TW202332699A - 靶向５ｔ４之抗體及其用途 - Google Patents

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TW202332699A TW111147107A TW111147107A TW202332699A TW 202332699 A TW202332699 A TW 202332699A TW 111147107 A TW111147107 A TW 111147107A TW 111147107 A TW111147107 A TW 111147107A TW 202332699 A TW202332699 A TW 202332699A
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宗顯 卓
心必 李
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Abstract

揭示蛋白質，其具有抗體重鏈可變域及抗體輕鏈可變域，該等可變域可配對以形成靶向細胞上5T4之抗原結合位點；醫藥組成物，其包含此類蛋白質；及治療方法，其使用此類蛋白質及醫藥組成物，包括用於治療癌症。

Description

靶向5T4之抗體及其用途
本揭露提供蛋白質，其具有抗體重鏈可變域及抗體輕鏈可變域，該等可變域可配對以形成靶向細胞上5T4之抗原結合位點；醫藥組成物，其包含此類蛋白質；及治療方法，其使用此類蛋白質及醫藥組成物，包括用於治療癌症。
儘管在關於治療此疾病的文獻中報導大量的研究努力及科學進展，癌症仍舊為重大的健康問題。成人最常診斷出的一些癌症包括乳癌及肺癌。此等癌症之目前治療選項並非對所有患者皆有效，且/或可能具有實質不良副作用。使用現有治療選項治療其他類型的癌症亦仍具有挑戰性。腫瘤之複製較慢的類幹細胞（亦即癌症幹細胞）可能係在經過靶向快速增殖細胞（構成腫瘤主體(bulk)）的傳統療法之後臨床復發(relapse)或再發(recurrence)的原因。此外，腫瘤微環境（包括癌相關纖維母細胞(cancer-associated fibroblast, CAF)）常促進惡性疾病並抑制癌症療法。
人類滋養層醣蛋白5T4係一種N-醣基化跨膜蛋白。其表現與透過下列之細胞方向性移動呈機械性相關：上皮間質轉化、促進CXCL12/CXCR4趨化性、及阻斷典型(canonical) Wnt/β-連環蛋白（同時有利於非典型路徑信號傳導）。此等程序在發育中及成人組織中受到高度調控，但其等有助於驅動癌細胞擴散。已顯示5T4在正常成人組織中表現非常有限，但其廣泛分布於許多癌症中，包括結腸直腸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、腎癌、乳癌（例如激素受體陽性(hormone receptor positive, HR+)乳癌）、子宮內膜癌、鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、子宮癌、胰臟癌、間皮瘤、及胃癌。此外，5T4與癌症幹細胞有關(Harper J et al.Mol Cancer Ther.2017)。5T4亦可能與腫瘤微環境相關。
因此，本領域仍需要結合5T4之新穎有用抗體。
本揭露提供結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域。含有此類抗原結合位點之蛋白質及蛋白質接合物（例如抗體、抗體藥物接合物、雙特異性T細胞銜接器(bispecific T-cell engager, BiTE)、及免疫細胞介素）以及表現含有此類抗原結合位點之蛋白質（例如嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)）的免疫效應細胞（例如T細胞）可用於治療5T4相關疾病，諸如癌症。
因此，在一個態樣中，本揭露提供一種結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域，其包含：重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:3之互補決定區1 (CDR1)序列、包含SEQ ID NO:4之互補決定區2 (CDR2)序列、及包含SEQ ID NO:5之互補決定區3 (CDR3)序列；及輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。在另一態樣中，提供一種結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域，其包含：重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:170之CDR1序列、包含SEQ ID NO:172之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列；及輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，其中該等互補決定區(CDR)係根據Kabat。在另一態樣中，提供一種結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域，其包含：重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:182之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:183之CDR3序列；及輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:184之CDR1序列、包含SEQ ID NO:185之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:186之CDR3序列，其中該等CDR係根據Chothia。
在另一態樣中，提供一種結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域，其包含：重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:199之CDR1序列、包含SEQ ID NO:200之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:201之CDR3序列；及輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:202之CDR1序列、包含SEQ ID NO:185之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，其中該等CDR係根據IMGT。在另一態樣中，提供一種結合5T4之抗原結合位點或抗原結合域，其包含：重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:216之CDR1序列、包含SEQ ID NO:217之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:218之CDR3序列；及輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:219之CDR1序列、包含SEQ ID NO:220之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:186之CDR3序列，其中該等CDR係根據Honegger。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:108之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列，且VL包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，VH相對於SEQ ID NO:9包含G44C取代，其中編號係根據Kabat。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列。
在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，VL相對於SEQ ID NO:10包含G100C取代，其中編號係根據Kabat。在一些實施例中，其中VL包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列。在一些實施例中，VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:94之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點或抗原結合域，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少95%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少95%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少95%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少95%同一性的VL。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少96%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少96%同一性的VL。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少96%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少96%同一性的VL。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少97%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少97%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少97%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少97%同一性的VL。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少98%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少98%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少98%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少98%同一性的VL。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少99%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少99%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少99%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少99%同一性的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點或抗原結合域，其包含：包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL；或包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種結合5T4之抗原結合位點，其包含：VH，其包含：包含SEQ ID NO:47之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:48之CDR3序列；及VL，其包含：包含SEQ ID NO:49之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
在另一態樣中，本揭露提供一種結合5T4之抗原結合位點，其包含：(a) VH，其包含：包含SEQ ID NO:53之CDR1序列、包含SEQ ID NO:54之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:55之CDR3序列；及VL，其包含：包含SEQ ID NO:56之CDR1序列、包含SEQ ID NO:57之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，或(b) VH，其包含來自表5之CDR1、CDR2、及CDR3序列；及VL，其包含：包含SEQ ID NO:56之CDR1序列、包含SEQ ID NO:57之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其與本文所提供之抗原結合位點競爭。
在一些實施例中，抗原結合位點係以單鏈可變片段(single-chain fragment variable, scFv)、Fab片段、或單株抗體存在。在一些實施例中，抗原結合位點係以單鏈可變片段(scFv)存在。在一些實施例中，scFv包含選自由SEQ ID NO:95及SEQ ID NO:96所組成之群組的序列。在一些實施例中，scFv包含選自由SEQ ID NO:13及SEQ ID NO:14所組成之群組的序列。
在一些實施例中，抗原結合位點結合LRR1域內之5T4。
在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含來自表1之CDR1、CDR2、及CDR3序列；及VL，其包含來自表1之CDR1、CDR2、及CDR3序列。在一些實施例中，抗原結合位點包含來自表1之VH及對應的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種蛋白質，其包含本文所提供之抗原結合位點。在一些實施例中，蛋白質進一步包含抗體重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體重鏈恆定區係人類IgG重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體重鏈恆定區係人類IgG1重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之各多肽鏈包含與野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之至少一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439，其係根據EU編號系統編號。
在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之至少一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含選自下列之一或多個突變：Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D、及K439E，其係根據EU編號系統編號。
在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439，其係根據EU編號系統編號。
在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含K360E及K409W取代；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含Q347R、D399V、及F405T取代，其係根據EU編號系統編號。在一些實施例中，抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含Y349C取代；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含S354C取代，其係根據EU編號系統編號。
在另一態樣中，本揭露提供一種經單離核酸分子，其編碼本文所述之抗原結合位點或蛋白質。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗體藥物接合物，其包含本文所提供之蛋白質及藥物部份。在一些實施例中，藥物部份係選自由下列所組成之群組：奧瑞他汀(auristatin)、N-乙醯基-γ卡奇黴素(N-acetyl-γ calicheamicin)、類美登素(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)、及SN-38。
在另一態樣中，本揭露提供一種免疫細胞介素，其包含本文所提供之抗原結合位點及細胞介素。在一些實施例中，細胞介素係選自由下列所組成之群組：IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF、及IFNα。
在另一態樣中，本揭露提供一種雙特異性T細胞銜接器，其包含本文所提供之抗原結合位點及結合CD3之抗原結合位點。
在另一態樣中，本揭露提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含：(a)本文所提供之抗原結合位點；(b)跨膜域；及(c)胞內信號傳導域。在一些實施例中，跨膜域係選自下列之跨膜域：T細胞受體之α、β、或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、5T4、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152、及CD154。在一些實施例中，胞內信號傳導域包含初級信號傳導域，該初級信號傳導域包含下列之功能細胞質信號傳導域：CD3ζ、共同FcRγ (FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ (FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、及DAP12。在一些實施例中，胞內信號傳導域進一步包含共刺激信號傳導域，該共刺激信號傳導域包含共刺激受體之功能細胞質信號傳導域。在一些實施例中，共刺激受體係選自由下列所組成之群組：OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS、及4-1BB (CD137)、或其任何組合。
在另一態樣中，本揭露提供一種經單離核酸分子，其編碼本文所提供之CAR。
在另一態樣中，本揭露提供一種表現載體，其包含本文所提供之經單離核酸。
在另一態樣中，本揭露提供一種免疫效應細胞，其包含本文所提供之核酸或本文所提供之表現載體。在另一態樣中，本揭露提供一種免疫效應細胞，其表現本文所提供之CAR。在一些實施例中，免疫效應細胞係T細胞。在一些實施例中，T細胞係CD8 +T細胞、CD4 +T細胞、γδ T細胞、或NKT細胞。在一些實施例中，免疫效應細胞係NK細胞。
在另一態樣中，本揭露提供一或多種經單離核酸分子，其編碼：VH，其包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列；及/或VL，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
在另一態樣中，提供一或多種核酸分子，其編碼：包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH；及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，提供一或多種經單離核酸分子，其編碼：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH；及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
在另一態樣中，本揭露提供一種經單離多肽，其係由本文所提供之核酸序列編碼。在一些實施例中，經單離多肽包含VH。在一些實施例中，經單離多肽包含VL。在一些實施例中，經單離多肽包含scFv。
在另一態樣中，本揭露提供一種表現載體，其包含本文所提供之經單離核酸。
在另一態樣中，本揭露提供一種宿主細胞，其包含本文所提供之經單離核酸或本文所提供之表現載體。
在另一態樣中，本揭露提供一種細胞，其包含一或多種核酸，該一或多種核酸編碼本文所提供之抗原結合位點或抗原結合域或蛋白質。
在另一態樣中，本揭露提供一種醫藥組成物，其包含本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、本文所提供之CAR、或本文所提供之免疫效應細胞；及醫藥上可接受之載劑。
在另一態樣中，本揭露提供一種醫藥組成物，其包含本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、及醫藥上可接受之載劑。
在另一態樣中，本揭露提供一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之對象投予有效量的本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供者、本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、本文所提供之CAR、本文所提供之免疫效應細胞、或本文所提供之醫藥組成物。在一些實施例中，癌症係選自由下列所組成之群組：結腸直腸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、腎癌、乳癌（例如激素受體陽性(HR+)乳癌）、子宮內膜癌、鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、子宮癌、胰臟癌、間皮瘤、及胃癌。在一些實施例中，乳癌係激素受體陽性(HR+)乳癌。在一些實施例中，癌症係轉移性癌症。在一些實施例中，對象對化學療法呈難治性。在一些實施例中，該方法增加對象之整體存活期及/或無進展存活期。在一些實施例中，癌症表現5T4。在一些實施例中，相對於正常細胞，5T4係以高水平表現。在一些實施例中，相對於正常細胞，5T4係以低水平表現。
在另一態樣中，本揭露提供一種增強腫瘤細胞死亡之方法，該方法包含使該腫瘤細胞暴露於有效量的本文所提供之蛋白質或本文所提供之醫藥組成物。在另一態樣中，提供一種本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、或本文所提供之醫藥組成物用於增強腫瘤細胞死亡的用途，其係藉由使腫瘤細胞暴露於有效量的該蛋白質、該抗體藥物接合物、該免疫細胞介素、或該雙特異性T細胞銜接器、或醫藥組成物（包含此類蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器）。在另一態樣中，提供本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、或本文所提供之醫藥組成物，其用於藉由使腫瘤細胞暴露於有效量的該蛋白質或醫藥組成物（包含此類蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器）而增強腫瘤細胞死亡。
在另一態樣中，本揭露提供一種增強癌相關纖維母細胞(CAF)細胞死亡之方法，該方法包含使該CAF暴露於有效量的本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、或本文所提供之醫藥組成物。在另一態樣中，提供一種本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、或本文所提供之醫藥組成物用於增強癌相關纖維母細胞(CAF)細胞死亡的用途，其係藉由使CAF暴露於有效量的該蛋白質、該抗體藥物接合物、該免疫細胞介素、或該雙特異性T細胞銜接器、或醫藥組成物（包含此類蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器）。在另一態樣中，提供本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器、或本文所提供之醫藥組成物，其用於藉由使CAF暴露於有效量的該蛋白質、該抗體藥物接合物、該免疫細胞介素、或該雙特異性T細胞銜接器、或醫藥組成物（包含此類蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器）而增強癌相關纖維母細胞(CAF)細胞死亡。
在一些實施例中，本文所提供之抗原結合位點、本文所提供之蛋白質、本文所提供之抗體藥物接合物、本文所提供之免疫細胞介素、或本文所提供之雙特異性T細胞銜接器係純化抗原結合位點、蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器。在一些實施例中，抗原結合位點、蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器係藉由選自由下列所組成之群組的方法純化：離心、深層過濾、細胞裂解、均質化、冷凍解凍、親和純化、凝膠過濾、離子交換層析法、疏水性交互作用交換層析法、及混合模式層析法。
在一些實施例中，本文所提供之蛋白質係純化蛋白質。在一些實施例中，蛋白質係使用選自由下列所組成之群組的方法純化：離心、深層過濾、細胞裂解、均質化、冷凍解凍、親和純化、凝膠過濾、離子交換層析法、疏水性交互作用交換層析法、及混合模式層析法。
本發明之此等及其他態樣及優點係藉由以下圖式、實施方式、及申請專利範圍說明。
相關申請案之交互參照
本申請案依據35 U.S.C. § 119(e)主張2021年12月8日申請之美國臨時專利申請案第63/287,511號及2022年9月15日申請之美國臨時專利申請案第63/375,823號之權益，其等全文出於所有目的特此以引用方式併入本文中。 序列表
本申請案含有以.XML檔案格式電子提交之序列表，且其全文特此以引用方式併入。該.XML副本（建立於2022年11月22日）係命名為DFY-123-TW-NP_SL.xml，且檔案大小為268,288位元組。
本揭露提供結合人類5T4之抗原結合位點。含有此類抗原結合位點之蛋白質及蛋白質接合物（例如抗體、抗體藥物接合物、雙特異性T細胞銜接器(bispecific T-cell engager, BiTE)、及免疫細胞介素）以及表現含有此類抗原結合位點之蛋白質（例如嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)）的免疫效應細胞（例如T細胞）可用於治療5T4相關疾病，諸如癌症。本揭露之各種態樣係於以下章節中闡述；然而，一個特定章節所述之本發明之態樣不限於任何特定章節。
為了促進對本揭露之理解，以下定義許多用語及片語。
除非上下文不適當，否則如本文中所使用，用語「一(a/an)」意指「一或多(one or more)」且包括複數。
如本文中所使用，用語「抗原結合部位(antigen-binding site)」係指參與或能夠進行抗原結合之免疫球蛋白分子之部分。在人類抗體中，抗原結合位點係由重（「H」）鏈及輕（「L」）鏈之N端可變（「V」）區之胺基酸殘基形成。重鏈及輕鏈之V區內的三個高度相異延伸(highly divergent stretch)係稱為「高度變異區(hypervariable region)」，其插入更為保守的側翼(flanking)延伸（稱為「構架區(framework region)」或「FR」）之間。因此，用語「FR」係指天然存在於免疫球蛋白中之高度變異區之間且相鄰於該等高度變異區的胺基酸序列。在人類抗體分子中，輕鏈之三個高度變異區及重鏈之三個高度變異區係在三維空間中彼此相對設置，以形成抗原結合表面。抗原結合表面係與所結合抗原之三維表面互補，且重鏈及輕鏈之各者之三個高度變異區係稱為「互補決定區(complementarity-determining region)」或「CDR」。在某些動物（諸如駱駝及軟骨魚）中，抗原結合位點係由提供「單域抗體(single domain antibody)」之單一抗體鏈形成。抗原結合位點可存在於完整抗體、保留抗原結合表面的抗體之抗原結合片段、或重組多肽（諸如scFv）中，其使用肽連接子連接重鏈可變域與輕鏈可變域於單一多肽中。除非另有指示，否則本文所揭示之重鏈可變區或輕鏈可變區之所有胺基酸位置係根據Kabat編號來編號。
抗原結合位點之CDR可藉由下列中所述之方法判定：Kabat et al., J. Biol. Chem.252, 6609-6616 (1977)及Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest.(1991)、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、及MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)。當彼此進行比較時，在此等定義下所判定之CDR一般包括胺基酸殘基之重疊或子集。在某些實施例中，用語「CDR」係如由下列所定義之CDR：Kabat et al., J. Biol. Chem.252, 6609-6616 (1977)及Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest.(1991)（「Kabat」編號方案）；Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948（「Chothia」編號方案）；Lefranc et al., Dev.Comp. Immunol., 2003, 27:55-77（「IMGT」編號方案）；Honegger and Plückthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70（「AHo」或「Honegger」編號方案）、MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)（「Contact」編號方案）、及Martin A., Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains, Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)。在某些實施例中，用語「CDR」係如由下列所定義之CDR：Kabat et al., J. Biol. Chem.252, 6609-6616 (1977)及Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest.(1991)，其等各者之全文以引用方式併入。在某些實施例中，抗體之重鏈CDR及輕鏈CDR係使用不同慣例定義。例如，在某些實施例中，重鏈CDR係根據MacCallum（上述）定義，且輕CDR係根據Kabat（上述）定義。CDRH1、CDRH2、及CDRH3表示重鏈CDR，且CDRL1、CDRL2、及CDRL3表示輕鏈CDR。可例如使用抗體編號軟體指派CDR，諸如Abnum，其可在www.bioinf.org.uk/abs/abnum/取得，並描述於Abhinandan and Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839（其全文以引用方式併入）中。
如本文中所使用，用語「蛋白質(protein)」意指包含一或多個胺基酸鏈之巨分子。此類胺基酸鏈可稱為多肽，其係由肽鍵連接之連續無支鏈胺基酸鏈。因此，蛋白質可包括單個多肽或多個多肽。
如本文中所使用，用語「對象(subject)」及「患者(patient)」係指待藉由本文所述之方法及組成物治療的生物體。此類生物體較佳地包括但不限於哺乳動物（例如鼠類、類人猿(simian)、馬、牛、豬、犬科、貓科、及類似者），且更佳地包括人類。
如本文中所使用，用語「有效量(effective amount)」係指足以實現有益或所欲結果的化合物（例如本揭露之化合物）之量。有效量可以一或多次投予、施加、或劑量投予，且其不意欲限於特定配方或投予途徑。如本文中所使用，用語「治療(treating)」包括導致改善病況、疾病、病症、及類似者、或改善其症狀的任何效果，例如減輕(lessening)、減少、調節、改善、或消除。
關於癌症治療，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域可選地與一或多種額外治療劑（如本文所述）可(i)減少病變細胞之數目；(ii)減少腫瘤大小；(iii)在一些程度上抑制、阻滯、減緩、及較佳地阻止病變細胞浸潤至周邊器官中；(iv)抑制（例如在一些程度上減緩及較佳地阻止）腫瘤轉移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)預防或延遲腫瘤之發生及/或復發；及/或(vii)在一些程度上和緩與癌症或骨髓增生性疾病相關的症狀之一或多者。在一些實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域可選地與一或多種額外治療劑（如本文所述）可(i)減少病變細胞之數目；(ii)減少腫瘤大小；(iii)在一些程度上抑制、阻滯、減緩、及較佳地阻止癌細胞浸潤至周邊器官中；(iv)抑制（例如在一些程度上減緩及較佳地阻止）腫瘤轉移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)預防或延遲腫瘤之發生及/或復發；及/或(vii)在一些程度上和緩與癌症相關的症狀之一或多者。在各種實施例中，量足以改善、緩和、減少、及/或延遲癌症的症狀之一或多者。
「增加的(increased)」或「增強的(enhanced)」量（例如關於癌細胞增殖或擴增、抗腫瘤反應、癌細胞轉移）係指本文所述之量或水平的1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、或50或更多倍（例如100、500、1000倍）（包括介於之間及大於1之所有整數及小數點，例如2.1、2.2、2.3、2.4等）增加。亦可包括增加本文所述之量或水平的至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100%、至少150%、至少200%、至少500%、或至少1000%。
「降低的(decreased)」或「減少的(reduced)」或「較少的(lesser)」量（例如關於腫瘤大小、癌細胞增殖或生長）係指本文所述之量或水平的約1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、或50或更多倍（例如100、500、1000倍）（包括介於之間及大於1之所有整數及小數點，例如1.5、1.6、1.7、1.8等）降低。亦可包括降低本文所述之量或水平的至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%、至少100%、至少150%、至少200%、至少500%、或至少1000%。在各種實施例中，腫瘤負荷係使用線性尺寸(linear dimensional)方法判定（例如Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST) v1.1 (Eisenhauer, et al., Eur J Cancer.(2009) 45(2):228–47）。在各種實施例中，腫瘤負荷係使用體積分析（例如正子發射斷層造影(PET) /電腦斷層(CT)掃描）判定。參見例如Paydary, et al., Mol Imaging Biol. (2019) 21(1):1-10；Li, et al., AJR Am J Roentgenol.(2021) 217(6):1433-1443；及Kerner, et al., EJNMMI Res.(2016) Dec; 6(1):33。
如本文中所使用，「抗腫瘤效應(anti-tumor effect)」係指可呈現為腫瘤體積降低、腫瘤細胞數目降低、腫瘤細胞增殖降低、轉移數目降低、整體或無進展存活期增加、預期壽命增加、或改善與腫瘤相關之各種生理症狀的生物效應。抗腫瘤效應亦可指預防腫瘤發生或再發，例如緩解之後復發。
如本文中所使用，用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」係指活性劑與惰性或活性載劑之組合，使得組成物尤其適用於體內或離體的診斷或治療用途。
如本文中所使用，用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指任何標準醫藥載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液（例如諸如油/水或水/油乳液）、及各種類型的潤濕劑。組成物亦可包括穩定劑及防腐劑。關於載劑、穩定劑、及佐劑之實例，參見例如Martin, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ.Co., Easton, PA [1975]。
如本文中所使用，用語「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salt)」係指本揭露之化合物之任何醫藥上可接受之鹽（例如酸或鹼），其在投予至對象後，能夠提供本發明之化合物或其活性代謝物或殘基。如所屬技術領域中具有通常知識者已知的，本揭露之化合物之「鹽」可衍生自無機或有機酸及鹼。例示性酸包括但不限於鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、過氯酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、及類似者。雖然其他酸（諸如草酸）本身非醫藥上可接受，但其可用於製備可在獲得下列中作為中間物之鹽：本揭露之化合物及其醫藥上可接受之酸加成鹽。
例示性鹼包括但不限於鹼金屬（例如鈉）氫氧化物、鹼土金屬（例如鎂）氫氧化物、氨、及式NW 4 +之化合物（其中W係C 1-4烷基）、及類似者。
例示性鹽包括但不限於：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、氟庚酸鹽(flucoheptanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(palmoate)、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽(pivalate)、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、及類似者。鹽之其他實例包括與合適陽離子化合之本揭露之化合物之陰離子，陽離子諸如Na +、NH 4 +、及NW 4 +（其中W係C 1-4烷基）、及類似者。
為供治療用途，設想本揭露之化合物之鹽係醫藥上可接受的。然而，亦發現非醫藥上可接受之酸及鹼的鹽可用於例如製備或純化醫藥上可接受之化合物。
如本文中所使用，5T4（亦稱為滋養層醣蛋白、TPBG、Wnt活化抑制因子1、WAIF1、M6P1、5T4AG）係指Uniprott登錄號Q13641之蛋白質及相關異構體及異種同源物。5T4之NCBI基因ID係7162。
如本文中所使用，關於如本文所述之蛋白質或抗原結合位點與目標分子、特定抗原（例如多肽目標）、或特定抗原上之表位之結合，用語「特異性結合(specific binding)」、「特異性結合至(specifically binds to)」、「對……具特異性(specific for)」、「選擇性結合(selectively binds)」、及「對……具選擇性(selective for)」意指在測量上不同於非特異性或非選擇性交互作用（例如與非目標分子）的結合。特異性結合可例如藉由測量與目標分子之結合，並將其及與非目標分子之結合進行比較來測量。特異性結合亦可藉由與對照分子競爭來判定，對照分子模擬目標分子上識別之表位。在此情況下，若蛋白質或抗原結合位點與目標分子之結合被對照分子競爭性抑制，則指示特異性結合。「特異性結合至」特定多肽或特定多肽上之表位、或「對」其「具特異性」之如本文所述之蛋白質或抗原結合位點係結合至該特定多肽或特定多肽上之表位而未實質結合至任何其他多肽或多肽表位者。在一些情況下，例如以抗體、scFv、Fab之形式、或本文所述之蛋白質之其他形式，在約4℃、25℃、37℃、或42℃之溫度下測量，如本文所述之蛋白質或抗原結合位點以如本文所述之解離常數(K D)特異性結合至抗原（例如多肽目標）。如本文所述之蛋白質或抗原結合位點的親和力可容易地使用習知技術判定，例如下列所描述者：Scatchard et al., Ann.N. Y. Acad. Sci. USA, 51:660 (1949)、ELISA檢定、生物膜干涉技術(biolayer interferometry, BLI)檢定、及表面電漿共振(SPR)檢定。如本文所述之蛋白質或抗原結合位點與其抗原、細胞、或組織之結合性質通常可使用免疫偵測方法判定及評估，免疫偵測方法包括例如基於免疫螢光之檢定，諸如免疫組織化學法(IHC)及/或螢光活化細胞分選(FACS)。通常而言（但不一定），提及「結合」意指「特異性結合」。
在整個描述（其中組成物係描述為具有、包括、或包含特定組分，或其中程序及方法係描述為具有、包括、或包含特定步驟）中，額外地設想到基本上由所述組分所組成或由所述組分所組成的本揭露之組成物，並設想到基本上由所述處理步驟所組成或由所述處理步驟所組成的根據本揭露之程序及方法。
就一般情況而言，除非另有說明，否則指定百分比之組成物係以重量計。此外，若變數未伴隨定義，則以變數之先前定義為準。
以下更詳細論述本發明之各種特徵及態樣。 I. 抗原結合位點
在一個態樣中，本揭露提供一種結合人類5T4之抗原結合位點。例示性抗原結合位點之VH、VL、CDR、及scFv序列係列於表1中。除非另有說明，否則根據Chothia編號方案識別CDR序列。表1A提供根據Kabat編號方案之CDR序列。表1B提供根據Chothia編號方案之CDR序列。表1C提供根據IMGT編號方案之CDR序列。表1D提供根據Honegger編號方案之CDR序列。 表1 ：結合5T4 之例示性抗原結合位點之序列
殖株 VH VL
10F10鼠類 EVQLQESGGGLVKPGGSRRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPEKGLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO:1) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIVLTQSPASLAVTLGQRATISC RASQSVTTSNYNYMHWFHQKPGQPPKLLIK FASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDIATYYC QHSWEIPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:2) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1002（人源化10F10，T62S） EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:9) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1002（具有半胱胺酸異二聚化突變，用於雙硫鍵形成） EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:11) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:12) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1002 scFv (VL-VH)（具有半胱胺酸異二聚化突變，用於雙硫鍵形成） DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:13)
AB1002 scFv (VH-VL)（具有半胱胺酸異二聚化突變，用於雙硫鍵形成） EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:14)
AB1002（人源化10F10）M33L EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:9) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:129) CDR1- RASQSVTTSNYNYLH (SEQ ID NO:130) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1002（人源化10F10）M33V EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:9) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:131) CDR1- RASQSVTTSNYNYVH (SEQ ID NO:132) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
05H04 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYKFTDYYMDWVRQAPGQGLEWIGYI FPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SRDADYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:15) CDR1- GYKFTDY (SEQ ID NO:41) CDR2- FPNDAS (SEQ ID NO:42) CDR3- SRDADY (SEQ ID NO:43) ENVLTQSPATLSLSPGERATLSC SAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIY DTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC QQWSSYPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:16) CDR1- SAKSSVSYIH (SEQ ID NO:44) CDR2- DTSYLGS (SEQ ID NO:45) CDR3- QQWSSYPYT (SEQ ID NO:46)
05H04 Q1E EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYKFTDYYMDWVRQAPGQGLEWIGYI FPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SRDADYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:17) CDR1- GYKFTDY (SEQ ID NO:41) CDR2- FPNDAS (SEQ ID NO:42) CDR3- SRDADY (SEQ ID NO:43) ENVLTQSPATLSLSPGERATLSC SAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIY DTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC QQWSSYPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:16) CDR1- SAKSSVSYIH (SEQ ID NO:44) CDR2- DTSYLGS (SEQ ID NO:45) CDR3- QQWSSYPYT (SEQ ID NO:46)
05H04 scFv (VH-VL) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYKFTDYYMDWVRQAPGQ CLEWIGYI FPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SRDADYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPATLSLSPGERATLSC SAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIY DTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC QQWSSYPYTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:18)
05H04 scFv (VL-VH) ENVLTQSPATLSLSPGERATLSC SAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIY DTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC QQWSSYPYTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYKFTDYYMDWVRQAPGQ CLEWIGYI FPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SRDADYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:120)
05H04 Q1E (VH-VL) EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYKFTDYYMDWVRQAPGQ CLEWIGYI FPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SRDADYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPATLSLSPGERATLSC SAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIY DTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC QQWSSYPYTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:19)
11F09 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:20) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:21) CDR1- RASQGVSTSTYTYLH (SEQ ID NO:49) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 21×05 AB1002親本人源化者(T62) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:22) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 21×05 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:23)
10F10 23×03人源化變體2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:24) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 23×03 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:25)
10F10 23×03 BM1 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:108) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 23×03 BM1 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA SSQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:133)
10F10 48×01人源化變體3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:138) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 48×01 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:27)
10F10 48×01 BM2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:26) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 48×01 BM2 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:121)
10F10 11×01人源化變體4 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:28) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 11×01 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:29)
10F10 21×05人源化變體5 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:30) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 21×05 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWIAYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:31)
10F10 11×01 BM1 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWIRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSSG (SEQ ID NO:106) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10 11×01 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWIRQAPGKCLEWVSYI SSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASS QSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:107)
10F10人源化共有序列 X 1VQLX 2ESGGGLVX 3PGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWX 4X 5YI SSGSSTIYYADX 6VKGRFTISRDNAKNX 7LYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:94) CDR1- RFTFSDF (SEQ ID NO:3) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTLDY (SEQ ID NO:5)，其中X 1係E或Q；X 2係V或L；X 3係K或Q；X 4係V或I；X 5係S或A；X 6係S或T；且X 7係S或T DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10) CDR1- RASQSVTTSNYNYMH (SEQ ID NO:6) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
10F10人源化共有scFv (VH-VL)（具有半胱胺酸突變，用於雙硫鍵形成） X 1VQLX 2ESGGGLVX 3PGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWX 4X 5YI SSGSSTIYYADX 6VKGRFTISRDNAKNX 7LYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:95)， 其中X 1係E或Q；X 2係V或L；X 3係K或Q；X 4係V或I；X 5係S或A；X 6係S或T；且X 7係S或T
10F10人源化共有scFv (VL-VH)（具有半胱胺酸突變，用於雙硫鍵形成） DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSX 1VQLX 2ESGGGLVX 3PGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGK CLEWX 4X 5YI SSGSSTIYYADX 6VKGRFTISRDNAKNX 7LYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:96)， 其中X 1係E或Q；X 2係V或L；X 3係K或Q；X 4係V或I；X 5係S或A；X 6係S或T；且X 7係S或T
10F10人源化共有scFv (VH-VL) X 1VQLX 2ESGGGLVX 3PGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWX 4X 5YI SSGSSTIYYADX 6VKGRFTISRDNAKNX 7LYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:134)， 其中X 1係E或Q；X 2係V或L；X 3係K或Q；X 4係V或I；X 5係S或A；X 6係S或T；且X 7係S或T
10F10人源化共有scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSX 1VQLX 2ESGGGLVX 3PGGSLRLSCAAS RFTFSDFGMHWVRQAPGKGLEWX 4X 5YI SSGSSTIYYADX 6VKGRFTISRDNAKNX 7LYLQMNSLRAEDTAVYYCAS SQSYYRGTLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:135)， 其中X 1係E或Q；X 2係V或L；X 3係K或Q；X 4係V或I；X 5係S或A；X 6係S或T；且X 7係S或T
11F09 48×01 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:32) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 48×01 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:34)
11F09 48×01 BM2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:122) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 48×01 BM2 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIKFASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYISSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGSSQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:123)
11F09 21×05 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:20) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 21×05 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:36)
11F09 21×05 BM1 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:139) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 21×05 scFv (VL-VH) BM1 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:124)
11F09 11×01 QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:37) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 11×01 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:38)
11F09 11×01 BM1 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWIRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:125) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 11×01 BM1 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWIRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:126)
11F09 23×03 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCG SSQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:39) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 23×03 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:40)
11F09 23×03-BM2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYIS SGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:127) CDR1- GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2- SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3- SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1- RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2- FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
11F09 23×03-BM2 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:128)
08E06 EVQLQESGAEMVRPGASVKLSCKAS GYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGKI DSSDSKTQYNQKFKDKATLTVDKSSITVYMELNSLTSEDSAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:51) CDR1- GYTFTSY (SEQ ID NO:53) CDR2- DSSDSK (SEQ ID NO:54) CDR3- GGYLWFAY (SEQ ID NO:55) DIVMTQSPASLAVSLGQRATISC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQSPKLLIT YASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDIATYYC QHSWEIPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:52) CDR1- RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:56) CDR2- YASNLES (SEQ ID NO:57) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
08E06-人源化變體1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGKI DSSDSKTQYNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:58) CDR1- GYTFTSY (SEQ ID NO:53) CDR2- DSSDSK (SEQ ID NO:54) CDR3- GGYLWFAY (SEQ ID NO:55) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:59) CDR1- RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:56) CDR2- YASNLES (SEQ ID NO:57) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
scFv08E06 (VH-VL)人源化變體1（具有半胱胺酸突變，用於雙硫鍵形成） QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWMHWVRQAPGQ CLEWMGKI DSSDSKTQYNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIK (SEQ ID NO:60)
scFv08E06 (VL-VH)人源化變體1（具有半胱胺酸突變，用於雙硫鍵形成） DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWMHWVRQAPGQ CLEWMGKI DSSDSKTQYNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:61)
scFv 08E06 (VH-VL)人源化變體1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWMHWVRQAPGQ GLEWMGKI DSSDSKTQYNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QHSWEIPWTFG GGTKVEIK (SEQ ID NO:136)
scFv08E06 (VL-VH)人源化變體1 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QHSWEIPWTFG GGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWMHWVRQAPGQ GLEWMGKI DSSDSKTQYNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR GGYLWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:137)
08E06-人源化變體2 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGKIDSSDSKTQYNQKFKDRVTMTVDTSSSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYLWFAYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO:62) CDR1- GYTFTSY (SEQ ID NO:53) CDR2- DSSDSK (SEQ ID NO:54) CDR3- GGYLWFAY (SEQ ID NO:55) DIVMTQSPASLAVSLGERATINC RASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIT YASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:63) CDR1- RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:56) CDR2- YASNLES (SEQ ID NO:57) CDR3- QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1011 (11F09-VH_BM1-VK_BM1) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:90) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1 - RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1011 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:97)
AB1012 (11F09-VH_BM1-VK_BM1_M33L) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:90) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:21) CDR1 - RASQGVSTSTYTYLH (SEQ ID NO:49) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1012 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:98)
AB1013 (11F09-VH_BM1-VK_BM1_M33V) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:90) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:91) CDR1 - RASQGVSTSTYTYVH (SEQ ID NO:92) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1013 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:99)
AB1014 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:93) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTIDY (SEQ ID NO:35) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1 - RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1014 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:100)
AB1015 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1_M33L) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:93) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTIDY (SEQ ID NO:35) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:21) CDR1 - RASQGVSTSTYTYLH (SEQ ID NO:49) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1015 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:101)
AB1016 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1_M33V) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:93) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTIDY (SEQ ID NO:35) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:91) CDR1 - RASQGVSTSTYTYVH (SEQ ID NO:92) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1016 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWVSYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTIDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:102)
AB1017 (11F09-VH_BM2-VK_BM1) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:20) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:33) CDR1 - RASQGVSTSTYTYMH (SEQ ID NO:50) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1017 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:103)
AB1018 (11F09-VH_BM2-VK_BM1_M33L) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:20) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:21) CDR1 - RASQGVSTSTYTYLH (SEQ ID NO:49) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1018 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:104)
AB1019 (11F09-VH_BM2-VK_BM1_M33V) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:20) CDR1 – GFTFSDY (SEQ ID NO:47) CDR2 – SSGSST (SEQ ID NO:4) CDR3 - SQSYYRGTMDY (SEQ ID NO:48) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:91) CDR1 - RASQGVSTSTYTYVH (SEQ ID NO:92) CDR2 - FASNLES (SEQ ID NO:7) CDR3 - QHSWEIPWT (SEQ ID NO:8)
AB1019 scFv (VL-VH) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGVSTSTYTYVHWFQQKPGKAPKLLIK FASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHSWEIPWTFG CGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEAS GFTFSDYGMHWVRQAPGK CLEWLAYI SSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGS SQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:105)
表 1A – 說明性抗 5T4 結合抗原結合域之 CDR (Kabat)
Ab 名稱 VH – CDR1 VH – CDR2 VH – CDR3 VL – CDR1 VL – CDR2 VL – CDR3  
140 DFGMH SEQ ID NO:170 YISSGSSTIYYADTVKG SEQ ID NO:171 SQSYYRGTLDY SEQ ID NO:5 RASQSVTTSNYNYMH SEQ ID NO:6 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
141 DFGMH SEQ ID NO:170 YISSGSSTIYYADSVKG SEQ ID NO:172 SQSYYRGTLDY SEQ ID NO:5 RASQSVTTSNYNYMH SEQ ID NO:6 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
142 DFGMH SEQ ID NO:170 YISSGSSTIYYADSVKG SEQ ID NO:172 SQSYYRGTLDY SEQ ID NO:5 RASQSVTTSNYNYLH SEQ ID NO:130 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
143 DFGMH SEQ ID NO:170 YISSGSSTIYYADSVKG SEQ ID NO:172 SQSYYRGTLDY SEQ ID NO:5 RASQSVTTSNYNYVH SEQ ID NO:132 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
144 DFGMH SEQ ID NO:170 YISSGSSTIYYADX 6VKG X 6=S或T SEQ ID NO:173 SQSYYRGTLDY SEQ ID NO:5 RASQSVTTSNYNYX 8H X 8=L、M、或V SEQ ID NO:174 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
145 DYYMD SEQ ID NO:175 YIFPNDASTTYNEKFKG SEQ ID NO:176 SRDADY SEQ ID NO:177 SAKSSVSYIH SEQ ID NO:44 DTSYLGS SEQ ID NO:45 QQWSSYPYT SEQ ID NO:46  
146 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTMDY SEQ ID NO:48 RASQGVSTSTYTYLH SEQ ID NO:49 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
147 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTMDY SEQ ID NO:48 RASQGVSTSTYTYMH SEQ ID NO:50 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
148 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTMDY SEQ ID NO:48 RASQGVSTSTYTYVH SEQ ID NO:92 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
149 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTIDY SEQ ID NO:35 RASQGVSTSTYTYMH SEQ ID NO:50 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
150 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTIDY SEQ ID NO:35 RASQGVSTSTYTYLH SEQ ID NO:49 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
151 DYGMH SEQ ID NO:178 YISSGSSTFYYADTVKG SEQ ID NO:179 SQSYYRGTIDY SEQ ID NO:35 RASQGVSTSTYTYVH SEQ ID NO:92 FASNLES SEQ ID NO:7 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
152 SYWMH SEQ ID NO:180 KIDSSDSKTQYNQKFKD SEQ ID NO:181 GGYLWFAY SEQ ID NO:55 RASQSVSTSTYSYMH SEQ ID NO:56 YASNLES SEQ ID NO:57 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8  
表 1B –說明性抗 5T4 結合抗原結合域之 CDR (Chothia)
Ab 名稱 VH – CDR1 VH – CDR2 VH – CDR3 VL – CDR1 VL – CDR2 VL – CDR3
153 RFTFSDF SEQ ID NO:3 SGSS SEQ ID NO:182 QSYYRGTLD SEQ ID NO:183 SQSVTTSNYNY SEQ ID NO:184 FAS SEQ ID NO:185 SWEIPW SEQ ID NO:186
154 GYKFTDY SEQ ID NO:41 PNDA SEQ ID NO:187 RDAD SEQ ID NO:188 KSSVSY SEQ ID NO:189 DTS SEQ ID NO:190 WSSYPY SEQ ID NO:191
155 GFTFSDY SEQ ID NO:47 SGSS SEQ ID NO:182 QSYYRGTMD SEQ ID NO:192 SQGVSTSTYTY SEQ ID NO:193 FAS SEQ ID NO:185 SWEIPW SEQ ID NO:186
156 GFTFSDY SEQ ID NO:47 SGSS SEQ ID NO:182 QSYYRGTID SEQ ID NO:194 SQGVSTSTYTY SEQ ID NO:193 FAS SEQ ID NO:185 SWEIPW SEQ ID NO:186
157 GYTFTSY SEQ ID NO:53 SSDS SEQ ID NO:195 GYLWFA SEQ ID NO:196 SQSVSTSTYSY SEQ ID NO:197 YAS SEQ ID NO:198 SWEIPW SEQ ID NO:186
表 1C –說明性抗 5T4 結合抗原結合域之 CDR (IMGT)
Ab 名稱 VH – CDR1 VH – CDR2 VH – CDR3 VL – CDR1 VL – CDR2 VL – CDR3
158 RFTFSDFG SEQ ID NO:199 ISSGSSTI SEQ ID NO:200 ASSQSYYRGTLDY SEQ ID NO:201 QSVTTSNYNY SEQ ID NO:202 FAS SEQ ID NO:185 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8
159 GYKFTDYY SEQ ID NO:203 IFPNDAST SEQ ID NO:204 ARSRDADY SEQ ID NO:205 SSVSY SEQ ID NO:206 DTS SEQ ID NO:190 QQWSSYPYT SEQ ID NO:46
160 GFTFSDYG SEQ ID NO:207 ISSGSSTF SEQ ID NO:208 GSSQSYYRGTMDY SEQ ID NO:209 QGVSTSTYTY SEQ ID NO:210 FAS SEQ ID NO:185 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8
161 GFTFSDYG SEQ ID NO:207 ISSGSSTF SEQ ID NO:208 GSSQSYYRGTIDY SEQ ID NO:211 QGVSTSTYTY SEQ ID NO:210 FAS SEQ ID NO:185 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8
162 GYTFTSYW SEQ ID NO:212 IDSSDSKT SEQ ID NO:213 ARGGYLWFAY SEQ ID NO:214 QSVSTSTYSY SEQ ID NO:215 YAS SEQ ID NO:198 QHSWEIPWT SEQ ID NO:8
表 1D –說明性抗 5T4 結合抗原結合域之 CDR (Honegger)
Ab 名稱 VH – CDR1 VH – CDR2 VH – CDR3 VL – CDR1 VL – CDR2 VL – CDR3  
163 ASRFTFSDFG SEQ ID NO:216 ISSGSSTIYYADTVKGR SEQ ID NO:217 SQSYYRGTLD SEQ ID NO:218 ASQSVTTSNYNY SEQ ID NO:219 FASNLESGVPAR SEQ ID NO:220 SWEIPW SEQ ID NO:186  
164 ASRFTFSDFG SEQ ID NO:216 ISSGSSTIYYADSVKGR SEQ ID NO:221 SQSYYRGTLD SEQ ID NO:218 ASQSVTTSNYNY SEQ ID NO:219 FASNLESGVPSR SEQ ID NO:222 SWEIPW SEQ ID NO:186  
165 ASRFTFSDFG SEQ ID NO:216 ISSGSSTIYYADX 6VKGR X 6= S或T SEQ ID NO:223 SQSYYRGTLD SEQ ID NO:218 ASQSVTTSNYNY SEQ ID NO:219 FASNLESGVPSR SEQ ID NO:222 SWEIPW SEQ ID NO:186  
166 ASRFTFSDFG SEQ ID NO:216 ISSGSSTIYYADX 6VKGR X 6= S或T SEQ ID NO:223 SQSYYRGTLD SEQ ID NO:218 ASQSVTTSNYNY SEQ ID NO:219 FASNLESGVPX 9R X 9= A或S SEQ ID NO:245 SWEIPW SEQ ID NO:186  
167 ASGYKFTDYY SEQ ID NO:224 IFPNDASTTYNEKFKGK SEQ ID NO:225 SRDAD SEQ ID NO:226 AKSSVSY SEQ ID NO:227 DTSYLGSGIPAR SEQ ID NO:228 WSSYPY SEQ ID NO:191  
168 ASGFTFSDYG SEQ ID NO:229 ISSGSSTFYYADTVKGR SEQ ID NO:230 SQSYYRGTMD SEQ ID NO:231 ASQGVSTSTYTY SEQ ID NO:232 FASNLESGVPSR SEQ ID NO:222 SWEIPW SEQ ID NO:186  
169 ASGFTFSDYG SEQ ID NO:229 ISSGSSTFYYADTVKGR SEQ ID NO:230 SQSYYRGTID SEQ ID NO:233 ASQGVSTSTYTY SEQ ID NO:232 FASNLESGVPSR SEQ ID NO:222 SWEIPW SEQ ID NO:186  
170 ASGYTFTSYW SEQ ID NO:234 IDSSDSKTQYNQKFKDK SEQ ID NO:235 GGYLWFA SEQ ID NO:236 ASQSVSTSTYSY SEQ ID NO:237 YASNLESGVPAR SEQ ID NO:238 SWEIPW SEQ ID NO:186  
171 ASGYTFTSYW SEQ ID NO:234 IDSSDSKTQYNQKFKDR SEQ ID NO:239 GGYLWFA SEQ ID NO:236 ASQSVSTSTYSY SEQ ID NO:237 YASNLESGVPDR SEQ ID NO:240 SWEIPW SEQ ID NO:186  
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少95%同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少95%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少96%同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少96%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少97%同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少97%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少98%同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少98%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含與表1所揭示之抗體之VH至少99%同一的胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少99%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，結合至5T4之抗原結合位點或抗原結合域包含：抗體重鏈可變域(VH)，其包含表1所揭示之抗體之胺基酸序列；及抗體輕鏈可變域(VL)，其包含表1所揭示之抗體之胺基酸序列。序列同一性可根據BLAST演算法(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)、使用預設設定判定。
在某些實施例中，抗原結合位點包含表1所揭示之抗體之VH及VL序列之重鏈CDR1、CDR2、及CDR3、及輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3，其依下列判定：Kabat（參見Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, NIH Publication No. 91-3242, Bethesda）、Chothia（參見例如Chothia C & Lesk A M, (1987), J Mol Biol 196: 901-917）、MacCallum（參見MacCallum R M et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745）、或所屬技術領域中已知之任何其他CDR判定方法。在某些實施例中，抗原結合位點包含表1、表1A、表1B、表1C、或表1D所揭示之抗體之重鏈CDR1、CDR2、及CDR3、及輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Kabat）： ●SEQ ID NO: 170、171、5、6、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、6、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、130、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、132、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、173、5、174、7、及8； ●SEQ ID NO: 175、176、177、44、45、及46； ●SEQ ID NO: 178、179、48、49、7、及8； ●SEQ ID NO: 178、179、48、50、7、及8； ●SEQ ID NO: 178、179、48、92、7、及8； ●SEQ ID NO: 178、179、35、50、7、及8； ●SEQ ID NO: 178、179、35、49、7、及8； ●SEQ ID NO: 178、179、35、92、7、及8；或 ●SEQ ID NO: 180、181、55、56、57、及8。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Kabat）： ●SEQ ID NO: 170、171、5、6、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、6、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、130、7、及8； ●SEQ ID NO: 170、172、5、132、7、及8；或 ●SEQ ID NO: 170、173、5、174、7、及8。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Chothia）： ●SEQ ID NO: 3、182、183、184、185、及186； ●SEQ ID NO: 41、187、188、189、190、及191； ●SEQ ID NO: 47、182、192、193、185、及186； ●SEQ ID NO: 47、182、194、193、185、及186；或 ●SEQ ID NO: 53、195、196、197、198、及186。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Chothia）：SEQ ID NO: 3、182、183、184、185、及186。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據IMGT）： ●SEQ ID NO: 199、200、201、202、185、及8； ●SEQ ID NO: 203、204、205、206、190、及46； ●SEQ ID NO: 207、208、209、210、185、及8； ●SEQ ID NO: 207、208、211、210、185、及8；或 ●SEQ ID NO: 212、213、214、215、198、及8；
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據IMGT）：SEQ ID NO: 199、200、201、202、185、及8。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Honegger）： ●SEQ ID NO: 216、217、218、219、220、及186； ●SEQ ID NO: 216、221、218、219、222、及186； ●SEQ ID NO: 216、223、218、219、222、及186； ●SEQ ID NO: 216、223、218、219、245、及186； ●SEQ ID NO: 224、225、226、227、228、及191； ●SEQ ID NO: 229、230、231、232、222、及186； ●SEQ ID NO: 234、235、236、237、238、及186；或 ●SEQ ID NO: 234、239、236、237、240、及186。
在各種實施例中，結合5T4（例如人類5T4）之抗原結合位點或抗原結合域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、及VL-CDR3，其等分別包含下列胺基酸序列（根據Honegger）： ●SEQ ID NO: 216、217、218、219、220、及186； ●SEQ ID NO: 216、221、218、219、222、及186； ●SEQ ID NO: 216、223、218、219、222、及186；或 ●SEQ ID NO: 216、223、218、219、245、及186。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 130、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 132、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 170、172、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、182、及183之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 184、185、及186之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 199、200、及201之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 202、185、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 216、217、及218之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 219、220、及186之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:2之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:94之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 95或96之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 134或135之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1002。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少95%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少95%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少96%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少96%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少97%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少97%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少98%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少98%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少99%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少99%同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH相對於SEQ ID NO:9在位置44處包含半胱胺酸(C)取代(G44C)，其係根據Kabat編號方案。在某些實施例中，VL相對於SEQ ID NO:10在位置100處包含半胱胺酸(C)取代(G100C)，其係根據Kabat編號方案。在某些實施例中，VL包含在位置33處之白胺酸(L)取代(M33L)（根據Kabat編號方案）(SEQ ID NO:130)。在某些實施例中，VL包含在位置33處之纈胺酸(V)取代(M33V)（根據Kabat編號方案）(SEQ ID NO:132)。包含M33L取代之例示性VL係SEQ ID NO:129。包含M33V取代之例示性VL係SEQ ID NO:131。因此，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與衍生自10F10之VH至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:129或SEQ ID NO:131之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少95%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少95%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少96%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少96%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少97%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少97%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少98%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少98%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：VH，其包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少99%同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少99%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域包含：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗原結合位點或抗原結合域係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 13或14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO: 13或14之胺基酸序列至少約95%同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少95%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少96%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少97%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少98%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少99%同一的胺基酸序列。在一些實施例中，scFv包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 41、42、及43之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 44、45、及46之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自05H04。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 41、42、及43之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 44、45、及46之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:15之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 18或19之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 120之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 21×05 AB1002親本人源化者(T62)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:22之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:23之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 23×03人源化變體2。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 23×03 BM1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:108之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:133之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列，
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 48×01 BM2。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:121之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 48×01人源化變體3。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:138之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:27之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 11×01人源化變體1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:28之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 11×01 BM1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:106之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:107之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自10F10 21×05人源化變體5。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:30之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含在位置62處之絲胺酸(S)取代（根據Kabat編號方案）。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 48×01。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:32之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:34之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:122之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:123之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 21×05。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:36之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 21×05 BM1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:139之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:124之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 11×01。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:37之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:38之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 11×01 BM1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:125之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 23×03。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:39之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:40之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自11F09 23×03 BM2。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:127之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:128之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 53、54、及55之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自08E06。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:51之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:52之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自08E06-人源化變體1。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:58之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:59之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO: 60或61之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO: 136或137之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自08E06-人源化變體2。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:62之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:63之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1011 (11F09-VH_BM1-VK_BM1)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:97之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1012 (11F09-VH_BM1-VK_BM1_M33L)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:98之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1013 (11F09-VH_BM1-VK_BM1_M33V)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:99之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1014 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:100之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1015 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1_M33L)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:101之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1016 (11F09-VH_BM1_M100cI-VK_BM1_M33V)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:102之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1017 (11F09-VH_BM2-VK_BM1)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:103之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1018 (11F09-VH_BM2-VK_BM1_M33L)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:104之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，VH包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列。在某些實施例中，VL包含CDR1、CDR2、及CDR3，其等分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點係衍生自AB1019 (11F09-VH_BM2-VK_BM1_M33V)。在某些實施例中，抗原結合位點包含(a) VH，其包含分別包含SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及(b) VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
例如，在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗原結合位點係以scFv存在，其中scFv包含與SEQ ID NO:105之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在前述實施例之各者中，本文設想一起結合5T4之VH及/或VL序列可在VH及/或VL之構架區中含有胺基酸改變（例如至少1、2、3、4、5、或10個胺基酸取代、缺失、或添加），而不顯著影響其結合至5T4之能力。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點以下列之K D（亦即解離常數）結合人類5T4，且/或結合來自對象之體液、組織、及/或細胞之5T4：1 nM或更低、5 nM或更低、10 nM或更低、15 nM或更低、或20 nM或更低，如藉由表面電漿共振(SPR)（例如，使用以下實例1中所述之方法）或藉由生物膜干涉技術(bio-layer interferometry, BLI)所測量。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點具有下列K d（亦即解離速率，亦稱為K off）：等於或低於1 × 10 -5、1 × 10 -4、1 × 10 -3、5 × 10 -3、0.01、0.02、或0.05 1/s，如藉由SPR（例如，使用以下實例1中所述之方法）或藉由BLI所測量。
在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點以下列之K D（亦即解離常數）結合食蟹獼猴5T4，且/或結合來自對象之體液、組織、及/或細胞之5T4：5 nM或更低、10 nM或更低、15 nM或更低、20 nM或更低、或30 nM或更低，如藉由表面電漿共振(SPR)（例如，使用以下實例1中所述之方法）或藉由生物膜干涉技術(BLI)所測量。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點具有下列K d（亦即解離速率，亦稱為K off）：等於或低於1 × 10 -3、5 × 10 -3、0.01、0.02、或0.03 1/s，如藉由SPR（例如，使用以下實例1中所述之方法）或藉由BLI所測量。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3，其中抗原結合位點結合LRR1域內之5T4。因此，CDR序列係識別為驅動抗原結合性質之特徵，所屬技術領域中具有通常知識者理解到，包含相同CDR之抗原結合位點預期會展現類似抗原結合性質。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係人類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係鼠類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:3、4、及5之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:6、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3，其中抗原結合位點結合LRR1域內之5T4。因此，CDR序列係識別為驅動抗原結合性質之特徵，所屬技術領域中具有通常知識者理解到，包含相同CDR之抗原結合位點預期會展現類似抗原結合性質。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係人類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係鼠類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:47、4、及48之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:50、7、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3，其中抗原結合位點結合LRR2域內之5T4。因此，CDR序列係識別為驅動抗原結合性質之特徵，所屬技術領域中具有通常知識者理解到，包含相同CDR之抗原結合位點預期會展現類似抗原結合性質。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係人類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。在一些態樣中，包含下列之抗原結合位點係鼠類抗原結合位點：VH，其包含分別包含SEQ ID NO:53、54、及55之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO:56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其與上述抗原結合位點競爭結合至5T4（例如人類5T4）。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點與衍生自下列之抗原結合位點競爭結合至5T4：AB1002、05H04、10F10 21×05、10F10 23×03、10F10 48×01、10F10 11×01、10F10 21×05、11F09 48×01、11F09 21×05、11F09 11×01、11F09 23×03、或自其衍生及以上揭示之scFV及人源化版本。在某些實施例中，本揭露之抗原結合位點與衍生自下列之抗原結合位點競爭結合至5T4：AB1002、05H04、10F10 21×05、10F10 23×03、10F10 48×01、10F10 11×01、10F10 21×05、11F09 48×01、11F09 21×05、11F09 11×01、11F09 23×03、08E06、08E06-人源化變體1、08E06-人源化變體2、AB1011、AB1012、AB1013、AB1014、AB1015、AB1016、AB1017、AB1018、AB1019、或自其衍生及以上揭示之scFV及人源化版本。在一些實施例中，抗原結合位點與AB1002競爭結合至5T4。
在另一態樣中，本揭露提供一種抗原結合位點，其包含：VH，其包含選自表5之CDR1、CDR2、及CDR3序列；及VL，其包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3序列。例如，在某些實施例中，抗原結合位點包含VH，該VH包含選自由下列所組成之群組的CDR1、CDR2、及CDR3序列：(a) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DSSDSK (SEQ ID NO:54)、及GGYLWFAY (SEQ ID NO:55)；(b) GYTFGSY (SEQ ID NO:73)、DASTEK (SEQ ID NO:74)、及GGYLWFQY (SEQ ID NO:75)；(c) GYLFTSY (SEQ ID NO:76)、SVSDAK (SEQ ID NO:77)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(d) GYTFGSY (SEQ ID NO:73)、DARSAK (SEQ ID NO:79)、及GGYLWFKY(SEQ ID NO:78)；(e) GYRFTSY (SEQ ID NO:80)、DASSAK (SEQ ID NO:81)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(f) GYGFTSY (SEQ ID NO:82)、DARTAK (SEQ ID NO:83)、及GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)；(g) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYHY (SEQ ID NO:86)；(h) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYSY (SEQ ID NO:87)；(i) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)；(j) GYSFTSY (SEQ ID NO:88)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(k) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；及(l) GYGFTSY (SEQ ID NO:82)、DARTAK (SEQ ID NO:83)、及GGHLWYAY (SEQ ID NO:89)。結合至5T4之此類抗原結合位點可藉由以下形成：將此等VH中之任一者與VL組合，該VL包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3序列。
本揭露提供一種經單離核酸，其編碼本文所述之抗原結合位點或蛋白質中之任一者。本揭露亦提供核酸，其編碼任何如本文所述之5T4抗原結合位點。因此，本揭露提供核酸，其編碼包含如本文所述之抗原結合位點或蛋白質之鏈中之一或多者。在一些實施例中，核酸編碼VH，該VH包含與表1所揭示之抗體之VH至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在一些實施例中，核酸編碼VL，該VL包含與表1所揭示之相同抗體之VL至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，核酸編碼VH，該VH包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列。在某些實施例中，核酸編碼VL，該VL包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。在某些實施例中，核酸編碼：VH，其包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列；及VL，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。在某些實施例中，核酸編碼包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH。在某些實施例中，核酸編碼包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。在某些實施例中，核酸編碼包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH。在某些實施例中，核酸編碼包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。本揭露又進一步提供核酸，其編碼如本文所述之Fc域或其部分。
本揭露之例示性核酸序列係提供於 表 2中。如本文中所使用之AB1310係指包含AB1002 scFv (VL-VH)之多特異性結合蛋白。如本文中所使用之AB1783係指包含AB1002 scFv (VL-VH)之多特異性結合蛋白。AB1310及AB1783之胺基酸序列係同一的。如表2中所示之核酸序列在不同宿主細胞中的表現有所不同。AB1783針對在CHO細胞中之表現經最佳化。 表2.例示性核酸序列（編碼結合5T4之抗原結合位點）之序列
殖株 序列
AB1310 5T4-scFv-Fc GTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGATGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGGACTCTAGAGGATCGAACCCTTAAGCTTGCCACCATGGACATGAGAGTGCCCGCTCAACTGCTGGGACTGCTGCTGCTTTGGCTTCCTGGCGCTAGATGCGACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGACCACCAGCAACTACAACTACATGCACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCAAGTTCGCCAGCAACCTGGAAAGCGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACCATATCTAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCACAGCTGGGAGATCCCTTGGACCTTTGGCTGTGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGCGGAGGCGGAGGAAGCGGTGGCGGCGGATCTGAAGTTCAGCTGGTTGAAAGTGGCGGAGGCCTGGTTAAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCTCCAGATTCACCTTCAGCGACTTCGGAATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAATGTCTGGAATGGGTGTCCTACATCAGCAGCGGCAGCAGCACCATCTACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCAGATTCACAATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCAGCAGCCAGTCCTACTACCGGGGCACACTGGATTATTGGGGCCAGGGCACAACCGTGACAGTGTCCAGCGCCAGCGATAAGACCCACACCTGTCCTCCATGTCCTGCTCCAGAACTGCTCGGCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGAACACCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCTCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCTCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTAGAGTGTATACCTTGCCTCCATGCCGGGACGAGCTGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGTGTCCGACGGCAGCTTTACCCTGTACAGCAAGCTGACAGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGTCTCCTGGATGATAATCTAGAAAGGGTTCGATCCCTACCGGTTAGTAATGAGTTTGATATCTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGAACGGGGGAGGCTAACTGAAACACGGAAGGAGACAATACCGGAAGGAACCCGCGCTATGACGGCAATAAAAAGACAGAATAAAACGCACGGGTGTTGGGTCGTTTGTTCATAAACGCGGGGTTCGGTCCCAGGGCTGGCACTCTGTCGATACCCCACCGAGACCCCATTGGGGCCAATACGCCCGCGTTTCTTCCTTTTCCCCACCCCACCCCCCAAGTTCGGGTGAAGGCCCAGGGCTCGCAGCCAACGTCGGGGCGGCAGGCCCTGCCATAGCAGATCTGCGCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTATCCCCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTAATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTCCCGGGAGCTTGTATATCCATTTTCGGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGCGAAATGACCGACCAAGCGACGCCCAACCTGCCATCACGAGATTTCGATTCCACCGCCGCCTTCTATGAAAGGTTGGGCTTCGGAATCGTTTTCCGGGACGCCGGCTGGATGATCCTCCAGCGCGGGGATCTCATGCTGGAGTTCTTCGCCCACCCCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTATACCGTCGACCTCTAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTCGACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTCGACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGG (SEQ ID NO:109)
AB1310 5T4-scFv-Fc GACATCCAGCTGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGACCACCAGCAACTACAACTACATGCACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCAAGTTCGCCAGCAACCTGGAAAGCGGCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACCATATCTAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCACAGCTGGGAGATCCCTTGGACCTTTGGCTGTGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGCGGAGGCGGAGGAAGCGGTGGCGGCGGATCTGAAGTTCAGCTGGTTGAAAGTGGCGGAGGCCTGGTTAAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCTCCAGATTCACCTTCAGCGACTTCGGAATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAATGTCTGGAATGGGTGTCCTACATCAGCAGCGGCAGCAGCACCATCTACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCAGATTCACAATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCAGCAGCCAGTCCTACTACCGGGGCACACTGGATTATTGGGGCCAGGGCACAACCGTGACAGTGTCCAGCGCCAGCGATAAGACCCACACCTGTCCTCCATGTCCTGCTCCAGAACTGCTCGGCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGAACACCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCTCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCTCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTAGAGTGTATACCTTGCCTCCATGCCGGGACGAGCTGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGTGTCCGACGGCAGCTTTACCCTGTACAGCAAGCTGACAGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGTCTCCTGGA (SEQ ID NO: 241)
AB1783 5T4-scFv-Fc AAGCTTACCGCCACCATGGACATGCGCGTCCCCGCGCAGCTCCTCGGCCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCCGGCGCCCGCTGCGACATCCAACTGACCCAGTCCCCGTCCTCCCTGAGCGCATCTGTCGGCGACCGGGTGACCATCACCTGCCGGGCCTCGCAGTCCGTGACCACGTCGAACTACAACTACATGCACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGTAAGGCGCCCAAGCTGCTCATCAAGTTCGCGTCCAACCTGGAGTCGGGCGTGCCGTCGCGGTTCTCCGGCTCCGGCAGCGGCACCGACTTCACGCTGACGATCTCGTCCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACGTACTACTGCCAGCACTCCTGGGAGATCCCGTGGACGTTCGGGTGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAGGGAGGCGGGGGCAGTGGGGGCGGAGGCTCTGGGGGCGGCGGCAGTGGCGGCGGCGGCTCGGAGGTCCAGCTGGTAGAGTCCGGAGGCGGCCTCGTGAAGCCGGGCGGCTCCCTGCGCCTGTCCTGCGCGGCCAGCCGTTTCACCTTCTCGGACTTCGGGATGCATTGGGTGCGCCAGGCCCCAGGCAAGTGCCTGGAGTGGGTTTCCTACATCTCGTCCGGCTCGAGTACCATCTATTACGCCGACAGCGTCAAGGGACGCTTCACGATCTCGCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTTTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCGGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCTCGTCCCAGAGCTATTACCGGGGTACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGGACGACGGTGACCGTCAGCTCCGCCAGCGACAAGACCCACACGTGCCCCCCGTGCCCGGCCCCGGAGCTGCTGGGAGGCCCGTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCGAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCGCGCACCCCGGAGGTGACCTGCGTAGTCGTCGACGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTCGAGGTCCACAACGCGAAGACCAAGCCGCGCGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTCGTGAGCGTCCTGACCGTGCTGCACCAAGACTGGCTCAACGGTAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGAGCAACAAGGCCCTCCCTGCCCCGATTGAGAAGACCATCTCGAAGGCTAAGGGCCAGCCGCGGGAGCCCCGGGTGTACACGCTCCCGCCCTGCCGGGACGAACTGACCAAAAACCAGGTGTCCCTGACGTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAATGGTCAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACCCCGCCCGTGCTGGTGAGCGACGGGTCCTTCACCCTGTATTCCAAGCTCACGGTCGACAAGTCCCGCTGGCAGCAGGGCAACGTCTTCTCGTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAGTCACTGTCACTCTCCCCCGGCTGATAATCTAGA (SEQ ID NO:110)
AB1783 5T4-scFv-Fc GACATCCAACTGACCCAGTCCCCGTCCTCCCTGAGCGCATCTGTCGGCGACCGGGTGACCATCACCTGCCGGGCCTCGCAGTCCGTGACCACGTCGAACTACAACTACATGCACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGTAAGGCGCCCAAGCTGCTCATCAAGTTCGCGTCCAACCTGGAGTCGGGCGTGCCGTCGCGGTTCTCCGGCTCCGGCAGCGGCACCGACTTCACGCTGACGATCTCGTCCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACGTACTACTGCCAGCACTCCTGGGAGATCCCGTGGACGTTCGGGTGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAGGGAGGCGGGGGCAGTGGGGGCGGAGGCTCTGGGGGCGGCGGCAGTGGCGGCGGCGGCTCGGAGGTCCAGCTGGTAGAGTCCGGAGGCGGCCTCGTGAAGCCGGGCGGCTCCCTGCGCCTGTCCTGCGCGGCCAGCCGTTTCACCTTCTCGGACTTCGGGATGCATTGGGTGCGCCAGGCCCCAGGCAAGTGCCTGGAGTGGGTTTCCTACATCTCGTCCGGCTCGAGTACCATCTATTACGCCGACAGCGTCAAGGGACGCTTCACGATCTCGCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTTTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCGGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCTCGTCCCAGAGCTATTACCGGGGTACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGGACGACGGTGACCGTCAGCTCCGCCAGCGACAAGACCCACACGTGCCCCCCGTGCCCGGCCCCGGAGCTGCTGGGAGGCCCGTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCGAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCGCGCACCCCGGAGGTGACCTGCGTAGTCGTCGACGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTCGAGGTCCACAACGCGAAGACCAAGCCGCGCGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTCGTGAGCGTCCTGACCGTGCTGCACCAAGACTGGCTCAACGGTAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGAGCAACAAGGCCCTCCCTGCCCCGATTGAGAAGACCATCTCGAAGGCTAAGGGCCAGCCGCGGGAGCCCCGGGTGTACACGCTCCCGCCCTGCCGGGACGAACTGACCAAAAACCAGGTGTCCCTGACGTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAATGGTCAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACCCCGCCCGTGCTGGTGAGCGACGGGTCCTTCACCCTGTATTCCAAGCTCACGGTCGACAAGTCCCGCTGGCAGCAGGGCAACGTCTTCTCGTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAGTCACTGTCACTCTCCCCCGGC (SEQ ID NO: 242)
在某些實施例中，本揭露之核酸分子包含SEQ ID NO:109。在某些實施例中，本揭露之核酸分子包含SEQ ID NO:110。在某些實施例中，本揭露之核酸分子包含SEQ ID NO:241。在某些實施例中，本揭露之核酸分子包含SEQ ID NO:242。 具有抗原結合位點之蛋白質
本文所揭示之抗原結合位點可存在於抗體或其抗原結合片段中。抗體可係單株抗體、嵌合抗體、雙價抗體(diabody)、Fab片段、Fab'片段、或F(ab’) 2片段、Fv、雙特異性抗體、雙特異性Fab2、雙特異性(mab)2、人源化抗體、人工產生之人類抗體、雙特異性T細胞銜接器、雙特異性NK細胞銜接器、單鏈抗體（例如單鏈可變片段或scFv）、三功能抗體(triomab)、鈕扣(knobs-into-holes, kih) IgG（具有共同輕鏈）、crossmab、ortho-Fab IgG、DVD-Ig、2合1-IgG (2 in 1-IgG)、IgG-scFv、sdFv2-Fc、雙奈米抗體(bi-nanobody)、tandAb、雙親和力重靶向抗體(dual-affinity retargeting antibody, DART)、DART-Fc、scFv-HSA-scFv（其中HSA =人類血清白蛋白）、或對接及鎖定(dock-and-lock, DNL)-Fab3。在某些實施例中，本揭露之抗體係scFv。在某些實施例中，scFv呈VH-VL格式。
在一些實施例中，上述單鏈可變片段(scFv)包括重鏈可變域及輕鏈可變域。在一些實施例中，重鏈可變域與輕鏈可變域形成雙硫鍵，以增強scFv之穩定性。例如，雙硫鍵可形成於重鏈可變域之C44殘基與輕鏈可變域之C100殘基之間，胺基酸位置係依Kabat編號。在一些實施例中，重鏈可變域係經由可撓性連接子連接至輕鏈可變域。可使用任何合適的連接子，例如(G 4S) 4連接子((GlyGlyGlyGlySer) 4(SEQ ID NO:111))。在scFv之一些實施例中，重鏈可變域係位於輕鏈可變域之N端。在scFv之一些實施例中，重鏈可變域係位於輕鏈可變域之C端。
設想的是，在scFv中，VH及VL可藉由連接子連接，例如(GlyGlyGlyGlySer) 4，亦即(G 4S) 4連接子(SEQ ID NO:111)。所屬技術領域中具有通常知識者會理解，在具有本文所揭示（例如，在表1中）之VH及VL序列之scFv中，可使用任何其他揭示之連接子（參見例如表3）。
連接子（例如可撓性連接子）之長度可為「短」，例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個胺基酸殘基；或為「長」，例如至少13個胺基酸殘基。在某些實施例中，連接子係10至50、10至40、10至30、10至25、10至20、15至50、15至40、15至30、15至25、15至20、20至50、20至40、20至30、或20至25個胺基酸殘基長。
在某些實施例中，連接子包含下列或由下列所組成：(GS) n(SEQ ID NO:112)、(GGS) n(SEQ ID NO:113)、(GGGS) n(SEQ ID NO:114)、(GGSG) n(SEQ ID NO:115)、(GGSGG) n(SEQ ID NO:116)、及(GGGGS) n(SEQ ID NO:117)序列，其中n係1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20。在某些實施例中，連接子包含下列或由下列所組成：選自如 表 3中所列之SEQ ID NO:64至72、111、及118之胺基酸序列。
表3   
SEQ ID 胺基酸序列
SEQ ID NO:118 GSGSGSGSGSGSGSGSGSGS
SEQ ID NO:64 GGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGS
SEQ ID NO:65 GGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGS
SEQ ID NO:66 GGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGGGSG
SEQ ID NO:67 GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG
SEQ ID NO:68 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID NO:111 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID NO:69 GGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID NO:70 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID NO:71 GGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG
SEQ ID NO:72 SGSGGGGS
在某些實施例中，本文所揭示之抗原結合位點係連接至與抗體恆定區至少90%（例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一的胺基酸序列，抗體恆定區例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、及IgE之重鏈恆定區；特別是選自例如IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4之（例如人類）重鏈恆定區。在另一實施例中，本文所揭示之抗原結合位點可連接至輕鏈恆定區，輕鏈恆定區係選自例如κ或λ之（例如人類）輕鏈恆定區。恆定區可經改變（例如突變）以修改抗體之性質（例如，以增加或減少下列中之一或多者：Fc受體結合、抗體醣基化、半胱胺酸殘基之數目、效應細胞功能、及/或補體功能）。在一個實施例中，抗體具有效應功能且可固定補體。在其他實施例中，抗體不募集效應細胞或固定補體。在另一實施例中，抗體結合Fc受體之能力已降低或沒有。例如，其係不支持與Fc受體結合之同型或亞型、片段或其他突變體，例如，其具有誘變(mutagenized)或缺失的Fc受體結合區。
在某些實施例中，抗原結合位點係連接至IgG恆定區，IgG恆定區包括鉸鏈域、CH2域、及CH3域（具有或不具有CH1域）。在一些實施例中，恆定區之胺基酸序列係與人類抗體恆定區至少90%（例如90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一，人類抗體恆定區諸如人類IgG1恆定區、人類IgG2恆定區、人類IgG3恆定區、或人類IgG4恆定區。在一個實施例中，足以結合CD16之抗體Fc域或其部分包含與以下闡述之野生型人類IgG1 Fc序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列： DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:119)。在一些其他實施例中，恆定區之胺基酸序列係與來自另一種哺乳動物（諸如兔、犬、貓、小鼠、或馬）之抗體恆定區至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一。相較於人類IgG1恆定區，一或多個突變可併入恆定區中，例如在Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及/或K439處。例示性取代包括例如Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、T350V、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, T394W, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I , Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D、及K439E。
在某些實施例中，抗原結合位點係連接至足以結合CD16之抗體Fc域之部分。在Fc域內，CD16結合係由鉸鏈區及CH2域介導。例如，在人類IgG1內，與CD16之交互作用主要集中於CH2域中之胺基酸殘基Asp 265 – Glu 269、Asn 297 – Thr 299、Ala 327 – Ile 332、Leu 234 – Ser 239、及碳水化合物殘基N-乙醯基-D-葡萄醣胺（參見Sondermann et al., Nature, 406 (6793):267-273）。基於已知結構域，可選擇突變以增強或降低與CD16之結合親和力（諸如藉由使用噬菌體展示庫或酵母菌表面展示cDNA庫），或可基於交互作用之已知三維結構設計突變。
在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之CH1中的突變可在胺基酸V125、F126、P127、T135、T139、A140、F170、P171、及/或V173處。在某些實施例中，可併入人類IgG1恆定區之Cκ中的突變可在胺基酸E123、F116、S176、V163、S174、及/或T164處。
在一些實施例中，抗體恆定域包含IgG抗體（例如人類IgG1抗體）之CH2域及CH3域。在一些實施例中，將突變引入抗體恆定域中，以實現與另一抗體恆定域的異二聚化。例如，若抗體恆定域係衍生自人類IgG1之恆定域，則抗體恆定域可包含與人類IgG1抗體之胺基酸234至332至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列，且在選自由下列所組成之群組的一或多個位置處有所不同：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439。本文所揭示之Fc域或鉸鏈區中之所有胺基酸位置係根據EU編號來編號。
為了促進不對稱蛋白質之形成，設想到Fc域異二聚化。例如，國際申請公開案第WO2019157366號中描述促進異二聚化的Fc域中之突變（例如胺基酸取代）。
可使用所屬技術領域中具有通常知識者熟知的重組DNA技術製造上述蛋白質。例如，可將編碼第一免疫球蛋白重鏈之第一核酸序列選殖至第一表現載體中；可將編碼第二免疫球蛋白重鏈之第二核酸序列選殖至第二表現載體中；可將編碼第一免疫球蛋白輕鏈之第三核酸序列選殖至第三表現載體中；可將編碼第二免疫球蛋白輕鏈之第四核酸序列選殖至第四表現載體中；可將第一、第二、第三、及第四表現載體一起穩定地轉染至宿主細胞中或染色體整合至宿主細胞之基因體中，以產生多聚體蛋白質。
為了達成蛋白質之最高產率，可探究第一、第二、第三、及第四表現載體之不同比率，以判定用於轉染至宿主細胞中之最佳比率。在轉染之後，可使用所屬技術領域中已知的方法（諸如有限稀釋(limited dilution)、ELISA、FACS、顯微鏡術、或Clonepix），單離單一殖株以用於細胞庫產生。
可將殖株在適用於生物反應器擴展(scale-up)及維持蛋白質表現之條件下培養，該蛋白質包含本文所揭示之抗原結合位點。可將蛋白質單離並純化。在一些實施例中，已單離並純化之此類蛋白質實質上不含至少一種組分（相較於培養物中產生之多特異性結合蛋白）。因此，當純化蛋白質係在非自然發生環境中產生、儲存、或存在時，可將其部分或完全自一或多種其他物質分離。可使用所屬技術領域中已知的方法，自細胞培養物單離並純化蛋白質，該等方法包括離心、深層過濾、細胞裂解、均質化、冷凍解凍、親和純化、凝膠過濾、硫酸銨或乙醇沉澱、離子交換層析法（陰離子或陽離子）、疏水性交互作用交換層析法、及混合模式層析法。其他熟知方法係描述於 Process Scale Purification of Antibodies, Second Edition, U. Gottschalk (Ed.), John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ (2017)中。替代地，本文所提供之蛋白質可使用熟知的重組方法獲得（參見例如Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York (2001)；及Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Baltimore, MD (1999)）。用於純化本文所提供之蛋白質的方法及條件可由所屬技術領域中具有通常知識者選擇，且例如藉由如本文所述之結合及/或功能性檢定監測純化。
因此，在另一態樣中，本揭露提供一或多種經單離核酸，其包含編碼下列之序列：前述抗體中之任一者之免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈可變區。本發明提供一或多種表現載體，其表現前述抗體中之任一者之免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈可變區。類似地，本發明提供宿主細胞，其包含前述表現載體及/或經單離核酸中之一或多者。
在某些實施例中，本揭露之抗體以下列之K D（亦即解離常數）特異性結合5T4（例如人類5T4或食蟹獼猴5T4）：25 nM、20 nM、15 nM、10 nM、9 nM、8 nM、7 nM、6 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.1 nM、或更低，如使用標準結合檢定（例如表面電漿共振(SPR)）（例如，使用以下實例1中所述之方法）或生物膜干涉技術(BLI)所測量。在某些實施例中，如本文所揭示之抗體以小於9 nM之K D特異性結合5T4。在某些實施例中，如本文所揭示之多特異性結合蛋白以小於8 nM之K D特異性結合5T4。在某些實施例中，如本文所揭示之抗體以小於7 nM之K D特異性結合5T4。在某些實施例中，如本文所揭示之抗體以小於6 nM之K D特異性結合5T4。在某些實施例中，如本文所揭示之抗體以小於5 nM之K D特異性結合5T4。在某些實施例中，本揭露之抗體以下列之K d（亦即解離速率，亦稱為K off）特異性結合5T4（例如人類5T4或食蟹獼猴5T4）：等於或低於1 × 10 -5、9 × 10 -4、8 × 10 -4、7 × 10 -4、6 × 10 -4、5 × 10 -4、4 × 10 -4、3 × 10 -4、2 × 10 -4、1 × 10 -4、1 × 10 -3、5 × 10 -3、0.01、0.02、或0.05 1/s，如藉由SPR（例如，使用以下實例1中所述之方法）或藉由BLI所測量。在某些實施例中，抗體結合來自對象之體液、組織、及/或細胞之5T4。
用於判定下列之競爭檢定係所屬技術領域中已知的：抗體是否結合至與所揭示之抗體相同之表位，或與所揭示之抗體競爭結合。例示性競爭檢定包括免疫檢定（例如ELISA檢定、RIA檢定）、表面電漿共振（例如BIAcore分析）、生物膜干涉技術、及流式細胞術。
一般而言，競爭檢定涉及下列之使用：結合至固體表面或表現於細胞表面上之抗原（例如人類5T4蛋白或其片段）、測試5T4結合抗體、及參考抗體。參考抗體經標示，且測試抗體未經標示。藉由判定在測試抗體存在下結合至固體表面或細胞之經標示參考抗體之量，測量競爭性抑制。通常，測試抗體過量（例如1x、5x、10x、20x、或100x）存在。藉由競爭檢定識別之抗體（例如競爭抗體）包括結合至與參考抗體相同表位或類似（例如重疊）表位之抗體、及結合至與參考抗體所結合之表位足夠接近的相鄰表位之抗體（以發生立體障礙(steric hindrance)）。
競爭檢定可以兩個方向進行，以確保標示之存在不會干擾或以其他方式抑制結合。例如，在第一方向，參考抗體經標示，且測試抗體未經標示，且在第二方向，測試抗體經標示，且參考抗體未經標示。
若有下列情形，則測試抗體與參考抗體競爭特異性結合至抗原：過量的一種抗體（例如1x、5x、10x、20x、或100x）將另一抗體之結合抑制例如至少50%、75%、90%、95%、或99%，如競爭性結合檢定所測量。
若有下列情形，可判定兩種抗體結合至相同表位：抗原中基本上所有減少或消除一種抗體結合之胺基酸突變減少或消除其他抗體結合。若有下列情形，可判定兩種抗體結合至重疊表位：僅減少或消除一種抗體結合之胺基酸突變之子集減少或消除其他抗體結合。
可將本文所揭示之抗體進一步最佳化（例如親和力成熟），以改善生物化學特徵（包含親和力及/或特異性）、改善生物物理性質（包括聚集、穩定性、沉澱、及/或非特異性交互作用）、及/或降低免疫原性。親和力成熟程序係在所屬技術領域中之通常知識內。例如，可藉由DNA改組(shuffling)、鏈改組、CDR改組、隨機誘變、及/或定點誘變，將多樣性引入免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈中。
在某些實施例中，經單離人類抗體含有一或多個體細胞突變。在此等情況下，可將抗體修飾為人類生殖系序列，以最佳化抗體（例如，藉由稱為生殖系化(germlining)之程序）。
通常而言，最佳化抗體與其衍生來源之非最佳化（或親本）抗體對抗原具有至少相同或實質上相同的親和力。較佳地，當相較於親本抗體時，最佳化抗體對抗原具有較高親和力。
若抗體係用作為治療劑，則可使用標準體外接合化學品，將其接合至效應劑（諸如小分子毒素或放射性核種）。若效應劑係多肽，則可將抗體化學接合至效應物或連接至效應物作為融合蛋白。融合蛋白之構築係在所屬技術領域中之通常知識內。
可使用標準體外接合化學品，將抗體接合至效應部份，諸如諸如小分子毒素或放射性核種。若效應部份係多肽，則可將抗體化學接合至效應物或連接至效應物作為融合蛋白。融合蛋白之構築係在所屬技術領域中之通常知識內。 CAR T 細胞、 5T4/CD3 導向雙特異性 T 細胞銜接器、免疫細胞介素、抗體藥物接合物、及免疫毒素
本揭露之另一態樣提供一種分子或複合物，其包含如本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點。例示性分子或複合物包括但不限於嵌合抗原受體(CAR)、T細胞銜接器（例如5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器）、免疫細胞介素、抗體藥物接合物、及免疫毒素。
可使用如本文所揭示之結合5T4之任何抗原結合位點。在某些實施例中，結合5T4之抗原結合位點之VH、VL、及/或CDR序列係提供於表1中。在某些實施例中，結合5T4之抗原結合位點係scFv。在某些實施例中，scFv包含與選自下列之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%）同一的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、14、18、19、23、25、27、29、31、34、36、38、40、60、61、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、120、121、123、124、126、128、133、134、135、136、或137。在某些實施例中，scFv包含選自下列之胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、14、18、19、23、25、27、29、31、34、36、38、40、60、61、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、120、121、123、124、126、128、133、134、135、136、或137。
在某些實施例中，在分子或複合物（例如CAR、T細胞銜接器、免疫細胞介素、抗體藥物接合物、或免疫毒素）中結合5T4之抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO: 10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:13或SEQ ID NO: 14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。 嵌合抗原受體 (CAR)
在某些實施例中，本揭露提供一種5T4靶向CAR，其包含如本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點（參見例如表1）。5T4靶向CAR可包含Fab片段或scFv。
用語「嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor)」或替代地「CAR」係指一種重組多肽構築體，其至少包含胞外抗原結合域、跨膜域、及胞內信號傳導域，該胞內信號傳導域包含衍生自刺激分子之功能細胞質信號傳導域（在本文中亦稱為「初級信號傳導域(primary signaling domain)」）。
因此，在某些實施例中，CAR包含如本文所揭示之結合5T4之胞外抗原結合位點、跨膜域、及胞內信號傳導域（包含初級信號傳導域）。在某些實施例中，CAR進一步包含一或多個功能細胞質信號傳導域，其係衍生自至少一種共刺激分子（亦稱為「共刺激信號傳導域(costimulatory signaling domain)」）。
在某些實施例中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含本文所揭示之作為胞外抗原結合域的結合5T4之抗原結合位點（例如5T4結合scFv）、跨膜域、及胞內信號傳導域（包含初級信號傳導域）。在某些實施例中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含本文所揭示之作為胞外抗原結合域的結合5T4之抗原結合位點（例如5T4結合scFv）、跨膜域、及胞內信號傳導域（包含共刺激信號傳導域及初級信號傳導域）。在某些實施例中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含本文所揭示之作為胞外抗原結合域的結合5T4之抗原結合位點（例如5T4結合scFv）、跨膜域、及胞內信號傳導域（包含兩個共刺激信號傳導域及初級信號傳導域）。在某些實施例中，CAR包含嵌合融合蛋白，該嵌合融合蛋白包含本文所揭示之作為胞外抗原結合域的結合5T4之抗原結合位點（例如5T4結合scFv）、跨膜域、及胞內信號傳導域（包含至少兩個共刺激信號傳導域及初級信號傳導域）。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:13之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:95之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:96之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 41、42、及43之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 44、45、及46之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:15或17之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:16之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:19之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:120之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:22之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:23之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:24之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:138之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:27之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:26之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:121之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:108之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:133之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：VH，其包含與SEQ ID NO:106之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:107之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:28之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 3、4、及5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 6、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:30之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:31之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:32之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:34之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:122之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:123之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:36之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:37之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:38之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:125之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:126之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:39之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:40之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:139之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:124之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 53、54、及55之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:58之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:59之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:60或61之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO: 136或137之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、57、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:97之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:98之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:90之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:99之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:100之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:127之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:128之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:101之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及35之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:93之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:102之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 50、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:33之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:103之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 49、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:21之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:104之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 47、4、及48之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由SEQ ID NO: 92、7、及8之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:20之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:91之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗原結合位點包含scFv，該scFv包含與SEQ ID NO:105之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。
在某些實施例中，胞外抗原結合域包含抗原結合位點（例如scFv），該抗原結合位點包含：重鏈可變域，其包含由來自表5之胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列；及輕鏈可變域，其包含分別由胺基酸序列表示的CDR1、CDR2、及CDR3序列。例如，在某些實施例中，胞外抗原結合域包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含選自由下列所組成之群組的CDR1、CDR2、及CDR3序列：(a) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DSSDSK (SEQ ID NO:54)、及GGYLWFAY (SEQ ID NO:55)；(b) GYTFGSY (SEQ ID NO:73)、DASTEK (SEQ ID NO:74)、及GGYLWFQY (SEQ ID NO:75)；(c) GYLFTSY (SEQ ID NO:76)、SVSDAK (SEQ ID NO:77)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(d) GYTFGSY (SEQ ID NO:73)、DARSAK (SEQ ID NO:79)、及GGYLWFKY(SEQ ID NO:78)；(e) GYRFTSY (SEQ ID NO:80)、DASSAK (SEQ ID NO:81)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(f) GYGFTSY (SEQ ID NO:82)、DARTAK (SEQ ID NO:83)、及GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)；(g) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYHY (SEQ ID NO:86)；(h) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYSY (SEQ ID NO:87)；(i) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)；(j) GYSFTSY (SEQ ID NO:88)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；(k) GYTFTSY (SEQ ID NO:53)、DASDAK (SEQ ID NO:85)、及GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)；及(l) GYGFTSY (SEQ ID NO:82)、DARTAK (SEQ ID NO:83)、及GGHLWYAY (SEQ ID NO:89)。結合至5T4之此類胞外抗原結合域可藉由以下形成：將此等重鏈可變域中之任一者與輕鏈可變域組合，該輕鏈可變域包含分別包含SEQ ID NO: 56、57、及8之胺基酸序列的CDR1、CDR2、及CDR3序列。
關於跨膜域，在各種實施例中，將CAR設計為包含融合至CAR之胞外域的跨膜域。在一個實施例中，跨膜域係與CAR中結構域之一者自然締合者。在一些情況下，跨膜域可藉由胺基酸取代選擇或修飾，以避免此類結構域與相同或不同表面膜蛋白之跨膜域結合，以最小化與受體複合物之其他成員的交互作用。在另一實施例中，跨膜域能夠與CAR T細胞表面上之另一個CAR同二聚化。在另一實施例中，跨膜域之胺基酸序列可經修飾或取代，以最小化與相同CAR T細胞中存在之天然結合夥伴之結合域的交互作用。
跨膜域可衍生自任何天然存在的膜結合或跨膜蛋白。在一個實施例中，每當CAR結合至目標時，跨膜區能夠信號傳導至（多個）胞內域。在一些實施例中，跨膜域包含選自由下列所組成之群組的一或多種蛋白質之（多個）跨膜區：TCR α鏈、TCR β鏈、TCR ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、BAFF-R、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、及CD154。在一些實施例中，跨膜域包含選自由下列所組成之群組之一或多種蛋白質之（多個）跨膜區：KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1 (CD11a, CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244, 2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、SLAMF6 (NTB-A, Ly108)、SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D、及NKG2C。
胞外5T4結合域（例如5T4結合scFv域）域可藉由鉸鏈區連接至跨膜域。可採用各種鉸鏈，包括但不限於人類Ig（免疫球蛋白）鉸鏈（例如IgG4鉸鏈、IgD鉸鏈）、Gly-Ser連接子、(G 4S) 4連接子(SEQ ID NO:111)、KIR2DS2鉸鏈、及CD8α鉸鏈。
本揭露之CAR之胞內信號傳導域負責活化其中已放置CAR的免疫細胞之至少一種特定功能（例如T細胞之細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞介素之分泌）。因此，如本文中所使用，用語「胞內信號傳導域(intracellular signaling domain)」係指蛋白質之部分，其轉導效應功能信號且引導細胞以執行特定功能。雖然通常可採用整個胞內信號傳導域，但在許多情況下，不必使用整條鏈。在使用胞內信號傳導域之截短部分的情況下，只要其轉導效應功能信號，則可使用此類截短部分代替完整的鏈。因此，用語胞內信號傳導域意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域之任何截短部分。
CAR之胞內信號傳導域包含初級信號傳導域（亦即衍生自刺激分子之功能細胞質信號傳導域）及一或多個共刺激信號傳導域（亦即衍生自至少一種共刺激分子之功能細胞質信號傳導域）。
如本文中所使用，用語「刺激分子(stimulatory molecule)」係指一種由免疫細胞（例如T細胞、NK細胞、或B細胞）表現之分子，其提供（多種）細胞質信號傳導序列，該（等）細胞質信號傳導序列至少在免疫細胞信號傳導路徑之一些方面以刺激方式調控免疫細胞之活化。在一個實施例中，信號係初級信號，其係由例如TCR/CD3複合物與MHC分子（載有肽）之結合起始，且其導致T細胞反應之介導，包括但不限於增殖、活化、分化、及類似者。
以刺激方式作用之初級信號傳導域可含有稱為基於免疫受體酪胺酸之活化模體或ITAM之信號傳導模體。含有在本揭露中具有特定用途之細胞質信號傳導序列的ITAM之實例包括衍生自下列者：CD3ζ、共同FcRγ (FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ (FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、及DAP12。在一個實施例中，本揭露之任何一或多個CAR中之初級信號傳導域包含衍生自CD3ζ之細胞質信號傳導序列。
在一些實施例中，初級信號傳導域係下列之功能細胞質信號傳導域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、4-1BB、及/或CD3-ζ。在一實施例中，胞內信號傳導域包含下列之功能細胞質信號傳導域：CD3ζ、共同FcRγ (FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ (FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、及/或DAP12。在一具體實施例中，初級信號傳導域係與T細胞受體複合物締合的ζ鏈之功能細胞質信號傳導域。
如本文中所使用，用語「共刺激分子(costimulatory molecule)」係指與共刺激配體特異性結合之T細胞上之同源結合夥伴，藉以介導T細胞之共刺激反應，諸如但不限於增殖。共刺激分子係抗原受體或其配體以外的細胞表面分子，其係淋巴球對抗原之有效反應所需。此類分子之實例包括CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相關抗原1 (LFA-1, CD11a/CD18)、CD2、CD7、CD258 (LIGHT)、NKG2C、B7-H3、及與CD83特異性結合之配體、及類似者。此類共刺激分子之進一步實例包括CD5、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM (LIGHTR)、SLAMF7、NKp80 (KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1 (CD226)、SLAMF4 (CD244, 2B4)、CD84、CD96 (Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9 (CD229)、CD160 (BY55)、PSGL1、CD100 (SEMA4D)、CD69、SLAMF6 (NTB-A, Ly108)、SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3)、BLAME (SLAMF8)、SELPLG (CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、及與CD83特異性結合之配體。在一些實施例中，CAR之共刺激信號傳導域係本文所述之共刺激分子之功能細胞質信號傳導域，共刺激分子例如OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS、及4-1BB (CD137)、或其任何組合。
如本文中所使用，用語「信號傳導域(signaling domain)」係指蛋白質之功能部分，其藉由在細胞內傳輸資訊而作用，以經由藉由以下定義之信號傳導路徑調控細胞活性：產生第二傳訊者或藉由回應於此類傳訊者作為效應物作用。
本揭露之CAR之細胞質信號傳導部分內之細胞質信號傳導序列可以隨機或指定順序彼此連接。可選地，短的寡肽或多肽連接子（例如長度在2與10個胺基酸之間）可形成鍵聯。
本揭露之另一態樣提供核酸，其編碼本文所揭示之5T4靶向CAR。藉由將核酸引入細胞中，核酸可用於在效應細胞（例如T細胞）中表現CAR。
序列中可進行修飾，以建立本揭露之等效或改良變體，其例如藉由根據密碼子簡併(degeneracy)表改變一或多個密碼子。DNA密碼子簡併表係提供於 表 4中。
表 4.胺基酸密碼子
胺基酸 單字母代碼 三字母代碼 密碼子
丙胺酸 A Ala GCA GCC GCG GCU
半胱胺酸 C Cys UGC UGU
天冬胺酸 D Asp GAC GAU
麩胺酸 E Glu GAA GAG
苯丙胺酸 F Phe UUC UUU
甘胺酸 G Gly GGA GGC GGG GGU
組胺酸 H His CAC CAU
異白胺酸 I Iso AUA AUC AUU
離胺酸 K Lys AAA AAG
白胺酸 L Leu UUA UUG CUA CUC CUG CUU
甲硫胺酸 M Met AUG
天冬醯胺酸 N Asn AAC AAU
脯胺酸 P Pro CCA CCC CCG CCU
麩醯胺酸 Q Gln CAA CAG
精胺酸 R Arg AGA AGG CGA CGC CGG CGU
絲胺酸 S Ser AGC AGU UCA UCC UCG UCU
蘇胺酸 T Thr ACA ACC ACG ACU
纈胺酸 V Val GUA GUC GUG GUU
色胺酸 W Trp UGG
酪胺酸 Y Tyr UAC UAU
在某些實施例中，核酸係DNA分子（例如cDNA分子）。在某些實施例中，核酸進一步包含表現控制序列（例如啟動子及/或增強子），其可操作地連接至CAR編碼序列。在某些實施例中，本揭露提供一種載體，其包含該核酸。載體可係病毒載體（例如AAV載體、慢病毒載體、或腺病毒載體）或非病毒載體（例如質體）。
在某些實施例中，核酸係RNA分子（例如mRNA分子）。用於產生用於轉染之mRNA的方法可涉及用特別設計之引子在體外進行模板之轉錄，接著進行polyA添加，以產生RNA構築體，該RNA構築體含有3’及5’未轉譯序列、5’帽及/或內部核糖體進入位點(IRES)、待表現之核酸、及polyA尾（長度一般為50至2000個鹼基）。可將RNA分子進一步修飾以增加轉譯效率及/或穩定性，例如如揭示於美國專利第8,278,036號；第8,883,506號、及第8,716,465號。如此產生之RNA分子可有效轉染不同種類的細胞。
在一個實施例中，核酸編碼在CAR之胺基端包含信號肽之胺基酸序列。此類信號肽當在效應細胞中表現時可促進CAR的細胞表面定位，且在細胞處理期間自CAR切割出來。在一個實施例中，核酸編碼在胞外5T4結合域（例如5T4結合scFv域）之N端包含信號肽之胺基酸序列。
可使用數種不同方法中之任一者，將RNA或DNA引入目標細胞中，該等方法例如市售方法，其包括但不限於電穿孔、陽離子微脂體介導之轉染（使用脂質轉染(lipofection)）、聚合物包封、肽介導之轉染、或生物彈道(biolistic)粒子遞送系統（諸如「基因槍」）（參見例如Nishikawa, et al.Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001)）。
本揭露之另一態樣提供一種免疫效應細胞，其表現5T4靶向CAR。亦提供一種免疫效應細胞，其包含編碼5T4靶向CAR之核酸。免疫效應細胞包含但不限於T細胞及NK細胞。在某些實施例中，T細胞係選自CD8 +T細胞、CD4 +T細胞、及NKT細胞。T細胞或NK細胞可係初代細胞或細胞系。
免疫效應細胞可藉由所屬技術領域中已知的方法獲自數種來源，包括周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、及腫瘤。免疫效應細胞亦可在體外分化自多能(pluripotent)或多潛能(multipotent)細胞（例如造血幹細胞）。在一些實施例中，本揭露提供一種多能或多潛能細胞（例如造血幹細胞），其表現5T4靶向CAR（例如在質膜上表現CAR）或包含本文所揭示之核酸。
在某些實施例中，將免疫效應細胞單離及/或純化。例如，可使用CD25結合配體將調節T細胞自T細胞群移除。可藉由類似方法，移除表現檢查點蛋白（例如PD-1、LAG-3、或TIM-3）之效應細胞。在某些實施例中，藉由正向選擇步驟單離效應細胞。例如，可藉由與抗CD3/抗CD28接合珠培養，單離T細胞群。其他細胞表面標記（諸如IFN-7、TNF-α、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-13、顆粒酶B、及穿孔素）亦可用於正向選擇。
通常可使用所屬技術領域中已知的方法，將免疫效應細胞活化及擴增，該等方法係例如描述於美國專利第6,352,694號；第6,534,055號；第6,905,680號；第6,692,964號；第5,858,358號；第6,887,466號；第6,905,681號；第7,144,575號；第7,067,318號；第7,172,869號；第7,232,566號；第7,175,843號；第5,883,223號；第6,905,874號；第6,797,514號；第6,867,041號；及美國專利申請公開案第2006/0121005號及第2016/0340406號。例如，在某些實施例中，T細胞可在適用於刺激T細胞增殖的條件下，藉由與抗CD3抗體及抗CD28抗體接觸而擴增及/或活化。可將細胞在培養物中擴增數小時（例如約2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、18、21小時）至約14天（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14天）之期間。在一個實施例中，將細胞擴增4至9天之期間。多個刺激週期可係長期細胞培養（例如，培養60天或更長之期間）所欲的。在某些實施例中，細胞培養物包含血清（例如胎牛或人類血清）、介白素2(IL-2)、胰島素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ、TNF-α、或其組合。細胞培養物中亦可包括具有通常知識者已知的用於細胞生長之其他添加劑，例如界面活性劑、Plasmanate、及還原劑（諸如N-乙醯基-半胱胺酸及2-巰基乙醇）。在某些實施例中，本揭露之免疫效應細胞係獲自體外擴增之細胞。
5T4靶向CAR（例如可調控CAR）、編碼CAR之核酸、及表現CAR或包含核酸之效應細胞之進一步例示性方法及應用係提供於美國專利第7,446,190號及第9,181,527號、美國專利申請公開案第2016/0340406號及第2017/0049819號、及國際專利申請公開案第WO2018/140725號中。 5T4/CD3 導向雙特異性 T 細胞銜接器
在某些實施例中，本揭露提供一種5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器，其包含本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器包含與選自SEQ ID NO:13或14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器包含SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96之胺基酸序列。在某些實施例中，細胞介素係直接或經由連接子連接至Fc域。
在某些實施例中，5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器進一步包含結合CD3之抗原結合位點。結合CD3之例示性抗原結合位點係揭示於國際專利申請公開案第WO2014/051433號及第WO2017/097723號中。
本揭露之另一態樣提供一種核酸，其編碼5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器之至少一種多肽，其中多肽包含結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽在表現時係在5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器之多肽中之一或多者之N端。亦提供一種載體（例如病毒載體），其包含核酸、包含核酸或載體之生產細胞(producer cell)、及表現5T4/CD3導向雙特異性T細胞銜接器之生產細胞。 免疫細胞介素
在某些實施例中，本揭露提供一種免疫細胞介素，其包含本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點及細胞介素。可使用所屬技術領域中已知的任何細胞介素（例如促炎性細胞介素），包括但不限於IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF、IFNα、IFNγ、及GM-CSF。其他例示性細胞介素係揭示於美國專利第9,567,399號中。在某些實施例中，抗原結合位點係藉由化學接合（例如共價或非共價化學接合）連接至細胞介素。在某些實施例中，抗原結合位點係藉由各多肽之融合連接至細胞介素。免疫細胞介素可進一步包含Fc域，該Fc域係連接至結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，免疫細胞介素包含與選自SEQ ID NO: 13或14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，免疫細胞介素包含SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96之胺基酸序列。在某些實施例中，細胞介素係直接或經由連接子連接至Fc域。
本揭露之另一態樣提供一種核酸，其編碼免疫細胞介素之至少一種多肽，其中多肽包含結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽在表現時係在免疫細胞介素之多肽中之一或多者之N端。亦提供一種載體（例如病毒載體），其包含核酸、包含核酸或載體之生產細胞、及表現免疫細胞介素之生產細胞。 抗體藥物接合物
在某些實施例中，本揭露提供一種抗體藥物接合物，其包含本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點及細胞毒性藥物部份。例示性細胞毒性藥物部份係揭示於國際專利申請公開案第WO2014/160160號及第WO2015/143382號中。在某些實施例中，細胞毒性藥物部份係選自奧瑞他汀(auristatin)、N-乙醯基-γ卡奇黴素(N-acetyl-γ calicheamicin)、類美登素(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)、及SN-38。抗原結合位點可藉由化學接合（例如共價或非共價化學接合）連接至細胞毒性藥物部份。在某些實施例中，抗體藥物接合物進一步包含Fc域，該Fc域係連接至結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，抗體藥物接合物包含與選自SEQ ID NO: 13或14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體藥物接合物包含SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96之胺基酸序列。在某些實施例中，細胞毒性藥物部份係直接或經由連接子連接至Fc域。 免疫毒素
在某些實施例中，本揭露提供一種免疫毒素，其包含本文所揭示之結合5T4之抗原結合位點及細胞毒性肽部份。可使用所屬技術領域中已知的任何細胞毒性肽部份，包括但不限於蓖麻毒素(ricin)、白喉( Diphtheria)毒素、及假單胞菌( Pseudomonas)外毒素A。更多例示性細胞毒性肽係揭示於國際專利申請公開案第WO2012/154530號及第WO2014/164680號中。在某些實施例中，細胞毒性肽部份係藉由化學接合（例如共價或非共價化學接合）連接至蛋白質。在某些實施例中，細胞毒性肽部份係藉由多肽之融合連接至蛋白質。免疫毒性可進一步包含Fc域，該Fc域係連接至結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，免疫毒素包含與選自SEQ ID NO: 13或14之胺基酸序列至少90%（例如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%）同一的胺基酸序列。在某些實施例中，免疫毒素包含SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96之胺基酸序列。在某些實施例中，細胞毒性肽部份係直接或經由連接子連接至Fc域。
本揭露之另一態樣提供一種核酸，其編碼免疫毒素之至少一種多肽，其中多肽包含結合5T4之抗原結合位點。在某些實施例中，核酸進一步包含編碼信號肽之核苷酸序列，該信號肽在表現時係在免疫毒素之多肽中之一或多者之N端。亦提供一種載體（例如病毒載體），其包含核酸、包含核酸或載體之生產細胞、及表現免疫毒素之生產細胞。 II. 治療組成物及其用途
本揭露提供用於治療癌症之方法，其使用包含本文所揭示之抗原結合位點及/或本文所揭示之醫藥組成物的蛋白質、接合物、或細胞。此類方法包括向有需要之對象投予有效量的本文所述之抗原結合位點或蛋白質中之任一者，其包括向有需要之對象投予呈下列形式之抗原結合位點或蛋白質：有效量的本文所述之抗原結合位點或蛋白質、或其醫藥組成物、配方、或劑量。可使用所屬技術領域中熟知的用於投予抗體或抗體片段之任何途徑，向對象投予抗原結合位點或蛋白質。該等方法可用以治療表現5T4之各種癌症，其藉由向有需要之患者投予治療有效量的蛋白質、接合物、或細胞，其包含本文所揭示之抗原結合位點。本申請案之方法可改善各種臨床終點。例如，在一些實施例中，該方法增加對象之整體存活期（相對於未接受治療之個體）。在一些實施例中，該方法增加對象之無進展存活期（相對於未接受治療之個體）。在一些實施例中，該方法增加對象之整體存活期及無進展存活期（相對於未接受治療之個體）。
本申請案之治療方法可根據待治療之癌症表徵。待治療之癌症可根據癌細胞表面上所表現之特定抗原（例如5T4）的存在表徵。因此，在一些實施例中，5T4係由癌細胞表現。在一些實施例中，5T4係由癌相關纖維母細胞表現。在一些實施例中，相對於正常細胞，5T4係以高水平表現。在一些實施例中，相對於正常細胞，5T4係以低水平表現。
由5T4表現表徵之癌症例如包括但不限於結腸直腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、肺（例如非小細胞肺癌）、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、乳癌（例如激素受體陽性(HR+)乳癌）、子宮癌、子宮內膜癌、鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、子宮癌、胰臟癌、間皮瘤、食道癌、及胃癌。參見例如Stern, et al., Cancer Immunol Immunother(2017) 66:415–426。
設想的是，本揭露所述之蛋白質、接合物、細胞、及/或醫藥組成物可用以治療各種癌症，不限於其中癌細胞或癌症微環境中之細胞表現5T4之癌症。亦設想的是，用本揭露所述之蛋白質、接合物、細胞、及/或醫藥組成物治療之對象先前已經接受治療，包括用於癌症之化學療法。因此，在一些實施例中，藉由本揭露所述之蛋白質、接合物、細胞、及/或醫藥組成物治療之對象對化學療法呈難治性。
在某些實施例中，癌症係實體腫瘤。在一些實施例中，癌症係轉移性癌症。在某些其他實施例中，癌症係腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、白血病、肺癌、肝癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、腎癌、胃癌、睪丸癌、或子宮癌。在又其他實施例中，癌症係血管化腫瘤(vascularized tumor)、鱗狀細胞癌、腺癌、小細胞癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤（例如血管肉瘤或軟骨肉瘤）、喉癌、腮腺癌、膽道癌(biliary tract cancer)、甲狀腺癌、肢端小痣性黑色素瘤、光化性角化症(actinic keratoses)、急性淋巴球白血病、急性骨髓性白血病、腺樣囊狀癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鱗狀癌、肛管癌、肛門癌、肛門直腸癌、星形細胞瘤、巴氏腺癌(Bartholin gland carcinoma)、基底細胞癌、膽癌(biliary cancer)、骨癌、骨髓癌、支氣管癌、支氣管腺癌、類癌、膽管癌(cholangiocarcinoma)、軟骨肉瘤、脈絡叢乳頭狀瘤/癌、慢性淋巴球白血病、慢性骨髓性白血病、透明細胞癌、結締組織癌、囊腺瘤、消化系統癌、十二指腸癌、內分泌系統癌、內胚竇瘤、子宮內膜增生、子宮內膜基質肉瘤、類子宮內膜腺癌、內皮細胞癌、室管膜癌、上皮細胞癌、Ewing氏肉瘤、眼與眼窩癌(eye and orbit cancer)、女性生殖器官癌、局部結節性增生、膽囊癌、胃竇癌、胃底癌、胃泌素瘤(gastrinoma)、神經膠母細胞瘤、升糖素瘤、心臟癌、血管母細胞瘤、血管內皮瘤、血管瘤、肝腺瘤(hepatic adenoma)、肝腺瘤病(hepatic adenomatosis)、肝膽癌、肝細胞癌、霍奇金氏病(Hodgkin’s disease)、迴腸癌、胰島素瘤、上皮內贅瘤形成(intraepithelial neoplasia)、上皮內鱗狀細胞贅瘤形成(intraepithelial squamous cell neoplasia)、肝內膽管癌、侵襲性鱗狀細胞癌、空腸癌、關節癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、骨盆癌(pelvic cancer)、大細胞癌、大腸癌、平滑肌肉瘤、惡性雀斑樣黑色素瘤(lentigo maligna melanoma)、淋巴瘤、男性生殖器官癌、惡性黑色素瘤、惡性間皮腫瘤、髓母細胞瘤、髓上皮瘤(medulloepithelioma)、腦膜癌、間皮癌、轉移癌、口腔癌(mouth cancer)、黏液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma)、多發性骨髓瘤、肌肉癌、鼻道癌(nasal tract cancer)、神經系統癌、神經上皮腺癌、結節性黑色素瘤(nodular melanoma)、非上皮性皮膚癌、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、燕麥細胞癌(oat cell carcinoma)、寡樹突神經膠質細胞癌(oligodendroglial cancer)、口腔癌(oral cavity cancer)、骨肉瘤、乳突狀漿液性腺癌(papillary serous adenocarcinoma)、陰莖癌、咽癌、腦下垂體瘤、漿細胞瘤、假性肉瘤(pseudosarcoma)、肺母細胞瘤、直腸癌、腎細胞癌、呼吸系統癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、肉瘤、漿液性癌(serous carcinoma)、鼻竇癌(sinus cancer)、皮膚癌、小細胞癌、小腸癌、平滑肌癌、軟組織癌、體抑素分泌腫瘤(somatostatin-secreting tumor)、脊椎癌(spine cancer)、鱗狀細胞癌、橫紋肌癌、間皮下癌(submesothelial cancer)、表淺擴散性黑色素瘤、T細胞白血病、舌癌、未分化癌、輸尿管癌、尿道癌、膀胱癌、泌尿系統癌、子宮頸癌、子宮體癌(uterine corpus cancer)、葡萄膜黑色素瘤、陰道癌、疣狀癌、血管活性腸肽瘤(VIPoma)、外陰癌、高分化癌、或威爾姆氏瘤(Wilms tumor)。
在一些實施例中，癌症係選自由下列所組成之群組：結腸直腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、肺（例如非小細胞肺癌）、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、乳癌（例如激素受體陽性(HR+)乳癌）、子宮癌、子宮內膜癌、鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、子宮癌、胰臟癌、間皮瘤、食道癌、及胃癌。在某些實施例中，癌症係選自由下列所組成之群組：乳癌、子宮頸癌、肺（例如非小細胞肺癌）、腎癌、膀胱癌、頭頸鱗狀細胞癌、胰臟癌、及胃癌。
本揭露亦提供增強腫瘤細胞死亡之方法。此類方法包括使腫瘤細胞暴露於有效量的下列中之任一者：本文所述之抗原結合位點或蛋白質、本文所述之抗體藥物接合物、本文所述之免疫細胞介素、本文所述之雙特異性T細胞銜接器、本文所述之CAR、或本文所述之免疫效應細胞，其包括向有需要之對象投予有效量的下列中之任一者：本文所述之抗原結合位點或蛋白質、本文所述之抗體藥物接合物、本文所述之免疫細胞介素、本文所述之雙特異性T細胞銜接器、本文所述之CAR、或本文所述之免疫效應細胞。 III. 組合療法
本申請案之另一態樣提供組合療法。本文所述之蛋白質可與額外治療劑組合使用以治療癌症。
可用作治療癌症之組合療法之部分的例示性治療劑例如包括放射、絲裂黴素、維A酸(tretinoin)、利博莫司汀(ribomustin)、吉西他濱(gemcitabine)、長春新鹼(vincristine)、依託泊苷(etoposide)、克拉屈濱(cladribine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、胺甲喋呤(methotrexate)、阿黴素(doxorubicin)、卡波醌(carboquone)、噴司他丁(pentostatin)、二胺硝吖啶(nitracrine)、淨司他汀(zinostatin)、西曲瑞克(cetrorelix)、來曲唑(letrozole)、雷替曲塞(raltitrexed)、道諾黴素(daunorubicin)、法屈唑(fadrozole)、福莫司汀(fotemustine)、胸腺法新(thymalfasin)、索布佐生(sobuzoxane)、奈達鉑(nedaplatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、比卡魯胺(bicalutamide)、長春瑞濱(vinorelbine)、維司力農(vesnarinone)、胺魯米特(aminoglutethimide)、安吖啶(amsacrine)、丙谷胺(proglumide)、依利醋銨(elliptinium acetate)、酮色林(ketanserin)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、艾視網酸酯(etretinate)、異維A酸(isotretinoin)、鏈脲佐菌素(streptozocin)、尼莫司汀(nimustine)、長春地辛(vindesine)、氟他胺(flutamide)、佐吉能(drogenil)、甘胺硫嘌呤(butocin)、卡莫氟(carmofur)、雷佐生(razoxane)、西佐喃(sizofilan)、卡鉑(carboplatin)、二溴衛矛醇(mitolactol)、替加氟(tegafur)、異環磷醯胺(ifosfamide)、潑尼莫司汀(prednimustine)、畢西巴尼(picibanil)、左旋咪唑(levamisole)、替尼泊苷(teniposide)、英丙舒凡(improsulfan)、依諾他濱(enocitabine)、利速萊得(lisuride)、氫氧美蘇腦(oxymetholone)、他莫昔芬(tamoxifen)、助孕酮(progesterone)、美雄烷(mepitiostane)、環硫雄醇(epitiostanol)、福美司坦(formestane)、干擾素α、干擾素2α、干擾素β、干擾素γ (IFN-γ)、群落刺激因子-1、群落刺激因子-2、地尼白介素(denileukin diftitox)、介白素2、促黃體荷爾蒙釋放因子、及前述藥劑之變體（可展現與其同源受體的差別性結合、或血清半衰期增加或減少）。
可用作治療癌症之組合療法之部分的額外藥劑類別係免疫檢查點抑制劑。例示性免疫檢查點抑制劑包括抑制下列中之一或多者之藥劑：(i)細胞毒性T淋巴球相關抗原4 (CTLA4)、(ii)程式性細胞死亡蛋白1 (PD1)、(iii) PDL1、(iv) LAG3、(v) B7-H3、(vi) B7-H4、及(vii) TIM3。CTLA4抑制劑伊匹單抗(ipilimumab)已獲得美國食品藥物管理局核准(United States Food and Drug Administration)用於治療黑色素瘤。
可用作治療癌症之組合療法之部分的又其他藥劑係靶向非檢查點目標之單株抗體劑（例如賀癌平(herceptin)）及非細胞毒性劑（例如酪胺酸激酶抑制劑）。
又其他抗癌劑類別包括例如：(i)抑制劑，其係選自ALK抑制劑、ATR抑制劑、A2A拮抗劑、鹼基切除修復抑制劑、Bcr-Abl酪胺酸激酶抑制劑、布魯頓氏(Bruton)酪胺酸激酶抑制劑、CDC7抑制劑、CHK1抑制劑、週期蛋白依賴性激酶抑制劑、DNA-PK抑制劑、DNA-PK及mTOR兩者之抑制劑、DNMT1抑制劑、DNMT1抑制劑加上2-氯-去氧腺苷、HDAC抑制劑、刺蝟信號傳導路徑抑制劑、IDO抑制劑、JAK抑制劑、mTOR抑制劑、MEK抑制劑、MELK抑制劑、MTH1抑制劑、PARP抑制劑、磷酸肌醇3-激酶抑制劑、PARP1及DHODH兩者之抑制劑、蛋白酶體抑制劑、拓樸異構酶II抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、VEGFR抑制劑、及WEE1抑制劑；(ii) OX40、CD137、CD40、GITR、CD27、HVEM、TNFRSF25、或ICOS之促效劑；及(iii)細胞介素，其係選自IL-2、IL-12、IL-15、GM-CSF、G-CSF、及其變體。
在一些實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係與選自下列之一或多種治療劑共投予：PI3K抑制劑、FLT3R促效劑、PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、CD47抑制劑、Trop-2抑制劑、MCL1抑制劑、CCR8結合劑、HPK1拮抗劑、DGKα抑制劑、CISH抑制劑、PARP-7抑制劑、Cbl-b抑制劑、KRAS抑制劑（例如KRAS G12C或G12D抑制劑）、KRAS降解劑、β-連環蛋白降解劑、helios降解劑、CD73抑制劑、腺苷受體拮抗劑、TIGIT拮抗劑、TREM1結合劑、TREM2結合劑、CD137促效劑、GITR結合劑、OX40結合劑、及CAR-T細胞療法。
在一些實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係與選自下列之一或多種治療劑共投予：PI3Kδ抑制劑（例如依地利司(idealisib)）、FLT3L-Fc融合蛋白（例如GS-3583）、抗PD-1抗體（派姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、賽帕利單抗(zimberelimab)）、小分子PD-L1抑制劑（例如GS-4224）、抗PD-L1抗體（例如阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)）、CD47抑制劑（例如馬格羅單抗(magrolimab)）、Trop-2抑制劑（例如薩西土珠單抗戈維特坎(sacituzumab govitecan) (TRODELVY ™)）、小分子MCL1抑制劑（例如GS-9716）、小分子HPK1抑制劑（例如GS-6451）、HPK1降解劑（PROTAC；例如ARV-766）、小分子DGKα抑制劑、小分子CD73抑制劑（例如奎立克魯司他(quemliclustat) (AB680)）、抗CD73抗體（例如奧勒魯單抗(oleclumab)）、雙重A2a/A2b腺苷受體拮抗劑（例如艾魯美冷(etrumadenant) (AB928)）、抗TIGIT抗體（例如替瑞利尤單抗(tiragolumab)、維博利單抗(vibostolimab)、多伐那利單抗(domvanalimab)、AB308）、抗TREM1抗體（例如PY159）、抗TREM2抗體（例如PY314）、CD137促效劑（例如AGEN-2373）、GITR/OX40結合劑（例如AGEN-1223）、IL-2受體促效劑（例如GS-4528）、及CAR-T細胞療法（例如西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替沙津魯(tisagenlecleucel)）。
在一些實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係與選自下列之一或多種治療劑共投予：馬格羅單抗、薩西土珠單抗戈維特坎(TRODELVY ™)、GS-4528、依地利司、GS-3583、賽帕利單抗、GS-4224、GS-9716、GS-6451、奎立克魯司他(AB680)、艾魯美冷(AB928)、多伐那利單抗、AB308、PY159、PY314、AGEN-1223、AGEN-2373、西卡思羅、及布萊奧妥。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抑制CD47與SIRPα之間的結合之藥劑組合。在各種實施例中，抑制CD47與SIRPα之間的結合之藥劑係結合至下列之抗體或其抗原結合片段：CD47（又名IAP、MER6、OA3；NCBI基因ID：961；UniProt Q08722）。在各種實施例中，結合至CD47之抗體具有具效應功能之Fc。在各種實施例中，結合至CD47之抗體係IgG4或IgG1。使用的抗CD47抗體之實例包括但不限於：馬格羅單抗、利佐帕單抗(lemzoparlimab)、來那普利單抗(letaplimab)、利古法利單抗(ligufalimab) (AK117)、AO-176、IBI-322、ZL-1201、IMC-002、SRF-231、CC-90002（又名INBRX-103）、NI-1701（又名TG-1801）、STI-6643 (Vx-1004)、CNTO-7108、RCT-1938、RRx-001、DSP-107、VT-1021、及SGN-CD47M。
在各種實施例中，抑制CD47與SIRPα Cd47之間的結合之藥劑係結合至下列之抗體或其抗原結合片段：信號調節蛋白α (SIRPα)（NCBI基因ID：140885；UniProt P78324）。結合至SIRPα之說明性抗體包括但不限於：安祖斯托巴特(anzurstobart)（又名CC-95251）、GS-0189 (FSI-189)、ES-004、BI765063、及ADU1805。
在各種實施例中，抑制CD47與SIRPα CD47之間的結合之藥劑係SIRPα-Fc融合蛋白或「高親和力SIRPα試劑」，其包括SIRPα衍生之多肽及其類似物。使用的說明性SIRPα-Fc融合蛋白包括ALX-148（又名依沃帕西普(evorpacept)，描述於WO2013109752中）、TTI-621或TTI-622（描述於WO2014094122中）、SIRPa-F8、JY002-M2G1 (N297A)、JMT601 (CPO107)、SS002M91、SIRPα-lgG4-Fc-Fc、及hCD172a(SIRPa)-Fc-LIGHT。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之促效劑組合：fms相關受體酪胺酸激酶3 (FLT3)；FLK2; STK1; CD135; FLK-2; NCBI基因ID：2322）。FLT3促效劑之實例包括但不限於CDX-301及GS-3583。GS-3583係描述於例如WO 2020/263830中，其全文出於所有目的特此以引用方式併入本文中。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD19劑或抗體組合。可共投予的抗CD19劑或抗體之實例包括但不限於：蘭妥莫單抗(blinatumomab)、他法替他單抗(tafasitamab)、XmAb5574 (Xencor)、AFM-11、因厄比利珠單抗(inebilizumab)、隆卡妥昔單抗(loncastuximab)、MEDI 551 (Cellective Therapeutics)；及MDX-1342 (Medarex)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD20劑或抗體組合。可共投予的抗CD20劑或抗體之實例包括但不限於：IGN-002、PF-05280586；利妥昔單抗(Rituxan/Biogen Idec)、奧法木單抗(Arzerra/Genmab)、阿托珠單抗(Gazyva/Roche Glycart Biotech)、阿侖單抗、維托珠單抗、維托珠單抗、奧克珠單抗(Ocrevus/Biogen Idec; Genentech)、奧卡拉珠單抗及烏妥昔單抗、及LFB-R603 (LFB Biotech.; rEVO Biologics)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD22劑或抗體組合。可共投予的抗CD22劑或抗體之實例包括但不限於：依帕珠單抗(Epratuzumab)、AMG-412、及IMMU-103 (Immunomedics)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD30劑或抗體組合。可共投予的抗CD30劑或抗體之實例包括但不限於：本妥昔單抗維多汀(Brentuximab vedotin) (Seattle Genetics)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD33劑或抗體組合。可共投予的抗CD33劑或抗體之實例包括但不限於：吉妥珠單抗(gemtuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、伐達妥昔單抗(vadastuximab)、CIK-CAR.CD33；CD33CART、AMG-330 (CD33/CD3)、AMG-673 (CD33/CD3)、GEM-333 (CD3/CD33)、及IMGN-779。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD37劑或抗體組合。可共投予的抗CD37劑或抗體之實例包括但不限於：BI836826 (Boehringer Ingelheim)、奧特勒土珠單抗(Otlertuzumab)、及TRU-016 (Trubion Pharmaceuticals)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD38劑或抗體組合。可共投予的抗CD38劑或抗體之實例包括但不限於：CD38，諸如T-007、UCART-38；Darzalex (Genmab)、達雷木單抗、JNJ-54767414 (Darzalex/Genmab)、艾薩妥昔單抗(isatuximab)、SAR650984 (ImmunoGen)、MOR202、MOR03087 (MorphoSys)、TAK-079；及抗CD38阿騰金(attenukine)，諸如TAK573。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD52劑或抗體組合。可共投予的抗CD52劑或抗體之實例包括但不限於：抗CD52抗體，諸如阿侖單抗(Campath/University of Cambridge)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD98 (4F2, FRP-1)劑或抗體組合。可共投予的抗CD98劑或抗體之實例包括但不限於：IGN523 (Igenica)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD157 (BST-1)劑或抗體組合。可共投予的抗CD157劑或抗體之實例包括但不限於：OBT357及MEN1112 (Menarini; Oxford BioTherapeutics)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗DKK-1劑或抗體組合。可共投予的抗DKK-1劑或抗體之實例包括但不限於：BHQ880 (MorphoSys; Novartis)及DKN-01、LY-2812176 (Eli Lilly)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗GRP78 (BiP)劑或抗體組合。可共投予的抗GRP78劑或抗體之實例包括但不限於：PAT-SM6 (OncoMab GmbH)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗NOTCH1劑或抗體組合。可共投予的抗NOTCH1劑或抗體之實例包括但不限於：布隆妥珠單抗(Brontictuzumab)及OMP-52M51 (OncoMed Pharmaceuticals)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗ROR1劑或抗體組合。可共投予的抗ROR1劑或抗體之實例包括但不限於：馬帕木單抗(Mapatumumab)、TRM1、及HGS-1012 (Cambridge Antibody Technology)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗SLAMF7 (CS1, CD319)劑或抗體組合。可共投予的抗SLAMF7劑或抗體之實例包括但不限於：埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、HuLuc63、BMS-901608 (Empliciti/PDL BioPharma)、及莫格利珠單抗(Mogamulizumab) (KW-0761)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列組合：TNFRSF10A (DR4; APO2; CD261; TRAILR1; TRAILR-1)劑或抗體。可共投予的抗TNFRSF10A劑或抗體之實例包括但不限於：馬帕木單抗(Mapatumumab)、TRM1、及HGS-1012 (Cambridge Antibody Technology)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列組合：抗運鐵蛋白受體(TFRC; CD71)劑或抗體。可共投予的抗運鐵蛋白受體劑或抗體之實例包括但不限於：E2.3/A27.15 (University of Arizona)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗EPHA3劑或抗體組合。可共投予的抗EPHA3劑或抗體之實例包括但不限於：依法妥珠單抗(Ifabotuzumab)、及KB004 (Ludwig Institute for Cancer Research)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CCR4劑或抗體組合。可共投予的抗CCR4劑或抗體之實例包括但不限於：莫格利珠單抗(Mogamulizumab)、及KW-0761 (Poteligeo/Kyowa Hakko Kirin Co.)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CXCR4劑或抗體組合。可共投予的抗CXCR4劑或抗體之實例包括但不限於：尤洛庫單抗(Ulocuplumab)、BMS-936564、MDX-1338 (Medarex)、及PF-06747143 (Pfizer)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗BAFF劑或抗體組合。可共投予的抗BAFF劑或抗體之實例包括但不限於：塔巴魯單抗(Tabalumab)、及LY2127399 (Eli Lilly)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗BAFF受體(BAFF-R)劑或抗體組合。可共投予的抗BAFF-R劑或抗體之實例包括但不限於：VAY736 (MorphoSys; Novartis)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗RANKL劑或抗體組合。可共投予的抗RANKL劑或抗體之實例包括但不限於：地諾單抗(Denosumab)、及AMG-162 (Prolia; Ranmark; Xgeva/Amgen)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗IL-6劑或抗體組合。可共投予的抗IL-6劑或抗體之實例包括但不限於：司妥昔單抗(Siltuximab)、及CNTO-328 (Sylvant/Centocor)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗IL-6受體(IL-6R)劑或抗體組合。可共投予的抗IL-6R劑或抗體之實例包括但不限於：托珠單抗(Tocilizumab)、R-1569 (Actemra/Chugai Pharmaceutical; Osaka University)、及AS-101 (CB-06-02, IVX-Q-101)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗IL3RA (CD123)劑或抗體組合。可共投予的抗IL3RA (CD123)劑或抗體之實例包括但不限於：塔格索夫(tagraxofusp)、塔拉考單抗(talacotuzumab) (JNJ-56022473; CSL362 (CSL))、pivekimab sunirine (IMGN632)、MB-102 (Mustang Bio)、CSL360 (CSL)；維克妥單抗(XmAb14045; Xencor)；KHK2823 (Kyowa Hakko Kirin Co.)；MGD-024 (CD123/CD3; Macrogenics)、APVO436 (CD123/CD3)；弗圖珠單抗(CD123/CD3)；JNJ-63709178 (CD123/CD3)；及XmAb-14045 (CD123/CD3) (Xencor)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗IL2RA (CD25)劑或抗體組合。可共投予的抗IL2RA劑或抗體之實例包括但不限於：巴利昔單抗(Basiliximab)、SDZ-CHI-621 (Simulect/Novartis)、及達利珠單抗(Daclizumab)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗IGF-1R (CD221)劑或抗體組合。可共投予的抗IGF-1R劑或抗體之實例包括但不限於：加尼圖單抗(Ganitumab)、AMG-479 (Amgen)；Ganitumab、AMG-479 (Amgen)、達洛圖單抗(Dalotuzumab)、MK-0646 (Pierre Fabre)、及AVE1642 (ImmunoGen)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗GM-CSF (CSF2)劑或抗體組合。可共投予的抗GM-CSF劑或抗體之實例包括但不限於：朗齊魯單抗(Lenzilumab)（又名KB003；KaloBios Pharmaceuticals）。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗HGF劑或抗體組合。可共投予的抗HGF劑或抗體之實例包括但不限於：費拉妥珠單抗(Ficlatuzumab)、AV-299 (AVEO Pharmaceuticals)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD44劑或抗體組合。可共投予的抗CD44劑或抗體之實例包括但不限於：RG7356、RO5429083 (Chugai Biopharmaceuticals; Roche)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗VLA-4 (CD49d)劑或抗體組合。可共投予的抗VLA-4劑或抗體之實例包括但不限於：那他珠單抗(Natalizumab)、及BG-0002-E (Tysabri/Elan Corporation)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗ICAM-1 (CD54)劑或抗體組合。可共投予的抗ICAM-1劑或抗體之實例包括但不限於：BI-505 (BioInvent International)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗VEGF-A劑或抗體組合。可共投予的抗VEGF-A劑或抗體之實例包括但不限於：貝伐單抗(Bevacizumab) (Avastin/Genentech; Hackensack University Medical Center)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗內皮唾液酸蛋白(Endosialin) (CD248, TEM1)劑或抗體組合。可共投予的抗內皮唾液酸蛋白劑或抗體之實例包括但不限於：翁特珠單抗(Ontecizumab)、及MORAB-004 (Ludwig Institute for Cancer Research; Morphotek)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗CD79劑或抗體組合。可共投予的抗CD79劑或抗體之實例包括但不限於：保納珠單抗(polatuzumab)、DCDS4501A、及RG7596 (Genentech)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與抗異檸檬酸去氫酶(IDH)劑或抗體組合。可共投予的抗IDH劑或抗體之實例包括但不限於：IDH1抑制劑艾伏尼布(ivosidenib) (Tibsovo; Agios)及IDH2抑制劑艾那尼布(Idhifa; Celgene/Agios)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與靶向下列之抗體組合：腫瘤相關鈣信號轉導子2 (TACSTD2)（NCBI基因ID：4070；EGP-1、EGP1、GA733-1、GA7331、GP50、M1S1、TROP2），抗體諸如薩西土珠單抗(sacituzumab)，例如薩西土珠單抗戈維特坎(sacituzumab govitecan) (TRODELVY ™)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列組合：抗主要組織相容性複合體I類G（HLA-G；NCBI基因ID：3135）抗體，諸如TTX-080。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列組合：抗白血球免疫球蛋白樣受體B2（LILRB2，又名CD85D、ILT4；NCBI基因ID：10288）抗體，諸如JTX-8064或MK-4830。 TNF受體超家族(TNFRSF)成員促效劑或活化劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與一或多個TNF受體超家族(TNFRSF)成員之促效劑組合，例如下列中之一或多者之促效劑：TNFRSF1A（NCBI基因ID：7132）、TNFRSF1B（NCBI基因ID：7133）、TNFRSF4（OX40、CD134；NCBI基因ID：7293）、TNFRSF5（CD40；NCBI基因ID：958）、TNFRSF6（FAS、NCBI基因ID：355）、TNFRSF7（CD27、NCBI基因ID：939）、TNFRSF8（CD30、NCBI基因ID：943）、TNFRSF9（4-1BB、CD137、NCBI基因ID：3604）、TNFRSF10A（CD261、DR4、TRAILR1、NCBI基因ID：8797）、TNFRSF10B（CD262、DR5、TRAILR2、NCBI基因ID：8795）、TNFRSF10C（CD263、TRAILR3、NCBI基因ID：8794）、TNFRSF10D（CD264、TRAILR4、NCBI基因ID：8793）、TNFRSF11A（CD265、RANK、NCBI基因ID：8792）、TNFRSF11B（NCBI基因ID：4982）、TNFRSF12A（CD266、NCBI基因ID：51330）、TNFRSF13B（CD267、NCBI基因ID：23495）、TNFRSF13C（CD268、NCBI基因ID：115650）、TNFRSF16（NGFR、CD271、NCBI基因ID：4804）、TNFRSF17（BCMA、CD269、NCBI基因ID：608）、TNFRSF18（GITR、CD357、NCBI基因ID：8784）、TNFRSF19（NCBI基因ID：55504）、TNFRSF21（CD358、DR6、NCBI基因ID：27242）、及TNFRSF25（DR3、NCBI基因ID：8718）。
可共投予的抗TNFRSF4 (OX40)抗體之實例包括但不限於MEDI6469、MEDI6383、MEDI0562（塔伏利西單抗）、MOXR0916、PF-04518600、RG-7888、GSK-3174998、INCAGN1949、BMS-986178、GBR-8383、ABBV-368，以及WO2016179517、WO2017096179、WO2017096182、WO2017096281、及WO2018089628中所述者，上述各文獻之全文特此以引用方式併入。
可共投予的例示性抗TNF受體超家族成員10b (TNFRSF10B, DR5, TRAILR2)抗體包括但不限於：DS-8273、CTB-006、INBRX-109、及GEN-1029。
可共投予的抗TNFRSF5 (CD40)抗體之實例包括但不限於：塞魯單抗(selicrelumab) (RO7009789)、米佐利單抗(mitazalimab)（又名瓦那利單抗(vanalimab)、ADC-1013、JNJ-64457107）、RG7876、SEA-CD40、APX-005M及ABBV-428、ABBV-927、及JNJ-64457107。
可共投予的抗TNFRSF7 (CD27)之實例包括但不限於：瓦里木單抗(varlilumab) (CDX-1127)。
可共投予的抗TNFRSF9 (4-1BB, CD137)抗體之實例包括但不限於：烏瑞魯單抗(urelumab)、烏圖木單抗(utomilumab) (PF-05082566)、AGEN2373、ADG-106、BT-7480、及QL1806。
可共投予的抗TNFRSF17 (BCMA)之實例包括但不限於：GSK-2857916.
可共投予的抗TNFRSF18 (GITR)抗體之實例包括但不限於：MEDI1873、FPA-154、INCAGN-1876、TRX-518、BMS-986156、MK-1248、GWN-323、及WO2017096179、WO2017096276、WO2017096189、及WO2018089628中所述者。在一些實施例中，共靶向TNFRSF4 (OX40)及TNFRSF18 (GITR)之抗體或其片段經共投予。此類抗體係描述例如於WO2017096179及WO2018089628中，其等各者之全文特此以引用方式併入。
可共投予的抗TRAILR1、抗TRAILR2、抗TRAILR3、抗TRAILR4抗體之實例包括但不限於：ABBV-621.
可共投予的靶向TNFRSF家族成員之雙特異性抗體之實例包括但不限於：PRS-343 (CD-137/HER2)、AFM26 (BCMA/CD16A)、AFM-13 (CD16/CD30)、REGN-1979 (CD20/CD3)、AMG-420 (BCMA/CD3)、INHIBRX-105 (4-1BB/PDL1)、FAP-4-IBBL (4-1BB/FAP)、XmAb-13676 (CD3/CD20)、RG-7828 (CD20/CD3)、CC-93269 (CD3/BCMA)、REGN-5458 (CD3/BCMA)、及IMM-0306 (CD47/CD20)、及AMG-424 (CD38.CD3)。
可共投予的含PVR相關免疫球蛋白域(PVRIG, CD112R)之抑制劑之實例包括但不限於：COM-701。
可共投予的具有Ig及ITIM域之T細胞免疫受體（TIGIT；NCBI基因ID：201633）之抑制劑之實例包括但不限於：BMS-986207、RG-6058、AGEN-1307、及COM-902、厄提吉利單抗(etigilimab)、替瑞利尤單抗(tiragolumab)（又名MTIG-7192A；RG-6058; RO 7092284）、AGEN1777、IBI-939、AB154、MG1131、及EOS884448 (EOS-448)。
可共投予的A型肝炎病毒細胞受體2 (HAVCR2, TIMD3, TIM-3)之抑制劑之實例包括但不限於：考伯利單抗(cobolimab) (TSR-022)、LY-3321367、薩巴托利單抗(sabatolimab) (MBG-453)、INCAGN-2390、RO-7121661 (PD-1/TIM-3)、LY-3415244 (TIM-3/PDL1)、及RG7769 (PD-1/TIM-3)。
可共投予的淋巴球活化3 (LAG-3, CD223)之抑制劑之實例包括但不限於：瑞拉單抗(relatlimab) (ONO-4482)、LAG-525、MK-4280、REGN-3767、INCAGN2385、TSR-033、MGD-013 (PD-1/LAG-3)、及FS-118 (LAG-3/PD-L1)。
可共投予的抗V-set免疫調節受體(VSIR, B7H5, VISTA)抗體之實例包括但不限於：HMBD-002、及CA-170 (PD-L1/VISTA)。
可共投予的抗CD70抗體之實例包括但不限於：AMG-172。
可共投予的抗ICOS抗體之實例包括但不限於：JTX-2011、及GSK3359609。
可共投予的ICOS促效劑之實例包括但不限於：ICOS-L.COMP (Gariepy, et al. 106th Annu Meet Am Assoc Immunologists (AAI) (May 9-13, San Diego) 2019, Abst 71.5)。 免疫檢查點抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與一或多種免疫檢查點抑制劑組合。在一些實施例中，一或多種免疫檢查點抑制劑係PD-L1 (CD274)、PD-1 (PDCD1)、或CTLA4之蛋白質（例如抗體或其片段、或抗體擬似物）抑制劑。在一些實施例中，一或多種免疫檢查點抑制劑包含PD-L1 (CD274)、PD-1 (PDCD1)、或CTLA4之小型有機分子抑制劑。
可共投予的CTLA4之抑制劑之實例包括但不限於：伊匹單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、BPI-002、HBM-4003、以及多特異性抑制劑FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308 (PD 1/CTLA4)、MGD-019 (PD-1/CTLA4)、KN-046 (PD-1/CTLA4)、MEDI-5752 (CTLA4/PD-1)、XmAb-20717 (PD-1/CTLA4)、及AK-104 (CTLA4/PD-1)。
可共投予的PD-L1 (CD274)或PD-1 (PDCD1)之抑制劑/抗體之實例包括但不限於：賽帕利單抗(zimberelimab)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA ®, MK-3477)、納武單抗(nivolumab) (OPDIVO ®, BMS-936558, MDX-1106)、西米普利單抗(cemiplimab)、皮地利珠單抗(pidilizumab)、斯巴達珠單抗(spartalizumab) (PDR-001)、阿特珠單抗(atezolizumab) (RG 7446; TECENTRIQ, MPDL3280A)、德瓦魯單抗(durvalumab) (MEDI-4736)、阿維魯單抗(avelumab) (MSB0010718C)、替雷利珠單抗(tislelizumab) (BGB-A317)、特瑞普利珠單抗(toripalimab) (JS-001)、傑諾珠單抗(genolimzumab) (CBT-501)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab) (SHR-1210)、多斯利單抗(dostarlimab) (TSR-042)、信迪利單抗(sintilimab) (IBI-308)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、西米普利單抗(REGN-2810)、拉立珠單抗(lambrolizumab)（CAS登記號1374853-91-4）、AMG-404、AMP-224、MEDI0680 (AMP-514)、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、GEN-1046 (PD-L1/4-1BB)、GLS-010 (WBP-3055)、AK-103 (HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JNJ-63723283、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306、CX-072、CBT-502、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001 (WBP-3155)、KN-035、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015 (IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、GS-4224、GS-4416、INCB086550、MAX10181、以及多特異性抑制劑FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308 (PD-1/CTLA4)、MGD-013 (PD-1/LAG-3)、RO-7247669 (PD-1/LAG-3)、FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA4)、KN-046 (PD-1/CTLA4)、MEDI-5752 (CTLA4/PD-1)、RO-7121661 (PD-1/TIM-3)、XmAb-20717 (PD-1/CTLA4)、AK-104 (CTLA4/PD-1)、M7824（PD-L1/TGFβ-EC域）、CA-170 (PD-L1/VISTA)、CDX-527 (CD27/PD-L1)、LY-3415244 (TIM-3/PDL1)、RG7769 (PD-1/TIM-3)及INBRX-105 (4-1BB/PDL1)、GNS-1480 (PD-L1/EGFR)、SCH-900475、PF-06801591、AGEN-2034、AK-105、PD1-PIK、BAT-1306、BMS-936559、CK-301、MEDI-0680、PDR001 + Tafinlar ®+ Mekinist ®、及描述於下列中者：國際專利公開案第WO2018195321號、第WO2020014643號、第WO2019160882號、及第WO2018195321號。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係與下列之抑制劑組合：MCL1細胞凋亡調節劑（BCL2家族成員）（MCL1、TM；EAT；MCL1L; MCL1S; Mcl-1；BCL2L3; MCL1-ES; bcl2-L-3；mcl1/EAT；NCBI基因ID：4170）。MCL1抑制劑之實例包括AMG-176、AMG-397、S-64315、及AZD-5991、483-LM、A-1210477、UMI-77、JKY-5-037、及WO2018183418、WO2016033486、及WO2017147410中所述者。 類鐸受體(TLR)促效劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域、或抗SIRPα劑係與類鐸受體(TLR)之促效劑組合，例如TLR1（NCBI基因ID：7096）、TLR2（NCBI基因ID：7097）、TLR3（NCBI基因ID：7098）、TLR4（NCBI基因ID：7099）、TLR5（NCBI基因ID：7100）、TLR6（NCBI基因ID：10333）、TLR7（NCBI基因ID：51284）、TLR8（NCBI基因ID：51311）、TLR9（NCBI基因ID：54106）、及/或TLR10（NCBI基因ID：81793）之促效劑。可共投予的TLR7促效劑之實例包括但不限於：DS-0509、GS-9620、LHC-165、TMX-101（咪喹莫特）、GSK-2245035、雷西莫特(resiquimod)、DSR-6434、DSP-3025、IMO-4200、MCT-465、MEDI-9197、3M-051、SB-9922、3M-052、林托普(Limtop)、TMX-30X、TMX-202、RG-7863、RG-7795、及下列中所揭示之化合物：US20100143301 (Gilead Sciences)、US20110098248 (Gilead Sciences)、及US20090047249 (Gilead Sciences)、US20140045849 (Janssen)、US20140073642 (Janssen)、WO2014/056953 (Janssen)、WO2014/076221 (Janssen)、WO2014/128189 (Janssen)、US20140350031 (Janssen)、WO2014/023813 (Janssen)、US20080234251 (Array Biopharma)、US20080306050 (Array Biopharma)、US20100029585 (Ventirx Pharma)、US20110092485 (Ventirx Pharma)、US20110118235 (Ventirx Pharma)、US20120082658 (Ventirx Pharma)、US20120219615 (Ventirx Pharma)、US20140066432 (Ventirx Pharma)、US20140088085 (Ventirx Pharma)、US20140275167 (Novira Therapeutics)、及US20130251673 (Novira Therapeutics)。可共投予的TLR7/TLR8促效劑係NKTR-262。可共投予的TLR8促效劑之實例包括但不限於：E-6887、IMO-4200、IMO-8400、IMO-9200、MCT-465、MEDI-9197、莫托莫德(motolimod)、雷西莫特、GS-9688、VTX-1463、VTX-763、3M-051、3M-052、及下列中所揭示之化合物：US20140045849 (Janssen)、US20140073642 (Janssen)、WO2014/056953 (Janssen)、WO2014/076221 (Janssen)、WO2014/128189 (Janssen)、US20140350031 (Janssen)、WO2014/023813 (Janssen)、US20080234251 (Array Biopharma)、US20080306050 (Array Biopharma)、US20100029585 (Ventirx Pharma)、US20110092485 (Ventirx Pharma)、US20110118235 (Ventirx Pharma)、US20120082658 (Ventirx Pharma)、US20120219615 (Ventirx Pharma)、US20140066432 (Ventirx Pharma)、US20140088085 (Ventirx Pharma)、US20140275167 (Novira Therapeutics)、及US20130251673 (Novira Therapeutics)。可共投予的TLR9促效劑之實例包括但不限於：AST-008、CMP-001、IMO-2055、IMO-2125、利騰莫特(litenimod)、MGN-1601、BB-001、BB-006、IMO-3100、IMO-8400、IR-103、IMO-9200、阿托莫特(agatolimod)、DIMS-9054、DV-1079、DV-1179、AZD-1419、勒托莫德(leftolimod) (MGN-1703)、CYT-003、CYT-003-QbG10、及PUL-042。TLR3促效劑之實例包括瑞他立德(rintatolimod)、poly-ICLC、RIBOXXON ®、Apoxxim、RIBOXXIM ®、IPH-33、MCT-465、MCT-475、及ND-1.1。
TLR8抑制劑之實例包括但不限於E-6887、IMO-8400、IMO-9200、及VTX-763。
TLR8促效劑之實例包括但不限於MCT-465、莫托莫德、GS-9688、及VTX-1463。
TLR9促效劑之實例包括但不限於AST-008、IMO 2055、IMO-2125、勒托莫德(lefitolimod)、利騰莫特、MGN-1601、及PUL-042。
TLR7/TLR8促效劑之實例包括但不限於：NKTR-262、IMO-4200、MEDI-9197（特拉莫德(telratolimod)）、及雷西莫特(resiquimod)。
TLR促效劑之實例包括但不限於：勒托莫德、替索莫德(tilsotolimod)、瑞他立德(rintatolimod)、DSP-0509、AL-034、G-100、庫比莫德(cobitolimod)、AST-008、莫托莫德(motolimod)、GSK-1795091、GSK-2245035、VTX-1463、GS-9688、LHC-165、BDB-001、RG-7854、及特拉莫德。
在一些實施例中，治療劑係干擾素基因(STING)之刺激劑。在一些實施例中，STING受體促效劑或活化劑係選自：ADU-S100 (MIW-815)、SB-11285、MK-1454、SR-8291、AdVCA0848、GSK-532、SYN-STING、MSA-1、SR-8291、5,6-二甲基𠮿酮-4-乙酸(DMXAA)、環狀-GAMP (cGAMP)、及環狀-二-AMP。 造血祖細胞激酶1 (HPK1)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1（MAP4K1、HPK1；NCBI基因ID：11184）。造血祖細胞激酶1 (HPK1)抑制劑之實例包括但不限於WO-2018183956、WO-2018183964、WO-2018167147、WO-2018183964、WO-2016205942、WO-2018049214、WO-2018049200、WO-2018049191、WO-2018102366、WO-2018049152、WO2020092528、WO2020092621、及WO-2016090300中所述者。 細胞凋亡信號調節激酶(ASK)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：ASK抑制劑，例如促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶5（MAP3K5；ASK1、MAPKKK5、MEKK5；NCBI基因ID：4217）。ASK1抑制劑之實例包括但不限於該些描述於WO 2011/008709 (Gilead Sciences)及WO 2013/112741 (Gilead Sciences)中者。 Bruton氏酪胺酸激酶(BTK)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：布魯頓氏酪胺酸激酶（BTK、AGMX1、AT、ATK、BPK、IGHD3、IMD1、PSCTK1、XLA；NCBI基因ID：695）。BTK抑制劑之實例包括但不限於(S)-6-胺基-9-(1-(丁-2-炔醯基)吡咯啶-3-基)-7-(4-苯氧基苯基)-7H-嘌呤-8(9H)-酮、阿卡替尼(acalabrutinib) (ACP-196)、BGB-3111、CB988、HM71224、依魯替尼(ibrutinib)（依布魯維卡(Imbruvica)）、M-2951（依伏替尼(evobrutinib)）、M7583、替拉替尼(tirabrutinib) (ONO-4059)、PRN-1008、司培替尼(spebrutinib) (CC-292)、TAK-020、維卡替尼(vecabrutinib)、ARQ-531、SHR-1459、DTRMWXHS-12、TAS-5315、卡昆司(Calquence) + AZD6738、及卡昆司+丹伐特生(danvatirsen)。 週期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：週期蛋白依賴性激酶1（CDK1、CDC2；CDC28A; P34CDC2; NCBI基因ID：983）；週期蛋白依賴性激酶2（CDK2、CDKN2；p33(CDK2)；NCBI基因ID：1017）；週期蛋白依賴性激酶3（CDK3；NCBI基因ID：1018）；週期蛋白依賴性激酶4（CDK4、CMM3；PSK-J3; NCBI基因ID：1019）；週期蛋白依賴性激酶6（CDK6、MCPH12；PLSTIRE；NCBI基因ID：1021）；週期蛋白依賴性激酶7（CDK7、CAK；CAK1; HCAK；MO15; STK1; CDKN7; p39MO15; NCBI基因ID：1022）；週期蛋白依賴性激酶9（CDK9、TAK；C-2k；CTK1; CDC2L4; PITALRE；NCBI基因ID：1025）。CDK 1、2、3、4、6、7、及/或9之抑制劑包括但不限於：阿貝馬昔布(abemaciclib)、阿伏西地(alvocidib)（HMR-1275、夫拉平度(flavopiridol)）、AT-7519、地那昔利(dinaciclib)、艾博蘭斯(ibrance)、FLX-925、LEE001、帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼(ribociclib)、瑞戈替布(rigosertib)、塞利尼索(selinexor)、UCN-01、SY1365、CT-7001、SY-1365、G1T38、米西西尼(milciclib)、曲拉西利(trilaciclib)、PF-06873600、AZD4573、及TG-02。 盤基蛋白域受體(DDR)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：盤基蛋白域受體酪胺酸激酶1（DDR1、CAK、CD167、DDR、EDDR1、HGK2、MCK10、NEP、NTRK4、PTK3、PTK3A、RTK6、TRKE；NCBI基因ID：780）；及/或盤基蛋白域受體酪胺酸激酶2（DDR2、MIG20a、NTRKR3、TKT、TYRO10、WRCN；NCBI基因ID：4921）。DDR抑制劑之實例包括但不限於達沙替尼(dasatinib)及揭示於WO2014/047624 (Gilead Sciences)、US 2009-0142345 (Takeda Pharmaceutical)、US 2011-0287011 (Oncomed Pharmaceuticals)、WO 2013/027802 (Chugai Pharmaceutical)、及WO2013/034933 (Imperial Innovations)中者。 組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與組蛋白去乙醯酶之抑制劑組合，例如組蛋白去乙醯酶9（HDAC9、HD7、HD7b、HD9、HDAC、HDAC7、HDAC7B、HDAC9B、HDAC9FL、HDRP、MITR；基因ID：9734）。HDAC抑制劑之實例包括但不限於：阿貝司他(abexinostat)、ACY-241、AR-42、BEBT-908、貝林司他(belinostat)、CKD-581、CS-055 (HBI-8000)、CUDC-907（非米司他(fimepinostat)）、恩替司他(entinostat)、吉韋司他(givinostat)、莫塞司他(mocetinostat)、帕比司他(panobinostat)、普拉司他(pracinostat)、奎西司他(quisinostat) (JNJ-26481585)、雷米諾他(resminostat)、瑞科司他(ricolinostat)、SHP-141、丙戊酸(VAL-001)、伏立諾他(vorinostat)、替諾斯汀(tinostamustine)、雷米諾他、恩替司他、羅米地辛(romidepsin)、及土西司他(tucidinostat)。 吲哚胺-吡咯-2,3-二加氧酶(IDO1)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：吲哚胺2,3-二加氧酶1（IDO1；NCBI基因ID：3620）。IDO1抑制劑之實例包括但不限於BLV-0801、依波斯他(epacadostat)、F-001287、GBV-1012、GBV-1028、GDC-0919、吲哚莫德(indoximod)、NKTR-218、基於NLG-919之疫苗、PF-06840003、哌喃萘醌(pyranonaphthoquinone)衍生物(SN-35837)、雷米諾他、SBLK-200802、BMS-986205、shIDO-ST、EOS-200271、KHK-2455、及LY-3381916。 Janus激酶(JAK)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：Janus激酶1（JAK1、JAK1A、JAK1B、JTK3；NCBI基因ID：3716）；Janus激酶2（JAK2、JTK10、THCYT3；NCBI基因ID：3717）；及/或Janus激酶3（JAK3、JAK-3、JAK3_HUMAN、JAKL、L-JAK、LJAK；NCBI基因ID：3718）。JAK抑制劑之實例包括但不限於：AT9283、AZD1480、巴瑞替尼(baricitinib)、BMS-911543、非達替尼(fedratinib)、費戈替尼(filgotinib) (GLPG0634)、甘多替尼(gandotinib) (LY2784544)、INCB039110（伊他替尼(itacitinib)）、來他替尼(lestaurtinib)、莫羅替尼(momelotinib) (CYT0387)、NS-018、帕瑞替尼(pacritinib) (SB1518)、皮非替尼(peficitinib) (ASP015K)、魯索替尼(ruxolitinib)、托法替尼(tofacitinib)（原名塔索替尼(tasocitinib)）、INCB052793、及XL019。 基質金屬蛋白酶(MMP)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與基質金屬蛋白酶(MMP)之抑制劑組合，例如下列之抑制劑：MMP1（NCBI基因ID：4312）、MMP2（NCBI基因ID：4313）、MMP3（NCBI基因ID：4314）、MMP7（NCBI基因ID：4316）、MMP8（NCBI基因ID：4317）、MMP9（NCBI基因ID：4318）；MMP10（NCBI基因ID：4319）；MMP11（NCBI基因ID：4320）；MMP12（NCBI基因ID：4321）、MMP13（NCBI基因ID：4322）、MMP14（NCBI基因ID：4323）、MMP15（NCBI基因ID：4324）、MMP16（NCBI基因ID：4325）、MMP17（NCBI基因ID：4326）、MMP19（NCBI基因ID：4327）、MMP20（NCBI基因ID：9313）、MMP21（NCBI基因ID：118856）、MMP24（NCBI基因ID：10893）、MMP25（NCBI基因ID：64386）、MMP26（NCBI基因ID：56547）、MMP27（NCBI基因ID：64066）、及/或MMP28（NCBI基因ID：79148）。MMP9抑制劑之實例包括但不限於馬立馬司他(marimastat) (BB-2516)、西馬司他(cipemastat) (Ro 32-3555)、GS-5745（安德西單抗(andecaliximab)）、及WO 2012/027721 (Gilead Biologics)中所述者。 RAS及RAS路徑抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：KRAS原致癌基因（GTP酶）（KRAS；又名NS；NS3; CFC2; RALD；K-Ras；KRAS1; KRAS2; RASK2; KI-RAS；C-K-RAS；K-RAS2A; K-RAS2B; K-RAS4A; K-RAS4B; c-Ki-ras2；NCBI基因ID：3845）；NRAS原致癌基因（GTP酶）（NRAS；又名NS6；CMNS；NCMS；ALPS4; N-ras；NRAS1; NCBI基因ID：4893）；HRas原致癌基因（GTP酶）（HRAS；又名CTLO；KRAS；HAMSV；HRAS1; KRAS2; RASH1; RASK2; Ki-Ras；p21ras; C-H-RAS；c-K-ras；H-RASIDX；c-Ki-ras；C-BAS/HAS；C-HA-RAS1;及NCBI基因ID：3265）。Ras抑制劑可在多核苷酸（例如轉錄抑制劑）或多肽（例如GTP酶抑制劑）層級上抑制Ras。在一些實施例中，抑制劑靶向Ras路徑中之一或多種蛋白質，例如抑制EGFR、Ras、Raf (A-Raf, B-Raf, C-Raf)、MEK (MEK1, MEK2)、ERK、PI3K、AKT、及mTOR中之一或多者。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與KRAS之抑制劑組合。KRAS抑制劑之實例包括AMG-510、COTI-219、MRTX-1257、ARS-3248、ARS-853、WDB-178、BI-3406、BI-1701963、ARS-1620 (G12C)、SML-8-73-1 (G12C)、化合物3144 (G12D)、Kobe0065/2602 (Ras GTP)、RT11、MRTX-849 (G12C)、及K-Ras(G12D)-選擇性抑制肽，包括KRpep-2 (Ac-RRCPLYISYDPVCRR-NH2) (SEQ ID NO: 243)及KRpep-2d (Ac-RRRRCPLYISYDPVCRRRR-NH2) (SEQ ID NO: 244)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與KRAS mRNA之抑制劑組合。例示性KRAS mRNA抑制劑包括抗KRAS U1轉接蛋白、AZD-4785、siG12D-LODER ™、及siG12D胞外體。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與MEK之抑制劑組合。可共投予的說明性MEK抑制劑包括畢尼替尼(binimetinib)、考比替尼(cobimetinib)、PD-0325901、匹瑪替布(pimasertib)、RG-7304、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、及司美替尼。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與AKT之抑制劑組合。可共投予的說明性AKT抑制劑包括RG7440、MK-2206、伊巴替布(ipatasertib)、阿弗替布(afuresertib)、AZD5363、及ARQ-092、卡瓦替布(capivasertib)、曲西立濱(triciribine)、及ABTL-0812 (PI3K/Akt/mTOR)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與Raf之抑制劑組合。可共投予的說明性Raf抑制劑包括BGB-283 (Raf/EGFR)、HM-95573、LXH-254、LY-3009120、RG7304、TAK-580、達拉非尼(dabrafenib)、維羅非尼(vemurafenib)、恩拉非尼(encorafenib) (LGX818)、PLX8394。RAF-265 (Raf/VEGFR)、及ASN-003 (Raf/PI3K)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與ERK之抑制劑組合。可共投予的說明性ERK抑制劑包括LTT-462、LY-3214996、MK-8353、雷沃替尼(ravoxertinib)、GDC-0994、及優立替尼(ulixertinib)。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與PI3K之抑制劑組合。可共投予的說明性PI3K抑制劑包括艾德昔布(idelalisib) (Zydelig ®)、艾培昔布(alpelisib)、布帕昔布(buparlisib)、皮克昔布(pictilisib)、伊格納昔布(eganelisib) (IPI-549)。可共投予的說明性PI3K/mTOR抑制劑包括達妥昔布(dactolisib)、奧米昔布(omipalisib)、沃塔昔布(voxtalisib)、吉達昔布(gedatolisib)、GSK2141795、及RG6114。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與mTOR之抑制劑組合。可共投予的說明性mTOR抑制劑包括賽泮替布(sapanisertib)、維塞替布(vistusertib) (AZD2014)、ME-344、西羅莫司(sirolimus)（口服奈米非晶配方，癌症）、及TYME-88（mTOR/細胞色素P450 3A4）。
在某些實施例中，具有CDKN2A突變之Ras驅使癌症（例如NSCLC）可藉由共投MEK抑制劑司美替尼及CDK4/6抑制劑帕博西尼來抑制。參見例如Zhou, et al., Cancer Lett.2017 Nov 1; 408:130-137。此外，K-RAS及突變體N-RAS可藉由不可逆ERBB1/2/4抑制劑來那替尼來減少。參見例如Booth, et al., Cancer Biol Ther.2018 Feb 1; 19(2):132-137。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與RAS之抑制劑組合。RAS抑制劑之實例包括NEO-100及瑞戈替布。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與EGFR之拮抗劑組合，諸如AMG-595、奈昔木單抗(necitumumab)、ABBV-221、瑪汀-迪妥昔珠單抗(depatuxizumab mafodotin) (ABT-414)、托木妥昔單抗(tomuzotuximab)、ABT-806、維必施(vectibix)、莫多妥昔單抗(modotuximab)、及RM-1929。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：蛋白酪胺酸磷酸酶非受體11型（PTPN11；BPTP3、CFC、JMML、METCDS、NS1、PTP-1D、PTP2C、SH-PTP2、SH-PTP3、SHP2；NCBI基因ID：5781）。SHP2抑制劑之實例包括TNO155 (SHP-099)、RMC-4550、JAB-3068、RMC-4630、SAR442720、及WO2018172984及WO2017211303中所述者。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與下列之抑制劑組合：促分裂原活化蛋白激酶7（MAP2K7、JNKK2、MAPKK7、MEK、MEK 7、MKK7、PRKMK7、SAPKK-4、SAPKK4；NCBI基因ID：5609）。MEK抑制劑之實例包括安卓奎諾爾(antroquinonol)、畢尼替尼、CK-127、考比替尼(GDC-0973, XL-518)、MT-144、司美替尼(AZD6244)、索拉非尼、曲美替尼(GSK1120212)、阿瑟替布(uprosertib) +曲美替尼、PD-0325901、皮馬瑟替、LTT462、AS703988、CC-90003、瑞法替尼(refametinib)、TAK-733、CI-1040、及RG7421。
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與磷脂醯肌醇-4,5-雙磷酸3-激酶催化次單元之抑制劑組合，例如磷脂醯肌醇-4,5-雙磷酸3-激酶催化次單元α（PIK3CA、CLAPO、CLOVE、CWS5、MCAP、MCM、MCMTC、PI3K、PI3K-α、p110-α；NCBI基因ID：5290）；磷脂醯肌醇-4,5-雙膦酸鹽3-激酶酶催化性次單元β（PIK3CB、P110BETA、PI3K、PI3KBETA、PIK3C1；NCBI基因ID：5291）；磷脂醯肌醇-4,5-雙膦酸鹽3-激酶酶催化性次單元γ（PIK3CG、PI3CG、PI3K、PI3Kγ、PIK3、p110γ、p120-PI3K；基因ID：5494）；及/或磷脂醯肌醇-4,5-雙膦酸鹽3-激酶酶催化性次單元δ（PIK3CD、APDS、IMD14、P110δ、PI3K、p110D，NCBI基因ID：5293）。在一些實施例中，PI3K抑制劑係泛PI3K抑制劑。PI3K抑制劑之實例包括但不限於ACP-319、AEZA-129、AMG-319、AS252424、AZD8186、BAY 1082439、BEZ235、必米昔布(PQR309)、布帕昔布(BKM120)、BYL719（艾培昔布）、羧基醯胺基三唑乳清酸鹽(CTO)、CH5132799、CLR-457、CLR-1401、考班昔布(BAY 80-6946)、DS-7423、達妥昔布、杜維昔布(duvelisib) (IPI-145)、非米司他(fimepinostat) (CUDC-907)、吉達昔布(PF-05212384)、GDC-0032、GDC-0084 (RG7666)、GDC-0077、皮克昔布(GDC-0941)、GDC-0980、GSK2636771、GSK2269577、GSK2141795、艾德昔布(Zydelig ®)、INCB040093、INCB50465、IPI-443、IPI-549、KAR4141、LY294002、LY3023414、NERLYNX ®（來那替尼）、奈米利塞(nemiralisib) (GSK2269557)、奧米昔布(GSK2126458, GSK458)、OXY111A、帕努昔布(panulisib) (P7170, AK151761)、PA799、哌立福新(KRX-0401)、皮拉昔布(Pilaralisib) (SAR245408; XL147)、普喹替尼(puquitinib)甲磺酸酯(XC-302)、SAR260301、塞萊斯布(seletalisib) (UCB-5857)、賽拉昔布(serabelisib) (INK-1117,MLN-1117,TAK-117)、SF1126、索諾昔布(sonolisib) (PX-866)、RG6114、RG7604、瑞戈替布鈉（ON-01910鈉）、RP5090、特納昔布(tenalisib) (RP6530)、RV-1729、SRX3177、泰斯昔布(taselisib)、TG100115、溫布昔布(umbralisib) (TGR-1202)、TGX221、沃塔昔布(SAR245409)、VS-5584、WX-037、X-339、X-414、XL499、XL756、渥曼青黴素(wortmannin)、ZSTK474、及描述於WO 2005/113556 (ICOS)、WO 2013/052699 (Gilead Calistoga)、WO 2013/116562 (Gilead Calistoga)、WO 2014/100765 (Gilead Calistoga)、WO 2014/100767 (Gilead Calistoga)、及WO 2014/201409 (Gilead Sciences)中之化合物。 脾臟酪胺酸激酶(SYK)抑制劑
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與脾臟相關酪胺酸激酶（SYK、p72-Syk，基因ID：6850）之抑制劑組合。SYK抑制劑之實例包括但不限於6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-N- 啉基苯基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-8-胺、BAY-61-3606、賽度替尼(cerdulatinib) (PRT-062607)、恩妥替尼(entospletinib)、福他替尼(fostamatinib) (R788)、HMPL-523、NVP-QAB 205 AA、R112、R343、塔馬替尼(tamatinib) (R406)、及US 8450321 (Gilead Connecticut)中所述者與U.S. 2015/0175616中所述者。 酪胺酸激酶抑制劑(TKI)
在各種實施例中，如本文所述之5T4靶向抗原結合位點或抗原結合域係進一步與酪胺酸激酶抑制劑(TKI)組合。TKI可靶向表皮生長因子受體(EGFR)及纖維母細胞生長因子(FGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、及血管內皮生長因子(VEGF)之受體。TKI之實例包括但不限於阿西替尼(axitinib)、阿法替尼(afatinib)、ARQ-087（德贊替尼(derazantinib)）、asp5878、AZD3759、AZD4547、伯舒替尼(bosutinib)、布格替尼(brigatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、西地尼布(cediranib)、克諾拉尼(crenolanib)、克唑替尼(crizotinib)、達可替尼(dacomitinib)、達沙替尼、多韋替尼(dovitinib)、E-6201、厄達替尼(erdafitinib)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、吉列替尼(gilteritinib) (ASP-2215)、FP-1039、HM61713、埃克替尼(icotinib)、伊馬替尼(imatinib)、KX2-391 (Src)、拉帕替尼(lapatinib)、來他替尼、樂伐替尼(lenvatinib)、米哚妥林(midostaurin)、尼達尼布(nintedanib)、ODM-203、奧莫替尼(olmutinib)、奧希替尼(osimertinib) (AZD-9291)、帕唑帕尼(pazopanib)、普納替尼(ponatinib)、波齊替尼(poziotinib)、喹雜替尼(quizartinib)、拉多替尼(radotinib)、羅西替尼(rociletinib)、索凡替尼(sulfatinib) (HMPL-012)、舒尼替尼(sunitinib)、法米替尼(famitinib) L-蘋果酸鹽、(MAC-4)、替沃尼布(tivoanib)、TH-4000、MEDI-575（抗PDGFR抗體）、及TAK-659。
本揭露之蛋白質亦可用作手術移除原發病灶之輔助手段(adjunct)。
可選擇蛋白質及額外治療劑之量、及相關投予時機，以達成所欲組合治療效果。例如，當向需要此類投予之患者投予組合療法時，組合中之治療劑、或包含治療劑之醫藥組成物或組成物可以任何順序投予，諸如例如依序(sequentially)、並行(concurrently)、一起、同時(simultaneously)、及類似者。此外，例如，可在（多種）額外治療劑發揮其疾病預防或治療效果的時間期間投予蛋白質，反之亦然。 IV. 醫藥組成物
本揭露亦以醫藥組成物為特徵，該醫藥組成物含有治療有效量的本文所述之蛋白質。可調配組成物以用於各種藥物遞送系統。亦可在用於適當配方之組成物中包括一或多種生理上可接受之賦形劑或載劑。適用於本揭露之配方係見於Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985中。關於藥物遞送方法的簡要綜述，參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。
在一個態樣中，本揭露提供一種下列之配方：本文所述之蛋白質，其含有本文所述之5T4結合位點；及醫藥上可接受之載劑。
在某些實施例中，醫藥組成物包括蛋白質，該蛋白質包括具有下列之抗原結合位點：重鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90%（例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一的胺基酸序列；及輕鏈可變域，其具有與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%（例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%）同一的胺基酸序列。
可調配組成物以用於各種藥物遞送系統。可在用於適當配方之組成物中包括一或多種生理上可接受之賦形劑或載劑。適用於本揭露之配方係見於Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985；及Steven Shire, 「Monoclonal Antibodies: Meeting the Challenges in Manufacturing, Formulation, Delivery and Stability of Final Drug Product,」 Woodhead Publishing; 1st edition (April 24, 2015)。關於藥物遞送方法的簡要綜述，參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。
例如，本揭露可以水性醫藥配方存在，其包括治療有效量的蛋白質於緩衝溶液中（形成配方）。水性載劑可包括無菌注射用水(sterile water for injection, SWFI)、抑菌注射用水(bacteriostatic water for injection, BWFI)、pH緩衝溶液（例如磷酸鹽緩衝鹽水）、無菌鹽水溶液、林格氏液(Ringer’s solution)、或右旋糖溶液。在某些實施例中，製備水性配方，其包括本文所揭示之蛋白質於pH緩衝溶液中。製劑之pH一般將在3與11之間，更佳的是在5與9之間或6與8之間，且最佳的是在7與8之間，諸如7至7.5。上述pH之居中範圍亦意欲為本揭露之部分。例如，意欲包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限的值範圍。緩衝劑（將pH控制在此範圍內）之實例包括乙酸鹽（例如乙酸鈉）、琥珀酸鹽（諸如琥珀酸鈉）、葡萄糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽、及其他有機酸緩衝劑。在某些實施例中，緩衝系統包括檸檬酸單水合物、檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉二水合物、及/或磷酸二氫鈉二水合物。在某些實施例中，緩衝系統包括約1.3 mg/mL的檸檬酸（例如1.305 mg/mL）、約0.3 mg/mL的檸檬酸鈉（例如0.305 mg/mL）、約1.5 mg/mL的磷酸氫二鈉二水合物（例如1.53 mg/mL）、約0.9 mg/mL的磷酸二氫鈉二水合物（例如0.86）、及約6.2 mg/mL的氯化鈉（例如6.165 mg/mL)。在某些實施例中，緩衝系統包括1至1.5 mg/mL的檸檬酸、0.25至0.5 mg/mL的檸檬酸鈉、1.25至1.75 mg/ml的磷酸氫二鈉二水合物、0.7至1.1 mg/mL的磷酸二氫鈉二水合物、及6.0至6.4 mg/mL的氯化鈉。液體配方之pH可藉由添加醫藥上可接受之酸及/或鹼設定。在某些實施例中，醫藥上可接受之酸可係鹽酸。在某些實施例中，鹼可係氫氧化鈉。
在一些實施例中，配方包括水性載劑，其係醫藥上可接受的（對於投予至人類而言安全且無毒性）且可用於製備液體配方。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液（例如磷酸鹽緩衝鹽水）、無菌鹽水溶液、林格氏液、或右旋糖溶液。
配方中亦可包括多元醇，其作用為張力調節劑(tonicifier)且可穩定抗體。多元醇係以可就配方之所欲等張性而變化的量添加至配方中。在某些實施例中，水性配方可係等張的。多元醇之添加量亦可就多元醇之分子量而改變。例如，相較於雙醣（例如海藻糖），可添加較低量的單醣（例如甘露醇）。在某些實施例中，可用於配方中作為張力劑之多元醇係甘露醇。在某些實施例中，甘露醇濃度可係約5至約20 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇之濃度可係約7.5至約15 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇之濃度可係約10至約14 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇之濃度可係約12 mg/mL。在某些實施例中，配方中可包括多元醇山梨醇。
亦可將清潔劑或界面活性劑添加至配方中。例示性清潔劑包括非離子清潔劑，諸如聚山梨醇酯（例如聚山梨醇酯20、80等）或泊洛沙姆(poloxamer)（例如泊洛沙姆188）。清潔劑之添加量係使得其減少調配抗體之聚集，且/或最小化配方中顆粒之形成，且/或減少吸附。在某些實施例中，配方可包括為聚山梨醇酯之界面活性劑。在某些實施例中，配方可含有清潔劑聚山梨醇酯80或Tween 80。Tween 80係用以描述聚氧乙烯(20)山梨醇酐單油酸酯之用語（參見Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th edi., 1996）。在某些實施例中，配方可含有在約0.1 mg/mL與約10 mg/mL之間的聚山梨醇酯80、或在約0.5 mg/mL與約5 mg/mL之間。在某些實施例中，配方中可添加約0.1%聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，可將本揭露之液體配方製備為10 mg/mL濃度溶液，其與糖以穩定水平組合。在某些實施例中，可將液體配方製備於水性載劑中。在某些實施例中，可添加穩定劑，其量不大於可導致對靜脈內投予而言非所欲或不適合的黏度的量。在某些實施例中，糖可係雙醣，例如蔗糖。在某些實施例中，液體配方亦可包括下列中之一或多者：緩衝劑、界面活性劑、及防腐劑，其經添加至本文之配方中以減少細菌作用。例如，防腐劑之添加可促進多次使用（多劑量）配方之產生。
在一些實施例中，本揭露提供一種儲放壽命延長的配方，其包括本揭露之蛋白質與甘露醇、檸檬酸單水合物、檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉二水合物、磷酸二氫鈉二水合物、氯化鈉、聚山梨醇酯80、水、及氫氧化鈉之組合。
脫醯胺化(deamidation)係肽及蛋白質之常見產物變體，其可能在發酵、採集/細胞澄清(cell clarification)、純化、原料藥/藥品儲存期間、及樣本分析期間發生。脫醯胺化係自蛋白質損失NH3，形成琥珀醯亞胺中間物，其可經歷水解。琥珀醯亞胺中間物導致親本肽的17道耳頓質量減少。後續水解導致18道耳頓質量增加。由於在水性條件下的不穩定性，琥珀醯亞胺中間物難以單離。因此，脫醯胺化一般可在1道耳頓質量增加時偵測到。天冬醯胺酸之脫醯胺化產生天冬胺酸或異天冬胺酸。影響脫醯胺化速率的參數包括pH、溫度、溶劑介電常數、離子強度、一級序列、局部多肽構形、及三級結構。肽鏈中相鄰於Asn之胺基酸殘基影響脫醯胺化速率。蛋白質序列中Asn後之Gly及Ser導致更易於發生脫醯胺化。在某些實施例中，本揭露之液體配方可在pH及濕度之條件下保存，以預防蛋白質產物之脫胺作用。
在一些實施例中，配方係凍乾配方。在某些實施例中，配方經冷凍乾燥（凍乾），並包含在約12至60個小瓶中。在某些實施例中，配方經冷凍乾燥，且可將45 mg的冷凍乾燥配方包含在一個小瓶中。在某些實施例中，將約40 mg至約100 mg的冷凍乾燥配方包含在一個小瓶中。在某些實施例中，將來自12、27、或45個小瓶之冷凍乾燥配方組合，以獲得靜脈內藥物配方中治療劑量的蛋白質。配方可係液體配方。在一些實施例中，液體配方係以約250 mg/小瓶至約1000 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，液體配方係以約600 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，液體配方係以約250 mg/小瓶儲存。
在一些實施例中，凍乾配方包括本文所述之蛋白質及凍乾保護劑(lyoprotectant)。凍乾保護劑可係糖，例如雙醣。在某些實施例中，凍乾保護劑可係蔗糖或麥芽糖。凍乾配方亦可包括下列中之一或多者：緩衝劑、界面活性劑、增積劑、及/或防腐劑。可用於穩定凍乾藥品的蔗糖或麥芽糖之量可呈至少1:2蛋白質與蔗糖或麥芽糖之重量比。在某些實施例中，蛋白質與蔗糖或麥芽糖重量比可係1:2至1:5。
在某些實施例中，在凍乾前，配方之pH可藉由添加醫藥上可接受之酸及/或鹼設定。在某些實施例中，醫藥上可接受之酸可係鹽酸。在某些實施例中，醫藥上可接受之鹼可係氫氧化鈉。在凍乾之前，可將含有本揭露蛋白質之溶液之pH調整在6至8之間。在某些實施例中，凍乾藥品之pH範圍可係7至8。
在某些實施例中，可添加「增積劑(bulking agent)」。「增積劑」係一種化合物，其將質量添加至凍乾混合物並促成凍乾餅(lyophilized cake)之物理結構（例如，促進產生基本上均勻的凍乾餅，其維持開孔結構）。說明性增積劑包括甘露醇、甘胺酸、聚乙二醇、及山梨醇。本揭露之凍乾配方可含有此類增積劑。
在某些實施例中，凍乾蛋白質產物係用水性載劑構成。本文所關注之水性載劑係醫藥上可接受的（例如，對於投予至人類而言安全且無毒性）且可用於製備液體配方（在凍乾之後）。說明性稀釋劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液（例如磷酸鹽緩衝鹽水）、無菌鹽水溶液、林格氏液、或右旋糖溶液。在某些實施例中，本揭露之凍乾藥品係用無菌注射用水(USP, SWFI)或0.9%氯化鈉注射液(USP)回溶。在回溶期間，凍乾粉末溶解成溶液。在某些實施例中，將本揭露之凍乾蛋白質產物構成約4.5 mL注射用水並用0.9%鹽水溶液（氯化鈉溶液）稀釋。
蛋白質組成物可藉由習知滅菌技術滅菌，或可經無菌過濾。可將所得水溶液原樣(as-is)包裝以供使用或凍乾，凍乾製劑係在投予前與無菌水性載劑組合。呈固體形式之所得組成物可以多個單次劑量單位包裝，其各自含有固定量的（多種）上述藥劑。亦可將呈固體形式之組成物包裝於容器中，以供彈性的數量。
本揭露之醫藥組成物中活性成分之實際劑量水平可有所變化，以獲得活性成分之量，其有效達成針對特定患者、組成物、及投予模式之所欲治療反應，而對患者不具毒性。
因此，在一些實施例中，小瓶中含有本揭露之蛋白質或凍乾蛋白質之液體配方。在一些實施例中，本文提供小瓶，其包含下列之液體配方：本文所述之蛋白質或凍乾蛋白質及緩衝劑、賦形劑、穩定劑、及類似者。液體配方中蛋白質或經凍乾者以及緩衝劑、賦形劑、穩定劑、及類似形式中之任一者之量可係上下文所述之任何組合。
具體劑量可係用於各患者之統一劑量，例如50至5000 mg的蛋白質。替代地，可根據患者之大概體重或表面積訂製患者之劑量。判定適當劑量之其他因子可包括待治療或預防之疾病或病況、疾病之嚴重性、投予途徑、及患者之年齡、性別、及醫療狀況。判定適當治療劑量所需之計算的進一步精細化係由所屬技術領域中具有通常知識者常規進行，尤其是鑒於本文所揭示之劑量資訊及檢定。劑量亦可透過使用已知檢定判定，該等已知檢定係用於判定與適當劑量反應數據結合使用的劑量。可隨著監測疾病進展調整個別患者之劑量。可測量患者中可靶向構築體或複合物之血液水平，以了解劑量是否需要調整以達到或維持有效濃度。可使用藥物基因體學，以判定哪種可靶向構築體及/或複合物、及其劑量最有可能對給定個體有效(Schmitz et al., Clinica.Chimica.Acta.308: 43-53, 2001; Steimer et al., Clinica.Chimica.Acta.308: 33-41, 2001)。
大致上，基於體重之劑量係每kg體重約0.01 µg至約100 mg，諸如約0.01 µg至約100 mg/kg體重、約0.01 µg至約50 mg/kg體重、約0.01 µg至約10 mg/kg體重、約0.01 µg至約1 mg/kg體重、約0.01 µg至約100 µg/kg體重、約0.01 µg至約50 µg/kg體重、約0.01 µg至約10 µg/kg體重、約0.01 µg至約1 µg/kg體重、約0.01 µg至約0.1 µg/kg體重、約0.1 µg至約100 mg/kg體重、約0.1 µg至約50 mg/kg體重、約0.1 µg至約10 mg/kg體重、約0.1 µg至約1 mg/kg體重、約0.1 µg至約100 µg/kg體重、約0.1 µg至約10 µg/kg體重、約0.1 µg至約1 µg/kg體重、約1 µg至約100 mg/kg體重、約1 µg至約50 mg/kg體重、約1 µg至約10 mg/kg體重、約1 µg至約1 mg/kg體重、約1 µg至約100 µg/kg體重、約1 µg至約50 µg/kg體重、約1 µg至約10 µg/kg體重、約10 µg至約100 mg/kg體重、約10 µg至約50 mg/kg體重、約10 µg至約10 mg/kg體重、約10 µg至約1 mg/kg體重、約10 µg至約100 µg/kg體重、約10 µg至約50 µg/kg體重、約50 µg至約100 mg/kg體重、約50 µg至約50 mg/kg體重、約50 µg至約10 mg/kg體重、約50 µg至約1 mg/kg體重、約50 µg至約100 µg/kg體重、約100 µg至約100 mg/kg體重、約100 µg至約50 mg/kg體重、約100 µg至約10 mg/kg體重、約100 µg至約1 mg/kg體重、約1 mg至約100 mg/kg體重、約1 mg至約50 mg/kg體重、約1 mg至約10 mg/kg體重、約10 mg至約100 mg/kg體重、約10 mg至約50 mg/kg體重、約50 mg至約100 mg/kg體重。劑量可每天、每週、每月、或每年給予一次或多次，或甚至每2至20年給予一次。所屬技術領域中具有通常知識者可基於體液或組織中可靶向構築體或複合物之測量滯留時間及濃度，容易地評估給藥之重複率。本揭露之投予可係靜脈內、動脈內、腹膜內、肌內、皮下、胸膜內、鞘内(intrathecal)、腔內、藉由透過導管之灌注、或藉由直接病灶內注射。此可每天投予一次更多次、每週投予一次或多次、每月投予一次或多次、及每年投予一次或多次。
以上說明描述本揭露之多個態樣及實施例。本專利申請案特別設想到態樣及實施例之所有組合及排列。
在整個描述（其中組成物係描述為具有、包括、或包含特定組分，或其中程序及方法係描述為具有、包括、或包含特定步驟）中，額外地設想到基本上由所述組分所組成或由所述組分所組成的本揭露之組成物，並設想到基本上由所述處理步驟所組成或由所述處理步驟所組成的根據本揭露之程序及方法。
在本申請案中，在元件或組分經表示為包括於及/或選自所述元件或組分之清單的情況下，應理解的是，該元件或組分可係所述元件或組分中之任一者，或該元件或組分可選自由所述元件或組分中之二或多者所組成之群組。
此外，應理解的是，本文所述之組成物或方法之元件及/或特徵可以各種方式組合，而不脫離本揭露之精神及範疇，無論是明示或暗示於本文中。例如，除非自上下文另有理解，否則在提及特定化合物的情況下，該化合物可用於本揭露之組成物之各種實施例及/或本揭露之方法中。換言之，在本申請案內，實施例已以能夠撰寫並繪製清楚且簡要的申請案之方式描述並描繪，但意欲且將理解的是，實施例可以各種方式組合或分開，而不背離本案教示及（多個）揭露。例如，將理解的是，本文所描述及所描繪之所有特徵可適用於本文所描述及所描繪之（多個）揭露之所有態樣。
應理解的是，除非自上下文及使用另有理解，否則表達方式「…中之至少一者(at least one of)」個別地包括該表達方式之後所述物體之各者、及所述物體中之二或更多者之各種組合。除非自上下文另有理解，否則與三或更多個所述物體有關之表達方式「及/或(and/or)」應理解為具有相同意義。
除非另有特別說明或自上下文理解，否則用語「包括(include/includes/including)」、「具有(have/has/having)」、或「含有(contain/contains/containing)」（包括其語法上之等效物）之使用通常應理解為開放式且非限制性，例如不排除額外未列舉之元件或步驟。
除非另有特別說明，否則在用語「約(about)」係使用於數量值之前的情況下，本揭露亦包括特定數量值本身。除非另有指示或推論，否則如本文中所使用，用語「約(about)」係指標稱值之±10%變化。
應理解的是，只要本揭露仍可操作，步驟之順序或執行某些動作之順序並不重要。此外，可同時進行二或更多個步驟或動作。
本文中任何及所有實例、或例示性語言（例如「諸如(such as)」或「包括(including)」）之使用僅意欲更好地說明本揭露，且不對本揭露之範疇作出限制，除非經請求保護。不應將本說明書中之語言解讀為指示任何未請求保護之元件為實行本揭露所必需的。 實例
現經大致描述之本揭露將藉由參照以下實例（僅出於說明本揭露之某些態樣及實施例的目的而納入）更容易理解，且不意欲以任何方式限制本揭露之範疇。 實例1.5T4 結合mAb 之產生及表徵
此實例描述來自抗體發現活動(antibody discovery campaign)之5T4之新識別的結合體。在使用酵母菌展示技術、針對一種5T4結合體之多輪親和力成熟（CDRH3為主及CDRH1/CDRH2為主）、及序列不利條件分析及修正（視需要針對多種結合體）之後，選擇一種結合體AB1002-scFv用於進一步發展。 5T4抗體產生
從131種結合至重組人類5T4-His之融合瘤抗體開始，選擇5T4特異性抗體。其中，發現113種結合至細胞表面上之人類5T4 (h5T4)。其中，藉由表面電漿共振(SPR)，78個殖株顯示與人類5T4之結合。藉由SPR，62個殖株顯示與恆河猴(rhesus) 5T4 (r5T4)之結合。15個殖株結合至h5T4及r5T4的程度同樣好並滿足親和力標準。此等研究識別鼠類10F10為展示適用於生物製劑藥物候選者之性質的結合體。亦將額外鼠類結合體11F09及08E06識別為具有所欲特徵，且將鼠類05H04識別為具有所欲特徵之子集（儘管缺乏與食蟹獼猴5T4之結合）。 殖株 08E06之親和力成熟
為了搜尋結合親和力改善的殖株08E06之變體，藉由使CDRH3殘基(GGYLWFAY (SEQ ID NO:55)突變，建立酵母菌展示親和力成熟庫。為富集對人類5T4 (h5T4)具有較高親和力之scFv，用1 nM的生物素化h5T4-R-hFc-His進行兩輪選擇。比較在親本殖株08E06與代表性個別庫殖株之間的親和力，並執行多輪FACS。
CDRH3為主之親和力成熟研究的結果展示親和力改善，且進一步改善係高度所欲的。因此，選擇CDRH1及CDRH2序列用於親和力成熟（CDRH1：GYTFTSY (SEQ ID NO:53)及CDRH2：DSSDSK (SEQ ID NO:54)），其使用成熟CDRH3骨架。目標係工程改造並選擇結合體，該等結合體之親和力較上述親本殖株(08E06 scFv)或CDRH3最佳化變體改善。此建立具有隨機CDRH1及CDRH2之庫，同時保留最佳化CDRH3。執行多輪FACS，以富集h5T4之高親和力結合體。自此等程序總共獲得53個親和力成熟殖株。殖株08E06之所選所得親和力成熟變體之CDR序列係顯示於 表 5中。 表5.殖株08E06之親和力成熟變體
殖株 CDRH1 CDRH2 CDRH3
08E06 GYTFTSY (SEQ ID NO:53) DSSDSK (SEQ ID NO:54) GGYLWFAY (SEQ ID NO:55)
AB1558 GYTFGSY (SEQ ID NO:73) DASTEK (SEQ ID NO:74) GGYLWFQY (SEQ ID NO:75)
AB1566 GYLFTSY (SEQ ID NO:76) SVSDAK (SEQ ID NO:77) GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)
AB1554 GYTFGSY (SEQ ID NO:73) DARSAK (SEQ ID NO:79) GGYLWFKY(SEQ ID NO:78)
AB1574 GYRFTSY (SEQ ID NO:80) DASSAK (SEQ ID NO:81) GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)
AB1579 GYGFTSY (SEQ ID NO:82) DARTAK (SEQ ID NO:83) GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)
AB1540 GYTFTSY (SEQ ID NO:53) DASDAK (SEQ ID NO:85) GGYLWYHY (SEQ ID NO:86)
AB1541 GYTFTSY (SEQ ID NO:53) DASDAK (SEQ ID NO:85) GGYLWYSY (SEQ ID NO:87)
AB1552 GYTFTSY (SEQ ID NO:53) DASDAK (SEQ ID NO:85) GGYLWYAY (SEQ ID NO:84)
AB1565 GYSFTSY (SEQ ID NO:88) DASDAK (SEQ ID NO:85) GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)
AB1534 GYTFTSY (SEQ ID NO:53) DASDAK (SEQ ID NO:85) GGYLWFKY (SEQ ID NO:78)
AB1573 GYGFTSY (SEQ ID NO:82) DARTAK (SEQ ID NO:83) GGHLWYAY (SEQ ID NO:89)
人源化及序列不利條件評估
將殖株10F10及11F09人源化為多個構架序列；此等人源化殖株之序列係提供於上表1中。因為此等殖株於其CDR中含有可能負面影響蛋白質表現、穩定性、或免疫原性的胺基酸，將殖株設計成在此等胺基酸處具有取代。此等經不利條件修正之殖株之序列亦提供於上表1中。
最終選擇AB1002（鼠類10F10之人源化變體，具有VH T62S修正以置換稀有殘基T62）用於進一步發展。 表位定位 (Epitope Mapping)
執行5T4結合體相對於參考5T4抗體的結合，以判定結合表位。將鼠類10F10及鼠類11F09之表位定位至富含白胺酸重複序列1 (LRR1)域中之5T4上。此外，將鼠類08E06之表位定位至富含白胺酸重複序列2 (LRR2)域中之5T4上。參見例如Zhao, et al., Structure(2014) 22(4):612-20。 表面電漿共振 (SPR)
將AB1002 scFv (VL-VH)（10F10之人源化變體）轉換為包含5T4-scFv之多特異性結合蛋白、及兩種非5T4結合體，以產出AB1310/AB1783。此外，將08E06人源化變體（AB0063 (VH-VL)及AB0064 (VL-VH)）以類似方式轉換為兩種多特異性結合蛋白。藉由表面SPR，測量AB1310/AB1783與5T4之結合親和力。簡言之，在37℃之生理溫度下使用Biacore 8K儀器執行SPR。簡言之，將人類Fc特異性抗體以約8000至10000個共振單位(resonance unit, RU)之密度共價固定於CM5生物感測器晶片之羧基甲基右旋糖酐基質上，，以建立抗hFc IgG晶片。將樣本以5至10 µL/min之流速注射於抗hFc IgG晶片上60秒。將蛋白質用運行緩衝劑以三倍稀釋進行連續稀釋（300 nM至0.14 nM），並以30 µl/min之流速注射於經捕捉之測試物品上。監測締合240至300秒，並監測解離300至900秒。將表面在週期之間再生，其以三次脈衝的10 mM甘胺酸-HCl (pH 1.7)以100 µL/min注射20秒。
SPR分析顯示AB1310/AB1783、AB0063、及AB0064對h5T4具有高親和力（ 圖 1A 至圖1E）。此結合親和力係維持在較低pH (6.0)下，其代表腫瘤微環境（ 圖 1F）。AB1310/AB1783與5T4之結合之SPR分析細節係顯示於 表 6中，且AB1310之與人類及食蟹獼猴5T4之比較性結合係顯示於 表 7中。 表6.AB1310/AB1783、AB0063、及AB0064在SPR檢定中之結合親和力
分子 pH k a(M -1s -1) k d(s -1) 動力學擬合K D(nM)
AB1310/AB1783 7.4 (1.3 ± 0.0) × 10 5 (7.7 ± 0.3) × 10 -4 6.1 ± 0.2
6.0 (1.2 ± 0.1) × 10 5 (1.2 ± 0.0) × 10 -3 9.4 ± 0.6
AB0064 7.4 1.56 × 10 5 2.49 × 10 -4 1.6
AB0063 7.4 1.28 × 10 5 2.42 × 10 -4 1.9
表7.AB1310在SPR檢定中之結合親和力
物種 K D5T4 (nM)
人類 6.2 ± 0.4
食蟹獼猴 8.3 ± 2.2
進行研究，以評估5T4靶向TriNKET ®與細胞表面上表現之5T4之結合親和力。使用KYSE-30及H292人類癌細胞系，其分別衍生自食道鱗狀細胞癌及非小細胞肺癌。相較於H292細胞上所發現的，KYSE-30細胞表現較高水平的表面5T4。簡言之，將腫瘤細胞與5T4-TriNKET ®或5T4-mAb在4℃下培養1小時。在培養之後，使用螢光團接合抗人類IgG二級抗體，偵測TriNKET ®及mAb與5T4+細胞之結合模式。藉由流式細胞術分析細胞，且記述相對於僅二級對照組之MFI倍數。此外，使用相同規程，以評估5T4-TriNKET ®與5T4表現性初代肺癌相關纖維母細胞之結合。
圖2A、 圖 2B、 圖 3A、及 圖 3B顯示在與5T4-TriNKET ®或5T4-mAb培養之後與5T4陽性目標細胞之結合。TriNKET ®以較高量值結合於KYSE-30細胞（其較H292細胞表現較大水平的表面5T4）上。5T4靶向TriNKET ®以個位數nM濃度結合細胞，且具有較5T4-mAb高的最大結合。此外，觀察到5T4-TriNKET ®與初代癌相關纖維母細胞之穩健結合。相比之下，AB1310/AB1783-TriNKET ®及親本單株抗體(10F10)皆未顯示與5T4 -細胞系H2712之結合（ 圖 2C）。 對 h5T4之特異性的評估
基於流式細胞術之多特異性試劑(polyspecificity reagent, PSR)檢定允許濾出具有較高機率非特異性結合至不相關蛋白質的抗體。PSR檢定與下列具良好相關性：交叉交互作用層析法（替代抗體溶解度）以及桿狀病毒顆粒酶聯免疫吸附檢定（替代體內清除率）(Xu et. al (2013).Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitroyeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool. Protein engineering design and selection, 26, 663-670)。
將50 µL的100 nM TriNKET ®或對照mAb（於PBSF中）與經預洗滌之5 µL蛋白質A dyna珠漿液（Invitrogen，目錄號10001D）在室溫下培養30分鐘。使TriNKET ®或mAb結合磁珠靜置於磁架60秒，且丟棄上清液。將結合珠用100 µL PBSF洗滌。將珠與50 µL的生物素化PSR試劑在冰上培養20分鐘，生物素化PSR試劑係自儲備液稀釋25倍(Xu et. al., (2013) Protein engineering design and selection, 26, 663-670)。將樣本置於磁架上，丟棄上清液，並用100 µL的PBSF洗滌。如下製造二級FACS試劑，以偵測生物素化PSR試劑與TriNKET ®或對照mAb之結合：將1:250 µL的鏈親和素-PE（Biologend，目錄號405204）及1:100驢抗人類Fc組合於PBSF中。向各樣本中，添加100 µL的二級試劑，並使其在冰上培養20分鐘。將珠用100 µL PBSF洗滌兩次，且在FACS Celesta (BD)上分析樣本。PSR檢定顯示AB1310/AB1783缺乏非特異性交互作用（ 圖 4）。 在體外與 h5T4之表面結合的評估
使用上述結合親和力檢定，所識別之5T4結合殖株10F10及11F09兩者在人源化及序列不利條件改變後，皆顯示維持與5T4 +腫瘤細胞H1975之結合（ 圖 5A 至圖5D ）。 圖 5E及 圖 5F係顯示各種濃度的人源化5T4結合體之結合（相對於背景的倍數(FOB)）的圖。
此外，AB1310/AB1783以個位數奈莫耳相對親和力（1.5至7.6 nM EC50值）結合於一小組腫瘤細胞系（代表一系列5T4表現）上，且未結合5T4剔除系，其展示高親和力及特異性，顯示於 表 8中。 表8.AB1310/AB1783與對5T4表現性腫瘤細胞系之結合
目標細胞系 來源 每細胞之5T4 細胞結合EC50 (nM)
KYSE-30 HNSCC 61,000 2.5
HCC4006 NSCLC-腺 53,000 7.6
FaDu HNSCC 22,000 7.1
H1975 NSCLC -腺 22,000 1.9
Detroit 562 HNSCC 21,000 2.7
BT474 BRC 20,000 3.7
786-O RCC 18,000 2.7
H1703 NSCLC – SCC 15,000 2.6
HCT116 CRC 14,000 2.1
H292 NSCLC 12,000 1.5
HT29 CRC 5,000 4.1
H2172 NSCLC 0 N/A
H292-5T4KO NSCLC 0 N/A
總而言之，進行針對5T4結合體之抗體發現活動。將多個5T4結合體（包括10F10、11F09、05H04、及08E06）識別為有前景的候選者，以用於進一步發展。特別是AB1002（鼠類10F10之人源化變體，具有VH T62S修正以置換稀有殘基T62）展示生物製劑之所欲性質。 附錄 例示性5T4 結合位點序列 AB2029 – hF3’.5T4scFv-Fc: ENVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIYDTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPYTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFTDYYMDWVRQAPGQCLEWIGYIFPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRDADYWGQGTTVTVSSGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPRVYTLPPCRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLVSDGSFTLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:140) AB2093 — hF3’.5T4scFv-Fc: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFTDYYMDWVRQAPGQCLEWIGYIFPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRDADYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIYDTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPYTFGCGTKVEIKGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPRVYTLPPCRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLVSDGSFTLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:141) AB2143 — hF3’.5T4scFv-Fc: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFTDYYMDWVRQAPGQCLEWIGYIFPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRDADYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSENVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIYDTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPYTFGCGTKVEIKGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPRVYTLPPCRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLVSDGSFTLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:142) AB2509 — hF3.5T4 （ 包含結合 5T4 之 Fab ）鏈L： ENVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAKSSVSYIHWYQQKPGQAPRLLIYDTSYLGSGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:143) 鏈H： QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFTDYYMDWVRQAPGQGLEWIGYIFPNDASTTYNEKFKGKATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRDADYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTENQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSWLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:144) AB2511 — hF3.5T4 （ 包含結合 5T4 之 Fab ）鏈L： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVSTSTYTYMHWFQQKPGKAPKLLIKFASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHSWEIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:145) 鏈H： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYISSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGSSQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTENQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSWLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:146) AB2512 — hF3.5T4 （ 包含結合 5T4 之 Fab ）鏈L： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGVSTSTYTYLHWFQQKPGKAPKLLIKFASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHSWEIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:147) 鏈H： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCEASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWLAYISSGSSTFYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGSSQSYYRGTMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTENQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSWLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:148) AB2513 — hF3.5T4 （ 包含結合 5T4 之 Fab ）鏈L： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVTTSNYNYMHWFQQKPGKAPKLLIKFASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHSWEIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:149) 鏈H：
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除非有相反說明，否則本文參照之專利文件及科學文章之各者之完整揭露出於所有目的係以引用方式併入。與本申請案並行申請之隨附附錄中列出之序列出於所有目的係以引用方式併入，作為本文所述之揭露之部分。 等效物
本揭露可在不脫離其精神或基本特徵的情況下以其他特定形式實施。因此，在所有方面皆應將前述實施例視為說明性，而非視為限制本文所述之揭露。不同實施例之各種結構元件及各種所揭示之方法步驟可以各種組合及排列利用，且所有此類變體皆應被視為本揭露之形式。因此，本揭露之範疇係由隨附申請專利範圍而非前述實施方式指示，且在申請專利範圍等效性之意義及範圍內的所有變化意欲涵蓋於其中。
無
參考以下圖式可更完整地理解本發明。 ［ 圖 1A］至［ 圖 1F］係顯示多特異性結合蛋白與5T4之表面電漿共振(surface plasmon resonance, SPR)的圖。 圖 1A顯示在pH 7.4下AB1310/AB1783與人類5T4之結合。 圖 1B顯示在pH 7.4下AB0064與人類5T4之結合。 圖 1C顯示在pH 7.4下AB0064與食蟹獼猴5T4之結合。 圖 1D顯示在pH 7.4下AB0063與人類5T4之結合。 圖 1E顯示在pH 7.4下AB0063與食蟹獼猴5T4之結合。 圖 1F顯示在pH 7.4下AB1310/AB1783與人類5T4之結合。 ［ 圖 2A］ 至［ 圖 2C］係顯示濃度曲線的圖，濃度曲線顯示AB1310/AB1783及親本抗體10F10與5T4表現性細胞之結合飽和。 圖 2A顯示與KYSE-30細胞之結合。 圖 2B顯示與H292細胞之結合。 圖 2C顯示與H2172細胞之結合。 ［ 圖 3A］ 至［ 圖 3B］係顯示AB1310/AB1783與初代癌相關纖維母細胞(CAF)之結合的圖。 圖 3A係顯示AB1310/AB1783與CAF之結合飽和的濃度曲線。 圖 3B係顯示AB1310/AB1783與腫瘤細胞系及初代CAF之觀察到的結合EC 50值的圖。 ［ 圖 4］係多特異性檢定之流式細胞術點圖，其顯示AB1310/AB1783（左圖）或對照組（中圖及右圖）在多特異性試劑(poly-specificity reagent, PSR)不存在（上圖）或存在（下圖）下的情況。 ［ 圖 5A］ 至［ 圖 5D］係顯示各種濃度的10F10、11F09、及其突變體（經由人源化及序列不利條件(sequence liability)修正產生）與5T4 +H1975細胞之結合（相對於背景的倍數(fold over background, FOB)）的圖。 ［ 圖 5E］ 及［ 圖 5F］係顯示各種濃度的人源化5T4結合體之結合（相對於背景的倍數(FOB)）的圖。
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Claims (83)

  1. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： 重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:3之互補決定區1 (CDR1)序列、包含SEQ ID NO:4之互補決定區2 (CDR2)序列、及包含SEQ ID NO:5之互補決定區3 (CDR3)序列；及 輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
  2. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： 重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:170之CDR1序列、包含SEQ ID NO:172之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列；及 輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，其中該等互補決定區(CDR)係根據Kabat編號方案指定。
  3. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： 重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:182之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:183之CDR3序列；及 輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:184之CDR1序列、包含SEQ ID NO:185之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:186之CDR3序列，其中該等CDR係根據Chothia編號方案指定。
  4. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： 重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:199之CDR1序列、包含SEQ ID NO:200之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:201之CDR3序列；及 輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:202之CDR1序列、包含SEQ ID NO:185之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，其中該等CDR係根據IMGT編號方案指定。
  5. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： 重鏈可變域(VH)，其包含：包含SEQ ID NO:216之CDR1序列、包含SEQ ID NO:217之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:218之CDR3序列；及 輕鏈可變域(VL)，其包含：包含SEQ ID NO:219之CDR1序列、包含SEQ ID NO:220之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:186之CDR3序列，其中該等CDR係根據Honegger編號方案指定。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗原結合位點，其中： a.     該VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， b.     該VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列， c.     該VH包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， d.     該VH包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， e.     該VH包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， f.      該VH包含SEQ ID NO:108之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， g.     該VH包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， h.     該VH包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列， i.      該VH包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列，或 j.      該VH包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列，且該VL包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列。
  7. 如請求項1至5中任一項之抗原結合位點，其中該VH包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的胺基酸序列。
  8. 如請求項1至5及7中任一項之抗原結合位點，其中該VH相對於SEQ ID NO:9包含G44C取代，其中該編號係根據Kabat編號方案。
  9. 如請求項1至5及7至8中任一項之抗原結合位點，其中該VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列。
  10. 如請求項1至5及7中任一項之抗原結合位點，其中該VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列。
  11. 如請求項1至5及7至10中任一項之抗原結合位點，其中該VL包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的胺基酸序列。
  12. 如請求項11之抗原結合位點，其中該VL相對於SEQ ID NO:10包含G100C取代，其中該編號係根據Kabat編號方案。
  13. 如請求項1至5及7至12中任一項之抗原結合位點，其中該VL包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列。
  14. 如請求項1至5及7至11中任一項之抗原結合位點，其中該VL包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。
  15. 一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:94之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
  16. 一種抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少95%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少95%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少95%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少95%同一性的VL。
  17. 如請求項1至5及請求項16中任一項之抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少96%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少96%同一性的VL。
  18. 如請求項1至5及16至17中任一項之抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少96%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少96%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少96%同一性的VL。
  19. 如請求項1至5及16至18中任一項之抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少97%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少97%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少97%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少97%同一性的VL。
  20. 如請求項1至5及16至18中任一項之抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少98%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少98%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少98%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少98%同一性的VL。
  21. 如請求項1至5及16至18中任一項之抗原結合位點，其包含：包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列至少99%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:10之胺基酸序列至少99%同一性的VL；或包含與SEQ ID NO:11之胺基酸序列至少99%同一性的VH、及包含與SEQ ID NO:12之胺基酸序列至少99%同一性的VL。
  22. 一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL；或包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
  23. 一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
  24. 一種抗原結合位點，其包含：包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH、及包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
  25. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： VH，其包含：包含SEQ ID NO:47之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:48之CDR3序列；及 VL，其包含：包含SEQ ID NO:49之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
  26. 一種結合5T4之抗原結合位點，其包含： (a)    VH，其包含：包含SEQ ID NO:53之CDR1序列、包含SEQ ID NO:54之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:55之CDR3序列；及 VL，其包含：包含SEQ ID NO:56之CDR1序列、包含SEQ ID NO:57之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列，或 (b)   VH，其包含來自表5之CDR1、CDR2、及CDR3序列；及 VL，其包含：包含SEQ ID NO:56之CDR1序列、包含SEQ ID NO:57之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
  27. 一種抗原結合位點，其與如請求項1至26中任一項之抗原結合位點競爭結合至5T4。
  28. 如請求項1至27中任一項之抗原結合位點，其中該抗原結合位點係以單鏈可變片段(single-chain fragment variable, scFv)、Fab片段、或單株抗體存在。
  29. 如請求項1至28中任一項之抗原結合位點，其中該抗原結合位點係以單鏈可變片段(scFv)存在。
  30. 如請求項29之抗原結合位點，其中該scFv包含選自由SEQ ID NO:95及SEQ ID NO:96所組成之群組的序列。
  31. 如請求項29之抗原結合位點，其中該scFv包含選自由SEQ ID NO:13及SEQ ID NO:14所組成之群組的序列。
  32. 一種抗原結合位點，其包含：VH，其包含來自表1之CDR1、CDR2、及CDR3序列；及VL，其包含來自表1之CDR1、CDR2、及CDR3序列。
  33. 如請求項1至24及26至31中任一項之抗原結合位點，其中該抗原結合位點結合LRR1域內之5T4。
  34. 一種蛋白質，其包含如請求項1至33中任一項之抗原結合位點。
  35. 如請求項34之蛋白質，其進一步包含抗體重鏈恆定區。
  36. 如請求項35之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區係人類IgG重鏈恆定區。
  37. 如請求項36之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區係人類IgG1重鏈恆定區。
  38. 如請求項35之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之各多肽鏈包含與野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列至少90%同一的胺基酸序列。
  39. 如請求項38之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之至少一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439，其係根據EU編號系統編號。
  40. 如請求項38或請求項39之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之至少一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含選自下列之一或多個突變：Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D、及K439E，其係根據EU編號系統編號。
  41. 如請求項38至40中任一項之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列在選自下列之一或多個位置處包含一或多個突變：Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、D401、F405、Y407、K409、T411、及K439，其係根據EU編號系統編號。
  42. 如請求項41之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含K360E及K409W取代；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含Q347R、D399V、及F405T取代，其係根據EU編號系統編號。
  43. 如請求項41或請求項42之蛋白質，其中該抗體重鏈恆定區之一個多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含Y349C取代；且該抗體重鏈恆定區之另一多肽鏈相對於野生型人類IgG1 Fc區之胺基酸序列包含S354C取代，其係根據EU編號系統編號。
  44. 一種經單離核酸分子，其編碼如請求項1至33中任一項之抗原結合位點或如請求項34至43中任一項之蛋白質。
  45. 一種抗體藥物接合物，其包含如請求項34至43中任一項之蛋白質及藥物部份。
  46. 如請求項45之抗體藥物接合物，其中該藥物部份係選自由下列所組成之群組：奧瑞他汀(auristatin)、N-乙醯基-γ卡奇黴素(N-acetyl-γ calicheamicin)、類美登素(maytansinoid)、吡咯并苯并二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)、及SN-38。
  47. 一種免疫細胞介素，其包含如請求項1至33中任一項之抗原結合位點及細胞介素。
  48. 如請求項47之免疫細胞介素，其中該細胞介素係選自由下列所組成之群組：IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、TNF、及IFNα。
  49. 一種雙特異性T細胞銜接器，其包含如請求項1至33中任一項之抗原結合位點及結合CD3之抗原結合位點。
  50. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含： (a)    如請求項1至33中任一項之抗原結合位點； (b)   跨膜域；及 (c)    胞內信號傳導域。
  51. 如請求項50之CAR，其中該跨膜域係選自下列之跨膜域：T細胞受體之α、β、或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、5T4、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152、及CD154。
  52. 如請求項50或請求項51之CAR，其中該胞內信號傳導域包含初級信號傳導域，該初級信號傳導域包含下列之功能細胞質信號傳導域：CD3ζ、共同FcRγ (FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ (FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、及DAP12。
  53. 如請求項50至52中任一項之CAR，其中該胞內信號傳導域進一步包含共刺激信號傳導域，該共刺激信號傳導域包含共刺激受體之功能細胞質信號傳導域。
  54. 如請求項53之CAR，其中該共刺激受體係選自由下列所組成之群組：OX40、CD27、CD28、CD30、CD40、PD-1、CD2、CD7、CD258、NKG2C、B7-H3、結合至CD83之配體、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS、及4-1BB (CD137)、或其任何組合。
  55. 一種經單離核酸分子，其編碼如請求項50至54中任一項之CAR。
  56. 一種表現載體，其包含如請求項55之經單離核酸分子。
  57. 一種免疫效應細胞，其包含如請求項55之經單離核酸分子或如請求項56之表現載體。
  58. 一種免疫效應細胞，其表現如請求項50至54中任一項之CAR。
  59. 如請求項57或請求項58之免疫效應細胞，其中該免疫效應細胞係T細胞。
  60. 如請求項59之免疫效應細胞，其中該T細胞係CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、γδ T細胞、或NKT細胞。
  61. 如請求項57或請求項58之免疫效應細胞，其中該免疫效應細胞係NK細胞。
  62. 一或多種經單離核酸分子，其編碼： a.     VH，其包含：包含SEQ ID NO:3之CDR1序列、包含SEQ ID NO:4之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:5之CDR3序列；及/或 b.     VL，其包含：包含SEQ ID NO:6之CDR1序列、包含SEQ ID NO:7之CDR2序列、及包含SEQ ID NO:8之CDR3序列。
  63. 一或多種經單離核酸分子，其編碼： a.     包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列的VH；及 b.     包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列的VL。
  64. 一或多種經單離核酸分子，其編碼： a.     包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列的VH；及 b.     包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列的VL。
  65. 一種經單離多肽，其係由如請求項62至64中任一項之一或多種核酸分子編碼。
  66. 如請求項65之經單離多肽，其中該經單離多肽包含VH。
  67. 如請求項65或請求項66之經單離多肽，其中該經單離多肽包含VL。
  68. 如請求項65至67中任一項之經單離多肽，其中該經單離多肽包含scFv。
  69. 一種表現載體，其包含如請求項62至64中任一項之一或多種經單離核酸分子。
  70. 一種宿主細胞，其包含如請求項62至64中任一項之一或多種經單離核酸分子或如請求項69之表現載體。
  71. 一種醫藥組成物，其包含如請求項34至43中任一項之蛋白質、如請求項45或請求項46之抗體藥物接合物、如請求項47或請求項48之免疫細胞介素、如請求項49之雙特異性T細胞銜接器、如請求項50至54中任一項之CAR、或如請求項57至61中任一項之免疫效應細胞；及醫藥上可接受之載劑。
  72. 一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之對象投予有效量的如請求項34至43中任一項之蛋白質、如請求項45或請求項46之抗體藥物接合物、如請求項47或請求項48之免疫細胞介素、或如請求項49之雙特異性T細胞銜接器、如請求項50至54中任一項之CAR、或如請求項57至61中任一項之免疫效應細胞、或如請求項71之醫藥組成物。
  73. 如請求項72之方法，其中該癌症係選自由下列所組成之群組：結腸直腸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、腎癌、乳癌、子宮內膜癌、鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、子宮癌、胰臟癌、間皮瘤、及胃癌。
  74. 如請求項73之方法，其中該癌症係激素受體陽性(HR+)乳癌。
  75. 如請求項72至74中之一項中任一項之方法，其中該癌症係轉移性癌症。
  76. 如請求項72至75中任一項之方法，其中該對象對化學療法呈難治性。
  77. 如請求項72至76中任一項之方法，其中該方法增加該對象之整體存活期及/或無進展存活期。
  78. 如請求項72至77中任一項之方法，其中該癌症表現5T4。
  79. 如請求項78之方法，其中相對於正常細胞，5T4係以高水平表現。
  80. 如請求項78之方法，其中相對於正常細胞，5T4係以低水平表現。
  81. 一種增強腫瘤細胞死亡之方法，該方法包含使該腫瘤細胞暴露於有效量的如請求項1至33中任一項之抗原結合位點、如請求項34至43中任一項之蛋白質、如請求項45或請求項46之抗體藥物接合物、如請求項47或請求項48之免疫細胞介素、如請求項49之雙特異性T細胞銜接器、如請求項50至54中任一項之CAR、或如請求項57至61中任一項之免疫效應細胞。
  82. 如請求項1至33中任一項之抗原結合位點、如請求項34至43中任一項之蛋白質、如請求項45或請求項46之抗體藥物接合物、如請求項47或請求項48之免疫細胞介素、或如請求項49之雙特異性T細胞銜接器，其中該抗原結合位點、該蛋白質、該抗體藥物接合物、該免疫細胞介素、或該雙特異性T細胞銜接器係純化抗原結合位點、蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器。
  83. 如請求項82之抗原結合位點、蛋白質、抗體藥物接合物、免疫細胞介素、或雙特異性T細胞銜接器，其中該抗原結合位點、該蛋白質、該抗體藥物接合物、該免疫細胞介素、或該雙特異性T細胞銜接器係藉由選自由下列所組成之群組的方法純化：離心、深層過濾、細胞裂解、均質化、冷凍解凍、親和純化、凝膠過濾、離子交換層析法、疏水性交互作用交換層析法、及混合模式層析法。
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