工作標準溶液。
HPLC條件 如遞送劑量和細顆粒劑量所述。
E-4 粒徑分布  (雷射繞射) 適用於例如API或乳糖
原理 將適當濃度分散在適當液體或氣體中的代表性樣品通過單色光束，通常是雷射。藉由多元素偵測器以各種角度散射的光測量顆粒。然後使用適當的光學模式和數學程序轉換散射圖案值，以產生形成體積粒徑分布之總體積與尺寸等級的離散數量之比例。
設備 具有RODOS`乾燥分散體單元之Sympatec HELOS
參數 壓力：4巴 進給率：18% 焦距 (RODOS)：100 mm
精確度 變異係數  max 5%
用於雷射繞射測量的替代配置
設備 具有乾燥分散體單元之Malvern Mastersizer 3000
參數 壓力：3.5巴 進給率：20 % 焦距：300 mm 取樣時間：3s
精確度 變異係數：max  5%
粒徑分析數據通常報告為計算的累積過細體積分布。符號x用於表示粒徑，其定義為體積等效球體的直徑。最常見的特徵值係以內插法從粒徑分布計算。經常使用為體積分布的10%、50%和90%的細體值之粒徑，表示為x10、x50和x90。x50也稱為中值粒徑。符號d廣泛用於指定粒徑，因此符號x可用符號d代替。 E-5 另外的穩定性測試方法
外觀 看得見的測試
RP-HPLC-UV方法 (用於降解產物) 具有於260 nm之UV-偵測和外部校準之逆相高效液相層析 (HPLC)。
設備 具有恆溫管管柱烘箱、UV-偵測器或二極體陣列偵測器和層析數據系統之高效液相層析儀
管柱 HPLC 管柱 Poroshell 120 EC-C8，2.7 µm，150 × 4.6 mm.
樣品稀釋劑 [Sol] 乙腈/水/磷酸 50/50/0.35
酸化水 磷酸/水 (7：1000 (v：v))
樣品製備 將所需數量的膠囊傾空至含有酸化水的容量瓶中。用乙腈沖洗膠囊並將没有膠囊殼的溶液轉移至容量瓶。用乙腈使容量瓶至體積以產生60µg/mL實施例2或4或比較例14溶液。
HPLC條件
溶析液 A) 55：45 H 2O：具有0.3 %磷酸之MeCN。
B) 5：95 H 2O：具有0.3 %磷酸之MeCN。
溶析 梯度
時間 (min) %A %B
0.0 100 0
12.0 100 0
32.0 0 100
35.0 0 100
35.1 100 0
42.0 100 0
層析圖運行時間 42分鐘
流速 1.5 mL/分鐘
管柱烘箱的溫度 35 ºC (± 2 ºC)
偵測 於260 nm之分光光度計
注入體積 100 µL
多晶形現象 – X射線粉末繞射
方法原理 固態形式的鑑定係根據‘藉由X射線粉末繞射之晶形和部分晶形固體之加以表徵’ (Ph. Eur. 2.9.33)的測試程序進行。
樣品製備： 將錠劑或壓碎的錠劑以薄層包封在兩層箔(例如聚乙酸酯箔紙)之間。
設備： X射線粉末繞射計
產生器： 40 kV / 40 mA
偵測器： Mythen (PSD)
輻射： 鍺單色化CuKα1-輻射
技術： 透射
掃描範圍： 5° 2 30°
步寬： 0.1°
測量時間： Mythen 60 sec/步(PSD 240 sec/步)
E-6 表徵成品乾粉摻合物中 API 和乳糖顆粒的顆粒分布和大小的其他方法
方法原理 自動光學和拉曼顯微鏡整合系統，用於分析複合粉末樣品的形態/粒徑和數量，同時鑑定粉末摻合物組分的化學性質。
設備： Malvern Morphologi 4-ID
乾燥分散體(示例性設定)： 體積：5 mm 3壓力：3巴 分散體時間：3 ms 沉降時間：60 s
形態(示例性設定)： 光源：透射：Diascopic 物鏡(放大倍率)x50 掃描面積 784 mm 2
拉曼(示例性設定) ： 獲取時間：15 s 光譜掩蔽：在0.520 cm -1和790 – 1740 cm -1區域
無
圖1：在投予0.15、0.5、1.5和5 µg/kg比較例11後觀察到(符號)和擬合(實線)的肺動脈壓(=PAP)改變
圖2：60 kg人類在對應肺沉積劑量下之最大預期PAP降低
圖 3a + 3b：基於膠囊的單一單位劑量吸入器
圖4：基於使用L-精胺酸之鹽篩選實驗的非晶形殘餘物的X射線粉末繞射圖
圖5：半水合物(實施例6a)的X射線粉末繞射圖
圖6：單水合物I(實施例6b)的X射線粉末繞射圖
圖7：單水合物II(實施例6c)的X射線粉末繞射圖
圖8：1,25-水合物(實施例6d)的X射線粉末繞射圖
圖9：倍半水合物(實施例6e)的X射線粉末繞射圖
圖10：二水合物(實施例6f)的X射線粉末繞射圖
圖10a：二水合物乾燥後(實施例6f)的X射線粉末繞射圖
圖11：非晶形(實施例6g)的X射線粉末繞射圖
圖12：半水合物(實施例6a)之拉曼光譜
圖13：單水合物I(實施例6b)之拉曼光譜
圖14：單水合物II(實施例6c)之拉曼光譜
圖15：1,25-水合物(實施例6d)之拉曼光譜
圖16：倍半水合物(實施例6e)之拉曼光譜
圖17：二水合物(實施例6f)之拉曼光譜
圖18：非晶形(實施例6g)之拉曼光譜
圖19：半水合物(實施例6a)之IR光譜
圖20：單水合物I(實施例6b)之IR光譜
圖21：單水合物II(實施例6c)之IR光譜
圖22：1,25-水合物(實施例6d)之IR光譜
圖23：倍半水合物(實施例6e)之IR光譜
圖24：二水合物(實施例6f)之IR光譜
圖25：非晶形(實施例6g)之IR光譜
圖26：半水合物(實施例6a)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖27：單水合物I(實施例6b)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖28：單水合物II(實施例6c)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖29：1,25-水合物(實施例6d)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖30：倍半水合物(實施例6e)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖31：二水合物(實施例6f)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖32：非晶形(實施例6g)之DSC-和TGA-溫度記錄圖
圖33：比較例11(非晶形)的X射線粉末繞射圖
圖34：實施例1(單水合物II)的X射線粉末繞射圖
圖35：實施例2微粉化前(單水合物II)的X射線粉末繞射圖
圖36：實施例2微粉化後(單水合物II)的X射線粉末繞射圖
圖37：實施例3(單水合物I)的X射線粉末繞射圖
圖38：實施例4(單水合物I)的X射線粉末繞射圖
圖39：實施例5(單水合物I)的X射線粉末繞射圖
圖40：實施例7的X射線粉末繞射圖(儲存穩定性)：用於儲存穩定性之起始材料，單水合物II
圖41：實施例7的X射線粉末繞射圖(儲存穩定性)：材料在儲存一個月後在25℃和60 % 相對濕度下在聚乙烯中之穩定性測試，單水合物I
圖42：實施例8b(微粉化)的X射線粉末繞射圖之疊加：起始材料(單水合物II)和材料微粉化後(具有非晶形量之單水合物II，PTFE塗布之噴射磨機，25℃)
圖43：實施例8a (微粉化)的X射線粉末繞射圖：材料微粉化後(具有非晶形量之單水合物I，VA噴射磨機，25℃)
圖44：X射線粉末繞射圖(實施例8e)(微粉化)：材料微粉化後(單水合物I)
圖45a + 45b：比較例11與比較例1(西那西瓜)對兔隱動脈的PE-誘發之收縮(培養 0.5 h vs. 2.5 h)的效應相比。數據以平均值 +/- SEM (數字)呈現
圖46：比較例11 (300 nmol/l)、比較例2 (100 nmol/l：里奧西瓜、比較例1 (100 nmol/l：西那西瓜)和比較例3 (100 nmol/l)對離體Langendorff 灌注大鼠心臟的冠心血流和彼等之洗出的效應。數據僅以平均值表示。
圖47：媒液溶液、比較例11(30 µg/kg)、比較例1(西那西瓜：3和10 µg/kg)、比較例2(里奧西瓜：100 µg/kg)和比較例3 (30 µg/kg)在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後對BP vs 基線(霧化開始前的5 min間隔)之%改變的效應。數據為平均值 ± SEM。
圖48：媒液溶液、比較例11 (30 µg/kg)、比較例1 (西那西瓜：3和10 µg/kg)、比較例2 (里奧西瓜：100 µg/kg)和比較例3 (30 µg/kg)在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後對PAP vs 基線(霧化開始前的5 min間隔)之%改變的效應。數據為平均值 ± SEM。
圖49：媒液溶液、比較例11、比較例4和比較例5 (全部化合物均以100 µg/kg的標稱劑量)在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後對PAP和BP vs 基線(霧化開始前的5 min間隔)之%改變的效應。數據為平均值 ± SEM。所有化合物的霧化間隔需要5-7分鐘(黃色條)。
圖50：在PAH小型豬模式中媒液溶液、比較例11(10、30和100 µg/kg標稱劑量)和Ventavis(10 µg/kg標稱劑量)在吸入施用後的效應。數據以PAP和BP vs 基線(霧化開始前的10 min間隔)中之%改變%表現。數據為平均值 ± SEM。所有化合物的霧化間隔需要5-7分鐘(灰色條)。
圖51：比較例11在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後有和没有以ODQ預治療的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)
BP：動脈血壓：bpm：每分鐘節拍：HR：心率：iv：靜脈內：mBP：平均血壓：mPAP：平均肺動脈壓：ODQ： 1H-[1,2,4]㗁二唑并[4,3-a]喹㗁啉-1-酮，一種可溶性鳥苷酸環化酶之高選擇性不可逆血色素位置抑制劑：PAH：肺動脈高血壓：PAP：肺動脈壓：SEM：
圖52：比較例11在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下吸入施用後有和没有以L-NAME預治療的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3) iv.：靜脈內：L-NAME：L-Nω-硝基精胺酸甲酯：mBP：平均血壓：mPAP：平均肺動脈壓：PAH：肺動脈高血壓：PAP：肺動脈壓；SEM：平均值的標準誤差：w/wo： 有/没有：wo：没有
圖53a：在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下，與全身應用波生坦(1mg/kg)、西地那非(300 µg/kg/h)和里奧西瓜(3 µg)相比，比較例11(30和100 µg/kg標稱劑量)吸入施用後對PAP和BP之%降低的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)
圖53b：在小型豬中在凝血脂素類似物U46619誘發之PAH下，比較例11 (30 µg/kg標稱劑量)單獨吸入施用後或除全身性施用波生坦(1mg/kg)、西地那非(300 µg/kg/h)和里奧西瓜(3 µg/kg/h)之外對PAP和BP之%降低的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)
圖54：乳糖以及乳糖調配物I (7.5 µg/kg)氣管內施用後的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)：以PennCentury乾粉吹入器和空氣泵進行氣管內施用：BP：動脈血壓：PAP：肺動脈壓：SEM：平均值的標準誤差
圖55：乳糖以及乳糖調配物II (22.5 µg/kg)氣管內施用後的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)：以PennCentury乾粉吹入器和空氣泵進行氣管內施用：BP：動脈血壓：PAP：肺動脈壓：SEM：平均值的標準誤差
圖56：乳糖和微粉化倍半水合物(例如實施例6e (375 µg/kg))氣管內施用後的效應。數據為平均值 ± SEM (n=3)以PennCentury乾粉吹入器和空氣泵進行氣管內施用：BP：動脈血壓：PAP：肺動脈壓：SEM：平均值的標準誤差
圖57：不同乳糖媒液、乳糖調配物I (7.5 µg/kg)、乳糖調配物II (22.5 µg/kg)和微粉化倍半水合物實施例6e (375 µg/kg)之氣管內施用後的效應。數據以%改變 vs. 預置值顯示，呈平均 ± SEM (n=3)
圖58：比較例11在氣管內施用不同水合物：微粉化單水合物II (實施例2)、微粉化半水合物(實施例6a)和微粉化倍半水合物(實施例6e)後對BP和PAP的效應。數據以絕對值[mmHg]顯示，呈平均值 ± SEM (n=3)
圖59：比較例11在氣管內施用不同水合物：微粉化單水合物II (實施例2)、微粉化半水合物(實施例6a)和微粉化倍半水合物(實施例6e)後對BP和PAP的效應。數據以絕對值[mmHg]顯示，呈平均值 ± SEM (n=3)
圖60 a和60b：圖60a (左側)：吸入後5-6h：各動物之PAP降低計算如下：PAP降低= (比較例11治療動物之從10-40min的mPAP的總和)-(各個安慰劑治療動物之從10-40min的mPAP的總和)/時間點數目：圖60b：(右側)：在清醒狗中比較例11 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對缺氧誘發之PAP升高的效應。數據顯示為平均值 ± SEM (n=3)。
圖61a-61e：在清醒狗中比較例11和比較例4 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對缺氧誘發之PAP升高的效應。數據顯示為平均值 ± SEM (n=3)
圖62：在清醒狗中比較例11和比較例4 (100 µg/kg標稱劑量)在缺氧前1、5、12、16和24小時吸入施用後對PAP降低的效應。數據顯示為平均值 ± SEM (n=3)
圖63：在小型豬中在8次支氣管阻塞循環期間比較例11吸入和i.v. 施用和媒液投予後對PAP和SaO 2的效應。數據為平均值 (n=3-4)：i.v. / iv.：靜脈內：inhal：吸入：PAP：肺動脈壓：SaO 2：血紅素之動脈氧飽和度
圖64：在小型豬中在8次支氣管阻塞循環期間比較例11吸入和i.v. 施用和媒液投予後對BP和HR的效應。數據為平均值 (n=3-4) BP：動脈血壓：HR：心率：i.v.：靜脈內：inhal：吸入：iv.：靜脈內
圖65：基於代表性循環的效應，比較例11降低最大缺氧PAP(正治療效應)和AUCSaO2 (不要的去飽和效應)的能力(n = 4隻動物)；數據為平均值±SEM (n=4) 比較例11 吸入(100 µg/kg標稱劑量)：i.v. 30和100 µg/kg AUCSaO 2：SaO 2曲線下面積：iv / i.v.：靜脈內：PAP：肺動脈壓：SaO 2：血紅素之動脈氧飽和度：SEM：平均值的標準誤差：VQ：通氣灌注：一些誤差線(error bar)太小而無法看到。
圖66：比較例1 (西那西瓜)、比較例11和比較例2 (里奧西瓜)對用卡巴可(carbachol)(0.1 µmol/L)預收縮之天竺鼠氣管的效應 (n = 9-13隻動物)：數據為平均值
圖67a和67b：在基線條件(基線RL)和乙醯膽鹼激發後(最大RL)噻托溴銨(Tiotropium)和比較例11 (1、10和100µg)對肺阻力(RL)的效應。數據以單一動物的絕對值呈現。
圖68：晚期過敏期(最終Ova激發後24 h)中之氣道高反應性：產生阻力的150%增加之有效吸入MCh劑量(µg))(ED 150。個別數據和平均) *p ＜ 0.05。**p ＜ 0.01 與陽性對照組相比。#p ＜ 0.05在單一t-測試中) ED 150：150%的最大有效劑量：MCh：乙醯甲膽鹼：R L：肺阻力
圖69a-c：總細胞計數。卵清蛋白激發後25 h BAL液中嗜酸性球數和淋巴細胞數 (x105/動物：個別數據和平均) **p ＜ 0.01 vs. 陽性對照組：#p ＜ 0.05 ##p ＜ 0.01陽性對照組 BAL：支氣管肺泡灌洗：vs.  對
圖70：480 µg (實施例2)劑量組的cGMP (nmol/L)之平均值 ± SD – 治療前 (第天-1)、第一 (第1天)和最後(第8天)治療日的比較(SAF，N = 9)
圖71：1000 µg (實施例2)劑量組的cGMP (nmol/L)之平均值 ± SD –治療前 (第-1天)、第一 (第1天)和最後(第8天)治療日的比較(SAF，N = 9)
圖72：2000 µg (實施例2)劑量組的cGMP (nmol/L)之平均值 ± SD – 治療前 (第-1天)、第一 (第1天)和最後(第8天)治療日的比較(SAF，N = 9)
圖73：GMP (nmol/L)之平均值 ± SD – 安慰劑之治療日組的比較(SAF，N = 9)
圖74：在基線日(-1d02h 的比較))vs.、第一吸入日(0d00h -2d00h)、谷測量2d00h-7d00h和7天吸入後(7d00h- 10d00h)之體液中cGMP 隨時間(nmol/L)的平均值(N = 9) 10d0。
圖75：總比氣道阻力(kPa/sec)隨時間的平均值(N = 36，12 各用於480、1000和2000 µg，實施例2)和SD：篩選1/2，基線日 (-1d00h – 0d00h)、第一吸入日(0d00h - 0d06h)、吸入2d02h- 6d04h後和7天吸入後(7d00h-7d06h)的測量。
圖76：安慰劑(N = 4)和1000 µg (N = 17)實施例4)在治療前一天(-1d00h – -0d09h)、第一吸入日(-0d02h - 1d00h；)、在2d00h- 2d12h、6d00h- 6d12h、10d00h- 10d12h吸入前和後(輪廓日)、在第3d-5d、7d-9d、11d-12d天和14天吸入之最後一天前及後(12d22h- 20d00h)的谷之對基線的cGMP濃度隨時間(nmol/L)的平均值。
圖77：為了研究肺沉積進行之治療的流程
圖78：血漿中實施例 4之濃度(µg/L)的幾何平均值和標準差，半對數刻度。
圖79：部分劑量到達吹嘴(噴出劑量)，部分劑量保留在膠囊中，在裝置中，沉積的肺劑量和部分劑量到達GIT道
圖80：PAH或CTEPH患者之臨床研究的研究設計。
圖81：在PAH或CTEPH患者中進行的臨床研究A部分之總結。
圖82：在PAH或CTEPH患者中，實施例4吸入後(0D00H30M直到0D03H00M)之肺血管阻力(PVR)隨時間相對於基線(0D00H00M)的相對改變(%)之平均和SD(N=4，各用於240、480、1000、2000和4000 µg組，每個方案組)。
圖83：在PAH或CTEPH患者中，實施例4吸入後(0D00H30M直到0D03H00M)之平均肺動脈壓(mPAP)隨時間相對於基線(0D00H00M)的相對改變(%)之平均和SD(N=4，各用於240、480、1000、2000和4000 µg組，每個方案組)。
無

Claims (15)

  1. 一種使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之晶形變體晶形變體單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸的吸入劑型係每天一次或兩次為期連續至少兩天投予至有需要的患者，其中該化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2之峰，以2θ值± 0.2°表示。
  2. 根據請求項1之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含作為載體之乳糖單水合物，其中該載體包含粗和細乳糖的混合物。
  3. 根據請求項1或2之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸係投予為期連續至少14天，特別是從治療開始後的整個疾病過程。
  4. 根據請求項1至3中任一或多項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含480至2000 µg的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。
  5. 根據請求項1至4中任一或多項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的形式之呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。
  6. 根據請求項1至5中任一或多項之使用於心肺病症的吸入治療之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其特徵在於呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)-乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸係經由乾粉吸入器投予。
  7. 一種治療心肺病症之方法，其包含將包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸之吸入劑型每天一次或兩次為期至少連續五到七天投予至有需要的患者，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2(較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2)之峰，以2θ值± 0.2°表示。
  8. 根據請求項7之治療心肺病症之方法，其特徵在於該吸入劑型包含在膠囊內之呈乾粉的活性成分。
  9. 根據請求項1至8中任一項之方法或用途，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之清單：肺動脈高血壓(PAH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
  10. 一種使用於心肺病症的吸入治療之藥劑，其特徵在於其包含吸入劑型，其包含240至4000 µg的呈式(I-M-I)之單水合物I的形式之式I之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2之峰，較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2，以2θ值± 0.2°表示，其中該藥劑每天一次或兩次為期至少連續兩天投予至有需要的患者。
  11. 一種使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於其含有乾粉吸入器和乾粉調配物，該乾粉調配物包含240至4000 µg的呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，其中式(I-M-I)化合物的X射線粉末繞射圖(在25℃下且使用Cu-K α1作為輻射源測量)包含至少於12.8和29.2之峰，較佳於6.9、7.2、7.3、12.8和29.2，以2θ值± 0.2°表示，其中該包裝含有以每天一次或兩次的頻率為期至少連續兩天投予該乾粉調配物的說明。
  12. 根據請求項11之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該心肺病症係選自由下列組成之清單：肺動脈高血壓(PAH)和與慢性肺部疾病相關之肺高血壓(PH)(第3組PH)諸如慢性阻塞性肺病中之肺高血壓(PH-COPD)和肺高血壓併發特發性間質性肺炎(PH-IIP)。
  13. 根據請求項11或12之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該包裝進一步含有藉由吸入使用該乾粉調配物以治療心肺病症的說明，其中吸入程序描述如下：深吸一口氣後，患者應屏住呼吸約2秒鐘，以使乾粉藥物從氣流中濃縮至更深的肺部區域表面，沉積在靠近其所欲藥理作用之位置。
  14. 根據請求項9至13中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該乾粉調配物包含(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4’-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]-胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸，較佳地呈在膠囊中之式(I-M-I)之單水合物I的形式。
  15. 根據請求項9至14中任一項之使用於心肺病症的吸入治療之經包裝醫藥組成物，其特徵在於該乾粉調配物包含480至2000 µg的呈其式(I-M-I)之單水合物I的形式之(5S)-{[2-(4-羧苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)聯苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]胺基}-5,6,7,8-四氫喹啉-2-甲酸。
TW111150447A 2021-12-29 2022-12-28 心肺病症之治療 TW202342034A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP21218165.5 2021-12-29
EP21218165 2021-12-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202342034A true TW202342034A (zh) 2023-11-01

Family

ID=79025014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111150447A TW202342034A (zh) 2021-12-29 2022-12-28 心肺病症之治療

Country Status (9)

Country Link
US (1) US12138256B2 (zh)
EP (1) EP4456896A1 (zh)
JP (1) JP2025501309A (zh)
KR (1) KR20240144178A (zh)
CN (1) CN118765199A (zh)
AU (1) AU2022424376A1 (zh)
IL (1) IL313920A (zh)
TW (1) TW202342034A (zh)
WO (1) WO2023126437A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118765272A (zh) 2021-12-29 2024-10-11 拜耳股份公司 制备用作药物活性化合物的(5s)-{[2-(4-羧基苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)联苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]氨基}-5,6,7,8-四氢喹啉-2-甲酸及其结晶形式的方法
WO2023126437A1 (en) 2021-12-29 2023-07-06 Bayer Aktiengesellschaft Treatment of cardiopulmonary disorders
CN118717697A (zh) * 2024-09-04 2024-10-01 杭州沐源生物医药科技有限公司 一种盐酸贝尼地平片组合物及其制备方法和应用

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE8004002L (sv) 1980-05-29 1981-11-30 Arvidsson Folke Lars Erik Terapeutiskt anvendbara tetralinderivat
IL65501A (en) 1981-05-08 1986-04-29 Astra Laekemedel Ab 1-alkyl-2-aminotetralin derivatives,process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
DE3718317A1 (de) 1986-12-10 1988-06-16 Bayer Ag Substituierte basische 2-aminotetraline
DE3719924A1 (de) 1986-12-22 1988-06-30 Bayer Ag 8-substituierte 2-aminotetraline
KR100195656B1 (ko) 1989-05-31 1999-06-15 로버트 에이.아미테이지 치료학적으로 유용한 2-아미노테트랄린 유도체
FR2659853A1 (fr) 1990-03-22 1991-09-27 Midy Spa Utilisation de derives 2-aminotetraliniques pour la preparation de medicaments destines a combattre les troubles de la motricite intestinale.
CA2180841C (en) 1994-01-10 2007-03-27 Sasson Cohen 1-aminoindan derivatives and compositions thereof
PT1083889E (pt) 1998-06-01 2004-04-30 Ortho Mcneil Pharm Inc Compostos de tetra-hidronaftaleno e sua utilizacao no tratamento de doencas neurodegenerativas
DE19834047A1 (de) 1998-07-29 2000-02-03 Bayer Ag Substituierte Pyrazolderivate
DE19834044A1 (de) 1998-07-29 2000-02-03 Bayer Ag Neue substituierte Pyrazolderivate
GB9827467D0 (en) 1998-12-15 1999-02-10 Zeneca Ltd Chemical compounds
DE19943635A1 (de) 1999-09-13 2001-03-15 Bayer Ag Neuartige Aminodicarbonsäurederivate mit pharmazeutischen Eigenschaften
AR031176A1 (es) 2000-11-22 2003-09-10 Bayer Ag Nuevos derivados de pirazolpiridina sustituidos con piridina
DE10109858A1 (de) 2001-03-01 2002-09-05 Bayer Ag Neuartige halogensubstituierte Aminodicarbonsäurederivate
DE10109861A1 (de) 2001-03-01 2002-09-05 Bayer Ag Neuartige seitenkettenhalogenierte Aminodicarbonsäurederivate
DE10109859A1 (de) 2001-03-01 2002-09-05 Bayer Ag Neuartige Aminodicarbonsäurederivate
DE10110749A1 (de) 2001-03-07 2002-09-12 Bayer Ag Substituierte Aminodicarbonsäurederivate
DE10110750A1 (de) 2001-03-07 2002-09-12 Bayer Ag Neuartige Aminodicarbonsäurederivate mit pharmazeutischen Eigenschaften
DE10220570A1 (de) 2002-05-08 2003-11-20 Bayer Ag Carbamat-substituierte Pyrazolopyridine
WO2004093848A2 (en) 2003-04-14 2004-11-04 Vectura Ltd Dry power inhaler devices and dry power formulations for enhancing dosing efficiency
US20050032873A1 (en) 2003-07-30 2005-02-10 Wyeth 3-Amino chroman and 2-amino tetralin derivatives
WO2006104826A2 (en) 2005-03-30 2006-10-05 Merck & Co., Inc. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
DE102005050377A1 (de) 2005-10-21 2007-04-26 Bayer Healthcare Ag Heterocyclische Verbindungen und ihre Verwendung
US20090048295A1 (en) 2007-08-13 2009-02-19 Joseph Kent Barbay Substituted 5,6,7,8-tetrahydroquinoline derivatives, compositions, and methods of use thereof
KR20100059952A (ko) 2007-09-06 2010-06-04 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 가용성 구아닐레이트 사이클라제 활성제
JP2011185957A (ja) 2008-07-04 2011-09-22 Sharp Corp 偏光板、表示装置及びその製造方法
JP5937353B2 (ja) 2008-08-19 2016-06-22 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｎａａｍｌｏｚｅ Ｖｅｎｎｏｏｔｓｃｈａｐ 冷感−メントール受容体拮抗剤
DE102010020553A1 (de) 2010-05-14 2011-11-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Substituierte 8-Alkoxy-2-aminotetralin-Derivate und ihre Verwendung
DE102010021637A1 (de) 2010-05-26 2011-12-01 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Substituierte 5-Fluor-1H-Pyrazolopyridine und ihre Verwendung
EP2585055A1 (de) 2010-06-25 2013-05-01 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung von stimulatoren und aktivatoren der löslichen guanylatzyklase zur behandlung von sichelzellanämie und konservierung von blutersatzstoffen
JP6114189B2 (ja) 2010-07-09 2017-04-12 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 縮合ピリミジンおよびトリアジンならびに心血管障害の処置および／または予防のためのその使用
DE102010040233A1 (de) 2010-09-03 2012-03-08 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Bicyclische Aza-Heterocyclen und ihre Verwendung
DE102010043379A1 (de) 2010-11-04 2012-05-10 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Substituierte 6-Fluor-1H-Pyrazolo[4,3-b]pyridine und ihre Verwendung
EP2683710B1 (en) 2011-03-10 2017-07-19 Boehringer Ingelheim International GmbH Soluble guanylate cyclase activators
MY166970A (en) 2011-08-12 2018-07-26 Nissan Chemical Ind Ltd Subtituted pyrrolo [2,3-h][1,6]naphthyridines and compositions thereof as jak inhibitors
CN104245663B (zh) 2012-04-16 2016-10-26 东亚荣养株式会社 二环化合物
CA2879456A1 (en) 2012-07-20 2014-01-23 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted aminoindane- and aminotetralincarboxylic acids and use thereof
ME02603B (me) 2012-07-20 2017-06-20 Bayer Pharma AG Nove 5 - aminotetrahidrohinolin-2-karbonske kiseline i njihova upotreba
US9624214B2 (en) 2012-11-05 2017-04-18 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Amino-substituted imidazo[1,2-a]pyridinecarboxamides and their use
GB201305825D0 (en) 2013-03-28 2013-05-15 Vectura Ltd New use
WO2019081456A1 (en) * 2017-10-24 2019-05-02 Bayer Aktiengesellschaft USE OF SGC ACTIVATORS AND STIMULATORS COMPRISING A BETA2 SUBUNIT
US20230183181A1 (en) 2020-05-20 2023-06-15 Bayer Aktiengesellschaft Process of preparing butyl-(5s)-5-({2-[4-(butoxycarbonyl)phenyl]ethyl}[2-(2-{[3-chloro-4'-(trifluoromethyl)[biphenyl]-4-yl]methoxy}phenyl)ethyl]amino)-5,6,7,8-tetrahydroquinoline-2-carboxylate
CN118804741A (zh) 2021-12-29 2024-10-18 拜耳股份公司 药物干粉吸入制剂
CN118765272A (zh) 2021-12-29 2024-10-11 拜耳股份公司 制备用作药物活性化合物的(5s)-{[2-(4-羧基苯基)乙基][2-(2-{[3-氯-4'-(三氟甲基)联苯-4-基]甲氧基}苯基)乙基]氨基}-5,6,7,8-四氢喹啉-2-甲酸及其结晶形式的方法
WO2023126437A1 (en) 2021-12-29 2023-07-06 Bayer Aktiengesellschaft Treatment of cardiopulmonary disorders

Also Published As

Publication number Publication date
JP2025501309A (ja) 2025-01-17
WO2023126437A1 (en) 2023-07-06
US20240148715A1 (en) 2024-05-09
IL313920A (en) 2024-08-01
AU2022424376A1 (en) 2024-07-04
EP4456896A1 (en) 2024-11-06
CN118765199A (zh) 2024-10-11
US12138256B2 (en) 2024-11-12
KR20240144178A (ko) 2024-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12138256B2 (en) Treatment of cardiopulmonary disorders
US10842792B2 (en) Deuterated baricitinib
US11491155B2 (en) Salt of a pyrimido[6,1-A]isoquinolin-4-one compound
JP6896113B2 (ja) ジアザ二環式置換イミダゾピリミジンおよび呼吸障害を治療するためのその使用
US12202805B2 (en) Process for preparing (5S)-{[2-(4-carboxyphenyl)ethyl] |2-(2-{|3-chloro-4'-(trifluoromethyl)biphenyl-4-yl]methoxy}phenyl)ethyl]aminol-5,6,7,8-tetrahydroquinoline-2-carboxylic acid and its crystalline forms for use as pharmaceutically active compound
TW201734012A (zh) 經取代２－苯基－３－（哌甲基）咪唑并吡啶類及其用途
TW201109015A (en) DP2 antagonist and uses thereof
JP2008510830A (ja) ホスホジエステラーゼ５阻害剤（ｐｄｅ５）と併用するエンドセリンａ受容体（ｅｔａ）アンタゴニストおよびその使用
TW202342035A (zh) 醫藥乾粉吸入配製物
TW201204412A (en) Dry powder formulation comprising an antimuscarinic drug
US20150238456A1 (en) Methods and compositions for administration of oxybutynin
AU2013368298B2 (en) Methods and compositions for administration of oxybutynin
US20200223850A1 (en) Pkc inhibitor solid state forms
NZ733926B2 (en) Salt of a pyrimido[6,1-a]isoquinolin-4-one compound