TW202334190A - Ｄｓｇ２組成物及方法 - Google Patents

Abstract

本揭露大致上關於組成物及藉由投予本文中所揭示之組成物治療疾病之方法。本文中提供DSG2融合多肽及包括治療及改善心肌細胞功能之方法的相關方法。

Description

ＤＳＧ２組成物及方法

本發明係關於DSG2組成物及方法。 [序列表] 本申請案根據WIPO標準ST26與XML格式之序列表一起提交。提交的序列表名稱為10383-108749-04，於2022年10月24日創建且檔案大小為約49,152位元組。電子格式序列表之資訊係以全文引用方式併入本文中。

在疾病進展之調節劑中，免疫系統失調據信係起著核心作用。免疫系統由多種細胞的高度調節及複雜防禦系統所組成，其特徵在於對損傷及抗原之反應具有高度的個體間變異性。在生理條件下，免疫系統經編程以辨別自身及外來成分，從而與經辨識為外來的任何結構交互作用並使其消除。然此過程可能轉變成攻擊自身組織的病理性狀態，導致自體免疫疾病。

循環自體抗體(circulating autoantibody)與心臟疾病有著密切關聯。其等的盛行率、作用模式、及潛在的治療調變已被深入研究。儘管引發心肌損傷據信為關鍵的起始事件，但遺傳的預先傾向性(genetic predisposition)、環境及表觀遺傳調變劑(epigenetic modulator)、及其他仍未知的機制對在周邊血液中觀察到之病理性抗體(pathological antibody)滴度之發展及心肌結構中炎症之強度至關重要。在一項前瞻研究中，Caforio等人表示循環抗心臟自體抗體可能先於疾病表現且係疾病發展之獨立預測指標(Caforio等人Circulation. 2007;115:76-83；其內容以全文引用方式併入本文中)。

目前而言，缺乏用於治療及/或管理與疾病(特別是心臟疾病)相關之自體抗體的治療策略。本揭露提供基於DSG2融合多肽之組成物及用於治療疾病諸如但不限於心臟病、及感染性疾病之方法。

本揭露提供包含單離之多肽的組成物。本揭露之多肽可包括DSG2蛋白質之全部或部分。在一些具體實施例中，單離之多肽係橋粒芯糖蛋白-2 (desmoglein-2, DSG2)融合多肽。DSG2融合多肽可包括(a) DSG2蛋白質之全部或部分；及/或(b)免疫球蛋白蛋白質之全部或部分。DSG2蛋白質可係智人( Homo sapiens) DSG2蛋白質、家鼷鼠( Mus musculus) DSG2蛋白質、溝鼠( Rattus norvegicus) DSG2蛋白質、恆河猴( Macaca mulatta) DSG2蛋白質、家犬( Canis lupus familiaris) DSG2蛋白質、或斑馬魚( Danio rerio) DSG2蛋白質。免疫球蛋白蛋白質可係人類或犬免疫球蛋白蛋白質。

在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係智人DSG2蛋白質(SEQ ID NO.1)。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係家鼷鼠DSG2蛋白質(SEQ ID NO.14)。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係溝鼠DSG2蛋白質(SEQ ID NO.15)。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係恆河猴DSG2蛋白質(SEQ ID NO.16)。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係家犬DSG2蛋白質(SEQ ID NO.17)。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可係斑馬魚DSG2蛋白質(SEQ ID NO.18)。

在一個具體實施例中，DSG2多肽可包括DSG2蛋白質之部分。DSG2蛋白質之部分可包括DSG2蛋白質之細胞外區域。在一些態樣中，DSG2之整個細胞外區域可被包括在融合多肽中。在一個具體實施例中，DSG2之整個細胞外區域包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列。本揭露之具體實施例亦可包括DSG2之細胞外區域之部分。例如，細胞外區域之部分可係細胞外黏附蛋白結構域1 (extracellular cadherin domain, EC1)、細胞外黏附蛋白結構域2 (EC2)、細胞外黏附蛋白結構域 (EC3)、細胞外黏附蛋白結構域4 (EC4)、及/或細胞外錨定結構域(extracellular anchor domain, EA)。在一些態樣中，DSG2融合多肽包括細胞外區域中之2個結構域。例如，二個結構域可係EC4EA、EC1EC2、EC2EC3、EC3EC4、EC1EA、EC1EC3、EC2EC4、及/或EC3EA。在一些態樣中，DSG2融合多肽包括細胞外區域中之三個結構域。例如，三個結構域可係EC1EC3EA、EC1EC4EA、EC1EC3EA、EC3EC4EA、EC1EC2EC3、EC2EC3EC4、及/或EC2EC4EA。在一些態樣中，DSG2融合多肽可包括細胞外區域中之四個結構域。例如，三個結構域可係EC1EC2EC4EA、EC2EC3EC4EA、EC1EC2EC3EC4EA、EC1EC2EC3EC4、及/或EC1EC2EC3EA。

DSG2融合多肽可包括免疫球蛋白之部分。該部分可係Fc區域、Fab區域、重鏈可變(VH)結構域、重鏈恆定結構域、輕鏈可變(VL)結構域、或輕鏈恆定結構域。在一個態樣中，免疫球蛋白之部分可係Fc區域。該免疫球蛋白可係IgG、IgM、IgA、IgD及/或IgE。作為非限制性實施例，免疫球蛋白可係IgG。組成物可包括IgG諸如IgG1、IgG2、IgG3、及/或IgG4。Fc區域可係人類Fc區域或犬Fc區域。可用於本揭露中之免疫球蛋白之部分的非限制性實施例包括人類IgG1 Fc區域(SEQ ID NO: 5)、人類IgG2 Fc區域(SEQ ID NO: 7)、人類IgG3 Fc區域(SEQ ID NO: 9)、或人類IgG4 Fc區域(SEQ ID NO: 11)、犬IgG重鏈D Fc區域(SEQ ID NO: 20)、犬IgG重鏈A Fc區域(SEQ ID NO: 22)、犬IgG重鏈B Fc區域(SEQ ID NO: 24)、或犬IgG重鏈C Fc區域(SEQ ID NO: 26)、人類IgG1重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 4)、人類IgG2重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 6)、人類IgG3重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 8)、或人類IgG4重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 10)、犬IgG重鏈恆定結構域鏈D (SEQ ID NO: 19)、犬IgG重鏈恆定結構域鏈A (SEQ ID NO: 21)、犬IgG重鏈恆定結構域鏈B (SEQ ID NO: 23)、或犬IgG重鏈恆定結構域鏈C (SEQ ID NO: 25)。

本揭露之多肽可進一步包括連接子序列。該連接子可係約5個胺基酸至約50個胺基酸長。在一個具體實施例中，連接子可係GGGGS (SEQ ID NO: 12)。在另一具體實施例中，連接子可係EAAAK (SEQ ID NO: 13)、GGGGS (SEQ ID NO: 27)、或IEGRMD (SEQ ID NO: 28)。

一個具體實施例係用於治療由抗橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2)自體抗體所引起之疾病或病症之醫藥組成物。該組成物包含融合多肽，其阻斷抗DSG2抗體與DSG2之細胞外結構域之結合。該融合多肽包含與SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基50至609、或其部分具有至少約85%序列同一性的人類DSG2蛋白質之細胞外區域、及親和性標籤。該人類DSG2蛋白質之細胞外區域之部分可包括選自由下列所組成之群組的DSG2結構域中之任一者或組合：細胞外黏附蛋白結構域1 (EC1)、細胞外黏附蛋白結構域2 (EC2)、細胞外黏附蛋白結構域3 (EC3)、細胞外黏附蛋白結構域4 (EC4)、及細胞外錨定結構域(EA)。親和性標籤可係免疫球蛋白(諸如IgG1)之Fc區域或其變體。該變體可具有SEQ ID NO: 31之序列。該親和性標籤可係IgG4之Fc區域或其變體。該變體可具有SEQ ID NO: 32之序列。替代地，親和性標籤可由較小的蛋白質或肽所提供，諸如聚組胺酸肽。融合多肽之一些具體實施例包括位於人類DSG2蛋白質之細胞外區域或其部分與親和性標籤之間的連接子序列。在一些具體實施例中，連接子序列係SEQ ID NO: 12、13、27或28。在一些具體實施例中，疾病或病症係心律不整諸如致心律失常性右心室心肌症(arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy,ARVC)、類肉瘤病、或擴張型心肌症。在一些具體實施例中，疾病或病症係心肌症諸如致心律失常性右心室心肌症(ARVC)、類肉瘤病、或擴張型心肌症。心律不整及心肌症可由病毒所引起，諸如SARS-CoV2、腺病毒、肝炎病毒、C型肝炎病毒、微小病毒、單純疱疹病毒、腸道細胞病變性人類孤兒病毒(echovirus)、艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、德國麻疹、巨細胞病毒、或HIV。

本揭露提供降低心肌細胞之致心律不整表型之方法。此類方法可涉及使心肌細胞與本揭露之組成物接觸。在一些具體實施例中，致心律不整表型可能與抗DSG2抗體相關或由其所引起。本揭露亦提供藉由使心肌細胞與本揭露之組成物接觸來降低或修正致心律不整表型之方法。致心律不整表型之降低或修正可使用心肌細胞鈉棘波(sodium spike) (µV/m)來測量。本揭露亦提供使用本文中所述之組成物的治療方法。

本揭露亦提供治療與血清DSG2自體抗體相關之病況之方法。此類方法可包括向個體投予本文中所述之組成物或表現本文中所述之組成物的細胞。在一些具體實施例中，病況可係心律不整。在一些具體實施例中，病況可係心肌症。在一些態樣中，病況可係自體免疫病症。

本揭露提供治療個體之心律不整及/或心肌症之方法。此類方法可包括使個體與本揭露之單離之多肽或細胞接觸，接著測量與心律不整相關之一或多種症狀或臨床結果，諸如心電圖上之異常搏動、暈眩、頭重腳輕、心悸、胸痛、呼吸急促、射出分率降低、心輸出量差及/或心臟衰竭。此類方法可包括使個體與本揭露之單離之多肽或細胞接觸，接著測量與心肌症相關之一或多種症狀，諸如心律不整、心悸、心肌炎、心臟衰竭、心輸出量差、及/或射出分率降低。作為非限制性實施例，心肌症可係致心律失常性右心室心肌症(ARVC)、類肉瘤病、擴張型心肌症。心肌症亦可由下列所引起：病毒(例如SARS- CoV2、腺病毒、肝炎病毒、C型肝炎病毒、微小病毒、單純疱疹病毒、腸道細胞病變性人類孤兒病毒、艾司坦-巴爾病毒、德國麻疹、巨細胞病毒、或HIV)、細菌(葡萄球菌( Staphylococcus)、鏈球菌( Streptococcus)、或伯氏疏螺旋體( Borrelia))、寄生蟲(錐蟲( Trypanosoma或弓蟲( Toxoplasma))或真菌(念珠菌( Candida)、麴菌( Aspergillus)、或組織漿菌( Histoplasma))。在一些具體實施例中，個體在其血清中可具有可偵測水平的抗DSG2抗體。

本揭露亦提供使用本文中所述之DSG2融合多肽治療個體之心臟異常之方法。在一些具體實施例中，個體可具有血清抗DSG2抗體。本揭露亦提供使用本文中所述之DSG2融合多肽降低個體中之抗DSG2抗體之方法之方法。在一些具體實施例中，抗DSG2抗體水平可降低約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%。

本文中提供包含DSG2融合多肽之組成物。本文中亦提供包含至少一種治療劑之組成物。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可包含本文中所述之DSG2融合多肽與至少一種治療劑的組合。在一些具體實施例中，組成物僅包括治療劑。治療劑之非限制性實施例包括抗CD20抗體、FcRn阻斷抗體、靜脈內免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins, IVIG)、及/或補體抑制劑諸如依庫珠單抗(eculizumab)。本文中亦提供使用本文中所述之DSG2融合多肽及/或治療劑治療與血清抗DSG2自體抗體相關之病況之方法。在一些具體實施例中，與血清抗DSG2抗體相關之病況可係心臟病症、或感染性疾病。心臟病症可係ARVC、類肉瘤病或擴張型心肌症、或與抗DSG2抗體相關之任何心臟疾病。

I. 介紹

產生針對自身蛋白質(稱為自體抗原)之自體抗體係許多自體免疫疾病之特徵。當被懷疑為自體免疫疾病時，患者體液中之自體抗體免疫反應提供了關鍵的診斷資訊。自體抗體圖譜通常為給定自體免疫疾病提供臨床上之資訊。一些自體免疫疾病含有僅針對一種或幾種目標自體抗原之自體抗體，但在其他情況下，針對多種目標之自體抗體亦可能共存。在七十種最常見的自體免疫疾病中，由基因組所編碼之估計20,000種人類蛋白質中大約有100種被認為包含最常見的抗原目標。然而，在罕見病症中已發現越來越多的自體抗體，表明額外的疾病很可能展現出自體抗體相關之自體免疫。

由於不同程度的療效及可用的干預措施之副作用，許多自體免疫疾病之治療仍然為次佳的(sub-optimal)。自體免疫疾病治療之進展將需要疾病特異性資訊，包括自體抗體如何參與致病機轉。

橋粒芯糖蛋白-2係數種心臟黏附蛋白中之一者。黏附蛋白係鈣依賴性黏附分子，在多種組織之細胞之間提供機械式附接。一般而言，三個鈣離子(總共12個)被嵌入到存在於五個連續胞外黏附蛋白(EC)結構域之各對之間的結合模體中，提供將來自相對之細胞的黏附蛋白結構域變成用於反式結合(trans binding)之90度構形所需之新月形形狀。此90度構形對結合係至關重要的，因為其允許在各EC1結構域上之色胺酸殘基同時插入到交替的黏附蛋白之疏水性凹穴(pocket)中。干擾此定向(諸如透過誤義突變、或抗體與近端細胞外DSG2結構域的結合)可能降低結合與附著。Chatterjee等人將心臟橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2)之自體抗體識別為患有ARVC之患者血清中之共同特徵(Chatterjee D,等人, Eur.Heart J. 2018;39(44):3932-3944；其內容以全文引用方式併入本文中)。此等自體抗體係特異於ARVC，因為該等自體抗體在二個對照血清獨立組、以及來自其他患有遺傳性心肌症之個體的血清中基本上皆不存在。抗DSG2抗體亦可在一些類肉瘤病例中發現，該類肉瘤病係一種全身性發炎疾病，其導致器官(諸如但不限於心臟)之肉芽腫。抗DSG2抗體亦可在患有心臟受累(cardiac involvement)之患者的肉狀瘤中發現(Suna等人2020, Eur. Heart Journal, Volume 41, Issue Supplement 2, November 2020, ehaa946.2127；其內容以全文引用方式併入本文中)。診斷為患有擴張型心肌症之患者可能在與ARVC相關之相同橋粒(desmosome)蛋白質中具有突變。此等觀察表明，一些擴張型心肌症患者可能實際上患有由抗DSG2抗體所媒介之ARVC樣疾病(ARVC-like disease)，卻被診斷為擴張型心肌症，此乃因該等患者不符合與ARVC相關之典型年齡及表現。抗DSG2自體抗體被認為是當心臟細胞損傷合併活化之免疫系統(例如在已知會直接影響心肌之感染的環境下)時發生。因此，靶向抗DSG2抗體(例如，DSG2自體抗體)的策略可能有利於治療因抗DSG2抗體之存在而發生的症狀及疾病，包括但不限於COVID-19、COVID-19後症候群及/或心臟疾病例如ARVC。

本揭露提供關於用於靶向抗DSG2抗體之DSG2融合多肽之組成物及方法。因此，本揭露之DSG2融合多肽可係治療與抗DSG2抗體相關之疾病及/或與自體免疫反應相關之疾病(諸如但不限於COVID-19、COVID-19後心臟症候群、及ARVC)的可行治療策略。DSG2融合多肽亦可用於治療與心臟細胞損傷(諸如但不限於具有抗DSG2自體抗體之致心律失常性心肌症(arrhythmogenic cardiomyopathy, AC)、類肉瘤病、擴張型心肌症)及病毒感染(包括但不限於由柯薩奇病毒(coxsackie virus)、腺病毒、腸道細胞病變性人類孤兒病毒、微小病毒、德國麻疹及/或巨細胞病毒所引起者)相關之其他疾病。 II. 組成物

在一些具體實施例中，本揭露提供包括DSG2融合多肽的組成物。本文中所述之組成物可係能夠與抗DSG2抗體結合或與其交互作用。在一個具體實施例中，本揭露之組成物可調變抗DSG2抗體之活性。在一個具體實施例中，本揭露之組成物可抑制抗DSG2抗體之活性。

在一些具體實施例中，本揭露包括DSG2蛋白質。在一些態樣中，DSG2蛋白質可係全部DSG2蛋白質或DSG2蛋白質之部分。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質可與任何其他蛋白質或蛋白質之片段融合。

本揭露之DSG2融合多肽可括蛋白質標籤。蛋白質標籤係為提供各種目的而被包括在重組蛋白質中之蛋白質或肽序列且通常位於N末端或C末端。在本發明具體實施例中，蛋白質標籤主要作用為親和性標籤，但可提供其他優點諸如增強之表現、溶解度、生物活性、及藥物動力學性質。親和性標籤經附加至蛋白質，以便可使用親和性技術將蛋白質從其粗製生物來源中純化。親和性標籤之實施例包括幾丁質結合蛋白(chitin binding protein, CBP)、麥芽糖結合蛋白(maltose binding protein, MBP)、鏈黴親和素及麩胱甘肽S-轉移酶(glutathione-S-transferase, GST)。常見的聚組胺酸(稱為6xHis、或六組胺酸)係一種廣泛使用之蛋白質標籤，其與帶有固定金屬離子之基質結合。

增溶標籤(solubilization tag)係特別使用於諸如大腸桿菌之物種中表現之重組蛋白質，以幫助蛋白質之正確摺疊並防止其在包涵體中之聚集。此等標籤包括硫氧還蛋白(thioredoxin, TRX)及聚(NANP)。一些親和性標籤可具有作為增溶劑之雙重作用，諸如MBP及GST。免疫球蛋白之Fc區域亦為可用，不僅充當親和性標籤及二聚合劑及增溶劑，而且提供使用商用ELISA套組用以偵測蛋白質之手段。添加IgG-Fc標籤亦可增加蛋白質表現產量並影響重組蛋白質之體內藥物動力學。

在下文所述之一些例示性具體實施例中，融合蛋白質之蛋白質標籤係聚組胺酸標籤，其具有六個連續組胺酸殘基，表示為6xHis。在其他實施例中，蛋白質標籤係IgG之Fc區域，該IgG包括IgG1 (SEQ ID NO: 5)或IgG ₄(SEQ ID NO: 11)。此等融合多肽具體實施例展現在與抗DSG2抗體結合方面之活性。

DSG2融合多肽可包括DSG2蛋白質之全部或DSG2蛋白質之部分及包括免疫球蛋白蛋白質之全部或部分之親和性標籤。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可進一步包括連接肽。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質之全部或部分可與非免疫球蛋白的蛋白質融合。DSG2蛋白質可與蛋白質或蛋白質之片段融合，該等蛋白質諸如能夠在體外或體內改善DSG2蛋白質之表現及純化的親和性標籤，諸如TRX、聚(NANP)、MBP、GST或聚組胺酸。

在一些具體實施例中，融合多肽之蛋白質標籤係PAS多肽標籤(PAS polypeptide tag)。PAS序列係親水性，不帶電荷之生物聚合物，其具有與聚乙二醇(PEG)十分類似的生物物理性質，該聚乙二醇與藥物之化學共軛係用於延長血漿半衰期之既定方法。相比之下，PAS多肽在基因層級上提供與治療性蛋白質的融合，允許產生完全活性的蛋白質並避免體外偶合或修飾步驟(Schlapschy等人, Protein Eng. Des.Sel., 2013, 26(8), 489-501，以全文引用方式併入本文中)。將PAS多肽添加至融合蛋白質之過程被稱為「PAS修飾(PASylation)」。在一些具體實施例中，將聚乙二醇(PEG)用作PAS多肽併入之非蛋白質標籤替代物。添加PEG部份之過程被稱為「PEG修飾(PEGylation)」。融合蛋白質之某些具體實施例之PAS修飾或PEG修飾，可提供藉由粒徑排阻層析法而非親和性層析法來純化融合蛋白質之能力。

在心臟細胞之間盤內的DSG2突變與心臟疾病有關，該等心臟疾病包括心律不整、擴張型心肌症、且特別是ARVC(致心律失常性右心室心肌症)。Chatterjee等人將心臟DSG2蛋白質之自體抗體識別為患有ARVC之患者血清中的共同特徵(Chatterjee D,等人, Eur Heart J. 2018; 39(44):3932-3944；其內容以全文引用方式併入本文中)。此等自體抗體係特異於ARVC，因為其在二個對照血清獨立組、以及來自其他患有遺傳性心肌症之個體的血清中基本上皆不存在。本揭露提供DSG2融合多肽作為靶向DSG2自體抗體之治療策略。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可與DSG2自體抗體結合。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽與DSG2自體抗體之結合消除個體中該自體抗體與內源性DSG2之結合。在本揭露之此態樣中，DSG2融合多肽作用為誘餌蛋白質(decoy protein)或配體陷阱(ligand trap)。

Chatterjee等人提出DSG2蛋白質可能包括暴露或釋放到細胞外空間及/或循環中之表位，且為心肌細胞損傷或橋粒突變之結果。此等表位之去遮蔽(unmasking)亦可能發生於任何心臟損傷(諸如但不限於感染性心肌炎、及/或心臟創傷)。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可不包括任何突變。此類釋放之DSG2蛋白質可與抗原呈現細胞連結以刺激T細胞反應，從而生成觀察到的自體抗體。藉由基因突變使隱性表位(cryptic epitope)去遮蔽可能造成其他形式的自體免疫。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括含有於DSG2中之一或多個突變之表位。

DSG2融合多肽可係可溶性及/或重組多肽。可最佳化DSG2融合多肽中組分之配置以達到合適的蛋白質表現及/或預期的治療效果。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括本文中所述之格式。本文中所提供之格式包括在組分之間藉由「；」劃分從N末端至C末端之組分。DSG2融合多肽之格式之非限制性實施例包括(i) DSG2蛋白質之全部或部分；Fc區域(ii) Fc區域；DSG2蛋白質之全部或部分(iii) DSG2蛋白質之全部或部分；連接子；Fc區域 (iv) Fc區域；連接子；DSG2蛋白質之全部或部分(v)親和性標籤；DSG2蛋白質之全部或部分(vi) DSG2蛋白質之全部或部分；親和性標籤(vii) DSG2蛋白質之全部或部分；連接子；親和性標籤(viii)親和性標籤；連接子；DSG2蛋白質之全部或部分。    DSG2蛋白質

在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括整個DSG2蛋白質。橋粒黏附蛋白(desmosomal cadherin)橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2)係一種跨膜細胞附著蛋白質，其表現於上皮及非上皮組織(諸如心臟及胃腸道)中。DSG2係橋粒單元之不可分割的部分，該橋粒單元係支持細胞與細胞附接及結構完整性的主要結構。DSG2已顯示調節許多細胞過程，包括增殖及細胞凋亡。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係人類DSG2蛋白質(UniProt ID: Q14126; ENSEMBL ID: ENSP00000261590.8)，其由1,118個胺基酸所組成，且包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可由SEQ ID NO: 2(NCBI參考序列：NM_001943.5；ENSMBL ID: ENST00000261590.13)之核酸序列所編碼。

在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可係經完全加工之DSG2蛋白質，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸50至1118。

DSG2蛋白質亦可包括相對於SEQ ID NO: 1之序列的一或多個突變。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質突變可係與疾病狀態相關之突變。在一個具體實施例中，疾病狀態可係致心律失常性右心室發育不良/心肌症(arrhythmogenic right ventricular dysplasia/cardiomyopathy)。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括含有於DSG2中之一或多個突變之表位。作為非限制性實施例，DSG2融合多肽可在SEQ ID NO: 1之胺基酸485至531及/或胺基酸586至610之區域中包括一或多個突變。

DSG2屬於細胞附著蛋白質之黏附蛋白超家族，其共同特徵為三個不同的區域：細胞外區域、跨膜結構域及細胞內訊息傳導區域。在一些具體實施例中，DSG2之細胞外區域可具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列，其係SEQ ID NO: 1之胺基酸50至609。蛋白質之黏附蛋白家族之細胞外區域含有不同數量的鈣結合模體，稱為黏附蛋白模體或EC結構域的重複單元。DSG2含有四個EC結構域，在本文中稱為EC1、EC2、EC3及EC4。DSG2亦包括靠近膜的細胞外錨定(EA)結構域。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括DSG2之整個細胞外區域。在一些態樣中，DSG2融合多肽可包括至少一個結構域，諸如但不限於EC1、EC2、EC3、EC4、及/或EA。在一些具體實施例中，EC1結構域可係SEQ ID NO: 1之胺基酸50至155。在一些具體實施例中，EC2結構域可係SEQ ID NO: 1之胺基酸151至268。在一些具體實施例中，EC3結構域可係SEQ ID NO: 1之胺基酸264至384。在一些具體實施例中，EC4結構域可係SEQ ID NO: 1之胺基酸382至495。在一些具體實施例中，EA結構域可係SEQ ID NO: 1之胺基酸491至609。表1提供DSG2蛋白質之胺基酸序列以及DSG2之細胞外區域之胺基酸序列。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2蛋白質可與表1中之任何序列或表1中之序列之片段具有至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%同一性。

在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係非人類DSG2蛋白質。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係家鼷鼠(小鼠)DSG2蛋白質。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可包括1,122個胺基酸，且包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係溝鼠(大鼠)DSG2蛋白質。在一個具體實施例中，DSG2蛋白質可包括1,128個胺基酸，且包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係非人靈長類(non-human primate, NHP) DSG2蛋白質。在一些態樣中，NHP DSG2蛋白質可係恆河猴DSG2蛋白質，其可包括1,115個胺基酸，且包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係家犬(狗)DSG2蛋白質。在一些具體實施例中，狗DSG2蛋白質可包括1,119個胺基酸，且包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些具體實施例中，DSG2蛋白質係斑馬魚(斑馬魚(zebra fish))DSG2蛋白質。在一些具體實施例中，斑馬魚DSG2蛋白質可包括1,142個胺基酸，且包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。

本揭露之DSG2融合多肽可包括DSG2之細胞外區域中之一或多個結構域。來自DSG2之細胞外區域的結構域可以串聯或混合順序之方式包括EC結構域或EA結構域中之一或多者的重複單元。例如，DSG2融合多肽可包括EC1、EC2、EC3、EC4或EA結構域之中之2、3、或更多的重複單元。當存在超過一個結構域及/或超過一個DSG2之細胞外區域之結構域的重複單元時，該等結構域可經由本文中所述之連接子可操作地連接。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括DSG2之細胞外區域中之兩個結構域。存在於本揭露之融合多肽中的DSG2之細胞外區域之非限制性實施例結構域包括EC1EC2、EC1EC3、EC1EC4、EC1EA、EC2EC1、EC2EC3、EC2EC4、EC2EA、EC3EC1、EC3EC2、EC3EC4、EC3EA、EC4EC1、EC4EC2、EC4EC3、EC4EA、EAEC1、EAEC2、EAEC3、及/或EAEC4。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括DSG2之細胞外區域中之三個結構域。存在於本揭露之融合多肽中的DSG2之細胞外區域之非限制性實施例結構域包括EC1EC2EC3、EC1EC2EC4、EC1EC2EA、EC1EC3EC2、EC1EC3EC4、EC1EC3EA、EC1EC4EC2、EC1EC4EC3、EC1EC4EA、EC1EAEC2、EC1EAEC3、EC1EAEC4、EC2EC1EC3、EC2EC1EC4、EC2EC1EA、EC2EC3EC1、EC2EC3EC4、EC2EC3EA、EC2EC4EC1、EC2EC4EC3、EC2EC4EA、EC2EAEC1、EC2EAEC3、EC2EAEC4、EC3EC1EC2、EC3EC1EC4、EC3EC1EA、EC3EC2EC1、EC3EC2EC4、EC3EC2EA、EC3EC4EC1、EC3EC4EC2、EC3EC4EA、EC3EAEC1、EC3EAEC2、EC3EAEC4、EC4EC1EC2、EC4EC1EC3、EC4EC1EA、EC4EC2EC1、EC4EC2EC3、EC4EC2EA、EC4EC3EC1、EC4EC3EC2、EC4EC3EA、EC4EAEC1、EC4EAEC2、EC4EAEC3、EAEC1EC2、EAEC1EC3、EAEC1EC4、EAEC2EC1、EAEC2EC3、EAEC2EC4、EAEC3EC1、EAEC3EC2、EAEC3EC4、EAEC4EC1、EAEC4EC2、及/或EAEC4EC3。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括DSG2之細胞外區域中之四個結構域。存在於本揭露之融合多肽中的DSG2之細胞外區域之非限制性實施例結構域包括EC1EC2EC3EC4、EC1EC2EC3EA、EC1EC2EC4EC3、EC1EC2EC4EA、EC1EC2EAEC3、EC1EC2EAEC4、EC1EC3EC2EC4、EC1EC3EC2EA、EC1EC3EC4EC2、EC1EC3EC4EA、EC1EC3EAEC2、EC1EC3EAEC4、EC1EC4EC2EC3、EC1EC4EC2EA、EC1EC4EC3EC2、EC1EC4EC3EA、EC1EC4EAEC2、EC1EC4EAEC3、EC1EAEC2EC3、EC1EAEC2EC4、EC1EAEC3EC2、EC1EAEC3EC4、EC1EAEC4EC2、EC1EAEC4EC3、EC2EC1EC3EC4、EC2EC1EC3EA、EC2EC1EC4EC3、EC2EC1EC4EA、EC2EC1EAEC3、EC2EC1EAEC4、EC2EC3EC1EC4、EC2EC3EC1EA、EC2EC3EC4EC1、EC2EC3EC4EA、EC2EC3EAEC1、EC2EC3EAEC4、EC2EC4EC1EC3、EC2EC4EC1EA、EC2EC4EC3EC1、EC2EC4EC3EA、EC2EC4EAEC1、EC2EC4EAEC3、EC2EAEC1EC3、EC2EAEC1EC4、EC2EAEC3EC1、EC2EAEC3EC4、EC2EAEC4EC1、EC2EAEC4EC3、EC3EC1EC2EC4、EC3EC1EC2EA、EC3EC1EC4EC2、EC3EC1EC4EA、EC3EC1EAEC2、EC3EC1EAEC4、EC3EC2EC1EC4、EC3EC2EC1EA、EC3EC2EC4EC1、EC3EC2EC4EA、EC3EC2EAEC1、EC3EC2EAEC4、EC3EC4EC1EC2、EC3EC4EC1EA、EC3EC4EC2EC1、EC3EC4EC2EA、EC3EC4EAEC1、EC3EC4EAEC2、EC3EAEC1EC2、EC3EAEC1EC4、EC3EAEC2EC1、EC3EAEC2EC4、EC3EAEC4EC1、EC3EAEC4EC2、EC4EC1EC2EC3、EC4EC1EC2EA、EC4EC1EC3EC2、EC4EC1EC3EA、EC4EC1EAEC2、EC4EC1EAEC3、EC4EC2EC1EC3、EC4EC2EC1EA、EC4EC2EC3EC1、EC4EC2EC3EA、EC4EC2EAEC1、EC4EC2EAEC3、EC4EC3EC1EC2、EC4EC3EC1EA、EC4EC3EC2EC1、EC4EC3EC2EA、EC4EC3EAEC1、EC4EC3EAEC2、EC4EAEC1EC2、EC4EAEC1EC3、EC4EAEC2EC1、EC4EAEC2EC3、EC4EAEC3EC1、EC4EAEC3EC2、EAEC1EC2EC3、EAEC1EC2EC4、EAEC1EC3EC2、EAEC1EC3EC4、EAEC1EC4EC2、EAEC1EC4EC3、EAEC2EC1EC3、EAEC2EC1EC4、EAEC2EC3EC1、EAEC2EC3EC4、EAEC2EC4EC1、EAEC2EC4EC3、EAEC3EC1EC2、EAEC3EC1EC4、EAEC3EC2EC1、EAEC3EC2EC4、EAEC3EC4EC1、EAEC3EC4EC2、EAEC4EC1EC2、EAEC4EC1EC3、EAEC4EC2EC1、EAEC4EC2EC3、EAEC4EC3EC1、及/或EAEC4EC3EC2。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括DSG2之細胞外區域中之五個結構域。存在於本揭露之融合多肽中的DSG2之細胞外區域之非限制性實施例結構域包括EC1EC2EC3EC4EA、EC1EC2EC3EAEC4、EC1EC2EC4EC3EA、EC1EC2EC4EAEC3、EC1EC2EAEC3EC4、EC1EC2EAEC4EC3、EC1EC3EC2EC4EA、EC1EC3EC2EAEC4、EC1EC3EC4EC2EA、EC1EC3EC4EAEC2、EC1EC3EAEC2EC4、EC1EC3EAEC4EC2、EC1EC4EC2EC3EA、EC1EC4EC2EAEC3、EC1EC4EC3EC2EA、EC1EC4EC3EAEC2、EC1EC4EAEC2EC3、EC1EC4EAEC3EC2、EC1EAEC2EC3EC4、EC1EAEC2EC4EC3、EC1EAEC3EC2EC4、EC1EAEC3EC4EC2、EC1EAEC4EC2EC3、EC1EAEC4EC3EC2、EC2EC1EC3EC4EA、EC2EC1EC3EAEC4、EC2EC1EC4EC3EA、EC2EC1EC4EAEC3、EC2EC1EAEC3EC4、EC2EC1EAEC4EC3、EC2EC3EC1EC4EA、EC2EC3EC1EAEC4、EC2EC3EC4EC1EA、EC2EC3EC4EAEC1、EC2EC3EAEC1EC4、EC2EC3EAEC4EC1、EC2EC4EC1EC3EA、EC2EC4EC1EAEC3、EC2EC4EC3EC1EA、EC2EC4EC3EAEC1、EC2EC4EAEC1EC3、EC2EC4EAEC3EC1、EC2EAEC1EC3EC4、EC2EAEC1EC4EC3、EC2EAEC3EC1EC4、EC2EAEC3EC4EC1、EC2EAEC4EC1EC3、EC2EAEC4EC3EC1、EC3EC1EC2EC4EA、EC3EC1EC2EAEC4、EC3EC1EC4EC2EA、EC3EC1EC4EAEC2、EC3EC1EAEC2EC4、EC3EC1EAEC4EC2、EC3EC2EC1EC4EA、EC3EC2EC1EAEC4、EC3EC2EC4EC1EA、EC3EC2EC4EAEC1、EC3EC2EAEC1EC4、EC3EC2EAEC4EC1、EC3EC4EC1EC2EA、EC3EC4EC1EAEC2、EC3EC4EC2EC1EA、EC3EC4EC2EAEC1、EC3EC4EAEC1EC2、EC3EC4EAEC2EC1、EC3EAEC1EC2EC4、EC3EAEC1EC4EC2、EC3EAEC2EC1EC4、EC3EAEC2EC4EC1、EC3EAEC4EC1EC2、EC3EAEC4EC2EC1、EC4EC1EC2EC3EA、EC4EC1EC2EAEC3、EC4EC1EC3EC2EA、EC4EC1EC3EAEC2、EC4EC1EAEC2EC3、EC4EC1EAEC3EC2、EC4EC2EC1EC3EA、EC4EC2EC1EAEC3、EC4EC2EC3EC1EA、EC4EC2EC3EAEC1、EC4EC2EAEC1EC3、EC4EC2EAEC3EC1、EC4EC3EC1EC2EA、EC4EC3EC1EAEC2、EC4EC3EC2EC1EA、EC4EC3EC2EAEC1、EC4EC3EAEC1EC2、EC4EC3EAEC2EC1、EC4EAEC1EC2EC3、EC4EAEC1EC3EC2、EC4EAEC2EC1EC3、EC4EAEC2EC3EC1、EC4EAEC3EC1EC2、EC4EAEC3EC2EC1、EAEC1EC2EC3EC4、EAEC1EC2EC4EC3、EAEC1EC3EC2EC4、EAEC1EC3EC4EC2、EAEC1EC4EC2EC3、EAEC1EC4EC3EC2、EAEC2EC1EC3EC4、EAEC2EC1EC4EC3、EAEC2EC3EC1EC4、EAEC2EC3EC4EC1、EAEC2EC4EC1EC3、EAEC2EC4EC3EC1、EAEC3EC1EC2EC4、EAEC3EC1EC4EC2、EAEC3EC2EC1EC4、EAEC3EC2EC4EC1、EAEC3EC4EC1EC2、EAEC3EC4EC2EC1、EAEC4EC1EC2EC3、EAEC4EC1EC3EC2、EAEC4EC2EC1EC3、EAEC4EC2EC3EC1、EAEC4EC3EC1EC2、及/或EAEC4EC3EC2EC1。

DSG2蛋白質之部分之非限制性實施例以及存在於DSG2融合多肽中之可能組態提供於表2中。表2中所述之任何DSG2結構域可使用本文中所提供之任何連接子可操作地連接至融合多肽內之另一結構域或連接至另一DSG2結構域。本揭露之組成物可包括表2中所述之任何結構域之部分或片段。被包括在本揭露之多肽中的SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之結構域或結構域組合可在表2中所定義之結構域的上游或下游延伸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40或50個胺基酸。在一些具體實施例中，被包括在本揭露之多肽中的SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之結構域或結構域組合可在表2中所定義之結構域的N末端或C末端截斷1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40或50個胺基酸。作為非限制性實施例，DSG2蛋白質之細胞外區域可從跨越SEQ ID NO: 1之胺基酸50至609的該等胺基酸延伸。 免疫球蛋白蛋白質

在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括免疫球蛋白蛋白質之全部或部分。免疫球蛋白蛋白質可係IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。在一個具體實施例中，免疫球蛋白蛋白質可係IgG。IgG之非限制性實施例可係IgG1、IgG2、IgG3及/或IgG4。 DSG2融合多肽可包括免疫球蛋白之區域或部分。免疫球蛋白之區域之非限制性實施例諸如Fc區域、Fab區域、重鏈可變(VH)結構域、重鏈恆定結構域、輕鏈可變(VL)結構域、或輕鏈恆定結構域。

DSG2融合多肽可包括一或多個免疫球蛋白之Fc區域。在一些具體實施例中，Fc區域可包括第一恆定區域免疫球蛋白結構域(例如，CH1)或其部分，且在一些情況下，包括絞鏈之部分。在其他態樣中，Fc區域排除第一恆定區域免疫球蛋白結構域。因此，Fc可係指IgA、IgD、及IgG之最後兩個恆定區域免疫球蛋白結構域(例如，CH2及CH3)，IgE及IgM之最後三個恆定區域免疫球蛋白結構域，及對於此等結構域為N末端之可撓性絞鏈。對於IgA及IgM，Fc區域可包括J鏈。對於IgG，Fc區域包含免疫球蛋白結構域Cγ2及Cγ3(Cγ2及Cγ3)及在Cγ1 (Cγ1)與Cγ2 (Cγ2)之間的低鉸鏈區域(lower hinge region)。在一些具體實施例中，Fc區域係指免疫球蛋白之經截斷之CH1結構域、及免疫球蛋白之CH2及CH3。儘管Fc區域之邊界可能有所不同，但人類IgG重鏈Fc區域典型上經常被定義為包括殘基E216或C226或P230至其C末端，其中該編號係根據Kabat抗體編號序列中之EU索引。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括人類免疫球蛋白蛋白質。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括非人類免疫球蛋白蛋白質。非人類免疫球蛋白蛋白質可係狗、大鼠、或靈長類免疫球蛋白蛋白質。表3中提供免疫球蛋白之部分之序列的非限制性實施例。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括與與表3中之任何序列或表3中之序列之片段具有至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%同一性的免疫球蛋白蛋白質或其部分。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括IgG1之重鏈恆定區域(GenBank登錄號P01857.1；SEQ ID NO: 4)之胺基酸100至330。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括IgG1之重鏈恆定區域(SEQ ID NO: 4)之胺基酸104至330，其在本文中提供為SEQ ID NO: 5，代表IgG1重鏈恆定區域之Fc區域。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括SEQ ID NO: 5之變體，其經指名為P329G LALA(使用Eu胺基酸編號命名法)。此變體在IgG1之Fc區中含有L234A/L235A/P329G突變，且於本文中提供為SEQ ID NO: 31。「P329G LALA變體(P329G LALA variant)」已顯示降低免疫球蛋白之FcγR與C1q交互作用，且因此其使由體內DSG2融合多肽之表現所引發之免疫反應最小化(Schlothauer,等人 Protein Eng. Des. Sel.2016, 29(10), 457-466，以全文引用方式併入本文中)。在一些替代具體實施例中，IgG1蛋白質不包括L234A、L235A及P329G突變。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括IgG4(GenBank登錄號P01861.1；SEQ ID NO: 10)之胺基酸99至327，其在本文中提供為SEQ ID NO: 11，代表IgG4重鏈恆定區域之Fc區域。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括SEQ ID NO: 11之變體，其包括三個經指名為S228P、L235E及P329G(使用Eu胺基酸編號命名法)之突變。包括此等三個突變之變體之序列係提供為SEQ ID NO: 32。

IgG4之人類IgG4 S228P/L235E/P329G變體(在本文中亦稱為「SPLE P329」)係之前已證明過具有最小的FcγR結合活性的IgG4之變體，(參見Newman等人2001, Clin. Immunol., 98, 164-174；其內容以全文引用方式併入本文中)。在一些具體實施例中，IgG4蛋白質不包括上述突變。 訊息序列

訊息序列(有時稱為訊息肽、靶向肽、目標肽、定位序列(localization sequence)、運輸肽(transit peptide)、前導序列或前導肽)將蛋白質(例如，本揭露之多肽)引導至其指定之細胞及/或細胞外位置。訊息序列可係存在於大多數經指定朝特定位置的新合成蛋白質之N末端處的短(5至50個胺基酸長)肽。訊息序列可由訊息辨識顆粒(signal recognition particles, SRP)所辨識，並使用I型及II型訊息肽肽酶切割。衍生自人類蛋白質之訊息序列可作為本揭露之DSG2融合多肽併入，以將本揭露之多肽引導至特定細胞及/或細胞外位置。此等訊息序列經實驗驗證且可被切割(Zhang等人, Protein Sci.2004, 13:2819-2824)。

在一些具體實施例中，訊息序列可位在本揭露之多肽的N末端或C末端，且可(儘管非必需)從該多肽切割下來，以產出「成熟」多肽，如本文中所討論。

在一些實施例中，訊息序列可係衍生自天然分泌蛋白質之分泌訊息序列及其變體。

在一些情況下，可使用將本揭露之多肽引導至目標細胞之表面膜的訊息序列。本揭露之多肽在目標細胞表面上之表現對限制本揭露之多肽向非目標體內環境之擴散可為有用的，從而潛在地的改善本揭露之多肽的安全性。此外，本揭露之多肽的膜呈現不僅可允許生理上及定性上之訊息傳導，而且允許多肽之穩定及再循環以持續更長的半衰期。

訊息序列可係來自其他生物體(諸如病毒、酵母及細菌)之異質性訊息序列，其可將本揭露之多肽引導至特定細胞部位，諸如細胞核(例如，EP 1209450)。其他實施例可包括來自木黴屬( Trichoderma)之天冬胺酸蛋白酶(NSP24)訊息序列，其可增加融合蛋白質(諸如酶)之分泌(例如，Cervin及Kim之美國專利第8,093,016號)；細菌脂蛋白訊息序列(例如，Lau及Rioux之PCT公開案第1991/09952號)；大腸桿菌( E.coli)腸毒素II訊息肽(例如，Kwon等人之美國專利第6,605,697號)；大腸桿菌分泌訊息序列(例如，Malley等人之美國專利公開案第2016/090404號)；來自甲基營養型酵母(methylotrophic yeast)之脂酶訊息序列(例如，美國專利第8,975,041號)；及衍生自棒狀桿菌( Coryneform bacteria)之去氧核糖核酸酶(DNase)的訊息肽(例如，美國專利第4,965,197號)；其各自內容係以全文引用方式併入本文中。

在一些具體實施例中，訊息肽可係IgG1訊息肽或IgG2訊息肽。在一些具體實施例中，訊息肽可係小鼠IgGκ κ輕鏈訊息肽，其具有胺基酸序列 METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO: 29)。此訊息肽係用於改善轉殖基因表現之經最充分表徵之訊息肽中之一者(Fonseca等人, Vaccine, 2018, 36(20): 2799-2808，其以全文引用方式併入本文中)。下文中所述之融合蛋白質之例示性實施例(DSG2FP#1除外)當表現時均包括SEQ ID NO: 29之訊息肽。在測試抗DSG2抗體之抑制前，訊息肽在各融合蛋白質之蛋白質生產期間隨後被切割下來。 連接子

在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可包括至少一個連接子。連接子可位在本揭露之多肽之一或多個區域之間。在一個具體實施例中，連接子可位在DSG2蛋白質之全部或部分與免疫球蛋白蛋白質之全部或部分之間。在一個態樣中，連接子可位在DSG2蛋白質之一或多個結構域之間。

在一些具體實施例中，連接子可係多肽。在一些具體實施例中，連接子可包含胺基酸殘基之組合。在一些具體實施例中，連接子可包含約1至50個胺基酸殘基。在一些具體實施例中，連接子可包含約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸殘基。

本揭露之連接子可係約1至約100個胺基酸長，其將效應子模組(effector module)之任何結構域/區域連接在一起(亦稱為肽連接子)。連接子可係1至40個胺基酸長、或2至30個胺基酸長、或20至80個胺基酸長、或50至100個胺基酸長。連接子長度亦可取決於多肽之組態類型及基於多肽之晶體結構來最佳化。在一些情況下，較佳地可選擇較短的連接子長度。在一些態樣中，肽連接子可由藉由肽鍵連接在一起之胺基酸構成，較佳地為由藉由肽鍵連接之1至20個胺基酸，其中胺基酸係選自20個天然存在的胺基酸：甘胺酸(G)、丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、白胺酸(L)、異白胺酸(I)、絲胺酸(S)、半胱胺酸(C)、蘇胺酸(T)、甲硫胺酸(M)、脯胺酸(P)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)、組胺酸(H)、離胺酸(K)、精酸酸(R)、天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)、天冬醯胺酸(N)及麩醯胺酸(Q)。此等胺基酸中之一或多者可經醣基化，如所屬技術領域中具有通常知識者所理解。在一些態樣中，肽連接子之胺基酸可選自丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、脯胺酸(P)、天冬醯胺酸(R)、絲胺酸(S)、麩醯胺酸(Q)及離胺酸(K)。

在一些具體實施例中，連接子可係可撓性連接子或剛性連接子。可撓性連接子可由小的、非極性(例如，Gly)或極性(例如，Ser或Thr)胺基酸所組成。此等胺基酸之小尺寸提供可撓性，並允許連接功能結構域之活動性。最常使用的可撓性連接子具有主要由Gly及Ser殘基之區段(stretch)所組成之序列(「GS」連接子)。最廣泛使用的可撓性連接子之實施例具有(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n之序列。藉由調整套數「n」，可將此GS連接子之長度最佳化以達到功能結構域之適當分離，或維持必要的結構域間交互作用。在一些具體實施例中，連接子可括額外胺基酸諸如Thr及Ala以維持可撓性、以及極性胺基酸諸如Lys及Glu以改善溶解度。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括可撓性連接子，諸如(Gly)8，其純粹由甘胺酸殘基所組成。連接子序列避免大的疏水性殘基以維持在水溶液中之良好溶解度。

在一些具體實施例中，連接子可係剛性連接子。剛性連接子之非限制性實施例包括具有(EAAAK)n(n = 1至5)之序列的連接子。在一些具體實施例中，剛性連接子可具有富含脯胺酸之序列(XP)n，其中X表示任何胺基酸，較佳地為Ala、Lys或Glu。

在一些具體實施例中，連接子可係GGGGGS (SEQ ID NO: 12)或EAAAK (SEQ ID NO: 13)。在一些具體實施例中，連接子可係GGGGS (SEQ ID NO: 27)。在一些具體實施例中，連接子可係IEGRMD (SEQ ID NO: 28)。 DSG2 融合多肽

在下文中所述之實施例中研究融合多肽之某些方案。在以下描述中，組分係以N末端至C末端之格式表示，其中組分係由分號隔開。所研究之DSG2融合多肽中之一者係獲自R&D Systems (rndsystems.com)，名為「重組人類橋粒芯糖蛋白-2 Fc崁合蛋白質(ecombinant human desmoglein-2 Fc chimera protein)，CF」。此融合多肽係為纖維母細胞與盤孔之附著所開發之研究工具且先前沒有在出於治療目的之抑制抗DSG2抗體之背景下進行過研究。此融合多肽(在本文中可互換地稱為「工具誘餌(tool decoy)」及「DSG2FP#1」)之結構包括N末端具有GenBank登錄號CAA81226，代表DSG2之細胞外結構域之全序列(作為SEQ ID NO:30被包括在本文中)之殘基Ala49至Gly608、具有序列IEGRMD (SEQ ID NO: 28)之連接子；及人類IgG1 (SEQ ID NO: 4)之殘基Pro100至Lys330。在表4之一些例示性具體實施例中，DSG2細胞外結構域包括人類DSG2序列(SEQ ID NO: 1)之胺基酸50至609。在表4之一些例示性具體實施例中，免疫球蛋白之Fc區域係IgG1Fc結構域或IgG4Fc結構域。在表4之一些例示性具體實施例中，IgG1序列包括SEQ NO: 4之胺基酸100至330或104至330。在表4之一些例示性具體實施例中，IgG4序列包括SEQ NO: 10之胺基酸99至327。在表4之一些例示性具體實施例中，IgG1序列係SEQ NO: 31，其在本文中可稱為「P329G LALA變體」。在一些具體實施例中，免疫球蛋白蛋白質可係IgG4之人類IgG4 S228P/L235E/P3229G變體(SEQ ID NO: 32)。為更清楚起見，上述變體之突變命名係參照Eu抗體編號命名法而非在本段落中所識別之序列內的位置。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可以雙硫鍵連接之二聚物之方式合成。

在一些具體實施例中，DSG2融合多肽可包括至少一個連接子。連接子可存在於融合蛋白質之任兩個組分之間。

表4提供DSG2融合多肽之實施例。 治療劑

在一些具體實施例中，本揭露提供用於靶向與血清抗DSG2抗體相關之病況、疾病、病症或症狀之治療劑。在一些具體實施例中，治療劑可包括免疫球蛋白蛋白質。在一些具體實施例中，治療劑可係抗CD20抗體，諸如但不限於利妥昔單抗(rituximab)。在一些具體實施例中，本文中所述之治療劑可藉由靶向Fab或Fc片段導致自體抗體功能之阻斷。在一些具體實施例中，治療劑可係靜脈內投予之免疫球蛋白(IVIG)。投予過量IgG，可使FcRn飽和，因此所有IgG分子(包括自體抗體)可被更快地清除。在一些具體實施例中，治療劑可係FcRn阻斷單株抗體。在一個具體實施例中，FcRn阻斷單株抗體可係SYNT001(Blumberg LJ,等人Sci Adv. 2019 Dec 18; 5(12): eaax9586. doi: 10.1126/sciadv.aax9586；其之內容以全文引用方式併入本文中)。在一些具體實施例中，治療劑可係抗C5抗體，諸如依庫珠單抗(eculizumab)。自體免疫疾病中補體系統之活化可能導致免疫細胞與其免疫複合物之結合，而隨後的細胞內訊息傳導事件對於致病機轉很重要。

本揭露之治療劑可單獨使用或與本文中所述之DSG2融合多肽組合使用。當與DSG2融合多肽組合使用時，治療劑可在向個體提供DSG2融合多肽之前、同時、或之後投予。在一個具體實施例中，治療劑係用於治療與抗DSG2抗體相關之非ARVC的病況的CAAR。

在一個具體實施例中，本揭露之組成物可包括治療劑(諸如CAAR)與DSG2融合多肽之組合且可用於治療疾病，諸如但不限於ARVC、COVID-19、COVID-19後症候群、類肉瘤病、擴張型心肌症或與抗DSG2抗體相關之任何疾病。 多核苷酸

在一些具體實施例中，本揭露之多肽係由本文中所述之多核苷酸或其變體所編碼。例示性核酸或多核苷酸包括但不限於核糖核酸(RNA)、去氧核醣核酸(DNA)、蘇糖核酸(threose nucleic acid, TNA)、乙二醇核酸(glycol nucleic acid, GNA)、肽核酸(peptide nucleic acid, PNA)、鎖核酸(LNA，包括具有β-D-核糖組態之LNA、具有a-L-核糖組態之α-LNA(LNA之非鏡像異構物)、具有2'-胺基官能化之2'-胺基-LNA、及具有2'-胺基官能化之2'-胺基-a-LNA)、乙烯核酸(ethylene nucleic acid, ENA)、環己烯核酸(cyclohexenyl nucleic acid, CeNA)、或其雜交體或組合。

因此，本文中揭示含有相對於參考序列(特別是多肽序列)之取代、插入及/或添加、缺失、及共價修飾的編碼肽或多肽之多核苷酸。例如，序列標籤或胺基酸(諸如一或多個離胺酸)可添加至本文中所述之肽序列(例如，在N末端或C末端端部)中。序列標籤可用於肽的純化或定位。離胺酸可用於增加肽的溶解度或允許肽生物素化。替代地，位於肽或蛋白質之胺基酸序列之羧基及胺基末端區域的胺基酸殘基可視需要地被缺失以提供截斷之序列。某些胺基酸(例如，C末端或N末端殘基)可取決於序列之用途而經替代地缺失，作為實施例，表現序列作為可溶解的或連接至固體支撐物的較大序列之部分。

當任何特徵已經識別或定義為由本文中所述之多核苷酸所編碼之多肽的所欲組分時，可藉由移動、交換、反轉、刪除、隨機化、或複製來執行此等特徵之任何數種操作及/或修飾。此外，應理解特徵之操作可導致與本文中所述之分子的修飾相同的結果。例如，涉及刪除結構域的操作將導致分子長度的改變，如同使核酸編碼小於全長分子之修飾。 III. 醫藥組成物及遞送

本文中所述之融合多肽可用作治療劑。在一些具體實施例中，本揭露提供醫藥組成物，其包含至少一種醫藥上可接受之載劑及融合多肽。

在一些具體實施例中，組成物經投予至人類、人類患者、或個體。儘管本文中所提供之醫藥組成物的描述主要針對適用於投予至人類的醫藥組成物，但技術人員應理解此類組成物通常適用於投予至任何其他動物，例如，非人類動物(例如，非人類哺乳動物)。適用於投予至人類之醫藥組成物以使該組成物適用於投予至各種動物之修飾係眾所周知的，且普通技術獸醫藥理學家可僅以普通(若有的話)實驗之方式設計及/或進行此種修飾。所設想之投予醫藥組成物之個體包括但不限於人類及/或其他靈長類；哺乳動物，包括商業相關哺乳動物，諸如狗、牛、豬、馬、羊、貓、小鼠、及/或大鼠；及/或鳥類，包括商業相關鳥類，諸如家禽、雞、鴨、鵝、及/或火雞。作為非限制性實施例，本揭露之組成物可投予至狗以治療ARVC。

本文中提供融合多肽及其醫藥組成物，其可與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合使用。

在一些具體實施例中，本揭露之融合多肽及醫藥組成物可經由皮下途徑或經由靜脈內途徑遞送。

在一些具體實施例中，醫藥上可接受之賦形劑包括但不限於任何及所有溶劑、分散介質、稀釋劑、或其他液體媒劑、分散及懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳劑、防腐劑、固體黏合劑、潤滑劑、調味劑、穩定劑、抗氧化劑、滲透壓調整劑、pH調整劑等，以適合所需之特定劑型。用於調配醫藥組成物之各種賦形劑及用於製備組成物之技術在所屬技術領域係已知的(參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21" Edition, A. R. Gennaro (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, Md., 2006；以全文引用方式併入本文中)。使用習知賦形劑介質可預期在本揭露之範躊內，除非與物質或其衍生物不相容的任何習知賦形劑介質(諸如藉由產生任何非所欲之生物效應或以其他有害方式與醫藥組成物之任何其他(多種)組分交互作用)之外，其使用預期在本揭露之範疇內。

在一些具體實施例中，醫藥上可接受之賦形劑係至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%純的。在一些具體實施例中，賦形劑經批准用於人類及獸醫用途。在一些具體實施例中，賦形劑可經美國食品及藥物管理局批准。在一些具體實施例中，賦形劑可具有醫藥等級。在一些具體實施例中，賦形劑符合美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典、及/或國際藥典之標準。

用於製造醫藥組成物之醫藥上可接受之賦形劑包括但不限於惰性稀釋劑、分散劑及/或造粒劑、表面活性劑及/或乳劑、崩解劑、黏合劑、防腐劑、緩衝劑、潤滑劑、及/或油劑。此類賦形劑可視需要地被包括在醫藥組成物中。組成物亦可包括賦形劑諸如可可脂及栓劑蠟(suppository wax)、著色劑、塗覆劑、甜味劑、調味劑、及/或芳香劑。

例示性稀釋劑包括但不限於碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化鈉、乾燥澱粉、玉米澱粉、糖粉等、及/或其組合。

例示性造粒及/或分散劑包括但不限於馬鈴薯澱粉、玉米澱粉、木薯澱粉、羥基乙酸澱粉鈉、黏土、海藻酸、瓜爾豆膠(guar gum)、柑橘渣(citrus pulp)、洋菜、膨潤土、纖維素及木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、矽酸鹽、碳酸鈉、交聯聚乙烯吡咯啶酮(交聯聚維酮)、羧甲基澱粉鈉(羥基乙酸澱粉鈉)、羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉(交聯羧甲基纖維素)、甲基纖維素、預糊化澱粉(澱粉1500)、微晶澱粉、水不溶性澱粉、羧甲基纖維素鈣、矽酸鋁鎂(VEEGUM®)、硫酸月桂酯鈉、四級銨化合物等、及/其組合。

例示性表面活性劑及/或乳劑包括但不限於天然乳劑(例如阿拉伯膠、洋菜、海藻酸、海藻酸鈉、黃蓍膠(tragacanth)、chon- drux、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟及卵磷脂)、膠體黏土(例如膨潤土(矽酸鋁)及VEEGUM®(矽酸鋁鎂)、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇(例如硬脂醇、鯨蠟醇、油醇、三乙醯甘油單硬脂酸酯(triacetin monostearate)、乙二醇二硬脂酸酯(ethylene glycol distearate)、甘油單硬脂酸酯及丙二醇單硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(carbomer)(例如羧基聚亞甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物、及羧基乙烯基聚合物)、紅藻膠(carrageenan)、纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素鈉、粉狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素)、山梨醇酐脂肪酸酯(如聚氧乙烯山梨醇酐月桂酸酯(TWEEN®20)、聚氧乙烯山梨醇酐(TWEEN®60)、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯(TWEEN®80)、山梨醇酐單棕櫚酸酯(SPAN®40)、山梨醇酐單硬脂酸酯(SPAN®60)、山梨醇酐三硬脂酸酯(SPAN®65)、單硬脂酸甘油酯、山梨醇酐單油酸酯(SPAN®80)、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯單硬脂酸酯(MYRJ®45)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧亞甲基硬脂酸酯、及SOLUTOL®)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如CREMOPHOR®)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚(BRIJ®30)、聚(乙烯基-吡咯啶酮)、月桂酸二甘單酯(diethylene glycol monolaurate)、油酸三乙醇胺、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、硫酸月桂酯鈉、PLUORINC®F 68、POLOXAMER® 188、十六烷基三甲基溴化銨(cetrimonium bromide)、氯化十六烷基吡啶、氯化苄烷銨(benzalkonium chloride)、多庫酯鈉等、及/或其組合。

例示性黏合劑包括但不限於澱粉(例如玉米澱粉及澱粉糊)；明膠；糖類(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；胺基酸(例如甘胺酸)；天然及合成膠(例如阿拉伯膠、海藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚萃取物、潘瓦爾膠(panwar gum)、甘地膠(ghatti gum)、車前籽膠(mucilage of isapol husk)、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素、醋酸纖維素、聚乙烯-吡咯啶酮、矽酸鋁鎂(VEEGUM®)、及落葉松阿拉伯半乳聚醣(larch arabogalactan))；藻酸鹽；聚環氧乙烷；聚乙二醇；無機鈣鹽；矽酸；聚甲基丙烯酸酯；蠟；水；酒精等；及其組合。

例示性防腐劑可包括但不限於抗氧化劑、螯合劑、抗菌防腐劑、抗真菌防腐劑、酒精防腐劑、酸性防腐劑，以/及其他防腐劑。氧化係mRNA，尤其是液體mRNA配方之潛在降解路徑。為了防止氧化，可將抗氧化劑添加至配方。例示性抗氧化劑包括但不限於α-生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、苯甲醇、丁基羥基甲氧苯、EDTA、間甲酚、甲硫胺酸、二丁基羥基甲苯、單硫代甘油(monothioglycerol)、偏亞硫酸鉀、丙酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸鈉、硫代甘油及/或亞硫酸鈉。例示性螯合劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸單水合物、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸(edetic acid)、丁烯二酸、蘋果酸、磷酸、乙二胺四乙酸鈉、酒石酸、及/或乙二胺四乙酸三鈉。例示性抗菌防腐劑包括但不限於氯化苄烷銨、氯化苯索寧、苯甲醇、布羅波爾(bronopol)、溴化十六基三甲銨(cetrimide)、氯化十六烷基吡啶、克羅西希定(chlorhexidine)、氯丁醇、氯甲苯酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、胺己嘧啶(hexetidine)、咪唑烷脲(imidurea)、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇、及/或乙汞硫柳酸鈉(thimerosal)。例示性抗真菌防腐劑包括但不限於對羥基苯甲酸丁酯(butyl paraben)、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉、及/或山梨酸。例示性酒精防腐劑包括但不限於乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚類化合物、雙酚、氯丁醇、羥基苯甲酸酯、及/或苯乙醇。例示性酸性防腐劑包括但不限於維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、醋酸、去氫乙酸、抗壞血酸、山梨酸，及/或植酸。其他防腐劑包括但不限於生育酚、生育酚乙酸酯、甲磺酸去鐵胺(deteroxime mesylate)、溴化十六基三甲銨、丁基羥基甲氧苯(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸鈉(SLS)、月桂基醚硫酸鈉(sodium lauryl ether sulfate，SLES)、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鉀、偏亞硫酸氫鉀、GLYDANT PLUS®、PHENONIP®、對羥基苯甲酸甲酯、GERMALL®115、GERMABEN®、NEOLONE™、KATHON™、及/或EUXYL®。

在一些具體實施例中，醫藥溶液之pH係維持在pH 5與pH 8之間以改善穩定性。用以控制pH之例示性緩衝液可包括但不限於磷酸鈉、檸檬酸鈉、琥珀酸鈉、組胺酸(或組胺酸-HCl)、碳酸鈉、及/或蘋果酸鈉。在另一具體實施例中，以上列示之例示性緩衝液可與其他單價相對離子(包括但不限於鉀)一起使用。二價陽離子亦可用作緩衝相對離子；然而，由於複合物形成及/或mRNA降解，此等不是較佳的。

例示性緩衝劑亦可包括但不限於檸檬酸鹽緩衝溶液、醋酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣(calcium glubionate)、葡庚糖酸鈣(calcium gluceptate)、葡萄糖酸鈣、D-葡萄糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、磷酸氫鈣、磷酸、磷酸三鈣、磷酸氫氧化鈣、乙酸鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀(dibasic potassium phosphate)、磷酸二氫鉀(monobasic potassium phosphate)、磷酸鉀混合物、乙酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、胺丁三醇、氫氧化鎂、氫氧化鋁、海藻酸、無熱原水、等張鹽水、林格氏溶液、乙醇等、及/或其組合。

例示性潤滑劑包括但不限於硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、二氧化矽、滑石粉、麥芽、甘油山崳酸酯(glyceryl behanate)、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、月桂基硫酸鎂、月桂基硫酸鈉等、及其組合。

例示性油劑包括杏仁油、杏核(apricot kernel)油、酪梨油、巴巴蘇(babassu)油、佛手柑油、黑醋栗籽(black currant seed)油、琉璃苣油、杜松(cade)油、甘菊油、芥花油、香菜油、巴西棕櫚(carnauba)油、蓖麻油、肉桂油、可可脂、椰子油、鱈魚肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鴯鶓油(emu)、桉樹油、月見草油、魚油、亞麻仁油、香葉醇(geraniol)油、葫蘆(gourd)油、葡萄籽油、榛子油、牛膝草油、肉荳蔻酸異丙酯、荷荷巴油、苦葵堅果(kukui nut)油、穗花薰衣草(lavandin)油、薰衣草油、檸檬油、山胡椒(litsea cubeba)油、澳洲堅果(macademia nut)油、錦葵油、芒果籽油、白芒花籽油(meadowfoam seed)、貂油、肉荳蔻油、橄欖油、柑橘油、大西洋胸棘鯛(orange roughy)油、棕櫚油、棕櫚仁油、桃仁油、花生油、罌粟籽油、南瓜籽油、油菜籽油、米糠油、迷迭香油、紅花油、檀香木油、山茶花(sasanqua)油、木質薄荷(savoury)油、沙棘(sea buckthorn)油、芝麻油、乳木果油(shea butter)、矽膠(silicone)、大豆油、向日葵油、茶樹油、薊油、椿油、香根草(vetiver)油、核桃油，以及小麥胚芽油。例示性油劑包括但不限於硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯(caprylic triglyceride)、癸酸三甘油酯(capric triglyceride)、環甲基聚矽氧烷(cyclomethicone)、癸二酸二乙酯、二甲基聚矽氧烷360 (dimethicone 360)、肉豆蔻酸異丙酯、礦物油、辛基十二醇、油醇、矽油、及/或其組合。

根據調配者之判斷，賦形劑諸如可可脂及栓劑臘、著色劑、塗覆劑、甜味劑、調味劑、及/或芳香劑可存在於組成物中。

例示性添加物包括生理上生物相容的緩衝劑(例如，三甲胺鹽酸鹽)、添加螯合劑(諸如例如，DTPA或DTPA-雙醯胺)或鈣螯合複合物(例如鈣DTPA、CaNaDTPA-雙醯胺)，或視需要地，鈣或鈉鹽之添加物(例如，氯化鈣、抗壞血酸鈣、葡萄糖酸鈣或乳酸鈣)。此外，可使用抗氧化劑及懸浮劑。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可藉由導致治療有效結果之任何途徑來投予。此等包括但不限於腸內(進入小腸)、胃腸道、硬膜上(進入硬腦膜)、口服(藉由嘴巴)、經皮、硬膜外、腦內(進入大腦)、腦室內(進入腦室)、表皮(施用於皮膚)、皮內(進入皮膚本身)、皮下(皮膚下方)、鼻腔投予(透過鼻子)、靜脈內(進入靜脈)、靜脈推注、靜脈滴注、動脈內(進入動脈)、肌肉內(進入肌肉)、心臟內(進入心臟)、骨內輸注(進入骨髓)、鞘內(進入脊髓管)、腹膜內(輸注或注射到腹膜內)、膀胱內輸注、玻璃體內(透過眼睛)、海綿體內注射(進入病理腔)、腔內(進入陰莖基部)、陰道內投予、子宮內、羊膜外投予、經皮(透過完整皮膚擴散以供全身分佈)、經黏膜(透過黏膜擴散)、經陰道、吹入(鼻吸(snorting))、舌下、唇下、灌腸、眼藥水(到結膜上)、滴耳劑、耳殼(在耳朵中或藉由耳朵)、口頰(針對臉頰)、結膜、皮膚、牙齒(至牙齒)、電滲透、子宮頸內、竇內、氣管內、體外、血液透析、浸潤、間質、腹膜內、羊膜內、關節內、膽內、支氣管內、滑囊內、軟骨內(在軟骨內)、尾部內(在馬尾部內(cauda equine))、腦池內(在腦大池小腦延髓內)、角膜內(在角膜內)、齒冠內(dental intracornal)、冠狀動脈內(冠狀動脈內)、海綿體內(在陰莖海綿體之可擴張空間內)、椎間盤內(在椎間盤內)、導管內(在腺體導管內)、十二指腸內(在十二指腸內)、硬膜內(在硬腦膜內或下方)、表皮內(至表皮)、食道內(至食道)、胃內(在胃內)、牙齦內(在牙齦內)、迴腸內(在小腸遠端部分內)、病灶內(在局部病灶內或直接引入至局部病灶中)、血管腔內(在管空腔內)、淋巴內(在淋巴內)、髓內(在骨頭之骨髓腔內)、腦膜內(在腦膜內)、眼內(在眼睛內)、卵巢內(在卵巢內)、心包內(在心包內)、胸膜內(在胸膜內)、前列腺內(在前列腺內)、肺內(在肺或其支氣管內)、竇內(在鼻或眶竇(periorbital sinuse)內)、脊髓內(在椎柱內)、滑膜內(在關節滑膜腔內)、肌腱內(在肌腱內)、睾丸內(在睾丸內)、鞘內(在腦脊髓軸之任何水平的腦脊髓液內)、胸腔內(在胸腔內)、小管內(在器官之小管內)、腫瘤內(在腫瘤內)、鼓膜內(在中耳內)、血管內(在血管內)、心室內(在心室內)、離子電滲法(iontophoresis)(藉助於電流，其中可溶性鹽之離子遷移到身體組織中)、灌洗(清洗或沖洗開放性傷口或體腔)、喉(直接在喉部上)、鼻胃(透過鼻子並進入胃中)、封閉敷料技術(occlusive dressing technique)、眼科(至眼睛外部)、口咽(直接至嘴巴及咽部)、腸胃外、經皮(percutaneous)、關節周圍、硬膜外、神經周圍、牙周、直腸、呼吸(在呼吸道內藉由經口或鼻腔吸入以供局部或全身效應)、眼球後(在腦橋後面或在眼球後面)、心肌內(進入心肌)、軟組織、蜘蛛膜下、結膜下、黏膜下、經胎盤(透過或穿過胎盤)、經氣管(透過氣管壁)、經鼓膜(穿過或透過鼓腔)、輸尿管(至輸尿管)、尿道(至尿道)、陰道、骶管阻滯(caudal block)、診斷、神經阻滯、膽道灌注、光除去法(photopheresis)或脊髓。在特定具體實施例中，組成物可以允許其穿越血腦障壁、血管障壁、或其他上皮障壁之方式投予。

治療有效劑量將可由所屬技術領域中具有通常知識者輕易地判定，且將取決於疾病之嚴重性及病程、患者的健康及對治療之反應、及治療醫師之判斷。 IV. 使用方法

本文中提供使用本揭露之DSG2融合多肽組成物之方法。在一個具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療與DSG2自體抗體相關之疾病。在一個具體實施例中，本揭露之組成物減輕與任何病因學之DSG2自體抗體相關之心臟毒性。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽組成物可用於降低個體中之抗DSG2抗體。個體可能沒有已知會生成抗DSG2抗體之症狀、疾病或病症。在一些具體實施例中，DSG2融合多肽組成物可用於降低血清DSG2抗體水平。本揭露之融合多肽可將DSG2抗體水平降低約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%。

在一些具體實施例中，與抗DSG2抗體於心肌中之致心律不整及/或致心肌症效應(procardiomyopathic effect)相關之任何疾病均可用如本文中所述之DSG2融合多肽治療。此類適應症之非限制性實施例包括致心律失常性右心室心肌症(ARVC)、類肉瘤病、擴張型心肌症、感染後心肌症、心臟功能受損(compromised cardiac function)、射出分率降低、心臟衰竭、心律不整、及心肌炎。

疾病之治療或改進的效力可例如藉由測量疾病進展、疾病緩解、症狀嚴重性、疼痛降低、生活品質、心臟測試之異常結果降低、維持治療效應所需之藥物劑量、疾病標誌物之水平或適用於治療中或針對預防之給定疾病的任何其他可衡量的參數來評定。藉由測量此類參數中之任一者、或參數之任何組合以監測治療或預防之效力完全在所屬技術領域中具有通常知識者的能力範圍內。關於融合多肽或其醫藥組成物之投予，「有效對抗(effective against)」疾病或病症指示以臨床上適當之方式投予導致對至少一部分的患者有益的效應，諸如症狀之改善、治癒、降低疾病負擔、延長生命、改善生活品質、降低輸血需求或由熟悉治療該特定類型的疾病或疾症之醫師通常辨識為積極的其他效應。

當一或多個疾病狀態之參數有顯著的改善(通常在統計學上為顯著)或沒有惡化或發展其他預期之症狀時，則治療或預防效應係明顯的。作為一實施例，在疾病之可衡量的參數中至少10%、及較佳地至少20%、30%、40%、50%或更多的有利改變可指示為有效治療。給定化合物或組成物之效力亦可使用如所屬技術領域中已知之針對給定疾病之實驗動物模型來判斷。當使用實驗動物模型時，當在標誌物或症狀上觀察到統計學上之顯著調變時，則證明治療之效力。

在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可用於降低治療個體之心臟異常。在一些具體實施例中，待治療之個體可具有血清抗DSG2抗體。 心肌症及心律不整

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療心律不整。心律不整係指心臟之不適當或異常的電活動模式。本揭露之組成物可用於治療一或多種類型的心律不整，如在以下疾病之非限制性實施例中發現，諸如致心律失常性右心室心肌症、類肉瘤病、COVID-19急性期後的後遺症、擴張型心肌症、肥厚型心肌症(hypertrophic cardiomyopathy)及/或限制型心肌症(restrictive cardiomyopathy)。在一個具體實施例中，患有心肌症之患者在其血清中可能出現血清DSG2自體抗體。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療心肌症。心肌症係指心臟腔室之肌肉壁的結構及功能損傷。本揭露之組成物可用於治療一或多種類型的心肌症，諸如但不限於致心律失常性右心室心肌症、類肉瘤病、COVID-19急性期後的後遺症(post-acute sequelae of COVID-19, PASC)、擴張型心肌症、肥厚型心肌症/或限制性心肌症。在一個具體實施例中，患有心肌症之患者在其血清中可能出現血清DSG2自體抗體。

在一個具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療致心律失常性右心室心肌症(ARVC)。致心律失常性右心室心肌症/發育不良(ARVC/ARVD)係與心室心律不整、心臟衰竭、及猝死相關之心肌疾症。ARVC係一種心臟疾病，其特徵在於猛爆性及復發性心律不整，且後期可能發展為心肌症並伴有心肌之纖維脂肪替代(fibrofatty replacement of the myocardium)。除了心肌細胞橋粒之結構及訊息傳導蛋白質之遺傳突變之外，患者免疫系統亦與ARVC有關。DSG2蛋白質之突變與ARVC相關，且已在患有該疾病之患者中識別出靶向DSG2之自體抗體。大約50%的ARVC患者不具有已知之橋粒突變；不過這些病患卻可表現DSG2自體抗體。在一些具體實施例中，DSG融合蛋白質可用於治療在DSG2蛋白質中具有一或多個突變的ARVC患者。在一些態樣中，DSG融合蛋白質可用於治療在DSG2蛋白質中無已知突變的ARVC患者。在一些具體實施例中，本揭露之DSG2融合多肽可靶向與ARVC相關之DSG2自體抗體。

心律不整及/或心肌症可能係與急性發炎過程相關之臨床結果，例如由諸如柯薩奇病毒或冠狀病毒感染所引起，且此種心肌炎症被稱為心肌炎。在一些具體實施例中，心肌炎可由病毒、細菌、寄生蟲、及/或真菌所引起。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療及/或預防與病毒相關之心肌炎。與心肌炎相關之病毒之非限制性實施例包含引起普通感冒之腺病毒、COVID-19；B型及C型肝炎；微小病毒，其通常引起兒童輕度皮疹(第五疾病)；及/或單純皰疹病毒、引起胃腸道感染之腸道細胞病變性人類孤兒病毒、引起單核白血球增多症之艾司坦-巴爾病毒、德國麻疹、巨細胞病毒、及HIV。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療及/或預防由細菌所引起之心肌炎。與心肌炎相關之細菌之非限制性實施例包括葡萄球菌( Staphylococcus)、鏈球菌( Streptococcus)、及/或伯氏疏螺旋體( Borrelia)。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療及/或預防由寄生蟲所引起之心肌炎。與心肌炎相關之寄生蟲之非限制性實施例包括克魯氏錐蟲( Trypanosoma cruzi)及弓蟲、包括一些由昆蟲傳送並可引起稱為南美錐蟲病(Chagas disease)之寄生蟲。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療及/或預防由真菌所引起之心肌炎。與心肌炎相關之真菌之非限制性實施例包括念珠菌、麴菌；及其他真菌，諸如組織漿菌。 致心律失常性右心室心肌症(ARVC)

致心律失常性右心室心肌症(ARVC)(亦稱為致心律失常性右心室發育不良/心肌症(ARVD/C))係一種複雜且具有破壞性的心臟疾病，常在年輕人及運動員中發現，該疾病在其臨床特徵方面展現出變異性。典型的ARVC臨床症狀包括心悸、心律不整先兆暈厥(arrhythmic presyncope)/暈厥及由於心室性心律不整所致之心因性猝死，其等指示主要電受累(primary electrical involvement)。然而，ARVC患者亦可能展現出與結構性疾病相關之臨床症狀(一般在疾病後期)，該等臨床症狀包括由變薄及擴張所組成之心肌重塑以及(右及/或左)心室之功能缺陷及/或心肌之纖維脂肪替代，其等指示主要結構受累(primary structural involvement)。因ARVC被稱為「橋粒之疾病(disease of the desmosome)」，進一步強化該疾病之結構本質，因為人類遺傳學研究顯示大約40至50%的患者在編碼橋粒細胞間接合之組分(例如，橋粒斑蛋白(desmoplakin, DSP)、斑珠蛋白(plakoglobin, JUP)、斑菲素蛋白2 (plakophillin 2, PKP2)及橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2))的基因中攜帶突變；然而，遺傳研究強烈表明單獨異常遺傳不足以引起ARVC疾病。

目前尚無有效的ARVC療法；也沒有特異於ARVC之治療方式、篩檢方案、或藥物治療之隨機試驗。因此，用於ARVC患者之治療策略主要係針對電生理學結果之症狀性緩解，及基於臨床專業知識、基於回顧性登記(etrospective registry-based)之研究結果、及模型系統之研究結果。因此，用於ARVC患者之現有療法依賴於使用抗心律不整藥物(索他洛爾(sotalol)、胺碘酮(amniodarone)及β阻斷劑)，若患者對抗心律不整療法變得難治或不耐受，則療法會轉變成更具侵襲性的選項，其包括可植入式心律去顫器(implantable cardioverter defibrillator)及心導管燒灼術(cardiac catheter ablation)。然而，現行治療方式在管理疾病方面效果有限，其中多達40%的ARVC患者在初次診斷之後10至11年內死亡，凸顯需要開發用於患有ARVC之患者的更有效療法。 COVID-19

可投予如本文中所述之DSG2融合多肽或含有該融合多肽之組成物以治療COVID-19或COVID-19.之長期影響。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療COVID-19及/或感染SARS-CoV-2之個體。感染者可能為有症狀、症狀發生前、及無症狀。根據世界衛生組織(WHO)，COVID-19傳播可發生在感染SARS-CoV-2之有症狀、症狀發生前、及無症狀的人員中。有症狀傳播可係指在人經歷症狀之前發生的傳播。症狀發生前的傳播可係指在COVID-19之症狀發作前發生的傳播。

COVID-19可與一或多種症狀相關，諸如但不限於發燒或發冷、咳嗽、呼吸急促或呼吸困難、疲勞、肌肉或身體疼痛、頭痛、新的味覺或嗅覺喪失、喉嚨痛、充血或流鼻涕、噁心或嘔吐、腹瀉、呼吸困難、胸部之持續疼痛或壓迫。在一些具體實施例中，COVID-19感染亦可能為無症狀，但仍會產生抗DSG2抗體。

DSG2融合多肽可用於治療COVID-19疾病之一或多個階段。一般來說，患有SARS-CoV-2感染之成人可被分組成下列疾病嚴重性類別。然而，在臨床指南及臨床試驗中，各類別之準則可能重疊或不同，且患者的臨床狀態可隨時間而變化(COVID-19治療指引小組。冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)治療指南。國立衛生研究院。可於www.covid19treatmentguidelines.nih.gov/獲取。訪問時間12/11/2020，以全文引用方式併入本文中)。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療無症狀或症狀發生前的感染，其可包括使用病毒學測試(即，核酸擴增測試或抗原測試)對SARS-CoV-2測試呈陽性但沒有與COVID-19一致症狀的個體。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療輕症，其包括具有COVID-19之任何各種徵象及症狀(例如，發燒、咳嗽、喉嚨痛、身體不適、頭痛、肌肉疼痛、噁心、嘔吐、腹瀉、喪失味覺及嗅覺)但沒有呼吸急促、呼吸困難、或胸部成像異常的個體。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療中症，其可包括在臨床評定或成像期間顯示下呼吸道疾病之跡象且在海平面之室內空氣中具有氧飽合度(SpO2) ≥94%的個體。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療重症，其包括在海平面之室內空氣中具有SpO2＜94%、動脈氧分壓與吸入氧濃度(fraction of inspired oxygen) (PaO2/FiO2)之比率＜300 mmHg、呼吸頻率每分鐘＞30次呼吸、或肺浸潤＞50%的個體。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療重症，其包括具有呼吸衰竭、敗血性休克、多重器官功能異常的個體。

本文中亦提供預防與COVID-19相關之一或多種病況之方法。在一個具體實施例中，可將本揭露之組成物在症狀發作前但在暴露於病毒之後提供給個體，因為在暴露於病毒與症狀發作之間有潛伏期。新型冠狀病毒SARS-CoV-2之潛伏期通常介於二至十四天之間，且平均為五天(Lombardi等人, J. Hosp.Infect. 2020 doi: 10.1016/ j.jhin.2020.03.003；其之內容以全文引用方式併入本文中)。

本揭露之組成物亦可與建議用於治療COVID-19之一或多種治療劑組合投予。在一些具體實施例中，本文中所述之DSG2融合多肽可與一或多種治療劑組合投予，諸如但不限於瑞德西韋(Remdesivir)、氯奎寧、羥氯喹寧、阿奇黴素(azithromycin)、洛匹那韋(Lopinavir)、利托那韋(Ritonavir)、伊維菌素(ivermectin)、介白素抑制劑、干擾素、激酶抑制劑、醣皮質類固醇、及/或SARS CoV-2單株抗體(例如，巴馬尼單抗(Bamlanivimab)、卡西瑞單抗(Casirivimab)、伊德單抗(Imdevimab))。

自2019開始，嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)引起數百萬人感染冠狀病毒疾病(被稱為COVID-19)(Wu等人, 2020 Nature 579, 265-269)之大流行，其導致全世界超過百萬人死亡。感染SARS-CoV-2之患者可能經歷範圍從無症狀至重症的各種臨床表現。最新研究表明，在一些情況中，個體(即使是患有輕度疾病者)在其初次康復之後有時候可能持續經歷症狀。此病況已被稱為COVID-19後症候群或「長途COVID-19 (long-haul COVID-19)」或「長期COVID-19 (long COVID-19)」或「COVID-19急性期後的後遺症(PASC)」。目前估計的是高達28%的感染Covid-19之患者在從急性期COVID-19感染康復之後3個月仍持續具有心悸(Puntmann,等人, Nature Med.2022, 28, 2117-2123，以全文引用方式併入本文中)。此外，即使在已解決COVID-19急性感染之後，患者亦可能發展出射出分率降低或心肌症。COVID-19後心臟徵象及症狀可能與對其他器官系統的影響共存，但亦可能單獨存在。患有長期-COVID之患者可能僅呈現心律不整、僅呈現心肌症、或兩者兼具。患有心肌症之患者範圍從無症狀者至猛爆性心臟衰竭、心律不整及/或心因性猝死者。

COVID-19病毒(SARS-CoV-2)影響多種器官系統，尤其是肺臟及心臟。在COVID-19感染之患者中常觀察到心臟生物標誌物之升高，特別是高敏感性肌鈣蛋白(high-sensitivity troponin)及/或肌酸激酶MB。由Bavishi等人進行之臨床分析綜述發現在患有COVID-19感染之患者中有20%發生心肌損傷(Prog Cardiovasc Dis. 2020 September-October; 63(5): 682-689)。與COVID-19相關之心肌損傷的可能機制包括但不限於，1)透過病理性T細胞及單核球媒介之高炎症(hyperinflammation)及細胞介素風暴(cytokine storm)導致心肌炎、2)呼吸衰竭及低氧血症導致心肌細胞損傷、3) ACE2表現及後續心肌細胞之保護性訊息傳導路徑之下調、4)高血液凝固性及冠狀動脈微血管血栓之發展、5)瀰漫性內皮細胞損傷、及/或6)炎症及/或壓力造成冠狀動脈斑塊破裂或供需不匹配導致心肌缺血/梗塞COVID-19後症候群。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療COVID-19後症候群。已有愈來愈多的患者從急性COVID-19康復之後持續經歷症狀且係在本文中被稱為「COVID-19後症候群(post-COVID-19 syndrome)」之報導，而罹患此等症狀之個體通常被稱為「長途跋涉者(long hauler)」。在一些具體實施例中，若患者罹患一或多種症狀長達一個月、長達兩個月、長達三個月、長達四個月、長達五個月、長達六個月、長達一年或更久，則患者可被視為患有COVID-19後症候群。

COVID-19後症候群亦與多重器官損傷相關，包括心血管損傷。在從COVID-19康復之後進行數個月的成像測試顯示即使在僅經歷輕度COVID-19症狀的人中，對心肌亦持續損傷。COVID-19後症候群亦似乎與心律不整及/或心肌炎及/或心肌症之風險增加相關。

目前，缺乏治療及/或管理COVID-19及COVID-19後症候群之治療策略。由於此等患者需要大量資源及潛在的重症照護支援，COVID-19之心臟表現已將不堪負荷的醫護系統置於更大的壓力下。具體來說，急切需要開發用於抑制發炎反應之治療方式以降低與COVID-19及COVID-19後症候群有關之心肌損傷相關之發病率及死亡率。本揭露提供基於DSG2融合多肽之組成物及用於治療疾病諸如但不限於COVID-19及/或COVID-19後症候群之方法。

本揭露之組成物可用於治療與COVID-19後症候群之心血管系統相關(即，COVID-19後心臟症候群)之一或多種症狀。一項包含近期從COVID-19康復之100位患者之研究，心臟核磁共振成像顯示有78位患者(78%)心臟受累及60位患者(60%)正處於心肌炎症，其與原有病況、急症之嚴重性及整體病程、及離初次診斷之時間無關(Puntmann等人JAMA Cardiol. 2020;5(11):1265-1273)。在一較小型研究中，在從急性COVID-19康復之後，有15%的運動員具有心肌異常之跡象。在一個具體實施例中，DSG2融合多肽可用於治療患有COVID-19後症候群之個體的心肌炎。

在一些具體實施例中，本文中所述之組成物可用於治療與任何心臟適應症無關之COVID-19後症候群。

在一些具體實施例中，本揭示之組成物可用於治療在初次COVID-19診斷之後顯示COVID-19之症狀長達數週、數個月及/或數年之個體。在一些具體實施例中，COVID-19後症候群病患可能在初次COVID-19診斷之後出現症狀長達1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、1年、2年、3年、4年、5年或更久及/或在以上時間之後出現症狀。可使用所屬技術領域已知之方法建立COVID-19之診斷(例如，反轉錄聚合酶鏈反應及/或抗體測試)。在一些具體實施例中，受COVID-19後症候群影響之個體可用本揭露之組成物治療。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療發展出心臟功能受損之COVID-19患者，最顯著的是射出分率降低，無論是否伴有明顯的心臟衰竭的患者。在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療心律不整。

本揭露之組成物可改進與COVID-19後症候群相關之一或多種症狀。在一些具體實施例中，COVID-19後症候群之症狀可能與急性COVID-19相同。在一些態樣中，與COVID-19後症候群相關之症狀可係呼吸急促、疲勞、水腫、端坐呼吸(orthopnea)、運動受限、認知能力受損、心悸、暈眩、暈厥、頭重腳輕、心臟衰竭、及/或心律不整。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療患有與重症照護後症候群(post-intensive care syndrome)重疊之症狀的COVID-19後症候群，該重症照護後症候群於未患有COVID-19的患者中亦已描述。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物亦可用於治療患有COVID-19後症候群之個體，該個體可能具有與心血管系統(例如，心肌炎症)、呼吸系統(肺功能異常)、腎臟系統(急性腎損傷)、皮膚病學(皮疹、落髮)、神經系統併發症(嗅覺及味覺問題、睡眠問題、注意力不集中、記憶問題)、及/或精神問題(抑鬱、焦慮、情緒變化)相關之一或多種長期併發症。

在一些具體實施例中，本揭露之組成物可用於治療可能患有一、二或更多種相關合併症(co-morbidity)的COVID-19後症候群個體。合併症之非限制性範例包括但不限於高血壓、甲狀腺疾病、免疫失調、COPD(慢性阻塞性肺病)、高血壓、肥胖、心理健康狀況、及糖尿病。 V. 定義

結構域：如本文中所使用當提及多肽時，術語「結構域(domain)」係指具有一或多個可識別的結構或功能特徵或性質(例如，結合能力，作為用於蛋白質-蛋白質交互作用之部位)之多肽的模體。

表現載體：如本文中所使用之術語「表現載體(expression vector)」係指含有編碼能夠被轉錄的至少一部分基因產物的核酸序列之載體。表現載體可含有各種控制序列，其係指在特定宿主生物體中可操作地連接編碼序列之轉錄及可能的轉譯所需之核酸序列。除了管理轉錄及轉譯的控制序列之外，載體及表現載體亦可含有用作其他功能的核酸序列。此術語亦包括重組質體或病毒，其包括要在體外或體內待遞送到宿主細胞中之多核苷酸。在一些具體實施例中，宿主細胞係瞬時細胞株或穩定細胞株。在一些具體實施例中，其係選自由CHO、HEK293及NS0細胞所組成之群組。

特徵：當提及多肽時，「特徵(Feature)」經定義為分子之基於不同胺基酸序列之組分。由本文中所述之多核苷酸所編碼之多肽的特徵包含局部構形、折疊、環圈、半環圈、結構域、半結構域、部位、末端或其任何組合。

融合蛋白質：如本文中所使用，術語「融合蛋白質(fusion protein)」或嵌合蛋白質係指包括非天然存在於相同多肽中之二或更多個胺基酸序列或其活性片段的蛋白質或多肽。在一些具體實施例中，可操作地共價地連接二或更多個分離多肽，例如化學地連接、或藉由肽鍵融合在一起。重組融合多肽係藉由重組DNA技術人工地產生。

半結構域：如本文中所使用，當提及多肽時，術語「半結構域(half-domain)」意指識別之結構域之部分具有存在於其所衍生自之結構域上之胺基酸的至少一半數量。應理解，結構域可能並不總是含有偶數數量的胺基酸殘基。因此，在結構域含有或經識別為包括奇數數量的胺基酸之彼等情況下，奇數數量之結構域的半結構域將包含該結構域之整數部分或下一個整數部分(結構域之胺基酸數量/2+/-0.5個胺基酸)。例如，經識別為7個胺基酸結構域之結構域可產生3個胺基酸或4個胺基酸之半結構域(7/2=3.5+1-0.5為3或4)。亦應理解，可在結構域或半結構域內識別子結構域，此等子結構域具有少於其所衍生自之結構域或半結構域中所識別之所有結構或功能性質。亦應理解，包含本文中任何結構域類型的胺基酸不需在沿著多肽之骨架上連續(即，非相鄰之胺基酸可在結構上折疊以產生結構域、半結構域或子結構域)。

免疫反應：如本文中所使用，術語「免疫反應(immune response)」係指與炎症、創傷、免疫病症、或傳染性疾病或遺傳性疾病相關之病況。此等病況的特徵可係各種因子之表現，該等因子例如，抗體、免疫細胞、細胞介素、趨化介素、及其他訊息傳導分子，其可影響細胞及全身性防禦系統。

連接子：如本文中所使用，「連接子(linker)」係指其中共價鍵將二或更多個多肽接合之功能性基團(例如，化學或多肽基團)。如本文中所使用，「肽連接子(peptide linker)」係用於將二個蛋白質彼此結合的二或多個胺基酸。

調變：如本文中所使用，術語「調變(modulation)」在所屬技術領域中係公認的且係指反應之向上調節(即，活化或刺激)、向下調節(即，抑制或抑止)，或兩者之組合或分開。

多核苷酸：如本文中所使用之術語「多核苷酸(polynucleotide)」係指藉由磷酸二酯鍵聯所連接之核苷酸序列。本文中所呈現之多核苷酸的方向為從5′至3′方向。多核苷酸可為去氧核糖核酸(DNA)分子或核糖核酸(RNA)分子。當多核苷酸為DNA分子時，分子可為基因或cDNA分子。核苷酸鹼基在本文中由單一字母代碼指示：腺嘌呤(A)、鳥糞嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、肌苷(I)及尿嘧啶(U)。可使用所屬技術領域中具有通常知識者眾所週知之標準技術來製備多核苷酸。

多肽：在一些具體實施例中，本揭露之組成物係多肽或蛋白質或其變體。根據本揭露，任何基於胺基酸之分子(天然或非天然)可被稱為「多肽(polypeptide)」，且此術語涵蓋「肽(peptide)」、「擬肽物(peptidomimetic)」、及「蛋白質(protein)」。如本文中所使用，「多肽(polypeptide)」意指最常藉由肽鍵連接在一起的胺基酸殘基(天然或非天然)之聚合物。如本文中所使用，該術語係指任何尺寸、結構或功能之蛋白質、多肽、及肽。「擬肽物(peptidomimetic)」或「多肽擬似物(polypeptide mimetic)」係其中分子含有在天然多肽(即，僅由20個蛋白質原胺基酸(proteinogenic amino acid)所組成之多肽)中不存在之結構元件的多肽。在一些具體實施例中，擬肽物能夠概括或模擬天然肽之(多種)生物作用。

多肽變體：術語「多肽變體(polypeptide variant)」係指胺基酸序列與原生或參考序列不同的分子。相較於原生或參考序列，胺基酸序列變體在胺基酸序列內之某些位置處可具有取代、缺失及/或插入。通常，變體與原生或參考序列具有至少約50%同一性(同源性)，且較佳地，其與原生或參考序列將為至少約80%、更佳地至少約90%同一的(同源的)。

重組：如本文中所使用之術語「重組(recombinant)」係指與在自然界中普遍發現的遺傳實體不同。當應用於多核苷酸或基因時，此意指該多核苷酸係選殖、限制及/或接合步驟及導致產生不同於自然界中發現之多核苷酸的構築體的其他程序之不同組合的產物。

樣本：如本文中所使用，術語「樣本(sample)」係指取自來源及/或提供分析或處理之等分試樣或部分。在一些具體實施例中，樣本係來自生物來源，諸如組織、細胞或組成部分(例如，體液，包括但不限於血液、黏液、淋巴液、滑液、腦脊髓液、唾液、羊水、羊水臍帶血、尿液、陰道分泌物及精液)。在一些具體實施例中，樣本可係或包括從整個生物體或其組織、細胞或組分部分之子集、或其片段或部分所製備之均質物、溶胞產物或萃取物，包括但不限於，例如，血漿、血清、脊髓液、淋巴液、皮膚、呼吸道、小腸、及生殖泌尿道之外切片、眼淚、唾液、乳汁、血球、腫瘤、或器官。在一些具體實施例中，樣本係或包括介質，諸如營養培養液或膠，其可含有細胞組分，諸如蛋白質。在一些具體實施例中，「初級(primary)」樣本係來源之等分試樣。在一些具體實施例中，初級樣本經受一或多種加工(例如，分離、純化等)步驟以製備用於分析或其他用途之樣本。

序列同一性：術語「序列同一性(sequence identity)」指示由序列比對所示之相同核苷酸或胺基酸之百分比。例如，兩個各具有20個胺基酸殘基之序列，除了在兩個位置處有差異之外，其胺基酸序列係相同的，將具有18/20或90%序列同一性。

實質上：如本文中所使用，術語「實質上(substantially)」係指展現全部或近乎全部範圍或程度之感興趣的特徵或性質之定性條件。所屬生物技術領域中具有通常知識者將理解生物及化學現象很少(若有的話)完成及/或繼續完成或達成或避免絕對的結果。因此本文中使用術語「實質上」以捕捉許多生物及化學現象中固有之完成性的潛在不足。

末端：如本文中所使用，當提及多肽時，術語「末端(termini)或(terminus)」係指肽或多肽之末端。此種末端不僅限於肽或多肽之第一或最終部位，亦可在端區域中包括額外胺基酸。本文中所述之基於多肽之分子的特徵可係具有N末端(由具有游離胺基(NH2)之胺基酸所終止)及C末端(由具有游離羧基(COOH)之胺基酸所終止)兩者。本文中所述之蛋白質在一些情況下由藉由雙硫鍵或藉由非共價力聚集在一起的多個多肽鏈構成(多聚體、寡聚體)。此等種類的蛋白質具有多個N及C末端。替代地，可修飾多肽之末端使得其以基於非多肽之部份(諸如有機共軛物)開始或結束，視情況而定。

治療有效量：如本文中所使用，術語「治療有效量(therapeutically effective amount)」意指當投予至患有或易患疾病、病症及/或病況的個體時，待遞送之藥劑的量係足以治療、改善症狀、診斷、預防及/或延遲疾病、病症及/或病況之發作。

治療：如本文中所使用，術語「治療(treating)」係指對特定疾病、病症及/或病況之一或多種症狀或特徵之部分或完全減輕、改進、改善、緩解、延遲發作、抑制進展、降低嚴重性及/或降低發病率。可對沒有展現疾病、病症及/或病況之徵象的個體、及/或對僅展現疾病、病症及/或病況之早期徵象的個體出於減少發展與疾病、病症及/或病況相關之病理風險之目的來投予治療。

治療：如本文中所使用，術語「治療(treat/treatment)」等係指緩解或減輕病理過程。在本揭露之上下文中，術語「治療(treat/treatment)」等關於下文中所描述之其他病況係意指緩解或減輕與此種病況相關之至少一種症狀，或減緩或反轉此種病況之進展或預期進展。

治療劑量：如本文中所使用，「治療劑量(treatment dose)」係指在解決或減輕治療適應症之療程中所投予之治療藥劑之一或多個劑量。可調整治療劑量以維持治療藥劑在體液或生物系統中所欲之濃度或活性水平。 VI. 等同物及範疇

雖然本揭露之各種實施例已具體地顯示並描述於本揭露中，所屬技術領域中具有通常知識者應理解在不脫離本文中所揭示之具體實施例及所附之申請專利範圍所中所闡述之精神及範疇下，可對形式及細節進行各種改變。

所屬技術領域中具有通常知識者將認可或能夠僅使用常規實驗來確定本文中所述之特定具體實施例之許多等同物。本揭露之範躊並不意欲局限於以上描述，而是如所附申請專利範圍中所闡述。

在申請專利範圍中，文章諸如「一(a/an)」及「該(the)」可意指一個或多於一個，除非有相反的指示或自上下文以其他方式明顯看出。若群組成員之一個、多於一個、或所有成員存在於、使用於、或以其他方式與給定的產物或處理相關，則視為滿足群組的一或多個成員之間包括「或」之申請專利範圍或說明，除非有相反的指示或自上下文以其他方式明顯看出。本揭露包括其中群組之一個成員準確地存在於、使用於給定的產物或過程中、或以其他方式與給定的產物或過程相關之具體實施例。本揭露包括其中多於一個、或所有群組成員準確地存在於、使用於給定的產物或過程中、或以其他方式與給定的產物或過程相關之具體實施例。

亦應注意，術語「包含(comprising)」意欲為開放式且容許但不要求包括額外元件或步驟。當在本文中使用術語「包含(comprising)」時，術語「由...所組成(consisting of)」及「或包括(or including」)亦因此被涵蓋及揭示。

當給定範圍時，端點被包括在內。此外，應理解，除非另有指示或從上下文中明顯看出且為所屬技術領域中具有通常知識者所理解，否則在本揭露之不同具體實施例中以範圍表示的值可假設為在所陳述範圍內的任何特定值或子範圍，除非上下文另有明確規定，否則精確至該範圍之下限單位的十分之一。

此外，應理解，落入現有技術範圍內之本揭露之任何特定具體實施例均可明確地從申請專利範圍中之任一項或多項中排除。因為此種具體實施例被認定為所屬技術領域中具有通常知識者已知的，所以即使在本文中沒有明確地闡述排除，其也可被排除。本文中所揭示之組成物之任何特定實施例可出於無論是否與現有技術之存在相關的任何原因而從任一項或多項申請專利範圍中排除。

即使在引述中沒有明確陳述，所有引述之來源，例如，參考文獻、出版物、數據庫、數據庫項目、及本文中所引述之技術均以引用方式併入本申請案中。在引述來源與本申請案之陳述衝突之情況下，應以本申請案中之陳述為主。

段落及表格標題不意欲為限制性。 [ 實施例 ] 實施例 1.DSG2 融合多肽及與抗 DSG2 抗體交互作用

DSG2融合多肽之候選物包括與IgG Fc或其變體融合之DSG2之細胞外結構域(ECD)部分。將ECD連接至免疫球蛋白之Fc部分被認為有利於DSG2融合多肽，因為其可提供增加之蛋白質穩定性、增強PK性質及有效純化。表4提供獲得或製備的DSG2融合多肽。

應注意，如藉由一個步驟親和性純化所見，DSG2融合多肽之整個製備係高度非均質。生產之早期評估表明高度聚集。如表5中所示，動態光散射(dynamic light scattering, DLS)顯示的是，所有候選物顯示平均聚合物分布指數(polymer distribution index, PDI)為＞ 0.25，指示該樣本可包含多種粒徑，此係由於更多的聚集或沉澱所致。將6個候選物與參考樣本進行比較。所有六個候選物顯示峰1模式直徑(peak 1 mode diameter)為約4至8倍更高的尺寸。如相較於含有IgG1之融合多肽，含有IgG4之融合多肽顯示峰1模式直徑為約2倍更高的尺寸。

表6顯示候選DSG2融合多肽之熔化溫度Tm值。存在三個Tm值表明在分析前該候選DSG2融合多肽可能含有聚集體。隨著溫度增加，該等聚集體開始移動、展開並分散開。在含有第三個Tm值之4個樣本之微差圖(differential graph)顯示在熔點之後的一轉移段。在分析期間所提供之Tm值證實所有DSG2融合多肽之間的值類似。此可表明該等構築體之熱穩定性係類似。

藉由抗DSG2抗體meso scale discovery (MSD)檢定測試DSG2融合多肽對阻斷抗DSG2抗體之能力。所測試之DSG2FP#2、DSG2FP#3、DSG2FP#4、DSG2FP#5、DSG2FP#6、DSG2FP#7融合多肽能夠與抗DSG2抗體結合並阻斷之。DSG2融合多肽DSG2FP#1能夠結合並阻斷抗DSG2抗體以及從ARVC患者獲得之血清(本文中亦稱為ARVC血清)(參見圖1A)。將DSG2融合多肽經受粒徑排阻層析法並檢驗不同的洗提餾分。餾分「C」顯示預計之~350 kDa的MW並將其用於另外的實驗中。如表7及圖1B、圖1C及圖1D所示，富集之餾分C改善DSG2融合多肽阻斷ARVC患者血清之能力。與DSG2FP#4觀察到的相比，此效應對DSG2FP#2及DSG2FP#3更明顯。 實施例 2. 抗 DSG2 抗體及 DSG2 融合多肽對心臟功能之效應

為測定抗DSG2抗體在心肌細胞中之效應，執行心臟試管內致心律不整(cardiac in vitroproarrhythmia, CiPA)檢定(Sager等人Am Heart J 2014;167:292-300；其內容以全文引用方式併入本文中)。CiPA經設想由四個組分所組成：(1)評估測試劑對心臟離子通道檢定之效應；(2)將基於離子通道結果之心臟動作電位(cardiac action potential)進行電腦模擬，以將數據與心臟功能整合；(3)實驗測量測試劑在人類心室肌細胞中之效應以確認模擬結果；及(4)對結果評分。多電極陣列(multielectrode array，MEA)檢定係CiPA之一組分，其使用人類誘導性富潛能幹細胞(iPSC)衍生之心肌細胞，藉由記錄自發性類ECG場電位(spontaneous ECG-like field potential)來評估二維激發傳播(two-dimensional excitation propagation)。以下所定量之鈉棘波係測量心肌細胞中之特定鈉通道電流，且亦描述於Blinova K,等人Cell Rep.2018 Sep 25; 24(13): 3582-3592(其內容以全文引用方式併入本文中)中。CiPA被FDA及EMA視為一種臨床驗證之基於心肌細胞之檢定。在檢定中心律不整訊號被視為係某些劑(例如，抗DSG2抗體)在人類中可能具有心律不整電位的證據。所評估之參數包括測量在電訊號傳播之組分中之棘波(例如鈉棘波)及細胞指數(細胞阻抗及細胞數量之函數)之改變。鈉棘波之改變可指示心律不整而細胞指數(cell index，CI)之改變可指示細胞連通性之改變。

在心肌細胞CiPA檢定中測試市售之抗DSG2抗體。發現抗DSG2抗體阻抑鈉棘波且此效應係時間及劑量依賴性。電壓(µV)係以0、1小時、12小時、24小時、48小時、72小時、及96小時之時間間隔測量。如圖2中所示，抗DSG2抗體(0.5 µg/mL)對鈉棘波之效應與10 µM利多卡因(lidocaine)(陽性對照)之效應係可相比。藉由1.1 µg/mL的DSG2融合多肽(DSG2FP#1)挽救抗DSG2抗體對心肌細胞鈉棘波之效應。一如預期，0.5 µg/mL之陰性對照(媒劑、兔IgG及抗VCAM-1抗體)隨著時間推移並沒有引起鈉棘波之任何改變。

不同劑量的抗DSG2抗體影響細胞指數。細胞指數與細胞層對電流之導電性呈逆相關。跨細胞層之導電性增加可能指示在細胞層中存在更多的間隙，此暗示該等細胞彼此黏附較差。因此，跨細胞層之導電性增加可能導致較低的細胞指數。未觀察到劑量反應。抗DSG2抗體之濃度從0.00005 µg/mL變化至5 µg/mL。用高劑量的利多卡因(陽性對照)處理導致細胞指數明顯降低及可能的細胞死亡。利多卡因之濃度從3µM變化至100 µM。應注意，陰性對照(媒劑、抗VCAM-1抗體或兔IgG)均未顯示出細胞指數降低。抗DSG2抗體之濃度從0.00005 µg/mL變化至5 µg/mL。抗DSG2抗體對細胞指數之效應藉由添加DSG2融合多肽DSG2FP#1而逆轉(參見圖3及表8)。 實施例 3. 在 ARVC 患者中之 DSG2 抗體水平

ARVC診斷係基於稱為工作小組標準(task force criteria)之複雜工具，其可導致對於ARVC診斷之不同信心水平。探討將DSG2抗體作為ARVC疾病狀態及嚴重性之指標的效用。從診斷為ARVC患者中收集大約50 cc血清。該分析使用總共10名ARVC患者及5名健康對照者。基於患者醫療紀錄中之可用數據，將ARVC血清樣本分成更穩健的診斷(more robust diagnosis)及不太穩健的診斷(less robust diagnosis)並使用基於抗DSG2抗體meso scale discovery (MSD)之檢定比較抗DSG2抗體水平。檢定結果顯示，檢定中之抗DSG2抗體訊號強度與診斷臨床數據之穩健性密切相關。相較於其他兩個群組，從具有強臨床數據之患者中獲得之ARVC血清樣本顯示更高的抗DSG2抗體水平(圖4A及圖4B)。來自具有強臨床數據之患者血清樣本的檢定訊號亦可藉由添加競爭性DSG2多肽DSG2-Fc (DSG2FP#1)來阻斷。 實施例 4. 藉由具有不同親和性標籤之 DSG2 融合多肽阻斷在 ARVC 患者血清中存在之抗 DSG2 抗體免於與 DSG2 細胞外結構域結合

在電化學免疫檢定中研究DSG2融合多肽阻斷ARVC患者之血清中之抗DSG2抗體與DSG2細胞外結構域結合之能力。將融合多肽添加至5 µg/mL之最終濃度且患者血清使用之最終濃度為10% (v/v)。結果顯示於圖5中之一系列條狀圖中，其中數字961、965、978、986及964指示ARVC患者的血清樣本。

在圖5中，從左起第一個數據系列係DSG2FP#1(上文描述為SEQ ID NO:30之胺基酸49至608；連接子(IEGRMD (SEQ ID NO: 28))；IgG1 (SEQ ID NO: 4)之胺基酸100至330。從左起第二個數據系列係DSG2 _(50-602)-6xHis，其係SEQ ID NO: 1(完整細胞外結構域)之DSG2胺基酸50至602與六組胺酸肽標籤之融合多肽。從左起第三個數據系列係融合多肽之組合，其包括EC1 _(50-155)-6xHis，為SEQ ID NO: 1之DSG2胺基酸50至155 (EC1)與六組胺酸肽標籤之融合EC2 _(151-268)-6xHis，為SEQ ID NO: 1之DSG2胺基酸151至268 (EC2)與六組胺酸肽標籤之融合。從左起第四個數據系列係EA _(491-602)-6xHis，為SEQ ID NO: 1之DSG2胺基酸491至602 (EA)與六組胺酸肽標籤之融合。圖5之抑制結果(其中100%抑制指示完全阻斷)顯示DSG2FP#1提供最好的阻斷活性。兩個額外檢定指示包括非IgG1 Fc區域之六組胺酸標籤的融合多肽至少有60%阻斷活性。因此，顯而易見的是阻斷ARVC患者血清中之抗DSG2抗體與DSG2細胞外結構域之結合可用具有非IgG之Fc區域的親和性標籤的DSG2融合多肽來完成。很可能可確定其他親和性標籤可用於DSG2多肽之替代具體實施例中，例如，實施例包括但不限於CBP、MBP、鏈黴親和素及GST。此外，具有細胞外結構域(ECD)之部分(包括EA區域)之融合多肽證實阻斷ARVC患者血清中之抗DSG2抗體與DSG2細胞外結構域之結合。此等發現為預測包含DSG2細胞外結構域或其部分與不同親和性標籤組合之融合多肽將用於治療由抗DSG2自體抗體所引起之包括各種心臟心律不整之病症的合適治療劑提供基礎，該等融合多肽藉由阻斷抗DSG2抗體與DSG2之細胞外結構域的交互作用來發揮作用。 實施例 5. 藉由具有 IgG4 親和性標籤之 DSG2 融合多肽阻斷抗 DSG2 抗體與 DSG2 細胞外結構域的結合

在電化學免疫檢定中評定由兩種重組DSG2融合多肽對抗DSG2抗體與DSG2細胞外結構域之結合的阻斷。將融合多肽添加至5 mg/mL之最終濃度。抗DSG2抗體使用之最終濃度為500 ng/mL。結果呈現於圖6中。在檢定中完全阻斷係100%抑制。DSG2重組蛋白質：黑色長條為DSG2-(IgG4)FC (DSG2FP#6)，為由SEQ ID NO: 1之胺基酸50至609所表示之DSG2細胞外結構域與SEQ ID NO: 11之IgG4 Fc結構域胺基酸99至332之融合蛋白質。灰色長條為DSG2-GGGGS-(IgG4)FC (DSG2FP#7)，為由SEQ ID NO: 1之胺基酸50至609所表示之全長DSG2細胞外結構域與GGGGS肽連接子(SEQ ID NO: 12)及SEQ ID NO: 11之IgG4 Fc結構域胺基酸99至332之融合蛋白質。

兩種融合多肽顯示至少大於80%抑制之類似活性。此指示使用人類IgG4 Fc區域作為親和性標籤不會削弱融合多肽之抗DSG2抗體阻斷功能，且在此情況下連接子之存在對抑制活性不會產生顯著影響。此等發現為預測包含DSG2細胞外結構域或其部分與不同親和性標籤(包括來自其他免疫球蛋白之Fc區域)組合之融合多肽將用於治療由抗DSG2自體抗體所引起之包括各種心臟心律不整之病症的合適治療劑提供基礎。

如隨附圖示中之說明，從以下本揭露之特定具體實施例之描述中，前述及其他目的、特徵及優點將顯而易見。圖示不一定按比例；而是將重點放在說明本揭示之各種具體實施例之原理。

[圖1A]顯示使用DSG2FP#1之抗DSG2抗體及ARVC血清的%抑制。[圖1B]顯示使用DSG2FP#2之抗DSG2抗體及ARVC血清的%抑制。[圖1C]顯示使用DSG2FP#3之抗DSG2抗體及ARVC血清的%抑制。[圖1D]顯示使用DSG2FP#4之抗DSG2抗體及ARVC血清的%抑制。將DSG2融合多肽經受粒徑排阻層析法並檢測不同的餾分。餾分「C」具有預計之~350 kDa的MW並用於另外的實驗中。在圖1B、圖1C、圖1D中，將全蛋白質製劑(「全製劑(whole preparation)」)與「餾分C」進行比較。

[圖2A]係第一系列的電壓(µV)相對時間(msec)圖，其顯示在多電極陣列(MEA)檢定中在人類iPSC心肌細胞中之利多卡因及抗DSG2抗體阻抑鈉棘波。鈉棘波之阻抑可藉由添加DSG2FP#1(於圖2A中標記為「DSG2融合多肽」)來逆轉，其顯示DSG2FP#1完全阻斷抗DSG2抗體對鈉棘波之效應。

[圖2B]係第二系列的電壓(µV)相對時間(msec)圖，其顯示在MEA檢定中，媒劑、兔IgG及抗VCAM-1抗體之對照測試對鈉棘波不具效應。

[圖3]顯示在多電極陣列(MEA)檢定中在人類iPSC心肌細胞中當用抗DSG2抗體及抗DSG2抗體加上DSG2FP#1(在圖3中標記為「誘餌(decoy)」)處理後之細胞指數，其顯示DSG2FP#1完全阻斷抗DSG2抗體之效應。

[圖4A]係在偵測檢定中抗DSG2抗體訊號的圖。

[圖4B]顯示在不同群組中百分比抑制與訊號背景比之相關之關係。對照群組及ARVC弱臨床數據群組數據點聚集在y軸上，表明在此兩個群組之間訊號比幾乎沒有差異。

[圖5]提供指示藉由在電化學免疫檢定中評定之一系列重組DSG2融合蛋白質阻斷ARVC患者血清與DSG2細胞外結構域之結合的一系列的長條圖。

[圖6]係指示藉由在電化學免疫檢定中評定之具有或不具有連接子之重組DSG2 _(50-609)-IgG4 Fc融合蛋白質阻斷抗DSG2抗體與DSG2細胞外結構域之結合的長條圖。

TW202334190A_111141818_SEQL.xml

Claims (67)

1. 一種單離之多肽，其包含橋粒芯糖蛋白-2 (desmoglein-2，DSG2)融合多肽，其中該DSG2融合多肽包含： a. DSG2蛋白質之全部或部分，其中該DSG2蛋白質係智人( Homo sapiens) DSG2蛋白質、家鼷鼠( Mus musculus) DSG2蛋白質、溝鼠( Rattus norvegicus) DSG2蛋白質、恆河猴( Macaca mulatta) DSG2蛋白質、家犬( Canis lupus familiaris) DSG2蛋白質、或斑馬魚( Danio rerio) DSG2蛋白質；及 b. 免疫球蛋白蛋白質之全部或部分，其中該免疫球蛋白蛋白質係人類或犬免疫球蛋白蛋白質。
2. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係智人DSG2蛋白質(SEQ ID NO.1)。
3. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係家鼷鼠DSG2蛋白質(SEQ ID NO.14)。
4. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係溝鼠DSG2蛋白質(SEQ ID NO.15)。
5. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係恆河猴DSG2蛋白質(SEQ ID NO.16)。
6. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係家犬DSG2蛋白質(SEQ ID NO.17)。
7. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質係斑馬魚DSG2蛋白質(SEQ ID NO.18)。
8. 如請求項1至7中任一項之單離之多肽，其中該DSG2融合多肽包含該DSG2蛋白質之部分。
9. 如請求項8之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質之該部分係該DSG2蛋白質之細胞外區域之全部或部分。
10. 如請求項3之單離之多肽，其中DSG2蛋白質之該部分係DSG2蛋白質之全部細胞外區域。
11. 如請求項1之單離之多肽，其中該DSG2融合多肽包含免疫球蛋白蛋白質之部分。
12. 如請求項11之單離之多肽，其中該免疫球蛋白蛋白質係選擇IgG、IgM、IgA、IgD或、IgE。
13. 如請求項12之單離之多肽，其中該免疫球蛋白蛋白質係IgE。
14. 如請求項12之單離之多肽，其中該免疫球蛋白係IgG。
15. 如請求項14之單離之多肽，其中該IgG係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。
16. 如請求項11至15中任一項之單離之多肽，其中該免疫球蛋白蛋白質之該部分係Fc區域、Fab區域、重鏈可變(VH)結構域、重鏈恆定結構域、輕鏈可變(VL)結構域、或輕鏈恆定結構域。
17. 如請求項14至16中任一項之單離之多肽，其中該免疫球蛋白蛋白質之該部分係Fc區域。
18. 如請求項14至17中任一項之單離之多肽，其中該Fc區域係人類Fc區域且其中該人類Fc區域係人類IgG1 Fc區域(SEQ ID NO: 5)、人類IgG2 Fc區域(SEQ ID NO: 7)、人類IgG3 Fc區域(SEQ ID NO: 9)、或人類IgG4 Fc區域(SEQ ID NO: 11)。
19. 如請求項14至18中任一項之單離之多肽，其中該Fc區域係犬Fc區域且其中該犬Fc區域係犬IgG重鏈D Fc區域(SEQ ID NO: 20)、犬IgG重鏈A Fc區域(SEQ ID NO: 22)、犬IgG重鏈B Fc區域(SEQ ID NO: 24)、或犬IgG重鏈C Fc區域(SEQ ID NO: 26)。
20. 如請求項16之單離之多肽，其中該免疫球蛋白蛋白質之該部分係重鏈恆定結構域。
21. 如請求項20之單離之多肽，其中該重鏈恆定係人類重鏈恆定區域且其中該人類重鏈恆定區域係人類IgG1重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 4)、人類IgG2重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 6)、人類IgG3重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 8)、或人類IgG4重鏈恆定結構域(SEQ ID NO: 10)。
22. 如請求項20之單離之多肽，其中該重鏈恆定係犬重鏈恆定區域且其中該犬重鏈恆定區域係犬IgG重鏈恆定結構域鏈D (SEQ ID NO: 19)、犬IgG重鏈恆定結構域鏈A (SEQ ID NO: 21)、犬IgG重鏈恆定結構域鏈B (SEQ ID NO: 23)、或犬IgG重鏈恆定結構域鏈C (SEQ ID NO: 25)。
23. 如請求項1至22中任一項之單離之多肽，其中該DSG2融合多肽進一步包含連接子。
24. 如請求項23之單離之多肽，其中該連接子係約5個胺基酸至約50個胺基酸長。
25. 如請求項24之單離之多肽，其中該連接子係GGGGGS (SEQ ID NO: 12)、EAAAK (SEQ ID NO: 13)、GGGGS (SEQ ID NO: 27)、或IEGRMD (SEQ ID NO: 28)。
26. 如請求項1至25中任一項之單離之多肽，其中該DSG2融合多肽進一步包含親和性標籤。
27. 如請求項10之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質之該全部細胞外區域包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。
28. 如請求項9之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質之該部分係該DSG2蛋白質之細胞外區域之部分。
29. 如請求項6之單離之多肽，其中該DSG2蛋白質之細胞外區域之該部分包含至少一個選自由下列所組成之群組的結構域：細胞外黏附蛋白結構域1 (EC1)、細胞外黏附蛋白結構域2 (EC2)、細胞外黏附蛋白結構域3 (EC3)、細胞外黏附蛋白結構域4 (EC4)、及細胞外錨定結構域(EA)。
30. 一種細胞，其表現如請求項1至29中任一項之單離之多肽。
31. 一種降低心肌細胞之致心律不整表型(proarrhythmic phenotype)之方法，該方法包含：使該心肌細胞與如請求項1至29中任一項之DSG2融合多肽接觸。
32. 如請求項31之方法，其中該致心律不整表型係與抗DSG2抗體相關。
33. 一種改善心肌細胞電功能之方法，該方法包含： 使該心肌細胞與如請求項1至29中任一項之DSG2融合多肽接觸，及 測量心肌細胞鈉棘波(sodium spike) (µV/m)，其中在與該DSG2融合多肽接觸之後該鈉棘波之增加指示心肌細胞電功能改善。
34. 如請求項33之方法，其中該心肌細胞係預先暴露於抗DSG2抗體中。
35. 一種治療與血清抗DSG2自體抗體相關之病況之方法，該方法包含使個體與如請求項1至29中任一項之單離之多肽、或如請求項30之細胞接觸。
36. 一種治療個體之心律不整及/或心肌症之方法，該方法包含： 使該個體與如請求項1至29中任一項之單離之多肽、或如請求項30之細胞接觸，及測量一或多種與選自由下列所組成之群組的心律不整相關之症狀：心悸、暈眩、頭重腳輕、暈厥、心臟衰竭及射出分率降低，及/或 測量一或多種與選自由下列所組成之群組的心肌症相關之症狀：心律不整、心悸、頭重腳輕、暈眩、暈厥、心肌炎、心臟衰竭、心輸出量差、及射出分率降低。
37. 如請求項36之方法，其中該心律不整及/或心肌症係致心律失常性右心室心肌症(arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy)。
38. 如請求項36之方法，其中該心律不整及/或心肌症係與類肉瘤病相關。
39. 如請求項36之方法，其中該心律不整及/或心肌症係擴張型心肌症(dilated cardiomyopathy)。
40. 如請求項36之方法，其中該心律不整及/或心肌症係與血清抗DSG2抗體相關。
41. 一種治療個體之心臟異常之方法，該方法包含使該個體與如請求項1至29中任一項之單離之多肽、或如請求項30之細胞接觸， 其中該個體之血清含抗DSG2抗體。
42. 一種降低個體中抗DSG2抗體之方法，該方法包含： (i)使該個體與如請求項1至29中任一項之單離之多肽、或如請求項30之細胞接觸，及 (ii)測量該個體中抗DSG2抗體之水平，其中使該個體與該單離之多肽接觸降低該抗DSG2抗體之該水平。
43. 如請求項42之方法，其中該抗DSG2抗體降低約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或100%。
44. 一種包含如請求項1至29中任一項之單離之多肽及至少一種治療劑之組成物。
45. 如請求項44之組成物，其中該至少一種治療劑係抗CD20抗體。
46. 如請求項44之組成物，其中該至少一種治療劑係FcRn阻斷抗體。
47. 如請求項44之組成物，其中該至少一種治療劑係靜脈內免疫球蛋白(IVIG)。
48. 如請求項44之組成物，其中該至少一種治療劑係依庫珠單抗(eculizumab)。
49. 一種治療與血清抗DSG2自體抗體相關之病況之方法，該方法包含使個體與如請求項1至29中任一項之單離之多肽、至少一種治療劑或其組合接觸。
50. 如請求項49之方法，其中該個體係與該至少一種治療劑接觸。
51. 如請求項50之方法，其中該至少一種治療劑係抗CD20抗體。
52. 如請求項50之方法，其中該至少一種治療劑係FcRn阻斷抗體。
53. 如請求項50之方法，其中該至少一種治療劑係靜脈內免疫球蛋白(IVIG)。
54. 如請求項50之方法，其中該至少一種治療劑係依庫珠單抗。
55. 一種用於治療由抗橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2)自體抗體所引起之疾病或病症之醫藥組成物，該組成物包含： 融合多肽，其阻斷抗DSG2抗體與DSG2之細胞外結構域之結合，該融合多肽包含： 與SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基50至609、或其部分具有至少約85%序列同一性的人類DSG2蛋白質之細胞外區域、及親和性標籤。
56. 如請求項55之醫藥組成物，其中該人類DSG2蛋白質之該細胞外區域之該部分包括選自由下列所組成之群組的DSG2結構域中之任一者或組合：細胞外黏附蛋白結構域1 (EC1)、細胞外黏附蛋白結構域2 (EC2)、細胞外黏附蛋白結構域3 (EC3)、細胞外黏附蛋白結構域4 (EC4)、及細胞外錨定結構域(EA)。
57. 如請求項55或56之醫藥組成物，其中該親和性標籤係免疫球蛋白之Fc區域。
58. 如請求項57之醫藥組成物，其中該免疫球蛋白係IgG1或IgG4。
59. 如請求項57之醫藥組成物，其中該免疫球蛋白係具有SEQ ID NO: 31之序列的IgG1的變體。
60. 如請求項57之醫藥組成物，其中該免疫球蛋白係具有SEQ ID NO: 32之序列的IgG4的變體。
61. 如請求項55或56之醫藥組成物，其中該親和性標籤係聚組胺酸標籤。
62. 如請求項55至61中任一項之醫藥組成物，其進一步包含位於人類DSG2蛋白質之該細胞外區域或其部分與該親和性標籤之間的連接子序列。
63. 如請求項62之醫藥組成物，其中該連接子係SEQ ID NO: 12、13、27或28。
64. 如請求項55至63中任一項之醫藥組成物，其中該疾病或病症係心律不整及/或心肌症。
65. 如請求項64之醫藥組成物，其中該心律不整及/或心肌症係致心律失常性右心室心肌症(ARVC)、類肉瘤病、COVID-19之急性期後的後遺症(post-acute sequelae)、或擴張型心肌症。
66. 如請求項64或65之醫藥組成物，其中該心律不整及/或心肌症係由病毒在近端或遠端所引起。
67. 如請求項66之醫藥組成物，其中該病毒係SARS-CoV2、腺病毒、肝炎病毒、C型肝炎病毒、微小病毒、單純疱疹病毒、腸道細胞病變性人類孤兒病毒(echovirus)、艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、德國麻疹、巨細胞病毒、或HIV。

Images